JP3681252B2

JP3681252B2 - 粒子計数方法および粒子計数装置

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Publication number: JP3681252B2
Application number: JP06509297A
Authority: JP
Inventors: 孝明長井; 宏朝倉
Original assignee: Sysmex Corp
Current assignee: Sysmex Corp
Priority date: 1997-03-18
Filing date: 1997-03-18
Publication date: 2005-08-10
Anticipated expiration: 2017-03-18
Also published as: JPH10260129A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、粒子計数方法および粒子計数装置に関し、特に、細胞等の微小粒子の計数において、誤差数の要因を除去して正確な計数を可能とする粒子計数方法および粒子計数装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来から、人体の血液中に含まれる赤血球、白血球などの細胞の計数をするために、いわゆるフローサイトメータなどの種々の粒子計数装置が用いられている。フローサイトメータは、フローセルと呼ばれる容器に希釈した血液試料をシース液に包んで試料流として流し、この試料流にレーザ光を照射して、試料流に含まれる細胞粒子で散乱された散乱光を光検出器で検出し、この検出信号から血液試料中の粒子の分類・計数を行うものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
フローセル内では、細胞粒子が整列して流れる試料流を作るために、希釈された血液試料はシース液によって包まれて流される。
このとき、シース液が本来有する気泡あるいは測定対象外の粒子（たとえばチリやゴミ）等のため測定対象粒子のみを正確に計数することが困難である。
【０００４】
実際、シース液には直径５μｍ程度の大きさの気泡が発生することが多いので、直径１０μｍ以上の比較的大きな白血球や赤血球の計数を行う場合には、この気泡が誤計数の要因となることはほとんどないが、血小板などの直径が５μｍ程度以下の微小粒子を計数する場合には、気泡は誤計数の要因となり、正確な計数ができない。
【０００５】
この発明は以上のような事情を考慮したものであり、誤計数の要因となる気泡やゴミを別途測定することにより、計数対象の粒子の正確な計数が行えるようにした粒子計数方法を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
この発明は、フローサイトメータを用いて、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して第１粒度分布を作成する第１の測定工程と、前記フローサイトメータを用いて前記シース液のみからなる試料流を形成し、その試料流を光学的に測定して第２粒度分布を作成する第２の測定工程と、第１粒度分布から第２粒度分布を減算することによって、測定対象粒子の粒度分布を求める解析工程とからなることを特徴とする粒子計数方法を提供するものである。またこの発明は、フローサイトメータを用いて、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して粒度分布を求める粒子計数装置において、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して得られた第１粒度分布から、シース液のみからなる試料流を光学的に測定して得られた第２粒度分布を減算することにより、測定対象粒子の粒度分布を求めることを特徴とする粒子計数装置を提供するものである。
さらに、この発明は、前記第１測定工程に続いて、シース液をフローセルに流すことによるフローセルの洗浄が行われ、前記第２測定工程が、シース液によるフローセルの洗浄の際に行われることを特徴とする粒子計数方法を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
この発明に用いるフローサイトメータとは、測定対象粒子を含む希釈された試料をフローセルに導き、これをシース液に包んで細流化して、この細流化された粒子の流れにレーザ光を照射して粒子による散乱光や蛍光を検出することによって粒子の計数を行う粒子計数装置である。
この発明の測定対象粒子とは、主として、血液中の細胞であり、赤血球、白血球、血小板などである。この測定対象粒子は、通常希釈液で希釈した試料液として与えられる。
【０００８】
また、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流とは、このような測定対象粒子を含む試料液をフローセルを流れるシース液中に注入して形成される細流であり、測定対象粒子はシース液に包まれ整列されて流される。一般に試料液には、多くの粒子が含まれており、それぞれの粒子は、その形状、大きさ等によって分類することが可能である。
粒度分布とは、粒子の大きさ（粒度）ごとに試料流の中に含まれる粒子の個数（度数）を測定した分布をいう。
つまり、測定において、試料流の中に含まれる粒子の大きさを識別し、ある特定の大きさの粒子の数を計数する処理が行われる。
【０００９】
このような粒子の大きさの識別及び計数には、マイクロコンピュータを用いることが好ましい。また、粒度分布の測定で求められた粒子の計数値は、ＲＡＭ等のメモリに記憶されることが好ましい。
第２の試料流とは、測定対象粒子を含まないシース液からなる流れであり、シース液は第１の試料流の粒度分布を測定する際にも利用される液体である。
【００１０】
前記解析工程は、マイクロコンピュータによって行われることが好ましい。
解析工程で行われる減算は、第１の測定工程で求められた第１粒度分布粒子の計数値から、第２の測定工程で求められた第２粒度分布の粒子の計数値を粒度毎に減算することを意味する。
このように、２つの計数値の引き算を、測定された粒子の大きさごとに行うことによって、誤計数の要因を除いた測定対象粒子の正確な粒度分布が求められる。
【００１１】
第２の測定工程において、本来シース液に含まれる微小な気泡や不純物等は、同じ大きさの粒子として計数される。
また、この気泡等は、同じシース液を用いる第１の測定工程でも同様に存在すると考えられ、同じ大きさの粒子として計数されるため、測定対象粒子が気泡等と同じ程度の大きさである場合には、測定対象粒子は誤計数されうる。この意味において、誤計数の要因となる気泡や不純物のことを、バックグラウンドと呼ぶ。すなわち、第２の測定工程は、バックグラウンドの粒度分布を求めている。
【００１２】
上記のようなこの発明の粒子計数方法は、微小粒子の計数を目的とする種々の粒子分析装置に適用可能である。たとえば、血小板のような直径が１０μｍ以下の微小粒子の計数に用いることができる。
【００１３】
また、この発明は、第２の測定工程が、第１の測定工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさない期間に行われることを特徴とする。
ここで、第１の測定工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさない期間とは、測定対象粒子を含む試料流を「実際に光学的に測定している期間」を除いた期間を意味し、この「実際に光学的に測定している期間」の前あるいは後であってもよい。
【００１４】
また、第１の測定工程が、前記シース液をフローセルに流すことによってフローセルを洗浄する洗浄工程をさらに備え、第２の測定工程を、前記洗浄工程に並行して行うようにしてもよい。
【００１５】
ここで、洗浄工程とは、フローセル、及びフローセルに接続され試料流が流れる測定経路上から、試料流に含まれる測定対象粒子やその他の不純物をシース液を流して除去する工程である。
この洗浄工程は、第１の測定工程に含まれることが好ましく、また、第２の測定工程の実施期間に並行して行われることがさらに好ましい。
【００１６】
第２の測定工程と洗浄工程を同時に並行して行えば、バックグラウンドの粒度分布の測定を行っても、この発明の粒子計測方法の全工程のトータル時間は増加せず、全工程の時間的効率は低下しない。
【００１７】
以下、図面に示す実施例に基づいてこの発明を詳述する。なお、これによってこの発明が限定されるものではない。
図１にこの発明の一実施例における構成図を示す。
【００１８】
図１において、１はレーザ光光源であり、たとえば半導体レーザ、Ａｒレーザ、Ｈｅ−Ｎｅレーザなどが使用される。
フローセル４は、計数対象である細胞粒子を整列させて流すものであり、フローセル４の中の粒子が細流化された部分にレーザ光源１からのレーザ光が照射される。
受光部２は、たとえばフォトダイオードが使用される。受光部２では、粒子によって散乱された散乱光の光強度が検出され、電気信号に変換される。
【００１９】
解析部３は、変換された電気信号をもとに、フローセル４を流れる粒子の大きさを判断して計数を行い、いわゆる粒度分布を作成するものである。また解析部３は、誤計数の要因となるいわゆるバックグラウンドの計数を行って、計数対象となる粒子の正確な計数を行うための種々の演算を行う。
【００２０】
このような解析部３は、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、タイマー、Ｉ／Ｏインタフェースなどのいわゆるマイクロコンピュータから構成されることが好ましく、ＲＡＭ等のメモリに計数手順を示したプログラムが格納されている。
【００２１】
ジェットノズル７は試料液をフローセル４に導入するものであり、シース液回収チャンバ５は、計数後の試料流を回収するものである。
フローセル４には、その下部に取りつけられたジェットノズル７から計数対象粒子を含んだ試料液が導入される。また、シース液チャンバ６に蓄えられたシース液が、バルブＶ₇を経由してフローセル４に導かれる。そして、フローセル４の上部にシース液によって細く絞られた試料流が導かれ、１つずつ整列された粒子にレーザ光が照射される。細く絞られた試料流はフローセル４の上部から排出され、バルブＶ₈を通って、シース液回収チャンバ５に蓄えられる。
【００２２】
希釈液チャンバ１１は、計数対象である試料を希釈するための希釈液を蓄える容器である。
サンプリングバルブ１０は、試料１４と希釈液とを混合した一定量の試料液を取り出すためのバルブであり、たとえば一部に空洞を持つ３枚の円板から構成される。この３枚の円板の少なくとも１つを回転させることにより、一定量の試料液が切り出される。たとえば、１０μｌの試料を含む試料液が切り出される。
ポンプ１３は試料１４をサンプリングバルブ１０へ導くためのものである。
【００２３】
ダイヤフラム式希釈ポンプ１２は、一定量（たとえば２００ｍｌ）の希釈液を希釈液チャンバ１１から取り出すためのポンプである。
バルブＶ₁、Ｖ₂を切り換えて、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２に陰圧をかけると、希釈液は一旦ダイヤフラム式希釈ポンプ１２内に引き込まれ、その後バルブＶ₁、Ｖ₂を切り換えてダイヤフラム式希釈ポンプ１２に陽圧をかけると、引き込まれた希釈液はバルブＶ₂を経由してサンプリングバルブ１０の方へ押し出される。
【００２４】
試料液チャンバ９は、切り出されて希釈された試料を一時蓄えておく容器である。この中には、たとえば、約２００倍に希釈された試料液が蓄えられる。
試料液押し出し用シリンジ１９は、バルブＶ₃を通って引き込まれた試料液をジェットノズル７の方へ押し出すものである。
モータ２０は、試料液押出し用シリンジの駆動用のモータである。
【００２５】
陽圧印加部１５は、０．３ｋｇ／ｃｍ²程度の陽圧をシース液チャンバ６へかけるものである。
バルブＶ₇が開放されると、この陽圧によって０．２ｍｌ／ｓｅｃ程度のシース液がシース液チャンバ６からフローセル４へ流れ込む。
陰圧印加部１６は、−４００ｍｍＨｇの陰圧を廃液チャンバにかけるものであるが、バルブＶ₃及びＶ₅が開放されたときに、この陰圧によって、バルブＶ₃とバルブＶ₅との間の経路に、試料液チャンバ９に蓄えられていた試料液が導かれる。
【００２６】
また、バルブＶ₃及びＶ₅を閉じた状態で、試料液押出し用シリンジ１９が押出されると、バルブＶ₃とバルブＶ₅との間の経路に導かれた試料液がジェットノズルへと出射される。
このとき、試料液の押出し流量は、約０．４μｌ／ｓｅｃ程度である。
【００２７】
陽圧印加部１７は、０．３ｋｇ／ｃｍ²程度の陽圧をダイヤフラム式希釈ポンプ１２へかけるものであり、陰圧印加部１８は、−４００ｍｍＨｇの陰圧を前記ポンプ１２へかけるものである。
【００２８】
また図１には、８つのバルブ（Ｖ₁〜Ｖ₈）を示しているが、これらのバルブは、解析部３のＣＰＵからの制御信号によりその開閉が制御される。
後述するように、このバルブの開閉のタイミングを制御することによって、フローセルにおける試料粒子の計数及び誤計測の要因となるバックグラウンドの計数が行われる。
【００２９】
各バルブの役割は、次のようなものである。
希釈ポンプ吐出バルブＶ₁は、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２にかけられる陽圧及び陰圧の切り換えを行うものである。
希釈ポンプ吐出バルブＶ₂は、希釈液チャンバ１１からの経路と、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２又はサンプリングバルブ１０への経路と接続の切り換えを行うものである。
【００３０】
試料液吸引バルブＶ₃は、試料液を吸引する際の経路の開閉を行うものである。
試料液チャンバ排出バルブＶ₄は、測定後、試料液チャンバ９に残った試料液を廃液チャンバ８へ導くための経路の開閉を行うものである。
【００３１】
試料液吸引バルブＶ₅は、試料液を吸引する際の経路の開閉およびジェットノズル７内に残った試料液を廃液チャンバ８へ引き込む際の経路の開閉を行うものである。
試料液測定ライン洗浄バルブＶ₆は、シース液チャンバ６と試料液押出しシリンジ１９の間の経路を開閉するものである。
このバルブＶ₆は、開放されたとき、試料液押出し用シリンジ１９とバルブＶ₅との間の経路にシース液を流すことによってこの経路の洗浄をするために用いられるものである。
【００３２】
シース液流入バルブＶ₇は、シース液チャンバ６とフローセル４との間の経路を開閉するものである。
シース液流入バルブＶ₈は、フローセル４の排出口とシース液回収チャンバ５との経路を開閉するものであり、開放状態のとき、フローセル４の排出口から排出される試料液とシース液の混合液がシース液回収チャンバ５に導かれる。
【００３３】
次に、試料計数とバックグラウンド計数の各工程について説明する。
図２に、この発明の計数シーケンスの一実施例を示す。
ここで、この実施例では、測定対象である試料の計数を行った後に行う洗浄工程を含む後工程のときに、バックグラウンドの計数を行うことを特徴とする。
【００３４】
計数シーケンスは、主として次の９つの工程（ＡからＩ）に分けられる。
横軸は各工程の時間（単位秒）を示している。
まず希釈工程Ａは、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２により、サンプリングバルブ１０内に取り出された試料を希釈液によって希釈して試料液チャンバ９へ押出す工程である。
この希釈工程Ａにおいて、ポンプ１３による吸引によって、サンプリングバルブ１０の中に一定量（１０μｌ）の試料１４が、取出されている必要がある。
【００３５】
この希釈工程Ａでは、まずバルブＶ₂及びＶ₁によって、希釈液チャンバ１１とダイヤフラム式希釈ポンプ１２との間の経路と、陰圧印加部１８とダイヤフラム式希釈ポンプ１２との間の経路とが接続される。これによって希釈液チャンバ１１から、一定量（２ｍｌ）の希釈液がダイヤフラム式希釈ポンプ１２内に取り出される。
【００３６】
次に、バルブＶ₁、Ｖ₂を逆に切りかえて、陽圧印加部１７とダイヤフラム式希釈ポンプ１２との間の経路と、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２とサンプリングバルブ１０との間の経路とが接続される。これによって、ダイヤフラム式希釈ポンプ１２内の希釈液は、サンプリングバルブ１０の方へ押し出される。
【００３７】
このとき、サンプリングバルブ１０では、予め取り出されていた試料１４と希釈液とが混合され、この混合液（すなわち試料液）は陽圧印加部１７による陽圧によって試料液チャンバ９に導かれる。
なお、この希釈工程Ａでは、バルブＶ₃、Ｖ₄は閉じられている。
また希釈工程は、図２に示すように、３秒程度とすることができる。
【００３８】
吸引工程Ｂは、試料液チャンバ９に導かれた試料液を、バルブＶ₃とバルブＶ₅との間の経路（以下、シース測定部という）へ吸引する工程である。
この工程Ｂでは、バルブＶ₃、Ｖ₅が開放で、バルブＶ₄、Ｖ₆、Ｖ₇、Ｖ₈は閉状態である。この工程も約３秒あればよい。
【００３９】
シース形成工程Ｃは、シース液とシース測定部に吸引された試料液とをフローセル４へ流入させてシース流を形成すると共に、試料液チャンバ９の中に残った試料液を廃液チャンバ８へ捨てる工程である。
この工程Ｃでは、バルブＶ₃を閉じて、バルブＶ₄を開くことによって試料液が廃液チャンバ８へ捨てられる。
【００４０】
またこの工程Ｃでは、バルブＶ₆が閉じられ、バルブＶ₇及びＶ₈が開かれる。
バルブＶ₇、Ｖ₈が開かれることによってシース液チャンバ６内に蓄えられていたシース液がフローセル４へ導かれ、フローセル４の上方の排出口から出射される。
【００４１】
一方、このシース形成工程Ｃにおいて、試料液押出し用シリンジ１９がモータ２０によって駆動され、シース測定部にあった試料液がジェットノズル７の中に導かれる。このとき、試料液押出し用シリンジ１９は１２μｌ／ｓｅｃ程度の速度で駆動される。このシース形成工程Ｃは、前工程と同様に約３秒でよい。
【００４２】
第１待機工程Ｄは、シース流の安定化のためにしばらく待つ工程である。たとえば約１秒間待てばよい。この工程Ｄに入る際にバルブＶ₄が閉じられる。
【００４３】
計数工程Ｅは、実際に計数対象である試料流の計数を行う工程である。
すなわち、試料液押出し用シリンジ１９が０．４μｌ／ｓｅｃ程度の速さで押され、ジェットノズル７から試料液がフローセル４の中へ流入される。
フローセル４では、この試料液とシース液とが混合され、シース液で包まれた細流となって排出口へと導かれる。
一方、この計数工程Ｅにおいて、レーザ光が放射され、試料粒子によって散乱された散乱光が受光部２で検出される。
【００４４】
この検出された信号をもとに解析部３で計数が行われる。
計数は、たとえば７秒間行われ、終了時には、試料液押出し用シリンジ１９がその位置で停止される。
この計数工程Ｅにおいて、計数された数値には、実際の試料の計数値と共に、気泡などの計数してほしくないバックグラウンドによる計数値も含まれる。
すなわち、計測した試料の大きさと、バックグラウンドとなる気泡等の大きさがほぼ同じ場合には、その大きさの計数値には、かなりの誤差が含まれることになる。
【００４５】
逆流工程Ｆは、ジェットノズル７の中に残った試料液を逆流させて廃液チャンバ８の中へ引き込む工程であり、洗浄工程の一つである。
ここでは、バルブＶ₃を閉じ、バルブＶ₇、Ｖ₈を開いたまま、バルブＶ₅を開く。このとき、陰圧印加部１６による陰圧によって、ジェットノズル７の中の試料液がバルブＶ₅を通って廃液チャンバ８へ引き込まれる。
この工程は、約１秒あればよい。
【００４６】
次のプレ洗浄工程Ｇ、洗浄工程Ｈ、第２待機工程Ｉは、試料計数が終了し、次の試料計数に入るための準備工程であるが、これらの３つの工程期間中にバックグラウンドの計数を行う。
すなわち、新たにバックグラウンド計数のための工程を別途設けるものではない。
通常の試料計数に必要な準備工程期間中に誤計数の要因となるバックグラウンドの計数を行うので、試料計数のための全工程の効率を低下させることなく、バックグラウンドの計数が可能となる。
【００４７】
プレ洗浄工程Ｇでは、バルブＶ₆を開く。
このとき、シース液チャンバ６からシース液が、バルブＶ₆、試料液押出し用シリンジ１９、シース測定部、バルブＶ₅を経由して、廃液チャンバ８へ流れる。すなわち、このプレ洗浄工程Ｇでは、試料液押出し用シリンジ１９とバルブＶ₅の間のシース測定部の洗浄が行われる。
【００４８】
一方、この工程Ｇにおいて、バルブＶ₇及びＶ₈は開放されているので、シース液はバルブＶ₇、フローセル４、フローセル４の上部排出口、バルブＶ₈を経由して、シース液回収チャンバ５へと流れる。
このフローセル４の上部排出口へのシース液の流れに、レーザ光を照射し、散乱光を測定することによって、気泡等のバックグラウンドのみの計数が行われる。
【００４９】
洗浄工程Ｈでは、試料液押出し用シリンジ１９を初期位置まで引き戻すほかは、プレ洗浄工程Ｇと同じ状態を保つ。
すなわち、シース液によるシース測定部の洗浄と、バックグラウンドの計測を行う。
プレ洗浄工程Ｇは約１秒、洗浄工程Ｈは約３秒程度あればよい。
【００５０】
第２待機工程Ｉは、シース測定部の洗浄が終了した後、ジェットノズル７よりシース液がフローセル４の方へ流出されることのないように待機する工程である。
この工程では、バルブＶ₇、Ｖ₈は開いたままであるが、バルブＶ₅とＶ₆とが閉じられる。このときバルブＶ₃も閉じられている。
したがって、ジェットノズル７、バルブＶ₅及びＶ₃、試料液押出し用シリンジ１９及びバルブＶ₆とで形成される。シース測定部の経路では、シース液の出入りはない。
【００５１】
一方、第２待機工程Ｉにおいても、バルブＶ₇、Ｖ₈は開放されているので、シース液は、バルブＶ₇、フローセル４、バルブＶ₈を経由してシース液回収チャンバ５へと流される。したがって、この工程Ｉにおいても、バックグラウンドの計数は続行する。
第２待機工程Ｉは、バルブＶ₇及びＶ₈を閉じると終了し、同時に、バックグラウンドの計数も終了する。この第２待機工程Ｉは、たとえば１秒程度設ければよい。
【００５２】
以上のように、３つの工程Ｇ、Ｈ、Ｉにおいて、シース液のみがフローセル４内に流され、約５秒間バックグラウンドの計数が行われる。
【００５３】
ところで、解析部３における計数処理では、粒子の大きさごとに計数が行われ、いわゆる粒度分布が作成され、ＲＡＭ等のメモリに記憶される。
図３に、この発明の粒度分布のグラフの一実施例を示す。
図３（ａ）は、計数工程Ｅで測定された粒度分布であり、計数対象粒子のなかに、いわゆるバックグラウンドも含んだ分布である。
図３（ｂ）は、３つの工程Ｇ、Ｈ、Ｉで測定された粒度分布であり、バックグラウンドのみの粒度分布を示している。
【００５４】
したがって、粒子の大きさごとに、図３（ａ）のその粒子の計数値から、図３（ｂ）のその粒子の大きさに相当するバックグラウンドの計数値を減算すれば、その大きさの粒子自体の計数値が求められる。
図３（ｃ）は、このような減算によって求めた粒度分布であり、バックグラウンドを除去した計測粒子のみの粒度分布を示している。
【００５５】
図１に示したようなフローセルを用いた粒子測定においては、５μｍ程度の大きさの気泡やゴミやチリなどの計数対象外粒子がバックグラウンドとして多数計数されることが多い。
したがって、実際の血液中の細胞の計数において、５μｍ程度の大きさの粒子、たとえば血小板の計数に、この発明の計数処理を用いることは非常に有効である。
【００５６】
なお、図２に示した計数シーケンスでは試料計数（７秒間）とバックグラウンド計数（５秒間）の時間が異なるが、両者の計数時間を統一するために、どちらか一方の計数値を換算してから、減算を行えばよい。
したがって、必ずしも両者の計数時間を一致させる必要はない。
【００５７】
また、図２に示したように、バックグラウンドの計数を試料計数後の洗浄工程時に行うのが、全工程の時間を増加させることなく、最も効率的である。しかし、粒子計測の仕様、シーケンスの順序等の関係で、バックグラウンドの計測工程を独立に別途設けてもよいことは言うまでもない。
【００５８】
また、バックグラウンドの計数において、通常の範囲を大きく超えるような異常なバックグラウンドが計測された場合には、粒子計測処理を中断し、所定の警告表示を行うことも可能である。
【００５９】
【発明の効果】
この発明によれば、誤計数の要因となるバックグラウンドのみの計数を行っているので、計数対象粒子がバックグラウンドと同じ程度の大きさであっても、正確な計数が可能である。
また、通常の粒子計数処理の中で通常の粒子計数工程に支障をきたさない期間にバックグラウンドの計数を行うようにしているので、粒子計数にかかる全時間を増加させることなく、測定対象粒子の正確な計数が可能である。
特に、洗浄工程時にバックグラウンドの計数を行えば、最も効率的かつ正確な粒子計数が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の粒子計数装置の一実施例の構成図である。
【図２】この発明の計数シーケンスの一実施例の説明図である。
【図３】この発明の粒子分布の一実施例の説明図である。
【符号の説明】
１レーザ光源
２受光部
３解析部
４フローセル
５シース液回収チャンバ
６シース液チャンバ
７ジェットノズル
８廃液チャンバ
９試料液チャンバ
１０サンプリングバルブ
１１希釈液チャンバ
１２ダイヤフラム式希釈ポンプ
１３ポンプ
１４試料
１５陽圧印加部
１６陰圧印加部
１７陽圧印加部
１８陰圧印加部
１９試料液押出し用シリンジ
２０モータ
Ａ希釈工程
Ｂ吸引工程
Ｃシース形成工程
Ｄ第１待機工程
Ｅ計数工程
Ｆ逆流工程
Ｇプレ洗浄工程
Ｈ洗浄工程
Ｉ第２待機工程

Claims

フローサイトメータを用いて、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して第１粒度分布を作成する第１の測定工程と、前記フローサイトメータを用いて前記シース液のみからなる試料流を形成し、その試料流を光学的に測定して第２粒度分布を作成する第２の測定工程と、
第１粒度分布から第２粒度分布を減算することによって、測定対象粒子の粒度分布を求める解析工程とからなることを特徴とする粒子計数方法。
前記第２の測定工程が、前記第１の測定工程における粒度分布の測定に支障を及ぼさない期間に行われることを特徴とする請求項１記載の粒子計数方法。
前記第１測定工程に続いて、シース液をフローセルに流すことによるフローセルの洗浄が行われ、前記第２測定工程が、シース液によるフローセルの洗浄の際に行われることを特徴とする請求項１記載の粒子計数方法。
前記測定対象粒子が直径１０μｍ以下の微小粒子を含むことを特徴とする請求項１から３に記載したいずれかの粒子計数方法。
前記測定対象粒子が、血小板である請求項１から３に記載したいずれかの粒子計数方法。
フローサイトメータを用いて、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して粒度分布を求める粒子計数装置において、測定対象粒子を含む試料液をシース液で包んで形成した試料流を光学的に測定して得られた第１粒度分布から、シース液のみからなる試料流を光学的に測定して得られた第２粒度分布を減算することにより、測定対象粒子の粒度分布を求めることを特徴とする粒子計数装置。