JP3515579B2 - 高力価グロブリン組成物およびその製造方法 - Google Patents
高力価グロブリン組成物およびその製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、静注可能な、高力価
（抗体活性の高い）グロブリン組成物に関する。
（抗体活性の高い）グロブリン組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】高力価グ
ロブリン組成物（製剤）とは一般的に特定の抗原に対し
て高い抗体活性を有するグロブリン製剤を指し、例え
ば、各種ウィルス（サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、
ヘルペスウィルス、ＨＩＶ、インフルエンザ等）、ウィ
ルス由来蛋白（Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原等）、破傷風
毒素あるいは腫瘍関連抗原（癌胎児性抗原、α−フェト
プロテインなど）に対するものが知られており、各々の
ウィルスによる感染の予防治療のために用いられたり、
腫瘍の治療のための使用が検討されている。
ロブリン組成物（製剤）とは一般的に特定の抗原に対し
て高い抗体活性を有するグロブリン製剤を指し、例え
ば、各種ウィルス（サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、
ヘルペスウィルス、ＨＩＶ、インフルエンザ等）、ウィ
ルス由来蛋白（Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原等）、破傷風
毒素あるいは腫瘍関連抗原（癌胎児性抗原、α−フェト
プロテインなど）に対するものが知られており、各々の
ウィルスによる感染の予防治療のために用いられたり、
腫瘍の治療のための使用が検討されている。
【０００３】しかし、従来の高力価グロブリン製剤はヒ
ト由来の陽性血漿を原料にして調製されており、力価も
充分に高いものではなく、また、ヒト由来の陽性血漿を
手にするのが困難である。均一の品質のものが得にくい
などの問題点も指摘されている。
ト由来の陽性血漿を原料にして調製されており、力価も
充分に高いものではなく、また、ヒト由来の陽性血漿を
手にするのが困難である。均一の品質のものが得にくい
などの問題点も指摘されている。
【０００４】一方、現在、例えば抗ＣＭＶ高力価グロブ
リン製剤は、抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペーストを原料
とし、その抽出上清から調製されている（以下、これを
抗ＣＭＶ低力価グロブリン組成物という）。しかし、こ
のような方法にて製造された抗ＣＭＶ低力価グロブリン
組成物の抗体価は、プールした血漿、すなわち抗ＣＭＶ
陽性血漿以外の血漿をも含めて一括貯蔵したもの、のII
＋III ペーストを原料とし、その抽出上清から抽出され
た通常の静注用グロブリン製剤の４倍程度である。その
理由はＣＭＶ抗体の抽出効率が悪い点にあると考えられ
ている。
リン製剤は、抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペーストを原料
とし、その抽出上清から調製されている（以下、これを
抗ＣＭＶ低力価グロブリン組成物という）。しかし、こ
のような方法にて製造された抗ＣＭＶ低力価グロブリン
組成物の抗体価は、プールした血漿、すなわち抗ＣＭＶ
陽性血漿以外の血漿をも含めて一括貯蔵したもの、のII
＋III ペーストを原料とし、その抽出上清から抽出され
た通常の静注用グロブリン製剤の４倍程度である。その
理由はＣＭＶ抗体の抽出効率が悪い点にあると考えられ
ている。
【０００５】上記問題を解決すべく、本発明の目的は、
静注可能な、高力価（抗体活性の高い）グロブリン組成
物を提供することにある。
静注可能な、高力価（抗体活性の高い）グロブリン組成
物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決しようとする手段】本発明者らは以上の点
に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、高抗体価II＋III 抽出
残渣には、多量のＩｇＧが存在し、この画分からＩｇＧ
を調製した場合、サイトメガロウィルス（以下、ＣＭＶ
という）に対して高い抗体価を有する抗体が得られ、か
かる抗体が高力価グロブリン組成物として好適であるこ
とを見出した。本発明の高力価グロブリンはＣＭＶの
他、破傷風毒素、風疹ウィルス、麻疹ウィルスに対する
抗体活性の高いものにも適用できる。以下、抗ＣＭＶ高
力価グロブリンを例にとって説明する。
に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、高抗体価II＋III 抽出
残渣には、多量のＩｇＧが存在し、この画分からＩｇＧ
を調製した場合、サイトメガロウィルス（以下、ＣＭＶ
という）に対して高い抗体価を有する抗体が得られ、か
かる抗体が高力価グロブリン組成物として好適であるこ
とを見出した。本発明の高力価グロブリンはＣＭＶの
他、破傷風毒素、風疹ウィルス、麻疹ウィルスに対する
抗体活性の高いものにも適用できる。以下、抗ＣＭＶ高
力価グロブリンを例にとって説明する。
【０００７】本発明の抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物
とは、抗ＣＭＶ高抗体価II＋III の抽出残渣から調製す
ることにより、ＣＭＶ標準品の１０倍以上、また従来の
抗ＣＭＶ高抗体価II＋III 抽出上清画分からの調製法に
より得られる抗ＣＭＶ低力価グロブリン組成物の２．７
倍もの高抗体価を有する抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン
組成物である。また、ＩｇＧ１サブクラスの割合が血漿
中あるいは通常の静注用グロブリン製剤（通常、５５〜
６８％）と比べて有意に高い（具体的には７０〜９０％
程度が例示される）ことが特徴である。
とは、抗ＣＭＶ高抗体価II＋III の抽出残渣から調製す
ることにより、ＣＭＶ標準品の１０倍以上、また従来の
抗ＣＭＶ高抗体価II＋III 抽出上清画分からの調製法に
より得られる抗ＣＭＶ低力価グロブリン組成物の２．７
倍もの高抗体価を有する抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン
組成物である。また、ＩｇＧ１サブクラスの割合が血漿
中あるいは通常の静注用グロブリン製剤（通常、５５〜
６８％）と比べて有意に高い（具体的には７０〜９０％
程度が例示される）ことが特徴である。
【０００８】本発明のグロブリン組成物は非化学修飾完
全分子型であることが好ましい。この非化学修飾完全分
子型とは、(1) 自然のままで何らの修飾や変化も受けて
おらず、従ってγ−グロブリンのフラグメントであるＦ
ａｂ、Ｆ（ａｂ’）2 、Ｆｃ等を含まず、(2) 抗体価の
低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下もなく、(3)
抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基準で
安全とみなされる２０単位（ＣＨ50値)よりも十分に低
い、という諸性状を備えたものをいう。
全分子型であることが好ましい。この非化学修飾完全分
子型とは、(1) 自然のままで何らの修飾や変化も受けて
おらず、従ってγ−グロブリンのフラグメントであるＦ
ａｂ、Ｆ（ａｂ’）2 、Ｆｃ等を含まず、(2) 抗体価の
低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下もなく、(3)
抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基準で
安全とみなされる２０単位（ＣＨ50値)よりも十分に低
い、という諸性状を備えたものをいう。
【０００９】かかる抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン組成
物は、例えば、次のようにして製造される。
物は、例えば、次のようにして製造される。
【００１０】（原料）
出発原料としては、抗ＣＭＶ（抗体）陽性免疫グロブリ
ンを含む画分が使用され、これはヒト血漿由来であっ
て、抗ＣＭＶ陽性免疫グロブリン画分を含むものであれ
ば特に限定されない。具体的には、抗ＣＭＶ陽性血漿か
らコーンのエタノール分画により得られる画分ＩＩ＋Ｉ
ＩＩのペーストが挙げられる。また、画分ＩＩ、または
抗ＣＭＶ陽性免疫グロブリンを含むこれらと同様の画分
のペースト等を用いることができる。この出発原料は、
ヒト血液型抗体、カリクレイン、プレカリクレイン、Ｉ
ｇＭ、ＩｇＧ重合体などを含んでいてもよい。陽性の確
認は公知の免疫学的試薬（ＲＩＡ法、ＲＰＨＡ法、ＥＩ
Ａ法、ラテックス凝集反応法）との反応性を検知するこ
とによって行う。この陽性血漿を出発原料とする。
ンを含む画分が使用され、これはヒト血漿由来であっ
て、抗ＣＭＶ陽性免疫グロブリン画分を含むものであれ
ば特に限定されない。具体的には、抗ＣＭＶ陽性血漿か
らコーンのエタノール分画により得られる画分ＩＩ＋Ｉ
ＩＩのペーストが挙げられる。また、画分ＩＩ、または
抗ＣＭＶ陽性免疫グロブリンを含むこれらと同様の画分
のペースト等を用いることができる。この出発原料は、
ヒト血液型抗体、カリクレイン、プレカリクレイン、Ｉ
ｇＭ、ＩｇＧ重合体などを含んでいてもよい。陽性の確
認は公知の免疫学的試薬（ＲＩＡ法、ＲＰＨＡ法、ＥＩ
Ａ法、ラテックス凝集反応法）との反応性を検知するこ
とによって行う。この陽性血漿を出発原料とする。
【００１１】（製造法）本発明による製造方法は、以下
の処理からなる。 抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペーストの抽出残渣画分
の調製 本工程は出発原料である抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペー
ストを水性溶媒で抽出する際の抽出残渣を回収する工程
である。水性溶媒はｐＨ５〜７、好ましくは５〜６程
度、低イオン強度、例えば、０．０００１〜０．１Ｍ、
好ましくは０．０００１〜０．０１Ｍ程度を用いる。ま
た、その使用量は抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペースト１
重量部に対して１０〜３０倍量（容量で）程度が例示さ
れる。抽出画分を除いたあとの抽出残渣画分を回収す
る。
の処理からなる。 抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペーストの抽出残渣画分
の調製 本工程は出発原料である抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペー
ストを水性溶媒で抽出する際の抽出残渣を回収する工程
である。水性溶媒はｐＨ５〜７、好ましくは５〜６程
度、低イオン強度、例えば、０．０００１〜０．１Ｍ、
好ましくは０．０００１〜０．０１Ｍ程度を用いる。ま
た、その使用量は抗ＣＭＶ高抗体価II＋III ペースト１
重量部に対して１０〜３０倍量（容量で）程度が例示さ
れる。抽出画分を除いたあとの抽出残渣画分を回収す
る。
【００１２】 酸処理
の抽出残渣１重量部を等量〜１０倍量、好ましくは２
〜５倍量（容量で）の適当な水性溶媒に懸濁する。得ら
れた懸濁液のｐＨを３〜５、好ましくは３．５〜４．５
に調整し、抽出処理を行う。その後、ｐＨを５〜６に調
整し、遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３
０分程度）して上清を回収する。
〜５倍量（容量で）の適当な水性溶媒に懸濁する。得ら
れた懸濁液のｐＨを３〜５、好ましくは３．５〜４．５
に調整し、抽出処理を行う。その後、ｐＨを５〜６に調
整し、遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３
０分程度）して上清を回収する。
【００１３】得られた上清画分を公知の方法を用いて精
製する。例えば、ポリエチレングリコール分画処理、陰
イオン交換体処理、固定化ジアミノ化合物処理、固定化
ヒト血液型物質処理、加熱処理（液状、乾燥）等が例示
される（特開昭６２−２８３９３３、同６２−２８９５
２３、同６３−１４６８３２、同６３−１８３５３９号
公報等）。これらの操作を目的に応じて、適宜組み合わ
せて当該抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の製造（精
製）のために用いることができる。好適な具体例として
は、上記抽出残渣の調製、酸処理の後、液状加熱
処理→低濃度ＰＥＧ処理→高濃度ＰＥＧ処理→陰
イオン交換体処理等の処理工程を用いることができる。
具体的に説明すると以下のようになる。
製する。例えば、ポリエチレングリコール分画処理、陰
イオン交換体処理、固定化ジアミノ化合物処理、固定化
ヒト血液型物質処理、加熱処理（液状、乾燥）等が例示
される（特開昭６２−２８３９３３、同６２−２８９５
２３、同６３−１４６８３２、同６３−１８３５３９号
公報等）。これらの操作を目的に応じて、適宜組み合わ
せて当該抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の製造（精
製）のために用いることができる。好適な具体例として
は、上記抽出残渣の調製、酸処理の後、液状加熱
処理→低濃度ＰＥＧ処理→高濃度ＰＥＧ処理→陰
イオン交換体処理等の処理工程を用いることができる。
具体的に説明すると以下のようになる。
【００１４】 加熱処理
安定化剤の存在下に免疫グロブリンの抗体活性の減少は
最小限にとどめるが、夾雑するＨＢウィルス、ＡＩＤＳ
ウィルス等は完全に不活性する条件下で加熱処理する。
加熱処理は、溶液状態、即ち免疫グロブリンの水溶液状
態（即ち、液状加熱処理）で行う。加熱処理時の安定化
剤としては、二糖類（例、サッカロース、マルトー
ス）、糖アルコール（例、ソルビトール、マンニトー
ル）が好適に例示される。安定化剤の添加量は、二糖
類、糖アルコール等を１０ｗ／ｗ％以上（好ましくは３
０〜５０ｗ／ｗ％）を用いることが好適に呈示される。
加熱の対象となる免疫グロブリンの量は、蛋白量として
０．１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは２〜５ｗ／ｖ％）に
調整することが好ましい。液状加熱処理は水溶液のｐＨ
を４．５〜６．５、好ましくはｐＨ５〜６に調整し、た
とえば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０分
〜２０時間（好ましくは１０時間程度）で処理される。
最小限にとどめるが、夾雑するＨＢウィルス、ＡＩＤＳ
ウィルス等は完全に不活性する条件下で加熱処理する。
加熱処理は、溶液状態、即ち免疫グロブリンの水溶液状
態（即ち、液状加熱処理）で行う。加熱処理時の安定化
剤としては、二糖類（例、サッカロース、マルトー
ス）、糖アルコール（例、ソルビトール、マンニトー
ル）が好適に例示される。安定化剤の添加量は、二糖
類、糖アルコール等を１０ｗ／ｗ％以上（好ましくは３
０〜５０ｗ／ｗ％）を用いることが好適に呈示される。
加熱の対象となる免疫グロブリンの量は、蛋白量として
０．１〜１０ｗ／ｖ％（好ましくは２〜５ｗ／ｖ％）に
調整することが好ましい。液状加熱処理は水溶液のｐＨ
を４．５〜６．５、好ましくはｐＨ５〜６に調整し、た
とえば５０〜７０℃（好ましくは６０℃程度）、１０分
〜２０時間（好ましくは１０時間程度）で処理される。
【００１５】 低濃度ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）処理 上記で得た画分を低濃度ＰＥＧで処理し、その上清を
回収する。この上清を分子量１，０００〜１０，０００
（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧで処理
する（例えば、両者を混合する）。処理条件としては、
蛋白濃度１〜１０ｗ／ｖ％（特に２〜５ｗ／ｖ％）、Ｐ
ＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４〜８ｗ／ｖ％）、ｐ
Ｈ４〜７（特に５〜６）、イオン強度０．０００１〜
０．１Ｍ（特に０．０００１〜０．０１Ｍ）であること
が好ましい。当該処理は、通常約０〜４℃で３０分〜６
時間攪拌することによって行われる。その後、例えば遠
心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）
して上清を回収する。
Ｇ）処理 上記で得た画分を低濃度ＰＥＧで処理し、その上清を
回収する。この上清を分子量１，０００〜１０，０００
（好適には約２，０００〜６，０００）のＰＥＧで処理
する（例えば、両者を混合する）。処理条件としては、
蛋白濃度１〜１０ｗ／ｖ％（特に２〜５ｗ／ｖ％）、Ｐ
ＥＧ濃度４〜１０ｗ／ｖ％（特に４〜８ｗ／ｖ％）、ｐ
Ｈ４〜７（特に５〜６）、イオン強度０．０００１〜
０．１Ｍ（特に０．０００１〜０．０１Ｍ）であること
が好ましい。当該処理は、通常約０〜４℃で３０分〜６
時間攪拌することによって行われる。その後、例えば遠
心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）
して上清を回収する。
【００１６】 高濃度ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）処理 さらに、上記の上清を高濃度ＰＥＧで処理し、沈澱を
回収する。即ち、上記上清を分子量１，０００〜１０，
０００（好適には２，０００〜６，０００）のＰＥＧに
てさらに処理する（たとえば、両者を混合する）。処理
条件としては、蛋白濃度０．０２〜５ｗ／ｖ％（特に
０．１〜１ｗ／ｖ％）、ＰＥＧ濃度１０〜１５ｗ／ｖ％
（特に１１〜１３ｗ／ｖ％）、ｐＨ７〜１０（特に８〜
９．５）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に
０．０００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。当
該処理は、通常約０〜４℃で３０分〜６時間攪拌するこ
とによって行われる。その後、例えば遠心分離（６００
０〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して沈澱を回収
する。
Ｇ）処理 さらに、上記の上清を高濃度ＰＥＧで処理し、沈澱を
回収する。即ち、上記上清を分子量１，０００〜１０，
０００（好適には２，０００〜６，０００）のＰＥＧに
てさらに処理する（たとえば、両者を混合する）。処理
条件としては、蛋白濃度０．０２〜５ｗ／ｖ％（特に
０．１〜１ｗ／ｖ％）、ＰＥＧ濃度１０〜１５ｗ／ｖ％
（特に１１〜１３ｗ／ｖ％）、ｐＨ７〜１０（特に８〜
９．５）、イオン強度０．０００１〜０．１Ｍ（特に
０．０００１〜０．０１Ｍ）であることが好ましい。当
該処理は、通常約０〜４℃で３０分〜６時間攪拌するこ
とによって行われる。その後、例えば遠心分離（６００
０〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して沈澱を回収
する。
【００１７】 陰イオン交換体処理
の沈澱画分を水性溶媒に溶解後、陰イオン交換体で接
触処理して非吸着画分を回収する操作であり、ＩｇＭ、
アルブミン等の不純蛋白質を除くために行われるもので
ある。
触処理して非吸着画分を回収する操作であり、ＩｇＭ、
アルブミン等の不純蛋白質を除くために行われるもので
ある。
【００１８】（ｉ）陰イオン交換体
陰イオン交換体は陰イオン交換基を不溶性担体に結合し
たものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミ
ノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）
基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、
デキストラン、ポリアクリルアミド等が挙げられる。
たものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルアミ
ノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡＥ）
基等を、不溶性担体としてはアガロース、セルロース、
デキストラン、ポリアクリルアミド等が挙げられる。
【００１９】(ii) 処理方法
の沈澱画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性溶媒は
ｐＨ４〜７、好ましくは５〜６程度、低イオン強度、好
ましくは、０．０００１〜０．１Ｍの水溶液である。蛋
白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に３〜１０ｗ／ｖ
％）が好ましい。さらに、適当な水性溶媒、例えば、
０．１〜１ｗ／ｖ％塩化ナトリウム溶液等で平衡化した
陰イオン交換体と接触処理する。その処理に際してはバ
ッチ法、カラム法のどちらかを用いてもよい。たとえ
ば、バッチ法では、陰イオン交換体１ｍｌに対して当該
溶液10〜１００ｍｌ程度の割合で両者を混合し、０〜４
℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心分離（６００
０〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収
する。カラム法でも陰イオン交換体１ｍｌに対して当該
溶液１０〜１００ｍｌ程度の割合で両者を接触させ、非
吸着画分を回収する。
ｐＨ４〜７、好ましくは５〜６程度、低イオン強度、好
ましくは、０．０００１〜０．１Ｍの水溶液である。蛋
白濃度としては１〜１５ｗ／ｖ％（特に３〜１０ｗ／ｖ
％）が好ましい。さらに、適当な水性溶媒、例えば、
０．１〜１ｗ／ｖ％塩化ナトリウム溶液等で平衡化した
陰イオン交換体と接触処理する。その処理に際してはバ
ッチ法、カラム法のどちらかを用いてもよい。たとえ
ば、バッチ法では、陰イオン交換体１ｍｌに対して当該
溶液10〜１００ｍｌ程度の割合で両者を混合し、０〜４
℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、遠心分離（６００
０〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分間）して上清を回収
する。カラム法でも陰イオン交換体１ｍｌに対して当該
溶液１０〜１００ｍｌ程度の割合で両者を接触させ、非
吸着画分を回収する。
【００２０】全工程終了後、公知の方法、すなわち透
析、除菌濾過、分注等の操作により液状製剤とすること
ができる（特開昭６３−１９２７２４号公報）。さら
に、凍結乾燥等の操作による乾燥製剤とすることができ
る。
析、除菌濾過、分注等の操作により液状製剤とすること
ができる（特開昭６３−１９２７２４号公報）。さら
に、凍結乾燥等の操作による乾燥製剤とすることができ
る。
【００２１】（液状組成物の調製）得られた抗ＣＭＶ高
力価免疫グロブリンを常套手段によって１〜１０ｗ／ｖ
％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）になるように水溶液を
調製し、さらにソルビトール１〜２０ｗ／ｖ％（好まし
くは２〜１０ｗ／ｖ％）、ｐＨを５〜６（好ましくは約
５．５）、低電導度、好ましくは電導度１ｍｍｈｏ以下
（特に、０．６ｍｍｈｏ以下、共に８℃換算）になるよ
うに、自体既知の手段にて調整した後、通常の製剤化技
術に基づいて、除菌濾過、分注等を行う。かくして、静
脈内投与可能な抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン液状組成
物が調製される。
力価免疫グロブリンを常套手段によって１〜１０ｗ／ｖ
％（好ましくは３〜７ｗ／ｖ％）になるように水溶液を
調製し、さらにソルビトール１〜２０ｗ／ｖ％（好まし
くは２〜１０ｗ／ｖ％）、ｐＨを５〜６（好ましくは約
５．５）、低電導度、好ましくは電導度１ｍｍｈｏ以下
（特に、０．６ｍｍｈｏ以下、共に８℃換算）になるよ
うに、自体既知の手段にて調整した後、通常の製剤化技
術に基づいて、除菌濾過、分注等を行う。かくして、静
脈内投与可能な抗ＣＭＶ高力価免疫グロブリン液状組成
物が調製される。
【００２２】
【発明の効果】本発明により、静注可能な、高力価（抗
体活性の高い）グロブリン組成物が提供され、本高力価
グロブリン組成物は、経済的にもまた調製された製剤の
評価（高力価）の面からも有益である。
体活性の高い）グロブリン組成物が提供され、本高力価
グロブリン組成物は、経済的にもまた調製された製剤の
評価（高力価）の面からも有益である。
【００２３】
【実施例】以下の実施例及び試験例によって本発明をよ
り具体的に説明する。なお、試験例において、試験は次
の方法によって行った。
り具体的に説明する。なお、試験例において、試験は次
の方法によって行った。
【００２４】実施例１
出発原料である抗ＣＭＶ高抗体価II＋III １ｋｇを２０
Ｌの蒸留水にて抽出し、遠心分離（１万Ｇ、60分間）を
行い、沈澱（II＋III 抽出残渣）を得る。得られたＣＭ
ＶII＋III 抽出残渣ペースト０．６ｋｇを蒸留水１．８
Ｌにて懸濁し、１Ｎ塩酸にてｐＨ４．０に調整後、１時
間抽出処理を行った。さらに、１Ｎ水酸化ナトリウム溶
液にてｐＨ５．５に調整後、遠心分離（１万Ｇ、20分
間) した。これにソルビトール７２０ｇ（終濃度４０％
ｗ／ｗ）を添加し、６０℃で１０時間加熱処理を行なっ
た。加熱処理後、蒸留水３．６Ｌを加え、ＰＥＧ＃４０
００を終濃度が８％になるように添加した。さらにｐＨ
を５．５に調整し、２℃で２時間攪拌後に、遠心分離を
行った。得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを用い
ｐＨ８．８とした後、ＰＥＧ＃４０００を終濃度が１２
％になるように加え、２℃で２時間攪拌後に遠心分離を
行い、沈澱画分にＩｇＧ画分を得た。この画分を蒸留水
０．７Ｌに溶解し、０．５Ｎ塩酸にてｐＨを５．５に戻
したあと、この溶液に０．６％ＮａＣｌにて平衡化した
ＤＥＡＥ−セファデックスを添加（溶液１ｍｌ当たり
０．０３ｇ）、０〜４℃の条件下、約１時間接触処理
し、ガラスフィルターにて濾過して濾液（ＩｇＧ溶液）
を回収した。このＩｇＧ溶液を蒸留水で５％ＩｇＧ溶液
に調整し、酢酸ナトリウムで溶液をｐＨ５．５にし、さ
らにソルビトールを終濃度５％まで添加した。この水溶
液（電導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用抗ＣＭ
Ｖグロブリン液状組成物とした。
Ｌの蒸留水にて抽出し、遠心分離（１万Ｇ、60分間）を
行い、沈澱（II＋III 抽出残渣）を得る。得られたＣＭ
ＶII＋III 抽出残渣ペースト０．６ｋｇを蒸留水１．８
Ｌにて懸濁し、１Ｎ塩酸にてｐＨ４．０に調整後、１時
間抽出処理を行った。さらに、１Ｎ水酸化ナトリウム溶
液にてｐＨ５．５に調整後、遠心分離（１万Ｇ、20分
間) した。これにソルビトール７２０ｇ（終濃度４０％
ｗ／ｗ）を添加し、６０℃で１０時間加熱処理を行なっ
た。加熱処理後、蒸留水３．６Ｌを加え、ＰＥＧ＃４０
００を終濃度が８％になるように添加した。さらにｐＨ
を５．５に調整し、２℃で２時間攪拌後に、遠心分離を
行った。得られた上清を１Ｎ−水酸化ナトリウムを用い
ｐＨ８．８とした後、ＰＥＧ＃４０００を終濃度が１２
％になるように加え、２℃で２時間攪拌後に遠心分離を
行い、沈澱画分にＩｇＧ画分を得た。この画分を蒸留水
０．７Ｌに溶解し、０．５Ｎ塩酸にてｐＨを５．５に戻
したあと、この溶液に０．６％ＮａＣｌにて平衡化した
ＤＥＡＥ−セファデックスを添加（溶液１ｍｌ当たり
０．０３ｇ）、０〜４℃の条件下、約１時間接触処理
し、ガラスフィルターにて濾過して濾液（ＩｇＧ溶液）
を回収した。このＩｇＧ溶液を蒸留水で５％ＩｇＧ溶液
に調整し、酢酸ナトリウムで溶液をｐＨ５．５にし、さ
らにソルビトールを終濃度５％まで添加した。この水溶
液（電導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用抗ＣＭ
Ｖグロブリン液状組成物とした。
【００２５】実施例１で得られた抗ＣＭＶ高力価グロブ
リン組成物の評価を次の各試験項目につき行った。 （試験項目及び方法） （１）ＩｇＧ収量 ＩｇＧ収量は、ＬＣパルチゲンＩｇＧ（ヘキスト社製）
を用いて２８０ｎｍの吸光度を測定し、その値をＩｇＧ
収量とした。 （２）ＨＰＬＣ分析 重合体の定量は高速液体クロマトグラフィーで分析し
た。 （３）カリクレイン含量 夾雑物としてのカリクレイン含量としては、Ｓ２３０２
（カビ社製）を合成基質として加え、酵素基質反応を利
用して４０５ｎｍの吸光度を測定した。 （４）ＩｇＧサブクラス コンビ・リッド・キット（ザ・バインディング・サイト
・リミテッド社製）を用いて測定した。 （５）ＣＭＶ抗体価 ＣＭＶ抗体価はエンザイグノストＣＭＶプレート（ヘキ
スト社製）を用いて測定した。プレートの各ウェルに希
釈検体〔希釈倍数（Ａ）とする〕１５０ｐｌを加え、３
７℃で２時間反応させた後、洗浄し、ペルオキシダーゼ
標識抗ヒトＩｇＧを５０μｌ加えた。３７℃で１時間反
応させた後に基質液を加え、３７℃で３０分間発色させ
て４Ｎ硫酸で反応を停止させ、４０５ｎｍの吸光度を測
定した。Ｓｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧの４０５ｎｍにおけ
る吸光度が上記で測定した４０５ｎｍにおける吸光度と
同じ値を示すときのＳｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧの希釈倍
数を、希釈倍数（Ｂ）とし、Ａ／Ｂの値をその検体のＳ
ｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧに対する比活性とした。 （６）ＣＭＶ中和力価 プラーク減少法にて測定した。中和力価はプラーク減少
率の５０％点で求め、その手法は最も一般的に利用され
るＲｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法によって求めた。
リン組成物の評価を次の各試験項目につき行った。 （試験項目及び方法） （１）ＩｇＧ収量 ＩｇＧ収量は、ＬＣパルチゲンＩｇＧ（ヘキスト社製）
を用いて２８０ｎｍの吸光度を測定し、その値をＩｇＧ
収量とした。 （２）ＨＰＬＣ分析 重合体の定量は高速液体クロマトグラフィーで分析し
た。 （３）カリクレイン含量 夾雑物としてのカリクレイン含量としては、Ｓ２３０２
（カビ社製）を合成基質として加え、酵素基質反応を利
用して４０５ｎｍの吸光度を測定した。 （４）ＩｇＧサブクラス コンビ・リッド・キット（ザ・バインディング・サイト
・リミテッド社製）を用いて測定した。 （５）ＣＭＶ抗体価 ＣＭＶ抗体価はエンザイグノストＣＭＶプレート（ヘキ
スト社製）を用いて測定した。プレートの各ウェルに希
釈検体〔希釈倍数（Ａ）とする〕１５０ｐｌを加え、３
７℃で２時間反応させた後、洗浄し、ペルオキシダーゼ
標識抗ヒトＩｇＧを５０μｌ加えた。３７℃で１時間反
応させた後に基質液を加え、３７℃で３０分間発色させ
て４Ｎ硫酸で反応を停止させ、４０５ｎｍの吸光度を測
定した。Ｓｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧの４０５ｎｍにおけ
る吸光度が上記で測定した４０５ｎｍにおける吸光度と
同じ値を示すときのＳｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧの希釈倍
数を、希釈倍数（Ｂ）とし、Ａ／Ｂの値をその検体のＳ
ｔａｎｄａｒｄ ＩｇＧに対する比活性とした。 （６）ＣＭＶ中和力価 プラーク減少法にて測定した。中和力価はプラーク減少
率の５０％点で求め、その手法は最も一般的に利用され
るＲｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法によって求めた。
【００２６】試験例１（ＩｇＧ収量）実施例１の方法に
て調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の各工程に
おけるＩｇＧ収量を調べた。その結果を表１に示す。
て調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の各工程に
おけるＩｇＧ収量を調べた。その結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】試験例２（ＨＰＬＣ分析）実施例１の方法
にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物について
ＨＰＬＣ分析を行った。その結果を図１に示す。単一ピ
ークを示し、重合物を含まない静注用グロブリン製剤が
調製された。
にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物について
ＨＰＬＣ分析を行った。その結果を図１に示す。単一ピ
ークを示し、重合物を含まない静注用グロブリン製剤が
調製された。
【００２９】試験例３（カリクレイン含量）実施例１の
方法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物につ
いてカリクレイン含量をΔＥ405nm で評価した。その結
果を表２に示す。加熱処理によりカリクレインが大幅に
不活性化している。
方法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物につ
いてカリクレイン含量をΔＥ405nm で評価した。その結
果を表２に示す。加熱処理によりカリクレインが大幅に
不活性化している。
【００３０】
【表２】
【００３１】試験例４（ＩｇＧサブクラス）実施例１の
方法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の各
工程におけるＩｇＧサブクラス（％）を調べた。また、
プールしたヒト血漿に由来するII＋III ペーストを原料
とし、その抽出上清から同様に調製した組成物〔通常の
静注用免疫グロブリン製剤（乾燥製剤、非加熱、商品名
ヴェノグロブリン−Ｉ／ミドリ十字、以下ヴェノ−Ｉと
いう）〕および液状加熱製剤（液状加熱済み液状製剤、
商品名ヴェノグロブリン−IH／ミドリ十字、以下ヴェノ
−IHという）との比較も行った。その結果を表３に示
す。ＩｇＧサブクラスの分析からII＋III 水抽出残渣中
にＣＭＶ抗体が多い理由として、水抽出によるＩｇＧ抽
出効率がＩｇＧ−２＞ＩｇＧ−１であり、残渣中のＩｇ
Ｇ−１が、II＋III に比べ高比率であるためと考えられ
た。
方法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物の各
工程におけるＩｇＧサブクラス（％）を調べた。また、
プールしたヒト血漿に由来するII＋III ペーストを原料
とし、その抽出上清から同様に調製した組成物〔通常の
静注用免疫グロブリン製剤（乾燥製剤、非加熱、商品名
ヴェノグロブリン−Ｉ／ミドリ十字、以下ヴェノ−Ｉと
いう）〕および液状加熱製剤（液状加熱済み液状製剤、
商品名ヴェノグロブリン−IH／ミドリ十字、以下ヴェノ
−IHという）との比較も行った。その結果を表３に示
す。ＩｇＧサブクラスの分析からII＋III 水抽出残渣中
にＣＭＶ抗体が多い理由として、水抽出によるＩｇＧ抽
出効率がＩｇＧ−２＞ＩｇＧ−１であり、残渣中のＩｇ
Ｇ−１が、II＋III に比べ高比率であるためと考えられ
た。
【００３２】
【表３】
【００３３】試験例５（抗ＣＭＶ抗体価）実施例１の方
法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物、また
比較として抗ＣＭＶ高力価II＋III ペーストを原料と
し、その抽出上清から調製した組成物（抗ＣＭＶ低力価
グロブリン組成物）、及びヴェノ−Ｉ、ヴェノ−IHにつ
いてそれぞれ上記エンザイグノストＣＭＶ−ＥＬＩＳＡ
を用いてＣＭＶ抗体価を測定し、社内標準品に対する比
活性を調べた。結果を表４に示す。本発明の抗ＣＭＶ高
力価グロブリン製剤は、通常の静注用グロブリン製剤
（ヴェノ−Ｉ、ヴェノ−II）の１０倍以上、また抗ＣＭ
Ｖ高抗体価II＋III 抽出上清画分からの調製法により得
られる抗ＣＭＶ低力価グロブリン製剤の２．７倍もの高
抗体価を示した。
法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物、また
比較として抗ＣＭＶ高力価II＋III ペーストを原料と
し、その抽出上清から調製した組成物（抗ＣＭＶ低力価
グロブリン組成物）、及びヴェノ−Ｉ、ヴェノ−IHにつ
いてそれぞれ上記エンザイグノストＣＭＶ−ＥＬＩＳＡ
を用いてＣＭＶ抗体価を測定し、社内標準品に対する比
活性を調べた。結果を表４に示す。本発明の抗ＣＭＶ高
力価グロブリン製剤は、通常の静注用グロブリン製剤
（ヴェノ−Ｉ、ヴェノ−II）の１０倍以上、また抗ＣＭ
Ｖ高抗体価II＋III 抽出上清画分からの調製法により得
られる抗ＣＭＶ低力価グロブリン製剤の２．７倍もの高
抗体価を示した。
【００３４】
【表４】
【００３５】試験例６（ＣＭＶ中和力価）実施例１の方
法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物、また
比較として現在西ドイツで抗ＣＭＶ高力価グロブリン製
剤として販売されている製剤３種[Cytomegalie(Behring
werke 社製) 、Cytotect(Biotest社製) 、CMV-Polyglob
in(Troponwerke(Cutter 社製)]についてそれぞれ標準化
前の中和力価及び社内標準品で標準化した中和力価を求
めた。結果を表５に示した。本発明の抗ＣＭＶ高力価グ
ロブリン組成物は、非常に高い中和力価（単位重量当た
り）を示した。次に力価の高いCytomegalie は筋注製剤
であるので、静注製剤としては、本発明の抗ＣＭＶ高力
価グロブリン組成物が、群を抜いて力価が高いといえ
る。
法にて調製した抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物、また
比較として現在西ドイツで抗ＣＭＶ高力価グロブリン製
剤として販売されている製剤３種[Cytomegalie(Behring
werke 社製) 、Cytotect(Biotest社製) 、CMV-Polyglob
in(Troponwerke(Cutter 社製)]についてそれぞれ標準化
前の中和力価及び社内標準品で標準化した中和力価を求
めた。結果を表５に示した。本発明の抗ＣＭＶ高力価グ
ロブリン組成物は、非常に高い中和力価（単位重量当た
り）を示した。次に力価の高いCytomegalie は筋注製剤
であるので、静注製剤としては、本発明の抗ＣＭＶ高力
価グロブリン組成物が、群を抜いて力価が高いといえ
る。
【００３６】
【表５】
【図１】抗ＣＭＶ高力価グロブリン組成物についてＨＰ
ＬＣ分析パターンを示す。
ＬＣ分析パターンを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 武智 和男
大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号
株式会社ミドリ十字中央研究所内
(56)参考文献 特開 昭59−225125（ＪＰ，Ａ)
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｃｒｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏ
ｌ．25（1989） Ｐ139−152
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 39/395
ＭＥＤＬＩＮＥ
Claims (2)
- 【請求項１】 高抗体価ＩＩ＋ＩＩＩペーストを１０〜
３０倍量の水で、ｐＨ５〜７の条件下で抽出する際の抽
出残渣を用いて、該抽出残渣を水に懸濁して得られた懸
濁液の抽出処理をｐＨ３〜５の条件下で行うことを特徴
とする、ＩｇＧ１サブクラスの割合が７０〜９０％であ
る高力価免疫グロブリン組成物の製造方法。 - 【請求項２】 高力価免疫グロブリンが抗サイトメガロ
ウイルス高力価免疫グロブリンである請求項１記載の製
造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30665591A JP3515579B2 (ja) | 1991-10-25 | 1991-10-25 | 高力価グロブリン組成物およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30665591A JP3515579B2 (ja) | 1991-10-25 | 1991-10-25 | 高力価グロブリン組成物およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05117166A JPH05117166A (ja) | 1993-05-14 |
| JP3515579B2 true JP3515579B2 (ja) | 2004-04-05 |
Family
ID=17959729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30665591A Expired - Fee Related JP3515579B2 (ja) | 1991-10-25 | 1991-10-25 | 高力価グロブリン組成物およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3515579B2 (ja) |
-
1991
- 1991-10-25 JP JP30665591A patent/JP3515579B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｃｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏｌ．２５（１９８９） Ｐ１３９−１５２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05117166A (ja) | 1993-05-14 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20040116 |
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |