JP3487064B2 - 基質の定量法 - Google Patents
基質の定量法Info
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- JP3487064B2 JP3487064B2 JP04859896A JP4859896A JP3487064B2 JP 3487064 B2 JP3487064 B2 JP 3487064B2 JP 04859896 A JP04859896 A JP 04859896A JP 4859896 A JP4859896 A JP 4859896A JP 3487064 B2 JP3487064 B2 JP 3487064B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、バイオセンサを用
いて、試料中のグルコースなどの基質を定量する定量法
に関する。
いて、試料中のグルコースなどの基質を定量する定量法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】基質の定量法の一例として、グルコ−ス
の定量法について説明する。電気化学的にグルコ−スを
定量する方法としては、グルコ−スオキシダ−ゼ（ＥＣ
１．１．３．４）と酸素電極あるいは過酸化水素電極と
を組み合わせた方式が一般的に知られている（例えば、
鈴木周一編「バイオセンサ−」講談社）。グルコースオ
キシダーゼは、酸素を電子受容体として、基質であるβ
−Ｄ−グルコ−スをＤ−グルコノ−δ−ラクトンに選択
的に酸化する。この反応に伴い、酸素は過酸化水素に還
元される。この時の酸素消費量を酸素電極によって測定
するか、もしくは過酸化水素の生成量を過酸化水素電極
によって測定することによって、グルコ−スを定量する
ことができる。
の定量法について説明する。電気化学的にグルコ−スを
定量する方法としては、グルコ−スオキシダ−ゼ（ＥＣ
１．１．３．４）と酸素電極あるいは過酸化水素電極と
を組み合わせた方式が一般的に知られている（例えば、
鈴木周一編「バイオセンサ−」講談社）。グルコースオ
キシダーゼは、酸素を電子受容体として、基質であるβ
−Ｄ−グルコ−スをＤ−グルコノ−δ−ラクトンに選択
的に酸化する。この反応に伴い、酸素は過酸化水素に還
元される。この時の酸素消費量を酸素電極によって測定
するか、もしくは過酸化水素の生成量を過酸化水素電極
によって測定することによって、グルコ−スを定量する
ことができる。
【０００３】上記の方法によると、その反応過程からも
推測できるように、測定結果は試料溶液中に溶存してい
る酸素濃度の影響を大きく受ける。また、酸素のない条
件下では測定が不可能となる。
推測できるように、測定結果は試料溶液中に溶存してい
る酸素濃度の影響を大きく受ける。また、酸素のない条
件下では測定が不可能となる。
【０００４】そこで、酸素を電子受容体として用いず、
フェリシアン化カリウム、フェロセン誘導体、キノン誘
導体等の有機化合物や金属錯体を電子受容体として用い
る新しいタイプのグルコ−スセンサが開発されてきた。
このタイプのセンサは、酵素反応の結果生じた電子受容
体の還元体を、電極で酸化することにより、その酸化電
流からグルコ−ス濃度を求めるものである。
フェリシアン化カリウム、フェロセン誘導体、キノン誘
導体等の有機化合物や金属錯体を電子受容体として用い
る新しいタイプのグルコ−スセンサが開発されてきた。
このタイプのセンサは、酵素反応の結果生じた電子受容
体の還元体を、電極で酸化することにより、その酸化電
流からグルコ−ス濃度を求めるものである。
【０００５】さらに、このような電子受容体を酸素の代
わりに用いると、既知量のグルコースオキシダーゼと電
子受容体を、安定な状態で、正確に電極上に担持させる
ことが可能となる。その場合、電極系と反応層を乾燥状
態に近い状態で一体化することができる。この技術に基
づいた使い捨て型グルコ−スセンサは、測定器に挿入さ
れたセンサチップに検体試料を導入するだけで容易にグ
ルコ−ス濃度を測定することができることから、近年多
くの注目を集めている。このような手法は、グルコ−ス
の定量に限らず、他の特定化合物の定量にも応用可能で
ある。
わりに用いると、既知量のグルコースオキシダーゼと電
子受容体を、安定な状態で、正確に電極上に担持させる
ことが可能となる。その場合、電極系と反応層を乾燥状
態に近い状態で一体化することができる。この技術に基
づいた使い捨て型グルコ−スセンサは、測定器に挿入さ
れたセンサチップに検体試料を導入するだけで容易にグ
ルコ−ス濃度を測定することができることから、近年多
くの注目を集めている。このような手法は、グルコ−ス
の定量に限らず、他の特定化合物の定量にも応用可能で
ある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上記の様な電子受容体
を用い、さらに電極系と反応層を一体化する技術によ
り、基質の簡便な電気化学的定量評価が可能となった。
を用い、さらに電極系と反応層を一体化する技術によ
り、基質の簡便な電気化学的定量評価が可能となった。
【０００７】特に血糖値測定用バイオセンサは、上記の
様な技術の発展により、同様のタイプのセンサが多数開
発され、市場競争は激化する一方である。また、センサ
の主使用者である糖尿病患者も、上昇の一途をたどって
いる。
様な技術の発展により、同様のタイプのセンサが多数開
発され、市場競争は激化する一方である。また、センサ
の主使用者である糖尿病患者も、上昇の一途をたどって
いる。
【０００８】そのような状況下でセンサ特性の更なる高
性能化が望まれており、その開発競争が激化している。
性能化が望まれており、その開発競争が激化している。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記の高性能化を達成す
るために本発明は、絶縁性の基板上に形成された作用極
および対極から成る電極系と、少なくとも酸化還元酵素
および電子受容体を含む反応層とを具備するバイオセン
サを用いて、試料中の基質と前記酸化還元酵素および電
子受容体との反応に際しての物質濃度変化を、前記作用
極−対極間に電圧を印加することで得られる電流応答に
基づいて検知する定量法において、電流応答を得るため
の印加電圧を、対極を基準とした作用極電位から開始
し、作用極電位の印加から一定時間経過後、印加作用極
電位と特定の条件にある電位での電流値を電流応答とし
て検知することを特徴とする基質の定量法である。
るために本発明は、絶縁性の基板上に形成された作用極
および対極から成る電極系と、少なくとも酸化還元酵素
および電子受容体を含む反応層とを具備するバイオセン
サを用いて、試料中の基質と前記酸化還元酵素および電
子受容体との反応に際しての物質濃度変化を、前記作用
極−対極間に電圧を印加することで得られる電流応答に
基づいて検知する定量法において、電流応答を得るため
の印加電圧を、対極を基準とした作用極電位から開始
し、作用極電位の印加から一定時間経過後、印加作用極
電位と特定の条件にある電位での電流値を電流応答とし
て検知することを特徴とする基質の定量法である。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の基質の定量法は下記実施
例に限るものではなく、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３の値、印加時
間および組み合わせ方等、また、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６の
値、印加時間および組み合わせ方等はこれに限定される
ものではない。
例に限るものではなく、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３の値、印加時
間および組み合わせ方等、また、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６の
値、印加時間および組み合わせ方等はこれに限定される
ものではない。
【００１１】また、実施例では、電位掃引速度を６０ｍ
Ｖ／ｓとしたが、これに限定されることはなく、５０〜
２００ｍＶ／ｓにおいても良好な応答特性が得られる。
また、一次関数的電位掃引に限定されることはない。
Ｖ／ｓとしたが、これに限定されることはなく、５０〜
２００ｍＶ／ｓにおいても良好な応答特性が得られる。
また、一次関数的電位掃引に限定されることはない。
【００１２】さらに、実施例では酸化還元酵素としてグ
ルコ−スオキシダ−ゼを用いたが、これに限定されるこ
とはない。酸化還元酵素として乳酸オキシダーゼまたは
乳酸デヒドロゲナーゼを用いた乳酸センサ、グルコース
デヒドロゲナーゼを用いたグルコースセンサ、コレステ
ロールオキシダーゼまたはコレステロールデヒドロゲナ
ーゼを用いたコレステロールセンサ、ウリカ−ゼを用い
た尿酸センサ、グルコースオキシダーゼ、インベルター
ゼの組合せ、グルコースオキシダーゼ、インベルター
ゼ、ムタロターゼの組合せ、フルクトースデヒドロゲナ
ーゼ、インベルターゼの組合せ、フルクトースデヒドロ
ゲナーゼ、インベルターゼ、ムタロターゼの組合せを用
いたしょ糖センサ等においても、実施例にあげたグルコ
−スセンサと同様の効果が得られる。
ルコ−スオキシダ−ゼを用いたが、これに限定されるこ
とはない。酸化還元酵素として乳酸オキシダーゼまたは
乳酸デヒドロゲナーゼを用いた乳酸センサ、グルコース
デヒドロゲナーゼを用いたグルコースセンサ、コレステ
ロールオキシダーゼまたはコレステロールデヒドロゲナ
ーゼを用いたコレステロールセンサ、ウリカ−ゼを用い
た尿酸センサ、グルコースオキシダーゼ、インベルター
ゼの組合せ、グルコースオキシダーゼ、インベルター
ゼ、ムタロターゼの組合せ、フルクトースデヒドロゲナ
ーゼ、インベルターゼの組合せ、フルクトースデヒドロ
ゲナーゼ、インベルターゼ、ムタロターゼの組合せを用
いたしょ糖センサ等においても、実施例にあげたグルコ
−スセンサと同様の効果が得られる。
【００１３】また、実施例では親水性高分子としてＣＭ
Ｃを用いたが、これに限定されることはなく、ポリビニ
ルピロリドン、ポリビニルアルコール、ゼラチンおよび
その誘導体、アクリル酸およびその塩、メタアクリル酸
およびその塩、スターチおよびその誘導体、無水マレイ
ン酸およびその塩、そして、セルロース誘導体、具体的
には、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロー
ス、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
エチルヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチル
エチルセルロースを用いても同様の効果が得られる。
Ｃを用いたが、これに限定されることはなく、ポリビニ
ルピロリドン、ポリビニルアルコール、ゼラチンおよび
その誘導体、アクリル酸およびその塩、メタアクリル酸
およびその塩、スターチおよびその誘導体、無水マレイ
ン酸およびその塩、そして、セルロース誘導体、具体的
には、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロー
ス、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
エチルヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチル
エチルセルロースを用いても同様の効果が得られる。
【００１４】一方、電子受容体としては、実施例に示し
たフェリシアン化カリウムは安定性の点等から優れてい
るが、これ以外にもｐ−ベンゾキノン、フェロセンなど
も使用できる。さらに、実施例では測定極と対極からな
る二電極系について述べたが、参照極を加えた三電極方
式においても同様の効果が得られる。
たフェリシアン化カリウムは安定性の点等から優れてい
るが、これ以外にもｐ−ベンゾキノン、フェロセンなど
も使用できる。さらに、実施例では測定極と対極からな
る二電極系について述べたが、参照極を加えた三電極方
式においても同様の効果が得られる。
【００１５】また、実施例においては、試料液に反応層
を溶解する方式について示したが、これに制限されるこ
とはなく、固定化によって試料液に不溶化させた場合に
も適用することができる。
を溶解する方式について示したが、これに制限されるこ
とはなく、固定化によって試料液に不溶化させた場合に
も適用することができる。
【００１６】以下、本発明を実施例により説明する。
（実施例１）定量法の一例として、グルコ−スの定量に
ついて説明する。まず実施例に用いたグルコ−スセンサ
について説明する。図１は、反応層を除いたグルコ−ス
センサの分解斜視図を示す。ポリエチレンテレフタレ−
トからなる絶縁性の基板１は、その表面に、銀ペースト
をスクリ−ン印刷することにより形成したリ−ド２、３
を有する。リード２、３形成後に、樹脂バインダ−を含
む導電性カ−ボンペ−ストを印刷して作用極４が形成さ
れる。この作用極４は、リ−ド２と接触している。
ついて説明する。まず実施例に用いたグルコ−スセンサ
について説明する。図１は、反応層を除いたグルコ−ス
センサの分解斜視図を示す。ポリエチレンテレフタレ−
トからなる絶縁性の基板１は、その表面に、銀ペースト
をスクリ−ン印刷することにより形成したリ−ド２、３
を有する。リード２、３形成後に、樹脂バインダ−を含
む導電性カ−ボンペ−ストを印刷して作用極４が形成さ
れる。この作用極４は、リ−ド２と接触している。
【００１７】次に、絶縁性ペ−ストを印刷して絶縁層６
が形成される。絶縁層６は、作用極４の外周部を覆って
おり、これによって作用極４の露出部分の面積を一定に
保っている。さらに、絶縁層６は、リ−ド２、３を部分
的に覆っている。
が形成される。絶縁層６は、作用極４の外周部を覆って
おり、これによって作用極４の露出部分の面積を一定に
保っている。さらに、絶縁層６は、リ−ド２、３を部分
的に覆っている。
【００１８】次に、樹脂バインダ−を含む導電性カ−ボ
ンペ−ストをリ−ド３と接触するように印刷して対極５
が形成される。前記の電極系（作用極４、対極５）上に
カルボキシメチルセルロース（以下ＣＭＣで表す）の水
溶液を滴下し、乾燥させることによりＣＭＣ層が形成さ
れる。更に、前記電極系上に、酵素としてグルコースオ
キシダーゼ、電子受容体としてフェリシアン化カリウム
を含有する水溶液を滴下し、乾燥させることにより、一
部がＣＭＣ層と混ざり合った反応層７が形成される。
ンペ−ストをリ−ド３と接触するように印刷して対極５
が形成される。前記の電極系（作用極４、対極５）上に
カルボキシメチルセルロース（以下ＣＭＣで表す）の水
溶液を滴下し、乾燥させることによりＣＭＣ層が形成さ
れる。更に、前記電極系上に、酵素としてグルコースオ
キシダーゼ、電子受容体としてフェリシアン化カリウム
を含有する水溶液を滴下し、乾燥させることにより、一
部がＣＭＣ層と混ざり合った反応層７が形成される。
【００１９】次に、反応層７上への試料液の供給をより
一層円滑にするために、レシチンの有機溶媒溶液、例え
ばトルエン溶液を試料供給部（センサ先端部）から反応
層上にわたって広げ、乾燥させることによりレシチン層
８が形成される。最後に、カバ−９およびスペ−サ−１
０を図１中、一点鎖線で示すような位置関係をもって接
着する。こうしてグルコ−スセンサが作製される。図２
はそのグルコ−スセンサの縦断面図である。
一層円滑にするために、レシチンの有機溶媒溶液、例え
ばトルエン溶液を試料供給部（センサ先端部）から反応
層上にわたって広げ、乾燥させることによりレシチン層
８が形成される。最後に、カバ−９およびスペ−サ−１
０を図１中、一点鎖線で示すような位置関係をもって接
着する。こうしてグルコ−スセンサが作製される。図２
はそのグルコ−スセンサの縦断面図である。
【００２０】図１に示す構成のセンサに試料液としてグ
ルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給した。
試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反応層
が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４に対
極５を基準として２００ｍＶ（Ｅ１）を印加し、印加と
同時にその電位を６０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。
電位印加から５秒後の５００ｍＶ（Ｅ２）での電流値を
測定し、グルコース濃度に対してプロットしたところ、
良好な直線性が得られた。印加電位の経時変化を図３に
示す。印加電圧を５００ｍＶ一定として５秒後の電流値
を測定した場合に比較して、電位を掃引することでその
直線の傾きが３０％程度増加した。ＣＭＣ層を形成しな
い場合においても、同様の結果が得られた。
ルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給した。
試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反応層
が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４に対
極５を基準として２００ｍＶ（Ｅ１）を印加し、印加と
同時にその電位を６０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。
電位印加から５秒後の５００ｍＶ（Ｅ２）での電流値を
測定し、グルコース濃度に対してプロットしたところ、
良好な直線性が得られた。印加電位の経時変化を図３に
示す。印加電圧を５００ｍＶ一定として５秒後の電流値
を測定した場合に比較して、電位を掃引することでその
直線の傾きが３０％程度増加した。ＣＭＣ層を形成しな
い場合においても、同様の結果が得られた。
【００２１】（実施例２）電位Ｅ１を種々の値に設定
し、Ｅ２を５００ｍＶとして実施例１と同様の測定を行
ったところ、Ｅ１が−３００ｍＶ以上、特に０〜３００
ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ１が−３０
０ｍＶよりも負電位側へ設定された場合、酵素反応には
関係なく作用極上において電子受容体の還元体が相当量
生成する。これが応答特性に影響を与えたものと考えら
れる。
し、Ｅ２を５００ｍＶとして実施例１と同様の測定を行
ったところ、Ｅ１が−３００ｍＶ以上、特に０〜３００
ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ１が−３０
０ｍＶよりも負電位側へ設定された場合、酵素反応には
関係なく作用極上において電子受容体の還元体が相当量
生成する。これが応答特性に影響を与えたものと考えら
れる。
【００２２】（実施例３）電位Ｅ２を種々の値に設定
し、Ｅ１を２００ｍＶとして実施例１と同様の測定を行
ったところ、Ｅ２が７００ｍＶ以下、特に４００〜６０
０ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ１が７０
０ｍＶよりも正電位側へ設定された場合、電子受容体の
酸化反応以外に、他の溶存イオンおよび溶媒の分解反応
等が生ずる場合があり、これらが応答特性に影響を与え
たものと考えられる。
し、Ｅ１を２００ｍＶとして実施例１と同様の測定を行
ったところ、Ｅ２が７００ｍＶ以下、特に４００〜６０
０ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ１が７０
０ｍＶよりも正電位側へ設定された場合、電子受容体の
酸化反応以外に、他の溶存イオンおよび溶媒の分解反応
等が生ずる場合があり、これらが応答特性に影響を与え
たものと考えられる。
【００２３】（実施例４）実施例１と同様のグルコ−ス
センサを用いた。
センサを用いた。
【００２４】図１に示す構成のセンサに試料液としてグ
ルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給した。
試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反応層
が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４に対
極５を基準として０ｍＶ（Ｅ１）を印加した。１秒経過
後、印加電位を８００ｍＶ（Ｅ３）とし、１００ミリ秒
経過後、再度印加電位を０ｍＶとした。０ｍＶへ戻すと
同時にその電位を６０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。
５００ｍＶ（Ｅ２）での電流値を測定し、グルコース濃
度に対してプロットしたところ、良好な直線性が得られ
た。印加電位の経時変化を図４に示す。８００ｍＶ（v
s.対極５）の電位を印加することで、電極表面の清浄化
と易酸化性妨害物質の除去が行われ、それにより応答特
性が向上したものと思われる。
ルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給した。
試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反応層
が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４に対
極５を基準として０ｍＶ（Ｅ１）を印加した。１秒経過
後、印加電位を８００ｍＶ（Ｅ３）とし、１００ミリ秒
経過後、再度印加電位を０ｍＶとした。０ｍＶへ戻すと
同時にその電位を６０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。
５００ｍＶ（Ｅ２）での電流値を測定し、グルコース濃
度に対してプロットしたところ、良好な直線性が得られ
た。印加電位の経時変化を図４に示す。８００ｍＶ（v
s.対極５）の電位を印加することで、電極表面の清浄化
と易酸化性妨害物質の除去が行われ、それにより応答特
性が向上したものと思われる。
【００２５】（実施例５）実施例１と同様のグルコ−ス
センサを用いた。図１に示す構成のセンサに試料液とし
てグルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給し
た。試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反
応層が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４
に対極５に対して８００ｍＶ（Ｅ４）印加した。１００
ミリ秒経過後、印加電位を２００ｍＶ（Ｅ５）とし、６
０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。５００ｍＶ（Ｅ６）
での電流値を測定し、グルコース濃度に対してプロット
したところ、良好な直線性が得られた。印加電位の経時
変化を図５に示す。８００ｍＶ（vs.対極５）の電位を
印加することで、電極表面の清浄化と易酸化性妨害物質
の除去が行われ、それにより応答特性が向上したものと
思われる。
センサを用いた。図１に示す構成のセンサに試料液とし
てグルコ−ス水溶液３μｌを試料供給孔１２より供給し
た。試料液は、空気孔１１部分まで達し、電極系上の反
応層が溶解した。試料供給から５５秒経過後、作用極４
に対極５に対して８００ｍＶ（Ｅ４）印加した。１００
ミリ秒経過後、印加電位を２００ｍＶ（Ｅ５）とし、６
０ｍＶ／ｓで正電位側へ掃引した。５００ｍＶ（Ｅ６）
での電流値を測定し、グルコース濃度に対してプロット
したところ、良好な直線性が得られた。印加電位の経時
変化を図５に示す。８００ｍＶ（vs.対極５）の電位を
印加することで、電極表面の清浄化と易酸化性妨害物質
の除去が行われ、それにより応答特性が向上したものと
思われる。
【００２６】（実施例６）電位Ｅ５を種々の値に設定
し、Ｅ６を５００ｍＶとして実施例５と同様の測定を行
ったところ、Ｅ５が−３００ｍＶ以上、特に０〜３００
ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ５が−３０
０ｍＶよりも負電位側へ設定された場合、酵素反応には
関係なく作用極上において電子受容体の還元体が相当量
生成する。これが応答特性に影響を与えたものと考えら
れる。
し、Ｅ６を５００ｍＶとして実施例５と同様の測定を行
ったところ、Ｅ５が−３００ｍＶ以上、特に０〜３００
ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ５が−３０
０ｍＶよりも負電位側へ設定された場合、酵素反応には
関係なく作用極上において電子受容体の還元体が相当量
生成する。これが応答特性に影響を与えたものと考えら
れる。
【００２７】（実施例７）電位Ｅ６を種々の値に設定
し、Ｅ５を２００ｍＶとして実施例５と同様の測定を行
ったところ、Ｅ６が７００ｍＶ以下、特に４００〜６０
０ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ６が７０
０ｍＶよりも正電位側へ設定された場合、電子受容体の
酸化反応以外に、他の溶存イオンおよび溶媒の分解反応
等が生ずる場合があり、これらが応答特性に影響を与え
たものと考えられる。
し、Ｅ５を２００ｍＶとして実施例５と同様の測定を行
ったところ、Ｅ６が７００ｍＶ以下、特に４００〜６０
０ｍＶの時に良好な応答特性が観察された。Ｅ６が７０
０ｍＶよりも正電位側へ設定された場合、電子受容体の
酸化反応以外に、他の溶存イオンおよび溶媒の分解反応
等が生ずる場合があり、これらが応答特性に影響を与え
たものと考えられる。
【００２８】
【発明の効果】以上のように本発明によると、高い信頼
性を有する基質の定量を行なうことができる。
性を有する基質の定量を行なうことができる。
【図１】本発明の一実施例に使用したグルコ−スセンサ
の反応層を除いた分解斜視図
の反応層を除いた分解斜視図
【図２】同グルコ−スセンサの要部の縦断面図
【図３】本発明の一実施例における印加電位の経時変化
を示す図
を示す図
【図４】本発明の一実施例における印加電位の経時変化
を示す図
を示す図
【図５】本発明の一実施例における印加電位の経時変化
を示す図
を示す図
１ 絶縁性の基板
２，３ リ−ド
４ 作用極
５ 対極
６ 絶縁層
７ 反応層
８ レシチン層
９ カバ−
１０ スペ−サ−
１１ 空気孔
１２ 試料供給孔
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 特開 平８−15220（ＪＰ，Ａ)
特開 平７−151727（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 27/26 - 27/49
Claims (6)
- 【請求項１】 絶縁性の基板上に形成された作用極およ
び対極から成る電極系と、少なくとも酸化還元酵素およ
び電子受容体を含む反応層とを具備するバイオセンサを
用いて、試料中の基質と前記酸化還元酵素および前記電
子受容体との反応に際しての物質濃度変化を、前記作用
極と前記対極との間に電圧を印加することで得られる電
流応答に基づいて検知する定量法において、電流応答を
得るための印加電位を前記対極を基準とした前記作用極
の電位Ｅ１から開始し、Ｅ１印加から一定時間経過後、
Ｅ３＞Ｅ１の条件を満たす電位Ｅ３を一定時間印加し、
次にＥ３＞Ｅ２＞Ｅ１の条件を満たす電位Ｅ２での電流
値を電流応答として検知することを特徴とする基質の定
量法。 - 【請求項２】 絶縁性の基板上に形成された作用極およ
び対極から成る電極系と、少なくとも酸化還元酵素およ
び電子受容体を含む反応層とを具備するバイオセンサを
用いて、試料中の基質と前記酸化還元酵素および前記電
子受容体との反応に際しての物質濃度変化を、前記作用
極と前記対極との間に電圧を印加することで得られる電
流応答に基づいて検知する定量法において、電流応答を
得るための印加電位を前記対極を基準とした前記作用極
の電位Ｅ４から開始し、Ｅ４印加から一定時間経過後、
Ｅ５＜Ｅ４の条件を満たす電位Ｅ５に変化させ、Ｅ５印
加から一定時間経過後、Ｅ６＞Ｅ５の条件を満たす電位
Ｅ６での電流値を電流応答として検知することを特徴と
する基質の定量法。 - 【請求項３】 Ｅ１またはＥ５が−３００ｍＶ以上であ
ることを特徴とする、請求項１または２に記載の基質の
定量法。 - 【請求項４】 Ｅ２またはＥ６が７００ｍＶ以下である
ことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の基質
の定量法。 - 【請求項５】 Ｅ１またはＥ５が０〜３００ｍＶである
ことを特徴とする、請求項３記載の基質の定量法。 - 【請求項６】 Ｅ２またはＥ６が４００〜６００ｍＶで
あることを特徴とする請求項４記載の基質の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04859896A JP3487064B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 基質の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04859896A JP3487064B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 基質の定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09243599A JPH09243599A (ja) | 1997-09-19 |
| JP3487064B2 true JP3487064B2 (ja) | 2004-01-13 |
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ID=12807855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP04859896A Expired - Fee Related JP3487064B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 基質の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3487064B2 (ja) |
-
1996
- 1996-03-06 JP JP04859896A patent/JP3487064B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
| JPH09243599A (ja) | 1997-09-19 |
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