JP3486196B2 - ストレプトリジンｏの精製方法、この方法により得られる完全ストレプトリジンｏおよびその使用 - Google Patents
ストレプトリジンｏの精製方法、この方法により得られる完全ストレプトリジンｏおよびその使用Info
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- C07K—PEPTIDES
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- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
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Description
【０００１】本発明は、クロマトグラフィーによるスト
レプトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法およびストレプト
リジンの使用方法に関する。
レプトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法およびストレプト
リジンの使用方法に関する。
【０００２】ストレプトリジンＯ（以下ＳＬＯと記す）
は連鎖球菌（streptococcus）属の細菌により形成され
る細胞外、細胞溶解性毒素である。人間が連鎖球菌に感
染するとＳＬＯに対する抗体が形成されるが、これは診
断上重要である。
は連鎖球菌（streptococcus）属の細菌により形成され
る細胞外、細胞溶解性毒素である。人間が連鎖球菌に感
染するとＳＬＯに対する抗体が形成されるが、これは診
断上重要である。
【０００３】連鎖球菌培養液中のタンパク質加水分解活
性の故に、分子量６０,０００Ｄの完全ＳＬＯを比較的
多量に単離することはこれまでできていない。単離され
るのは主として約５３,０００Ｄの分子量を有するタン
パク質加水分解的に分解されたＳＬＯである。さらに、
ＳＬＯが大気中酸素により可逆的に不活化され得ること
そしてチオール化合物により活性化され得ることも知ら
れている。すべての既知のＳＬＯ精製方法は極めて手間
がかかり、費用のかかる工程を含み、そして高純度物質
を低収率でしか与えず、従って生産規模でのＳＬＯ精製
にはふさわしくない。Biochem. J. 207, 557-560（198
2）には、疎水相互作用クロマトグラフィーによっては
ＳＬＯを活性な形で得ることができなかったと記されて
いる。
性の故に、分子量６０,０００Ｄの完全ＳＬＯを比較的
多量に単離することはこれまでできていない。単離され
るのは主として約５３,０００Ｄの分子量を有するタン
パク質加水分解的に分解されたＳＬＯである。さらに、
ＳＬＯが大気中酸素により可逆的に不活化され得ること
そしてチオール化合物により活性化され得ることも知ら
れている。すべての既知のＳＬＯ精製方法は極めて手間
がかかり、費用のかかる工程を含み、そして高純度物質
を低収率でしか与えず、従って生産規模でのＳＬＯ精製
にはふさわしくない。Biochem. J. 207, 557-560（198
2）には、疎水相互作用クロマトグラフィーによっては
ＳＬＯを活性な形で得ることができなかったと記されて
いる。
【０００４】驚くべきことに、ＳＬＯを、例えば培養溶
液から、水溶性チオール化合物および十分高濃度の硫酸
アンモニウムの存在下に、緩衝液中のフェニル−RSepha
roseまたは疎水相互作用クロマトグラフィーに適した他
の支持体に結合させることができ、そしてそれを漸減硫
酸アンモニウム濃度勾配中での濃度勾配により他のタン
パク質成分から分離することが見出された。
液から、水溶性チオール化合物および十分高濃度の硫酸
アンモニウムの存在下に、緩衝液中のフェニル−RSepha
roseまたは疎水相互作用クロマトグラフィーに適した他
の支持体に結合させることができ、そしてそれを漸減硫
酸アンモニウム濃度勾配中での濃度勾配により他のタン
パク質成分から分離することが見出された。
【０００５】従って、本発明は、ＳＬＯ含有溶液を、水
溶性チオール化合物と塩の存在下に、緩衝液中の疎水相
互作用クロマトグラフィーに適した物質と接触させ、そ
して前記吸着用の塩の濃度よりも低い濃度から始まる負
の濃度勾配を用いて塩の溶液による濃度勾配溶出により
溶出し、そしてＳＬＯを含む画分を取得することより成
るストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法に関する。
溶性チオール化合物と塩の存在下に、緩衝液中の疎水相
互作用クロマトグラフィーに適した物質と接触させ、そ
して前記吸着用の塩の濃度よりも低い濃度から始まる負
の濃度勾配を用いて塩の溶液による濃度勾配溶出により
溶出し、そしてＳＬＯを含む画分を取得することより成
るストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法に関する。
【０００６】この簡単な方法を用いて、随伴酵素を実質
的に含まない生物学的に高活性のＳＬＯを高収率で単離
することができる。文献記載のＳＬＯ製品とは対照的
に、本発明方法により精製されたＳＬＯはタンパク質加
水分解的に断片化されていない、すなわち完全ＳＬＯで
ある。
的に含まない生物学的に高活性のＳＬＯを高収率で単離
することができる。文献記載のＳＬＯ製品とは対照的
に、本発明方法により精製されたＳＬＯはタンパク質加
水分解的に断片化されていない、すなわち完全ＳＬＯで
ある。
【０００７】ＳＬＯ含有溶液は連鎖球菌、好ましくは溶
血連鎖球菌、の培養濃縮液であってよい。
血連鎖球菌、の培養濃縮液であってよい。
【０００８】しかしながら、かかる溶液中のＳＬＯは遺
伝子工学により製造された生成物であってもよい。該生
成物は、天然構造またはアレリック構造であってよく、
あるいは誘導体であってさえもよい。
伝子工学により製造された生成物であってもよい。該生
成物は、天然構造またはアレリック構造であってよく、
あるいは誘導体であってさえもよい。
【０００９】従って本発明は、前述の方法により取得で
きる完全ストレプトリジンＯにも関する。
きる完全ストレプトリジンＯにも関する。
【００１０】吸着に用いられる塩は好ましくは硫酸アン
モニウムである。しかしながら、タンパク質に対して塩
析効果を示す他のいずれの塩を用いてもよい。硫酸アン
モニウムの場合、濃度は飽和濃度の１５％〜２５％であ
る。
モニウムである。しかしながら、タンパク質に対して塩
析効果を示す他のいずれの塩を用いてもよい。硫酸アン
モニウムの場合、濃度は飽和濃度の１５％〜２５％であ
る。
【００１１】チオール化合物はタンパク質ジスルフィド
結合を分解する化合物、好ましくはβ−メルカプトエタ
ノール、チオグリセロール、チオグリコレートまたはジ
チオトレイトールである。
結合を分解する化合物、好ましくはβ−メルカプトエタ
ノール、チオグリセロール、チオグリコレートまたはジ
チオトレイトールである。
【００１２】クロマトグラフィーに用いられる緩衝液
は、好ましくはアルカリ性緩衝液（好ましくはpH７.５
〜８.５）、好ましくは０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3である。
は、好ましくはアルカリ性緩衝液（好ましくはpH７.５
〜８.５）、好ましくは０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3である。
【００１３】クロマトグラフィー物質は好ましくは表面
にアルキルまたはアリール基を含み、そして好ましくは
フェニル−RSepharoseである。
にアルキルまたはアリール基を含み、そして好ましくは
フェニル−RSepharoseである。
【００１４】この方法によって得られたＳＬＯ溶液は、
なおも、タンパク質加水分解的に分解されたＳＬＯ、お
よび不活性ＳＬＯで汚染されている可能性がある。
なおも、タンパク質加水分解的に分解されたＳＬＯ、お
よび不活性ＳＬＯで汚染されている可能性がある。
【００１５】驚くべきことに、例えばSephacrylR S300
HRまたは同様の分離特性を有する他のクロマトグラフィ
ー物質を用いた、チオール化合物の存在下でのゲル浸透
クロマトグラフィーにより、不活性の、またはタンパク
質加水分解的に分解されたＳＬＯ分子をそのような溶液
から除去でき、そして高活性の完全ＳＬＯを得ることが
できることが見出された。
HRまたは同様の分離特性を有する他のクロマトグラフィ
ー物質を用いた、チオール化合物の存在下でのゲル浸透
クロマトグラフィーにより、不活性の、またはタンパク
質加水分解的に分解されたＳＬＯ分子をそのような溶液
から除去でき、そして高活性の完全ＳＬＯを得ることが
できることが見出された。
【００１６】ゲルクロマトグラフィーにおけるチオール
化合物も同じく好ましくは、タンパク質ジスルフィド結
合を分解する化合物、特にβ−メルカプトエタノール、
チオグリセロール、チオグリコレートまたはジチオトレ
イトールである。
化合物も同じく好ましくは、タンパク質ジスルフィド結
合を分解する化合物、特にβ−メルカプトエタノール、
チオグリセロール、チオグリコレートまたはジチオトレ
イトールである。
【００１７】好ましくは、クロマトグラフィーは、（好
ましくはpH７.５〜８.５の）アルカリ性pHを有する緩衝
液、好ましくは０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3、中で行われる。
ましくはpH７.５〜８.５の）アルカリ性pHを有する緩衝
液、好ましくは０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3、中で行われる。
【００１８】クロマトグラフィー緩衝液は、付加的に、
塩、好ましくは塩化ナトリウム、を好ましくは０.２Ｍ
〜２Ｍの濃度で含有することができる。
塩、好ましくは塩化ナトリウム、を好ましくは０.２Ｍ
〜２Ｍの濃度で含有することができる。
【００１９】このクロマトグラフィー工程を経た後は、
ＳＬＯは高純度で高溶血活性の調製物の形となるが、こ
れは滅菌、冷条件下に貯蔵すれば数ヶ月間にわたって安
定したままである。
ＳＬＯは高純度で高溶血活性の調製物の形となるが、こ
れは滅菌、冷条件下に貯蔵すれば数ヶ月間にわたって安
定したままである。
【００２０】見出されたアミノ末端アミノ酸配列はＮＨ
２−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ
−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−であった。
２−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ
−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−であった。
【００２１】このようにして調製されたＳＬＯは人間の
血清または血漿中のＳＬＯに対する抗体を測定する診断
系において試験抗原として用いることができる。それら
試験系の特異性は、使用ＳＬＯの純度が高度であるた
め、優れている。
血清または血漿中のＳＬＯに対する抗体を測定する診断
系において試験抗原として用いることができる。それら
試験系の特異性は、使用ＳＬＯの純度が高度であるた
め、優れている。
【００２２】さらに、本発明により調製されたＳＬＯ
は、人間または動物のＳＬＯに対する高特異性抗体を免
疫アフィニティークロマトグラフィーにより単離するの
に適しているが、それら抗体は診断試験系に用いれば高
特異性標準として役立てることができる。
は、人間または動物のＳＬＯに対する高特異性抗体を免
疫アフィニティークロマトグラフィーにより単離するの
に適しているが、それら抗体は診断試験系に用いれば高
特異性標準として役立てることができる。
【００２３】
実施例１
ａ. 出発材料の調製
化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）H46Aの培養上
清２０リットルをKiefer, D. et al., Infect. Immun.
13(2), 1976, p. 501-512に記載された方法により調製
した。遠心分離により澄明化させた培養上清を３０KD排
除限界を有する限外濾過装置を用いて１２０mlの容量ま
で濃縮した。
清２０リットルをKiefer, D. et al., Infect. Immun.
13(2), 1976, p. 501-512に記載された方法により調製
した。遠心分離により澄明化させた培養上清を３０KD排
除限界を有する限外濾過装置を用いて１２０mlの容量ま
で濃縮した。
【００２４】ｂ. 疎水相互作用クロマトグラフィー
０.１容量％のβ−メルカプトエタノール、次いで４０m
lの飽和硫酸アンモニウム溶液を撹拌しながら実施例ａ
よりの出発材料１２０mlに添加した；形成された沈殿を
遠心分離し、捨てた。その材料を０.１Ｍ ＮａＨＣ
Ｏ3、２５％硫酸アンモニウムおよび０.１容量％β−メ
ルカプトエタノールで平衡させた。フェニル−Sepharos
eRのカラム（２.５×３０cm）にかけた。４００mlの平
衡緩衝液をまず濃度勾配ミキサーに導入した。０.１Ｍ
ＮａＨＣＯ3、０.１容量％β−メルカプトエタノール中
の漸減直線硫酸アンモニウム濃度勾配（２５％→０％）
を用いて溶出を行った。
lの飽和硫酸アンモニウム溶液を撹拌しながら実施例ａ
よりの出発材料１２０mlに添加した；形成された沈殿を
遠心分離し、捨てた。その材料を０.１Ｍ ＮａＨＣ
Ｏ3、２５％硫酸アンモニウムおよび０.１容量％β−メ
ルカプトエタノールで平衡させた。フェニル−Sepharos
eRのカラム（２.５×３０cm）にかけた。４００mlの平
衡緩衝液をまず濃度勾配ミキサーに導入した。０.１Ｍ
ＮａＨＣＯ3、０.１容量％β−メルカプトエタノール中
の漸減直線硫酸アンモニウム濃度勾配（２５％→０％）
を用いて溶出を行った。
【００２５】溶出液を画分として集めた。最高溶血活性
（測定については実施例２参照）を合一し、そして３０
KD排除限界を有する限外濾過装置で最大容量１０mlの粗
製ストレプトリジンまで濃縮した。
（測定については実施例２参照）を合一し、そして３０
KD排除限界を有する限外濾過装置で最大容量１０mlの粗
製ストレプトリジンまで濃縮した。
【００２６】実施例２
ゲル浸透クロマトグラフィー
実施例１よりの粗製ストレプトリジンを０.１Ｍ ＮａＨ
ＣＯ3、１Ｍ ＮａＣｌおよび０.１容量％β−メルカプ
トエタノールで平衡させたSepharoseR S-300のクロマト
グラフィーカラム（２.５×８０cm）に導入した。
ＣＯ3、１Ｍ ＮａＣｌおよび０.１容量％β−メルカプ
トエタノールで平衡させたSepharoseR S-300のクロマト
グラフィーカラム（２.５×８０cm）に導入した。
【００２７】４０cm／時の流速を用いて平衡緩衝液で溶
出を行い、そして溶出液を画分として集めた。
出を行い、そして溶出液を画分として集めた。
【００２８】最高の溶血活性を有する画分を合一したと
ころ、それらは高純度ＳＬＯである。
ころ、それらは高純度ＳＬＯである。
【００２９】ａによる２０リットルの出発材料から２７
mgのＳＬＯを単離することができた。
mgのＳＬＯを単離することができた。
【００３０】分子量既知の各種タンパク質と比較しつつ
ＳＬＯのＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（スタン
ダードNo.４、Serva、１０％アクリルアミドおよび０.
３３％Ｎ,Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミドを用い
たLaemmliによるゲルシステム）を行った。タンパク質
バンドをRServablau R250で染色した。
ＳＬＯのＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（スタン
ダードNo.４、Serva、１０％アクリルアミドおよび０.
３３％Ｎ,Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミドを用い
たLaemmliによるゲルシステム）を行った。タンパク質
バンドをRServablau R250で染色した。
【００３１】実施例２よりのＳＬＯは、約７８,０００
Ｄの見掛け分子量を有するバンドとして現われる。
Ｄの見掛け分子量を有するバンドとして現われる。
【００３２】実施例２よりのＳＬＯのアミノ末端タンパ
ク質配列分析 Edmanによる配列分析で、実施例２よりのＳＬＯのタン
パク質のアミノ末端の最後の１０アミノ酸を測定するこ
とができた。ＮＨ２−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−
なる配列が見出された。
ク質配列分析 Edmanによる配列分析で、実施例２よりのＳＬＯのタン
パク質のアミノ末端の最後の１０アミノ酸を測定するこ
とができた。ＮＨ２−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−
なる配列が見出された。
【００３３】８個の位置において、見出された配列は、
Kehoe, M. et al.（Infect. Immun.55(12), 1987, p. 3
228-3232）のＤＮＡ配列から導かれたＳＬＯのアミノ末
端配列と一致する。すなわち、本発明による生成物はア
ミノ末端的に完全なＳＬＯであることを示すことができ
る。
Kehoe, M. et al.（Infect. Immun.55(12), 1987, p. 3
228-3232）のＤＮＡ配列から導かれたＳＬＯのアミノ末
端配列と一致する。すなわち、本発明による生成物はア
ミノ末端的に完全なＳＬＯであることを示すことができ
る。
【００３４】ＳＬＯの溶血活性の測定
１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡおよび０.１容量％β−メルカプ
トエタノールを含む、ＰＢＳ（pH７.２）中の供試ＳＬ
Ｏ含有調製物の等比希釈列を９６穴Ｕ形マイクロタイタ
ープレートにまず導入する（１００μl）。１００μlの
１％強度（容量％）の用時調整ウサギ赤血球懸濁液をピ
ペットでマイクロタイタープレートの各穴に導入する。
ゆるやかに振盪することにより混合を行う。
トエタノールを含む、ＰＢＳ（pH７.２）中の供試ＳＬ
Ｏ含有調製物の等比希釈列を９６穴Ｕ形マイクロタイタ
ープレートにまず導入する（１００μl）。１００μlの
１％強度（容量％）の用時調整ウサギ赤血球懸濁液をピ
ペットでマイクロタイタープレートの各穴に導入する。
ゆるやかに振盪することにより混合を行う。
【００３５】そのプレートを加温室（humidity chambe
r）中、３７℃で６０分間インキュベートする。次いで
溶血活性を肉視評価により測定する。前記インキュベー
ション時間の後、混合物中の５０％の赤血球を溶解する
ＳＬＯ含有溶液の希釈比逆数を力値とする。
r）中、３７℃で６０分間インキュベートする。次いで
溶血活性を肉視評価により測定する。前記インキュベー
ション時間の後、混合物中の５０％の赤血球を溶解する
ＳＬＯ含有溶液の希釈比逆数を力値とする。
【００３６】１HU（溶血単位）は前記試験条件下に、使
用赤血球の５０％を溶解するＳＬＯ量である。
用赤血球の５０％を溶解するＳＬＯ量である。
【００３７】画 分
比活性（HU／mg)
出発材料 １２１９０
高純度ＳＬＯ ５１２０００
【００３８】実施例３
免疫アフィニティクロマトグラフィーによるＳＬＯに対
する抗体の精製 実施例２により精製された５０mgのＳＬＯを臭化シアン
活性化SepharoseR 4B（２０ml）に結合した。ＳＬＯ−S
epharoseRをガラスカラムに充填し、そしてＰＢＳ（pH
７.２）で平衡させた。
する抗体の精製 実施例２により精製された５０mgのＳＬＯを臭化シアン
活性化SepharoseR 4B（２０ml）に結合した。ＳＬＯ−S
epharoseRをガラスカラムに充填し、そしてＰＢＳ（pH
７.２）で平衡させた。
【００３９】９０mlのＰＢＳ（pH７.２）で希釈された
３０mlのRBeriglobin（１６％強度ヒト免疫グロブリン
濃縮液）をそのカラムにかけた。非結合型抗体をＰＢＳ
（pH７.２）でカラムから洗浄除去した。特異的抗−Ｓ
ＬＯ抗体を蒸留水中１容量％酢酸を用いてカラムから溶
出し、希水酸化ナトリウム溶液で直ちに中和し、そして
限外濾過により濃縮した。３０mlのRBeriglobinから２
４.６mgの抗−ＳＬＯ抗体を単離することができた。
３０mlのRBeriglobin（１６％強度ヒト免疫グロブリン
濃縮液）をそのカラムにかけた。非結合型抗体をＰＢＳ
（pH７.２）でカラムから洗浄除去した。特異的抗−Ｓ
ＬＯ抗体を蒸留水中１容量％酢酸を用いてカラムから溶
出し、希水酸化ナトリウム溶液で直ちに中和し、そして
限外濾過により濃縮した。３０mlのRBeriglobinから２
４.６mgの抗−ＳＬＯ抗体を単離することができた。
【００４０】ＳＬＯに対する精製ヒト抗−ＳＬＯ抗体の
Ouchterlony免疫拡散においてRBeriglobinで対比する
と、実施例１による出発材料、実施例１による粗製ＳＬ
Ｏおよび実施例２による精製ＳＬＯでは、ＳＬＯ出発材
料の各種成分に対して沈降素バンドを示すのに対し、精
製抗−ＳＬＯ抗体はＳＬＯとだけ反応する。
Ouchterlony免疫拡散においてRBeriglobinで対比する
と、実施例１による出発材料、実施例１による粗製ＳＬ
Ｏおよび実施例２による精製ＳＬＯでは、ＳＬＯ出発材
料の各種成分に対して沈降素バンドを示すのに対し、精
製抗−ＳＬＯ抗体はＳＬＯとだけ反応する。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
(Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｐ 21/00
Ｃ１２Ｒ 1:46） Ｃ１２Ｒ 1:46
(56)参考文献 特開 平１−290698（ＪＰ，Ａ)
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，1982年，207,
557−560
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 1/16
C07K 14/315
Claims (12)
- 【請求項１】 ストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）含有溶液
を、水溶性チオール化合物と塩の存在下に、アルカリ性
緩衝液中の疎水相互作用クロマトグラフィーに適した物
質と接触させ、そして前記吸着用の塩の濃度よりも低い
濃度から始まる負の濃度勾配を用いて塩の溶液による濃
度勾配溶出により溶出し、そしてＳＬＯを含む画分を取
得しそして所望によりさらに精製することより成る、ス
トレプトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法。 - 【請求項２】 ＳＬＯ含有溶液が連鎖球菌の培養濃縮液
である請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 ＳＬＯ含有溶液が溶血連鎖球菌の培養濃
縮液である請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 ＳＬＯ含有溶液が遺伝子工学により調製
された生成物である請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 タンパク質の塩析に適した塩が用いられ
る請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 チオール化合物がタンパク質ジスルフィ
ド結合を分解する化合物である請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 チオール化合物がβ−メルカプトエタノ
ール、チオグリセロール、チオグリコレートまたはジチ
オトレイトールである請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 緩衝液がｐＨ７.５〜８.５のアルカリ性
緩衝液である請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 クロマトグラフィー物質が表面にアルキ
ルまたはアリール基を有する請求項１記載の方法。 - 【請求項１０】 ＳＬＯを含む画分がチオール化合物の
存在下にゲル浸透クロマトグラフィーによりさらに精製
される請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 塩を０.２Ｍ〜２Ｍの濃度で含む緩衝
液中で行われる請求項１０記載の方法。 - 【請求項１２】 ストレプトリジンＯ（ＳＬＯ）含有溶
液を、タンパク質ジスルフィド結合を分解する水溶性チ
オール化合物と硫酸アンモニウム塩の存在下に、ｐＨ
７.５〜８.５のアルカリ性緩衝液中で表面にアルキルま
たはアリール基を含む疎水相互作用クロマトグラフィー
物質と接触させ、そして前記吸着用の塩の濃度よりも低
い濃度から始まる負の濃度勾配を用いて塩の溶液による
濃度勾配溶出により溶出し、そしてＳＬＯを含む画分を
取得し、そして前記画分をタンパク質ジスルフィド結合
を分解するチオール化合物の存在下にゲル浸透クロマト
グラフィーによりさらに精製することより成る、ストレ
プトリジンＯ（ＳＬＯ）の精製方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4133707:7 | 1991-10-11 | ||
| DE4133707A DE4133707A1 (de) | 1991-10-11 | 1991-10-11 | Verfahren zur reinigung von streptolysin o, intaktes streptolysin o erhaeltlich nach diesem verfahren und seine verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05331198A JPH05331198A (ja) | 1993-12-14 |
| JP3486196B2 true JP3486196B2 (ja) | 2004-01-13 |
Family
ID=6442501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27131692A Expired - Fee Related JP3486196B2 (ja) | 1991-10-11 | 1992-10-09 | ストレプトリジンｏの精製方法、この方法により得られる完全ストレプトリジンｏおよびその使用 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5258504A (ja) |
| EP (1) | EP0536564B1 (ja) |
| JP (1) | JP3486196B2 (ja) |
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| AU (1) | AU665579B2 (ja) |
| CA (1) | CA2080258A1 (ja) |
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| DK (1) | DK0536564T3 (ja) |
| ES (1) | ES2104783T3 (ja) |
| GR (1) | GR3024442T3 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| EP1601689B1 (en) * | 2003-03-13 | 2007-11-28 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Purification process for bacterial cytolysin |
| GB0421083D0 (en) * | 2004-09-22 | 2004-10-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Purification process |
| CN104098659A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-10-15 | 桂林英美特生物技术有限公司 | 一种重组slo蛋白及其制备方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JPH01290698A (ja) * | 1988-05-19 | 1989-11-22 | Fujirebio Inc | 抗ストレプトリジンｏ モノクローナル抗体 |
| GB2233977B (en) * | 1989-01-04 | 1993-03-31 | Michael Kehoe | Cytolytic streptolysin o mutants and uses |
| US5378620A (en) * | 1991-08-30 | 1995-01-03 | Beckman Instruments, Inc. | Streptolysin O derivatives |
| EP0555425A1 (en) * | 1991-08-30 | 1993-08-18 | Beckman Instruments, Inc. | Antibodies to streptolysin o derivatives and variants |
-
1991
- 1991-10-11 DE DE4133707A patent/DE4133707A1/de not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-09-15 DE DE59208707T patent/DE59208707D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-15 EP EP92115737A patent/EP0536564B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-15 ES ES92115737T patent/ES2104783T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-15 AT AT92115737T patent/ATE155481T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-09-15 DK DK92115737.6T patent/DK0536564T3/da active
- 1992-10-08 US US07/957,811 patent/US5258504A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-09 AU AU26297/92A patent/AU665579B2/en not_active Ceased
- 1992-10-09 JP JP27131692A patent/JP3486196B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-09 CA CA002080258A patent/CA2080258A1/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-08-13 GR GR970402085T patent/GR3024442T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，１９８２年，２０７，５５７−５６０ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59208707D1 (de) | 1997-08-21 |
| ATE155481T1 (de) | 1997-08-15 |
| EP0536564A2 (de) | 1993-04-14 |
| DE4133707A1 (de) | 1993-04-15 |
| GR3024442T3 (en) | 1997-11-28 |
| EP0536564A3 (en) | 1994-07-06 |
| DK0536564T3 (da) | 1998-02-02 |
| US5258504A (en) | 1993-11-02 |
| ES2104783T3 (es) | 1997-10-16 |
| EP0536564B1 (de) | 1997-07-16 |
| CA2080258A1 (en) | 1993-04-12 |
| AU2629792A (en) | 1993-04-22 |
| AU665579B2 (en) | 1996-01-11 |
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