JP3422493B2 - 質量分光学によるリガンドの親和力選択 - Google Patents
質量分光学によるリガンドの親和力選択Info
- Publication number
- JP3422493B2 JP3422493B2 JP52235096A JP52235096A JP3422493B2 JP 3422493 B2 JP3422493 B2 JP 3422493B2 JP 52235096 A JP52235096 A JP 52235096A JP 52235096 A JP52235096 A JP 52235096A JP 3422493 B2 JP3422493 B2 JP 3422493B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- target
- compounds
- mixture
- complex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 title abstract description 13
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title description 10
- 238000003314 affinity selection Methods 0.000 title description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 91
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000010180 Endothelin receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050001739 Endothelin receptor Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 2
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 2
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N indane Chemical compound C1=CC=C2CCCC2=C1 PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- LEWZOBYWGWKNCK-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1h-inden-5-amine Chemical compound NC1=CC=C2CCCC2=C1 LEWZOBYWGWKNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000638886 Homo sapiens Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 108010049175 N-substituted Glycines Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241001319148 Pharmacis Species 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N Tyramine Natural products NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042352 Urokinase Plasminogen Activator Receptors Proteins 0.000 description 1
- BNBQRQQYDMDJAH-UHFFFAOYSA-N benzodioxan Chemical compound C1=CC=C2OCCOC2=C1 BNBQRQQYDMDJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001360 collision-induced dissociation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 102000056831 human PLAU Human genes 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000000752 ionisation method Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 description 1
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O tyraminium Chemical compound [NH3+]CCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/538—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by sorbent column, particles or resin strip, i.e. sorbent materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は薬物発見および質量分光学の分野に関する。
より詳細には、本発明は類似のリガンドのプールから選
択されたレセプターと結合するリガンドを同定するため
の質量分光学の使用に関する。
より詳細には、本発明は類似のリガンドのプールから選
択されたレセプターと結合するリガンドを同定するため
の質量分光学の使用に関する。
発明の背景
GeysenのEP 198855は、多数の異なるペプチドの同時
合成のための方法を開示した。基本的に、この方法は、
固体ポリマー性表面（例えばポリエチレン）上でのペプ
チドの合成を包含し、これはロッドまたはピンの形状に
成形され得る。この方法の好適な実施態様においては、
これらのロッドまたはピンは12×８のマトリックスを形
成するようにホルダー中に位置し、ロッドおよびピン
は、間隔がELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）試験に
広範に用いられるマイクロタイタープレートのウェルの
それと対応するように位置している。
合成のための方法を開示した。基本的に、この方法は、
固体ポリマー性表面（例えばポリエチレン）上でのペプ
チドの合成を包含し、これはロッドまたはピンの形状に
成形され得る。この方法の好適な実施態様においては、
これらのロッドまたはピンは12×８のマトリックスを形
成するようにホルダー中に位置し、ロッドおよびピン
は、間隔がELISA（酵素結合免疫吸着アッセイ）試験に
広範に用いられるマイクロタイタープレートのウェルの
それと対応するように位置している。
Huebnerら、US 5,182,366（本明細書中に参考として
援用される）は、固装樹脂上で等モル比のペプチドの多
数の混合物を調製する方法を開示した。これは、リガン
ド（例えば、結合したレセプター）をペプチド混合物の
セットと接触させ、そしてセットのどのメンバーが結合
するかまたは反応するかを示すことにより、リガンドに
結合するか、またはリガンドと反応する化合物の迅速な
探索を可能にする。代表的には、このセットは、オリゴ
ペプチドの１つまたは２つの位置で既知のアミノ酸を特
定すること、および他の位置でアミノ酸の混合物を提供
することにより調製される。従って、１つのペプチドの
混合物は、式Gly−Gly−X1−X2−X3−X4のヘキサペプチ
ドのプールからなり得、ここで各Ｘは全てのアミノ酸が
その位置で見出されることを示す。次のペプチド混合物
は、Gly−Ala−X1−X2−X3−X4、続いてGly−Cys−X1−
X2−X3−X4などである。これらの混合物の全てからなる
セットを「ライブラリ」と言う。ライブラリは、それぞ
れの個々の混合物を試験し、そしてどの混合物が陽性の
応答を生じるかを示すことによりスクリーニングされ
る。いくつかの形式では、この混合物は同時にスクリー
ニングされ得る。次いで、陽性の混合物は特定されたさ
らなる位置で再合成される。従って、例えば、Phe−Tyr
−X1−X2−X3−X4を含む混合物が陽性である場合、次に
合成された混合物はPhe−Tyr−Gly−X2−X3−X4であり
得る。このプロセス（「デコンボリューション」と呼ば
れる）は、個々のペプチドが合成され、そして試験され
るまで繰り返される。
援用される）は、固装樹脂上で等モル比のペプチドの多
数の混合物を調製する方法を開示した。これは、リガン
ド（例えば、結合したレセプター）をペプチド混合物の
セットと接触させ、そしてセットのどのメンバーが結合
するかまたは反応するかを示すことにより、リガンドに
結合するか、またはリガンドと反応する化合物の迅速な
探索を可能にする。代表的には、このセットは、オリゴ
ペプチドの１つまたは２つの位置で既知のアミノ酸を特
定すること、および他の位置でアミノ酸の混合物を提供
することにより調製される。従って、１つのペプチドの
混合物は、式Gly−Gly−X1−X2−X3−X4のヘキサペプチ
ドのプールからなり得、ここで各Ｘは全てのアミノ酸が
その位置で見出されることを示す。次のペプチド混合物
は、Gly−Ala−X1−X2−X3−X4、続いてGly−Cys−X1−
X2−X3−X4などである。これらの混合物の全てからなる
セットを「ライブラリ」と言う。ライブラリは、それぞ
れの個々の混合物を試験し、そしてどの混合物が陽性の
応答を生じるかを示すことによりスクリーニングされ
る。いくつかの形式では、この混合物は同時にスクリー
ニングされ得る。次いで、陽性の混合物は特定されたさ
らなる位置で再合成される。従って、例えば、Phe−Tyr
−X1−X2−X3−X4を含む混合物が陽性である場合、次に
合成された混合物はPhe−Tyr−Gly−X2−X3−X4であり
得る。このプロセス（「デコンボリューション」と呼ば
れる）は、個々のペプチドが合成され、そして試験され
るまで繰り返される。
BartlettらのWO91/19735およびZuckermannらのWO94/0
6451は、組合せ（combinatorial）ライブラリ合成を、
ペプチド以外の化合物に拡張する方法を開示した。Bart
lettおよびZuckermannは、Ｎ−置換ポリアミド、ポリ−
カルバメート、および他の骨格に基づくモジュラー化合
物（modular compound）を開示し、これは非ペプチド化
合物の探索を可能にする。これらのライブラリもまた、
デコンボリューションにより分析される。
6451は、組合せ（combinatorial）ライブラリ合成を、
ペプチド以外の化合物に拡張する方法を開示した。Bart
lettおよびZuckermannは、Ｎ−置換ポリアミド、ポリ−
カルバメート、および他の骨格に基づくモジュラー化合
物（modular compound）を開示し、これは非ペプチド化
合物の探索を可能にする。これらのライブラリもまた、
デコンボリューションにより分析される。
発明の開示
本発明者らは、ここに化合物のプールをデコンボリュ
ートする必要を排除する、質量分光学により、結合する
リガンドの同一性を直接決定する方法を発明した。これ
は、混合物を再合成することなく、組合せライブラリの
結果の直接分析を可能にする。
ートする必要を排除する、質量分光学により、結合する
リガンドの同一性を直接決定する方法を発明した。これ
は、混合物を再合成することなく、組合せライブラリの
結果の直接分析を可能にする。
本発明の別の局面は、２つ以上の異なる化合物：標的
比で、化合物を選択し、そしてスペクトルを比較するこ
とにより、混合物中に存在する類似の活性化合物の相対
的な親和力を決定する方法である。
比で、化合物を選択し、そしてスペクトルを比較するこ
とにより、混合物中に存在する類似の活性化合物の相対
的な親和力を決定する方法である。
発明の実施の形態
A. 定義
用語「標的」は、結合または反応する化合物を調べる
ための任意の化合物、タンパク質、レセプターなどを言
う。例えば、ライブラリがエンドセリンレセプターに結
合する化合物についてスクリーニングされる場合、この
エンドセリンレセプターは標的である。この標的は溶解
性であり得るか、または、例えば、固相または細胞表面
上に固定され得る。
ための任意の化合物、タンパク質、レセプターなどを言
う。例えば、ライブラリがエンドセリンレセプターに結
合する化合物についてスクリーニングされる場合、この
エンドセリンレセプターは標的である。この標的は溶解
性であり得るか、または、例えば、固相または細胞表面
上に固定され得る。
用語「化合物」は、質量分光学により分析され得、そ
して生物学的活性を有し得る化学物質（chemical entit
y）を言う。本発明の範囲内の化合物は、好ましくは約1
00〜約1,000AU、より好ましくは約200〜900AUの分子量
を有する。用語「類似の化合物」は、実質的に同じ合成
法で作製されるか、または特定の特性を共有する化合物
のセットを言う。例えば、ペプチドの混合物は、この定
義の範囲内に類似の化合物のセットを構成する。共通の
骨格に基づくペプトイドのセットは、極性、疎水性、p
K、または他の特性における違いに関わらず、類似の化
合物のセットである。
して生物学的活性を有し得る化学物質（chemical entit
y）を言う。本発明の範囲内の化合物は、好ましくは約1
00〜約1,000AU、より好ましくは約200〜900AUの分子量
を有する。用語「類似の化合物」は、実質的に同じ合成
法で作製されるか、または特定の特性を共有する化合物
のセットを言う。例えば、ペプチドの混合物は、この定
義の範囲内に類似の化合物のセットを構成する。共通の
骨格に基づくペプトイドのセットは、極性、疎水性、p
K、または他の特性における違いに関わらず、類似の化
合物のセットである。
用語「類似の化合物の混合物」は、少なくとも10の別
個の化合物、より好ましくは少なくとも100の異なる化
合物、さらにより好ましくは少なくとも1,000の異なる
化合物を有する類似の化合物（上記に定義される）の溶
液または懸濁液を言う。
個の化合物、より好ましくは少なくとも100の異なる化
合物、さらにより好ましくは少なくとも1,000の異なる
化合物を有する類似の化合物（上記に定義される）の溶
液または懸濁液を言う。
B. 一般的な方法
親和力選択は、代表的には、組合せライブラリから得
られる化合物の混合物を用いて行われる。この化合物
は、固相に結合するよりむしろ、好ましくは溶解性であ
り、そして好ましくは約200と約700ダルトンとの間の分
子量を有する。この化合物は、任意の方法、好ましくは
BartlettらのWO91/19735またはZuckermannらのWO94/064
51（両方とも本明細書中に参考として援用される）に記
載の方法により調製され得る。
られる化合物の混合物を用いて行われる。この化合物
は、固相に結合するよりむしろ、好ましくは溶解性であ
り、そして好ましくは約200と約700ダルトンとの間の分
子量を有する。この化合物は、任意の方法、好ましくは
BartlettらのWO91/19735またはZuckermannらのWO94/064
51（両方とも本明細書中に参考として援用される）に記
載の方法により調製され得る。
標的は、結合され得るか、または溶解性であり得るか
のいずれかであるが、動力学的理由のため、好ましくは
溶解性である。標的は、代表的には、分子生物学の通常
の技術を用いて提供される。固定化標的は、例えば、適
切な宿主細胞（例えば、トランスフェクトされたCHO細
胞または組換えバキュロウイルス感染したSf9細胞）の
表面でクローン化レセプターを発現させるか、または溶
解性形態でレセプターを発現させ（例えば、トランスメ
ンブレンアンカードメインを排除するようにレセプター
を短縮することにより）、そして適切な表面上にそれを
固定することにより（例えば、ナイロンまたはポリスチ
レンアッセイプレートに対する非特異的親和力による
か、あるいは抗体またはビオチン−アビジンカップリン
グ系を用いる特異的結合により）提供される。
のいずれかであるが、動力学的理由のため、好ましくは
溶解性である。標的は、代表的には、分子生物学の通常
の技術を用いて提供される。固定化標的は、例えば、適
切な宿主細胞（例えば、トランスフェクトされたCHO細
胞または組換えバキュロウイルス感染したSf9細胞）の
表面でクローン化レセプターを発現させるか、または溶
解性形態でレセプターを発現させ（例えば、トランスメ
ンブレンアンカードメインを排除するようにレセプター
を短縮することにより）、そして適切な表面上にそれを
固定することにより（例えば、ナイロンまたはポリスチ
レンアッセイプレートに対する非特異的親和力による
か、あるいは抗体またはビオチン−アビジンカップリン
グ系を用いる特異的結合により）提供される。
標的および化合物（またはライブラリ）を、溶液相中
かまたは固相に結合した１成分と接触させ、反応させる
かまたは結合させ、そして非結合化合物を結合化合物
（または化合物−標的複合体）から分離する。化合物ま
たは標的が固相と結合する場合、この分離は固相支持体
を洗浄することにより容易に達成される。このアッセイ
が溶液中で行われる場合、この分離はサイズカラムまた
は標的の親和力捕獲（affinity capture）により達成さ
れ得る。サイズカラムは、所定のライブラリにおける全
ての化合物が類似のサイズのようであり、そして標的ま
たは化合物−標的複合体よりずっと小さいようであるた
め一般的に有用である。親和力捕獲は、例えば、抗体ま
たは結合パートナー（例えば、アビジン／ビオチン）に
結合する「タグ」またはリガンドを標的に提供すること
により行われ得る。ここでは、迅速なサイズ排除クロマ
トグラフィーHPLC（SEC−HPLC）により、非結合化合物
を化合物−標的複合体から分離することが好ましい。
かまたは固相に結合した１成分と接触させ、反応させる
かまたは結合させ、そして非結合化合物を結合化合物
（または化合物−標的複合体）から分離する。化合物ま
たは標的が固相と結合する場合、この分離は固相支持体
を洗浄することにより容易に達成される。このアッセイ
が溶液中で行われる場合、この分離はサイズカラムまた
は標的の親和力捕獲（affinity capture）により達成さ
れ得る。サイズカラムは、所定のライブラリにおける全
ての化合物が類似のサイズのようであり、そして標的ま
たは化合物−標的複合体よりずっと小さいようであるた
め一般的に有用である。親和力捕獲は、例えば、抗体ま
たは結合パートナー（例えば、アビジン／ビオチン）に
結合する「タグ」またはリガンドを標的に提供すること
により行われ得る。ここでは、迅速なサイズ排除クロマ
トグラフィーHPLC（SEC−HPLC）により、非結合化合物
を化合物−標的複合体から分離することが好ましい。
一旦分離されると、この化合物は標的から溶出される
か、または質量分光学（MS）分析のために直接供される
かのいずれかである。溶出は、希釈、pH、特異的リガン
ドとの競合などにより達成され得る。いくつかのMSイオ
ン化方法（例えば、エレクトロスプレー（electrospra
y）、APCI、レーザー脱離、および電子衝撃）は、標的
から化合物を分離するに十分であり、従って、前溶出
（prior elution）せずに直接使用され得る。従って、S
EC−HPLCカラムは、迅速なスループット器具の形成のた
めにES MSのインプットに直接連結され得る。存在する
可能性のある化合物（すなわち、初期の混合物中に存在
する化合物）の認識をもって、約1A.Uの分解能を有する
MS検出器を用いて混合物から選択されたほとんどまたは
全ての結合化合物を代表的に同定し得る。
か、または質量分光学（MS）分析のために直接供される
かのいずれかである。溶出は、希釈、pH、特異的リガン
ドとの競合などにより達成され得る。いくつかのMSイオ
ン化方法（例えば、エレクトロスプレー（electrospra
y）、APCI、レーザー脱離、および電子衝撃）は、標的
から化合物を分離するに十分であり、従って、前溶出
（prior elution）せずに直接使用され得る。従って、S
EC−HPLCカラムは、迅速なスループット器具の形成のた
めにES MSのインプットに直接連結され得る。存在する
可能性のある化合物（すなわち、初期の混合物中に存在
する化合物）の認識をもって、約1A.Uの分解能を有する
MS検出器を用いて混合物から選択されたほとんどまたは
全ての結合化合物を代表的に同定し得る。
用いられる正確なパラメーター（例えば、溶媒、温
度、pHなど）は、本発明の方法の広く一般的な性質なら
びに可能な化合物および標的の多様性により、選択され
る化合物および標的に必然的に依存する。しかし、この
ようなパラメーターは、日常的な実験のみを用い、化合
物および標的がインビボで相互作用すると予想される生
理学的条件を出発点として使用して決定され得る。これ
らの初期条件から、溶媒またはキャリアを変化させて、
疎水性標的および／または化合物の溶解を補助し得、そ
してアッセイをよりストリンジェントするために、一般
的に温度、pH、およびイオン強度を増加させ得る。約50
0pmolのレセプター、および500pmolのそれぞれの化合物
（全体として混合物に対して約１μＭ）を用い、過剰の
競合リガンドを用いるか、または用いることなく開始し
得る。
度、pHなど）は、本発明の方法の広く一般的な性質なら
びに可能な化合物および標的の多様性により、選択され
る化合物および標的に必然的に依存する。しかし、この
ようなパラメーターは、日常的な実験のみを用い、化合
物および標的がインビボで相互作用すると予想される生
理学的条件を出発点として使用して決定され得る。これ
らの初期条件から、溶媒またはキャリアを変化させて、
疎水性標的および／または化合物の溶解を補助し得、そ
してアッセイをよりストリンジェントするために、一般
的に温度、pH、およびイオン強度を増加させ得る。約50
0pmolのレセプター、および500pmolのそれぞれの化合物
（全体として混合物に対して約１μＭ）を用い、過剰の
競合リガンドを用いるか、または用いることなく開始し
得る。
さらに、化合物の標的に対する比を変化させることに
より、構造活性関係（SAR）を誘導し得る。例えば、1:1
の化合物：標的比で最も堅い結合化合物のみが選択され
る。しかし、この比が0.3:1の化合物：標的に減少する
と、より低い親和力を有する化合物もまた選択される。
従って、異なる比で得られたMSスペクトルの比較は、混
合物中に存在する化合物の相対的な親和力の示度を提供
する。化合物の標的に対する高い比で得られたスペクト
ルで表される化合物は高い親和力を示すが、一方、低い
化合物：標的比で得られたスペクトルにおいてのみ表さ
れる化合物は第１の群より低い親和力を示す。選択され
た化合物の認識を用いると、この情報は、化合物のどの
性質（例えば、親水性または疎水性基、水素結合、芳香
族性の存在）が活性に対して重要であるかの迅速な決定
を可能にする。この決定は、好ましくは、化合物の標的
に対する、３つ以上の異なる比で（例えば、3:1、1:1、
0.3:1、0.01:1、および0.03:1（化合物：標的）の比
で）行われる。
より、構造活性関係（SAR）を誘導し得る。例えば、1:1
の化合物：標的比で最も堅い結合化合物のみが選択され
る。しかし、この比が0.3:1の化合物：標的に減少する
と、より低い親和力を有する化合物もまた選択される。
従って、異なる比で得られたMSスペクトルの比較は、混
合物中に存在する化合物の相対的な親和力の示度を提供
する。化合物の標的に対する高い比で得られたスペクト
ルで表される化合物は高い親和力を示すが、一方、低い
化合物：標的比で得られたスペクトルにおいてのみ表さ
れる化合物は第１の群より低い親和力を示す。選択され
た化合物の認識を用いると、この情報は、化合物のどの
性質（例えば、親水性または疎水性基、水素結合、芳香
族性の存在）が活性に対して重要であるかの迅速な決定
を可能にする。この決定は、好ましくは、化合物の標的
に対する、３つ以上の異なる比で（例えば、3:1、1:1、
0.3:1、0.01:1、および0.03:1（化合物：標的）の比
で）行われる。
C. 実施例
以下に示す実施例は、当業者の実施例にさらなる指針
として与えられ、本発明をいかなる方法においても限定
するものとして解釈されるべきではない。
として与えられ、本発明をいかなる方法においても限定
するものとして解釈されるべきではない。
実施例１
（sUPAR結合化合物の選択）
ヒトウロキナーゼプラスミノーゲンアクティベーター
レセプター（UPAR）を、本明細書中に参考として援用さ
れるRosenbergら、WO94/28145に記載のように溶解性
の、短縮形態で発現させた。ペプトイド化合物を、本明
細書中に参考として援用されるBartlettら、WO91/19735
に記載されるように調製した。第１（Ｎ−末端）位にチ
ラミン、第２位に５−アミノインダン、そして第３（最
後）位に以下の側鎖：ジェニル、フェニルフェニルエー
テル、インダン、および1,4−ベンゾジオキサンを有す
る４つのＮ置換グリシンペプトイドを調製した。ジフェ
ニルまたはフェニルフェニルエーテルを第３位に有する
化合物を、uPAR（＞10μＭ）に対する親和力を説明する
ために示し、一方、他の２つの化合物は有為な活性を示
さなかった。リガンドuPA1-48を、Rosenberg（前出）に
記載されるように調製した。
レセプター（UPAR）を、本明細書中に参考として援用さ
れるRosenbergら、WO94/28145に記載のように溶解性
の、短縮形態で発現させた。ペプトイド化合物を、本明
細書中に参考として援用されるBartlettら、WO91/19735
に記載されるように調製した。第１（Ｎ−末端）位にチ
ラミン、第２位に５−アミノインダン、そして第３（最
後）位に以下の側鎖：ジェニル、フェニルフェニルエー
テル、インダン、および1,4−ベンゾジオキサンを有す
る４つのＮ置換グリシンペプトイドを調製した。ジフェ
ニルまたはフェニルフェニルエーテルを第３位に有する
化合物を、uPAR（＞10μＭ）に対する親和力を説明する
ために示し、一方、他の２つの化合物は有為な活性を示
さなかった。リガンドuPA1-48を、Rosenberg（前出）に
記載されるように調製した。
上記に明細に述べられた４つの化合物を含む576N−置
換グリシンペプトイドの混合物を調製した。この混合物
（化合物当たり１μＭ）を、uPAR1-48（２μＭ）の存在
下および非存在下でsUPAR（１μＭ）と接触させ、30分
間インキュベートし、そしてSEC HPLCカラム（Pharmaci
a HSIO/IO）に展開した。カラムの排除体積で溶出する
化合物−標的複合体を回収し、そしてES MS（PE−Scie
x）で分析した。結果は、（ジフェニルまたはフェニル
フェニルエーテルを第３位に有する）同じ２つのペプト
イドが、uPA1-48の非存在下で接触する場合、選択され
たことを示し：特異性をuPA1-48の存在下における競合
により確認した。化合物の同一性を、CCID質量分光学
（衝突誘導解離（collision induced dissociation））
におけるフラグメンテーションにより確認した。
換グリシンペプトイドの混合物を調製した。この混合物
（化合物当たり１μＭ）を、uPAR1-48（２μＭ）の存在
下および非存在下でsUPAR（１μＭ）と接触させ、30分
間インキュベートし、そしてSEC HPLCカラム（Pharmaci
a HSIO/IO）に展開した。カラムの排除体積で溶出する
化合物−標的複合体を回収し、そしてES MS（PE−Scie
x）で分析した。結果は、（ジフェニルまたはフェニル
フェニルエーテルを第３位に有する）同じ２つのペプト
イドが、uPA1-48の非存在下で接触する場合、選択され
たことを示し：特異性をuPA1-48の存在下における競合
により確認した。化合物の同一性を、CCID質量分光学
（衝突誘導解離（collision induced dissociation））
におけるフラグメンテーションにより確認した。
結果は、標的に対して相対的に低い親和力を有する化
合物でさえも、デコンボリューションを必要とせずに迅
速かつ正確に選択され得ることを示す。
合物でさえも、デコンボリューションを必要とせずに迅
速かつ正確に選択され得ることを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 カウアー，スリンダー
アメリカ合衆国カリフォルニア 94549,
ラファイエット，スウィート ドライブ
3386
(56)参考文献 特表 昭61−502127（ＪＰ，Ａ)
米国特許4022876（ＵＳ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/536
G01N 33/532
G01N 33/538
Claims (12)
- 【請求項１】選択された標的を結合し得る化合物を選択
する方法であって、該化合物が類似の化合物の混合物中
に存在し、該方法が以下の工程を包含する、方法： ａ） 少なくとも100の類似の化合物の混合物のおよび
標的部分を提供する工程； ｂ） 該標的を該化合物の混合物と接触させ、化合物−
標的複合体を形成する工程； ｃ） 該化合物−標的複合体から該標的に結合しない化
合物を分離する工程；および ｄ） 該化合物−標的複合体を質量分光光度計に通過さ
せる工程。 - 【請求項２】前記化合物の混合物および前記標的が溶解
性である、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】前記工程ｃ）が前記化合物および複合体を
クロマトグラフィーカラムに展開させる工程を包含す
る、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】前記クロマトグラフィーカラムがサイズカ
ラムを含む、請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】前記クロマトグラフィーカラムが、逆相高
性能液体クロマトグラフィーカラムを含む、請求項３に
記載の方法。 - 【請求項６】前記質量分光器がエレクトロスプレーMSで
ある、請求項１に記載の方法。 - 【請求項７】請求項１に記載の方法であって、さらに以
下の工程を包含する、方法： ｅ） 化合物−標的複合体に関与した化合物を同定する
工程。 - 【請求項８】前記化合物の混合物が少なくとも1,000の
類似の化合物の混合物を含有する、請求項９に記載の方
法。 - 【請求項９】標的化合物に対して２つの化合物の相対的
な親和力を決定する方法であって、該方法が以下の工程
を包含する、方法： ａ） 化合物の混合物および標的部分を提供する工程； ｂ） 該標的を該化合物の混合物と第１の化合物：標的
比で接触させ、化合物−標的複合体を形成する工程； ｃ） 該化合物−標的複合体から該標的に結合しない化
合物を分離する工程； ｄ） 該化合物−標的複合体を質量分光光度計に通過さ
せ、第１のスペクトルを得る工程； ｅ） 該第１の化合物：標的比とは異なる第２の化合
物：標的比で工程ａ）からｄ）を繰り返し、第２のスペ
クトルを得る工程、および ｆ） 該第１のスペクトルおよび第２のスペクトルを比
較する工程。 - 【請求項１０】前記化合物の混合物が少なくとも10の類
似の化合物の混合物を含有する、請求項９に記載の方
法。 - 【請求項１１】前記化合物の混合物が少なくとも100の
類似の化合物の混合物を含有する、請求項10に記載の方
法。 - 【請求項１２】前記化合物の混合物が少なくとも1000の
類似の化合物の混合物を含有する、請求項11に記載の方
法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/375,979 US5891742A (en) | 1995-01-19 | 1995-01-19 | Affinity selection of ligands by mass spectroscopy |
| US08/375,979 | 1995-01-19 | ||
| PCT/US1996/000575 WO1996022530A1 (en) | 1995-01-19 | 1996-01-16 | Affinity selection of ligands by mass spectroscopy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10512673A JPH10512673A (ja) | 1998-12-02 |
| JP3422493B2 true JP3422493B2 (ja) | 2003-06-30 |
Family
ID=23483180
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52235096A Expired - Fee Related JP3422493B2 (ja) | 1995-01-19 | 1996-01-16 | 質量分光学によるリガンドの親和力選択 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5891742A (ja) |
| EP (1) | EP0804729B1 (ja) |
| JP (1) | JP3422493B2 (ja) |
| AT (1) | ATE216777T1 (ja) |
| AU (1) | AU4963796A (ja) |
| CA (1) | CA2209988C (ja) |
| DE (1) | DE69620870T2 (ja) |
| WO (1) | WO1996022530A1 (ja) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6063633A (en) | 1996-02-28 | 2000-05-16 | The University Of Houston | Catalyst testing process and apparatus |
| AU2889097A (en) * | 1996-05-10 | 1997-12-05 | Novartis Ag | Identification of members of combinatorial libraries by mass spectrometry |
| EP0934515B1 (en) * | 1996-10-09 | 2006-03-08 | Symyx Technologies, Inc. | Infrared spectroscopy and imaging of libraries |
| US6528098B2 (en) * | 1996-10-22 | 2003-03-04 | Advanced Viral Research Corp. | Preparation of a therapeutic composition |
| DE19649359C1 (de) | 1996-11-28 | 1998-02-12 | Thomas Prof Dr Peters | Verfahren zum Nachweis biologisch aktiver Substanzen in Substanzbibliotheken |
| CA2292751A1 (en) * | 1997-06-13 | 1998-12-17 | Christopher A. Lepre | Methods for identifying drug cores |
| WO1999029908A1 (en) * | 1997-12-11 | 1999-06-17 | The President & Fellows Of Harvard College | A method for identifying new anti-picornaviral compounds |
| US6207861B1 (en) | 1998-01-05 | 2001-03-27 | Neogenesis, Inc. | Method for producing and screening mass coded combinatorial libraries for drug discovery and target validation |
| EP2241541A1 (en) * | 1998-01-05 | 2010-10-20 | Neogenesis, Inc. | Method for identifying a member of a mass-coded combinatorial library |
| JP3788909B2 (ja) | 1999-02-12 | 2006-06-21 | セテク コーポレイション | 親和力配位子について複合生理学的材料をスクリーニングする高処理量のサイズ排除法 |
| WO2001062688A2 (en) * | 2000-02-25 | 2001-08-30 | Wyeth | Methods of structure-based drug design using ms/nmr |
| DE10028186A1 (de) * | 2000-06-09 | 2002-09-19 | November Ag Molekulare Medizin | Verfahren zur Bestimmung der Menge von an Ziel-Molekülen gebundenen Liganden |
| US6864091B1 (en) | 2000-08-31 | 2005-03-08 | Symyx Technologies, Inc. | Sampling probe |
| CA2467657A1 (en) * | 2000-11-17 | 2002-08-01 | Alfred E. Slanetz | Process for determining target function and identifying drug leads |
| DE10125258A1 (de) * | 2001-05-23 | 2003-01-09 | November Ag Molekulare Medizin | Verfahren zur Bestimmung des Bindeverhaltens von an Ziel-Molekülen spezifisch bindenden Liganden |
| US20060234390A1 (en) * | 2002-05-17 | 2006-10-19 | Slanetz Alfred E | Process for determining target function and identifying drug leads |
| JP2006519998A (ja) * | 2003-03-10 | 2006-08-31 | シェーリング コーポレイション | リガンド分析 |
| DE10327399A1 (de) * | 2003-06-18 | 2005-01-05 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Verfahren und Messanordnung zur markierungsfreien Detektion von Bindungsereignissen zwischen Proteinen und oberflächengebundenen Antikörpern |
| DE102005022057B3 (de) * | 2005-05-09 | 2007-02-08 | Analyticon Biotechnologies Ag | Verfahren zur Herstellung von Liganden, Liganden und Test-Kit |
| JP2008542369A (ja) * | 2005-06-03 | 2008-11-27 | アドバンスト バイラル リサーチ コープ． | Ａｖｒ１１８を用いて苦痛緩和医療を提供する方法 |
| CA2634821C (en) * | 2005-12-23 | 2016-05-03 | Andrew Emili | Method for the identification of macromolecule targets of analytes |
| WO2007079755A1 (en) | 2006-01-12 | 2007-07-19 | Janus Beierholm Holding Aps | Reimmunization and antibody design |
| DK2027158T3 (da) | 2006-05-02 | 2013-01-14 | Carviar Aps | Metode til immunisering af en fugleart |
| CN114616470A (zh) | 2019-09-13 | 2022-06-10 | 欧陆塞雷普公司 | 在多路复用靶标评估中使用质谱分析的方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4022876A (en) * | 1973-06-21 | 1977-05-10 | Stanford Research Institute | Mass spectrometric immunoassay |
| IL49685A (en) * | 1976-05-31 | 1978-10-31 | Technion Res & Dev Foundation | Specific binding assay method for determining the concentration of materials and reagent means therefor |
| DE3417638A1 (de) * | 1984-05-10 | 1985-11-14 | Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen | Verfahren zur bestimmung geringer stoffmengen von arzneimitteln, von koerpereigenen oder anderen chemischen substanzen in biologischem material |
| US4586108A (en) * | 1984-10-12 | 1986-04-29 | Rosemount Inc. | Circuit for capacitive sensor made of brittle material |
| US5182366A (en) * | 1990-05-15 | 1993-01-26 | Huebner Verena D | Controlled synthesis of peptide mixtures using mixed resins |
| IE66205B1 (en) * | 1990-06-14 | 1995-12-13 | Paul A Bartlett | Polypeptide analogs |
| US5470753A (en) * | 1992-09-03 | 1995-11-28 | Selectide Corporation | Peptide sequencing using mass spectrometry |
| BR9307092A (pt) * | 1992-09-24 | 1999-03-30 | Chiron Corp | Processo para sintetizar monômero de poliamida n-substituida oligômero mistura de pelo menos dois oligômeros diferentes poli (n-substituida glicina) processo de tratamento anti-sentido composição processo de sintetizar composto de poliamida composto e processo para preparar mistura de compostos de amida |
| DE69432608T2 (de) * | 1993-06-01 | 2004-02-26 | Chiron Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware), Emeryville | Expression von inhibitoren vom plasminogenaktivator vom urokinasetyp |
| GB9315847D0 (en) * | 1993-07-30 | 1993-09-15 | Isis Innovation | Tag reagent and assay method |
| ATE197156T1 (de) * | 1994-03-23 | 2000-11-15 | Penn State Res Found | Verfahren zum nachweis von verbindungen einer konbinatorischen bibliothek. |
-
1995
- 1995-01-19 US US08/375,979 patent/US5891742A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-01-16 AU AU49637/96A patent/AU4963796A/en not_active Abandoned
- 1996-01-16 DE DE69620870T patent/DE69620870T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-16 CA CA002209988A patent/CA2209988C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-16 WO PCT/US1996/000575 patent/WO1996022530A1/en active IP Right Grant
- 1996-01-16 JP JP52235096A patent/JP3422493B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-16 EP EP96906169A patent/EP0804729B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-16 AT AT96906169T patent/ATE216777T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2209988A1 (en) | 1996-07-25 |
| EP0804729B1 (en) | 2002-04-24 |
| DE69620870T2 (de) | 2002-08-14 |
| AU4963796A (en) | 1996-08-07 |
| CA2209988C (en) | 2005-01-04 |
| DE69620870D1 (de) | 2002-06-06 |
| ATE216777T1 (de) | 2002-05-15 |
| JPH10512673A (ja) | 1998-12-02 |
| WO1996022530A1 (en) | 1996-07-25 |
| EP0804729A1 (en) | 1997-11-05 |
| US5891742A (en) | 1999-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3422493B2 (ja) | 質量分光学によるリガンドの親和力選択 | |
| US8906832B2 (en) | Quantitative analysis of carbohydrate-protein interactions using glycan microarrays: determination of surface and solution dissociation constants | |
| US8163567B2 (en) | Methods and compositions comprising capture agents | |
| JP4079223B2 (ja) | 生物学および医学に応用される被保持物クロマトグラフィーおよびタンパク質チップアレイ | |
| US20120077696A1 (en) | Soluble hla complexes for use in disease diagnosis | |
| US20160054331A1 (en) | Method for the detection and/or enrichment of analyte proteins and/or analyte peptides from a complex protein mixture | |
| JPH1025299A (ja) | 整列ペプチド、及びそれを用いたタンパク質の結合・相互作用部位検出方法 | |
| US20090022623A1 (en) | Peptides Capable of Functioning as Mimotopes for Hormonal Analytes | |
| US8318440B2 (en) | Synthetic peptides immuno-reactive with rheumatoid arthritis auto-antibodies | |
| JP2690164B2 (ja) | パラログ親和性クロマトグラフィー | |
| JP2003527605A (ja) | 生物学的物質マイクロアレイの作製および使用方法 | |
| EP1604209B1 (en) | Screening assay | |
| US20060275923A1 (en) | Methods for reducing the range in concentrations of analyte species in a sample | |
| AU2001282035A1 (en) | Peptides capable of functioning as mimotopes for estradiol analytes | |
| WO1996032642A1 (en) | Affinity chromatographic method for screening combinatorial libraries | |
| Soloviev et al. | Combinatorial peptidomics: a generic approach for protein expression profiling | |
| US20060201886A1 (en) | Method for determining the binding behavior of ligands which specifically bind to target molecules | |
| Parandoosh et al. | Synthesis coupled to scintillation proximity affinity screening | |
| Wingren et al. | Antibody-based microarrays: from focused assays to proteome-scale analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090425 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090425 Year of fee payment: 6 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090425 Year of fee payment: 6 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |