JP3401903B2 - ステロイド・ホルモンまたはビタミン類の測定法 - Google Patents
ステロイド・ホルモンまたはビタミン類の測定法Info
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- JP3401903B2 JP3401903B2 JP05864194A JP5864194A JP3401903B2 JP 3401903 B2 JP3401903 B2 JP 3401903B2 JP 05864194 A JP05864194 A JP 05864194A JP 5864194 A JP5864194 A JP 5864194A JP 3401903 B2 JP3401903 B2 JP 3401903B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、小分子を免疫学的に測
定する方法において、反応系に疎水性アミノ酸を共存さ
せることにより、小分子の非特異的結合を抑えて、試料
中の小分子の濃度を正確に測定する方法に関するもので
ある。
定する方法において、反応系に疎水性アミノ酸を共存さ
せることにより、小分子の非特異的結合を抑えて、試料
中の小分子の濃度を正確に測定する方法に関するもので
ある。
【０００２】
【従来の技術】血液中の小分子は、その大部分が特異
的、非特異的に蛋白質、脂質などと結合している。また
容器などに移した場合は、容器にも非特異的に結合する
ことが知られている。そのため、それら小分子の総量を
正確に精度良く低濃度まで測定するためには、小分子を
特異的、非特異的結合から遊離させなければならない。
的、非特異的に蛋白質、脂質などと結合している。また
容器などに移した場合は、容器にも非特異的に結合する
ことが知られている。そのため、それら小分子の総量を
正確に精度良く低濃度まで測定するためには、小分子を
特異的、非特異的結合から遊離させなければならない。
【０００３】特に小分子が甲状腺ホルモン、ステロイド
ホルモンの場合は、それぞれ特異的な結合蛋白質が存在
し、小分子の血液中での安定性を大きく向上させてい
る。例えばサイロキシン・バインディンググロブリンや
セックスホルモン・バインディンググロブリンなどが良
く知られている。
ホルモンの場合は、それぞれ特異的な結合蛋白質が存在
し、小分子の血液中での安定性を大きく向上させてい
る。例えばサイロキシン・バインディンググロブリンや
セックスホルモン・バインディンググロブリンなどが良
く知られている。
【０００４】加えて、小分子はこの他にも非特異的結合
することが知られている。これら小分子の多くは疎水的
性質を有しており、疎水性相互作用により非特異的に結
合することが知られており、低濃度域まで精度良く正確
に小分子濃度を測定するには、小分子を完全に遊離型に
しなければならない。現実には低濃度域で非特異的結合
の影響が大きく反映して、真濃度より低い濃度で測定さ
れる現象が起こっている。しかしながら、小分子につい
ては低濃度域での正確な濃度を測定する必要があり、臨
床的にこれら問題を解決することが望まれている。
することが知られている。これら小分子の多くは疎水的
性質を有しており、疎水性相互作用により非特異的に結
合することが知られており、低濃度域まで精度良く正確
に小分子濃度を測定するには、小分子を完全に遊離型に
しなければならない。現実には低濃度域で非特異的結合
の影響が大きく反映して、真濃度より低い濃度で測定さ
れる現象が起こっている。しかしながら、小分子につい
ては低濃度域での正確な濃度を測定する必要があり、臨
床的にこれら問題を解決することが望まれている。
【０００５】従来知られている小分子の特異的結合阻害
剤は、コルチゾ−ルの免疫測定法におけるグルタミン酸
溶液（特開昭５３−１０１５２１号公報）、同じくコル
チゾ−ルの分析方法における８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸（ＡＮＳ）あるいはその塩（特開昭６１
−１２５４７号公報）が報告されている。ＡＮＳは、蛋
白質の疎水性領域に結合することが知られ、そのため小
分子の特異的結合を阻害すると考えられている。サイロ
イドホルモンの免疫測定では、利用される特異的阻害剤
がＩ．Ｊ．Ｃｈｏｐｒａのアメリカ合衆国特許３，９１
１，０９６号に詳細に記載されている。
剤は、コルチゾ−ルの免疫測定法におけるグルタミン酸
溶液（特開昭５３−１０１５２１号公報）、同じくコル
チゾ−ルの分析方法における８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸（ＡＮＳ）あるいはその塩（特開昭６１
−１２５４７号公報）が報告されている。ＡＮＳは、蛋
白質の疎水性領域に結合することが知られ、そのため小
分子の特異的結合を阻害すると考えられている。サイロ
イドホルモンの免疫測定では、利用される特異的阻害剤
がＩ．Ｊ．Ｃｈｏｐｒａのアメリカ合衆国特許３，９１
１，０９６号に詳細に記載されている。
【０００６】しかしながらこれら特異的阻害剤は、反応
中に存在する蛋白質全般に影響するため、不必要な変性
を誘発し、抗原抗体反応を阻害することもありうる。ま
たこれら特異的阻害剤は、有効なｐＨが存在し、中性付
近で必ずしも効果があるとは言い難い。そしてこれら特
異的阻害剤は、残念ながら低濃度の小分子を測定する場
合に必ずしも有効とは言いがたく、また非特異的結合阻
害剤については、ほとんど報告がない。
中に存在する蛋白質全般に影響するため、不必要な変性
を誘発し、抗原抗体反応を阻害することもありうる。ま
たこれら特異的阻害剤は、有効なｐＨが存在し、中性付
近で必ずしも効果があるとは言い難い。そしてこれら特
異的阻害剤は、残念ながら低濃度の小分子を測定する場
合に必ずしも有効とは言いがたく、また非特異的結合阻
害剤については、ほとんど報告がない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、小分子の免
疫学的測定法において、試料中の小分子の濃度を正確に
測定する方法を提供するものである。
疫学的測定法において、試料中の小分子の濃度を正確に
測定する方法を提供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、非特異的
結合が小分子の疎水的な性質に起因していることに注目
し、その反応系に疎水性アミノ酸を添加することで、そ
の疎水性相互作用に起因する非特異的結合を減少させる
ことを見出だした。さらに本発明者らは、小分子の免疫
測定において、疎水性アミノ酸が一般的な抗原抗体反応
活性剤として作用することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
結合が小分子の疎水的な性質に起因していることに注目
し、その反応系に疎水性アミノ酸を添加することで、そ
の疎水性相互作用に起因する非特異的結合を減少させる
ことを見出だした。さらに本発明者らは、小分子の免疫
測定において、疎水性アミノ酸が一般的な抗原抗体反応
活性剤として作用することを見いだし、本発明を完成す
るに至った。
【０００９】すなわち本発明は、小分子を免疫測定法に
て測定する際に、疎水性アミノ酸を反応系に共存させる
ことを特徴とする、小分子の測定法である。以下、本発
明をさらに詳細に説明する。
て測定する際に、疎水性アミノ酸を反応系に共存させる
ことを特徴とする、小分子の測定法である。以下、本発
明をさらに詳細に説明する。
【００１０】本発明で小分子とは、免疫測定法で測定さ
れる際の測定対象とされる物であり、その分子量が小さ
い物である。例えばビタミン類または各種ホルモン、具
体的にはステロイドホルモン、甲状腺ホルモン、ペプタ
イドホルモンなどがあげられる。中でもホルモンとして
は、エストラジオ−ル、エストリオ−ル、テストステロ
ン、プロゲステロン、コルチゾ−ル、またはデヒドロエ
ピアンドロステロン硫酸などをあげることができる。ま
たビタミン類としては、ビタミンＤ、ビタミンＢ12また
は葉酸などをあげることができる。
れる際の測定対象とされる物であり、その分子量が小さ
い物である。例えばビタミン類または各種ホルモン、具
体的にはステロイドホルモン、甲状腺ホルモン、ペプタ
イドホルモンなどがあげられる。中でもホルモンとして
は、エストラジオ−ル、エストリオ−ル、テストステロ
ン、プロゲステロン、コルチゾ−ル、またはデヒドロエ
ピアンドロステロン硫酸などをあげることができる。ま
たビタミン類としては、ビタミンＤ、ビタミンＢ12また
は葉酸などをあげることができる。
【００１１】共存させるアミノ酸としては、疎水性アミ
ノ酸であれば特に限定はないが、例えばフェニルアラニ
ン、トリプトファン、イソロイシン、ロイシン、プロリ
ン、チロシン、メチオニン、バリン、アラニンなどをあ
げることができる。特にイソロイシンまたはロイシンを
用いるとよい結果が得られるため、それらを用いること
が好ましい。これらの疎水性アミノ酸は、１種類を単独
で用いてもよく、また２種以上を混合して用いてもよ
い。２種以上を用いた場合は、相乗効果が期待される。
ノ酸であれば特に限定はないが、例えばフェニルアラニ
ン、トリプトファン、イソロイシン、ロイシン、プロリ
ン、チロシン、メチオニン、バリン、アラニンなどをあ
げることができる。特にイソロイシンまたはロイシンを
用いるとよい結果が得られるため、それらを用いること
が好ましい。これらの疎水性アミノ酸は、１種類を単独
で用いてもよく、また２種以上を混合して用いてもよ
い。２種以上を用いた場合は、相乗効果が期待される。
【００１２】疎水性アミノ酸は、免疫測定の際に、反応
系に共存させることが必要であるが、共存させるときの
濃度は、通常（ｗ／ｖ）換算で０．０１％〜０．５％、
好ましくは０．０２〜０．２％である。疎水性アミノ酸
の反応系への共存のさせ方には特に限定はなく、疎水性
アミノ酸は免疫測定の反応時に反応系に共存していれば
よい。したがって、反応系への添加順序にも特に限定は
なく、疎水性アミノ酸は、小分子及びその他の免疫反応
試薬と比較してどちらを先に添加してもよく、また同時
に添加してもよい。もちろん、免疫測定の反応に先立
ち、小分子と疎水性アミノ酸とを前もって混合させてか
ら反応系へ添加してもよい。
系に共存させることが必要であるが、共存させるときの
濃度は、通常（ｗ／ｖ）換算で０．０１％〜０．５％、
好ましくは０．０２〜０．２％である。疎水性アミノ酸
の反応系への共存のさせ方には特に限定はなく、疎水性
アミノ酸は免疫測定の反応時に反応系に共存していれば
よい。したがって、反応系への添加順序にも特に限定は
なく、疎水性アミノ酸は、小分子及びその他の免疫反応
試薬と比較してどちらを先に添加してもよく、また同時
に添加してもよい。もちろん、免疫測定の反応に先立
ち、小分子と疎水性アミノ酸とを前もって混合させてか
ら反応系へ添加してもよい。
【００１３】本発明の方法を適用できる免疫反応の種類
には特に限定はなく、免疫反応の原理や検出のためのラ
ベルの種類を問わないものである。例えば免疫反応とし
ては、サンドイッチ法、競合法、凝集法などに適用する
ことができ、ラベルとして、放射性同位元素、酵素、化
学発光、生物化学発光などに適用することができる。特
に放射性同位元素または酵素や蛍光物質を用いた、サン
ドイッチ法や競合法が好ましい。免疫測定の反応条件
は、疎水性アミノ酸の非存在下で測定を行うのと同様の
通常の条件、例えば通常の反応温度・時間で、疎水性ア
ミノ酸の存在下で免疫測定を行えばよい。
には特に限定はなく、免疫反応の原理や検出のためのラ
ベルの種類を問わないものである。例えば免疫反応とし
ては、サンドイッチ法、競合法、凝集法などに適用する
ことができ、ラベルとして、放射性同位元素、酵素、化
学発光、生物化学発光などに適用することができる。特
に放射性同位元素または酵素や蛍光物質を用いた、サン
ドイッチ法や競合法が好ましい。免疫測定の反応条件
は、疎水性アミノ酸の非存在下で測定を行うのと同様の
通常の条件、例えば通常の反応温度・時間で、疎水性ア
ミノ酸の存在下で免疫測定を行えばよい。
【００１４】疎水性アミノ酸を測定時に反応系に共存さ
せることの作用は、必ずしも明らかではないが、以下の
ように考えられる。すなわち、過剰の疎水性アミノ酸を
測定対象の小分子と共存させることにより、測定系全体
の疎水的性質を改変させ、遊離型の小分子の比率を多く
することができると考えられる。さらに疎水性アミノ酸
が、小分子に先立って非特異的に蛋白質、脂質、容器な
どと結合するので、遊離型の小分子を正確に測定するこ
とができると考えられる。
せることの作用は、必ずしも明らかではないが、以下の
ように考えられる。すなわち、過剰の疎水性アミノ酸を
測定対象の小分子と共存させることにより、測定系全体
の疎水的性質を改変させ、遊離型の小分子の比率を多く
することができると考えられる。さらに疎水性アミノ酸
が、小分子に先立って非特異的に蛋白質、脂質、容器な
どと結合するので、遊離型の小分子を正確に測定するこ
とができると考えられる。
【００１５】
【発明の効果】本発明によれば、抽出操作なしに試料中
の小分子の濃度を精度良く測定することが可能である。
例えば、臨床検査において非常に有効な手段であるＥＩ
Ａ，ＲＩＡで測定されている小分子は、必ず容器などへ
の非特異的結合などが考えられ、特に低濃度では低回収
されることは広く知られている。そのような測定系に
て、正確な小分子濃度を測定することは非常に有用であ
り、高精度な測定、測定時間の短縮、自動化への発展に
たいする多くの要望を簡便に解決するものであり、その
応用範囲は広い。
の小分子の濃度を精度良く測定することが可能である。
例えば、臨床検査において非常に有効な手段であるＥＩ
Ａ，ＲＩＡで測定されている小分子は、必ず容器などへ
の非特異的結合などが考えられ、特に低濃度では低回収
されることは広く知られている。そのような測定系に
て、正確な小分子濃度を測定することは非常に有用であ
り、高精度な測定、測定時間の短縮、自動化への発展に
たいする多くの要望を簡便に解決するものであり、その
応用範囲は広い。
【００１６】また従来使用されていた、小分子の特異的
結合阻害剤であるグルタミン酸溶液やＡＮＳは、ｐＨ
６．０〜６．５という弱酸性領域においてその効果が発
揮されるが、本発明の疎水性アミノ酸の場合は、中性ｐ
Ｈ領域にて非特異的に結合していた小分子を遊離型とす
ることができるため、より生理的ｐＨに近い条件で測定
を実施することができる。
結合阻害剤であるグルタミン酸溶液やＡＮＳは、ｐＨ
６．０〜６．５という弱酸性領域においてその効果が発
揮されるが、本発明の疎水性アミノ酸の場合は、中性ｐ
Ｈ領域にて非特異的に結合していた小分子を遊離型とす
ることができるため、より生理的ｐＨに近い条件で測定
を実施することができる。
【００１７】
【実施例】以下本発明を更に詳細に説明するために実施
例を示すが、本発明はこれら実施例になんら限定される
ものではない。
例を示すが、本発明はこれら実施例になんら限定される
ものではない。
【００１８】（１）エストラジオ−ルの測定反応試薬
アルカリ性フォスファタ−ゼ標識エストラジオ−ル溶
液 Ｌ−ロイシンを０．１％（ｗ／ｖ）になるように、０．
５％ウシ血清アルブミンを含む５０ｍＭトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ７．０）に溶解させ、希釈液１とした。また
Ｌ−ロイシン非添加の０．５％ウシ血清アルブミンを含
む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を希釈液
２とした。アルカリ性フォスファタ−ゼ標識エストラジ
オ−ル溶液を、２８０ｎｍの吸光度で０．０００２Ａｂ
ｓになるように希釈液１，２にそれぞれ加え、よく混和
した。
液 Ｌ−ロイシンを０．１％（ｗ／ｖ）になるように、０．
５％ウシ血清アルブミンを含む５０ｍＭトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ７．０）に溶解させ、希釈液１とした。また
Ｌ−ロイシン非添加の０．５％ウシ血清アルブミンを含
む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を希釈液
２とした。アルカリ性フォスファタ−ゼ標識エストラジ
オ−ル溶液を、２８０ｎｍの吸光度で０．０００２Ａｂ
ｓになるように希釈液１，２にそれぞれ加え、よく混和
した。
【００１９】エストラジオ−ル抗血清の固定化
リン酸緩衝液にて４０００倍に希釈したウサギ抗−エス
トラジオ−ル抗血清を、ポリスチレンビ−ズ１個あたり
５μｇになるように加え、一晩放置した。次に０．５％
ＢＳＡにて２時間ブロッキング処理し、エストラジオ−
ル抗血清固定化ポリスチレンビ−ズを作製した。
トラジオ−ル抗血清を、ポリスチレンビ−ズ１個あたり
５μｇになるように加え、一晩放置した。次に０．５％
ＢＳＡにて２時間ブロッキング処理し、エストラジオ−
ル抗血清固定化ポリスチレンビ−ズを作製した。
【００２０】エストラジオ−ル標準液
脱エストラジオ−ル・ヒト血清に、市販エストラジオ−
ル（シグマ社製）を０，４０，１００，５８０，１６９
０，または３５００ｐｇ／ｍｌになるように調製し、エ
ストラジオ−ル標準液とした。
ル（シグマ社製）を０，４０，１００，５８０，１６９
０，または３５００ｐｇ／ｍｌになるように調製し、エ
ストラジオ−ル標準液とした。
【００２１】希釈試験用試料
ヒト血清を用意し、高濃度の既知量のエストラジオ−ル
を添加して１６８６ｐｇ／ｍｌとし、脱エストラジオ−
ル・ヒト血清にて２倍の希釈系列で試料を作製した。
を添加して１６８６ｐｇ／ｍｌとし、脱エストラジオ−
ル・ヒト血清にて２倍の希釈系列で試料を作製した。
【００２２】（２）標準液の測定
で調製した２種類のアルカリ性フォスファタ−ゼ標識
エストラジオ−ル溶液２５μｌ中に、で調製した各標
準液を７５μｌずつマイクロピペットにて分注した。次
にで調製した抗血清固定化球を加えた後、ＡＩＡ１２
００（東ソ−株式会社製）にて３７℃で４０分で反応さ
せ、アルカリ性フォスファタ−ゼの蛍光基質である４−
メチルウンベリフェロンの蛍光強度の増加速度を、それ
ぞれ蛍光光度計にて測定した（ｎＭ／ｓｅｃ）。各標準
液は、５回ずつ測定した。
エストラジオ−ル溶液２５μｌ中に、で調製した各標
準液を７５μｌずつマイクロピペットにて分注した。次
にで調製した抗血清固定化球を加えた後、ＡＩＡ１２
００（東ソ−株式会社製）にて３７℃で４０分で反応さ
せ、アルカリ性フォスファタ−ゼの蛍光基質である４−
メチルウンベリフェロンの蛍光強度の増加速度を、それ
ぞれ蛍光光度計にて測定した（ｎＭ／ｓｅｃ）。各標準
液は、５回ずつ測定した。
【００２３】（３）各標準液濃度（ｐｇ／ｍｌ）におい
て、標識化エストラジオ−ルの抗血清への結合率（Ｂ／
Ｂ0）を下記の計算式より算出し、表１に示した。
て、標識化エストラジオ−ルの抗血清への結合率（Ｂ／
Ｂ0）を下記の計算式より算出し、表１に示した。
【００２４】Ｂ／Ｂ0＝（各標準液の蛍光増加速度／濃
度０の標準液の蛍光増加速度）×１００ 標準液濃度０の時に、希釈液１，２の蛍光増加速度を比
較すると、ロイシンを含有する希釈液１の方が蛍光増加
速度が大きく、遊離の標識化エストラジオ−ルの量が多
いことが示される。
度０の標準液の蛍光増加速度）×１００ 標準液濃度０の時に、希釈液１，２の蛍光増加速度を比
較すると、ロイシンを含有する希釈液１の方が蛍光増加
速度が大きく、遊離の標識化エストラジオ−ルの量が多
いことが示される。
【００２５】また標準液濃度４０ｐｇ／ｍｌの時に、結
合率Ｂ／Ｂ0を比較すると、希釈液１の方が希釈液２よ
りはるかに結合率が低いことから、同濃度の標準液を加
えた場合でも、希釈液１の方が遊離のエストラジオ−ル
の量が多く、標識化エストラジオ−ルと競合したためと
考えられる。したがって、ロイシン存在下のほうがエス
トラジオ−ルを感度よく測定することができる。一方、
標準液濃度３５００ｐｇ／ｍｌの場合は、両者の結合率
は変わらない。このように、ロイシンを共存させること
により、特に低濃度域でも精度よく測定することができ
る。
合率Ｂ／Ｂ0を比較すると、希釈液１の方が希釈液２よ
りはるかに結合率が低いことから、同濃度の標準液を加
えた場合でも、希釈液１の方が遊離のエストラジオ−ル
の量が多く、標識化エストラジオ−ルと競合したためと
考えられる。したがって、ロイシン存在下のほうがエス
トラジオ−ルを感度よく測定することができる。一方、
標準液濃度３５００ｐｇ／ｍｌの場合は、両者の結合率
は変わらない。このように、ロイシンを共存させること
により、特に低濃度域でも精度よく測定することができ
る。
【００２６】
【表１】
【００２７】（４）希釈直線性試験
１６８６ｐｇ／ｍｌに調製したエストラジオ−ル試料血
清を、脱エストラジオ−ル・ヒト血清で２倍の希釈系列
で希釈し、測定試料とした。この測定試料を「（２）標
準液の測定」と同様に測定した。各試料は３回ずつ測定
した。回収率は下記の計算式により算出し、結果を表２
にまとめた。
清を、脱エストラジオ−ル・ヒト血清で２倍の希釈系列
で希釈し、測定試料とした。この測定試料を「（２）標
準液の測定」と同様に測定した。各試料は３回ずつ測定
した。回収率は下記の計算式により算出し、結果を表２
にまとめた。
【００２８】回収率＝（測定値／理論値）×１００
表からも明らかなように、疎水性アミノ酸であるＬ−ロ
イシンを添加することにより、エストラジオ−ルの回収
率が低濃度まで著しく改善されていることがわかる。一
方、Ｌ−ロイシン非添加の希釈液２を用いた場合は、低
濃度になるほど低回収率となった。
イシンを添加することにより、エストラジオ−ルの回収
率が低濃度まで著しく改善されていることがわかる。一
方、Ｌ−ロイシン非添加の希釈液２を用いた場合は、低
濃度になるほど低回収率となった。
【００２９】
【表２】
Claims (3)
- 【請求項１】ステロイド・ホルモンまたはビタミン類を
免疫測定法にて測定する際に、ロイシンを反応系に共存
させることを特徴とする、ステロイド・ホルモンまたは
ビタミン類の測定法。 - 【請求項２】ステロイド・ホルモンが、エストラジオー
ル、エストリオール、テストステロン、プロゲステロ
ン、コルチゾール、またはデヒドロエピアンドロステロ
ン硫酸である請求項１に記載の測定法。 - 【請求項３】ビタミン類がビタミンＤ、ビタミンＢ12ま
たは葉酸である請求項１に記載の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05864194A JP3401903B2 (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | ステロイド・ホルモンまたはビタミン類の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05864194A JP3401903B2 (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | ステロイド・ホルモンまたはビタミン類の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07270412A JPH07270412A (ja) | 1995-10-20 |
| JP3401903B2 true JP3401903B2 (ja) | 2003-04-28 |
Family
ID=13090213
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05864194A Expired - Lifetime JP3401903B2 (ja) | 1994-03-29 | 1994-03-29 | ステロイド・ホルモンまたはビタミン類の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3401903B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5541747B2 (ja) * | 2012-03-26 | 2014-07-09 | 株式会社Ｌｓｉメディエンス | 低分子の免疫学的測定法及びキット |
-
1994
- 1994-03-29 JP JP05864194A patent/JP3401903B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07270412A (ja) | 1995-10-20 |
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