JP3396705B2 - 一次止血における血小板の機能を測定する方法および装置 - Google Patents
一次止血における血小板の機能を測定する方法および装置Info
- Publication number
- JP3396705B2 JP3396705B2 JP18390694A JP18390694A JP3396705B2 JP 3396705 B2 JP3396705 B2 JP 3396705B2 JP 18390694 A JP18390694 A JP 18390694A JP 18390694 A JP18390694 A JP 18390694A JP 3396705 B2 JP3396705 B2 JP 3396705B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- platelets
- container
- platelet
- aggregation
- ecm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 47
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 35
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 11
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 11
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 9
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 7
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000013373 fibrillar collagen Human genes 0.000 claims description 5
- 108060002894 fibrillar collagen Proteins 0.000 claims description 5
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 claims description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 claims 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 abstract 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 10
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 9
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 9
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 9
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 7
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 7
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 6
- 208000000392 Thrombasthenia Diseases 0.000 description 5
- 208000002004 Afibrinogenemia Diseases 0.000 description 4
- 206010016075 Factor I deficiency Diseases 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- OZIHYFWYFUSXIS-UHFFFAOYSA-N (25R)-spirost-5-en-3beta-ol 3-O-alpha-L-rhamnopyranosyl-(1->2)-O-{[alpha-L-rhamnopyranosyl-(1->4)]-O-[alpha-L-rhamnopyranosyl-(1->4)]}-beta-D-glucopyranoside Natural products O1C2(OCC(C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C(C1O)OC2C(C(O)C(O)C(C)O2)O)OC(CO)C1OC(C(C1O)O)OC(C)C1OC1OC(C)C(O)C(O)C1O OZIHYFWYFUSXIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024659 Hemostatic disease Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 101000829980 Homo sapiens Ral guanine nucleotide dissociation stimulator Proteins 0.000 description 1
- 102100023320 Ral guanine nucleotide dissociation stimulator Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000013130 cardiovascular surgery Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 210000000399 corneal endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
- G01N33/4905—Determining clotting time of blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、一次止血における血小
板の機能を測定する方法および装置に関する。
板の機能を測定する方法および装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】止血、すなわち、出血の阻止は、本質的
に２つの連続して機能するメカニズムからなるメカニズ
ムである。「一次止血」は出血の直ちの阻止しそして損
傷された血管表面または露出した組織上の循環する血小
板の局在化および凝集および引き続く血栓の形成により
引き起こされ、「二次止血」は出血の長期間の阻止を行
いそして究極的にフィブリンの形成を生ずる１連の酵素
反応により引き起こされる。
に２つの連続して機能するメカニズムからなるメカニズ
ムである。「一次止血」は出血の直ちの阻止しそして損
傷された血管表面または露出した組織上の循環する血小
板の局在化および凝集および引き続く血栓の形成により
引き起こされ、「二次止血」は出血の長期間の阻止を行
いそして究極的にフィブリンの形成を生ずる１連の酵素
反応により引き起こされる。
【０００３】一次止血の異常は、外傷の場合、例えば、
手術、出産、侵入性診断および治療的処置ならびに外傷
において生命を脅かすようになりうる出血の傾向に関連
する症状である。従って、一次止血の程度の評価は非常
に臨床上重要である。
手術、出産、侵入性診断および治療的処置ならびに外傷
において生命を脅かすようになりうる出血の傾向に関連
する症状である。従って、一次止血の程度の評価は非常
に臨床上重要である。
【０００４】従来、一次止血を評価するために、いくつ
かの手順が使用されてきている。１つの手順は「出血時
間の試験（ｔｈｅ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ｔｅ
ｓｔ）」と呼ばれ、一次止血を測定する最も普通の臨床
的試験であり、試験した被検者の腕の中にコントロール
された切断を誘発し、そして出血が阻止されるまでの時
間を測定することによって実施される。この手順は比較
的低い臨床的関連性を有する。なぜなら、それは一次止
血における重大な異常のみを同定できるにすぎないの
で、正常の被検者と一次止血がわずかに欠陥のある被検
者とを区別することができないからである。さらに、こ
の方法は標準化することが事実上不可能である。なぜな
ら、出血の時間が切断の正確な大きさおよび位置ならび
に静脈および動脈の血圧に強く依存するからである。
かの手順が使用されてきている。１つの手順は「出血時
間の試験（ｔｈｅ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ｔｅ
ｓｔ）」と呼ばれ、一次止血を測定する最も普通の臨床
的試験であり、試験した被検者の腕の中にコントロール
された切断を誘発し、そして出血が阻止されるまでの時
間を測定することによって実施される。この手順は比較
的低い臨床的関連性を有する。なぜなら、それは一次止
血における重大な異常のみを同定できるにすぎないの
で、正常の被検者と一次止血がわずかに欠陥のある被検
者とを区別することができないからである。さらに、こ
の方法は標準化することが事実上不可能である。なぜな
ら、出血の時間が切断の正確な大きさおよび位置ならび
に静脈および動脈の血圧に強く依存するからである。
【０００５】血小板の凝集の研究は、通常、Ｂｏｒｎ
（Ｂｏｒｎ Ｇ．Ｖ．Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ、１９４、９
２７−９２９（１９６２）に従い、血小板に富んだ血漿
（ＰＲＰ）中で濁り度測定装置を使用して実施される。
濁り度測定の１つの欠点は、ＰＲＰの使用が遠心および
他の血球からの血小板の分離を必要とし、これらの操作
は血小板の性質および挙動を変更することがあるという
ことである。濁り度測定法の他の欠点は、それが時間を
消費しかつ労力を要するということである。最後に、こ
のような試験の評価は、血漿中の脂質のレベルにより影
響を受けるＰＲＰの光学的品質により制限される。
（Ｂｏｒｎ Ｇ．Ｖ．Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ、１９４、９
２７−９２９（１９６２）に従い、血小板に富んだ血漿
（ＰＲＰ）中で濁り度測定装置を使用して実施される。
濁り度測定の１つの欠点は、ＰＲＰの使用が遠心および
他の血球からの血小板の分離を必要とし、これらの操作
は血小板の性質および挙動を変更することがあるという
ことである。濁り度測定法の他の欠点は、それが時間を
消費しかつ労力を要するということである。最後に、こ
のような試験の評価は、血漿中の脂質のレベルにより影
響を受けるＰＲＰの光学的品質により制限される。
【０００６】血小板の凝集は、また、全血（ＷＢ）で試
験された（Ｒｉｅｓｓ Ｈ．、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐ
ａｔｈｌ．８５、５０−５６（１９８６））。この技術
に従うと、血小板の凝集は血液試料の中に配置された２
つの電極を横切るインピーダンスの増加により測定され
た。しかしながら、この技術ならびに前述の濁り度測定
技術において、血小板の凝集は人工的試薬により誘発さ
れ、結局凝集の測定条件は明瞭に非生理学的であった。
験された（Ｒｉｅｓｓ Ｈ．、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐ
ａｔｈｌ．８５、５０−５６（１９８６））。この技術
に従うと、血小板の凝集は血液試料の中に配置された２
つの電極を横切るインピーダンスの増加により測定され
た。しかしながら、この技術ならびに前述の濁り度測定
技術において、血小板の凝集は人工的試薬により誘発さ
れ、結局凝集の測定条件は明瞭に非生理学的であった。
【０００７】いくつかの他の手順は、ＰＲＰを剪断力に
暴露し、そして血小板の凝集をこれらの条件下に測定す
ることを必要とする。このような試験における剪断力
は、回転部材が円筒形容器内で回転する円錐−板型装置
によるか、あるいは流体の連続的流れを生成することが
できる種々の特殊化された手段により誘発された（Ｔｉ
ｐｐｅ Ａ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．６
７：４０７−１２４０（１９９１））；Ｆｕｋｉｙａｍ
ａ Ｍ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．６４：２
５３−２６０（１９８９））。一般にＰＲＰを使用して
実施される、このような試験において、剪断誘発付着が
試験容器の表面上に起こった。このような条件下の人工
的マトリックスへの血小板の付着の生理学的意味は問題
を生じ、そしてこの手順は事実非常にしばしば臨床的に
有意な結果を提供することができない。さらに、前述の
刊行物の中に開示されている手順のいくつかにおける剪
断力を生成する手段はしばしば複雑かつ経費がかかるの
で、この手順は日常的臨床手順として不適当である。
暴露し、そして血小板の凝集をこれらの条件下に測定す
ることを必要とする。このような試験における剪断力
は、回転部材が円筒形容器内で回転する円錐−板型装置
によるか、あるいは流体の連続的流れを生成することが
できる種々の特殊化された手段により誘発された（Ｔｉ
ｐｐｅ Ａ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．６
７：４０７−１２４０（１９９１））；Ｆｕｋｉｙａｍ
ａ Ｍ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ．６４：２
５３−２６０（１９８９））。一般にＰＲＰを使用して
実施される、このような試験において、剪断誘発付着が
試験容器の表面上に起こった。このような条件下の人工
的マトリックスへの血小板の付着の生理学的意味は問題
を生じ、そしてこの手順は事実非常にしばしば臨床的に
有意な結果を提供することができない。さらに、前述の
刊行物の中に開示されている手順のいくつかにおける剪
断力を生成する手段はしばしば複雑かつ経費がかかるの
で、この手順は日常的臨床手順として不適当である。
【０００８】他の従来開示された手順は、血小板に富ん
だ血漿（ＰＲＰ）中で細胞外マトリックス（ＥＣＭ）へ
の血小板の付着の測定を必要とする（Ｖｌｏｄｖｋｓ
ｙ、Ｉ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ、１８、１７９−１９１（１９８３））および全血中
で（Ｌａｖｅｅ Ｊ．ら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆＴｈｏｒａｃｉｃ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕ
ｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ、９７（２）、２０４−２１
２、（１９８９））。
だ血漿（ＰＲＰ）中で細胞外マトリックス（ＥＣＭ）へ
の血小板の付着の測定を必要とする（Ｖｌｏｄｖｋｓ
ｙ、Ｉ．ら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ、１８、１７９−１９１（１９８３））および全血中
で（Ｌａｖｅｅ Ｊ．ら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆＴｈｏｒａｃｉｃ ａｎｄ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕ
ｌａｒ Ｓｕｒｇｅｒｙ、９７（２）、２０４−２１
２、（１９８９））。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、一次
止血における血小板の機能を評価する簡便で新規な方法
および装置を提供することである。
止血における血小板の機能を評価する簡便で新規な方法
および装置を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、（ａ）全血ま
たはその血小板含有画分である試料を獲得し、そして必
要に応じてそれを血液凝固を阻止するために十分な量の
抗凝固剤と混合し、（ｂ）（ａ）において得られた試料
を、平の底を有しそして内表面がそれへの血小板の付着
および凝集を誘発することができる基質で被覆されてい
る容器の中に導入し、（ｃ）前記調製物を容器の内側で
回転することにより剪断力を前記表面において発生さ
せ、そして（ｄ）付着した血小板のパラメーターであっ
て、付着した血小板の量、凝集物の大きさ、凝集物の形
態、凝集物で被覆された合計の面積および付着した血小
板または凝集物および／または前記物質の分布から成る
群より選択されるパラメーターを測定する、ことからな
る一次止血における血小板の機能を測定する方法を提供
する。
たはその血小板含有画分である試料を獲得し、そして必
要に応じてそれを血液凝固を阻止するために十分な量の
抗凝固剤と混合し、（ｂ）（ａ）において得られた試料
を、平の底を有しそして内表面がそれへの血小板の付着
および凝集を誘発することができる基質で被覆されてい
る容器の中に導入し、（ｃ）前記調製物を容器の内側で
回転することにより剪断力を前記表面において発生さ
せ、そして（ｄ）付着した血小板のパラメーターであっ
て、付着した血小板の量、凝集物の大きさ、凝集物の形
態、凝集物で被覆された合計の面積および付着した血小
板または凝集物および／または前記物質の分布から成る
群より選択されるパラメーターを測定する、ことからな
る一次止血における血小板の機能を測定する方法を提供
する。
【００１１】前記基質は細胞外マトリックス（ＥＣ
Ｍ）、それへの血小板の付着および凝集を誘発すること
ができるその活性成分または任意の他の天然もしくは人
工的に生産された物質であることができる。
Ｍ）、それへの血小板の付着および凝集を誘発すること
ができるその活性成分または任意の他の天然もしくは人
工的に生産された物質であることができる。
【００１２】ＥＣＭは通常ウシまたはヒト源から得られ
る内皮細胞、例えば、角膜または血管の内皮細胞により
生産されるマトリックスである。ＥＣＭは細胞を前記容
器の内側で培養し、次いでＥＣＭの生産後に細胞を取り
出すことによって生産することができる（Ｇｏｓｐｏｄ
ａｒｏｗｉｃｚ Ｄら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１、２
０１−２０７（１９８０））。さらに、ＥＣＭを使用す
るよりむしろ、表面を、また、一次止血を誘発すること
ができるその種々の成分または人工的に生産された類似
体、例えば、基底膜のマトリックス（例えば、ＭＡＴＲ
ＩＧＥＬ（商標）、フロー・ラボラトリーズ・インコー
ポレーテッド、米国；ＫｌｅｉｎｍａｎＨ．ら、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２５、３１２−３１８（１９８
６））、種々のタイプの原線維性および非原線維性のコ
ラーゲン、フォン・ウィブランド（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅ
ｂｒａｎｄ）因子、フィブロネクチンなどにより被覆す
ることができる。
る内皮細胞、例えば、角膜または血管の内皮細胞により
生産されるマトリックスである。ＥＣＭは細胞を前記容
器の内側で培養し、次いでＥＣＭの生産後に細胞を取り
出すことによって生産することができる（Ｇｏｓｐｏｄ
ａｒｏｗｉｃｚ Ｄら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１、２
０１−２０７（１９８０））。さらに、ＥＣＭを使用す
るよりむしろ、表面を、また、一次止血を誘発すること
ができるその種々の成分または人工的に生産された類似
体、例えば、基底膜のマトリックス（例えば、ＭＡＴＲ
ＩＧＥＬ（商標）、フロー・ラボラトリーズ・インコー
ポレーテッド、米国；ＫｌｅｉｎｍａｎＨ．ら、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２５、３１２−３１８（１９８
６））、種々のタイプの原線維性および非原線維性のコ
ラーゲン、フォン・ウィブランド（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅ
ｂｒａｎｄ）因子、フィブロネクチンなどにより被覆す
ることができる。
【００１３】次の説明において、本発明は時々ＥＣＭの
使用を参照して説明するが、これは便利さを目的として
のみなされそして他のマトリックス、例えば、前記活性
成分または類似体から成るマトリックスを等しく使用で
きることを理解すべきである。
使用を参照して説明するが、これは便利さを目的として
のみなされそして他のマトリックス、例えば、前記活性
成分または類似体から成るマトリックスを等しく使用で
きることを理解すべきである。
【００１４】試験した血液試料は、全血、すなわち、す
べてのその細胞成分を含む血液であるか、あるいは血小
板に富んだ血漿（ＰＲＰ）であることができる。試料は
必要に応じて抗凝固剤と混合し、この抗凝固剤は二次止
血のメカニズムの影響を中和するために添加される。抗
凝固剤はこの分野において知られている任意の抗凝固
剤、例えば、クエン酸三ナトリウム、ヒルジン、ヘパリ
ンなどであることができる。
べてのその細胞成分を含む血液であるか、あるいは血小
板に富んだ血漿（ＰＲＰ）であることができる。試料は
必要に応じて抗凝固剤と混合し、この抗凝固剤は二次止
血のメカニズムの影響を中和するために添加される。抗
凝固剤はこの分野において知られている任意の抗凝固
剤、例えば、クエン酸三ナトリウム、ヒルジン、ヘパリ
ンなどであることができる。
【００１５】容器の内側の流体の回転、それゆえ剪断力
はある数の手段により誘発することができる。本発明の
１つの態様に従えば、剪断力は容器の回転により発生さ
れる。本発明に従い好ましい、本発明の他の態様に従え
ば、容器を静止させ、そして流体の回転を容器の内側の
回転要素により発生させる。この態様に従う容器は好ま
しくは円筒形である。
はある数の手段により誘発することができる。本発明の
１つの態様に従えば、剪断力は容器の回転により発生さ
れる。本発明に従い好ましい、本発明の他の態様に従え
ば、容器を静止させ、そして流体の回転を容器の内側の
回転要素により発生させる。この態様に従う容器は好ま
しくは円筒形である。
【００１６】本発明の第２態様に従う回転要素は好まし
くは円筒形である。このような場合において、血小板に
作用する剪断力は容器の中央から周辺に向かって徐々に
増加する。この態様は、例えば、単一の試験において、
変化する条件下に一次止血を評価しようとするとき、有
用である。剪断力がこのような場合において比較的低い
ＥＣＭで被覆された中央、および剪断力が比較的より高
い周辺における、血小板の付着および凝集の差は、血小
板が異なる剪断力に暴露される種々の血管の中の一次止
血における血小板の機能の差の指標を提供することがで
きる。
くは円筒形である。このような場合において、血小板に
作用する剪断力は容器の中央から周辺に向かって徐々に
増加する。この態様は、例えば、単一の試験において、
変化する条件下に一次止血を評価しようとするとき、有
用である。剪断力がこのような場合において比較的低い
ＥＣＭで被覆された中央、および剪断力が比較的より高
い周辺における、血小板の付着および凝集の差は、血小
板が異なる剪断力に暴露される種々の血管の中の一次止
血における血小板の機能の差の指標を提供することがで
きる。
【００１７】回転要素は、好ましくは、倒立円錐の形状
を有する底部分を有し、例えば、「円錐−板型」装置で
ある（Ｉｋｅｄａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８
７、１２３４−１２４０（１９９１））。このような装
置において、円錐の底、傾斜した面は水平からある角
度、例えば、約３°までの角度をなし、この角度はその
中央と周辺との間の要素により回転される流体の速度の
差の影響を本質的に中和し、こうして容器のＥＣＭで被
覆された底表面上に発生する剪断力が表面全体を通じて
（そこに存在する境界線の条件による極端な周辺を除外
する）本質的に等しいように計算される。こうして、こ
の態様に従い、ＥＣＭで被覆された表面への血小板の付
着および凝集は、それらの位置に無関係に血小板へ作用
する本質的に均一な剪断力の結果である。
を有する底部分を有し、例えば、「円錐−板型」装置で
ある（Ｉｋｅｄａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８
７、１２３４−１２４０（１９９１））。このような装
置において、円錐の底、傾斜した面は水平からある角
度、例えば、約３°までの角度をなし、この角度はその
中央と周辺との間の要素により回転される流体の速度の
差の影響を本質的に中和し、こうして容器のＥＣＭで被
覆された底表面上に発生する剪断力が表面全体を通じて
（そこに存在する境界線の条件による極端な周辺を除外
する）本質的に等しいように計算される。こうして、こ
の態様に従い、ＥＣＭで被覆された表面への血小板の付
着および凝集は、それらの位置に無関係に血小板へ作用
する本質的に均一な剪断力の結果である。
【００１８】血液試料が容器内に配置された後、血液を
１０秒〜１０分間、例えば、約２分間、例えば、５０〜
３０００ｓｅｃ-1、好ましくは１００〜２０００ｓｅｃ
-1の範囲であることができる剪断力において回転する。
１０秒〜１０分間、例えば、約２分間、例えば、５０〜
３０００ｓｅｃ-1、好ましくは１００〜２０００ｓｅｃ
-1の範囲であることができる剪断力において回転する。
【００１９】ＥＣＭ上への血小板の付着および凝集は、
ある数のそれ自体知られている手段、例えば適当な、染
色後光学顕微鏡を使用する光学的検査により、走査型電
子顕微鏡の使用により、光の吸収または透過の変化の測
定などにより測定される。この測定は、また、種々の画
像解析系（ＩＡＳ）を使用する画像解析を含むことがで
きる。
ある数のそれ自体知られている手段、例えば適当な、染
色後光学顕微鏡を使用する光学的検査により、走査型電
子顕微鏡の使用により、光の吸収または透過の変化の測
定などにより測定される。この測定は、また、種々の画
像解析系（ＩＡＳ）を使用する画像解析を含むことがで
きる。
【００２０】本発明は、また、前述の本発明の好ましい
態様に従う方法を実施するための装置を提供する。この
装置は、平の底の容器、および容器内の回転要素からな
る。容器の底の内表面は前記基質で被覆されている。
態様に従う方法を実施するための装置を提供する。この
装置は、平の底の容器、および容器内の回転要素からな
る。容器の底の内表面は前記基質で被覆されている。
【００２１】好ましい態様に従えば、回転要素は前述し
たように倒立円錐の形状を有する底部分を有する。
たように倒立円錐の形状を有する底部分を有する。
【００２２】この装置における回転要素は、ある数の手
段により、例えば、回転ローターへの直接の機械的カッ
プリングによるか、あるいは外部の推進手段（「磁気撹
拌機」）への磁気的カップリングにより推進することが
できる。
段により、例えば、回転ローターへの直接の機械的カッ
プリングによるか、あるいは外部の推進手段（「磁気撹
拌機」）への磁気的カップリングにより推進することが
できる。
【００２３】こうして、血小板の付着および凝集が誘発
される状態は血管の中に存在する生理学的状態に密接に
類似するので、本発明は生理学的意味を有する結果を生
ずる方法で一次止血を評価する手段を提供する。さら
に、本発明は比較的簡単なかつ安価な計装の使用により
実施することができる。
される状態は血管の中に存在する生理学的状態に密接に
類似するので、本発明は生理学的意味を有する結果を生
ずる方法で一次止血を評価する手段を提供する。さら
に、本発明は比較的簡単なかつ安価な計装の使用により
実施することができる。
【００２４】本発明は、出血の危険を生ずる、低い機能
の一次止血の症状、ならびに血栓症の危険を増加する、
病理学的に高い速度の一次止血の症状の両者を測定する
ために適当である。
の一次止血の症状、ならびに血栓症の危険を増加する、
病理学的に高い速度の一次止血の症状の両者を測定する
ために適当である。
【００２５】本発明を、添付した図面を場合により参照
するいくつかの非限定的態様により説明する。
するいくつかの非限定的態様により説明する。
【００２６】第１図をまず参照すると、第１図は本発明
の１つの態様に従う装置の概略的表示である。本発明に
よる装置は、円筒形容器１１および回転要素１２からな
る円錐−板型装置、倒立円錐の形状を有する底部分１３
からなる。回転要素１２は内側で磁気撹拌棒１４を保持
する。要素１２の上の部分１５はストッパー１６内に保
持されており、これにより要素１２は容器１１内のスト
ッパーから懸垂されており、そして自由に回転すること
ができる。容器１１の底表面１７はＥＣＭ１８により被
覆されている。装置１０は磁気撹拌装置１９上に配置さ
れている。
の１つの態様に従う装置の概略的表示である。本発明に
よる装置は、円筒形容器１１および回転要素１２からな
る円錐−板型装置、倒立円錐の形状を有する底部分１３
からなる。回転要素１２は内側で磁気撹拌棒１４を保持
する。要素１２の上の部分１５はストッパー１６内に保
持されており、これにより要素１２は容器１１内のスト
ッパーから懸垂されており、そして自由に回転すること
ができる。容器１１の底表面１７はＥＣＭ１８により被
覆されている。装置１０は磁気撹拌装置１９上に配置さ
れている。
【００２７】操作において、血液試料を、必要に応じて
抗凝固剤と混合し、容器１１の中に導入し、次いでスト
ッパー１６は要素１２を懸垂して容器上に配置されてお
り、その作動は回転する磁場を発生させ、この磁場は要
素１２を回転させる。従って、剪断力はＥＣＭで被覆さ
れた表面１８上に発生し、これは表面全体を通じて本質
的に一定である。
抗凝固剤と混合し、容器１１の中に導入し、次いでスト
ッパー１６は要素１２を懸垂して容器上に配置されてお
り、その作動は回転する磁場を発生させ、この磁場は要
素１２を回転させる。従って、剪断力はＥＣＭで被覆さ
れた表面１８上に発生し、これは表面全体を通じて本質
的に一定である。
【００２８】
実施例Ｉ：走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による定量的評
価 正常のボランティアあるいはグランツマン血小板無力症
（ＧＴ）、フォン・ウィブランド病（ｖＷＤ）、無繊維
素原血症（ＡＦ）および他の規定されない異常を包含す
る止血疾患を有する患者から全血を集めた。また、血栓
症の素因をもつ明らかに増加した一次止血を有する冠状
バイバス前の患者から血液試料を集めた。
価 正常のボランティアあるいはグランツマン血小板無力症
（ＧＴ）、フォン・ウィブランド病（ｖＷＤ）、無繊維
素原血症（ＡＦ）および他の規定されない異常を包含す
る止血疾患を有する患者から全血を集めた。また、血栓
症の素因をもつ明らかに増加した一次止血を有する冠状
バイバス前の患者から血液試料を集めた。
【００２９】各試料に、抗凝固剤として作用するクエン
酸ナトリウムの０．３８％を添加した。
酸ナトリウムの０．３８％を添加した。
【００３０】２００μｌ〜５００μｌのクエン酸ナトリ
ウム処理した血液を、ブロッカーまたはそれらの対照と
予備インキュベーションするか、あるいはしないで前述
の装置に添加した。
ウム処理した血液を、ブロッカーまたはそれらの対照と
予備インキュベーションするか、あるいはしないで前述
の装置に添加した。
【００３１】回転ディスクの対応する速度を選択するこ
とによって、試料を低いまたは高い剪断力に２分間暴露
した：低い剪断力について、試料を１００〜２００ｒｐ
ｍの速度で回転し、そして高い剪断力について、試料を
１０００〜２０００ｒｐｍの速度で回転した。特定の設
定において、回転速度（ｒｐｍ）は適用した剪断力（ｓ
ｅｃ-1の単位）に正確に対応した。
とによって、試料を低いまたは高い剪断力に２分間暴露
した：低い剪断力について、試料を１００〜２００ｒｐ
ｍの速度で回転し、そして高い剪断力について、試料を
１０００〜２０００ｒｐｍの速度で回転した。特定の設
定において、回転速度（ｒｐｍ）は適用した剪断力（ｓ
ｅｃ-1の単位）に正確に対応した。
【００３２】次いで試料をリン酸塩緩衝生理食塩水で洗
浄し、そしてＥＣＭ上への付着および凝集のレベルの評
価は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）下の検査により実施
した。
浄し、そしてＥＣＭ上への付着および凝集のレベルの評
価は、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）下の検査により実施
した。
【００３３】第２図は、低い（ｌ）剪断力の条件（１０
０ｓｅｃ-1）および高い（ｈ）剪断力（１０００ｓｅｃ
-1）下に試験した正常の血液試料のＳＥＭ写真を示す。
理解することができるように、正常の血液は使用した両
者の剪断力において付着／凝集の再現性あるモードを示
した。
０ｓｅｃ-1）および高い（ｈ）剪断力（１０００ｓｅｃ
-1）下に試験した正常の血液試料のＳＥＭ写真を示す。
理解することができるように、正常の血液は使用した両
者の剪断力において付着／凝集の再現性あるモードを示
した。
【００３４】止血異常を有する異なる患者からの血液を
止血メーターで試験したとき、付着および凝集の両者の
速度における明瞭な減少が観察された。次はこのような
試験のいくつかの例である：グランツマン血小板無力症
（ＧＴ）（第３図）− 低い（ｌ）および高い（ｈ）両
者の剪断力において凝集物の形成の完全な欠如が存在
し、そして単一の付着した血小板はわずかに部分的に広
がり、多少の偽足の形成を示した。
止血メーターで試験したとき、付着および凝集の両者の
速度における明瞭な減少が観察された。次はこのような
試験のいくつかの例である：グランツマン血小板無力症
（ＧＴ）（第３図）− 低い（ｌ）および高い（ｈ）両
者の剪断力において凝集物の形成の完全な欠如が存在
し、そして単一の付着した血小板はわずかに部分的に広
がり、多少の偽足の形成を示した。
【００３５】フォン・ウィブランド病（ｖＷＤ）（第４
図）− 低い（ｌ）および高い（ｈ）両者の剪断力条件
において凝集物の形成は存在せず、そして付着した血小
板は部分的広がりを示している（プラスチック表面上の
正常の血小板の広がりに匹敵する）。
図）− 低い（ｌ）および高い（ｈ）両者の剪断力条件
において凝集物の形成は存在せず、そして付着した血小
板は部分的広がりを示している（プラスチック表面上の
正常の血小板の広がりに匹敵する）。
【００３６】ｖＷｄ血小板の病理学的凝集は、ｖＷＦを
使用する生体内または生体外の処置により部分的に補正
することができた（データは示されていない）。
使用する生体内または生体外の処置により部分的に補正
することができた（データは示されていない）。
【００３７】無繊維素原血症（ＡＦ）（第５図）− 無
繊維素原血症は、単一の付着した血小板の多少の偽足の
形成を伴うＥＣＭとの病理学的相互作用を表す。低い
（ｌ）剪断条件の実験において凝集の形成はまったく発
見されなかったが、高い（ｈ）剪断力を適用したとき、
明確な凝集が存在した。これらのデータは、高い（ｈ）
剪断条件（これは動脈の条件に相当する）において、ｖ
ＷＦが血小板とＥＣＭおよび血小板−血小板の相互作用
を仲介する主要な相互作用のリガンドであるという概念
と一致した。
繊維素原血症は、単一の付着した血小板の多少の偽足の
形成を伴うＥＣＭとの病理学的相互作用を表す。低い
（ｌ）剪断条件の実験において凝集の形成はまったく発
見されなかったが、高い（ｈ）剪断力を適用したとき、
明確な凝集が存在した。これらのデータは、高い（ｈ）
剪断条件（これは動脈の条件に相当する）において、ｖ
ＷＦが血小板とＥＣＭおよび血小板−血小板の相互作用
を仲介する主要な相互作用のリガンドであるという概念
と一致した。
【００３８】特定のレセプターのブロッカー（第６図）
− ｖＷＦブロッカーとして働くｖＷＦ断片（ｖＷＦ
ｆ）およびインテグリンレセプターのブロッカーである
アルギニン−グリシン−アスパラギン−セリンのテトラ
ペプチド（ＲＧＤＳ）の両者を、それぞれ、４μＭおよ
び１５μＭの濃度で、本発明の装置における剪断力条件
下に適用すると、血小板とＥＣＭとの病理学的相互作用
が発生した。特定のレセプターのブロッカーの作用は、
それぞれ、対応した疾患ｖＷＤおよびＧＴに匹敵した。
− ｖＷＦブロッカーとして働くｖＷＦ断片（ｖＷＦ
ｆ）およびインテグリンレセプターのブロッカーである
アルギニン−グリシン−アスパラギン−セリンのテトラ
ペプチド（ＲＧＤＳ）の両者を、それぞれ、４μＭおよ
び１５μＭの濃度で、本発明の装置における剪断力条件
下に適用すると、血小板とＥＣＭとの病理学的相互作用
が発生した。特定のレセプターのブロッカーの作用は、
それぞれ、対応した疾患ｖＷＤおよびＧＴに匹敵した。
【００３９】実施例ＩＩ．画像解析系（ＩＡＳ）による
定量的評価 下に示すように変化する程度の剪断速度において第１図
に表す装置を使用して、クエン酸塩処理した全血中の正
常の血小板をＥＣＭ上に循環させた。剪断作用は１５秒
から５分までの範囲の種々の時間の間適用した。
定量的評価 下に示すように変化する程度の剪断速度において第１図
に表す装置を使用して、クエン酸塩処理した全血中の正
常の血小板をＥＣＭ上に循環させた。剪断作用は１５秒
から５分までの範囲の種々の時間の間適用した。
【００４０】次いでＥＣＭ表面を洗浄し、固定し、そし
て染色した後光学顕微鏡で検査し、次いでＩＡＳにより
解析した。この系において評価することができたパラメ
ーターは、次のものを包含した： （ｉ）付着した血小板凝集物により被覆された合計の面
積の％（これは下に示すグラフに表面被覆％として示
す）； （ｉｉ）観察された物体の平均大きさ（下のグラフに
「平均粒子大きさとして示す）； （ｉｉｉ）単一の付着した／広がった血小板の％（５〜
６μｍ２の平均面積） （ｉｖ）血小板凝集物の％（１４μｍ２より大きい平均
面積を有する凝集物）。
て染色した後光学顕微鏡で検査し、次いでＩＡＳにより
解析した。この系において評価することができたパラメ
ーターは、次のものを包含した： （ｉ）付着した血小板凝集物により被覆された合計の面
積の％（これは下に示すグラフに表面被覆％として示
す）； （ｉｉ）観察された物体の平均大きさ（下のグラフに
「平均粒子大きさとして示す）； （ｉｉｉ）単一の付着した／広がった血小板の％（５〜
６μｍ２の平均面積） （ｉｖ）血小板凝集物の％（１４μｍ２より大きい平均
面積を有する凝集物）。
【００４１】第７図は３つの場合からの代表的な結果を
示す：正常の被検者（Ａ）、フォン・ウィブランド病に
悩む被検者（Ｂ）およびグランツマン血小板無力症に悩
む被検者（Ｃ）。疾患を有する被検者において見ること
ができるように、単一の付着した血小板％（ヒストグラ
ムにおける第１欄）を除外して、すべての上の４つのパ
ラメーターにおいて劇的な減少が存在した。
示す：正常の被検者（Ａ）、フォン・ウィブランド病に
悩む被検者（Ｂ）およびグランツマン血小板無力症に悩
む被検者（Ｃ）。疾患を有する被検者において見ること
ができるように、単一の付着した血小板％（ヒストグラ
ムにおける第１欄）を除外して、すべての上の４つのパ
ラメーターにおいて劇的な減少が存在した。
【００４２】種々の疾患の患者において正常の被検者か
ら得られた結果を、次の表１に要約する：
ら得られた結果を、次の表１に要約する：
【００４３】
【表１】
【００４４】上の表から理解することができるように、
正常と対照との間の差はすべての試験したパラメーター
において明らかであり、そして観測された変化は低い
（１００ｓｅｃ-1）または高い（１５００ｓｅｃ-1）剪
断速度の適用後に明らかである。
正常と対照との間の差はすべての試験したパラメーター
において明らかであり、そして観測された変化は低い
（１００ｓｅｃ-1）または高い（１５００ｓｅｃ-1）剪
断速度の適用後に明らかである。
【００４５】低いおよび高い両者の剪断速度における経
時的血小板付着を第８図に示す。理解できるように、表
面被覆および粒子大きさの増加の両者により証明される
ように、付着は経時的に進行する。さらに、理解できる
ように、両者の剪断速度において、表面被覆の百分率な
らびにＥＣＭ結合粒子の平均大きさ（平均粒子大きさ）
の時間に依存する増加が存在した。平均凝集物大きさに
おける表面被覆の最大値は、低いおよび高い両者の剪断
速度の条件において２分の血液循環後に得られた。
時的血小板付着を第８図に示す。理解できるように、表
面被覆および粒子大きさの増加の両者により証明される
ように、付着は経時的に進行する。さらに、理解できる
ように、両者の剪断速度において、表面被覆の百分率な
らびにＥＣＭ結合粒子の平均大きさ（平均粒子大きさ）
の時間に依存する増加が存在した。平均凝集物大きさに
おける表面被覆の最大値は、低いおよび高い両者の剪断
速度の条件において２分の血液循環後に得られた。
【００４６】剪断速度（剪断力は１分間加えた）の関数
としてＥＣＭ上の血小板付着速度（表面被覆％および平
均粒子大きさ）を第９図に示す。理解できるように、１
００〜１０００ｓｅｃ-1の剪断速度の間において表面被
覆の百分率または平均凝集物大きさにおける有意の変動
は存在しない。しかしながら、１５００ｓｅｃ-1におい
て、両者のパラメーターの有意な増加を観察することが
できる。
としてＥＣＭ上の血小板付着速度（表面被覆％および平
均粒子大きさ）を第９図に示す。理解できるように、１
００〜１０００ｓｅｃ-1の剪断速度の間において表面被
覆の百分率または平均凝集物大きさにおける有意の変動
は存在しない。しかしながら、１５００ｓｅｃ-1におい
て、両者のパラメーターの有意な増加を観察することが
できる。
【００４７】時間経過および剪断速度依存性の実験に基
づいて、最適な条件を選択することができる：約２分の
循環時間、これは高いおよび低い両者の剪断速度におい
て最大の表面被覆および最大の平均凝集物大きさを達成
するために十分であることが発見された；低い剪断速度
として１００ｓｅｃ-1および高い剪断速度として１５０
０ｓｅｃ-1の選択。
づいて、最適な条件を選択することができる：約２分の
循環時間、これは高いおよび低い両者の剪断速度におい
て最大の表面被覆および最大の平均凝集物大きさを達成
するために十分であることが発見された；低い剪断速度
として１００ｓｅｃ-1および高い剪断速度として１５０
０ｓｅｃ-1の選択。
【００４８】クエン酸塩処理した全血中の正常の血小板
をＥＣＭ上に２分間循環させた。両者の剪断速度におい
て、血小板はこのＥＣＭ上に付着かつ凝集した。しかし
ながら、凝集物の程度は高い剪断速度において有意によ
り高かった。高い剪断速度における全血とＥＣＭとのイ
ンキュベーションは、低い剪断速度下に見いだされるも
のより非常に大きい凝集物を生じた（表９および表Ｉ参
照）。高い剪断速度において形成した大きい凝集物の百
分率は３７．０％±６．５４％であったが、これに対し
て低い剪断速度におけるそれは１２．８３％±３．２５
％であった。高い剪断速度における血小板凝集のより高
い程度は、また、ＥＣＭ結合粒子のより大きい平均大き
さ（高い剪断速度における４２．２６±１１．７８μｍ
2；低い剪断速度における２４．０６±２．３４μｍ2）
ならびに表面被覆のより高い百分率により反映された
（表Ｉ参照）。
をＥＣＭ上に２分間循環させた。両者の剪断速度におい
て、血小板はこのＥＣＭ上に付着かつ凝集した。しかし
ながら、凝集物の程度は高い剪断速度において有意によ
り高かった。高い剪断速度における全血とＥＣＭとのイ
ンキュベーションは、低い剪断速度下に見いだされるも
のより非常に大きい凝集物を生じた（表９および表Ｉ参
照）。高い剪断速度において形成した大きい凝集物の百
分率は３７．０％±６．５４％であったが、これに対し
て低い剪断速度におけるそれは１２．８３％±３．２５
％であった。高い剪断速度における血小板凝集のより高
い程度は、また、ＥＣＭ結合粒子のより大きい平均大き
さ（高い剪断速度における４２．２６±１１．７８μｍ
2；低い剪断速度における２４．０６±２．３４μｍ2）
ならびに表面被覆のより高い百分率により反映された
（表Ｉ参照）。
【００４９】ＩＩＩ型ｖＷＤ患者またはＧＴ患者から採
取したクエン酸塩処理した全血のＥＣＭ上のインキュベ
ーションは、高いおよび低い両者の剪断速度において凝
集なしの制限された血小板の付着を生じた（第３図およ
び第４図、ならびに表Ｉ）。低いおよび高い両者の剪断
速度において、表面被覆、ならびにＥＣＭ結合粒子の平
均大きさは、対応する正常の対照の値に比較して、ｖＷ
ＤおよびＧＴの両者の試料において大きく減少した。ｖ
ＷＤおよびＧＴの両者の試料は、高い剪断速度の条件を
適用したとき、表面被覆の顕著な減少を示した。
取したクエン酸塩処理した全血のＥＣＭ上のインキュベ
ーションは、高いおよび低い両者の剪断速度において凝
集なしの制限された血小板の付着を生じた（第３図およ
び第４図、ならびに表Ｉ）。低いおよび高い両者の剪断
速度において、表面被覆、ならびにＥＣＭ結合粒子の平
均大きさは、対応する正常の対照の値に比較して、ｖＷ
ＤおよびＧＴの両者の試料において大きく減少した。ｖ
ＷＤおよびＧＴの両者の試料は、高い剪断速度の条件を
適用したとき、表面被覆の顕著な減少を示した。
【００５０】低い剪断速度の条件下に、フィブリノゲン
欠乏血液中の血小板は凝集物の形成なしにＥＣＭへの付
着を示した（第５図および表Ｉ参照）。対照的に、高い
剪断速度において、付着および凝集の両者を観察するこ
とができた高い剪断速度の条件下に。無繊維素原血症の
血液から得られたＥＣＭ上の血小板のパラメーターは、
低い剪断速度における対照試料において観察されたもの
に非常に類似した（表Ｉ参照）。これらの発見は、血小
板の凝集はフィブリノゲンの存在下に高い剪断速度の条
件下に起こることができるが、低い剪断速度の条件下に
起こることができないことを示す従来の報告と一致す
る。
欠乏血液中の血小板は凝集物の形成なしにＥＣＭへの付
着を示した（第５図および表Ｉ参照）。対照的に、高い
剪断速度において、付着および凝集の両者を観察するこ
とができた高い剪断速度の条件下に。無繊維素原血症の
血液から得られたＥＣＭ上の血小板のパラメーターは、
低い剪断速度における対照試料において観察されたもの
に非常に類似した（表Ｉ参照）。これらの発見は、血小
板の凝集はフィブリノゲンの存在下に高い剪断速度の条
件下に起こることができるが、低い剪断速度の条件下に
起こることができないことを示す従来の報告と一致す
る。
【００５１】超活性止血（および前血栓症の状態）を同
定する本発明の方法の可能性は第１０図に示されてい
る。この図面は、正常の被検者（中央のパネル）、アス
ピリン治療下の患者（下のパネル）および冠状動脈の血
管形成前の患者（上のパネル）のＩＡＳ評価を示す。理
解できるように、異なる患者の間のすべてのパラメータ
ーにおける明瞭な差が存在し、冠状心臓疾患の患者にお
けるより高い付着および凝集速度およびアスピリン処置
された患者における付着の減少を示唆する。
定する本発明の方法の可能性は第１０図に示されてい
る。この図面は、正常の被検者（中央のパネル）、アス
ピリン治療下の患者（下のパネル）および冠状動脈の血
管形成前の患者（上のパネル）のＩＡＳ評価を示す。理
解できるように、異なる患者の間のすべてのパラメータ
ーにおける明瞭な差が存在し、冠状心臓疾患の患者にお
けるより高い付着および凝集速度およびアスピリン処置
された患者における付着の減少を示唆する。
【００５２】以下に本発明の主な特徴および態様を示
す。
す。
【００５３】１．（ａ）全血またはその血小板含有画分
である試料を獲得し、そして必要に応じてそれを血液凝
固を阻止するために十分な量の抗凝固剤と混合し、 （ｂ）（ａ）において得られた試料を、平の底を有し、
内表面はそれへの血小板の付着および凝集を誘発するこ
とができる基質で被覆されている容器の中に導入し、 （ｃ）前記調製物を容器の内側で回転することにより剪
断力を前記表面において発生させ、そして （ｄ）付着した血小板のパラメーターであって、付着し
た血小板の量、凝集物の大きさ、凝集物の形態、凝集物
で被覆された合計の面積および付着した血小板または凝
集物および／または前記物質の分布から成る群より選択
されるパラメーターを測定する、ことからなる一次止血
における血小板の機能を測定する方法。
である試料を獲得し、そして必要に応じてそれを血液凝
固を阻止するために十分な量の抗凝固剤と混合し、 （ｂ）（ａ）において得られた試料を、平の底を有し、
内表面はそれへの血小板の付着および凝集を誘発するこ
とができる基質で被覆されている容器の中に導入し、 （ｃ）前記調製物を容器の内側で回転することにより剪
断力を前記表面において発生させ、そして （ｄ）付着した血小板のパラメーターであって、付着し
た血小板の量、凝集物の大きさ、凝集物の形態、凝集物
で被覆された合計の面積および付着した血小板または凝
集物および／または前記物質の分布から成る群より選択
されるパラメーターを測定する、ことからなる一次止血
における血小板の機能を測定する方法。
【００５４】２．前記基質がＥＣＭまたはそれへの血小
板の付着および凝集物を誘発することができるその活性
成分である、上記１の方法。
板の付着および凝集物を誘発することができるその活性
成分である、上記１の方法。
【００５５】３．細胞外マトリックスの前記活性成分
が、基底膜のマトリックス、種々のタイプの原線維性お
よび非原線維性のコラーゲン、フォン・ウィブランド因
子およびフィブロネクチンから選択される、上記２の方
法。
が、基底膜のマトリックス、種々のタイプの原線維性お
よび非原線維性のコラーゲン、フォン・ウィブランド因
子およびフィブロネクチンから選択される、上記２の方
法。
【００５６】４．回転要素が円筒形である、上記１〜３
のいずれか１つの方法。
のいずれか１つの方法。
【００５７】５．回転要素が倒立円錐の形状の底部分を
有する、上記１〜３のいずれか１つの方法。
有する、上記１〜３のいずれか１つの方法。
【００５８】６．上記１〜５のいずれか１つの方法を実
施するための装置。
施するための装置。
【００５９】７．液体を受容することができる平の底の
容器内に配置された回転要素からなり、前記容器の底の
内面はそれへの血小板の付着および凝集物を誘発するこ
とができる基質でライニングされている、上記６の装
置。
容器内に配置された回転要素からなり、前記容器の底の
内面はそれへの血小板の付着および凝集物を誘発するこ
とができる基質でライニングされている、上記６の装
置。
【００６０】８．回転要素が本質的に円錐形を有する、
上記７の装置。
上記７の装置。
【００６１】９．円錐の回転運動の間に、容器の底内面
を通して発生した剪断力が本質的に等しいように、円錐
の角度が調節されている、円錐−板型装置である、上記
８の装置。
を通して発生した剪断力が本質的に等しいように、円錐
の角度が調節されている、円錐−板型装置である、上記
８の装置。
【００６２】１０．基質がＥＣＭまたはそれに対する血
小板の付着および血小板の凝集を誘発しうるＥＣＭの活
性成分である上記６〜９のいずれかに記載の装置。
小板の付着および血小板の凝集を誘発しうるＥＣＭの活
性成分である上記６〜９のいずれかに記載の装置。
【００６３】１１．細胞外マトリックスの前記活性成分
が、基底膜のマトリックス、種々のタイプの原線維性お
よび非原線維性のコラーゲン、フォン・ウィブランド因
子およびフィブロネクチンから選択される、上記１０の
装置。
が、基底膜のマトリックス、種々のタイプの原線維性お
よび非原線維性のコラーゲン、フォン・ウィブランド因
子およびフィブロネクチンから選択される、上記１０の
装置。
【図１】本発明の装置の概略的表示である。
【図２】対照血液中のＥＣＭに付着した凝集物の形成
（生物の形態）を描写する拡大図に代わる走査型電子顕
微鏡（ＳＥＭ）写真である（倍率：×７４５）。
（生物の形態）を描写する拡大図に代わる走査型電子顕
微鏡（ＳＥＭ）写真である（倍率：×７４５）。
【図３】グランツマン血小板無力症に悩む患者の血液中
のＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写
する拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍率：×７４
５）。
のＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写
する拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍率：×７４
５）。
【図４】フォン・ウィブランド病に悩む患者の血液中の
ＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写す
る拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍率：×１００
０）。
ＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写す
る拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍率：×１００
０）。
【図５】無繊維素原血症に悩む患者の血液中のＥＣＭに
付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写する拡大図
に代わるＳＥＭ写真である（倍率：１−×１００；ｈ−
×１７００）。
付着した凝集物の形成（生物の形態）を描写する拡大図
に代わるＳＥＭ写真である（倍率：１−×１００；ｈ−
×１７００）。
【図６】フォン・ウィブランドのブロッカーおよびイン
テグリンレセプターのブロッカーを供給した試験した血
液試料中のＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形
態）を描写する拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍
率：ｖＷＦｆ−×７４５；ＲＧＤ−×１５００）。
テグリンレセプターのブロッカーを供給した試験した血
液試料中のＥＣＭに付着した凝集物の形成（生物の形
態）を描写する拡大図に代わるＳＥＭ写真である（倍
率：ｖＷＦｆ−×７４５；ＲＧＤ−×１５００）。
【図７】正常の被検者（Ａ）、フォン・ウィブランド病
に悩む被検者（Ｂ）およびグランツマン血小板無力症に
悩む被検者（Ｃ）からの血液のＥＣＭに付着した血小板
凝集物の大きさ、それらの画像解析により得られた代表
的な結果の粒子の大きさのヒストグラムを示す。
に悩む被検者（Ｂ）およびグランツマン血小板無力症に
悩む被検者（Ｃ）からの血液のＥＣＭに付着した血小板
凝集物の大きさ、それらの画像解析により得られた代表
的な結果の粒子の大きさのヒストグラムを示す。
【図８】低い（１００ｓｅｃ−１）または高い（１５０
０ｓｅｃ−１）の剪断条件下のインキュベーション時間
の関数としてのＥＣＭ表面上に付着した血小板粒子（単
一のまたは凝集した）の表面の被覆および平均凝集物大
きさを示す。
０ｓｅｃ−１）の剪断条件下のインキュベーション時間
の関数としてのＥＣＭ表面上に付着した血小板粒子（単
一のまたは凝集した）の表面の被覆および平均凝集物大
きさを示す。
【図９】剪断速度の関数としてのＥＣＭ表面上に付着し
た血小板粒子（単一のまたは凝集した）の表面の被覆お
よび平均凝集物の大きさを示す。
た血小板粒子（単一のまたは凝集した）の表面の被覆お
よび平均凝集物の大きさを示す。
【図１０】冠状動脈の血管形成前の患者からの血液
（Ａ）、正常の被検者からの血液（Ｂ）およびスペリン
（ａｓｐｅｒｉｎ）治療下の患者からの血液（Ｃ）から
ＥＣＭ表面上に付着した血小板粒子の表面の被覆および
平均凝集物の大きさを示す。
（Ａ）、正常の被検者からの血液（Ｂ）およびスペリン
（ａｓｐｅｒｉｎ）治療下の患者からの血液（Ｃ）から
ＥＣＭ表面上に付着した血小板粒子の表面の被覆および
平均凝集物の大きさを示す。
フロントページの続き
(72)発明者 ダビド・バロン
イスラエル76965クフアルビルエイ（番
地なし)
(72)発明者 ナフタリ・サビオン
イスラエル・ギバトシユミユエル
54052・オラニムストリート９／16
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 33/49
G01N 33/86
Claims (12)
- 【請求項１】 （ａ）全血またはその血小板含有画分で
ある試料を獲得し、 （ｂ）（ａ）において得られた試料を、平らな底を有
し、内表面はそれへの血小板の付着および凝集を誘発す
ることができる基質で被覆されている容器の中に導入
し、 （ｃ）前記試料を容器の内側で回転することにより剪断
力を前記表面において発生させ、こうして前記内表面へ
の血小板の付着および血小板の凝集を起こし、そして （ｄ）付着および凝集した血小板のパラメーターであっ
て、付着した血小板の量、凝集物の大きさ、凝集物の形
態、凝集物で被覆された総面積および付着した血小板ま
たは凝集物の分布から成る群より選択されるパラメータ
ーを測定する、ことからなる一次止血における血小板の
機能の測定方法。 - 【請求項２】 前記基質が細胞外マトリックスまたはそ
れへの血小板の付着および血小板の凝集を誘発すること
ができるその活性成分である、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 前記基質が細胞外マトリックスの前記活
性成分であり、前記活性成分が基底膜マトリックス、種
々のタイプの原線維性および非原線維性のコラーゲン、
フォンビルブラント因子およびフィブロネクチンから選
択される、請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 前記容器が、その中に配置された円筒形
回転要素を有するものである請求項１〜３のいずれかに
記載の方法。 - 【請求項５】 前記容器が、その中に配置された回転要
素であって、倒立円錐の形状の底部分を有するものであ
る請求項１〜３のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 試料が容器の中に導入する前に血液凝固
を阻害するのに十分な量の抗凝固剤と混合される請求項
１〜５のいずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 液体を受容することのできる平らな底を
有する容器および前記容器内に配置された回転要素を備
えており、かつ前記容器の底の内表面がそれへの血小板
の付着および血小板の凝集を誘発することができる基質
でライニングされていることを特徴とする一次止血にお
ける血小板の機能を測定するための装置。 - 【請求項８】 回転要素が本質的に円錐形を有する請求
項７記載の装置。 - 【請求項９】 円錐回転要素の角度が、前記要素の回転
運動の間に、容器の底内面を通して発生した剪断力が本
質的に等しいように調節されている請求項８記載の装
置。 - 【請求項１０】 前記基質が細胞外マトリックスまたは
それへの血小板の付着および血小板の凝集を誘発するこ
とができるその活性成分である請求項７〜９のいずれか
に記載の装置。 - 【請求項１１】 前記細胞外マトリックスの活性成分が
基底膜マトリックス、種々のタイプの原線維性および非
原線維性のコラーゲン、フォンビルブラント因子および
フィブロネクチンから選択される請求項１０記載の装
置。 - 【請求項１２】 請求項１記載の方法を実施するための
請求項７〜１１のいずれかに記載の装置。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL106330A IL106330A (en) | 1993-07-14 | 1993-07-14 | Method and instrument for determining the activity of their plaques in the initial coagulation system |
| IL106330 | 1993-07-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07146291A JPH07146291A (ja) | 1995-06-06 |
| JP3396705B2 true JP3396705B2 (ja) | 2003-04-14 |
Family
ID=11065042
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18390694A Expired - Fee Related JP3396705B2 (ja) | 1993-07-14 | 1994-07-13 | 一次止血における血小板の機能を測定する方法および装置 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5523238A (ja) |
| EP (1) | EP0635720B1 (ja) |
| JP (1) | JP3396705B2 (ja) |
| KR (1) | KR100346993B1 (ja) |
| AT (1) | ATE202631T1 (ja) |
| AU (1) | AU682692B2 (ja) |
| CA (1) | CA2127899C (ja) |
| DE (1) | DE69427560T2 (ja) |
| DK (1) | DK0635720T3 (ja) |
| ES (1) | ES2160618T3 (ja) |
| IL (1) | IL106330A (ja) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040247611A1 (en) * | 1994-05-23 | 2004-12-09 | Montana State University | Identification of pathogen-ligand interactions |
| US5763199A (en) * | 1994-09-29 | 1998-06-09 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Platelet blockade assay |
| US5783446A (en) * | 1996-03-04 | 1998-07-21 | Biocircuits Corporation | Particle assay using fluid velocity gradients |
| US6043871A (en) * | 1997-03-03 | 2000-03-28 | Brigham Young University | System and method for measuring blood platelet function |
| US20040219682A1 (en) * | 1997-09-18 | 2004-11-04 | Ridgway Helen Jane | Single-tube method and system for platelet function analysis |
| US20040219681A1 (en) * | 1997-09-18 | 2004-11-04 | Ridgway Helen Jane | Two-tube method and system for platelet function analysis using platelet count |
| US6410337B1 (en) * | 1997-09-18 | 2002-06-25 | Helena Laboratories Corporation | Method of platlet function analysis using platelet count |
| US6251615B1 (en) | 1998-02-20 | 2001-06-26 | Cell Analytics, Inc. | Cell analysis methods |
| AUPP660798A0 (en) * | 1998-10-20 | 1998-11-12 | Monash University | Method for measuring cellular adhesion |
| US6225126B1 (en) * | 1999-02-22 | 2001-05-01 | Haemoscope Corporation | Method and apparatus for measuring hemostasis |
| US8008086B2 (en) * | 1999-02-22 | 2011-08-30 | Cora Healthcare, Inc. | Protocol for monitoring direct thrombin inhibition |
| US7732213B2 (en) * | 1999-02-22 | 2010-06-08 | Coramed Healthcare, Inc. | Method of evaluating patient hemostasis |
| US7179652B2 (en) * | 1999-02-22 | 2007-02-20 | Haemoscope Corporation | Protocol for monitoring platelet inhibition |
| DE19939252A1 (de) * | 1999-08-16 | 2001-04-19 | Volker Goltz | Verfahren und Vorrichtung zur Untersuchung von Blut |
| DE10003093C2 (de) * | 2000-01-25 | 2002-05-16 | Goltz Volker Freiherr Von | Vorrichtung zur Untersuchung von Eigenschaften der globalen Hämostasefunktion in Vollblut oder plättchenreichem Plasma |
| US6989272B1 (en) | 2001-03-06 | 2006-01-24 | David Varon | Apparatus and method for processing and testing a biological specimen |
| JP2004536694A (ja) * | 2001-04-26 | 2004-12-09 | フリーイェ・ユニヴェルシテイト・ブリュッセル | 標的−受容体との結合を促進および強化する方法、およびそのための装置 |
| US20040131500A1 (en) * | 2002-01-18 | 2004-07-08 | Chow Herbert S. | Device and method for evaluating platelets |
| AU2003208193A1 (en) * | 2002-02-14 | 2003-09-04 | Maurice Frojmovic | Device and method for determining parameters |
| EP1546710A4 (en) | 2002-09-10 | 2011-05-25 | Placor Inc | METHOD AND DEVICE FOR MONITORING THE THROMBOCYTE FUNCTION |
| JP3746756B2 (ja) * | 2002-10-22 | 2006-02-15 | 株式会社日立製作所 | 溶液攪拌装置、溶液攪拌方法 |
| US7393690B2 (en) * | 2003-05-06 | 2008-07-01 | Thrombodyne, Inc. | Systems and methods for measuring fluid properties |
| US7262059B2 (en) * | 2003-05-06 | 2007-08-28 | Thrombodyne, Inc. | Systems and methods for measuring fluid properties |
| WO2005007868A2 (en) | 2003-07-08 | 2005-01-27 | Accumetrics, Inc. | Controlled platelet activation to monitor therapy of adp antagonists |
| US20070243632A1 (en) * | 2003-07-08 | 2007-10-18 | Coller Barry S | Methods for measuring platelet reactivity of patients that have received drug eluting stents |
| US7524670B2 (en) * | 2003-08-05 | 2009-04-28 | Haemoscope Corporation | Protocol and apparatus for determining heparin-induced thrombocytopenia |
| US20050032200A1 (en) * | 2003-08-08 | 2005-02-10 | Ming-Tsung Sun | Shear stress inducing apparatus and automatic shear stress inducing system |
| DE102004006316A1 (de) | 2004-02-09 | 2005-08-25 | Michael Prof. Dr. Kratzer | Einrichtung zur Messung der Aggregation und/oder der Koagulation und/oder der Viskosität des Blutes |
| US7439069B2 (en) * | 2004-02-27 | 2008-10-21 | Nippoldt Douglas D | Blood coagulation test cartridge, system, and method |
| US7422905B2 (en) * | 2004-02-27 | 2008-09-09 | Medtronic, Inc. | Blood coagulation test cartridge, system, and method |
| US7399637B2 (en) * | 2004-04-19 | 2008-07-15 | Medtronic, Inc. | Blood coagulation test cartridge, system, and method |
| RU2378649C2 (ru) | 2004-04-21 | 2010-01-10 | Фдг-Фон Дер Гольтц Гмбх | Устройство для исследования параметров свертывания и/или агрегации крови |
| US7745223B2 (en) | 2004-08-12 | 2010-06-29 | C A Casyso Ag | Device with novel and improved surface properties |
| US7544514B2 (en) * | 2004-12-27 | 2009-06-09 | David Varon | Method and system for determining platelet-mediated clot formation |
| EP1875232A2 (en) * | 2005-04-25 | 2008-01-09 | PlaCor, Inc. | Methods and devices for monitoring platelet function |
| US20100099130A1 (en) * | 2006-10-25 | 2010-04-22 | Placor Inc. | Methods and devices for monitoring platelet function |
| JP4926854B2 (ja) * | 2007-06-27 | 2012-05-09 | シスメックス株式会社 | 血小板凝集測定方法および血小板凝集測定装置 |
| US8289514B2 (en) * | 2008-03-05 | 2012-10-16 | Aggredyne, Inc. | Systems for measuring properties of a physiological fluid suspension |
| WO2010058412A1 (en) * | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Dilip Shrinivas Velaskar | A new rapid thrombochek test kit based on whole blood screening test to detect platelet hyperaggregation at a temparature of 37°c in the clinical laboratory |
| US9546981B2 (en) * | 2012-08-22 | 2017-01-17 | Neotek Biosciences Co. Ltd. | Device and method for performing blood thromboelastographic assays by magnetic sensing |
| US10823743B1 (en) | 2013-10-28 | 2020-11-03 | Ifirst Medical Technologies, Inc. | Methods of measuring coagulation of a biological sample |
| CN103638856B (zh) * | 2013-12-04 | 2015-11-11 | 西北大学 | 磁子悬浮式磁力搅拌器 |
| CN106438668A (zh) * | 2016-08-30 | 2017-02-22 | 诺泰科生物科技（苏州）有限公司 | 一种连接组件、支架、血栓弹力仪及使用方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5967936A (ja) * | 1982-10-08 | 1984-04-17 | テルモ株式会社 | 採血管 |
| DE3522098A1 (de) * | 1985-06-20 | 1987-01-02 | Jung Friedrich | Vorrichtung zur bestimmung einer der erythrozytenaggregation entsprechenden me?groesse |
| US4880788A (en) * | 1987-10-30 | 1989-11-14 | Baylor College Of Medicine | Method for preventing and treating thrombosis |
| EP0337300B1 (en) * | 1988-04-08 | 1994-11-09 | Toray Industries, Inc. | Apparatus and method for determining functions of cells |
-
1993
- 1993-07-14 IL IL106330A patent/IL106330A/en not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-07-11 US US08/273,549 patent/US5523238A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-12 AU AU67384/94A patent/AU682692B2/en not_active Ceased
- 1994-07-13 AT AT94401634T patent/ATE202631T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-07-13 JP JP18390694A patent/JP3396705B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-07-13 CA CA002127899A patent/CA2127899C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-07-13 ES ES94401634T patent/ES2160618T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-13 KR KR1019940016810A patent/KR100346993B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-07-13 DE DE69427560T patent/DE69427560T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-13 EP EP94401634A patent/EP0635720B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-07-13 DK DK94401634T patent/DK0635720T3/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2127899C (en) | 2003-12-16 |
| IL106330A (en) | 1998-01-04 |
| US5523238A (en) | 1996-06-04 |
| EP0635720A3 (en) | 1996-06-12 |
| ES2160618T3 (es) | 2001-11-16 |
| ATE202631T1 (de) | 2001-07-15 |
| IL106330A0 (en) | 1993-11-15 |
| EP0635720B1 (en) | 2001-06-27 |
| DK0635720T3 (da) | 2001-08-27 |
| AU6738494A (en) | 1995-01-27 |
| CA2127899A1 (en) | 1995-01-15 |
| KR960014934A (ko) | 1996-05-22 |
| EP0635720A2 (en) | 1995-01-25 |
| DE69427560D1 (de) | 2001-08-02 |
| DE69427560T2 (de) | 2002-04-18 |
| KR100346993B1 (ko) | 2002-11-29 |
| JPH07146291A (ja) | 1995-06-06 |
| AU682692B2 (en) | 1997-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3396705B2 (ja) | 一次止血における血小板の機能を測定する方法および装置 | |
| US10830683B2 (en) | Method for measuring coagulation of blood samples using viscoelastic tests (VET) | |
| Jandak et al. | Alpha-tocopherol, an effective inhibitor of platelet adhesion | |
| JP3806884B2 (ja) | 血小板の機能性評価のための試験用カートリッジ | |
| US5792660A (en) | Comparative determinants of viscosity in body fluids obtained with probes providing increased sensitivity | |
| EP1581107A2 (en) | System and method for in vitro bleeding time testing | |
| Gear | Preaggregation reactions of platelets | |
| JPH11511856A (ja) | 血液検査の実施方法 | |
| Bowers et al. | A micromechanical technique for monitoring cell—substrate adhesiveness: measurements of the strength of red blood cell adhesion to glass and polymer test surfaces | |
| Mason et al. | Reactions of Blood with Nonbiologic Surfaces: Ultrastructural and Clotting Studies with Normal and Coagulation Factor Deficient Bloods | |
| Mason et al. | A simple test for quantitation of platelet adhesion to glass | |
| Chang et al. | Physical and hydrodynamic factors affecting erythrocyte adhesion to polymer surfaces | |
| CN207528590U (zh) | 检测凝血功能的样品杯及系统 | |
| Bruck | Problems and artefacts in the evaluation of polymeric materials for medical uses | |
| CN109884327A (zh) | 功能性纤维蛋白原激活剂检测及其应用 | |
| Reininger et al. | Mechanisms underlying increased platelet reactivity in patients with peripheral arterial disease: Preliminary results | |
| Nageswari et al. | Hemorheological parameters for biocompatibility evaluation | |
| Jung et al. | Haemocompatibility of Endovascular Coronary Stents: Wiktor GX©. Hämokompatibilität von Koronarstents: Wiktor GX© | |
| JP3261133B2 (ja) | 光学的血液止血分析装置および方法 | |
| Riquelme et al. | Laser diffractometry technique for determination of stationary and dynamics viscoelastic parameters of erythrocyte in vascular pathologies | |
| Cavic et al. | Blood platelet adhesion to protein studied by on-line acoustic wave sensor | |
| JP2856653B2 (ja) | 薬剤の抗血栓効果の判定方法 | |
| Bowie et al. | Platelet retention and other adhesion-aggregation phenomena | |
| Järemo | Computerised method for monitoring stored platelet packs | |
| RU2234857C1 (ru) | Способ количественной оценки эффективности сдвиговой регуляции функции тромбоцитов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R154 | Certificate of patent or utility model (reissue) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R154 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080214 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090214 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090214 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100214 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110214 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120214 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |