JP3337704B2 - ペプチド，その製造法および用途 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、高血圧治療剤、心・脳
循環疾患治療剤、腎疾患治療剤、ぜんそく治療剤あるい
はその予防剤等、医薬として有用なエンドセリン受容体
拮抗作用を有する新規なペプチドおよびその用途に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】エンドセリン（ＥＴ）は、柳沢らにより
ブタ大動脈内皮細胞の培養上清から単離され構造決定さ
れた２１個のアミノ酸から成る血管収縮性ペプチドであ
る〔柳沢ら、ネイチャー（Nature)，332巻、411〜412
頁）(1988)〕。その後、エンドセリンをコードしている
遺伝子の研究から、エンドセリンに構造の類似したペプ
チドが存在することが明らかにされ、それぞれエンドセ
リン−１（ＥＴ−１）、エンドセリン−２（ＥＴ−
２）、エンドセリン−３（ＥＴ−３）と命名されてい
る。それらのエンドセリン類の構造は以下の通りである
（ＥＴ−１，２，３における構成アミノ酸はすべてＬ体
である）。

【０００３】

【化３】

【０００４】 〔井上ら、プロシージング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー(Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA)，86巻、2863〜2867頁(1989)〕。上
記エンドセリン類は生体内に存在し、血管収縮作用を有
していることから循環系調節に関与する内因性因子であ
ると予想され、高血圧症、心・脳循環疾患（例えば心筋
梗塞）、腎疾患（例えば急性腎不全）との関係が推定さ
れている。また気管支平滑筋収縮作用も有しているの
で、ぜんそくとの関係も推定されている。

【０００５】

【発明が解決すべき課題】上記のエンドセリン類の受容
体に対する優れた拮抗剤が得られれば該エンドセリン類
の作用機作の解明に役立つのみならず、上記の疾患の有
効な治療薬になる可能性が大きいので、そのような優れ
た効果を有する新規ペプチドを提供することが本発明の
課題である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、エンドセ
リンによる強力な血管平滑筋収縮活性を抑制する作用を
指標として更に鋭意研究を進め、エンドセリンの19位に
おける置換を中心にアミノ酸置換を行なった新規なペプ
チドがエンドセリン拮抗剤として顕著な効果を奏するこ
とを見出し、本発明を完成したものである。すなわち本
発明は、式（Ｉ）（配列番号：１）

【０００７】

【化４】

【０００８】〔式中、Ｍはメルカプトアシル基を示し、
Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそ
れぞれアミノ酸残基を示しＹのアミノ酸側鎖は置換され
た炭素数１ないし１５の飽和脂肪族炭化水素基または
（１Ｓ）−１−メチルプロピル基以外の置換されていな
い炭素数４ないし１５の飽和脂肪族炭化水素基である〕
で表わされるペプチドまたはその薬理学的に許容される
塩、および式（II）（配列番号：２） M-P-Cys-Q-R-S-T-Asp-U-Glu-Cys-Val-Tyr-V-Cys-His-W-X-Y-Ile-Z-OH (II) 〔式中、Ｍはメルカプトアシル基を示し、Ｐ、Ｑ、Ｒ、
Ｓ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはそれぞれアミノ
酸残基を示しＹのアミノ酸側鎖は置換された炭素数１な
いし１５の飽和脂肪族炭化水素基または（１Ｓ）−１−
メチルプロピル基以外の置換されていない炭素数４ない
し１５の飽和脂肪族炭化水素基である〕で表わされるペ
プチドまたはその塩を酸化反応に付すことを特徴とする
式（Ｉ）（配列番号：１）

【０００９】

【化５】

【００１０】〔式中の記号は前記と同意義を示す〕で表
わされるペプチドまたはその塩の製造法ならびに該ペプ
チド（Ｉ）またはその薬理学的に許容される塩の用途に
関するものである。

【００１１】本発明のペプチド（Ｉ）において、Ｙのア
ミノ酸側鎖としての炭素数１ないし１５の飽和脂肪族炭
化水素基は、直鎖状または分枝状のアルキル、シクロア
ルキルもしくはシクロアルキルアルキル基である。アル
キル基としてはＣ₁ないしＣ_{1 0}のアルキル基が好まし
く、例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプ
ロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ
−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチ
ル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−
ノニル、ｎ−デシルなどが挙げられる。シクロアルキル
基としては、Ｃ₃ないしＣ₁₀のシクロアルキル基が好ま
しく、その例としてはシクロプロピル、シクロブチル、
シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シ
クロオクチルおよびノルボルニルが挙げられる。シクロ
アルキル−アルキル基としてはＣ₃−Ｃ_{1 0}シクロアルキ
ル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキルが好ましく、その例としてはシク
ロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチ
ルメチル、シクロヘキシルメチル、シクロヘプチルメチ
ル、１−シクロペンチルエチル、１−シクロヘキシルエ
チル、２−シクロペンチルエチル、２−シクロヘキシル
エチル、３−シクロヘキシルプロピル、４−シクロヘキ
シルブチルおよび５−シクロヘキシルプロピルが挙げら
れる。

【００１２】上記の飽和炭化水素基は置換されており、
この置換基としては含イオウ基（チオン、メルカプト、
メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロ
ピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｔ−ブチ
ルチオ、フェニルチオ、シクロペンチルチオ、シクロヘ
キシルチオ、チエニルなど）、含酸素基（ケトン、ヒド
ロキシ、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプ
ロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｔ−ブトキ
シ、ｎ−ペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、フェ
ノキシ、ベンジルオキシ、フリルなど）、含窒素基（ア
ミノ、Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−エチルアミノ、Ｎ−ｎ−
プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピルアミノ、Ｎ−ｎ−ブ
チルアミノ、Ｎ−イソブチルアミノ、Ｎ−ｔ−ブチルア
ミノ、Ｎ−ｎ−ペンチルアミノ、Ｎ−ｎ−ヘキシルアミ
ノ、Ｎ−シクロヘキシルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミ
ノ、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピ
ルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−イソ−プロピルアミノ、Ｎ，Ｎ
−ジ−ｎ−ブチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−イソ−ブチルア
ミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−ｔ−ブチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ
−ペンチルアミノ、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ヘキシルアミノ、
Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミノ、ニトロ、グアニジ
ノ、ピロリジノ、ピペリジノ、インドリル、イミダゾリ
ルなど）、芳香族炭化水素基（例えばフェニル、１−ナ
フチル、２−ナフチル）、ハロゲン（クロロ、ブロモ、
フルオロなど）などが挙げられる。

【００１３】Ｙ’としての（１Ｓ）−１−メチルプロピ
ル基以外の置換されていない炭素数４ないし１５の飽和
脂肪族炭化水素基としては、アルキル、シクロアルキル
またはシクロアルキル−アルキル基が挙げられ、これら
のアルキルは直鎖状あるいは分枝状であることができ
る。アルキル基としてはＣ₄−Ｃ₁₀のアルキル基が好ま
しく、これらの例としては、ｎ−ブチル、イソブチル、
ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチ
ル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−
ノニル、ｎ−デシルなどが挙げられる。シクロアルキル
基としては炭素数４〜１０のシクロアルキル基が好まし
く、例えばシクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキ
シル、シクロヘプチル、シクロオクチルおよびノルボル
ニルが挙げられる。シクロアルキル−アルキル基として
はＣ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル−Ｃ₁−Ｃ₆アルキルが好ま
しく、その例としてはシクロプロピルメチル、シクロブ
チルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメ
チル、シクロヘプチルメチル、１−シクロペンチルエチ
ル、１−シクロヘキシルエチル、２−シクロペンチルエ
チル、２−シクロヘキシルエチル、２，２−ジシクロペ
ンチルエチル、２，２−ジシクロヘキシルエチル、３−
シクロヘキシルプロピル、４−シクロヘキシルブチルお
よび５−シクロヘキシルプロピルが挙げられる。Ｙのア
ミノ酸の側鎖としては、β位の炭素原子において分岐し
た炭化水素基であるものがより好ましく、例えばイソブ
チル、ネオペンチル、シクロプロピルメチル、シクロブ
チルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメ
チル、シクロヘプチルメチル、２−シクロヘキシルプロ
ピル、２，２−ジシクロヘキシルエチル、２−メルカプ
トプロピル、２−チエニルメチル、２−ヒドロキシプロ
ピル、２−フリルメチル、３−インドリルメチル、４−
イミダゾイルメチルおよびベンジルのようなものが挙げ
られる。

【００１４】本発明明細書において、アミノ酸およびペ
プチドなどを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニールアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン Ｔｙｒ（Ｅｔ） ：Ｏ−エチルチロシン Ｎａｌ（１） ：１−ナフチルアラニン Ｎａｌ（２） ：２−ナフチルアラニン Ｃｈａ ：シクロヘキシルアラニン Ｔｈｉ ：β−２−チエニルアラニン Ｐｈｅ（４Ｆ） ：４−フルオロフェニルアラニン Ｐｈｇ ：フェニルグリシン Ｃｙｔ ：シスチン Ａｂｕ ：２−アミノ酪酸 Ｎｖａ ：ノルバリン Ｎｌｅ ：ノルロイシン ｔＬｅｕ ：ターシャリーロイシン γＬｅｕ ：γ−メチルロイシン Ｍｐｒ ：３−メルカプトプロピオン酸 また本文中で常用される保護基および試薬を下記の略号
で表記する。 Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル ＢｒＺ ：２−ブロムベンジルオキシカルボニル ＣｌＺ ：２−クロルベンジルオキシカルボニル Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルホニル Ｄｎｐ ：２，４−ジニトロフェニル ＯｃＨｅｘ：シクロヘキシルエステル Ｆｏｒ ：ホルミル ＭｅＢｚｌ：４−メチルベンジル Ａｃｍ ：アセトアミドメチル ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 ＨＦ ：無水フッ化水素 ＨＯＢｔ ：１−ハイドロキシベンズトリアゾール ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド 本発明において、Ｍで表わされる置換されていてもよい
メルカプトアシル基は、メルカプト基を有するカルボン
酸由来のアシル基であり、該カルボン酸としては脂肪
族、脂環族および芳香族のものが挙げられる。脂肪族の
メルカプトアシル基としてはメルカプトＣ₂−Ｃ₁₀アル
カノイル基が好ましく、たとえば３−メルカプトプロピ
オニル、４−メルカプトブチリルなどが挙げられる。脂
環族のメルカプトアシル基としてはメルカプトＣ₃−Ｃ₈
シクロアルキルカルボニルが好ましく、たとえば３−メ
ルカプトシクロペンチルカルボニルなどが挙げられる。
芳香族のメルカプトアシル基としてはたとえばメルカプ
トＣ₆−Ｃ₁₄アリールカルボニル基が好ましく、たとえ
ば４−メルカプトベンゾイル、４−メルカプトフェニル
アセチル、３−メルカプト−３−フェニルプロピオニル
などが挙げられる。中でも上記の脂肪族、脂環族のもの
が好ましい。該メルカプトアシル基は置換されていても
よい。メルカプトアシル基上の置換基としてはアミノ
基、水酸基等が挙げられ、アシル基のα位がアミノ基で
置換されたメルカプトアシル基がより好ましい。したが
ってＣｙｓ、ホモシステイン、３−メルカプト−Ｄ−バ
リン（ペニシラミン）等が好ましい例として挙げられ
る。置換されていないメルカプトアシル基としては３−
メルカプトプロピオニル基が、置換されたメルカプトア
シル基としてはＣｙｓが、それぞれ最も好ましい例であ
る。

【００１５】本発明において、Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，
Ｕ，Ｖ，Ｗ，Ｘ，Ｙ，Ｚで表わされるアミノ酸残基は、
天然のアミノ酸の残基であっても、また非天然のアミノ
酸の残基であってもよく、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体のいずれ
でもよい。従って、Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｕ，Ｖ，Ｗ，
Ｘ，Ｙ，Ｚはそれぞれ

【００１６】

【化６】

【００１７】と書き表わすこともでき、式（Ｉ）（配列
番号：１）の化合物は（Ｉ’）（配列番号：１）

【００１８】

【化７】

【００１９】と表わすことができる。式（Ｉ’）におい
てＰ’，Ｑ’，Ｒ’，Ｓ’，Ｔ’，Ｕ’，Ｖ’，Ｗ’、
Ｘ’、Ｚ’はそれぞれ水素原子または置換されていても
よい炭素数１ないし１５の炭化水素基であり、Ｙ’は前
記したＹのアミノ酸側鎖に相当し、置換された炭素数１
ないし１５の飽和脂肪族炭化水素基または（１Ｓ）−１
−メチルプロピル基以外の置換されていない炭素数４な
いし１５の飽和脂肪族炭化水素基である。炭素数１ない
し１５の炭化水素基としては、脂肪族炭化水素基、芳香
族炭化水素基あるいは脂肪芳香族炭化水素基が挙げられ
る。

【００２０】上記のＰ’〜Ｘ’およびＺ’における脂肪
族炭化水素基としては、飽和あるいは不飽和の直鎖状、
分枝状または環状いずれの炭化水素基でもよく、例とし
て、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ
−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、
ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、シクロペ
ンチル、ｎ−ヘキシル、シクロヘキシル、ｎ−ヘプチ
ル、シクロヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−
デシル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチル
などが挙げられる。置換された脂肪族炭化水素基として
は、メチルチオメチル、エチルチオメチル、ｎ−プロピ
ルチオメチル、イソプロピルチオメチル、ｎ−ブチルチ
オメチル、ｔ−ブチルチオメチル、２−メチルチオエチ
ル、２−エチルチオエチル、２−ｔ−ブチルチオエチ
ル、メルカプトメチル、１−メルカプトエチル、２−メ
ルカプトエチル、フェニルチオメチル、１−フェニルチ
オエチル、２−フェニルチオエチル、ベンジルチオメチ
ル、４−メトキシフェニルチオメチル、４−メトキシベ
ンジルチオメチル、４−メチルベンジルチオメチル、４
−ニトロベンジルチオメチル、４−ピリジルベンジルチ
オメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、
２−ヒドロキシエチル、メトキシメチル、エトキシメチ
ル、ｎ−プロポキシメチル、イソプロポキシメチル、ｎ
−ブトキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、ｎ−ペンチル
オキシメチル、シクロペンチルオキシメチル、ｎ−ヘキ
シルオキシメチル、シクロヘキシルオキシメチル、１−
メトキシエチル、１−エトキシエチル、１−プロポキシ
エチル、１−イソプロポキシエチル、１−ｎ−ブトキシ
エチル、１−イソブトキシエチル、１−ｔ−ブトキシエ
チル、フェノキシメチル、１−フェノキシエチル、２−
フェノキシエチル、ベンジルオキシメチル、２−ベンジ
ルオキシエチル、カルボキシメチル、１−カルボキシエ
チル、２−カルボキシエチル、メトキシカルボニルメチ
ル、エトキシカルボニルメチル、ｎ−プロポキシカルボ
ニルメチル、イソプロポキシカルボニルメチル、ｎ−ブ
トキシカルボニルメチル、イソブトキシカルボニルメチ
ル、ｔ−ブトキシカルボニルメチル、ｎ−ペンチルオキ
シカルボニルメチル、シクロペンチルオキシカルボニル
メチル、ｎ−ヘキシルオキシカルボニルメチル、シクロ
ヘキシルオキシカルボニルメチル、シクロヘプチルオキ
シカルボニルメチル、シクロオクチルオキシカルボニル
メチル、カルボキシエチル、メトキシカルボニルエチ
ル、エトキシカルボニルエチル、ｎ−プロポキシカルボ
ニルエチル、イソプロポキシカルボニルエチル、ｎ−ブ
トキシカルボニルエチル、イソブトキシカルボニルエチ
ル、ｔ−ブトキシカルボニルエチル、ｎ−ペンチルオキ
シカルボニルエチル、シクロペンチルオキシカルボニル
エチル、ｎ−ヘキシルオキシカルボニルエチル、シクロ
ヘキシルオキシカルボニルエチル、シクロヘプチルオキ
シカルボニルエチル、シクロオクチルオキシカルボニル
エチル、２−アミノエチル、２−（Ｎ−メチルアミノ）
エチル、２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチル、３−
アミノプロピル、３−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）プロ
ピル、２−グアジニノエチル、３−グアニジノプロピ
ル、アミノカルボニルメチル、Ｎ−メチルアミノカルボ
ニルメチル、Ｎ−エチルアミノカルボニルメチル、Ｎ−
ｎ−プロピルアミノカルボニルメチル、Ｎ−イソプロピ
ルアミノカルボニルメチル、Ｎ−ｎ−ブチルアミノカル
ボニルメチル、Ｎ−イソブチルアミノカルボニルメチ
ル、Ｎ−ｔ−ブチルアミノカルボニルメチル、Ｎ−ｎ−
ペンチルアミノカルボニルメチル、Ｎ−イソペンチルア
ミノカルボニルメチル、Ｎ−ネオペンチルアミノカルボ
ニルメチル、Ｎ−ｎ−ヘキシルアミノカルボニルメチ
ル、Ｎ−シクロヘキシルアミノカルボニルメチル、Ｎ，
Ｎ−ジメチルアミノカルボニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジエチ
ルアミノカルボニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピル
アミノカルボニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ
ノカルボニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルアミノカ
ルボニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジ−イソブチルアミノカルボ
ニルメチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｔ−ブチルアミノカルボニル
メチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルアミノカルボニルメ
チル、Ｎ，Ｎ−ジ−イソペンチルアミノカルボニルメチ
ル、Ｎ，Ｎ−ジ−ネオペンチルアミノカルボニルメチ
ル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ヘキシルアミノカルボニルメチ
ル、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミノカルボニルメチ
ル、ピロリジノカルボニルメチル、ピペリジノカルボニ
ルメチル、アミノカルボニルエチル、Ｎ−メチルアミノ
カルボニルエチル、Ｎ−エチルアミノカルボニルエチ
ル、Ｎ−ｎ−プロピルアミノカルボニルエチル、Ｎ−イ
ソプロピルアミノカルボニルエチル、Ｎ−ｎ−ブチルア
ミノカルボニルエチル、Ｎ−イソブチルアミノカルボニ
ルエチル、Ｎ−ｔ−ブチルアミノカルボニルエチル、Ｎ
−ｎ−ペンチルアミノカルボニルエチル、Ｎ−シクロペ
ンチルアミノカルボニルエチル、Ｎ−ｎ−ヘキシルアミ
ノカルボニルエチル、Ｎ−シクロヘキシルアミノカルボ
ニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノカルボニルエチ
ル、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ
−ジ−ｎ−プロピルアミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−
ジイソプロピルアミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジ−
ｎ−ブチルアミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジイソブ
チルアミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｔ−ブチル
アミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ペンチルア
ミノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジシクロペンチルアミ
ノカルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ヘキシルアミノ
カルボニルエチル、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルアミノカ
ルボニルエチル、３−インドリルメチル、４−イミダゾ
リルメチル、２−チエニルメチル、２−フリルメチル、
ピロリジノカルボニルエチル、ピペリジノカルボニルエ
チル等が挙げられる。

【００２１】上記のＰ’〜Ｘ’およびＺ’における芳香
族炭化水素基または該脂肪芳香族炭化水素基としては、
例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、フェ
ニルメチル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチ
ル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチル、９−ア
ントラニルメチルなどが挙げられる。置換された芳香族
炭化水素基、脂肪芳香族炭化水素基としては例えば、４
−ヒドロキシフェニル、４−ヒドロキシフェニルメチ
ル、４−メトキシフェニルメチル、４−エトキシフェニ
ルメチル、４−ｎ−プロポキシフェニルメチル、４−イ
ソプロポキシフェニルメチル、４−ｎ−ブトキシフェニ
ルメチル、４−イソブトキシフェニルメチル、４−ｔ−
ブトキシフェニルメチル、４−ｎ−ペンチルオキシフェ
ニルメチル、４−シクロペンチルオキシフェニルメチ
ル、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニルメチル、４−シク
ロヘキシルオキシフェニルメチル、４−アミノフェニル
メチル、４−ジメチルアミノフェニルメチル、４−ジエ
チルアミノフェニルメチル、４−ジ−ｎ−プロピルアミ
ノフェニルメチル、４−ジイソプロピルアミノフェニル
メチル、４−ジ−ｎ−ブチルアミノフェニルメチル、４
−ピロリジノフェニルメチル、４−ピペリジノフェニル
メチル、４−ニトロフェニルメチル、４−フルオロフェ
ニルメチル、３−フルオロフェニルメチル、２−フルオ
ロフェニルメチル、４−クロロフェニルメチル、３−ク
ロロフェニルメチル、２−クロロフェニルメチル等が挙
げられる。Ｙ’（Ｙのアミノ酸側鎖に相当）は置換され
た炭素数１ないし１５の飽和脂肪族炭化水素基または
（１Ｓ）−１−メチルプロピル基以外の置換されていな
い炭素数４ないし１５の飽和脂肪族炭化水素基である。

【００２２】上記のＰ〜Ｚのアミノ酸残基（すなわち
Ｐ’〜Ｚ’）について、更に具体的に、また好ましいも
のを説明すると、以下のようである。Ｐは、アミノ酸側
鎖（Ｐ’）として置換されていてもよいアルキル基を有
するアミノ酸残基であり、この置換基としては水酸基が
好ましく、具体的にはＳｅｒ，Ｔｈｒの他Ａｌａ等が挙
げられる。Ｑとしては、例えばＳｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈ
ｅ，Ａｌａが挙げられ、中でもＳｅｒ，Ａｌａが好まし
いものとして挙げられる。Ｒは、アミノ酸側鎖（Ｒ’）
として置換されていてもよいアルキル基を有するアミノ
酸残基であり、この置換基としては水酸基が好ましく、
具体的にはＳｅｒ，Ｔｈｒの他Ａｌａ等が挙げられる。
Ｓは、アミノ酸側鎖（Ｓ’）として親油性(lipophilic)
の部分を有するアミノ酸残基であり、例えばＬｅｕ，Ａ
ｌａ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｍｅｔ等が具体例として挙げら
れ、中でもＬｅｕが好ましい。Ｔとしては、Ｍｅｔ，Ｌ
ｅｕ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｎｌｅ，Ｇｌｕ等が挙げられ、
中でもＭｅｔ，Ａｌａ，Ｎｌｅ等が好ましい。Ｕとして
は、Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｇｌｕが挙げられる。Ｖとして
は、芳香族アミノ酸が好ましく、その中でも単環式のも
のの方が二環式のものに比べ好ましく、Ｐｈｅ，Ｔｙｒ
の他、Ｔｒｐが好ましいものとして挙げられる。Ｗとし
ては、Ｌｅｕの他Ｇｌｎ等も挙げられる。Ｚとしては、
芳香族アミノ酸が好ましく、その中でも二環式のものが
好ましく、Ｔｒｐの他、Ｔｒｐに置換基を有するもの
〔例えばＮ(インドール)−ホルミルトリプトファン〕、
α−ナフチルアラニン，β−ナフチルアラニン等が好ま
しいものとして挙げられる。なお、合成時にはＳ−Ｓ結
合の酸化を伴うため、酸化による分解を受け易いトリプ
トファンを用いずにそのＮ(インドール)−ホルミル体等
の置換体を用いることがしばしば行われる。Ｘとして
は、Ａｓｐ以外のものが好ましく、中でもそのエンドセ
リン受容体への結合親和性の強さから水酸基を有するア
ミノ酸残基が特に好ましく、例えばＳｅｒ，Ｔｈｒが好
ましいものの例として挙げられる。この他、Ａｓｎ，Ｇ
ｌｙ等も好ましく用いられるアミノ酸残基である。

【００２３】Ｙとしては、アミノ酸側鎖（Ｙ’）の２位
が分岐しているアミノ酸残基、例えばＬｅｕ，Ｃｈａ，
Ｐｈｅ，γＬｅｕ，Ａｓｎ等が好ましいものとして挙げ
られる。本発明は１９位における置換（Ｙ）を本質的な
特徴とするものである。更にはこの１９位の置換と１８
位置換との組合せも重要であり、１８位−１９位がＴｈ
ｒ−Ｌｅｕ，Ｔｈｒ−γＬｅｕ，Ｔｈｒ−Ｃｈａ，Ｔｈ
ｒ−Ｐｈｅ，Ｔｈｒ−Ａｓｎ，Ｓｅｒ−Ｌｅｕ，Ａｓｎ
−Ｌｅｕ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ等の組合せが好ましい例であ
る。中でもＴｈｒ−Ｌｅｕ，Ｔｈｒ−γＬｅｕ，Ｔｈｒ
−Ｃｈａの組合せが特に好ましい。

【００２４】ペプチド（Ｉ）または（Ｉ’）の薬理学的
に許容される塩としては塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩など
の無機酸付加塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸
塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、蓚酸塩などの有機酸塩のほ
か、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの塩
も挙げられる。本発明のペプチド（Ｉ）または（Ｉ’）
は、ペプチド合成の常套手段で製造し得る。即ち、固相
合成法、液相合成法のいずれによってもよい。そのよう
なペプチド合成の手段は、任意の公知の方法に従えばよ
く、たとえば、M．Bodansky および M.A.Ondetti 著、
ペプチド・シンセシス（Peptide Synthesis)、インター
サイエンス、ニューヨーク、１９６６年；F．M．Finn
および K．Hofmann 著、ザ・プロテインズ（The Protei
ns)、第２巻、H．Nenrath、R．L．Hill 編集、アカデミ
ックプレスインク、ニューヨーク、１９７６年；泉屋信
夫他著“ペプチド合成の基礎と実験”丸善（株）１９８
５年；矢島治明、榊原俊平他著、生化学実験講座１、日
本生化学会編、東京化学同人１９７７年；木村皓俊他
著、続生化学実験講座２、日本生化学会編、東京化学同
人１９８７年；J．M．Stewart およびJ．D．Young 著、
ソリッド フェイズ ペプチド シンセシス(Solid Phase
Peptide Synthesis)、ピアスケミカルカンパニー、イリ
ノイ、１９８４年などに記載された方法、たとえばアジ
ド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無水物法、ＤＣ
Ｃ法、活性エステル法、ウッドワード試薬Ｋを用いる方
法、カルボジイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／Ｈ
ＯＮＢ法、ＢＯＰ試薬を用いる方法などが挙げられる。

【００２５】本発明のペプチド（Ｉ）または（Ｉ’）
は、そのペプチド結合の任意の位置で２分される２種の
フラグメントの一方に相当する反応性カルボキシル基を
有する原料と、他方のフラグメントに相当する反応性ア
ミノ基を有する原料をペプチド合成の常套手段で縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を常套手段で脱離させた後、更に酸化反応を行うことに
より製造しうる。

【００２６】特に固相合成法においては、反応に関与す
べきでない官能基を保護したアミノ酸とパム（Pam)樹脂
などの不溶性樹脂をアミノ酸のカルボキシル基を通して
結合させ、このＮ（α）保護基を脱離したのち、これに
関与すべきでない官能基を保護したアミノ酸を縮合し、
目的とする保護ペプチドとなるまでこの操作をくり返
し、次いでフッ化水素処理、トリフルオロメタンスルホ
ン酸処理、トリフルオロ酢酸処理などの常套手段により
保護基を脱離すると同時に目的のペプチドを樹脂から切
り出し、更に酸化反応を行うことにより製造しうる。

【００２７】酸化反応を行って、Ｍ¹−Cys¹⁵結合および
Cys³−Cys¹¹結合を作る場合、化合物（II）または（I
I’） M-P-Cys-Q-R-S-T-Asp-U-Glu-Cys-Val-Tyr-V-Cys-His-W-X-Y-Ile-Z-OH （II）

【００２８】

【化８】

【００２９】を公知の方法により酸化する。この場合
同時に２つのジスルフィド結合を酸化反応によりつくっ
てもよいし、Ｍ¹とCys¹⁵の保護基を残したまま酸化反
応を行ってCys³−Cys¹¹結合をつくったのち保護基を脱
離し、もう一度酸化反応をおこなってＭ¹−Cys¹⁵結合を
つくってもよいし、またCys³とCys¹¹の保護基を残し
たまま酸化反応を行ってＭ¹−Cys¹⁵結合をつくったのち
保護基を脱離し、もう一度酸化反応をおこなってCys³−
Cys¹¹結合をつくってもよい。

【００３０】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護および保護基、ならびにその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などもまた公知のものあるいは手
段から適宜選択しうる。

【００３１】原料のアミノ基の保護基としては、たとえ
ばカルボベンゾキシ、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ｔ
−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボ
ニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ク
ロルベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカ
ルボニル、トリフルオロアセチル、フタリル、ホルミ
ル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホス
フィノチオイル、９−フルオレニルメチルオキシカルボ
ニルなどが挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は、たとえばアルキルエステル（例、メチル、エチル、
プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シク
ロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−ア
ダマンチルなどのエステル基）、ベンジルエステル、４
−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエス
テル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエ
ステル、フェナシルエステル、カルボベンゾキシヒドラ
ジド、ｔ−ブチルオキシカルボニルヒドラジド、トリチ
ルヒドラジドなどが挙げられる。

【００３２】システインのチオール保護基としては、た
とえば４−メトキシベンジル、４−メチルベンジル、ベ
ンジル、ｔ−ブチル、アダマンチル、トリチル、アセト
アミドメチル、カルボメトキシスルフェニル、３−ニト
ロ−２−ピリジンスルフェニル、トリメチルアセトアミ
ドメチル等が挙げられる。

【００３３】セリンの水酸基は、たとえばエステル化ま
たはエーテル化によって保護することができる。このエ
ステル化に適する基としてはたとえばアセチル基などの
低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、
ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル
基などの炭酸から誘導される基などがあげられる。また
エーテル化に適する基としては、たとえばベンジル基、
テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。し
かしながら、セリンの水酸基は必ずしも保護する必要は
ない。チロシンのフェノール性水酸基の保護基として
は、たとえば、ベンジル、２、６−ジクロロベンジル、
２−ニトロベンジル、２−ブロモベンジルオキシカルボ
ニル、ｔ−ブチルなどが挙げられるが、必ずしも保護す
る必要はない。メチオニンはスルホキサイドの形で保護
しておいてもよい。ヒスチジンのイミダゾールの保護基
としては、ｐ−トルエンスルホニル，４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル，２，４−
ジニトロフェニル，ベンジルオキシメチル，ｔ−ブトキ
シメチル，ｔ−ブトキシカルボニル，トリチル，ｔ−ブ
トキシカルボニル，トリチル，９−フルオレニルメチル
オキシカルボニルなどがあげられるが、必ずしも保護す
る必要はない。トリプトファンのインドールの保護基と
しては、ホルミル，２，４，６−トリメチルベンゼンス
ルホニル，２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホニ
ル，４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンス
ルホニル，β，β，β−トリクロルエチルオキシカルボ
ニル，ジフェニルホスフィノチオイルなどがあげられる
が、必ずしも保護する必要はない。

【００３４】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば対応する酸無水物、アジド，活性エス
テル［アルコール（例、ペンタクロロフェノール，２，
４，５−トリクロロフェノール，２，４−ジニトロフェ
ノール，シアノメチルアルコール，ｐ−ニトロフェノー
ル，Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジ
カルボキシイミド，Ｎ−ハイドロキシスクシミド，Ｎ−
ハイドロキシフタルイミド，Ｎ−ハイドロキシベンゾト
リアゾール）とのエステル］などがあげられる。原料の
アミノ基の活性化されたものとして、例えば対応するリ
ン酸アミドがあげられる。縮合反応は溶媒の存在下に行
うことができる。溶媒としては、ペプチド縮合反応に使
用しうることが知られているものから適宜選択されう
る。例えば無水又は含水のジメチルホルムアミド，ジメ
チルスルホキサイド，ピリジン，クロロホルム，ジオキ
サン，ジクロロメタン，テトラハイドロフラン，アセト
ニトリル，酢酸エチル，Ｎ−メチルピロリドンあるいは
これらの適宜の混合物などがあげられる。反応温度は、
ペプチド結合形成反応に使用されうることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜３０℃の範
囲から適宜選択される。

【００３５】次にこのようにして得られた保護ペプチド
又は保護ペプチド樹脂を保護基脱離反応に付す。該反応
は、使用する保護基の種類によって異なるが、いずれに
してもペプチド結合に影響を与えずに、保護基が除かれ
ることが工業的に有利であり、システイン含有ペプチド
においては、２段階で、即ち、まず、チオール保護基以
外の保護基を除去したのち、ついでチオール保護基を除
去する方が、その精製のしやすさから有利の場合もあ
る。そのような場合に用いられるチオール保護基として
は、アセトアミドメチル基、トリメチルアセトアミドメ
チル基などがあげられる。前記したように最終工程の酸
化反応は全保護基を脱離したペプチド（II）（又は（I
I’））を一段階で酸化してペプチド（I）（又は
（I’））に導いてもよいし、また、ペプチド（II）
（又は（II’））の２個のメルカプト基のみ保護基を有
する化合物を一度酸化した後、保護基を脱離して二度目
の酸化を行うことによりペプチド（I）（又は（I’））
に導いてもよい。後者の場合、保護基の脱離と酸化反応
を同時に行う酸化的脱保護反応を行ってもよい。また、
Ｔｒｐは前記したとおり酸化反応に弱いので、Ｔｒｐの
保護基だけは残したままで上記の酸化反応を行ったの
ち、最後に該保護基を脱離するという方法も採り得る。
保護基の脱離方法としては、例えば、無水フッ化水素，
メタンスルホン酸，トリフルオロメタンスルホン酸，ト
リフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液等による酸処理
があげられるが、この他に液体アンモニア中ナトリウム
による還元等もあげられる。上記酸処理による脱保護基
反応は、一般に−２０℃〜４０℃の適温で行われるが、
酸処理においては、アニソール，フェノール，チオアニ
ソール，ｍ−クレゾール，ｐ−クレゾール，ジメチルス
ルフィド，１，４−ブタンジチオール，１，２−エタン
ジチオールの如きカチオン捕捉剤の添加が有効である。
また、酸処理に安定なチオール保護基、例えばアセトア
ミドメチル，３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル等
の保護基は、前者は、ヨウ素，酢酸水銀で、後者は、メ
ルカプトエタノール等で除去することができる。また、
ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる２，
４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除
去され、トリプトファンのインドール保護基として用い
られるホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール，
１，４−ブタンジチオール等の存在下、酸処理による脱
保護以外に、希水酸化ナトリウム，希アンモニア等によ
るアルカリ処理によっても除去される。このようにして
保護ペプチドの保護基を除去して得られたペプチドがチ
オールペプチド（II）または（II’）の場合は該チオー
ルペプチドを酸化反応に付す。酸化する方法としては、
水などの溶媒中、空気，フェリシアン化カリウム，ヨウ
素，ジヨードエタンなどで酸化する方法があげられる。
上記酸化反応は、一般に約０℃〜約４０℃の適温で、ｐ
Ｈ約６〜約８．５において、高度希釈法で行われるのが
望ましい。

【００３６】このようにして製造されたペプチド（I）
又は（I’）は反応終了後、ペプチドの分離手段におけ
る常法、例えば、抽出，分配，再沈殿，再結晶，カラム
クロマトグラフィー，高速液体クロマトグラフィーなど
によって採取される。本発明のペプチド（I）又は
（I’）は自体公知の方法によりナトリウム塩，カリウ
ム塩，カルシウム塩，マグネシウム塩などの塩や、酸付
加塩、とりわけ薬理学的に許容される酸付加塩としても
得ることができ、たとえば、無機酸（例、塩酸，硫酸，
リン酸）あるいは有機酸（例、酢酸，プロピオン酸，ク
エン酸，酒石酸，リンゴ酸，蓚酸，メタンスルホン酸）
などの塩があげられる。

【００３７】本発明のペプチドまたはその薬理学的に許
容され得る塩は後記する試験例に示されるように温血動
物のエンドセリン受容体に結合し、しかもこのものがエ
ンドセリン様の収縮活性を示さないことによって、エン
ドセリン拮抗剤として作用するものである。温血動物に
抗エンドセリン活性を導入するために、有効量の該ペプ
チドまたはその薬理学的に許容され得る塩が温血動物に
投与される。

【００３８】

【作用・効果】エンドセリンの１，２，４，５，６，
７，９，14，17，18，19および21位のいずれかのアミノ
酸において、特に19位において置換を行なった本発明の
新規なペプチドは、エンドセリン拮抗剤としてエンドセ
リンの血管収縮活性の抑制に顕著な効果を奏する。この
ように本発明の新規なペプチドもしくはその塩は血管拡
張作用を有するエンドセリン拮抗剤であるため、循環機
能改善剤または心筋梗塞・急性腎不全、ぜんそく等の治
療剤として用いることができる。本発明のペプチドを上
記治療薬として用いる場合、そのままあるいは薬学的に
許容される担体、賦形剤、希釈剤と混合し、粉末、顆
粒、錠剤、カプセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤、徐放型
製剤などの剤型で経口的または非経口的に安全に投与す
ることができる。本発明の誘導体は主として非経口的に
投与（例、静脈あるいは皮下注射、脳室内あるいは脊髄
内投剤、経鼻投与、直腸投与）されるが、場合によって
は経口投与されることもある。本発明のペプチドは物質
として安定であるため生理食塩水の溶液として保存でき
るが、マンニトール、ソルビトールを添加して凍結乾燥
アンプルとし、使用時に溶解することもできる。本発明
のペプチドは、遊離体としてあるいはそのアルカリ付加
塩または酸付加塩として投与され得る。その投与量は、
ペプチド（Ｉ）の遊離体、アルカリ付加塩、酸付加塩と
もに、遊離体の量として、一般に体重１ｋｇ当り１ｎｇ
〜１０ｍｇの範囲の適量である。さらに詳述すれば、投
与量は対象疾患、症状、投与対象、投与方法などによっ
ても異なるが、たとえば成人の高血圧症患者に対して注
射で投与する場合、通常薬効成分〔ペプチド（Ｉ）〕１
回量として１ｎｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度を１
日１回〜３回程度投与するのが好都合である。また、点
滴でも効果があり、点滴の場合の全投与量は注射の場合
と同じである。このペプチドまたはその薬理学的に許容
され得る塩は循環機能改善剤または心筋梗塞・急性腎不
全、ぜんそく等の治療剤として用いられる。この治療剤
を調製する場合には、注意深く精製を行ない細菌や発熱
物質が存在しないように注意しなければならない。

【００３９】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明する。なお、実施例のグリシン以外のアミノ酸は
特記されているものを除いてすべてＬ体である。表１に
エンドセリン−１，−２，−３、マウスエンドセリン
（ＭＥＴ）および本発明の実施例で得られた新規ペプチ
ドのアミノ酸配列を比較して示す。 表１ 既知 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 ET-1 CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuAspIleIleTrp （配列番号：４） ET-2 CysSerCysSerSerTrpLeuAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuAspIleIleTrp （配列番号：５） ET-3 CysThrCysPheThrTyrLysAspLysGluCysValTyrTyrCysHisLeuAspIleIleTrp （配列番号：６） MET CysSerCysAsnSerTrpLeuAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuAspIleIleTrp （配列番号：７） 実施例 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 実施例 番号 １ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：８）（略称 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） ２ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrChaIleTrp （配列番号：９）（略称 〔Thr¹⁸，Cha¹⁹〕ET-1） ３ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrPheIleTrp （配列番号：１０）（略称 〔Thr¹⁸，Phe¹⁹〕ET-1） ４ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrγLeuIleTrp （配列番号：１１）（略称 〔Thr¹⁸，γLeu¹⁹〕ET-1） ５ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrAsnIleTrp （配列番号：１２）（略称 〔Thr¹⁸，Asn¹⁹〕ET-1） ６ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuSerLeuIleTrp （配列番号：１３）（略称 〔Ser¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） ７ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuAsnLeuIleTrp （配列番号：１４）（略称 〔Asn¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） ８ CysSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuGlyLeuIleTrp （配列番号：１５）（略称 〔Gly¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） ９ CysThrCysPheThrTyrLysAspLysGluCysValTyrTyrCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：１６）（略称 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-3） 10 CysSerCysSerSerLeuMetAspAlaGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：１７）（略称 〔Ala⁹，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 11 MprSerCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：１８）（略称 〔Mpr¹，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 12 CysAlaCysSerSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：１９）（略称 〔Ala²，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 13 CysSerCysAlaSerLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２０）（略称 〔Ala⁴，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 14 CysSerCysSerAlaLeuMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２１）（略称 〔Ala⁵，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 15 CysSerCysSerSerAlaMetAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２２）（略称 〔Ala⁶，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 16 CysSerCysSerSerLeuAlaAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２３）（略称 〔Ala⁷，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 17 CysSerCysSerSerLeuNleAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２４）（略称 〔Nle⁷，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1） 18 CysSerCysSerSerTrpLeuAspLysGluCysValTyrPheCysHisLeuThrLeuIleTrp （配列番号：２５）（略称 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-2） 上記のペプチドは全て、Ｃｙｓ¹−Ｃｙｓ¹⁵（またはＭ
ｐｒ¹−Ｃｙｓ¹⁵），Ｃｙｓ³−Ｃｙｓ¹¹にＳ−Ｓ結合を
有する。

【００４０】実施例１〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1の製造 Boc-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂（０．５ミルモル）を出発
原料とし、アプライド・バイオシステムズ社のBoc-アミ
ノ酸誘導体カートリッジ（２．０ミリモル）を用い、ト
リフルオロ酢酸によるBoc基の脱離後、ＨＯＢｔ活性エ
ステル法にて順次Ｃ末端側からペプチド鎖を延長する。
但し、Boc-Asp(OcHex)，Boc-Glu(OcHex)は、（株）ペプ
チド研究所製の粉末を専用カートリッジに封入後使用し
た。このようにして次式で表わされる保護ペプチド樹脂
を得た。 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂 このペプチド樹脂をＤＭＦ １０ｍｌに懸濁し、これに
チオフェノール１．０ｍｌを加え、室温で２時間撹拌す
ることにより、Ｈｉｓのイミダゾール保護基のＤｎｐ基
を脱離し、さらに０．１％のインドールを含む５０％Ｔ
ＦＡ／ジクロルメタンで室温２０分処理することにより
Ｂｏｃ基を脱離した。このようにして得られるペプチド
樹脂５００ｍｇをｐ−クレゾール５００ｍｇ、１，４−
ブタンジチオール０．７５ｍｌの存在下、無水フッ化水
素５ｍｌで、０℃，１時間処理し全保護基を除去すると
ともに、ペプチドを樹脂より切り出した。フッ化水素を
減圧留去し、残留物に、エチルエーテルを加えて沈殿と
してこれを瀘取した。これにＴＦＡ３０ｍｌを加えてペ
プチドを溶解し、樹脂を瀘別し、瀘液を濃縮し、残留物
にエチルエーテルを加えて沈殿として瀘取し減圧乾燥し
た。これを０．１Ｍ酢酸アンモニウム／水−ｎＢｕＯＨ
−ＥｔＯＨ（２：１：１ｖ／ｖ）（ｐＨ８．０〜８．
５）５００ｍｌに溶かし、室温で１５時間撹拌し、空気
酸化した。その後、酢酸を加えてｐＨ５．０として溶媒
を減圧で留去し、残留物を凍結乾燥した。これを６０％
酢酸２０ｍｌに溶かし、セファデックスＧ−５０のカラ
ム（５ｃｍ×１０８ｃｍ）に付し、６０％酢酸で溶出
し、目的の分画を集め凍結乾燥した。最後にこれをＹＭ
Ｃ−Ｄ−ＯＤＳ−５（２ｃｍ×２５ｃｍ）のカラム（Ｙ
ＭＣ社製）を用いた分取液体クロマトグラフィーで精製
し、目的物を得た。アミノ酸分析値（１１０℃、２４時
間加水分解、（ ）内は理論値を示す） Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.93(1)；Ｓｅｒ 2.56(3)；Ｇ
ｌｕ 1.06(1)；Ｃｙｔ 1.85(2)；Ｖａｌ 0.99(1)；Ｍｅ
ｔ 0.99(1)；Ｉｌｅ 0.94(1)；Ｌｅｕ 3.08(3)；Ｔｙｒ
0.97(1)；Ｐｈｅ 1.02(1)；Ｌｙｓ 1.00(1)；Ｈｉｓ
1.19(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４７７（理論値＝２４７
７）。

【００４１】実施例２〔Thr¹⁸，Cha¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Cha-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.94(1)；Ｓｅｒ 2.55(3)；Ｇ
ｌｕ 1.05(1)；Ｃｙｔ 1.69(2)；Ｖａｌ 0.97(1)；Ｍｅ
ｔ 1.01(1)；Ｉｌｅ 0.94(1)；Ｌｅｕ 2.04(2)；Ｔｙｒ
0.92(1)；Ｐｈｅ 1.01(1)；Ｌｙｓ 1.00(1)；Ｈｉｓ
1.19(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２５１７（理論値＝２５１
７）。

【００４２】実施例３〔Thr¹⁸，Phe¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Phe-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.88(1)；Ｓｅｒ 2.45(3)；Ｇ
ｌｕ 1.03(1)；Ｃｙｔ 1.48(2)；Ｖａｌ 0.88(1)；Ｍｅ
ｔ 1.00(1)；Ｉｌｅ 0.85(1)；Ｌｅｕ 1.93(2)；Ｔｙｒ
0.87(1)；Ｐｈｅ 1.81(2)；Ｌｙｓ 1.01(1)；Ｈｉｓ
0.88(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２５１１（理論値＝２５１
１）。

【００４３】実施例４〔Thr¹⁸，γLeu¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-γLeu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実
施例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得
た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.94(1)；Ｓｅｒ 2.51(3)；Ｇ
ｌｕ 1.05(1)；Ｃｙｔ 1.69(2)；Ｖａｌ 0.98(1)；Ｍｅ
ｔ 1.00(1)；Ｉｌｅ 0.92(1)；Ｌｅｕ 2.07(2)；Ｔｙｒ
1.04(1)；Ｐｈｅ 0.99(1)；Ｌｙｓ 1.01(1)；Ｈｉｓ
1.00(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４９１（理論値＝２４９
１）。 γLeu＝γ−メチル−Ｌ−ロイシン。

【００４４】実施例５〔Thr¹⁸，Asn¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Asn-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 2.00(2)；Ｔｈｒ 0.96(1)；Ｓｅｒ 2.50(3)；Ｇ
ｌｕ 1.07(1)；Ｃｙｔ 0.75(2)；Ｖａｌ 0.91(1)；Ｍｅ
ｔ 1.03(1)；Ｉｌｅ 0.91(1)；Ｌｅｕ 2.11(2)；Ｔｙｒ
0.92(1)；Ｐｈｅ 1.04(1)；Ｌｙｓ 1.02(1)；Ｈｉｓ
0.99(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４７８（理論値＝２４７
８）。

【００４５】実施例６〔Ser¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Ser(Bz
l)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｓｅｒ 3.39(4)；Ｇｌｕ 1.06(1)；Ｃ
ｙｔ 1.58(2)；Ｖａｌ 0.90(1)；Ｍｅｔ 0.98(1)；Ｉｌ
ｅ 0.87(1)；Ｌｅｕ 3.05(3)；Ｔｙｒ 0.87(1)；Ｐｈｅ
0.98(1)；Ｌｙｓ 0.99(1)；Ｈｉｓ 0.93(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４６３（理論値＝２４６
３）。

【００４６】実施例７〔Asn¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Asn-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 2.00(2)；Ｓｅｒ 2.40(3)；Ｇｌｕ 1.04(1)；Ｃ
ｙｔ 0.76(2)；Ｖａｌ 0.85(1)；Ｍｅｔ 1.02(1)；Ｉｌ
ｅ 0.85(1)；Ｌｅｕ 3.06(3)；Ｔｙｒ 0.85(1)；Ｐｈｅ
1.00(1)；Ｌｙｓ 1.00(1)；Ｈｉｓ 0.93(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４９０（理論値＝２４９
０）。

【００４７】実施例８〔Gly¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Gly-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｓｅｒ 2.51(3)；Ｇｌｕ 1.05(1)；Ｇ
ｌｙ 0.99(1)；Ｃｙｔ 1.48(2)；Ｖａｌ 0.89(1)；Ｍｅ
ｔ 0.98(1)；Ｉｌｅ 0.84(1)；Ｌｅｕ 3.01(3)；Ｔｙｒ
0.86(1)；Ｐｈｅ 0.97(1)；Ｌｙｓ 0.99(1)；Ｈｉｓ
0.93(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４３３（理論値＝２４３
３）。

【００４８】実施例９〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-3の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Thr(Bzl)-Cys(MeBzl)-Phe-Thr(Bzl)-Ty
r(BrZ)-Lys(ClZ)-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys
(MeBzl)-Val-Tyr(BrZ)-Tyr(BrZ)-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-
Leu-Thr(Bzl)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、
さらに実施例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的
物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 2.71(3)；Ｇｌｕ 1.10(1)；Ｃ
ｙｔ 0.77(2)；Ｖａｌ 0.94(1)；Ｉｌｅ 0.91(1)；Ｌｅ
ｕ 2.01(2)；Ｔｙｒ 2.84(3)；Ｐｈｅ 0.99(1)；Ｌｙｓ
1.96(2)；Ｈｉｓ 0.95(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２６２８（理論値＝２６２
８）。

【００４９】実施例１０〔Ala⁹，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Met-Asp(OcHex)-Ala-Glu(OcHex)-Cys(MeBzl)-Va
l-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bzl)-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.91(1)；Ｓｅｒ 2.46(3)；Ｇ
ｌｕ 1.03(1)；Ａｌａ 0.99(1)；Ｃｙｔ 0.75(2)；Ｖａ
ｌ 0.88(1)；Ｍｅｔ 1.00(1)；Ｉｌｅ 0.88(1)；Ｌｅｕ
2.98(3)；Ｔｙｒ 0.86(1)；Ｐｈｅ 0.96(1)；Ｈｉｓ
0.93(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４２０（理論値＝２４２
０）。

【００５０】実施例１１〔Mpr¹，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Mpr(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-L
eu-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBzl)-V
al-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bzl)-L
eu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１
と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.94(1)；Ｓｅｒ 2.53(3)；Ｇ
ｌｕ 1.07(1)；Ｃｙｔ 0.66(1)；Ｖａｌ 0.94(1)；Ｍｅ
ｔ 0.98(1)；Ｉｌｅ 0.92(1)；Ｌｅｕ 3.03(3)；Ｔｙｒ
0.88(1)；Ｐｈｅ 0.97(1)；Ｌｙｓ 0.98(1)；Ｈｉｓ
0.94(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４６２（理論値＝２４６
２）。

【００５１】実施例１２〔Ala²，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ala-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Le
u-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBzl)-Va
l-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bzl)-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.95(1)；Ｓｅｒ 1.74(2)；Ｇ
ｌｕ 1.06(1)；Ａｌａ 0.96(1)；Ｃｙｔ 0.74(2)；Ｖａ
ｌ 0.95(1)；Ｍｅｔ 0.99(1)；Ｉｌｅ 0.94(1)；Ｌｅｕ
3.08(3)；Ｔｙｒ 0.89(1)；Ｐｈｅ 0.98(1)；Ｌｙｓ
0.99(1)；Ｈｉｓ 0.96(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４６１（理論値＝２４６
１）。

【００５２】実施例１３〔Ala⁴，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ala-Ser(Bzl)-Le
u-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBzl)-Va
l-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bzl)-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.95(1)；Ｓｅｒ 1.67(2)；Ｇ
ｌｕ 1.06(1)；Ａｌａ 0.96(1)；Ｃｙｔ 0.82(2)；Ｖａ
ｌ 0.94(1)；Ｍｅｔ 0.99(1)；Ｉｌｅ 0.92(1)；Ｌｅｕ
3.06(3)；Ｔｙｒ 0.88(1)；Ｐｈｅ 0.98(1)；Ｌｙｓ
0.99(1)；Ｈｉｓ 0.95(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４６１（理論値＝２４６
１）。

【００５３】実施例１４〔Ala⁵，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ala-Le
u-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBzl)-Va
l-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bzl)-Le
u-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施例１と
同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.94(1)；Ｓｅｒ 1.68(2)；Ｇ
ｌｕ 1.05(1)；Ａｌａ 0.98(1)；Ｃｙｔ 0.92(2)；Ｖａ
ｌ 0.92(1)；Ｍｅｔ 0.92(1)；Ｉｌｅ 0.90(1)；Ｌｅｕ
2.96(3)；Ｔｙｒ 0.91(1)；Ｐｈｅ 0.98(1)；Ｌｙｓ
0.98(1)；Ｈｉｓ 0.95(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４６１（理論値＝２４６
１）。

【００５４】実施例１５〔Ala⁶，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Ala-Met-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.89(1)；Ｓｅｒ 2.45(3)；Ｇ
ｌｕ 1.04(1)；Ａｌａ 0.98(1)；Ｃｙｔ 0.88(2)；Ｖａ
ｌ 0.86(1)；Ｍｅｔ 0.96(1)；Ｉｌｅ 0.85(1)；Ｌｅｕ
1.85(2)；Ｔｙｒ 0.86(1)；Ｐｈｅ 0.93(1)；Ｌｙｓ
0.98(1)；Ｈｉｓ 0.90(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４３５（理論値＝２４３
５）。

【００５５】実施例１６〔Ala⁷，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Ala-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.94(1)；Ｓｅｒ 2.55(3)；Ｇ
ｌｕ 1.06(1)；Ａｌａ 0.97(1)；Ｃｙｔ 0.87(2)；Ｖａ
ｌ 0.93(1)；Ｉｌｅ 0.92(1)；Ｌｅｕ 3.03(3)；Ｔｙｒ
0.90(1)；Ｐｈｅ 0.98(1)；Ｌｙｓ 0.98(1)；Ｈｉｓ
0.95(1) LSIMS(M+H+）＝２４１７（理論値＝２４１７）。

【００５６】実施例１７〔Nle⁷，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-1
の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Leu-Nle-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys(MeBz
l)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-Thr(Bz
l)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに実施
例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得た。 アミノ酸分析値： Ａｓｐ 1.00(1)；Ｔｈｒ 0.95(1)；Ｓｅｒ 2.50(3)；Ｇ
ｌｕ 1.07(1)；Ｃｙｔ 0.78(2)；Ｖａｌ 0.95(1)；Ｉｌ
ｅ 0.93(1)；Ｌｅｕ 3.07(3)；Ｔｙｒ＋Ｎｌｅ 1.97
(2)；Ｐｈｅ 0.99(1)；Ｌｙｓ 0.99(1)；Ｈｉｓ 0.96
(1) ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２４５９（理論値＝２４５
９）。

【００５７】実施例１８〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕-ET-2の製造 実施例１と同様の操作により以下の保護ペプチド樹脂、 Boc-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bz
l)-Trp(For)-Leu-Asp(OcHex)-Lys(ClZ)-Glu(OcHex)-Cys
(MeBzl)-Val-Tyr(BrZ)-Phe-Cys(MeBzl)-His(Dnp)-Leu-T
hr(Bzl)-Leu-Ile-Trp(For)-OCH₂-パム樹脂を得、さらに
実施例１と同様の脱保護・酸化・精製により目的物を得
た。 アミノ酸分析値： ＬＳＩＭＳ（Ｍ＋Ｈ+）＝２５３２（理論値＝２５３
２）。

【００５８】〔試験例〕 （１）ブタ冠動脈平滑筋に対する収縮抑制作用の測定 外膜結合組織及び内皮細胞を除去した冠動脈右回旋枝か
ら作製した２×１５ｍｍの螺旋条片を、４ｍｌのマグヌ
ス装置に固定し、その張力を変重・変位変換器ＵＬ−１
０ＧＲ（ミネベア社）により検出し、ポリグラフ（日本
電気三栄）により記録した。マグヌス装置は３７℃に保
ち、Ｏ₂ 95％，ＣＯ₂ ５％混合ガスで飽和したクレブス
−ヘンゼライト液（組成〔ｍＭ〕：ＮａＣｌ １１８，
ＫＣｌ ４．７，ＣａＣｌ₂ ２．５，ＫＨ₂ＰＯ₄ １．
２，ＮａＨＣＯ₃ ２５．０，ＭｇＳＯ₄ １．２，Glucos
e １０．０）で満たした。条片は１．２５−１．５ｇの
張力をかけ、１．５時間平衡化し、収縮応答が一定とな
るまで３０分間隔で６０ｍＭ ＫＣｌ投与を繰り返し、
さらに１．５時間平衡化した後、測定試料の投与を行な
った。条片の収縮は、個々の条片の６０ｍＭ ＫＣｌに
対する収縮応答で正規化して統計処理した。抑制作用
は、所定の濃度の化合物投与の約１５分後に、エンドセ
リン−１を累積的に投与し、その収縮のコントロール
（エンドセリン−１のみ投与）との比較から求めたｐＡ
₂値で示した。その結果を表３に示す。

【００５９】本発明の新規ペプチド（Ｉ）およびその塩
は、ブタ冠動脈平滑筋において、エンドセリンによる収
縮を抑制する作用を示したが、このような例は未だ報告
されていない。したがって、本発明のペプチド（Ｉ）ま
たはその塩は、哺乳動物（例、マウス、ラット、ウサ
ギ、犬、ネコ、ブタ、ヒト等）の高血圧症、心筋梗塞、
急性腎不全、ぜんそく等の治療に用いることができる。

【００６０】（２）本発明ペプチドの、エンドセリンに
対するアンタゴニスト性について、エンドセリンレセプ
ターへの結合性、およびブタ冠動脈平滑筋に対する収縮
作用（前記（１）の方法による）を測定した結果を表２
に示す。なおレセプターへの結合性測定法は以下の通り
である。レセプター結合アッセイ ブタの心臓より調製した膜画分をアッセイ用緩衝液を用
いて０．１５ｍｇ／ｍｌに希釈し、これを１００μｌず
つアッセイチューブに分注しアッセイに用いる。この膜
画分懸濁液に、５ｎＭの放射性ヨード（¹²⁵Ｉ）で標識
したエンドセリン−１溶液を２μｌ、さらに被検ペプチ
ド溶液を３μｌ加えて、１時間２５℃でインキュベート
した。この後、膜画分懸濁液を氷冷したアッセイ用緩衝
液９００μｌで希釈した後、１２，０００×ｇ、１０分
間遠心して上清と沈さに分離した。沈さには細胞膜とこ
れに埋め込まれたエンドセリンレセプターが含まれ、レ
セプターに結合した放射性ヨード標識エンドセリンも沈
さに回収される。従って、この沈さの放射性ヨードをガ
ンマ線計測機により測定することにより、エンドセリン
レセプターに結合した放射性ヨード標識エンドセリン量
を定量した。表２に示すとおり本発明のペプチドはＥＴ
レセプター結合性の値が大きくて最大収縮の値が大きく
ないので強いアンタゴニスト作用を有することがわか
る。 表２ 実施例 化合物 結合活性(＊1) 収縮活性(＊2) 最大収縮番号 比活性 比活性 〔％ 60mM ＫＣｌ〕 ＥＴ−１ １００(＊3) １００(＊4) １２０ １ 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ４０ ＜０．１ ４ ２ 〔Thr¹⁸，Cha¹⁹〕ET-1 ２３ ＜０．１ ２ ３ 〔Thr¹⁸，Phe¹⁹〕ET-1 ９．０ ＜０．１ ４ ４ 〔Thr¹⁸，γLeu¹⁹〕ET-1 ２３ ＜０．１ ０ ５ 〔Thr¹⁸，Asn¹⁹〕ET-1 １．６ ＜０．１ ９ ６ 〔Ser¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 １５ ＜０．１ １ ７ 〔Asn¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 １２ ＜０．１ ４ ８ 〔Gly¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ９．５ ＜０．１ １４ ９ 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-3 ４．０ ＜０．１ １２ 10 〔Ala⁹,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 １６ ＜０．１ ４ 11 〔Mpr¹,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 １６ ＜０．１ １ 12 〔Ala²,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ３２ ＜０．１ ５ 13 〔Ala⁴,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ５７ ＜０．１ ６ 14 〔Ala⁵,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ８．６ ＜０．１ ６ 15 〔Ala⁶,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 １１ ＜０．１ ７ 16 〔Ala⁷,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ６２ ＜０．１ ９ 17 〔Nle⁷,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ２７ ＜０．１ ９ ＊1 ブタ心筋膜画分； ＊2 ブタ冠動脈； ＊3 ＩＣ₅₀＝２．０×１０~⁹Ｍ，ＩＣ₅₀はＩ¹²⁵−ＥＴ
−１のブタ心筋画分への結合を５０％阻止するに要する
試料の濃度を表わす； ＊4 ＥＣ₅₀（％ＫＣｌ）＝１．６×１０~⁹Ｍ，ＥＣ₅₀
（％ＫＣｌ）は６０ｍＭ ＫＣｌによるブタ冠動脈の収
縮の５０％収縮をひきおこす試料の濃度を表わす。

【００６１】（３）ブタ冠動脈収縮に対する拮抗作用は
以下の表３に示すとおりである。 表３ ブタ冠動脈収縮に対する拮抗作用 実施例 番号 化合物 ｐＡ₂ 比活性 １ 〔Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ７．７ １００ ２ 〔Thr¹⁸，Cha¹⁹〕ET-1 ７．７ １００ ３ 〔Thr¹⁸，Phe¹⁹〕ET-1 ７．２ ３２ ４ 〔Thr¹⁸，γLeu¹⁹〕ET-1 ７．４ ５０ ６ 〔Ser¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ７．５ ６３ ８ 〔Gly¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ６．７ １０ 10 〔Ala⁹,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ５．９ １．６ 11 〔Mpr¹,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ６．５ ６ 12 〔Ala²,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ６．７ １０ 13 〔Ala⁴,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ６．９ １６ 14 〔Ala⁵,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ５．５ ０．６ 15 〔Ala⁶,Thr¹⁸,Leu¹⁹〕ET-1 ６．５ ６ 16〔Ala⁷，Thr¹⁸，Leu¹⁹〕ET-1 ７．２ ３２ ｐＡ₂は活性薬（たとえばＥＴ−１）単独での濃度反応
曲線（dose response curve）を２倍だけ高用量側に平
行移動させるのに必要な競合的拮抗薬のモル濃度のネガ
ティブロガリズムの値。大きいほど拮抗作用が強いこと
を示す。以上のように本発明のエンドセリン誘導体
〔Ｉ〕またはその塩はエンドセリンの拮抗としての性質
を有し、循環機能改善剤、血管拡張剤またはぜんそく治
療剤として用いることができる。

【００６２】

【配列表】配列番号：1 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Glu Cys Val Tyr Xaa Cys His 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Ile Xaa 20。

【００６３】配列番号：2 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Glu Cys Val Tyr Xaa Cys His 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Ile Xaa 20。

【００６４】配列番号：３ 配列の長さ：２１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Lys Glu Cys Val Tyr Xaa Cys His 1 5 10 15 Leu Asp Ile Ile Trp 20。

【００６５】配列番号：4 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Asp Ile Ile Trp 20。

【００６６】配列番号：5 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Trp Leu Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Asp Ile Ile Trp 20。

【００６７】配列番号：6 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Thr Cys Phe Thr Tyr Lys Asp Lys Glu Cys Val Tyr Tyr Cys His 1 5 10 15 Leu Asp Ile Ile Trp 20。

【００６８】配列番号：7 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Asn Ser Trp Leu Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Asp Ile Ile Trp 20。

【００６９】配列番号：8 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００７０】配列番号：9 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Cha Ile Trp 20。

【００７１】配列番号：10 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Phe Ile Trp 20。

【００７２】配列番号：11 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 特徴を表す記号：modified site 存在位置：19 他の情報：γLeu 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Xaa Ile Trp 20。

【００７３】配列番号：12 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−ｂｏｎｄｓ 存在位置：１，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Asn Ile Trp 20。

【００７４】配列番号：13 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Ser Leu Ile Trp 20。

【００７５】配列番号：14 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Asn Leu Ile Trp 20。

【００７６】配列番号：15 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Gly Leu Ile Trp 20。

【００７７】配列番号：16 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Thr Cys Phe Thr Tyr Lys Asp Lys Glu Cys Val Tyr Tyr Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００７８】配列番号：17 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Ala Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００７９】配列番号：18 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 特徴を表す記号：modified site 存在位置：1 他の情報：Xaa=Mpr 配列 Xaa Ser Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８０】配列番号：19 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ala Cys Ser Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８１】配列番号：20 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ala Ser Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８２】配列番号：21 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ala Leu Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８３】配列番号：22 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Ala Met Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８４】配列番号：23 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Ala Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８５】配列番号：24 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Leu Nle Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

【００８６】配列番号：25 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号：disulfide-bonds 存在位置：1，15 存在位置：3，11 配列 Cys Ser Cys Ser Ser Trp Leu Asp Lys Glu Cys Val Tyr Phe Cys His 1 5 10 15 Leu Thr Leu Ile Trp 20。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/04 - 7/66 C07K 14/575 ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ

Claims (8)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：８、配列番号：９、配列番号：
   １０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１
   ３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１
   ６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１
   ９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２
   ２、配列番号：２３、配列番号：２４及び配列番号：２
   ５で表わされる群から選ばれるものであるペプチドまた
   はその薬理学的に許容される塩。
2. 【請求項２】配列番号：８、配列番号：９、配列番号：
   １０、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１
   ６、配列番号：２０、配列番号：２３、配列番号：２４
   及び配列番号：２５で表わされる群から選ばれるもので
   ある、請求項１記載のペプチドまたはその薬理学的に許
   容される塩。
3. 【請求項３】配列番号：８で表わされる請求項１記載の
   ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
4. 【請求項４】配列番号：９で表わされる請求項１記載の
   ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
5. 【請求項５】配列番号：１１で表わされる請求項１記載
   のペプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
6. 【請求項６】配列番号：８、配列番号：９、配列番号：
   １０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１
   ３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１
   ６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１
   ９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２
   ２、配列番号：２３、配列番号：２４及び配列番号：２
   ５で表わされる群から選ばれるものであるペプチドまた
   はその薬理学的に許容される塩の製造において、各配列
   番号のペプチドまたはその薬理学的に許容される塩にお
   けるCys¹−Cys¹⁵及びCys³−Cys¹¹間のＳ−Ｓ結合を有し
   ないものを酸化反応に付し、Cys¹−Cys¹⁵及びCys³−Cys
   ¹¹間にＳ−Ｓ結合を付与したことを特徴とする配列番
   号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１
   １、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１
   ４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１
   ７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２
   ０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２
   ３、配列番号：２４及び配列番号：２５で表わされる群
   から選ばれるものであるペプチドまたはその薬理学的に
   許容される塩の製造法。
7. 【請求項７】請求項１記載のペプチドまたはその薬理学
   的に許容される塩を含有するエンドセリン受容体拮抗
   剤。
8. 【請求項８】血管拡張剤である請求項７記載のエンドセ
   リン受容体拮抗剤。