JP3335434B2 - アミノ酸配列を決定する方法 - Google Patents
アミノ酸配列を決定する方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、タンパク質を構成する
単位であるアミノ酸の結合順序を決定する、アミノ酸配
列分析法に関する。
単位であるアミノ酸の結合順序を決定する、アミノ酸配
列分析法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、タンパク質のアミノ酸配列分析法
としては、図２に示すように、タンパク質にイソチオシ
アナート誘導体の一つであるフェニルイソチオシアナー
ト（ＰＩＴＣ）を作用させて得たフェニルチオカルバミ
ル（ＰＴＣ）タンパク質を酸で処理することにより、２
−アニリノ−５−チアゾリノン（ＡＴＺ）アミノ酸誘導
体を生成させ、さらに酸で処理することにより得たフェ
ニルチオヒダントイン（ＰＴＨ）アミノ酸誘導体を、ク
ロマトグラフと紫外吸光光度法とを組み合わせて同定す
る、という一連の工程から構成されるサイクルを、分析
するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方
法、エドマン分解法、が用いられてきた（Ｐ．Ｅｄｍａ
ｎ， Ａｃｔａ Ｃｈｅｍ． Ｓｃａｎｄ． １０，７
６１（１９５６））。
としては、図２に示すように、タンパク質にイソチオシ
アナート誘導体の一つであるフェニルイソチオシアナー
ト（ＰＩＴＣ）を作用させて得たフェニルチオカルバミ
ル（ＰＴＣ）タンパク質を酸で処理することにより、２
−アニリノ−５−チアゾリノン（ＡＴＺ）アミノ酸誘導
体を生成させ、さらに酸で処理することにより得たフェ
ニルチオヒダントイン（ＰＴＨ）アミノ酸誘導体を、ク
ロマトグラフと紫外吸光光度法とを組み合わせて同定す
る、という一連の工程から構成されるサイクルを、分析
するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方
法、エドマン分解法、が用いられてきた（Ｐ．Ｅｄｍａ
ｎ， Ａｃｔａ Ｃｈｅｍ． Ｓｃａｎｄ． １０，７
６１（１９５６））。
【０００３】一方、図３に示すようにＡＴＺアミノ酸誘
導体に放射性同位体元素で標識したアミノ化合物を反応
させ、生成したＰＴＣアミノ酸誘導体を薄層クロマトグ
ラフで分離して検出する方法が特開昭６１−２６４２６
４に開示されている。さらに、図４に示すようにＡＴＺ
アミノ酸誘導体に蛍光性アミノ化合物を反応させ、生成
したＰＴＣアミノ酸誘導体を高速液体クロマトグラフで
分離して、蛍光光度法により検出する方法が特開昭６３
−１９６８５８に開示されている。
導体に放射性同位体元素で標識したアミノ化合物を反応
させ、生成したＰＴＣアミノ酸誘導体を薄層クロマトグ
ラフで分離して検出する方法が特開昭６１−２６４２６
４に開示されている。さらに、図４に示すようにＡＴＺ
アミノ酸誘導体に蛍光性アミノ化合物を反応させ、生成
したＰＴＣアミノ酸誘導体を高速液体クロマトグラフで
分離して、蛍光光度法により検出する方法が特開昭６３
−１９６８５８に開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】エドマン分解法によっ
て原理的には無限のアミノ酸配列が決定できることにな
る。しかしながら、実際にはエドマン分解法を構成する
各工程の反応収率が１００％ではないため、これらの積
であるサイクル毎の収率（反復収率）は必然的に１００
％を下回ることになる。アミノ酸配列分析において、サ
イクルの進行にしたがって徐々に分析が困難になる大き
な理由には、同定しようとする信号の強度がサイクル毎
に反復収率分ずつ減少していくことと並んで、あるサイ
クルにおいて未反応のアミノ基末端（Ｎ末端）が以降の
サイクルで反応することが繰り返されることによって生
じるバックグラウンドシグナル（これはオーバーラップ
シグナルと呼ばれている）が増加しＳ／Ｎ比が低下する
ことがあげられる。このために、サイクルを繰り返すに
従い分析が困難になってくる。エドマン分解法におい
て、ＰＩＴＣのような単一のイソチオシアナート誘導体
を用いる限り、これを避けることはできない。
て原理的には無限のアミノ酸配列が決定できることにな
る。しかしながら、実際にはエドマン分解法を構成する
各工程の反応収率が１００％ではないため、これらの積
であるサイクル毎の収率（反復収率）は必然的に１００
％を下回ることになる。アミノ酸配列分析において、サ
イクルの進行にしたがって徐々に分析が困難になる大き
な理由には、同定しようとする信号の強度がサイクル毎
に反復収率分ずつ減少していくことと並んで、あるサイ
クルにおいて未反応のアミノ基末端（Ｎ末端）が以降の
サイクルで反応することが繰り返されることによって生
じるバックグラウンドシグナル（これはオーバーラップ
シグナルと呼ばれている）が増加しＳ／Ｎ比が低下する
ことがあげられる。このために、サイクルを繰り返すに
従い分析が困難になってくる。エドマン分解法におい
て、ＰＩＴＣのような単一のイソチオシアナート誘導体
を用いる限り、これを避けることはできない。
【０００５】ここでイソチオシアナート誘導体としてＰ
ＩＴＣ以外の化合物、例えば可視部に吸収波長を持つイ
ソチオシアナート化合物あるいは蛍光性を持ったイソシ
アナート化合物を用いた場合には、反復収率は更に低下
する。また、ＡＴＺアミノ酸誘導体にアミノ化合物を反
応させ、生成したＰＴＣアミノ酸誘導体を検出する方法
が開示されているが、この方法においても工程の前半の
部分はエドマン分解法であり、あるサイクルにおいて未
反応のアミノ基末端（Ｎ末端）が以降のサイクルで反応
することが繰り返されることによって生じるバックグラ
ウンドシグナルが増加しＳ／Ｎ比が低下することは同様
である。
ＩＴＣ以外の化合物、例えば可視部に吸収波長を持つイ
ソチオシアナート化合物あるいは蛍光性を持ったイソシ
アナート化合物を用いた場合には、反復収率は更に低下
する。また、ＡＴＺアミノ酸誘導体にアミノ化合物を反
応させ、生成したＰＴＣアミノ酸誘導体を検出する方法
が開示されているが、この方法においても工程の前半の
部分はエドマン分解法であり、あるサイクルにおいて未
反応のアミノ基末端（Ｎ末端）が以降のサイクルで反応
することが繰り返されることによって生じるバックグラ
ウンドシグナルが増加しＳ／Ｎ比が低下することは同様
である。
【０００６】そこで本発明は、バックグラウンドシグナ
ルが上昇しＳ／Ｎ比が低下することをできるだけ避け
て、容易にタンパク質のアミノ酸配列を決定する方法を
提供しようとするものである。
ルが上昇しＳ／Ｎ比が低下することをできるだけ避け
て、容易にタンパク質のアミノ酸配列を決定する方法を
提供しようとするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明においては、上記
の欠点を克服し、バックグラウンドシグナルの増加によ
りＳ／Ｎ比が低下することを避けて容易にタンパク質の
アミノ酸配列を決定するために、ＡＴＺアミノ酸誘導体
と一般式Ｘ−ＮＨ2 で表されるアミノ化合物とを反応さ
せ、ＰＴＣアミノ酸誘導体とし、そのＰＴＣアミノ酸誘
導体を検出する、という一連の工程から構成されるサイ
クルを、分析するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し
実行する方法において、複数のアミノ化合物、例えば、
２種類のアミノ化合物を交互に用い、例えば前記アミノ
化合物の一つとしては、アミノフルオレセインを用い、
例えば前記アミノ化合物の他の一つとしては、アミノテ
トラメチルローダミンを用いて配列分析を行った。
の欠点を克服し、バックグラウンドシグナルの増加によ
りＳ／Ｎ比が低下することを避けて容易にタンパク質の
アミノ酸配列を決定するために、ＡＴＺアミノ酸誘導体
と一般式Ｘ−ＮＨ2 で表されるアミノ化合物とを反応さ
せ、ＰＴＣアミノ酸誘導体とし、そのＰＴＣアミノ酸誘
導体を検出する、という一連の工程から構成されるサイ
クルを、分析するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し
実行する方法において、複数のアミノ化合物、例えば、
２種類のアミノ化合物を交互に用い、例えば前記アミノ
化合物の一つとしては、アミノフルオレセインを用い、
例えば前記アミノ化合物の他の一つとしては、アミノテ
トラメチルローダミンを用いて配列分析を行った。
【０００８】ここで用いたＡＴＺアミノ酸誘導体は、タ
ンパク質あるいはペプチドにＰＩＴＣを作用させ、ＰＴ
Ｃタンパク質あるいはＰＴＣペプチドを生成させた後に
酸を作用させる、エドマン分解法、によって得たもので
ある。
ンパク質あるいはペプチドにＰＩＴＣを作用させ、ＰＴ
Ｃタンパク質あるいはＰＴＣペプチドを生成させた後に
酸を作用させる、エドマン分解法、によって得たもので
ある。
【０００９】
【作用】上記手段により、バックグラウンドシグナルの
上昇によりＳ／Ｎ比が低下することを避けて、容易にタ
ンパク質のアミノ酸配列を決定することが可能になっ
た。
上昇によりＳ／Ｎ比が低下することを避けて、容易にタ
ンパク質のアミノ酸配列を決定することが可能になっ
た。
【００１０】
【実施例】以下、実施例に基づいて本発明を説明する。 （実施例１）図１は本発明の分析方法を示す工程図であ
る。図中の、Xn-NH2、は複数のアミノ化合物を、Ph- 、
はフェニル基を、R-、はアミノ酸の側鎖をそれぞれ示
す。これは以降の各図においても同じである。
る。図中の、Xn-NH2、は複数のアミノ化合物を、Ph- 、
はフェニル基を、R-、はアミノ酸の側鎖をそれぞれ示
す。これは以降の各図においても同じである。
【００１１】まず、タンパク質にＰＩＴＣを作用させ、
ＰＴＣタンパク質誘導体を生成させる。次に、このＰＴ
Ｃタンパク質誘導体に酸を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘
導体と、アミノ末端のアミノ酸を一つ失ったタンパク質
とを生成させる。ＡＴＺアミノ酸誘導体とアミノ末端の
アミノ酸を一つ失ったタンパク質とを含んだ混合物か
ら、ＡＴＺアミノ酸誘導体を取りだし、アミノ化合物を
作用させてＰＴＣアミノ酸誘導体を生成させ、そのＰＴ
Ｃアミノ酸誘導体を同定する。
ＰＴＣタンパク質誘導体を生成させる。次に、このＰＴ
Ｃタンパク質誘導体に酸を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘
導体と、アミノ末端のアミノ酸を一つ失ったタンパク質
とを生成させる。ＡＴＺアミノ酸誘導体とアミノ末端の
アミノ酸を一つ失ったタンパク質とを含んだ混合物か
ら、ＡＴＺアミノ酸誘導体を取りだし、アミノ化合物を
作用させてＰＴＣアミノ酸誘導体を生成させ、そのＰＴ
Ｃアミノ酸誘導体を同定する。
【００１２】本法においては、決定したいアミノ酸の残
基数と同じ回数繰り返されるこの一連の工程から構成さ
れるサイクルにおいて、複数のアミノ化合物を用いる。 （実施例２）ここでは、２種類のアミノ化合物を交互に
用いる例を示す。
基数と同じ回数繰り返されるこの一連の工程から構成さ
れるサイクルにおいて、複数のアミノ化合物を用いる。 （実施例２）ここでは、２種類のアミノ化合物を交互に
用いる例を示す。
【００１３】図５は、２種類のアミノ化合物を交互に用
いる場合の本発明の分析方法を示す工程図である。図６
は、２種類のアミノ化合物を交互に用いる場合の本発明
の分析方法を示す図５に続く工程図である。ここで用い
られるアミノ化合物の一つはアミノフルオレセインであ
る。この化合物の構造式を図７に示す。アミノ化合物の
他の一つとしては、アミノテトラメチルローダミンを用
いる。この化合物の構造式を図８に示す。
いる場合の本発明の分析方法を示す工程図である。図６
は、２種類のアミノ化合物を交互に用いる場合の本発明
の分析方法を示す図５に続く工程図である。ここで用い
られるアミノ化合物の一つはアミノフルオレセインであ
る。この化合物の構造式を図７に示す。アミノ化合物の
他の一つとしては、アミノテトラメチルローダミンを用
いる。この化合物の構造式を図８に示す。
【００１４】表１にこれらのアミノ化合物の、最大励起
波長と、最大蛍光波長とを示す。
波長と、最大蛍光波長とを示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】実験手順を説明する。図５中の、X1-NH2、
はアミノフルオレセインを、図６中のX2-NH2、はアミノ
テトラメチルローダミンを、それぞれ示す。まず、タン
パク質にＰＩＴＣを作用させ、ＰＴＣタンパク質誘導体
を生成させる。次に、このＰＴＣタンパク質誘導体に酸
を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘導体と、アミノ末端のア
ミノ酸を一つ失ったタンパク質とを生成させる。ＡＴＺ
アミノ酸誘導体とアミノ末端のアミノ酸を一つ失ったタ
ンパク質とを含む混合物から、ＡＴＺアミノ酸誘導体を
取りだし、アミノフルオレセインを作用させてＰＴＣア
ミノ酸誘導体を生成させ、一つの系の高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）で分離し、そのＰＴＣアミノ酸
誘導体を同定する。この同定において用いる蛍光検出の
条件は、励起波長４８６ｎｍ、蛍光波長５１３ｎｍ、で
ある。
はアミノフルオレセインを、図６中のX2-NH2、はアミノ
テトラメチルローダミンを、それぞれ示す。まず、タン
パク質にＰＩＴＣを作用させ、ＰＴＣタンパク質誘導体
を生成させる。次に、このＰＴＣタンパク質誘導体に酸
を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘導体と、アミノ末端のア
ミノ酸を一つ失ったタンパク質とを生成させる。ＡＴＺ
アミノ酸誘導体とアミノ末端のアミノ酸を一つ失ったタ
ンパク質とを含む混合物から、ＡＴＺアミノ酸誘導体を
取りだし、アミノフルオレセインを作用させてＰＴＣア
ミノ酸誘導体を生成させ、一つの系の高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）で分離し、そのＰＴＣアミノ酸
誘導体を同定する。この同定において用いる蛍光検出の
条件は、励起波長４８６ｎｍ、蛍光波長５１３ｎｍ、で
ある。
【００１７】次に、アミノ末端のアミノ酸を一つ失った
タンパク質にＰＩＴＣを作用させ、ＰＴＣタンパク質誘
導体を生成させる。次に、このＰＴＣタンパク質誘導体
に酸を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘導体と、アミノ末端
のアミノ酸を一つ失ったタンパク質とを生成させる。Ａ
ＴＺアミノ酸誘導体とアミノ末端のアミノ酸をさらに一
つ失ったタンパク質とを含む混合物から、ＡＴＺアミノ
酸誘導体を取りだし、アミノテトラメチルローダミンを
作用させてＰＴＣアミノ酸誘導体を生成させ、そのＰＴ
Ｃアミノ酸誘導体をもう一つの異なった系のＨＰＬＣで
分離し同定する。この同定において用いる蛍光検出の条
件は、励起波長５４４ｎｍ、蛍光波長５６７ｎｍ、であ
る。
タンパク質にＰＩＴＣを作用させ、ＰＴＣタンパク質誘
導体を生成させる。次に、このＰＴＣタンパク質誘導体
に酸を作用させ、ＡＴＺアミノ酸誘導体と、アミノ末端
のアミノ酸を一つ失ったタンパク質とを生成させる。Ａ
ＴＺアミノ酸誘導体とアミノ末端のアミノ酸をさらに一
つ失ったタンパク質とを含む混合物から、ＡＴＺアミノ
酸誘導体を取りだし、アミノテトラメチルローダミンを
作用させてＰＴＣアミノ酸誘導体を生成させ、そのＰＴ
Ｃアミノ酸誘導体をもう一つの異なった系のＨＰＬＣで
分離し同定する。この同定において用いる蛍光検出の条
件は、励起波長５４４ｎｍ、蛍光波長５６７ｎｍ、であ
る。
【００１８】以降これら一連の操作を繰り返す。すなわ
ち、奇数番目のサイクルにおいてはアミノフルオレセイ
ンを用いて蛍光検出を行い、その条件を、励起波長４８
６ｎｍ、蛍光波長５１３ｎｍ、とする。偶数番目のサイ
クルにおいてはアミノテトラメチルローダミンを用いて
蛍光検出を行い、その条件を、励起波長５４４ｎｍ、蛍
光波長５６７ｎｍ、とする。これによって、奇数番目の
サイクルにおけるエドマン反応の反復収率が１００％に
満たないことに起因するＰＴＣアミノ酸誘導体は、偶数
番目のサイクルにおける同定の際に検出されない。また
同様に、偶数番目のサイクルにおけるエドマン反応の反
復収率が１００％に満たないことに起因するＰＴＣアミ
ノ酸誘導体は、奇数番目のサイクルにおける同定の際に
検出されない。
ち、奇数番目のサイクルにおいてはアミノフルオレセイ
ンを用いて蛍光検出を行い、その条件を、励起波長４８
６ｎｍ、蛍光波長５１３ｎｍ、とする。偶数番目のサイ
クルにおいてはアミノテトラメチルローダミンを用いて
蛍光検出を行い、その条件を、励起波長５４４ｎｍ、蛍
光波長５６７ｎｍ、とする。これによって、奇数番目の
サイクルにおけるエドマン反応の反復収率が１００％に
満たないことに起因するＰＴＣアミノ酸誘導体は、偶数
番目のサイクルにおける同定の際に検出されない。また
同様に、偶数番目のサイクルにおけるエドマン反応の反
復収率が１００％に満たないことに起因するＰＴＣアミ
ノ酸誘導体は、奇数番目のサイクルにおける同定の際に
検出されない。
【００１９】このようにして、ある任意のサイクルにお
いて、一サイクル前のエドマン分解において１００％の
収率が得られないことに起因するバックグラウンドシグ
ナルの影響を避けることができる。これは、奇数番目の
サイクルにおいてはアミノテトラメチルローダミンを用
いて蛍光検出を行い、その条件を、励起波長５４４ｎ
ｍ、蛍光波長５６７ｎｍ、とし、偶数番目のサイクルに
おいてはアミノフルオレセインを用いて蛍光検出を行
い、その条件を、励起波長４８６ｎｍ、蛍光波長５１３
ｎｍ、とした場合でも同じである。
いて、一サイクル前のエドマン分解において１００％の
収率が得られないことに起因するバックグラウンドシグ
ナルの影響を避けることができる。これは、奇数番目の
サイクルにおいてはアミノテトラメチルローダミンを用
いて蛍光検出を行い、その条件を、励起波長５４４ｎ
ｍ、蛍光波長５６７ｎｍ、とし、偶数番目のサイクルに
おいてはアミノフルオレセインを用いて蛍光検出を行
い、その条件を、励起波長４８６ｎｍ、蛍光波長５１３
ｎｍ、とした場合でも同じである。
【００２０】以上述べてきた内容をまとめると以下のよ
うになる。ＡＴＺアミノ酸誘導体と一般式Ｘ−ＮＨ2 で
表されるアミノ化合物とを反応させ、ＰＴＣアミノ酸誘
導体とし、そのＰＴＣアミノ酸誘導体を検出する、とい
う一連の工程から構成されるサイクルを、分析するアミ
ノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方法におい
て、複数のアミノ化合物を用いた。これにより、連続す
るサイクルの前後において、ＰＴＣアミノ酸誘導体を同
定する際に検出器あるいは検出波長といった検出手段を
異なったものとすることができる。すなわち、ある任意
のサイクルにおいて、一サイクル前のエドマン分解にお
いて１００％の収率が得られないことに起因するバック
グラウンドシグナルの影響を避けることができる。
うになる。ＡＴＺアミノ酸誘導体と一般式Ｘ−ＮＨ2 で
表されるアミノ化合物とを反応させ、ＰＴＣアミノ酸誘
導体とし、そのＰＴＣアミノ酸誘導体を検出する、とい
う一連の工程から構成されるサイクルを、分析するアミ
ノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方法におい
て、複数のアミノ化合物を用いた。これにより、連続す
るサイクルの前後において、ＰＴＣアミノ酸誘導体を同
定する際に検出器あるいは検出波長といった検出手段を
異なったものとすることができる。すなわち、ある任意
のサイクルにおいて、一サイクル前のエドマン分解にお
いて１００％の収率が得られないことに起因するバック
グラウンドシグナルの影響を避けることができる。
【００２１】このようにして、バックグラウンドシグナ
ルの上昇によりＳ／Ｎ比が低下することを避けて、容易
にタンパク質のアミノ酸配列を決定することが可能にな
った。
ルの上昇によりＳ／Ｎ比が低下することを避けて、容易
にタンパク質のアミノ酸配列を決定することが可能にな
った。
【００２２】
【発明の効果】ここまで説明したように、本発明の重要
な点は、バックグラウンドシグナルの上昇によりＳ／Ｎ
比が低下することを避けて、容易にタンパク質のアミノ
酸配列を決定することが可能になったことである。
な点は、バックグラウンドシグナルの上昇によりＳ／Ｎ
比が低下することを避けて、容易にタンパク質のアミノ
酸配列を決定することが可能になったことである。
【００２３】実施例においては、アミノフルオレセイン
とアミノテトラメチルローダミンとを交互に用いる例を
示したが、他のアミノ化合物を複数、すなわち２種類あ
るいはそれ以上、用いても可能なことは明らかであり、
実施例に制約されない。よって、本発明によるタンパク
質あるいはペプチドのアミノ酸配列を決定する方法はそ
の工業的価値が大である。
とアミノテトラメチルローダミンとを交互に用いる例を
示したが、他のアミノ化合物を複数、すなわち２種類あ
るいはそれ以上、用いても可能なことは明らかであり、
実施例に制約されない。よって、本発明によるタンパク
質あるいはペプチドのアミノ酸配列を決定する方法はそ
の工業的価値が大である。
【図１】本発明の分析方法を示す工程図である。
【図２】ＰＩＴＣを用いる、従来の分析方法を示したも
のである。
のである。
【図３】放射性同位体元素で標識したアミノ化合物を反
応させる、従来の分析方法を示したものである。
応させる、従来の分析方法を示したものである。
【図４】蛍光性アミノ化合物を反応させる、従来の分析
方法を示したものである。
方法を示したものである。
【図５】２種類のアミノ化合物を交互に用いる場合の本
発明の分析方法を示す工程図である。
発明の分析方法を示す工程図である。
【図６】２種類のアミノ化合物を交互に用いる場合の本
発明の分析方法を示す工程図である。
発明の分析方法を示す工程図である。
【図７】アミノフルオレセインの構造式を示す。
【図８】アミノテトラメチルローダミンの構造式を示
す。
す。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭55−110955（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−264264（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−196858（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−71045（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−68551（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−310862（ＪＰ，Ａ) 特表 平７−502015（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/68
Claims (6)
- 【請求項１】 ２−アニリノ−５−チアゾリノンアミノ
酸誘導体と一般式Ｘ−ＮＨ2 で表されるアミノ化合物と
を反応させ、フェニルチオカルバミルアミノ酸誘導体と
し、そのフェニルチオカルバミルアミノ酸誘導体を検出
する、という一連の工程から構成されるサイクルを、分
析するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方
法において、少なくとも２種類以上のアミノ化合物を用
いることを特徴とするアミノ酸配列を決定する方法。 - 【請求項２】 ２−アニリノ−５−チアゾリノンアミノ
酸誘導体と一般式Ｘ−ＮＨ2 で表されるアミノ化合物と
を反応させ、フェニルチオカルバミルアミノ酸誘導体と
し、そのフェニルチオカルバミルアミノ酸誘導体を検出
する、という一連の工程から構成されるサイクルを、分
析するアミノ酸の残基数と同じ回数くり返し実行する方
法において、少なくとも２種類以上のアミノ化合物を交
互に用いることを特徴とする、請求項１記載のアミノ酸
配列を決定する方法。 - 【請求項３】 前記２−アニリノ−５−チアゾリノンア
ミノ酸誘導体は、タンパク質あるいはペプチドにフェニ
ルイソチオシアネートを作用させ、フェニルチオカルバ
ミルタンパク質あるいはフェニルチオカルバミルペプチ
ドを生成させた後に酸を作用させる、エドマン分解法、
によって得ることを特徴とする請求項１記載のアミノ酸
誘導体の高感度検出法。 - 【請求項４】 前記アミノ化合物は、蛍光性アミンであ
ることを特徴とする請求項１記載のアミノ酸配列を決定
する方法。 - 【請求項５】 前記蛍光性アミンは、アミノフルオレセ
インであることを特徴とする請求項４記載のアミノ酸配
列を決定する方法。 - 【請求項６】 前記蛍光性アミンは、アミノテトラメチ
ルローダミンであることを特徴とする請求項４記載のア
ミノ酸配列を決定する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20973393A JP3335434B2 (ja) | 1993-08-24 | 1993-08-24 | アミノ酸配列を決定する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20973393A JP3335434B2 (ja) | 1993-08-24 | 1993-08-24 | アミノ酸配列を決定する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0763766A JPH0763766A (ja) | 1995-03-10 |
| JP3335434B2 true JP3335434B2 (ja) | 2002-10-15 |
Family
ID=16577742
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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