JP3281919B2

JP3281919B2 - 肥満細胞脱顆粒阻害剤

Info

Publication number: JP3281919B2
Application number: JP33266699A
Authority: JP
Inventors: 修一岡; 真美井上; 和哉中込; しのぶ高木; 進丸山; 登冨塚; 祥太伊東; 清隆畑田
Original assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 1997-03-27
Filing date: 1999-11-24
Publication date: 2002-05-13
Anticipated expiration: 2017-03-27
Also published as: JP2000143528A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、肥満細胞脱顆粒阻
害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】肥満細胞は脱顆粒することによってヒス
タミンを遊離し、喘息、枯草熱、アトピー性湿疹などの
即時型アレルギー反応を誘起することが知られている。
このため、肥満細胞の脱顆粒を阻害することによってア
レルギーを軽減することができるものと考えられてい
る。したがって、効果的な肥満細胞脱顆粒阻害剤を開発
して、有用な抗アレルギー剤を提供することが望まれて
いる。ヒアルロニダーゼ活性の阻害と肥満細胞脱顆粒阻
害機構の間には、何らかの関係が存在するとの報告がな
されているが〔掛川ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．７，
Ｓ−９６（１９８４）およびＣｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂ
ｕｌｌ．３３（１１）５０７９−５０８２（１９８
５）〕、両者の関係は完全に明らかにされているとはい
えない。

【０００３】本発明者らが着目した藻類は、近海、湖、
池などに豊富に生育する植物であり、健康食品として食
用に供されるとともに、飼料成分や肥料成分としても広
く用いられている。藻類は、ほとんどが炭水化物と灰分
からなっており、陸上植物とは異なる成分を含有してい
る。しかしながら、藻類には多種多様の成分が含まれて
いるため、藻類の構成成分とその含有量はいまだ完全に
分析されるに至っていない。これまでに、藻類に含まれ
ている成分のうち非水溶性のアルギン酸については、抗
アレルギー作用、抗炎症作用、ヒアルロニダーゼ活性阻
害作用および肥満細胞脱顆粒阻害作用があることが報告
されているが、それ以外の成分について検討した例はな
い。とくに藻類の水溶性成分に抗アレルギー作用、抗炎
症作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用および肥満細胞
脱顆粒阻害作用があるか否かを検討した文献はまったく
存在しておらず、これらの作用の存在を示唆する研究も
何ら公表されていない。また、これらの作用活性を強化
する方法についても、検討例はまったくない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、藻類の水溶性成分を利用することによって、安全性
が高くて容易に製造することができる新しい肥満細胞脱
顆粒阻害剤を提供することを課題として検討を進めた。

【０００５】

【課題を解決するための手段】これらについて鋭意検討
を行なった結果、本発明者らは、藻類の熱水抽出物を用
いればこれらの課題を解決することができることを見出
して本発明を完成した。すなわち、本発明は、藻類を、
２００〜５００℃、６０〜４００気圧の高温高圧下に水
で抽出した熱水抽出物を活性成分として含有することを
特徴とする肥満細胞脱顆粒阻害剤を提供するものであ
る。

【０００６】本発明で使用する藻類の種類は特に制限さ
れない。藻類は、水中に生育し同化色素を有して独立栄
養生活をする下等植物の総称であり、厳密には光合成の
過程において酸素を放出する有胚植物以外の生物と定義
される。本発明で使用する藻類は、この定義に当てはま
る植物の中から選択する。具体的には、藍藻類、紅藻
類、灰色藻類、クリプト藻類、渦鞭藻類、黄金色藻類、
珪藻類、褐藻類、黄緑藻類、ハプト藻類、ラフィド藻類
（緑色鞭藻類）、ボーケリア藻類、ミドリムシ藻類、ブ
ラシノ藻類、緑藻類、車軸藻類をはじめとするさまざま
な藻類のいずれに属するものを使用してもよい。好まし
い藻類は、緑藻類、褐藻類、紅藻類である。

【０００７】本発明で使用する藻類の生育場所は特に限
定されない。したがって、海水中に生育するものであっ
ても、湖、池、沼などの淡水中に生育するものであって
も構わない。また、生育場所の深度、透明度、水中酸素
濃度、水中二酸化炭素濃度、水中および地中の化合物濃
度、水中および地中の温度、生物分布、土質、水流速
度、地形、緯度、経度、気候もとくに制限されない。さ
らに、本発明で使用する藻類は、天然に生育しているも
ののみならず、人工的に養殖したものであっても構わな
い。また、本発明で使用する藻類の採取時期や藻類の生
育年数についても特に制限されない。

【０００８】本発明では、これらの多種多様な藻類の中
から一種類だけを選択して使用してもよいし、複数種を
組み合わせて使用してもよい。活性が高い藻類を組み合
わせて使用すれば、より高い活性の発現が期待できる。
また、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用が強い藻類と、肥
満細胞脱顆粒阻害活性が強い藻類を組み合わせれば、よ
り有効な抗アレルギー作用と抗炎症作用の発現が期待で
きるため、このような組み合わせを利用するのも好まし
い。本発明では、藻類を熱水で抽出した抽出物を使用す
る。抽出に使用する水は、必ずしも純水である必要はな
い。例えば、水道水や不純物を含むものであっても構わ
ないが、活性物質の抽出を妨げる成分を含むものであっ
てはならない。抽出に用いる水の温度は、２００℃〜５
００℃である。したがって、特許請求の範囲に記載され
る抽出用の水は、これらの沸騰水や超臨界状態にある水
も含むものである。抽出に使用する水の量は、藻類中に
含まれる水溶性活性成分を十分に溶解しうる量であるの
が好ましい。

【０００９】本発明において、抽出は当業界で通常用い
られている方法にしたがって行なうことができる。通常
は、採取した藻類を洗浄して表面に付着した汚れや生物
を除去した後、裁断してから抽出する。裁断に先立って
風乾や凍結乾燥処理を行なってもよい。また、裁断によ
って藻類の大きさを２〜５ｍｍ程度にしておくのが好ま
しい。裁断した藻類は、通常用いられる抽出器に水とと
もに導入して抽出する。沸騰水または超臨界状態にある
水を使用して抽出する場合には、水の蒸気圧に耐え得る
抽出器を使用する必要がある。抽出時の圧力は、６０〜
４００気圧に設定する。高圧下における抽出は、例えば
図１に示す抽出装置を用いて水１ｍｌあたり藻類１０〜
４０ｍｇの割合で混合して行なうことができる。このよ
うな高温高圧下で抽出を行なう場合には、抽出時間を長
くし過ぎると活性成分が過度に分解したり、化学反応を
起こすことがある。このため、高温高圧下で抽出を行な
うときには、抽出時間を３分以内にするのが好ましい。
中でも、１分以内にするのがより好ましく、３０秒以内
にするのがもっとも好ましい。

【００１０】常温水で抽出した抽出物と熱水で抽出した
抽出物の活性を比較すると、熱水抽出物の方が高い肥満
細胞脱顆粒阻害活性を示すことが確認されている（試験
例２）。このことは、熱水抽出物の方が抗アレルギー活
性が高いことを示している。また、この事実は、藻類を
比較的低い温度で抽出した抽出物を加熱することによっ
て、肥満細胞脱顆粒阻害活性と抗アレルギー活性を強化
することができることを示唆するものである。

【００１１】水で抽出した抽出液は、そのまま肥満細胞
脱顆粒阻害剤として使用することができる。また、必要
に応じて希釈または濃縮して適当な濃度に調節すること
もできる。さらに、ゼラチンなどのゲル化剤を添加した
り、ｐＨを調節したりすることによって、固体状または
ペースト状の肥満細胞脱顆粒阻害剤にすることもでき
る。あるいは、抽出液を噴霧乾燥することによって、粉
末状の肥満細胞脱顆粒阻害剤にすることもできる。この
ように、本発明の組成物の濃度や形状はとくに制限され
ず、その用途に応じて適宜決定することができる。

【００１２】本発明の組成物には、藻類の水抽出物以外
にゼラチン、乳糖、脂肪、油脂などの担体を含ませてお
くことができる。また、アルコールなどの溶媒や、カル
ボキシメチルセルロースなどの希釈剤、保存剤、結合
剤、崩壊剤、湿潤剤、滑沢剤などを組み合わせて使用し
てもよい。さらに、本発明の組成物には、藻類の水抽出
物以外の活性成分を含ませてもよい。本発明の組成物
は、従来から食用に供されている藻類の抽出物を活性成
分としているため、生体に対する安全性が高い。このた
め、本発明の組成物は、化粧品、医薬品、食品などの幅
広い製品中に含有させることができる。これらの製品に
おける本発明の活性成分の濃度は、所望の効果を奏する
範囲内で適宜選択することができる。化粧品の場合に
は、例えば１〜１００ｐｐｍにすることができる。ま
た、人体に投与する場合には、例えば１日あたり０．５
μｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重として、１回から数回に分け
て投与することができる。医薬品にする場合の剤形は、
投与目的や投与経路等に応じて、錠剤、カプセル剤、注
射剤、点滴剤、散剤、座剤、顆粒剤、軟膏剤、懸濁剤、
乳剤などにすることができる。

【００１３】本発明の組成物は抗アレルギー作用を有す
ることから、食品に含ませることによってその食品を抗
アレルギー機能性食品にすることができる。対象となる
食品の種類は，これらの活性成分の抗アレルギー作用が
阻害されないものであれば特に限定されない。例えば、
ジュース、清涼飲料水、紅茶などの飲料、パンやもちな
どの加工食品、あめなどの菓子類、カップラーメンなど
のインスタント食品、醤油やみりんなどの調味料、ふり
かけ、みそなどの広範な食品に含ませることができる。

【００１４】

【実施例】以下に実施例および試験例を記載して、本発
明をさらに具体的に説明する。ただし、これらの実施例
および試験例によって、本発明の範囲は限定的に解釈さ
れることはない。

【００１５】（実施例）本実施例において、藻類の水抽
出物を含有する肥満細胞脱顆粒阻害剤の製造方法を具体
的に説明する。藻類として、アカバギンナンソウ、エゾ
ノネジモク、ウルシグサ、ホソバナミノハナ、ハネモ、
カギノリ、スサビノリ、エゾヤハズ、ワタモ、アカモ
ク、ヌメハノリ、フシスジモク、ハイミル、ウメゾウメ
ン、ツヤナシシオグサ、ホソメコンブ、フクロノリ、ミ
ル、ウミトラノオ、オオソゾ、ショウジョウケノリ、ハ
リガネ、タマジュズモ、ユナ、ヒジキ、ノリ、イワヒ
ゲ、遊走子放出ワカメ、ピリヒバ、コンブ、ネバリモ、
ダルス、メカブ、コスジフシツナギ、マツモ、アラメ、
トゲモクおよびケウルシグサを採取した。

【００１６】各藻類を十分に水洗いすることによって藻
類表面に付着している汚れや生物を除去し、風乾して凍
結乾燥した。その後、再び表面を水洗いして、２〜５ｍ
ｍ程度の大きさに裁断した。得られた裁断藻類は、常温
水抽出用と熱水抽出用に２分して、それぞれ以下の抽出
操作に使用した。常温水抽出用の裁断藻類１０〜１００
ｍｇを蒸留水５〜８ｍｌとともに抽出用容器の中に入
れ、栓をして約３０分間常温で震盪した。その後、濾過
することによって裁断藻類を除き、抽出液を得た。この
抽出液はそのまま肥満細胞脱顆粒阻害剤として使用する
ことができる。

【００１７】一方、熱水抽出用の裁断藻類１００ｍｇ
を、脱酸素した蒸留水５ｍｌとともに耐圧反応管（ＳＵ
Ｓ３１６製、内径０．９３ｃｍ、外径１．２７ｃｍ、長
さ１５ｃｍ、容積１０．５ｃｍ３）に入れ、反応管の
内部を窒素置換して栓をした。この反応管を図１に示す
震盪装置に保持し、３００℃の溶融塩バス中に入れて３
０秒間震盪した。反応管に挿入した熱電対によって反応
管内部の温度変化を調べたところ、反応管を溶融塩バス
に入れてから２０〜２５秒で３００℃に達した。バスに
入れて３０秒間震盪した後、直ちにバスから反応管を取
り出し、氷水中に入れて冷却した。その後、濾過するこ
とによって裁断藻類を除き、抽出液を得た。この抽出液
は、そのまま肥満細胞脱顆粒阻害剤として使用すること
ができる。

【００１８】（試験例１）本試験例において、上記実施
例で製造した抽出液の一部について、肥満細胞脱顆粒阻
害活性を測定した。測定は以下の手順で行なった。タイ
ロード液２０ｍｌをウイスター系ラット腹腔内に注入
し、ピペットを用いて腹水を取り出した。この腹水を４
℃で遠心分離（１００ｘｇ、１２分間）することによっ
て、沈殿した細胞を収集した。この細胞をタイロード液
２ｍｌに懸濁し、牛血清アルブミン生理食塩水（比重
１．０６８）４ｍｌに重層した。４℃で再度遠心分離
（１００ｘｇ、１２分間）して、沈殿した肥満細胞を収
集した。抗ＤＮＰマウスモノクローナルＩｇＥ抗体を用
いて３７℃で１時間処理することによって、肥満細胞に
ＩｇＥを結合させて感作状態にした。タイロード液で数
回洗浄した後、０．２％牛血清アルブミン含有タイロー
ド液に肥満細胞を懸濁させて、肥満細胞濃度が１×１０
６細胞／ｍｌのＩｇＥ感作肥満細胞懸濁液を調製し
た。ＮａＣｌ（８．００ｇ／ｌ）、ＫＣ１（０．２０ｇ
／ｌ）、Ｎａ２ＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ（１．１５ｇ／
ｌ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．２ｇ／ｌ）を含有する生
理的塩類混合溶液（ＰＢＳ溶液）に藻類の常温水抽出液
または熱水抽出液を固形分濃度１．２５ｍｇ／ｍｌで溶
解し、この溶液を上記懸濁液に濃度２５０μｇ／ｍｌに
なるように添加して、３７℃で１０分間インキュベート
した。さらに抗原（ＤＮＰ−ＢＳＡ）（最終濃度として
２００ｎｇ／ｍｌ）およびホスファチジルセリン（最終
濃度として１０μｇ／ｍｌ）含有ＰＢＳ溶液を脱顆粒誘
発剤として添加し、３７℃で１０分間インキュベートし
た。遠心分離（１５００ｘｇ、５分間）して得られた上
清中のヒスタミン量を、オルトフタルアルデヒドでポス
トカラムラベルしてＨＰＬＣにより定量した。以下の式
にしたがってヒスタミン遊離阻害率を求めて活性を評価
した。

【００１９】

【数１】Ａ＝細胞をＰＢＳ溶液だけとインキュベートした際に遊
離するヒスタミンの量Ｂ＝サンプル存在下で細胞を脱顆粒誘発剤とインキュベ
ートした際に遊離するヒスタミンの量Ｃ＝サンプル非存在下で細胞を脱顆粒誘発剤とインキュ
ベートした際に遊離するヒスタミンの量

【００２０】測定結果は以下の表に示すとおりであっ
た。

【表１】藻類の種類常温水抽出液熱水抽出液アカバギンナンソウ５６１エゾノネジモク１２６１ハネモ − ２４エゾヤハズ − （１３６）ヌメハノリ３７１フシスジモク７６５ツヤナシシオグサ − ３７フクロノリ − ２７ショウジョウケノリ４６２タマジュズモ１７５ユナ１４９７ヒジキ − ６４ノリ − ３９イワヒゲ − ４４ピリヒバ − １０コンブ４９８ネバリモ１６１ダルス７３５メカブ１０８７トゲモク２８（１０７）ケウルシグサ − ７９（注）「−」は、活性が確認されなかったことを示す。（）内の数値はノイズピ−クとの重なりがあることを示す。

【００２１】上記試験結果は、広範な藻類の水抽出液に
肥満細胞脱顆粒阻害活性があることを示している。とく
にエゾヤハズとトゲモクの熱水抽出液には極めて高い肥
満細胞脱顆粒阻害活性が確認された。また、一般に水抽
出液よりも熱水抽出液の方が高活性であることが確認さ
れた。

【００２２】

【発明の効果】本明細書に示した藻類の水抽出物は、肥
満細胞脱顆粒阻害剤の活性成分として有用である。藻類
の水抽出物は安全性が高いうえに簡単な方法で調製する
ことができるため、化粧品、医薬品、食品などへの利用
性が高くその応用範囲はきわめて広いものと期待され
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の熱水による抽出を行なう際に使用する
ことができる装置の一例を示した図である。

【符号の説明】

１：震盪装置２：熱電対３：耐圧反応管４：高温バス

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩ // Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｂ (72)発明者冨塚登茨城県つくば市東１丁目１番３工業技術院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者伊東祥太宮城県仙台市宮城野区苦竹４丁目２番１号工業技術院東北工業技術研究所内 (72)発明者畑田清隆宮城県仙台市宮城野区苦竹４丁目２番１号工業技術院東北工業技術研究所内審査官鶴見秀紀 (56)参考文献特開平９−67266（ＪＰ，Ａ) 特開平９−208475（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 35/80 A61K 7/00 A23L 1/30 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】藻類を、２００〜５００℃、６０〜４０
０気圧の高温高圧下に水で抽出した熱水抽出物を活性成
分として含有することを特徴とする肥満細胞脱顆粒阻害
剤。