JP3270558B2 - Ｌ−フェニルアラニンの精製方法および製造方法 - Google Patents
Ｌ−フェニルアラニンの精製方法および製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、Ｌ−フェニルアラニン
の改良された精製方法および製造方法に関する。例え
ば、桂皮酸を原料としてアンモニアの存在下、フェニル
アラニンアンモニアリアーゼを用いた反応により生成し
たＬ−フェニルアラニンの精製に好適な改良された精製
方法に関する。Ｌ−フェニルアラニンは必須アミノ酸の
一種であり、アミノ酸輸液等の医薬品に使用され、又、
ペプチド系甘味料であるα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンメチルエステルの構成アミノ酸として重
要な成分である。
の改良された精製方法および製造方法に関する。例え
ば、桂皮酸を原料としてアンモニアの存在下、フェニル
アラニンアンモニアリアーゼを用いた反応により生成し
たＬ−フェニルアラニンの精製に好適な改良された精製
方法に関する。Ｌ−フェニルアラニンは必須アミノ酸の
一種であり、アミノ酸輸液等の医薬品に使用され、又、
ペプチド系甘味料であるα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンメチルエステルの構成アミノ酸として重
要な成分である。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−フェニルアラニンの製造方法として
は、化学合成法、発酵法、酵素法等が挙げられる。酵素
法としては、例えば桂皮酸を原料としてアンモニアの存
在下、フェニルアラニンアンモニアリアーゼを用いる方
法がある。この反応は可逆的であり、原料である桂皮酸
は反応液中に残存するので、精製工程に於て桂皮酸を除
去し、効率的にＬ−フェニルアラニンを回収しなければ
ならない。
は、化学合成法、発酵法、酵素法等が挙げられる。酵素
法としては、例えば桂皮酸を原料としてアンモニアの存
在下、フェニルアラニンアンモニアリアーゼを用いる方
法がある。この反応は可逆的であり、原料である桂皮酸
は反応液中に残存するので、精製工程に於て桂皮酸を除
去し、効率的にＬ−フェニルアラニンを回収しなければ
ならない。
【０００３】従来、Ｌ−フェニルアラニンの精製方法と
しては、イオン交換樹脂吸着剤を用いる方法（特開昭６
１−１９４０５６）、濃縮・晶析による方法（特開昭６
０−１３３８９３）、低級アルコール類を用いる方法
（米国特許４７３１４６９）等がある。
しては、イオン交換樹脂吸着剤を用いる方法（特開昭６
１−１９４０５６）、濃縮・晶析による方法（特開昭６
０−１３３８９３）、低級アルコール類を用いる方法
（米国特許４７３１４６９）等がある。
【０００４】前記のＬ−フェニルアラニンの精製法に於
ては、工業規模で実施する場合、それぞれ次に述べるよ
うな問題点がある。イオン交換樹脂吸着法は、特開昭６
１−１９４０５６に記載されている如く、Ｌ−フェニル
アラニンと桂皮酸のクロマト分離を行う方法であるが、
容積効率が悪く、しかも多大なエネルギーを消費し大規
模生産には不都合である。
ては、工業規模で実施する場合、それぞれ次に述べるよ
うな問題点がある。イオン交換樹脂吸着法は、特開昭６
１−１９４０５６に記載されている如く、Ｌ−フェニル
アラニンと桂皮酸のクロマト分離を行う方法であるが、
容積効率が悪く、しかも多大なエネルギーを消費し大規
模生産には不都合である。
【０００５】濃縮・晶析による方法は、特開昭６０−１
３３８９３に記載されている如く、桂皮酸を含有したＬ
−フェニルアラニンの水溶液のｐＨを６〜９に調整し
て、濃縮後冷却晶析を行っているが、この方法では桂皮
酸を完全に分離することは難しい。又、同じく特開昭６
０−１３３８９３には別法として、桂皮酸を含有したＬ
−フェニルアラニンの水溶液のｐＨを強酸性にし、沈澱
してくる桂皮酸を除去した後にＬ−フェニルアラニンを
精製する方法が記載されているが、桂皮酸を除くために
強酸性の溶液について濾過等の分離操作をしなければな
らず、操作が煩雑で容積効率が悪い。又、桂皮酸の除去
後、強酸性ではＬ−フェニルアラニンの溶解度が高いの
で、溶液をＬ−フェニルアラニンの等電点近辺迄中和す
る必要があり、このため桂皮酸が除去される代わりに大
量の塩が混入するという不都合がある。
３３８９３に記載されている如く、桂皮酸を含有したＬ
−フェニルアラニンの水溶液のｐＨを６〜９に調整し
て、濃縮後冷却晶析を行っているが、この方法では桂皮
酸を完全に分離することは難しい。又、同じく特開昭６
０−１３３８９３には別法として、桂皮酸を含有したＬ
−フェニルアラニンの水溶液のｐＨを強酸性にし、沈澱
してくる桂皮酸を除去した後にＬ−フェニルアラニンを
精製する方法が記載されているが、桂皮酸を除くために
強酸性の溶液について濾過等の分離操作をしなければな
らず、操作が煩雑で容積効率が悪い。又、桂皮酸の除去
後、強酸性ではＬ−フェニルアラニンの溶解度が高いの
で、溶液をＬ−フェニルアラニンの等電点近辺迄中和す
る必要があり、このため桂皮酸が除去される代わりに大
量の塩が混入するという不都合がある。
【０００６】低級アルコール類を用いる方法は、米国特
許４７３１４６９に記載されている如く、Ｌ−フェニル
アラニンの濃縮液に低級アルコール類を添加し、桂皮酸
を低級アルコール類に溶解することにより除去する方法
であるが、この方法では、Ｌ−フェニルアラニンに対し
て約５倍重量といった多量の低級アルコール類が必要で
ある為、桂皮酸が除去される代わりにＬ−フェニルアラ
ニンの収率が悪くなる上に容積効率が悪く溶媒回収設備
も大きくなる。又、Ｌ−フェニルアラニンの製造を行う
際、未反応の桂皮酸の回収は大きな課題であり、Ｌ−フ
ェニルアラニンを取り出した後の晶析濾液には不純物が
多量に混入している為、回収される桂皮酸の純度が低い
といった不都合を有する。又、Ｌ−フェニルアラニンの
水に対する溶解度は低く、Ｌ−フェニルアラニンの水溶
液からＬ−フェニルアラニンの結晶を析出させる際、非
常に容積効率が悪いといった問題が残されている。
許４７３１４６９に記載されている如く、Ｌ−フェニル
アラニンの濃縮液に低級アルコール類を添加し、桂皮酸
を低級アルコール類に溶解することにより除去する方法
であるが、この方法では、Ｌ−フェニルアラニンに対し
て約５倍重量といった多量の低級アルコール類が必要で
ある為、桂皮酸が除去される代わりにＬ−フェニルアラ
ニンの収率が悪くなる上に容積効率が悪く溶媒回収設備
も大きくなる。又、Ｌ−フェニルアラニンの製造を行う
際、未反応の桂皮酸の回収は大きな課題であり、Ｌ−フ
ェニルアラニンを取り出した後の晶析濾液には不純物が
多量に混入している為、回収される桂皮酸の純度が低い
といった不都合を有する。又、Ｌ−フェニルアラニンの
水に対する溶解度は低く、Ｌ−フェニルアラニンの水溶
液からＬ−フェニルアラニンの結晶を析出させる際、非
常に容積効率が悪いといった問題が残されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、Ｌ−
フェニルアラニンの製造に於て、原料である桂皮酸とＬ
−フェニルアラニンを効率的に分離し、高収率で高品質
のＬ−フェニルアラニンを工業的に有利に得る方法を提
供することである。
フェニルアラニンの製造に於て、原料である桂皮酸とＬ
−フェニルアラニンを効率的に分離し、高収率で高品質
のＬ−フェニルアラニンを工業的に有利に得る方法を提
供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記問題
点を解決するため鋭意検討を行い、桂皮酸を含むＬ−フ
ェニルアラニンの水溶液からＬ−フェニルアラニンの結
晶を取り出すにあたり、Ｌ−フェニルアラニンの水溶液
を濃縮する際、Ｌ−フェニルアラニンの結晶が析出し始
めた時点より、その溶液の一部または全部を取り出して
固液分離を行い、液相のみを濃縮液に戻し、連続的また
は断続的に濃縮を継続することにより、桂皮酸とＬ−フ
ェニルアラニンを効率的に分離できることを見い出し
た。さらに、桂皮酸が濃縮液中に多量に存在すると、桂
皮酸を含まないＬ−フェニルアラニンの収率が減少する
ことに着目し、桂皮酸を予めトルエンにより抽出する工
夫を加え、本発明を完成するに至った。
点を解決するため鋭意検討を行い、桂皮酸を含むＬ−フ
ェニルアラニンの水溶液からＬ−フェニルアラニンの結
晶を取り出すにあたり、Ｌ−フェニルアラニンの水溶液
を濃縮する際、Ｌ−フェニルアラニンの結晶が析出し始
めた時点より、その溶液の一部または全部を取り出して
固液分離を行い、液相のみを濃縮液に戻し、連続的また
は断続的に濃縮を継続することにより、桂皮酸とＬ−フ
ェニルアラニンを効率的に分離できることを見い出し
た。さらに、桂皮酸が濃縮液中に多量に存在すると、桂
皮酸を含まないＬ−フェニルアラニンの収率が減少する
ことに着目し、桂皮酸を予めトルエンにより抽出する工
夫を加え、本発明を完成するに至った。
【０００９】本発明のＬ−フェニルアラニンの精製方法
は、桂皮酸とＬ−フェニルアラニンを含む水溶液からト
ルエンで桂皮酸を抽出する工程、上記桂皮酸を抽出した
水溶液を濃縮しながら固液分離を行い、固相のみを取り
出す工程を含む。
は、桂皮酸とＬ−フェニルアラニンを含む水溶液からト
ルエンで桂皮酸を抽出する工程、上記桂皮酸を抽出した
水溶液を濃縮しながら固液分離を行い、固相のみを取り
出す工程を含む。
【００１０】本発明の方法は、特に桂皮酸を原料として
アンモニアの存在下、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いた反応によりＬ−フェニルアラニンを製造す
る方法に於ける反応液からのＬ−フェニルアラニンの精
製に有用である。
アンモニアの存在下、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いた反応によりＬ−フェニルアラニンを製造す
る方法に於ける反応液からのＬ−フェニルアラニンの精
製に有用である。
【００１１】本発明方法によれば、Ｌ−フェニルアラニ
ンと桂皮酸を効率的に分離でき、高品質のＬ−フェニル
アラニンを高収率でかつ工業的に有利に精製することが
可能となった。特に、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いて桂皮酸とアンモニアからＬ−フェニルアラ
ニンを合成する際に得られる原料としての桂皮酸と、製
品としてのＬ−フェニルアラニンの両方を含む反応液か
らのＬ−フェニルアラニンの分離、精製に本発明の精製
方法を用いることで、高収率で、かつ工業的に有利な精
製Ｌ−フェニルアラニンの製造を行うことができる。
ンと桂皮酸を効率的に分離でき、高品質のＬ−フェニル
アラニンを高収率でかつ工業的に有利に精製することが
可能となった。特に、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いて桂皮酸とアンモニアからＬ−フェニルアラ
ニンを合成する際に得られる原料としての桂皮酸と、製
品としてのＬ−フェニルアラニンの両方を含む反応液か
らのＬ−フェニルアラニンの分離、精製に本発明の精製
方法を用いることで、高収率で、かつ工業的に有利な精
製Ｌ−フェニルアラニンの製造を行うことができる。
【００１２】本発明のＬ−フェニルアラニンの精製方法
は、（ａ）桂皮酸とＬ−フェニルアラニンを主に含む水
溶液にトルエン抽出処理を行う工程、（ｂ）該トルエン
抽出処理後の水相を濃縮しながら固液分離を行う工程、
（ｃ）該固液分離で得られたＬ−フェニルアラニンの結
晶からなる固相を回収する工程を含む。
は、（ａ）桂皮酸とＬ−フェニルアラニンを主に含む水
溶液にトルエン抽出処理を行う工程、（ｂ）該トルエン
抽出処理後の水相を濃縮しながら固液分離を行う工程、
（ｃ）該固液分離で得られたＬ−フェニルアラニンの結
晶からなる固相を回収する工程を含む。
【００１３】（ａ）の工程において、水溶液のＬ−フェ
ニルアラニンの濃度は通常６重量％以下、好ましくは４
〜６重量％であり、桂皮酸の濃度は０．６重量以下、好
ましくは０．０１〜０．６重量％である。該水溶液の温
度はＬ−フェニルアラニンを溶解するに充分な温度であ
ればよく、好ましくは６０〜８０℃である。トルエン抽
出時の該水溶液のｐＨはｐＨ５以下、好ましくはｐＨ
４．５以下である。ｐＨ調整には鉱酸たとえば硫酸、塩
酸、燐酸等が用いられる。ｐＨ５をこえると桂皮酸の抽
出効率が悪くなる傾向がある。抽出に使用されるトルエ
ン量は水溶液量に対して通常５０重量％未満、好ましく
は８〜１５重量％であり、たとえば７０℃で１５分間攪
拌を行ないトルエン抽出処理が実施される。桂皮酸を含
むＬ−フェニルアラニン水溶液に対してトルエンを１５
重量％加えて７０℃で１５分間攪拌・静置により抽出を
行った場合の桂皮酸の抽出率はｐＨ４．０で約７０％、
ｐＨ５．５で約１０％であった。このようにして桂皮酸
の一部が抽出除去されたＬ−フェニルアラニンの水溶液
に対し濃縮操作をおこなう。
ニルアラニンの濃度は通常６重量％以下、好ましくは４
〜６重量％であり、桂皮酸の濃度は０．６重量以下、好
ましくは０．０１〜０．６重量％である。該水溶液の温
度はＬ−フェニルアラニンを溶解するに充分な温度であ
ればよく、好ましくは６０〜８０℃である。トルエン抽
出時の該水溶液のｐＨはｐＨ５以下、好ましくはｐＨ
４．５以下である。ｐＨ調整には鉱酸たとえば硫酸、塩
酸、燐酸等が用いられる。ｐＨ５をこえると桂皮酸の抽
出効率が悪くなる傾向がある。抽出に使用されるトルエ
ン量は水溶液量に対して通常５０重量％未満、好ましく
は８〜１５重量％であり、たとえば７０℃で１５分間攪
拌を行ないトルエン抽出処理が実施される。桂皮酸を含
むＬ−フェニルアラニン水溶液に対してトルエンを１５
重量％加えて７０℃で１５分間攪拌・静置により抽出を
行った場合の桂皮酸の抽出率はｐＨ４．０で約７０％、
ｐＨ５．５で約１０％であった。このようにして桂皮酸
の一部が抽出除去されたＬ−フェニルアラニンの水溶液
に対し濃縮操作をおこなう。
【００１４】（ｂ）の工程における、該トルエン抽出処
理後の水相を濃縮しながら固液分離を実施するための濃
縮−固液分離装置の概略図を第１図（図１）に示す。第
１図において１１はトルエン抽出処理後の桂皮酸とＬ−
フェニルアラニンからなる水溶液を貯蔵または濃度調整
する溶解槽を示す。１は濃縮缶で、ジャケット加熱あい
は加熱管を付属し、結晶成長促進のためドラフトチュー
ブを有する構造でもよい。溶解槽１１に満たされたトル
エン抽出処理後の桂皮酸とＬ−フェニルアラニンからな
る水溶液は溶解液供給ポンプ７を介して濃縮缶１に給液
される。濃縮缶に於いて蒸発した水蒸気は濃縮缶１の上
部に接続された蒸発ライン８を介し、凝縮機９において
凝縮され取り除かれる。濃縮の温度はＬ−フェニルアラ
ニンのラセミ化等の影響を考慮すると７０℃以下が好ま
しい。しかし、あまり低温であれば濃縮缶の真空ポンプ
の設備が過大となるので５０〜７０℃で操作されるのが
好ましい。濃縮缶１において、Ｌ−フェニルアラニンの
結晶が発生した時点でスラリーポンプ６により固液分離
機２に給液される。固液分離機２において分離された結
晶は結晶受器３へ排出される。固液分離機に於いて洗浄
ライン４により結晶洗浄を行ってもよい。結晶を分離し
た濾液は濾液ライン５から排出され、濾液送液ポンプ１
３を介して、濾液加熱器１０とパージ液ライン１５に分
配される。濾液加熱器１０を通過した溶液は濾液戻りラ
イン１２を介して濃縮缶１に戻る。連続的濃縮操作は第
１図の溶解槽１１に調整された水溶液がポンプ７を介し
て濃縮缶１に連続して給液され、濾液の一部がパージ液
バルブ１４を介してパージ液ライン１５から排出される
ことにより行われる。断続的濃縮操作は第１図の溶解槽
１１の水溶液が濃縮缶１へ連続して給液されるのではな
く、一度濃縮缶１に水溶液を満たし、固液分離しながら
濃縮操作を行う。この間、濃縮缶には溶解槽１１の新た
な水溶液の給液は行われないが、そのほかの結晶排出お
よび濾液の戻りと濾液の一部パージは連続的操作と同様
に行われる。たとえば濃縮時のＬ−フェニルアラニンの
濃度が１５重量％を超えた時点で溶解槽１１から新たな
水溶液の給液を行う。
理後の水相を濃縮しながら固液分離を実施するための濃
縮−固液分離装置の概略図を第１図（図１）に示す。第
１図において１１はトルエン抽出処理後の桂皮酸とＬ−
フェニルアラニンからなる水溶液を貯蔵または濃度調整
する溶解槽を示す。１は濃縮缶で、ジャケット加熱あい
は加熱管を付属し、結晶成長促進のためドラフトチュー
ブを有する構造でもよい。溶解槽１１に満たされたトル
エン抽出処理後の桂皮酸とＬ−フェニルアラニンからな
る水溶液は溶解液供給ポンプ７を介して濃縮缶１に給液
される。濃縮缶に於いて蒸発した水蒸気は濃縮缶１の上
部に接続された蒸発ライン８を介し、凝縮機９において
凝縮され取り除かれる。濃縮の温度はＬ−フェニルアラ
ニンのラセミ化等の影響を考慮すると７０℃以下が好ま
しい。しかし、あまり低温であれば濃縮缶の真空ポンプ
の設備が過大となるので５０〜７０℃で操作されるのが
好ましい。濃縮缶１において、Ｌ−フェニルアラニンの
結晶が発生した時点でスラリーポンプ６により固液分離
機２に給液される。固液分離機２において分離された結
晶は結晶受器３へ排出される。固液分離機に於いて洗浄
ライン４により結晶洗浄を行ってもよい。結晶を分離し
た濾液は濾液ライン５から排出され、濾液送液ポンプ１
３を介して、濾液加熱器１０とパージ液ライン１５に分
配される。濾液加熱器１０を通過した溶液は濾液戻りラ
イン１２を介して濃縮缶１に戻る。連続的濃縮操作は第
１図の溶解槽１１に調整された水溶液がポンプ７を介し
て濃縮缶１に連続して給液され、濾液の一部がパージ液
バルブ１４を介してパージ液ライン１５から排出される
ことにより行われる。断続的濃縮操作は第１図の溶解槽
１１の水溶液が濃縮缶１へ連続して給液されるのではな
く、一度濃縮缶１に水溶液を満たし、固液分離しながら
濃縮操作を行う。この間、濃縮缶には溶解槽１１の新た
な水溶液の給液は行われないが、そのほかの結晶排出お
よび濾液の戻りと濾液の一部パージは連続的操作と同様
に行われる。たとえば濃縮時のＬ−フェニルアラニンの
濃度が１５重量％を超えた時点で溶解槽１１から新たな
水溶液の給液を行う。
【００１５】この精製方法をフェニルアラニンアンモニ
アリアーゼを用いたＬ−フェニルアラニンの製造におけ
る精製工程として用いることで、より効率的で工業的に
有利なＬ−フェニルアラニンの製造方法を提供すること
ができる。
アリアーゼを用いたＬ−フェニルアラニンの製造におけ
る精製工程として用いることで、より効率的で工業的に
有利なＬ−フェニルアラニンの製造方法を提供すること
ができる。
【００１６】本発明のＬ−フェニルアラニンの製造方法
は、（１）フェニルアラニンアンモニアリアーゼの存在
下で桂皮酸とアンモニア源とを反応させて反応液を得る
工程、（２）該反応液の清澄液を調製する工程、（３）
該清澄液からアンモニア源を除去する工程、（４）工程
（３）を経た清澄液にトルエン抽出を行う工程、（５）
該トルエン抽出で得られた水相を濃縮しながら、固液分
離を行う工程、（６）工程（５）で得られた固相をＬ−
フェニルアラニン結晶として回収する工程、を含む。工
程（１）〜（３）は公知の方法により行うことができ、
工程（４）〜（６）は上述の本発明の精製方法に相当す
る。
は、（１）フェニルアラニンアンモニアリアーゼの存在
下で桂皮酸とアンモニア源とを反応させて反応液を得る
工程、（２）該反応液の清澄液を調製する工程、（３）
該清澄液からアンモニア源を除去する工程、（４）工程
（３）を経た清澄液にトルエン抽出を行う工程、（５）
該トルエン抽出で得られた水相を濃縮しながら、固液分
離を行う工程、（６）工程（５）で得られた固相をＬ−
フェニルアラニン結晶として回収する工程、を含む。工
程（１）〜（３）は公知の方法により行うことができ、
工程（４）〜（６）は上述の本発明の精製方法に相当す
る。
【００１７】本発明方法に於ては、桂皮酸を原料として
アンモニアの存在下、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いた反応によりＬ−フェニルアラニンを製造す
る。酵素反応としては、例えばフェニルアラニンアンモ
ニアリアーゼの遺伝子を組み込んだ大腸菌の形質転換株
ＭＴ１０４２３（ＦＥＲＭ Ｐ−９０２３）（特開昭６
３−３１７０８６）を培養して得られた菌体、もしくは
該菌体を固定化したものを、適当なアンモニウム源、例
えば炭酸アンモニウム緩衝液（アンモニア濃度１３〜１
７重量％、ｐＨ９〜１１）に乾燥菌体として０．５〜
２．０重量％懸濁し、反応器の内温が通常３０〜４０℃
になるように調整して反応を行う。反応方法は、例えば
特開昭６１−２４７３９５に記載されている如く、１０
モル／Ｌ以上のアンモニア、０．０５〜０．５当量の炭
酸イオン、０．０５モル／Ｌ以下の桂皮酸を存在させる
方法に準拠できる。
アンモニアの存在下、フェニルアラニンアンモニアリア
ーゼを用いた反応によりＬ−フェニルアラニンを製造す
る。酵素反応としては、例えばフェニルアラニンアンモ
ニアリアーゼの遺伝子を組み込んだ大腸菌の形質転換株
ＭＴ１０４２３（ＦＥＲＭ Ｐ−９０２３）（特開昭６
３−３１７０８６）を培養して得られた菌体、もしくは
該菌体を固定化したものを、適当なアンモニウム源、例
えば炭酸アンモニウム緩衝液（アンモニア濃度１３〜１
７重量％、ｐＨ９〜１１）に乾燥菌体として０．５〜
２．０重量％懸濁し、反応器の内温が通常３０〜４０℃
になるように調整して反応を行う。反応方法は、例えば
特開昭６１−２４７３９５に記載されている如く、１０
モル／Ｌ以上のアンモニア、０．０５〜０．５当量の炭
酸イオン、０．０５モル／Ｌ以下の桂皮酸を存在させる
方法に準拠できる。
【００１８】この反応液中の菌体及びそれに由来する固
形物を遠心分離又は濾過等の方法により除去することに
より清澄液が得られる。さらに該清澄液について、通常
４０〜１００℃、好ましくは４０〜７０℃の温度で蒸発
等の操作によりアンモニア源を除去することにより、Ｌ
−フェニルアラニンの水溶液が得られる。
形物を遠心分離又は濾過等の方法により除去することに
より清澄液が得られる。さらに該清澄液について、通常
４０〜１００℃、好ましくは４０〜７０℃の温度で蒸発
等の操作によりアンモニア源を除去することにより、Ｌ
−フェニルアラニンの水溶液が得られる。
【００１９】該Ｌ−フェニルアラニンの水溶液を鉱酸で
酸性ｐＨに調整後、トルエンを添加・接触させることに
より桂皮酸を抽出することができる。又、ｐＨ調整後に
活性炭処理を行い、濾過等の方法により活性炭及び活性
炭付着物を除去した溶液に対してもトルエンによる桂皮
酸の抽出を行うことができる。抽出は、通常温度が６０
〜８０℃、ｐＨ５以下、好ましくはｐＨ４．５以下に於
いて行なわれる。ｐＨ５をこえると桂皮酸の抽出効率が
悪くなる傾向がある。
酸性ｐＨに調整後、トルエンを添加・接触させることに
より桂皮酸を抽出することができる。又、ｐＨ調整後に
活性炭処理を行い、濾過等の方法により活性炭及び活性
炭付着物を除去した溶液に対してもトルエンによる桂皮
酸の抽出を行うことができる。抽出は、通常温度が６０
〜８０℃、ｐＨ５以下、好ましくはｐＨ４．５以下に於
いて行なわれる。ｐＨ５をこえると桂皮酸の抽出効率が
悪くなる傾向がある。
【００２０】例えば、桂皮酸を含む水溶液に対してトル
エンを１５重量％加え、７０℃で１５分間撹拌・抽出を
行った場合、桂皮酸の抽出率は、ｐＨ４．０で約７０
％、ｐＨ５．５で約１０％であった。
エンを１５重量％加え、７０℃で１５分間撹拌・抽出を
行った場合、桂皮酸の抽出率は、ｐＨ４．０で約７０
％、ｐＨ５．５で約１０％であった。
【００２１】トルエンに抽出された桂皮酸は容易に回収
でき、反応に再利用することができる。即ち、桂皮酸を
含むトルエン相を取り出し、トルエンを蒸発させる方法
又は、新たに水を加えアルカリｐＨに調整することによ
り、水相に逆抽出する方法等が挙げられる。
でき、反応に再利用することができる。即ち、桂皮酸を
含むトルエン相を取り出し、トルエンを蒸発させる方法
又は、新たに水を加えアルカリｐＨに調整することによ
り、水相に逆抽出する方法等が挙げられる。
【００２２】このようにして桂皮酸の一部が抽出除去さ
れたＬ−フェニルアラニンの水溶液に対して濃縮操作を
行う。
れたＬ−フェニルアラニンの水溶液に対して濃縮操作を
行う。
【００２３】本発明の濃縮とは、先に述べたように常圧
または減圧下での濃縮をいい、Ｌ−フェニルアラニンの
濃度がその水溶液での飽和溶解度を上回った状態で結晶
化を起こさせ、その溶液の一部または全部を取り出し、
濃縮液の温度を保持したままで固液分離を行い、液相は
再び濃縮液に戻し、固相のみを取り出すことにより、連
続的または断続的に濃縮操作を継続するものである。
または減圧下での濃縮をいい、Ｌ−フェニルアラニンの
濃度がその水溶液での飽和溶解度を上回った状態で結晶
化を起こさせ、その溶液の一部または全部を取り出し、
濃縮液の温度を保持したままで固液分離を行い、液相は
再び濃縮液に戻し、固相のみを取り出すことにより、連
続的または断続的に濃縮操作を継続するものである。
【００２４】濃縮の温度は、ラセミ化等の影響を考える
と５０〜７０℃の範囲が好ましい。濃縮時のＬ−フェニ
ルアラニンの濃度は、好ましくは８〜１５重量％の範囲
に及ぶものである。この時、８重量％より薄い濃度で固
液分離を行うと処理量が多く、装置が大きくなるという
不都合があり、１５重量％を越える濃度で行うと操作性
が悪くなる上に、結晶中の不純物の含量が増加するとい
った不都合が生じる。又、固液分離には、濾過機、遠心
分離機等が適用できるが、デカンター型遠心沈降機を用
いる方法が好ましい。又、得られた固相は、適量の温水
で洗浄する方が好ましい。
と５０〜７０℃の範囲が好ましい。濃縮時のＬ−フェニ
ルアラニンの濃度は、好ましくは８〜１５重量％の範囲
に及ぶものである。この時、８重量％より薄い濃度で固
液分離を行うと処理量が多く、装置が大きくなるという
不都合があり、１５重量％を越える濃度で行うと操作性
が悪くなる上に、結晶中の不純物の含量が増加するとい
った不都合が生じる。又、固液分離には、濾過機、遠心
分離機等が適用できるが、デカンター型遠心沈降機を用
いる方法が好ましい。又、得られた固相は、適量の温水
で洗浄する方が好ましい。
【００２５】このように、固液分離を行いながら連続的
または断続的に濃縮を行って得られた固相、即ちＬ−フ
ェニルアラニンの結晶は、従来のバッチ式の濃縮に比べ
て桂皮酸等の不純物の巻き込みが少なく純度が高い。
又、濃縮液の粘度は十分低いので、移液や濾過等の操作
性が非常に良い。さらに、連続操作にすると濃縮機が非
常に小さくてすみ、容積効率が向上する。こうして得ら
れたＬ−フェニルアラニンの結晶はそのまま乾燥するこ
とができる。
または断続的に濃縮を行って得られた固相、即ちＬ−フ
ェニルアラニンの結晶は、従来のバッチ式の濃縮に比べ
て桂皮酸等の不純物の巻き込みが少なく純度が高い。
又、濃縮液の粘度は十分低いので、移液や濾過等の操作
性が非常に良い。さらに、連続操作にすると濃縮機が非
常に小さくてすみ、容積効率が向上する。こうして得ら
れたＬ−フェニルアラニンの結晶はそのまま乾燥するこ
とができる。
【００２６】又、本発明方法に従って濃縮して得られた
Ｌ−フェニルアラニンの結晶に対して、低級アルコール
類をその沸点以下の温度に於て添加して、Ｔ％を向上さ
せることも可能である。ここで、低級アルコール類とし
て、イソプロピルアルコール、ノルマルプロピルアルコ
ール、メチルアルコール、エチルアルコールが包含され
る。これら低級アルコール類の添加量は、好ましくはＬ
−フェニルアラニンに対して５０〜１５０重量％であ
る。この時、低級アルコール類の添加量が５０重量％未
満では固体分の濃度が高すぎてスラッジングの操作性が
悪いという不都合があり、１５０重量％を越える量では
Ｌ−フェニルアラニンの収率が低下する上に容積効率が
悪くなる。
Ｌ−フェニルアラニンの結晶に対して、低級アルコール
類をその沸点以下の温度に於て添加して、Ｔ％を向上さ
せることも可能である。ここで、低級アルコール類とし
て、イソプロピルアルコール、ノルマルプロピルアルコ
ール、メチルアルコール、エチルアルコールが包含され
る。これら低級アルコール類の添加量は、好ましくはＬ
−フェニルアラニンに対して５０〜１５０重量％であ
る。この時、低級アルコール類の添加量が５０重量％未
満では固体分の濃度が高すぎてスラッジングの操作性が
悪いという不都合があり、１５０重量％を越える量では
Ｌ−フェニルアラニンの収率が低下する上に容積効率が
悪くなる。
【００２７】このようにして得られたスラッジングマス
について、濾過等の操作を行ってＬ−フェニルアラニン
の結晶を回収することができる。又、この濾液について
は、蒸発等の方法により低級アルコール類を除いた後、
精製工程に回収することは十分可能である。
について、濾過等の操作を行ってＬ−フェニルアラニン
の結晶を回収することができる。又、この濾液について
は、蒸発等の方法により低級アルコール類を除いた後、
精製工程に回収することは十分可能である。
【００２８】
【実施例】実施例及び比較例に於て、Ｌ−フェニルアラ
ニン中の桂皮酸の定量は、結晶０．１ｇを水１００ｇで
希釈した水溶液について、紫外吸収分光光度計を検出器
に設置した液体クロマトグラフィー法により行った。分
析条件は以下の通りである。 カラム ：Ｆｉｎｅ Ｐａｃｋ ＴＳＬ Ｃ１８（日本
分光社製） 移動相 ：燐酸でｐＨ２に調整した５０％メタノール水
溶液 検出波長：２８０ｎｍ この条件下での桂皮酸の検出限界は０．２ｐｐｍであっ
た。Ｌ−フェニルアラニンの分析法は以下の方法によっ
た。０．３ｇのサンプルを精密に量り、５０ｍｌの氷酢
酸を加え、加温して溶解し、放冷後、１０滴のα−ナフ
トールベンゼン指示薬（ｐ−Ｎａｐｈｔｈｏｌｂｅｎｚ
ｅｉｎ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｌｕｔｉｏｎ）を指示
薬として添加し、０．１Ｎ−過塩素酸溶液にて滴定す
る。同様のサンプルを入れない空試験で補正をする。Ｎ
−過塩素酸溶液１ｍｌは１６．５１９ｍｇのＬ−フェニ
ルアラニンに相当する。
ニン中の桂皮酸の定量は、結晶０．１ｇを水１００ｇで
希釈した水溶液について、紫外吸収分光光度計を検出器
に設置した液体クロマトグラフィー法により行った。分
析条件は以下の通りである。 カラム ：Ｆｉｎｅ Ｐａｃｋ ＴＳＬ Ｃ１８（日本
分光社製） 移動相 ：燐酸でｐＨ２に調整した５０％メタノール水
溶液 検出波長：２８０ｎｍ この条件下での桂皮酸の検出限界は０．２ｐｐｍであっ
た。Ｌ−フェニルアラニンの分析法は以下の方法によっ
た。０．３ｇのサンプルを精密に量り、５０ｍｌの氷酢
酸を加え、加温して溶解し、放冷後、１０滴のα−ナフ
トールベンゼン指示薬（ｐ−Ｎａｐｈｔｈｏｌｂｅｎｚ
ｅｉｎ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｌｕｔｉｏｎ）を指示
薬として添加し、０．１Ｎ−過塩素酸溶液にて滴定す
る。同様のサンプルを入れない空試験で補正をする。Ｎ
−過塩素酸溶液１ｍｌは１６．５１９ｍｇのＬ−フェニ
ルアラニンに相当する。
【００２９】実施例１ フェニルアラニンアンモニアリアーゼの遺伝子を組み込
んだ大腸菌の形質転換株ＭＴ１０４２３（ＦＥＲＭ Ｐ
−９０２３）（特開昭６３−３１７０８６）を培養し、
得られた湿菌体１９．２ｇ（乾燥菌体として４．０ｇ）
を炭酸アンモニウム緩衝液７５０ｇ（アンモニア濃度１
３重量％）に懸濁し、反応液のｐＨをアンモニアで１
０．４に保つようにしながら桂皮酸４７．８ｇを紛状の
まま１６時間かけて逐次添加し、反応液８００ｇを得
た。この反応液中に生成したＬ−フェニルアラニンは４
８．０ｇ、残存桂皮酸は４．８ｇであった。この反応マ
スを遠心分離により菌体を除き、上澄液を７０℃で加熱
して炭酸アンモニウムを除去し、Ｌ−フェニルアラニン
の水溶液を得た。上記Ｌ−フェニルアラニンの水溶液を
濃硫酸でｐＨ４．０とし、トルエン１００ｇを添加し、
１５分間撹拌後、静置・分液を行った。この桂皮酸抽出
操作を計４回繰り返した。この時のトルエン相中の桂皮
酸濃度は１．１９％であった。水相については、減圧下
７０℃に於て以下のように濃縮操作を行った。濃縮槽の
液量を１６０ｇ、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が１０重
量％になるように保持するように、濃縮原液を８０ｇ／
Ｈｒで濃縮槽にフィードした。一方、濃縮液の一部を連
続的に抜き出し、固液分離を行った。液相の一部を４．
０ｇ／Ｈｒで系外にパ−ジし、残りを濃縮槽に戻した。
この時、装置全体を保温して操作を行った。この様にし
て得られた固相中のＬ−フェニルアラニンは３４．４ｇ
であり純度は９９．５％であった。また、この中に含ま
れる桂皮酸は検出限界以下であった。
んだ大腸菌の形質転換株ＭＴ１０４２３（ＦＥＲＭ Ｐ
−９０２３）（特開昭６３−３１７０８６）を培養し、
得られた湿菌体１９．２ｇ（乾燥菌体として４．０ｇ）
を炭酸アンモニウム緩衝液７５０ｇ（アンモニア濃度１
３重量％）に懸濁し、反応液のｐＨをアンモニアで１
０．４に保つようにしながら桂皮酸４７．８ｇを紛状の
まま１６時間かけて逐次添加し、反応液８００ｇを得
た。この反応液中に生成したＬ−フェニルアラニンは４
８．０ｇ、残存桂皮酸は４．８ｇであった。この反応マ
スを遠心分離により菌体を除き、上澄液を７０℃で加熱
して炭酸アンモニウムを除去し、Ｌ−フェニルアラニン
の水溶液を得た。上記Ｌ−フェニルアラニンの水溶液を
濃硫酸でｐＨ４．０とし、トルエン１００ｇを添加し、
１５分間撹拌後、静置・分液を行った。この桂皮酸抽出
操作を計４回繰り返した。この時のトルエン相中の桂皮
酸濃度は１．１９％であった。水相については、減圧下
７０℃に於て以下のように濃縮操作を行った。濃縮槽の
液量を１６０ｇ、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が１０重
量％になるように保持するように、濃縮原液を８０ｇ／
Ｈｒで濃縮槽にフィードした。一方、濃縮液の一部を連
続的に抜き出し、固液分離を行った。液相の一部を４．
０ｇ／Ｈｒで系外にパ−ジし、残りを濃縮槽に戻した。
この時、装置全体を保温して操作を行った。この様にし
て得られた固相中のＬ−フェニルアラニンは３４．４ｇ
であり純度は９９．５％であった。また、この中に含ま
れる桂皮酸は検出限界以下であった。
【００３０】実施例２〜４ 実施例１の操作で最後に残った濃縮槽中のＬ−フェニル
アラニンの水溶液に、実施例１と同様にして得られた濃
縮原液をフィードすることにより、実施例１と同様の操
作を３回繰り返し、結果を第１表（表１）にまとめた。
得られたＬ−フェニルアラニンの結晶は純度９９．０％
以上であった。
アラニンの水溶液に、実施例１と同様にして得られた濃
縮原液をフィードすることにより、実施例１と同様の操
作を３回繰り返し、結果を第１表（表１）にまとめた。
得られたＬ−フェニルアラニンの結晶は純度９９．０％
以上であった。
【００３１】実施例５ 実施例１の操作で炭酸アンモニア除去後のＬ−フェニル
アラニンの水溶液を濃硫酸でｐＨ４．０に調整後、トル
エン１００ｇを添加し、１５分間撹拌後、静置・分液を
行った。こうして得られた濃縮原液８００ｇ（Ｌ−フェ
ニルアラニン４８．０ｇ及び桂皮酸１．４ｇ）を用いて
以下の操作を行った。この濃縮原液のＬ−フェニルアラ
ニンの濃度が１０重量％になるまで７０℃で減圧濃縮を
行った後、濃縮温度を保ったまま濾過を行い、Ｌ−フェ
ニルアラニンの結晶を分離した。得られた結晶は、それ
とほぼ同量の７０℃の温水で洗浄した。濾洗液について
は再び濃縮、濾過といった同様の操作を行い、合計で７
回繰り返した。得られた結晶は、合計で４５．５ｇ（乾
燥重量）であり、純度は９８．５％で含まれる桂皮酸は
検出限界以下であった。
アラニンの水溶液を濃硫酸でｐＨ４．０に調整後、トル
エン１００ｇを添加し、１５分間撹拌後、静置・分液を
行った。こうして得られた濃縮原液８００ｇ（Ｌ−フェ
ニルアラニン４８．０ｇ及び桂皮酸１．４ｇ）を用いて
以下の操作を行った。この濃縮原液のＬ−フェニルアラ
ニンの濃度が１０重量％になるまで７０℃で減圧濃縮を
行った後、濃縮温度を保ったまま濾過を行い、Ｌ−フェ
ニルアラニンの結晶を分離した。得られた結晶は、それ
とほぼ同量の７０℃の温水で洗浄した。濾洗液について
は再び濃縮、濾過といった同様の操作を行い、合計で７
回繰り返した。得られた結晶は、合計で４５．５ｇ（乾
燥重量）であり、純度は９８．５％で含まれる桂皮酸は
検出限界以下であった。
【００３２】実施例６ 実施例５で得られた結晶（Ｔ％９６．２）に８０％イソ
プロピルアルコ−ルを６０ｇ添加し、１０℃で１時間ス
ラッジング後、濾過を行った。得られた結晶は４３．４
ｇ（乾燥重量）でＴ％９８．５であった。
プロピルアルコ−ルを６０ｇ添加し、１０℃で１時間ス
ラッジング後、濾過を行った。得られた結晶は４３．４
ｇ（乾燥重量）でＴ％９８．５であった。
【００３３】比較例１ 実施例１の操作でトルエン抽出前のｐＨ４．０のＬ−フ
ェニルアラニンの水溶液（Ｌ−フェニルアラニン４８．
０ｇ、桂皮酸４．８ｇを含む）を用いて以下の操作を行
った。Ｌ−フェニルアラニンの濃度が１０重量％になる
まで７０℃で減圧濃縮を行った後、濃縮温度を保ったま
ま濾過を行い、Ｌ−フェニルアラニンの結晶を分離し
た。得られた結晶は、それとほぼ同量の７０℃の温水で
洗浄した。濾洗液については再び濃縮、濾過といった同
様の操作を行い、合計で７回繰り返した。得られた結晶
は、合計で４２．３ｇ（乾燥重量）であり、含まれる桂
皮酸は０．１％であった。
ェニルアラニンの水溶液（Ｌ−フェニルアラニン４８．
０ｇ、桂皮酸４．８ｇを含む）を用いて以下の操作を行
った。Ｌ−フェニルアラニンの濃度が１０重量％になる
まで７０℃で減圧濃縮を行った後、濃縮温度を保ったま
ま濾過を行い、Ｌ−フェニルアラニンの結晶を分離し
た。得られた結晶は、それとほぼ同量の７０℃の温水で
洗浄した。濾洗液については再び濃縮、濾過といった同
様の操作を行い、合計で７回繰り返した。得られた結晶
は、合計で４２．３ｇ（乾燥重量）であり、含まれる桂
皮酸は０．１％であった。
【００３４】比較例２ 実施例１の操作でトルエン抽出前のＬ−フェニルアラニ
ン４８．０ｇ及び桂皮酸４．８ｇを含む濃縮原液８００
ｇを用い、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が２０重量％に
なるまで７０℃で減圧濃縮を行った。さらに、１０℃で
１時間晶析を行った後、濾過を行った。得られた結晶は
４１．２ｇ（乾燥重量）で含まれる桂皮酸は０．２％で
あった。
ン４８．０ｇ及び桂皮酸４．８ｇを含む濃縮原液８００
ｇを用い、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が２０重量％に
なるまで７０℃で減圧濃縮を行った。さらに、１０℃で
１時間晶析を行った後、濾過を行った。得られた結晶は
４１．２ｇ（乾燥重量）で含まれる桂皮酸は０．２％で
あった。
【００３５】比較例３ 実施例１の操作でトルエン抽出前のＬ−フェニルアラニ
ン４８．０ｇ及び桂皮酸４．８ｇを含む濃縮原液８００
ｇを用い、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が２０重量％に
なるまで７０℃で減圧濃縮を行った。さらに、濃縮液に
２４０ｇの８０％イソプロピルアルコール水溶液を添加
し、冷却して１０℃で１時間晶析を行った後、濾過を行
った。得られた結晶は４０．８ｇ（乾燥重量）で含まれ
る桂皮酸は０．１％であった。
ン４８．０ｇ及び桂皮酸４．８ｇを含む濃縮原液８００
ｇを用い、Ｌ−フェニルアラニンの濃度が２０重量％に
なるまで７０℃で減圧濃縮を行った。さらに、濃縮液に
２４０ｇの８０％イソプロピルアルコール水溶液を添加
し、冷却して１０℃で１時間晶析を行った後、濾過を行
った。得られた結晶は４０．８ｇ（乾燥重量）で含まれ
る桂皮酸は０．１％であった。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【発明の効果】本発明方法によれば、原料である桂皮酸
を効率的に分離でき、高品質のＬ−フェニルアラニンを
高収率で精製することが可能となった。
を効率的に分離でき、高品質のＬ−フェニルアラニンを
高収率で精製することが可能となった。
【図１】本発明を実施する濃縮ー固液分離装置の概略図
である。
である。
１．濃縮缶 ２．固液分離機 ３．結晶受器 ４．洗浄ライン ５．濾液ライン ６．スラリーポンプ ７．溶解液供給ポンプ ８．蒸発ライン ９．凝縮機 １０．濾液加熱機 １１．溶解漕 １２．濾液戻りライン １３．濾液送液ポンプ １４．パージ液バルブ １５．パージ液ライン
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−71189（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−14796（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−267885（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 13/22 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (11)
- 【請求項１】下記工程を含むＬ−フェニルアラニンの精
製方法： （ａ）桂皮酸とＬ−フェニルアラニンを主に含む水溶液
にｐＨ４．５以下の範囲に於てトルエン抽出を行う工
程、 （ｂ）該トルエン抽出で得られた水相を濃縮しながら固
液分離を行う工程、 （ｃ）工程（ｂ）で分離されたＬ−フェニルアラニン結
晶からなる固相を回収する工程。 - 【請求項２】濃縮しながら固液分離を行う工程にデカン
ター型遠心沈降機を用いる請求項１記載の方法。 - 【請求項３】固相に低級アルコール類を添加してスラッ
ジングする請求項１記載の方法。 - 【請求項４】低級アルコール類がイソプロピルアルコー
ル、ノルマルプロピルアルコール、メチルアルコール、
エチルアルコールよりなる群から選ばれるものである請
求項３記載の方法。 - 【請求項５】低級アルコール類の添加量がＬ−フェニル
アラニンに対して５０〜１５０重量％である請求項３記
載の方法。 - 【請求項６】下記工程を含むＬ−フェニルアラニンの製
造方法： （１）フェニルアラニンアンモニアリアーゼの存在下で
桂皮酸とアンモニア源とを反応させて反応液を得る工
程、 （２）該反応液の清澄液を調製する工程、 （３）該清澄液からアンモニア源を除去する工程、 （４）工程（３）を経た清澄液にｐＨ４．５以下の範囲
に於てトルエン抽出を行う工程、 （５）該トルエン抽出で得られた水相を濃縮しながら、
固液分離を行う工程、 （６）工程（５）で得られたＬ−フェニルアラニン結晶
からなる固相を回収する工程。 - 【請求項７】濃縮しながら固液分離を行う工程にデカン
ター型遠心沈降機を用いる請求項６記載の方法。 - 【請求項８】アンモニア源を除去した後活性炭処理を行
う請求項６記載の方法。 - 【請求項９】濃縮で得られた固相に低級アルコール類を
添加してスラッジングする請求項６記載の方法。 - 【請求項１０】低級アルコール類がイソプロピルアルコ
ール、ノルマルプロピルアルコール、メチルアルコー
ル、エチルアルコールよりなる群から選ばれるものであ
る請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】低級アルコール類の添加量がＬ−フェニ
ルアラニンに対して５０〜１５０重量％である請求項９
記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP02463293A JP3270558B2 (ja) | 1992-02-17 | 1993-02-15 | Ｌ−フェニルアラニンの精製方法および製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2920592 | 1992-02-17 | ||
| JP4-29205 | 1992-02-17 | ||
| JP02463293A JP3270558B2 (ja) | 1992-02-17 | 1993-02-15 | Ｌ−フェニルアラニンの精製方法および製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05304970A JPH05304970A (ja) | 1993-11-19 |
| JP3270558B2 true JP3270558B2 (ja) | 2002-04-02 |
Family
ID=26362182
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP02463293A Expired - Fee Related JP3270558B2 (ja) | 1992-02-17 | 1993-02-15 | Ｌ−フェニルアラニンの精製方法および製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3270558B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5561506B2 (ja) * | 2007-10-24 | 2014-07-30 | 三菱レイヨン株式会社 | Ｌ−カルニチンの単離精製方法 |
-
1993
- 1993-02-15 JP JP02463293A patent/JP3270558B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05304970A (ja) | 1993-11-19 |
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