JP3142993B2 - 水溶性ベナスタチン誘導体及びその薬学的用途 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は免疫調節剤（ｉｍｍｕｎ
ｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ）として有用である新規な水溶性
ベナスタチン誘導体及びその薬学的用途に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】免疫調節剤としては、サイクロスポリン
Ａなどの免疫抑制剤やクレスチン（登録商標）、ウベニ
メクス（一般名）などの免疫賦活剤が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明で原料として用
いるベナスタチンＣ及びＤは、青柳高明らにより分離さ
れたストレプトミセス エスピーＭＩ３８４−ＤＦ１２
株（微工研条寄第３２２８号）の醗酵生産物から新規生
理活性物質として単離され、強い免疫賦活作用と高濃度
での免疫抑制作用を有することが見い出された化合物で
ある。ベナスタチンＣ及びＤの化学構造は以下の通りで
ある。

【化２】 ベナスタチンＣ：Ｒ¹ ＝−ＣＨ＝ＣＨ− ベナスタチンＤ：Ｒ¹ ＝−ＣＨ₂ ＣＨ₂ − ベナスタチンＣ及びＤは免疫賦活剤として期待される
が、これらの化合物は水溶性の点で問題があり、例えば
ベナスタチンＣは水に難溶性のため製剤化の際に製剤的
工夫が必要と考えられていた。従って、水溶性の点にお
いて優れたベナスタチンＣ及びＤの誘導体の開発が望ま
れている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者らは種々
検討の結果、ベナスタチンＣ及びＤの分子中に存在する
１位の水酸基に特定の置換基を導入することによって、
水に対する溶解性が著しく改善されたベナスタチン誘導
体が得られ、そしてこの誘導体は特に低濃度では強い免
疫賦活性を有し、高濃度では免疫抑制活性を有すること
を見出し本発明を完成させた。従って、本発明は、下記
式（１）

【化３】 〔式中、Ｒ¹ は−ＣＨ＝ＣＨ−又は−ＣＨ₂ ＣＨ₂ −を
示し、Ｒ² は−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｙ又は−（Ｃ
Ｈ₂ ）_n+1 −Ｙを示す。ここでｎは０〜５の整数、Ｙは
−ＣＯ₂ Ｈ又はＮＲ³ Ｒ⁴ （Ｒ³ ，Ｒ⁴ はそれぞれ水素
原子、炭素原子数１〜５の低級アルキル基を示し、ある
いはＲ³ とＲ⁴ が結合しその結合鎖中に酸素原子又は窒
素原子を含んでいてもよい低級アルキレン基を示す）を
示す〕で表わされるベナスタチン誘導体及びその生理学
的に許容しうる塩である。更に、本発明は、上記式
（１）で表わされるベナスタチン誘導体又はその生理学
的に許容しうる塩を有効成分として含有する免疫調節剤
である。

【０００５】上記式（１）で表わされるベナスタチン誘
導体及びその生理学的に許容しうる塩は、酸性、中性及
び塩基性の水溶液に対してベナスタチンＣ及びＤより高
い溶解性を示し医薬品として極めて有用な化合物であ
る。上記式（１）の定義において、Ｒ³ ，Ｒ⁴ がそれぞ
れ炭素原子数１〜５の低級アルキル基を示す場合の低級
アルキル基としては例えばメチル基、エチル基、プロピ
ル基、ブチル基、ペンチル基などの炭素数１〜５のアル
キル基があげられる。結合鎖中に酸素原子又は窒素原子
を含んでいてもよい低級アルキレン基としては、例えば
−（ＣＨ₂ ）₃ −，−（ＣＨ₂ ）₄ −，−（ＣＨ₂ ）₅
−，

【化４】 −（ＣＨ₂ ）₂ −Ｏ−（ＣＨ₂ ）₂ −などの炭素原子数
１〜５の低級アルキレン基があげられる。

【０００６】上記一般式〔Ｉ〕の置換基Ｒ² が−ＣＯ−
（ＣＨ₂ ）_n −ＣＯ₂ Ｈを示す時の置換基Ｒ² として
は、例えばオキザロ基、２−カルボキシルアセチル基、
３−カルボキシプロパノイル基、４−カルボキシブチリ
ル基、５−カルボキシペンタノイル基などがあげられ
る。 置換基Ｒ² が−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −ＮＲ³ Ｒ⁴
を示す時の置換基Ｒ² としては、例えば、ジメチルアミ
ノアセチル基、ジエチルアミノアセチル基、ジエチルア
ミノプロピオニル基、ブチルアミノアセチル基、ジメチ
ルアミノプロピオニル基、ジメチルアミノブチリル基、
ピロリジノブチリル基、ピロリジノアセチル基、ピペラ
ジノアセチル基、モルホリノアセチル基などがあげられ
る。置換基Ｒ² が−（ＣＨ₂ ）_n+1 −ＣＯ₂ Ｈを示す時
の置換基Ｒ² としてはカルボキシメチル基、２−カルボ
キシエチル基、３−カルボキシプロピル基、４−カルボ
キシブチル基、５−カルボキシペンチル基、６−カルボ
キシヘキシル基などがあげられる。

【０００７】置換基Ｒ² が−（ＣＨ₂ ）_n+1 −ＮＲ³ Ｒ
⁴ を示す時の置換基Ｒ² としては、例えばアミノメチル
基、ジメチルアミノメチル基、ジエチルアミノメチル
基、２−アミノエチル基、２−メチルアミノエチル基、
２−ジメチルアミノエチル基、２−エチルアミノエチル
基、２−ジエチルアミノエチル基、２−ピロリジノエチ
ル基、２−ピペリジノエチル基、２−モルホリノエチル
基、２−（４−ピペラジノ）エチル基、３−アミノプロ
ピル基、３−メチルアミノプロピル基、３−ジメチルア
ミノプロピル基、３−エチルアミノプロピル基、３−ジ
エチルアミノプロピル基、３−ピロリジノプロピル基、
３−ピペリジノプロピル基、３−モルホリノプロピル
基、３−（４−ピペラジノ）プロピル基、４−アミノブ
チル基、４−メチルアミノブチル基、４−ジメチルアミ
ノブチル基、４−エチルアミノブチル基、４−ジエチル
アミノブチル基、４−ピロリジノブチル基、４−ピペリ
ジノブチル基、４−モルホリノブチル基、４−（４−ピ
ペラジノ）ブチル基、５−アミノペンチル基、５−メチ
ルアミノペンチル基、５−ジメチルアミノペンチル基、
５−エチルアミノペンチル基、５−ジエチルアミノペン
チル基、５−ピロリジノペンチル基、５−ピペリジノペ
ンチル基、５−モルホリノペンチル基、５−（４−ピペ
ラジノ）ペンチル基、６−アミノヘキシル基、６−メチ
ルアミノヘキシル基、６−ジメチルアミノヘキシル基、
６−エチルアミノヘキシル基、６−ジエチルアミノヘキ
シル基、６−ピロリジノヘキシル基、６−ピペリジノヘ
キシル基、６−モルホリノヘキシル基、６−（４−ピペ
ラジノ）ヘキシル基などがあげられる。

【０００８】一般式〔Ｉ〕の置換基Ｒ² としては以上に
あげたものがあり、このような置換基Ｒ² を有する一般
式〔Ｉ〕の化合物のなかでも特に好ましい一般式〔Ｉ〕
の化合物として次の化合物を挙げることができる。 化合物番号 １． １−（３−ジメチルアミノプロパノイル）ベナス
タチンＣ ２． １−（４−ジメチルアミノブチリル）ベナスタチ
ンＣ ３． １−（５−ジメチルアミノペンタノイル）ベナス
タチンＣ ４． １−（３−カルボキシプロパノイル）ベナスタチ
ンＣ ５． １−（４−カルボキシブチリル）ベナスタチンＣ ６． １−（５−カルボキシペンタノイル）ベナスタチ
ンＣ ７． １−（２−アミノエチル）ベナスタチンＣ ８． １−（２−メチルアミノエチル）ベナスタチンＣ ９． １−（２−ジメチルアミノエチル）ベナスタチン
Ｃ １０．１−（３−アミノプロピル）ベナスタチンＣ １１．１−（３−メチルアミノプロピル）ベナスタチン
Ｃ １２．１−（３−ジメチルアミノプロピル）ベナスタチ
ンＣ １３．１−（３−ジメチルアミノプロパノイル）ベナス
タチンＤ １４．１−（４−ジメチルアミノブチリル）ベナスタチ
ンＤ １５．１−（５−ジメチルアミノペンタノイル）ベナス
タチンＤ １６．１−（３−カルボキシプロパノイル）ベナスタチ
ンＤ １７．１−（４−カルボキシブチリル）ベナスタチンＤ １８．１−（５−カルボキシペンタノイル）ベナスタチ
ンＤ １９．１−（２−アミノエチル）ベナスタチンＤ ２０．１−（２−メチルアミノエチル）ベナスタチンＤ ２１．１−（２−ジメチルアミノエチル）ベナスタチン
Ｄ ２２．１−（３−アミノプロピル）ベナスタチンＤ ２３．１−（３−メチルアミノプロピル）ベナスタチン
Ｄ ２４．１−（３−ジメチルアミノプロピル）ベナスタチ
ンＤ

【０００９】一般式（１）のベナスタチン誘導体は生理
学的に許容しうる塩の形態であってもよい。このような
塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リ
ン酸塩等の無機酸塩、あるいはギ酸塩、酢酸塩、フマー
ル酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸
塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩があげられる。あ
るいは、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、
カルシウム塩等の金属塩又は４級アンモニウム塩、ピリ
ジニウム塩等の有機塩基塩が挙げられる。

【００１０】一般式〔Ｉ〕で表わされるベナスタチン誘
導体は以下に述べる方法によって製造される。 １．一般式〔Ｉ〕において置換基Ｒ² が−ＣＯ−（ＣＨ
₂ ）_n −Ｙであるベナスタチン誘導体は下記のいずれか
の方法により製造できる。 （１） Ｒ² が−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −ＣＯ₂ Ｈであっ
てｎが２〜５の整数であるベナスタチン誘導体の製造：
ヘキサン、ベンゼン、トルエン、エーテル、酢酸エチ
ル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ピリ
ジン等の溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、
炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、
炭酸水素カリウムアンモニア水等の無機塩基、あるいは
１，５−ジアザビシクロ〔４，３，０〕ノン−５−エ
ン、１，８−ジアザビシクロ〔５，４，０〕−７−ウン
デセン、ピリジン、トリエチルアミン等の有機塩基を用
い、ベナスタチンＣ又はＤに、下記式

【化５】 （式中、ｎは２〜５の整数を示す）で表わされるジカル
ボン酸無水物を反応させて得ることができる。

【００１１】（２） Ｒ² が−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｃ
Ｏ₂ Ｈであってｎが０〜５の整数であるベナスタチン誘
導体の製造： ａ） 前記（１）と同様の溶媒中、必要に応じて４−ジ
メチルアミノピリジン等の触媒存在下、Ｎ，Ｎ′−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤を用いて、下記
式

【化６】Ｒ⁵ Ｏ₂ Ｃ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ₂ Ｈ （式中、Ｒ⁵ はエステル基の保護基、ｎは０〜５の整数
を示す）で表わされる化合物をベナスタチンＣ又はＤに
反応させ、反応後、保護基Ｒ⁵ を脱離させることによっ
て得ることができる。エステルの保護基は通常用いられ
る保護基を用いることができ、その脱離もそれ自体周知
の方法を採用することによって実施できる。

【００１２】ｂ） 前記（１）と同様の溶媒中、必要に
応じて４−ジメチルアミノピリジン等の触媒の存在下、
前記（１）と同様の塩基を用い、下記式

【化７】Ｒ⁵ Ｏ₂ Ｃ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯＺ （式中、Ｒ⁵ はエステル基の保護基、ｎは０〜５の整
数、ＺはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ等のハロゲン原子を示す）で表
わされる化合物をベナスタチンＣ又はＤに反応させ、反
応後、保護基Ｒ⁵ を脱保護することによっても得ること
ができる。

【００１３】（３） Ｒ² が−ＣＯ−（ＣＨ₂ ）_n −Ｎ
Ｒ³ Ｒ⁴ であるベナスタチン誘導体の製造： ａ）．前記（２）のａ）と同様の溶媒、触媒、縮合剤を
用いた反応条件下、下記式

【化８】Ｒ³ Ｒ⁴ Ｎ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ₂ Ｈ （式中、Ｒ³ ，Ｒ⁴ は前記と同じであり、ｎは０〜５の
整数を示す）で表わされる化合物をベナスタチンＣ又は
Ｄに反応させることにより得ることができる。Ｒ³ Ｒ⁴
Ｎにおいて保護基が必要な場合は保護基が導入された化
合物Ｒ ³ Ｒ⁴ Ｎ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ₂ Ｈを反応させ、反応
後、保護基を脱保護することにより得ることができる。
ここで用いる保護基としては、アミノ基の保護基として
通常用いられる保護基を用いることができ、その脱離も
それ自体周知の方法によって実施することができる。

【００１４】ｂ）．前記（２）のｂ）と同様の溶媒、触
媒、塩基を用いた反応条件下、下記式

【化９】Ｒ³ Ｒ⁴ Ｎ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯＺ （式中、Ｒ³ ，Ｒ⁴ は前記と同じであり、ｎは０〜５の
整数、ＺはＣｌ，Ｂｒ，Ｉ等のハロゲン原子を示す）で
表わされる化合物をベナスタチンＣ又はＤに反応させる
ことによっても得ることができる。Ｒ³ Ｒ⁴ Ｎにおいて
保護基が必要な場合は保護基が導入された化合物Ｒ³ Ｒ
⁴Ｎ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯＺを反応させ、反応後、保護基を
脱保護することにより得ることができる。

【００１５】ｃ）．前記（３）のａ）又はｂ）と同様の
反応条件下、それぞれ、下記式

【化１０】Ｗ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯ₂ Ｈ （式中、Ｗは、Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ等のハロゲン原子、ある
いはメタンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニ
ルオキシ基等を示し、ｎは０〜５の整数を示す）で表わ
される化合物、又は下記式

【化１１】Ｗ（ＣＨ₂ ）_n ＣＯＺ （式中、Ｗ及びｎは前記と同じであり、ＺはＣｌ，Ｂ
ｒ，Ｉ等のハロゲン原子を示す）で表わされる化合物を
ベナスタチンＣ又はＤに反応させ、次いでアミノ化合物
ＨＮＲ³ Ｒ⁴ を反応させることによっても得ることがで
きる。

【００１６】２． 一般式〔Ｉ〕において置換基Ｒ² が
−（ＣＨ₂ ）_n+1 −Ｙであるベナスタチン誘導体は下記
のいずれかの方法により製造できる。 （１） ヘキサン、ベンゼン、トルエン、エーテル、酢
酸エチル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサ
ン、ピリジン等の溶媒中、ジエチルアゾジカルボキシラ
ート（ＤＥＡＤ）又はトリフェニルホスフィン存在下、
下記式

【化１２】Ｙ−（ＣＨ₂ ）_n+1 −ＯＨ （式中、Ｙは前記と同じであり、ｎは０〜５の整数を示
す）で表わされる化合物をベナスタチンＣ又はＤに反応
させることにより得ることができる。ここで上記化合物
中のＹに保護基が必要な場合は保護基の入った化合物Ｙ
−（ＣＨ₂ ）_n+1 −ＯＨを反応させ、反応後、保護基を
脱保護することにより得ることができる。

【００１７】（２） ヘキサン、ベンゼン、トルエン、
キシレン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテ
ル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジグライム、ト
リグライム等の非プロトン性溶媒中、ナトリウム、カリ
ウム等のアルカリ金属；メチルリチウム、エチルリチウ
ム、ブチルリチウム、フェニルリチウム、メチルマグネ
シウムアイオダイド、エチルマグネシウムブロマイド、
フェニルマグネシウムブロマイド、フェニルマグネシウ
ムアイオダイド、等の有機金属；水素化リチウム、水素
化ナトリウム、水素化カリウム等の水素化物；あるいは
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド、リチウムア
ミド、ソジウムアミド、ポタシウムアミド、リチウムジ
シクロヘキシルアミド、リチウムジイソプロピルアミド
等の金属アミド等の存在下、下記式

【化１３】Ｙ−（ＣＨ₂ ）_n+1 −Ｖ （Ｙは前記と同じであり、ｎは０〜５の整数、Ｖはフッ
素原子、塩素原子、臭素原子、ヨーウ素原子などのハロ
ゲン原子、あるいはメタンスルホニルオキシ基、ｐ−ト
ルエンスルホニルオキシ基等を示す）で表わされる化合
物をベナスタチンＣ又はＤに反応させることにより得る
ことができる。ここで上記化合物中のＹに保護基が必要
な場合は保護基の導入された化合物Ｙ−（ＣＨ₂ ）_n+1
−Ｖを反応させ反応後、保護基を脱保護することにより
得ることができる。

【００１８】（３） 前記の２の（１）又は（２）と同
様の反応条件下、それぞれ、下記式

【化１４】Ｖ₁ −（ＣＨ₂ ）_n+1 −ＯＨ （式中、Ｖ₁ はＣｌ，Ｂｒ，Ｉ等のハロゲン原子、ある
いはメタンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニ
ルオキシ基等を示し、ｎは０〜５の整数を示す）で表わ
される化合物、又は下記式

【化１５】Ｖ₂ −（ＣＨ₂ ）_n+1 −Ｖ₃ （式中、Ｖ₂ ，Ｖ₃ はそれぞれＣｌ，Ｂｒ，Ｉ等のハロ
ゲン原子又はメタンスルホニルオキシ基、ｐ−トルエン
スルホニルオキシ基等を示し、ｎは０〜５の整数を示
す）で表わされる化合物をベナスタチンＣ又はＤに反応
させ次いでアミノ化合物ＨＮＲ³ Ｒ⁴ を反応させること
によっても製造することができる。

【００１９】以上に示した各種の製造法によって上記式
（１）のベナスタチン誘導体を得ることができる。上記
した各種の製造法における反応後の処理としては、各種
の製造法に応じて通常の手法に従い反応後の処理を行う
ことができる。例えば、必要に応じて沈澱物をろ別し、
反応液を酢酸エチル、ジエチルエーテル、テトラヒドロ
フラン、ジクロロメタン、クロロホルム、トルエン、ベ
ンゼン、キシレン等の溶剤に溶解し、希塩酸、希硫酸、
希硝酸等の酸、又は希水酸化ナトリウム水溶液、希炭酸
ナトリウム水溶液、希炭酸水素カリウム水溶液、希アン
モニア水等の塩基で洗浄する。酸又は塩基で洗浄した
後、好ましくは速やかに逆の性質の水溶液、即ちそれぞ
れ塩基又は酸で洗浄し、更に水で洗浄し酸又は塩基を除
くことによって反応後の処理を実施できる。

【００２０】精製法としては通常の方法を採用すること
ができる。例えばシリカゲル、アルミナ、けいそう土
等、あるいはそれらを各種コーティング剤で修飾した充
填剤を用い、常圧から数百気圧の圧力下、順層又は逆層
のカラムクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン、トルエ
ン、エーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホ
ルム、アセトン、エタノール、メタノール、水、酢酸、
ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド、トリエチルアミン、アンモニア水等又はそれらの適
当な比率の混合溶媒で溶出する方法、又は同様の溶媒又
はそれらの適当な比率の混合溶媒を用いて再結晶又は再
沈澱あるいはそれらの方法を組み合わせて行なうことが
できる。

【００２１】本発明の上記式（１）のベナスタチン誘導
体は、必要に応じて生理学的に許容し得る塩に変換する
こともできる。これらの塩への変換は、通常知られた方
法により、前記した無機酸塩、有機酸塩、金属塩、有機
塩基塩などの塩に変換することにより実施できる。

【００２２】本発明のベナスタチン誘導体は、免疫調節
作用、特に強い免疫賦活作用を有し、従って、免疫調節
剤として有用である。ベナスタチン誘導体は以下の試験
例に示すようにリンパ球幼若化反応において低濃度（例
えば約７μｇ／ｍｌ以下）では免疫賦活作用を示し、高
濃度（例えば約１２μｇ／ｍｌ以上）では免疫抑制作用
を示す。しかもこの化合物は毒性を示さない。したがっ
て、ベナスタチン誘導体は免疫調節剤として極めて有用
である。ベナスタチン誘導体は、通常、経口投与あるい
は静脈、皮内、筋肉内投与などの非経口投与によって投
与することができる。投与量は投与する対象、投与ルー
トなどによって変動するが、通常０．５〜１００ｍｇ／
ｋｇ／日、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。

【００２３】投与する際の製剤としては慣用的に用いら
れている剤形が挙げられる。経口投与の場合には、デン
プンなどの通常の賦形剤などともに成型された錠剤、顆
粒剤、カプセル剤などが用いられる。非経口投与の場合
には生理食塩水、溶解剤などを用いて成型された通常の
注射剤などが用いられる。

【００２４】

【発明の効果】以上に詳細に説明したように、本発明で
は新規な生理活性物質ベナスタチン誘導体が提供され
る。本発明のベナスタチン誘導体は、水に対する高い溶
解性を示す。例えば化合物番号５のナトリウム塩は水に
対し０．２３ｍｇ／ｍｌでありベナスタチンＣの２０倍
以上の溶解性を示す。更には、本発明のベナスタチン誘
導体は、低濃度においては免疫賦活作用を示し、高濃度
では免疫抑制作用を示し、従って免疫調節剤として極め
て有用である。

【００２５】以下に本発明のベナスタチン誘導体の合成
例、製剤例及び試験例を挙げて、本発明を更に詳細に説
明する。

【合成例】実施例１ １−（４−カルボキシブチリル）ベナスタチンＣ（化合
物番号５）の合成 ベナスタチンＣ（９８ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌｅ）をピ
リジン（７．０ｍｌ）に溶解し、グルタル酸無水物（３
１ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌｅ）を加え、室温で３日間攪
拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで２回抽出
し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥後、有機層を減圧濃縮して得られた残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／テト
ラヒドロフラン＝２４／１〜２２／３）で精製して１−
（４−カルボキシブチリル）ベナスタチンＣ（５０ｍ
ｇ，収率４１％）を得た。更に精製不十分のフラクショ
ンを分取用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開溶
媒；クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、
１−（４−カルボキシブチリル）ベナスタチンＣ（１１
ｍｇ，収率９％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚＦＴ，ＴＭＳ，ＣＤ₃ Ｏ
Ｄ） ０．９３ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ） １．３３−１．４７ （４Ｈ，ｍ） １．７５ （６Ｈ，ｓ） １．６２−１．８６ （２Ｈ，ｍ） ２．１１ （２Ｈ，ｍ） ２．５２ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） ２．７９ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ） ３．０１ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） ６．２８ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ６．７１ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ７．２０ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ７．６０ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ７．６７ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ） ８．２３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ） ８．７６ （１Ｈ，ｓ） マススペクトル ＦＡＢｍａｓｓ ５７１．５（〔Ｍ＋Ｈ〕⁺ ）

【００２６】実施例２ １−（２−ジメチルアミノエチル）ベナスタチンＣ（化
合物番号９）の合成 ベナスタチンＣ（７２ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌｅ）をテ
トラヒドロフラン（４．０ｍｌ）に溶解しトリフェニル
フォスフィン（４７ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌｅ）を加
え、室温でアゾジカルボン酸エチルエステル（３１ｍ
ｇ，０．１８ｍｍｏｌｅ）のテトラヒドロフラン溶液
（３．０ｍｌ）を滴下した。続いてＮ，Ｎ−ジメチルア
ミノエタノール（１７ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌｅ）のテ
トラヒドロフラン溶液（５．０ｍｌ）を滴下し室温で１
４時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで２
回抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナ
トリウムで乾燥後、有機層を減圧濃縮して得られた残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム
／酢酸エチルエステル＝２４／１〜１／１，クロロホル
ム／メタノール＝１００／１〜４／１）で精製して１−
（２−ジメチルアミノエチル）ベナスタチンＣ（２０ｍ
ｇ，収率１９％）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚＦＴ，ＴＭＳ，ＣＤＣ
ｌ₃ ：ＣＤ₃ ＯＤ＝１０：１） ０．９０ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ） １．２１−１．４７ （４Ｈ，ｍ） １．７７ （６Ｈ，ｓ） １．５３−１．９２ （２Ｈ，ｍ） ２．３９ （６Ｈ，ｓ） ２．７３ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ） ２．８３ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ） ４．１７ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ） ６．４１ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ６．７８ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ） ６．９５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ） ７．２３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ） ７．６２ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ） ８．２６ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ） ９．６１ （１Ｈ，ｓ） マススペクトル ＦＡＢｍａｓｓ ５２８（〔Ｍ＋Ｈ〕⁺ ）

【００２７】

【製剤例】実施例３ 化合物番号５、３０重量部、結晶乳糖１２０部、結晶セ
ルロース１４７部及びステアリン酸マグネシウム３部を
Ｖ型混合機で混合後打錠し、１錠３００ｍｇの錠剤を得
た。

【００２８】

【試験例】以下に、ベナスタチン誘導体が免疫調節活性
を有し、且つ毒性を示さないことを試験例により示す。試験例１ ベナスタチン誘導体のリンパ球幼若化反応における免疫
調節活性 リンパ球幼若化反応に対するベナスタチン誘導体の調節
効果の試験法は次の通りである。培養には２０％牛胎児
血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｂｕｆｆｅｒ、１００μ
ｇ／ｍｌのストレプトマイシン及び１００単位／ｍｌの
ペニシリンＧを添加したＲＰＭＩ １６４０培地を用い
た。培養は９６穴の平底マイクロプレート（ＣＯＳＴＡ
Ｒ）で行った。マイトジェンは、リポポリサッカライド
（ＬＰＳ）とコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）をそれぞ
れ最終濃度１００、５μｇ／ｍｌで用いた。

【００２９】脾臓細胞は、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性、
＞２０週齢）から脾臓を取り出し単細胞浮遊液を作り、
ハイパーショック（ｈｙｐｅｒ ｓｈｏｃｋ）で赤血球
を除去し、ＬＰＳ用にはこれをそのまま用いて調整し、
Ｃｏｎ Ａ用にはＴ細胞分離用Ｎｙｌｏｎ Ｆｉｂｅｒ
（和光純薬）を通して調整した。各ウエルに２×１０ ⁵
個の脾細胞と、それぞれの希釈濃度の被験化合物を加え
総量０．２ｍｌとし、これを７２時間培養した。培養終
了の８時間前にウエル当たり３７ＫＢｑの〔 ³Ｈ〕−チ
ミジンを添加し、その細胞内への取り込み量を測定し
た。効果の判定は、それぞれの被験化合物添加群の対照
に対する〔 ³Ｈ〕−チミジンの取り込み量の比率によっ
た（日本免疫学会編、免疫実験操作法、第２２６７〜２
２７６頁）。ベナスタチン誘導体のマウスのリンパ球幼
若化反応に対する作用を表１及び２に示した。ベナスタ
チン誘導体はＬＰＳ，Ｃｏｎ Ａによるリンパ球幼若化
反応を低濃度において非常に強く促進した。

【００３０】

【表１】 ＬＰＳ及びＣｏｎ Ａによるマウスリンパ球幼若化反応に おける化合物番号５（Ｎａ塩）の作用 ───────────────────────────────── 化合物 濃度 作用指数（％） 番号 （μg/ml) ＬＰＳ Ｃｏｎ Ａ ───────────────────────────────── ５(Na 塩) 0.1 155.8 159.8 0.33 396.3 293.8 1 982.6 947.2 3.3 863.0 1320.1 10 22.6 13.3 33 2.0 1.7 100 1.8 1.6 コントロール 100.0 100.0 ─────────────────────────────────

【００３１】

【表２】 ＬＰＳ及びＣｏｎ Ａによるマウスリンパ球幼若化反応に おける化合物番号９（ＨＣｌ塩）の作用 ───────────────────────────────── 化合物 濃度 作用指数（％） 番号 （μg/ml) ＬＰＳ Ｃｏｎ Ａ ───────────────────────────────── ９（ＨＣｌ塩） 0.1 111.1 141.4 0.33 189.4 112.0 1 291.3 239.9 3.3 265.3 268.2 10 72.9 87.5 33 4.2 8.3 100 2.3 0.8 コントロール 100.0 100.0 ─────────────────────────────────

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 217/24 Ｃ０７Ｃ 217/24 (72)発明者 青柳 高明 神奈川県藤沢市本鵠沼３−３−６ (72)発明者 竹内 富雄 東京都品川区東五反田５−１−11−701 Ａ (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07C 69/353 A61K 31/135 A61K 31/225 A61P 37/00 A61P 37/06 C07C 217/24 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（１） 【化１】 〔式中、Ｒ¹は−ＣＨ＝ＣＨ−又は−ＣＨ₂ＣＨ₂−を示
   し、Ｒ²は−ＣＯ−（ＣＨ₂）_n−Ｙ又は−（ＣＨ₂）_n+1
   −Ｙを示す。ここでｎは０〜５の整数、Ｙは−ＣＯ₂Ｈ
   又はＮＲ³Ｒ⁴（Ｒ³，Ｒ⁴はそれぞれ水素原子、炭素原子
   数１〜５の低級アルキル基を示し、あるいはＲ³とＲ⁴が
   結合しその結合鎖中に酸素原子又は窒素原子を含んでい
   てもよい低級アルキレン基を示す）を示す〕で表わされ
   るベナスタチン誘導体又はその生理学的に許容しうる
   塩。
2. 【請求項２】 請求項１記載のベナスタチン誘導体又は
   その生理学的に許容しうる塩を有効成分として含有する
   免疫調節剤。