JP3135653B2 - 光学活性カルボン酸の製法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、α−置換された光学活
性カルボン酸を、相応するアミドのエナンチオマーの混
合物を酵素触媒によりエナンチオ選択加水分解すること
及び光学活性カルボン酸を単離することによって製造す
る方法に関する。
性カルボン酸を、相応するアミドのエナンチオマーの混
合物を酵素触媒によりエナンチオ選択加水分解すること
及び光学活性カルボン酸を単離することによって製造す
る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】α−アミノ酸は、天然産及び合成の両方
で食品工業、医薬品工業、農業化学工業等で多く使用さ
れる重要な分子である。光学的に純粋なＤ−（−）−フ
ェニルグリシンは、Ｄ−（−）−パラヒドロキシフェニ
ルグリシンが抗生物質アモキシリン製造の際の中間体で
あるため、抗生物質アンピシリン及びセファレキシンの
ための重要な構成単位である。Ｄ−エナンチオマーがフ
ルバリネート(Fluvalinate)（殺虫剤）のための価値の
ある中間体であるため、天然産のアミノ酸Ｌ−バリンは
シクロスポリン−Ａ発酵の先駆物質として好適である。
合成アミノ酸と同様にＤ−ホモフェニルアラニン及びＬ
−ホモフェニルアラニンを種々のＡＣＥ−阻害剤の合成
の際の構成単位として使用することができる。
で食品工業、医薬品工業、農業化学工業等で多く使用さ
れる重要な分子である。光学的に純粋なＤ−（−）−フ
ェニルグリシンは、Ｄ−（−）−パラヒドロキシフェニ
ルグリシンが抗生物質アモキシリン製造の際の中間体で
あるため、抗生物質アンピシリン及びセファレキシンの
ための重要な構成単位である。Ｄ−エナンチオマーがフ
ルバリネート(Fluvalinate)（殺虫剤）のための価値の
ある中間体であるため、天然産のアミノ酸Ｌ−バリンは
シクロスポリン−Ａ発酵の先駆物質として好適である。
合成アミノ酸と同様にＤ−ホモフェニルアラニン及びＬ
−ホモフェニルアラニンを種々のＡＣＥ−阻害剤の合成
の際の構成単位として使用することができる。
【０００３】α−アミノ酸以外にα−アルキル−α−ア
ミノ酸もまた種々の工業において重要である。Ｌ−α−
メチル−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンは、例
えば高血圧に対する重要な薬剤である。
ミノ酸もまた種々の工業において重要である。Ｌ−α−
メチル−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンは、例
えば高血圧に対する重要な薬剤である。
【０００４】α−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸及び／又は該
物質の誘導体は、該物質のペプチドと同様に一般的に生
物学的活性を有しており、かつ通常は抗生物質的活性及
び／又は抗腫瘍活性を有している。E. Buehler及びG.B.
Brown（J. Org. Chem.３２（１９６７）２６５）は、
種々のＮ−ヒドロキシアミノ酸が微生物学的発酵中に得
られる種々の抗生物質の成分であると述べており、これ
らの執筆者は、天然産のペプチドから得られる幾つかの
α−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸を挙げている。
物質の誘導体は、該物質のペプチドと同様に一般的に生
物学的活性を有しており、かつ通常は抗生物質的活性及
び／又は抗腫瘍活性を有している。E. Buehler及びG.B.
Brown（J. Org. Chem.３２（１９６７）２６５）は、
種々のＮ−ヒドロキシアミノ酸が微生物学的発酵中に得
られる種々の抗生物質の成分であると述べており、これ
らの執筆者は、天然産のペプチドから得られる幾つかの
α−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸を挙げている。
【０００５】キラルα−ヒドロキシ酸もまた、薬剤生成
物及び農業化学生成物の両方を製造する際の重要な分子
であり：これらの生成物は、例えばα−ヒドロキシプロ
ピオン酸（除草剤）、α−ヒドロキシフェニルブチル酸
（ＡＣＥ阻害剤）及びマンデル酸（分解剤(splitting a
gent)）である。α−ヒドロキシ酸と併用される場合の
通常の分解技術の付加的に重要な利点は、β−遮断薬の
合成にとって著しく重要であるキラルα−ヒドロキシア
ミンに還元することができる光学活性α−ヒドロキシ酸
アミドが残留されることである。
物及び農業化学生成物の両方を製造する際の重要な分子
であり：これらの生成物は、例えばα−ヒドロキシプロ
ピオン酸（除草剤）、α−ヒドロキシフェニルブチル酸
（ＡＣＥ阻害剤）及びマンデル酸（分解剤(splitting a
gent)）である。α−ヒドロキシ酸と併用される場合の
通常の分解技術の付加的に重要な利点は、β−遮断薬の
合成にとって著しく重要であるキラルα−ヒドロキシア
ミンに還元することができる光学活性α−ヒドロキシ酸
アミドが残留されることである。
【０００６】α−ヒドロキシカルボン酸アミドの、酵素
触媒によるエナンチオ選択加水分解は、特開昭６１‐８
８８９４号公報に記載されている。そこに記載されてい
る方法の場合には、アエロモナス ヒドロフィラ(Aerom
onashydrophila)（ＦＥＲＭＰ−７３６０）及びモラキ
セラ フェニルペルビカ（ＦＥＲＭ Ｐ−７３５９）が
使用される。基質は、α−ヒドロキシカルボン酸アミド
に制限される。
触媒によるエナンチオ選択加水分解は、特開昭６１‐８
８８９４号公報に記載されている。そこに記載されてい
る方法の場合には、アエロモナス ヒドロフィラ(Aerom
onashydrophila)（ＦＥＲＭＰ−７３６０）及びモラキ
セラ フェニルペルビカ（ＦＥＲＭ Ｐ−７３５９）が
使用される。基質は、α−ヒドロキシカルボン酸アミド
に制限される。
【０００７】上記方法の欠点は、収量及び光学純度（エ
ナンチオマー過剰率）が比較的低いことである。達成さ
れた光学純度は９０〜９５％のみであるが、しかし、多
くの場合の使用、特に薬剤への使用に対しては少なくと
も９９％の光学純度が要求される。
ナンチオマー過剰率）が比較的低いことである。達成さ
れた光学純度は９０〜９５％のみであるが、しかし、多
くの場合の使用、特に薬剤への使用に対しては少なくと
も９９％の光学純度が要求される。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、光学
活性Ｌ−カルボン酸及びまた残留Ｄ−カルボン酸アミド
がエナンチオマー過剰率（ｅ.ｅ.）９５％以上、特に９
８％以上、最大の場合には９９％以上で得られ、この場
合には高い収量も達成される方法を提供することであ
る。
活性Ｌ−カルボン酸及びまた残留Ｄ−カルボン酸アミド
がエナンチオマー過剰率（ｅ.ｅ.）９５％以上、特に９
８％以上、最大の場合には９９％以上で得られ、この場
合には高い収量も達成される方法を提供することであ
る。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記目的は、本発明によ
ればアミノ−、ヒドロキシ−もしくはＮ−ヒドロキシア
ミン基でα−置換されたラセミカルボン酸アミドを加水
分解することによって達成され、この場合、使用酵素は
オクロバクトルム アントロピ(Ochrobactrumanthropi)
又はクレブシエラ(Klebsiella)属ｓｐ.である。
ればアミノ−、ヒドロキシ−もしくはＮ−ヒドロキシア
ミン基でα−置換されたラセミカルボン酸アミドを加水
分解することによって達成され、この場合、使用酵素は
オクロバクトルム アントロピ(Ochrobactrumanthropi)
又はクレブシエラ(Klebsiella)属ｓｐ.である。
【００１０】
【作用】オクロバクトルム アントロピ又はクレブシエ
ラ属ｓｐ.が使用される場合に、Ｌ−カルボン酸及び残
留Ｄ−カルボン酸アミドが著しく光学的に純粋な形及び
高い収量で得られ、一方ではさらに、該微生物が、該物
質の使用を商業的規模で可能にする、著しく高い活性度
を有していることが見出された。また、本発明によって
使用される微生物を使用することによって、注目すべき
構造的多様性を有する著しく多数のα−置換カルボン酸
アミドを高い選択性及び活性度で加水分解することがで
きることも見出された。有利には、オクロバクトルム
アントロピＮＣＩＢ４０３２１又はクレブシエラ属ｓ
ｐ. ＮＣＩＢ４０３２２が使用される。
ラ属ｓｐ.が使用される場合に、Ｌ−カルボン酸及び残
留Ｄ−カルボン酸アミドが著しく光学的に純粋な形及び
高い収量で得られ、一方ではさらに、該微生物が、該物
質の使用を商業的規模で可能にする、著しく高い活性度
を有していることが見出された。また、本発明によって
使用される微生物を使用することによって、注目すべき
構造的多様性を有する著しく多数のα−置換カルボン酸
アミドを高い選択性及び活性度で加水分解することがで
きることも見出された。有利には、オクロバクトルム
アントロピＮＣＩＢ４０３２１又はクレブシエラ属ｓ
ｐ. ＮＣＩＢ４０３２２が使用される。
【００１１】適当な基質の例は、炭素原子２〜２０個を
有するα−アミノ酸アミド、例えばフェニルグリシンア
ミド、パラ−ヒドロキシフェニルグリシンアミド、バリ
ンアミド等である。例えばα−アミノ酸アミドの加水分
解は、公知のアミダーゼ（アミノペプチダーゼ）、例え
ばプソイドモナス プティダ(Pseudomonas putida)から
のアミダーゼの存在下での加水分解と比較して迅速に進
行する。加水分解活性が広いｐＨ範囲にわたって生じる
ことは利点である。他の適当な基質は、例えばα−ヒド
ロキシ酸アミド及びα−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸アミド
である。カルボン酸アミドは多くの場合炭素原子２〜２
０個を有し、かつα位に第２の置換基、例えばアルキル
基を有していてもよい。
有するα−アミノ酸アミド、例えばフェニルグリシンア
ミド、パラ−ヒドロキシフェニルグリシンアミド、バリ
ンアミド等である。例えばα−アミノ酸アミドの加水分
解は、公知のアミダーゼ（アミノペプチダーゼ）、例え
ばプソイドモナス プティダ(Pseudomonas putida)から
のアミダーゼの存在下での加水分解と比較して迅速に進
行する。加水分解活性が広いｐＨ範囲にわたって生じる
ことは利点である。他の適当な基質は、例えばα−ヒド
ロキシ酸アミド及びα−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸アミド
である。カルボン酸アミドは多くの場合炭素原子２〜２
０個を有し、かつα位に第２の置換基、例えばアルキル
基を有していてもよい。
【００１２】α−Ｎ−ヒドロキシ−アミノ酸アミンの酵
素加水分解は、これまで文献には全く記載されていなか
った。この種の加水分解方法での問題は、得られたα−
Ｎ−ヒドロキシ−アミノ酸が、このような方法の場合に
常用される基本条件下で脱カルボキシル化することであ
る。今回出願人によって、本発明による方法の場合には
良好な活性度が低いｐＨ値で、脱カルボキシル化が生じ
ないか又は脱カルボキシル化が殆ど生じないで達成され
ていることも見出された。酸素が化学的な脱カルボキシ
ル化反応のための触媒として作用する際には、α−Ｎ−
ヒドロキシアミノ酸アミドの加水分解中に反応混合物は
有利には窒素分子でフラッシされる。さらに加水分解は
窒素分子下で行なわれる。
素加水分解は、これまで文献には全く記載されていなか
った。この種の加水分解方法での問題は、得られたα−
Ｎ−ヒドロキシ−アミノ酸が、このような方法の場合に
常用される基本条件下で脱カルボキシル化することであ
る。今回出願人によって、本発明による方法の場合には
良好な活性度が低いｐＨ値で、脱カルボキシル化が生じ
ないか又は脱カルボキシル化が殆ど生じないで達成され
ていることも見出された。酸素が化学的な脱カルボキシ
ル化反応のための触媒として作用する際には、α−Ｎ−
ヒドロキシアミノ酸アミドの加水分解中に反応混合物は
有利には窒素分子でフラッシされる。さらに加水分解は
窒素分子下で行なわれる。
【００１３】本発明は、相応するＬ−酸に加水分解され
る基質のＬ−エナンチオマー及び、Ｄ−アミドを残留さ
せるＤ−エナンチオマーにとって著しく大きな利点を有
するエナンチオ選択酵素加水分解を基礎とする。
る基質のＬ−エナンチオマー及び、Ｄ−アミドを残留さ
せるＤ−エナンチオマーにとって著しく大きな利点を有
するエナンチオ選択酵素加水分解を基礎とする。
【００１４】本発明による方法によって使用される生物
は、オクロバクトルム アントロピ及びクレブシエラ属
ｓｐ.、殊にオクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ
４０３２１及びクレブシエラ属ｓｐ. ＮＣＩＢ４０３
２２である。これらの生体の生成は、成分、例えば炭素
源、窒素源、ビタミン及びミネラルを含有する、空気に
晒された媒体中で行なわれる。この種の酵素製造の活性
度及び選択性を最適にするために、加水分解されるべき
少量のアミド又は他の適当な誘導物質を培養基に添加す
ることができる。培養をバッチで、供給バッチ(fed-bat
ches)で行なうこともできるし、連続的に行なうことも
できる。
は、オクロバクトルム アントロピ及びクレブシエラ属
ｓｐ.、殊にオクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ
４０３２１及びクレブシエラ属ｓｐ. ＮＣＩＢ４０３
２２である。これらの生体の生成は、成分、例えば炭素
源、窒素源、ビタミン及びミネラルを含有する、空気に
晒された媒体中で行なわれる。この種の酵素製造の活性
度及び選択性を最適にするために、加水分解されるべき
少量のアミド又は他の適当な誘導物質を培養基に添加す
ることができる。培養をバッチで、供給バッチ(fed-bat
ches)で行なうこともできるし、連続的に行なうことも
できる。
【００１５】同様の培養方法は、特許明細書及び科学出
版物、例えば欧州特許出願公開第２４４９１２号明細書
から公知であり、かつこれらの印刷物に詳細に記載され
ており；従って該培養方法の記載は本明細書には必要な
い。本発明に使用される際の酵素調剤は純度及びその他
同様のことを強制されず、かつ粗製酵素溶液であっても
よいし、精製酵素であってもよく；また、該調剤は、必
要な活性度を有する透過性化された細胞からなっていて
もよいし、同様の活性度を有する細胞のホモジネートか
らなっていてもよい。また、酵素を固定化した形で使用
することもできるし、化学的に改質した形で使用するこ
ともできる。発明は、酵素が本発明に使用される態様に
よって制限されることは決してない。本発明の記載の範
囲内では、突然変異体から誘導された酵素を使用するこ
ともできるし、通常は遺伝的に改質された微生物から誘
導された酵素を使用することもできる。
版物、例えば欧州特許出願公開第２４４９１２号明細書
から公知であり、かつこれらの印刷物に詳細に記載され
ており；従って該培養方法の記載は本明細書には必要な
い。本発明に使用される際の酵素調剤は純度及びその他
同様のことを強制されず、かつ粗製酵素溶液であっても
よいし、精製酵素であってもよく；また、該調剤は、必
要な活性度を有する透過性化された細胞からなっていて
もよいし、同様の活性度を有する細胞のホモジネートか
らなっていてもよい。また、酵素を固定化した形で使用
することもできるし、化学的に改質した形で使用するこ
ともできる。発明は、酵素が本発明に使用される態様に
よって制限されることは決してない。本発明の記載の範
囲内では、突然変異体から誘導された酵素を使用するこ
ともできるし、通常は遺伝的に改質された微生物から誘
導された酵素を使用することもできる。
【００１６】エナンチオ選択酵素加水分解は、このよう
なものとして公知である。エナンチオ選択は、種々のエ
ナンチオマーの転化速度における差違を基礎としてい
る。本発明による方法の場合には上記アミドの殆ど専ら
１つのエナンチオマーが加水分解され、その結果して転
化率は約５０％であり、生成物ｅ.ｅ.及び基質ｅ.ｅ.は
約１００％であることが見出された。本発明による方法
の付加的な利点は、残留基質、カルボン酸アミドのＤ−
エナンチオマーを回収することもできることである。引
き続き、公知方法、例えば非立体特異酵素を使用するこ
とによって該カルボン酸アミドを加水分解して該カルボ
ン酸の別のエナンチオマーに変換することができる。転
化率とｅ.ｅ.値との間の関係は、エナンチオ選択酵素加
水分解についてはQu-Ming Gu他によってTetrahedron Le
tters ２７（１９８６）５２０３以降に記載されてお
り、かつより一般的な用語ではGhing-ShinChen他によっ
てJ. Am. Chem. Soc. １０４（１９８２）７２９４以
降に記載されている。エナンチオ選択転化についての一
般的理論はこれらの刊行物に記載されており、かつ本発
明による方法にも適用される。
なものとして公知である。エナンチオ選択は、種々のエ
ナンチオマーの転化速度における差違を基礎としてい
る。本発明による方法の場合には上記アミドの殆ど専ら
１つのエナンチオマーが加水分解され、その結果して転
化率は約５０％であり、生成物ｅ.ｅ.及び基質ｅ.ｅ.は
約１００％であることが見出された。本発明による方法
の付加的な利点は、残留基質、カルボン酸アミドのＤ−
エナンチオマーを回収することもできることである。引
き続き、公知方法、例えば非立体特異酵素を使用するこ
とによって該カルボン酸アミドを加水分解して該カルボ
ン酸の別のエナンチオマーに変換することができる。転
化率とｅ.ｅ.値との間の関係は、エナンチオ選択酵素加
水分解についてはQu-Ming Gu他によってTetrahedron Le
tters ２７（１９８６）５２０３以降に記載されてお
り、かつより一般的な用語ではGhing-ShinChen他によっ
てJ. Am. Chem. Soc. １０４（１９８２）７２９４以
降に記載されている。エナンチオ選択転化についての一
般的理論はこれらの刊行物に記載されており、かつ本発
明による方法にも適用される。
【００１７】反応に使用される細胞は必要に応じて分離
されていてもよく、かつ引き続く転化に、活性度が明ら
かに影響を及ぼされることなく再使用することができ
る。
されていてもよく、かつ引き続く転化に、活性度が明ら
かに影響を及ぼされることなく再使用することができ
る。
【００１８】問題の微生物の培養の開始時、培養中もし
くは培養後にアミドを培養基に添加することによって加
水分解を行なうことができる。培養細胞を例えば遠心分
離によって収集することもでき、かつアミドを含有する
反応媒体に添加することもできる。この場合には細胞懸
濁液及び乾燥細胞の両方、例えば凍結乾燥細胞、噴霧乾
燥細胞、及び有機溶剤、例えばアセトンもしくはトルエ
ンで処理した細胞を使用することができる。破壊された
細胞又は細胞からの抽出物を使用することもできる。
くは培養後にアミドを培養基に添加することによって加
水分解を行なうことができる。培養細胞を例えば遠心分
離によって収集することもでき、かつアミドを含有する
反応媒体に添加することもできる。この場合には細胞懸
濁液及び乾燥細胞の両方、例えば凍結乾燥細胞、噴霧乾
燥細胞、及び有機溶剤、例えばアセトンもしくはトルエ
ンで処理した細胞を使用することができる。破壊された
細胞又は細胞からの抽出物を使用することもできる。
【００１９】反応は通常水性環境の中で行なわれる。こ
の加水分解反応を有機溶剤の存在下で行なうこともまた
可能である。
の加水分解反応を有機溶剤の存在下で行なうこともまた
可能である。
【００２０】加水分解のための反応条件はそれほど重要
ではない。反応は通常水性環境の中で行なわれるが、し
かし水と有機溶剤の混合物を使用することもできる。ｐ
Ｈは、例えばＫＯＨ、ＮａＯＨ及びＮＨ4ＯＨを使用し
て酵素の活性度範囲内の値に調整され；この値は通常３
〜１１、特に４〜９.５である。さらに、加水分解は通
常周囲温度もしくは僅かに高い温度、即ち２０℃〜８５
℃の間の温度で行なわれる。３０℃〜７０℃の間の温度
が有利である。明らかに反応条件は、不利な副反応はい
ずれも回避される方法で選択されるべきである。
ではない。反応は通常水性環境の中で行なわれるが、し
かし水と有機溶剤の混合物を使用することもできる。ｐ
Ｈは、例えばＫＯＨ、ＮａＯＨ及びＮＨ4ＯＨを使用し
て酵素の活性度範囲内の値に調整され；この値は通常３
〜１１、特に４〜９.５である。さらに、加水分解は通
常周囲温度もしくは僅かに高い温度、即ち２０℃〜８５
℃の間の温度で行なわれる。３０℃〜７０℃の間の温度
が有利である。明らかに反応条件は、不利な副反応はい
ずれも回避される方法で選択されるべきである。
【００２１】基質の濃度は広い範囲内で変化することが
でき、かつ例えば２.５〜５００ｇ／ｌであってもよ
い。基質もしくは生成物との副反応を回避するために転
化を酸素の不在下で、例えば窒素分子を用いたフラッシ
ング下で行なわせることができる。
でき、かつ例えば２.５〜５００ｇ／ｌであってもよ
い。基質もしくは生成物との副反応を回避するために転
化を酸素の不在下で、例えば窒素分子を用いたフラッシ
ング下で行なわせることができる。
【００２２】本発明による方法を使用しかつ上記の微生
物を使用することによって多数のα−置換カルボン酸ア
ミドを加水分解して、著しく高い選択性及び活性度を有
する、相応するカルボン酸に変換することができること
が見出された。実際には、同じ生体触媒を種々の生成物
の製造に使用することは殊に有利であり、それというの
も、この個々の生成物は通常それぞれ少ない需要量にし
か相当しないからである。
物を使用することによって多数のα−置換カルボン酸ア
ミドを加水分解して、著しく高い選択性及び活性度を有
する、相応するカルボン酸に変換することができること
が見出された。実際には、同じ生体触媒を種々の生成物
の製造に使用することは殊に有利であり、それというの
も、この個々の生成物は通常それぞれ少ない需要量にし
か相当しないからである。
【００２３】
【実施例】次に、本発明を例につき詳説するが、しかし
ながら、本発明はこの例の範囲内で限定されるものでは
ない。
ながら、本発明はこの例の範囲内で限定されるものでは
ない。
【００２４】これらの例の場合には反応生成物の分析、
特にエナンチオマー過剰率（ｅ.ｅ.）の測定を２つのＨ
ＰＬＣ方法を用いて行い、この方法では必要に応じて反
応の選択度の値をGhing-Shin Chen氏らの式を用いて計
算することができる。（J. Am. Chem. Soc. １０４（１
９８２）７２９４以降）。α−Ｈ−α−アミノ酸及びα
−アルキル−α−アミノ酸の２つ、並びに相応するアミ
ノ酸アミドをA. Duchateau氏らの記載（J. Chromatogr.
４７１（１９８９）２６３）の通りに分析した。マン
デル酸のエナンチオマー構成を、逆相カラム（ヌクレオ
シル(Nucleosil)１２０−Ｃ18）上で、リガンド交換ク
ロマトグラフィーを使用することによって２つのエナン
チオマーを分離することによって測定した。使用する溶
離剤を次の通りにして得た：トリエチルアミン０.２ｇ
を２ ｌ メスフラスコ中のＨ2Ｏ１８００ｍｌに添加
し；さらにＣｕ(ＣＨ3ＣＯＯ)2・２Ｈ2Ｏ ０.８ｇ及び
Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピル−Ｌ−アラニン１.３８ｇを
添加した。ｐＨを酢酸（１.８モル／ｌ）を用いて５.３
に調整し、さらにメスフラスコをＨ2Ｏで２リットルま
で満たした。得られた溶液をサルトリウス膜フィルター
(Sartorius membrane filter)（０.４５μｍ）を通して
濾過し、かつアセトンニトリルと次の比で混合した：Ｃ
ｕ−溶液２３０／アセトンニトリル２０（ｖ／ｖ）。流
速は１.５ｍｌ／分であり、かつ温度は４０℃であっ
た。成分を、Ｆｅ2（ＳＯ4）3試薬（Ｈ2Ｏ６００ｍｌ中
のＦｅ2（ＳＯ4）3・ｎＨ2Ｏ ５００ｍｇ；ｐＨはＨ2
（ＳＯ4）／Ｈ2Ｏ（１０／２４０−溶液）を用いて２.
１に調整した）を用いた後カラム反応を使用して選択的
に検出した。検出を紫外可視検出器を用いて４２０ｎｍ
で行なった。添加率の測定前に上記のＨＰＬＣ方法を使
用し、この場合、紫外線検出を用いた逆相ＨＰＬＣ系又
は、加水分解反応中に放出されたアンモニアが測定され
るイオン選択性アンモニア電極のいずれかを使用した。
特にエナンチオマー過剰率（ｅ.ｅ.）の測定を２つのＨ
ＰＬＣ方法を用いて行い、この方法では必要に応じて反
応の選択度の値をGhing-Shin Chen氏らの式を用いて計
算することができる。（J. Am. Chem. Soc. １０４（１
９８２）７２９４以降）。α−Ｈ−α−アミノ酸及びα
−アルキル−α−アミノ酸の２つ、並びに相応するアミ
ノ酸アミドをA. Duchateau氏らの記載（J. Chromatogr.
４７１（１９８９）２６３）の通りに分析した。マン
デル酸のエナンチオマー構成を、逆相カラム（ヌクレオ
シル(Nucleosil)１２０−Ｃ18）上で、リガンド交換ク
ロマトグラフィーを使用することによって２つのエナン
チオマーを分離することによって測定した。使用する溶
離剤を次の通りにして得た：トリエチルアミン０.２ｇ
を２ ｌ メスフラスコ中のＨ2Ｏ１８００ｍｌに添加
し；さらにＣｕ(ＣＨ3ＣＯＯ)2・２Ｈ2Ｏ ０.８ｇ及び
Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピル−Ｌ−アラニン１.３８ｇを
添加した。ｐＨを酢酸（１.８モル／ｌ）を用いて５.３
に調整し、さらにメスフラスコをＨ2Ｏで２リットルま
で満たした。得られた溶液をサルトリウス膜フィルター
(Sartorius membrane filter)（０.４５μｍ）を通して
濾過し、かつアセトンニトリルと次の比で混合した：Ｃ
ｕ−溶液２３０／アセトンニトリル２０（ｖ／ｖ）。流
速は１.５ｍｌ／分であり、かつ温度は４０℃であっ
た。成分を、Ｆｅ2（ＳＯ4）3試薬（Ｈ2Ｏ６００ｍｌ中
のＦｅ2（ＳＯ4）3・ｎＨ2Ｏ ５００ｍｇ；ｐＨはＨ2
（ＳＯ4）／Ｈ2Ｏ（１０／２４０−溶液）を用いて２.
１に調整した）を用いた後カラム反応を使用して選択的
に検出した。検出を紫外可視検出器を用いて４２０ｎｍ
で行なった。添加率の測定前に上記のＨＰＬＣ方法を使
用し、この場合、紫外線検出を用いた逆相ＨＰＬＣ系又
は、加水分解反応中に放出されたアンモニアが測定され
るイオン選択性アンモニア電極のいずれかを使用した。
【００２５】例 Ｉ 生体触媒の培養 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ４０３２１と
クレブシエラ属ｓｐ.ＮＣＩＢ４０３２２それぞれの培
養を培養基５００ｍｌで満たされた２ ｌ 三角フラスコ
中で行ない、この場合、該培養基を撹拌（１５０ｒｐ
ｍ）下で２８℃でインキュベーションを行なった。培養
基は次の成分を含有していた：イーストカーボンベース
１０ｇ／ｌ（Difco）、ＤＬ−マンデル酸アミド１.５ｇ
／ｌ、及び燐酸カリウム緩衝剤、ｐＨ７.０ ５０ミリ
モル。接種の約２０時間後に培養細胞を遠心分離（１０
分、１５０００ｇ）によって収集し、燐酸カリウム緩衝
剤（５０ミリモル、ｐＨ７.０）を使用して洗浄し、か
つ同じ緩衝剤中で再懸濁した。このようにして得られた
細胞懸濁液を酵素加水分解に直接使用するか又は先ず短
時間、深冷凍結した（−２０℃）。
クレブシエラ属ｓｐ.ＮＣＩＢ４０３２２それぞれの培
養を培養基５００ｍｌで満たされた２ ｌ 三角フラスコ
中で行ない、この場合、該培養基を撹拌（１５０ｒｐ
ｍ）下で２８℃でインキュベーションを行なった。培養
基は次の成分を含有していた：イーストカーボンベース
１０ｇ／ｌ（Difco）、ＤＬ−マンデル酸アミド１.５ｇ
／ｌ、及び燐酸カリウム緩衝剤、ｐＨ７.０ ５０ミリ
モル。接種の約２０時間後に培養細胞を遠心分離（１０
分、１５０００ｇ）によって収集し、燐酸カリウム緩衝
剤（５０ミリモル、ｐＨ７.０）を使用して洗浄し、か
つ同じ緩衝剤中で再懸濁した。このようにして得られた
細胞懸濁液を酵素加水分解に直接使用するか又は先ず短
時間、深冷凍結した（−２０℃）。
【００２６】例 II ＤＬ−フェニルグリシンアミドの加水分解 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ４０３２１を
例Ｉに記載されたとおりに培養した。
例Ｉに記載されたとおりに培養した。
【００２７】このようにして得られた細胞懸濁液は、１
ｍｌ当り乾燥重量５０ｍｇを有していた。該細胞懸濁液
０.５ｍｌを、ＤＬ−フェニルグリシンアミド５.０ｇ／
ｌを含有する燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ
８.０、１９.５ｍｌに添加した。１５分間のインキュベ
ーション（４０℃、５０ｒｐｍ）後に添加されたアミド
の５０％が加水分解された。ＨＰＬＣ分析によって、Ｌ
−アミドのみが加水分解されたことが示された。残留反
応混合物は、Ｌ−フェニルグリシン及びＤ−フェニルグ
リシンアミドの両方をｅ.ｅ.≧９９.５％で含有してい
た。Ｌ−フェニルグリシンアミド及びＤ−フェニルグリ
シンアミドを別々に用いたインキュベーション中にＬ−
フェニルグリシンアミドのみが加水分解された。アンモ
ニアは理論量で堆積した。
ｍｌ当り乾燥重量５０ｍｇを有していた。該細胞懸濁液
０.５ｍｌを、ＤＬ−フェニルグリシンアミド５.０ｇ／
ｌを含有する燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ
８.０、１９.５ｍｌに添加した。１５分間のインキュベ
ーション（４０℃、５０ｒｐｍ）後に添加されたアミド
の５０％が加水分解された。ＨＰＬＣ分析によって、Ｌ
−アミドのみが加水分解されたことが示された。残留反
応混合物は、Ｌ−フェニルグリシン及びＤ−フェニルグ
リシンアミドの両方をｅ.ｅ.≧９９.５％で含有してい
た。Ｌ−フェニルグリシンアミド及びＤ−フェニルグリ
シンアミドを別々に用いたインキュベーション中にＬ−
フェニルグリシンアミドのみが加水分解された。アンモ
ニアは理論量で堆積した。
【００２８】例 III ＤＬ−マンデル酸アミドのエナンチオ選択加水分解 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ４０３２１と
クレブシエラ属ｓｐ.ＮＣＩＢ４０３２２をそれぞれ例
Ｉに記載されたとおりに培養した。例２の場合と同様
に、得られたオクロバクトルムの細胞懸濁液は乾燥重量
５０ｍｇ／ｍｌを有しており、クレブシエラ細胞の場合
には乾燥重量は４８ｍｇ／ｍｌであった。これらの細胞
懸濁液２.０ｍｌを、ＤＬ−マンデル酸アミドを含有す
る燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ７.０、１
８ｍｌに添加した。７０分間のインキュベーション（２
８℃、１５０ｒｐｍ）後にインキュベーションを中断
し、かつ反応混合物を分析した。転化率をＨＰＬＣ及び
イオン選択性アンモニア電極の両方を用いて測定した。
結果は第１表に示されている。
クレブシエラ属ｓｐ.ＮＣＩＢ４０３２２をそれぞれ例
Ｉに記載されたとおりに培養した。例２の場合と同様
に、得られたオクロバクトルムの細胞懸濁液は乾燥重量
５０ｍｇ／ｍｌを有しており、クレブシエラ細胞の場合
には乾燥重量は４８ｍｇ／ｍｌであった。これらの細胞
懸濁液２.０ｍｌを、ＤＬ−マンデル酸アミドを含有す
る燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ７.０、１
８ｍｌに添加した。７０分間のインキュベーション（２
８℃、１５０ｒｐｍ）後にインキュベーションを中断
し、かつ反応混合物を分析した。転化率をＨＰＬＣ及び
イオン選択性アンモニア電極の両方を用いて測定した。
結果は第１表に示されている。
【００２９】 第１表 転化率 ｅ.ｅ.p Ｅ ＮＨ3 ＨＰＬＣ ＮＨ3 ＨＰＬＣ ─────────────────────────────────── オクロバクトルム アントロピ ０.４８ ０.４６ ９８.４％ ３７８ ３３０ ＮＣＩＢ４０３２１ クレブシエラ属ｓｐ. ０.３２ ０.４０ ９７.１％ １０７ １３３ ＮＣＩＢ４０３２２ 例 IV ｐＨの作用としての加水分解率 例IIIの場合と同様にして、オクロバクトルム アント
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度をｐＨの作用
として試験した。インキュベーションを６０℃で行なっ
た。次の緩衝剤（１００ミリモル）を使用した：燐酸カ
リウム緩衝剤（△）；トリス／ＨＣｌ緩衝剤（＊）、グ
リシン／ＮａＯＨ緩衝剤（●）。結果は図１に示されて
いる。活性度１００％は、加水分解率１４０ナノモル
ｍｉｎ-1（乾燥重量ｍｇ）-1に相応する。
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度をｐＨの作用
として試験した。インキュベーションを６０℃で行なっ
た。次の緩衝剤（１００ミリモル）を使用した：燐酸カ
リウム緩衝剤（△）；トリス／ＨＣｌ緩衝剤（＊）、グ
リシン／ＮａＯＨ緩衝剤（●）。結果は図１に示されて
いる。活性度１００％は、加水分解率１４０ナノモル
ｍｉｎ-1（乾燥重量ｍｇ）-1に相応する。
【００３０】例 Ｖ 温度の作用としての加水分解率 例IIIの場合と同様にして、オクロバクトルム アント
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度を温度の作用
として試験した。インキュベーションをｐＨ８.５（ト
リス／ＨＣｌ１００ミリモル）で行なった。結果は図２
に示されている。活性度１００％は、加水分解率１７５
ナノモル ｍｉｎ−１（乾燥重量ｍｇ）−１に相応す
る。
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度を温度の作用
として試験した。インキュベーションをｐＨ８.５（ト
リス／ＨＣｌ１００ミリモル）で行なった。結果は図２
に示されている。活性度１００％は、加水分解率１７５
ナノモル ｍｉｎ−１（乾燥重量ｍｇ）−１に相応す
る。
【００３１】例 VI 基質及び／又は生成物の抑制 例IIIの場合と同様にして、オクロバクトルム アント
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度をマンデル酸
アミド及びマンデル酸の両方の濃度の作用として試験し
た。マンデル酸１００ｇ／ｌの存在下では活性度は、例
３の場合に測定された活性度と実質的に同じであった。
マンデル酸アミド１００ｇ／ｌの存在下では活性度は、
例３の場合に測定された活性度より２５％低かった。
ロピ ＮＣＩＢ４０３２１細胞を使用することによって
ＤＬ−マンデル酸アミドの加水分解活性度をマンデル酸
アミド及びマンデル酸の両方の濃度の作用として試験し
た。マンデル酸１００ｇ／ｌの存在下では活性度は、例
３の場合に測定された活性度と実質的に同じであった。
マンデル酸アミド１００ｇ／ｌの存在下では活性度は、
例３の場合に測定された活性度より２５％低かった。
【００３２】例 VII α−Ｎ−ヒドロキシフェニルグリシンアミドのエナンチ
オ選択加水分解 例Ｉの場合と同様にして、オクロバクトルム アントロ
ピ ＮＣＩＢ４０３２１を培養した。ＤＬ−α−Ｎ−ヒ
ドロキシフェニルグリシンアミド２.０ｇ／ｌを含有す
る燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ６.０、１
９.５ｍｌを窒素分子でフラッシした。さらに、オクロ
バクトルム細胞懸濁液（１ｍｌ当りの乾燥重量５０ｍ
ｇ）０.５ｍｌをこの反応媒体に添加した。この混合物
を窒素分子で再度フラッシし、かつこのインキュベーシ
ョン混合物を４０℃で振盪（１５０ｒｐｍ）しながらイ
ンキュベーションした。６０分後にはＤＬアミドの５０
％が加水分解されていた（ＨＰＬＣ分析及びアンモニア
測定）。１２０分後及び１８０分後にはアミド及びアン
モニアの全く同じ濃度が測定された。Ｄ−α−Ｎ−ヒド
ロキシフェニルグリシンアミド及びＬ−α−Ｎ−ヒドロ
キシフェニルグリシンアミドを別々に用いたインキュベ
ーションによって、Ｌ−アミドのみが加水分解されてい
たことが示された。
オ選択加水分解 例Ｉの場合と同様にして、オクロバクトルム アントロ
ピ ＮＣＩＢ４０３２１を培養した。ＤＬ−α−Ｎ−ヒ
ドロキシフェニルグリシンアミド２.０ｇ／ｌを含有す
る燐酸カリウム緩衝剤１００ミリモル、ｐＨ６.０、１
９.５ｍｌを窒素分子でフラッシした。さらに、オクロ
バクトルム細胞懸濁液（１ｍｌ当りの乾燥重量５０ｍ
ｇ）０.５ｍｌをこの反応媒体に添加した。この混合物
を窒素分子で再度フラッシし、かつこのインキュベーシ
ョン混合物を４０℃で振盪（１５０ｒｐｍ）しながらイ
ンキュベーションした。６０分後にはＤＬアミドの５０
％が加水分解されていた（ＨＰＬＣ分析及びアンモニア
測定）。１２０分後及び１８０分後にはアミド及びアン
モニアの全く同じ濃度が測定された。Ｄ−α−Ｎ−ヒド
ロキシフェニルグリシンアミド及びＬ−α−Ｎ−ヒドロ
キシフェニルグリシンアミドを別々に用いたインキュベ
ーションによって、Ｌ−アミドのみが加水分解されてい
たことが示された。
【００３３】例 VIII α−メチルフェニルグリシンアミドのエナンチオ選択加
水分解 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ４０３２１細
胞懸濁液（１ｍｌ当りの乾燥重量５０ｍｇ）２.０ｍｌ
を、ＤＬ−α−メチルフェニルグリシンアミド２.０ｇ
／ｌを含有する燐酸カリウム緩衝剤（ｐＨ８.０）１０
０ミリモル、１８ｍｌに添加した。６０分間のインキュ
ベーション（４０℃、１５０ｒｐｍ）後にはアミドの５
０％が加水分解されていた。残留反応混合物の分析によ
って、Ｌ−α−メチルフェニルグリシン及びＤ−α−メ
チルフェニルグリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で
存在していたことが示された。
水分解 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩＢ４０３２１細
胞懸濁液（１ｍｌ当りの乾燥重量５０ｍｇ）２.０ｍｌ
を、ＤＬ−α−メチルフェニルグリシンアミド２.０ｇ
／ｌを含有する燐酸カリウム緩衝剤（ｐＨ８.０）１０
０ミリモル、１８ｍｌに添加した。６０分間のインキュ
ベーション（４０℃、１５０ｒｐｍ）後にはアミドの５
０％が加水分解されていた。残留反応混合物の分析によ
って、Ｌ−α−メチルフェニルグリシン及びＤ−α−メ
チルフェニルグリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で
存在していたことが示された。
【００３４】例 IX バリンアミドのエナンチオ選択加水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−バリンアミドを用いて行なった。４時間後の残留反応
混合物の分析によって、ｅ.ｅ.９８.５％のＬ−バリン
が生成されており、かつｅ.ｅ.９９％のＤ−バリンアミ
ドが残留したことが示された。
−バリンアミドを用いて行なった。４時間後の残留反応
混合物の分析によって、ｅ.ｅ.９８.５％のＬ−バリン
が生成されており、かつｅ.ｅ.９９％のＤ−バリンアミ
ドが残留したことが示された。
【００３５】例 Ｘ α−メチルバリンアミドのエナンチオ選択加水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−メチルバリンアミドを用いて行なった。８時間後
の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−メチルバリ
ン及びＤ−α−メチルバリンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９
９.５％で反応混合物中に存在していたことが示され
た。
−α−メチルバリンアミドを用いて行なった。８時間後
の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−メチルバリ
ン及びＤ−α−メチルバリンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９
９.５％で反応混合物中に存在していたことが示され
た。
【００３６】例 XI α−アリル−フェニルグリシンアミドのエナンチオ選択
加水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−アリル−フェニルグリシンα−アミドを用いて行
なった。８時間後の残留反応混合物の分析によって、
ｅ.ｅ.９９.５％のＬ−α−アリル−フェニルグリシン
が生成されており、かつｅ.ｅ.９９.５％のＤ−α−ア
リル−フェニルグリシンアミドが残留したことが示され
た。
加水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−アリル−フェニルグリシンα−アミドを用いて行
なった。８時間後の残留反応混合物の分析によって、
ｅ.ｅ.９９.５％のＬ−α−アリル−フェニルグリシン
が生成されており、かつｅ.ｅ.９９.５％のＤ−α−ア
リル−フェニルグリシンアミドが残留したことが示され
た。
【００３７】例 ＸＩＩ α−プロピルフェニルグリシンアミドのエナンチオ選択
加水分解 例ＶＩＩＩの場合と同様にして、インキュベーションを
ＤＬ−α−プロピルフェニルグリシンアミドを用いて行
なった。８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ
−α−プロピルフェニルグリシン及びＤ−α−プロピル
フェニルグリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９.５％で
反応混合物中に存在していたことが示された。
加水分解 例ＶＩＩＩの場合と同様にして、インキュベーションを
ＤＬ−α−プロピルフェニルグリシンアミドを用いて行
なった。８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ
−α−プロピルフェニルグリシン及びＤ−α−プロピル
フェニルグリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９.５％で
反応混合物中に存在していたことが示された。
【００３８】例 XIII α−エチルフェニルグリシンアミドのエナンチオ選択加
水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−エチルフェニルグリシンアミドを用いて行なっ
た。８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α
−エチルフェニルグリシン及びＤ−α−エチルフェニル
グリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中
に存在していたことが示された。
水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−エチルフェニルグリシンアミドを用いて行なっ
た。８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α
−エチルフェニルグリシン及びＤ−α−エチルフェニル
グリシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中
に存在していたことが示された。
【００３９】例 XIV α−シンナミル−アラニンアミドのエナンチオ選択加水
分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−シンナミル−アラニンアミドを用いて行なった。
８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−シ
ンナミル−アラニン及びＤ−α−シンナミル−アラニン
アミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中に存在し
ていたことが示された。
分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−α−シンナミル−アラニンアミドを用いて行なった。
８時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−シ
ンナミル−アラニン及びＤ−α−シンナミル−アラニン
アミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中に存在し
ていたことが示された。
【００４０】例 XV 第三ロイシンアミドのエナンチオ選択加水分解 例VIIIの場合と同様にして、インキュベーションをＤＬ
−第三ロイシンアミドを用いて行なった。８時間後の残
留反応混合物の分析によって、Ｌ−第三ロイシン及びＤ
−第三ロイシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混
合物中に存在していたことが示された。
−第三ロイシンアミドを用いて行なった。８時間後の残
留反応混合物の分析によって、Ｌ−第三ロイシン及びＤ
−第三ロイシンアミドの両方がｅ.ｅ.≧９９％で反応混
合物中に存在していたことが示された。
【００４１】例 ＸＶＩ α−メチルロイシンアミドのエナンチオ選択加水分解 例ＶＩＩＩの場合と同様にして、インキュベーションを
ＤＬ−α−メチルロイシンアミドを用いて行なった。４
時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−メチ
ルロイシン及びＤ−α−メチルロイシンアミドの両方が
ｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中に存在していたことが示
された。
ＤＬ−α−メチルロイシンアミドを用いて行なった。４
時間後の残留反応混合物の分析によって、Ｌ−α−メチ
ルロイシン及びＤ−α−メチルロイシンアミドの両方が
ｅ.ｅ.≧９９％で反応混合物中に存在していたことが示
された。
【図１】本発明による加水分解の活性度とｐＨとの関係
を示す線図である。
を示す線図である。
【図２】本発明による加水分解の活性度と温度との関係
を示す線図である。
を示す線図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 41/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (9)
- 【請求項１】 光学活性カルボン酸を、相応するアミド
のエナンチオマーの混合物を酵素によりエナンチオ選択
加水分解すること及び光学活性酸を単離することによっ
て製造する方法において、Ｌ−カルボン酸を、アミノ
−、ヒドロキシ−もしくはＮ−ヒドロキシルアミン基で
α−置換されたＬカルボン酸アミド及びＤカルボン酸ア
ミドの混合物を、オクロバクトルム アントロピ又はク
レブシエラ属ｓｐ.を酵素として使用して、酵素加水分
解することによって製造することを特徴とする、光学活
性カルボン酸の製法。 - 【請求項２】 オクロバクトルム アントロピ ＮＣＩ
Ｂ４０３２１又はクレブシエラ属ｓｐ. ＮＣＩＢ４０
３２２を酵素として使用する、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 加水分解をｐＨ４〜９.５の間で行な
う、請求項１又は２記載の方法。 - 【請求項４】 加水分解を温度３０〜７０℃で行なう、
請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】 α−アミノ酸アミドを基質として使用す
る、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項６】 α−アルキル−α−アミノ酸アミドをα
−アミノ酸アミドとして使用する、請求項５記載の方
法。 - 【請求項７】 α−Ｎ−ヒドロキシアミノ酸アミドを基
質として使用する、請求項１から４までのいずれか１項
に記載の方法。 - 【請求項８】 α−ヒドロキシ酸アミドを基質として使
用する、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方
法。 - 【請求項９】 光学活性カルボン酸アミドを製造する方
法において、請求項１から８までのいずれか１項に記載
の方法で残留カルボン酸アミドを得ることによる光学活
性カルボン酸アミドの製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL9100038A NL9100038A (nl) | 1991-01-11 | 1991-01-11 | Enzym-gekatalyseerde bereiding van optisch aktieve carbonzuren. |
| NL9100038 | 1991-01-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0530992A JPH0530992A (ja) | 1993-02-09 |
| JP3135653B2 true JP3135653B2 (ja) | 2001-02-19 |
Family
ID=19858714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04002845A Expired - Fee Related JP3135653B2 (ja) | 1991-01-11 | 1992-01-10 | 光学活性カルボン酸の製法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP0494716B1 (ja) |
| JP (1) | JP3135653B2 (ja) |
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| CA (1) | CA2059075A1 (ja) |
| DE (1) | DE69213033T2 (ja) |
| DK (1) | DK0494716T3 (ja) |
| ES (1) | ES2093764T3 (ja) |
| NL (1) | NL9100038A (ja) |
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