JP3122520B2 - ２−アミノピリジン誘導体、その製造方法及び蛍光標識剤 - Google Patents
２−アミノピリジン誘導体、その製造方法及び蛍光標識剤Info
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、２−アミノピリジン誘
導体及びその製造法に関し、特に、糖、蛋白質、アミノ
酸、脂質、核酸等の生体物質を蛍光標識して種々の検定
等に使用できると共に該生体物質間又は該生体物質と合
成樹脂とを架橋することができる二官能性架橋剤に関す
るものである。
導体及びその製造法に関し、特に、糖、蛋白質、アミノ
酸、脂質、核酸等の生体物質を蛍光標識して種々の検定
等に使用できると共に該生体物質間又は該生体物質と合
成樹脂とを架橋することができる二官能性架橋剤に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、糖蛋白質等の複合糖質の構造とそ
の機能の関係を研究するために、より高感度でしかも微
量の試料で定量検定が可能な方法が種々提案されてい
る。例えば、糖鎖の微量分析の方法としては、還元末端
を糖アルコールに変換する際にトリチウムを導入し、そ
の放射活性を利用することが挙げられる。この検出感度
は、ｐｍｏｌレベルであり、良好であるが、放射性物質
であるために種々の制約がある。
の機能の関係を研究するために、より高感度でしかも微
量の試料で定量検定が可能な方法が種々提案されてい
る。例えば、糖鎖の微量分析の方法としては、還元末端
を糖アルコールに変換する際にトリチウムを導入し、そ
の放射活性を利用することが挙げられる。この検出感度
は、ｐｍｏｌレベルであり、良好であるが、放射性物質
であるために種々の制約がある。
【０００３】この制約がない高感度検定法として、２−
アミノピリジン等の有機化合物を蛍光標識剤として使用
する方法が公知である（例えば、Ｓ．ハセ等、ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー、第９５巻、第１９７〜
２０３頁（１９８４））。これは、糖又は糖鎖の還元末
端に該２−アミノ基を反応させてシッフ塩基とし、次い
で還元して、蛍光により検出するものであり、感度は上
述と同様にｐｍｏｌレベルであることが開示されてい
る。
アミノピリジン等の有機化合物を蛍光標識剤として使用
する方法が公知である（例えば、Ｓ．ハセ等、ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー、第９５巻、第１９７〜
２０３頁（１９８４））。これは、糖又は糖鎖の還元末
端に該２−アミノ基を反応させてシッフ塩基とし、次い
で還元して、蛍光により検出するものであり、感度は上
述と同様にｐｍｏｌレベルであることが開示されてい
る。
【０００４】しかしながら、該蛍光標識剤は、糖鎖の構
造解析には有効であるが、一官能性であるため、他の生
体物質、例えば、蛋白質、アミノ酸、脂質、核酸等と糖
との複合体等を形成させることはできず、従ってそれら
を総合的に解析するには、十分であるとは言えなかっ
た。
造解析には有効であるが、一官能性であるため、他の生
体物質、例えば、蛋白質、アミノ酸、脂質、核酸等と糖
との複合体等を形成させることはできず、従ってそれら
を総合的に解析するには、十分であるとは言えなかっ
た。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の第一の目的
は、種々の目的に応じて糖、蛋白質、アミノ酸、核酸も
しくは脂質等の生体物質同士間、又はこれらの物質とポ
リマー樹脂との間の所望の複合構造を形成できる新規な
二官能性の構造を有する２−アミノピリジン誘導体、該
２−アミノピリジン誘導体のアミノ基と糖が結合した誘
導体であって、前記生体物質、ポリマー樹脂等がさらに
結合して複合体構造を形成できる官能基を有する一官能
性の構造を有する２−アミノピリジン誘導体、及びその
製造方法を提供することであり、第二に該複合体が高感
度に検出できる二官能性もしくは一官能性蛍光標識剤を
提供することであり、第三に糖蛋白質、糖脂質等の生体
内複合体と類似構造の前記複合体を形成できる二官能性
架橋剤を提供することである。
は、種々の目的に応じて糖、蛋白質、アミノ酸、核酸も
しくは脂質等の生体物質同士間、又はこれらの物質とポ
リマー樹脂との間の所望の複合構造を形成できる新規な
二官能性の構造を有する２−アミノピリジン誘導体、該
２−アミノピリジン誘導体のアミノ基と糖が結合した誘
導体であって、前記生体物質、ポリマー樹脂等がさらに
結合して複合体構造を形成できる官能基を有する一官能
性の構造を有する２−アミノピリジン誘導体、及びその
製造方法を提供することであり、第二に該複合体が高感
度に検出できる二官能性もしくは一官能性蛍光標識剤を
提供することであり、第三に糖蛋白質、糖脂質等の生体
内複合体と類似構造の前記複合体を形成できる二官能性
架橋剤を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、下記化６に記
載の一般式で表される化合物（ａ）であることを特徴と
する２−アミノピリジン誘導体である。
載の一般式で表される化合物（ａ）であることを特徴と
する２−アミノピリジン誘導体である。
【０００７】
【化６】
【０００８】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、互いに
同一でも異なっても良く、各々水素、炭素数１〜４の低
級アルキル基から選択される基を表す。Ｒ4 は、−（Ｃ
Ｈ2）m ＣＯＯＨで表されるカルボキシル基またはカル
ボキシアルキル基、−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシア
ノ基またはシアノアルキル基、アミノアルキル基、アル
コキシカルボニル基、アルキルオキシカルボニルアミノ
基、メルカプト基、マレイミド基、ハロゲン原子から選
択される基を表す。ｎは、２〜２０の整数を表し、ｍ
は、０又は１〜３の整数を表す。）また、本発明の化合
物（ａ）の製造方法は、下記化７に記載の一般式で表さ
れる化合物（ｂ）のアミノ基に保護基Ｒ6 を結合した
後、６位の−ＣＯ2 Ｒ5 基を還元して下記化８に記載の
一般式で表される化合物（ｃ）を得て、該６位の−ＣＨ
Ｏ基と炭素−炭素２重結合を縮合形成する縮合化合物を
反応させて化９に記載の一般式で表される化合物（ｄ）
を形成し、得られた化合物（ｄ）の６位の−ＣＨ＝Ｒ7
を少なくとも還元し、次いで保護基Ｒ6 を脱離すること
を特徴とする。
同一でも異なっても良く、各々水素、炭素数１〜４の低
級アルキル基から選択される基を表す。Ｒ4 は、−（Ｃ
Ｈ2）m ＣＯＯＨで表されるカルボキシル基またはカル
ボキシアルキル基、−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシア
ノ基またはシアノアルキル基、アミノアルキル基、アル
コキシカルボニル基、アルキルオキシカルボニルアミノ
基、メルカプト基、マレイミド基、ハロゲン原子から選
択される基を表す。ｎは、２〜２０の整数を表し、ｍ
は、０又は１〜３の整数を表す。）また、本発明の化合
物（ａ）の製造方法は、下記化７に記載の一般式で表さ
れる化合物（ｂ）のアミノ基に保護基Ｒ6 を結合した
後、６位の−ＣＯ2 Ｒ5 基を還元して下記化８に記載の
一般式で表される化合物（ｃ）を得て、該６位の−ＣＨ
Ｏ基と炭素−炭素２重結合を縮合形成する縮合化合物を
反応させて化９に記載の一般式で表される化合物（ｄ）
を形成し、得られた化合物（ｄ）の６位の−ＣＨ＝Ｒ7
を少なくとも還元し、次いで保護基Ｒ6 を脱離すること
を特徴とする。
【０００９】
【化７】
【００１０】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、前記と
同義であり、Ｒ5 は、炭素数１〜４の低級アルキル基で
ある。）
同義であり、Ｒ5 は、炭素数１〜４の低級アルキル基で
ある。）
【００１１】
【化８】
【００１２】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、前記と
同義である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。）
同義である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。）
【００１３】
【化９】
【００１４】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、前記と
同義である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。Ｒ
7 は、縮合化合物残基である。）また、上記化合物
（ａ）においてＲ4 がカルボキシル基又はシアノ基であ
る化合物の製造方法は、上記製造法において、前記縮合
化合物がＲ4aＣＨ2 ＣＯＯＲ9 （式中、Ｒ4aは−ＣＯＯ
Ｒ9 又は−ＣＮであり、Ｒ9 は、Ｒ4aが−ＣＯＯＲ9 の
ときは炭素数１〜４の低級アルキル基であり、Ｒ4aが−
ＣＮのときは炭素数１〜４の低級アルキル基又は水素原
子である。）であり、前記−ＣＨ＝Ｒ7 が−ＣＨ＝ＣＲ
4aＣＯＯＲ9 であって、これを還元した後、カルボン酸
の脱炭酸、又はカルボン酸エステルのけん化及び脱炭酸
を行い、前記−ＣＨ＝Ｒ7 を−ＣＨ2 ＣＨ2 Ｒ4 （但
し、式中、Ｒ4 は−ＣＯＯＨ又は−ＣＮである。）とす
る方法であることが好ましい（合成法Ａ）。
同義である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。Ｒ
7 は、縮合化合物残基である。）また、上記化合物
（ａ）においてＲ4 がカルボキシル基又はシアノ基であ
る化合物の製造方法は、上記製造法において、前記縮合
化合物がＲ4aＣＨ2 ＣＯＯＲ9 （式中、Ｒ4aは−ＣＯＯ
Ｒ9 又は−ＣＮであり、Ｒ9 は、Ｒ4aが−ＣＯＯＲ9 の
ときは炭素数１〜４の低級アルキル基であり、Ｒ4aが−
ＣＮのときは炭素数１〜４の低級アルキル基又は水素原
子である。）であり、前記−ＣＨ＝Ｒ7 が−ＣＨ＝ＣＲ
4aＣＯＯＲ9 であって、これを還元した後、カルボン酸
の脱炭酸、又はカルボン酸エステルのけん化及び脱炭酸
を行い、前記−ＣＨ＝Ｒ7 を−ＣＨ2 ＣＨ2 Ｒ4 （但
し、式中、Ｒ4 は−ＣＯＯＨ又は−ＣＮである。）とす
る方法であることが好ましい（合成法Ａ）。
【００１５】また、上記化合物（ａ）においてＲ4 が−
（ＣＨ2 ）m ＣＮ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨ（但し、
ｍは０又は１〜３の整数である。）である化合物の製造
方法は、上記製造法において、前記縮合化合物がＰｈ3
Ｐ＝ＣＨＲ4b（式中、Ｒ4bは−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＲ9
又は−（ＣＨ2 ）m ＣＮで、ｍは０又は１〜３の整数で
あり、Ｒ9 は前記と同義の低級アルキル基であり、Ｐｈ
はフェニル基を示す。）であり、−ＣＨ＝Ｒ7 が−ＣＨ
＝ＣＨＲ4bであって、これを還元し、前記−ＣＨ＝Ｒ7
を−ＣＨ2 ＣＨ2 Ｒ4 （但し、式中、Ｒ4 は−（Ｃ
Ｈ2 ）m ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＮである。）と
する方法であることが好ましい（合成法Ｂ）。
（ＣＨ2 ）m ＣＮ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨ（但し、
ｍは０又は１〜３の整数である。）である化合物の製造
方法は、上記製造法において、前記縮合化合物がＰｈ3
Ｐ＝ＣＨＲ4b（式中、Ｒ4bは−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＲ9
又は−（ＣＨ2 ）m ＣＮで、ｍは０又は１〜３の整数で
あり、Ｒ9 は前記と同義の低級アルキル基であり、Ｐｈ
はフェニル基を示す。）であり、−ＣＨ＝Ｒ7 が−ＣＨ
＝ＣＨＲ4bであって、これを還元し、前記−ＣＨ＝Ｒ7
を−ＣＨ2 ＣＨ2 Ｒ4 （但し、式中、Ｒ4 は−（Ｃ
Ｈ2 ）m ＣＯＯＨ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＮである。）と
する方法であることが好ましい（合成法Ｂ）。
【００１６】また、上記化合物（ａ）においてＲ4 が−
（ＣＨ2 ）m ＣＨ2 ＮＨ2 （式中、ｍは０又は１〜３の
整数である。）で表されるアミノアルキル基である化合
物の製造方法は、上記化合物（ａ）において、Ｒ4 が−
（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基又はシアノアルキ
ル基である化合物を還元して−ＣＮを−ＣＨ2 ＮＨ2と
する方法であることが好ましい（合成法Ｃ）。
（ＣＨ2 ）m ＣＨ2 ＮＨ2 （式中、ｍは０又は１〜３の
整数である。）で表されるアミノアルキル基である化合
物の製造方法は、上記化合物（ａ）において、Ｒ4 が−
（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基又はシアノアルキ
ル基である化合物を還元して−ＣＮを−ＣＨ2 ＮＨ2と
する方法であることが好ましい（合成法Ｃ）。
【００１７】又、本発明は、化６に記載の化合物（ａ）
の２位のアミノ基と少なくとも一つの還元末端を有する
糖化合物とを還元結合してなる下記化１０に記載の一般
式で表される化合物（ｅ）であることを特徴とする２−
アミノピリジン誘導体を提供する。
の２位のアミノ基と少なくとも一つの還元末端を有する
糖化合物とを還元結合してなる下記化１０に記載の一般
式で表される化合物（ｅ）であることを特徴とする２−
アミノピリジン誘導体を提供する。
【００１８】
【化１０】
【００１９】（式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、ｎ及びｍは、
請求項１記載と同義であり、Ｒ 4A はＲ 4 及び水酸基から
選択される基を表し、Ｒ8 は、糖化合物残基である。）
更に本発明は、上記本発明の化合物（ａ）である二官能
性蛍光標識剤及び二官能性架橋剤、並びに化合物（ｅ）
である一官能性蛍光標識剤を提供する。本発明の化合物
（ａ）は、２位にアミノ基を、６位に−（ＣＨ2 ）m Ｃ
ＯＯＨで表されるカルボキシル基又はカルボキシアルキ
ル基、−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基又はシア
ノアルキル基、アミノアルキル基、アルコキシカルボニ
ル基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、メルカプト
基、マレイミド基、ハロゲン原子から選択されるＲ4 で
示される官能基を有し、一方又は両方の官能基を他の有
機化合物と結合して該化合物を標識することができる二
官能性の蛍光標識剤として使用することができ、また、
両方の官能基を他の有機化合物と結合し、有機化合物同
士を架橋することができる架橋剤としても使用すること
ができる。
請求項１記載と同義であり、Ｒ 4A はＲ 4 及び水酸基から
選択される基を表し、Ｒ8 は、糖化合物残基である。）
更に本発明は、上記本発明の化合物（ａ）である二官能
性蛍光標識剤及び二官能性架橋剤、並びに化合物（ｅ）
である一官能性蛍光標識剤を提供する。本発明の化合物
（ａ）は、２位にアミノ基を、６位に−（ＣＨ2 ）m Ｃ
ＯＯＨで表されるカルボキシル基又はカルボキシアルキ
ル基、−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基又はシア
ノアルキル基、アミノアルキル基、アルコキシカルボニ
ル基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、メルカプト
基、マレイミド基、ハロゲン原子から選択されるＲ4 で
示される官能基を有し、一方又は両方の官能基を他の有
機化合物と結合して該化合物を標識することができる二
官能性の蛍光標識剤として使用することができ、また、
両方の官能基を他の有機化合物と結合し、有機化合物同
士を架橋することができる架橋剤としても使用すること
ができる。
【００２０】本発明の化合物（ｅ）は、２位のアミノ基
が糖化合物により置換され、６位に本発明の化合物
（ａ）のＲ 4 及び水酸基から選択され基Ｒ 4A を官能基と
して有しており、この官能基を他の有機化合物に結合し
て該化合物を標識することができる一官能性の蛍光標識
剤として使用することができる。 〔本発明の化合物〕 本発明の化合物（ａ）及び（ｅ）における、ピリジン環
に置換したＲ1 、Ｒ2及びＲ3 は、互いに同一でも異な
ってもよく、各々水素及び炭素数１〜４程度の低級アル
キル基（メチル、エチル、プロピル、イソプロピル等）
から選択されるが、好ましくは、全てが水素である場合
である。また、ピリジン環の６位に置換した炭素鎖−
（ＣＨ2 ）n −におけるｎは特に制限されないが、２〜
２０であることが好ましく、とりわけ２であることが好
ましい。ｎが２０を越える場合、疎水性が増加し、望ま
しくない疎水性相互作用が生じることもある。６位の上
記炭素鎖の末端のＲ4 で表される官能基については以下
に説明する。 〔官能基〕 本発明の化合物（ａ）又は（ｅ）のピリジン環の６位の
官能基（Ｒ4 又はＲ 4A ）の種類は、基本的には該官能基
と結合すべき有機化合物と反応してコンジュゲートを形
成でき、形成されたコンジュゲートの蛍光スペクトル分
析が可能な種類のものであれば、特に制限されない。好
適な例としては−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨで表されるカル
ボキシル基又はカルボキシアルキル基、−（ＣＨ2 ）m
ＣＮで表されるシアノ基又はシアノアルキル基、アミノ
アルキル基、アルコキシカルボニル基、アルキルオキシ
カルボニルアミノ基（それぞれの基のアルキル部分の炭
素数は１〜３）、メルカプト基から選択される基が挙げ
られる。ここで、ｎは、２〜２０の整数を表し、ｍは、
０又は１〜３の整数を表す。更に、該官能基としては、
化合物（ａ）の場合は、マレイミド基、塩素、臭素から
選ばれるハロゲン原子であってもよく、化合物（ｅ）の
場合は、化合物（ａ）の前記官能基の他に水酸基であっ
てもよい。 〔化合物（ａ）の合成〕 本発明の化合物（ａ）の製造法は、特に制限されない
が、好ましくは化合物（ｂ）のアミノ基に保護基Ｒ6 を
結合した後、６位の−ＣＯＯＲ5 基を還元して、化合物
（ｃ）を合成し、該６位のホルミル基（−ＣＨＯ）と炭
素−炭素二重結合を縮合形成する縮合化合物を反応させ
て化合物（ｄ）を形成し、得られた化合物（ｄ）の６位
の−ＣＨ＝Ｒ7 を少なくとも還元し、次いでアミノ基の
保護基Ｒ6を脱離することにより製造される。
が糖化合物により置換され、６位に本発明の化合物
（ａ）のＲ 4 及び水酸基から選択され基Ｒ 4A を官能基と
して有しており、この官能基を他の有機化合物に結合し
て該化合物を標識することができる一官能性の蛍光標識
剤として使用することができる。 〔本発明の化合物〕 本発明の化合物（ａ）及び（ｅ）における、ピリジン環
に置換したＲ1 、Ｒ2及びＲ3 は、互いに同一でも異な
ってもよく、各々水素及び炭素数１〜４程度の低級アル
キル基（メチル、エチル、プロピル、イソプロピル等）
から選択されるが、好ましくは、全てが水素である場合
である。また、ピリジン環の６位に置換した炭素鎖−
（ＣＨ2 ）n −におけるｎは特に制限されないが、２〜
２０であることが好ましく、とりわけ２であることが好
ましい。ｎが２０を越える場合、疎水性が増加し、望ま
しくない疎水性相互作用が生じることもある。６位の上
記炭素鎖の末端のＲ4 で表される官能基については以下
に説明する。 〔官能基〕 本発明の化合物（ａ）又は（ｅ）のピリジン環の６位の
官能基（Ｒ4 又はＲ 4A ）の種類は、基本的には該官能基
と結合すべき有機化合物と反応してコンジュゲートを形
成でき、形成されたコンジュゲートの蛍光スペクトル分
析が可能な種類のものであれば、特に制限されない。好
適な例としては−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨで表されるカル
ボキシル基又はカルボキシアルキル基、−（ＣＨ2 ）m
ＣＮで表されるシアノ基又はシアノアルキル基、アミノ
アルキル基、アルコキシカルボニル基、アルキルオキシ
カルボニルアミノ基（それぞれの基のアルキル部分の炭
素数は１〜３）、メルカプト基から選択される基が挙げ
られる。ここで、ｎは、２〜２０の整数を表し、ｍは、
０又は１〜３の整数を表す。更に、該官能基としては、
化合物（ａ）の場合は、マレイミド基、塩素、臭素から
選ばれるハロゲン原子であってもよく、化合物（ｅ）の
場合は、化合物（ａ）の前記官能基の他に水酸基であっ
てもよい。 〔化合物（ａ）の合成〕 本発明の化合物（ａ）の製造法は、特に制限されない
が、好ましくは化合物（ｂ）のアミノ基に保護基Ｒ6 を
結合した後、６位の−ＣＯＯＲ5 基を還元して、化合物
（ｃ）を合成し、該６位のホルミル基（−ＣＨＯ）と炭
素−炭素二重結合を縮合形成する縮合化合物を反応させ
て化合物（ｄ）を形成し、得られた化合物（ｄ）の６位
の−ＣＨ＝Ｒ7 を少なくとも還元し、次いでアミノ基の
保護基Ｒ6を脱離することにより製造される。
【００２１】ここで、原料化合物（ｂ）の内、ｎ＝２の
場合は公知化合物であり、公知の方法（Ｆａｒｍａｃｏ
（Ｐａｖｉａ） Ｅｄ．ｓｃｉ．１４，５９４−５９７
（１９５９））によって合成できる。なお、ｎが３以上
は、新規化合物である。化合物（ｂ）においてＲ5 は、
炭素数１〜４であり、好ましくは炭素数１〜２である。
場合は公知化合物であり、公知の方法（Ｆａｒｍａｃｏ
（Ｐａｖｉａ） Ｅｄ．ｓｃｉ．１４，５９４−５９７
（１９５９））によって合成できる。なお、ｎが３以上
は、新規化合物である。化合物（ｂ）においてＲ5 は、
炭素数１〜４であり、好ましくは炭素数１〜２である。
【００２２】以下、上記合成法の具体例を説明する。 （合成法Ａ）化合物（ａ）のＲ4 がカルボキシル基又は
シアノ基である化合物を合成する際には以下に説明する
本合成法を採用することができる。概要を以下の反応ス
キームに示す。
シアノ基である化合物を合成する際には以下に説明する
本合成法を採用することができる。概要を以下の反応ス
キームに示す。
【００２３】
【化１１】
【００２４】先ず、化合物（ｂ）のアミノ基に保護基を
導入するが、この保護基としては、通常使用されるトリ
チル基、ジフェニルメチル基、ベンジル基、メトキシベ
ンジル基などの炭素数７〜２０のアラルキル基を使用す
ることができる。反応は、通常、化合物（ｂ）と、これ
らの保護基のハロゲン化物（例えば塩化物）を塩基（ト
リエチルアミンなど）の存在下、クロロホルムなどの溶
媒を用いて室温付近で数時間、好ましくは４．５時間反
応させればよい。
導入するが、この保護基としては、通常使用されるトリ
チル基、ジフェニルメチル基、ベンジル基、メトキシベ
ンジル基などの炭素数７〜２０のアラルキル基を使用す
ることができる。反応は、通常、化合物（ｂ）と、これ
らの保護基のハロゲン化物（例えば塩化物）を塩基（ト
リエチルアミンなど）の存在下、クロロホルムなどの溶
媒を用いて室温付近で数時間、好ましくは４．５時間反
応させればよい。
【００２５】得られた化合物（ｂa ）を還元して、化合
物（ｃ）を合成する。この時の還元法としてはジイソブ
チルヒドリドアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）、水素化
トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウムなどの選択的
還元剤を使用する方法が挙げられる。反応は、トルエン
などの溶媒中、冷却下（例えば、−７０℃）、数十分程
度、好ましくは３０分で完了する。
物（ｃ）を合成する。この時の還元法としてはジイソブ
チルヒドリドアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）、水素化
トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウムなどの選択的
還元剤を使用する方法が挙げられる。反応は、トルエン
などの溶媒中、冷却下（例えば、−７０℃）、数十分程
度、好ましくは３０分で完了する。
【００２６】次いで、化合物（ｃ）にＲ4aＣＨ2 ＣＯＯ
Ｒ9 で表される化合物（ｆ−Ａ）を反応させ、化合物
（ｃ）のホルミル基との間に炭素−炭素二重結合を縮合
形成させ、化合物（ｄ−Ａ−１）を合成する。ここで、
化合物（ｆ−Ａ）のＲ4aが−ＣＯＯＲ9 であるときは該
化合物はマロン酸ジアルキルエステル（マロン酸ジメチ
ル、マロン酸ジエチル、マロン酸ジプロピル等）であ
り、Ｒ4aが−ＣＮであるときは該化合物はシアノ酢酸又
はそのアルキルエステル（シアノ酢酸メチル、シアノ酢
酸エチル、シアノ酢酸プロピル等）である。反応は、ベ
ンゼンなどの溶媒中、好ましくはピペリジン等の塩基を
添加して還流条件下、数時間〜数十時間、好ましくは２
１時間で完了する。
Ｒ9 で表される化合物（ｆ−Ａ）を反応させ、化合物
（ｃ）のホルミル基との間に炭素−炭素二重結合を縮合
形成させ、化合物（ｄ−Ａ−１）を合成する。ここで、
化合物（ｆ−Ａ）のＲ4aが−ＣＯＯＲ9 であるときは該
化合物はマロン酸ジアルキルエステル（マロン酸ジメチ
ル、マロン酸ジエチル、マロン酸ジプロピル等）であ
り、Ｒ4aが−ＣＮであるときは該化合物はシアノ酢酸又
はそのアルキルエステル（シアノ酢酸メチル、シアノ酢
酸エチル、シアノ酢酸プロピル等）である。反応は、ベ
ンゼンなどの溶媒中、好ましくはピペリジン等の塩基を
添加して還流条件下、数時間〜数十時間、好ましくは２
１時間で完了する。
【００２７】次いで、化合物（ｄ−Ａ−１）を還元反応
（接触水素化反応）に付し、二重結合を還元して化合物
（ｄ−Ａ−２）を合成する。この反応は、テトラヒドロ
フラン等のエーテル溶媒中、水素化触媒（パラジウム
黒、白金黒等）の存在下、水素ガスを使用して行われ、
室温付近で数時間、好ましくは４．５時間で完了する。
次いで、化合物（ｄ−Ａ−２）のカルボン酸の脱炭酸又
はカルボン酸エステルをけん化（加水分解）し、脱炭酸
反応に付すことによって化合物（ｄ−Ａ−３）を合成す
る。ここで、けん化反応は通常のけん化剤（水酸化カリ
ウム、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム等）を使用し
て行われ、還流条件下、数時間で完了する。脱炭酸反応
は、反応液をクエン酸等で酸性にした後、ベンゼン等の
溶媒中、還流条件下で行われ、数十分〜数時間、好まし
くは１時間で完了する。
（接触水素化反応）に付し、二重結合を還元して化合物
（ｄ−Ａ−２）を合成する。この反応は、テトラヒドロ
フラン等のエーテル溶媒中、水素化触媒（パラジウム
黒、白金黒等）の存在下、水素ガスを使用して行われ、
室温付近で数時間、好ましくは４．５時間で完了する。
次いで、化合物（ｄ−Ａ−２）のカルボン酸の脱炭酸又
はカルボン酸エステルをけん化（加水分解）し、脱炭酸
反応に付すことによって化合物（ｄ−Ａ−３）を合成す
る。ここで、けん化反応は通常のけん化剤（水酸化カリ
ウム、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム等）を使用し
て行われ、還流条件下、数時間で完了する。脱炭酸反応
は、反応液をクエン酸等で酸性にした後、ベンゼン等の
溶媒中、還流条件下で行われ、数十分〜数時間、好まし
くは１時間で完了する。
【００２８】最後に、化合物（ｄ−Ａ−３）をアミノ基
の脱保護反応に付して化合物（ａ）を合成する。脱保護
反応はアミノ基の保護基の除去に用いられる通常の方法
によればよく、例えば酢酸等を使用し、酸性条件におい
て８０℃付近の温度で数十分〜数時間、好ましくは３０
分反応させればよい。各段階での精製は目的物質の物性
に応じて各種クロマトグラフィー、再結晶等の常法によ
って行うことができる。
の脱保護反応に付して化合物（ａ）を合成する。脱保護
反応はアミノ基の保護基の除去に用いられる通常の方法
によればよく、例えば酢酸等を使用し、酸性条件におい
て８０℃付近の温度で数十分〜数時間、好ましくは３０
分反応させればよい。各段階での精製は目的物質の物性
に応じて各種クロマトグラフィー、再結晶等の常法によ
って行うことができる。
【００２９】（合成法Ｂ）化合物（ａ）のＲ4 が−（Ｃ
Ｈ2 ）m ＣＮ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨであるである
化合物を合成する際には以下に説明する本合成法を採用
することができる。概要を以下の反応スキームに示す。
Ｈ2 ）m ＣＮ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨであるである
化合物を合成する際には以下に説明する本合成法を採用
することができる。概要を以下の反応スキームに示す。
【００３０】
【化１２】
【００３１】合成法Ａと同様に合成した化合物（ｃ）と
ウィッティッヒ試薬であるＰｈ3 Ｐ＝ＣＨＲ4bで表され
る化合物（ｆ−Ｂ）を反応させ（ウィッティッヒ反
応）、化合物（ｃ）のホルミル基との間に炭素−炭素二
重結合を縮合形成させることによって化合物（ｄ−Ｂ−
１）を合成する。ここで使用する化合物（ｆ−Ｂ）とし
ては、具体的には、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨＣＮ、Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 Ｃ
Ｎ、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＣＨ3 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＣ2 Ｈ5 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）3 ＣＯＯＣＨ3 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）3 ＣＯＯＣ2 Ｈ5 が例示される。反応は、ベンゼンなどの溶媒中、還流条
件下、数時間〜数十時間で完了する。
ウィッティッヒ試薬であるＰｈ3 Ｐ＝ＣＨＲ4bで表され
る化合物（ｆ−Ｂ）を反応させ（ウィッティッヒ反
応）、化合物（ｃ）のホルミル基との間に炭素−炭素二
重結合を縮合形成させることによって化合物（ｄ−Ｂ−
１）を合成する。ここで使用する化合物（ｆ−Ｂ）とし
ては、具体的には、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨＣＮ、Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 Ｃ
Ｎ、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＣＨ3 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＣ2 Ｈ5 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）3 ＣＯＯＣＨ3 、 Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨ（ＣＨ2 ）3 ＣＯＯＣ2 Ｈ5 が例示される。反応は、ベンゼンなどの溶媒中、還流条
件下、数時間〜数十時間で完了する。
【００３２】次いで、合成法Ａでの化合物（ｄ−Ａ−
１）から化合物（ｄ−Ａ−２）を合成する還元反応と同
様の方法によって化合物（ｄ−Ｂ−１）から化合物（ｄ
−Ｂ−２）を合成する。反応時間は数十時間、好ましく
は１５時間である。なお、化合物（ｄ−Ｂ−２）がカル
ボン酸エステルであるときは、引き続いて合成法Ａと同
様にカルボン酸エステルをけん化すればよい。
１）から化合物（ｄ−Ａ−２）を合成する還元反応と同
様の方法によって化合物（ｄ−Ｂ−１）から化合物（ｄ
−Ｂ−２）を合成する。反応時間は数十時間、好ましく
は１５時間である。なお、化合物（ｄ−Ｂ−２）がカル
ボン酸エステルであるときは、引き続いて合成法Ａと同
様にカルボン酸エステルをけん化すればよい。
【００３３】最後に、合成法Ａでの化合物（ｄ−Ａ−
３）から化合物（ａ）を合成するアミノ基の脱保護反応
と同様の方法によって化合物（ｄ−Ｂ−２）から化合物
（ａ）を合成する。各段階のでの精製は目的物質の物性
に応じて各種クロマトグラフィー、再結晶等の常法によ
って行うことができる。
３）から化合物（ａ）を合成するアミノ基の脱保護反応
と同様の方法によって化合物（ｄ−Ｂ−２）から化合物
（ａ）を合成する。各段階のでの精製は目的物質の物性
に応じて各種クロマトグラフィー、再結晶等の常法によ
って行うことができる。
【００３４】（合成法Ｃ）合成法（Ａ）又は（Ｂ）によ
って得られた化合物（ａ）が６位にシアノ基を有する化
合物であるときは、これを還元反応に付して−ＣＮを−
ＣＨ2 ＮＨ2 とすることができる。ここでの還元反応は
合成法Ａでの化合物（ｄ−Ａ−１）から化合物（ｄ−Ａ
−２）を合成するを還元反応と同様の方法によって行う
ことができる。 〔官能基と反応する有機化合物〕本発明の化合物（ａ）
又は（ｅ）と反応させコンジュゲートを形成する有機化
合物も、コンジュゲートが蛍光スペクトル分析が可能で
ある限り制限されない。該有機化合物としては糖（多糖
類、グリコサミノグリカン、オリゴ糖類、単糖類な
ど）、蛋白質（生理活性蛋白質、抗体、酵素、ポリペプ
チドなど）、アミノ酸、脂質、核酸等の生体物質が好ま
しい。 〔官能基の反応（コンジュゲートの合成）〕該官能基と
該有機化合物との反応様式も特に制限されず、好ましく
は、アミド結合反応、エステル結合反応、シッフ塩基形
成反応、アミジン形成反応、ジスルフィド結合反応等を
例示できる。
って得られた化合物（ａ）が６位にシアノ基を有する化
合物であるときは、これを還元反応に付して−ＣＮを−
ＣＨ2 ＮＨ2 とすることができる。ここでの還元反応は
合成法Ａでの化合物（ｄ−Ａ−１）から化合物（ｄ−Ａ
−２）を合成するを還元反応と同様の方法によって行う
ことができる。 〔官能基と反応する有機化合物〕本発明の化合物（ａ）
又は（ｅ）と反応させコンジュゲートを形成する有機化
合物も、コンジュゲートが蛍光スペクトル分析が可能で
ある限り制限されない。該有機化合物としては糖（多糖
類、グリコサミノグリカン、オリゴ糖類、単糖類な
ど）、蛋白質（生理活性蛋白質、抗体、酵素、ポリペプ
チドなど）、アミノ酸、脂質、核酸等の生体物質が好ま
しい。 〔官能基の反応（コンジュゲートの合成）〕該官能基と
該有機化合物との反応様式も特に制限されず、好ましく
は、アミド結合反応、エステル結合反応、シッフ塩基形
成反応、アミジン形成反応、ジスルフィド結合反応等を
例示できる。
【００３５】この場合、本発明の化合物の該官能基及び
／又は有機化合物の官能基は、公知の方法により活性基
を導入した後に縮合反応等の種々の反応に供してもよ
い。例えば、縮合に関与する官能基がカルボキシル基で
ある場合、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロ
フェノール等によるカルボキシル基の活性エステル化、
カルボキシル基のアジド化等によってカルボキシル基を
活性化できる。該縮合反応においては、公知の縮合剤、
例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、
１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−
カルボジイミド（ＥＤＣ）、１−ベンジル−３−ジメチ
ルアミノプロピルカルボジイミドトシル酸等のカルボジ
イミド試薬等を使用することができる。
／又は有機化合物の官能基は、公知の方法により活性基
を導入した後に縮合反応等の種々の反応に供してもよ
い。例えば、縮合に関与する官能基がカルボキシル基で
ある場合、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロ
フェノール等によるカルボキシル基の活性エステル化、
カルボキシル基のアジド化等によってカルボキシル基を
活性化できる。該縮合反応においては、公知の縮合剤、
例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、
１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）−
カルボジイミド（ＥＤＣ）、１−ベンジル−３−ジメチ
ルアミノプロピルカルボジイミドトシル酸等のカルボジ
イミド試薬等を使用することができる。
【００３６】また上記縮合反応としては、本発明の化合
物（ａ）の２位のアミノ基を糖類（単糖、オリゴ糖、多
糖、グリコサミノグリカン等）の還元末端に反応させて
シッフ塩基を形成させ、次いで還元することによって−
ＣＨ2 ＮＨ−結合を形成させて糖類と化合物（ａ）の複
合体である化合物（ｅ）とし、必要に応じて高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の分別手段によって分
離精製し、蛍光スペクトルによって目的とする複合体を
検出し、更に化合物（ｅ）の６位の官能基と該官能基と
反応し得る官能基を有する任意の有機化合物（糖類、蛋
白質、オリゴペプチド、アミノ酸、核酸、脂質、ポリマ
ー樹脂等）を反応、結合させ、糖類と上記有機化合物の
複合体を得る一連の反応を一例に挙げることができる。
物（ａ）の２位のアミノ基を糖類（単糖、オリゴ糖、多
糖、グリコサミノグリカン等）の還元末端に反応させて
シッフ塩基を形成させ、次いで還元することによって−
ＣＨ2 ＮＨ−結合を形成させて糖類と化合物（ａ）の複
合体である化合物（ｅ）とし、必要に応じて高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の分別手段によって分
離精製し、蛍光スペクトルによって目的とする複合体を
検出し、更に化合物（ｅ）の６位の官能基と該官能基と
反応し得る官能基を有する任意の有機化合物（糖類、蛋
白質、オリゴペプチド、アミノ酸、核酸、脂質、ポリマ
ー樹脂等）を反応、結合させ、糖類と上記有機化合物の
複合体を得る一連の反応を一例に挙げることができる。
【００３７】なお、上記シッフ塩基形成反応及びそれに
続く還元反応は、公知の方法（例えば、特開昭６４−１
０１７７号、特開平１−１４１３５６号、Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，第９５巻，第１９７〜２０３頁（１９８
４）、「蛋白質 核酸 酵素」第３６巻、第１号、第６
３〜６８頁（１９９１年）参照）に従って行うことがで
きる。すなわち、塩酸、フッ化水素酸等の無機酸もしく
は酢酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸及びピリジン等の
有機溶媒中、常温〜１００℃、数分〜数時間（好ましく
は、約９０℃、１〜３時間、ｐＨ３〜６．４）の反応条
件下、糖類に対して２０〜１００当量程度の化合物
（ａ）を使用して反応させることによってシッフ塩基を
生成させることができる。シッフ塩基の還元には、通常
シッフ塩基の還元に使用されている還元剤を使用するこ
とができ、とりわけ揮発性のボランコンプレックス（例
えば、ボランジメチルアミンコンプレックス、ボラント
リエチルアミンコンプレックス、ボランピリジンコンプ
レックス等）、ナトリウムボロハイドライド、シアノ水
素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ3 ＣＮ）等が好まし
い。還元反応は、常温〜１００℃、１時間〜１０時間
（好ましくは約８０〜９０℃、１時間程度）で完了す
る。
続く還元反応は、公知の方法（例えば、特開昭６４−１
０１７７号、特開平１−１４１３５６号、Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，第９５巻，第１９７〜２０３頁（１９８
４）、「蛋白質 核酸 酵素」第３６巻、第１号、第６
３〜６８頁（１９９１年）参照）に従って行うことがで
きる。すなわち、塩酸、フッ化水素酸等の無機酸もしく
は酢酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸及びピリジン等の
有機溶媒中、常温〜１００℃、数分〜数時間（好ましく
は、約９０℃、１〜３時間、ｐＨ３〜６．４）の反応条
件下、糖類に対して２０〜１００当量程度の化合物
（ａ）を使用して反応させることによってシッフ塩基を
生成させることができる。シッフ塩基の還元には、通常
シッフ塩基の還元に使用されている還元剤を使用するこ
とができ、とりわけ揮発性のボランコンプレックス（例
えば、ボランジメチルアミンコンプレックス、ボラント
リエチルアミンコンプレックス、ボランピリジンコンプ
レックス等）、ナトリウムボロハイドライド、シアノ水
素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ3 ＣＮ）等が好まし
い。還元反応は、常温〜１００℃、１時間〜１０時間
（好ましくは約８０〜９０℃、１時間程度）で完了す
る。
【００３８】〔用途〕本発明の化合物（ａ）は、その官
能基であるピリジン環の２位のアミノ基と６位の前記官
能基をそれぞれ任意の有機化合物、特に糖類、蛋白質、
アミノ酸、核酸、脂質等の生体物質とそれぞれ反応、結
合させることにより該有機化合物同士を架橋し、既知の
複合化合物（例えば、複合糖質、複合脂質、複合蛋白質
等）の疑似化合物（ネオコンジュゲート）もしくはモデ
ル化合物あるいはこれら有機化合物を蛍光標識するため
のマーカー化合物として種々の化合物の同定、定量、調
製、精製等に応用できる効果を有する。
能基であるピリジン環の２位のアミノ基と６位の前記官
能基をそれぞれ任意の有機化合物、特に糖類、蛋白質、
アミノ酸、核酸、脂質等の生体物質とそれぞれ反応、結
合させることにより該有機化合物同士を架橋し、既知の
複合化合物（例えば、複合糖質、複合脂質、複合蛋白質
等）の疑似化合物（ネオコンジュゲート）もしくはモデ
ル化合物あるいはこれら有機化合物を蛍光標識するため
のマーカー化合物として種々の化合物の同定、定量、調
製、精製等に応用できる効果を有する。
【００３９】また、本発明の化合物（ｅ）は、複合糖質
の疑似化合物（ネオグリココンジュゲート）とも見做す
ことができる上記複合体を製造するための原料として有
用であるだけでなく、それ自身蛍光標識剤として有用で
ある。例えば、該有機化合物について、その抗原性の研
究、それに対する抗体の調製、その構造の解析等に応用
できる。その際、化合物（ａ）によって蛍光標識された
該有機化合物を公知の分別手段（高速液体クロマトグラ
フィー、薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフ
ィー等のクロマトグラフィー；電気泳動等）によって分
別し、蛍光スペクトルを測定することによって目的有機
化合物の単離、構造解析、定量等を行うことができる。
の疑似化合物（ネオグリココンジュゲート）とも見做す
ことができる上記複合体を製造するための原料として有
用であるだけでなく、それ自身蛍光標識剤として有用で
ある。例えば、該有機化合物について、その抗原性の研
究、それに対する抗体の調製、その構造の解析等に応用
できる。その際、化合物（ａ）によって蛍光標識された
該有機化合物を公知の分別手段（高速液体クロマトグラ
フィー、薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフ
ィー等のクロマトグラフィー；電気泳動等）によって分
別し、蛍光スペクトルを測定することによって目的有機
化合物の単離、構造解析、定量等を行うことができる。
【００４０】本発明の化合物（ａ）及び（ｅ）を蛍光標
識剤として使用する場合、化合物は塩の形態（例えば、
塩酸塩、酢酸塩等）でもよく、また、固形でも溶液の状
態で保管してもかまわない。溶液状態で保存する場合
は、エーテル類、アルコール類、ジメチルフォルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、アミン類などの
溶媒が用いられる。また、所望により種々の公知の安定
剤等と混合、併用してもよい。また、本発明の化合物
（ａ）は、架橋剤としても使用され、上記の蛍光標識剤
の場合と同様の態様が適用できる。
識剤として使用する場合、化合物は塩の形態（例えば、
塩酸塩、酢酸塩等）でもよく、また、固形でも溶液の状
態で保管してもかまわない。溶液状態で保存する場合
は、エーテル類、アルコール類、ジメチルフォルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド、ピリジン、アミン類などの
溶媒が用いられる。また、所望により種々の公知の安定
剤等と混合、併用してもよい。また、本発明の化合物
（ａ）は、架橋剤としても使用され、上記の蛍光標識剤
の場合と同様の態様が適用できる。
【００４１】
【実施例】以下に実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明は、かかる実施例に限定されるもので
はない。 実施例１：２−アミノ−６−（２−カルボキシエチル）
ピリジンの合成 公知の方法に従って、２−アミノ−６−メチルピリジン
から、２−アミノ基をアセチル化して保護し、６−メチ
ル基を酸化、次いで脱アセチル化して、２−アミノ−６
−カルボキシピリジンを合成し、カルボキシル基をエチ
ルエステル化して化１３に示す化合物（ｂ−１）（融点
７２〜７３℃）を合成した。化１３に示す合成ルートに
従って以下説明する。
明するが、本発明は、かかる実施例に限定されるもので
はない。 実施例１：２−アミノ−６−（２−カルボキシエチル）
ピリジンの合成 公知の方法に従って、２−アミノ−６−メチルピリジン
から、２−アミノ基をアセチル化して保護し、６−メチ
ル基を酸化、次いで脱アセチル化して、２−アミノ−６
−カルボキシピリジンを合成し、カルボキシル基をエチ
ルエステル化して化１３に示す化合物（ｂ−１）（融点
７２〜７３℃）を合成した。化１３に示す合成ルートに
従って以下説明する。
【００４２】
【化１３】
【００４３】化合物（ｂ−１）０．１０ｇをクロロホル
ム：トリエチルアミン＝１８：１の混合溶媒１．６ｍＬ
に溶解し、トリチルクロライド０．１７ｇを添加し、室
温で４．５時間、攪拌し、２−アミノ基にトリチル基
（Ｔｒｔ）を保護基として結合させて化合物（ｂ−１−
１）（融点５３〜５８℃）を収率８８％で得た。得られ
た化合物（ｂ−１−１）４．０ｇをトルエン１２０ｇに
溶解し、−７０℃、０．５時間、ＤＩＢＡＬ−Ｈにより
ＣＯＯＥｔ基（Ｅｔはエチル基）を還元して、ホルミル
基とし、化合物（ｃ−１）（２−トリチルアミノ−６−
ホルミルピリジン）（融点２０８〜２０９℃（分解）を
収率８５％で得た。化合物（ｃ−１）２．２ｇをベンゼ
ン５３ｇに溶解し、ピペリジン数滴を添加、２１時間、
還流してマロン酸ジエチル〔ＣＨ2 （ＣＯＯＥｔ）2 〕
１．６ｇを該ホルミル基に縮合させて、化合物（ｄ−
１）（融点１４６〜１５０℃）を収率８４％で得た。こ
の化合物（ｄ−１）１．３ｇをテトラヒドロフラン：メ
タノール（７：１）３０ｇに溶解し、水素気流中でＰｄ
黒の存在下に４．５時間攪拌して、接触還元し、収率９
９％で化合物（ｄ−１−１）（融点７２〜７４℃）を得
た。この化合物（ｄ−１−１）を１０Ｎの水酸化カリウ
ム（ＫＯＨ）溶液に溶解し、２．５時間、還流して、ケ
ン化し、クエン酸を添加した。ついで、得られた化合物
をベンゼンに溶解して１時間還流し、脱炭酸して、化合
物（ｄ−１−２）を１００％の収率で得た（融点１２０
℃）。得られた化合物（ｄ−１−２）を５０％酢酸に溶
解し、８０℃、３０分反応させて、トリチル基を脱保護
し、目的の２−アミノ−６−（２−カルボキシエチル）
ピリジン（ａ−１）を９７％の収率で得た（融点は１６
６℃（分解）であった。また、励起波長λexは、３０５
ｎｍ、蛍光波長λemは３６７ｎｍであった。）。出発物
質化合物（ｂ−１）からの収率は、約５５％であった。
ム：トリエチルアミン＝１８：１の混合溶媒１．６ｍＬ
に溶解し、トリチルクロライド０．１７ｇを添加し、室
温で４．５時間、攪拌し、２−アミノ基にトリチル基
（Ｔｒｔ）を保護基として結合させて化合物（ｂ−１−
１）（融点５３〜５８℃）を収率８８％で得た。得られ
た化合物（ｂ−１−１）４．０ｇをトルエン１２０ｇに
溶解し、−７０℃、０．５時間、ＤＩＢＡＬ−Ｈにより
ＣＯＯＥｔ基（Ｅｔはエチル基）を還元して、ホルミル
基とし、化合物（ｃ−１）（２−トリチルアミノ−６−
ホルミルピリジン）（融点２０８〜２０９℃（分解）を
収率８５％で得た。化合物（ｃ−１）２．２ｇをベンゼ
ン５３ｇに溶解し、ピペリジン数滴を添加、２１時間、
還流してマロン酸ジエチル〔ＣＨ2 （ＣＯＯＥｔ）2 〕
１．６ｇを該ホルミル基に縮合させて、化合物（ｄ−
１）（融点１４６〜１５０℃）を収率８４％で得た。こ
の化合物（ｄ−１）１．３ｇをテトラヒドロフラン：メ
タノール（７：１）３０ｇに溶解し、水素気流中でＰｄ
黒の存在下に４．５時間攪拌して、接触還元し、収率９
９％で化合物（ｄ−１−１）（融点７２〜７４℃）を得
た。この化合物（ｄ−１−１）を１０Ｎの水酸化カリウ
ム（ＫＯＨ）溶液に溶解し、２．５時間、還流して、ケ
ン化し、クエン酸を添加した。ついで、得られた化合物
をベンゼンに溶解して１時間還流し、脱炭酸して、化合
物（ｄ−１−２）を１００％の収率で得た（融点１２０
℃）。得られた化合物（ｄ−１−２）を５０％酢酸に溶
解し、８０℃、３０分反応させて、トリチル基を脱保護
し、目的の２−アミノ−６−（２−カルボキシエチル）
ピリジン（ａ−１）を９７％の収率で得た（融点は１６
６℃（分解）であった。また、励起波長λexは、３０５
ｎｍ、蛍光波長λemは３６７ｎｍであった。）。出発物
質化合物（ｂ−１）からの収率は、約５５％であった。
【００４４】上記化合物（ｂ−１）〜（ａ−１）の各化
合物の構造は、1H NMR、ＭＳ あるいは更に元素分析で
確認した。以下にその結果を記す。
合物の構造は、1H NMR、ＭＳ あるいは更に元素分析で
確認した。以下にその結果を記す。
【００４５】化合物（ｂ−１−１）：２−トリチルアミ
ノピコリン酸エチルエステル1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.34-7.07
(17H,m,Ph-,H-3,4), 6.46(1H,s,-NH-), 5.96(1H,dd,J
4，５=8Hz,J3,5=1Hz,H-5),4.40(2H,q,J=7Hz,-CO2CH2CH3
のメチレン), 1.38(3H,t,J=7Hz,-CH2CH3のメチレン);ポ
ジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４０８（Ｍ+ ）。
ノピコリン酸エチルエステル1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.34-7.07
(17H,m,Ph-,H-3,4), 6.46(1H,s,-NH-), 5.96(1H,dd,J
4，５=8Hz,J3,5=1Hz,H-5),4.40(2H,q,J=7Hz,-CO2CH2CH3
のメチレン), 1.38(3H,t,J=7Hz,-CH2CH3のメチレン);ポ
ジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４０８（Ｍ+ ）。
【００４６】分析値 ：Ｃ，７９．５５；Ｈ，
６．０２；Ｎ，６．５７ C27H24O2N2としての計算値：Ｃ，７９．３９；Ｈ，５．
９２；Ｎ，６．８６ 化合物（ｃ−１）：２−トリチルアミノ−６−ホルミル
ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝9.80(1H,s,
-CHO), 7.35-7.14(17H,m,Ph-,H-3,4), 6.35(1H,s,-NH
-), 6.06(1H,dd,J4,5=8Hz,J3，５=1Hz,H-5),ポジティブ
ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ３６４（Ｍ+ ）。
６．０２；Ｎ，６．５７ C27H24O2N2としての計算値：Ｃ，７９．３９；Ｈ，５．
９２；Ｎ，６．８６ 化合物（ｃ−１）：２−トリチルアミノ−６−ホルミル
ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝9.80(1H,s,
-CHO), 7.35-7.14(17H,m,Ph-,H-3,4), 6.35(1H,s,-NH
-), 6.06(1H,dd,J4,5=8Hz,J3，５=1Hz,H-5),ポジティブ
ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ３６４（Ｍ+ ）。
【００４７】分析値 ：Ｃ，８２．４７；Ｈ，
５．５８；Ｎ，７．５８ C25H20ON2 としての計算値：Ｃ，８２．３９；Ｈ，５．
５３；Ｎ，７．６９
５．５８；Ｎ，７．５８ C25H20ON2 としての計算値：Ｃ，８２．３９；Ｈ，５．
５３；Ｎ，７．６９
【００４８】化合物（ｄ−１）：エチル２−エトキシカ
ルボニル−３−（６−トリチルアミノ−２−ピリジル）
アクリレート1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.45(1H,s,
-CH=C), 7.31-7.22(15H,m,Ph-), 7.04(1H,dd,J=8Hz,7H
z,H-4), 6.64(1H,d,J=7Hz,H-3又は5), 5.99(1H,s,-NH
-), 5.78(1H,d,J=8Hz,H-5又は3), 4.29(4H,q,J=7Hz,-CO
2CH2CH3のメチレン), 1.34-1.25(6H,m,J=7Hz,-CH2CH3
のメチル) ；ポジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ５０６（Ｍ
+ ）。
ルボニル−３−（６−トリチルアミノ−２−ピリジル）
アクリレート1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.45(1H,s,
-CH=C), 7.31-7.22(15H,m,Ph-), 7.04(1H,dd,J=8Hz,7H
z,H-4), 6.64(1H,d,J=7Hz,H-3又は5), 5.99(1H,s,-NH
-), 5.78(1H,d,J=8Hz,H-5又は3), 4.29(4H,q,J=7Hz,-CO
2CH2CH3のメチレン), 1.34-1.25(6H,m,J=7Hz,-CH2CH3
のメチル) ；ポジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ５０６（Ｍ
+ ）。
【００４９】分析値 ：Ｃ，７６．０３；Ｈ，
５．９７；Ｎ，５．５２ C32H30O4N2としての計算値：Ｃ，７５．８７；Ｈ，５．
９７；Ｎ，５．５３
５．９７；Ｎ，５．５２ C32H30O4N2としての計算値：Ｃ，７５．８７；Ｈ，５．
９７；Ｎ，５．５３
【００５０】化合物（ｄ−１−１）：ジエチル（６−ト
リチルアミノ−２−ピリジル）メチルマロネート1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.18
(15H,m,Ph-), 6.94(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.37(1H,d,
J=7Hz,H-3又は5), 5.94(1H,s,-NH-), 5.66(1H,d,J=8Hz,
H-5又は3), 4.15(4H,q,J=7Hz,-CO2CH2CH3のメチレン),
3.95(1H,t,J=7Hz,-CH2CH-のメチン), 3.14(2H,d,J=7Hz,
-CH2CH-のメチレン),1.20(6H,m,J=7Hz,-CH2CH3 のメチ
ル) ；ポジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ５０８
（Ｍ+ ）。
リチルアミノ−２−ピリジル）メチルマロネート1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.18
(15H,m,Ph-), 6.94(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.37(1H,d,
J=7Hz,H-3又は5), 5.94(1H,s,-NH-), 5.66(1H,d,J=8Hz,
H-5又は3), 4.15(4H,q,J=7Hz,-CO2CH2CH3のメチレン),
3.95(1H,t,J=7Hz,-CH2CH-のメチン), 3.14(2H,d,J=7Hz,
-CH2CH-のメチレン),1.20(6H,m,J=7Hz,-CH2CH3 のメチ
ル) ；ポジティブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ５０８
（Ｍ+ ）。
【００５１】分析値 ：Ｃ，７５．７６；Ｈ，
６．３４；Ｎ，５．４５ C32H32O4N2としての計算値：Ｃ，７５．５７；Ｈ，６．
３４；Ｎ，５．５１
６．３４；Ｎ，５．４５ C32H32O4N2としての計算値：Ｃ，７５．５７；Ｈ，６．
３４；Ｎ，５．５１
【００５２】化合物（ｄ−１−２）：２−トリチルアミ
ノ−６−（２−カルボキシエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.21
(15H,m,Ph-,-NH-), 7.13(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.46
(1H,d,J=7Hz,H-3 又は5), 5.88(1H,d,J=8Hz,H-5又は3),
3.01(2H,t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβＨ）, 2.82(2H,
t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβＨ）; ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋
Ｈ）+ 。
ノ−６−（２−カルボキシエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.21
(15H,m,Ph-,-NH-), 7.13(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.46
(1H,d,J=7Hz,H-3 又は5), 5.88(1H,d,J=8Hz,H-5又は3),
3.01(2H,t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβＨ）, 2.82(2H,
t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβＨ）; ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋
Ｈ）+ 。
【００５３】分析値 ：Ｃ，７７．７８；Ｈ，
５．９２；Ｎ，６．６５ C27H24O2N2・0.5H2O ：Ｃ，７７．６７；Ｈ，６．
０４；Ｎ，６．７１ としての計算値
５．９２；Ｎ，６．６５ C27H24O2N2・0.5H2O ：Ｃ，７７．６７；Ｈ，６．
０４；Ｎ，６．７１ としての計算値
【００５４】化合物（ａ−１）：２−アミノ−６−（２
−カルボキシエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，Ｄ2 Ｏ，ＤＳＳ），δ＝7.79(1
H,dd,J=9Hz,7Hz,H-4),6.81(1H,d,J=9Hz,H-3又は5), 6.7
3(1H,d,J=7Hz,H-5 又は3), 2.96(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2-
のα又はβＨ）, 2.58(2H,t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβ
Ｈ）； ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６７（Ｍ＋
Ｈ）+ 。
−カルボキシエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，Ｄ2 Ｏ，ＤＳＳ），δ＝7.79(1
H,dd,J=9Hz,7Hz,H-4),6.81(1H,d,J=9Hz,H-3又は5), 6.7
3(1H,d,J=7Hz,H-5 又は3), 2.96(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2-
のα又はβＨ）, 2.58(2H,t,J=6Hz,-CH2CH2-のα又はβ
Ｈ）； ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６７（Ｍ＋
Ｈ）+ 。
【００５５】実施例２：２−アミノ−６−（２−シアノ
エチル）ピリジンの合成 実施例１で得られた化合物（ｃ−１）を原料として化１
４に示すルートで合成した。
エチル）ピリジンの合成 実施例１で得られた化合物（ｃ−１）を原料として化１
４に示すルートで合成した。
【００５６】
【化１４】
【００５７】化合物（ｃ−１）２．５ｇをベンゼン１７
ｇに溶解し、Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨＣＮを１０．１ｇ添加し
て、ウィッティッヒ反応を行い、化合物（ｄ−２）を得
た（1HNMR、ＭＳで確認した。収率９６％）。化合物
（ｄ−２）１．４ｇをテトラヒドロフラン：メタノール
（７：１）４５ｇに溶解し、３気圧の水素気流中でＰｄ
黒の存在下に１５時間攪拌して、接触還元し、収率１０
０％で化合物（ｄ−２−１）を得た。得られた化合物
（ｄ−２−１）を５０％酢酸に溶解し、８０℃、３０分
反応させて、トリチル基を脱保護し、目的の２−アミノ
−６−（２−シアノエチル）ピリジン（ａ−２）を１０
０％の収率で得た（融点は６６〜６８℃であった。ま
た、励起波長λexは、２９５ｎｍ、蛍光λemは３６４ｎ
ｍであった。）。
ｇに溶解し、Ｐｈ3 Ｐ＝ＣＨＣＮを１０．１ｇ添加し
て、ウィッティッヒ反応を行い、化合物（ｄ−２）を得
た（1HNMR、ＭＳで確認した。収率９６％）。化合物
（ｄ−２）１．４ｇをテトラヒドロフラン：メタノール
（７：１）４５ｇに溶解し、３気圧の水素気流中でＰｄ
黒の存在下に１５時間攪拌して、接触還元し、収率１０
０％で化合物（ｄ−２−１）を得た。得られた化合物
（ｄ−２−１）を５０％酢酸に溶解し、８０℃、３０分
反応させて、トリチル基を脱保護し、目的の２−アミノ
−６−（２−シアノエチル）ピリジン（ａ−２）を１０
０％の収率で得た（融点は６６〜６８℃であった。ま
た、励起波長λexは、２９５ｎｍ、蛍光λemは３６４ｎ
ｍであった。）。
【００５８】上記化合物の各化合物の構造は、1H NMR、
ＭＳ あるいは更に元素分析で確認した。以下にその結
果を記す。
ＭＳ あるいは更に元素分析で確認した。以下にその結
果を記す。
【００５９】化合物（ｄ−２）：３−（６−トリチルア
ミノ−２−ピリジル）プロペンニトリル 1H NMR（２７
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.19(15H,m,Ph-),
7.12(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 7.12(1H,d,J=16Hz,-CH=CH
CNのβＨ), 6.50(1H,d,J=7Hz,H-3又は5), 6.17(1H,d,J=
16Hz,-CH=CHCN のαＨ), 6.05(1H,s,-NH-), 6.03(1H,d,
J=8Hz,H-5 又は3); ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ
３８８（Ｍ＋Ｈ）+ 。
ミノ−２−ピリジル）プロペンニトリル 1H NMR（２７
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.19(15H,m,Ph-),
7.12(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 7.12(1H,d,J=16Hz,-CH=CH
CNのβＨ), 6.50(1H,d,J=7Hz,H-3又は5), 6.17(1H,d,J=
16Hz,-CH=CHCN のαＨ), 6.05(1H,s,-NH-), 6.03(1H,d,
J=8Hz,H-5 又は3); ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ
３８８（Ｍ＋Ｈ）+ 。
【００６０】分析値 ：Ｃ，８２．９０；Ｈ，
５．４１；Ｎ，１０．４７ C27H21N3 0.2H2O ：Ｃ，８２．９２；Ｈ，５．
５２；Ｎ，１０．７ としての計算値
５．４１；Ｎ，１０．４７ C27H21N3 0.2H2O ：Ｃ，８２．９２；Ｈ，５．
５２；Ｎ，１０．７ としての計算値
【００６１】化合物（ｄ−２−１）：２−トリチルアミ
ノ−６−（２−シアノエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.19
(15H,m,Ph-), 7.04(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.38(1H,d,
J=7Hz,H-3又は5), 5.93(1H,s,-NH-), 5.84(1H,d,J=8Hz,
H-5又は3), 2.80(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のβ又はα
Ｈ）, 2.57(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のα又はβＨ）；ポ
ジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ３９０（Ｍ＋Ｈ）+ 。
ノ−６−（２−シアノエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.35-7.19
(15H,m,Ph-), 7.04(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.38(1H,d,
J=7Hz,H-3又は5), 5.93(1H,s,-NH-), 5.84(1H,d,J=8Hz,
H-5又は3), 2.80(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のβ又はα
Ｈ）, 2.57(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のα又はβＨ）；ポ
ジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ３９０（Ｍ＋Ｈ）+ 。
【００６２】化合物（ａ−２）：２−アミノ−６−（２
−シアノエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.45(1H,d
d,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.5９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ
−３又は5), 6.46(1H,d,J=8Hz,H-5 又は3), 4.89(2H,b
s,-NH2), 2.97(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のβ又はαＨ）,
2.82(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のα又はβＨ）; ポジテ
ィブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １４７（Ｍ+ ）。
−シアノエチル）ピリジン1 H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ），δ＝7.45(1H,d
d,J=8Hz,7Hz,H-4), 6.5９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，Ｈ
−３又は5), 6.46(1H,d,J=8Hz,H-5 又は3), 4.89(2H,b
s,-NH2), 2.97(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のβ又はαＨ）,
2.82(2H,t,J=7Hz,-CH2CH2CN のα又はβＨ）; ポジテ
ィブＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ １４７（Ｍ+ ）。
【００６３】実施例３ ２−アミノ−６−（２−カルボキシエチル）ピリジン
（ａ−１）とＤ−グルコース（Ｄ−Ｇｌｃ）またはＤ−
マンノース（Ｄ−Ｍａｎ）との結合体を化１５に従って
合成した。
（ａ−１）とＤ−グルコース（Ｄ−Ｇｌｃ）またはＤ−
マンノース（Ｄ−Ｍａｎ）との結合体を化１５に従って
合成した。
【００６４】
【化１５】
【００６５】Ｄ−ＧｌｃまたはＤ−Ｍａｎに対し２０倍
当量の化合物（ａ−１）を酢酸とピリジンの混合溶媒
（酢酸：ピリジン＝１：４０）に０．４μｍｏｌ／ｍＬ
（ミリリットル）溶解し、ｐＨ６．４、９０℃、１時間
反応させてシッフ塩基化合物（ａ−１−１）（Ｄ−Ｇｌ
ｃ型：Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ＯＨ、Ｄ−Ｍａｎ型：Ｘ＝ＯＨ、Ｙ
＝Ｈ）を合成した。得られた化合物（ａ−１−１）を酢
酸−ピリジンに溶解し、ボランのジメチルアミン錯体
（ＢＨ3 ・Ｍｅ2 ＮＨ）を用い、８０℃、１時間反応さ
せて還元し、本発明の化合物（ｅ−１−Ｇ）（Ｘ＝Ｈ、
Ｙ＝ＯＨ）と（ｅ−１−Ｍ）（Ｘ＝ＯＨ、Ｙ＝Ｈ）を収
率５０〜７０％で得た。
当量の化合物（ａ−１）を酢酸とピリジンの混合溶媒
（酢酸：ピリジン＝１：４０）に０．４μｍｏｌ／ｍＬ
（ミリリットル）溶解し、ｐＨ６．４、９０℃、１時間
反応させてシッフ塩基化合物（ａ−１−１）（Ｄ−Ｇｌ
ｃ型：Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ＯＨ、Ｄ−Ｍａｎ型：Ｘ＝ＯＨ、Ｙ
＝Ｈ）を合成した。得られた化合物（ａ−１−１）を酢
酸−ピリジンに溶解し、ボランのジメチルアミン錯体
（ＢＨ3 ・Ｍｅ2 ＮＨ）を用い、８０℃、１時間反応さ
せて還元し、本発明の化合物（ｅ−１−Ｇ）（Ｘ＝Ｈ、
Ｙ＝ＯＨ）と（ｅ−１−Ｍ）（Ｘ＝ＯＨ、Ｙ＝Ｈ）を収
率５０〜７０％で得た。
【００６６】出発物質として、Ｄ−Ｇｌｃを使用した場
合、化合物（ｅ−１−Ｇ）とこの２−エピ体〔化合物
（ｅ−１−Ｍ）〕との生成比率は、９５：５程であっ
た。また、出発物質として、Ｄ−Ｍａｎを使用した場
合、化合物（ｅ−１−Ｍ）とこの２−エピ体（化合物
（ｅ−１−Ｇ））との生成比率は、９５：５であった。
得られた化合物（ｅ−１−Ｇ）及び（ｅ−１−Ｍ）は、
1H NMR、ＭＳで確認した。
合、化合物（ｅ−１−Ｇ）とこの２−エピ体〔化合物
（ｅ−１−Ｍ）〕との生成比率は、９５：５程であっ
た。また、出発物質として、Ｄ−Ｍａｎを使用した場
合、化合物（ｅ−１−Ｍ）とこの２−エピ体（化合物
（ｅ−１−Ｇ））との生成比率は、９５：５であった。
得られた化合物（ｅ−１−Ｇ）及び（ｅ−１−Ｍ）は、
1H NMR、ＭＳで確認した。
【００６７】また、シッフ塩基形成反応における化合物
（ａ−１）の当量を２０〜１００倍当量、加熱時間を１
〜３時間としても収率、エピ化には影響しなかった。化
合物（ｅ−１−Ｇ）と（ｅ−１−Ｍ）は、下記ＨＰＬＣ
で分離できた。 カラム；コスモシール５Ｃ１８ＡＲ〔２０ｍｍ（ＩＤ）
×２５０ｍｍ（Ｌ）〕 （（株）ナカライテスク） 溶出溶媒；アセトニトリル−０．１Ｍ酢酸アンモニウム
水溶液（pH６．８５） 濃度勾配；０〜１０％（０．５％／分）〜５０％（２％
／分） 流速；８ｍＬ／分 検出；ＵＶ ３００ｎｍ
（ａ−１）の当量を２０〜１００倍当量、加熱時間を１
〜３時間としても収率、エピ化には影響しなかった。化
合物（ｅ−１−Ｇ）と（ｅ−１−Ｍ）は、下記ＨＰＬＣ
で分離できた。 カラム；コスモシール５Ｃ１８ＡＲ〔２０ｍｍ（ＩＤ）
×２５０ｍｍ（Ｌ）〕 （（株）ナカライテスク） 溶出溶媒；アセトニトリル−０．１Ｍ酢酸アンモニウム
水溶液（pH６．８５） 濃度勾配；０〜１０％（０．５％／分）〜５０％（２％
／分） 流速；８ｍＬ／分 検出；ＵＶ ３００ｎｍ
【００６８】実施例４ 実施例３で合成した本発明の化合物（ｅ−１−Ｇ）とア
ミノ酸誘導体〔Ｏ1 −メチル−Ｎ2 −アセチルリシン塩
酸塩（Ｎ2 −Ａｃ−Ｌｙｓ−ＯＭｅ）〕との結合体を糖
と蛋白質の蛍光標識ネオコンジュゲートモデルとして以
下に従って作成した。 化合物（ｅ−１−Ｇ）に対し、
０．５倍当量の縮合剤ＥＤＣ及び２．５倍当量のＥＤＣ
・ＨＣｌを水に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ールを水に対し１０重量％添加し、本発明の化合物を２
０重量％溶液とし、ｐＨ５〜６の条件で約２０時間、攪
拌して化１６に記載の蛍光標識されたネオグリココンジ
ュゲート（ｆ）を収率４２％で得た。
ミノ酸誘導体〔Ｏ1 −メチル−Ｎ2 −アセチルリシン塩
酸塩（Ｎ2 −Ａｃ−Ｌｙｓ−ＯＭｅ）〕との結合体を糖
と蛋白質の蛍光標識ネオコンジュゲートモデルとして以
下に従って作成した。 化合物（ｅ−１−Ｇ）に対し、
０．５倍当量の縮合剤ＥＤＣ及び２．５倍当量のＥＤＣ
・ＨＣｌを水に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ールを水に対し１０重量％添加し、本発明の化合物を２
０重量％溶液とし、ｐＨ５〜６の条件で約２０時間、攪
拌して化１６に記載の蛍光標識されたネオグリココンジ
ュゲート（ｆ）を収率４２％で得た。
【００６９】
【化１６】
【００７０】得られた化合物（ｆ）は1H NMR、ＭＳ（Ｆ
ＡＢ）で確認、同定され、リシンのε−アミノ基が化合
物（ｅ−１−Ｇ）のカルボキシル基とアミド結合したも
のであることが確認された。
ＡＢ）で確認、同定され、リシンのε−アミノ基が化合
物（ｅ−１−Ｇ）のカルボキシル基とアミド結合したも
のであることが確認された。
【００７１】実施例５ ２−アセチルアミノ−６−（３−アセチルアミノプロピ
ル）ピリジンを以下に従って合成した。２−アセチルア
ミノ−６−（２−シアノエチル）ピリジン（１１．５ｍ
ｇ、７８μｍｏｌ）を２５％アンモニア水（３．０ｍ
Ｌ）に溶かし、窒素置換したのちパラジウム黒（３０ｍ
ｇ）を加えた。再度窒素置換したのち９気圧の水素気流
下室温で２８時間攪拌した。窒素置換後パラジウム黒を
濾去し減圧濃縮した。残渣にクロロホルム（５００μ
Ｌ）を加えて氷冷し、無水酢酸（１００μＬ、１．１ｍ
ｍｏｌ）を加えて１０分間攪拌した。室温に戻した後さ
らに５時間攪拌した。氷冷してメタノール（１．０ｍ
Ｌ）を加え、１時間攪拌した。これを減圧濃縮し、残渣
をシリカゲルクロマトグラフィー〔シリカゲル１０ｇ、
クロロホルム−メタノール（１９：１）→（１５：
１）〕で精製して２−アセチルアミノ−６−（３−アセ
チルアミノプロピル）ピリジンの無色固体を得た。収量
６ｍｇ（５１％）；1H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ3 ），δ＝9.25(1H,bs, -CH2NHAc ), 8.10(1H,d,J=8
Hz,H-3又は5), 7.66(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4),6.91(1H,d,
J=7Hz,H-3 又は5), 5.74(1H,bs,2-NH-Ac), 3.29(2H,m,-
CH2NHAc ), 2.71(2H,t,J=7Hz,6-CH2CH2CH2NHAc のα
Ｈ), 2.21(3H,s,2-NHCOCH3), 1.97(3H,s,-CH2NHCOCH3),
1.89(2H,m,-CH2CH2CH2-のβＨ);ポジティブＥＩ−ＭＳ
ｍ／ｚ ２３５（Ｍ+ ）。
ル）ピリジンを以下に従って合成した。２−アセチルア
ミノ−６−（２−シアノエチル）ピリジン（１１．５ｍ
ｇ、７８μｍｏｌ）を２５％アンモニア水（３．０ｍ
Ｌ）に溶かし、窒素置換したのちパラジウム黒（３０ｍ
ｇ）を加えた。再度窒素置換したのち９気圧の水素気流
下室温で２８時間攪拌した。窒素置換後パラジウム黒を
濾去し減圧濃縮した。残渣にクロロホルム（５００μ
Ｌ）を加えて氷冷し、無水酢酸（１００μＬ、１．１ｍ
ｍｏｌ）を加えて１０分間攪拌した。室温に戻した後さ
らに５時間攪拌した。氷冷してメタノール（１．０ｍ
Ｌ）を加え、１時間攪拌した。これを減圧濃縮し、残渣
をシリカゲルクロマトグラフィー〔シリカゲル１０ｇ、
クロロホルム−メタノール（１９：１）→（１５：
１）〕で精製して２−アセチルアミノ−６−（３−アセ
チルアミノプロピル）ピリジンの無色固体を得た。収量
６ｍｇ（５１％）；1H NMR（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ3 ），δ＝9.25(1H,bs, -CH2NHAc ), 8.10(1H,d,J=8
Hz,H-3又は5), 7.66(1H,dd,J=8Hz,7Hz,H-4),6.91(1H,d,
J=7Hz,H-3 又は5), 5.74(1H,bs,2-NH-Ac), 3.29(2H,m,-
CH2NHAc ), 2.71(2H,t,J=7Hz,6-CH2CH2CH2NHAc のα
Ｈ), 2.21(3H,s,2-NHCOCH3), 1.97(3H,s,-CH2NHCOCH3),
1.89(2H,m,-CH2CH2CH2-のβＨ);ポジティブＥＩ−ＭＳ
ｍ／ｚ ２３５（Ｍ+ ）。
【００７２】
【発明の効果】本発明の２−アミノピリジン誘導体は、
糖類、蛋白質、脂質等と反応、結合させることにより複
合糖質、複合脂質、複合蛋白質等の疑似化合物（ネオコ
ンジュゲート）を形成することができるので、種々の該
目的化合物、特に、構造が複雑な生体高分子、例えば、
抗原、抗体等を各種クロマトグラフィー、ゲル電気泳
動、免疫電気泳動、免疫検定等で同定、定量、調製、精
製等を行うに当たって各種の蛍光スペクトル分析を使用
することができる。従って、特に、生体高分子等の複雑
な化合物を対象とする研究に応用できる範囲は極めて広
くかつ有力な解析手段を提供することができる。
糖類、蛋白質、脂質等と反応、結合させることにより複
合糖質、複合脂質、複合蛋白質等の疑似化合物（ネオコ
ンジュゲート）を形成することができるので、種々の該
目的化合物、特に、構造が複雑な生体高分子、例えば、
抗原、抗体等を各種クロマトグラフィー、ゲル電気泳
動、免疫電気泳動、免疫検定等で同定、定量、調製、精
製等を行うに当たって各種の蛍光スペクトル分析を使用
することができる。従って、特に、生体高分子等の複雑
な化合物を対象とする研究に応用できる範囲は極めて広
くかつ有力な解析手段を提供することができる。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−45283（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−45365（ＪＰ，Ａ) 特表 平６−510287（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，ＶＯＬ. 44，ＮＯ．10，Ｐ．1172−1177（1991) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07D 213/00 - 213/73 C09K 11/00 - 11/06 G01N 33/00 - 33/533 C07H 17/00 - 17/02 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】 下記化１に記載の一般式で表される化合
物（ａ）であることを特徴とする２−アミノピリジン誘
導体。 【化１】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、互いに同一でも異な
っても良く、各々水素、炭素数１〜４の低級アルキル基
から選択される基を表す。Ｒ4 は、−（ＣＨ2）m ＣＯ
ＯＨで表されるカルボキシル基またはカルボキシアルキ
ル基、−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基またはシ
アノアルキル基、アミノアルキル基、アルコキシカルボ
ニル基、アルキルオキシカルボニルアミノ基、メルカプ
ト基、マレイミド基、ハロゲン原子から選択される基を
表す。ｎは、２〜２０の整数を表し、ｍは、０又は１〜
３の整数を表す。） - 【請求項２】 下記化２に記載の一般式で表される化合
物（ｂ）のアミノ基に保護基Ｒ6 を結合した後、６位の
−ＣＯ2 Ｒ5 基を還元して下記化３に記載の一般式で表
される化合物（ｃ）を得て、該６位の−ＣＨＯ基と炭素
−炭素２重結合を縮合形成する縮合化合物を反応させて
化４に記載の一般式で表される化合物（ｄ）を形成し、
得られた化合物（ｄ）の６位の−ＣＨ＝Ｒ7 を少なくと
も還元し、次いで保護基Ｒ6 を脱離することを特徴とす
る請求項１記載の化合物（ａ）の製造方法。 【化２】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、請求項１記載と同義
であり、Ｒ5 は、炭素数１〜４の低級アルキル基であ
る。） 【化３】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、請求項１記載と同義
である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。） 【化４】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、及びＲ3 は、請求項１記載と同義
である。Ｒ6 は、アミノ基の保護基である。Ｒ7 は、縮
合化合物残基である。） - 【請求項３】 請求項１記載の化合物（ａ）においてＲ
4 がカルボキシル基又はシアノ基である化合物の製造方
法であって、縮合化合物がＲ4aＣＨ2 ＣＯＯＲ9（式
中、Ｒ4aは−ＣＯＯＲ9 又は−ＣＮであり、Ｒ9 は、Ｒ
4aが−ＣＯＯＲ9 のときは炭素数１〜４の低級アルキル
基であり、Ｒ4aが−ＣＮのときは炭素数１〜４の低級ア
ルキル基又は水素原子である。）であり、−ＣＨ＝Ｒ7
が−ＣＨ＝ＣＲ4aＣＯＯＲ9 であって、これを還元した
後、カルボン酸の脱炭酸、又はカルボン酸エステルのけ
ん化及び脱炭酸を行い、−ＣＨ＝Ｒ7 を−ＣＨ2 ＣＨ2
Ｒ4 （但し、式中、Ｒ4 は−ＣＯＯＨ又は−ＣＮであ
る。）とすることを特徴とする請求項２記載の製造方
法。 - 【請求項４】 請求項１の化合物（ａ）においてＲ4 が
−（ＣＨ2 ）m ＣＮ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＨ（但
し、ｍは０又は１〜３の整数である。）である化合物の
製造方法であって、縮合化合物がＰｈ3 Ｐ＝ＣＨＲ
4b（式中、Ｒ4bは−（ＣＨ2 ）m ＣＯＯＲ9 又は−（Ｃ
Ｈ2 ）m ＣＮで、ｍは０又は１〜３の整数であり、Ｒ9
は炭素数１〜４の低級アルキル基であり、Ｐｈはフェニ
ル基を示す。）であり、−ＣＨ＝Ｒ7 が−ＣＨ＝ＣＨＲ
4bであって、これを還元し、−ＣＨ＝ＣＨＲ4bを−ＣＨ
2 ＣＨ2 Ｒ4 （但し、式中、Ｒ4 は−（ＣＨ2 ）m ＣＯ
ＯＨ又は−（ＣＨ2 ）m ＣＮである。）とすることを特
徴とする請求項２記載の製造方法。 - 【請求項５】 請求項１の化合物（ａ）においてＲ4 が
−（ＣＨ2 ）m ＣＨ2 ＮＨ2 （式中、ｍは０又は１〜３
の整数である。）で表されるアミノアルキル基である化
合物の製造方法であって、化合物（ａ）においてＲ4 が
−（ＣＨ2 ）m ＣＮで表されるシアノ基又はシアノアル
キル基である化合物を還元して−ＣＮを−ＣＨ2 ＮＨ2
とすることを特徴とする請求項２記載の製造方法。 - 【請求項６】 請求項１記載の化合物（ａ）の２位のア
ミノ基と少なくとも一つの還元末端を有する糖化合物と
を還元結合してなる下記化５に記載の一般式で表される
化合物（ｅ）であることを特徴とする２−アミノピリジ
ン誘導体。 【化５】 （式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、Ｒ4 及びｎは、請求項１記
載と同義であり、Ｒ8は、糖化合物残基である。） - 【請求項７】 請求項１記載の一般式で表される化合物
（ａ）であることを特徴とする蛍光標識剤。 - 【請求項８】 請求項６記載の一般式で表される化合物
（ｅ）であることを特徴とする蛍光標識剤。 - 【請求項９】 請求項１記載の一般式で表される化合物
（ａ）であることを特徴とする架橋剤。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04088314A JP3122520B2 (ja) | 1992-03-13 | 1992-03-13 | ２−アミノピリジン誘導体、その製造方法及び蛍光標識剤 |
| US08/031,476 US5386033A (en) | 1992-03-13 | 1993-03-15 | 2-aminopyridine compounds |
| US08/311,733 US5548077A (en) | 1992-03-13 | 1994-09-23 | Method of producing a conjugate utilizing a 2-amino-pyridine compound |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04088314A JP3122520B2 (ja) | 1992-03-13 | 1992-03-13 | ２−アミノピリジン誘導体、その製造方法及び蛍光標識剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05255253A JPH05255253A (ja) | 1993-10-05 |
| JP3122520B2 true JP3122520B2 (ja) | 2001-01-09 |
Family
ID=13939477
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04088314A Expired - Fee Related JP3122520B2 (ja) | 1992-03-13 | 1992-03-13 | ２−アミノピリジン誘導体、その製造方法及び蛍光標識剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5386033A (ja) |
| JP (1) | JP3122520B2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US6455734B1 (en) | 2000-08-09 | 2002-09-24 | Magnesium Diagnostics, Inc. | Antagonists of the magnesium binding defect as therapeutic agents and methods for treatment of abnormal physiological states |
| KR100672301B1 (ko) * | 2001-10-16 | 2007-01-23 | 엘지전자 주식회사 | 고효율 유기전계발광소자 |
| JP2005241389A (ja) * | 2004-02-25 | 2005-09-08 | Ochiyanomizu Jiyoshi Univ | 蛍光標識糖鎖の特異的固定化試薬および固定化方法 |
| US20090186366A1 (en) * | 2006-06-28 | 2009-07-23 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Method of detecting interactions between protein components |
| AU2007303205A1 (en) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Lipid containing formulations |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2807619A (en) * | 1956-07-23 | 1957-09-24 | Reilly Tar & Chem Corp | 2-aminoalkanolpyridines |
| JPS6410177A (en) * | 1987-07-02 | 1989-01-13 | Takara Shuzo Co | Fluorescent labeling method for saccharides |
-
1992
- 1992-03-13 JP JP04088314A patent/JP3122520B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-03-15 US US08/031,476 patent/US5386033A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，ＶＯＬ．４４，ＮＯ．１０，Ｐ．１１７２−１１７７（１９９１） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5386033A (en) | 1995-01-31 |
| JPH05255253A (ja) | 1993-10-05 |
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