JP3026041B2 - ｈＣＧ関連９糖性ハプテン - Google Patents

ｈＣＧ関連９糖性ハプテン

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JP3026041B2
JP3026041B2 JP4-213187A JP21318792A JP3026041B2 JP 3026041 B2 JP3026041 B2 JP 3026041B2 JP 21318792 A JP21318792 A JP 21318792A JP 3026041 B2 JP3026041 B2 JP 3026041B2
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徹 北嶋
真一 小宮
智也 小川
宏一 形浦
良文 石井
和昭 加藤
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東和化成工業株式会社
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
【０００２】本発明は、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン
（以下ｈＣＧと云うことがある）の絨毛癌由来９糖性ハ
プテンに関する。
【０００３】
【従来の技術】
【０００４】ｈＣＧ関連糖鎖のうち、糖鎖（Ａ）［図３
参照］は絨毛癌に特異的な糖鎖の一つとして報告されて
いる［Ａ．コバタら、ジャーナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミストリー（ J. Biol. Chem. ) ，２５８（１９
８３）ｐ１４１２６］。
【０００５】この糖鎖構造を化学合成して免疫原とし、
絨毛癌の尿又は血清診断用モノクローナル抗体を作製す
ることを目的として、本発明者らは、すでに、７糖性ハ
プテン（Ｂ）［図３参照］の合成を報告し［Ｔ．オガワ
ら、カーボハイドレート・リサーチ（Carbohydrate Res
earch），１５０（１９８６）ｐ９１］、ハプテン
（Ｂ）を免疫原としてモノクローナル抗体を得ている
［第４７回日本癌学会総会記事、（１９８８）ｐ３８
２］。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】しかしながら、得られたモノクローナル抗
体は、ハプテン（Ｂ）のスペーサー部分をも含む広範囲
な部分の認識をしていることがわかり、尿中の天然型糖
鎖（Ａ）とは反応しないという結果になった。
【０００８】そこで、目的のモノクローナル抗体を作製
するために、新しい免疫原が必要となり、９糖（Ａ）の
構造を有するハプテンが要望されていた。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
【００１０】本発明者等は、上記課題を解決するため
に、天然型の糖鎖構造にスペーサーを導入した形の９糖
性ハプテン（１１）［図３参照］を分子設計し、その合
成に成功し、本発明を完成させた。
【００１１】即ち、本発明の化合物は、下記の通りの物
である。
【００１２】第１に、式（１１）［一般式（Ｉ）でＲ1
がメチル基、Ｒ2 、Ｒ4 、Ｒ5 、Ｒ6 が水素原子、Ｒ3
がアセチル基の場合］で表される化合物である。
【００１３】
【化５】
【００１４】第２に、式（１０）［一般式（Ｉ）でＲ1
がエチル基、Ｒ2 、Ｒ3 がフタロイル基、Ｒ4 がベンジ
ル基、Ｒ5 が水素原子、Ｒ6 がアセチル基の場合］で表
される化合物である。
【００１５】
【化６】
【００１６】第３に、式（８）［一般式（Ｉ）でＲ1 が
エチル基、Ｒ2 、Ｒ3 がフタロイル基、Ｒ4 がベンジル
基、Ｒ5 がｐ−メトキシフェニル基、Ｒ6 がアセチル基
の場合］で表される化合物である。
【００１７】
【化７】
【００１８】第４に、式（６）で表される化合物であ
る。
【００１９】
【化８】
【００２０】（式中、Ａｃはアセチル基を、Ｂｎはベン
ジル基を、Ｅｔはエチル基を、ＭＰはｐ−メトキシフェ
ニル基を、Ｐｈｔｈはフタロイル基をそれぞれ示す。）
【００２１】以下に本発明の内容を詳細に説明する。
【００２２】（ａ）化合物（６）の合成（図１及び図２
参照）
【００２３】化合物（１）［日本農芸化学会誌，第６５
巻第３号，１９９１年度大会，講演要旨集，第２０６頁
（３Ｅｐ１１）に記載されている内容が発表された時の
方法により製造できる］を脱アセチル化して化合物
（２）とし、公知化合物（３）［Ｍ．Ｍ．Ｐｏｎｐｉｐ
ｏｍら、テトラヘドロン・レターズ（ Tetrahedron Let
ters），（１９７８）ｐ１７１７の方法により製造でき
る］でグリコシル化して、化合物（４）及び（５）を得
る。この時、化合物（３）の代わりに相当するイミデー
トを用いると、化合物（４）のみが収率良く得られる。
【００２４】次いで、化合物（４）を脱シリル化して化
合物（６）を得る。
【００２５】（ｂ）一般式（Ｉ）で表される化合物の合
成（図２参照）
【００２６】化合物（６）を公知化合物（７）［ペンタ
アセチルマンノースから２段階で製造できる］でグリコ
シル化して、化合物（８）及び（９）を得る。
【００２７】次に、化合物（８）を脱ｐ−メトキシフェ
ニル化して化合物（１０）とし、次いで、脱ベンジル
化、脱アセチル化、エステル交換、脱フタロイル化及び
Ｎ−アセチル化を行い、化合物（１１）を得る。
【００２８】尚、前記工程において合成される化合物
（２）、（４）、（５）、（６）、（８）、（９）、
（１０）及び（１１）は、何れも新規化合物である。
【００２９】
【実施例】
【００３０】以下に、実施例を挙げて本発明の内容を更
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定さ
れるものではない。
【００３１】［実施例−１］［化合物（１）→化合物
（２）］
【００３２】化合物（１）３４０ｍｇを容器にとり、窒
素で系内を置換した。エタノール２０ｍｌ、ＤＭＦ５ｍ
ｌの混合溶媒を加えて溶解した後、０℃に冷却し、６０
％水素化ナトリウムを約１０ｍｇ加え、７時間反応させ
た。反応終了後、酢酸で中和し、減圧濃縮して、残渣を
ＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解し、重曹処理をして、有機溶媒層を
無水ＭｇＳＯ4 で乾燥した。ＭｇＳＯ4 を濾過した後、
減圧濃縮し、残渣をトルエン：酢酸エチル＝３：１→
２：１の混合溶媒を用いて２０ｇのシリカゲルカラムに
通して精製し、化合物（２）を２６０ｍｇ得た（収率７
９．５％）。
【００３３】［化合物（２）の性質］
【００３４】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．２４（トルエン：酢
酸エチル＝２：１）
【００３５】元素分析 Ｃ123 Ｈ134 Ｎ2 Ｏ26Ｓｉとし
て 計算値 Ｃ，７０．８７；Ｈ，６．４８；Ｎ，１．３４ 実測値 Ｃ，７０．６１；Ｈ，６．５６；Ｎ，１．０２
【００３６】 比旋光度 ［α］D 25 ＋１６．５°（Ｃ１.７２，ＣＨＣｌ3 ）
【００３７】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.52(C-1c),101.09(C-1e),98.08(C-1a),97.63(C-1b)
【００３８】［実施例−２］［化合物（２）＋（３）→
化合物（４）＋（５）］
【００３９】モレキュラーシーブ４Ａ粉末１ｇを容器に
とり、１９０℃で１６時間真空乾燥を行った後、窒素で
系内を置換した。次に、銀トリフレート（ＡｇＯＴｆ）
１５５．０ｍｇ（０．６０３ミリモル）を加え、更に、
９ｍｌのジクロロメタンを用いて、化合物（２）２２
０．０ｍｇ（０．１０６ミリモル）及び化合物（３）約
０．６ミリモルを溶解した後加え、０℃→室温で２日間
反応を行った。反応終了後、食塩水及びＣＨ2 Ｃｌ2 を
加えてしばらく攪拌した後、濾過を行い、濾液をＣＨ2
Ｃｌ2 で抽出した。有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ4 で乾燥
後、これを濾過し、減圧濃縮して、残渣をトルエン：酢
酸エチル＝２：１→１：１の混合溶媒を用いて７０ｇの
シリカゲルカラムに通して精製し、化合物（４）１６
２．８ｍｇ（収率４４．１％）及び化合物（５）１２
３．５ｍｇ（収率４１．９％）を得た。
【００４０】［化合物（４）の性質］
【００４１】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．２７（トルエン：酢
酸エチル＝１：１）
【００４２】元素分析 Ｃ187 Ｈ204 Ｎ4 Ｏ60Ｓｉ・４
Ｈ2 Ｏとして 計算値 Ｃ，６２．９５；Ｈ，５．９９；Ｎ，１．５７ 実測値 Ｃ，６２．９２；Ｈ，５．８６；Ｎ，１．３５
【００４３】比旋光度 ［α］D 25 ＋１３．６°（Ｃ
１.８７，ＣＨＣｌ3 ）
【００４４】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.39(C-1c),101.06(C-1e),100.39(C-1h),98.45(C-1f,
C-1i),98.08(C-1a),97.78(C-1b),95.47(C-1g)
【００４５】［化合物（５）の性質］
【００４６】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．５６（トルエン：酢
酸エチル＝１：１）
【００４７】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.20(C-1c,C-1e),101.10(C-1h),98.15(C-1f),98.08(C
-1a),97.62(C-1b)
【００４８】［実施例−３］［化合物（４）→化合物
（６）］
【００４９】化合物（４）１６２．８ｍｇ（０．０４７
ミリモル）をＴＨＦ１０ｍｌに溶解し、次に、酢酸によ
りｐＨ４〜５に調整したｎＢｕ4 ＮＦ１モル溶液（ＴＨ
Ｆ溶媒）を０．９ｍｌ加え、２日間加熱還流して反応を
行なった。反応終了後、ＣＨ2 Ｃｌ2 及び燐酸緩衝液を
加えて抽出を行い、有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ4 で乾燥
した。次いで、ＭｇＳＯ4 を濾過し、減圧濃縮して、残
渣をトルエン：酢酸エチル＝１：１の混合溶媒を用いて
２０ｇのシリカゲルカラムに通して精製し、化合物
（６）１２２．７ｍｇ（収率８０．９％）を得た。
【００５０】［化合物（６）の性質］
【００５１】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．４０（トルエン：酢
酸エチル＝２：３）
【００５２】元素分析 Ｃ171 Ｈ186 Ｎ4 Ｏ60・３Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ，６２．０２；Ｈ，５．８４；Ｎ，１．６９ 実測値 Ｃ，６２．０３；Ｈ，５．８５；Ｎ，１．３９
【００５３】比旋光度 ［α］D 25 ＋８．６°（Ｃ２．
７３，ＣＨＣｌ3 ）
【００５４】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.33(C-1c),101.04(C-1e),100.14(C-1h),98.64(C-1
i),98.29(C-1f),98.09(C-1a),97.67(C-1b),95.63(C-1g)
【００５５】［実施例−４］［化合物（６）＋（７）→
化合物（８）＋（９）］
【００５６】化合物（６）７３８．８ｍｇ（０．２２７
ミリモル）及び化合物（７）５９０．０ｍｇ（１．２０
ミリモル）を容器にとり、窒素で系内を置換した。次
に、予め乾燥しておいたモレキュラーシーブＡＷ３００
粉末２００ｍｇを加え、更に、ＣＨ2 Ｃｌ2 ４．５ｍｌ
を加えて、−２３℃で１時間攪拌した。次いで、トリメ
チルシリルトリフレート（ＴＭＳＯＴｆ）４５μｌ
（０．２３３ミリモル）を加え、−２３℃で３時間反応
させた。反応終了後、０℃まで昇温し、飽和重曹水５０
ｍｌを加えて反応を停止させた。次に、濾過を行い、濾
液をＣＨ2 Ｃｌ2 で抽出し、有機溶媒層を無水ＭｇＳＯ
4 で乾燥した。ＭｇＳＯ4 を濾過した後、減圧濃縮し
て、残渣をトルエン：酢酸エチル＝２：３の混合溶媒を
用いて１５０ｇのシリカゲルカラムに通して精製し、化
合物（８）３５１．０ｍｇ（収率４３．１％）及び化合
物（９）１０７．４ｍｇ（収率１３．２％）を得た。
【００５７】［化合物（８）の性質］
【００５８】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．３８（トルエン：酢
酸エチル＝３：５）
【００５９】元素分析 Ｃ185 Ｈ204 Ｎ4 Ｏ69・３Ｈ2
Ｏとして 計算値 Ｃ，６１．０１；Ｈ，５．８１；Ｎ，１．５４ 実測値 Ｃ，６０．９０；Ｈ，５．７７；Ｎ，１．１８
【００６０】比旋光度 ［α］D 25 ＋２１．３°（Ｃ
１.７２，ＣＨＣｌ3 ）
【００６１】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.39(C-1c),101.07(C-1e),100.45(C-1h),98.65(C-1
i),98.42(C-1f),98.05(C-1a),97.76(C-1b),97.24(C-1
d),95.60(C-1g)
【００６２】［化合物（９）の性質］ ＴＬＣ Ｒｆ＝０．２０（トルエン：酢酸エチル＝
３：５）
【００６３】［実施例−５］［化合物（８）→化合物
（１０）］
【００６４】まず、化合物（８）２６９ｍｇ（０．０７
５ミリモル）をＣＨ3 ＣＮ５ｍｌに溶解し、次に、約−
２０℃に冷却し、Ｈ2Ｏ １ｍｌに溶解したＣｅ（ＮＨ
4 ）2（ＮＯ3 ）6 ２００ｍｇ（０．３６５ミリモル）
をゆっくり加えて、１時間反応を行った。反応終了後、
メタノールを加え、０℃まで昇温した後、飽和重曹水及
びＣＨ2Ｃｌ2 を加えて抽出を行い、有機溶媒層を無水
ＭｇＳＯ4 で乾燥した。次いで、ＭｇＳＯ4 を濾過し、
減圧濃縮して、残渣をトルエン：酢酸エチル＝３：５の
混合溶媒を用いて３０ｇのシリカゲルカラムに通して精
製し、化合物（１０）２３０．３ｍｇ（収率８８．２
％）を得た。
【００６５】［化合物（１０）の性質］
【００６６】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．３６（トルエン：酢
酸エチル＝３：５）
【００６７】13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ） 101.42(C-1c),101.09(C-1e),100.45(C-1h),98.70(C-1
i),98.38(C-1f),98.26(C-1a),97.85(C-1b),97.24(C-1
d),95.61(C-1g)
【００６８】［実施例−６］［化合物（１０）→化合物
（１１）］
【００６９】容器にパラジウムブラック３００ｍｇを取
り、Ｈ2 を封入し、酢酸２ｍｌを加えて、室温で１時間
強く攪拌し、活性化を行った。次に、酢酸５ｍｌに溶解
した化合物（１０）２２７．０ｍｇを加え、４５℃で３
日間反応させた。反応終了後、濾過を行い、濾液を減圧
濃縮して、残渣をメタノールを用いて、３００ｍｌのセ
ファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）カラムに
通して精製し、脱ベンジル体１２８．２ｍｇを得た。
（ＴＬＣ分析、Ｒｆ＝０．４７、トルエン：酢酸エチ
ル：メタノール＝６：１０：１） 次に、脱ベンジル体にメタノール１０ｍｌ及びナトリウ
ムメトキシド（２８％メタノール溶液）０．１７ミリモ
ル相当を加え、室温で２日間反応させた。反応終了後、
アンバーライトＩＲＣ−５０（ローム・アンド・ハース
社製）２ｍｌを加え、反応を停止させた。次に、アンバ
ーライトを濾過した後、濾液を減圧濃縮して、水を用い
て、残渣を３００ｍｌのセファデックスＧ−２５（ファ
ルマシア社製）カラムに通して精製し、水を留去して７
７．９ｍｇの固体を得た。次いで、メタノール６ｍｌ及
びヒドラジンアセテート３３０ｍｇを加えて、５０℃で
２日間反応させた後、０℃まで冷却し、メタノール１０
ｍｌと無水酢酸１ｍｌを加えて、１６時間反応させた。
反応終了後、エタノールにより酢酸を共沸させながら減
圧濃縮を行った。残渣に含まれる不純物をメタノールで
洗い流した後、水を用いて１００ｍｌのセファデックス
Ｇ−２５カラムに通して精製し、凍結乾燥して、化合物
（１１）を１８．３ｍｇ得た（収率１５．５％）。
【００７０】［化合物（１１）の性質］
【００７１】ＴＬＣ Ｒｆ＝０．１７（エタノール：
水：酢酸＝１０：１：２）
【００７２】比旋光度 ［α］D 25 −３．７°（Ｃ０．
３３，Ｈ2 Ｏ）
【００７３】1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ，３５℃） 5.117(s,1H,H-1e),4.917(s,1H,H-1d),4.764(s,1H,H-1
c),4.62-4.52(3H,H-1b,H-1f,H-1g),4.52-4.43(3H,H-1a,
H-1h,H-1i),3.689(s,3H,OCH3),2.385(t,2H,J7.4Hz,CH2C
O),2.076(s,6H,2NAc),2.047,2.025(2s,6H,2NAc)
【００７４】
【発明の効果】
【００７５】本発明により９糖性ハプテンが提供され、
絨毛癌の尿又は血清診断用モノクローナル抗体の作製が
可能になる。
【図面の簡単な説明】
【図１】化合物（４）、化合物（５）の合成のスキーム
を示す図
【図２】一般式（Ｉ）で示される化合物の合成のスキー
ムを示す図
【図３】糖鎖（Ａ）、７糖性ハプテン（Ｂ）、９糖性ハ
プテン（１１）を示す図
フロントページの続き (72)発明者 石井 良文 静岡県富士市大渕3369−５ (72)発明者 加藤 和昭 埼玉県北葛飾郡吉川町中曽根477 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C08B 37/00

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式（１１）［一般式（Ｉ）でＲ1 がメチ
    ル基、Ｒ2 、Ｒ4 、Ｒ5 、Ｒ6 が水素原子、Ｒ3 がアセ
    チル基の場合］で表される化合物。 【化１】
  2. 【請求項２】 式（１０）［一般式（Ｉ）でＲ1 がエチ
    ル基、Ｒ2 、Ｒ3 がフタロイル基、Ｒ4 がベンジル基、
    Ｒ5 が水素原子、Ｒ6 がアセチル基の場合］で表される
    化合物。 【化２】
  3. 【請求項３】 式（８）［一般式（Ｉ）でＲ1 がエチル
    基、Ｒ2 、Ｒ3 がフタロイル基、Ｒ4 がベンジル基、Ｒ
    5 がｐ−メトキシフェニル基、Ｒ6 がアセチル基の場
    合］で表される化合物。 【化３】
  4. 【請求項４】 式（６）で表される化合物。 【化４】 （式中、Ａｃはアセチル基を、Ｂｎはベンジル基を、Ｅ
    ｔはエチル基を、ＭＰはｐ−メトキシフェニル基を、Ｐ
    ｈｔｈはフタロイル基をそれぞれ示す。）
JP4-213187A 1992-02-27 1992-07-20 ｈＣＧ関連９糖性ハプテン Expired - Lifetime JP3026041B2 (ja)

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