JP3072441B2 - 糖転移酵素識別用糖鎖 - Google Patents
糖転移酵素識別用糖鎖Info
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- JP3072441B2 JP3072441B2 JP3319692A JP31969291A JP3072441B2 JP 3072441 B2 JP3072441 B2 JP 3072441B2 JP 3319692 A JP3319692 A JP 3319692A JP 31969291 A JP31969291 A JP 31969291A JP 3072441 B2 JP3072441 B2 JP 3072441B2
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- compound
- sugar chain
- residue
- glycosyltransferase
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【０００２】本発明は糖転移酵素の特異性識別用糖鎖に
関する。
関する。
【０００３】
【０００４】本発明の化合物は、文献未記載の新規化合
物である。
物である。
【０００５】生体内には様々な糖鎖構造を作り出す、種
々の糖転移酵素が多数存在する。
々の糖転移酵素が多数存在する。
【０００６】最近、細胞機能発現因子としての種々の糖
転移酵素を臓器等から取り出す試みや、遺伝子組換えに
より人工的に糖転移酵素を作り出す試みが行われてい
る。
転移酵素を臓器等から取り出す試みや、遺伝子組換えに
より人工的に糖転移酵素を作り出す試みが行われてい
る。
【０００７】既に、本発明者等は、Ｎ−アセチルグルコ
サミン転移酵素IVの特異性検定用糖鎖として、式（Ａ）
及び式（Ｂ）で表される糖鎖を特許出願（特願平３−８
９１６１号）し、研究等に使用している。
サミン転移酵素IVの特異性検定用糖鎖として、式（Ａ）
及び式（Ｂ）で表される糖鎖を特許出願（特願平３−８
９１６１号）し、研究等に使用している。
【０００８】
【化４】
【０００９】
【化５】
【００１０】
【００１１】しかしながら、臓器等を処理して得られる
粗酵素液には、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素IVの
他に、転移酵素Ｖが存在する場合があり、２種類の糖転
移生成物ができる可能性が考えられる。従って、双方を
識別するための分析用標品が要望されていた。
粗酵素液には、Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素IVの
他に、転移酵素Ｖが存在する場合があり、２種類の糖転
移生成物ができる可能性が考えられる。従って、双方を
識別するための分析用標品が要望されていた。
【００１２】
【００１３】本発明者等は、上記課題を解決するために
鋭意研究を重ねた結果、Ｎ−アセチルグルコサミン転移
酵素Ｖの作用により生成する可能性のある２，６−分岐
型糖鎖を化学合成することに成功し、本発明を完成させ
た。
鋭意研究を重ねた結果、Ｎ−アセチルグルコサミン転移
酵素Ｖの作用により生成する可能性のある２，６−分岐
型糖鎖を化学合成することに成功し、本発明を完成させ
た。
【００１４】即ち、本発明の第１の化合物は、式７で表
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
【００１５】
【化６】
【００１６】また、本発明の第２の化合物は、式６で表
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
【００１７】
【化７】
【００１８】また、本発明の第３の化合物は、式２で表
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
される化合物である（式中、GlcNAcはＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン残基を示し、ManはＤ−マンノース残基
を示す）。
【００１９】
【化８】
【００２０】以下に本発明の内容を詳細に説明する。
【００２１】（ａ）化合物（２）の合成（図１に示すス
キーム１参照） 公知の化合物（１）［Ｈ．パウルセン（ H. Paulsen ）
ら、カーボハイドレート・リサーチ（Carbohydrate Res
earch)，２１６（１９９１）ｐ２８９．の方法により製
造できる］を接触還元後、脱アセチル化して化合物
（２）を得る。
キーム１参照） 公知の化合物（１）［Ｈ．パウルセン（ H. Paulsen ）
ら、カーボハイドレート・リサーチ（Carbohydrate Res
earch)，２１６（１９９１）ｐ２８９．の方法により製
造できる］を接触還元後、脱アセチル化して化合物
（２）を得る。
【００２２】（ｂ）一般式（Ｉ）の化合物の合成（図２
に示すスキーム２参照） 先願の化合物（４）［特願昭６３−１０１３５７の方法
により製造できる］を公知の化合物（３）［Ｈ．パウル
セン（ H. Paulsen ）ら、カーボハイドレート・リサー
チ（Carbohydrate Research)，２１６（１９９１）ｐ２
８９．の方法で製造できる］でグリコシル化して化合物
（５）とし、脱ベンジル化後、脱アセチル化及びエステ
ル交換反応を行い、化合物（６）を得る。更に、化合物
（６）をｍ−ニトロベンジルアルコール中でエステル交
換して化合物（７）を得る。尚、前記工程において合成
される化合物（２）、（５）、（６）及び（７）は、何
れも新規化合物である。
に示すスキーム２参照） 先願の化合物（４）［特願昭６３−１０１３５７の方法
により製造できる］を公知の化合物（３）［Ｈ．パウル
セン（ H. Paulsen ）ら、カーボハイドレート・リサー
チ（Carbohydrate Research)，２１６（１９９１）ｐ２
８９．の方法で製造できる］でグリコシル化して化合物
（５）とし、脱ベンジル化後、脱アセチル化及びエステ
ル交換反応を行い、化合物（６）を得る。更に、化合物
（６）をｍ−ニトロベンジルアルコール中でエステル交
換して化合物（７）を得る。尚、前記工程において合成
される化合物（２）、（５）、（６）及び（７）は、何
れも新規化合物である。
【００２３】
【００２４】以下に実施例を挙げて、本発明の内容を更
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定さ
れるものではない。
に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定さ
れるものではない。
【００２５】実施例−１［化合物（１）→（２）］（図
１参照）
１参照）
【００２６】化合物（１）６６０．０ｍｇを１８ｍｌの
クロロホルムに溶解し、１８ｍｌのＴＨＦに懸濁させた
パラジウムブラック１３２ｍｇを加えて水素を封入し、
５０℃で５時間攪拌した。
クロロホルムに溶解し、１８ｍｌのＴＨＦに懸濁させた
パラジウムブラック１３２ｍｇを加えて水素を封入し、
５０℃で５時間攪拌した。
【００２７】この反応液をセライト濾過後、減圧濃縮し
て、混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１５：１）
を用いて残渣を７０ｇのシリカゲルカラムに通して精製
し、得られた脱ベンジル化物［ＴＬＣ（Ｒｆ＝０．１
７，クロロホルム：メタノール＝２０：１）］をメタノ
ール２０ｍｌに溶解し、２．３ｍｌの１Ｎ−ＮａＯＣＨ3
を加えて室温で１６時間攪拌した。
て、混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１５：１）
を用いて残渣を７０ｇのシリカゲルカラムに通して精製
し、得られた脱ベンジル化物［ＴＬＣ（Ｒｆ＝０．１
７，クロロホルム：メタノール＝２０：１）］をメタノ
ール２０ｍｌに溶解し、２．３ｍｌの１Ｎ−ＮａＯＣＨ3
を加えて室温で１６時間攪拌した。
【００２８】反応終了後、４．６ｍｌのアンバーライト
（Amberlite）ＩＲＣ−５０（ローム・アンド・ハース
社製）を加えて中和し、セライト濾過後、減圧濃縮し
て、その残渣をゲル濾過［セファデックス（Sephadex）
Ｇ−２５（ファルマシア社製）３００ｍｌ、Ｈ2 Ｏ］に
より精製し、凍結乾燥して、化合物（２）を１６７．２
ｍｇ得た（収率４２．７％）。
（Amberlite）ＩＲＣ−５０（ローム・アンド・ハース
社製）を加えて中和し、セライト濾過後、減圧濃縮し
て、その残渣をゲル濾過［セファデックス（Sephadex）
Ｇ−２５（ファルマシア社製）３００ｍｌ、Ｈ2 Ｏ］に
より精製し、凍結乾燥して、化合物（２）を１６７．２
ｍｇ得た（収率４２．７％）。
【００２９】［化合物（２）の性質］
【００３０】
【外１】
【００３１】実施例−２［化合物（３）＋（４）→
（５）］（図２参照）
（５）］（図２参照）
【００３２】１７０℃で１６時間真空乾燥したモレキュ
ラーシーブ４Ａ（ＭＳ−４Ａ）粉末２．１ｇに、２４２
ｍｇ（０．９４ミリモル）のＡｇＯＳＯ2ＣＦ3 と１８
ｍｌの１，２−ジクロロエタン（ドライ）を加え、系内
を窒素置換した。
ラーシーブ４Ａ（ＭＳ−４Ａ）粉末２．１ｇに、２４２
ｍｇ（０．９４ミリモル）のＡｇＯＳＯ2ＣＦ3 と１８
ｍｌの１，２−ジクロロエタン（ドライ）を加え、系内
を窒素置換した。
【００３３】次に、４ｍｌの１，２−ジクロロエタンに
溶解した化合物（４）２７６．０ｍｇ（０．４７ミリモ
ル）を加え、５ｍｌの１，２−ジクロロエタンに溶解し
た化合物（３）４６０．０ｍｇ（０．４７ミリモル）を
滴下し、室温で１７時間攪拌した。
溶解した化合物（４）２７６．０ｍｇ（０．４７ミリモ
ル）を加え、５ｍｌの１，２−ジクロロエタンに溶解し
た化合物（３）４６０．０ｍｇ（０．４７ミリモル）を
滴下し、室温で１７時間攪拌した。
【００３４】反応終了後、９０ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2 を加
えてセライト濾過し、水洗、重曹処理をして、有機層を
硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、減圧濃縮して、
残渣を混合溶媒（クロロホルム：アセトン＝４：１）を
用いて７０ｇのシリカゲルカラムに通して精製し、化合
物（５）を２２３．２ｍｇ得た（収率３１．８％）。
えてセライト濾過し、水洗、重曹処理をして、有機層を
硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、減圧濃縮して、
残渣を混合溶媒（クロロホルム：アセトン＝４：１）を
用いて７０ｇのシリカゲルカラムに通して精製し、化合
物（５）を２２３．２ｍｇ得た（収率３１．８％）。
【００３５】［化合物（５）の性質］
【００３６】
【外２】
【００３７】実施例−３［化合物（５）→（６）］（図
２参照）
２参照）
【００３８】化合物（５）１４４．８ｍｇをエタノール
３．４ｍｌに溶解し、３．４ｍｌのＴＨＦに懸濁させた
パラジウムブラック２９ｍｇを加えてＨ2を封入し、５
０℃で２時間攪拌した。
３．４ｍｌに溶解し、３．４ｍｌのＴＨＦに懸濁させた
パラジウムブラック２９ｍｇを加えてＨ2を封入し、５
０℃で２時間攪拌した。
【００３９】この反応液をセライト濾過後、減圧濃縮
し、更に、真空乾燥して、６．８ｍｌのメタノール（ド
ライ）に再溶解し、１Ｎ−ＮａＯＣＨ3 ０．４５ｍｌを
加えて、室温で１６時間攪拌した。
し、更に、真空乾燥して、６．８ｍｌのメタノール（ド
ライ）に再溶解し、１Ｎ−ＮａＯＣＨ3 ０．４５ｍｌを
加えて、室温で１６時間攪拌した。
【００４０】反応終了後、アンバーライト（Amberlite
）ＩＲＣ−５０（ローム・アンド・ハース社製）２．
３ｍｌを加えて中和し、セライト濾過後、減圧濃縮し
て、その残渣をゲル濾過［セファデックス（ Sephadex
）Ｇ−１０（ファルマシア社製）１００ｍｌ、Ｈ2
Ｏ］により精製し、凍結乾燥して、化合物（６）を６
３．８ｍｇ得た（収率７１．６％）。
）ＩＲＣ−５０（ローム・アンド・ハース社製）２．
３ｍｌを加えて中和し、セライト濾過後、減圧濃縮し
て、その残渣をゲル濾過［セファデックス（ Sephadex
）Ｇ−１０（ファルマシア社製）１００ｍｌ、Ｈ2
Ｏ］により精製し、凍結乾燥して、化合物（６）を６
３．８ｍｇ得た（収率７１．６％）。
【００４１】［化合物（６）の性質］
【００４２】
【外３】
【００４３】実施例−４［化合物（６）→（７）］（図
２参照）
２参照）
【００４４】化合物（６）１０．５ｍｇを０．５ｍｌの
ｍ−ニトロベンジルアルコールに溶解し、４０℃で１時
間真空乾燥した。
ｍ−ニトロベンジルアルコールに溶解し、４０℃で１時
間真空乾燥した。
【００４５】次に、１０Ｎ−ＮａＯＣＨ3 １滴を加え
て、真空下で４０℃にて４時間攪拌した。
て、真空下で４０℃にて４時間攪拌した。
【００４６】この反応液を０℃のメタノール５ｍｌと
０．５ｍｌのアンバーリスト（Amberlyst ）１５（ロー
ム・アンド・ハース社製）との混合物中に滴下し、０℃
で１０分間攪拌した。次いで、濾過した後、３０℃で減
圧濃縮して、濃縮液をそのまま、ゲル濾過［バイオビー
ズＳ−Ｘ２（バイオラツド社製）３５０ｍｌ、クロロホ
ルム：メタノール＝１：１］により精製し、溶出液を減
圧濃縮後、水１ｍｌに再溶解して凍結乾燥し、化合物
（７）を８．０ｍｇ得た（収率６７．２％）。
０．５ｍｌのアンバーリスト（Amberlyst ）１５（ロー
ム・アンド・ハース社製）との混合物中に滴下し、０℃
で１０分間攪拌した。次いで、濾過した後、３０℃で減
圧濃縮して、濃縮液をそのまま、ゲル濾過［バイオビー
ズＳ−Ｘ２（バイオラツド社製）３５０ｍｌ、クロロホ
ルム：メタノール＝１：１］により精製し、溶出液を減
圧濃縮後、水１ｍｌに再溶解して凍結乾燥し、化合物
（７）を８．０ｍｇ得た（収率６７．２％）。
【００４７】［化合物（７）の性質］
【００４８】
【外４】
【００４９】
【００５０】本発明の糖転移酵素識別用糖鎖を用いるこ
とにより、高速液体クロマトグラフィー等での２，４−
分岐型糖鎖と２，６−分岐型糖鎖の識別が可能になる。
とにより、高速液体クロマトグラフィー等での２，４−
分岐型糖鎖と２，６−分岐型糖鎖の識別が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【図１】化合物（２）の合成のスキームを示す図であ
る。
る。
【図２】一般式（Ｉ）で示される化合物の合成のスキー
ムを示す図である。
ムを示す図である。
フロントページの続き (72)発明者 小川 智也 東京都武蔵野市吉祥寺北町３−６−６− ３−101 (72)発明者 古川 清 東京都三鷹市大沢２−20−31−204 (72)発明者 木幡 陽 東京都多摩市落合６−６−４−203 (72)発明者 石井 良文 静岡県富士市大渕3369−５ (72)発明者 加藤 和昭 埼玉県北葛飾郡吉川町中曽根477 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07H 15/04 C12Q 1/48 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (2)
- 【請求項１】式７で表される化合物（式中、GlcNAcはＮ
−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基を示し、Man はＤ−
マンノース残基を示す）。 【化１】 - 【請求項２】式６で表される化合物（式中、GlcNAcはＮ
−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基を示し、Man はＤ−
マンノース残基を示す）。 【化２】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3319692A JP3072441B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | 糖転移酵素識別用糖鎖 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3319692A JP3072441B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | 糖転移酵素識別用糖鎖 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05125089A JPH05125089A (ja) | 1993-05-21 |
| JP3072441B2 true JP3072441B2 (ja) | 2000-07-31 |
Family
ID=18113121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3319692A Expired - Fee Related JP3072441B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | 糖転移酵素識別用糖鎖 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3072441B2 (ja) |
-
1991
- 1991-11-08 JP JP3319692A patent/JP3072441B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05125089A (ja) | 1993-05-21 |
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