JP3054026B2

JP3054026B2 - 抗真菌剤オーレオバシジン感受性関連遺伝子

Info

Publication number: JP3054026B2
Application number: JP6106158A
Authority: JP
Inventors: 尚志大門; 一任竹迫; 郁之進加藤
Original assignee: 寳酒造株式会社
Priority date: 1993-05-24
Filing date: 1994-04-22
Publication date: 2000-06-19
Anticipated expiration: 2015-06-19
Also published as: JPH07313172A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗真菌剤オーレオバシ
ジンの感受性に関連する蛋白質、及び該蛋白質をコード
する遺伝子、すなわちオーレオバシジン感受性関連遺伝
子に関する。また、本発明は、これらの蛋白質、遺伝子
の一連の用途に関する。更に本発明は、該蛋白質に対す
る抗体、及びその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、免疫抑制剤の使用の増加や後天性
免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等による免疫能の低下した
患者の増加と共に、更に、広範囲スペクトラムの抗細菌
性抗生物質の多用による菌交代症による日和見感染症と
して、カンジダ症を始めとする全身性真菌症が増大して
いる。これに対して、現在、真菌症に対する治療に使用
されている薬剤としては、アンホテリシンＢ、フルシト
シン、アゾール系薬剤（フルコナゾール、ミコナゾール
等）がある程度であり、いずれもまだ満足できるもので
ない。また、診断薬においても不十分であり、特にカン
ジダ症に関してはいくつかの診断薬（カンジテック法、
Ｄ−アラビニトール測定法等）があるが、特異性、感
度、いずれの点でも満足すべき結果は得られていない。
上記のように、真菌症に対する治療薬、診断薬の開発が
遅れている理由は、原因菌である真菌が、宿主であるヒ
トと同様に真核生物であるため、両者の相違が少ない、
また、真菌、特に病原性真菌に関する知見が不足してい
る。したがって、ヒトと真菌を区別したり、選択的に真
菌を殺すことが難しく、薬剤の開発が遅れている。

【０００３】近年、アンチセンス、ＰＣＲ等の遺伝子工
学技術の真菌症の治療、診断への応用が期待されている
が、現在知られている応用可能な遺伝子、及び／又はそ
のコードする蛋白質は極めてわずかである（ＰＣＴ国際
公開ＷＯ９２／０３４５５号）。最近、病原性真菌に関
しては、カンジダ症の原因菌であるカンジダアルビカ
ンス（Candida albicans、以下、Ｃ．アルビカンスと略
記する）、カンジダトロピカリス（Ｃ．tropicalis、以
下、Ｃ．トロピカリスと略記する）の病原性への関与が
予測されていた酸性プロテアーゼ遺伝子〔Ｂ．ヒューブ
（Ｂ．Hube)ほか、ジャーナルオブメディカルア
ンドベテリナリーマイコロジー（Ｊ．Med. Vet. My
col.）、第２９巻、第１２９〜１３２頁（１９９１）、
特開平５−４９４７６号公報、Ｇ．トグニ（Ｇ．Togni)
ほか、フェブスレターズ（ＦＥＢＳ Letters)、第２
８６巻、第１８１〜１８５頁（１９９１）〕、Ｃ．アル
ビカンスのカルモジュリン遺伝子〔Ｓ．Ｍ．サポリト
（Ｓ．Ｍ．Saporito) ほか、ジーン（Gene) 、第１０６
巻、第４３〜４９頁（１９９１）〕、Ｃ．アルビカンス
の解糖系酵素エノラーゼ遺伝子〔Ｐ．サンドストローム
（Ｐ．Sundstrom)ほか、ジャーナルオブバクテリオ
ロジー（Ｊ．Bacteriology) 、第１７４巻、第６７８９
〜６７９９頁（１９９２）〕等がクローニングされてい
る。しかし、これらの遺伝子及びそのコードする蛋白質
は非病原性真菌及び真菌以外の真核生物との相違が不明
確であったり、また、明確であっても、選択毒性を示す
ための明確な作用点とはなりえないものである。

【０００４】オーレオバシジン〔特開平２−１３８２９
６号、同３−２２９９５号、同３−２２０１９９号、同
５−２７９３８４号、特願平４−３０３１７７号、ジャ
ーナルオブアンチバイオチクス（Ｊ．Antibiotic
s)、第４４巻、第９号、第９１９〜９２４頁、同第４４
巻、第９号、第９２５〜９３３頁、同第４４巻、第１１
号、第１１８７〜１１９８頁（１９９１）〕は、オーレ
オバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans)
No.Ｒ１０６株の発酵生産物として得られる、環状のデ
プシペプチドであり、他の抗真菌剤とは構造的に全く異
なる。更に、オーレオバシジンの中で代表的な化合物で
あるオーレオバシジンＡは、下記表１及び表２に示した
ように、病原性真菌であるＣ．アルビカンスを始めとす
る種々のカンジダ属酵母、クリプトコッカスネオホル
マンス（Cryptococcus neoformans)、ヒストプラズマ
カプスラタム（Histoplasma capsulatum) 、ブラストマ
イセスデルマチチジス（Blastomyces dermatitidis)
、アスペルギルス（Aspergillus)属真菌に対して、強
い抗真菌活性を有する（特開平２−１３８２９６号）
が、毒性が非常に弱く、優れた選択毒性を有する抗真菌
剤として期待されている。

【０００５】以下、本明細書において、カンジダをＣ．
クリプトコッカスをＣｒ．、アスペルギルスをＡ．と略
記する。

【０００６】

【表１】表１ ─────────────────────────────────── 試験菌ＴＩＭＭ番号ＭＩＣ（μｇ／ml） ─────────────────────────────────── Ｃ．アルビカンス０１３６ ≦０．０４Ｃ．アルビカンスバリアントステラトイデア１３０８ ≦０．０４Ｃ．トロピカリス０３１２０．０８Ｃ．ケフィール０２９８０．１６Ｃ．パラプシロシス０２８７０．１６Ｃ．クルセイ０２７０ ≦０．０４Ｃ．ギリエルモンジ０２５７０．０８Ｃ．グラブラータ１０６２ ≦０．０４Ｃｒ．ネオホルマンス０３５４０．６３Ｃｒ．テレウス０４２４０．３１ロドトルラルブラ０９２３０．６３Ａ．フミガタス００６３２０Ａ．クラバタス００５６０．１６ ───────────────────────────────────

【０００７】

【表２】表２ ─────────────────────────────────── 試験菌ＴＩＭＭ番号ＭＩＣ（μｇ／ml） ─────────────────────────────────── Ａ．ニドランス０１１２０．１６Ａ．テレウス０１２０５ペニシリウムコムュン１３３１１．２５トリコフィトンメンタグロフィテス１１８９１０エピデルモフィトンフロコッサム０４３１２．５フォンセカエアペドロソイ０４８２０．３１エキソフィアラベルネッキ１３３４１．２５クラドスポリウムバンチアヌム０３４３０．６３ヒストプラズマカプスラタム０７１３０．１６パラコクシディオイデスブラジリエンシス０８８００．３１ジオトリカムカンディダム０６９４０．６３ブラストマイセスデルマチチジス０１２６０．３１ ───────────────────────────────────

【０００８】上記表１及び表２中、未記載の菌の原語を
以下にまとめて示す。Ｃ．アルビカンスバリアント
ステラトイデア（Ｃ．albicans var. stellatoidea) 、
Ｃ．ケフィール（Ｃ．kefyr)、Ｃ．パラプシロシス
（Ｃ．parapsilosis) 、Ｃ．クルセイ（Ｃ．krusei) 、
Ｃ．ギリエルモンジ（Ｃ．guilliermondii) 、Ｃ．グラ
ブラータ（Ｃ．glabrata) 、Ｃｒ．テレウス（Cr.terre
us) 、ロドトルラルブラ（Rhodotorula rubra)、Ａ．
フミガタス（Ａ．fumigatus)、Ａ．クラバタス（Ａ．cl
avatus) 、Ａ．ニドランス（Ａ．nidulans) 、Ａ．テレ
ウス（Ａ．terreus)、ペニシリウムコムュン（Penici
llium commune)、トリコフィトンメンタグロフィテス
（Trichophyton mentagrophytes)、エピデルモフィトン
フロコッサム（Epidermophyton floccosum) 、フォン
セカエアペドロソイ（Fonsecaea pedrosoi) 、エキソ
フィアラベルネッキ（Exophiala werneckii)、クラド
スポリウムバンチアヌム（Cladosporium bantianum)
、パラコクシディオイデスブラジリエンシス（Parac
occidioides brasiliensis)、ジオトリカムカンディ
ダム（Geotrichum candidum)。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】従来の毒性の弱い抗真
菌剤はすべて静菌的な作用しか示さず、臨床上問題とな
っていたが、オーレオバシジンの作用は殺菌的である。
これらの点から、オーレオバシジンの選択毒性の機構の
解明が待たれているが、現在のところ全く知られていな
い。本発明の目的は、上記のような現状を考慮し、オー
レオバシジンの選択毒性の機構を解明することにより、
新規なオーレオバシジンの感受性に関連する蛋白質を見
出すことにある。すなわち、本発明はオーレオバシジン
の感受性に関連する蛋白質をコードする遺伝子を明らか
にし、該遺伝子のクローニング方法、該遺伝子のコード
するオーレオバシジンの感受性に関連する蛋白質を提供
すること、更に該遺伝子のアンチセンスＤＮＡ及びアン
チセンスＲＮＡを提供すること、該遺伝子にハイブリダ
イズ可能な核酸プローブ、及びその核酸プローブを用い
た該遺伝子の検出方法を提供すること、該遺伝子を用い
るオーレオバシジンの感受性に関連する蛋白質の製造方
法を提供すること、オーレオバシジン感受性に関連する
蛋白質の抗体及びその抗体を用いたオーレオバシジン感
受性に関連する蛋白質の検出方法を提供すること等を目
的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は、特定のオーレオバシジン感受性又
は耐性を付与する蛋白質をコードする遺伝子、すなわち
オーレオバシジン感受性関連遺伝子に関する。第２の発
明は、オーレオバシジン感受性関連遺伝子のクローニン
グ方法に関し、本発明の第１の発明のオーレオバシジン
感受性関連遺伝子をプローブとして用いることを特徴と
する。第３の発明は、オーレオバシン感受性関連遺伝子
にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ可能な１
５塩基以上の配列よりなる核酸プローブに関する。第４
の発明は、オーレオバシジン感受性関連遺伝子のアンチ
センスＤＮＡに関する。第５の発明は、オーレオバシジ
ン感受性関連遺伝子のアンチセンスＲＮＡに関する。第
６の発明は、オーレオバシジン感受性関連遺伝子を含有
させた組換体プラスミドに関し、第７の発明は、そのプ
ラスミドを導入させた形質転換体に関する。第８の発明
は、上記の形質転換体を使用したオーレオバシジン感受
性又は耐性を付与する蛋白質の製造方法に関する。第９
の発明は、オーレオバシジン感受性又は耐性を付与する
蛋白質に関する。第１０の発明は、オーレオバシジン感
受性又は耐性を付与する蛋白質に対する抗体に関し、第
１１の発明は、その抗体を用いたオーレオバシジン感受
性又は耐性を付与する蛋白質の検出方法に関する。第１
２の発明は、ハイブリダイゼーションによるオーレオバ
シジン感受性関連遺伝子の検出方法に関し、本発明の第
３の発明の核酸プローブを用いることを特徴とする。第
１３の発明は、上記の形質転換体又はオーレオバシジン
感受性又は耐性を付与する蛋白質を用いた抗真菌活性を
有する物質のスクリーニング方法に関する。

【００１１】本発明者らは、下記表３に示したシゾサッ
カロミセスポンベ（Schizosaccharomyces pombe 、以
下、Schizo．ポンベと略記する）、サッカロミセスセ
レビシエ（Saccharomyces cerevisiae、以下、Ｓ．セレ
ビシエと略記する）等の真菌、更に、哺乳類細胞の中で
も、マウスリンパ腫細胞ＥＬ−４等がオーレオバシジン
に感受性を示すことを見出した。

【００１２】

【表３】表３ ─────────────────────────────────── 試験菌及び試験細胞ＭＩＣ（μｇ／ml） ─────────────────────────────────── Schizo. ポンベ０．０８Ｓ．セレビシエ０．３１マウスリンホーマ(mouse lymphoma) ＥＬ−４細胞１０マウスリンホーマＬ５１７８Ｙ細胞１００ＮＲＫ−４９Ｆ細胞１２．５ ───────────────────────────────────

【００１３】そして、Schizo. ポンベ、Ｓ．セレビシエ
等の感受性細胞に変異処理を施すことにより耐性細胞に
かえ、その耐性細胞よりオーレオバシジン耐性を付与す
る遺伝子（耐性遺伝子）、更に感受性細胞より対応する
オーレオバシジン感受性を付与する遺伝子（感受性遺伝
子）の単離に成功した。更に、本発明者らは、本遺伝子
のコードする蛋白質の存在を明らかにした。また、本遺
伝子を導入して形質転換した細胞を培養し、本遺伝子を
発現させることに成功した。更に、本遺伝子のＤＮＡ断
片をプローブとして用いることによって、オーレオバシ
ジンに感受性の他の真菌より、新たにオーレオバシジン
感受性に関連する遺伝子を発見することに成功した。更
に、オーレオバシジン感受性関連遺伝子が細胞の生育に
必須であることを明らかにし、この遺伝子を検出するこ
とにより、又は遺伝子産物である蛋白質を抗体により検
出することにより、その細胞が原因となって生じている
疾患、例えば真菌によって引起こされている真菌症の診
断が可能であること、更に、その細胞に特有のオーレオ
バシジン感受性関連遺伝子の発現を阻害するアンチセン
スＤＮＡ又はアンチセンスＲＮＡは、その細胞が原因と
なって生じている疾患の治療薬、例えば真菌による真菌
症に対する抗真菌剤、となることを見出し、本発明を完
成した。

【００１４】すなわち、オーレオバシジンに感受性を有
する表１及び表２に示した病原性真菌、及び表３の真菌
及び哺乳類細胞はオーレオバシジン感受性に関連する蛋
白質及びその蛋白質をコードする遺伝子を保有してい
る。本発明におけるオーレオバシジン感受性に関連する
蛋白質とは、オーレオバシジンに対して感受性を示す生
物に含有される蛋白質であり、その蛋白質はオーレオバ
シジンに対して感受性又は耐性を示すために必要とされ
る。当然、この蛋白質と３５％以上のホモロジーを有す
る、同様の機能を有する蛋白質も、本発明におけるオー
レオバシジン感受性に関連する蛋白質に含まれる。更
に、これらの蛋白質を遺伝子工学的に変化させた蛋白質
も本発明におけるオーレオバシジン感受性に関連する蛋
白質に含まれる。オーレオバシジン感受性関連遺伝子と
は、これらのオーレオバシジン感受性に関連する蛋白質
をコードする遺伝子であり、感受性遺伝子及び耐性遺伝
子が含まれる。

【００１５】本発明の第１の発明は、オーレオバシジン
感受性関連遺伝子である。本遺伝子を単離するために
は、まずオーレオバシジンに感受性の細胞（野生株）よ
り変異処理により耐性株を誘導し、この耐性株の染色体
ＤＮＡ又はｃＤＮＡからＤＮＡライブラリーを作製し、
このライブラリーの中から耐性を付与する遺伝子（耐性
遺伝子）をクローニングする。また、野生株のＤＮＡラ
イブラリーを作製し、このライブラリーの中に、耐性遺
伝子とハイブリダイズするＤＮＡ分子を単離、クローニ
ングすれば、感受性遺伝子を単離することができる。

【００１６】変異処理の方法としては、エチルメタンス
ルホネート（ＥＭＳ）、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ
−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の薬剤処理による方
法、紫外線又は放射線により処理する方法等がある。耐
性を獲得した変異株を選択するためには、変異処理した
細胞を適当な濃度のオーレオバシジンを含有する栄養培
地で、適当な条件で培養すれば、耐性を獲得した株を選
択することができる。変異処理の方法、条件により、得
られる耐性株は異なる可能性がある。また、選択の際、
オーレオバシジンの濃度を変えることにより耐性度の異
なる株を分離したり、温度を変化させることにより温度
感受性耐性株を分離することができる。オーレオバシジ
ンに対する耐性の機構は複数存在するため、これらの種
々の耐性株を遺伝学的に分類していくことにより、複数
の耐性遺伝子を単離することができる。分類は、酵母の
場合、一倍体細胞を用いて耐性菌を作製し、接合型の異
なる耐性菌同志の交雑により、二倍体細胞を得ることが
できる。その二倍体より生じる胞子について四分子分析
を行う、相補性試験（complementation test) を行えば
よい。

【００１７】本発明のオーレオバシジン（aureobasidi
n) 感受性関連遺伝子（aur)の代表例として、aur1、 au
r２遺伝子がある。 aur１遺伝子の代表例としては、Sch
izo.ポンベより単離した spaur１遺伝子、及びＳ．セレ
ビシエより単離した scaur１遺伝子があり、 aur２遺伝
子の代表例としては、Ｓ．セレビシエより単離したscau
r２遺伝子がある。以下、本発明者らが耐性の変異株よ
り単離した耐性遺伝子（ spaur１^R、 scaur１^R、 sca
ur２^R）、及び感受性の野生株より単離した感受性遺伝
子（ spaur１^S、 scaur１^S、 scaur２^S）について説
明する。

【００１８】なお、添付図面の図１にオーレオバシジン
感受性関連遺伝子の spaur１^R及びspaur１^Sの制限酵
素地図を、図２に scaur１^R及び scaur１^Sの制限酵素
地図を、図３に scaur２^R及び scaur２^Sの制限酵素地
図をそれぞれ示す。

【００１９】オーレオバシジンに感受性であるSchizo.
ポンベをＥＭＳにより変異処理し、得られた耐性菌のゲ
ノムライブラリーを作製し、その中から耐性遺伝子（ s
paur１^R）を含有する、図１の制限酵素地図を有するＤ
ＮＡ断片を単離した。本遺伝子の塩基配列は配列表の配
列番号１の通りであり、この塩基配列より予想される本
遺伝子のコードする蛋白質のアミノ酸配列は配列表の配
列番号２の通りである。この耐性遺伝子を用いたハイブ
リダイゼーションにより、感受性株より感受性遺伝子
（ spaur１^S）を含有する、図１の制限酵素地図を有す
るＤＮＡ断片を単離した。この感受性遺伝子の塩基配列
は配列表の配列番号３の通りであり、この塩基配列より
予想される本遺伝子のコードする蛋白質のアミノ酸配列
は配列表の配列番号４の通りである。配列番号３と配列
番号１の比較により１０５３番目の塩基のＧからＴへの
突然変異が起こり、配列番号４と配列番号２の比較によ
りアミノ酸レベルで２４０番目のアミノ酸がグリシンか
らシステインへ変化し、これが耐性の原因となっている
ことが明らかとなった。

【００２０】更に、オーレオバシジンに感受性である
Ｓ．セレビシエをＥＭＳにより変異処理し、得られた２
種類の耐性菌についてゲノムライブラリーを作製し、そ
の一方から図２の制限酵素地図を有する優性変異である
耐性遺伝子（ scaur１^R）を含有するＤＮＡ断片、もう
一方から図３の制限酵素地図を有する耐性遺伝子（ sca
ur２^R）を含有するＤＮＡ断片を単離した。scaur１^R
遺伝子の蛋白質をコードしている部分を含む領域の塩基
配列は配列表の配列番号５の通りであり、この塩基配列
より予想される本遺伝子のコードする蛋白質のアミノ酸
配列は配列表の配列番号６の通りである。この耐性遺伝
子 scaur１^Rを用いたハイブリダイゼーションにより感
受性株より感受性遺伝子（ scaur１^S）を含有する、図
２の制限酵素地図を有するＤＮＡ断片を単離した。この
感受性遺伝子の塩基配列は配列表の配列番号７の通りで
あり、この塩基配列より予想される本遺伝子のコードす
る蛋白質のアミノ酸配列は配列表の配列番号８の通りで
ある。配列番号７と配列番号５を比較すると８５２番目
の塩基のＴからＡへの突然変異が起こり、配列番号８と
配列番号６を比較するとアミノ酸レベルで１５８番目の
アミノ酸がフェニルアラニンからチロシンへ変化し、こ
れが耐性の原因となっていることが明らかとなった。 s
paur１遺伝子と scaur１遺伝子を比較するとアミノ酸レ
ベルで５８％のホモロジーがあり、両遺伝子が同様の機
能を有する蛋白質をコードする遺伝子であることが明ら
かである。 spaur１、 scaur１遺伝子及びそのコードす
る蛋白質のアミノ酸配列とホモロジーを有する遺伝子及
び蛋白質をデータベースにより探索したところ、３５％
以上のホモロジーを有するものはなかった。すなわち、
本遺伝子及びそのコードする蛋白質は従来全く知られて
いない分子であることが明らかである。

【００２１】耐性遺伝子 scaur２^RのＤＮＡ断片を用い
たハイブリダイゼーションにより感受性株より感受性遺
伝子（ scaur２^S）を含有し、図３の制限酵素地図を有
するＤＮＡ断片を単離した。この感受性遺伝子の塩基配
列は、配列表の配列番号９の通りであり、この塩基配列
より予想される、本遺伝子のコードする蛋白質のアミノ
酸配列は、配列表の配列番号１０の通りである。 scaur
２^S遺伝子及びそのコードする蛋白質についてホモロジ
ー検索を行った結果、哺乳類の有するのう胞性線維症膜
貫通性伝導性因子（ＣＦＴＲ）が、わずかに３１％のホ
モロジーを示すだけであった。ただし、このＣＦＴＲと
比較するとホモロジーの高いのはヌクレオチド結合ドメ
イン周辺に限られていた。すなわち scaur２^S遺伝子の
コードする蛋白質は、ＣＦＴＲとは全く異なる機能を有
するものであり、従来知られていない遺伝子であること
は明らかである。

【００２２】また、 aur１遺伝子の細胞の生育における
重要性を確認するために、 aur１遺伝子の途中にオロチ
ジン−５′−ホスフェートデカルボキシラーゼ遺伝子を
コードする遺伝子（Schizo. ポンベの場合、 ura４⁺、
Ｓ．セレビシエの場合、ＵＲＡ３）を導入した、図４及
び図５の aur１破壊用遺伝子を作製した。これらをそれ
ぞれSchizo. ポンベ、Ｓ．セレビシエ細胞に導入した結
果、 aur１破壊遺伝子を有する細胞は全く生育できず、
これらの遺伝子及びそのコードする蛋白質は酵母細胞の
生育に必須であることが明らかとなった。

【００２３】上記の例から明らかなように、オーレオバ
シジンに感受性を示す生物を出発材料として、種々の変
異処理方法、及び／又は選択方法を用い、上記と同様の
方法でクローニングを行えば、それぞれの生物又は方法
に対応したオーレオバシジン感受性関連遺伝子を単離す
ることができる。更に、これらの遺伝子にハイブリダイ
ズ可能な遺伝子も本発明の第１の発明に含まれる。ま
た、オーレオバシジン感受性関連遺伝子は、次のような
方法で単離することができる。すなわち、オーレオバシ
ジンに感受性を示す生物のゲノムＤＮＡライブラリー
を、例えば酵母の高発現ベクターに組込み、酵母に形質
転換し、その形質転換体の中からオーレオバシジン感受
性の低下したクローンを選択し、そのクローンよりＤＮ
Ａを回収、単離すれば、目的の遺伝子が得られる。当
然、上記のようにして得られたオーレオバシジン感受性
関連遺伝子の一部を化学的、物理的方法により変化させ
た遺伝子も本発明の第１の発明に含まれる。

【００２４】本発明の第２の発明は、オーレオバシジン
感受性関連遺伝子のクローニング方法に関し、本発明の
第１の発明のオーレオバシジン感受性関連遺伝子又はそ
の一部をプローブとして用いることを特徴とする。すな
わち、上記のようにして得られた遺伝子の一部（１５オ
リゴヌクレオチド以上）又は全部を用いて、ハイブリダ
イゼーション法、又はポリメラーゼ・チェイン・リアク
ション（ＰＣＲ）法により探索すれば、同様の機能を有
する蛋白質をコードする遺伝子を単離することができ
る。

【００２５】例えば、配列番号１に示した spaur１^R遺
伝子のＤＮＡ塩基配列から配列表の配列番号１１と配列
番号１２のプライマー対を合成し、病原性真菌である
Ｃ．アルビカンスのｃＤＮＡを鋳型として、上記プライ
マーを用いてＰＣＲを行う。図６に示すように図６のレ
ーン１は、Ｃ．アルビカンスのｃＤＮＡを、レーン２は
Ｓ．セレビシエのｃＤＮＡを、レーン３はSchizo. ポン
ベのｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、そのＰＣＲ産
物についてアガロースゲル電気泳動を行い、臭化エチジ
ウム染色した結果であり、あるＤＮＡ断片が特異的に増
幅されている。そして、このＤＮＡ断片をプローブとし
て、Ｃ．アルビカンスのゲノムＤＮＡライブラリーをス
クリーニングすることにより、 spaur１、 scaur１遺伝
子と同様の機能を有する遺伝子（ caaur１）を含有する
図７の制限酵素地図を有するＤＮＡ分子が得られた。こ
の caaur１遺伝子の塩基配列は配列表の配列番号１３の
通りであり、この塩基配列より推定される本遺伝子がコ
ードする蛋白質のアミノ酸配列は配列表の配列番号１４
の通りであり、 spaur１、 scaur１遺伝子のコードする
蛋白質と高いホモロジーを有していた。また、配列表の
配列番号９に示した scaur２^S遺伝子の全長又は一部の
ＤＮＡ断片をプローブとして、Ｃ．アルビカンスのゲノ
ムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによ
り、 scaur２遺伝子と同様の機能を有する遺伝子（ caa
ur２）を含有する図８の制限酵素地図を有するＤＮＡ分
子が得られた。この caaur２遺伝子の一部の塩基配列は
配列表の配列番号１５の通りであり、この塩基配列より
推定される本遺伝子のこの領域のアミノ酸配列は配列表
の配列番号１６の通りであり、 scaur２遺伝子のコード
する蛋白質の対応する領域と高いホモロジーを有してい
た。

【００２６】本発明の第３の発明は、上記の核酸プロー
ブであり、オーレオバシジン感受性関連遺伝子、例え
ば、図１、図２又は図３に示した制限酵素地図を有する
ＤＮＡ断片と選択的にハイブリダイズ可能な１５塩基以
上のオリゴヌクレオチドである。この核酸プローブはイ
ンシトゥ（in situ)ハイブリダイゼーション、上記遺
伝子を発現する組織の確認、各種生体組織における遺伝
子やｍＲＮＡの存在の確認等に利用可能である。該核酸
プローブは上記遺伝子又は遺伝子断片を適当なベクター
につなぎ、細菌に導入し、複製させ、菌体破砕液からフ
ェノール等により抽出、そしてベクターとつないだ部位
を認識する制限酵素で切断、電気泳動後、ゲルより切り
出せば調製できる。また、該核酸プローブは配列表の配
列番号１、３、５、７、９、１３、１５のそれぞれの塩
基配列に基づき、ＤＮＡ合成機による化学合成やＰＣＲ
による遺伝子増幅技術によっても調製できる。該核酸プ
ローブは使用時の検出感度を上げるために放射性同位体
や蛍光で標識することもできる。

【００２７】本発明の第４の発明は、上記のオーレオバ
シジン感受性関連遺伝子のアンチセンスＤＮＡであり、
本発明の第５の発明はアンチセンスＲＮＡである。これ
らのアンチセンスＤＮＡ又はアンチセンスＲＮＡを細胞
に導入することによりオーレオバシジン感受性関連遺伝
子の発現を制御することが可能である。導入するアンチ
センスＤＮＡとしては、例えば、配列表の配列番号１、
３、５、７、９、１３、１５の各オーレオバシジン感受
性関連遺伝子の、それぞれの対応するアンチセンスＤＮ
Ａ又はその一部を用いることができる。該アンチセンス
ＤＮＡの例を配列表の配列番号１７に示す。これは配列
表の配列番号１のオーレオバシジン感受性関連遺伝子の
アンチセンスＤＮＡの配列を示すものである。アンチセ
ンスＤＮＡとしては、例えば、これらのアンチセンスＤ
ＮＡの一部を適当に切断して得た断片を用いてもよい
し、これらのアンチセンスＤＮＡ配列に基づいて合成し
たＤＮＡを用いてもよい。

【００２８】導入するアンチセンスＲＮＡとしては、例
えば、配列表の配列番号１、３、５、７、９、１３、１
５の各オーレオバシジン感受性関連遺伝子の、それぞれ
の対応するアンチセンスＲＮＡ又はその一部を用いるこ
とができる。該アンチセンスＲＮＡの例を配列表の配列
番号１８に示す。これは配列表の配列番号１のオーレオ
バシジン感受性関連遺伝子のアンチセンスＲＮＡの配列
を示すものである。アンチセンスＲＮＡとしては、例え
ば、これらのアンチセンスＲＮＡの一部を適当に切断し
て得た断片を用いてもよいし、これらのアンチセンスＲ
ＮＡ配列に基づいて合成したＲＮＡや、例えば、配列表
の配列番号１、配列番号３のオーレオバシジン感受性関
連遺伝子の、それぞれの対応するアンチセンスＲＮＡ又
はその一部を用いて、インビトロ転写系でＲＮＡポリ
メラーゼを作用させて作製したＲＮＡを用いてもよい。
また、アンチセンスＤＮＡ及びアンチセンスＲＮＡは、
生体内で分解されにくいように、更に、細胞膜を通過で
きるように化学的な修飾を施しておくことができる。ｍ
ＲＮＡを不活化できるような物質、例えば、リボザイム
（ribozyme) を結合させてもよい。このようにして調製
したアンチセンスＤＮＡ及びアンチセンスＲＮＡは、真
菌症を始めとするオーレオバシジンの感受性に関連する
蛋白質をコードするｍＲＮＡ量が増大している各種疾患
の治療に使用することができる。

【００２９】本発明の第６の発明は、オーレオバシジン
の感受性に関連する蛋白質をコードする遺伝子を適当な
ベクターに組込んだ、組換体プラスミドである。例え
ば、酵母の適当なベクターにオーレオバシジン耐性遺伝
子を組込んだプラスミドは、オーレオバシジンを用いた
薬剤耐性により容易に形質転換体を選択できるため、選
別マーカー遺伝子として有用性が高い。また、組換体プ
ラスミドは大腸菌等に安定に保持させることが可能であ
り、その際、ベクターとして使用可能なものとして、pU
C118、 pWH５、pAU-PS、Traplex119、pTV118等がある。
spaur１^S遺伝子を組込んだpAU-PSは、 pSPAR１と命名
し、 spaur１^S遺伝子を組込んだ pWH５は、 pSCAR１と
命名し、 scaur２^R遺伝子を組込んだ pWH５は、 pSCAR
２と命名し、 caaur１遺伝子を組込んだTraplex119ベク
ターは pCAAR１と命名し、また、 caaur２遺伝子の一部
を組込んだpTV118ベクターは pCAAR2Nと命名し、それぞ
れ大腸菌に形質転換された。また、適当な宿主に発現さ
せることも可能であり、上記プラスミドを、必要に応じ
て適当な制限酵素等で、蛋白質に翻訳される領域（open
reading frame、ＯＲＦ）にだけ切り縮めた後、適当な
ベクターにつなぎ、発現用組換体プラスミドとすること
ができる。発現用プラスミドとしては、宿主が大腸菌の
時は、pTV118等のプラスミド、宿主の酵母の時は、pYES
２等のプラスミド、宿主が哺乳類細胞の時は、pMAMneo
等のプラスミドをベクターとして使用すればよい。

【００３０】本発明の第７の発明は、上記の組換体プラ
スミドを適当な宿主に導入した形質転換体である。宿主
としては、大腸菌、酵母、哺乳類細胞が使用可能であ
る。 spaur１^S遺伝子を組込んだ pSPAR１で形質転換さ
れた大腸菌ＪＭ１０９は、Escherichia coli JM109/pSP
AR１と命名、表示され、工業技術院生命工学工業技術研
究所にFERM BP-4485として寄託されている。 scaur１^S
遺伝子を組込んだ pSCAR１で形質転換された大腸菌ＨＢ
１０１は、Escherichia coli HB101/pSCAR１と命名、表
示され、工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM BP-
4483として寄託されている。 scaur２^R遺伝子を組込ん
だ pSCAR２で形質転換された大腸菌ＨＢ１０１は、Esch
erichia coli HB101/pSCAR２と命名、表示され、工業技
術院生命工学工業技術研究所にFERM BP-4484として寄託
されている。 caaur１遺伝子を組込んだ pCAAR１で形質
転換された大腸菌ＨＢ１０１は、Escherichia coli HB1
01/pCAAR１と命名、表示され、工業技術院生命工学工業
技術研究所にFERM BP-4482として寄託されている。 caa
ur２遺伝子の一部を組込んだ pCAAR2Nで形質転換された
大腸菌ＨＢ１０１は、Escherichia coli HB101/pCAAR2N
と命名、表示され、工業技術院生命工学工業技術研究所
にFERM BP-4481として寄託されている。また、オーレオ
バシジンの感受性に関連する蛋白質を発現する形質転換
体は、上記のように発現用ベクターへ組込んだ組換体プ
ラスミドを適当な宿主に形質転換することにより得られ
る。例えば、図９に示すような組換体プラスミドを導入
した酵母は、この目的に使用可能である。

【００３１】本発明の第８の発明は、オーレオバシジン
の感受性に関連する蛋白質の製造方法であり、該蛋白質
をコードする遺伝子を含有させた、本発明の第６の発明
の組換体プラスミドを導入した発現用形質転換体を適当
な栄養培地で培養し、該蛋白質を発現させ、その細胞又
は培地より該蛋白質を回収、精製すればよい。該蛋白質
をコードする遺伝子を発現させるために、宿主として大
腸菌、酵母、哺乳類細胞が使用される。例えば、図９の
組換体プラスミドを導入した酵母は、ガラクトース入り
の培地で培養することにより scaur１^S遺伝子のコード
する、オーレオバシジンの感受性に関連する蛋白質を発
現させることができる。

【００３２】本発明の第９の発明は、オーレオバシジン
の感受性に関連する蛋白質である。その例としては、上
記の spaur１、 scaur１、 scaur２、 caaur１、 caaur
２遺伝子のコードする蛋白質を挙げることができる。sp
aur１^S遺伝子は配列表の配列番号４に示すアミノ酸配
列を有する蛋白質を、 scaur１^S遺伝子は配列表の配列
番号８に示すアミノ酸配列を有する蛋白質をコードして
いる。 spaur１遺伝子のＤＮＡ断片をプローブとしたノ
ーザン（northern) ハイブリダイゼーション法により感
受性菌中にｍＲＮＡが検出された（図１０）ことから、
spaur１遺伝子の発現を確認した。図１０において、レ
ーン１は、Schizo. ポンベの感受性菌の対数増殖期の細
胞より、レーン２は耐性菌の対数増殖期の細胞より、レ
ーン３は感受性菌の定常期の細胞より、更に、レーン４
は耐性菌の定常期の細胞より得られたｍＲＮＡを用い、
それぞれのｍＲＮＡをホルムアルデヒドを含む１．２％
アガロースゲル電気泳動を行い、ノーザンハイブリダイ
ゼーションの結果のオートラジオグラフを示す。

【００３３】本発明の第１０の発明は、上記のオーレオ
バシジンの感受性に関連する蛋白質に対する抗体であ
る。例えば、配列表の配列番号２、４、６、８、１０、
１４、１６のアミノ酸配列を有する蛋白質やそのアミノ
酸配列の一部の領域のペプチド断片等を抗原として使用
することができる。前者は、前記形質転換体に発現さ
せ、精製すれば調製することができ、後者は市販の合成
機等で合成することができる。抗体の作製は常法により
行われるが、例えば、上記の蛋白質又はペプチド断片を
アジュバントと共にウサギ等の動物に免疫することによ
って、ポリクローナル抗体を調製することができる。ま
た、モノクローナル抗体は抗原を免疫して得られた抗体
産生Ｂ細胞とミエローマ細胞を融合し、目的の抗体を産
生するハイブリドーマを選択し、この細胞を培養するこ
とによって調製することができる。これらの抗体は後述
のように真菌症を始めとする、該蛋白質の関係するヒト
や動物の疾患の治療や診断に使用することができる。例
えば、配列番号８のアミノ酸配列の中で１０３番目から
１１３番目に相当するペプチドを合成機により合成し、
これにキャリア蛋白質を結合後、ウサギに免疫し、ポリ
クローナル抗体を調製した。キャリア蛋白質としては、
本発明においては、キーホールリンペットヘモシアニン
（ＫＬＨ）を使用したが、ウシ血清アルブミン、オボア
ルブミン等を使用することもできる。

【００３４】本発明の第１１の発明は、上記の抗体を用
いた、オーレオバシジンの感受性に関連する蛋白質の検
出方法であり、抗体と蛋白質の結合又は結合量を測定す
ることにより行うことができる。例えば、蛍光標識した
抗体で処理後、蛍光顕微鏡で観察すれば該蛋白質や産生
細胞の存在を検出できる。また、結合した抗体量は公知
の種々の方法で測定することができる。例えば、前記の
抗体と、二次抗体として、例えばＦＩＴＣ標識抗ウサギ
抗体を用いて、Ｓ．セレビシエ細胞を免疫蛍光抗体法に
より染色した所、細胞全体にscaur１遺伝子のコードす
る蛋白質が分布することが明らかとなった。更に、図９
の組換体プラスミドを導入した酵母を、グルコース又は
ガラクトース入りの培地で培養し、それぞれより得られ
た菌体をガラスビーズにより破砕し、蛋白質を可溶化し
た。その蛋白質をＳＤＳ電気泳動にかけ分離後、前記の
ポリクローナル抗体とペルオキシダーゼ標識抗ウサギ抗
体を用いて、常法によりウエスタンブロッティングを行
った。その結果、図１１に示すように、 scaur１遺伝子
のコードする蛋白質を検出することができた。図１１に
おいて、レーン１はグルコース存在下の培養により得ら
れた細胞より、レーン２はガラクトース存在下の培養に
より得られた細胞より、調製した蛋白質をＳＤＳ電気泳
動にかけ、ウエスタンブロッティングを行った結果であ
る。主要なものとして３８ｋＤａ付近に本発明のポリク
ローナル抗体に結合するバンドが検出された。

【００３５】本発明の第１２の発明は、上記オリゴヌク
レオチドを核酸プローブとした、オーレオバシジンの感
受性に関連する遺伝子、例えば蛋白質の発現時のｍＲＮ
Ａの検出方法である。この方法は、真菌症を始めとす
る、該蛋白質をコードするｍＲＮＡ量に異常のある各種
疾患の診断に使用することができる。例えば、破砕した
細胞より核酸を沈殿させ、ｍＲＮＡをニトロセルロース
膜上で放射性同位体標識した核酸プローブにハイブリダ
イズさせ、オートラジオグラフィー（図１０）やシンチ
レーションカウンターにより結合量を測定することがで
きる。

【００３６】本発明の第１３の発明は、本発明の第７の
発明の形質転換体又は本発明の第９の発明のオーレオバ
シジンの感受性に関連する蛋白質を用いた新規抗真菌剤
の効率的スクリーニング方法である。例えば、感受性遺
伝子を含有させた形質転換体と耐性遺伝子を含有させた
形質転換体に対する活性の比較により、又は発現量に差
のある形質転換体に対する活性の比較により、効率的に
本発明の蛋白質、又は遺伝子に作用する薬剤を発見する
ことができる。また、本発明の蛋白質に対する親和性の
差を測定する、例えば標識したオーレオバシジンの該蛋
白質への結合に対する阻害活性を測定することにより効
率よくスクリーニングすることができる。

【００３７】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明は、これら実施例に限定されるものではな
い。

【００３８】実施例１．分裂酵母 Schizo.ポンベ由来
のオーレオバシジン感受性関連遺伝子spaur１のクロー
ニング 1-a) Schizo. ポンベのオーレオバシジン耐性変異株の
分離オーレオバシジンに対して０．０８μｇ／mlで感受性を
示す Schizo.ポンベの一倍体細胞株ＪＹ７４５（接合型
ｈ^-、遺伝子型ade6-M210 、leu1、ura4-D18)の約１×
１０⁸個の細胞を１mlの０．９％塩化ナトリウムを含む
リン酸緩衝液に懸濁した。最終濃度３％のＥＭＳ、３０
℃、９０分間という条件で変異処理をした。５％チオ硫
酸ナトリウム８mlを加えて中和した後、処理細胞を遠心
（２５００r.p.m.、５分間）により回収し、６mlの生理
食塩水で２回洗浄後、２mlのＹＥＬ培地（３％グルコー
ス、０．５％酵母エキス）に懸濁した。懸濁液を３０
℃、５時間、かくはんしながら保温した後、５μｇ／ml
のオーレオバシジンＡを含むＹＥＡプレート（１．５％
寒天を含むＹＥＬ培地）へ蒔き、３０℃、３〜４日間培
養した。１×１０⁸細胞当り２〜３個のオーレオバシジ
ン耐性コロニーが生じた。数回の突然変異誘発により、
５クローンの変異株、ＴＨＲ０１、ＴＨＲ０４、ＴＨＲ
０５、ＴＨＲ０６、ＴＨＲ０７を得た。これらは２５μ
ｇ／mlのオーレオバシジンＡに対しても耐性を示した
が、シクロヘキシミド、アンホテリシンＢに対しては親
株と同じ感受性を持つことから、多剤耐性変異ではな
く、オーレオバシジンに特異的な耐性であると推定され
る。

【００３９】1-b) 遺伝学的解析前述の耐性株、ＴＨＲ０１、ＴＨＲ０４、ＴＨＲ０５、
ＴＨＲ０６、ＴＨＲ０７を接合型の異なった正常細胞 S
chizo.ポンベＬＨ１２１株（接合型ｈ⁺、遺伝子型ade6
-M216 、ura4-D18) と交雑し二倍体細胞を形成させ、オ
ーレオバシジン耐性を調べた。耐性株と正常株との交雑
により生じた５種類の二倍体は耐性株と同様に２５μｇ
／mlのオーレオバシジンＡに対して耐性を示したため、
この耐性変異は優性変異であった。次に、四分子分析を
行うため、上記の二倍体を胞子形成用ＭＥＡ培地（３％
麦芽エキス、２．５％寒天）に植菌し、２５℃、２日間
培養した。二倍体細胞はＭＥＡ培地上で減数分裂前ＤＮ
Ａ合成後、減数分裂して一倍体の子のう胞子を４個含む
子のうを形成する。この胞子をマイクロマニピュレータ
により分離し、ＹＥＡプレート上で発芽、更にコロニー
を形成させ、それらのコロニーについてオーレオバシジ
ン感受性を調べた。１個の子のう内の４個の胞子は感受
性：耐性が２：２の分離を示した。上記の結果は、オー
レオバシジン耐性変異は１種類の遺伝子の変異によって
起こったことを示す。更に、前記の５変異株の耐性遺伝
子が同一の遺伝子であるかどうかを確認するため、相補
性試験を行った。例えば、前記の四分子分析により変異
体ＴＨＲ０１とＬＨ１２１株の交雑により得られた接合
型ｈ⁺の変異体と、前記の別の変異体ＴＨＲ０４（接合
型ｈ^-）をＭＥＡプレート上で交雑後、胞子形成させ前
述の四分子分析を行った。４個の子のう胞子から生じる
コロニーがすべてオーレオバシジン耐性を示すことか
ら、ＴＨＲ０１とＴＨＲ０４の２種の変異体の変異遺伝
子は同一である。同様に５種の変異体を調べた結果、す
べて同一遺伝子上の変異であった。このオーレオバシジ
ン感受性関連遺伝子を spaur１と命名し、正常遺伝子
（感受性遺伝子）を spaur１^S、変異遺伝子（耐性遺伝
子）を spaur１^Rと表す。

【００４０】1-c) オーレオバシジン耐性株のゲノムラ
イブラリーの作製オーレオバシジン耐性株ＴＨＲ０１からゲノムＤＮＡを
Ｐ．フィリップセン（Ｐ. philippsen）らの方法〔メソ
ッズインエンザイモロジー（Methods in Enzymolog
y)、第１９４巻、第１６９〜１７５頁（１９９１）〕に
より抽出、精製した。精製したゲノムＤＮＡ（８μｇ）
を制限酵素 HindIII５ユニットで３７℃、１０分間処理
による部分分解後、フェノール／クロロホルムにより除
蛋白し、エタノール沈殿した。部分分解ＤＮＡを０．８
％アガロースゲル電気泳動にかけ、３〜１５kb領域のＤ
ＮＡを抽出した。得られたＤＮＡと HindIIIで完全分解
した酵母−大腸菌シャトルベクターpAU-PS（２μｇ）を
ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造社製）により連結
させた後、大腸菌ＨＢ１０１へ形質転換し、オーレオバ
シジン耐性株のゲノムライブラリーを作製した。このゲ
ノムライブラリーを含有させた大腸菌を１００μｇ／ml
アンピシリンと２５μｇ／mlテトラサイクリンを含むＬ
Ｂ培地（１％バクトトリプトン、０．５％バクトイース
トエキス、０．５％塩化ナトリウム）５０ml中で３７
℃、一夜培養後、大腸菌からプラスミドを回収、精製し
た。

【００４１】1-d) オーレオバシジン耐性遺伝子 spaur
１^Rの発現及びクローニング上記のようにして調製したオーレオバシジン耐性株のゲ
ノムライブラリー由来のプラスミドをオカザキらの方法
〔ヌクレイックアシッドリサーチ（Nucleic Acid R
esearch)、第１８巻、第６４８５〜６４８９頁（１９９
０）〕により Schizo.ポンベＪＹ７４５株へ形質転換し
た。形質転換した細胞を７５μｇ／mlアデニン硫酸と５
０μｇ／mlロイシンを含む最少培地ＳＤプレート〔０．
６７％アミノ酸不含酵母ニトロゲンベース（ディフコ社
製）、２％グルコース、２％寒天〕へ蒔いた。３０℃、
３〜４日間培養後、生じたコロニーを５μｇ／mlオーレ
オバシジンＡ、７５μｇ／mlアデニン硫酸及び５０μｇ
／mlロイシンを含むＳＤプレートへレプリカした。この
プレート上で増殖したコロニーはオーレオバシジン耐性
遺伝子を含むプラスミドを持っていると考えられる。こ
のコロニーを７５μｇ／mlアデニン硫酸と５０μｇ／ml
ロイシンを含む液体ＳＤ培地５mlへ植菌し、３０℃、２
日間培養後、増殖した細胞からプラスミドをＩ．ハーガ
ン〔ジャーナルオブセルサイエンス（Ｊ．Cell S
ci. ）、第９１巻、第５８７〜５９５頁、（１９８
８）〕らの方法により回収した。すなわち、５ml培養液
から遠心により集菌した細胞へ１．２Ｍソルビトールと
２mg／mlザイモリアーゼを含む５０mMクエン酸−リン酸
緩衝液１．５mlを加え懸濁した後、３７℃で６０分間保
温した。３０００r.p.m.、３０秒間の遠心により菌体を
回収し、３００μｌのＴＥ〔１０mMトリス（Tris) −Ｈ
Ｃｌ、ｐＨ８、１mMＥＤＴＡ〕溶液に懸濁した後、１０
％ＳＤＳを３５μｌ加え、６５℃で５分間保温した。１
００μｌの５Ｍ酢酸カリウムを加え氷中で３０分間放置
した。１0,０００r.p.m.、４℃で１０分間遠心後、上清
からEASYTRAP（宝酒造社製）によりプラスミドＤＮＡを
精製した。このプラスミドを大腸菌ＨＢ１０１へ形質転
換し、アンピシリンとテトラサイクリンを含むＬＢ培地
上に生じた大腸菌コロニーからプラスミドＤＮＡを調製
した。このプラスミドは４．５kbのＤＮＡを含んでお
り、ｐＡＲ２５と命名した。ｐＡＲ２５中の４．５kbの
ＤＮＡの制限酵素地図を図１２に示す。更に遺伝子領域
を限定するため、種々の大きさよりなる HindIII断片又
はＳａｃＩ断片をそれぞれpAU-PSベクターへクローニン
グした。そのＤＮＡを正常細胞ＪＹ７４５へ前述のオカ
ザキらの方法により形質転換し、オーレオバシジン耐性
を獲得するかどうかを確認した。その結果、 HindIII-S
acI ２．４kbＤＮＡ断片に spaur１^R遺伝子が存在する
ことが明らかとなった。このオーレオバシジン耐性遺伝
子 spaur１^Rを含有するＤＮＡ断片の制限酵素地図は図
１に示すとおりである。この断片をpUC118ベクターへク
ローニング（pUARS2R と命名）後、ＤＮＡ塩基配列を決
定した（配列表の配列番号１）。この塩基配列より spa
ur１^R遺伝子は、配列表の配列番号２に示したアミノ酸
配列を有する蛋白質をコードしていることが明らかとな
った。

【００４２】1-e) オーレオバシジン感受性遺伝子 spa
ur１^Sのクローニング前記のc)と同様の方法により、正常細胞からゲノムＤＮ
Ａを抽出、精製、HindIII による部分分解後、正常細胞
のゲノムライブラリーを作製した。このライブラリーＤ
ＮＡを含有させた大腸菌ストックをアンピシリンとテト
ラサイクリンを含むＬＢ寒天培地上へ蒔き、３７℃一夜
培養した。生じたコロニーをナイロンメンブレン（Hybo
nd-N、アルシャム社製）へ移し、コロニーハイブリダイ
ゼーションを行った。プローブは前記の spaur１^R遺伝
子のHindIII-SacI切断によるＤＮＡ断片（２kb）をラン
ダムプライマーＤＮＡラベリングキット（宝酒造社製）
により〔α−³²Ｐ〕ｄＣＴＰで標識したものを用いた。
５×１０⁴個のコロニーのスクリーニングの結果、プロ
ーブとハイブリダイズするクローンを５クローン得た。
５クローンの大腸菌からプラスミドを精製し、制限酵素
による切断の結果、５クローンとも４．５kbの同じＤＮ
Ａ断片（ｐＡＲＮ１と命名）を含んでいた。ｐＡＲＮ１
中の４．５kbのＤＮＡの制限酵素地図は図１０のｐＡＲ
２５と同一であったため、ｐＡＲＮ１より spaur１^S遺
伝子を含む領域である、HindIII-SacI２．４kbＤＮＡ断
片を調製し、これをpAU-PSベクターへクローニングし、
このプラスミドをpSPAR１と命名した。プラスミド pSPA
R１を用いて、大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換し、形質
転換体をEscherichia coli JM109/pSPAR１と命名、表示
した。該菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に
FERM BP-4485として寄託されている。このオーレオバシ
ジン感受性遺伝子 spaur１^Sを含有するＤＮＡ断片は図
１に示す制限酵素地図を有し、そのＤＮＡ塩基配列は配
列表の配列番号３に示す通りである。この塩基配列より
spaur１^S遺伝子は、配列表の配列番号４に示したアミ
ノ酸配列を有する蛋白質をコードしており、耐性遺伝子
spaur１^Rと比較すると、２４０番目のアミノ酸がグリ
シンからシステインに変化していることが明らかとなっ
た。

【００４３】実施例２．出芽酵母Ｓ．セレビシエ由来の
オーレオバシジン感受性関連遺伝子 scaur１、 scaur２
のクローニング 2-a) Ｓ．セレビシエのオーレオバシジン耐性変異株の
分離オーレオバシジンＡに対して０．３１μｇ／mlで感受性
を示すＳ．セレビシエＤＫＤ５Ｄ（接合型ａ、遺伝子型
leu2-3・112 、 trp１、 his３）を Schizo.ポンベの場
合と同様の方法によりＥＭＳで変異処理し、５μｇ／ml
又は１．５μｇ／mlオーレオバシジＡを含む完全栄養培
地ＹＰＤ培地（１％酵母エキス、２％ポリペプトン、２
％グルコース）の寒天プレート上で耐性変異株を単離し
た。数回の突然変異誘発により、３４クローンの変異株
を得た。これらは２５μｇ／mlのオーレオバシジンＡに
対しても耐性を示し、多剤耐性変異ではなく、オーレオ
バシジンに特異的な耐性であると推定される。

【００４４】2-b) 遺伝学的解析前述の Schizo.ポンベの場合と同様に、四分子分析、相
補性試験による遺伝学的解析をした結果、２種類の遺伝
子に分類することができた。これらのオーレオバシジン
感受性関連遺伝子を scaur１、 scaur２と命名し、耐性
変異株より単離した耐性遺伝子をそれぞれ scaur１^R、
scaur２^Rと表し、感受性野生株より単離した感受性遺
伝子をそれぞれ scaur１^S、 scaur２^Sと表す。Ｒ９４
Ａ株等は、優性変異である遺伝子（ scaur１^R）を有し
ていた。更に、scaur１遺伝子は第１１染色体の met14
遺伝子近傍に位置することが明らかとなった。

【００４５】2-c) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
１^Rを有するオーレオバシジン耐性株のゲノムライブラ
リーの作製オーレオバシジン耐性株Ｒ９４ＡからゲノムＤＮＡを前
記のＰ．フィリップセンらの方法により抽出、精製し
た。精製したゲノムＤＮＡ（８μｇ）を制限酵素HindII
I ５ユニットで３７℃、１０分間処理による部分分解
後、フェノール／クロロホルムにより除蛋白し、エタノ
ール沈殿し、部分分解ＤＮＡを得た。このＤＮＡを０．
８％アガロースゲル電気泳動にかけ、３〜１５kbp 領域
のＤＮＡを抽出、精製した。このＤＮＡとHindIII で完
全分解した酵母−大腸菌シャトルベクターｐＷＨ５（２
μｇ）をＤＮＡライゲーションキットにより連結させた
後、大腸菌ＨＢ１０１へ形質転換し、ゲノムライブラリ
ーを作製した。ゲノムライブラリーを含有させた大腸菌
をアンピシリンとテトラサイクリンを含むＬＢ培地（５
０ml）中で３７℃、一夜培養後、大腸菌からプラスミド
を回収、精製した。

【００４６】2-d) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
１^Rの発現及びクローニング上記のＲ９４Ａ株のゲノムライブラリーをＳ．セレビシ
エＳＨ３３２８（接合型α、遺伝子型 ura3-52、his4、
thr4、leu2-3・112 ）へＲ．Ｈ．シースル（Ｒ．Ｈ．Sc
hiestl) らの方法〔カレントジェネチィクス（Curren
t Genetics) 、第１６巻、第３３９〜３４６頁（１９８
９）〕により形質転換した。形質転換した細胞を２５μ
ｇ／mlウラシル、３５μｇ／mlヒスチジン、５００μｇ
／mlスレオニンを含む最少培地ＳＤプレート（０．６７
％アミノ酸不含酵母ニトロゲンベース、２％グルコー
ス、２％寒天）へ蒔いた。３０℃、３〜４日間培養後、
生じたコロニーを１．５μｇ／mlのオーレオバシジンＡ
入りＹＰＤ寒天プレートへレプリカした。生じたコロニ
ーを液体ＹＰＤ培地５mlへ植菌し、３０℃、２日間培養
後、増殖した細胞からプラスミドＤＮＡを前記のＩ．ハ
ーガンらの方法により回収した。このプラスミドを再
度、酵母へ形質転換し、形質転換体がオーレオバシジン
耐性を獲得していることを確認した。このプラスミドＤ
ＮＡは３．５kbのＤＮＡを含んでおり pWTCR３と命名し
た。 HindIIIによるＤＮＡ断片２．０kbと１．５kbはそ
れぞれ単独ではオーレオバシジン耐性活性がないため、
３．５kb中に遺伝子があると推定される。このオーレオ
バシジン耐性遺伝子 scaur１^Rを含有する３．５kbのＤ
ＮＡ断片の制限酵素地図を図２に示す。１．５kbと２kb
の HindIII断片をそれぞれpUC118へクローニングし、Ｄ
ＮＡ塩基配列を決定した（配列表の配列番号５）。この
塩基配列より scaur１^R遺伝子は配列表の配列番号６に
示したアミノ酸配列を有する蛋白質をコードしているこ
とが明らかとなった。

【００４７】2-e) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
１^Rに対応するオーレオバシジン感受性遺伝子 scaur１
^Sのクローニング親株であるＳ．セレビシエＤＫＤ５Ｄから実施例２−c)
の方法によりゲノムＤＮＡを抽出、精製し、 HindIIIに
よる部分分解後、ｐＷＨ５につなぎ、大腸菌ＨＢ１０１
へ形質転換し、正常細胞のゲノムライブラリーを作製し
た。このライブラリーＤＮＡを含む大腸菌ストックをア
ンピシリンとテトラサイクリンを含むＬＢ寒天培地上へ
蒔き、３７℃で一夜培養した。生じたコロニーをナイロ
ンメンブレン（Hybond-N）へ移し、コロニーハイブリダ
イゼーションを行った。プローブとして、実施例２−d)
で得られた３．５kbのＤＮＡ断片をランダムプライマー
ＤＮＡラベリングキット（宝酒造社製）を用い、〔α−
³²Ｐ〕ｄＣＴＰで標識したものを用いた。２×１０⁴個
のコロニーをスクリーニングした結果、プローブとハイ
ブリダイズするクローンを７クローン得た。７クローン
の大腸菌からプラスミドを精製し、制限酵素による切断
の結果、１クローンが３．５kbのＤＮＡ断片を含んでい
た。このＤＮＡ断片は図２の制限酵素地図を有してお
り、 scaur１^S遺伝子を含有していると判断された。こ
のＤＮＡ断片を含有するプラスミドをpSCAR1と命名し、
このプラスミドを組込んだ大腸菌ＨＢ１０１をEscheric
hia coliHB101/pSCAR１と命名、表示した。該菌株は、
工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM BP-4483とし
て寄託されている。 pSCAR１を HindIIIにより部分分解
し、得られた３．５kbのＤＮＡ断片をpUC118へサブクロ
ーニング後、塩基配列を決定した（配列表の配列番号
７）。耐性遺伝子と比較すると、８５２番目の塩基がＴ
からＡに置換され、この置換によりアミノ酸はフェニル
アラニンからチロシンに変換されていた（配列表の配列
番号８）。

【００４８】2-f) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
２^R遺伝子を有するオーレオバシジン耐性株のゲノムラ
イブラリーの作製オーレオバシジン耐性株 L 22-8B株から実施例２−c)と
同様の方法によりゲノムライブラリーを作製した。ゲノ
ムライブラリーを含有させた大腸菌をアンピシリンとテ
トラサイクリンを含むＬＢ培地（５０ml）中で３７℃、
一夜培養後、大腸菌からプラスミドを回収、精製した。

【００４９】2-g) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
２^Rの発現及びクローニング上記の L 22-8B株のゲノムライブラリー由来のプラスミ
ドを前記のＲ．Ｈ．シースルらの方法によりＳ．セレビ
シエＳＨ３３２８へ形質転換した。形質転換株の中か
ら、オーレオバシジン耐性株を単離した。この耐性株よ
り scaur２^R遺伝子を含有するプラスミドＤＮＡを前記
のＩ．ハーガンらの方法により回収した。このプラスミ
ドを再度、酵母へ形質転換し、形質転換体がオーレオバ
シジン耐性を獲得していることを確認した。このプラス
ミドは８．５kbのＤＮＡを有しており、pSCAR2と命名し
た。このオーレオバシジン耐性遺伝子 scaur２^Rを含有
する、８．５kbのＤＮＡ断片の制限酵素地図を図３に示
す。プラスミド pSCAR２を導入した大腸菌ＨＢ１０１を
Escherichia coli HB101/pSCAR２と命名、表示した。該
菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM BP-
4484として寄託されている。BamHＩ、EcoRＩ、HindIII
、 PstＩにより種々の大きさのＤＮＡ断片を調製し、
ｐＷＨ５ベクターへクローニングした。これらのプラス
ミドを前記のＲ．Ｈ．シースルらの方法によりＳ．セレ
ビシエＤＫＤ５Ｄへ形質転換し、オーレオバシジン耐性
を獲得するかどうかを検討した。その結果、作製したＤ
ＮＡ断片の形質転換体はすべて耐性でなかった。すなわ
ち、全長がオーレオバシジン耐性に必要であることが明
らかとなった。

【００５０】2-h) オーレオバシジン耐性遺伝子 scaur
２^R遺伝子に対応するオーレオバシジン感受性遺伝子 s
caur２^S断片の単離Ｓ．セレビシエＤＫＤ５Ｄから作製した、実施例２−e)
の正常細胞のゲノムライブラリーＤＮＡを含む大腸菌ス
トックをアンピシリンとテトラサイクリンを含むＬＢ寒
天培地上へ蒔き、３７℃一夜培養した。生じたコロニー
をナイロンメンブレン（Hybond-N) へ移し、コロニーハ
イブリダイゼーションを行った。プローブとして、実施
例２−g)で得られた８．５kbのＤＮＡ断片をランダムプ
ライマーＤＮＡラベリングキットを用い、〔α−³²Ｐ〕
ｄＣＴＰで標識したものを用いた。２×１０⁴個のコロ
ニーのスクリーニングの結果、プローブとハイブリダイ
ズする数クローンを得た。これらのクローンは４．６kb
のＤＮＡ断片を含むものと３．９kbのＤＮＡ断片を含む
クローンであった。それらのＤＮＡ断片の制限酵素地図
より、これらは図３で表される scaur２^S遺伝子の一部
であることが明らかとなった。両ＤＮＡ断片をライゲー
ションし、図３で表される scaur２^S断片を得た。得ら
れた８．５kbのＤＮＡ断片をpUC118へサブクローニング
後ＤＮＡ塩基配列を決定した（配列表の配列番号９）。
配列表の配列番号９の塩基配列より配列表の配列番号１
０のアミノ酸配列が推定された。

【００５１】実施例３． spaur１^S、 scaur１^S遺伝子
の遺伝子破壊実験 3-a) spaur１^S遺伝子の遺伝子破壊実験オーレオバシジン感受性関連遺伝子 spaur１^Sが細胞増
殖に必須であるかどうかを遺伝子破壊実験により確認す
るために、まず、実施例１−d)において作製したプラス
ミドpUARS2R をBalIとEcoT22I で切断し、２４０bpのＤ
ＮＡ断片を除いた後、ＤＮＡブランチングキット（宝酒
造社製）により平滑末端化した。このＤＮＡと、pUC8ur
a4プラスミド〔モレキュラーアンドゼネラルジェ
ネチィクス（Mol. Gen. Genet.) 、第２１５巻、第８１
〜８６頁（１９８８）〕から HindIII切断により切り出
した後、平滑末端化した１．７kbのura4遺伝子を含むＤ
ＮＡをライゲーションすることにより、プラスミドpUAR
S2RBT22::ura4-1 、及びこれと反対方向にura4ＤＮＡが
挿入したpUARS2RBT22::ura4-6 を得た。両プラスミドを
ＳａｃＩと HindIII切断によりベクターpUC118から切り
出し、 ura４を含むspaur１^SＤＮＡ断片であるARS2RBT
22::ura4-1 とARS2RBT22::ura4-6 （図４）を精製し
た。精製ＤＮＡ断片を二倍体細胞 Schizo.ポンベＣ５２
５（ｈ⁹⁰／ｈ⁹⁰、ura4-D18/ura4-D18 、leu1/leu1 、ad
e6-M210/ade6-M216)に前記のオカザキらの方法により形
質転換した後、ロイシンを含むＳＤ寒天プレートで形質
転換体を選択した。得られた形質転換体は染色体上の一
対の spaur１^S遺伝子のうち一方が、導入された破壊遺
伝子ARS2RBT22::ura4-1 又はARS2RBT22::ura4-6 と遺伝
子組換えにより置き換わっている。この細胞を胞子形成
培地ＭＥＡ上で胞子形成後、四分子分析を行った結果、
４個の子のう胞子のうち、２個はコロニーを形成する
が、残りの２個はコロニーを形成しなかった。すなわ
ち、正常 spaur１^S遺伝子が導入ＤＮＡと置き換わった
胞子は増殖しないことから、 spaur１^S遺伝子は生育に
必須であることが明らかとなった。

【００５２】3-b) scaur１^S遺伝子の遺伝子破壊実験実施例２−e)で作製したプラスミド pSCAR１を HindIII
で部分分解し、図２で示される３．５kbＤＮＡ断片を得
た。このＤＮＡ断片をpUC119の HindIII部位へクローニ
ングし、 pSCAR３と命名した。 pSCAR３を StuＩとEcoT
22I より切断し０．３kbのＤＮＡ断片を除いたＤＮＡと
pYEUra3プラスミド（クローンテック社製）のHindIII
とEcoRI による切断により得られたＵＲＡ３遺伝子のＤ
ＮＡ断片（１．１kb）を平滑末端化した後、連結し、pU
SCAR3.ST22::URA3⁺、及びＵＲＡ３遺伝子が逆方向に挿
入したpUSCAR3.ST22::URA3A を得た。両プラスミドをEc
oRI により scaur１^S遺伝子内のEcoRI 部位とpUC119ベ
クターの EcoRI部位により切り出し、ＵＲＡ３を含む s
caur１^SＤＮＡ断片であるSCAR3.ST22::URA3⁺とSCAR3.
ST22::URA3A （図５）を精製した。精製ＤＮＡ断片を二
倍体細胞Ｓ．セレビシエＡＯＤ１（接合型ａ／α、遺伝
子型ura3-52/ura3-52 、leu2-3・112/leu2-3・112 、tr
p1/TRP1 、thr4/THR4 、his4/HIS4)に前記のＲ．Ｈ．シ
ースルらの方法により形質転換した後、ロイシンを含む
ＳＤ寒天プレートで形質転換体を選択した。得られた形
質転換体を胞子形成用ＳＰ培地（１％酢酸カリウム、２
％寒天）上で胞子形成後、四分子分析を行った。その結
果、４個の子のう胞子のうち、２個は発芽し、コロニー
を形成するが、残りの２個は発芽しなかった。すなわ
ち、 scaur１^S遺伝子が導入ＤＮＡ（破壊遺伝子）と置
き替わった胞子は増殖しないと推定される。上記の実験
より scaur１^S遺伝子は生育に必須であった。

【００５３】実施例４．ノーザンハイブリダイゼーショ
ンによるオーレオバシジン感受性関連遺伝子 spaur１の
発現の有無の測定 Schizo.ポンベの正常細胞又は耐性菌からＲ．ジェンセ
ンらの方法〔プロシーディングズオブザナショナ
ルアカデミーオブサイエンシーズオブザＵＳ
Ａ（Proc. Natl. Acad. Sci.ＵＳＡ）、第８０巻、第３
０３５〜３０３９頁（１９８３）〕により全ＲＮＡを抽
出、精製した。更にオリゴテックス−ｄＴ３０（宝酒造
社製）によりポリ（Ａ）⁺ＲＮＡのみを精製した。精製
ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡ（２．５μｇ）をホルムアルデヒド
を含む１．２％アガロースゲルでの電気泳動により分離
後、ナイロンメンブレン（Hybond-N) へ移し、固定後、
〔α−³²Ｐ〕ｄＣＴＰで標識された spaur１^R遺伝子の
HindIII-SacI断片（２kb）をプローブとして用いて、ハ
イブリダイゼーションを行った。正常細胞及び耐性菌ど
ちらにも約２kbの同量のバンドが現われた。更に対数増
殖期と増殖定常期、どちらにおいてもその量は変化しな
かった（図１０）。なお、図１０において、レーン１は
Schizo.ポンベの感受性菌の対数増殖期の細胞より、レ
ーン２は耐性菌の対数増殖期の細胞より、レーン３は感
受性菌の定常期の細胞より、更にレーン４は、耐性菌の
定常期の細胞より得られたｍＲＮＡを用い、それぞれの
ｍＲＮＡをホルムアルデヒドを含む１．２％アガロース
ゲル電気泳動を行い、ノーザンハイブリダイゼーション
の結果のオートラジオグラフを示す。

【００５４】実施例５． scaur１^S遺伝子の活性測定 5-a) プラスミドYEpSCARW３（図９）とYEpSCARW１の構
築実施例２−e)で作製したプラスミド pSCAR１を HindIII
により切断し、全ＯＲＦを含む２kbの断片を切り出し
た。該断片を培地中のガラクトースにより発現が誘導さ
れる Ga110プロモーターを持つ酵母用発現プラスミドYE
p52 の HindIII部位へ挿入した。 Ga110プロモーターに
よりscaur1遺伝子が正常に転写される向きに挿入されて
いるプラスミドをYEpSCARW3 と命名し、その構造を図９
に示す。更に、逆向きに挿入されているプラスミドをYE
pSCARW１と命名した。

【００５５】5-b) プラスミドYEpSCARW３とYEpSCARW１
による形質転換実施例３−b)で作製した scaur１^S遺伝子を破壊した二
倍体Ｓ．セレビシエ細胞へプラスミドYEpSCARW３及びYE
pSCARW１をそれぞれ５μｇずつ用いて形質転換した。Ｓ
Ｄ寒天プレート上で形質転換体を選択した。この形質転
換体をＳＰ培地で胞子形成させた後、四分子分析を行っ
た。 YPGal培地（１％酵母エキス、２％ポリペプトン、
２％ガラクトース）を用いて scaur１^S遺伝子の発現を
誘導すると、YEpSCARW３によって形質転換した二倍体細
胞から生じた子のう胞子はすべて発芽したが、YEpSCARW
１によって形質転換した二倍体細胞から生じた子のう胞
子は４個の中で２個は発芽するが、残り２個は発芽しな
かった。すなわち、scaur1^S遺伝子を破壊した細胞に、
新たに scaur１^S遺伝子を含有するYEpSCARW３を導入す
ると正常に戻ったと考えられる。したがって、この sca
ur１^S遺伝子を破壊した細胞を宿主として用いることに
より、他の生物が有する正常 aur１類似遺伝子の活性測
定が可能となる。

【００５６】実施例６．Ｃ．アルビカンスの有する aur
１、 aur２遺伝子（ caaur１、 caaur２）の確認及びク
ローニング 6-a) ＰＣＲ法による aur１遺伝子の検出オーレオバシジン感受性であるＣ．アルビカンスTIMM01
36株より実施例４と同様の方法によりポリ（Ａ）⁺ＲＮ
Ａを抽出、精製した。得られたポリ（Ａ）⁺ＲＮＡ（５
μｇ）を鋳型として、オリゴ（ｄＴ）プライマーを用い
てｃＤＮＡ合成システムプラス（アマシャム社製）に
より二本鎖ｃＤＮＡを合成した。Ｓ．セレビシエと Sch
izo.ポンベのアミノ酸配列における同一アミノ酸配列領
域に対応するＰＣＲ用ミックスプライマーをＤＮＡ合成
機で合成し、精製した。すなわち、 Schizo.ポンベにお
ける配列表の配列番号４の１８４番目から１９２番目
（Ｓ．セレビシエにおける配列表の配列番号８の１８４
番目から１９２番目）のアミノ酸に対応する配列表の配
列番号１１のプライマーと２８９番目から２９８番目
（Ｓ．セレビシエにおける配列番号８の２８９番目から
２９８番目）のアミノ酸に対応する配列表の配列番号１
２のプライマーを用いた。両プライマー及び鋳型として
上記のｃＤＮＡを用いてＰＣＲを行った。ＰＣＲの条件
は９４℃（３０秒）、４８℃（１分）、７２℃（２分）
を１サイクルとし、２５サイクル増幅した。その結果、
Ｓ．セレビシエ、 Schizo.ポンベとほぼ同じ長さのＤＮ
Ａ（約３５０bp）が増幅された（図６）。なお、図６の
レーン１はＣ．アルビカンスのｃＤＮＡを、レーン２は
Ｓ．セレビシエのｃＤＮＡを、レーン３は Schizo.ポン
ベのｃＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、そのＰＣＲ産
物についてアガロースゲル電気泳動を行い、臭化エチジ
ウム染色した結果を示すパターン図である。

【００５７】6-b) Ｃ．アルビカンスの aur１遺伝子
（ caaur１）のクローニング (i) Ｃ．アルビカンスTIMM0136株より実施例１−c)と
同様の方法によりゲノムＤＮＡを抽出、精製し、HindII
I による部分分解後、HindIII で完全分解したTraplex1
19ベクターに連結し、大腸菌ＨＢ１０１に形質転換し、
Ｃ．アルビカンスのゲノムライブラリーを作製した。こ
のライブラリーから、実施例６−ａ）に記載のＰＣＲに
より増幅して得られたＣ．アルビカンス由来のＤＮＡ断
片をランダムプライマーＤＮＡラベリングキット（宝酒
造社製）を用いて〔α−³²Ｐ〕ｄＣＴＰで標識したもの
をプローブとして、Ｃ．アルビカンスの有する aur１遺
伝子を含有する４．５kbのＤＮＡ断片をクローニングし
た。このＤＮＡ断片は図７に示す制限酵素地図を有して
おり、そのＤＮＡ塩基配列は配列表の配列番号１３の通
りである。この塩基配列より caaur１遺伝子は配列表の
配列番号１４に示したアミノ酸配列を有する蛋白質をコ
ードしており、 scaur１^S蛋白質と比較すると５３％の
高い相同性があった。この caaur１遺伝子を組込んだTr
aplex119ベクターは pCAAR１と命名し、該ベクターで形
質転換した大腸菌ＨＢ１０１をEscherichia coli HB101
/pCAAR１と命名、表示した。該菌株は、工業技術院生命
工学工業技術研究所にFERM BP-4482として寄託されてい
る。次に pCAAR１を HindIII処理し、４．５kbの caaur
１を調製し、更に HindIIIで完全分解したpTV118に組込
み caaur１の発現用ベクターを作製し、該ベクターをpT
CAAR１と命名した。 (ii) Ｃ．アルビカンスTIMM 1768 株〔ジャーナルオ
ブアンチバイオチクス、第４６巻、第1414〜1420頁
（1993）〕より実施例１−c)と同様の方法によりゲノム
ＤＮＡを抽出、精製し、 HindIIIによる部分分解後、 H
indIIIで完全分解したpUC 118 ベクターに連結し、大腸
菌ＨＢ１０１に形質転換し、Ｃ．アルビカンスTIMM 176
8 株のゲノムライブラリーを作製した。このライブラリ
ーから、実施例６−b)−(i) に記載のプローブと同一の
プローブを用いて、コロニーハイブリダイゼーション法
により、Ｃ．アルビカンスTIMM 1768 株の有するaur １
遺伝子を含有する４．５kbのＤＮＡ断片をクローニング
した。このＤＮＡ断片は図７に示す制限酵素地図と同一
の制限酵素地図を有していた。次にこのＤＮＡ断片のＯ
ＲＦを含む一部のＤＮＡ塩基配列を決定した。そのＤＮ
Ａ塩基配列は配列表の配列番号２１のとおりである。こ
の塩基配列より、この遺伝子は配列表の配列番号２２に
示したアミノ酸配列を有する蛋白質をコードしている。
このＣ．アルビカンスTIMM 1768 株の caaur１蛋白質の
アミノ酸配列をＣ．アルビカンスTIMM 0136 株の caaur
１蛋白質のアミノ酸配列と比較すると、Ｃ．アルビカン
スTIMM 0136 株の caaur１蛋白質のアミノ酸配列（配列
番号１４）の１〜３８１番、３８３〜４２３番、４２５
〜４７１番のそれぞれのアミノ酸配列は、Ｃ．アルビカ
ンスTIMM 1768 株の caaur１蛋白質のアミノ酸配列（配
列番号２２）の２〜３８２番、３８４〜４２４番、４２
６〜４７２番のそれぞれのアミノ酸配列と完全に一致し
ていたが、配列番号１４のアミノ酸番号３８２番、及び
４２４番のセリンが配列番号２２のアミノ酸番号３８３
番、及び４２５番ではそれぞれプロリンに置換されてい
た。

【００５８】6-c) Ｃ．アルビカンスの aur２遺伝子
（ caaur２）のクローニングＣ．アルビカンスTIMM0136株のゲノムＤＮＡを BamＨＩ
により分解後、 BamＨＩにより完全分解したpTV118ベク
ターに連結し、大腸菌ＨＢ１０１に形質転換し、Ｃ．ア
ルビカンスのゲノムライブラリーを作製した。一方、実
施例２−ｈ）で得られた scaur２^S遺伝子を含有するＤ
ＮＡ断片をHindIII と PstＩにより切断し、１．２kbの
ＤＮＡ断片を得た。このＤＮＡ断片をランダムプライマ
ーＤＮＡラベリングキットを用いて〔α−³²Ｐ〕ｄＣＴ
Ｐで標識し、これをプローブとして、上記のＣ．アルビ
カンスの BamＨＩ分解により調製したゲノムライブラリ
ーをコロニーハイブリダイゼーションによりスクリーニ
ングした。その結果、８．３kbのＤＮＡ断片を含有する
プラスミドを得た。このＤＮＡ断片の BamＨＩ部位より
上流のＤＮＡ配列の一部を決定した（配列表の配列番号
１５）。その配列から推定されるアミノ酸配列は、配列
表の配列番号１６の通りであり、 scaur２遺伝子のアミ
ノ酸配列（配列番号１０）の１２３０番目から１３０９
番目のアミノ酸配列に対応し、７７％の高い相同性を示
した。このＤＮＡ断片はＣ末端の一部が欠けていたた
め、更に、このＤＮＡ断片をプローブとして、実施例６
−ｂ）で作製したゲノムライブラリーのスクリーニング
を行い、Ｃ末端部分を含有する６．５kbのＤＮＡ断片を
得た。以上の結果より明らかになった、 caaur２遺伝子
を含有するＤＮＡ領域の制限酵素地図を図８に示す。上
記の８．３kbの caaur２遺伝子の断片を組込んだpTV118
ベクターは pCAAR２Ｎと命名し、該ベクターで形質転換
した大腸菌ＨＢ１０１をEscherichia coli HB101/pCAAR
２Ｎと命名、表示した。該菌株は、工業技術院生命工学
工業技術研究所にFERM BP-4481として寄託されている。

【００５９】実施例７． scaur１^S遺伝子のコードする
蛋白質に対する抗体の作製、並びに同抗体を用いたＳ．
セレビシエ細胞の染色及び該蛋白質の検出 7-a) 抗体の作製配列表の配列番号８のアミノ酸配列の中で１０３番目か
ら１１３番目に相当するペプチドのＮ末端にシステイン
を付加したＳＣＡＲ１−１（配列表の配列番号１９）と
３３１番目から３４８番目に相当するペプチドのＮ末端
にシステインを付加したＳＣＡＲ１−２（配列表の配列
番号２０）をＦｍｏｃ固相合成法で合成し、逆相ＨＰＬ
Ｃにより精製し、それぞれ約１０mgを得た。これらの合
成ペプチドのＮ末端のシステインにキャリア蛋白として
ＫＬＨを結合し、この結合物を抗原としてウサギに免疫
し、抗血清を得た。更に、この抗血清を、抗原として用
いた合成ペプチドをアガロースゲルに結合して作製した
アフィニティーカラムにより精製し、合成ペプチドに対
する特異的ポリクローナル抗体を作製した。

【００６０】7-b) 抗体によるＳ．セレビシエ細胞の染
色Ｓ．セレビシエＡＴＣＣ9763株をＹＮＢＧ培地〔０．６
７％酵母ニトロゲンベース（ディフコ社製）、２％グル
コース〕で培養し、３×１０⁷個／mlの菌液を得た。こ
の菌液１mlに１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．１１
ml、３７％ホルムアルデヒド０．１７mlを添加した。室
温で１時間ゆっくりかくはん後、遠心により集菌し、得
られた菌体をザイモリエース２０Ｔ（２０μｇ／ml）を
含有するＳＳ緩衝液（１Ｍソルビトール、０．２％β−
メルカプトエタノール、０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．
５）２０mlに懸濁し、３０℃、１時間処理した。その
後、集菌、ＳＳ緩衝液で洗浄、０．１％トライトンＸ１
００入りＳＳ緩衝液１mlに細胞を懸濁し、１０分静置し
た。この菌液をあらかじめポリリジンでコートしたスラ
イドグラス上にのせ、１０分間静置した。次に、１％ア
ルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ液を滴下した。室温で
１５分間放置後、余分な液を除去し、次に抗ＳＣＡＲ１
−１抗体（０．０２mg／ml）を入れたＢＳＡ入りＰＢＳ
液を滴下した。室温で６０分間放置後、ＢＳＡ入りＰＢ
Ｓ液で３回洗浄、ＦＩＴＣ標識した抗ウサギＩｇＧ抗体
（抗体濃度０．０２mg／ml）を重層し、室温で１時間静
置した。ＢＳＡ入りＰＢＳ液で洗浄後、少量のマウンテ
ン液〔０．１ｇｐ−フェニレンジアミンを１０mlのＣＢ
Ｓ（１５０ｍＭＮａＣｌ、５０ｍＭＣＨＥＳｐＨ
９．５）に溶解、１０ＮＮａＯＨでｐＨ９．０に調
整、更に９０mlのグリセロールを加えた液〕を重層し、
カバーグラスをかけ、標本とした。この標本を蛍光顕微
鏡で観察し、 scaur１蛋白質の細胞内分布を調べたとこ
ろ、該蛋白質が、細胞全体に分布していることが明らか
となった。

【００６１】7-c) 抗体による scaur１遺伝子のコード
する蛋白質の検出実施例５−ａ）で作製したプラスミドYEpSCARW３を正常
の一倍体Ｓ．セレビシエSH3328に導入し、形質転換体を
得た。この形質転換体をYPGal 培地又はＹＰＤ培地で培
養後、菌体を遠心により集菌した。得られた菌体を緩衝
液（１％トライトンＸ１００、１％ＳＤＳ、２０ｍＭ
トリス−ＨＣｌｐＨ７．９、１０ｍＭＥＤＴＡ、１ｍ
ＭＤＴＴ、１ｍＭＰＭＳＦ）に懸濁し、更に、ガラ
スビーズを加え、菌体を破砕した。これにＳＤＳローデ
ィング液を加え、９５℃、５分間加熱処理、蛋白質を変
性させた。遠心後、得られた上清の一部をＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥにかけ、分離、蛋白質をイモビロン膜（ミリポア社
製）へ転写した。このイモビロン膜をブロックエース
（大日本製薬社製）により処理後、一次抗体として７−
ａ）で調製した抗ＳＣＡＲ１−２抗体を反応させ、洗浄
後、二次抗体としてパーオキシダーゼ標識した抗ウサギ
ＩｇＧ抗体を反応させ、十分に洗浄した。次に、ジアミ
ノベンチジンにより発色させ、 scaur１蛋白質のバンド
を検出した。その結果を図１１に示す。図１１におい
て、レーン１はＹＰＤ培地で培養した菌体より調製した
蛋白質、レーン２はYPGal 培地で培養した菌体より調製
した蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、抗ＳＣＡＲ１−２抗
体により検出した結果であり、誘導をかけたYPGal 培地
の菌体において特異的バンドが表れている。

【００６２】

【発明の効果】本発明により、オーレオバシジン感受性
に関連する新規蛋白質及び該蛋白質をコードする遺伝
子、オーレオバシジン感受性関連遺伝子が提供された。
これらは、該遺伝子を有する生物が原因で起こる、真菌
症を始めとする疾患の診断、治療に有用である。更に、
本発明により、該遺伝子のアンチセンスＤＮＡ及びアン
チセンスＲＮＡ、該遺伝子にハイブリダイズ可能な核酸
プローブ、その核酸プローブを用いた該遺伝子の検出方
法、該遺伝子を導入させた形質転換体を用いたオーレオ
バシジン感受性に関連する蛋白質の製造方法、該蛋白質
の抗体、その抗体を用いた該蛋白質の検出方法等が提供
された。これらも真菌症等の疾患の診断、治療に有用で
ある。

【００６３】

【配列表】

【００６４】配列番号：1 配列の長さ：2385 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： AAGCTTTTTT GCCTCTGCAA AAGTTCCTTT CTCGAATTGG TTTTTTGAGG AAAAGCAAGT 60 TAATAAACTA ATTATATTAT ATATAATTAG CAATTTTATA AAAAAAATAA AAAAATAGCC 120 CTGATTGCTG GCAACTGTGA GCTGAACATT GGTTAATCGG TCCATCTTTT TTTAAATATT 180 TTACATCGCT ACTTTTAAGT GCTTGACACT TGCATTTAAT AGCTACTTTC TTTCCTTCAT 240 AAAAATTCCT TTTTTTTCCT TTAGTTTTCC GGTTAATTCC TTACGAAATT TTTTTCGTAC 300 GCTTCCCTTT TTTACTCTGA TAATTCTTTG AAGCAATGTC TGCTCTTTCG ACCTTAAAAA 360 AGCGCCTTGC TGCGTGTAAC CGAGCATCCC AATACAAGTT GGAAACAAGC TTAAACCCTA 420 TGCCTACATT TCGTTTGCTA CGCAATACGA AATGGTCATG GACACATTTG CAATATGTGT 480 TTCTAGCAGG TAATTTGATT TTTGCTTGTA TTGTCATTGA ATCTCCTGGA TTCTGGGGGA 540 AATTTGGCAT TGCCTGTCTT TTGGCCATTG CGTTGACCGT TCCTTTAACA CGCCAAATTT 600 TTTTTCCTGC CATTGTTATC ATCACCTGGG CAATTTTATT TTACTCTTGT AGGTTTATTC 660 CAGAACGCTG GCGTCCACCC ATATGGGTTC GTGTTTTACC CACACTTGAA AATATTCTTT 720 ATGGCTCTAA TCTTTCTAGT CTTCTCTCGA AAACCACGCA TAGCATCCTT GATATTTTGG 780 CCTGGGTTCC ATATGGAGTC ATGCATTATT CGGCTCCTTT TATCATTTCA TTTATTCTTT 840 TCATCTTTGC ACCTCCTGGA ACTCTTCCAG TTTGGGCTCG AACTTTTGGT TATATGAATT 900 TATTTGGTGT TCTTATCCAA ATGGCTTTCC CCTGTTCTCC TCCTTGGTAT GAAAATATGT 960 ATGGTTTAGA ACCTGCCACG TATGCAGTAC GTGGCTCTCC TGGTGGATTG GCCCGTATTG 1020 ATGCTCTCTT CGGCACTAGC ATTTACACTG ATTGTTTTTC TAACTCTCCG GTTGTTTTTG 1080 GTGCCTTTCC ATCTCTTCAC GCTGGATGGG CCATGCTGGA AGCACTTTTC CTTTCGCATG 1140 TGTTTCCTCG ATACCGCTTC TGCTTTTATG GATATGTTCT ATGGCTTTGC TGGTGTACTA 1200 TGTACCTTAC CCACCACTAC TTTGTAGATT TGGTCGGCGG TATGTGTTTA GCTATTATAT 1260 GCTTCGTTTT TGCTCAAAAG CTACGCCTCC CACAGTTGCA AACTGGTAAA ATCCTTCGTT 1320 GGGAATACGA GTTTGTTATC CACGGTCATG GTCTTTCCGA AAAAACCAGC AACTCCTTGG 1380 CTCGTACCGG CAGCCCATAC TTACTTGGAA GGGATTCTTT TACTCAAAAC CCTAATGCAG 1440 TAGCCTTCAT GAGTGGTCTT AACAATATGG AACTTGCTAA CACCGATCAT GAATGGTCCG 1500 TGGGTTCATC ATCACCTGAG CCGTTACCTA GTCCTGCTGC TGATTTGATT GATCGTCCTG 1560 CCAGTACCAC TTCCTCCATC TTTGATGCAA GTCATCTTCC TTAAATCAAC GTGCTTTAAG 1620 AATATATTTC CAAAAGCTAC ATGATACATT GACTAGAATC GGTTTGATTC ATAGTGGTAT 1680 TGGAATGATG TTGTTCATTG TGTTTTTTAA CTGTTAATCT GACATCCATT GAGTCATTCT 1740 TTACAATTTG TAAAATTAAT TTGTATCACT AATTTTGAAG GAAGCTATTT TGGTATTAAT 1800 ACCGCTTTTG GTCTCCACTT CCTTTTCGAA ACTCTTAACA GCGATTAGGC CGGGTATCTT 1860 CCAGTGTGAT GTATAGGTAT TTGTCGTTTT TTTATCATTT CCGTTAATAA AGAACTCTTT 1920 TATCCAGCTT CTTACACTGT CAACTGTTGT GAAAGGAACA CATTTAGAAT TTCATTTTCC 1980 TTATTTGTTG TGATTTAAAT CGTTTGACAT AATTTTAAAT TTGGTTTGAA ATGTGTGTGA 2040 GAAGGCTTGT TTTATTCATT TAGTTTATTG CTTGTTTGCA CGAAAATCCA GAACGGAGCA 2100 TTAATGTAAT CCTTTTTTAT TCTGTAAAGC GTTTTTATAC AAATGTTGGT TATACGTTTC 2160 TAAAATAAGA ATATTGTTAT AATAATATAG TTTTTTCTAT CATTTGTTAC ACACACTAAA 2220 GAGACATTAA GGATAAGCAA ATGTGTTAAA ATGATAATAT ATTTTGGAAA CATTTATAAA 2280 GAAATTAAGC AGCTTTGACT AACTACATTT TTGTTTTTTT CCTAAGCAAA ACTGTATAGT 2340 TATACACGCG AGCTGTATTC ACTTCCATTG TAGTGACTTG AGCTC 2385

【００６５】配列番号：2 配列の長さ：422 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ser Ala Leu Ser Thr Leu Lys Lys Arg Leu Ala Ala Cys Asn 1 5 10 15 Arg Ala Ser Gln Tyr Lys Leu Glu Thr Ser Leu Asn Pro Met Pro 20 25 30 Thr Phe Arg Leu Leu Arg Asn Thr Lys Trp Ser Trp Thr His Leu 35 40 45 Gln Tyr Val Phe Leu Ala Gly Asn Leu Ile Phe Ala Cys Ile Val 50 55 60 Ile Glu Ser Pro Gly Phe Trp Gly Lys Phe Gly Ile Ala Cys Leu 65 70 75 Leu Ala Ile Ala Leu Thr Val Pro Leu Thr Arg Gln Ile Phe Phe 80 85 90 Pro Ala Ile Val Ile Ile Thr Trp Ala Ile Leu Phe Tyr Ser Cys 95 100 105 Arg Phe Ile Pro Glu Arg Trp Arg Pro Pro Ile Trp Val Arg Val 110 115 120 Leu Pro Thr Leu Glu Asn Ile Leu Tyr Gly Ser Asn Leu Ser Ser 125 130 135 Leu Leu Ser Lys Thr Thr His Ser Ile Leu Asp Ile Leu Ala Trp 140 145 150 Val Pro Tyr Gly Val Met His Tyr Ser Ala Pro Phe Ile Ile Ser 155 160 165 Phe Ile Leu Phe Ile Phe Ala Pro Pro Gly Thr Leu Pro Val Trp 170 175 180 Ala Arg Thr Phe Gly Tyr Met Asn Leu Phe Gly Val Leu Ile Gln 185 190 195 Met Ala Phe Pro Cys Ser Pro Pro Trp Tyr Glu Asn Met Tyr Gly 200 205 210 Leu Glu Pro Ala Thr Tyr Ala Val Arg Gly Ser Pro Gly Gly Leu 215 220 225 Ala Arg Ile Asp Ala Leu Phe Gly Thr Ser Ile Tyr Thr Asp Cys 230 235 240 Phe Ser Asn Ser Pro Val Val Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His 245 250 255 Ala Gly Trp Ala Met Leu Glu Ala Leu Phe Leu Ser His Val Phe 260 265 270 Pro Arg Tyr Arg Phe Cys Phe Tyr Gly Tyr Val Leu Trp Leu Cys 275 280 285 Trp Cys Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Val 290 295 300 Gly Gly Met Cys Leu Ala Ile Ile Cys Phe Val Phe Ala Gln Lys 305 310 315 Leu Arg Leu Pro Gln Leu Gln Thr Gly Lys Ile Leu Arg Trp Glu 320 325 330 Tyr Glu Phe Val Ile His Gly His Gly Leu Ser Glu Lys Thr Ser 335 340 345 Asn Ser Leu Ala Arg Thr Gly Ser Pro Tyr Leu Leu Gly Arg Asp 350 355 360 Ser Phe Thr Gln Asn Pro Asn Ala Val Ala Phe Met Ser Gly Leu 365 370 375 Asn Asn Met Glu Leu Ala Asn Thr Asp His Glu Trp Ser Val Gly 380 385 390 Ser Ser Ser Pro Glu Pro Leu Pro Ser Pro Ala Ala Asp Leu Ile 395 400 405 Asp Arg Pro Ala Ser Thr Thr Ser Ser Ile Phe Asp Ala Ser His 410 415 420 Leu Pro

【００６６】配列番号：3 配列の長さ：2385 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： AAGCTTTTTT GCCTCTGCAA AAGTTCCTTT CTCGAATTGG TTTTTTGAGG AAAAGCAAGT 60 TAATAAACTA ATTATATTAT ATATAATTAG CAATTTTATA AAAAAAATAA AAAAATAGCC 120 CTGATTGCTG GCAACTGTGA GCTGAACATT GGTTAATCGG TCCATCTTTT TTTAAATATT 180 TTACATCGCT ACTTTTAAGT GCTTGACACT TGCATTTAAT AGCTACTTTC TTTCCTTCAT 240 AAAAATTCCT TTTTTTTCCT TTAGTTTTCC GGTTAATTCC TTACGAAATT TTTTTCGTAC 300 GCTTCCCTTT TTTACTCTGA TAATTCTTTG AAGCAATGTC TGCTCTTTCG ACCTTAAAAA 360 AGCGCCTTGC TGCGTGTAAC CGAGCATCCC AATACAAGTT GGAAACAAGC TTAAACCCTA 420 TGCCTACATT TCGTTTGCTA CGCAATACGA AATGGTCATG GACACATTTG CAATATGTGT 480 TTCTAGCAGG TAATTTGATT TTTGCTTGTA TTGTCATTGA ATCTCCTGGA TTCTGGGGGA 540 AATTTGGCAT TGCCTGTCTT TTGGCCATTG CGTTGACCGT TCCTTTAACA CGCCAAATTT 600 TTTTTCCTGC CATTGTTATC ATCACCTGGG CAATTTTATT TTACTCTTGT AGGTTTATTC 660 CAGAACGCTG GCGTCCACCC ATATGGGTTC GTGTTTTACC CACACTTGAA AATATTCTTT 720 ATGGCTCTAA TCTTTCTAGT CTTCTCTCGA AAACCACGCA TAGCATCCTT GATATTTTGG 780 CCTGGGTTCC ATATGGAGTC ATGCATTATT CGGCTCCTTT TATCATTTCA TTTATTCTTT 840 TCATCTTTGC ACCTCCTGGA ACTCTTCCAG TTTGGGCTCG AACTTTTGGT TATATGAATT 900 TATTTGGTGT TCTTATCCAA ATGGCTTTCC CCTGTTCTCC TCCTTGGTAT GAAAATATGT 960 ATGGTTTAGA ACCTGCCACG TATGCAGTAC GTGGCTCTCC TGGTGGATTG GCCCGTATTG 1020 ATGCTCTCTT CGGCACTAGC ATTTACACTG ATGGTTTTTC TAACTCTCCG GTTGTTTTTG 1080 GTGCCTTTCC ATCTCTTCAC GCTGGATGGG CCATGCTGGA AGCACTTTTC CTTTCGCATG 1140 TGTTTCCTCG ATACCGCTTC TGCTTTTATG GATATGTTCT ATGGCTTTGC TGGTGTACTA 1200 TGTACCTTAC CCACCACTAC TTTGTAGATT TGGTCGGCGG TATGTGTTTA GCTATTATAT 1260 GCTTCGTTTT TGCTCAAAAG CTACGCCTCC CACAGTTGCA AACTGGTAAA ATCCTTCGTT 1320 GGGAATACGA GTTTGTTATC CACGGTCATG GTCTTTCCGA AAAAACCAGC AACTCCTTGG 1380 CTCGTACCGG CAGCCCATAC TTACTTGGAA GGGATTCTTT TACTCAAAAC CCTAATGCAG 1440 TAGCCTTCAT GAGTGGTCTT AACAATATGG AACTTGCTAA CACCGATCAT GAATGGTCCG 1500 TGGGTTCATC ATCACCTGAG CCGTTACCTA GTCCTGCTGC TGATTTGATT GATCGTCCTG 1560 CCAGTACCAC TTCCTCCATC TTTGATGCAA GTCATCTTCC TTAAATCAAC GTGCTTTAAG 1620 AATATATTTC CAAAAGCTAC ATGATACATT GACTAGAATC GGTTTGATTC ATAGTGGTAT 1680 TGGAATGATG TTGTTCATTG TGTTTTTTAA CTGTTAATCT GACATCCATT GAGTCATTCT 1740 TTACAATTTG TAAAATTAAT TTGTATCACT AATTTTGAAG GAAGCTATTT TGGTATTAAT 1800 ACCGCTTTTG GTCTCCACTT CCTTTTCGAA ACTCTTAACA GCGATTAGGC CGGGTATCTT 1860 CCAGTGTGAT GTATAGGTAT TTGTCGTTTT TTTATCATTT CCGTTAATAA AGAACTCTTT 1920 TATCCAGCTT CTTACACTGT CAACTGTTGT GAAAGGAACA CATTTAGAAT TTCATTTTCC 1980 TTATTTGTTG TGATTTAAAT CGTTTGACAT AATTTTAAAT TTGGTTTGAA ATGTGTGTGA 2040 GAAGGCTTGT TTTATTCATT TAGTTTATTG CTTGTTTGCA CGAAAATCCA GAACGGAGCA 2100 TTAATGTAAT CCTTTTTTAT TCTGTAAAGC GTTTTTATAC AAATGTTGGT TATACGTTTC 2160 TAAAATAAGA ATATTGTTAT AATAATATAG TTTTTTCTAT CATTTGTTAC ACACACTAAA 2220 GAGACATTAA GGATAAGCAA ATGTGTTAAA ATGATAATAT ATTTTGGAAA CATTTATAAA 2280 GAAATTAAGC AGCTTTGACT AACTACATTT TTGTTTTTTT CCTAAGCAAA ACTGTATAGT 2340 TATACACGCG AGCTGTATTC ACTTCCATTG TAGTGACTTG AGCTC 2385

【００６７】配列番号：4 配列の長さ：422 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ser Ala Leu Ser Thr Leu Lys Lys Arg Leu Ala Ala Cys Asn 1 5 10 15 Arg Ala Ser Gln Tyr Lys Leu Glu Thr Ser Leu Asn Pro Met Pro 20 25 30 Thr Phe Arg Leu Leu Arg Asn Thr Lys Trp Ser Trp Thr His Leu 35 40 45 Gln Tyr Val Phe Leu Ala Gly Asn Leu Ile Phe Ala Cys Ile Val 50 55 60 Ile Glu Ser Pro Gly Phe Trp Gly Lys Phe Gly Ile Ala Cys Leu 65 70 75 Leu Ala Ile Ala Leu Thr Val Pro Leu Thr Arg Gln Ile Phe Phe 80 85 90 Pro Ala Ile Val Ile Ile Thr Trp Ala Ile Leu Phe Tyr Ser Cys 95 100 105 Arg Phe Ile Pro Glu Arg Trp Arg Pro Pro Ile Trp Val Arg Val 110 115 120 Leu Pro Thr Leu Glu Asn Ile Leu Tyr Gly Ser Asn Leu Ser Ser 125 130 135 Leu Leu Ser Lys Thr Thr His Ser Ile Leu Asp Ile Leu Ala Trp 140 145 150 Val Pro Tyr Gly Val Met His Tyr Ser Ala Pro Phe Ile Ile Ser 155 160 165 Phe Ile Leu Phe Ile Phe Ala Pro Pro Gly Thr Leu Pro Val Trp 170 175 180 Ala Arg Thr Phe Gly Tyr Met Asn Leu Phe Gly Val Leu Ile Gln 185 190 195 Met Ala Phe Pro Cys Ser Pro Pro Trp Tyr Glu Asn Met Tyr Gly 200 205 210 Leu Glu Pro Ala Thr Tyr Ala Val Arg Gly Ser Pro Gly Gly Leu 215 220 225 Ala Arg Ile Asp Ala Leu Phe Gly Thr Ser Ile Tyr Thr Asp Gly 230 235 240 Phe Ser Asn Ser Pro Val Val Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His 245 250 255 Ala Gly Trp Ala Met Leu Glu Ala Leu Phe Leu Ser His Val Phe 260 265 270 Pro Arg Tyr Arg Phe Cys Phe Tyr Gly Tyr Val Leu Trp Leu Cys 275 280 285 Trp Cys Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Val 290 295 300 Gly Gly Met Cys Leu Ala Ile Ile Cys Phe Val Phe Ala Gln Lys 305 310 315 Leu Arg Leu Pro Gln Leu Gln Thr Gly Lys Ile Leu Arg Trp Glu 320 325 330 Tyr Glu Phe Val Ile His Gly His Gly Leu Ser Glu Lys Thr Ser 335 340 345 Asn Ser Leu Ala Arg Thr Gly Ser Pro Tyr Leu Leu Gly Arg Asp 350 355 360 Ser Phe Thr Gln Asn Pro Asn Ala Val Ala Phe Met Ser Gly Leu 365 370 375 Asn Asn Met Glu Leu Ala Asn Thr Asp His Glu Trp Ser Val Gly 380 385 390 Ser Ser Ser Pro Glu Pro Leu Pro Ser Pro Ala Ala Asp Leu Ile 395 400 405 Asp Arg Pro Ala Ser Thr Thr Ser Ser Ile Phe Asp Ala Ser His 410 415 420 Leu Pro

【００６８】配列番号：5 配列の長さ：2340 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： TTTCTTTCTG TCAAAGAATA ATAAAGTGCC CATCAGTGTT CATATTTGTT ACAAAGTGGT 60 TTTCTGATTT GGTACTACTG CAGAGGCGTA TTTTTTGCTT CAGTTACCAT AGCGTAAGAA 120 CACTAGCGAC TTTTGTTCGT GAACCAACAG AGTAGGATTT CTACTGCTAC ATCTCTTAGG 180 TAGTTGGTTA GTCCGATCGC TCACTTTTGG TTGTTGTTAA GTACTTCATA AGTTTATCCT 240 TTTCCTTTTT CACACTGAGC TACTTTGGGT ATAGCTTTTG GCCCAAGGAT CTTTGAATTT 300 TCTCCAAAAG TACTTTATTT TATATCCTAC AGGTTGCGGT TTTCATATTT TAAAAAGCTT 360 TTTAATCATT CCTTTGCGTA TGGCAAACCC TTTTTCGAGA TGGTTTCTAT CAGAGAGACC 420 TCCAAACTGC CATGTAGCCG ATTTAGAAAC AAGTTTAGAT CCCCATCAAA CGTTGTTGAA 480 GGTGCAAAAA TACAAACCCG CTTTAAGCGA CTGGGTGCAT TACATCTTCT TGGGATCCAT 540 CATGCTGTTT GTGTTCATTA CTAATCCCGC ACCTTGGATC TTCAAGATCC TTTTTTATTG 600 TTTCTTGGGC ACTTTATTCA TCATTCCAGC TACGTCACAG TTTTTCTTCA ATGCCTTGCC 660 CATCCTAACA TGGGTGGCGC TGTATTTCAC TTCATCGTAC TTTCCAGATG ACCGCAGGCC 720 TCCTATTACT GTCAAAGTGT TACCAGCGGT GGAAACAATT TTATACGGCG ACAATTTAAG 780 TGATATTCTT GCAACATCGA CGAATTCCTT TTTGGACATT TTAGCATGGT TACCGTACGG 840 ACTATTTCAT TATGGGGCCC CATTTGTCGT TGCTGCCATC TTATTCGTAT TTGGTCCACC 900 AACTGTTTTG CAAGGTTATG CTTTTGCATT TGGTTATATG AACCTGTTTG GTGTTATCAT 960 GCAAAATGTC TTTCCAGCCG CTCCCCCATG GTATAAAATT CTCTATGGAT TGCAATCAGC 1020 CAACTATGAT ATGCATGGCT CGCCTGGTGG ATTAGCTAGA ATTGATAAGC TACTCGGTAT 1080 TAATATGTAT ACTACAGCTT TTTCAAATTC CTCCGTCATT TTCGGTGCTT TTCCTTCACT 1140 GCATTCCGGG TGTGCTACTA TGGAAGCCCT GTTTTTCTGT TATTGTTTTC CAAAATTGAA 1200 GCCCTTGTTT ATTGCTTATG TTTGCTGGTT ATGGTGGTCA ACTATGTATC TGACACACCA 1260 TTATTTTGTA GACCTTATGG CAGGTTCTGT GCTGTCATAC GTTATTTTCC AGTACACAAA 1320 GTACACACAT TTACCAATTG TAGATACATC TCTTTTTTGC AGATGGTCAT ACACTTCAAT 1380 TGAGAAATAC GATATATCAA AGAGTGATCC ATTGGCTGCA GATTCAAACG ATATCGAAAG 1440 TGTCCCTTTG TCCAACTTGG AACTTGACTT TGATCTTAAT ATGACTGATG AACCCAGTGT 1500 AAGCCCTTCG TTATTTGATG GATCTACTTC TGTTTCTCGT TCGTCCGCCA CGTCTATAAC 1560 GTCACTAGGT GTAAAGAGGG CTTAATGAGT ATTTTATCTG CAATTACGGA TACGGTTGGT 1620 CTTATGTAGA TACATATAAA TATATATCTT TTTCTTTCTT TTTCTTAGTC AGGATTGTCG 1680 TTTAGCATAA TATACATGTA GTTTATTTAA TCACATACCA CTGATTATCT TTAGAATTTT 1740 ATAAATTTTT GAAATAAATG GGTGGCTTTT AATGGTGTCT ATGTTAAGTG AGGCTTTTAG 1800 AATGCTCTTC CTGCTTTGTT TATTATATGT GTATGAAAGA TATGTATGTA TTTACATGTG 1860 TTTGTAGCGT CCCCAGTCAA AACCTGTGCG CTATACCTAA ATGGATTGAT AATCTTCATT 1920 CACTAATTCT AAAATAGACT TCTTCCCCAA AGAACGGTGT AACGATGAGG CTCTATCCAG 1980 CTGCTTATCT AAATCAACTT TAACGATGGA TGATCTTATG ACACGGGGAT CTTTCTTTAA 2040 AGTTCTTAGA ATTTCAGACT GTACCGCAGC TGATGAATCA AACAGCATTA AAAAGTGATA 2100 TGCTCGAAAA TGTTTTTCCT GGTCTTTCTT CATTATTTTA GGAAGATACC TTATGCCCAT 2160 GGGTACAATG TCCCTCACCA CACCTCTGTT TTGAATAATC AGTTTCCCGA TTGTGGAAGA 2220 CAATTCTTTT GCTTCCAACT TTGGCGCATT GGAGTTGGTT ATGCGAACAA GTCCGATCAG 2280 CTCATAAAGC ATCTTAGTGA AAAGGGTGGT TTTGCGTTAT TCTTTCCTCT GTTGAAGCTT 2340

【００６９】配列番号：6 配列の長さ：401 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ala Asn Pro Phe Ser Arg Trp Phe Leu Ser Glu Arg Pro Pro 1 5 10 15 Asn Cys His Val Ala Asp Leu Glu Thr Ser Leu Asp Pro His Gln 20 25 30 Thr Leu Leu Lys Val Gln Lys Tyr Lys Pro Ala Leu Ser Asp Trp 35 40 45 Val His Tyr Ile Phe Leu Gly Ser Ile Met Leu Phe Val Phe Ile 50 55 60 Thr Asn Pro Ala Pro Trp Ile Phe Lys Ile Leu Phe Tyr Cys Phe 65 70 75 Leu Gly Thr Leu Phe Ile Ile Pro Ala Thr Ser Gln Phe Phe Phe 80 85 90 Asn Ala Leu Pro Ile Leu Thr Trp Val Ala Leu Tyr Phe Thr Ser 95 100 105 Ser Tyr Phe Pro Asp Asp Arg Arg Pro Pro Ile Thr Val Lys Val 110 115 120 Leu Pro Ala Val Glu Thr Ile Leu Tyr Gly Asp Asn Leu Ser Asp 125 130 135 Ile Leu Ala Thr Ser Thr Asn Ser Phe Leu Asp Ile Leu Ala Trp 140 145 150 Leu Pro Tyr Gly Leu Phe His Tyr Gly Ala Pro Phe Val Val Ala 155 160 165 Ala Ile Leu Phe Val Phe Gly Pro Pro Thr Val Leu Gln Gly Tyr 170 175 180 Ala Phe Ala Phe Gly Tyr Met Asn Leu Phe Gly Val Ile Met Gln 185 190 195 Asn Val Phe Pro Ala Ala Pro Pro Trp Tyr Lys Ile Leu Tyr Gly 200 205 210 Leu Gln Ser Ala Asn Tyr Asp Met His Gly Ser Pro Gly Gly Leu 215 220 225 Ala Arg Ile Asp Lys Leu Leu Gly Ile Asn Met Tyr Thr Thr Ala 230 235 240 Phe Ser Asn Ser Ser Val Ile Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His 245 250 255 Ser Gly Cys Ala Thr Met Glu Ala Leu Phe Phe Cys Tyr Cys Phe 260 265 270 Pro Lys Leu Lys Pro Leu Phe Ile Ala Tyr Val Cys Trp Leu Trp 275 280 285 Trp Ser Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Met 290 295 300 Ala Gly Ser Val Leu Ser Tyr Val Ile Phe Gln Tyr Thr Lys Tyr 305 310 315 Thr His Leu Pro Ile Val Asp Thr Ser Leu Phe Cys Arg Trp Ser 320 325 330 Tyr Thr Ser Ile Glu Lys Tyr Asp Ile Ser Lys Ser Asp Pro Leu 335 340 345 Ala Ala Asp Ser Asn Asp Ile Glu Ser Val Pro Leu Ser Asn Leu 350 355 360 Glu Leu Asp Phe Asp Leu Asn Met Thr Asp Glu Pro Ser Val Ser 365 370 375 Pro Ser Leu Phe Asp Gly Ser Thr Ser Val Ser Arg Ser Ser Ala 380 385 390 Thr Ser Ile Thr Ser Leu Gly Val Lys Arg Ala 395 400

【００７０】配列番号：7 配列の長さ：2340 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA TTTCTTTCTG TCAAAGAATA ATAAAGTGCC CATCAGTGTT CATATTTGTT ACAAAGTGGT 60 TTTCTGATTT GGTACTACTG CAGAGGCGTA TTTTTTGCTT CAGTTACCAT AGCGTAAGAA 120 CACTAGCGAC TTTTGTTCGT GAACCAACAG AGTAGGATTT CTACTGCTAC ATCTCTTAGG 180 TAGTTGGTTA GTCCGATCGC TCACTTTTGG TTGTTGTTAA GTACTTCATA AGTTTATCCT 240 TTTCCTTTTT CACACTGAGC TACTTTGGGT ATAGCTTTTG GCCCAAGGAT CTTTGAATTT 300 TCTCCAAAAG TACTTTATTT TATATCCTAC AGGTTGCGGT TTTCATATTT TAAAAAGCTT 360 TTTAATCATT CCTTTGCGTA TGGCAAACCC TTTTTCGAGA TGGTTTCTAT CAGAGAGACC 420 TCCAAACTGC CATGTAGCCG ATTTAGAAAC AAGTTTAGAT CCCCATCAAA CGTTGTTGAA 480 GGTGCAAAAA TACAAACCCG CTTTAAGCGA CTGGGTGCAT TACATCTTCT TGGGATCCAT 540 CATGCTGTTT GTGTTCATTA CTAATCCCGC ACCTTGGATC TTCAAGATCC TTTTTTATTG 600 TTTCTTGGGC ACTTTATTCA TCATTCCAGC TACGTCACAG TTTTTCTTCA ATGCCTTGCC 660 CATCCTAACA TGGGTGGCGC TGTATTTCAC TTCATCGTAC TTTCCAGATG ACCGCAGGCC 720 TCCTATTACT GTCAAAGTGT TACCAGCGGT GGAAACAATT TTATACGGCG ACAATTTAAG 780 TGATATTCTT GCAACATCGA CGAATTCCTT TTTGGACATT TTAGCATGGT TACCGTACGG 840 ACTATTTCAT TTTGGGGCCC CATTTGTCGT TGCTGCCATC TTATTCGTAT TTGGTCCACC 900 AACTGTTTTG CAAGGTTATG CTTTTGCATT TGGTTATATG AACCTGTTTG GTGTTATCAT 960 GCAAAATGTC TTTCCAGCCG CTCCCCCATG GTATAAAATT CTCTATGGAT TGCAATCAGC 1020 CAACTATGAT ATGCATGGCT CGCCTGGTGG ATTAGCTAGA ATTGATAAGC TACTCGGTAT 1080 TAATATGTAT ACTACAGCTT TTTCAAATTC CTCCGTCATT TTCGGTGCTT TTCCTTCACT 1140 GCATTCCGGG TGTGCTACTA TGGAAGCCCT GTTTTTCTGT TATTGTTTTC CAAAATTGAA 1200 GCCCTTGTTT ATTGCTTATG TTTGCTGGTT ATGGTGGTCA ACTATGTATC TGACACACCA 1260 TTATTTTGTA GACCTTATGG CAGGTTCTGT GCTGTCATAC GTTATTTTCC AGTACACAAA 1320 GTACACACAT TTACCAATTG TAGATACATC TCTTTTTTGC AGATGGTCAT ACACTTCAAT 1380 TGAGAAATAC GATATATCAA AGAGTGATCC ATTGGCTGCA GATTCAAACG ATATCGAAAG 1440 TGTCCCTTTG TCCAACTTGG AACTTGACTT TGATCTTAAT ATGACTGATG AACCCAGTGT 1500 AAGCCCTTCG TTATTTGATG GATCTACTTC TGTTTCTCGT TCGTCCGCCA CGTCTATAAC 1560 GTCACTAGGT GTAAAGAGGG CTTAATGAGT ATTTTATCTG CAATTACGGA TACGGTTGGT 1620 CTTATGTAGA TACATATAAA TATATATCTT TTTCTTTCTT TTTCTTAGTC AGGATTGTCG 1680 TTTAGCATAA TATACATGTA GTTTATTTAA TCACATACCA CTGATTATCT TTAGAATTTT 1740 ATAAATTTTT GAAATAAATG GGTGGCTTTT AATGGTGTCT ATGTTAAGTG AGGCTTTTAG 1800 AATGCTCTTC CTGCTTTGTT TATTATATGT GTATGAAAGA TATGTATGTA TTTACATGTG 1860 TTTGTAGCGT CCCCAGTCAA AACCTGTGCG CTATACCTAA ATGGATTGAT AATCTTCATT 1920 CACTAATTCT AAAATAGACT TCTTCCCCAA AGAACGGTGT AACGATGAGG CTCTATCCAG 1980 CTGCTTATCT AAATCAACTT TAACGATGGA TGATCTTATG ACACGGGGAT CTTTCTTTAA 2040 AGTTCTTAGA ATTTCAGACT GTACCGCAGC TGATGAATCA AACAGCATTA AAAAGTGATA 2100 TGCTCGAAAA TGTTTTTCCT GGTCTTTCTT CATTATTTTA GGAAGATACC TTATGCCCAT 2160 GGGTACAATG TCCCTCACCA CACCTCTGTT TTGAATAATC AGTTTCCCGA TTGTGGAAGA 2220 CAATTCTTTT GCTTCCAACT TTGGCGCATT GGAGTTGGTT ATGCGAACAA GTCCGATCAG 2280 CTCATAAAGC ATCTTAGTGA AAAGGGTGGT TTTGCGTTAT TCTTTCCTCT GTTGAAGCTT 2340

【００７１】配列番号：8 配列の長さ：401 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ala Asn Pro Phe Ser Arg Trp Phe Leu Ser Glu Arg Pro Pro 1 5 10 15 Asn Cys His Val Ala Asp Leu Glu Thr Ser Leu Asp Pro His Gln 20 25 30 Thr Leu Leu Lys Val Gln Lys Tyr Lys Pro Ala Leu Ser Asp Trp 35 40 45 Val His Tyr Ile Phe Leu Gly Ser Ile Met Leu Phe Val Phe Ile 50 55 60 Thr Asn Pro Ala Pro Trp Ile Phe Lys Ile Leu Phe Tyr Cys Phe 65 70 75 Leu Gly Thr Leu Phe Ile Ile Pro Ala Thr Ser Gln Phe Phe Phe 80 85 90 Asn Ala Leu Pro Ile Leu Thr Trp Val Ala Leu Tyr Phe Thr Ser 95 100 105 Ser Tyr Phe Pro Asp Asp Arg Arg Pro Pro Ile Thr Val Lys Val 110 115 120 Leu Pro Ala Val Glu Thr Ile Leu Tyr Gly Asp Asn Leu Ser Asp 125 130 135 Ile Leu Ala Thr Ser Thr Asn Ser Phe Leu Asp Ile Leu Ala Trp 140 145 150 Leu Pro Tyr Gly Leu Phe His Phe Gly Ala Pro Phe Val Val Ala 155 160 165 Ala Ile Leu Phe Val Phe Gly Pro Pro Thr Val Leu Gln Gly Tyr 170 175 180 Ala Phe Ala Phe Gly Tyr Met Asn Leu Phe Gly Val Ile Met Gln 185 190 195 Asn Val Phe Pro Ala Ala Pro Pro Trp Tyr Lys Ile Leu Tyr Gly 200 205 210 Leu Gln Ser Ala Asn Tyr Asp Met His Gly Ser Pro Gly Gly Leu 215 220 225 Ala Arg Ile Asp Lys Leu Leu Gly Ile Asn Met Tyr Thr Thr Ala 230 235 240 Phe Ser Asn Ser Ser Val Ile Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His 245 250 255 Ser Gly Cys Ala Thr Met Glu Ala Leu Phe Phe Cys Tyr Cys Phe 260 265 270 Pro Lys Leu Lys Pro Leu Phe Ile Ala Tyr Val Cys Trp Leu Trp 275 280 285 Trp Ser Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Met 290 295 300 Ala Gly Ser Val Leu Ser Tyr Val Ile Phe Gln Tyr Thr Lys Tyr 305 310 315 Thr His Leu Pro Ile Val Asp Thr Ser Leu Phe Cys Arg Trp Ser 320 325 330 Tyr Thr Ser Ile Glu Lys Tyr Asp Ile Ser Lys Ser Asp Pro Leu 335 340 345 Ala Ala Asp Ser Asn Asp Ile Glu Ser Val Pro Leu Ser Asn Leu 350 355 360 Glu Leu Asp Phe Asp Leu Asn Met Thr Asp Glu Pro Ser Val Ser 365 370 375 Pro Ser Leu Phe Asp Gly Ser Thr Ser Val Ser Arg Ser Ser Ala 380 385 390 Thr Ser Ile Thr Ser Leu Gly Val Lys Arg Ala 395 400

【００７２】配列番号：9 配列の長さ：5340 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： AGCGCTTCTA TTTTCCTCCC CACCGCGAGG CGGAAATGGC ACATTTTTTT TCTTTTGCTT 60 CTGTGCTTTT GCTGTAATTT TTGGCATGTG CTATTGTATG AAGATAACGC GTGGTTCCGT 120 GGAAATAGCC GGAAATTTTG CCGGGAATAT GACGGACATG ATTTAACACC CGTGGAAATG 180 AAAAAAGCCA AGGTAAGAAA GTGGCAATAT TTTTCCTACA AATAGATCTG CTGTCCCTTA 240 GATGATTACC ATACATATAT ATATTTATTA CACACATCTG TCAGAGGTAG CTAGCGAAGG 300 TGTCACTGAA ATATTTTTTG TTCCAGTTAG TATAAATACG GAGGTAGAAC AGCTCTCCGC 360 GTGTATATCT TTTTTTGCGC TATACAAGAA CAGGAAGAAC GCATTTCCAT ACCTTTTTCT 420 CCTTACAGGT GCCCTCTGAG TAGTGTCACG AACGAGGAAA AAGATTAATA TTACTGTTTT 480 TATATTCAAA AAGAGTAAAG CCGTTGCTAT ATACGAATAT GACGATTACC GTGGGGGATG 540 CAGTTTCGGA GACGGAGCTG GAAAACAAAA GTCAAAACGT GGTACTATCT CCCAAGGCAT 600 CTGCTTCTTC AGACATAAGC ACAGATGTTG ATAAAGACAC ATCGTCTTCT TGGGATGACA 660 AATCTTTGCT GCCTACAGGT GAATATATTG TGGACAGAAA TAAGCCCCAA ACCTACTTGA 720 ATAGCGATGA TATCGAAAAA GTGACAGAAT CTGATATTTT CCCTCAGAAA CGTCTGTTTT 780 CATTCTTGCA CTCTAAGAAA ATTCCAGAAG TACCACAAAC CGATGACGAG AGGAAGATAT 840 ATCCTCTGTT CCATACAAAT ATTATCTCTA ACATGTTTTT TTGGTGGGTT CTACCCATCC 900 TGCGAGTTGG TTATAAGAGA ACGATACAGC CGAACGATCT CTTCAAAATG GATCCGAGGA 960 TGTCTATAGA GACCCTTTAT GACGACTTTG AAAAAAACAT GATTTACTAT TTTGAGAAGA 1020 CGAGGAAAAA ATACCGTAAA AGACATCCAG AAGCGACAGA AGAAGAGGTT ATGGAAAATG 1080 CCAAACTACC TAAACATACA GTTCTGAGAG CTTTATTATT CACTTTTAAG AAACAGTACT 1140 TCATGTCGAT AGTGTTTGCA ATTCTCGCTA ATTGTACATC CGGTTTTAAC CCCATGATTA 1200 CCAAGAGGCT AATTGAGTTT GTCGAAGAAA AGGCTATTTT TCATAGCATG CATGTTAACA 1260 AAGGTATTGG TTACGCTATT GGTGCATGTT TGATGATGTT CGTTAACGGG TTGACGTTCA 1320 ATCATTTCTT TCATACATCC CAACTGACTG GTGTGCAAGC TAAGTCTATT CTTACTAAAG 1380 CTGCCATGAA GAAAATGTTT AATGCATCTA ATTATGCGAG ACATTGTTTT CCTAACGGTA 1440 AAGTGACTTC TTTTGTAACA ACAGATCTCG CTAGAATTGA ATTTGCCTTA TCTTTTCAGC 1500 CGTTTTTGGC TGGGTTCCCT GCAATTTTGG CTATTTGCAT TGTTTTATTG ATCGTTAACC 1560 TTGGACCCAT TGCCTTAGTT GGGATTGGTA TTTTTTTCGG TGGGTTTTTC ATATCCTTAT 1620 TTGCATTTAA GTTAATTCTG GGCTTTAGAA TTGCTGCGAA CATCTTCACT GATGCTAGAG 1680 TTACCATGAT GAGAGAAGTG CTGAATAATA TAAAAATGAT TAAATATTAT ACGTGGGAGG 1740 ATGCGTATGA AAAAAATATT CAAGATATTA GGACCAAAGA GATTTCTAAA GTTAGAAAAA 1800 TGCAACTATC AAGAAATTTC TTGATTGCTA TGGCCATGTC TTTGCCTAGT ATTGCTTCAT 1860 TGGTCACTTT CCTTGCAATG TACAAAGTTA ATAAAGGAGG CAGGCAACCT GGTAATATTT 1920 TTGCCTCTTT ATCTTTATTT CAGGTCTTGA GTTTGCAAAT GTTTTTCTTA CCTATTGCTA 1980 TTGGTACTGG AATTGACATG ATCATTGGAT TGGGCCGTTT GCAAAGCTTA TTGGAGGCTC 2040 CAGAAGATGA TCCAAATCAG ATGATTGAAA TGAAGCCCTC TCCTGGCTTT GATCCAAAAT 2100 TGGCTCTAAA AATGACACAT TGCTCATTTG AGTGGGAAGA TTATGAATTA AACGACGCTA 2160 TTGAAGAAGC AAAAGGAGAA GCTAAAGATG AAGGTAAAAA GAACAAAAAA AAGCGTAAGG 2220 ATACATGGGG TAAGCCATCT GCAAGTACTA ATAAGGCGAA AAGATTGGAC AATATGTTGA 2280 AAGACAGAGA CGGCCCGGAA GATTTAGAAA AAACTTCGTT TAGGGGTTTC AAGGACTTGA 2340 ACTTCGATAT TAAAAAGGGC GAATTTATTA TGATTACGGG ACCTATTGGT ACTGGTAAAT 2400 CTTCATTATT GAATGCGATG GCAGGATCAA TGAGAAAAAT TGATGGTAAG GTTGAAGTCA 2460 ACGGGGACTT ATTAATGTGT GGTTATCCAT GGATTCAAAA TGCATCTGTA AGAGATAACA 2520 TCATATTCGG TTCACCATTC AATAAAGAAA AGTATGATGA AGTAGTTCGT GTTTGCTCTT 2580 TGAAAGCTGA TCTGGATATT TTACCGGCAG GCGATATGAC CGAAATTGGG GAACGTGGTA 2640 TTACTTTATC TGGTGGTCAA AAGGCACGTA TCAATTTAGC CAGGTCTGTT TATAAGAAGA 2700 AGGATATTTA TGTATTCGAC GATGTCCTAA GTGCTGTCGA TTCTCGTGTT GGTAAACACA 2760 TCATGGATGA ATGTCTAACC GGAATGCTTG CTAATAAAAC CAGAATTTTA GCAACGCATC 2820 AGTTGTCACT GATTGAGAGA GCTTCTAGAG TCATCGTTTT AGGTACTGAT GGCCAAGTCG 2880 ATATTGGTAC TGTTGATGAG CTAAAAGCTC GTAATCAAAC TTTGATAAAT CTTTTACAAT 2940 TCTCTTCTCA AAATTCGGAG AAAGAGGATG AAGAACAGGA AGCGGTTGTT TCCGGTGAAT 3000 TGGGACAACT AAAATATGAA CCAGAGGTAA AGGAATTGAC TGAACTGAAG AAAAAGGCTA 3060 CAGAAATGTC ACAAACTGCA AATAGTGGTA AAATTGTAGC GGATGGTCAT ACTAGTAGTA 3120 AAGAAGAAAG AGCAGTCAAT AGTATCAGTC TGAAAATATA CCGTGAATAC ATTAAAGCTG 3180 CAGTAGGTAA GTGGGGTTTT ATCGCACTAC CGTTGTATGC AATTTTAGTC GTTGGAACCA 3240 CATTCTGCTC ACTTTTTTCT TCCGTTTGGT TATCTTACTG GACTGAGAAT AAATTCAAAA 3300 ACAGACCACC CAGTTTTTAT ATGGGTCTTT ACTCCTTCTT TGTGTTTGCT GCTTTCATAT 3360 TCATGAATGG CCAGTTCACC ATACTTTGCG CAATGGGTAT TATGGCATCG AAATGGTTAA 3420 ATTTGAGGGC TGTGAAAAGA ATTTTACACA CTCCAATGTC ATACATAGAT ACCACACCTT 3480 TGGGACGTAT TCTGAACAGA TTCACAAAAG ATACAGATAG CTTAGATAAT GAGTTAACCG 3540 AAAGTTTACG GTTGATGACA TCTCAATTTG CTAATATTGT AGGTGTTTGC GTCATGTGTA 3600 TTGTTTACTT GCCGTGGTTT GCTATCGCAA TTCCGTTTCT TTTGGTCATC TTTGTTCTGA 3660 TTGCTGATCA TTATCAGAGT TCTGGTAGAG AAATTAAAAG ACTTGAAGCT GTGCAACGGT 3720 CTTTTGTTTA CAATAATTTA AATGAAGTTT TGGGTGGGAT GGATACAATC AAAGCATACC 3780 GAAGTCAGGA ACGATTTTTG GCGAAATCAG ATTTTTTGAT CAACAAGATG AATGAGGCGG 3840 GATACCTTGT AGTTGTCCTG CAAAGATGGG TAGGTATTTT CCTTGATATG GTTGCTATCG 3900 CATTTGCACT AATTATTACG TTATTGTGTG TTACGAGAGC CTTTCCTATT TCCGCGGCTT 3960 CAGTTGGTGT TTTGTTGACT TATGTATTAC AATTGCCTGG TCTATTAAAT ACCATTTTAA 4020 GGGCAATGAC TCAAACAGAG AATGACATGA ATAGTGCCGA AAGATTGGTA ACATATGCAA 4080 CTGAACTACC ACTAGAGGCA TCCTATAGAA AGCCCGAAAT GACACCTCCA GAGTCATGGC 4140 CCTCAATGGG CGAAATAATT TTTGAAAATG TTGATTTTGC CTATAGACCT GGTTTACCTA 4200 TAGTTTTAAA AAATCTTAAC TTGAATATCA AGAGTGGGGA AAAAATTGGT ATCTGTGGTC 4260 GTACAGGTGC TGGTAAGTCC ACTATTATGA GTGCCCTTTA CAGGTTGAAT GAATTGACCG 4320 CAGGTAAAAT TTTAATTGAC AATGTTGATA TAAGTCAGCT GGGACTTTTC GATTTAAGAA 4380 GAAAATTAGC CATCATTCCA CAAGATCCAG TATTATTTAG GGGTACGATT CGCAAGAACT 4440 TAGATCCATT TAATGAGCGT ACAGATGACG AATTATGGGA TGCATTGGTG AGAGGTGGTG 4500 CTATCGCCAA GGATGACTTG CCGGAAGTGA AATTGCAAAA ACCTGATGAA AATGGTACTC 4560 ATGGTAAAAT GCATAAGTTC CATTTAGATC AAGCAGTGGA AGAAGAGGGC TCCAATTTCT 4620 CCTTAGGTGA GAGACAACTA TTAGCATTAA CAAGGGCATT GGTCCGCCAA TCAAAAATAT 4680 TGATTTTGGA TGAGGCTACA TCCTCAGTGG ACTACGAAAC GGATGGCAAA ATCCAAACAC 4740 GTATTGTTGA GGAATTTGGA GATTGTACAA TTTTGTGTAT TGCTCACAGA CTGAAGACCA 4800 TTGTAAATTA TGATCGTATT CTTGTTTTAG AGAAGGGTGA AGTCGCAGAA TTCGATACAC 4860 CATGGACGTT GTTTAGTCAA GAAGATAGTA TTTTCAGAAG CATGTGTTCT AGATCTGGTA 4920 TTGTGGAAAA TGATTTCGAG AACAGAAGTT AATTTATATT ATTTGTTGCA TGATTTTTCT 4980 CTTTTATTTA TTTATATGTT GCCGATGGTA CAAATTAGTA CTAGAAAAGA AAACCCACTA 5040 CTATGACTTG CAGAAAAAGT TATGTGTGCC ATAGATAGAT ATAATTGCAT ACCCACATCG 5100 TATACTCAAA ATTCCGAAAA GAACATTTCA TTTTTTATGA GGCAAACTGA ACAACGCTTC 5160 GGTCCTTTTT TCATTCTAGA AATATATATT TATACATCAT TTTCAGAAGA TATTCAAAGA 5220 ACTTATTGGG ATGTCTATTT ACTGAATAAA GTATACACAA AAAACGAATT TAAAATGGAA 5280 GGCATAAATA GAAAACTTAG AAGTGAAAAT CCTAAAACCG AAGGATATTT CAAATACGTA 5340

【００７３】配列番号：10 配列の長さ：1477 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Thr Ile Thr Val Gly Asp Ala Val Ser Glu Thr Glu Leu Glu 5 10 15 Asn Lys Ser Gln Asn Val Val Leu Ser Pro Lys Ala Ser Ala Ser 20 25 30 Ser Asp Ile Ser Thr Asp Val Asp Lys Asp Thr Ser Ser Ser Trp 35 40 45 Asp Asp Lys Ser Leu Leu Pro Thr Gly Glu Tyr Ile Val Asp Arg 50 55 60 Asn Lys Pro Gln Thr Tyr Leu Asn Ser Asp Asp Ile Glu Lys Val 65 70 75 Thr Glu Ser Asp Ile Phe Pro Gln Lys Arg Leu Phe Ser Phe Leu 80 85 90 His Ser Lys Lys Ile Pro Glu Val Pro Gln Thr Asp Asp Glu Arg 95 100 105 Lys Ile Tyr Pro Leu Phe His Thr Asn Ile Ile Ser Asn Met Phe 110 115 120 Phe Trp Trp Val Leu Pro Ile Leu Arg Val Gly Tyr Lys Arg Thr 125 130 135 Ile Gln Pro Asn Asp Leu Phe Lys Met Asp Pro Arg Met Ser Ile 140 145 150 Glu Thr Leu Tyr Asp Asp Phe Glu Lys Asn Met Ile Tyr Tyr Phe 155 160 165 Glu Lys Thr Arg Lys Lys Tyr Arg Lys Arg His Pro Glu Ala Thr 170 175 180 Glu Glu Glu Val Met Glu Asn Ala Lys Leu Pro Lys His Thr Val 185 190 195 Leu Arg Ala Leu Leu Phe Thr Phe Lys Lys Gln Tyr Phe Met Ser 200 205 210 Ile Val Phe Ala Ile Leu Ala Asn Cys Thr Ser Gly Phe Asn Pro 215 220 225 Met Ile Thr Lys Arg Leu Ile Glu Phe Val Glu Glu Lys Ala Ile 230 235 240 Phe His Ser Met His Val Asn Lys Gly Ile Gly Tyr Ala Ile Gly 245 250 255 Ala Cys Leu Met Met Phe Val Asn Gly Leu Thr Phe Asn His Phe 260 265 270 Phe His Thr Ser Gln Leu Thr Gly Val Gln Ala Lys Ser Ile Leu 275 280 285 Thr Lys Ala Ala Met Lys Lys Met Phe Asn Ala Ser Asn Tyr Ala 290 295 300 Arg His Cys Phe Pro Asn Gly Lys Val Thr Ser Phe Val Thr Thr 305 310 315 Asp Leu Ala Arg Ile Glu Phe Ala Leu Ser Phe Gln Pro Phe Leu 320 325 330 Ala Gly Phe Pro Ala Ile Leu Ala Ile Cys Ile Val Leu Leu Ile 335 340 345 Val Asn Leu Gly Pro Ile Ala Leu Val Gly Ile Gly Ile Phe Phe 350 355 360 Gly Gly Phe Phe Ile Ser Leu Phe Ala Phe Lys Leu Ile Leu Gly 365 370 375 Phe Arg Ile Ala Ala Asn Ile Phe Thr Asp Ala Arg Val Thr Met 380 385 390 Met Arg Glu Val Leu Asn Asn Ile Lys Met Ile Lys Tyr Tyr Thr 395 400 405 Trp Glu Asp Ala Tyr Glu Lys Asn Ile Gln Asp Ile Arg Thr Lys 410 415 420 Glu Ile Ser Lys Val Arg Lys Met Gln Leu Ser Arg Asn Phe Leu 425 430 435 Ile Ala Met Ala Met Ser Leu Pro Ser Ile Ala Ser Leu Val Thr 440 445 450 Phe Leu Ala Met Tyr Lys Val Asn Lys Gly Gly Arg Gln Pro Gly 455 460 465 Asn Ile Phe Ala Ser Leu Ser Leu Phe Gln Val Leu Ser Leu Gln 470 475 480 Met Phe Phe Leu Pro Ile Ala Ile Gly Thr Gly Ile Asp Met Ile 485 490 495 Ile Gly Leu Gly Arg Leu Gln Ser Leu Leu Glu Ala Pro Glu Asp 500 505 510 Asp Pro Asn Gln Met Ile Glu Met Lys Pro Ser Pro Gly Phe Asp 515 520 525 Pro Lys Leu Ala Leu Lys Met Thr His Cys Ser Phe Glu Trp Glu 530 535 540 Asp Tyr Glu Leu Asn Asp Ala Ile Glu Glu Ala Lys Gly Glu Ala 545 550 555 Lys Asp Glu Gly Lys Lys Asn Lys Lys Lys Arg Lys Asp Thr Trp 560 565 570 Gly Lys Pro Ser Ala Ser Thr Asn Lys Ala Lys Arg Leu Asp Asn 575 580 585 Met Leu Lys Asp Arg Asp Gly Pro Glu Asp Leu Glu Lys Thr Ser 590 595 600 Phe Arg Gly Phe Lys Asp Leu Asn Phe Asp Ile Lys Lys Gly Glu 605 610 615 Phe Ile Met Ile Thr Gly Pro Ile Gly Thr Gly Lys Ser Ser Leu 620 625 630 Leu Asn Ala Met Ala Gly Ser Met Arg Lys Ile Asp Gly Lys Val 635 640 645 Glu Val Asn Gly Asp Leu Leu Met Cys Gly Tyr Pro Trp Ile Gln 650 655 660 Asn Ala Ser Val Arg Asp Asn Ile Ile Phe Gly Ser Pro Phe Asn 665 670 675 Lys Glu Lys Tyr Asp Glu Val Val Arg Val Cys Ser Leu Lys Ala 680 685 690 Asp Leu Asp Ile Leu Pro Ala Gly Asp Met Thr Glu Ile Gly Glu 695 700 705 Arg Gly Ile Thr Leu Ser Gly Gly Gln Lys Ala Arg Ile Asn Leu 710 715 720 Ala Arg Ser Val Tyr Lys Lys Lys Asp Ile Tyr Val Phe Asp Asp 725 730 735 Val Leu Ser Ala Val Asp Ser Arg Val Gly Lys His Ile Met Asp 740 745 750 Glu Cys Leu Thr Gly Met Leu Ala Asn Lys Thr Arg Ile Leu Ala 755 760 765 Thr His Gln Leu Ser Leu Ile Glu Arg Ala Ser Arg Val Ile Val 770 775 780 Leu Gly Thr Asp Gly Gln Val Asp Ile Gly Thr Val Asp Glu Leu 785 790 795 Lys Ala Arg Asn Gln Thr Leu Ile Asn Leu Leu Gln Phe Ser Ser 800 805 810 Gln Asn Ser Glu Lys Glu Asp Glu Glu Gln Glu Ala Val Val Ser 815 820 825 Gly Glu Leu Gly Gln Leu Lys Tyr Glu Pro Glu Val Lys Glu Leu 830 835 840 Thr Glu Leu Lys Lys Lys Ala Thr Glu Met Ser Gln Thr Ala Asn 845 850 855 Ser Gly Lys Ile Val Ala Asp Gly His Thr Ser Ser Lys Glu Glu 860 865 870 Arg Ala Val Asn Ser Ile Ser Leu Lys Ile Tyr Arg Glu Tyr Ile 875 880 885 Lys Ala Ala Val Gly Lys Trp Gly Phe Ile Ala Leu Pro Leu Tyr 890 895 900 Ala Ile Leu Val Val Gly Thr Thr Phe Cys Ser Leu Phe Ser Ser 905 910 915 Val Trp Leu Ser Tyr Trp Thr Glu Asn Lys Phe Lys Asn Arg Pro 920 925 930 Pro Ser Phe Tyr Met Gly Leu Tyr Ser Phe Phe Val Phe Ala Ala 935 940 945 Phe Ile Phe Met Asn Gly Gln Phe Thr Ile Leu Cys Ala Met Gly 950 955 960 Ile Met Ala Ser Lys Trp Leu Asn Leu Arg Ala Val Lys Arg Ile 965 970 975 Leu His Thr Pro Met Ser Tyr Ile Asp Thr Thr Pro Leu Gly Arg 980 985 990 Ile Leu Asn Arg Phe Thr Lys Asp Thr Asp Ser Leu Asp Asn Glu 995 1000 1005 Leu Thr Glu Ser Leu Arg Leu Met Thr Ser Gln Phe Ala Asn Ile 1010 1015 1020 Val Gly Val Cys Val Met Cys Ile Val Tyr Leu Pro Trp Phe Ala 1025 1030 1035 Ile Ala Ile Pro Phe Leu Leu Val Ile Phe Val Leu Ile Ala Asp 1040 1045 1050 His Tyr Gln Ser Ser Gly Arg Glu Ile Lys Arg Leu Glu Ala Val 1055 1060 1065 Gln Arg Ser Phe Val Tyr Asn Asn Leu Asn Glu Val Leu Gly Gly 1070 1075 1080 Met Asp Thr Ile Lys Ala Tyr Arg Ser Gln Glu Arg Phe Leu Ala 1085 1090 1095 Lys Ser Asp Phe Leu Ile Asn Lys Met Asn Glu Ala Gly Tyr Leu 1100 1105 1110 Val Val Val Leu Gln Arg Trp Val Gly Ile Phe Leu Asp Met Val 1115 1120 1125 Ala Ile Ala Phe Ala Leu Ile Ile Thr Leu Leu Cys Val Thr Arg 1130 1135 1140 Ala Phe Pro Ile Ser Ala Ala Ser Val Gly Val Leu Leu Thr Tyr 1145 1150 1155 Val Leu Gln Leu Pro Gly Leu Leu Asn Thr Ile Leu Arg Ala Met 1160 1165 1170 Thr Gln Thr Glu Asn Asp Met Asn Ser Ala Glu Arg Leu Val Thr 1175 1180 1185 Tyr Ala Thr Glu Leu Pro Leu Glu Ala Ser Tyr Arg Lys Pro Glu 1190 1195 1200 Met Thr Pro Pro Glu Ser Trp Pro Ser Met Gly Glu Ile Ile Phe 1205 1210 1215 Glu Asn Val Asp Phe Ala Tyr Arg Pro Gly Leu Pro Ile Val Leu 1220 1225 1230 Lys Asn Leu Asn Leu Asn Ile Lys Ser Gly Glu Lys Ile Gly Ile 1235 1240 1245 Cys Gly Arg Thr Gly Ala Gly Lys Ser Thr Ile Met Ser Ala Leu 1250 1255 1260 Tyr Arg Leu Asn Glu Leu Thr Ala Gly Lys Ile Leu Ile Asp Asn 1265 1270 1275 Val Asp Ile Ser Gln Leu Gly Leu Phe Asp Leu Arg Arg Lys Leu 1280 1285 1290 Ala Ile Ile Pro Gln Asp Pro Val Leu Phe Arg Gly Thr Ile Arg 1295 1300 1305 Lys Asn Leu Asp Pro Phe Asn Glu Arg Thr Asp Asp Glu Leu Trp 1310 1315 1320 Asp Ala Leu Val Arg Gly Gly Ala Ile Ala Lys Asp Asp Leu Pro 1325 1330 1335 Glu Val Lys Leu Gln Lys Pro Asp Glu Asn Gly Thr His Gly Lys 1340 1345 1350 Met His Lys Phe His Leu Asp Gln Ala Val Glu Glu Glu Gly Ser 1355 1360 1365 Asn Phe Ser Leu Gly Glu Arg Gln Leu Leu Ala Leu Thr Arg Ala 1370 1375 1380 Leu Val Arg Gln Ser Lys Ile Leu Ile Leu Asp Glu Ala Thr Ser 1385 1390 1395 Ser Val Asp Tyr Glu Thr Asp Gly Lys Ile Gln Thr Arg Ile Val 1400 1405 1410 Glu Glu Phe Gly Asp Cys Thr Ile Leu Cys Ile Ala His Arg Leu 1415 1420 1425 Lys Thr Ile Val Asn Tyr Asp Arg Ile Leu Val Leu Glu Lys Gly 1430 1435 1440 Glu Val Ala Glu Phe Asp Thr Pro Trp Thr Leu Phe Ser Gln Glu 1445 1450 1455 Asp Ser Ile Phe Arg Ser Met Cys Ser Arg Ser Gly Ile Val Glu 1460 1465 1470 Asn Asp Phe Glu Asn Arg Ser 1475

【００７４】配列番号：11 配列の長さ：26 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： TTTGGTTAYA TGAAYYTNTT YGGNGT 26

【００７５】配列番号：12 配列の長さ：29 配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列： TCTACAAART ARTGGTGNGT NARRTACAT 29

【００７６】配列番号：13 配列の長さ：2274 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： TTATATATAT TATTGATTTG TTCCTGTTGT TATTTAGTTT AGAATCAGAC GACTACACCA 60 GAACCACAAT TCAACCAACA CTTATATAGA ACCTGGCTTG GAAAAAAGTA ACATTTATCA 120 TTCCTATACT TTTTTAGCAA ACATAATCCG TGTTTTACAT ATATTATTCA CCCAATATCA 180 TAACAAAAAC AAACTGAATA ATGGCGTCTT CTATTTTGCG TTCCAAAATA ATACAAAAAC 240 CGTACCAATT ATTCCACTAC TATTTTCTTC TGGAGAAGGC TCCTGGTTCT ACAGTTAGTG 300 ATTTGAATTT TGATACAAAC ATACAAACGA GTTTACGTAA ATTAAAGCAT CATCATTGGA 360 CGGTGGGAGA AATATTCCAT TATGGGTTTT TGGTTTCCAT ACTTTTTTTC GTGTTTGTGG 420 TTTTCCCAGC TTCATTTTTT ATAAAATTAC CAATAATCTT AGCATTTGCT ACTTGTTTTT 480 TAATACCCTT AACATCACAA TTTTTTCTTC CTGCCTTGCC CGTTTTCACT TGGTTGGCAT 540 TATATTTTAC GTGTGCTAAA ATACCTCAAG AATGGAAACC AGCTATCACA GTTAAAGTTT 600 TACCAGCTAT GGAAACAATT TTGTACGGCG ATAATTTATC AAATGTTTTG GCAACCATCA 660 CTACCGGAGT GTTAGATATA TTGGCATGGT TACCATATGG GATTATTCAT TTCAGTTTCC 720 CATTTGTACT TGCTGCTATT ATATTTTTAT TTGGGCCACC GACGGCATTA AGATCATTTG 780 GATTTGCCTT TGGTTATATG AACTTGCTTG GAGTCTTGAT TCAAATGGCA TTCCCAGCTG 840 CTCCTCCATG GTACAAAAAC TTGCACGGAT TAGAACCAGC TAATTATTCA ATGCACGGGT 900 CTCCTGGTGG ACTTGGAAGG ATAGATAAAT TGTTAGGTGT TGATATGTAT ACCACAGGGT 960 TTTCCAATTC ATCAATCATT TTTGGGGCAT TCCCATCGTT ACATTCAGGA TGTTGTATCA 1020 TGGAAGTGTT ATTTTTGTGT TGGTTGTTTC CACGATTCAA GTTTGTGTGG GTTACATACG 1080 CATCTTGGCT TTGGTGGAGC ACGATGTATT TGACCCATCA CTACTTTGTC GATTTGATTG 1140 GTGGAGCCAT GCTATCTTTG ACTGTTTTTG AGTTCACCAA ATATAAATAT TTGCCAAAAA 1200 ACAAAGAAGG CCTTTTCTGT CGTTGGTCAT ACACTGAAAT TGAAAAAATC GATATCCAAG 1260 AGATTGACCC TTTATCATAC AATTATATCC CTGTCAACAG CAATGATAAT GAAAGCAGAT 1320 TGTATACGAG AGTGTACCAA GAGTCTCAGG TTAGTCCCCC ACAGAGAGCT GAAACACCTG 1380 AAGCATTTGA GATGTCAAAT TTTTCTAGGT CTAGACAAAG CTCAAAGACT CAGGTTCCAT 1440 TGAGTAATCT TACTAACAAT GATCAAGTGT CTGGAATTAA CGAAGAGGAT GAAGAAGAAG 1500 AAGGCGATGA AATTTCATCG AGTACTCCTT CGGTGTTTGA AGACGAACCA CAGGGTAGCA 1560 CATATGCTGC ATCCTCAGCT ACATCAGTAG ATGATTTGGA TTCCAAAAGA AATTAGTAAA 1620 ATAACAGTTT CTATTAATTT CTTTATTTCC TCCTAATTAA TGATTTTATG CTCAATACCT 1680 ACACTATCTG TTTTTAATTT CCTACTTTTT TTTTATTATT GTTGAGTTCA TTTGCTGTTC 1740 ATTGAATATT TACAATTTTG CATTAATTAC CATCAATATA GAATGGGCAC AGTTTTTTTA 1800 AGTTTTTTTG TTTTTGTGTT TGTCTTTCTT TTTTTACATT AATGTGTTTG GATTGTTTTA 1860 GGTTCCTTTA TCCCTTAGCC CCCTCAGAAT ACTATTTTAT CTAATTAATT TGTTTTTATT 1920 TTCTGATATT TACCAATTGC TTTTTCTTTT GGATATTTAT AATAGCATCC CCTAATAATT 1980 AATATACAAC TGTTTCATAT ATATACGTGT ATGTCCTGTA GTGGTGGAAA CTGGAGTCAA 2040 CATTTGTATT AATGTGTACA AGAAAGCAGT GTTAATGCTA CTATTATAAT TTTTGAGGTG 2100 CAAATCAAGA GGTTGGCAGC TTTCTTATGG CTATGACCGT GAATGAAGGC TTGTAAACCA 2160 CGTAATAAAC AAAAGCCAAC AAGTTTTTTT AGAGCCTTTA ACAACATACG CAATGAGAGT 2220 GATTGCAATA CTACAAGATA TAGCCCAAAA AATTGAATGC ATTTCAACAA CAAC 2274

【００７７】配列番号：14 配列の長さ：471 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Ala Ser Ser Ile Leu Arg Ser Lys Ile Ile Gln Lys Pro Tyr 5 10 15 Gln Leu Phe His Tyr Tyr Phe Leu Ser Glu Lys Ala Pro Gly Ser 20 25 30 Thr Val Ser Asp Leu Asn Phe Asp Thr Asn Ile Gln Thr Ser Leu 35 40 45 Arg Lys Leu Lys His His His Trp Thr Val Gly Glu Ile Phe His 50 55 60 Tyr Gly Phe Leu Val Ser Ile Leu Phe Phe Val Phe Val Val Phe 65 70 75 Pro Ala Ser Phe Phe Ile Lys Leu Pro Ile Ile Leu Ala Phe Ala 80 85 90 Thr Cys Phe Leu Ile Pro Leu Thr Ser Gln Phe Phe Leu Pro Ala 95 100 105 Leu Pro Val Phe Thr Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Thr Cys Ala Lys 110 115 120 Ile Pro Gln Glu Trp Lys Pro Ala Ile Thr Val Lys Val Leu Pro 125 130 135 Ala Met Glu Thr Ile Leu Tyr Gly Asp Asn Leu Ser Asn Val Leu 140 145 150 Ala Thr Ile Thr Thr Gly Val Leu Asp Ile Leu Ala Trp Leu Pro 155 160 165 Tyr Gly Ile Ile His Phe Ser Phe Pro Phe Val Leu Ala Ala Ile 170 175 180 Ile Phe Leu Phe Gly Pro Pro Thr Ala Leu Arg Ser Phe Gly Phe 185 190 195 Ala Phe Gly Tyr Met Asn Leu Leu Gly Val Leu Ile Gln Met Ala 200 205 210 Phe Pro Ala Ala Pro Pro Trp Tyr Lys Asn Leu His Gly Leu Glu 215 220 225 Pro Ala Asn Tyr Ser Met His Gly Ser Pro Gly Gly Leu Gly Arg 230 235 240 Ile Asp Lys Leu Leu Gly Val Asp Met Tyr Thr Thr Gly Phe Ser 245 250 255 Asn Ser Ser Ile Ile Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His Ser Gly 260 265 270 Cys Cys Ile Met Glu Val Leu Phe Leu Cys Trp Leu Phe Pro Arg 275 280 285 Phe Lys Phe Val Trp Val Thr Tyr Ala Ser Trp Leu Trp Trp Ser 290 295 300 Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Ile Gly Gly 305 310 315 Ala Met Leu Ser Leu Thr Val Phe Glu Phe Thr Lys Tyr Lys Tyr 320 325 330 Leu Pro Lys Asn Lys Glu Gly Leu Phe Cys Arg Trp Ser Tyr Thr 335 340 345 Glu Ile Glu Lys Ile Asp Ile Gln Glu Ile Asp Pro Leu Ser Tyr 350 355 360 Asn Tyr Ile Pro Val Asn Ser Asn Asp Asn Glu Ser Arg Leu Tyr 365 370 375 Thr Arg Val Tyr Gln Glu Ser Gln Val Ser Pro Pro Gln Arg Ala 380 385 390 Glu Thr Pro Glu Ala Phe Glu Met Ser Asn Phe Ser Arg Ser Arg 395 400 405 Gln Ser Ser Lys Thr Gln Val Pro Leu Ser Asn Leu Thr Asn Asn 410 415 420 Asp Gln Val Ser Gly Ile Asn Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Gly 425 430 435 Asp Glu Ile Ser Ser Ser Thr Pro Ser Val Phe Glu Asp Glu Pro 440 445 450 Gln Gly Ser Thr Tyr Ala Ala Ser Ser Ala Thr Ser Val Asp Asp 455 460 465 Leu Asp Ser Lys Arg Asn 470

【００７８】配列番号：15 配列の長さ：243 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： TTTGAAAAAT TTGAATTTTA AAATTAATCC AATGGAAAAA ATTGGTATTT GTGGAAGAAC 60 CGGTGCTGGT AAATCATCAA TTATGACAGC ATTATATCGA TTATCAGAAT TAGAACTGGG 120 GAAAATTATT ATTGATGATA TTGATATTTC AACTTTGGGT TTAAAAGATC TTCGATCAAA 180 ATTATCAATT ATTCCTCAAG ATCCAGTATT ATTCCGAGGT TCAATTCGGA AAAACTTGGA 240 TCC 243

【００７９】配列番号：16 配列の長さ：80 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Leu Lys Asn Leu Asn Phe Lys Ile Asn Pro Met Glu Lys Ile Gly 5 10 15 Ile Cys Gly Arg Thr Gly Ala Gly Lys Ser Ser Ile Met Thr Ala 20 25 30 Leu Tyr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Leu Gly Lys Ile Ile Ile Asp 35 40 45 Asp Ile Asp Ile Ser Thr Leu Gly Leu Lys Asp Leu Arg Ser Lys 50 55 60 Leu Ser Ile Ile Pro Gln Asp Pro Val Leu Phe Arg Gly Ser Ile 65 70 75 Arg Lys Asn Leu Asp 80

【００８０】配列番号：17 配列の長さ：1601 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA アンチセンス：YES 配列： AGGAAGATGA CTTGCATCAA AGATGGAGGA AGTGGTACTG GCAGGACGAT CAATCAAATC 60 AGCAGCAGGA CTAGGTAACG GCTCAGGTGA TGATGAACCC ACGGACCATT CATGATCGGT 120 GTTAGCAAGT TCCATATTGT TAAGACCACT CATGAAGGCT ACTGCATTAG GGTTTTGAGT 180 AAAAGAATCC CTTCCAAGTA AGTATGGGCT GCCGGTACGA GCCAAGGAGT TGCTGGTTTT 240 TTCGGAAAGA CCATGACCGT GGATAACAAA CTCGTATTCC CAACGAAGGA TTTTACCAGT 300 TTGCAACTGT GGGAGGCGTA GCTTTTGAGC AAAAACGAAG CATATAATAG CTAAACACAT 360 ACCGCCGACC AAATCTACAA AGTAGTGGTG GGTAAGGTAC ATAGTACACC AGCAAAGCCA 420 TAGAACATAT CCATAAAAGC AGAAGCGGTA TCGAGGAAAC ACATGCGAAA GGAAAAGTGC 480 TTCCAGCATG GCCCATCCAG CGTGAAGAGA TGGAAAGGCA CCAAAAACAA CCGGAGAGTT 540 AGAAAAACCA TCAGTGTAAA TGCTAGTGCC GAAGAGAGCA TCAATACGGG CCAATCCACC 600 AGGAGAGCCA CGTACTGCAT ACGTGGCAGG TTCTAAACCA TACATATTTT CATACCAAGG 660 AGGAGAACAG GGGAAAGCCA TTTGGATAAG AACACCAAAT AAATTCATAT AACCAAAAGT 720 TCGAGCCCAA ACTGGAAGAG TTCCAGGAGG TGCAAAGATG AAAAGAATAA ATGAAATGAT 780 AAAAGGAGCC GAATAATGCA TGACTCCATA TGGAACCCAG GCCAAAATAT CAAGGATGCT 840 ATGCGTGGTT TTCGAGAGAA GACTAGAAAG ATTAGAGCCA TAAAGAATAT TTTCAAGTGT 900 GGGTAAAACA CGAACCCATA TGGGTGGACG CCAGCGTTCT GGAATAAACC TACAAGAGTA 960 AAATAAAATT GCCCAGGTGA TGATAACAAT GGCAGGAAAA AAAATTTGGC GTGTTAAAGG 1020 AACGGTCAAC GCAATGGCCA AAAGACAGGC AATGCCAAAT TTCCCCCAGA ATCCAGGAGA 1080 TTCAATGACA ATACAAGCAA AAATCAAATT ACCTGCTAGA AACACATATT GCAAATGTGT 1140 CCATGACCAT TTCGTATTGC GTAGCAAACG AAATGTAGGC ATAGGGTTTA AGCTTGTTTC 1200 CAACTTGTAT TGGGATGCTC GGTTACACGC AGCAAGGCGC TTTTTTAAGG TCGAAAGAGC 1260 AGACATTGCT TCAAAGAATT ATCAGAGTAA AAAAGGGAAG CGTACGAAAA AAATTTCGTA 1320 AGGAATTAAC CGGAAAACTA AAGGAAAAAA AAGGAATTTT TATGAAGGAA AGAAAGTAGC 1380 TATTAAATGC AAGTGTCAAG CACTTAAAAG TAGCGATGTA AAATATTTAA AAAAAGATGG 1440 ACCGATTAAC CAATGTTCAG CTCACAGTTG CCAGCAATCA GGGCTATTTT TTTATTTTTT 1500 TTATAAAATT GCTAATTATA TATAATATAA TTAGTTTATT AACTTGCTTT TCCTCAAAAA 1560 ACCAATTCGA GAAAGGAACT TTTGCAGAGG CAAAAAAGCT T 1601

【００８１】配列番号：18 配列の長さ：1601 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：mRNA アンチセンス：YES 配列： AGGAAGAUGA CUUGCAUCAA AGAUGGAGGA AGUGGUACUG GCAGGACGAU CAAUCAAAUC 60 AGCAGCAGGA CUAGGUAACG GCUCAGGUGA UGAUGAACCC ACGGACCAUU CAUGAUCGGU 120 GUUAGCAAGU UCCAUAUUGU UAAGACCACU CAUGAAGGCU ACUGCAUUAG GGUUUUGAGU 180 AAAAGAAUCC CUUCCAAGUA AGUAUGGGCU GCCGGUACGA GCCAAGGAGU UGCUGGUUUU 240 UUCGGAAAGA CCAUGACCGU GGAUAACAAA CUCGUAUUCC CAACGAAGGA UUUUACCAGU 300 UUGCAACUGU GGGAGGCGUA GCUUUUGAGC AAAAACGAAG CAUAUAAUAG CUAAACACAU 360 ACCGCCGACC AAAUCUACAA AGUAGUGGUG GGUAAGGUAC AUAGUACACC AGCAAAGCCA 420 UAGAACAUAU CCAUAAAAGC AGAAGCGGUA UCGAGGAAAC ACAUGCGAAA GGAAAAGUGC 480 UUCCAGCAUG GCCCAUCCAG CGUGAAGAGA UGGAAAGGCA CCAAAAACAA CCGGAGAGUU 540 AGAAAAACCA UCAGUGUAAA UGCUAGUGCC GAAGAGAGCA UCAAUACGGG CCAAUCCACC 600 AGGAGAGCCA CGUACUGCAU ACGUGGCAGG UUCUAAACCA UACAUAUUUU CAUACCAAGG 660 AGGAGAACAG GGGAAAGCCA UUUGGAUAAG AACACCAAAU AAAUUCAUAU AACCAAAAGU 720 UCGAGCCCAA ACUGGAAGAG UUCCAGGAGG UGCAAAGAUG AAAAGAAUAA AUGAAAUGAU 780 AAAAGGAGCC GAAUAAUGCA UGACUCCAUA UGGAACCCAG GCCAAAAUAU CAAGGAUGCU 840 AUGCGUGGUU UUCGAGAGAA GACUAGAAAG AUUAGAGCCA UAAAGAAUAU UUUCAAGUGU 900 GGGUAAAACA CGAACCCAUA UGGGUGGACG CCAGCGUUCU GGAAUAAACC UACAAGAGUA 960 AAAUAAAAUU GCCCAGGUGA UGAUAACAAU GGCAGGAAAA AAAAUUUGGC GUGUUAAAGG 1020 AACGGUCAAC GCAAUGGCCA AAAGACAGGC AAUGCCAAAU UUCCCCCAGA AUCCAGGAGA 1080 UUCAAUGACA AUACAAGCAA AAAUCAAAUU ACCUGCUAGA AACACAUAUU GCAAAUGUGU 1140 CCAUGACCAU UUCGUAUUGC GUAGCAAACG AAAUGUAGGC AUAGGGUUUA AGCUUGUUUC 1200 CAACUUGUAU UGGGAUGCUC GGUUACACGC AGCAAGGCGC UUUUUUAAGG UCGAAAGAGC 1260 AGACAUUGCU UCAAAGAAUU AUCAGAGUAA AAAAGGGAAG CGUACGAAAA AAAUUUCGUA 1320 AGGAAUUAAC CGGAAAACUA AAGGAAAAAA AAGGAAUUUU UAUGAAGGAA AGAAAGUAGC 1380 UAUUAAAUGC AAGUGUCAAG CACUUAAAAG UAGCGAUGUA AAAUAUUUAA AAAAAGAUGG 1440 ACCGAUUAAC CAAUGUUCAG CUCACAGUUG CCAGCAAUCA GGGCUAUUUU UUUAUUUUUU 1500 UUAUAAAAUU GCUAAUUAUA UAUAAUAUAA UUAGUUUAUU AACUUGCUUU UCCUCAAAAA 1560 ACCAAUUCGA GAAAGGAACU UUUGCAGAGG CAAAAAAGCU U 1601

【００８２】配列番号：19 配列の長さ：12 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Cys Phe Thr Ser Ser Tyr Phe Pro Asp Asp Arg Arg 5 10

【００８３】配列番号：20 配列の長さ：19 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Cys Tyr Thr Ser Ile Glu Lys Tyr Asp Ile Ser Lys Ser Asp Pro 5 10 15 Leu Ala Ala Asp

【００８４】配列番号：21 配列の長さ：1553 配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 配列： TTTTACATAT ATTATTCACC CAATATCATA ACAAAAACAA ACTGAATGAT GGCATCTTCT 60 ATTTTGCGTT CCAAAATAAT ACAAAAACCG TACCAATTAT TCCACTACTA TTTTCTTCTG 120 GAGAAGGCTC CTGGTTCTAC AGTTAGTGAT TTGAATTTTG ATACAAACAT ACAAACGAGT 180 TTACGTAAAT TAAAGCATCA TCATTGGACG GTGGGAGAAA TATTCCATTA TGGGTTTTTG 240 GTTTCCATAC TTTTTTTCGT GTTTGTGGTT TTCCCAGCTT CATTTTTTAT AAAATTACCA 300 ATAATCTTAG CATTTGCTAC TTGTTTTTTA ATACCCTTAA CATCACAATT TTTTCTTCCT 360 GCCTTGCCCG TTTTCACTTG GTTGGCATTA TATTTTACGT GTGCTAAAAT ACCTCAAGAA 420 TGGAAACCAG CTATCACAGT TAAAGTTTTA CCAGCTATGG AAACAATTTT GTACGGCGAT 480 AATTTATCAA ATGTTTTGGC AACCATCACT ACCGGAGTGT TAGATATATT GGCATGGTTA 540 CCATATGGGA TTATTCATTT CAGTTTCCCA TTTGTACTTG CTGCTATTAT ATTTTTATTT 600 GGGCCACCGA CGGCATTAAG ATCATTTGGA TTTGCCTTTG GTTATATGAA CTTGCTTGGA 660 GTCTTGATTC AAATGGCATT CCCAGCTGCT CCTCCATGGT ACAAAAACTT GCACGGATTA 720 GAACCAGCTA ATTATTCAAT GCACGGGTCT CCTGGTGGAC TTGGAAGGAT AGATAAATTG 780 TTAGGTGTTG ATATGTATAC CACAGGGTTT TCCAATTCAT CAATCATTTT TGGGGCATTC 840 CCATCGTTAC ATTCAGGATG TTGTATCATG GAAGTGTTAT TTTTGTGTTG GTTGTTTCCA 900 CGATTCAAGT TTGTGTGGGT TACATACGCA TCTTGGCTTT GGTGGAGCAC GATGTATTTG 960 ACCCATCACT ACTTTGTCGA TTTGATTGGT GGAGCCATGC TATCTTTGAC TGTTTTTGAA 1020 TTCACCAAAT ATAAATATTT GCCAAAAAAC AAAGAAGGCC TTTTCTGTCG TTGGTCATAC 1080 ACTGAAATTG AAAAAATCGA TATCCAAGAG ATTGACCCTT TATCATACAA TTATATCCCT 1140 GTCAACAGCA ATGATAATGA AAGCAGATTG TATACGAGAG TGTACCAAGA GCCTCAGGTT 1200 AGTCCCCCAC AGAGAGCTGA AACACCTGAA GCATTTGAGA TGTCAAATTT TTCTAGGTCT 1260 AGACAAAGCT CAAAGACTCA GGTTCCATTG AGTAATCTTA CTAACAATGA TCAAGTGCCT 1320 GGAATTAACG AAGAGGATGA AGAAGAAGAA GGCGATGAAA TTTCGTCGAG TACTCCTTCG 1380 GTGTTTGAAG ACGAACCACA GGGTAGCACA TATGCTGCAT CCTCAGCTAC ATCAGTAGAT 1440 GATTTGGATT CCAAAAGAAA TTAGTAAAAC AGCAGTTTCT ATTAATTTCT TTATTTCCTC 1500 CTAATTAATG ATTTTATGTT CAATACCTAC ACTATCTGTT TTTAATTTCC TAC 1553

【００８５】配列番号：22 配列の長さ：472 配列の型：アミノ酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列： Met Met Ala Ser Ser Ile Leu Arg Ser Lys Ile Ile Gln Lys Pro 1 5 10 15 Tyr Gln Leu Phe His Tyr Tyr Phe Leu Leu Glu Lys Ala Pro Gly 20 25 30 Ser Thr Val Ser Asp Leu Asn Phe Asp Thr Asn Ile Gln Thr Ser 35 40 45 Leu Arg Lys Leu Lys His His His Trp Thr Val Gly Glu Ile Phe 50 55 60 His Tyr Gly Phe Leu Val Ser Ile Leu Phe Phe Val Phe Val Val 65 70 75 Phe Pro Ala Ser Phe Phe Ile Lys Leu Pro Ile Ile Leu Ala Phe 80 85 90 Ala Thr Cys Phe Leu Ile Pro Leu Thr Ser Gln Phe Phe Leu Pro 95 100 105 Ala Leu Pro Val Phe Thr Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Thr Cys Ala 110 115 120 Lys Ile Pro Gln Glu Trp Lys Pro Ala Ile Thr Val Lys Val Leu 125 130 135 Pro Ala Met Glu Thr Ile Leu Tyr Gly Asp Asn Leu Ser Asn Val 140 145 150 Leu Ala Thr Ile Thr Thr Gly Val Leu Asp Ile Leu Ala Trp Leu 155 160 165 Pro Tyr Gly Ile Ile His Phe Ser Phe Pro Phe Val Leu Ala Ala 170 175 180 Ile Ile Phe Leu Phe Gly Pro Pro Thr Ala Leu Arg Ser Phe Gly 185 190 195 Phe Ala Phe Gly Tyr Met Asn Leu Leu Gly Val Leu Ile Gln Met 200 205 210 Ala Phe Pro Ala Ala Pro Pro Trp Tyr Lys Asn Leu His Gly Leu 215 220 225 Glu Pro Ala Asn Tyr Ser Met His Gly Ser Pro Gly Gly Leu Gly 230 235 240 Arg Ile Asp Lys Leu Leu Gly Val Asp Met Tyr Thr Thr Gly Phe 245 250 255 Ser Asn Ser Ser Ile Ile Phe Gly Ala Phe Pro Ser Leu His Ser 260 265 270 Gly Cys Cys Ile Met Glu Val Leu Phe Leu Cys Trp Leu Phe Pro 275 280 285 Arg Phe Lys Phe Val Trp Val Thr Tyr Ala Ser Trp Leu Trp Trp 290 295 300 Ser Thr Met Tyr Leu Thr His His Tyr Phe Val Asp Leu Ile Gly 305 310 315 Gly Ala Met Leu Ser Leu Thr Val Phe Glu Phe Thr Lys Tyr Lys 320 325 330 Tyr Leu Pro Lys Asn Lys Glu Gly Leu Phe Cys Arg Trp Ser Tyr 335 340 345 Thr Glu Ile Glu Lys Ile Asp Ile Gln Glu Ile Asp Pro Leu Ser 350 355 360 Tyr Asn Tyr Ile Pro Val Asn Ser Asn Asp Asn Glu Ser Arg Leu 365 370 375 Tyr Thr Arg Val Tyr Gln Glu Pro Gln Val Ser Pro Pro Gln Arg 380 385 390 Ala Glu Thr Pro Glu Ala Phe Glu Met Ser Asn Phe Ser Arg Ser 395 400 405 Arg Gln Ser Ser Lys Thr Gln Val Pro Leu Ser Asn Leu Thr Asn 410 415 420 Asn Asp Gln Val Pro Gly Ile Asn Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu 425 430 435 Gly Asp Glu Ile Ser Ser Ser Thr Pro Ser Val Phe Glu Asp Glu 440 445 450 Pro Gln Gly Ser Thr Tyr Ala Ala Ser Ser Ala Thr Ser Val Asp 455 460 465 Asp Leu Asp Ser Lys Arg Asn 470

【図面の簡単な説明】

【図１】オーレオバシジン感受性関連遺伝子spaur1^R及
びspaur1^Sの制限酵素地図を示す図である。

【図２】scaur1^R及びscaur1^Sの制限酵素地図を示す図
である。

【図３】scaur2^R及びscaur2^Sの制限酵素地図を示す図
である。

【図４】schizo. ポンベのspaur1^S遺伝子破壊用ＤＮＡ
の構造を示す図である。

【図５】Ｓ．セレビシエのscaur1^S遺伝子破壊用ＤＮＡ
の構造を示す図である。

【図６】ＰＣＲによるＣ．アルビカンスの有するaur1遺
伝子caaur1の検出結果を示す図である。

【図７】Ｃ．アルビカンスの有するcaaur1遺伝子の制限
酵素地図を示す図である。

【図８】caaur2遺伝子の制限酵素地図を示す図である。

【図９】scaur1遺伝子発現用プラスミドＹＥｐＳＣＡＲ
Ｗ３の構造を示す図である。

【図１０】schizo. ポンベのspaur1遺伝子のノーザンハ
イブリダイゼーションの結果を示す図である。

【図１１】抗体によるscaur1蛋白の検出の結果を示す図
である。

【図１２】ｐＡＲ２５の制限酵素地図を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｑ 1/18 Ｃ１２Ｑ 1/18 1/68 1/68 ＡＧ０１Ｎ 33/563 Ｇ０１Ｎ 33/563 //(Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｒ 1:865） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:865） (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/31 C07K 14/39 C07K 16/14 C12N 1/19 C12P 21/02 C12Q 1/18 C12Q 1/68 G01N 33/563 ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳｅｑＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ／Ｌ（ＱＵＥＳＴＥＬ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】配列表の配列番号１、５、９、１３又は
１５で示される塩基配列から選択される塩基配列、ある
いは該配列に１以上の塩基の置換、欠失、付加、挿入の
うちの少なくとも１つを有する塩基配列で示され、かつ
オーレオバシジン感受性又は耐性を付与する蛋白質をコ
ードすることを特徴とするオーレオバシジン感受性関連
遺伝子。
【請求項２】配列表の配列番号１、５、９、１３又は
!５で示される塩基配列から選択される塩基配列にコー
ドされるアミノ酸配列、あるいは該配列に１以上のアミ
ノ酸の置換、欠失、付加、挿入のうちの少なくとも１つ
を有するアミノ酸配列で示され、かつオーレオバシジン
感受性又は耐性を付与する蛋白質をコードすることを特
徴とするオーレオバシジン感受性関連遺伝子。
【請求項３】配列表の配列番号１、５、９、１３又は
１５で示される塩基配列とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズし、かつオーレオバシジン感受性又は耐
性を付与する蛋白質をコードする遺伝子。
【請求項４】配列表の配列番号３、７又は２１から選
択される塩基配列で示されることを特徴とする請求項３
記載の遺伝子。
【請求項５】下記（１）〜（５）に示す制限酵素地図
で表される、それぞれシゾサッカロミセスポンベ由来
（１）、サッカロミセスセレビシエ由来（２）、サッ
カロミセスセレビシエ由来（３）、カンジダアルビ
カンス由来（４）、カンジダアルビカンス由来（５）
のＤＮＡ断片に含有されているオーレオバシジン感受性
又は耐性を付与する蛋白質をコードする遺伝子。（１）（２）（３）（４）（５）
【請求項６】請求項５記載の遺伝子とストリンジェン
トな条件下でハイブリダイズし、かつオーレオバシジン
感受性又は耐性を付与する蛋白質をコードする遺伝子。
【請求項７】請求項１、３〜６のいずれか１項に記載
の遺伝子をプローブとして用いることを特徴とするオー
レオバシジン感受性又は耐性を付与する蛋白質をコード
する遺伝子のクローニング方法。
【請求項８】請求項１、３〜６のいずれか１項に記載
の遺伝子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
可能な１５塩基以上の請求項１、３〜６のいずれか１項
に記載の遺伝子の部分配列よりなる核酸プローブ。
【請求項９】請求項１、３〜６のいずれか１項に記載
の遺伝子に相補的なオーレオパシジン感受性又は耐性を
付与する蛋白質をコードする遺伝子のアンチセンスＤＮ
Ａ。
【請求項１０】請求項１、３〜６のいずれか１項に記
載の遺伝子に相補的なオーレオパシジン感受性又は耐性
を付与する蛋白質をコードする遺伝子のアンチセンスＲ
ＮＡ。、
【請求項１１】請求項１〜６のいずれか１項に記載の
遺伝子を含有させた組換体プラスミド。
【請求項１２】請求項１１記載の組換体プラスミドを
導入させた形質転換体。
【請求項１３】請求項１２記載の形質転換体を培養
し、該培養物からオーレオーバシジン感受性又は耐性を
付与する蛋白質を採取することを特徴とするオーレオバ
シジン感受性又は耐性を付与する蛋白質の製造方法。
【請求項１４】請求項１〜６のいずれか１項に記載の
遺伝子がコードするオーレオバシジン感受性又は耐性を
付与する蛋白質。
【請求項１５】配列表の配列番号２、４，６、８、１
０、１４又は２２から選択されるアミノ酸配列で示され
ることを特徴とする請求項１４記載の蛋白質。
【請求項１６】請求項１４又は１５記載の蛋白質に対
する抗体。
【請求項１７】請求項１６記載の抗体を用いる、請求
項１４又は１５に記載のオーレオバシシン感受性又は耐
性を付与する蛋白質の検出方法。
【請求項１８】請求項１、３〜６のいずれか１項に記
載の遺伝子又は請求項８記載の核酸プローブをプローブ
として用い、当該プローブとのストリンジェントな条件
下でのハイブリダイズを測定する工程を包含する、請求
項１〜６のいずれか１項に記載のオーレオバシジン感受
性又は耐性を付与する蛋白質をコードする遺伝子の検出
方法。
【請求項１９】請求項１２記載の形質転換体を用い、
被検抗真菌活性を有する物質の当該形質転換体への抗菌
活性を測定する工程を包含する、抗真菌物質のスクリー
ニング方法。