JP3016794B2 - ヒトパピローマウイルスタイプ５７、そのｄｎａおよびそれによってコードされるタンパク質 - Google Patents
ヒトパピローマウイルスタイプ５７、そのｄｎａおよびそれによってコードされるタンパク質Info
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Description
【発明の詳細な説明】 ヒトパピローマ（乳頭腫）ウイルス（HPV）は、50種
以上の異なるタイプのグループを形成する。HPVは、良
性（疣、外陰部領域の湿疣）および悪性（皮膚および膣
の癌腫）上皮腫瘍に関連して見出されてきた。パピロー
マウイルスは、培養では増殖できない。したがって、遺
伝子操作の方法が、ヒトパピローマウイルスタイプ57DN
A（HPV57DNA）の診断補助物としておよび発現産生物の
獲得のための使用、抗原としてのそれらの使用、抗体の
単離、および対応する診断補助物および治療剤の調製の
ために、要求される。
以上の異なるタイプのグループを形成する。HPVは、良
性（疣、外陰部領域の湿疣）および悪性（皮膚および膣
の癌腫）上皮腫瘍に関連して見出されてきた。パピロー
マウイルスは、培養では増殖できない。したがって、遺
伝子操作の方法が、ヒトパピローマウイルスタイプ57DN
A（HPV57DNA）の診断補助物としておよび発現産生物の
獲得のための使用、抗原としてのそれらの使用、抗体の
単離、および対応する診断補助物および治療剤の調製の
ために、要求される。
本発明は、HPV57の初めての単離、そのゲノムの部分
的特徴付け、およびpUC19におけるクローニングに基づ
いている。これによって、HPV57に関連のある腫瘍（口
腔、生殖器部分および皮膚の腫瘍）の診断の道が開け
る。
的特徴付け、およびpUC19におけるクローニングに基づ
いている。これによって、HPV57に関連のある腫瘍（口
腔、生殖器部分および皮膚の腫瘍）の診断の道が開け
る。
本発明は、特許請求の範囲に定義される通りである。
本発明のさらなる態様は、以下に詳述される通りであ
る。
本発明のさらなる態様は、以下に詳述される通りであ
る。
HPV57のクローニングによって、56の他のHPVとの比較
が可能になった。HPV2およびHPV27はきわめて密接に関
連していて、液相でのハイブリダイゼーションでは、そ
れぞれ17％および25％の相同性を示した。HPV57の、HPV
2およびHPV27との共直線性（colinearity）を決定して
（第１図）、制限酵素切断部位の物理的ゲノム地図（第
２図）を構築した。
が可能になった。HPV2およびHPV27はきわめて密接に関
連していて、液相でのハイブリダイゼーションでは、そ
れぞれ17％および25％の相同性を示した。HPV57の、HPV
2およびHPV27との共直線性（colinearity）を決定して
（第１図）、制限酵素切断部位の物理的ゲノム地図（第
２図）を構築した。
これは、腫瘍（生殖器および皮膚の腫瘍）、とくに頭
の腫瘍、をHPV57の存在について試験するための道を開
き、また適切な場合には、HPV57タンパク質に対する抗
体を介しての治療的アプローチを可能にした。
の腫瘍、をHPV57の存在について試験するための道を開
き、また適切な場合には、HPV57タンパク質に対する抗
体を介しての治療的アプローチを可能にした。
例 1. エピソームHPV57DNAの単離 高分子量のDNAを記載の用法（Gissmannら：（198
2）、Int.J.Cancer 29、143−146）にて上顎洞（maxill
ary sinus）の反転させた乳頭腫（inverted papillom
a）から単離した。
2）、Int.J.Cancer 29、143−146）にて上顎洞（maxill
ary sinus）の反転させた乳頭腫（inverted papillom
a）から単離した。
2. プラスミドpUC19におけるHPV57のクローニング 既知のプラスミドpUC19（Vanish−Perronら：（198
5）、Gene 33、113−119）をクローニングベクターとし
て選択した。HPV57を含む細胞性二本鎖DNAをEcoR Iで切
断して、次いで、pUC19（Maniatisら：（1982）、Molec
ular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harb
or Laboratory Press、New York）にクローニングし
た。組換えクローンをβ−ガラクトシダーゼ試験（Mess
ingら：（1977）、Proc.Nat.Acad.Sci.USA 75、3641−3
646）にて同定して、直ちにDNAを抽出して、連結された
DNAフラグメントを分析した（H.L.BirnboimおよびJ.Dol
y:（1979）、Nucl.Acids.Res.7、1513−1523）。
5）、Gene 33、113−119）をクローニングベクターとし
て選択した。HPV57を含む細胞性二本鎖DNAをEcoR Iで切
断して、次いで、pUC19（Maniatisら：（1982）、Molec
ular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harb
or Laboratory Press、New York）にクローニングし
た。組換えクローンをβ−ガラクトシダーゼ試験（Mess
ingら：（1977）、Proc.Nat.Acad.Sci.USA 75、3641−3
646）にて同定して、直ちにDNAを抽出して、連結された
DNAフラグメントを分析した（H.L.BirnboimおよびJ.Dol
y:（1979）、Nucl.Acids.Res.7、1513−1523）。
3. HPV57の物理的ゲノム地図 EcoR I切断によってベクターから取り出したHPV57DNA
を、制限エンドヌクレアーゼで消化して、対応する物理
的ゲノム地図を一般に既知の方法にて構築した。その結
果は、第２図に要約する通りである。ここで、唯一のEc
oR I切断部位を用いてHPV57分子を直線化した。表は、
各々の制限酵素フラグメントの長さを示すものである。
を、制限エンドヌクレアーゼで消化して、対応する物理
的ゲノム地図を一般に既知の方法にて構築した。その結
果は、第２図に要約する通りである。ここで、唯一のEc
oR I切断部位を用いてHPV57分子を直線化した。表は、
各々の制限酵素フラグメントの長さを示すものである。
4. 他のHPVとの比較 HPV57ゲノムのDNAを、種々の程度の緊縮度（stringen
cy）下においてのDNA/DNAハイブリダイゼーションによ
って、56種の入手可能なHPVタイプのDNA（E.M.Southern
（1975）、J.Mol.Biol.98、50−517）と比較した。高い
緊縮条件下（融解温度Tm＝−20℃）で、HPV57DNAはHPV2
およびHPV27とハイブリダイズする。
cy）下においてのDNA/DNAハイブリダイゼーションによ
って、56種の入手可能なHPVタイプのDNA（E.M.Southern
（1975）、J.Mol.Biol.98、50−517）と比較した。高い
緊縮条件下（融解温度Tm＝−20℃）で、HPV57DNAはHPV2
およびHPV27とハイブリダイズする。
ハイブリダイゼーション実験を基にしたHPV18との共
直線性（colinearity）は、第１図に示す通りである。
直線性（colinearity）は、第１図に示す通りである。
既知のHPV18DNA配列（Coleら：（1987）、J.Mol.Bio
l.193、599−608）から、HPV57の転写解読枠（open rea
ding frame）を想定することが可能で、したがって、一
般的な方法にてサブクローニングしてから原核細胞また
は真核細胞発現系（system）で発現することによって、
HPV57タンパク質を得ることができる。
l.193、599−608）から、HPV57の転写解読枠（open rea
ding frame）を想定することが可能で、したがって、一
般的な方法にてサブクローニングしてから原核細胞また
は真核細胞発現系（system）で発現することによって、
HPV57タンパク質を得ることができる。
HPV57を含むpUC19プラスミドDNAは、1988年６月13日
にDeutsche Sammlungfr Mikroorganismen（German Mi
croorganism Collection）にブダペスト条約に従って寄
託された。その寄託番号はDSM4694である。
にDeutsche Sammlungfr Mikroorganismen（German Mi
croorganism Collection）にブダペスト条約に従って寄
託された。その寄託番号はDSM4694である。
【図面の簡単な説明】 第１図は、HPV57のHPV2および27との共直線性を図示す
る、説明図である。 第２図は、HPV57ゲノムの制限酵素切断地図を図示す
る、説明図である。環状ゲノムをそのEcoR I切断部位を
介してクローニングした。図中、フラグメントを表す文
字に続く数字は、塩基対（bp）の長さを示す。一つの切
断部位を有する制限酵素は、Xho I、Hind IIおよびSac
Iである。制限酵素Xba I、Sal I、BamH I、Hind IIIお
よびHpa Iは、切断しない。四つの500bpの長さのPst I
フラグメントの正確な位置は決定されなかった。
る、説明図である。 第２図は、HPV57ゲノムの制限酵素切断地図を図示す
る、説明図である。環状ゲノムをそのEcoR I切断部位を
介してクローニングした。図中、フラグメントを表す文
字に続く数字は、塩基対（bp）の長さを示す。一つの切
断部位を有する制限酵素は、Xho I、Hind IIおよびSac
Iである。制限酵素Xba I、Sal I、BamH I、Hind IIIお
よびHpa Iは、切断しない。四つの500bpの長さのPst I
フラグメントの正確な位置は決定されなかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ (72)発明者 ハラルト、ツール、ハウゼン ドイツ連邦共和国ヒルシュベルク、ウン テラー、ホイゼルベルクウェーク、８ (56)参考文献 特開 昭61−216700（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−248492（ＪＰ，Ａ) Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏ ｇｙ，62（１）（1988），ｐ．226−233 Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，145（１) （1985），ｐ．181−185 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏ ｇｙ，58（１）（1986），ｐ．225−229 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＡＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＡＧ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ)
Claims (8)
- 【請求項１】単離されたヒトパピローマウイルス57DNA
であって、第２図に示される制限パターンを特徴とする
単離ヒトパピローマウイルス57DNA、および該ヒトパピ
ローマウイルス57と50％を超える相同性を有する突然変
異体（mutants）および変異体（variants）。 - 【請求項２】寄託番号DSM4694を有するpUC中のヒトパピ
ローマウイルス57DNA。 - 【請求項３】単離されたヒトパピローマウイルス57であ
って、突然変異体および変異体を包含し、請求項１また
は２に記載のヒトパピローマウイルス57DNAを特徴とす
る、単離ヒトパピローマウイルス57。 - 【請求項４】請求項１または２に記載のDNAを遺伝子操
作によって発現させる方法。 - 【請求項５】患者の試料中のヒトパピローマウイルス57
DNAまたはRNAをハイブリダイゼーションにより検出する
ための、請求項１または２に記載のDNAの使用方法。 - 【請求項６】請求項１または２に記載のDNAまたはこのD
NAのヒトパピローマウイルス57特異的配列を含んでなる
診断補助物。 - 【請求項７】請求項３に記載のヒトパピローマウイルス
57のワクチンの生産のための使用方法。 - 【請求項８】ワクチンの生産のための、請求項４に記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3826793A DE3826793A1 (de) | 1988-08-06 | 1988-08-06 | Humaner papillomvirus typ 57, seine dna und die davon kodierten proteine |
| DE3826793.4 | 1988-08-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02150278A JPH02150278A (ja) | 1990-06-08 |
| JP3016794B2 true JP3016794B2 (ja) | 2000-03-06 |
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ID=6360384
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP1204535A Expired - Fee Related JP3016794B2 (ja) | 1988-08-06 | 1989-08-07 | ヒトパピローマウイルスタイプ５７、そのｄｎａおよびそれによってコードされるタンパク質 |
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| Country | Link |
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| EP (1) | EP0354440B1 (ja) |
| JP (1) | JP3016794B2 (ja) |
| AT (1) | ATE124991T1 (ja) |
| AU (1) | AU623424B2 (ja) |
| CA (1) | CA1339268C (ja) |
| DE (2) | DE3826793A1 (ja) |
| ES (1) | ES2076178T3 (ja) |
| FI (1) | FI98467C (ja) |
Families Citing this family (8)
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|---|---|---|---|---|
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| US5447839A (en) * | 1988-09-09 | 1995-09-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Detection of human papillomavirus by the polymerase chain reaction |
| US5639871A (en) * | 1988-09-09 | 1997-06-17 | Roche Molecular Systems, Inc. | Detection of human papillomavirus by the polymerase chain reaction |
| AU778737B2 (en) * | 1999-04-14 | 2004-12-16 | Musc Foundation For Research Development | Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes |
| EP1539245A2 (en) * | 2002-06-26 | 2005-06-15 | The Penn State Research Foundation | Methods and materials for treating human papillomavirus infections |
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| US8080643B2 (en) * | 2006-09-05 | 2011-12-20 | Third Wave Technologies, Inc. | HPV primers |
| EP2576840B1 (en) | 2010-05-25 | 2018-10-17 | QIAGEN Gaithersburg, Inc. | Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1337336C (en) * | 1987-05-26 | 1995-10-17 | Attila T. Lorincz | Human papillomavirus nucleic acid hybridization probes and methods for employing the same |
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1988
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