JP2949354B2 - 変性リポタンパクの測定法及びこれに用いるキット - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は変性リポタンパクの測定法、更に詳細には特
に心筋梗塞等の心疾患や、糖尿病、脳卒中等の脳血管障
害等の各種動脈硬化性疾患の発症因子としての脂質代謝
異常の臨床検査や診断に有用な変性リポタンパクの測定
法及びこれに用いるキットに関する。

〔従来の技術〕

脂質代謝異常とは、リポタンパクの合成、分泌、異化
の過程でこれらのいずれかが異常をきたす状態と定義で
き、これは先天性リポタンパク代謝異常と後天性リポタ
ンパク代謝異常とに分類される。

また、上記脂質代謝異常は、種々の疾患、例えば心筋
梗塞等の心疾患、脳卒中等の脳血管障害等の各種動脈硬
化性疾患等の発症の重大な危険因子（リスクファクタ
ー）とされており、これら疾患の進展、予後等に重大な
影響を及ぼすことが知られており、該脂質代謝異常の検
出は、各種の臨床検査・診断に極めて重要な成果をもた
らす。

従来、上記脂質代謝異常の検出法としては、血液中の
総コレステロール値をパラメーターとするものが最も一
般的に定着している。この方法は、血液中の総コレステ
ロール値を常法、例えば酵素法により測定し、該値が臨
床的及び経験的に設定された域値（正常域）を逸脱する
場合を脂質代謝異常として検出するものである。また近
年、血液中のリポタンパク、即ち脂質とアポタンパクと
の結合物を比重により分画し、このうち特に高比重のリ
ポタンパク（高密度リポタンパク、HDL）のコレステロ
ール値を測定し、このHDL−コレステロール値そのもの
又は該値に対する総コレステロール値から該値を引いた
値、所謂動脈硬化指数を、脂質代謝異常の検出パラメー
ターとする方法も行われている。

しかしながら、現在までに蓄積された多くの免疫学的
調査の結果及び臨床的知見によれば、これら従来の脂質
代謝異常の検出方法は、実際の脂質代謝異常を必ずしも
的確に反映するものではなく、殊に臨床上その意義は低
いことがしばしば指摘されている。即ち、上記従来法は
いずれも総コレステロール値又はこれとHDL−コレステ
ロール値を測定するものであって、これらの測定値はい
ずれも脂質代謝異常とは必ずしも関連しない。特に総コ
レステロール値の高値は虚血性心疾患のリスクファクタ
ーの一つとしての意義は有する〔例えばMed.Clin:North
Am.,58,363−379（2974）参照〕が、疾患と直接結付く
ものではなく、その検出方法による脂質代謝正常群にお
ける疾患の発生や高度脂質代謝異常群における恒常的な
健全性等は、いずれも何ら希なものではない。またHDL
−コレステロール値及びこれを基準とする動脈硬化指数
をパラメーターとする場合も、上記と同様に実際の脂質
代謝異常を必ずしも的確に反映しない〔動脈硬化、14
（４）,931−936（1986）等参照〕。

更に、最近の知見によると実際の脂質代謝異常には、
超低比重リポタンパク（VLDL）等のリポタンパクが生体
内で何らかの作用を受けることにより生成すると考えら
れる変性リポタンパクが、重大な影響を及ぼすという報
告が種々なされている〔例えばHui,D.Y.,Innerarity,T.
L.,＆ Mahley,R.W.,J.Biol.Chem.,259,860−869（198
4）:Gonen B et al.,Diabetes,30,875（1981）等参
照〕。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、この変性リポタンパクを検出できれば、脂質
代謝異常を正確に検出でき、これは該脂質代謝異常をも
たらす各種疾患の的確な診断手段として、殊に疾患の発
見、進展状態、治療効果の把握等の臨床分野において非
常に有効であると考えられる。

本発明者は、総血漿リポタンパクから、アポタンパク
Ａ−Ｉを構成成分とするリポタンパク（アポＡ−Ｉ含有
リポタンパク）及びアポタンパクＢ−100を構成成分と
するリポタンパク（アポＢ−100含有リポタンパク）を
除したものが、上記変性リポタンパクに相当することを
認めると共に、予め調製された抗アポタンパクＡ−Ｉモ
ノクローナル抗体及び抗アポタンパクＢ−100モノクロ
ーナル抗体を含むアフィニティゲル混合物と被検血液と
を接触させる時には上記アポタンパクＡ−Ｉ含有リポタ
ンパク及びアポタンパクＢ−100含有リポタンパクが見
事に系外に除去され、系の脂質測定によって所望の変性
リポタンパク量を容易且つ確実に測定、検出できること
を見出し、特に特許出願した（特願昭63−244987号、特
願平１−231893号）が、さらに新たな変性リポタンパク
の測定方法の開発が望まれている。

〔課題を解決するための手段〕

かかる実情において本発明者は、更に研究を重ねた結
果、検体よりアポタンパクＡ−Ｉ含有リポタンパク及び
アポタンパクＢ−100含有リポタンパク、又はアポタン
パクＢ−100含有リポタンパクを除去した後、残渣に抗
アポタンパクＢポリクローナル抗体を反応させ、これに
結合するリポタンパク量を測定したところ、このリポタ
ンパク量が検体中の変性リポタンパク量をよく反映して
いることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は検体から抗アポタンパクＢ−100
モノクローナル抗体に結合するリポタンパク又は抗アポ
タンパクＢ−100モノクローナル抗体及び抗アポタンパ
クＡ−Ｉモノクローナル抗体に結合するリポタンパクを
除去した残渣より、抗アポタンパクＢポリクローナル抗
体に結合するリポタンパクを検出することを特徴とす
る、検体中の変性リポタンパクの測定法、並びにこれに
用いる変性リポタンパク測定用キットを提供するもので
ある。

本発明測定法において、検体としては血液、特に空腹
時の血清又は血漿が好ましく、これらは被検者より採血
後、常法に従い調製できる。

本発明において、検体から抗アポタンパクＢ−100モ
ノクローナル抗体に結合するリポタンパク、又は抗アポ
タンパクＢ−100モノクローナル抗体及び抗アポタンパ
クＡ−Ｉモノクローナル抗体に結合するリポタンパクを
除去するには、例えば抗アポタンパクＢ−100モノクロ
ーナル抗体を結合させたアフィニティゲル、あるいは抗
アポタンパクＢ−100モノクローナル抗体及び抗アポタ
ンパクＡ−Ｉモノクローナル抗体を結合させたアフィニ
ティゲル混合物に、検体を加えて反応させた後、遠心分
離等によりゲルを除去すればよい。

ここで用いるアフィニティゲルは、通常の方法で調製
できる。すなわち、例えば上記のアフィニティゲルの調
製は、抗アポタンパクＡ−Ｉモノクローナル抗体及び抗
アポタンパクＢ−100モノクローナル抗体のぞれぞれを
ブロモシアン等で活性化させたアフィニティゲルにカッ
プリングさせ、その後両者を混合し、適当な緩衝液にて
平衡化する。ここで用いられる抗体としては、抗ヒトア
ポＡ−Ｉモノクローナル抗体及び抗体ヒトアポＢ−100
モノクローナル抗体（いずれも株式会社日本抗体研究所
製造）を代表例として例示できるが、特にこれらに限定
されるものではない。また用いられるアフィニティゲル
の代表例としては、例えば予めブロモシアン等で活性化
されたセファロース4B（ファルマシア社製）等を例示で
き、カップリング反応は上記ゲルとタンパクとのカップ
リング反応に慣用される常法に従い、通常pH8〜10の範
囲でゲル1ml当たり約１〜10μモルの抗体を用いて、室
温（約20〜25℃）下に２時間以内で実施できる。

このようにして調製されたアフィニティゲルは、その
まま又は振盪及び遠心分離が可能なチューブに予め調製
しておくことが好ましく、また予め適当な緩衝液、例え
ば0.01Mトリス塩酸緩衝液（pH7.4）＋0.15M NaCl等の緩
衝液で上記ゲルを平衡化しておくのが好ましい。更に上
記緩衝液には、例えばアジ化ナトリウム等の通常の保存
剤を含ませることができる。

また、上記アフィニティゲル混合物における抗アポタ
ンパクＡ−Ｉモノクローナル抗体及び抗アポタンパクＢ
−100モノクローナル抗体の配合割合は、特に限定され
るものではなく、適宜決定できるが、通常前者に対して
後者を等量量以上、好ましくは約１〜２倍重量の範囲か
ら選択するのが望ましい。また得られるアフィニティゲ
ル混合物のpHは一般には約７〜7.5の範囲に調整される
のが好適である。

検体から抗アポタンパクＢ−100モノクローナル抗体
に結合するリポタンパク又は抗アポタンパクＢ−100モ
ノクローナル抗体及び抗アポタンパクＡ−Ｉモノクロー
ナル抗体に結合するリポタンパクを除去するための好ま
しい一実施態様によれば、まず前記のアフィニティゲル
（混合物）を振盪及び遠心可能な適当な容器乃至テスト
チューブに入れ、適当な緩衝液で平衡化させた後、該容
器内に所定量の被検血清を加え、室温で静置又は振盪し
て反応させた後、比較的低速度（約800〜1000rpm）で遠
心分離して沈渣を除去し、上清を取得することにより実
施される。この方法における被検血清の使用量は、通常
前記アフィニティゲル（混合物）重量の約1/8重量程
度、好ましくは1/4〜1/16重量程度とするのがよい。

かくして得られた残渣（上記実施態様における上清）
より、抗アポタンパクＢポリクローナル抗体に結合する
リポタンパクを検出するには、抗アポタンパクＢポリク
ローナル抗体を用いた通常の免疫学的手段を採用できる
が、例えば抗アポタンパクＢポリクローナル抗体を固定
化した不溶性担体に上記残渣を接触させ、次いでこれに
標識抗アポタンパクＢポリクローナル抗体を反応させ、
該担体中の反応生成物の標識量を測定することにより行
うのが好ましい。

本発明測定法に使用される抗アポタンパクＢポリクロ
ーナル抗体としては、マウス、ラット、モルモット、ウ
サギ、ヒツジ、ヤギ、馬、牛等の動物にアポタンパクＢ
を感作させて得られる抗血清、これより分離されたイム
ノグロブリン（例えばIgG、IgM等）、その加工品である
Ｆ（ab′）_２、Ｆ（ab′）、Ｆ（ab）などが挙げられ
る。

不溶性担体としては、例えばガラス、ポリスチレン、
ポリエチレン、シリカ、フェノール樹脂、アクリル樹
脂、セルロース、ウレタン樹脂、ポリビニルアルコー
ル、塩化ビニル樹脂、ポリ塩化ビニリデン、ポリプロピ
レン、ポリテレフタレート、ポリカーボネート、ナイロ
ン、フッ素系プラスチック、ポリエステル等の球状又は
多角形粒子；あるいはセルロース、綿、ガラス繊維、ナ
イロン繊維、ビニロン繊維、アクリル繊維、ポリエチレ
ン繊維、ポリエステル繊維等の繊維性のものが挙げられ
る。これらのうち、球状又は多角形粒子が好ましく、そ
の粒径は、免疫反応終了後のB/F分離の容易性を考慮す
ると一般に3mm〜5mmが好ましい。

これらの不溶性担体に抗アポタンパクＢポリクローナ
ル抗体を固定化するには、不溶性担体のもつ吸着性を利
用して自体公知の方法によって抗アポタンパクＢポリク
ローナル抗体を担体の表面に結合させる。例えば、担体
がポリスチレンボールの場合には抗体を入れた緩衝液に
一晩かるく振盪しながら吸着させることによって固相化
する。また担体がガラスビーズの場合には、その表面に
塩基性アミノ酸類を吸着させ、これにグルタルアルデヒ
ド、マレイミド等の架橋剤を結合させ、さらにこの架橋
剤に抗アポタンパクＢポリクローナル抗体を結合させる
ことによって固定化する。

標識抗アポタンパクＢポリクローナル抗体は、抗アポ
タンパクＢポリクローナル抗体を通常の標識剤を用いて
標識することにより調製される。標識剤としては、例え
ばヨウ素アイソトープ（例えば¹²⁵I、¹³¹I）、¹⁴C、ト
リチウム等の放射性アイソトープ；ペルオキシダーゼ、
アルカリフォスファターゼ、ジアホラーゼ、β−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ペニシリナ
ーゼ等の酵素；又はフルオレッセインイソシアネート、
フルオレッセインイソチオシアネート、ローダミン等の
蛍光物質が挙げられるが、このうち酵素が好ましい。こ
れらの標識剤で上記抗アポタンパクＢポリクローナル抗
体を標識するには自体公知の方法が採用される。

また反応生成物中の標識量の測定には、標識剤が酵素
の場合、該酵素の基質及び発色剤を利用し、標識量を吸
光度変化として測定するのが好ましい。かかる基質及び
発色剤としては、標識剤の酵素に対応して、次のものが
例示される。すなわち、ペルオキシダーゼの場合、基質
として過酸化水素が発色剤としてｏ−ジアニシジン、ｏ
−トリジン、４−クロル−１−ナフトル、2,2′−アジ
ノ−３−エチルベンゾチアゾリンスルホネート〔ABT
S〕、３−アミノ−９−エチルカルバゾール、2,7−フル
オレンジアミン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン
ハイドロゾン〔MBTH〕、チラミン等が挙げられ；アルカ
ルフォスファターゼの場合、基質としてｐ−ニトロフェ
ノールリン酸が、発色剤として４−アミノアンチピリン
等が挙げられる。

前記の残渣より、抗アポタンパクＢポリクローナル抗
体に結合するリポタンパクを検出するための一実施態様
を示せば、次の通りである。すなわち、まず、前記の残
渣は、適当な緩衝液に浸漬した抗アポタンパクＢポリク
ローナル抗体（例えば、抗アポタンパクB IgG）結合ポ
リスチレンボールを添加し、約37℃で１〜３時間インキ
ュベート後、該ポリスチレンボールを適当な緩衝液で洗
浄する。次に酵素標識抗アポタンパクＢポリクローナル
抗体（例えばペルオキシダーゼ標識抗アポタンパクB F
（ab′））を含有する緩衝液を添加し、約37℃で0.5〜
２時間インキュベートし、再び該ポリスチレンボールを
適当な緩衝液で洗浄する。次に発色剤（例えばABTS）を
添加してプレインキュベートし、さらに基質（例えば過
酸化水素液）を添加してインキュベートした後、反応を
停止させ、吸光度を測定する。得られた吸光度と対照の
吸光度との差から、検体中の変性リポタンパク量が、測
定できる。

本発明の測定法を実施するにあたっては、予め抗アポ
タンパクＢ−100モノクローナル抗体と抗アポタンパク
Ｂポリクローナル抗体の組み合せ、あるいは抗アポタン
パクＢ−100モノクローナル抗体、抗アポタンパクＡ−
Ｉモノクローナル抗体及び抗アポタンパクＢポリクロー
ナル抗体の組み合せをキットとして供給するのが好まし
い。また、抗アポタンパクＢ−100モノクローナル抗体
及び抗アポタンパクＡ−Ｉモノクローナル抗体はアフィ
ニティゲルとして供給し、抗アポタンパクＢポリクロー
ナル抗体は不溶性担体に固定化したものと、標識したも
のとして供給するのがより好ましい。なお、本発明キッ
トには、更に必要に応じてサッカロースやウシ血清タン
パク等の安定化剤及び／又は保存剤を添加配合できる。
この保存剤はキットの使用に際し実験値に悪影響を与え
ないものから選択され、例えば代表的には希釈したアジ
化ナトリウム（sodium azide）等を使用できる。また本
発明キットには水溶性もしくは水と混和し得るグリセリ
ン、アルコール類、グリコール類、グリコールエーテル
類等を含有させることもできる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、変性リポタンパクを簡便に測定で
き、これを脂質代謝異常のパラメーターとして該異常を
容易且つ有効に検出できる。殊に、血液中の変性リポタ
ンパク量は脂質代謝異常及びその程度を的確に反映する
もであり、本発明による脂質代謝異常の検出によれば、
前記した各種疾患の発見、進展、治療効果の把握等、特
に従来の検出法では把握できなかった心筋梗塞等の心疾
患や肥満等の病態の把握を十分且つ有効に行い得る。

〔実施例〕

次に参考例及び実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明する。

参考例１ 抗アポタンパクＢポリクローナル抗体の調製 調製LDL（シグマ社製）2mg/mlとフロイントの完全ア
ジュバント（Freund's Complete adjuvant）（半井化学
社製）を等量混合し、ウサギ四肢、及び背中の皮内数十
ケ所に注射して免疫した。２ケ月〜３ケ月の間に５〜６
回同様に投与した。最終投与２週間後に全血液を採取
し、その血清を用いた。

参考例２ 抗ヒトアポタンパクＢポリクローナル抗体固
定化ポリスチレンボールの調製 参考例１で得られた血清を飽和硫酸アンモニウムで塩
析分画し、沈澱を少量のPBS緩衝液に溶解して、同緩衝
液に対して４℃で24〜48時間、外液を数回交換しながら
透析を行った。透析後４℃、3000rpm、10分間遠心分離
を行った上清をプレフィルターを通し、0.0175M PBS（p
H6.3）で平衡化したDEAEセルロースに付加した。溶出し
てくる画分を吸光度280nmで測定し、タンパク画分を集
めこれに0.1M PBSを1/9量加えて４℃で保存した。

参考例３ ペルオキシダーゼ標識ヒトアポタンパクＢポ
リクローナル抗体の調製 a.ポリクローナル抗体の前処理 参考例１で得られた精製抗体を0.1M NaClを含む0.1M
酢酸ナトリウム緩衝液（pH4.5）に対して透析をした。
この溶液にブタ胃・ペプシンをIgG量の４％添加溶解
し、37℃で約18時間反応させ、次いで0.1M NaOHでpH7.0
に調整して、0.1M NaClを含む0.1Mリン酸ナトリウム緩
衝液（pH7.0）で平衡化したTSKgel G3000W（21.5mm×60
cm）のカラムに付した。Ｆ（ab′）のピークを回収後、
これを限外濾過により約5mg/mlにまで濃縮し、5mM EDTA
を含む0.1Mリン酸緩衝液（pH6.0）で透析を行った。透
析後、0.1M 2−メルカプトエチルアミン、及び5mM EDTA
を含む0.1Mリン酸緩衝液（pH6.0）を10分の１容添加
し、37℃、90分反応させた。ついでこれを50mM EDTA、
及び0.1M NaClを含む0.1Mリン酸緩衝液で平衡化したTSK
gel G3000SWに付与し、Ｆ（ab′）画分を回収した。回
収したＦ（ab′）画分を限外濾過で濃縮して、2.5mM ED
TAを含む0.1Mリン酸緩衝液で透析しペルオキシダーゼ標
識に供した。

b. ペルオキシダーゼの処理 Ｎ−サクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチ
ル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート2.5mgをN,N
−ジメチルホルムアミドの150μに溶解した溶液を、
0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）1.5mlに10mgの西洋ワサビ・
ペルオキシダーゼ（HRP）を溶解した液に入れ30℃60分
間反応させた。ついで反応液に存在する沈澱を遠心分離
によって除去し、0.1Mリン酸緩衝液で平衡化したTSKgel
G3000SWに付与し、マレイミド・HRP画分を回収後、こ
れを濃縮して2.5mM EDTAを含む0.1Mリン酸緩衝液で透析
した。

c. HRP標識 ａで得られたＦ（ab′）4mgとマレイミドHRP3.6mgを
混合し、2.5mM EDTAを含む0.1Mリン酸緩衝液を加えて2.
0mlとし、30℃で１時間反応させた後、50nM N−エチル
マレイミドを20μ加えた。次いで0.1M NaClを含む0.1
Mリン酸緩衝液で平衡化したTSKgel G3000SWXL（7.8mm×
30cm）に付与し、FRP−Ｆ（ab′）の画分を回収した。
これを回収したFRP−Ｆ（ab′）画分をPBS（−）で透析
後、2mg/mlのチメロサールを100分の１添加し、分注し
て−20℃で保存した。

実施例１ （１） 患者又は健常人より空腹時EDTA採血し、遠心分
離（2500〜3000rpm）して血漿を得た。

得られた各血漿について、トリグリセライド量を酵素
法（TG−555、協和メディクス社製）により測定した。
またコレステロール量を酵素法（Mereko Test CHO、関
東化学社製、2ml/10μ血漿、37℃、10分間インキュベ
ート）により測定（365nmでの吸光度測定）した。

（２） 上記血漿20μを試験管に加え、抗ヒトアポＡ
−Ｉモノクローナル抗体及び抗ヒトアポＢ−100モノク
ローナル抗体（ともに、株式会社日本抗体研究所製）を
それぞれ結合させたアフィニティゲル（ゲル1ml当り各
抗体をタンパク量として10mgずつカップリング反応させ
たブロムシアン活性化セファロース−4B）を含有する反
応液（各ゲルを等量の0.01M PBS（pH7.4）に混和して調
製したもの、各抗体のそれぞれ80μを含む）600μ
を分注し、振盪を30分間行い、その後15分間静置して上
清200μを分取した。

（３） 上記（２）の操作をアフィニティゲルとして、
抗ヒトアポＢ−100モノクローナル抗体のみを結合させ
たアフィニティゲル（調製手段は、抗体として抗ヒトア
ポＢ−100モノクローナル抗体のみを使用する以外は前
記（２）と同様）を用いる以外は、上記（２）と同様に
して上清300μを得た。

（４） 上記上清300μに抗アポB IgG固定化ポリスチ
レンボール〔牛血清アルブミン0.1％、塩化ナトリウム
0.1Mを含むリン酸緩衝液（0.01M,pH7.0）に浸漬したも
の〕を１個加え、37℃で２時間インキュベートした。ア
スピレータで反応液を除き、ポリスチレンボールをリン
酸緩衝液2mlで２回洗浄した。次いでペルオキシダーゼ
標識抗アポB F（ab′）のリン酸緩衝液（0.1M,pH6.5）3
00μ加え、37℃で１時間インキュベートした。再度ア
スピレータで反応液を除き、ポリスチレンボールをリン
酸緩衝液2mlで２回洗浄した。2,2′−アジノ−３−エチ
ルベンゾチアゾリンスルホネート〔ABTS〕0.13mgを含む
緩衝液（0.01Mクエン酸三ナトリウム及び0.01Mリン酸緩
衝液）にポリスチレンボールを加え、37℃で２分間プレ
インキュベートした。さらに0.02％過酸化水素水200μ
を加え、37℃で６分間インキュベートした。次に0.05
％アジ化ナトリウム液200μを加えて反応を停止さ
せ、波長405nmにおける吸光度を測定した。

（５） 上記の試験を健常人５名及び脂質代謝異常患者
５名の血液を用いて行った結果を第１表に示す。

第１表より、本発明の結果は、コレステロール値に比
べてトリグリセライド値と高い相関を有しており、この
ことより、外因性脂質代謝異常の一つの指標であるカイ
ロミクロンレムナント及び内因性脂質代謝異常の一つの
指標である異常VLDL（β−）を反映する変性リポタンパ
クの検出が行い得ることが確認できた。

また、上記（２）の上清を用いた場合と（３）の上清
を用いた場合の相関関係を第１図に示す。その結果、
（２）の上清を用いた場合と（３）の上清を用いた場合
には極めて高い相関性が認められた。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１において（２）の上清を用いて変性リ
ポタンパクを測定した場合（縦軸）と（３）の上清を用
いて変性リポタンパクを測定した場合（横軸）との相関
図である。

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】検体から抗アポタンパクＢ−100モノクロ
   ーナル抗体に結合するリポタンパク又は抗アポタンパク
   Ｂ−100モノクローナル抗体及び抗アポタンパクＡ−Ｉ
   モノクローナル抗体に結合するリポタンパクを除去した
   残渣より、抗アポタンパクＢポリクローナル抗体に結合
   するリポタンパクを検出することを特徴とする検体中の
   変性リポタンパクの測定法。
2. 【請求項２】抗アポタンパクＢポリクローナル抗体に結
   合するリポタンパクの検出が、抗アポタンパクＢポリク
   ローナル抗体を固定化した不溶性担体に請求項１記載の
   残渣を接触させ、次いでこれに標識抗アポタンパクＢポ
   リクローナル抗体を反応させ、該担体中の反応生成物の
   標識量を測定するものである請求項１記載の測定法。
3. 【請求項３】抗アポタンパクＢ−100モノクローナル抗
   体、抗アポタンパクＡ−Ｉモノクローナル抗体及び抗ア
   ポタンパクＢポリクローナル抗体を含有する変性リポタ
   ンパク測定用キット。