JP2833740B2 - 易水溶性クロロフィルの製造方法 - Google Patents
易水溶性クロロフィルの製造方法Info
- Publication number
- JP2833740B2 JP2833740B2 JP7968796A JP7968796A JP2833740B2 JP 2833740 B2 JP2833740 B2 JP 2833740B2 JP 7968796 A JP7968796 A JP 7968796A JP 7968796 A JP7968796 A JP 7968796A JP 2833740 B2 JP2833740 B2 JP 2833740B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chlorophyll
- algae
- water
- soluble
- soluble chlorophyll
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は易水溶性クロロフィルに
関し、それは食品および医薬品等に広く利用することが
できる。
関し、それは食品および医薬品等に広く利用することが
できる。
【０００２】
【従来の技術】クロロフィリン類の一つである銅クロロ
フィリンナトリウムは天然物由来の緑色色素として食品
の着色料、歯磨きやチューインガムなどの消臭用、また
胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍など消化性潰瘍の治療剤等
に葉緑素として広く用いられている。またトリプＰ２を
はじめとする変異原性物質の多くを吸着除去する作用も
認められており、その機能性は高く評価されるものであ
る。さらにＸ線撮影の造影剤として用いる事も検討され
ている。
フィリンナトリウムは天然物由来の緑色色素として食品
の着色料、歯磨きやチューインガムなどの消臭用、また
胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍など消化性潰瘍の治療剤等
に葉緑素として広く用いられている。またトリプＰ２を
はじめとする変異原性物質の多くを吸着除去する作用も
認められており、その機能性は高く評価されるものであ
る。さらにＸ線撮影の造影剤として用いる事も検討され
ている。
【０００３】現在、銅クロロフィリンの製造法として
は、ホウレン草、コンフリー、アルファルファーなどの
食用あるいは飼料用植物や、クロレラ、スピルリナ等の
微細藻類よりクロロフィル、クロロフィルの脱マグネシ
ウムしたフェオフィチン、クロロフィルの脱フィトール
したクロロフィリド、脱マグネシウムと脱フィトールし
たフェオホルバイドとして抽出し、酸性条件下において
すべて完全に脱マグネシウムし、銅イオンを加えて後、
水酸化ナトリウムでアルカリ性として、化学構造上の中
心金属に銅を入れると共にポルフィリン環をナトリウム
塩とすることにより製造されている。
は、ホウレン草、コンフリー、アルファルファーなどの
食用あるいは飼料用植物や、クロレラ、スピルリナ等の
微細藻類よりクロロフィル、クロロフィルの脱マグネシ
ウムしたフェオフィチン、クロロフィルの脱フィトール
したクロロフィリド、脱マグネシウムと脱フィトールし
たフェオホルバイドとして抽出し、酸性条件下において
すべて完全に脱マグネシウムし、銅イオンを加えて後、
水酸化ナトリウムでアルカリ性として、化学構造上の中
心金属に銅を入れると共にポルフィリン環をナトリウム
塩とすることにより製造されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、銅クロ
ロフィリンは重量の４〜６％の銅を含有する。天然クロ
ロフィルに中心金属として含まれるマグネシウムとは異
なり銅は多量に摂取すると人体に対し有害であることは
一般に良く知られている。そこで、着色料として少量を
用いる場合には問題はないものの、医薬品として、また
機能性材料としての利用には大きな問題が生じる。とこ
ろが中心金属にマグネシウムを有するクロロフィル類は
光に対して極めて不安定であり、光分解して退色し、着
色料として利用できなくなるだけでなく、その機能をも
喪失してしまうものと言える。また、クロロフィルの分
解により生じるフェオホルバイドは光過敏症の原因物質
であり、その毒性が認められている。
ロフィリンは重量の４〜６％の銅を含有する。天然クロ
ロフィルに中心金属として含まれるマグネシウムとは異
なり銅は多量に摂取すると人体に対し有害であることは
一般に良く知られている。そこで、着色料として少量を
用いる場合には問題はないものの、医薬品として、また
機能性材料としての利用には大きな問題が生じる。とこ
ろが中心金属にマグネシウムを有するクロロフィル類は
光に対して極めて不安定であり、光分解して退色し、着
色料として利用できなくなるだけでなく、その機能をも
喪失してしまうものと言える。また、クロロフィルの分
解により生じるフェオホルバイドは光過敏症の原因物質
であり、その毒性が認められている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らの研究の結
果、藻類を培養し、その藻体内においてクロロフィルａ
およびクロロフィルｂより易水溶性クロロフィルを合成
させた後、抽出、精製を行なって回収した物質が水溶性
であるばかりでなく、光に対して高い安定性を有し、さ
らに、本発明の物質は光過敏症の原因物質であるフェオ
ホルバイドには、その化学構造上なり得ず、安全性が高
いことが判った。
果、藻類を培養し、その藻体内においてクロロフィルａ
およびクロロフィルｂより易水溶性クロロフィルを合成
させた後、抽出、精製を行なって回収した物質が水溶性
であるばかりでなく、光に対して高い安定性を有し、さ
らに、本発明の物質は光過敏症の原因物質であるフェオ
ホルバイドには、その化学構造上なり得ず、安全性が高
いことが判った。
【０００６】本発明はこの知見を発展させたもので、光
合成を行う生体をアルカリ性下に加温して失活させ、続
いて冷却、放置したのち親水性溶媒で抽出することを特
徴とする易水溶性クロロフィルの製造方法に関する。光
合成を行う生体としては葉緑素を含有する植物体が用い
られ、それは高等植物でも藻類でもよい。生体はアルカ
リ性下に加温して死滅させる。アルカリ性はｐＨ８前
後、好ましくはｐＨ７．５〜８．５である。加温は約６
０℃が好ましい。この温度に加熱するとクロロフィラー
ゼ以外のほとんどの酵素は失活すると共に生体も生命活
動を停止して死滅する。
合成を行う生体をアルカリ性下に加温して失活させ、続
いて冷却、放置したのち親水性溶媒で抽出することを特
徴とする易水溶性クロロフィルの製造方法に関する。光
合成を行う生体としては葉緑素を含有する植物体が用い
られ、それは高等植物でも藻類でもよい。生体はアルカ
リ性下に加温して死滅させる。アルカリ性はｐＨ８前
後、好ましくはｐＨ７．５〜８．５である。加温は約６
０℃が好ましい。この温度に加熱するとクロロフィラー
ゼ以外のほとんどの酵素は失活すると共に生体も生命活
動を停止して死滅する。
【０００７】上記の加温に続いて死滅生体を冷却、放置
する。冷却は加温後速かに行うのが好ましく、放置は上
記同様のアルカリ性下に数時間行うのがよい。上記の操
作により死滅生体体内のクロロフィルは易水溶性に変化
する。放置後の生体から親水性溶媒で易水溶性クロロフ
ィルを抽出することができる。親水性溶媒としてはメタ
ノール、エタノールなどのアルコール類が好ましい。
する。冷却は加温後速かに行うのが好ましく、放置は上
記同様のアルカリ性下に数時間行うのがよい。上記の操
作により死滅生体体内のクロロフィルは易水溶性に変化
する。放置後の生体から親水性溶媒で易水溶性クロロフ
ィルを抽出することができる。親水性溶媒としてはメタ
ノール、エタノールなどのアルコール類が好ましい。
【０００８】生体とし藻類を用いる場合の一例について
次にさらに具体的に説明する。藻類の培養は光照射によ
り光合成を行なわせて増殖させる独立栄養による明培養
法、光照射を行なわず炭素源としてブドウ糖や酢酸等を
与えて増殖させる従属栄養による暗培養法、またその両
方の併用による方法の三方法が知られているが、どの培
養法を用いても良い。
次にさらに具体的に説明する。藻類の培養は光照射によ
り光合成を行なわせて増殖させる独立栄養による明培養
法、光照射を行なわず炭素源としてブドウ糖や酢酸等を
与えて増殖させる従属栄養による暗培養法、またその両
方の併用による方法の三方法が知られているが、どの培
養法を用いても良い。
【０００９】培養終了後、藻体を含む培養液をｐＨ８程
度のアルカリに調整し、６０℃に加温して死滅させる。
その後速やかに冷却し、ｐＨを８程度に調整しながら２
０〜３０℃の暗所に数時間ないし１日間静置する。この
処理により、死滅藻体内に含まれるクロロフィルａおよ
びクロロフィルｂは藻体内において易水溶性クロロフィ
ルに完全に変化する。これをアルコール抽出し、油性培
養で洗浄しカロテノイド類を除去後、溶媒を真空下で蒸
発させる。この操作により、かなり純度の高い易水溶性
クロロフィルが得られる。
度のアルカリに調整し、６０℃に加温して死滅させる。
その後速やかに冷却し、ｐＨを８程度に調整しながら２
０〜３０℃の暗所に数時間ないし１日間静置する。この
処理により、死滅藻体内に含まれるクロロフィルａおよ
びクロロフィルｂは藻体内において易水溶性クロロフィ
ルに完全に変化する。これをアルコール抽出し、油性培
養で洗浄しカロテノイド類を除去後、溶媒を真空下で蒸
発させる。この操作により、かなり純度の高い易水溶性
クロロフィルが得られる。
【００１０】このようにして得られた易水溶性クロロフ
ィルは４００ｎｍ，５００ｎｍ，６６０ｎｍに吸収極大
を有する特異的な可視吸収曲線を示し、クロロフィルを
アルカリ処理して得らえるマグネシウムクロロフィリン
とは異なり、加えてブドウ糖存在下においてクロロフィ
ルを水酸化ナトリウムでアルカリ処理しても得ることは
できない。またこの易水溶性クロロフィルは、プロトン
核磁気共鳴分光法と高速液体クロマトグラフィーによ
り、クロロフィルａおよびクロロフィルｂに存在するフ
ィトール鎖が存在しないことが判明した。
ィルは４００ｎｍ，５００ｎｍ，６６０ｎｍに吸収極大
を有する特異的な可視吸収曲線を示し、クロロフィルを
アルカリ処理して得らえるマグネシウムクロロフィリン
とは異なり、加えてブドウ糖存在下においてクロロフィ
ルを水酸化ナトリウムでアルカリ処理しても得ることは
できない。またこの易水溶性クロロフィルは、プロトン
核磁気共鳴分光法と高速液体クロマトグラフィーによ
り、クロロフィルａおよびクロロフィルｂに存在するフ
ィトール鎖が存在しないことが判明した。
【００１１】プラズマ発光分光分析法等により１分子の
ポルフィリン環にマグネシウム１原子、アルカリ剤とし
てナトリウム化合物を用いた場合はナトリウム２原子、
アルカリ剤としてカリウム化合物を用いた場合はカリウ
ム２原子の割合で含まれていることがわかった。この易
水溶性クロロフィルは光照射に対して安定であり、１０
ｃｍの至近距離から３００Ｗの電灯による強い光照射に
対して、クロロフィルａが５０％分解した時点におい
て、１８．４％分解したにすぎず、同時点において銅ク
ロロフィリンナトリウムが１２．５％分解しているとこ
ろから考えても光に対する安定性を知ることができる。
ポルフィリン環にマグネシウム１原子、アルカリ剤とし
てナトリウム化合物を用いた場合はナトリウム２原子、
アルカリ剤としてカリウム化合物を用いた場合はカリウ
ム２原子の割合で含まれていることがわかった。この易
水溶性クロロフィルは光照射に対して安定であり、１０
ｃｍの至近距離から３００Ｗの電灯による強い光照射に
対して、クロロフィルａが５０％分解した時点におい
て、１８．４％分解したにすぎず、同時点において銅ク
ロロフィリンナトリウムが１２．５％分解しているとこ
ろから考えても光に対する安定性を知ることができる。
【００１２】以上に記すように、疎水基であるフィトー
ル鎖を有さず、ナトリウム、もしくはカリウム塩となっ
た本発明の物質は同クロロフィリンナトリウム同様に高
い水溶性を示し、光に安定であり、しかも銅のように有
害な物質を含まないことから機能性色素として、また医
薬品として巾広い利用が期待される。
ル鎖を有さず、ナトリウム、もしくはカリウム塩となっ
た本発明の物質は同クロロフィリンナトリウム同様に高
い水溶性を示し、光に安定であり、しかも銅のように有
害な物質を含まないことから機能性色素として、また医
薬品として巾広い利用が期待される。
【００１３】
実施例１ クロレラ・ブルガリスＥ２５（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖ
ｕｌｇａｒｉｓ Ｅ２５（特許第１１９８１８５号）を
タンクでブドウ糖を炭素源として従属栄養下無菌純粋培
養し、対数増殖期終了と同時に遠心分離によって得たク
ロレラ藻体を水に懸濁して水洗し、再度遠心分離によっ
て集め、食品添加物である炭酸カリウムを加えてｐＨ
８．０として、６０℃に加熱してクロレラ藻体を殺滅し
た後、ｐＨを８．０に保ちながら２４時間２０℃で無菌
的に保存し、１１０℃で３分間熱処理してクロロフィラ
ーゼを失活させた。
ｕｌｇａｒｉｓ Ｅ２５（特許第１１９８１８５号）を
タンクでブドウ糖を炭素源として従属栄養下無菌純粋培
養し、対数増殖期終了と同時に遠心分離によって得たク
ロレラ藻体を水に懸濁して水洗し、再度遠心分離によっ
て集め、食品添加物である炭酸カリウムを加えてｐＨ
８．０として、６０℃に加熱してクロレラ藻体を殺滅し
た後、ｐＨを８．０に保ちながら２４時間２０℃で無菌
的に保存し、１１０℃で３分間熱処理してクロロフィラ
ーゼを失活させた。
【００１４】上記処理を行なったクロレラ藻体より藻体
量の１０倍量のエチルアルコールを加えて色素を抽出
し、分液ロートを用いてｎ−ヘキサンで洗浄してカロテ
ノイド類を除去後、逆相ＯＤＳカラムで移動相をエチル
アルコールとして高速液体クロマトグラフィーで分取し
た。高速液体クロマトグラフィーにおける流出時間はク
ロロフィルａに比べて極めて速く、クロロフィルａのフ
ィトール鎖が外れて極性が高くなったクロロフィリドａ
よりも速く流出する。（図１） これを分取し吸収スペクトルを調べたところ、４００ｎ
ｍ，５００ｎｍ，６６０ｎｍに吸収極大を有する本発明
の物質が得られた。（図２）
量の１０倍量のエチルアルコールを加えて色素を抽出
し、分液ロートを用いてｎ−ヘキサンで洗浄してカロテ
ノイド類を除去後、逆相ＯＤＳカラムで移動相をエチル
アルコールとして高速液体クロマトグラフィーで分取し
た。高速液体クロマトグラフィーにおける流出時間はク
ロロフィルａに比べて極めて速く、クロロフィルａのフ
ィトール鎖が外れて極性が高くなったクロロフィリドａ
よりも速く流出する。（図１） これを分取し吸収スペクトルを調べたところ、４００ｎ
ｍ，５００ｎｍ，６６０ｎｍに吸収極大を有する本発明
の物質が得られた。（図２）
【００１５】参考例１ ２．試薬クロロフィルａ（和光純薬製）（吸収スペクト
ル、図３）を用いて、炭酸カリウムでアルカリ性とし、
ブドウ糖を加えたものと加えないものの２試験区につい
て６０℃で加熱処理後放冷し、２５℃となったものにつ
いて吸収スペクトルを調べたところ、図４に示すような
吸収スペクトルとなり、本発明の物質は得られなかっ
た。またアルカリ剤として炭酸カリウムのかわりに水酸
化ナトリウムを用いて行なっても同様の結果であった。
ル、図３）を用いて、炭酸カリウムでアルカリ性とし、
ブドウ糖を加えたものと加えないものの２試験区につい
て６０℃で加熱処理後放冷し、２５℃となったものにつ
いて吸収スペクトルを調べたところ、図４に示すような
吸収スペクトルとなり、本発明の物質は得られなかっ
た。またアルカリ剤として炭酸カリウムのかわりに水酸
化ナトリウムを用いて行なっても同様の結果であった。
【００１６】
【発明の効果】本発明によれば、易水溶性のクロロフィ
ルが製造でき、それは光に対して安定であり、また好ま
しくない銅を含有しないので、食品、医薬など多方面で
の利用が期待される。
ルが製造でき、それは光に対して安定であり、また好ま
しくない銅を含有しないので、食品、医薬など多方面で
の利用が期待される。
【００１７】
【図１】本発明のクロロフィルの高速液体クロマトグラ
フィーにおける流出パターンを示す。
フィーにおける流出パターンを示す。
【図２】本発明のクロロフィルの吸収スペクトルを示
す。
す。
【図３】クロロフィルａの吸収スペクトルを示す。
【図４】クロロフィルａにアルカリ性でブドウ糖を加え
または加えずに加熱処理した後の吸収スペクトルを示
す。
または加えずに加熱処理した後の吸収スペクトルを示
す。
Claims (6)
- 【請求項１】 光合成を行う生体をアルカリ性下に加温
して失活させ、続いて冷却、放置したのち、親水性溶媒
で抽出することを特徴とする図２の吸収スペクトルを示
す易水溶性クロロフィルの製造方法。 - 【請求項２】 アルカリ性がｐＨ８前後である請求項１
記載の方法。 - 【請求項３】 加温が約６０℃である請求項１記載の方
法。 - 【請求項４】 放置を数時間以上行う請求項１記載の方
法。 - 【請求項５】 生体が藻類である請求項１記載の方法。
- 【請求項６】 藻類の培養液をｐＨ７．５以上のアルカ
リ性下に加温して藻類を死滅させ、続いて冷却してｐＨ
７．５以上のアルカリ性に調整しながら静置したのち、
アルコールで抽出する請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7968796A JP2833740B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 易水溶性クロロフィルの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7968796A JP2833740B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 易水溶性クロロフィルの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09238694A JPH09238694A (ja) | 1997-09-16 |
| JP2833740B2 true JP2833740B2 (ja) | 1998-12-09 |
Family
ID=13697125
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7968796A Expired - Fee Related JP2833740B2 (ja) | 1996-03-06 | 1996-03-06 | 易水溶性クロロフィルの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2833740B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002114703A (ja) * | 2000-10-06 | 2002-04-16 | Yamaki:Kk | 抗酸化剤 |
| KR100979224B1 (ko) * | 2007-09-28 | 2010-09-01 | 광주과학기술원 | 안정화된 클로로필 ａ 조성물 |
| MX2012011558A (es) * | 2010-04-06 | 2013-02-21 | Heliae Dev Llc | Metodos y sistemas para producir biocombustible. |
-
1996
- 1996-03-06 JP JP7968796A patent/JP2833740B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09238694A (ja) | 1997-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ryan et al. | How green is green chemistry? Chlorophylls as a bioresource from biorefineries and their commercial potential in medicine and photovoltaics | |
| US4613672A (en) | Process for the production of tea catechins | |
| US4851339A (en) | Extraction of anti-mutagenic pigments from algae and vegetables | |
| Wang et al. | Effects of magnetic field on the antioxidant defense system of recirculation‐cultured Chlorella vulgaris | |
| McLachlan et al. | The role of oxygen in photosensitizations with polyacetylenes and thiophene derivatives | |
| JP3727077B2 (ja) | バクテリア菌体からのカロチノイド化合物の抽出方法 | |
| JP2833740B2 (ja) | 易水溶性クロロフィルの製造方法 | |
| CN105601638B (zh) | 一种叶绿酸衍生物及其制备方法、作为光敏抑菌剂及光敏杀虫剂的应用 | |
| EP0881879B1 (en) | Photosensitive composition | |
| KR100388110B1 (ko) | 효모 균주에서 아스타산틴 색소 추출방법 및 추출된 색소 | |
| Prasertsan et al. | Optimization for growth of Rhodocyclus gelatinosus in seafood processing effluents | |
| KR20000072136A (ko) | 녹조류에서 아스타산틴 색소 추출방법 및 추출된 색소 | |
| SE468815B (sv) | Foerfarande foer framstaellning av selenrika alger | |
| Joshi et al. | Evaluation of chemically-induced phototoxicity to aquatic organism using Paramecium as a model | |
| JPH08103288A (ja) | アスタキサンチンおよびアスタキサンチン含有物の製造方法 | |
| CN113698285B (zh) | 一种卤代姜黄素衍生物、其制备方法及其在水产品保鲜上的应用 | |
| JP4469840B2 (ja) | ハヘラ・チェジュエンシス由来の殺藻効果を有する赤色色素 | |
| CN108184904A (zh) | 观赏鱼养殖水体改善液的制备方法 | |
| JP4961550B2 (ja) | アスタキサンチンの製造方法 | |
| EP0586255A1 (en) | Process for producing beta-carotene | |
| NO300499B1 (no) | Komplekse salter av hematoporfyrin og av derivater derav, blandinger av slike salter samt terapeutisk middel for detektering og/eller behandling av neoplasmer | |
| JPH09294596A (ja) | 光合成藻類によるフィコビリ蛋白質および／または脂肪酸の生産方法 | |
| Eichler et al. | Isolation and characteristics of Thiopedia rosea (neotype) | |
| JPH07289201A (ja) | スピルリナ食品の製造方法 | |
| RU2520857C2 (ru) | Способ обеззараживания воды и оценки его эффективности |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071002 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081002 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091002 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091002 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101002 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101002 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111002 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111002 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121002 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121002 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131002 Year of fee payment: 15 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |