JP2829779B2

JP2829779B2 - 環式ニューロキニンａ拮抗剤

Info

Publication number: JP2829779B2
Application number: JP2209390A
Authority: JP
Inventors: リーハーベソンスコット; ヘンダーセンバックステファン
Original assignee: Merrell Dow Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1989-08-10
Filing date: 1990-08-09
Publication date: 1998-12-02
Anticipated expiration: 2013-12-02
Also published as: IE69382B1; EP0412542A3; ES2084627T3; CA2022740A1; FI95913B; DE69024555D1; KR0169123B1; CN1049353A; HU904952D0; DK0412542T3; NZ234814A; NO903513L; FI903922A0; CA2022740C; CN1035056C; ATE132503T1; EP0412542A2; AU638264B2; AU6022290A; JPH03141295A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はニューロキニンＡの拮抗剤である環式ペプチ
ド誘導体に関する。

〔従来の技術と発明が解決しようとする課題〕

物質Ｐと関連のタチキニン類、すなわちニューロキニ
ンＡ及びニューロキニンＢは、体組織中に広く分布し、
広範囲の生物学的効果をもつことが示された一群の天然
に生ずるペプチド類である。物質ＰとニューロキニンＢ
については、作用剤も拮抗剤も知られており、ニューロ
キニンＡの作用剤も同様に知られているが、ニューロキ
ニンＡの拮抗剤はまだ報告されていなかった。

いま出願人らは、ニューロキニンＡ拮抗剤群を発見し
た。このような化合物類は生化学的観点から興味ぶかい
だけでなく、このような化合物類は価値ある薬理学的及
び医学的有用性をも有している。

〔課題を解決する手段〕

次の構造１の環式ペプチド誘導体類、及び製薬上受け
入れられるその塩は、ニューロキニンＡの拮抗剤であ
る。

［式中A₁はGlnであり； A₂はTrpであり； A₃はPheであり； A₄はGlyであり；Ｂは式の基であって、ここでＲは水素原子又は１〜４個の炭素
原子のアルキル基であり； R₁とR₂は各々独立にイソプロピル、イソブチル、第二
ブチル、ｎ−ブチル、及び２−（メチルチオ）エチル基
から選ばれる。

これらの新規な環式ペプチド誘導体類はニューロキニ
ンＡの拮抗剤であり、従って有用な抗喘息剤、抗炎症
剤、及び抗関節炎剤である。

アミノ酸とアミノ及びカルボキシ末端基について、以
下の一般的な略字が本明細書を通じて使用されている。

Gly（又はＧ）−グリシン Ala（又はＡ）−アラニン Val（又はＶ）−バリン Leu（又はＬ）−ロイシン Ile（又はＩ）−イソロイシン Fum−フマリル Orn−オルニチン Pro（又はＰ）−プロリン Phe（又はＦ）−フェニルアラニン Trp（又はＷ）−トリプトファン Met（又はＭ）−メチオニン Ser（又はＳ）−セリン Thr（又はＴ）−スレオニン Cys（又はＣ）−システイン Tyr（又はＣ）−チロシン Asn（又はＮ）−アスパラギン Gln（又はＱ）−グルタミン Asp（又はＤ）−アスパラギン酸 Glu（又はＥ）−グルタミン酸 Lys（又はＫ）−リシン Arg（又はＲ）−アルギニン His（又はＨ）−ヒスチジン Nle−ノルロイシン Hyp−ヒドロキシプロリン Cha−シクロヘキシルアラニン Glt−グルタリル Mal−マレイル β−Ala−β−アラニン Npa−β−（２−ナフチル）アラニン 3,4−デヒドロPro−3,4−デヒドロプロリン Phg−フェニルグリシン NMePgl−Ｎ−メチル−フェニルグリシン Sar−サルコシン（Ｎ−メチルグリシン） pSubPhe−パラ置換フェニルアラニン SubPhe−オルト、メタ、又はパラ、モノ−又はジ−置換
フェニルアラニン Ac−アセチル Suc−サクシニル Phe（４′−Cl）−パラ−クロロ−フェニルアラニン Phe（４′−NO₂）−パラ−ニトロ−フェニルアラニン NMeVel−Ｎ−メチル−バリンいずれの場合も、第一字が大文字の場合のアミノ酸に
対する３文字記号は、そのアミノ酸がＬ−立体配置であ
ることを意味している。同様に、アミノ酸に対する３文
字記号の第一字が小文字の場合は、そのアミノ酸がＤ−
立体配置であることを意味している。

アルキル基及びアルコキシ基のアルキル部分は、直
鎖、分枝鎖又は環式アルキル基、例えばメチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第
三ブチル、ペンチル、イソペンチル、第二ペンチル、シ
クロペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、及びシクロペ
ンチルメチルを包含するものとして扱われる。本発明の
フェニルアルキレン基のアルキレン部分は、１−４個の
炭素原子を含有し、直鎖又は分岐鎖、例えばメチレン、
エチレン、プロピレン、ブチレン、イソプロピリデン、
及び第二ブチリデンでありうる。本発明のフェニルアル
キレン基のフェニル部分は、未置換であるか、又はオル
ト、メタ、又は好ましくはパラの位置にモノ置換でき
る。未置換フェニル又はパラヒドロキシフェニルが好ま
しい。２−10個の炭素原子のアシル基は、基当たり１個
又は２個のカルボニル部分をもった直鎖、分枝鎖、環
式、飽和及び不飽和アシル基、例えばアセチル、ベンゾ
イル、サクシニル、マレイル、及びグルタリルを包含す
るものとして扱われる。ハロゲン基はフルオロ、クロ
ロ、ブロモ又はヨード基である。

Ｂがである場合の本発明化合物類は、構造式1aをもってい
る。

Ｂが−Ｓ−CH₂−基の場合の本発明化合物類は、構造
式1bをもっている。

Ｂが−Ｏ−CH₂−基の場合の本発明化合物類は、構造
式1cをもっている。

Ｂが−CH＝CH−基の場合の本発明化合物類は、構造式
1dをもっている。

Ｂが−CH₂−Ｃ（Ｏ）−基の場合の本発明化合物類
は、構造式1eをもっている。

Ｂが−CH₂CH（OH）基の場合の本発明化合物類は、構
造式1fをもっている。

Ｂが−Ｃ（Ｏ）NH基の場合の本発明化合物類は、構造
式1gをもっている。

本発明の環式ペプチド誘導体類が、天然に生ずるニュ
ーロキニンＡの二つの炭素末端アミノ酸類の正常なペプ
チドアミド結合を変更して、環化を通してA₁アミノ酸残
基に結合させた場合のペプチド類を包含していること
は、自明であろう。ペプチド化学者に用いられている命
名法を使用して、R₁とR₂が各々第二ブチル基で、Ｂが−
NHCH₂−基である場合の式１化合物類（すなわち、A₄残
基をA₁残基に連結する部分が還元されたアミド結合によ
って結ばれた二つのLeu残基からなっている場合の化合
物類）は、LeuΨ［CH₂NH］Leuとして指定できる。この
指定は、末位から二番めのLeuのアミドカルボニル基が
がメチレン基に還元されることを示している。本発明の
ペプチド誘導体の記述に使用されるその他の命名指定
は、Ψ［CH₂S］、Ψ［CH₂O］、Ψ［CH＝CH］、Ψ［Ｃ
（Ｏ）CH₂］、Ψ［CH（OH）CH₂］及びΨ［NHC（Ｏ）］
である。

本明細書で使用される用語「任意のアミノ酸」は、天
然に生ずるアミノ酸類、並びに天然に生ずるペプチドの
合成類似体類つくる時にペプチド化学の当業者に一般に
利用されるその他の「非タンパク」α−アミノ酸類を包
含する。天然に生ずるアミノ酸類はグリシン、アラニ
ン、β−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
セリン、メチオニン、スレオニン、フェニルアラニン、
チロシン、トリプトファン、システイン、プロリン、ヒ
スチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン
酸、グルタミン、アルギニン、オルニチン、及びリシン
である。「非タンパク」α−アミノ酸の例はノルロイシ
ン、ノルバリン、アロイソロイシン、ホモアルギニン、
チアプロリン、デヒドロプロリン、ヒドロキシプロリン
（Hyp）、ホモセリン、シクロヘキシルグリシン（Ch
g）、α−アミノ−ｎ−酪酸（Aba）、シクロヘキシルア
ラニン（Cha）、アミノフェニル酪酸（Pba）、フェニル
部分のオルト、メタ、又はパラ位置が（C₁−C₄）アルキ
ル、（C₁−C₄）アルコキシ、ハロゲン、又はニトロ基で
置換されたフェニルアラニン類又はメチレンジオキシ基
で置換されたフェニルアラニン類、β−２−及び３−チ
エニルアラニン、β−２−及び３−フエニルアラニン、
β−２−、３−、及び４−ピリジルアラニン、β−（ベ
ンゾチエニル−２−及び３−イル）アラニン、β−（１
−及び２−ナフチル）アラニン、セリン、スレオニン、
又はチロシンのＯ−アルキル化誘導体類、Ｓ−アルキル
化システイン、チロシンのＯ−スルフェートエステル、
3,5−ジヨードチロシン、及び天然に生ずるアミノ酸類
のＤ−異性体類である。

グリシンとβ−アラニンを除いて、天然アミノ酸類は
キラル炭素原子を含んでいる。他に特に注意がなけれ
ば、本明細書で言及される光学活性アミノ酸類は、Ｌ立
体配置のものである。慣習どおりに、本明細書で描かれ
るペプチド類の構造は、アミノ末端が連鎖の左側、カル
ボキシ末端が連鎖の右側にあるようになっている。

式１のポリペプチド類は、任意の無毒性有機又は無機
酸と共に製薬上受け入れられる塩類を形成できる。適当
な塩類を形成する例示的な無機酸類は、塩酸、臭化水素
酸、硫酸、燐酸、及びオルト燐酸一水素ナトリウムと硫
酸水素カリウムのような酸金属塩類を包含する。適当な
塩類を形成する例示的な有機酸類は、モノ、ジ及びトリ
カルボン酸類を包含する。このような酸類の例は、例え
ば酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、
コハク酸、グルタール酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石
酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキ
シマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニ
ル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香
酸、及びメタンスルホン酸と２−ヒドロキシエタンスル
ホン酸のようなスルホン酸類を包含する。

化合物類の任意の一般群と同様に、ある基が好まし
い。出願人らは、A₁がGln、gln、Asn、又はasnの場合の
式１ペプチド誘導体類;A₂とA₃が各々Trp、trp、Phe、ph
e、Tyr、tyr、Cha、cha、Phg又はphgの場合のペプチド
誘導体類；及びA₄がGly、Ala、又はalaの場合のペプチ
ド誘導体類を好ましいと考える。A₁がGln、A₂とA₃が各
々Trp又はPhe、及びA₄がGlyの場合のペプチド誘導体類
がいっそう好ましい。

本発明のペプチド類は、当業者に容易に知られる種々
の手順によってつくることができる。このような手順は
自動化ペプチド合成機の使用などの確立された自動化法
を用いて実施できる固体相配列手順を包含している。本
発明のペプチド誘導体類をつくるには、A₄に対応する樹
脂結合アミノ酸を使用して、A₃、A₂及びA₁に対応するア
ミノ酸類を次々に付加し、最後にNH₂CHR₂CO₂Hに対応す
るアミノ酸類を付加する。続いて、変更Ｂアミドリンケ
ージは、NH₂CHR₁CO₂Hに対応するアミノ酸の付加、樹脂
からの除去、及び環化によって形成される。変更ペプチ
ドリンケージの各々をつくるのに使用される手順は、こ
の技術で周知であり、熟練したペプチド化学者に容易に
実施できる。Ｂが−NHCO−基の場合のペプチド誘導体
類、すなわちΨ［NCCO］化合物類をつくる手順は、コレ
ブ（Chorev）及びグッドマン（Goodman）、Int.J.Pept.
Protein Res.21巻（３号）258−68頁（1983年）から知
られる。Ｂが−COCH₂−又は−CH（OH）CH₂−基の場合の
式１のペプチド誘導体類、すなわちそれぞれΨ［CO−CH
₂］及びΨ［CH（OH）CH₂］化合物類をつくる手順は、ホ
ラデイ（Holladay）及びリッチ（Rich）、Tetrahedron
Letters,24巻（41号）、4401−04頁（1983年）から知ら
れる。Ｂが−CH₂NH−基の場合の式１ペプチド誘導体
類、すなわちΨ［CH₂NH］化合物類をつくる手順は、サ
サキ及びコイ（Coy）、Peptides 8巻119−121頁（1987
年）から知られ、下に十分に記述されている。Ｂが−CH
₂S−基の場合の式１ペプチド誘導体類、すなわちΨ［CH
₂S］化合物類をつくる手順はスパトーラ（Spatola）及
びダーラク（Darlak）、Tetrahedron Letters,44巻（３
号）821−33頁（1988年）から知られる。Ｂが−CH₂O−
基の場合の式１ペプチド誘導体、すなわちΨ［CH₂O］化
合物類をつくる手順は、テンブリンク（TenBrink）、J.
Org.Chem.52巻418−22頁（1987年）から知られる。

樹脂からの線状ペプチドの除去、及び所望により任意
の保護基の除去に続いて、線状ペプチドはジメチルホル
ムアミド中のトリエチルアミンとジフェニルホスホニル
アジドでの処理のような慣用手順を用いて環化される。
クロマトグラフィ使用のような通常の方法で粗製環式ペ
プチドを精製するに先立って、任意の残りの保護基と官
能基前駆体は除去又は所望の基へ転化される。

特定的には、Ｂが−CN₂N（Ｒ）−基の場合の本発明化
合物類は、式３のＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミドを還
元することによってつくられ、式４のアルデヒドを生ず
る。この還元は、水素化アルミニウムリチウム（LAH）
の使用など、当業者に一般に知られ、容易に実施できる
任意の方法で実施できる。この還元は、LAHの約１モル
当量を、テトラヒドロフラン（THF）やジエチルエーテ
ルのような非反応性溶媒中の式３化合物の冷却（典型的
には約０℃の）溶媒に加えることによって都合よく実施
できる。反応が実質的に完了した後（典型的には30分
後）、例えば10％硫酸水素カリウム又はナトリウム溶
液、次に水の添加によって、反応混合物を停止させる。
次に、例えばジエチルエーテルのような溶媒で混合物水
溶液を抽出し、エーテル相を冷たい希塩酸水溶液で洗
い、乾燥して、溶媒を除去することによって生成物を単
離できる。

次に式４アルデヒドを式６［式中ＲとR₂は式１で定義されたとおりであり、はペプチド樹脂を表わす］の樹脂結合ペプチドと反応さ
せる。初めに形成されるシフ塩基生成物は、例えば水素
化シアノホウ素ナトリウムを使用して現場還元される
と、式７［式中Ｒ、R₁及びR₂は式１で定義されたとおりであり、はペプチド樹脂を表わす］の樹脂結合され変更されたジ
ペプチドを生ずる。

式３のＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド類は、対応す
るＮ−Boc保護された酸から通常の方法でつくられる。
ジエチルエーテルのようなエーテル溶媒中のＮ−Boc保
護されたアミノ酸を乾燥溶液にカルボニルジイミダゾー
ルを添加する。反応混合物を10分から１時間、典型的に
は約15−20分間かきまぜる。DMF中のN,O−ジメチルヒド
ロキシアルミンHClと、ジイソプロピルエチルアミンの
ような立体障害されたアミンを加え、混合物を約６時間
から約24時間まで室温でかきまぜる。次に所望の化合物
を溶媒蒸発によって単離し、粗生成物の生成は例えば塩
化メチレンで溶離するシリカゲル上のフラッシュ・クロ
マトグラフィによって達成できる。

使用の樹脂支持体は、ポリペプチド類の固体相調製に
この技術で慣用的に使用される任意適当な樹脂、好まし
くは0.5ないし約３％のジビニルベンゼンで架橋され、
また初期に導入されたα−アミノ保護されたアミノ酸と
のエステル形成用の部位を提供するためにクロロメチル
化又はヒドロキシメチル化されたポリスチレンでありう
る。

ヒドロキシメチル樹脂の一例は、ボダンズスキー（Bo
danszsky）ら、Chem.Ind.（London）38巻1597−98頁（1
966年）によって記述されている。クロロメチル化樹脂
は、バイオライド研究所（カリフォルニア州リッチモン
ド）から市販されており、このような樹脂の調製はスチ
ュワート（Stewart）ら、「固体相ペプチド合成」（フ
リーマン社、サンフランシスコ1969年）第１章１−６頁
に記述されている。保護アミノ酸は、ジシン（Gisi
n）、Helv.Chem.Acta,56巻1476頁（1973年）の手順によ
って樹脂に結合できる。多くの樹脂結合された保護アミ
ノ酸類が市販されている。一例として、カルボキシ末端
がThr残基の場合の本発明のポリペプチドをつくるに
は、ベンジル化されヒドロキシメチル化されたフェニル
アセトアミドメチル（PAM）樹脂に結合された第三ブチ
ロキシカルボニル（Boc）保護されたThrが使用でき、市
販されている。

α−アミノ保護アミノ酸の樹脂支持体へのカップリン
グに続いて、保護基は塩化メチレン中のトリフルオロ酢
酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン中のHClを
使用するなど、任意適当な手順を用いて除去される。脱
保護は０℃と室温の間の温度で実施される。その他の標
準的な開裂試薬と、特定的なα−アミノ保護基の除去条
件を使用できる。α−アミノ保護基の除去後、その他の
アミノ保護されたアミノ酸類は所望の順序で段階的に結
合される。その代わりに、樹脂支持されたアミノ酸配列
とのカップリングに先立って、溶液法によって複数のア
ミノ酸基を結合できる。

ポリペプチド配列へ導入される各アミノ酸に使用され
るα−アミノ保護基は、この技術で知られた任意のこの
ような保護基でありうる。考えられるα−アミノ保護基
の部類としては、（１）アシル型保護基、例えばホルミ
ル、トリフルオロアセチル、フタリル、トルエンスルホ
ニル（トシル）、ベンゼンスルホニル、ニトロ−フェニ
ルスルフェニル、トリチルスルフェニル、ｏ−ニトロフ
ェノキシアセチル、及びα−クロロブチリル；（２）芳
香族ウレタン型保護基、例えばベンジロキシカルボニル
及び置換ベンジロキシカルボニル、例えばｐ−クロロベ
ンジロキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジロキシカルボ
ニル、ｐ−ブロモベンジロキシカルボニル、ｐ−メトキ
シベンジロキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニル）−
１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−3,
5−ジメトキシベンジロキシカルボニル及びベンズヒド
ロキシカルボニル；（３）脂肪族ウレタン保護基、例え
ば第三ブチロキシカルボニル（Boc）、ジイソプロピル
メトキシカルボニル、イソプロピロキシカルボニル、エ
トキシカルボニル及びアリロキシカルボニル；（４）シ
クロアルキルウレタン型保護基、例えばシクロペンチロ
キシカルボニル、アダマンチロキシカルボニル、及びシ
クロヘキシロキシカルボニル；（５）フェニルチオカル
ボニルのようなチオウレタン型保護基；（６）トリフェ
ニルメチル（トリチル）とベンジルのようなアルキル型
保護基；及び（７）トリメチルシランのようなトリアル
キルシラン基がある。好ましいα−アミノ保護基は第三
ブチロキシカルボニルである。

適当なカップリング試薬の選択はこの技術の範囲内に
ある。添加アミノ酸がGln、Asn又はArgの場合の特に適
したカップリング試薬は、N,N′−ジイソプロピルカル
ボジイミドと１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであ
る。これらの試薬の使用はニトリル及びラクタムの形成
を予防する。その他のカップリング剤は（１）カルボジ
イミド（例えばN,N′−ジシクロヘキシルカルボジイミ
ドとＮ−メチル−Ｎ′−（γ−ジメチルアミノプロピル
カルボジイミド）；（２）シアナミド類（例えばN,N′
−ジベンジルシアナミド）；（３）ケテンイミン類；
（４）イソキサゾリウム塩（例えばＮ−エチル−５−フ
ェニル−イソキサゾリウム−３′−スルホネート）；
（５）環中に１−４個の窒素を含有する芳香族性で単環
の窒素含有複素環式アミド類、例えばイミダゾリド類、
ピラゾリド類及び1,2,4−トリアゾリド類（有用な特定
的な複素環式アミド類はN,N′−カルボニルジイミダゾ
ールとN,N′−カルボニル−ジ−1,2,4−トリアゾールを
包含する）；（６）アルコキシル化アセチレン（例えば
エトキシアセチレン）；（７）アミノ酸のカルボキシル
部分と混合無水物を形成する試薬（例えばエチルクロロ
フォルメートとイソブチルクロロフォルメート）又はカ
ップリングしようとするアミノ酸の対称無水物（例えば
Boc−Ala−Ｏ−Ala−Boc）；及び（８）一つの環窒素上
に１個のヒドロキシ基をもった窒素含有複素環式化合物
類（例えばＮ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキ
シサクシンイミド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル）である。その他の活性化試薬と、ペプチドのカップ
リングにおけるそれらの使用は、ケイパー（Kapoor）、
J.Pharm.Sci.59巻１−27頁（1970年）に記述されてい
る。出願人らは、Arg、Asn及びGlnを除き、すべてのア
ミノ酸に対するカップリング試薬として、対称的無水物
の使用を好ましいと考える。

各々の保護アミノ酸又はアミノ酸配列は、４倍過剰量
で固体相反応器に導入され、ジメチルホルムアミド：塩
化メチレン（1:1）又はジメチルホルムアミドのみ、又
は好ましくは塩化メチレンのみの媒体中でカップリング
が行なわれる。不完全なカップリングが起こる場合は、
α−アミノ保護基の除去前に、固体相反応器中で次のア
ミノ酸のカップリングに先立って、カップリング手順を
繰り返す。各合成段階でのカップリング反応の成功は、
イー・カイザー（E.Kaiser）ら、Analyt・Biochem.34巻
595頁（1970年）に記述されたとおりに、ニンヒドリン
反応によって監視される。

所望のアミノ酸配列が得られた後、ペプチドは樹脂か
ら除去される。これは樹脂結合ポリペプチドを無水フッ
化水素酸中の硫化ジメチル、ｐ−クレゾール、及びチオ
クレゾールの溶液で処理するなど加水分解によって行な
うことができる。

固体相ペプチド合成の技術に知られているように、ア
ミノ酸類の多くは連鎖生成中に保護を必要とするような
官能基をもっている。適当な保護基の選定と使用は当業
者の能力の範囲内にあり、保護しようとするアミノ酸
と、ペプチド上の他の保護アミノ酸残基の存在に依存し
よう。このような側鎖保護基の選択は、α−アミノ部分
の保護基の開裂中にそれが除去されてはならないという
点で決定的重要性をもっている。例えば、リシンに適し
た側鎖保護基はベンジロキシカルボニル及び置換ベンジ
ロキシカルボニル［この置換基はハロゲン（例えばクロ
ロ、ブロモ、フルオロ）及びニトロ（例えば２−クロロ
ベンジロキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジロキシカル
ボニル、3,4−ジクロロベンジロキシカルボニル）から
選ばれる］、トシル、ｔ−アミロキシカルボニル、ｔ−
ブチロキシカルボニル、及びジイソプロピルメトキシカ
ルボニルである。スレオニンとセリンのアルコール性ヒ
ドロキシル基はアセチル、ベンゾイル、第三ブチル、ト
リチル、ベンジル、2,6−ジクロロベンジル又はベンジ
ロキシカルボニル基で保護できる。アスパラギン酸とグ
ルタミン酸のカルボン酸ヒドロキシル基は、ベンジル又
はシクロヘキシル基で保護できる。好ましい保護基はベ
ンジルである。

これらの基はこの技術で周知の手順によって除去でき
る。典型的には、保護基の除去はペプチド鎖合成が完了
してから行なわれるが、保護基はその他の任意適当な時
に除去できる。

式１ペプチド誘導体がニューロキニンＡ拮抗剤として
作用するための能力は、バック（Buck）ら、Science 22
6巻987−989頁（1984年）の方法を使用して、これらの
ペプチドが哺乳類ニューロキニンＡ（NK₂）受容体につ
いてヨウ素化ニューロキニンＡと競合する能力により、
またブリストウ（Bristow）ら、British J.Pharmacol.9
0巻211−221頁（1987年）の方法を使用して、このよう
な化合物鎖がニューロキニンＡで誘発されるホスファチ
ジルイノシトールの転換を刺激又は抑制する能力によっ
て例証できる。

本発明のペプチド誘導体類がニューロキニンＡ拮抗剤
として作用する能力があるため、化合物類免疫抑制剤と
して、また関節炎、喘息、痛み、炎症、腫瘍成長、胃腸
の運動過剰、ハンチントン秒、精神病、神経炎、神経
痛、片頭痛を含めた頭痛、高血圧、尿失禁、じんまし
ん、カルチノイド症候群、インフルエンザ、及び感冒の
処置に有用である。経口、非経口によらず、有効投与量
は当業者が容易に決定できるものであり、ニューロキニ
ンＡ（NK₂）受容体の拮抗を生ずる投与量である。例え
ば、本発明ペプチドの有効投与量は、一日当たり患者の
体重kg当たり約0.5μｇないし約500mgでありうる。化合
物類は活性化合物約1mgないし約500mgを含有する単位適
量形式で都合よく投与され、一日当たり１−４回ないし
それ以上の単位適量形式で投与できる。本明細書で使用
される用語「患者」とは、ヒトを含めた霊長類、羊、
馬、牛、豚、犬、猫、ラット、及びハツカネズミのよう
な哺乳類を意味するものとして扱われる。

ペプチド誘導体類の幾つかは経口投与後、腸を通過し
て生き残ることもあるが、出願人らは非経口投与、例え
ば皮下、静脈内、筋肉内又は腹膜内；デボー注射による
投与；移植製剤；又は鼻、のど、気管などの粘膜へ、本
発明のペプチド誘導体を含有するアエロゾル缶で、スプ
レー又は乾燥粉末型としての適用が好ましいと考える。

非経口投与には、化合物類は薬学担体を伴った生理学
的に受入れられる希釈剤中の化合物の溶液又は懸濁液の
注射可能な適量として投与でき、担体は、表面活性剤そ
の他の製薬上受け入れられる助剤の添加を伴って、又は
伴っていない水や油類のような無菌液体でありうる。こ
れらの製剤に使用できる油類の例は、石油、動植物、又
は合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、及び鉱油
である。概して、水、食塩水、デキストロース水溶液、
及び関連する糖溶液、エタノール及びプロピレングリコ
ールやポリエチレングリコールのようなグリコール類
が、特に注射液用に好ましい液体担体である。

化合物類は、デポー注射剤又は移植製剤の形で投与で
き、これらは活性分の持続的放出を可能とするような方
法で処方できる。活性成分はペレットや小円筒形に圧縮
されて、皮下又は筋肉内にデポー注射剤又は移植剤とし
て移植できる。移植剤は生物劣化可能な重合体類や合成
シリコーン類、例えばダウコーニング・コーポレーショ
ンで製造されるシリコンゴムのシラスチックのような不
活性材料を使用できる。

［実施例］本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示され
ている。

実施例１ヨウ素化ニューロキニンＡ受容体での競合に
よって例証される環式Gln−Trp−Phe−Gly−LeuΨ［CH₂
NH］Leu及び環式Gln−Trp−Phe−Gly−LeuΨ［CH₂NC
H₃］LeuによるニューロキニンＡ受容体の拮抗ハムスター数匹の膀胱を集めて刻み、120mM NaCl及び
5mM KClを含有する４℃の50mMトリス−HCl（pH7.4）中
で均質化し、48,000xGで15分の遠心分離にかけた。ペレ
ットを、10mM EDTAと300mMKClを含有する50mMトリス−H
Cl（pH7.4）中で、４℃で30分間に再懸濁した。懸濁液
を上のように遠心分離し、ペレットを混ぜ物のない50mM
トリス−HCl（pH7.4）中で２回洗い、同様な遠心分離に
かけた。次に組織を培養緩衝液中に再懸濁し、各検定試
験管にアリコート（約３−5mgの組織）を加えて検定を
開始した。検定試験管は、50mMトリス−HCl（pH7.4）、
0.02％BSA、40μg/mlバシトラシン、４μg/mlキモスタ
チン、４μg/mlロイペプチン、2mM MnCl₂、0.1nM¹²⁵ヨ
ードヒスチジル^１−ニューロキニンＡ（アマーシャム・
コープ）、及び0.03nMないし100μＭの範囲の濃度の表
題化合物又は標準物質からなる培養緩衝液を含有した。
検定は、室温で120分間平衡化させた。この時間の後、
各試験管の内容物を、0.5％BSA中に事前浸漬したホワッ
トマンGF/Bフィルターに通して急いで濾過し、フィルタ
ーを氷冷した混ぜ物のない50mMトリス−HCl（pH7.4）
で、急いで２回洗った。フィルターに結合された放射能
をガンマ計測器で定量した。特異的結合（最大）は、１
μＭ未標識ニューロキニンＡ（NKA）の存在下及び不在
下の結合間の差として定義された。ヨウ素化ニューロキ
ニンＡ結合の試験化合物類又は標準による競合を、この
最大競合の百分率として表わした。IC₅₀値（受容体結合
の50％を抑制するのに要する濃度）は、表題化合物の場
合、0.01−0.5nMであることがわかった（第１図）。

実施例２ホスファチジルイノシトールの転換への影響
によって例証される、環式Gln−Trp−Phe−Gly−LeuΨ
［CH₂NH］Leuと環式Gln−Trp−Phe−Gly−LeuΨ［CH₂NC
H₃］LeuによるニューロキニンＡ受容体の拮抗ハムスター数匹の膀胱を集めて刻み、組織チョッパー
で350μｍに刻んだ。刻んだ組織を37℃のクレブス＝ヘ
ペス緩衝液中で30分培養し、新しい緩衝液と15分ごとに
代えた。次に、³H−イノシトール100−200μCiを含有す
るこの緩衝液中で37℃で組織を培養した。次に組織を洗
い、クレブス＝ヘペス（10mM Li⁺を含有）中で37℃で更
に30分培養し、15分ごとに新しい緩衝液と取り替えた。
組織塊（検定管当たり約10−20mg）の一部をLi⁺緩衝液
中に入れ、25μｌの中の試験化合物を添加し、次に25μ
ｌ中の種々の濃度のニューロキニンＡを加え、最終容量
を250μｌとした。ニューロキニンＡを1nMないし10μＭ
の濃度範囲とし、試験化合物を1nMないし100μＭの範囲
の濃度で評価した。また、試験化合物の作用活性を試験
するために、指示濃度の試験化合物を単独で評価した。
室温で30分後、ホスファチジルイノシトールの転換をク
ロロホルム：メタノール（1:2）940μｌの添加と、これ
に続いてクロロホルム310μｌと水310μｌの添加によっ
て終了させた。次に各管を15秒間うず巻状にかきまぜ、
次いで相分離のため3000rpmで10分間遠心分離した。上
相（水性）900μｌを0.5mlバイオライドAG−1X8（フォ
ルメート）イオン交換カラムに充填した。底相（クロロ
ホルム）50μｌを各管から取り出し、計測バイアル中に
入れ、乾燥し、シンチレーション流体中で計測した。カ
ラム上のミネラルを次の順序で洗った。

１）水10ml ２）5mM四ホウ酸二ナトリウム/60mM蟻酸ナトリウム5ml ３）0.1M蟻酸中の1M蟻酸アンモニウム10ml最終（第三）
洗浄液を集め、1mlをACSシンチラント6mlと混合して計
測した。各試料について、これらのカウント（全イノシ
トールホスフェート）と対応する有機相のカウントとの
比を計算した。試験化合物及び／又は標準物質の存在下
における比を、対照検定管（すなわち刺激性作用剤を含
まないもので）での比と比較した。投与量−応答曲線を
作図し、試験化合物がニューロキニンＡで誘発されるホ
スファチジルイノシトール転換を刺激ないし抑制する能
力について、グラフ分析により、又はコンピュータプロ
グラムの助けによって決定した。これは第２図から第５
図に例示されている。

実施例３現場ラット膀胱製剤中の環式Gln−Trp−Phe
−Gly−LeuΨ［CH₂NCH₃］LeuによるニューロキニンＡの
拮抗ウレタン（1.2g/kg腹膜内）を補充したケタミン塩酸
塩（100mg/kg腹膜内）でラット（雌、スプラーグ・ドー
リー種、150−200g）を麻酔にかけた。ドレイ（Dray）
［J.Pharmacol.Methods 13巻157−165頁（1985年）］の
方法に従って、膀胱をむき出しにし、からにした。膀胱
ドーム頂に針を挿入し、食塩水を毎分100μｌの速度で
膀胱に潅流した。膀胱流出液を、尿道に挿入されたポリ
エチレンカニューレから集めた。潅流系と直列に連結し
た流圧トランスデューサを通して、膀胱の収縮を監視し
た。食塩水又は最小限のDMSOを含有する食塩水40−100
μｌ中の試験化合物を膀胱ドームに適用した。75％まで
のDMSOを含有する適用ビヒクルは、直接の効果をもた
ず、その後のNKAで誘発される収縮に影響を及ぼさなか
った。収縮に対するNKAの限界濃度値は約10μｇであ
り、この量は定常的に使用された。KNAの反復適用の５
分前に拮抗剤を同様に膀胱に適用した。NKA10μｇの反
復適用は、タキフィラキシーを生じなかった。各動物に
対して、１分の時間間隔で収縮の振幅（力）を連続的に
記録した。自動記録装置の記録例を第６図に示す。

実施例４ I.Boc−Leu−アルデヒド合成［フェーレンツ・ジェイ・
エイ（Fehrentz,J.A.）及びカストロ・ビー（Castro,
B.）Synthesis（1983年）676−678頁］： A.N−ｔ−Boc−ロイシンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミ
ド Boc−ロイシン水和物15.0ミリモルを乾燥エーテル30m
lに溶解した。溶液を無水MgSO₄で乾燥し、固体を濾過に
よって除去した。カルボニルジイミダゾール16.5ミリモ
ルを濾液に加え、反応を室温で20分かきまぜた。生ずる
溶液に、ジメチルホルムアミド15mlとジイソプロピルエ
チルアミン3.9ml中のO,N−ジメチルヒドロキシルアミン
塩酸塩（22.5ミリモル）の懸濁液を添加した。反応混合
物を室温で一夜かきまぜた。反応を酢酸エチル75mlで希
釈し、冷たい1N HCl（３×40ml）、飽和NaHCO₃（３×40
ml）及び飽和NaCl（１×40ml）で洗った。有機相をMgSO
₄で乾燥し、濾過し、酢酸エチルを真空中で除去した。
分析データ:Rf（シリカゲルf254）:0.51（酢酸エチル／
ヘキサン3:2）；′Ｈ−NMR（CDCl₃）TMS int）：δ＝0.
95ppm（2d,6H,J＝6.6 Hz）;1.42（s,11H）;1.64−1.80
（m,1H）;3.20（s,3H）;3.80（s,3H）;4.72（m,1H）;5.
10（d,1H,J＝7.5 Hz）質量スペクトル:M＋H⁺:論理値27
5、測定値275。

B.Boc−ロイシンアルデヒド Boc−ロイシンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド2.5ミ
リモルを乾燥エーテル30mlに溶解した。この溶液に、水
素化アルミニウムリチウム3.2ミリモル（1Mテトラヒド
ロフラン溶液）を添加した。反応を室温で20分かきま
ぜ、次いで水10ml中のNaHSO₄（0.6g）の溶液を添加して
注意深く停止させた。反応混合物をエーテル75mlに添加
し、冷たい1N HCl（３×30ml）、飽和NaHCO₃（３×30m
l）、及び飽和1N NaCl（３×30ml）で洗った。有機相を
MgSO₄で乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去した。分
析データ:Rf（シリカゲル60 F254）:0.68（酢酸エチル
／ヘキサン3:2）。質量スペクトル:M＝H⁺:理論値216、
測定値216。

II.Leu−Gln−Trp［Ψ（CHO）］−Phe−Gly−PAM−樹脂
の合成 Boc−Gly−PAM樹脂（0.5ミリモル）から始めて、自動
化ペプチド合成機での標準的な固体相ペプチド合成手法
を用いた。残りのアミノ酸（Phe、Trp［Ψ（CHO）］、G
ln、Leu）を次々に付加した。次にBoc保護基をトリフル
オロ酢酸で除去し、樹脂をジイソプロピルエチルアミン
で中和した。次に樹脂をジメチルホルムアミド、ジクロ
ロメタンで洗って乾燥した。

III.還元アミド結合（LeuΨ［CH₂NH］の形成 Boc−Leuアルデヒド（２ミリモル）をジメチルホルム
アミド10ml中の１％酢酸に溶解し、ペプチド樹脂（0.5
ミリモル、上のIIを参照）を含有する反応容器にこの溶
液を添加した。この混合物に、ジメチルホルムアミド2m
l中のNaCNBH₃（150mg）の溶液を添加した。混合物を４
時間振とうし、反応容器から排出し、樹脂をジメチルホ
ルムアミド、及び次にジクロロメタンで洗った。

IV.環式［LeuΨ［CH₂NH］Leu−Gln−Trp−Phe−Gly］の
合成ペプチドを樹脂から開裂し、無水HF/アニソール（10:
1）を用いて全体的に脱保護した。粗製ペプチド77mgの
一部をジメチルホルムアミド15mlに溶解し、次にトリエ
チルアミン0.2mlとジフェニルホスホニルアジド0.08ml
を加えることによって、ペプチドを環化した。室温で12
時間かきまぜた後、溶媒を真空中で除去した。次に、1:
1アセトニトリル：水（v/v）60mlに粗製環式ペプチドを
溶解し、トリエチルアミン2.0mlを添加することによっ
て、Trp（CHO）残基を脱ホルミル化した。脱ホルミル化
反応を室温で12時間かきまぜてから、溶媒を真空中で除
去した。逆相HPLC手法を使用して粗製環式ペプチドを精
製すると、純粋な化合物が得られた。収量27.9mg,38.2
μモル。分析データ：アミノ酸分析：（HCl消化）Gl×
（0.83）、Phe（0.97）、Gly（1.03）。高速原子衝撃質
量スペクトル分析：（Ｍ＋Ｈ）⁺.論理値731、測定値73
1;ペプチド含有量:50.7％。

V.環式［LeuΨ［CH₂NCH₃］Leu−Gln−Trp−Phe−Gly］
の合成上のIIIに述べたとおりに、Ｎ−メチル−Leu−Gln−T
rp（CHO）−Phe−Gly−PAM樹脂（上のIIに従ってBoc−
Ｎ−メチルロイシンから調製）を、Boc−Leuアルデヒド
（2.0ミリモル）と反応させた。次に、上のIVに述べた
とおりに、ペプチド合成を完了させた。分析データ：ア
ミノ酸分析：（HCl消化物）Glx（0.72）;Gly（1.04）;P
he（0.96）．ペプチド含有量:63.7％．高速原子衝撃質
量スペクトル分析:M＋H⁺.計算値745;測定値745。

VI.環式［LeuΨ［CH₂NR］Leu−Gln−Trp−Phe−Gly］の
合成 Boc−Leu［Ψ（CH₂NH）］−Leu−Gln−Trp（CHO）−P
he−Gly−PAM−樹脂を上の段階II及びIIIに従って調製
する。次に、上のIIIに述べたとおりに、NaCNBH₃の存在
下に、ジメチルホルムアミド中１％HOAc10ml中のＲ−CH
O（2.5ミリモル）と樹脂を反応させる。次に、上のIVに
述べたとおりに、ペプチド合成を完了させる。

以下図面を説明する。

第１図は、ハムスター膀胱からのI¹²⁵標識付きNKAの
結合と競合する試験化合物の能力によって例証されると
おり、NKA受容体での作用剤の結合に対する環式（Gln−
Trp−Phe−Gly−Leu［Ψ（CH₂NH）］−Leu）及び環式
（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu［Ψ（CH₂NCH₃）］−Leu）
の拮抗能力を示す（実施例１）。横座標（ｘ軸）はニュ
ーロキニンＡ（NKA）受容体の作用剤又は拮抗剤濃度を
対数で示す。縦座標（ｙ軸）は、最大特異結合の百分率
として測定された。各試験作用剤又は拮抗剤について観
察された特異的結合を示す。値は６−12回の実験のMEAN
±S.E.M.である。IC₅₀値はグラフで50％抑制点から推定
され、図に列挙されている。環式（Gln−Trp−Phe−Gly
−Leu［Ψ（CH₂NCH₃）］−Leu）は環式（Gln−Trp−Phe
−Gly−Leu［Ψ（CH₂NH）］−Leu）より強力な競合物質
であり、作用剤のNKA自体より強力であった。

第２図と第３図は、ハムスターの膀胱でNKAによって
誘発されるホスファチジルイノシトール（PI）転換の、
投与量と関連した拮抗をつくりだすための、それぞれ環
式（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu［Ψ（CH₂NH）］−Leu）
と環式（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu［Ψ（CH₂NCH₃）］−
Leu）の能力を示す（実施例２）。横座標（ｘ軸）はNKA
受容体の作用剤又は拮抗剤濃度を対数で示す。縦座標
（ｙ軸）は、対照の百分率として観察されたPI転換率を
示す。値は１回の三重試験からのMEAN＋S.E.M.である。
各投与量−応答曲線の身元は、図に列挙されたとおりで
ある。10nM及び100nMの濃度の環式（Gln−Trp−Phe−Gl
y−Leu［Ψ（CH₂NH）］−Leu）（第２図）と、100nM、
１μＭ、及び10μＭの濃度の環式（Gln−Trp−Phe−Gly
−Leu［Ψ（CH₂NCH₃）］−Leu）（第３図）は、右寄り
のNKA投与量−応答曲線を生じた。10μＭまでの濃度の
化合物のみでは、PI転換を誘発しなかった。

第４図と第５図は、ハムスター膀胱での受容体で媒介
されNKAで誘発されるPI転換（実施例２）に対する環式
（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NH−Leu）と環式（Gln
−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NCH₃−Leu）の拮抗能力の比
較を示す。横座標（ｘ軸）は、NKA濃度を対数で示す。
縦座標（ｙ軸）は、対照の百分率として観察されたPI転
換率を示す。値は１回の三重試験からのMEAN＋S.E.M.で
ある。各投与量−応答曲線の身元は、図に列挙されたと
おりである。100nM（第４図）と１μＭ（第５図）での
両ペプチド類は、平行な右寄りのNKA投与量−応答曲線
を生じた。各拮抗剤濃度とも、両ペプチドは互いに同等
な能力をもっている。

第５図第６図。麻酔をかけたラットの露出された膀胱ドーム
にNKA（10μｇ）を直接に適用したとき、これは持続的
な緊張性収縮と回数の増加をもたらした。環式（Gln−T
rp−Phe−Gly−Leu［Ψ（CH₂NCH₃）］−Leu）（25μ
ｇ）を適用して５分後、第二の同じ適用をしたとき、NK
Aの効果は著しく低下するか、又は２匹の異なるラット
で完全に遮断された。各動物に対して連続記憶を示す。
方法は実施例３に記述されたとおりである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ハムスター膀胱からのI¹²⁵標識付きNKAの結
合と競合する試験化合物の拮抗能力を示すグラフ（実施
例１）。第２図と第３図は、ハムスターの膀胱でNKAによって誘
発されるPI転換の、投与量と関連した拮抗をつくりだす
環式（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NH−Leu）と環式
（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NCH₃−Leu）の能力を
示すグラフ（実施例２）。第４図と第５図は、ハムスター膀胱での受容体で媒介さ
れNKAで誘発されるPI転換（実施例２）に対する環式（G
ln−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NH−Leu）と環式（Gln−T
rp−Phe−Gly−Leu−CH₂NCH₃−Leu）の拮抗能力の比較
を示すグラフ。第６図は、麻酔ラットの露出膀胱ドームにNKAを直接に
適用したときの接続的な緊張性収縮と回数の増加効果
を、環式（Gln−Trp−Phe−Gly−Leu−CH₂NCH₃−Leu）
（25μｇ）適用５分後の第二の同じ適用が、著しく低下
させるか完全に遮断することを示している、各動物に対
する連続記録のグラフ。

フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07K 5/10 C07K 7/06 A61K 38/00 - 38/04 C07K 5/02 ＷＰＩ／Ｌ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】式［式中A₁はGlnであり； A₂はTrpであり； A₃はPheであり； A₄はGlyであり；Ｂは式の基であって、ここでＲは水素原子又は１〜４個の炭素
原子のアルキル基であり； R₁とR₂は各々独立にイソプロピル、イソブチル、第二ブ
チル、ｎ−ブチル、及び２−（メチルチオ）エチル基か
ら選ばれる。］のペプチド、又は製薬上受け入れられる
その塩。
【請求項２】Ｒが水素である請求項１に記載のペプチ
ド。
【請求項３】Ｒがメチルである請求項１に記載のペプチ
ド
【請求項４】R₁がｎ−ブチルである、請求項１に記載の
ペプチド。
【請求項５】R₂がｎ−ブチル又は２−メチルチオエチル
である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】環状のGln−Trp−Phe−Gly−Leu［CH₂NC
H₃］Leuである請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】環状のGln−Trp−Phe−Gly−Leu［CH₂NH］
Leuである請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】請求項１〜７の何れか一に記載のペプチド
の有効量を含む抗喘息剤。