JP2828675B2 - ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法 - Google Patents
ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はPHB菌体内蓄積菌（以下PHB蓄積菌と称する）
をPHBを菌体内に蓄積する条件で培養後、飢餓状態にて
安定に保存し、菌体の簡便利用に施用することを特徴と
するPHB蓄積菌の保存安定化法に関する。
をPHBを菌体内に蓄積する条件で培養後、飢餓状態にて
安定に保存し、菌体の簡便利用に施用することを特徴と
するPHB蓄積菌の保存安定化法に関する。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕 現在、微生物は医薬、食品、農業、農業用土壌資材等
の様々な方面で抗生物質やビタミンやアミノ酸等の有用
物生産に大いに利用されている。これら微生物の代謝能
及び発育能は保存環境によって極めて変化し易く、その
保存法については種々の方法が考案され、使用されてい
る（根井外喜男編；「微生物の保存法」東京大学出版
会,1977年）。
の様々な方面で抗生物質やビタミンやアミノ酸等の有用
物生産に大いに利用されている。これら微生物の代謝能
及び発育能は保存環境によって極めて変化し易く、その
保存法については種々の方法が考案され、使用されてい
る（根井外喜男編；「微生物の保存法」東京大学出版
会,1977年）。
微生物の保存法の中で代表的なものとして、継代培
養、蒸留水保存、糖液又は緩衝液保存等が挙げられる。
しかしながら、これらの方法は種菌調製を３日〜４週間
毎に実施しなければならず、多大な労力が必要である。
養、蒸留水保存、糖液又は緩衝液保存等が挙げられる。
しかしながら、これらの方法は種菌調製を３日〜４週間
毎に実施しなければならず、多大な労力が必要である。
また、−80℃凍結保存、液体窒素保存、あるいは凍結
乾燥保存では長期間生菌数が保持されるが、保存時の凍
結及び使用時の融解の条件の変化により細胞障害を起こ
したり、細胞の死滅による生菌数の減少、代謝能の低下
による生理活性物質生産能の低下及び薬剤に対する感受
性の変化等の問題が起こる。これらの問題を解決するた
め、保護剤として糖類、グリセリン、脱脂粉乳、アミノ
酸、血清又は血液、ジメチルスルフォキサイド、エチレ
ングリコール、アラビアゴム、リン酸緩衝液、糖蜜等が
単独又は組み合わせて用いられているが、満足し得る結
果が得られていない。
乾燥保存では長期間生菌数が保持されるが、保存時の凍
結及び使用時の融解の条件の変化により細胞障害を起こ
したり、細胞の死滅による生菌数の減少、代謝能の低下
による生理活性物質生産能の低下及び薬剤に対する感受
性の変化等の問題が起こる。これらの問題を解決するた
め、保護剤として糖類、グリセリン、脱脂粉乳、アミノ
酸、血清又は血液、ジメチルスルフォキサイド、エチレ
ングリコール、アラビアゴム、リン酸緩衝液、糖蜜等が
単独又は組み合わせて用いられているが、満足し得る結
果が得られていない。
本発明者らは上記問題を解決するために鋭意研究を行
った結果、保存担体に栄養性の物質を用いるのではな
く、菌体内に栄養物質であるPHBを保持させる方法に着
目し、PHB蓄積菌体内にPHBを蓄積させ、その後飢餓状態
にすることでその菌体の生菌数を維持できることを見出
し本発明を完成するに至った。
った結果、保存担体に栄養性の物質を用いるのではな
く、菌体内に栄養物質であるPHBを保持させる方法に着
目し、PHB蓄積菌体内にPHBを蓄積させ、その後飢餓状態
にすることでその菌体の生菌数を維持できることを見出
し本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、PHBを菌体内に蓄積する微生物を
菌体内にPHBを蓄積する条件で培養した後、飢餓状態の
下で０℃〜50℃で保存することを特徴とするPHBを菌体
内に蓄積する微生物の保存安定化法を提供するものであ
る。
菌体内にPHBを蓄積する条件で培養した後、飢餓状態の
下で０℃〜50℃で保存することを特徴とするPHBを菌体
内に蓄積する微生物の保存安定化法を提供するものであ
る。
本発明に用いられるPHB蓄積菌としては、アクチノミ
セス（Actinomyces）属、アルカリジェネス（Alcaligen
es）属、アゾトバクター（Azotobacter）属、アゾスピ
リルム（Azospirillum）属、バチルス（Bacillus）属、
ベイイエリンキア（Beijerinckia）属、クロマチウム
（Chromatium）属、クロモバクテリウム（Chromobacter
ium）属、デラキシア（Derxia）属、フェロバチルス（F
erobacillus）属、ハイポミクロビウム（Hyphomicrobiu
m）属、ランプロペディア（Lampropedia）属、メチロバ
クテリウム（Methylobacterium）属、ミクロコッカス
（Micrococcus）属、ノカルディア（Nocardia）属、シ
ュードモナス（Pseudomonas）属、リゾビウム（Rhizobi
um）属、ロドシュードモナス（Rhodopseudomonas）属、
ロドスピリルム（Rhodospirillum）属、スペロチルス
（Sphaerotilus）属、スピリルム（Spirillum）属、ス
トレプトミセス（Streptmyces）属、ヴィブリオ（Vibri
o）属、ズーグロエア（Zoogloea）属等公知の菌が挙げ
られるが、PHBを菌体内に蓄積する菌であれば上記菌種
に制限されるものではない。
セス（Actinomyces）属、アルカリジェネス（Alcaligen
es）属、アゾトバクター（Azotobacter）属、アゾスピ
リルム（Azospirillum）属、バチルス（Bacillus）属、
ベイイエリンキア（Beijerinckia）属、クロマチウム
（Chromatium）属、クロモバクテリウム（Chromobacter
ium）属、デラキシア（Derxia）属、フェロバチルス（F
erobacillus）属、ハイポミクロビウム（Hyphomicrobiu
m）属、ランプロペディア（Lampropedia）属、メチロバ
クテリウム（Methylobacterium）属、ミクロコッカス
（Micrococcus）属、ノカルディア（Nocardia）属、シ
ュードモナス（Pseudomonas）属、リゾビウム（Rhizobi
um）属、ロドシュードモナス（Rhodopseudomonas）属、
ロドスピリルム（Rhodospirillum）属、スペロチルス
（Sphaerotilus）属、スピリルム（Spirillum）属、ス
トレプトミセス（Streptmyces）属、ヴィブリオ（Vibri
o）属、ズーグロエア（Zoogloea）属等公知の菌が挙げ
られるが、PHBを菌体内に蓄積する菌であれば上記菌種
に制限されるものではない。
菌体内にPHBを蓄積させる方法としては窒素源の少な
い培地、例えばSoybean Casein Digest培地、肉エキス
培地あるいはポテトデキストロース培地等を用いること
が好ましいが、PHBを蓄積し得る条件であれば限定され
るものではない。またこれらの条件にて培養後、更に炭
素源、例えばグルコース、スクロース、グリセリン、ラ
クトース、フルクトース等を単品或いは組み合わせて加
え培養するとPHBの蓄積がより効果的に行なえる。
い培地、例えばSoybean Casein Digest培地、肉エキス
培地あるいはポテトデキストロース培地等を用いること
が好ましいが、PHBを蓄積し得る条件であれば限定され
るものではない。またこれらの条件にて培養後、更に炭
素源、例えばグルコース、スクロース、グリセリン、ラ
クトース、フルクトース等を単品或いは組み合わせて加
え培養するとPHBの蓄積がより効果的に行なえる。
本発明において菌体内にPHBを蓄積させた菌体は、非
栄養性の物質と混合されることにより飢餓状態にされ
る。その際用いられる非栄養性物質としては純水或いは
炭素源や窒素源を含んでいない水溶液、軽量多孔質無機
担体、ゼオライト、ケイソウ土、パーライト、ベントナ
イト、大谷石、アンスラ石、石灰石、稲わら或いはモミ
ガラ等の資化しずらい有機高分子体、バーミキュライト
等の単品又は組み合わせが挙げられるが、栄養源を含ん
でいない物質であれば上記のものに制限されるものでは
ない。
栄養性の物質と混合されることにより飢餓状態にされ
る。その際用いられる非栄養性物質としては純水或いは
炭素源や窒素源を含んでいない水溶液、軽量多孔質無機
担体、ゼオライト、ケイソウ土、パーライト、ベントナ
イト、大谷石、アンスラ石、石灰石、稲わら或いはモミ
ガラ等の資化しずらい有機高分子体、バーミキュライト
等の単品又は組み合わせが挙げられるが、栄養源を含ん
でいない物質であれば上記のものに制限されるものでは
ない。
また、飢餓状態にある菌体の保存条件は温度が０℃〜
50℃、好ましくは10℃〜35℃の範囲であり、菌体濃度は
103個/g以上、好ましくは109〜1012個/gの範囲である。
50℃、好ましくは10℃〜35℃の範囲であり、菌体濃度は
103個/g以上、好ましくは109〜1012個/gの範囲である。
以下の実施例によって本発明をより具体的に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
実施例１ 表１に示す各種菌体を肉エキス−ペプトン培地（ディ
フコ社製）を用い、30℃で24〜72時間振盪或いは静置培
養した後、遠心分離法によって集菌し、更に純水にて５
回洗菌後、菌体濃度が1011個/g程度になるように純水と
混合し、20℃で保存し、１年間生菌数の保存安定性を調
べた。
フコ社製）を用い、30℃で24〜72時間振盪或いは静置培
養した後、遠心分離法によって集菌し、更に純水にて５
回洗菌後、菌体濃度が1011個/g程度になるように純水と
混合し、20℃で保存し、１年間生菌数の保存安定性を調
べた。
生菌数測定は普通寒天培地（日水製薬社製）に菌体を
含む試料を一定の割合で希釈して植菌し、48時間後のコ
ロニー数により求めた。
含む試料を一定の割合で希釈して植菌し、48時間後のコ
ロニー数により求めた。
その結果、表１に示すとおりPHB蓄積菌はいずれも高
い生存率を示すことが認められた。
い生存率を示すことが認められた。
実施例２ Pseudomonas gladioliを実施例１の方法と同様に処理
し、純水と懸濁させ、表２に示す種々の温度において保
存し、１年間生菌数の保存安定性を調べた。その結果は
表２に示すとおり広い範囲の温度条件で生菌数が維持さ
れた。
し、純水と懸濁させ、表２に示す種々の温度において保
存し、１年間生菌数の保存安定性を調べた。その結果は
表２に示すとおり広い範囲の温度条件で生菌数が維持さ
れた。
実施例３ Pseudomonas gladioliを実施例１と同様の方法にて培
養し、得られた菌体を表３に示す種々の担体と菌体濃度
が1011個/g程度になるように混合して20℃にて保存し、
１年間生菌数の保存安定性を調べた。その結果は表３に
示すとおり非栄養性物質である純水、大谷石、ベントナ
イトでは良好な生存率が認められた。
養し、得られた菌体を表３に示す種々の担体と菌体濃度
が1011個/g程度になるように混合して20℃にて保存し、
１年間生菌数の保存安定性を調べた。その結果は表３に
示すとおり非栄養性物質である純水、大谷石、ベントナ
イトでは良好な生存率が認められた。
Claims (2)
- 【請求項１】ポリヒドロキシブチレート（以下PHBと称
する）を菌体内に蓄積する微生物を、菌体内にPHBを蓄
積する条件で培養した後、飢餓状態下で０℃〜50℃で保
存することを特徴とするPHBを菌体内に蓄積する微生物
の保存安定化法。 - 【請求項２】保存時の菌濃度が103個/g以上であること
を特徴とする請求項１記載の微生物の保存安定化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20217089A JP2828675B2 (ja) | 1989-08-03 | 1989-08-03 | ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20217089A JP2828675B2 (ja) | 1989-08-03 | 1989-08-03 | ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0365178A JPH0365178A (ja) | 1991-03-20 |
| JP2828675B2 true JP2828675B2 (ja) | 1998-11-25 |
Family
ID=16453124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20217089A Expired - Fee Related JP2828675B2 (ja) | 1989-08-03 | 1989-08-03 | ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2828675B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2561542Y2 (ja) * | 1992-06-16 | 1998-01-28 | 幹夫 福永 | サポータ |
| US5250427A (en) * | 1992-06-25 | 1993-10-05 | Midwest Research Institute | Photoconversion of gasified organic materials into biologically-degradable plastics |
| JP2773832B2 (ja) * | 1995-10-19 | 1998-07-09 | 株式会社川衛製作所 | 骨盤の矯正補助具 |
-
1989
- 1989-08-03 JP JP20217089A patent/JP2828675B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0365178A (ja) | 1991-03-20 |
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Legal Events
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