JPH0365178A - ポリヒドロキシブチレートを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＰＨＢ菌体内蓄積菌（以下ＰＩ（Ｂ蓄積菌と称
する）をＰＨＢを菌体内に蓄積する条件で培養後、飢餓
状態にて安定に保存し、菌体の簡便利用に施用すること
を特徴とするＰＨＢ蓄積菌の保存安定化法に関する。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕現在、
微生物は医薬、食品、農業、農業用土壌資材等の様々な
方面で抗生物質やビタミンやアミノ酸等の有用物生産に
大いに利用されている。これら微生物の代謝能及び発育
能は保存環境によって極めて変化し易く、その保存法に
ついては種々の方法が考案され、使用されている（根井
外喜男編；「微生物の保存法」東京大学出版会、　１９
７７年）。

微生物の保存法の中で代表的なものとして、継代培養、
蒸留水保存、糖液又は緩衝液保存等が挙げられる。しか
しながら、これらの方法は種菌調製を３日〜４週間毎に
実施しなければならず、多大な労力が必要である。

また、−８０°Ｃ凍結保存、液体窒素保存、あるいは凍
結乾燥保存では長期間生菌数が保持されるが、保存時の
凍結及び使用時の融解の条件の変化により細胞障害を起
こしたり、細胞の死滅による生菌数の減少、代謝能の低
下による生理活性物質生産能の低下及び薬剤に対する感
受性の変化等の問題が起こる。これらの問題を解決する
ため、保護剤として糖類、グリセリン、脱脂粉乳、アミ
ノ酸、血清又は血液、ジメチルスルフォキサイド、エチ
レングリコール、アラビアゴム、リン酸緩衝液、Ｉ！蜜
等が単独又は組み合わせて用いられているが、満足し得
る結果が得られていない。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記問題を解決するために鋭意研究を行っ
た結果、保存担体に栄養性の物質を用いるのではなく、
菌体内に栄養物質であるＰＨＢを保持させる方法に着目
し、ＰＨＢ蓄積菌体内にＰＩ（Ｂを蓄積させ、その後飢
餓状態にすることでその菌体の生菌数を維持できること
を見出し本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、ＰＨＢを菌体内に蓄積する微生物を
菌体内にＰＨＢを蓄積する条件で培養した後、飢餓状態
の下でＯ′Ｃ〜５０°Ｃで保存することを特徴とするＰ
ＵＢを菌体内に蓄積する微生物の保存安定化法を提供す
るものである。

本発明に用いられるＰＨＢ蓄積菌としては、アクチノミ
セス（Ａｃｔ　１ｎｏｔａｙｃｅｓ）属、アルカリジェ
ネス（ＡＬｃａＬｉｇｅｎｅｓ）属、アゾトバクタ−（
Ａｚｏｔｏ−ｂａｃｔｅｒ）属、アゾスピリルム（Ａｚ
ｏｓｐｉｒｉ　ｌ　１ｕａ）属、バチルス（ＢａｃｉＬ
Ｌｕｓ）属、ペイイエリンキア（Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋ
ｉａ）属、クロマチウム（Ｃｈｒｏｍａｔ　ｆｕｓｅＪ
属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）属、デラキシア（Ｄｅｒｘｉａ）属、フェロバチ
ルス（Ｆｅｒｏ−ｂａｃｉｔｌｕｓ）属、ハイポξクロ
ビウム（Ｈｙｐｈｏａｉｃｒｏ−ｂｉｕａ）属、ランプ
ロペディア（Ｌａｍｐｒｏｐｅｄｉａ）属、メチロバク
テリウム（ＭｅｔｈｙＬｏｂａｃｔｅｒｉｕｔａ）属、
ミクロコツカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ノカル
デイア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属、シュードモナス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉ
ｕｍ）属、ロドシュードモナス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ）属、ロドスビリルム（Ｒｈｏｄｏｓｐｉ
ｒｉ　ｌ　Ｌｕｔｅ）属、スペロチルス（Ｓｐｈａｅｒ
ｏｔｉＬｕｓ）属、スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）
属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔａｙｃｅｓ）属、
ヴイブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属、ズーグロエア（Ｚｏｏ
ｇＬｏｅａ）属等公知の菌が挙げられるが、ＰＨＢを菌
体内に蓄積する菌であれば上記菌種に制限されるもので
はない。

菌体内にＰＨＢを蓄積させる方法としては窒素源の少な
い培地、例えば５ｏｙｂｅａｎ　Ｃａ５ｅｉｎ　Ｄｉｇ
ｅｓｔ培地、肉エキス培地あるいはポテトデキストロー
ス培地等を用いることが好ましいが、Ｐ）ＩＢを蓄積し
得る条件であれば限定されるものではない、またこれら
の条件にて培養後、更に炭素源、例えばグルコース、ス
クロース、グリセリン、ラクトース、フルクトース等を
単品或いは組み合わせて加え培養するとＰＨＨの蓄積が
より効果的に行なえる。

本発明において菌体内にＰＨＢを蓄積させた菌体は、非
栄養性の物質と混合されることにより飢餓状態にされる
。その際用いられる非栄養性物質としては純水或いは炭
素源や窒素源を含んでいない水溶液、軽量多孔質無機担
体、ゼオライト、ケイソウ土、パーライト、ベントナイ
ト、大谷石、アンスラ石、石灰石、稲わら或いはモミガ
ラ等の資化しずらい有機高分子体、バーミキュライト等
の単品又は組み合わせが挙げられるが、栄養源を含んで
いない物質であれば上記のものに制限されるものではな
い。

また、飢餓状態にある菌体の保存条件は温度が００〜５
０°Ｃ１好ましくは１０’Ｃ〜３５°Ｃの範囲であり、
菌体濃度は１０３個／ｇ以上、好ましくは１０９〜１０
１８個／ｇの範囲である。

〔実　施　例〕

以下の実施例によって本発明をより具体的に説明するが
、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

叉嵐斑上 表１に示す各種菌体を肉エキス−ペプトン培地（デイフ
コ社製）を用い、３０℃で２４〜７２時間振盪或いは静
置培養した後、遠心分離法によって集菌し、更に純水に
て５回洗菌後、菌体濃度が１０１区個／ｇ程度になるよ
うに純水と混合し、２０°Ｃで保存し、１年間生菌数の
保存安定性を調べた。

生菌数測定は普通寒天培地（日永製薬社製）に菌体を含
む試料を一定の割合で希釈して植菌し、４８時間後のコ
ロニー数により求めた。

その結果、表１に示すとおりＰＨＢ蓄積菌はいずれも高
い生存率を示すことが認められた。

表　　　　１ ［表中数字は生存率（％）を表すｌ ＊　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏＬｉ　：　　ＰＨＢ
非蓄積菌、比較例文ＪｉｉＪ通え に混合して２０℃にて保存し、１年間生菌数の保存安定
性を調べた。その結果は表３に示すとおり非栄養性物質
である純水、大谷石、ベントナイトでは良好な生存率が
認められた。

表　　　　３ ［表中数字は生存率（％）を表す］

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　ポリヒドロキシブチレート（以下ＰＨＢと称する）
   を菌体内に蓄積する微生物を、菌体内にＰＨＢを蓄積す
   る条件で培養した後、飢餓状態下で０℃〜５０℃で保存
   することを特徴とするＰＨＢを菌体内に蓄積する微生物
   の保存安定化法。 ２　保存時の菌濃度が１０＾３個／ｇ以上であることを
   特徴とする請求項１記載の微生物の保存安定化法。