JP2793431B2 - 改変された補体系制御因子 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、補体活性化調節因子
（ＲＣＡ）をコードする遺伝子クラスターの改変タンパ
ク質を使用する、補体系の調節に関する。さらに詳しく
は、改変された結合特異性および親和性を有するこの系
のタンパク質のアナログに関する。
（ＲＣＡ）をコードする遺伝子クラスターの改変タンパ
ク質を使用する、補体系の調節に関する。さらに詳しく
は、改変された結合特異性および親和性を有するこの系
のタンパク質のアナログに関する。
【０００２】
【従来の技術】補体系は、異物および動物の宿主からの
免疫複合体の除去を補助する役目をする。この系および
その調節の性質についての最近出された要約が、Hourca
de, DらによるAdvances in Immunol (1989) 45:381-416
に示された。この文献は本明細書にて参考として援用さ
れている。
免疫複合体の除去を補助する役目をする。この系および
その調節の性質についての最近出された要約が、Hourca
de, DらによるAdvances in Immunol (1989) 45:381-416
に示された。この文献は本明細書にて参考として援用さ
れている。
【０００３】簡潔に述べれば、この総説に示されている
ように、補体系は、「古典経路」または「副経路」のい
ずれかによって、重要なタンパク質Ｃ３ｂを生成する。
このＣ３ｂは、免疫複合体または異物を標的としてこれ
らに結合し、これらを破壊または除去するためにマーク
する。Ｃ３ｂは、「Ｃ３コンベルターゼ」と総称される
タンパク質分解酵素により、その前駆体Ｃ３から生成さ
れる。Ｃ３コンベルターゼの１つの形態は、タンパク質
Ｃ４ｂおよびＣ２ａの結合により、古典経路において生
成される。もう１つの形態は、Ｃ３ｂおよびＢｂの結合
により副経路において生成される。これらのＣ３コンベ
ルターゼは共に、別のＣ３ｂサブユニットと結合し、Ｃ
５コンベルターゼ、Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂおよびＣ４ｂＣ２
ａＣ３ｂを形成し得る。これらは共に、細胞溶解を起こ
し得るＣ５−Ｃ９膜侵襲複合体の産生において、および
主要なプロ炎症剤であるＣ５ａの産生において、活性で
ある。従って、Ｃ３ｂおよび、Ｃ３ｂほど直接的ではな
いがＣ４ｂは、共に補体系におけるアゴニストである。
ように、補体系は、「古典経路」または「副経路」のい
ずれかによって、重要なタンパク質Ｃ３ｂを生成する。
このＣ３ｂは、免疫複合体または異物を標的としてこれ
らに結合し、これらを破壊または除去するためにマーク
する。Ｃ３ｂは、「Ｃ３コンベルターゼ」と総称される
タンパク質分解酵素により、その前駆体Ｃ３から生成さ
れる。Ｃ３コンベルターゼの１つの形態は、タンパク質
Ｃ４ｂおよびＣ２ａの結合により、古典経路において生
成される。もう１つの形態は、Ｃ３ｂおよびＢｂの結合
により副経路において生成される。これらのＣ３コンベ
ルターゼは共に、別のＣ３ｂサブユニットと結合し、Ｃ
５コンベルターゼ、Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂおよびＣ４ｂＣ２
ａＣ３ｂを形成し得る。これらは共に、細胞溶解を起こ
し得るＣ５−Ｃ９膜侵襲複合体の産生において、および
主要なプロ炎症剤であるＣ５ａの産生において、活性で
ある。従って、Ｃ３ｂおよび、Ｃ３ｂほど直接的ではな
いがＣ４ｂは、共に補体系におけるアゴニストである。
【０００４】これらの関係を図４に示す。
【０００５】補体系は意図した通りに作用すると有益で
あるが、これは体自身の組織をマークして破壊すること
もあり得るため、制御の下に保持しておく必要がある。
従って、ヒトおよび他の動物は、この作用方式で挙動す
る補体系の様々な構成成分が、特に宿主に内因性の細胞
と結合するときは、破壊され得るようなメカニズムを提
供している。
あるが、これは体自身の組織をマークして破壊すること
もあり得るため、制御の下に保持しておく必要がある。
従って、ヒトおよび他の動物は、この作用方式で挙動す
る補体系の様々な構成成分が、特に宿主に内因性の細胞
と結合するときは、破壊され得るようなメカニズムを提
供している。
【０００６】この補体系の効力を阻害するメカニズムに
は一般的に２つのものがある。第１のメカニズムは、一
般に可逆性であり、Ｃ３コンベルターゼの解離（すなわ
ちＢｂからＣ３ｂおよびＣ２ａからＣ４ｂ）を促進す
る。解離の促進は、時には崩壊の加速として知られる。
解離はまた、アンタゴニストタンパク質のＣ３ｂまたは
Ｃ４ｂ成分への可逆的な結合をも包含し得、これにより
これらの再結合を妨げる。もう１つのメカニズムは、不
可逆性の不活性化プロセスであり、Ｃ３コンベルターゼ
成分であるＣ３ｂまたはＣ４ｂを、セリンプロテアーゼ
因子Ｉにより、タンパク質開裂することにより得られ
る。このタンパク質開裂は補因子の存在下においてのみ
起こる。これら２つの一般的な制御メカニズム、Ｃ３ｂ
およびＣ４ｂの解離を促進すること、および因子Ｉによ
る開裂によりＣ３ｂおよびＣ４ｂを不活性化すること
は、副経路Ｃ５コンベルターゼ（Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂ）お
よび古典経路Ｃ５コンベルターゼ（Ｃ４ｂＣ２ａＣ３
ｂ）の阻害にもまた適用される。「補体活性化調節因
子」（ＲＣＡ）遺伝子クラスターと呼ばれるゲノムの１
領域によりコードされるタンパク質は、前記メカニズム
の両方で用いられる。現在、少なくとも６つのタンパク
質がこの領域によりコードされることが知られている。
これらを表１に要約して示す。
は一般的に２つのものがある。第１のメカニズムは、一
般に可逆性であり、Ｃ３コンベルターゼの解離（すなわ
ちＢｂからＣ３ｂおよびＣ２ａからＣ４ｂ）を促進す
る。解離の促進は、時には崩壊の加速として知られる。
解離はまた、アンタゴニストタンパク質のＣ３ｂまたは
Ｃ４ｂ成分への可逆的な結合をも包含し得、これにより
これらの再結合を妨げる。もう１つのメカニズムは、不
可逆性の不活性化プロセスであり、Ｃ３コンベルターゼ
成分であるＣ３ｂまたはＣ４ｂを、セリンプロテアーゼ
因子Ｉにより、タンパク質開裂することにより得られ
る。このタンパク質開裂は補因子の存在下においてのみ
起こる。これら２つの一般的な制御メカニズム、Ｃ３ｂ
およびＣ４ｂの解離を促進すること、および因子Ｉによ
る開裂によりＣ３ｂおよびＣ４ｂを不活性化すること
は、副経路Ｃ５コンベルターゼ（Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂ）お
よび古典経路Ｃ５コンベルターゼ（Ｃ４ｂＣ２ａＣ３
ｂ）の阻害にもまた適用される。「補体活性化調節因
子」（ＲＣＡ）遺伝子クラスターと呼ばれるゲノムの１
領域によりコードされるタンパク質は、前記メカニズム
の両方で用いられる。現在、少なくとも６つのタンパク
質がこの領域によりコードされることが知られている。
これらを表１に要約して示す。
【０００７】
【表１】
【０００８】これらのタンパク質は、以下に述べるいく
つかの構造上の類似性を有する。
つかの構造上の類似性を有する。
【０００９】Ｃ４ｂまたはＣ３ｂへ可逆的に結合してＣ
３コンベルターゼを解離することは、Ｃ４結合タンパク
質（Ｃ４ｂｐ）およびＨ因子と呼ばれる２つのプラズマ
タンパク質により、ならびに崩壊加速因子（ＤＡＦ）お
よび補体受容体１（ＣＲ１）と呼ばれる２つの膜タンパ
ク質により行われる。Ｃ４ｂへの可逆的結合は、Ｃ４ｂ
ｐ、ＤＡＦ、およびＣＲ１により行われ、一方、Ｃ３ｂ
への可逆的結合は、Ｈ因子、ＤＡＦ、およびＣＲ１によ
り行われる。
３コンベルターゼを解離することは、Ｃ４結合タンパク
質（Ｃ４ｂｐ）およびＨ因子と呼ばれる２つのプラズマ
タンパク質により、ならびに崩壊加速因子（ＤＡＦ）お
よび補体受容体１（ＣＲ１）と呼ばれる２つの膜タンパ
ク質により行われる。Ｃ４ｂへの可逆的結合は、Ｃ４ｂ
ｐ、ＤＡＦ、およびＣＲ１により行われ、一方、Ｃ３ｂ
への可逆的結合は、Ｈ因子、ＤＡＦ、およびＣＲ１によ
り行われる。
【００１０】酵素Ｉ因子によるコンベルターゼ成分Ｃ３
ｂまたはＣ４ｂのタンパク質開裂の結果起こるＣ３コン
ベルターゼの不可逆的不活性化は、上述のプラズマ中の
Ｈ因子とＣ４ｂｐにより、および細胞表面でのＣＲ１と
膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）により行われる補因子活
性により起こり得る。Ｃ３ｂの開裂のための補因子活性
は、Ｈ因子、ＣＲ１、およびＭＣＰにより行われ、一
方、Ｃ４ｂの開裂のための補因子活性は、Ｃ４ｂｐ、Ｃ
Ｒ１、およびＭＣＰにより行われる。第６番目のタンパ
ク質、補体受容体２（ＣＲ２）が細胞表面にこの補因子
活性を有することもまた可能である。
ｂまたはＣ４ｂのタンパク質開裂の結果起こるＣ３コン
ベルターゼの不可逆的不活性化は、上述のプラズマ中の
Ｈ因子とＣ４ｂｐにより、および細胞表面でのＣＲ１と
膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）により行われる補因子活
性により起こり得る。Ｃ３ｂの開裂のための補因子活性
は、Ｈ因子、ＣＲ１、およびＭＣＰにより行われ、一
方、Ｃ４ｂの開裂のための補因子活性は、Ｃ４ｂｐ、Ｃ
Ｒ１、およびＭＣＰにより行われる。第６番目のタンパ
ク質、補体受容体２（ＣＲ２）が細胞表面にこの補因子
活性を有することもまた可能である。
【００１１】従って、ＲＣＡ遺伝子クラスターによりコ
ードされる６つのタンパク質のうち、Ｈ因子、Ｃ４ｂ
ｐ、およびＣＲ１は可逆的解離活性および不可逆的補因
子活性を共に有し、ＤＡＦは可逆的解離活性のみを有
し、そしてＭＣＰおよび恐らくＣＲ２は不可逆的補因子
活性のみを有する。ＣＲ１、ＤＡＦ、およびＭＣＰは、
Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両方と相互作用し、Ｃ４ｂｐは主
にＣ４ｂと、そしてＨ因子は主にＣ３ｂと相互作用す
る。
ードされる６つのタンパク質のうち、Ｈ因子、Ｃ４ｂ
ｐ、およびＣＲ１は可逆的解離活性および不可逆的補因
子活性を共に有し、ＤＡＦは可逆的解離活性のみを有
し、そしてＭＣＰおよび恐らくＣＲ２は不可逆的補因子
活性のみを有する。ＣＲ１、ＤＡＦ、およびＭＣＰは、
Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両方と相互作用し、Ｃ４ｂｐは主
にＣ４ｂと、そしてＨ因子は主にＣ３ｂと相互作用す
る。
【００１２】参照および援用される上記のHourcadeの文
献は、ｃＤＮＡから推定されるアミノ酸配列の比較によ
り判定される、これらタンパク質の関係について述べて
いる。ＣＲ１、ＣＲ２、ＤＡＦ、ＭＣＰ、Ｃ４ｂｐ、お
よびＨ因子に対応するｃＤＮＡは、すべて得られており
配列決定されている。これら比較配列の評価により、図
１に示す比較図が得られた。図１には、Ｎ末端部を左側
にして、ＳＣＲを含有する領域、およびＳＣＲを含有し
ない領域にＲＣＡタンパク質をわけて示す。この図にお
いて、ＴＭは膜貫通ドメイン、Ｃは細胞質ドメイン、Ｏ
はＯ結合糖タンパク質化ドメイン、Ｇは糖脂質アンカ
ー、Ｕは未知の重要性を持つドメイン、そしてＤはジス
ルフィド架橋含有ドメインである。
献は、ｃＤＮＡから推定されるアミノ酸配列の比較によ
り判定される、これらタンパク質の関係について述べて
いる。ＣＲ１、ＣＲ２、ＤＡＦ、ＭＣＰ、Ｃ４ｂｐ、お
よびＨ因子に対応するｃＤＮＡは、すべて得られており
配列決定されている。これら比較配列の評価により、図
１に示す比較図が得られた。図１には、Ｎ末端部を左側
にして、ＳＣＲを含有する領域、およびＳＣＲを含有し
ない領域にＲＣＡタンパク質をわけて示す。この図にお
いて、ＴＭは膜貫通ドメイン、Ｃは細胞質ドメイン、Ｏ
はＯ結合糖タンパク質化ドメイン、Ｇは糖脂質アンカ
ー、Ｕは未知の重要性を持つドメイン、そしてＤはジス
ルフィド架橋含有ドメインである。
【００１３】タンパク質のＲＣＡファミリー全般に相当
の均一性があるのが分かる。これらのすべては、一般に
「短いコンセンサス反復」（ＳＣＲ）と呼ばれる６０〜
７０個のアミノ酸反復ユニットからなる。各ＳＣＲは、
多くの不変のまたは高度に保存されたアミノ酸残基を、
同じタンパク質の他のＳＣＲとまたは他のファミリーメ
ンバーのＳＣＲと共有する。ファミリーの膜に結合され
るメンバーはまた、Ｃ末端に膜貫通領域および細胞内領
域を有する。さもなくば、糖脂質アンカーを有する。
の均一性があるのが分かる。これらのすべては、一般に
「短いコンセンサス反復」（ＳＣＲ）と呼ばれる６０〜
７０個のアミノ酸反復ユニットからなる。各ＳＣＲは、
多くの不変のまたは高度に保存されたアミノ酸残基を、
同じタンパク質の他のＳＣＲとまたは他のファミリーメ
ンバーのＳＣＲと共有する。ファミリーの膜に結合され
るメンバーはまた、Ｃ末端に膜貫通領域および細胞内領
域を有する。さもなくば、糖脂質アンカーを有する。
【００１４】ＳＣＲは、ファミリーの膜に結合されるメ
ンバーの細胞外部位、および分泌メンバーのタンパク質
構造物のほとんどすべてを形成する。２つの共有架橋結
合したシステインのペアが、各ＳＣＲ内に２つのループ
を確立する。最も小さいファミリーメンバーはＤＡＦお
よびＭＣＰであり、各々４つのＳＣＲを含有し、この
後、Ｏ結合の糖タンパク質化領域が続く。ＤＡＦは糖脂
質アンカーにより終了し、一方ＭＣＰは未知の重要性を
持つ細胞質外セグメント、膜貫通領域、および細胞内ド
メインと続いて終了する。ファミリーの分泌メンバーの
うち、Ｈ因子は２０個のＳＣＲを含有し、一方Ｃ４ｂｐ
の天然形態は、８個のＳＣＲのサブユニット７つ（Ｃ４
ｂｐα鎖）と、３個のＳＣＲのサブユニット１つ（Ｃ４
ｂｐβ鎖）と結合している。これらのＣ４ｂｐ鎖は、共
に非ＳＣＲドメインにより終了し、このドメインがジス
ルフィド結合を通じて、鎖を互いに接続している。ＣＲ
２は１６個のＳＣＲ、膜貫通領域、および細胞内ドメイ
ンを含有する。ＣＲ１は、１〜２８番の、７個の類似し
たＳＣＲのユニットを４度反復し（長い相同反復すなわ
ちＬＨＲ）、続いて、２９および３０番の２個の別のＳ
ＣＲ、および膜貫通領域ならびに細胞内部位を含有す
る。
ンバーの細胞外部位、および分泌メンバーのタンパク質
構造物のほとんどすべてを形成する。２つの共有架橋結
合したシステインのペアが、各ＳＣＲ内に２つのループ
を確立する。最も小さいファミリーメンバーはＤＡＦお
よびＭＣＰであり、各々４つのＳＣＲを含有し、この
後、Ｏ結合の糖タンパク質化領域が続く。ＤＡＦは糖脂
質アンカーにより終了し、一方ＭＣＰは未知の重要性を
持つ細胞質外セグメント、膜貫通領域、および細胞内ド
メインと続いて終了する。ファミリーの分泌メンバーの
うち、Ｈ因子は２０個のＳＣＲを含有し、一方Ｃ４ｂｐ
の天然形態は、８個のＳＣＲのサブユニット７つ（Ｃ４
ｂｐα鎖）と、３個のＳＣＲのサブユニット１つ（Ｃ４
ｂｐβ鎖）と結合している。これらのＣ４ｂｐ鎖は、共
に非ＳＣＲドメインにより終了し、このドメインがジス
ルフィド結合を通じて、鎖を互いに接続している。ＣＲ
２は１６個のＳＣＲ、膜貫通領域、および細胞内ドメイ
ンを含有する。ＣＲ１は、１〜２８番の、７個の類似し
たＳＣＲのユニットを４度反復し（長い相同反復すなわ
ちＬＨＲ）、続いて、２９および３０番の２個の別のＳ
ＣＲ、および膜貫通領域ならびに細胞内部位を含有す
る。
【００１５】Klickstein, L.B.らは、J Exp Med (1988)
168:1699-1717において、欠失変異導入法を使用して、
ＣＲ１中の別々のＣ３ｂおよびＣ４ｂ認識部位を同定す
ることについて述べている。結論としては、単一の基本
的なＣ４ｂ結合部位は、ＳＣＲ１−２を必要とし、一方
２つの主要なＣ３ｂ結合部位はＳＣＲ８−９およびＳＣ
Ｒ１５−１６を必要とする。Ｃ３ｂ補因子活性はＳＣＲ
８−９およびＳＣＲ１５−１６を必要とする。Kalli,
K.R.によるJ Exp Med (1991) 174:1451-1460は、Ｃ３ｂ
結合および補因子活性はまたＳＣＲ１０−１１およびＳ
ＣＲ１７−１８も必要とすることを示している。ＳＣＲ
１０−１１、ＳＣＲ１７−１８、およびＳＣＲ３−４は
実質的には同一であるため、ＣＲ１の３つの主要な活性
部位の特異性を決定するのはＳＣＲ１−２、ＳＣＲ８−
９、およびＳＣＲ１５−１６である。
168:1699-1717において、欠失変異導入法を使用して、
ＣＲ１中の別々のＣ３ｂおよびＣ４ｂ認識部位を同定す
ることについて述べている。結論としては、単一の基本
的なＣ４ｂ結合部位は、ＳＣＲ１−２を必要とし、一方
２つの主要なＣ３ｂ結合部位はＳＣＲ８−９およびＳＣ
Ｒ１５−１６を必要とする。Ｃ３ｂ補因子活性はＳＣＲ
８−９およびＳＣＲ１５−１６を必要とする。Kalli,
K.R.によるJ Exp Med (1991) 174:1451-1460は、Ｃ３ｂ
結合および補因子活性はまたＳＣＲ１０−１１およびＳ
ＣＲ１７−１８も必要とすることを示している。ＳＣＲ
１０−１１、ＳＣＲ１７−１８、およびＳＣＲ３−４は
実質的には同一であるため、ＣＲ１の３つの主要な活性
部位の特異性を決定するのはＳＣＲ１−２、ＳＣＲ８−
９、およびＳＣＲ１５−１６である。
【００１６】Hourcade, D.らは、J Exp Med (1988) 16
8:1255-1270において、ＣＲ１の最初の８個と半分のア
ミノ末端ＳＣＲをコードするＣＲ１−４と呼ばれるｃＤ
ＮＡクローンについて述べている。このｃＤＮＡはＣＯ
Ｓ細胞にトランスフェクトされ、その結果、分子量７８
ｋｄを有するＣＲ１の分泌切断型が合成される（Krych
ら、1991）。以下に示すように、この短く切られた形態
のタンパク質は、主にＣ４ｂに結合する。
8:1255-1270において、ＣＲ１の最初の８個と半分のア
ミノ末端ＳＣＲをコードするＣＲ１−４と呼ばれるｃＤ
ＮＡクローンについて述べている。このｃＤＮＡはＣＯ
Ｓ細胞にトランスフェクトされ、その結果、分子量７８
ｋｄを有するＣＲ１の分泌切断型が合成される（Krych
ら、1991）。以下に示すように、この短く切られた形態
のタンパク質は、主にＣ４ｂに結合する。
【００１７】ＣＲ１の多結合部位は、Ｃ３ｂを含有する
標的とのそれらの相互作用において、協同し得る。ＤＡ
ＦまたはＭＣＰ遺伝子構築物でトランスフェクトされ、
表面ＤＡＦまたはＭＣＰを発現する細胞は、補体介在の
細胞溶解に対する抵抗を実質的に増加させた（Lublin,
D.M.らによるJ Exp Med (1990) 174:35、Oglesby, T.J.
らによるTrans Assoc Am Phys (1991) CIV:164-172、Wh
ite, D.J.G.らによるTransplant Proc (1992) 24:474-4
76）。ダイマーへの結合は、同じＣＲ１分子内の２つの
部位で同時に起こり得るため、インビトロにおいて、Ｃ
Ｒ１のＣ３ｂ−Ｃ３ｂダイマーへの結合はＣ３ｂモノマ
ーへの結合よりはるかに強い（WongおよびFarrellによ
るJ Immunol (1991) 146:656、RossおよびMedofによるA
dv Immunol (1985) 37:217）。２つの基本的なＣ３ｂ結
合部位のうち一方を欠失させると、ＣＲ１のＣ３ｂ−Ｃ
３ｂへの結合を１０の因数だけ低減し得る（Wongおよび
FarrellによるJ Immunol (1991) 146:656）。基本的な
Ｃ４ｂ結合部位はまた、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂを共に含有
する標的との相互作用において、基本的なＣ３ｂ結合部
位と協同するように見える。これらの効果はインビボに
おいて重要な結果を持つ。すなわち、ＣＲ１はＣ３ｂで
密にコートされた標的に対して、およびＣ３ｂに加えて
Ｃ４ｂで密にコートされた標的に対して、さらに高い親
和性を有する。 さらに、いくつかの標的細胞の、炎症
刺激および溶解において重要であるＣ５コンベルターゼ
は、多くのＣＲ１リガンドより構成される。すなわち、
古典Ｃ５コンベルターゼは、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ（Ｃ４
ｂＣ３ｂＣ２ａ）を含有し、一方、副経路Ｃ５コンベル
ターゼは、２つのＣ３ｂタンパク質（Ｃ３ｂＣ３ｂＢ
ｂ）を含有する。ＣＲ１によるＣ５コンベルターゼの不
活性化はまた、１つ以上のＣＲ１の結合部位間の協同を
包含し得る。実際において、１つ以上のＣＲ１のＣ３ｂ
結合部位は、副経路Ｃ３およびＣ５コンベルターゼを効
率的に阻害するために重要なものであり得ることが示さ
れている（WongおよびFarrellによるJ Immunol (1991)
146:656）。
標的とのそれらの相互作用において、協同し得る。ＤＡ
ＦまたはＭＣＰ遺伝子構築物でトランスフェクトされ、
表面ＤＡＦまたはＭＣＰを発現する細胞は、補体介在の
細胞溶解に対する抵抗を実質的に増加させた（Lublin,
D.M.らによるJ Exp Med (1990) 174:35、Oglesby, T.J.
らによるTrans Assoc Am Phys (1991) CIV:164-172、Wh
ite, D.J.G.らによるTransplant Proc (1992) 24:474-4
76）。ダイマーへの結合は、同じＣＲ１分子内の２つの
部位で同時に起こり得るため、インビトロにおいて、Ｃ
Ｒ１のＣ３ｂ−Ｃ３ｂダイマーへの結合はＣ３ｂモノマ
ーへの結合よりはるかに強い（WongおよびFarrellによ
るJ Immunol (1991) 146:656、RossおよびMedofによるA
dv Immunol (1985) 37:217）。２つの基本的なＣ３ｂ結
合部位のうち一方を欠失させると、ＣＲ１のＣ３ｂ−Ｃ
３ｂへの結合を１０の因数だけ低減し得る（Wongおよび
FarrellによるJ Immunol (1991) 146:656）。基本的な
Ｃ４ｂ結合部位はまた、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂを共に含有
する標的との相互作用において、基本的なＣ３ｂ結合部
位と協同するように見える。これらの効果はインビボに
おいて重要な結果を持つ。すなわち、ＣＲ１はＣ３ｂで
密にコートされた標的に対して、およびＣ３ｂに加えて
Ｃ４ｂで密にコートされた標的に対して、さらに高い親
和性を有する。 さらに、いくつかの標的細胞の、炎症
刺激および溶解において重要であるＣ５コンベルターゼ
は、多くのＣＲ１リガンドより構成される。すなわち、
古典Ｃ５コンベルターゼは、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ（Ｃ４
ｂＣ３ｂＣ２ａ）を含有し、一方、副経路Ｃ５コンベル
ターゼは、２つのＣ３ｂタンパク質（Ｃ３ｂＣ３ｂＢ
ｂ）を含有する。ＣＲ１によるＣ５コンベルターゼの不
活性化はまた、１つ以上のＣＲ１の結合部位間の協同を
包含し得る。実際において、１つ以上のＣＲ１のＣ３ｂ
結合部位は、副経路Ｃ３およびＣ５コンベルターゼを効
率的に阻害するために重要なものであり得ることが示さ
れている（WongおよびFarrellによるJ Immunol (1991)
146:656）。
【００１８】ＲＣＡ遺伝子クラスターによりコードされ
るタンパク質は、組換えにより調製され得、補体系の調
節のために診断および治療において使用され得ることが
認められている。異種移植の問題が、Platt, J.L.らに
よりImmunology Today (1990)11:450-457において論じ
られている。不適合異種移植片の即時激症拒絶は、レシ
ピエントの補体活性に起因するという証拠が集まってい
る。細胞表面にヒト補体制御因子（ＤＡＦまたはＭＣＰ
など）を発現するトランスジェニック動物は、ヒトレシ
ピエントにおける激症拒絶から防御され得る豊富な器官
ソースであり得る。可溶性補体阻害剤もまた、補体介在
の拒絶から異種移植を防御する役割を果たし得る（Prui
tt, S.K.らによるTransplantation (1991) 52:868-87
3）。
るタンパク質は、組換えにより調製され得、補体系の調
節のために診断および治療において使用され得ることが
認められている。異種移植の問題が、Platt, J.L.らに
よりImmunology Today (1990)11:450-457において論じ
られている。不適合異種移植片の即時激症拒絶は、レシ
ピエントの補体活性に起因するという証拠が集まってい
る。細胞表面にヒト補体制御因子（ＤＡＦまたはＭＣＰ
など）を発現するトランスジェニック動物は、ヒトレシ
ピエントにおける激症拒絶から防御され得る豊富な器官
ソースであり得る。可溶性補体阻害剤もまた、補体介在
の拒絶から異種移植を防御する役割を果たし得る（Prui
tt, S.K.らによるTransplantation (1991) 52:868-87
3）。
【００１９】ＣＲ１の組換え可溶性形態が、ラットにお
ける逆受身アルサス反応において炎症を阻害し得ること
が、Yeh, C.G.らによるJ Immunol (1991) 146:250-256
において述べられている。肺および皮膚血管損傷のモデ
ルにおいて、補体介在のおよび好中球介在の組織損傷を
阻害することもまた示されている（Mulligan, M.S.らに
よるJ Immunol (1992) 148:1479-1485）。この可溶性Ｃ
Ｒ１は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に
おいて、突然変異させて膜貫通ドメインおよび細胞質ド
メインを除去したＣＲ１遺伝構築物の発現から得られ
た。ＣＨＯ細胞において同じく組換えにより産生された
類似の可溶性ＣＲ１が、ラットにおけるポスト虚血性心
筋炎症および壊死を阻害し得ることが、Weissman, H.F.
らによるScience (1990) 249:146-151に報告されてい
る。
ける逆受身アルサス反応において炎症を阻害し得ること
が、Yeh, C.G.らによるJ Immunol (1991) 146:250-256
において述べられている。肺および皮膚血管損傷のモデ
ルにおいて、補体介在のおよび好中球介在の組織損傷を
阻害することもまた示されている（Mulligan, M.S.らに
よるJ Immunol (1992) 148:1479-1485）。この可溶性Ｃ
Ｒ１は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に
おいて、突然変異させて膜貫通ドメインおよび細胞質ド
メインを除去したＣＲ１遺伝構築物の発現から得られ
た。ＣＨＯ細胞において同じく組換えにより産生された
類似の可溶性ＣＲ１が、ラットにおけるポスト虚血性心
筋炎症および壊死を阻害し得ることが、Weissman, H.F.
らによるScience (1990) 249:146-151に報告されてい
る。
【００２０】ＲＣＡタンパク質に関連したタンパク質は
また、恐らくはウィルスによる感染を促進させるメカニ
ズムとして、ウィルスにより産生されるということも示
されている（Kotwaal, J.らによるNature (1988) 335:1
76-178、McNearney, T.AによるJ Exp Med (1987) 166:1
525-1535）。
また、恐らくはウィルスによる感染を促進させるメカニ
ズムとして、ウィルスにより産生されるということも示
されている（Kotwaal, J.らによるNature (1988) 335:1
76-178、McNearney, T.AによるJ Exp Med (1987) 166:1
525-1535）。
【００２１】長期ベースでの補体系の完全な阻害は、ほ
とんどの個体において望ましくないようである。自己免
疫性疾患のいくつかの事例においては、古典経路のみの
阻害で十分であり得る。しかし、異種移植の事例におい
ては、両方の経路の緊縮阻害が重要であり得る。同様の
緊縮性は、他の適用例に対しても必要とされ得る。従っ
て、調節可能な結合活性を有する補体系の副次的モジュ
レーターが望まれる。本発明は、補体系の調節を厳密に
制御可能とする、変更された結合特異性および親和性を
有する、ＲＣＡをコードするタンパク質の改変型を調製
する手段を提供する。
とんどの個体において望ましくないようである。自己免
疫性疾患のいくつかの事例においては、古典経路のみの
阻害で十分であり得る。しかし、異種移植の事例におい
ては、両方の経路の緊縮阻害が重要であり得る。同様の
緊縮性は、他の適用例に対しても必要とされ得る。従っ
て、調節可能な結合活性を有する補体系の副次的モジュ
レーターが望まれる。本発明は、補体系の調節を厳密に
制御可能とする、変更された結合特異性および親和性を
有する、ＲＣＡをコードするタンパク質の改変型を調製
する手段を提供する。
【００２２】
【発明の目的】本発明は、ＲＣＡをコードするタンパク
質のアナログであり、これら調節タンパク質の改変され
た全長型または切断型であるアナログを目的とする。こ
れらアナログはまた、１つより多いＲＣＡタンパク質か
らの１つまたはそれ以上のＳＣＲを含有し得るＲＣＡハ
イブリッド型の改変型、およびＳＣＲが新しい順序で配
列されているＲＣＡ再構成型の改変型も包含する。これ
ら改変は、改変が行われる切断型、ハイブリッド型、ま
たは再構成型を包含するタンパク質と比較した場合の、
アナログの結合特異性および親和性の調整を行うことに
ある。これらのアナログは、補体系の制御において有用
であり、従って、自己免疫性疾患の治療、移植拒絶の抑
圧、心筋梗塞および脳卒中に関連した組織損傷における
診断および修復において有用であり得る。これらはま
た、補体活性化および免疫複合体形成に関連した症状の
診察においても役割を果たす。
質のアナログであり、これら調節タンパク質の改変され
た全長型または切断型であるアナログを目的とする。こ
れらアナログはまた、１つより多いＲＣＡタンパク質か
らの１つまたはそれ以上のＳＣＲを含有し得るＲＣＡハ
イブリッド型の改変型、およびＳＣＲが新しい順序で配
列されているＲＣＡ再構成型の改変型も包含する。これ
ら改変は、改変が行われる切断型、ハイブリッド型、ま
たは再構成型を包含するタンパク質と比較した場合の、
アナログの結合特異性および親和性の調整を行うことに
ある。これらのアナログは、補体系の制御において有用
であり、従って、自己免疫性疾患の治療、移植拒絶の抑
圧、心筋梗塞および脳卒中に関連した組織損傷における
診断および修復において有用であり得る。これらはま
た、補体活性化および免疫複合体形成に関連した症状の
診察においても役割を果たす。
【００２３】従って、１つの局面においては、本発明
は、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包含す
る、ＲＣＡをコードするタンパク質のアナログを目的と
する。これらのアナログは、改変されないタンパク質と
は異なる結合特異性および／または親和性を有する。別
の局面においては、本発明は、これらのアナログの産生
において有用である組換え物質を目的とする。さらに別
の局面においては、本発明は、これらのアナログが活性
成分である薬剤組成物、およびこれらのアナログを使用
する診断法を目的とする。さらにもう１つの局面におい
ては、本発明は、本発明のアナログを調製する方法を目
的とする。
は、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包含す
る、ＲＣＡをコードするタンパク質のアナログを目的と
する。これらのアナログは、改変されないタンパク質と
は異なる結合特異性および／または親和性を有する。別
の局面においては、本発明は、これらのアナログの産生
において有用である組換え物質を目的とする。さらに別
の局面においては、本発明は、これらのアナログが活性
成分である薬剤組成物、およびこれらのアナログを使用
する診断法を目的とする。さらにもう１つの局面におい
ては、本発明は、本発明のアナログを調製する方法を目
的とする。
【００２４】
【発明の構成】本発明のアナログは、切断型、ハイブリ
ッド型、または再構成型を包含するＲＣＡタンパク質の
アナログであって、該ＲＣＡタンパク質とは異なる、Ｃ
３ｂおよび／またはＣ４ｂ結合特性を有する。
ッド型、または再構成型を包含するＲＣＡタンパク質の
アナログであって、該ＲＣＡタンパク質とは異なる、Ｃ
３ｂおよび／またはＣ４ｂ結合特性を有する。
【００２５】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、高められたＣ３ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
１１４〜１２１位に対応する部位が、少なくとも１つの
ＳＣＲにおいて、配列Ｓ−Ｔ−（Ｋ／Ｒ）−Ｐ−Ｐ−
（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｑ／Ｎ）を含有するように改変
されている。
アナログは、高められたＣ３ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
１１４〜１２１位に対応する部位が、少なくとも１つの
ＳＣＲにおいて、配列Ｓ−Ｔ−（Ｋ／Ｒ）−Ｐ−Ｐ−
（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｑ／Ｎ）を含有するように改変
されている。
【００２６】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、前記ＣＲ１の１１４〜１２１位に対応する
部位が、配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを含有す
るように改変されている。
アナログは、前記ＣＲ１の１１４〜１２１位に対応する
部位が、配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを含有す
るように改変されている。
【００２７】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、低められたＣ３ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
１１４〜１２１位に対応する部位が、少なくとも１つの
ＳＣＲにおいて、配列（Ｄ／Ｅ）−（Ｎ／Ｑ）−（Ｅ／
Ｄ）−Ｔ−Ｐ−（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｄ／Ｅ）を含有
するように改変されている。
アナログは、低められたＣ３ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
１１４〜１２１位に対応する部位が、少なくとも１つの
ＳＣＲにおいて、配列（Ｄ／Ｅ）−（Ｎ／Ｑ）−（Ｅ／
Ｄ）−Ｔ−Ｐ−（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｄ／Ｅ）を含有
するように改変されている。
【００２８】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、前記ＣＲ１の１１４〜１２１位に対応する
部位が、配列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄを含有す
るように改変されている。
アナログは、前記ＣＲ１の１１４〜１２１位に対応する
部位が、配列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄを含有す
るように改変されている。
【００２９】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、高められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
３５，６４，６５および／または９４位に対応する部位
の少なくとも１つが、少なくとも１つのＳＣＲにおい
て、（Ｇ／Ａ）３５，（Ｒ／Ｋ）６４，（Ｎ／Ｑ）６
５，および／または（Ｙ／Ｆ）９４となるように改変さ
れている。
アナログは、高められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
３５，６４，６５および／または９４位に対応する部位
の少なくとも１つが、少なくとも１つのＳＣＲにおい
て、（Ｇ／Ａ）３５，（Ｒ／Ｋ）６４，（Ｎ／Ｑ）６
５，および／または（Ｙ／Ｆ）９４となるように改変さ
れている。
【００３０】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、前記ＣＲ１の３５，６４，６５または９４
位に対応する少なくとも１つの部位が、Ｇ３５，Ｒ６
４，Ｎ６５，および／またはＹ９４であるように改変さ
れている。
アナログは、前記ＣＲ１の３５，６４，６５または９４
位に対応する少なくとも１つの部位が、Ｇ３５，Ｒ６
４，Ｎ６５，および／またはＹ９４であるように改変さ
れている。
【００３１】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、高められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
少なくとも９２位またはそれに対応する部位がＴに改変
されている。
アナログは、高められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
少なくとも９２位またはそれに対応する部位がＴに改変
されている。
【００３２】好適な実施態様においては、上記に記載の
アナログは、低められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
３５，６４，６５，９２，および９４位に対応する少な
くとも１つの部位が、該部位のアミノ酸残基、および該
ＣＲ１の３５，６４，６５，９２，および９４位に対応
する部位のアミノ酸残基とは異なるアミノ酸残基により
置換されている。
アナログは、低められたＣ４ｂ結合性を有し、ＣＲ１の
３５，６４，６５，９２，および９４位に対応する少な
くとも１つの部位が、該部位のアミノ酸残基、および該
ＣＲ１の３５，６４，６５，９２，および９４位に対応
する部位のアミノ酸残基とは異なるアミノ酸残基により
置換されている。
【００３３】本発明の、生物学的試料中のＣ３ｂおよび
／またはＣ４ｂの存在、不在、または量を検出する方法
は、該試料と上記に記載のアナログとを、該アナログと
該試料中の任意のＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂとの複合
体を形成させる条件下で接触させる工程と、該複合体の
存在、不在、または量を検出する工程とを包含する。本
発明の、動物被検体における補体系を調節する方法は、
このような調整を必要とする動物に、有効な量の、上記
に記載のアナログ、またはその薬剤組成物を投与するこ
とを包含する。
／またはＣ４ｂの存在、不在、または量を検出する方法
は、該試料と上記に記載のアナログとを、該アナログと
該試料中の任意のＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂとの複合
体を形成させる条件下で接触させる工程と、該複合体の
存在、不在、または量を検出する工程とを包含する。本
発明の、動物被検体における補体系を調節する方法は、
このような調整を必要とする動物に、有効な量の、上記
に記載のアナログ、またはその薬剤組成物を投与するこ
とを包含する。
【００３４】本発明の、補体活性を調節するための薬剤
組成物は、該調節を行うために有効な量の上記に記載の
アナログを、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形
剤と混合して含有する。
組成物は、該調節を行うために有効な量の上記に記載の
アナログを、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形
剤と混合して含有する。
【００３５】本発明のＤＮＡ配列は、上記に記載のアナ
ログをコードし、精製し、単離されている。
ログをコードし、精製し、単離されている。
【００３６】本発明の発現系は、適合する組換え宿主細
胞中に形質転換された場合、上記に記載のアナログをコ
ードするＤＮＡを発現可能な発現系であって、該宿主と
適合性のある制御配列に作動可能に結合した該アナログ
をコードするＤＮＡを含む。本発明の組換え宿主細胞
は、上記に記載の発現系で形質転換されている。
胞中に形質転換された場合、上記に記載のアナログをコ
ードするＤＮＡを発現可能な発現系であって、該宿主と
適合性のある制御配列に作動可能に結合した該アナログ
をコードするＤＮＡを含む。本発明の組換え宿主細胞
は、上記に記載の発現系で形質転換されている。
【００３７】好適な実施態様においては、上記に記載の
形質転換された宿主細胞は、哺乳類の細胞である。
形質転換された宿主細胞は、哺乳類の細胞である。
【００３８】好適な実施態様においては、上記に記載の
形質転換された宿主細胞は、トランスジェニック動物の
一部である。
形質転換された宿主細胞は、トランスジェニック動物の
一部である。
【００３９】本発明の、切断型、ハイブリッド型、およ
び再構成型を包含するＲＣＡタンパク質のアナログを生
産する方法は、該アナログが、該切断型、ハイブリッド
型、および再構成型を包含するＲＣＡタンパク質とは異
なる、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂ結合特性を有し、該
アナログをコードするＤＮＡが該アナログを産生するた
めに発現される条件下で、上記に記載の細胞を培養する
こと、および該培養物から該アナログを回収することを
包含する。
び再構成型を包含するＲＣＡタンパク質のアナログを生
産する方法は、該アナログが、該切断型、ハイブリッド
型、および再構成型を包含するＲＣＡタンパク質とは異
なる、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂ結合特性を有し、該
アナログをコードするＤＮＡが該アナログを産生するた
めに発現される条件下で、上記に記載の細胞を培養する
こと、および該培養物から該アナログを回収することを
包含する。
【００４０】本発明の、Ｃ３ｂへの結合特性を改変する
ように、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包
含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、該切断型、
ハイブリッド型の、および再構成型を包含するＲＣＡタ
ンパク質におけるアミノ酸配列であって、ＣＲ１の１１
４〜１２１位のアミノ酸に対応する配列を、アミノ酸配
列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑ、またはアミノ酸配
列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄに置換することを包
含する。
ように、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包
含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、該切断型、
ハイブリッド型の、および再構成型を包含するＲＣＡタ
ンパク質におけるアミノ酸配列であって、ＣＲ１の１１
４〜１２１位のアミノ酸に対応する配列を、アミノ酸配
列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑ、またはアミノ酸配
列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄに置換することを包
含する。
【００４１】本発明の、Ｃ４ｂへの結合特性を改変する
ように、切断型、ハイブリッド型の、および再構成型を
包含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、該切断
型、ハイブリッド型、および再構成型を包含するタンパ
ク質におけるアミノ酸であって、ＣＲ１の３５、６４、
６５、または９４位の少なくとも１つに対応するアミノ
酸を、各々、Ｇ、Ｒ、Ｎ、およびＹ以外のアミノ酸に置
換することを包含する。好適な実施態様においては、前
記置換アミノ酸は、各々、Ｅ、Ｋ、Ｔ、およびＨであ
る。
ように、切断型、ハイブリッド型の、および再構成型を
包含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、該切断
型、ハイブリッド型、および再構成型を包含するタンパ
ク質におけるアミノ酸であって、ＣＲ１の３５、６４、
６５、または９４位の少なくとも１つに対応するアミノ
酸を、各々、Ｇ、Ｒ、Ｎ、およびＹ以外のアミノ酸に置
換することを包含する。好適な実施態様においては、前
記置換アミノ酸は、各々、Ｅ、Ｋ、Ｔ、およびＨであ
る。
【００４２】本発明の、Ｃ４ｂへの結合特性を改変する
ように、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包
含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、ＣＲ１の９
２位に対応する部位のアミノ酸をＴまたはＫに置換する
ことを包含する。
ように、切断型、ハイブリッド型、および再構成型を包
含するＲＣＡタンパク質を改変する方法は、ＣＲ１の９
２位に対応する部位のアミノ酸をＴまたはＫに置換する
ことを包含する。
【００４３】本発明は、様々な生物学的状況に直面する
とその活性を調整する補体系を調節するために使用され
得る、ＲＣＡタンパク質アナログの１ファミリーを提供
する。本発明により提供される、このタンパク質ファミ
リーの、膜結合型および可溶性型の両方のメンバーの結
合特異性を調整する能力により補体系を調節すること、
および古典経路と副経路との間の均衡を調整することに
より活性に影響を及ぼすことに関して、長期的なまたは
短期的な必要のいずれかを満たすように、この調節が調
整可能とされる。ＣＲ１におけるＣ４ｂおよびＣ３ｂに
結合する部位が同定されることにより、ＲＣＡファミリ
ーの残りのメンバーに遺伝学的にコードされる対応する
配列についての知識と結びつけて、特定の特異性および
親和性を有する広範囲のアナログの産生が可能となる。
とその活性を調整する補体系を調節するために使用され
得る、ＲＣＡタンパク質アナログの１ファミリーを提供
する。本発明により提供される、このタンパク質ファミ
リーの、膜結合型および可溶性型の両方のメンバーの結
合特異性を調整する能力により補体系を調節すること、
および古典経路と副経路との間の均衡を調整することに
より活性に影響を及ぼすことに関して、長期的なまたは
短期的な必要のいずれかを満たすように、この調節が調
整可能とされる。ＣＲ１におけるＣ４ｂおよびＣ３ｂに
結合する部位が同定されることにより、ＲＣＡファミリ
ーの残りのメンバーに遺伝学的にコードされる対応する
配列についての知識と結びつけて、特定の特異性および
親和性を有する広範囲のアナログの産生が可能となる。
【００４４】Ｃ４ｂおよびＣ３ｂへの結合にとって重要
な（または不応の）アミノ酸配列の同定により、類似の
配列を、同じタンパク質の対応する領域または他のファ
ミリーメンバーの対応する領域へ転位させること、また
はこれらタンパク質に結合する配列を変更させてその親
和性を変更することが可能となる。対応する領域は、ア
ミノ酸配列のホモロジーの程度によって同定され得る。
ＣＲ１の場合においては、関係する４つの対応領域は、
ＳＣＲ１−２、ＳＣＲ８−９、ＳＣＲ１５−１６、およ
びＳＣＲ２２−２３である。図１において、ＤＡＦ中２
−３と書かれたＳＣＲの部位は、ＣＲ１で１−２、８−
９、１５−１６、および２２−２３と書かれたものに対
応する。ＤＡＦの部位を相同性のあるＣＲ１配列に置換
することにより、ＣＲ１により示されるように、補因子
活性および／または結合活性を有するＤＡＦの型が提供
される。同様に、ＭＣＰの部分を相同性のある配列に置
換することにより、結合親和性および補因子活性が増
大、および／または解離活性が増大した型のＭＣＰが提
供される。同様に、対応する領域を改変して、Ｃ４ｂお
よびＣ３ｂに対する親和性を増大させることにより、ま
たは補体系の一部を特異的に阻害する可溶補体阻害剤を
設計すること、さらに強力な可溶補体阻害剤を設計する
ことにより可能であり得る。
な（または不応の）アミノ酸配列の同定により、類似の
配列を、同じタンパク質の対応する領域または他のファ
ミリーメンバーの対応する領域へ転位させること、また
はこれらタンパク質に結合する配列を変更させてその親
和性を変更することが可能となる。対応する領域は、ア
ミノ酸配列のホモロジーの程度によって同定され得る。
ＣＲ１の場合においては、関係する４つの対応領域は、
ＳＣＲ１−２、ＳＣＲ８−９、ＳＣＲ１５−１６、およ
びＳＣＲ２２−２３である。図１において、ＤＡＦ中２
−３と書かれたＳＣＲの部位は、ＣＲ１で１−２、８−
９、１５−１６、および２２−２３と書かれたものに対
応する。ＤＡＦの部位を相同性のあるＣＲ１配列に置換
することにより、ＣＲ１により示されるように、補因子
活性および／または結合活性を有するＤＡＦの型が提供
される。同様に、ＭＣＰの部分を相同性のある配列に置
換することにより、結合親和性および補因子活性が増
大、および／または解離活性が増大した型のＭＣＰが提
供される。同様に、対応する領域を改変して、Ｃ４ｂお
よびＣ３ｂに対する親和性を増大させることにより、ま
たは補体系の一部を特異的に阻害する可溶補体阻害剤を
設計すること、さらに強力な可溶補体阻害剤を設計する
ことにより可能であり得る。
【００４５】さらに、Ｃ３ｂまたはＣ４ｂ結合を変更す
るアミノ酸の置換は、切断型、ハイブリッド型、および
再構成型を含む、ＣＲ１または他のＲＣＡタンパク質の
対応しないＳＣＲに対してなされ得る。このような場合
には、置換のための特定のアミノ酸の選択は、すべての
またはほとんどのＳＣＲに特有の部分に見いだされる高
度に保存されたアミノ酸に関して、それらの位置に基づ
いて行われる。このようにして、例えば、通常は結合能
力に直接には貢献しないＳＣＲに結合部位が付加され得
る。
るアミノ酸の置換は、切断型、ハイブリッド型、および
再構成型を含む、ＣＲ１または他のＲＣＡタンパク質の
対応しないＳＣＲに対してなされ得る。このような場合
には、置換のための特定のアミノ酸の選択は、すべての
またはほとんどのＳＣＲに特有の部分に見いだされる高
度に保存されたアミノ酸に関して、それらの位置に基づ
いて行われる。このようにして、例えば、通常は結合能
力に直接には貢献しないＳＣＲに結合部位が付加され得
る。
【００４６】本明細書にて使用される意味において、
「補体の活性化を調節するタンパク質」とは、「ＲＣＡ
タンパク質」のことを指す。「ＲＣＡタンパク質」と
は、遺伝子領域ｌｑ３２にて遺伝子クラスターによりコ
ードされるタンパク質を意味する。この領域は、補体調
節に有効な６個の既知のタンパク質、Ｈ因子、Ｃ４ｂ
ｐ、ＣＲ１、ＣＲ２、ＤＡＦ、およびＭＣＰをコードし
ている。さらに、ＣＲ１遺伝子のアミノ末端コード領域
に類似した見かけのコード領域が、この配列が発現され
るかどうかは不明ではあるが、このクラスターに配置さ
れている（Hourcade，D．らによるJ Bio1 Chem（l990）
265：974‐980）。「ＲＣＡタンパク質」という用語は
また、このファミリーのメンバーすべてに相同性がある
と同定され得る短いコンセンサス反復（ＳＣＲ）よりな
る１群のタンパク質を意味する。「ＲＣＡタンパク質」
はまた、ＲＣＡタンパク質の切断型、ハイブリッド型、
および再構成型をも包含する。「切断」型とは、ＲＣＡ
タンパク質が単に短くされたものであり、典型的には、
膜結合または分泌を行うＣ末端領域を除去するように改
変され、また１つまたはそれ以上のＳＣＲを欠失させる
ことによりさらに改変されることもある。「ハイブリッ
ド」型とは、１つまたはそれ以上の他のＲＣＡタンパク
質および／または他の非ＲＣＡタンパク質ドメインのＳ
ＣＲと結合した１つのＲＣＡタンパク質の部位、すなわ
ちＳＣＲよりなるＲＣＡタンパク質である。「再編成」
型とは、ＲＣＡタンパク質のＳＣＲが新しい順序で再配
列されるものである。当然ながら、「ＲＣＡタンパク
質」はまた、これら変更の組合せから得られるタンパク
質も包含する。
「補体の活性化を調節するタンパク質」とは、「ＲＣＡ
タンパク質」のことを指す。「ＲＣＡタンパク質」と
は、遺伝子領域ｌｑ３２にて遺伝子クラスターによりコ
ードされるタンパク質を意味する。この領域は、補体調
節に有効な６個の既知のタンパク質、Ｈ因子、Ｃ４ｂ
ｐ、ＣＲ１、ＣＲ２、ＤＡＦ、およびＭＣＰをコードし
ている。さらに、ＣＲ１遺伝子のアミノ末端コード領域
に類似した見かけのコード領域が、この配列が発現され
るかどうかは不明ではあるが、このクラスターに配置さ
れている（Hourcade，D．らによるJ Bio1 Chem（l990）
265：974‐980）。「ＲＣＡタンパク質」という用語は
また、このファミリーのメンバーすべてに相同性がある
と同定され得る短いコンセンサス反復（ＳＣＲ）よりな
る１群のタンパク質を意味する。「ＲＣＡタンパク質」
はまた、ＲＣＡタンパク質の切断型、ハイブリッド型、
および再構成型をも包含する。「切断」型とは、ＲＣＡ
タンパク質が単に短くされたものであり、典型的には、
膜結合または分泌を行うＣ末端領域を除去するように改
変され、また１つまたはそれ以上のＳＣＲを欠失させる
ことによりさらに改変されることもある。「ハイブリッ
ド」型とは、１つまたはそれ以上の他のＲＣＡタンパク
質および／または他の非ＲＣＡタンパク質ドメインのＳ
ＣＲと結合した１つのＲＣＡタンパク質の部位、すなわ
ちＳＣＲよりなるＲＣＡタンパク質である。「再編成」
型とは、ＲＣＡタンパク質のＳＣＲが新しい順序で再配
列されるものである。当然ながら、「ＲＣＡタンパク
質」はまた、これら変更の組合せから得られるタンパク
質も包含する。
【００４７】本発明の「アナログ」とは、上記に定義し
たＲＣＡタンパク質であり、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ結合部
位と結合するアミノ酸配列における変更により特異的に
改変された、切断型、ハイブリッド型、および再構成型
も包含する。
たＲＣＡタンパク質であり、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ結合部
位と結合するアミノ酸配列における変更により特異的に
改変された、切断型、ハイブリッド型、および再構成型
も包含する。
【００４８】いくつかの好適な実施態様においては、こ
れらの改変は、変更のための部位としてタンパク質の対
応するＳＣＲを使用することによって行われる。「対応
するＳＣＲ］とは、タンパク質のアミノ酸配列により判
定される、最も高度に相同性のあるＳＣＲを意味する。
場合によっては、エキソン構造がこの割当てを促進し得
る。従って、上述のように、ＣＲ１のＳＣＲ１−２はＤ
ＡＦのＳＣＲ２−３に対応する。さらに、Ｈ因子、ＣＲ
１、Ｃ４ｂｐ、およびＭＣＰのＳＣＲ１−２が、これら
のタンパク質の間で対応する配列であることが知られて
いる。上述のように、ＣＲ１は７個のＳＣＲを含有する
一連の長い相同反復（ＬＨＲ）へと構築されるため、Ｃ
Ｒ１のＳＣＲ１−７はＣＲ１のＳＣＲ８−１４、１５ー
２１、および２２−２８に対応する。ＣＲ２は、長さが
４個のＳＣＲよりなる一連の長い相同反復に構築され
る。ＣＲ１のＳＣＲ１−２は、ＣＲ２のＳＣＲ３−４、
ＳＣＲ７−８、ＳＣＲ１１−１２、およびＳＣＲ１５−
１６に対応する。
れらの改変は、変更のための部位としてタンパク質の対
応するＳＣＲを使用することによって行われる。「対応
するＳＣＲ］とは、タンパク質のアミノ酸配列により判
定される、最も高度に相同性のあるＳＣＲを意味する。
場合によっては、エキソン構造がこの割当てを促進し得
る。従って、上述のように、ＣＲ１のＳＣＲ１−２はＤ
ＡＦのＳＣＲ２−３に対応する。さらに、Ｈ因子、ＣＲ
１、Ｃ４ｂｐ、およびＭＣＰのＳＣＲ１−２が、これら
のタンパク質の間で対応する配列であることが知られて
いる。上述のように、ＣＲ１は７個のＳＣＲを含有する
一連の長い相同反復（ＬＨＲ）へと構築されるため、Ｃ
Ｒ１のＳＣＲ１−７はＣＲ１のＳＣＲ８−１４、１５ー
２１、および２２−２８に対応する。ＣＲ２は、長さが
４個のＳＣＲよりなる一連の長い相同反復に構築され
る。ＣＲ１のＳＣＲ１−２は、ＣＲ２のＳＣＲ３−４、
ＳＣＲ７−８、ＳＣＲ１１−１２、およびＳＣＲ１５−
１６に対応する。
【００４９】他の好適な実施態様においては、改変は、
すべてのまたはほとんどのＳＣＲに特有の部位に見いだ
される高度に保存されたアミノ酸に関して行われる。こ
れについては以下の実施例にてさらに述べる。
すべてのまたはほとんどのＳＣＲに特有の部位に見いだ
される高度に保存されたアミノ酸に関して行われる。こ
れについては以下の実施例にてさらに述べる。
【００５０】上記の方法のいずれかが、同じかまたは異
なったＲＣＡタンパク質における「対応する部位」を決
定するために使用され得る。
なったＲＣＡタンパク質における「対応する部位」を決
定するために使用され得る。
【００５１】以下に示すように、ＣＲ１におけるＣ３ｂ
結合配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑは、他のＳ
ＣＲにおける対応する部位に、または他のＳＣＲにおけ
る保持されたアミノ酸に関する部位に移され得、これに
より３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ
２における相同配列、すなわち、Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−
Ｉ−Ｃ−Ｄは、Ｃ３ｂ結合性を増強させるために、Ｃ３
ｂ結合ＳＣＲにおけるこのような部位に置換することに
より移され得る。
結合配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑは、他のＳ
ＣＲにおける対応する部位に、または他のＳＣＲにおけ
る保持されたアミノ酸に関する部位に移され得、これに
より３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ
２における相同配列、すなわち、Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−
Ｉ−Ｃ−Ｄは、Ｃ３ｂ結合性を増強させるために、Ｃ３
ｂ結合ＳＣＲにおけるこのような部位に置換することに
より移され得る。
【００５２】同様に、ＣＲ１における第２のＣ３ｂ結合
配列、Ｎ−Ａ−Ａ−Ｈは、他のＳＣＲの対応する部位
に、または他のＳＣＲにおける保持されたアミノ酸に関
する部位に移され得、これによりＣ３ｂ結合性が付与さ
れる。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ２における相同配列、す
なわち、Ｄ−Ｔ−Ｖ−Ｉは、結合性を弱めるために、Ｃ
３ｂ結合ＳＣＲにおけるこのような部位に置換すること
により移され得る。
配列、Ｎ−Ａ−Ａ−Ｈは、他のＳＣＲの対応する部位
に、または他のＳＣＲにおける保持されたアミノ酸に関
する部位に移され得、これによりＣ３ｂ結合性が付与さ
れる。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ２における相同配列、す
なわち、Ｄ−Ｔ−Ｖ−Ｉは、結合性を弱めるために、Ｃ
３ｂ結合ＳＣＲにおけるこのような部位に置換すること
により移され得る。
【００５３】さらに、ＣＲ１における第３のＣ３ｂ結合
配列、Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄは、他
のＳＣＲの対応する部位に、または他のＳＣＲにおける
保持されたアミノ酸に関する部位に移され得、これによ
りＣ３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ
１における相同配列、すなわち、Ｒ−Ｐ−Ｔ−Ｎ−Ｌ−
Ｔ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｅは、結合性を弱めるために、Ｃ３ｂ
結合性ＳＣＲにおけるこのような部位に置換することに
より移され得る。
配列、Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄは、他
のＳＣＲの対応する部位に、または他のＳＣＲにおける
保持されたアミノ酸に関する部位に移され得、これによ
りＣ３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１のＳＣＲ
１における相同配列、すなわち、Ｒ−Ｐ−Ｔ−Ｎ−Ｌ−
Ｔ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｅは、結合性を弱めるために、Ｃ３ｂ
結合性ＳＣＲにおけるこのような部位に置換することに
より移され得る。
【００５４】最後に、Ｃ３ｂ結合において重要な第４部
位、Ｙ残基は、他のＳＣＲの対応する部位に、または他
のＳＣＲにおける保持されたアミノ酸に関する部位に移
され得、これによりＣ３ｂ結合性が付与される。反対
に、ＣＲ１のＳＣＲ１における相同配列、すなわちＳ
は、結合を弱めるために、Ｃ３ｂ結合性ＳＣＲにおける
このような部位に置換することにより移され得る。
位、Ｙ残基は、他のＳＣＲの対応する部位に、または他
のＳＣＲにおける保持されたアミノ酸に関する部位に移
され得、これによりＣ３ｂ結合性が付与される。反対
に、ＣＲ１のＳＣＲ１における相同配列、すなわちＳ
は、結合を弱めるために、Ｃ３ｂ結合性ＳＣＲにおける
このような部位に置換することにより移され得る。
【００５５】以下に示すように、これらの置換は組み合
わせて行われ得る。すなわちＣＲ１におけるＣ３ｂ結合
配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−ＱおよびＮ−Ａ−
Ａ−Ｈは、他のＳＣＲの対応する部位に、または他のＳ
ＣＲにおける保存されたアミノ酸に関する部位に同時に
移され得、これにより単独の場合のどの転位よりも強力
なＣ３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１における
相同配列、すなわちＲ−Ｐ−Ｔ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｄ−Ｅ−
Ｆ−ＥおよびＤ−Ｔ−Ｖ−Ｉは、Ｃ３ｂ結合ＳＣＲにお
けるこのような部位に置換することにより同時に移され
得、これにより結合性が単独の場合のどの転位より大幅
に弱められる。
わせて行われ得る。すなわちＣＲ１におけるＣ３ｂ結合
配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−ＱおよびＮ−Ａ−
Ａ−Ｈは、他のＳＣＲの対応する部位に、または他のＳ
ＣＲにおける保存されたアミノ酸に関する部位に同時に
移され得、これにより単独の場合のどの転位よりも強力
なＣ３ｂ結合性が付与される。反対に、ＣＲ１における
相同配列、すなわちＲ−Ｐ−Ｔ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｄ−Ｅ−
Ｆ−ＥおよびＤ−Ｔ−Ｖ−Ｉは、Ｃ３ｂ結合ＳＣＲにお
けるこのような部位に置換することにより同時に移され
得、これにより結合性が単独の場合のどの転位より大幅
に弱められる。
【００５６】さらに、Ｃ４ｂ結合部位は、アミノ酸３
５、６４−６５、および９２−９４の付近の、ＣＲ１の
ＳＣＲ−１およびＳＣＲ−２における３つの離れた重要
な部位と関係しているように示されている。従って、Ｃ
Ｒ１における、対応するＳＣＲのアミノ酸配列の変更、
または付加的なＲＣＡファミリーメンバーもしくはそれ
らの切断型、ハイブリッド型、または再構成型における
対応するＳＣＲのアミノ酸配列の変更により、結果的
に、Ｃ４ｂ結合活性が変化する。
５、６４−６５、および９２−９４の付近の、ＣＲ１の
ＳＣＲ−１およびＳＣＲ−２における３つの離れた重要
な部位と関係しているように示されている。従って、Ｃ
Ｒ１における、対応するＳＣＲのアミノ酸配列の変更、
または付加的なＲＣＡファミリーメンバーもしくはそれ
らの切断型、ハイブリッド型、または再構成型における
対応するＳＣＲのアミノ酸配列の変更により、結果的
に、Ｃ４ｂ結合活性が変化する。
【００５７】さらに、構造的に類似したアミノ酸は、こ
のような転位において、特定のアミノ酸のいくつかに置
換し得る。構造的に類似したアミノ酸群としては、
（Ｉ，Ｌ，Ｖ）、（Ｆ，Ｙ）、（Ｋ，Ｒ）、（Ｑ，
Ｎ）、（Ｄ，Ｅ）、および（Ｇ，Ａ）が包含される。
のような転位において、特定のアミノ酸のいくつかに置
換し得る。構造的に類似したアミノ酸群としては、
（Ｉ，Ｌ，Ｖ）、（Ｆ，Ｙ）、（Ｋ，Ｒ）、（Ｑ，
Ｎ）、（Ｄ，Ｅ）、および（Ｇ，Ａ）が包含される。
【００５８】本発明のアナログの調製 本発明のアナログは、最も便利な方法として、組換え技
術を用いて調製される。ＲＣＡタンパク質ファミリーの
様々なメンバーをコードする遺伝子は、既知の配列であ
りまた公表されている。ＣＲ１に対応するｃＤＮＡにつ
いては、Klickstein, L.B.らによるJ Exp Med (1987) 1
65:1095、Klickstein, L.B.らによるJ Exp Med (1988)
168:1699、およびHourcade, D.らによるJ Exp Med (198
8) 168:1255において述べられている。ＣＲ２をコード
するｃＤＮＡについては、Moore,M.D.らによるProc Nat
l Acad Sci USA (1987) 84:9194、およびWeiss, J.J.に
よるJ Exp Med (1988) 167:1047において述べられてい
る。ＤＡＦをコードするｃＤＮＡについては、Caras,
I.W.らによるNature (1987) 325:545、およびMedof,M.
E.らによるProc Natl Acad Sci USA (1987) 84:2007に
おいて述べられている。ＭＣＰをコードするｃＤＮＡに
ついては、Lublin, D.M.らによるJ Exp Med (1988) 16
8:181において、Ｃ４ｂｐアルファ鎖をコードするｃＤ
ＮＡについては、Chung, L.P.らによるBiochem J (198
5) 230:133において、またＣ４ｂｐベータ鎖をコードす
るｃＤＮＡについては、Hillarp, A.およびDahlback, B
によるProcNatl Acad Sci USA (1990) 87:1183におい
て、さらに、Ｈ因子をコードするｃＤＮＡについては、
Ripoche, J.らによるBiochem J (1988) 249:593におい
て述べられている。
術を用いて調製される。ＲＣＡタンパク質ファミリーの
様々なメンバーをコードする遺伝子は、既知の配列であ
りまた公表されている。ＣＲ１に対応するｃＤＮＡにつ
いては、Klickstein, L.B.らによるJ Exp Med (1987) 1
65:1095、Klickstein, L.B.らによるJ Exp Med (1988)
168:1699、およびHourcade, D.らによるJ Exp Med (198
8) 168:1255において述べられている。ＣＲ２をコード
するｃＤＮＡについては、Moore,M.D.らによるProc Nat
l Acad Sci USA (1987) 84:9194、およびWeiss, J.J.に
よるJ Exp Med (1988) 167:1047において述べられてい
る。ＤＡＦをコードするｃＤＮＡについては、Caras,
I.W.らによるNature (1987) 325:545、およびMedof,M.
E.らによるProc Natl Acad Sci USA (1987) 84:2007に
おいて述べられている。ＭＣＰをコードするｃＤＮＡに
ついては、Lublin, D.M.らによるJ Exp Med (1988) 16
8:181において、Ｃ４ｂｐアルファ鎖をコードするｃＤ
ＮＡについては、Chung, L.P.らによるBiochem J (198
5) 230:133において、またＣ４ｂｐベータ鎖をコードす
るｃＤＮＡについては、Hillarp, A.およびDahlback, B
によるProcNatl Acad Sci USA (1990) 87:1183におい
て、さらに、Ｈ因子をコードするｃＤＮＡについては、
Ripoche, J.らによるBiochem J (1988) 249:593におい
て述べられている。
【００５９】これらのタンパク質をコードするｃＤＮＡ
は既知であり、アミノ酸配列は推定されているため、メ
ンバーファミリーの様々なタンパク質の対応する領域の
比較が可能である。さらに、ｃＤＮＡ配列が利用可能で
あるため、Kunkel, T.A.らによりMethods Enzymol (198
7) 154:367-382にて述べられているような、標準的な部
位特異的変異導入法を用いて、切断型および本発明のア
ナログをコードする遺伝子構築物を調製することが可能
である。従って、アナログの調製には、第１の工程とし
て、標的タンパク質の対応する部位を、この部位におけ
る配列の相同性および部位特異的変異導入法を用いて確
認し、Ｃ４ｂまたはＣ３ｂ結合特性を改変することが含
まれる。
は既知であり、アミノ酸配列は推定されているため、メ
ンバーファミリーの様々なタンパク質の対応する領域の
比較が可能である。さらに、ｃＤＮＡ配列が利用可能で
あるため、Kunkel, T.A.らによりMethods Enzymol (198
7) 154:367-382にて述べられているような、標準的な部
位特異的変異導入法を用いて、切断型および本発明のア
ナログをコードする遺伝子構築物を調製することが可能
である。従って、アナログの調製には、第１の工程とし
て、標的タンパク質の対応する部位を、この部位におけ
る配列の相同性および部位特異的変異導入法を用いて確
認し、Ｃ４ｂまたはＣ３ｂ結合特性を改変することが含
まれる。
【００６０】このアナログをコードする遺伝子を調製し
た後、現在当該分野において既知である標準組換え技術
を用いて発現がなされ得る。遺伝子配列は、所望の宿主
にとって適切であると知られている配列制御の下で、適
切な発現ベクター中に連結される。E. coli、B. subtil
is、様々な酵母の菌株、およびAspergillusのような他
の菌類など、微生物系における組換えタンパク質の産生
はよく知られている。同様に、標準ＢＰＶ／Ｃ１２７
系、バキュロウィルス／昆虫細胞系、ＣＨＯ細胞、ＣＯ
Ｓ細胞、および他の哺乳類の細胞のような高等な生物の
細胞において、またはトランスジェニック動物におい
て、所望のアナログを産生することは有益で有り得る。
様々な細胞ラインにおける標準発現系は、現在では当該
分野でよく知られており標準となっている。トランスジ
ェニック動物はいくつかの種については構築され得る。
トランスジェニック動物における産生は、他の種での使
用のための移植物を調製するという状況において重要で
ある。
た後、現在当該分野において既知である標準組換え技術
を用いて発現がなされ得る。遺伝子配列は、所望の宿主
にとって適切であると知られている配列制御の下で、適
切な発現ベクター中に連結される。E. coli、B. subtil
is、様々な酵母の菌株、およびAspergillusのような他
の菌類など、微生物系における組換えタンパク質の産生
はよく知られている。同様に、標準ＢＰＶ／Ｃ１２７
系、バキュロウィルス／昆虫細胞系、ＣＨＯ細胞、ＣＯ
Ｓ細胞、および他の哺乳類の細胞のような高等な生物の
細胞において、またはトランスジェニック動物におい
て、所望のアナログを産生することは有益で有り得る。
様々な細胞ラインにおける標準発現系は、現在では当該
分野でよく知られており標準となっている。トランスジ
ェニック動物はいくつかの種については構築され得る。
トランスジェニック動物における産生は、他の種での使
用のための移植物を調製するという状況において重要で
ある。
【００６１】培養にて組換えにより産生されるアナログ
は、クロマトグラフィー、例えばイオン交換クロマトグ
ラフィー、電気泳動などの標準精製技術を用いて細胞培
養物から精製され得る。
は、クロマトグラフィー、例えばイオン交換クロマトグ
ラフィー、電気泳動などの標準精製技術を用いて細胞培
養物から精製され得る。
【００６２】本発明のアナログの組換えによる生産は、
明らかに最も便利で実用的な方法であるが、標準固相ペ
プチド合成技術などタンパク質合成技術を用いて、直接
アナログを合成することもまた可能である。このアプロ
ーチは、本発明のアナログとして改変アミノ酸配列を有
する、ＲＣＡタンパク質ファミリーの切断型の場合に特
に適切であり得る。
明らかに最も便利で実用的な方法であるが、標準固相ペ
プチド合成技術などタンパク質合成技術を用いて、直接
アナログを合成することもまた可能である。このアプロ
ーチは、本発明のアナログとして改変アミノ酸配列を有
する、ＲＣＡタンパク質ファミリーの切断型の場合に特
に適切であり得る。
【００６３】アッセイシステム 本発明のアナログは、インビトロにおけるまたはインビ
ボにおけるアッセイを用いて、ＲＣＡファミリーに特有
な生物学的活性の中でも所望の生物学的活性を有するこ
とが確証され得る。WongおよびFarrell（J Immunol (19
91) 146:656）により述べられたようなインビトロにお
けるシステムは、補体経路における効果を測定するため
に使用され得る。本発明のアナログをコードするように
改変されたＲＣＡ遺伝子および／またはｃＤＮＡ由来の
遺伝子構築物によりトランスフェクトされた細胞が、本
発明のアナログの表面発現による補体からの細胞の保護
をアッセイするために使用され得る（Lublin, D.M.らに
よるJ Exp Med (1990) 174:35、Oglesby, T.J.らによる
Trans Assoc Am Phys (1991) CIV:164-172、およびWhit
e, D.J.G.らによるTransplant Proc (1992) 24:474-47
6）。
ボにおけるアッセイを用いて、ＲＣＡファミリーに特有
な生物学的活性の中でも所望の生物学的活性を有するこ
とが確証され得る。WongおよびFarrell（J Immunol (19
91) 146:656）により述べられたようなインビトロにお
けるシステムは、補体経路における効果を測定するため
に使用され得る。本発明のアナログをコードするように
改変されたＲＣＡ遺伝子および／またはｃＤＮＡ由来の
遺伝子構築物によりトランスフェクトされた細胞が、本
発明のアナログの表面発現による補体からの細胞の保護
をアッセイするために使用され得る（Lublin, D.M.らに
よるJ Exp Med (1990) 174:35、Oglesby, T.J.らによる
Trans Assoc Am Phys (1991) CIV:164-172、およびWhit
e, D.J.G.らによるTransplant Proc (1992) 24:474-47
6）。
【００６４】インビボにおけるおよび一般的な生物学的
効果は、Weismanらにより（Science(1990) 249:146）、
またはYehらにより（J Immunol (1991) 146:250）述べ
られたように評価され得る。これらの基準に基づいた最
も強力なアナログは、治療剤として用いられるものであ
る。
効果は、Weismanらにより（Science(1990) 249:146）、
またはYehらにより（J Immunol (1991) 146:250）述べ
られたように評価され得る。これらの基準に基づいた最
も強力なアナログは、治療剤として用いられるものであ
る。
【００６５】有用性および投与 Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂを結合し得るな本発明のア
ナログは、生物学的な液体中のＣ３ｂ、Ｃ４ｂ、または
Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂを有する免疫複合体の有無、またはその
量を評価する診断用の手段として有用である。このよう
なアッセイは、特異的にＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂに
結合するアナログの能力を利用し、また一般に既知であ
る多種類のフォーマットで行われ得る。特異的結合パー
トナーを検定するためのフォーマットには、直接および
競合フォーマット、サンドイッチアッセイ、凝集アッセ
イなどが含まれる。特異的結合ペアのメンバー間の複合
化は、溶液中でまたは固相にて行われ得、また蛍光、放
射性同位体、発色団、および可視粒子を包含する種々の
標識技術を使用して検出され得る。
ナログは、生物学的な液体中のＣ３ｂ、Ｃ４ｂ、または
Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂを有する免疫複合体の有無、またはその
量を評価する診断用の手段として有用である。このよう
なアッセイは、特異的にＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂに
結合するアナログの能力を利用し、また一般に既知であ
る多種類のフォーマットで行われ得る。特異的結合パー
トナーを検定するためのフォーマットには、直接および
競合フォーマット、サンドイッチアッセイ、凝集アッセ
イなどが含まれる。特異的結合ペアのメンバー間の複合
化は、溶液中でまたは固相にて行われ得、また蛍光、放
射性同位体、発色団、および可視粒子を包含する種々の
標識技術を使用して検出され得る。
【００６６】Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂおよび／また
はＣ３ｂ／Ｃ４ｂを有する免疫複合体についてのアッセ
イにおいて有用な典型的な試薬キットには、必要に応じ
て固体支持体に結合した分析物に結合するアナログ、お
よび他にアッセイにおいて有用である標識試薬が含まれ
る。例えば、アッセイのための多くのフォーマットの１
つは、試験すべき試料を本発明のアナログが「捕獲」特
異的結合パートナーとして結合した固体支持体により処
理すること、分析物を含有すると想定される試料により
処理された支持体を洗浄すること、および次に洗浄され
た支持体を、西洋ワサビペルオキシダーゼのような酵素
で標識された抗Ｃ３ｂまたは抗Ｃ４ｂ抗体により処理す
ることを包含し得る。支持体に標識酵素が存在すること
は、酵素の存在により発色する基質溶液を添加すること
により検出される。以上の事は、当然ながら、単に例証
的なものであり、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂのため
に、本発明のアナログの特異的結合特性を利用する方法
は、何十通りもの設計が可能である。
はＣ３ｂ／Ｃ４ｂを有する免疫複合体についてのアッセ
イにおいて有用な典型的な試薬キットには、必要に応じ
て固体支持体に結合した分析物に結合するアナログ、お
よび他にアッセイにおいて有用である標識試薬が含まれ
る。例えば、アッセイのための多くのフォーマットの１
つは、試験すべき試料を本発明のアナログが「捕獲」特
異的結合パートナーとして結合した固体支持体により処
理すること、分析物を含有すると想定される試料により
処理された支持体を洗浄すること、および次に洗浄され
た支持体を、西洋ワサビペルオキシダーゼのような酵素
で標識された抗Ｃ３ｂまたは抗Ｃ４ｂ抗体により処理す
ることを包含し得る。支持体に標識酵素が存在すること
は、酵素の存在により発色する基質溶液を添加すること
により検出される。以上の事は、当然ながら、単に例証
的なものであり、Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂのため
に、本発明のアナログの特異的結合特性を利用する方法
は、何十通りもの設計が可能である。
【００６７】本発明のアナログはまた、治療および予防
分野においても有用である。補体の活性化は、全身性の
紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、溶血性貧血、重症筋無
力症などのような広範囲の自己免疫／免疫複合体介在症
候群における実質的な組織損傷の原因となり得る。補体
系の阻害は、これらの事例において望ましい治療上の介
入であるようである。いくつかの事例においては、副経
路の長期的阻害が深刻な副作用を導き得るため、ＲＣＡ
アナログによる古典経路のみの特異的阻害が好適であり
得る。
分野においても有用である。補体の活性化は、全身性の
紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチ、溶血性貧血、重症筋無
力症などのような広範囲の自己免疫／免疫複合体介在症
候群における実質的な組織損傷の原因となり得る。補体
系の阻害は、これらの事例において望ましい治療上の介
入であるようである。いくつかの事例においては、副経
路の長期的阻害が深刻な副作用を導き得るため、ＲＣＡ
アナログによる古典経路のみの特異的阻害が好適であり
得る。
【００６８】補体活性の阻害はまた、心筋梗塞、脳卒
中、または急性衝撃肺症候群のような血管損傷によりも
たらされる組織損傷を包含する事例においてもまた好適
である。このような事例においては、補体系は、再潅流
損傷（reperfusion injury）におけるように、部分的に
損傷した組織の破壊の寄与し得る。比較的短い期間に極
めて緊縮的な補体阻害を行うことが、これらの事例にお
いては好適であり、高い効力を得るために設計される可
溶ＲＣＡアナログは特に有用であり得る。
中、または急性衝撃肺症候群のような血管損傷によりも
たらされる組織損傷を包含する事例においてもまた好適
である。このような事例においては、補体系は、再潅流
損傷（reperfusion injury）におけるように、部分的に
損傷した組織の破壊の寄与し得る。比較的短い期間に極
めて緊縮的な補体阻害を行うことが、これらの事例にお
いては好適であり、高い効力を得るために設計される可
溶ＲＣＡアナログは特に有用であり得る。
【００６９】補体阻害はまた、異種移植拒絶の阻止にお
いても重要であり得る。ヒトＤＡＦまたはＭＣＰが導入
されたトランスジェニック動物由来の器官は、異種移植
の細胞表面のトランスジェニックＤＡＦまたはＭＣＰの
発現による補体により媒介される激症拒絶から防御され
得ることが可能である。効力をより高めるために設計さ
れたＲＣＡアナログが導入されたトランスジェニック動
物では、異種移植の成功率をより高くし得る。可溶ＲＣ
Ａアナログはまた、レシピエントにおいて移植片を保護
するのに有用であり得る。従って、補体の阻害が求めら
れる多くの状況が存在する。ＲＣＡタンパク質、および
その切断型、再構成型、およびハイブリッド型を改変す
ることが可能であるため、各事例に適した治療剤の設計
が可能となる。
いても重要であり得る。ヒトＤＡＦまたはＭＣＰが導入
されたトランスジェニック動物由来の器官は、異種移植
の細胞表面のトランスジェニックＤＡＦまたはＭＣＰの
発現による補体により媒介される激症拒絶から防御され
得ることが可能である。効力をより高めるために設計さ
れたＲＣＡアナログが導入されたトランスジェニック動
物では、異種移植の成功率をより高くし得る。可溶ＲＣ
Ａアナログはまた、レシピエントにおいて移植片を保護
するのに有用であり得る。従って、補体の阻害が求めら
れる多くの状況が存在する。ＲＣＡタンパク質、および
その切断型、再構成型、およびハイブリッド型を改変す
ることが可能であるため、各事例に適した治療剤の設計
が可能となる。
【００７０】本発明のアナログの投与のレベルおよび方
式は、アナログの性質、処置すべき症状の特徴、および
個々の患者の病歴に依存する。全身投与が一般には必要
とされ、これは注射により、または経粘膜または経皮送
達により行われ得る。注射による投与は、静脈、筋肉
内、腹腔内、または皮下注射であり得る。注射のための
処方は一般に、活性成分のハンク氏溶液（Hank's solut
ion）またはリンガー氏溶液のような生体適合性溶液で
ある。経皮または経粘膜投与のための処方は一般には、
フシジン酸または胆汁酸塩のような浸透剤を洗浄剤また
は表面活性剤と組み合わせて含有する。次にこれらの処
方は、エアゾール、坐剤、またはパッチとして製造され
得る。
式は、アナログの性質、処置すべき症状の特徴、および
個々の患者の病歴に依存する。全身投与が一般には必要
とされ、これは注射により、または経粘膜または経皮送
達により行われ得る。注射による投与は、静脈、筋肉
内、腹腔内、または皮下注射であり得る。注射のための
処方は一般に、活性成分のハンク氏溶液（Hank's solut
ion）またはリンガー氏溶液のような生体適合性溶液で
ある。経皮または経粘膜投与のための処方は一般には、
フシジン酸または胆汁酸塩のような浸透剤を洗浄剤また
は表面活性剤と組み合わせて含有する。次にこれらの処
方は、エアゾール、坐剤、またはパッチとして製造され
得る。
【００７１】経口投与は一般には、タンパク質またはペ
プチド活性成分には好ましくない。しかし、消化酵素か
ら防御されるように適切に処方されるならば、経口投与
もまた使用し得る。所望の投与方式に対する適切な処方
は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publ
ishing Co., Easton, PA最新版に見いだされ得る。投与
レベルおよび正確な処方は、当該分野において一般に既
知の通常の最適化された方法により得られ得る。
プチド活性成分には好ましくない。しかし、消化酵素か
ら防御されるように適切に処方されるならば、経口投与
もまた使用し得る。所望の投与方式に対する適切な処方
は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publ
ishing Co., Easton, PA最新版に見いだされ得る。投与
レベルおよび正確な処方は、当該分野において一般に既
知の通常の最適化された方法により得られ得る。
【００７２】以下の実施例は、本発明を例証するもので
あって、これを限定するものではない。
あって、これを限定するものではない。
【００７３】
［実施例１］（切断型ＣＲ１の結合特異性） 成熟ＣＲ１の最初の５４３個のアミノ酸（ＳＣＲ１-
８、およびＳＣＲ-９の１／２）をコードする上記のｃ
ＤＮＡクローンＣＲ１-４をＣＯＳ細胞中にトランスフ
ェクトし、これによって、ＣＲ１-４と命名される、分
泌されたタンパク質を得た。
８、およびＳＣＲ-９の１／２）をコードする上記のｃ
ＤＮＡクローンＣＲ１-４をＣＯＳ細胞中にトランスフ
ェクトし、これによって、ＣＲ１-４と命名される、分
泌されたタンパク質を得た。
【００７４】２種類の抗ＣＲＩマウスモノクローナル抗
体を、ＣＲ１-４の免疫反応性の決定およびこのタンパ
ク質を分析する方法に用いた。抗体Ｅ１１（Hogg, N.
ら、Eur J Immunol (1984) 14:236-243）および３Ｄ９
（O'Shea, J.J.ら、J Immunol (1985) 134:2580-2587）
はＣＲ１を認識し、組み換えによって生産されたＣＲ１
-４に結合した。
体を、ＣＲ１-４の免疫反応性の決定およびこのタンパ
ク質を分析する方法に用いた。抗体Ｅ１１（Hogg, N.
ら、Eur J Immunol (1984) 14:236-243）および３Ｄ９
（O'Shea, J.J.ら、J Immunol (1985) 134:2580-2587）
はＣＲ１を認識し、組み換えによって生産されたＣＲ１
-４に結合した。
【００７５】Ｃ４ｂまたはＣ３ｂとの結合を、セファロ
ース支持体に結合したＣ４ｂまたはｉＣ３（反応性およ
び機能に関してＣ３ｂに類似の、切断されたチオエステ
ル結合を含有するＣ３）を用いてテストした。これは、
Dykman, TらのProc Natl Acad Sci USA (1983) 80:1698
-1702およびCole, J.L.らのProc Natl Acad Sci USA(19
85) 82:859-863に記載のように行った。これらの固体支
持体に支持された基質に対する結合を、ＣＲＩについ
て、ＥＬＩＳＡにより評価することによって確認した。
Ｃ４ｂが固定化された支持体はＣＲ１-４と結合可能で
あった。その結合には、ＣＲ１で知られているようなイ
オン強度に対する依存性が見られた。最も効率的な結合
は12.5〜25mMの塩において生じた。
ース支持体に結合したＣ４ｂまたはｉＣ３（反応性およ
び機能に関してＣ３ｂに類似の、切断されたチオエステ
ル結合を含有するＣ３）を用いてテストした。これは、
Dykman, TらのProc Natl Acad Sci USA (1983) 80:1698
-1702およびCole, J.L.らのProc Natl Acad Sci USA(19
85) 82:859-863に記載のように行った。これらの固体支
持体に支持された基質に対する結合を、ＣＲＩについ
て、ＥＬＩＳＡにより評価することによって確認した。
Ｃ４ｂが固定化された支持体はＣＲ１-４と結合可能で
あった。その結合には、ＣＲ１で知られているようなイ
オン強度に対する依存性が見られた。最も効率的な結合
は12.5〜25mMの塩において生じた。
【００７６】さらに、可溶化されたＣ４ｂは、Ｃ４ｂが
固定化された支持体に対するこのタンパク質の結合を阻
害したが、可溶性ｉＣ３がこの結合を阻害することはな
かった。これによって、ＣＲ１-４は主としてＣ４ｂに
結合するがｉＣ３（Ｃ３ｂ）には結合しないことが確認
される。
固定化された支持体に対するこのタンパク質の結合を阻
害したが、可溶性ｉＣ３がこの結合を阻害することはな
かった。これによって、ＣＲ１-４は主としてＣ４ｂに
結合するがｉＣ３（Ｃ３ｂ）には結合しないことが確認
される。
【００７７】［実施例２］（ＣＲ１-４アナログの構
築） ＣＲ１-４の種々の変異型を構築し、Ｃ４ｂおよびｉＣ
３に対するその結合活性を、実施例１に記載のようにテ
ストした。表２および表３は構築したアナログおよび得
られる結合に対する効果を示す。表２には、完全なＣ４
ｂ結合部位を持つＣＲ１-４についての対する単純な変
化が記載されている。表３には、変異型のＣＲ１-４
（Ｃ３ｂ）についての単純な変化が記載されている。こ
の変異型は、ＣＲ１-４のＳＣＲ１-２がＣＲ１のＳＣＲ
８-９に置換されることによって、ＣＲ１の完全なＣ３
ｂ結合部位を持つ形態となったものである。表２および
表３の双方において、各改変は、アミノ酸の番号および
行った変換によって示されている。これらの番号は、Ｃ
Ｒ１中のＳＣＲ-１、ＳＣＲ-２、ＳＣＲ-８およびＳＣ
Ｒ-９のアミノ酸配列を示す図２（表２）および図３
（表３）に記載した番号に対応する。
築） ＣＲ１-４の種々の変異型を構築し、Ｃ４ｂおよびｉＣ
３に対するその結合活性を、実施例１に記載のようにテ
ストした。表２および表３は構築したアナログおよび得
られる結合に対する効果を示す。表２には、完全なＣ４
ｂ結合部位を持つＣＲ１-４についての対する単純な変
化が記載されている。表３には、変異型のＣＲ１-４
（Ｃ３ｂ）についての単純な変化が記載されている。こ
の変異型は、ＣＲ１-４のＳＣＲ１-２がＣＲ１のＳＣＲ
８-９に置換されることによって、ＣＲ１の完全なＣ３
ｂ結合部位を持つ形態となったものである。表２および
表３の双方において、各改変は、アミノ酸の番号および
行った変換によって示されている。これらの番号は、Ｃ
Ｒ１中のＳＣＲ-１、ＳＣＲ-２、ＳＣＲ-８およびＳＣ
Ｒ-９のアミノ酸配列を示す図２（表２）および図３
（表３）に記載した番号に対応する。
【００７８】
【表２】
【００７９】
【表３】
【００８０】表２に示すように、ＳＣＲ-１またはＳＣ
Ｒ-２の何れかを欠失させると、Ｃ４ｂ結合活性が失わ
れる。したがって、Ｃ４ｂとの結合には両方の領域が必
要である。Ｃ３ｂとの結合は、ＳＣＲ-９の配列Ｓ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-ＱをＳＣＲ-２に挿入することによ
って生じる。しかし、ＳＣＲ-１の欠失によってもま
た、この変異体の、Ｃ３ｂとの結合が失われる。したが
って、Ｃ３ｂとの結合には、ＳＣＲ-２中の関連配列の
みならずＳＣＲ-１の付加部分も必要である。ＳＣＲ-２
中の配列を変更することにより得られるＣ３ｂとの結合
能力は、Ｃ４ｂとの結合には影響しない。
Ｒ-２の何れかを欠失させると、Ｃ４ｂ結合活性が失わ
れる。したがって、Ｃ４ｂとの結合には両方の領域が必
要である。Ｃ３ｂとの結合は、ＳＣＲ-９の配列Ｓ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-ＱをＳＣＲ-２に挿入することによ
って生じる。しかし、ＳＣＲ-１の欠失によってもま
た、この変異体の、Ｃ３ｂとの結合が失われる。したが
って、Ｃ３ｂとの結合には、ＳＣＲ-２中の関連配列の
みならずＳＣＲ-１の付加部分も必要である。ＳＣＲ-２
中の配列を変更することにより得られるＣ３ｂとの結合
能力は、Ｃ４ｂとの結合には影響しない。
【００８１】さらに表２に示すように、３５位、６４〜
６５位または９４位のアミノ酸を変更することによっ
て、Ｃ４ｂとの結合を弱めるか、あるいは破壊すること
が可能である。９２位のアミノ酸を変更することによっ
て、Ｃ４ｂ結合を強化することができる。
６５位または９４位のアミノ酸を変更することによっ
て、Ｃ４ｂとの結合を弱めるか、あるいは破壊すること
が可能である。９２位のアミノ酸を変更することによっ
て、Ｃ４ｂ結合を強化することができる。
【００８２】Ｃ３ｂ結合は、ＳＣＲ-９の第２の配列Ｎ-
Ａ-Ａ-ＨをＳＣＲ-２中に挿入することによっても生じ
る。この変更は、Ｃ４ｂとの結合には影響しない。ＳＣ
Ｒ-９の配列Ｎ-Ａ-Ａ-ＨおよびＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-
Ｃ）-Ｑの両方をＳＣＲ-２中に挿入すると、何れか一方
を挿入する場合よりも、Ｃ３ｂへの結合の程度は大き
い。これらの配列は、ＳＣＲ-９上で隣接しているため
に、同一の活性部位であるＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-
Ｋ-Ａ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑの一部となり得る。
Ａ-Ａ-ＨをＳＣＲ-２中に挿入することによっても生じ
る。この変更は、Ｃ４ｂとの結合には影響しない。ＳＣ
Ｒ-９の配列Ｎ-Ａ-Ａ-ＨおよびＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-
Ｃ）-Ｑの両方をＳＣＲ-２中に挿入すると、何れか一方
を挿入する場合よりも、Ｃ３ｂへの結合の程度は大き
い。これらの配列は、ＳＣＲ-９上で隣接しているため
に、同一の活性部位であるＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-
Ｋ-Ａ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑの一部となり得る。
【００８３】Ｃ３ｂ結合は、ＳＣＲ-８の配列Ｋ-Ｌ-Ｋ-
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-ＤをＳＣＲ-１中に挿入するこ
とによっても生じる。
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-ＤをＳＣＲ-１中に挿入するこ
とによっても生じる。
【００８４】表３に示すように、１２〜１６位および１
８〜２１位のアミノ酸、３７位のアミノ酸、１０９〜１
１２位のアミノ酸、１１４〜１１７位および１２１位の
アミノ酸、または１０９〜１１２位、１１４〜１１７位
および１２１位のアミノ酸を変更することによって、Ｃ
３ｂとの結合を弱めるか、あるいは破壊することが可能
である。
８〜２１位のアミノ酸、３７位のアミノ酸、１０９〜１
１２位のアミノ酸、１１４〜１１７位および１２１位の
アミノ酸、または１０９〜１１２位、１１４〜１１７位
および１２１位のアミノ酸を変更することによって、Ｃ
３ｂとの結合を弱めるか、あるいは破壊することが可能
である。
【００８５】これらの結果により、ＣＲ１中のＣ３ｂお
よびＣ４ｂ結合部位を操作することによって、ＣＲ１-
４の親和性および特異性を変化させるということが分か
る。ＲＣＡタンパク質ファミリーの付加のメンバー中の
対応する領域に、類似の変更を行うことが可能である。
よびＣ４ｂ結合部位を操作することによって、ＣＲ１-
４の親和性および特異性を変化させるということが分か
る。ＲＣＡタンパク質ファミリーの付加のメンバー中の
対応する領域に、類似の変更を行うことが可能である。
【００８６】［実施例３］（古典経路を特異的に阻害す
る可溶性ＣＲ１アナログ） 可溶性ＣＲ１型は、一般に、正確な読み取り枠で、翻訳
終止コドンをＣＲ１構築物のＣＲ１コード配列中に導入
することによって構築できる。この手法の一例として、
Weismanら（Science (1990) 249:146）がＣＲ１形態の
構築に使用したものがある。このＣＲ１形態は、長さ30
ＳＣＲであり、完全長ＣＲ１の膜貫通セグメントの最初
のアミノ酸である１９３１位のアラニンの部位の先端が
切断されている。この可溶性ＣＲ１（本明細書ではｓＣ
Ｒ１と称する）は、アナログ作製のための出発材料とし
て例示されているが、他の多くのｓＣＲ１型（例えば上
記のＣＲ１-４またはKalli, K.R.らのJ Exp Med (1991)
174:1451-1460に記載の（ＣＲ１）２-Ｆ（ａｂ’）２
キメラ補体インヒビター）もまた出発材料として使用で
きる。このｓＣＲ１形態は、Ｃ４ｂ結合領域であるＳＣ
Ｒ１-２、並びに２つの同一のＣ３ｂ結合領域であるＳ
ＣＲ８-９およびＳＣＲ１５-１６（Klicksteinら、J Ex
p Med (1988) 168:1699）を含有する。これらの３つの
領域は、全て上記で定義したように、対応する配列であ
る。さらに、ｓＣＲ１は、第４の対応する領域、ＳＣＲ
２２- ２３を含有する。この領域に関しては、その結合
活性は報告されていない。
る可溶性ＣＲ１アナログ） 可溶性ＣＲ１型は、一般に、正確な読み取り枠で、翻訳
終止コドンをＣＲ１構築物のＣＲ１コード配列中に導入
することによって構築できる。この手法の一例として、
Weismanら（Science (1990) 249:146）がＣＲ１形態の
構築に使用したものがある。このＣＲ１形態は、長さ30
ＳＣＲであり、完全長ＣＲ１の膜貫通セグメントの最初
のアミノ酸である１９３１位のアラニンの部位の先端が
切断されている。この可溶性ＣＲ１（本明細書ではｓＣ
Ｒ１と称する）は、アナログ作製のための出発材料とし
て例示されているが、他の多くのｓＣＲ１型（例えば上
記のＣＲ１-４またはKalli, K.R.らのJ Exp Med (1991)
174:1451-1460に記載の（ＣＲ１）２-Ｆ（ａｂ’）２
キメラ補体インヒビター）もまた出発材料として使用で
きる。このｓＣＲ１形態は、Ｃ４ｂ結合領域であるＳＣ
Ｒ１-２、並びに２つの同一のＣ３ｂ結合領域であるＳ
ＣＲ８-９およびＳＣＲ１５-１６（Klicksteinら、J Ex
p Med (1988) 168:1699）を含有する。これらの３つの
領域は、全て上記で定義したように、対応する配列であ
る。さらに、ｓＣＲ１は、第４の対応する領域、ＳＣＲ
２２- ２３を含有する。この領域に関しては、その結合
活性は報告されていない。
【００８７】あるｓＣＲ１アナログのファミリーは、そ
のＣ４ｂ結合の増強によって、古典経路の阻害を増強さ
せた。Ｃ４ｂ結合を増強させる改変の例には、以下のも
のがある： １．ＳＣＲ１-２のＣ４ｂ１次活性部位の親和性を、９
２位のＫをＴに置換することによって、増強させる。こ
れによって、その領域のＣ４ｂ補酵素機能及び解離機能
が向上する。
のＣ４ｂ結合の増強によって、古典経路の阻害を増強さ
せた。Ｃ４ｂ結合を増強させる改変の例には、以下のも
のがある： １．ＳＣＲ１-２のＣ４ｂ１次活性部位の親和性を、９
２位のＫをＴに置換することによって、増強させる。こ
れによって、その領域のＣ４ｂ補酵素機能及び解離機能
が向上する。
【００８８】２．ＣＲ１の他の対応する領域のＣ４ｂに
対する親和性を、ＣＲ１の３５位、６４位、６５位、９
２位および９４位に対応する他のＳＣＲ中の位置を改変
することによって、増強させる。この改変は、これらの
位置に、それぞれＧ（または構造上類似のＡ）、Ｒ、Ｎ
（またはＱ）、ＴおよびＹ（またはＦ）を挿入すること
によって、好ましくはそれぞれＧ、Ｒ、Ｎ、ＴおよびＹ
を挿入することによって行う。またこの改変によって、
ＳＣＲ１-２のＣ４ｂ１次活性部位の有用性が向上し得
る。さらにこの改変によって、これらの対応する領域に
おけるＣ４ｂ補酵素機能または解離機能が確立する。
対する親和性を、ＣＲ１の３５位、６４位、６５位、９
２位および９４位に対応する他のＳＣＲ中の位置を改変
することによって、増強させる。この改変は、これらの
位置に、それぞれＧ（または構造上類似のＡ）、Ｒ、Ｎ
（またはＱ）、ＴおよびＹ（またはＦ）を挿入すること
によって、好ましくはそれぞれＧ、Ｒ、Ｎ、ＴおよびＹ
を挿入することによって行う。またこの改変によって、
ＳＣＲ１-２のＣ４ｂ１次活性部位の有用性が向上し得
る。さらにこの改変によって、これらの対応する領域に
おけるＣ４ｂ補酵素機能または解離機能が確立する。
【００８９】表２に示すように、ＣＲ１-４のＳＣＲ１-
２の５つの特異的アミノ酸のうちの何れかをＳＣＲ８-
９の対応するアミノ酸に置換すると、ＣＲ１-４のＣ４
ｂ結合能力を改変することになる。３５位のＧをＥに置
換すると、あるいは９４位のＹをＨに置換すると、検出
可能なＣ４ｂ結合が消失する。６４位のＲをＫに置換す
ることおよび／または６５位のＮをＴに置換することに
よって、Ｃ４ｂとの結合が検出可能ではあるが低い程度
のものとなる。９２位のＫをＴに置換することによっ
て、ＣＲ１-４のＣ４ｂ結合が増強すると思われる。
２の５つの特異的アミノ酸のうちの何れかをＳＣＲ８-
９の対応するアミノ酸に置換すると、ＣＲ１-４のＣ４
ｂ結合能力を改変することになる。３５位のＧをＥに置
換すると、あるいは９４位のＹをＨに置換すると、検出
可能なＣ４ｂ結合が消失する。６４位のＲをＫに置換す
ることおよび／または６５位のＮをＴに置換することに
よって、Ｃ４ｂとの結合が検出可能ではあるが低い程度
のものとなる。９２位のＫをＴに置換することによっ
て、ＣＲ１-４のＣ４ｂ結合が増強すると思われる。
【００９０】上記の知識を利用して、上記のＣＲ１の４
つの対応する領域の何れかまたは全てに対して、古典経
路をより強く阻害するための改変が次のように行われ
る：ＳＣＲ１-２即ちＣＲ１のＣ４ｂ１次結合部位を、
ＣＲ１-４変異体＃８ａの場合と同様に、９２位のＫを
Ｔに置換することによって改変する。ＳＣＲ８-９およ
びこれと同等のＳＣＲ１５-１６を、ＣＲ１-４のＣ４ｂ
結合性を減少させた各置換をもとにもどすことによっ
て、改変した。したがって、ＳＣＲ８-９およびＳＣＲ
１５- １６の改変は、３５位に対応する位置のＥをＧ
に、９４位に対応する位置のＨをＹ（またはＦ）に、６
４位に対応する位置のＫをＲに、および６５位に対応す
る位置のＴをＮ（またはＱ）に置換することによって行
う。これらの同じ原理を利用して、ＳＣＲ２２- ２３の
改変を、６４位に対応する位置のＧ（またはＡ）をＲ
に、６５位に対応する位置のＰをＮ（またはＱ）に、９
２位に対応する位置のＥをＴに、および９４位に対応す
る位置のＦをＹに置換することによって行う。
つの対応する領域の何れかまたは全てに対して、古典経
路をより強く阻害するための改変が次のように行われ
る：ＳＣＲ１-２即ちＣＲ１のＣ４ｂ１次結合部位を、
ＣＲ１-４変異体＃８ａの場合と同様に、９２位のＫを
Ｔに置換することによって改変する。ＳＣＲ８-９およ
びこれと同等のＳＣＲ１５-１６を、ＣＲ１-４のＣ４ｂ
結合性を減少させた各置換をもとにもどすことによっ
て、改変した。したがって、ＳＣＲ８-９およびＳＣＲ
１５- １６の改変は、３５位に対応する位置のＥをＧ
に、９４位に対応する位置のＨをＹ（またはＦ）に、６
４位に対応する位置のＫをＲに、および６５位に対応す
る位置のＴをＮ（またはＱ）に置換することによって行
う。これらの同じ原理を利用して、ＳＣＲ２２- ２３の
改変を、６４位に対応する位置のＧ（またはＡ）をＲ
に、６５位に対応する位置のＰをＮ（またはＱ）に、９
２位に対応する位置のＥをＴに、および９４位に対応す
る位置のＦをＹに置換することによって行う。
【００９１】ＳＣＲ１-２に対応する３つの領域はＳＣ
Ｒ１-２に対してアミノ酸配列の高い相同性を有してお
り、そのうちの２つ、即ちＳＣＲ８-９およびＳＣＲ１
５- １６は、ある条件下で検出可能な低いＣ４ｂ結合活
性を既に持っている。このため、ＳＣＲ１-２において
Ｃ４ｂ結合に重要と判明したこれらの４つのアミノ酸の
うちの１つまたはそれ以上を、ＳＣＲ８-９、ＳＣＲ１
５- １６およびＳＣＲ２２- ２３の対応する位置に置換
すると、３つの全ての対応する領域のＣ４ｂ結合能力が
向上する。これらの置換によって、ｓＣＲ１のＣ４ｂに
対する親和性が向上し、さらに、新たな補酵素あるいは
解離機能が確立するか、またはｓＣＲ１出発物質中の補
酵素および解離機能の能力が向上する。
Ｒ１-２に対してアミノ酸配列の高い相同性を有してお
り、そのうちの２つ、即ちＳＣＲ８-９およびＳＣＲ１
５- １６は、ある条件下で検出可能な低いＣ４ｂ結合活
性を既に持っている。このため、ＳＣＲ１-２において
Ｃ４ｂ結合に重要と判明したこれらの４つのアミノ酸の
うちの１つまたはそれ以上を、ＳＣＲ８-９、ＳＣＲ１
５- １６およびＳＣＲ２２- ２３の対応する位置に置換
すると、３つの全ての対応する領域のＣ４ｂ結合能力が
向上する。これらの置換によって、ｓＣＲ１のＣ４ｂに
対する親和性が向上し、さらに、新たな補酵素あるいは
解離機能が確立するか、またはｓＣＲ１出発物質中の補
酵素および解離機能の能力が向上する。
【００９２】古典経路の特異的インヒビターであるＣＲ
１アナログの第２のファミリーでは、副経路を阻害する
ＣＲ１の能力が減少する。WongおよびFarell（J Immuno
l (1991) 146:656）によれば、古典経路の効率的なイン
ビトロでの阻害には１つのＣ３ｂ結合部位のみが必要で
あるのに対して、副経路のコンベルターゼの効率的なイ
ンビトロでの阻害には少なくとも２つのＣ３ｂ結合部位
が必要である。
１アナログの第２のファミリーでは、副経路を阻害する
ＣＲ１の能力が減少する。WongおよびFarell（J Immuno
l (1991) 146:656）によれば、古典経路の効率的なイン
ビトロでの阻害には１つのＣ３ｂ結合部位のみが必要で
あるのに対して、副経路のコンベルターゼの効率的なイ
ンビトロでの阻害には少なくとも２つのＣ３ｂ結合部位
が必要である。
【００９３】実施例２に示したように、ＣＲ１-４のＳ
ＣＲ１-２中のアミノ酸の短い配列をＳＣＲ８-９の対応
するアミノ酸に置換することによって、具体的には、１
１４〜１１７位のＤ-Ｎ-Ｅ-ＴをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐに置換し、
かつ１２１位のＤをＱに置換することによって、ＣＲ１
-４にＣ３ｂ結合能力が生じる。これらの何れかのアミ
ノ酸を単独でまたはＥ-ＴをＫ-Ｐに置換しても、Ｃ３ｂ
結合性の検出可能な増強は見られない。これらの何れの
置換を行っても、Ｃ４ｂ結合性に検出可能な変化は生じ
ない。１１８〜１２０位がＳＣＲ１-２およびＳＣＲ８-
９の両方においてＰ-Ｉ-Ｃであるために、全アミノ酸配
列Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑが観察されたＣ３ｂ結合の
増強に必要不可欠であると思われる。
ＣＲ１-２中のアミノ酸の短い配列をＳＣＲ８-９の対応
するアミノ酸に置換することによって、具体的には、１
１４〜１１７位のＤ-Ｎ-Ｅ-ＴをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐに置換し、
かつ１２１位のＤをＱに置換することによって、ＣＲ１
-４にＣ３ｂ結合能力が生じる。これらの何れかのアミ
ノ酸を単独でまたはＥ-ＴをＫ-Ｐに置換しても、Ｃ３ｂ
結合性の検出可能な増強は見られない。これらの何れの
置換を行っても、Ｃ４ｂ結合性に検出可能な変化は生じ
ない。１１８〜１２０位がＳＣＲ１-２およびＳＣＲ８-
９の両方においてＰ-Ｉ-Ｃであるために、全アミノ酸配
列Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑが観察されたＣ３ｂ結合の
増強に必要不可欠であると思われる。
【００９４】さらに実施例２に示したように、１０９〜
１１２位のＤ-Ｔ-Ｖ-ＩをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、Ｃ
４ｂ結合に検出可能な変化を引き起こすことなく、Ｃ３
ｂ結合能力が生じる。両方の部位を一度に置換すると、
即ちＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑ
をＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑに
置換すると、何れか一方を置換した場合よりも高い結合
能力が生じる。
１１２位のＤ-Ｔ-Ｖ-ＩをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、Ｃ
４ｂ結合に検出可能な変化を引き起こすことなく、Ｃ３
ｂ結合能力が生じる。両方の部位を一度に置換すると、
即ちＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑ
をＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑに
置換すると、何れか一方を置換した場合よりも高い結合
能力が生じる。
【００９５】さらに実施例２に示したように、１２〜２
１位のＲ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄに置換すると、３７位のＳを
Ｙに置換した場合と同様に、Ｃ３ｂ結合能力が生じる。
１位のＲ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄに置換すると、３７位のＳを
Ｙに置換した場合と同様に、Ｃ３ｂ結合能力が生じる。
【００９６】２つの第１次Ｃ３ｂ結合部位のうちの一方
を改変すると、古典経路の阻害に実質的な影響を生じる
ことなく、副経路の阻害が顕著に減少する（Wongおよび
Farrell、J Immunol (1991) 146:656）。具体的には、
ｓＣＲ１中のＳＣＲ１５-１６またはＳＣＲ８-９の１１
４〜１２１に対応する部位のＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ
をＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｄに置換することによって、
Ｃ３ｂ結合能力が低減する。構造上類似のアミノ酸によ
っては、同様にＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｄ配列が置換さ
れ得るものもある。これによって、強いＣ３ｂ結合部位
が１つだけ残っている可溶性ＣＲ１アナログが得られ
る。したがって、副経路標的に対する親和性が低下す
る。Ｃ３ｂ結合が補酵素活性に必要と思われるため、こ
のような改変によってＣ３ｂ補酵素能力も低下する。
を改変すると、古典経路の阻害に実質的な影響を生じる
ことなく、副経路の阻害が顕著に減少する（Wongおよび
Farrell、J Immunol (1991) 146:656）。具体的には、
ｓＣＲ１中のＳＣＲ１５-１６またはＳＣＲ８-９の１１
４〜１２１に対応する部位のＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ
をＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｄに置換することによって、
Ｃ３ｂ結合能力が低減する。構造上類似のアミノ酸によ
っては、同様にＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｄ配列が置換さ
れ得るものもある。これによって、強いＣ３ｂ結合部位
が１つだけ残っている可溶性ＣＲ１アナログが得られ
る。したがって、副経路標的に対する親和性が低下す
る。Ｃ３ｂ結合が補酵素活性に必要と思われるため、こ
のような改変によってＣ３ｂ補酵素能力も低下する。
【００９７】同様に、副経路の阻害を低減するために２
つのＣ３ｂ１次結合部位のうちの一方を改変すること
は、他の配列の置換によっても行なわれ得る。具体的に
は、ＣＲ１-４（Ｃ４ｂ）アナログ中の１０９〜１１２
位のＮ-Ａ-Ａ-ＨをＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉに置換すると、Ｃ３ｂ結
合能力が低下する。両方の部位を同時に置換すると、即
ちＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑを
Ｄ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑに置
換すると、何れか一方を置換した場合よりもＣ３ｂ結合
能力の低下が大きい。さらに実施例２に示したように、
１２〜２１位の、Ｋ-Ｌ-Ｋ-Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄ
を、Ｒ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-Ｅに置換するこ
とによっても、３７位のＹをＳに置換する場合と同様
に、Ｃ３ｂ結合能力が低下する。構造上類似のアミノ酸
によっては、同様にＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉ、Ｄ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-
Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-ＱおよびＲ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-
（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-Ｅ配列において置換され得るものがあ
る。Ｃ３ｂ結合が補酵素活性に必要と思われるため、上
記の改変を行うとまた、Ｃ３ｂ補酵素能力も低下する。
つのＣ３ｂ１次結合部位のうちの一方を改変すること
は、他の配列の置換によっても行なわれ得る。具体的に
は、ＣＲ１-４（Ｃ４ｂ）アナログ中の１０９〜１１２
位のＮ-Ａ-Ａ-ＨをＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉに置換すると、Ｃ３ｂ結
合能力が低下する。両方の部位を同時に置換すると、即
ちＮ-Ａ-Ａ-Ｈ-（Ｗ）-Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑを
Ｄ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-Ｑに置
換すると、何れか一方を置換した場合よりもＣ３ｂ結合
能力の低下が大きい。さらに実施例２に示したように、
１２〜２１位の、Ｋ-Ｌ-Ｋ-Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄ
を、Ｒ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-Ｅに置換するこ
とによっても、３７位のＹをＳに置換する場合と同様
に、Ｃ３ｂ結合能力が低下する。構造上類似のアミノ酸
によっては、同様にＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉ、Ｄ-Ｔ-Ｖ-Ｉ-（Ｗ）-
Ｄ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-（Ｐ-Ｉ-Ｃ）-ＱおよびＲ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-
（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-Ｅ配列において置換され得るものがあ
る。Ｃ３ｂ結合が補酵素活性に必要と思われるため、上
記の改変を行うとまた、Ｃ３ｂ補酵素能力も低下する。
【００９８】１つ以上の上記の各置換を利用することに
よって、Ｃ３ｂ結合の低下の程度を変化させることがで
きる。これによって、副経路標的に対して異なる親和性
を有するアナログが得られる。したがって、異なる状況
に各々適切となり得る種々のアナログが作製される。
よって、Ｃ３ｂ結合の低下の程度を変化させることがで
きる。これによって、副経路標的に対して異なる親和性
を有するアナログが得られる。したがって、異なる状況
に各々適切となり得る種々のアナログが作製される。
【００９９】したがって、古典経路インヒビターの設計
では、大きく分けて２種類の置換を提案する。一方はＣ
４ｂ活性を増強させるように設計され、他方はＣ３ｂ活
性を低下させるように設計される。効果的かつ特異的な
古典経路インヒビターを作製するために、上記の置換の
うちの幾つかを、あるいは全てを行う。
では、大きく分けて２種類の置換を提案する。一方はＣ
４ｂ活性を増強させるように設計され、他方はＣ３ｂ活
性を低下させるように設計される。効果的かつ特異的な
古典経路インヒビターを作製するために、上記の置換の
うちの幾つかを、あるいは全てを行う。
【０１００】［実施例４］（より有効な可溶性ＣＲ１ア
ナログ） 補酵素システムの緊縮インヒビターは、より高い有効性
を必要とする場合に使用される。本実施例では、ｓＣＲ
１配列を、古典経路および副経路の両方に対してより高
い阻害能力を有するアナログのファミリー用の出発物質
として使用する。他のＣＲ１の、切断型、完全長型、再
編成型あるいはハイブリッド型のＣＲ１、またはＣＲ１
もまた使用可能である。
ナログ） 補酵素システムの緊縮インヒビターは、より高い有効性
を必要とする場合に使用される。本実施例では、ｓＣＲ
１配列を、古典経路および副経路の両方に対してより高
い阻害能力を有するアナログのファミリー用の出発物質
として使用する。他のＣＲ１の、切断型、完全長型、再
編成型あるいはハイブリッド型のＣＲ１、またはＣＲ１
もまた使用可能である。
【０１０１】上記のように、ｓＣＲ１タンパク質は、重
要な４つの対応する領域、即ち、ＳＣＲ１-２、ＳＣＲ
８-９、ＳＣＲ１５-１６およびＳＣＲ２２-２３を含有
する。１つのＣ４ｂ１次結合部位がＳＣＲ１-２中に存
在し、２つのＣ３ｂ１次結合部位がＳＣＲ８-９および
ＳＣＲ１５-１６中に存在する。ＳＣＲ２２-２３は、他
の３つの対応する領域に対してアミノ酸配列の高い相同
性を有するにもかかわらず、その結合活性は報告されて
いない。
要な４つの対応する領域、即ち、ＳＣＲ１-２、ＳＣＲ
８-９、ＳＣＲ１５-１６およびＳＣＲ２２-２３を含有
する。１つのＣ４ｂ１次結合部位がＳＣＲ１-２中に存
在し、２つのＣ３ｂ１次結合部位がＳＣＲ８-９および
ＳＣＲ１５-１６中に存在する。ＳＣＲ２２-２３は、他
の３つの対応する領域に対してアミノ酸配列の高い相同
性を有するにもかかわらず、その結合活性は報告されて
いない。
【０１０２】上記実施例で既に記載した置換を、Ｃ３ｂ
およびＣ４ｂを含む標的に対するｓＣＲ１の親和性を増
強させるために、上記の４つの対応する領域に対して行
う。これらの改変は、存在する補酵素の有用性および解
離機能を向上させるように設計される。またこれらの改
変によって、新たな補酵素および解離機能を確立し得
る。Ｃ３ｂ結合に重要なアミノ酸配列をＣ４ｂ結合領域
に導入すると、おそらくＣ４ｂ活性を実質的に妨害する
ことは無いであろう。なぜなら、ＣＲ１-４中に２つの
そのような置換を行っても、ＣＲ１-４のＣ４ｂ結合特
性に検出可能な変化は見られなかったからである。Ｃ４
ｂ結合に重要なアミノ酸配列をＣ３ｂ結合領域に導入す
ると、おそらくＣ３ｂ活性を実質的に妨害することは無
いであろう。なぜなら、ＳＣＲ１-２に特異的な多くの
アミノ酸（Ｃ４ｂ結合に重要なアミノ酸を含む）が既に
存在するＣＲ１-４変異体１０、ＣＲ１-４変異体１１お
よびＣＲ１-４変異体１０、１１中に、実質的なＣ３ｂ
結合が生じるからである。
およびＣ４ｂを含む標的に対するｓＣＲ１の親和性を増
強させるために、上記の４つの対応する領域に対して行
う。これらの改変は、存在する補酵素の有用性および解
離機能を向上させるように設計される。またこれらの改
変によって、新たな補酵素および解離機能を確立し得
る。Ｃ３ｂ結合に重要なアミノ酸配列をＣ４ｂ結合領域
に導入すると、おそらくＣ４ｂ活性を実質的に妨害する
ことは無いであろう。なぜなら、ＣＲ１-４中に２つの
そのような置換を行っても、ＣＲ１-４のＣ４ｂ結合特
性に検出可能な変化は見られなかったからである。Ｃ４
ｂ結合に重要なアミノ酸配列をＣ３ｂ結合領域に導入す
ると、おそらくＣ３ｂ活性を実質的に妨害することは無
いであろう。なぜなら、ＳＣＲ１-２に特異的な多くの
アミノ酸（Ｃ４ｂ結合に重要なアミノ酸を含む）が既に
存在するＣＲ１-４変異体１０、ＣＲ１-４変異体１１お
よびＣＲ１-４変異体１０、１１中に、実質的なＣ３ｂ
結合が生じるからである。
【０１０３】Ｃ４ｂに対する親和性を増強させるように
設計された特定の置換は、実施例３で既に述べたもので
ある。ＳＣＲ１-２、即ちＣＲ１のＣ４ｂ１次結合部位
は、９２位のＫをＴに置換することによって改変でき
る。ＳＣＲ８-９およびこれと同一のＳＣＲ１５- １６
は、３５位に対応する位置のＥをＧ（またはＡ）に置換
し、９４位に対応する位置のＨをＹ（またはＦ）に置換
し、６４位に対応する位置のＫをＲに置換し、そして６
５位に対応する位置のＴをＮ（またはＱ）に置換するこ
とによって、改変され得る。ＳＣＲ２２- ２３は、６４
位に対応する位置のＧをＲ（またはＫ）に置換し、６５
位に対応する位置のＰをＮ（またはＱ）に置換し、９２
位に対応する位置のＥをＴに置換し、９４位に対応する
位置のＦをＹに置換することによって、改変され得る。
設計された特定の置換は、実施例３で既に述べたもので
ある。ＳＣＲ１-２、即ちＣＲ１のＣ４ｂ１次結合部位
は、９２位のＫをＴに置換することによって改変でき
る。ＳＣＲ８-９およびこれと同一のＳＣＲ１５- １６
は、３５位に対応する位置のＥをＧ（またはＡ）に置換
し、９４位に対応する位置のＨをＹ（またはＦ）に置換
し、６４位に対応する位置のＫをＲに置換し、そして６
５位に対応する位置のＴをＮ（またはＱ）に置換するこ
とによって、改変され得る。ＳＣＲ２２- ２３は、６４
位に対応する位置のＧをＲ（またはＫ）に置換し、６５
位に対応する位置のＰをＮ（またはＱ）に置換し、９２
位に対応する位置のＥをＴに置換し、９４位に対応する
位置のＦをＹに置換することによって、改変され得る。
【０１０４】総合すれば、これらの改変によって、Ｃ４
ｂに対する親和性が向上し、さらに、新しい補酵素およ
び解離機能が確立し得るかあるいはｓＣＲ１出発物質中
の補酵素および解離機能の能力が向上し得る。
ｂに対する親和性が向上し、さらに、新しい補酵素およ
び解離機能が確立し得るかあるいはｓＣＲ１出発物質中
の補酵素および解離機能の能力が向上し得る。
【０１０５】上記各実施例に記載したように、ＣＲ１-
４のＳＣＲ１-２中のアミノ酸の短い配列中に、ＳＣＲ
８-９の対応するアミノ酸によって３つの異なる置換を
行うと、各々において、３７位のＳを１つのアミノ酸Ｙ
に置換する場合と同様に、ＣＲ１-４にＣ３ｂ結合能力
が生じる。ｓＣＲ１のＳＣＲ１-２中の１１４〜１２１
位のＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-ＤをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-
Ｑに置換すると、ｓＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が増
強する。さらに、ＳＣＲ２２- ２３中の１１４〜１２１
位のＤ-Ｋ-Ｋ-Ａ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-ＤをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-
Ｑに置換することによっても、ｓＣＲ１のＣ３ｂに対す
る親和性が増強する。構造上類似のアミノ酸配列によっ
ては、同様にＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ配列において置
換され得るものもある。
４のＳＣＲ１-２中のアミノ酸の短い配列中に、ＳＣＲ
８-９の対応するアミノ酸によって３つの異なる置換を
行うと、各々において、３７位のＳを１つのアミノ酸Ｙ
に置換する場合と同様に、ＣＲ１-４にＣ３ｂ結合能力
が生じる。ｓＣＲ１のＳＣＲ１-２中の１１４〜１２１
位のＤ-Ｎ-Ｅ-Ｔ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-ＤをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-
Ｑに置換すると、ｓＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が増
強する。さらに、ＳＣＲ２２- ２３中の１１４〜１２１
位のＤ-Ｋ-Ｋ-Ａ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-ＤをＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-
Ｑに置換することによっても、ｓＣＲ１のＣ３ｂに対す
る親和性が増強する。構造上類似のアミノ酸配列によっ
ては、同様にＳ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ配列において置
換され得るものもある。
【０１０６】同様に、１０９〜１１２位のＤ-Ｔ-Ｖ-Ｉ
をＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対す
る親和性が向上する。さらに、ＳＣＲ１ＳＣＲ２２-２
３中の１０９〜１１２位のＮ-Ｎ-Ｖ-ＴをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに
置換することによっても、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親
和性が向上する。構造上類似のアミノ酸配列によって
は、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得るもの
もある。
をＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対す
る親和性が向上する。さらに、ＳＣＲ１ＳＣＲ２２-２
３中の１０９〜１１２位のＮ-Ｎ-Ｖ-ＴをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに
置換することによっても、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親
和性が向上する。構造上類似のアミノ酸配列によって
は、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得るもの
もある。
【０１０７】さらに、１２〜２１位のＲ-Ｐ-Ｔ-Ｎ-Ｌ-
（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ
-Ｄに置換すると、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が
増強する。さらに、ＳＣＲ１ＳＣＲ２２-２３中の１２
〜２１位のＳ-Ｐ-Ｔ-Ｉ-Ｐ-Ｉ-Ｎ-Ｄ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄに置換することによっても、
ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が向上する。この場合
もまた、構造上類似のアミノ酸によっては、同様にＮ-
Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得るものもある。
（Ｔ）-Ｄ-Ｅ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ
-Ｄに置換すると、ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が
増強する。さらに、ＳＣＲ１ＳＣＲ２２-２３中の１２
〜２１位のＳ-Ｐ-Ｔ-Ｉ-Ｐ-Ｉ-Ｎ-Ｄ-Ｆ-ＥをＫ-Ｌ-Ｋ-
Ｔ-Ｑ-（Ｔ）-Ｎ-Ａ-Ｓ-Ｄに置換することによっても、
ＳＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が向上する。この場合
もまた、構造上類似のアミノ酸によっては、同様にＮ-
Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得るものもある。
【０１０８】さらに、３７位のＳをＹに置換すると、Ｓ
ＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が増強する。また、ＳＣ
Ｒ１ ＳＣＲ２２- ２３中の３７位のＦをＹに置換する
ことによっても、ＳＣＲ１Ｃの３ｂに対する親和性が向
上する。
ＣＲ１のＣ３ｂに対する親和性が増強する。また、ＳＣ
Ｒ１ ＳＣＲ２２- ２３中の３７位のＦをＹに置換する
ことによっても、ＳＣＲ１Ｃの３ｂに対する親和性が向
上する。
【０１０９】より有効な補酵素インヒビターは、一般
に、Ｃ４ｂ結合およびＣ３ｂ結合を増強させる。これ
は、上記の全ての改変を導入することによって実現す
る。
に、Ｃ４ｂ結合およびＣ３ｂ結合を増強させる。これ
は、上記の全ての改変を導入することによって実現す
る。
【０１１０】［実施例５］（ＤＡＦアナログ） メンブラン結合性補酵素制御因子ＤＡＦは、Ｃ３ｂおよ
びＣ４ｂ含有コンベルターゼの解離を促進するが、Ｃ３
ｂまたはＣ４ｂの何れとも結合することはなく、しかも
Ｃ３ｂまたはＣ４ｂのＩ因子仲介タンパク質失活のため
の補因子として機能することもない。ある状況下では、
ＤＡＦの、またはＤＡＦの切断型、再構成型、あるいは
ハイブリッド型の補酵素調節活性を増強させることが望
ましい。アミノ酸配列の相同性に基づいて、ＤＡＦのＳ
ＣＲ２-３はＣＲ１活性領域に対応する。ＤＡＦのＳＣ
Ｒ２-３とＣＲ１のＳＣＲ１-２とは40％相同性があり、
一方ＤＡＦのＳＣＲ２- ３とＣＲ１のＳＣＲ８-９とは3
9％相同性がある（これらの配列中には幾つかの不一致
のアミノ酸が存在するために、ＤＡＦの位置番号はＣＲ
１の位置番号と正確には一致しない）。
びＣ４ｂ含有コンベルターゼの解離を促進するが、Ｃ３
ｂまたはＣ４ｂの何れとも結合することはなく、しかも
Ｃ３ｂまたはＣ４ｂのＩ因子仲介タンパク質失活のため
の補因子として機能することもない。ある状況下では、
ＤＡＦの、またはＤＡＦの切断型、再構成型、あるいは
ハイブリッド型の補酵素調節活性を増強させることが望
ましい。アミノ酸配列の相同性に基づいて、ＤＡＦのＳ
ＣＲ２-３はＣＲ１活性領域に対応する。ＤＡＦのＳＣ
Ｒ２-３とＣＲ１のＳＣＲ１-２とは40％相同性があり、
一方ＤＡＦのＳＣＲ２- ３とＣＲ１のＳＣＲ８-９とは3
9％相同性がある（これらの配列中には幾つかの不一致
のアミノ酸が存在するために、ＤＡＦの位置番号はＣＲ
１の位置番号と正確には一致しない）。
【０１１１】ＤＡＦの１８０〜１８７位（Lublinおよび
AtkinsonのAnn Rev Immunol (1989)7:35-58に記載の数
え方を用いる）のＳ−Ｄ−Ｐ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−ＲをＳ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂに対
する親和性が増強する。Ｓ-Ｄ-Ｐ-Ｌ-Ｐ-Ｅ-ＣをＳ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑに置換すると、このセグメントの末
端にＲが残る。なぜなら、Ｒが、ＣＲ１のＳＣＲ１-２
およびＣＲ１のＳＣＲ８-９の対応する位置に見られる
からである。構造上類似のアミノ酸によっては、同様に
Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ配列において置換され得るも
のもある。
AtkinsonのAnn Rev Immunol (1989)7:35-58に記載の数
え方を用いる）のＳ−Ｄ−Ｐ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−ＲをＳ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂに対
する親和性が増強する。Ｓ-Ｄ-Ｐ-Ｌ-Ｐ-Ｅ-ＣをＳ-Ｔ-
Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑに置換すると、このセグメントの末
端にＲが残る。なぜなら、Ｒが、ＣＲ１のＳＣＲ１-２
およびＣＲ１のＳＣＲ８-９の対応する位置に見られる
からである。構造上類似のアミノ酸によっては、同様に
Ｓ-Ｔ-Ｋ-Ｐ-Ｐ-Ｉ-Ｃ-Ｑ配列において置換され得るも
のもある。
【０１１２】同様に、ＤＡＦの１７５〜１７８位のＳ-
Ｓ-Ｖ-ＱをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂ
に対する親和性が増強する。構造上類似のアミノ酸によ
っては、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得る
ものもある。
Ｓ-Ｖ-ＱをＮ-Ａ-Ａ-Ｈに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂ
に対する親和性が増強する。構造上類似のアミノ酸によ
っては、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され得る
ものもある。
【０１１３】さらに、ＤＡＦの７４〜８４位からのＳ-
Ｌ-Ｋ-Ｑ-Ｐ-Ｙ-Ｉ-Ｔ-Ｑ-Ｎ-ＹをＫ-L-Ｋ-Ｔ-Ｑ-Ｔ-Ｎ
-Ａ-Ｓ-Ｄに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂに対する親和
性が増強する。この場合もまた、構造上類似のアミノ酸
によっては、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され
得るものもある。
Ｌ-Ｋ-Ｑ-Ｐ-Ｙ-Ｉ-Ｔ-Ｑ-Ｎ-ＹをＫ-L-Ｋ-Ｔ-Ｑ-Ｔ-Ｎ
-Ａ-Ｓ-Ｄに置換すると、ＤＡＦのＣ３ｂに対する親和
性が増強する。この場合もまた、構造上類似のアミノ酸
によっては、同様にＮ-Ａ-Ａ-Ｈ配列において置換され
得るものもある。
【０１１４】さらに、ＤＡＦの１００位のＲをＹに置換
することによっても、ＤＡＦのＣ３ｂに対する親和性を
増強させることができる。構造上類似のアミノ酸Ｆもま
たＹに置換され得る。
することによっても、ＤＡＦのＣ３ｂに対する親和性を
増強させることができる。構造上類似のアミノ酸Ｆもま
たＹに置換され得る。
【０１１５】ＤＡＦの１３０位のＰをＲ（またはＫ）
に、特にＲに置換すると、ＤＡＦのＣ４ｂに対する親和
性が増強する。ＣＲ１中のＣ４ｂ相互作用に重要である
と判明した他の全てのアミノ酸は、ＤＡＦのＳＣＲ２-
３中に既に存在する。
に、特にＲに置換すると、ＤＡＦのＣ４ｂに対する親和
性が増強する。ＣＲ１中のＣ４ｂ相互作用に重要である
と判明した他の全てのアミノ酸は、ＤＡＦのＳＣＲ２-
３中に既に存在する。
【０１１６】これらの置換によって、ＤＡＦのＣ３ｂに
対する、およびおそらくはＣ４ｂに対する親和性が増強
し、これによって、補体活性に対するＤＡＦの各々の阻
害効果が向上する。これらのアナログは、例えば、異種
移植拒絶の抑制に有用である。このようなＤＡＦアナロ
グを用いたトランスジェニック動物ドナーは、ヒトレシ
ピエントに対する移植のための臓器を提供するために使
用される。
対する、およびおそらくはＣ４ｂに対する親和性が増強
し、これによって、補体活性に対するＤＡＦの各々の阻
害効果が向上する。これらのアナログは、例えば、異種
移植拒絶の抑制に有用である。このようなＤＡＦアナロ
グを用いたトランスジェニック動物ドナーは、ヒトレシ
ピエントに対する移植のための臓器を提供するために使
用される。
【０１１７】［実施例６］古典経路を特異的に阻害する
可溶性ＭＣＰアナログ 膜結合補体調節因子ＭＣＰは、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両
方に結合し、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両方をＩ因子の仲介
により不活性化するための補因子として作用する。これ
は、とくにｓＣＲ１中に複数の結合部位を有するように
再構築された場合、可溶性補体阻害剤として興味を引く
ものである。１つの実施態様として、２つ以上のＭＣＰ
ＳＣＲ１−４の縦列反復から成るより長い型のＭＣＰ
を出発物質として利用する。この延長されたＭＰＣのア
ナログは、古典経路に特異的である。実施例３において
ｓＣＲ１について概説されるように、全ての、またはい
くつかのＭＣＰ反復を、Ｃ４ｂ結合性を高めるように改
変し、１つのＭＣＰ反復を除く全てを、Ｃ３ｂ結合性を
低下させるように改変する。
可溶性ＭＣＰアナログ 膜結合補体調節因子ＭＣＰは、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両
方に結合し、Ｃ３ｂおよびＣ４ｂの両方をＩ因子の仲介
により不活性化するための補因子として作用する。これ
は、とくにｓＣＲ１中に複数の結合部位を有するように
再構築された場合、可溶性補体阻害剤として興味を引く
ものである。１つの実施態様として、２つ以上のＭＣＰ
ＳＣＲ１−４の縦列反復から成るより長い型のＭＣＰ
を出発物質として利用する。この延長されたＭＰＣのア
ナログは、古典経路に特異的である。実施例３において
ｓＣＲ１について概説されるように、全ての、またはい
くつかのＭＣＰ反復を、Ｃ４ｂ結合性を高めるように改
変し、１つのＭＣＰ反復を除く全てを、Ｃ３ｂ結合性を
低下させるように改変する。
【０１１８】このＭＣＰ ＳＣＲ１−２は、ＣＲ１ Ｓ
ＣＲ１−２に対応する。このように、実施例３でＣＲ１
のＳＣＲ８−９の改変のために提案された以下のいくつ
かのアミノ酸の置換は、ＭＣＰのＣ４ｂに対する親和性
を高めることに寄与する：ＭＣＰの６６位（Liszewski
ら、Ann Rev Immunol (1991) 9:431に記載の数え方を用
いる）のＰをＲ（またはＫ）に、とくにＲに置換するこ
と；ＭＣＰの６７位のＹをＮ（またはＱ）に、とくにＮ
に置換すること；ＭＣＰの９５位のＥをＴに置換するこ
と。
ＣＲ１−２に対応する。このように、実施例３でＣＲ１
のＳＣＲ８−９の改変のために提案された以下のいくつ
かのアミノ酸の置換は、ＭＣＰのＣ４ｂに対する親和性
を高めることに寄与する：ＭＣＰの６６位（Liszewski
ら、Ann Rev Immunol (1991) 9:431に記載の数え方を用
いる）のＰをＲ（またはＫ）に、とくにＲに置換するこ
と；ＭＣＰの６７位のＹをＮ（またはＱ）に、とくにＮ
に置換すること；ＭＣＰの９５位のＥをＴに置換するこ
と。
【０１１９】ＣＲ１−４にＣ３ｂ結合性を付与するＳＣ
Ｒ８−９のアミノ酸配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ
−Ｑは、対応するＭＣＰの１１７〜１２４位にぴったり
と対応する。これらのＭＣＰアミノ酸をＣＲ１のＳＣＲ
１−２のアミノ酸（Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄ）
に置換することにより、各々の改変されたＭＣＰ部位の
Ｃ３ｂ結合性は低下する。いくつかの構造的に類似した
アミノ酸が、このＤ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄ配列
において置換され得る。
Ｒ８−９のアミノ酸配列、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ
−Ｑは、対応するＭＣＰの１１７〜１２４位にぴったり
と対応する。これらのＭＣＰアミノ酸をＣＲ１のＳＣＲ
１−２のアミノ酸（Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄ）
に置換することにより、各々の改変されたＭＣＰ部位の
Ｃ３ｂ結合性は低下する。いくつかの構造的に類似した
アミノ酸が、このＤ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄ配列
において置換され得る。
【０１２０】いくつかのアミノ酸の置換は、ＭＣＰのＣ
３ｂに対する親和性を高めることに寄与する。ＭＣＰの
１１８位のＧをＴに置換すること、およびＭＣＰの１２
４位のＥをＱ（またはＮ）に置換することにより、Ｃ３
ｂ結合性は高まる。さらに、１１２〜１１５位のＳ−Ｖ
−Ａ−ＩをＮ−Ａ−Ａ−Ｈに置換すること、９〜１９位
のＡ−Ｍ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｋ−Ｐ−ＹをＫ−
Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄに置換すること、
およびＦを３５位のＹに置換することによっても、Ｃ３
ｂ結合性は高まる。
３ｂに対する親和性を高めることに寄与する。ＭＣＰの
１１８位のＧをＴに置換すること、およびＭＣＰの１２
４位のＥをＱ（またはＮ）に置換することにより、Ｃ３
ｂ結合性は高まる。さらに、１１２〜１１５位のＳ−Ｖ
−Ａ−ＩをＮ−Ａ−Ａ−Ｈに置換すること、９〜１９位
のＡ−Ｍ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｋ−Ｐ−ＹをＫ−
Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄに置換すること、
およびＦを３５位のＹに置換することによっても、Ｃ３
ｂ結合性は高まる。
【０１２１】出発物質として用いられる１つの実施態様
は、１６番目のＳＣＲのすぐ後で終わるＭＣＰ ＳＣＲ
１−４の１６のＳＣＲ−長縦列反復であり、このよう
に、４つの対応する長い相同性反復（ＬＨＲｓ）を含有
する。このアナログにおいて、全ての対応部位がＣ４ｂ
の親和性を高めるために、上記のように増強され、アミ
ノ末端から２番目のＬＨＲを除く全ては、Ｃ３ｂ結合性
を抑制するように改変される。この２番目のＬＨＲは、
Ｃ３ｂ結合性を高めるように改変される。このアナログ
は、特異的な古典経路インヒビターである。
は、１６番目のＳＣＲのすぐ後で終わるＭＣＰ ＳＣＲ
１−４の１６のＳＣＲ−長縦列反復であり、このよう
に、４つの対応する長い相同性反復（ＬＨＲｓ）を含有
する。このアナログにおいて、全ての対応部位がＣ４ｂ
の親和性を高めるために、上記のように増強され、アミ
ノ末端から２番目のＬＨＲを除く全ては、Ｃ３ｂ結合性
を抑制するように改変される。この２番目のＬＨＲは、
Ｃ３ｂ結合性を高めるように改変される。このアナログ
は、特異的な古典経路インヒビターである。
【０１２２】[実施例７] Ｈ因子のアナログ Ｈ因子は、２０のＳＣＲのみから成るプラズマタンパク
質である。Ｈ因子は、Ｃ３ｂ結合性、Ｃ３ｂ補因子、お
よび解離能力を示すが、Ｃ４ｂを不活性化するか、また
はＣ４ｂに結合する能力ははっきり示さない。Ｈ因子
は、すでにプラズマタンパク質として進化しているの
で、これを可溶性ＲＣＡアナログのための出発物質とし
て用いることは有利である。Ｈ因子の活性部位は、正確
には知られていないが、Ｈ因子の最初の５．５個のＳＣ
Ｒを含有するタンパク質分解断片は、Ｃ３ｂ結合性およ
び補因子活性を示す（Alsenzら、Boichem J（1984）38
9）。
質である。Ｈ因子は、Ｃ３ｂ結合性、Ｃ３ｂ補因子、お
よび解離能力を示すが、Ｃ４ｂを不活性化するか、また
はＣ４ｂに結合する能力ははっきり示さない。Ｈ因子
は、すでにプラズマタンパク質として進化しているの
で、これを可溶性ＲＣＡアナログのための出発物質とし
て用いることは有利である。Ｈ因子の活性部位は、正確
には知られていないが、Ｈ因子の最初の５．５個のＳＣ
Ｒを含有するタンパク質分解断片は、Ｃ３ｂ結合性およ
び補因子活性を示す（Alsenzら、Boichem J（1984）38
9）。
【０１２３】Ｈ因子のＣ３ｂ結合性に対する親和性を高
めるために、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを、この
ＳＣＲのいくつかに導入しても、いずれもＣＲ１ ＳＣ
Ｒ８−９との密接な対応を生じない。１つの実施態様で
は、この最初の６つのＳＣＲを改変しないままにして、
元の活性部位を保持し、残りの１４のＳＣＲを、このＳ
−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−ＱをＣＲ１と相同な部位に
導入することによって改変する。いくつかの構造的に類
似したアミノ酸は、このＳ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−
Ｑ配列において置換し得る。Ｃ３ｂに結合するセグメン
トの中のＣは全ての公知のＳＣＲにおいて見られるが、
このＣ３ｂに結合するセグメントに先行するＷは、ほと
んどのＳＣＲにおいて見られる（ＳＣＲ１０およびＳＣ
Ｒ２０を除くすべてのＨ因子ＳＣＲにおいて見られる）
ので、相同性を有する部位は容易に同定される。
めるために、Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを、この
ＳＣＲのいくつかに導入しても、いずれもＣＲ１ ＳＣ
Ｒ８−９との密接な対応を生じない。１つの実施態様で
は、この最初の６つのＳＣＲを改変しないままにして、
元の活性部位を保持し、残りの１４のＳＣＲを、このＳ
−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−ＱをＣＲ１と相同な部位に
導入することによって改変する。いくつかの構造的に類
似したアミノ酸は、このＳ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−
Ｑ配列において置換し得る。Ｃ３ｂに結合するセグメン
トの中のＣは全ての公知のＳＣＲにおいて見られるが、
このＣ３ｂに結合するセグメントに先行するＷは、ほと
んどのＳＣＲにおいて見られる（ＳＣＲ１０およびＳＣ
Ｒ２０を除くすべてのＨ因子ＳＣＲにおいて見られる）
ので、相同性を有する部位は容易に同定される。
【０１２４】他のＣＲ１配列は、Ｃ３ｂ結合のためのＨ
因子の能力を高めるために、ＣＲ１と相同性を有する部
位のＨ因子ＳＣＲに導入され得る：Ｎ−Ａ−Ａ−Ｈ、Ｋ
−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−ＤおよびＹ。いく
つかの構造的に類似したアミノ酸は、これらのＮ−Ａ−
Ａ−Ｈ、Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄおよ
びＹ配列において置換し得る。
因子の能力を高めるために、ＣＲ１と相同性を有する部
位のＨ因子ＳＣＲに導入され得る：Ｎ−Ａ−Ａ−Ｈ、Ｋ
−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−ＤおよびＹ。いく
つかの構造的に類似したアミノ酸は、これらのＮ−Ａ−
Ａ−Ｈ、Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄおよ
びＹ配列において置換し得る。
【０１２５】これらのＨ因子ＳＣＲは、ＣＲ１ ＳＣＲ
１−２およびＣＲ１ ＳＣＲ８−９領域との相同性が低
いので、置換の全てにより結合活性が必ずしもさらに付
与されるのではない。しかし、少なくともいくつかの改
変されたＨ因子ＳＣＲは、Ｃ３ｂへの結合能力を得て、
Ｃ３ｂへのはるかに高い親和性を有するＨ因子アナログ
となる。上記のように、より高い親和性により、最初の
６つのＨ ＳＣＲにすでに存在する活性部位の用途が広
がる。
１−２およびＣＲ１ ＳＣＲ８−９領域との相同性が低
いので、置換の全てにより結合活性が必ずしもさらに付
与されるのではない。しかし、少なくともいくつかの改
変されたＨ因子ＳＣＲは、Ｃ３ｂへの結合能力を得て、
Ｃ３ｂへのはるかに高い親和性を有するＨ因子アナログ
となる。上記のように、より高い親和性により、最初の
６つのＨ ＳＣＲにすでに存在する活性部位の用途が広
がる。
【０１２６】［実施例８］強力な古典経路インヒビター
としてのＣＲ１−４アナログ ＣＲ１−４タンパク質は、ＣＲ１受容体の最初の８．５
個のＮ末端ＳＣＲから成る、ＣＲ１の分泌された形であ
る（Hourcadeら、J Exp Med (1988) 168:1255;Krych
ら、(1991) 印刷中）。どのＣＲ１−４に対応するタン
パク質もメッセンジャーもインビボでは単離されなかっ
たが、ＣＲ１−４ ｃＤＮＡが、ヒト前骨髄球細胞系か
ら単離されたので、ＣＲ１−４ｍＲＮＡは、エプスタイ
ン・バールウイルスにより形質転換されたヒトＢ細胞を
用いても生産され得ることが示唆される。従って、この
ＣＲ１−４タンパク質は、補体に対する防御としての形
質転換された細胞によりインビボで生産可能である。
としてのＣＲ１−４アナログ ＣＲ１−４タンパク質は、ＣＲ１受容体の最初の８．５
個のＮ末端ＳＣＲから成る、ＣＲ１の分泌された形であ
る（Hourcadeら、J Exp Med (1988) 168:1255;Krych
ら、(1991) 印刷中）。どのＣＲ１−４に対応するタン
パク質もメッセンジャーもインビボでは単離されなかっ
たが、ＣＲ１−４ ｃＤＮＡが、ヒト前骨髄球細胞系か
ら単離されたので、ＣＲ１−４ｍＲＮＡは、エプスタイ
ン・バールウイルスにより形質転換されたヒトＢ細胞を
用いても生産され得ることが示唆される。従って、この
ＣＲ１−４タンパク質は、補体に対する防御としての形
質転換された細胞によりインビボで生産可能である。
【０１２７】ＣＲ１−４はインビボで作用し得るので、
実施例３のｓＣＲ１よりも、プラズマ中で循環するのに
より適している。例えば、それはより安定であり得る。
ＣＲ１−４は、Ｃ３ｂ補因子活性を媒介する第１部位を
欠いているので、古典経路に特異的なインヒビターであ
る。ＣＲ１−４は、このように、実施例３における改変
と類似の改変のための出発物質として用いられ得る。
実施例３のｓＣＲ１よりも、プラズマ中で循環するのに
より適している。例えば、それはより安定であり得る。
ＣＲ１−４は、Ｃ３ｂ補因子活性を媒介する第１部位を
欠いているので、古典経路に特異的なインヒビターであ
る。ＣＲ１−４は、このように、実施例３における改変
と類似の改変のための出発物質として用いられ得る。
【０１２８】Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂ親和性は、次
のように、高められる。すなわち、出発物質として、Ｃ
Ｒ１−４、または表２に記載のように、１１４〜１２１
位および／または９２位において改変されているＣＲ１
−４を用いることにより、高められる。新しい結合部位
を構築することにより、ｓＣＲ１相互作用において見ら
れるような共同結合効果が生じる（Wong, W. ら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９１） １４６：６５６）。Ｓ
ＣＲ５−６は、Ｃ４ｂ結合性にとっては重要でないもの
として示されている（Ｋｌｉｃｋｓｔｅｉｎら、J Exp
Med (1988) 168:1699）ので、この領域における改変
は、ＣＲ１−４においてすでに本来備わっているＣ４ｂ
の能力を損なわない。アミノ酸配列の比較（Klickstein
ら、J Exp Med (1987) 165:1095）およびＣＲ１遺伝子
の各々のコード領域のイントロン/エキソン構造（Hourc
ade, D. ら、J Biol Chem）は、ＳＣＲ５−６ならびに
ＳＣＲ１−２、およびＳＣＲ８−９間の実質的な相同性
および進化の関連性を示す。
のように、高められる。すなわち、出発物質として、Ｃ
Ｒ１−４、または表２に記載のように、１１４〜１２１
位および／または９２位において改変されているＣＲ１
−４を用いることにより、高められる。新しい結合部位
を構築することにより、ｓＣＲ１相互作用において見ら
れるような共同結合効果が生じる（Wong, W. ら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９１） １４６：６５６）。Ｓ
ＣＲ５−６は、Ｃ４ｂ結合性にとっては重要でないもの
として示されている（Ｋｌｉｃｋｓｔｅｉｎら、J Exp
Med (1988) 168:1699）ので、この領域における改変
は、ＣＲ１−４においてすでに本来備わっているＣ４ｂ
の能力を損なわない。アミノ酸配列の比較（Klickstein
ら、J Exp Med (1987) 165:1095）およびＣＲ１遺伝子
の各々のコード領域のイントロン/エキソン構造（Hourc
ade, D. ら、J Biol Chem）は、ＳＣＲ５−６ならびに
ＳＣＲ１−２、およびＳＣＲ８−９間の実質的な相同性
および進化の関連性を示す。
【０１２９】ＣＲ１−４のＳＣＲ５−６を改変すると、
Ｃ４ｂ親和性およびＣ３ｂ親和性の両方が高められる。
３１８〜３１９位（Hourcadeら、J Exp Med (1988) 16
8:1255-1270に記載の数え方を用いる）のＤ−Ｄを、Ｒ
−Ｎ（またはＫ−Ｎ，Ｒ−ＱもしくはＫ−Ｑ）に置換す
ることにより、Ｃ４ｂ親和性が高められ得る。ＳＣＲ１
−２におけるＲ−Ｎの後に２つのプロリンを保持するこ
とが必要であると考えられるので、Ｄ−Ｄ−Ｆ−ＭをＲ
−Ｎ−Ｐ−Ｐに置換することが好ましい。３４７位のＥ
をＴに、および３４９位のＦをＹに置換することによっ
ても、Ｃ４ｂ親和性は高められる。ＳＣＲ５−６は、Ｃ
３ｂ親和性を高めるために、３６９〜３７６位のＮ−Ｓ
−Ｓ−Ｖ−Ｐ−Ｖ−Ｃ−Ｅを、ＣＲ１ ＳＣＲ８−９の
Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑに置換することによっ
ても改変される。いくつかの構造的に類似のアミノ酸
は、このＳ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑ配列において
置換し得る。
Ｃ４ｂ親和性およびＣ３ｂ親和性の両方が高められる。
３１８〜３１９位（Hourcadeら、J Exp Med (1988) 16
8:1255-1270に記載の数え方を用いる）のＤ−Ｄを、Ｒ
−Ｎ（またはＫ−Ｎ，Ｒ−ＱもしくはＫ−Ｑ）に置換す
ることにより、Ｃ４ｂ親和性が高められ得る。ＳＣＲ１
−２におけるＲ−Ｎの後に２つのプロリンを保持するこ
とが必要であると考えられるので、Ｄ−Ｄ−Ｆ−ＭをＲ
−Ｎ−Ｐ−Ｐに置換することが好ましい。３４７位のＥ
をＴに、および３４９位のＦをＹに置換することによっ
ても、Ｃ４ｂ親和性は高められる。ＳＣＲ５−６は、Ｃ
３ｂ親和性を高めるために、３６９〜３７６位のＮ−Ｓ
−Ｓ−Ｖ−Ｐ−Ｖ−Ｃ−Ｅを、ＣＲ１ ＳＣＲ８−９の
Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑに置換することによっ
ても改変される。いくつかの構造的に類似のアミノ酸
は、このＳ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑ配列において
置換し得る。
【０１３０】同様に、Ｃ３ｂ親和性をさらに高めるため
に、ＳＣＲ５−６は、２６６〜２７４位のＥ−Ｒ−Ｔ−
Ｑ−Ｒ−Ｄ−Ｋ−ＮをＣＲ１ ＳＣＲ８−９のＫ−Ｌ−
Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄに置換すること、３６
４〜３６７位のＭ−Ｅ−Ｓ−ＬをＣＲ１ ＳＣＲ８−９
のＮ−Ａ−Ａ−Ｈに置換すること、および２９１位のＤ
をＣＲ１ ＳＣＲ８−９のＹに置換することにより改変
される。いくつかの構造的に類似のアミノ酸は、このＫ
−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄ配列、Ｎ−Ａ−
Ａ−Ｈ配列、およびＹにおいて置換し得る。
に、ＳＣＲ５−６は、２６６〜２７４位のＥ−Ｒ−Ｔ−
Ｑ−Ｒ−Ｄ−Ｋ−ＮをＣＲ１ ＳＣＲ８−９のＫ−Ｌ−
Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄに置換すること、３６
４〜３６７位のＭ−Ｅ−Ｓ−ＬをＣＲ１ ＳＣＲ８−９
のＮ−Ａ−Ａ−Ｈに置換すること、および２９１位のＤ
をＣＲ１ ＳＣＲ８−９のＹに置換することにより改変
される。いくつかの構造的に類似のアミノ酸は、このＫ
−Ｌ−Ｋ−Ｔ−Ｑ−Ｔ−Ｎ−Ａ−Ｓ−Ｄ配列、Ｎ−Ａ−
Ａ−Ｈ配列、およびＹにおいて置換し得る。
【０１３１】標的Ｃ３ｂおよび／またはＣ４ｂに対する
特異性および親和性を改変した、補体活性の制御因子
（ＲＣＡ）タンパク質のアナログが記載されている。こ
れらのアナログは、アミノ酸３５、６４〜６５、９２〜
９４（Ｃ４ｂ）と称せられ、これらのタンパク質の結合
に影響するアミノ酸を置換することにより得られ、そし
て、このＣＲ１タンパク質における配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ
−（Ｐ−Ｉ−Ｃ）−Ｑ（Ｃ３ｂ）は、ＣＲ１の対応する
部位またはＲＣＡの他のメンバーの対応する部位に転移
され得る。アナログは、これらのタンパク質の結合に影
響するアミノ酸を、ＣＲ１が対応しないＳＣＲの相同領
域または他のメンバーの相同領域に導入することによっ
ても設計され得る。
特異性および親和性を改変した、補体活性の制御因子
（ＲＣＡ）タンパク質のアナログが記載されている。こ
れらのアナログは、アミノ酸３５、６４〜６５、９２〜
９４（Ｃ４ｂ）と称せられ、これらのタンパク質の結合
に影響するアミノ酸を置換することにより得られ、そし
て、このＣＲ１タンパク質における配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ
−（Ｐ−Ｉ−Ｃ）−Ｑ（Ｃ３ｂ）は、ＣＲ１の対応する
部位またはＲＣＡの他のメンバーの対応する部位に転移
され得る。アナログは、これらのタンパク質の結合に影
響するアミノ酸を、ＣＲ１が対応しないＳＣＲの相同領
域または他のメンバーの相同領域に導入することによっ
ても設計され得る。
【図１】ＲＣＡによりコードされるタンパク質の構造お
よび関係の概略図である。Ａは、短いコンセンサス反復
を示し、高度に保持された残基が提示されている。Ｂ
は、ＲＣＡタンパク質のＳＣＲ構造を示す。
よび関係の概略図である。Ａは、短いコンセンサス反復
を示し、高度に保持された残基が提示されている。Ｂ
は、ＲＣＡタンパク質のＳＣＲ構造を示す。
【図２】全長ＣＲ１のＳＣＲ−１、ＳＣＲ−２、ＳＣＲ
−８、およびＳＣＲ−９のアミノ酸配列を示す。ＳＣＲ
１５−１６のアミノ酸配列は、１１０位にＴが存在する
こと以外は、ＳＣＲ８−９のものと同一である。この数
え方は、HourcadeらによるJ Exp Med (1988) 168:1255-
1270のものと一致しており、成熟受容体の第１アミノ酸
（Ｑ）がアミノ酸＃１と呼ばれる。ＣＲ１のＳＣＲ８に
おける対応する部位が同様に規定される。
−８、およびＳＣＲ−９のアミノ酸配列を示す。ＳＣＲ
１５−１６のアミノ酸配列は、１１０位にＴが存在する
こと以外は、ＳＣＲ８−９のものと同一である。この数
え方は、HourcadeらによるJ Exp Med (1988) 168:1255-
1270のものと一致しており、成熟受容体の第１アミノ酸
（Ｑ）がアミノ酸＃１と呼ばれる。ＣＲ１のＳＣＲ８に
おける対応する部位が同様に規定される。
【図３】ＣＲ１−４の変異型（ＣＲ１−４（３ｂ））の
アミノ酸配列を示す。ここで、ＣＲ１−４のＳＣＲ１お
よび２は、ＣＲ４のＳＣＲ８−９に置換されている。
アミノ酸配列を示す。ここで、ＣＲ１−４のＳＣＲ１お
よび２は、ＣＲ４のＳＣＲ８−９に置換されている。
【図４】Ｃ３コンベルターゼの古典経路および副経路に
おける生成を示す。
おける生成を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 マルゴールザタ クリチ アメリカ合衆国 ミズーリ 63108，セ ントルイス，＃９，ウエスト パイン 4225 (56)参考文献 Ｊ．ＥＸＰ．ＭＥＤ．，ＶＯＬ．168, Ｐ．1699−1717（1988) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 14/47 C12P 21/02 C12N 15/09 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (23)
- 【請求項１】 補体受容体１、補体受容体２、崩壊加速
因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、およ
びＨ因子、ならびにこれらの補体調節タンパク質であっ
て分泌のためにカルボキシ末端が除去されている補体調
節タンパク質からなる群から選択されるアミノ酸配列中
の複数の短いコンセンサス反復を有する、補体の活性化
を調節するタンパク質アナログ： ここで、該タンパク質アナログは、補体受容体１、補体
受容体２、崩壊加速因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結
合タンパク質、およびＨ因子からなる群から選択される
補体調節タンパク質の２つまたはそれより多い補体調節
タンパク質に由来する複数の短いコンセンサス反復を有
する補体調節タンパク質、および該選択される補体調節
タンパク質の複数の短いコンセンサス反復が再配列され
ている補体調節タンパク質からなる群から選択される。 - 【請求項２】 補体受容体１、補体受容体２、崩壊加速
因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、およ
びＨ因子、ならびにこれらの補体調節タンパク質であっ
て分泌のためにカルボキシ末端が除去されている補体調
節タンパク質からなる群から選択されるアミノ酸配列中
の複数の短いコンセンサス反復を有する、補体の活性化
を調節するタンパク質アナログ： ここで、該タンパク質アナログは、限定されたアミノ酸
置換を該複数の短いコンセンサス反復中に有し、そして
短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の１１４位から１
２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸が、アミノ酸配列
Ｓ−Ｔ−（Ｋ／Ｒ）−Ｐ−Ｐ−（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−
（Ｑ／Ｎ）を含有するように改変されているタンパク
質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の１１４位から１
２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸が、配列Ｓ−Ｔ−
Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを含有するように改変されてい
るタンパク質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の１１４位から１
２１位の位置に対応するアミノ酸が、配列（Ｄ／Ｅ）−
（Ｎ／Ｑ）−（Ｅ／Ｄ）−Ｔ−Ｐ−（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ
−（Ｄ／Ｅ）を含有するように改変されているタンパク
質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の１１４位から１
２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸が、配列Ｄ−Ｎ−
Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄを含有するように改変されてい
るタンパク質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の３５位、６４
位、６５位、および９４位からなる群から選択されるア
ミノ酸に対応する１つのアミノ酸が、３５位では（Ｇ／
Ａ）、６４位では（Ｒ／Ｋ）、６５位では（Ｎ／Ｑ）、
および９４位では（Ｙ／Ｆ）からなる群から選択される
ことにより改変されているタンパク質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の３５位、６４
位、６５位、および９４位からなる群から選択されるア
ミノ酸に対応する１つのアミノ酸が、３５位ではＧ、６
４位ではＲ、６５位ではＮ、および９４位ではＹからな
る群から選択されることにより改変されているタンパク
質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の９２位のアミノ
酸に対応するアミノ酸が、Ｔであるように改変されてい
るタンパク質；短いコンセンサス反復における ＣＲ１の３５位、６４
位、６５位、９２位、および９４位からなる群から選択
されるアミノ酸に対応する１つのアミノ酸が、３５位で
はＥ、６４位ではＫ、６５位ではＴ、９２位ではＴ、お
よび９４位ではＨからなる群から選択されることにより
改変されているタンパク質；および該タンパク質アナロ
グがＣＲ１−４であり、そして以下の変更からなる群か
ら選択される変更により改変されているタンパク質； １位から６０位のアミノ酸が欠失； ６１位から１２２位のアミノ酸が欠失； ３５位のＧおよび３７位のＳが、それぞれＥおよびＹに
置換； ３５位のＧがＥに置換； ３７位のＳがＹに置換； ４４位、４７位、および４９位のＩ、Ｋ、およびＳが、
それぞれＴ、Ｄ、およびＬに置換； ５２位から５４位のＴ−Ｇ−ＡがＳ−Ｓ−Ｐに置換； ５７位および５９位のＲおよびＲが、それぞれＶおよび
Ｋに置換； ６４位から６５位のＲ−ＮがＫ−Ｔに置換； ６４位のＲがＫに置換； ６５位のＮがＴに置換； ７８位から７９位のＫ−ＧがＴ−Ｄに置換； ８５位および８７位のＱおよびＫが、それぞれＲおよび
Ｎに置換； ９２位および９４位のＫおよびＹが、それぞれＴおよび
Ｈに置換； ９４位のＹがＨに置換； ９９位および１０３位のＳおよびＴが、それぞれＨおよ
びＥに置換； １０９位から１１２位のＤ−Ｔ−Ｖ−Ｉが、それぞれＮ
−Ａ−Ａ−Ｈに置換； １１４位から１１７位および１２１位のＤ−Ｎ−Ｅ−Ｔ
およびＤが、それぞれＳ−Ｔ−Ｋ−ＰおよびＱに置換； １１４位のＤがＳに置換； １１５位のＮがＴに置換； １１６位のＥがＫに置換； １１７位のＴがＰに置換； １１６位から１１７位のＥ−ＴがＫ−Ｐに置換； １２１位のＤがＱに置換；および１位から６０位が欠
失、１１４位から１１７位および１２１位のＤ−Ｎ−Ｅ
−ＴおよびＤが、それぞれＳ−Ｔ−Ｋ−ＰおよびＱに置
換； からなる群から選択されるタンパク質である。 - 【請求項３】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
１１４位から１２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸
が、アミノ酸配列Ｓ−Ｔ−（Ｋ／Ｒ）−Ｐ−Ｐ−（Ｉ／
Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｑ／Ｎ）を含有するように改変されて
いる、請求項２に記載のタンパク質アナログ。 - 【請求項４】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
１１４位から１２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸
が、配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑを含有するよ
うに改変されている、請求項２に記載のタンパク質アナ
ログ。 - 【請求項５】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
１１４位から１２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸
が、配列（Ｄ／Ｅ）−（Ｎ／Ｑ）−（Ｅ／Ｄ）−Ｔ−Ｐ
−（Ｉ／Ｌ／Ｖ）−Ｃ−（Ｄ／Ｅ）を含有するように改
変されている、請求項２に記載のタンパク質アナログ。 - 【請求項６】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
１１４位から１２１位のアミノ酸に対応するアミノ酸
が、配列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄを含有するよ
うに改変されている、請求項５に記載のタンパク質アナ
ログ。 - 【請求項７】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
３５位、６４位、６５位、および９４位のアミノ酸から
なる群から選択される１つのアミノ酸が、３５位では
（Ｇ／Ａ）、６４位では（Ｒ／Ｋ）、６５位では（Ｎ／
Ｑ）、および９４位では（Ｙ／Ｆ）からなる群から選択
されることにより改変されている、請求項２に記載のタ
ンパク質アナログ。 - 【請求項８】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
３５位、６４位、６５位、および９４位のアミノ酸から
なる群から選択される１つのアミノ酸が、３５位では
Ｇ、６４位ではＲ、６５位ではＮ、および９４位ではＹ
からなる群から選択されるアミノ酸であるように改変さ
れている、請求項７に記載のタンパク質アナログ。 - 【請求項９】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１の
９２位のアミノ酸がＴであるように改変されている、請
求項２に記載のタンパク質アナログ。 - 【請求項１０】 短いコンセンサス反復におけるＣＲ１
の３５位、６４位、６５位、９２位、および９４位のア
ミノ酸からなる群から選択される１つのアミノ酸が、３
５位ではＥ、６４位ではＫ、６５位ではＴ，９２位では
Ｔ，およびおよび９４位ではＨからなる群から選択され
ることにより改変されてる、請求項２に記載のタンパク
質アナログ。 - 【請求項１１】 前記タンパク質アナログがＣＲ１−４
であり、そして以下の変更からなる群から選択される変
更により改変されている、請求項２に記載のタンパク質
アナログ： １位から６０位のアミノ酸が欠失； ６１位から１２２位のアミノ酸が欠失； ３５位のＧおよび３７位のＳが、それぞれＥおよびＹに
置換； ３５位のＧがＥに置換； ３７位のＳがＹに置換； ４４位、４７位、および４９位のＩ、Ｋ、およびＳが、
それぞれＴ、Ｄ、およびＬに置換； ５２位から５４位のＴ−Ｇ−ＡがＳ−Ｓ−Ｐに置換； ５７位および５９位のＲおよびＲが、それぞれＶおよび
Ｋに置換； ６４位から６５位のＲ−ＮがＫ−Ｔに置換； ６４位のＲがＫに置換； ６５位のＮがＴに置換； ７８位から７９位のＫ−ＧがＴ−Ｄに置換； ８５位および８７位のＱおよびＫが、それぞれＲおよび
Ｎに置換； ９２位および９４位のＫおよびＹが、それぞれＴおよび
Ｈに置換； ９４位のＹがＨに置換； ９９位および１０３位のＳおよびＴが、それぞれＨおよ
びＥに置換； １０９位から１１２位のＤ−Ｔ−Ｖ−Ｉが、それぞれＮ
−Ａ−Ａ−Ｈに置換； １１４位から１１７位および１２１位のＤ−Ｎ−Ｅ−Ｔ
およびＤが、それぞれＳ−Ｔ−Ｋ−ＰおよびＱに置換； １１４位のＤがＳに置換； １１５位のＮがＴに置換； １１６位のＥがＫに置換； １１７位のＴがＰに置換； １１６位から１１７位のＥ−ＴがＫ−Ｐに置換； １２１位のＤがＱに置換；および１位から６０位が欠
失、１１４位から１１７位および１２１位のＤ−Ｎ−Ｅ
−ＴおよびＤが、それぞれＳ−Ｔ−Ｋ−ＰおよびＱに置
換。 - 【請求項１２】 請求項１から１１のいずれかに記載の
タンパク質アナログを用いて生物学的試料中のＣ３ｂお
よび／またはＣ４ｂの存在、不在、または量を検出する
方法であって、 該試料と該タンパク質アナログとを、該タンパク質アナ
ログと該試料中の任意のＣ３ｂおよび／またはＣ４ｂと
が複合体を形成する条件下で、接触させる工程；および
該複合体の存在、不在、または量を検出する工程； を包含する、方法。 - 【請求項１３】 補体活性を調節するための薬剤組成物
であって、該調節を行うために有効な量の請求項１から
１１のいずれかに記載のタンパク質アナログを、少なく
とも１種の薬学的に許容される賦形剤と混合して含有す
る、組成物。 - 【請求項１４】 請求項１から１１のいずれかに記載の
タンパク質アナログをコードする、精製され、単離され
た形態のＤＮＡ配列。 - 【請求項１５】 適合する組換え宿主細胞中に形質転換
されたときに、請求項１から１１のいずれかに記載のタ
ンパク質アナログをコードするＤＮＡを発現し得る発現
系であって、 該宿主に適合する制御配列に作動可能に結合された、該
タンパク質アナログをコードするＤＮＡを含む、発現
系。 - 【請求項１６】 請求項１５に記載の発現系で形質転換
された組換え宿主細胞。 - 【請求項１７】 哺乳類細胞である、請求項１６に記載
の形質転換された宿主細胞。 - 【請求項１８】 トランスジェニック動物の一部であ
る、請求項１６に記載の形質転換された宿主細胞。 - 【請求項１９】 請求項１から１１のいずれかに記載の
タンパク質アナログを生産する方法であって、 該タンパク質アナログをコードするＤＮＡが発現して、
該タンパク質アナログを産生する条件下で、請求項１６
に記載の細胞を培養する工程；および該培養物から該タ
ンパク質アナログを回収する工程； を包含する、方法。 - 【請求項２０】 補体受容体１、補体受容体２、崩壊加
速因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、お
よびＨ因子、ならびにこれらの補体調節タンパク質であ
って分泌のためにカルボキシ末端が除去されている補体
調節タンパク質からなる群から選択されるアミノ酸配列
中の短いコンセンサス反復を有する、補体の活性化を調
節するタンパク質アナログ（ここで、該タンパク質アナ
ログは、補体受容体１、補体受容体２、崩壊加速因子、
膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、およびＨ因
子からなる群から選択される補体調節タンパク質の２つ
またはそれより多い補体調節タンパク質に由来する短い
コンセンサス反復を有する補体調節タンパク質、および
該選択される補体調節タンパク質の短いコンセンサス反
復が再配列されている補体調節タンパク質からなる群か
ら選択される）をＣ３ｂへの結合特性を改変するように
改変する方法であって、 ＣＲ１の１１４位から１２１位のアミノ酸に対応する配
列を、アミノ酸配列Ｓ−Ｔ−Ｋ−Ｐ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｑ、
またはアミノ酸配列Ｄ−Ｎ−Ｅ−Ｔ−Ｐ−Ｉ−Ｃ−Ｄに
置換することを包含する、方法。 - 【請求項２１】 補体受容体１、補体受容体２、崩壊加
速因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、お
よびＨ因子、ならびにこれらの補体調節タンパク質であ
って分泌のためにカルボキシ末端が除去されている補体
調節タンパク質からなる群から選択されるアミノ酸配列
中の短いコンセンサス反復を有する、補体の活性化を調
節するタンパク質アナログ（ここで、該タンパク質アナ
ログは、補体受容体１、補体受容体２、崩壊加速因子、
膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、およびＨ因
子からなる群から選択される補体調節タンパク質の２つ
またはそれより多い補体調節タンパク質に由来する短い
コンセンサス反復を有する補体調節タンパク質、および
該選択される補体調節タンパク質の短いコンセンサス反
復が再配列されている補体調節タンパク質からなる群か
ら選択される）をＣ４ｂへの結合特性を改変するように
改変する方法であって、ＣＲ１の３５位、６４位、６５
位、または９４位の少なくとも１つに対応するアミノ酸
を、それぞれ、Ｇ、Ｒ、Ｎ、およびＹ以外のアミノ酸に
置換することにより改変することを包含する、方法。 - 【請求項２２】 前記置換アミノ酸が、それぞれ、Ｅ、
Ｋ、Ｔ、およびＨである、請求項２１に記載の方法。 - 【請求項２３】 補体受容体１、補体受容体２、崩壊加
速因子、膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、お
よびＨ因子、ならびにこれらの補体調節タンパク質であ
って分泌のためにカルボキシ末端が除去されている補体
調節タンパク質からなる群から選択されるアミノ酸配列
中の短いコンセンサス反復を有する、補体の活性化を調
節するタンパク質アナログ（ここで、該タンパク質アナ
ログは、補体受容体１、補体受容体２、崩壊加速因子、
膜補因子タンパク質、Ｃ４結合タンパク質、およびＨ因
子からなる群から選択される補体調節タンパク質の２つ
またはそれより多い補体調節タンパク質に由来する短い
コンセンサス反復を有する補体調節タンパク質、および
該選択される補体調節タンパク質の短いコンセンサス反
復が再配列されている補体調節タンパク質からなる群か
ら選択される）をＣ４ｂへの結合特性を改変するように
改変する方法であって、 ＣＲ１の９２位のアミノ酸に対応するアミノ酸を、Ｔま
たはＫに置換することにより改変することを包含する、
方法。
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|---|---|---|---|
| US69551491A | 1991-05-03 | 1991-05-03 | |
| US695,514 | 1991-05-03 |
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|---|---|
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| US5976540A (en) * | 1993-05-17 | 1999-11-02 | T Cell Sciences, Inc. | Compositions comprising complement related proteins and carbohydrates, and methods for producing and using said compositions |
| US5856300A (en) * | 1994-05-12 | 1999-01-05 | T Cell Sciences, Inc. | Compositions comprising complement related proteins and carbohydrates, and methods for producing and using said compositions |
| PT730608E (pt) | 1993-05-17 | 2002-09-30 | Avant Immunotherapeutics Inc | Composicoes compreendendo hidratos de carbono e proeinas relacionadas pelo complemento e metodos para produzir e utilizar as referidas composicoes |
| EP1493446A1 (en) * | 1993-09-24 | 2005-01-05 | Washington University | Modified truncated complement system regulators |
| US5679546A (en) * | 1993-09-24 | 1997-10-21 | Cytomed, Inc. | Chimeric proteins which block complement activation |
| ATE265221T1 (de) * | 1993-09-24 | 2004-05-15 | Univ Washington | Modifizierte, verkürzte regulatoren des komplementsystems |
| US5866402A (en) * | 1995-05-05 | 1999-02-02 | Chiron Corporation | Chimeric MCP and DAF proteins with cell surface localizing domain |
| GB9604518D0 (en) * | 1996-03-02 | 1996-05-01 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
| GB9624731D0 (en) * | 1996-11-28 | 1997-01-15 | Univ Leicester | Complement inhibitor |
| GB9704519D0 (en) * | 1997-03-05 | 1997-04-23 | Smithkline Beecham Plc | Compounds |
| US6221621B1 (en) | 1997-03-06 | 2001-04-24 | Bard Diagnostic Sciences, Inc. | Methods of screening for colorectal cancers in which a complement Factor I or related protein is associated |
| WO1998039659A1 (en) * | 1997-03-06 | 1998-09-11 | Bion Diagnostic Sciences, Inc. | Screening and treatment using complement regulator or receptor proteins |
| AU4452100A (en) * | 1999-04-09 | 2000-11-14 | Washington University | Modified complement system regulators |
| US20090054330A1 (en) * | 1999-05-25 | 2009-02-26 | Kotwal Girish J | Novel Therapeutic Use of Viral Inflammation Modulatory Protein in Blocking Xenograft Rejection |
| EP1185283B1 (en) * | 1999-05-25 | 2005-09-07 | King Faisal Specialist Hospital And Research Centre | Novel therapeutic use of viral inflammation modulatory protein in blocking xenograft rejection |
| US6820011B2 (en) | 2001-04-11 | 2004-11-16 | The Regents Of The University Of Colorado | Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof |
| EP1387697A4 (en) * | 2001-05-17 | 2005-04-20 | Jolla Pharma | METHOD FOR TREATING ANTIBODY-MEDIATED DISEASES USING MEANS TO INHIBIT CD21 |
| ES2392511T3 (es) | 2002-11-15 | 2012-12-11 | Musc Foundation For Research Development | Moduladores de complemento dianas sobre el receptor 2 de complemento |
| DE10343620A1 (de) * | 2003-09-20 | 2005-04-28 | Leibrock Maschinenfabrik Im Un | Verfahren und Vorrichtung zum Erfassen der zum Rauen bestimmten Seitenbereiche von auf Leisten aufgebrachten Schuhschäften |
| US8124097B2 (en) * | 2004-01-21 | 2012-02-28 | Case Western Reserve University | Hybrid and chimeric polypeptides that regulate activation of complement |
| PT1713503E (pt) * | 2004-02-10 | 2013-11-14 | Nat Jewish Health | Inibição do factor b, a via alternativa do complemento e métodos relacionados |
| US7947267B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-05-24 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Viral complement control proteins for eye disorders |
| US8043609B2 (en) | 2004-10-08 | 2011-10-25 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Viral complement control proteins for eye disorders |
| ES2548700T3 (es) * | 2005-05-26 | 2015-10-20 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Inhibición de la vía alternativa del complemento para el tratamiento de lesión cerebral traumática, lesión de médula espinal y afecciones relacionadas |
| US20070004625A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-04 | Li Liang-Man | Use of complement inhibitory proteins to treat spinal cord injury |
| EP1738763A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-03 | AVANT Immunotherapeutics, Inc. | Use of complement inhibitory proteins to treat spinal cord injury |
| PL1951279T3 (pl) | 2005-10-08 | 2017-12-29 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Kompstatyna i jej analogi w zaburzeniach oczu |
| US8168584B2 (en) * | 2005-10-08 | 2012-05-01 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof |
| CN101563363B (zh) | 2006-06-21 | 2013-01-02 | 南卡罗来纳医疗大学研究发展基金会 | 用于治疗疾病的靶向补体因子h |
| NZ574046A (en) | 2006-07-13 | 2012-09-28 | Univ Iowa Res Found | Methods and reagents for treatment and diagnosis of vascular disorders and age-related macular degeneration |
| EP2236518B1 (en) | 2007-03-14 | 2014-08-06 | Alexion Cambridge Corporation | Humaneered anti-factor B antibody |
| WO2009015087A2 (en) * | 2007-07-20 | 2009-01-29 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of trauma |
| WO2009121065A2 (en) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Apellis Ag | Modulation and repletion/enhancement of the complement system for treatment of trauma |
| RS20120461A1 (en) | 2009-07-02 | 2013-06-28 | Musc Foundation For Research Development | METHODS FOR STIMULATION OF LIVER REGENERATION |
| AU2010314931A1 (en) | 2009-11-05 | 2012-06-21 | Taligen Therapeutics, Inc. | Treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, hemolytic anemias and disease states involving intravascular and extravascular hemolysis |
| JP5986990B2 (ja) | 2010-05-14 | 2016-09-06 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティ オブ コロラド，ア ボディ コーポレート | 改善された補体レセプター２（ｃｒ２）ターゲティング基 |
| US9421240B2 (en) | 2010-06-22 | 2016-08-23 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Compstatin analogs for treatment of neuropathic pain |
| WO2011163412A1 (en) | 2010-06-22 | 2011-12-29 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Antibodies to the c3d fragment of complement component 3 |
| NZ608814A (en) | 2010-09-03 | 2015-06-26 | Stem Centrx Inc | Novel modulators and methods of use |
| US20120148542A1 (en) | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Lifeline Scientific, Inc. | Machine perfusion with complement inhibitors |
| EP4105224A1 (en) | 2011-05-11 | 2022-12-21 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Long-acting compstatin analogs and uses thereof |
| AU2012272706B2 (en) | 2011-06-22 | 2017-07-06 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating chronic disorders with complement inhibitors |
| EP2557089A2 (en) * | 2011-07-15 | 2013-02-13 | Fundació Institut d'Investigació Biomèdica de Bellvitge (IDIBELL) | Compositions and methods for immunomodulation |
| EP2855529A4 (en) | 2012-05-24 | 2015-12-09 | Alexion Pharma Inc | HUMANIZED ANTI-FACTOR B ANTIBODIES |
| US10413620B2 (en) | 2012-08-17 | 2019-09-17 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Light-emitting versions of the monoclonal antibody to C3D (MAB 3D29) for imaging |
| AU2013302441B2 (en) | 2012-08-17 | 2018-05-10 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for detecting complement activation |
| EP3660033B9 (en) | 2012-11-15 | 2022-06-22 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Long-acting compstatin analogs and related compositions and methods |
| US10308687B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-06-04 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof |
| WO2016094834A2 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | A method for treating a complement mediated disorder caused by an infectious agent in a patient |
| EP3328885A1 (en) | 2015-09-11 | 2018-06-06 | Bruce Andrien | Recombinant glycosylated eculizumab and eculizumab variants |
| BR112018006810A2 (pt) | 2015-10-07 | 2018-10-23 | Apellis Pharmaceuticals Inc | regimes de dosagem |
| US11203634B2 (en) | 2015-10-07 | 2021-12-21 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating age-related macular degeneration in a patient comprising administering an anti-C5a antibody |
| JP7068203B2 (ja) * | 2016-06-28 | 2022-05-16 | ウニベルジテート ウルム | 補体阻害剤及びその使用 |
| WO2018075761A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | A method of quantitating unbound c5a in a sample |
| JP7096240B2 (ja) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 試料中の非結合ｃ５の定量化方法 |
| CN110831544B (zh) | 2017-04-07 | 2022-11-18 | 阿佩利斯制药有限公司 | 长效坎普他汀类似物、其组合物的给药方案及其医药用途 |
| WO2020232319A1 (en) | 2019-05-15 | 2020-11-19 | Insideoutbio, Inc. | Modular therapeutics for the treatment of inflammatory diseases and cancer |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5212071A (en) | 1988-04-01 | 1993-05-18 | The Johns Hopkins University | Nucleic acids encoding a human C3b/C4b receptor (CR1) |
| US5109113A (en) * | 1986-05-02 | 1992-04-28 | Genentech, Inc. | Membrane anchor fusion polypeptides |
| JPH0742235B2 (ja) * | 1985-11-08 | 1995-05-10 | 三共株式会社 | 自己免疫性疾病の予防・治療剤 |
| US4935233A (en) * | 1985-12-02 | 1990-06-19 | G. D. Searle And Company | Covalently linked polypeptide cell modulators |
| IL89790A (en) | 1988-04-01 | 2002-05-23 | Johns Hopking University | Sequences of nucleic acids encoding and cells producing CR1 protein and methods for its production and purification |
| US5256642A (en) * | 1988-04-01 | 1993-10-26 | The Johns Hopkins University | Compositions of soluble complement receptor 1 (CR1) and a thrombolytic agent, and the methods of use thereof |
| EP0483247A4 (en) * | 1989-07-21 | 1992-12-09 | Washington University | Recombinantly produced human membrane cofactor protein (mcp) |
| AU655182B2 (en) * | 1990-05-11 | 1994-12-08 | Austin Research Institute, The | CD46 variants |
| CA2082277A1 (en) * | 1990-05-11 | 1991-11-12 | Damien F. J. Purcell | Cd46 variants |
| EP0512733A2 (en) * | 1991-05-03 | 1992-11-11 | Washington University | Modified complement system regulator |
| JPH05271288A (ja) | 1992-02-21 | 1993-10-19 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 新規な薬理学的特性を有する蛋白質 |
-
1992
- 1992-04-28 EP EP92303826A patent/EP0512733A2/en not_active Ceased
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1995
- 1995-06-07 US US08/477,860 patent/US6010873A/en not_active Expired - Fee Related
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1996
- 1996-07-30 US US08/688,675 patent/US5719127A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-12-02 US US09/453,835 patent/US6521450B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-11-23 US US10/997,454 patent/US20080119400A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊ．ＥＸＰ．ＭＥＤ．，ＶＯＬ．１６８，Ｐ．１６９９−１７１７（１９８８） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6521450B1 (en) | 2003-02-18 |
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| US5545619A (en) | 1996-08-13 |
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