JP2735986B2 - 癌抑制遺伝子ｗｔの産物に対する抗体 - Google Patents
癌抑制遺伝子ｗｔの産物に対する抗体Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗体に係り、殊に癌抑制
遺伝子 WT の産物に対する抗体に係るものであり、癌及
び腫瘍の診断に利用することができる。
遺伝子 WT の産物に対する抗体に係るものであり、癌及
び腫瘍の診断に利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】正常細胞と癌細胞とを融合させることに
より得られるハイブリドーマは正常細胞と変わらない形
値を示すこと並びに網膜芽細胞腫、Wilms 腫瘍、神経芽
細胞腫等の遺伝性腫瘍においては染色体の特定部位に異
常が認められるので、遺伝性腫瘍の発生には癌抑制遺伝
子の異常が関与しているものと考えられてきた。事実、
分子生物学の進歩により、最近になって遺伝性腫瘍であ
る網膜芽細胞腫、Wilms腫瘍等に関する癌抑制遺伝子が
次々とクローニングされ、その構造が明らかにされ、当
該遺伝子における異常が確認されるに至っている。更
に、現在では上記の遺伝性腫瘍のみならず肺癌、乳癌、
胃癌、大腸癌等の一般的な腫瘍の発生に関しても癌抑制
遺伝子の異常が重要な役割を果たしていることが解明さ
れつつある。
より得られるハイブリドーマは正常細胞と変わらない形
値を示すこと並びに網膜芽細胞腫、Wilms 腫瘍、神経芽
細胞腫等の遺伝性腫瘍においては染色体の特定部位に異
常が認められるので、遺伝性腫瘍の発生には癌抑制遺伝
子の異常が関与しているものと考えられてきた。事実、
分子生物学の進歩により、最近になって遺伝性腫瘍であ
る網膜芽細胞腫、Wilms腫瘍等に関する癌抑制遺伝子が
次々とクローニングされ、その構造が明らかにされ、当
該遺伝子における異常が確認されるに至っている。更
に、現在では上記の遺伝性腫瘍のみならず肺癌、乳癌、
胃癌、大腸癌等の一般的な腫瘍の発生に関しても癌抑制
遺伝子の異常が重要な役割を果たしていることが解明さ
れつつある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題乃至発明の目的】上記の
従来技術に鑑みて、癌や腫瘍の発生を解明するためには
癌抑制遺伝子、殊にその産物に関する研究が肝要であ
る。従って、本発明の目的は癌抑制遺伝子の産物に対す
る抗体を提供し、これによって各種の癌や腫瘍の発生に
関する研究を発展させ、延いては癌や腫瘍の診断に利用
する途を開くことにある。
従来技術に鑑みて、癌や腫瘍の発生を解明するためには
癌抑制遺伝子、殊にその産物に関する研究が肝要であ
る。従って、本発明の目的は癌抑制遺伝子の産物に対す
る抗体を提供し、これによって各種の癌や腫瘍の発生に
関する研究を発展させ、延いては癌や腫瘍の診断に利用
する途を開くことにある。
【０００４】
【課題を解決し目的を達成する手段及び作用】本発明に
よれば、上記の課題はアミノ酸配列が Cys-His-Gln-Arg-Asn-Met-Thr-Lys-Leu-Gln-Leu-Ala-Le
u である抗原性ペプチドとキャリヤー蛋白との結合物を抗
原として得られる抗体であって、免疫グロブリンクラス
が IgG、分子量が約 150000、分子吸光係数 [E1%(1cm),
(280nm)] が 1.40 であることを特徴とする、癌抑制遺
伝子WT の産物に対する抗体により解決されると共に、
上記の目的が達成される。
よれば、上記の課題はアミノ酸配列が Cys-His-Gln-Arg-Asn-Met-Thr-Lys-Leu-Gln-Leu-Ala-Le
u である抗原性ペプチドとキャリヤー蛋白との結合物を抗
原として得られる抗体であって、免疫グロブリンクラス
が IgG、分子量が約 150000、分子吸光係数 [E1%(1cm),
(280nm)] が 1.40 であることを特徴とする、癌抑制遺
伝子WT の産物に対する抗体により解決されると共に、
上記の目的が達成される。
【０００５】本発明において、抗原性ペプチドとして特
定の上記アミノ酸配列を有するペプチドが採択された理
由は、Wilms 腫瘍に関する癌抑制遺伝子 WT の推定構造
の一部であって、抗原性が高い部分であると推定された
からである。この抗原性ペプチドと結合させるべきキャ
リヤー蛋白としては各種のものを用いることができ、例
えばキーホールリンペットヘモシアニン (KLH)、ウシ血
清アルブミン等を例示することができる。抗原性ペプチ
ドとキャリヤー蛋白との結合は自体公知の手法にて、例
えばサクシンイミドを用いる方法 [T. Kitagawa 等「J.
Biochem.」第 79 巻、第 233 頁(1976 年)] にて行う
ことができる。
定の上記アミノ酸配列を有するペプチドが採択された理
由は、Wilms 腫瘍に関する癌抑制遺伝子 WT の推定構造
の一部であって、抗原性が高い部分であると推定された
からである。この抗原性ペプチドと結合させるべきキャ
リヤー蛋白としては各種のものを用いることができ、例
えばキーホールリンペットヘモシアニン (KLH)、ウシ血
清アルブミン等を例示することができる。抗原性ペプチ
ドとキャリヤー蛋白との結合は自体公知の手法にて、例
えばサクシンイミドを用いる方法 [T. Kitagawa 等「J.
Biochem.」第 79 巻、第 233 頁(1976 年)] にて行う
ことができる。
【０００６】得られた結合物は、抗原として、免疫目的
でマウス、ウサギ、ラット、ヒツジ等の動物に慣用の方
法で投与される。免疫した動物から本発明による抗体を
得る方法としても慣用の手法を採用することができる。
例えば、免疫した動物から採血し、常法に従い抗血清を
調製することにより行うことができ [この場合における
抗体の存否の判定は癌抑制遺伝子 WT を発現している細
胞、例えばヒト赤芽球症細胞株 K-562 を可溶化させ、
上記の抗血清を用いウエスタンブロット法により解析
し、癌抑制遺伝子 WT の産物 (分子量 55000) が検出さ
れるか否かにより行うことができる]、又免疫した動物
のリンパ球を採取しミエローマ細胞と融合させてハイブ
リドーマを調製し、スクリーニングにより抗体を特異的
に産生するハイブリドーマを特定し、該抗体産生ハイブ
リドーマを培養することによりモノクローナル抗体とし
て得ることができる。尚、上記の抗体産生ハイブリドー
マを動物に移植して抗体を産生させ、次いで採血等によ
り採取し単離することによっても所望の抗体を得ること
ができる。
でマウス、ウサギ、ラット、ヒツジ等の動物に慣用の方
法で投与される。免疫した動物から本発明による抗体を
得る方法としても慣用の手法を採用することができる。
例えば、免疫した動物から採血し、常法に従い抗血清を
調製することにより行うことができ [この場合における
抗体の存否の判定は癌抑制遺伝子 WT を発現している細
胞、例えばヒト赤芽球症細胞株 K-562 を可溶化させ、
上記の抗血清を用いウエスタンブロット法により解析
し、癌抑制遺伝子 WT の産物 (分子量 55000) が検出さ
れるか否かにより行うことができる]、又免疫した動物
のリンパ球を採取しミエローマ細胞と融合させてハイブ
リドーマを調製し、スクリーニングにより抗体を特異的
に産生するハイブリドーマを特定し、該抗体産生ハイブ
リドーマを培養することによりモノクローナル抗体とし
て得ることができる。尚、上記の抗体産生ハイブリドー
マを動物に移植して抗体を産生させ、次いで採血等によ
り採取し単離することによっても所望の抗体を得ること
ができる。
【０００７】
【実施例等】次に、抗体の製造例、確認試験例等により
本発明を更に詳細に且つ具体的に説明する。
本発明を更に詳細に且つ具体的に説明する。
【０００８】製造例 (A) 抗原性ペプチドの調製 Wilms 腫瘍に関する癌抑制遺伝子 WT の産物について既
に報告されている推定構造を検討し、抗原性が高い部分
と推定されるペプチドであって、下記のアミノ酸配列を
有するペプチドを、自動ペプチド合成装置 (ベックマン
社製の 990B型) により、固相法で合成した。 Cys-His-Gln-Arg-Asn-Met-Thr-Lys-Leu-Gln-Leu-Ala-Le
u 上記の合成ペプチドを 0℃ において 30 分間にわたり
75% 弗化水素/25% アニソールで処理することにより固
相から剥離させ、1mM ジチオスライトール含有0.05M 酢
酸アンモニウム緩衝液 (pH 7.0) により平衡化させ、SP
セファデックスカラム (2.5 x 50cm) に吸着させた。
上記の平衡化用緩衝液 500ml と 1mM ジチオスライトー
ル含有 0.5M 酢酸 (pH 7.0) 500ml とのグラジェントに
より上記カラム内の吸着物を分画溶出させた。各画分を
フルオロレスカミンにてチェックすることによりペプチ
ド含有画分を集めて濃縮し、この濃縮物を、30% 酢酸溶
液で平衡化したセファデックス G-10 カラム (1.0 x 50
cm) に吸着させ、上記と同様にしてペプチド含有画分を
集めて濃縮し、乾固させることにより所望の抗原性ペプ
チドを得た。このペプチドを 1N 塩酸溶液に 120℃ で
一晩浸漬して加水分解させ、アミノ酸分析装置によりア
ミノ酸組成を調べた結果は下記の通りであった。 Cys 0.9; His 1.0; Gln 2.0; Arg 1.1; Asn 0.9; Met
1.0; Thr 1.0;Lys 0.9; Leu 1.9, Ala 1.0 (%)
に報告されている推定構造を検討し、抗原性が高い部分
と推定されるペプチドであって、下記のアミノ酸配列を
有するペプチドを、自動ペプチド合成装置 (ベックマン
社製の 990B型) により、固相法で合成した。 Cys-His-Gln-Arg-Asn-Met-Thr-Lys-Leu-Gln-Leu-Ala-Le
u 上記の合成ペプチドを 0℃ において 30 分間にわたり
75% 弗化水素/25% アニソールで処理することにより固
相から剥離させ、1mM ジチオスライトール含有0.05M 酢
酸アンモニウム緩衝液 (pH 7.0) により平衡化させ、SP
セファデックスカラム (2.5 x 50cm) に吸着させた。
上記の平衡化用緩衝液 500ml と 1mM ジチオスライトー
ル含有 0.5M 酢酸 (pH 7.0) 500ml とのグラジェントに
より上記カラム内の吸着物を分画溶出させた。各画分を
フルオロレスカミンにてチェックすることによりペプチ
ド含有画分を集めて濃縮し、この濃縮物を、30% 酢酸溶
液で平衡化したセファデックス G-10 カラム (1.0 x 50
cm) に吸着させ、上記と同様にしてペプチド含有画分を
集めて濃縮し、乾固させることにより所望の抗原性ペプ
チドを得た。このペプチドを 1N 塩酸溶液に 120℃ で
一晩浸漬して加水分解させ、アミノ酸分析装置によりア
ミノ酸組成を調べた結果は下記の通りであった。 Cys 0.9; His 1.0; Gln 2.0; Arg 1.1; Asn 0.9; Met
1.0; Thr 1.0;Lys 0.9; Leu 1.9, Ala 1.0 (%)
【０００９】(b) 抗原の調製 (キャリヤー蛋白との結
合) 10mg/ml の割合で 10mM 燐酸緩衝液に溶解させたキーホ
ールリンペットヘモシアニンと、15mg/ml の割合で 10m
M 燐酸緩衝液に溶解させた n-マレイミド-n-ハイドロキ
シサクシンイミドエステル 63μl とを混合し、室温下
に 30 分間保持して反応させた。0.1M 燐酸緩衝液 (pH
6.0) により平衡化させたセファデックス G-25 カラム
を用い 4℃ の温度条件下で、上記の反応液をクロマト
グラフィーすることによりキーホールリンペットヘモシ
アニンを活性化させた。この活性化キーホールリンペッ
トヘモシアニン 2.3ml と、10mg/ml の割合で10mM 燐酸
緩衝液 (pH 7.3) に既述の (a) 項で得た抗原性ペプチ
ドを溶解させた溶液に 5mM EDTA を添加した溶液 0.1ml
とを混合し、pH を 6.5 に調整し、次いで室温下で 4
時間混合することにより所望の抗原 (抗原性ペプチド
と、キャリヤー蛋白であるキーホールリンペットヘモシ
アニンとの結合物) を得た。この結合物が生成したこと
は、SDS-ゲル電気泳動解析により確認された。
合) 10mg/ml の割合で 10mM 燐酸緩衝液に溶解させたキーホ
ールリンペットヘモシアニンと、15mg/ml の割合で 10m
M 燐酸緩衝液に溶解させた n-マレイミド-n-ハイドロキ
シサクシンイミドエステル 63μl とを混合し、室温下
に 30 分間保持して反応させた。0.1M 燐酸緩衝液 (pH
6.0) により平衡化させたセファデックス G-25 カラム
を用い 4℃ の温度条件下で、上記の反応液をクロマト
グラフィーすることによりキーホールリンペットヘモシ
アニンを活性化させた。この活性化キーホールリンペッ
トヘモシアニン 2.3ml と、10mg/ml の割合で10mM 燐酸
緩衝液 (pH 7.3) に既述の (a) 項で得た抗原性ペプチ
ドを溶解させた溶液に 5mM EDTA を添加した溶液 0.1ml
とを混合し、pH を 6.5 に調整し、次いで室温下で 4
時間混合することにより所望の抗原 (抗原性ペプチド
と、キャリヤー蛋白であるキーホールリンペットヘモシ
アニンとの結合物) を得た。この結合物が生成したこと
は、SDS-ゲル電気泳動解析により確認された。
【００１０】(c) 抗体の調製 上記の (b) 項で得た抗原 200μg をフロインドの完全
アジュバンドと共にウサギの手掌部に注射投与した。そ
の後、更に、3 週間間隔で抗原を 200μg 宛 4回背皮下
に注射投与することにより免疫を施した。最終投与から
10 日目に採血し、血清を分取した。この血清を遠心
(10000 x g) して得た上清に飽和硫安溶液 (pH 7.4) を
添加して硫安濃度を 14% になした。この溶液を氷冷下
で一晩攪拌した後に 10000 x g にて 10 分間遠心して
沈澱物を採取した。得られた沈澱物を蒸留水に溶解さ
せ、500 倍量の 0.15M NaCl に対して 48 時間透析処理
して抗血清溶液を得た。
アジュバンドと共にウサギの手掌部に注射投与した。そ
の後、更に、3 週間間隔で抗原を 200μg 宛 4回背皮下
に注射投与することにより免疫を施した。最終投与から
10 日目に採血し、血清を分取した。この血清を遠心
(10000 x g) して得た上清に飽和硫安溶液 (pH 7.4) を
添加して硫安濃度を 14% になした。この溶液を氷冷下
で一晩攪拌した後に 10000 x g にて 10 分間遠心して
沈澱物を採取した。得られた沈澱物を蒸留水に溶解さ
せ、500 倍量の 0.15M NaCl に対して 48 時間透析処理
して抗血清溶液を得た。
【００１１】10mM 燐酸緩衝液 (pH 7.2) により平衡化
させた DEAE-セルロース (ワットマン DE32) カラム
(1.5 x 15cm) に上記の抗血清溶液 2ml を流し、素通り
画分として免疫グロブリン IgG 画分を得た。この IgG
の収量は 24mg である。集められたIgG を 0.1M 炭酸ナ
トリウム緩衝液 (pH 8.0) により透析処理した。一方、
活性化 CH-セファロース 4B (ファルマシア社製) 1g を
0.1M 炭酸ナトリウム緩衝液 (pH 8.0) 5μl に懸濁さ
せ、これに既述の (a) 項で得た抗原性ペプチド 10mg
を添加して室温下で 2 時間攪拌することによりペプチ
ド結合 CH-セファロース 4B を調製してカラム (0.5 x
2.0cm) に入れ、このカラムに上記の 透析処理済み IgG
画分をチャージし、0.15M NaCl/0.002M 炭酸ナトリウ
ム緩衝液 (pH 8.0) により充分に洗浄し、次いでカラム
に吸着しているペプチド抗体を 0.17M グリシン-塩酸緩
衝液 (pH 2.3) により溶出させた。集めた溶出液を0.15
M NaCl に対して透析処理し、次いで限外濾過すること
により所望の IgG 抗体を含有する溶液を 0.5ml 得た。
させた DEAE-セルロース (ワットマン DE32) カラム
(1.5 x 15cm) に上記の抗血清溶液 2ml を流し、素通り
画分として免疫グロブリン IgG 画分を得た。この IgG
の収量は 24mg である。集められたIgG を 0.1M 炭酸ナ
トリウム緩衝液 (pH 8.0) により透析処理した。一方、
活性化 CH-セファロース 4B (ファルマシア社製) 1g を
0.1M 炭酸ナトリウム緩衝液 (pH 8.0) 5μl に懸濁さ
せ、これに既述の (a) 項で得た抗原性ペプチド 10mg
を添加して室温下で 2 時間攪拌することによりペプチ
ド結合 CH-セファロース 4B を調製してカラム (0.5 x
2.0cm) に入れ、このカラムに上記の 透析処理済み IgG
画分をチャージし、0.15M NaCl/0.002M 炭酸ナトリウ
ム緩衝液 (pH 8.0) により充分に洗浄し、次いでカラム
に吸着しているペプチド抗体を 0.17M グリシン-塩酸緩
衝液 (pH 2.3) により溶出させた。集めた溶出液を0.15
M NaCl に対して透析処理し、次いで限外濾過すること
により所望の IgG 抗体を含有する溶液を 0.5ml 得た。
【００１２】確認試験例 (1) 免疫グロブリンクラスの決定 カッペル社製の抗ウサギ IgG 抗体、抗ウサギ IgM 抗体
及び抗ウサギ IgA +IgM + IgG 抗体を使用し、オクタロ
ニー法により、上記の製造例により得られた抗体 (癌抑
制遺伝子 WT の産物に対する精製抗体) の免疫沈降試験
を実施して、その免疫グロブリンクラスを決定した。即
ち、1% 寒天ゲルに形成した穴の中心部には上記の 3 種
の抗ウサギ抗体を入れ、周囲に形成された穴には、これ
らの抗ウサギ抗体に対して 1/20 量から 2倍づつ稀釈し
た製造例による精製抗体を入れ、0℃ において一晩放置
した後に、形成された沈降縁を観察した処、当該精製抗
体は抗ウサギ IgG 抗体及び抗ウサギ IgA + IgM + IgG
抗体によって免疫沈降を示していたので、その免疫グロ
ブリンクラスは IgG であることが確認された。
及び抗ウサギ IgA +IgM + IgG 抗体を使用し、オクタロ
ニー法により、上記の製造例により得られた抗体 (癌抑
制遺伝子 WT の産物に対する精製抗体) の免疫沈降試験
を実施して、その免疫グロブリンクラスを決定した。即
ち、1% 寒天ゲルに形成した穴の中心部には上記の 3 種
の抗ウサギ抗体を入れ、周囲に形成された穴には、これ
らの抗ウサギ抗体に対して 1/20 量から 2倍づつ稀釈し
た製造例による精製抗体を入れ、0℃ において一晩放置
した後に、形成された沈降縁を観察した処、当該精製抗
体は抗ウサギ IgG 抗体及び抗ウサギ IgA + IgM + IgG
抗体によって免疫沈降を示していたので、その免疫グロ
ブリンクラスは IgG であることが確認された。
【００１３】(2) 分子量の決定 製造例で得た精製抗体の分子量をセファデックス G-100
を用い、ゲル濾過法により決定した。即ち、0.02M 炭
酸ナトリウム緩衝液にて平衡化させたセファデックス G
-100カラム (1.0 x 100cm) に製造例で得た精製抗体を
1mg チャージし、上記の緩衝液にて展開させ、280nm で
の吸光度を測定して溶出する蛋白を検出し、分子量マー
カ [バイオラッド社製の分子量測定キット(No. 151 - 1
901) であってチログロブリン (分子量 670000)、γ-グ
ロブリン (分子量 158000)、卵白アルブミン(分子量 44
000)、ミオグロビン (分子量 17000) 及びビタミン B12
(分子量1350) が予めセットされているもの] における
溶出パターンと比較した処、精製抗体の分子量は約 150
000 であることが判明した。
を用い、ゲル濾過法により決定した。即ち、0.02M 炭
酸ナトリウム緩衝液にて平衡化させたセファデックス G
-100カラム (1.0 x 100cm) に製造例で得た精製抗体を
1mg チャージし、上記の緩衝液にて展開させ、280nm で
の吸光度を測定して溶出する蛋白を検出し、分子量マー
カ [バイオラッド社製の分子量測定キット(No. 151 - 1
901) であってチログロブリン (分子量 670000)、γ-グ
ロブリン (分子量 158000)、卵白アルブミン(分子量 44
000)、ミオグロビン (分子量 17000) 及びビタミン B12
(分子量1350) が予めセットされているもの] における
溶出パターンと比較した処、精製抗体の分子量は約 150
000 であることが判明した。
【００１４】(3) 分子吸光係数 製造例で得た精製抗体 1mg を 1ml の炭酸ナトリウム緩
衝液 (pH 9.0) に溶解させ、280nm での吸光度を測定し
た処、1.40 であった。従って分子吸光係数はE1% (1cm)
= 1.40 となる。
衝液 (pH 9.0) に溶解させ、280nm での吸光度を測定し
た処、1.40 であった。従って分子吸光係数はE1% (1cm)
= 1.40 となる。
【００１５】(4) 免疫特異性 癌抑制遺伝子 WT を発現しているヒト赤芽球症細胞株 K
-562 を RIPA 緩衝液(1% NP-40、0.1% デオキシコール
酸ナトリウム塩、0.5% NaCl 及び 1mM フェニ ルメチル
スルフォニルフルオライド及び 50mM トリス塩酸緩衝液
を含有、pH7.4) により可溶化させた後に 10000 x g に
て 30 分間遠心して上清を採取し、この上清 を (Lemml
i) レムリの方法に従い 10% SDS-ゲル電気泳動法により
分離した。得られた各分離蛋白を常法によりニトロセル
ロースフィルタにウエスタントランスファーした後に、
製造例により得た精製抗体とアルカリフォスファターゼ
結合抗ウサギ IgG 抗体 (カッペル社製) とを用いて癌
抑制遺伝子 WT 産物の検出を行った。その結果、癌抑制
遺伝子 WT を発現しているヒト赤芽球症細胞株 K-562
に関しては分子量 55000 の蛋白の存在が確認された。
尚、製造例の (a) 項に記載の抗原性ペプチドを添加し
て抗体を吸収させた後に、上記と同様の試験を行った
処、分子量 55000 の蛋白を検出することはできなかっ
た。これらの事実は、製造例により得られた抗体が癌抑
制遺伝子 WT の産物を特異的に認識するものであること
を示している。
-562 を RIPA 緩衝液(1% NP-40、0.1% デオキシコール
酸ナトリウム塩、0.5% NaCl 及び 1mM フェニ ルメチル
スルフォニルフルオライド及び 50mM トリス塩酸緩衝液
を含有、pH7.4) により可溶化させた後に 10000 x g に
て 30 分間遠心して上清を採取し、この上清 を (Lemml
i) レムリの方法に従い 10% SDS-ゲル電気泳動法により
分離した。得られた各分離蛋白を常法によりニトロセル
ロースフィルタにウエスタントランスファーした後に、
製造例により得た精製抗体とアルカリフォスファターゼ
結合抗ウサギ IgG 抗体 (カッペル社製) とを用いて癌
抑制遺伝子 WT 産物の検出を行った。その結果、癌抑制
遺伝子 WT を発現しているヒト赤芽球症細胞株 K-562
に関しては分子量 55000 の蛋白の存在が確認された。
尚、製造例の (a) 項に記載の抗原性ペプチドを添加し
て抗体を吸収させた後に、上記と同様の試験を行った
処、分子量 55000 の蛋白を検出することはできなかっ
た。これらの事実は、製造例により得られた抗体が癌抑
制遺伝子 WT の産物を特異的に認識するものであること
を示している。
【００１６】
【発明の効果】本発明による抗体は癌抑制遺伝子の産物
を特異的に認識する。癌抑制遺伝子は遺伝性の特殊な癌
や腫瘍のみならず、一般的な各種の癌や腫瘍の発生に関
与するものであることが解明されつつあるので、本発明
による抗体は癌や腫瘍の発生解明や診断に利用すること
が可能である。更に、本発明による抗体は鎖長の短い、
従って合成が容易なペプチドを抗原材料とするのみで、
他は生物工学分野において自体周知の手法を用いて調製
することができ、従って製造が容易である。
を特異的に認識する。癌抑制遺伝子は遺伝性の特殊な癌
や腫瘍のみならず、一般的な各種の癌や腫瘍の発生に関
与するものであることが解明されつつあるので、本発明
による抗体は癌や腫瘍の発生解明や診断に利用すること
が可能である。更に、本発明による抗体は鎖長の短い、
従って合成が容易なペプチドを抗原材料とするのみで、
他は生物工学分野において自体周知の手法を用いて調製
することができ、従って製造が容易である。
配列番号：１ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ペプチド 配列 Cys His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu Gln Leu Ala Leu 1 5 10
Claims (1)
- 【請求項１】 アミノ酸配列が Cys-His-Gln-Arg-Asn-Met-Thr-Lys-Leu-Gln-Leu-Ala-Le
u である抗原性ペプチドとキャリヤー蛋白との結合物を抗
原として得られる抗体であって、免疫グロブリンクラス
が IgG、分子量が約 150000、分子吸光係数 [E1%(1cm),
(280nm)] が 1.40 であることを特徴とする、癌抑制遺
伝子 WT の産物に対する抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27849892A JP2735986B2 (ja) | 1992-10-16 | 1992-10-16 | 癌抑制遺伝子ｗｔの産物に対する抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27849892A JP2735986B2 (ja) | 1992-10-16 | 1992-10-16 | 癌抑制遺伝子ｗｔの産物に対する抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06128299A JPH06128299A (ja) | 1994-05-10 |
| JP2735986B2 true JP2735986B2 (ja) | 1998-04-02 |
Family
ID=17598156
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27849892A Expired - Lifetime JP2735986B2 (ja) | 1992-10-16 | 1992-10-16 | 癌抑制遺伝子ｗｔの産物に対する抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2735986B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US7553494B2 (en) | 2001-08-24 | 2009-06-30 | Corixa Corporation | WT1 fusion proteins |
| CN110872345B (zh) * | 2019-08-20 | 2020-09-01 | 中科世生(北京)医药科技有限公司 | 一种高纯免疫球蛋白g的制备方法 |
-
1992
- 1992-10-16 JP JP27849892A patent/JP2735986B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＯＮＣＯＧＥＮＥ，ＶＯＬ．６，１９９１，Ｐ．２３３９−２３４８ |
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| JPH06128299A (ja) | 1994-05-10 |
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