JP2727289B2 - ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法 - Google Patents

３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法

Info

Publication number
JP2727289B2
JP2727289B2 JP5264092A JP26409293A JP2727289B2 JP 2727289 B2 JP2727289 B2 JP 2727289B2 JP 5264092 A JP5264092 A JP 5264092A JP 26409293 A JP26409293 A JP 26409293A JP 2727289 B2 JP2727289 B2 JP 2727289B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
derivative
deoxyglucosone
label
general formula
glucose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
JP5264092A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0798317A (ja
Inventor
利充 丹羽
浩一 新村
稔 大原
茂巳 富山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kureha Corp
Original Assignee
Kureha Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kureha Corp filed Critical Kureha Corp
Priority to JP5264092A priority Critical patent/JP2727289B2/ja
Priority to EP94307109A priority patent/EP0645625A1/en
Priority to CA002133130A priority patent/CA2133130A1/en
Priority to US08/314,687 priority patent/US5633356A/en
Priority to US08/406,704 priority patent/US5618734A/en
Publication of JPH0798317A publication Critical patent/JPH0798317A/ja
Priority to US08/471,751 priority patent/US5623063A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP2727289B2 publication Critical patent/JP2727289B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/64—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving ketones
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/66—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood sugars, e.g. galactose
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N2001/2893—Preparing calibration standards
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7206—Mass spectrometers interfaced to gas chromatograph
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/104998—Glucose, ketone, nitrate standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/13—Tracers or tags
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
    • Y10T436/144444—Glucose
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/20—Oxygen containing
    • Y10T436/200833—Carbonyl, ether, aldehyde or ketone containing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】この出願発明は、１３Ｃラベル化
合物又は１４Ｃラベル化合物を内部標準物質として利用
することを特徴とする測定方法、一般式［Ｉ］で表され
る３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体およびそ
の測定法に関するものであり、さらに詳しくは、１３Ｃ
又は１４Ｃで標識した３−デオキシグルコソンあるいは
その誘導体とそのガスクロマトグラフィー／マススペク
トル法による測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、タンパク質とグルコースなどの還
元糖とのメイラード反応が、タンパク質の変性の原因、
あるいは糖尿病の種々の合併症の原因として注目されて
いる。メイラード反応とは、アミノ酸やタンパク質と還
元糖を加熱すると褐色に変化する反応のことで第１段階
はタンパク質やアミノ酸のアミノ基と糖のアルデヒド基
との間の反応によるシッフ塩基化合物の形成である。３
−デオキシグルコソン誘導体はそのメイラード反応の結
果生じる中間代謝物で蛋白質の架橋作用が強い。メイラ
ード反応に伴うタンパク質の架橋、重合変性は、特に寿
命の長いタンパク質（クリスタリン、コラーゲン）でも
影響が大きく蛋白質の老化変性と密接に関連していると
考えられている。その為この３−デオキシグルコソン誘
導体の測定が試みられているが、定量する際の適当な内
部標準物質がなく正確な定量が行われていないのが現状
である。すなわち従来は絶対法として、３−デオキシグ
ルコソン誘導体をそのまま測定したり、ＮａＢＤ４を用
いた還元体が利用（例えばＭ．Ｓ．Ｆｅａｔｈｅｒ ｅ
ｔａｌ Ａｒｃｈｉｖｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐ
ｈｙ、２９４ １３０（１９９２））されていた。３−
デオキシグルコソン誘導体はメイラード反応の中間代謝
物で、老化や糖尿病合併症などの各種病態との関係が注
目されているにもかかわらず、その不安定性及び反応性
の為に、血液、尿、毛、皮膚、涙等の体液及び各種臓器
等の生体組織の中からの信頼度の高い分析が困難であっ
た。近年、質量分析計を検出器として用いたガスクロマ
トグラフィーであるガスクロマトグラフィー質量分析法
の高度化と簡易操作化が進みこの方法を用いて３−デオ
キシグルコソン誘導体の定量法が提案されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記文献は、３−デオ
キシグルコソン誘導体をＮａＢＤ４又はＮａＢＴ４を用
いて還元して、３−デオキシヘキシトールに変換した後
に、アシル化誘導体として、ガスクロマトグラフィー質
量分析に付した分析法である。そこでは３−［１、２−
２Ｈ〕−デオキシヘキシトール又は３−［１、２−
３Ｈ］−デオキシヘキシトールが内部標準として用いら
れており、１位、２位を重水素で置換した同位体標識化
合物である。しかし、この同位体標識物は３−デオキシ
グルコソンを還元したものであり、質量数も天然形と比
べて２質量しか大きくなく、しかも、水溶液中での安定
性も悪い。同位体標識化合物は、サンプル調整の段階か
ら添加され、回収率や誘導化の反応率の指標になり、高
精度の定量を可能にするためには、内部標準となる同位
体標識物は、同じ化学的性質を持ちながら、なるべく質
量数が異なっており、分子内において安定な位置に標識
されていることが望ましく、そのような物質が求められ
ていた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】この出願発明者らは、微
量な３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体を精度
よく定量する為の内部標準物質について検討をした。そ
の結果、あらかじめ１３Ｃ又は１４Ｃで標識したグルコ
ースを出発原料として合成した１３Ｃ６−又は１４Ｃ６
−３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体及びその
メトキシオキシム体を内部標準物質として用いてガスク
ロマトグラフィー質量分析（以下ＧＣ／ＭＳ分析と略
称）を行なう事により精度よく、３−デオキシグルコソ
ンあるいはその誘導体を定量できることを見出し、この
出願発明を完成したものである。この出願発明は、１３
Ｃ又は１４Ｃラベル化合物を内部標準物質として利用す
ることを特徴とする測定方法、一般式［Ｉ］で表される
３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体およびその
測定法に関するものであり、さらに詳しくは、１３Ｃ又
は１４Ｃで標識した３−デオキシグルコソンあるいはそ
の誘導体とそのガスクロマトグラフィー／マススペクト
ル法による測定法に関する。３−デオキシグルコソンあ
るいはその誘導体はいずれの３−デオキシグルコソンあ
るいはその誘導体であってもよいが、式（ＩＩＩ）およ
び（ＶＩ）が好ましい。
【０００５】
【化３】
【０００６】
【化４】
【０００７】
【化５】
【０００８】
【化６】
【０００９】
【化７】
【００１０】この出願発明は１分子あたり１〜１２個の
１３Ｃ又は１４Ｃで置換された３−デオキシグルコソン
あるいはその誘導体であり、天然型と比べて１〜１２質
量分増加した分子量を有する化合物である。１３Ｃ６−
又は１４Ｃ６−３−デオキシグルコソンあるいはその誘
導体は１３Ｃ又は１４−Ｃグルコースを、Ｐ−トルイジ
ンと酢酸存在下エチルアルコール中ベンゾイルヒドラゾ
ンと反応させて得られるビス（ベンゾイルヒドラゾン）
体をベンズアルデヒドとのトランスヒドラゾン化反応に
付することにより容易に得ることができる。この物質
（ＩＩ）はそのままでも内部標準物質として利用できる
が、より安定性の高い物質として本物質をメトキシアミ
ン塩酸塩で処理することにより得られる物質（ＩＩＩ）
がより好ましい。一般的な分析法としては物質（ＩＩ）
あるいは（ＩＩＩ）をこれから定量しようとする試料に
一定量添加する。その際、試料に含有されている３−デ
オキシグルコソンあるいはその誘導体の０．０１乃至２
０倍量用いる。この添加は試料クリーンアップのどの段
階でも可能であるが、好ましくは、血清あるいは尿サン
プル１ｍｌを準備した時の最初に添加するのが好まし
い。
【００１１】
【実施例】この出願発明を実施例により具体的に説明す
る。 実施例１１３ Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソース−２
−ウロース ビス（ベンゾイルヒドラゾン）の合成
【化８】 昭光通商社製の１３Ｃ−グルコース（２．０ｇ，１０．
７ｍｍｏｌ，１．０ｅｑ．）とｐ−トルイジン（１．１
ｇ，１０．３ｍｍｏｌ，０．９２ｅｑ）を９５％のエチ
ルアルコール（４５ｍｌ）と酢酸（２．２ｍｌ）に懸濁
させ、アルゴン気流下、１２０℃で３０分間加熱撹拌し
た。反応液は５分後に均一溶液となり、３０分後には茶
色となった。この溶液にベンゾイルヒドラゾン（３．３
ｇ，２４．４ｍｍｏｌ，２．１８ｅｑ．）を加えて、ア
ルゴン雰囲気下７時間加熱還流した。茶色の反応液を４
℃で一晩放置すると結晶が析出していた。この結晶をグ
ラスフィルターにて濾取し、すばやく冷メチルアルコー
ル（２０ｍｌ×３）、続いて冷ジエチルエーテル（２０
ｍｌ×３）にて洗浄した。洗浄液を室温で風乾させると
１３Ｃ−３ＤＧ−ビス−ベンゾイルヒドラゾンの粗結晶
（１．６０ｇ，３６．８％）が得られた。この粗結晶を
９５％エチルアルコール（１００ｍｌ）から再結晶する
と、白色針状晶（１．２５ｇ，２８．７％）が得られ
た。 融点 ：１７４−１７５ ［α］Ｄ ２５：１０．２（ｃ０．６ピリジン） 質量スペクトル（ｍ／ｅ）：３８６（Ｍ−１８） 元素分析値（％）：実験値：Ｃ，５６．９；Ｈ，５．
６；Ｎ，１３．３、理論値Ｃａｌｃ．ｆｏｒ Ｃ２０Ｈ
２２Ｎ４Ｏ６／Ｈ２Ｏ；Ｃ，５６．９；Ｈ５．７３；
Ｎ，１３．２６１ Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：１２．０
９（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ，重水添加で消失）、１２．９３
（ｂｒ，ＩＨ，ＮＨ，重水添加で消失）、８．３６
（Ｓ，０．５Ｈ，ＣＨＯ）、８．０２（ｓ，０．５Ｈ，
ＣＨＯ）、７．９（ｍ，４Ｈ，芳香環）、７．５（ｍ，
６Ｈ，芳香環）、６．１５（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ，重水添
加で消失）、５．０４（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ，重水添加で
消失）、４．５２（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ，重水添加で消
失）、３．９９（ｓ，０．５Ｈ）、３．７１（ｓ，１
Ｈ）、３．５５（ｓ，１Ｈ）、３．４３（ｍ，０．５
Ｈ）、３．３０（ｓ，Ｈ２Ｏ）、３．２８（ｍ，１．５
Ｈ）、３．０２（ｂｒ，１Ｈ）、２．７８（ｂｒ，０．
５Ｈ）、１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：２８．２
６（ｔ）、６２．５３（ｄ）、７０．９５（ｔ）、７
４．３９（ｔ）、１４８．２５（ｄ）、１５４．５
（ｍ）
【００１２】実施例２１３ Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソース−２
−ウロース（３ＤＧ）の合成
【化９】 １３Ｃ−ＤＧ−ビス ベンゾイル ヒドラゾン（８０
８．８ｍｇ，２．０ｍｌ，１．０ｅｑ．）、エチルアル
コール（２４ｍｌ），酢酸（０．５ｍｌ），蒸留水（４
０ｍｌ）及び蒸留したて（３０ｍｍＨｇ，８２℃）のベ
ンズアルデヒド（１．３ｍｌ，１２．５ｍｍｏｌ，６．
２ｅｑ．）の混合液を１００ｍｌのナス型フラスコにい
れて、アルゴン雰囲気下、４時間加熱還流した。１５分
後に、反応液は均一となり無色透明液となった。反応終
了後、淡黄色となった反応液に４０ｍｌの蒸留水を加え
ると白色の沈澱が生じた。この状態で、反応液から常圧
下、２４ｍｌの溶媒を留去した。この懸濁液を４℃で一
晩放置した後、ＮＯ．３のグラスフィルターで沈澱を除
去した。沈澱はベンズアルデヒド ベンゾイルヒドラゾ
ン（δ１８．５ｍｇ，９１．２％回収）であった。沈澱
を蒸留水（１０ｍｌ×３）で洗った後、イオン交換樹脂
ＩＲＡ−４１０（ＯＨ）（２．２８ｇ）で中和した。濾
液を減圧下（３７℃，１２ｍｍＨｇ）ロータリーエバポ
レーターにより濃縮して２０ｍｌにした。この溶液をジ
エチルエーテル（１０ｍｌ ｘ８）にて抽出し、黄色成
分を除いた。水層のエーテルを軽く緩めて（４０℃）除
いた後、活性炭（２００ｍｇ）で処理してろ過した。濾
紙を蒸留水（５ｍｌ×３）で洗った。水層（４５ｍｌ）
を減圧下（１２ｍｍＨｇ）濃縮して１．４１ｍｌとし
た。２０ｍｌの熱い（６０℃）エチルアルコールを加え
ると、しばらくして沈澱が生じた。生じた沈澱をろ過
後、濾液を減圧濃縮すると、淡黄色生成物（３８７．９
ｍｇ）が得られた。２０ｍｌの蒸留水に溶解したのちイ
オン交換樹脂のアンバーライト ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ）
（１．５ｇ）とＩＲＡ−４１０（ＯＨ）（１．５ｇ）の
混合物を加えて撹拌後、デカンテーションにより、淡黄
色の溶液を得て、濃縮乾固し、粗生成物（２４８．８ｍ
ｇ）を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（φ２．５
×９．５ｃｍ，１４．４ｇ）を用いて精製し、ジクロロ
メタン：メチルアルコール：蒸留水＝１００：１０：１
により、ｆｒ１０−１５（５４．５ｍｇ）、ｆｒ１６−
２５（７１．９ｍｇ）、ｆｒ２６−３５（３３．７ｍ
ｇ）を得た。３つのフラクションを合わせて再クロマト
グラフィー（φ２．５×１１ｃｍ，１６ｇ，φ２．５×
１０ｃｍ，１５ｇ）を２回行い、クロロホルム：メチル
アルコール：蒸留水＝１００：１０：１によりｆｒ１３
−１８（４１．６ｍｇ）、ｆｒ１９−２２（３５．５ｍ
ｇ）ｆｒ２３−２８（２５．４ｍｇ）を得た。各画分を
２ｍｌの蒸留水に溶かし、凍結乾燥により白色無定形粉
末を得た。質量スペクトル（ｍ／ｅ）：１３８（Ｍ−３
０） 薄層クロマトグラフィー ：０．４８ クロロホルム：
メチルアルコール：蒸留水（７：３：０．５） ＩＲ（ｃｍ−１） ：３４００Ｗ，１６４０Ｓ
【００１３】実施例３１３ Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソース−２
−ウロースービス メトキシオキシムの合成
【化１０】 ２５ｍｌのナス型フラスコに３−デオキシグルコソン誘
導体（３５．５ｍｇ，０．２１１ｍｍｏｌ，１．０ｅ
ｑ．），メトキサミン塩酸塩 （３９．５ｍｇ，０．４
６４ｍｍｏｌ，２．２ｅｑ．）とピリジン（１．０ｍ
ｌ）を入れて、室温で７時間撹拌した。３時間で反応は
終了していた。反応液から減圧下で、溶媒を留去した
後、残査をシリカゲルクロマトグラフィー（φ２．５×
６．７ｃｍ，１０ｇ）で分離精製し、流出液を酢酸エチ
ルとした時、無色油（２８．２ｍｇ，５８．９％）を得
た。 無色油 薄層クロマトグラフィー：Ｒ＝０．３３ 酢酸エチル 質量スペクトル（ｍ／ｅ）：１９５（Ｍ−３１），１８
０（Ｍ−３１−１５），１６３（Ｍ−３１−１５−１
７）
【００１４】実施例４ 実施例３で得られた１３Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリス
ローヘキソース−２−ウロース １０ｕｇに、１％のト
リメチルクロロシランを含む２０ｍｌＮ，Ｏ−ビス（ト
リメチルシリル）トリフルオロアセタミドを加えて６０
℃で２０分間反応させた。このトリメチルシリル化の
後、ガスクロマトグラフィー質量分析計Ｈｅｗｌｅｔｔ
−Ｐａｃｋａｒｄ社製 ＨＰ５８９０＋ＨＰ５９７０Ｂ
型（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ社製）カラムを使
用し１５０℃で１分間保持の後１分間１０℃の割で昇温
し３１０℃して３．５分間保持）で分析した。図に示す
如く１２Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソース
−２−ウロース、４，５，６−Ｏ−トリメチルシリル
１、２−ビス メトキシムと比べて４質量分多い所ｍ／
ｅ２３５に特徴的なピークを示すことが判明した。又、
ＣＩ−ＳＩＭ により従来品は４３７、この出願発明品
は４４３にピークを示すことが判明した。これにより内
部標準法を用いた３−デオキシグルコソン誘導体の定量
が可能となった。
【００１５】実施例５ サンプル調整：内部標準物質としてこの出願発明により
調整した１３Ｃ６−３−デオキシグルコソン誘導体の２
００ｎｇを、１ｍｌの健常人（あるいは糖尿病患者血清
あるいは胃臓病患者血清）に添加した後、サンプルを、
グルコースオキシダーゼ（２００μ／ｍｌ）、カタラー
ゼ（１１００μ／ｍｌ）ムタロターゼ（４μ／ｍｌ）を
含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．０）と充分混和
させて、３７℃で１時間インキュベートした。その混合
物に２ｍｌのエチルアルコールを加えて３０００回転で
１０分間遠心して除蛋白を行った。上清をＢｏｎｄ Ｅ
１ｕｔ ＳＣＸ カートリッジ（陽イオン交換樹脂１０
０ｍｇ／ｍｌ Ａｎａｌｙｔｉｃｈｅｍ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ、Ｈａｒｂｏｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳ
Ａ）に添加して３ｍｌの蒸留水で溶出させた。集めた溶
出液をＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ ＳＡＸカートリジ（陰イオ
ン交換樹脂１００ｍｇ／ｍｌ，Ａｎａｌｙｔｉｃｈｅｍ
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に添加して３ｍｌの蒸
留水で溶出させた。溶出液を集めて凍結乾燥した。これ
をメチルアルコールに溶解させてスクリューキャップ付
きのバイアルびんに移し、窒素気流下で溶媒を除いた。
ついで、２００μｌのピリジンに５ｍｇのメトキシルア
ミン塩酸塩を含む溶液を加えて７０℃で３０分反応させ
てメトキシオキシム誘導体に導いた。窒素気流で溶媒を
除いた後、１％のトリエチルアミンを含む２０μｌの
Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセタ
ミドを加えて６０℃で２０分間反応させ、水酸基をトリ
メチルシリル誘導体へ変換した。サンプルを放冷後、５
μｌをとって、カスクロマトグラフィー／マススペクト
ロメトリー（ＧＣ／ＭＳ）により分析した。正常人血清
を用いた時のサンプル間、およびサンプル内の偏差係数
は８００ｎｇ／ｍｌまでの濃度でそれぞれ５．７％（ｎ
＝５）、６．３％（ｎ＝５）と小さかった。又添加した
３−デオキシグルコソン誘導体の回収率はほぼ１００．
９ ４．６（平均値±平均誤差 ｎ＝５）％であった。
【００１６】実施例６ ＧＳ／ＭＳ ２重収束型マススペクトロメーターをつけ
た島津ＧＣ−９ＡガスクロマトグラフィーにＤＢ−１７
を結合させたシリカのキャピラリーカラム（３０ｍｘ
０．３２ｍｍ 内径１５μｍ Ｊ＆Ｗ Ｓｃｉｌｎｔｉ
ｂｉｃ、Ｆｏｌｓｏｍ ＣＡ ＵＳＡ）を装備したもの
で移動型針タイプのインジェクタ付きの機器。カラム温
度は、１４０℃から２００℃まで５℃／ｍｉｎの割で昇
温する．インジェクター温度は２８０℃、セパレター温
度も２８０℃イオン源は２５０℃、ＥＩマススペクトル
は、７０ｅＶのイオン化電圧で測定した。補足電流は６
０μＡで加速電圧は３ＫＶであった。ＣＩマススペクト
ルは、反応ガスとしてイソブタンを使用し、イオン化電
圧は１５０ｅＶで行った。ＳＩＭ（ｓｅｌｅｃｔｅｄｉ
ｏｎ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）を３−デオキシグルコソ
ン誘導体の同定と定量の為に用いた。
【００１７】実施例７ サンプル測定結果 標準品、正常人血清、糖尿病患者について血清を採取し
ＥＩ−ＳＩＭ，ＣＩ−ＳＩＭを測定した。その結果（分
子イオン＋Ｈ）＋の出現するＣＩ−ＳＩＭが４３７と４
４３にピークを示すことからこの値を用いて血清中の３
−デオキシグルコソン誘導体の定量を行った。ＧＣ−Ｍ
Ｓの測定条件は実施例５に示す如くであった。４３７と
４４３は６質量数異なっているので正確な内部標準物質
となりえている。実施例５の方法に従って調整したサン
プルについて３−デオキシグルコソンの測定を行ない下
記の結果を得た。
【００１８】 １４Ｃ−グルコースを用いて同様な方法で合成した１４
Ｃ６−３−デオキシグルコソン誘導体を用いた。測定に
ついても同様な結果が得られた。
【００１９】以上のように、この出願発明により３−デ
オキシグルコソン誘導体が容易に測定可能となったばか
りでなく病態を反映して血清中の３−デオキシグルコソ
ン誘導体濃度が変化していることが判明し、逆に血清中
の３−デオキシグルコソン誘導体を測定することにより
病態の診断への応用も可能である。従来法では標識分子
が水溶液中で不安定であることを考慮すると、この出願
発明の方法は測定結果の信頼度が向上し、優れた測定方
法であることが理解される。以上の如くから明かなよう
に、生体試料中から３−デオキシグルコソンの定量を３
−デオキシグルコソン誘導体とした後定量を高感度で行
なうことが可能である。
【００２５】
【発明の効果】生体試料中の３−デオキシグルコソンあ
るいはその誘導体測定において１３Ｃ又は１４Ｃで標識
した３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体を内部
標準物質としてガスクロマトフラフィー質量分析を行な
うことにより精度よく３−デオキシグルコソンあるいは
その誘導体の含有量を求めることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例３で得られた１３Ｃ−３−デオキシ−Ｄ
−エリスロ−ヘキソース−２−ウロース ４、５、６−
Ｏ−トリメチルシリル １、２−ビス メトキシオキシ
ムのスペクトル
【図２】１２Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソ
ース−２−ウロ ４，５，６−Ｏ−トリメチルシリル
１、２−ビス メトキシオキシムのスペクトル
【図３】１２Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソ
ース−２−ウロ ４，５，６−Ｏ−トリメチルシリル
１、２−ビス メトキシオキシムのスペクトル
【図４】１３Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソ
ース−２−ウロ ４，５，６−Ｏ−トリメチルシリル
１、２−ビス メトキシオキシムのスペクトル
【図５】１３Ｃ−３−デオキシ−Ｄ−エリスロ−ヘキソ
ース−２−ウロ ４，５，６−Ｏ−トリメチルシリル
１、２−ビス メトキシオキシムのスペクトル
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平４−145360（ＪＰ，Ａ) ＡＲＣＨＩＶＥＳ ＯＦ ＢＩＯＣＨ ＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＢＩＯＰＨＹ ＳＩＣＳ 294 〜１！ （1992） Ｐ. 130−137

Claims (9)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ３−デオキシグルコソンあるいはその誘
    導体を定量する方法において、同位体である、１分子あ
    たり１〜１２質量多い分子で置換された、一般式（Ｉ）
    の３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体を内部標
    準物質として用い質量分析を行うことを特徴とする３−
    デオキシグルコソンあるいはその誘導体の測定法。 【化１】 （式中、 ＊ Ｃは １３ Ｃ， １４ Ｃ、ＸはＯ，Ｎ−ＯＲ（Ｒ
    はＭｅ，Ｅｔ，又はＨ）、ＹはＨ，ＳｉＭｅ ３ ，ＳｉＭ
    ｅ ２ ｔ Ｂｕを示す）
  2. 【請求項２】 サンプルの前処理において陽イオン及び
    陰イオン交換樹脂を用いて調整することを特徴とする請
    求項１に記載の測定法。
  3. 【請求項３】 血清中に １３ Ｃラベル又は １４ Ｃラベル
    ３−デオキシグルコソンあるいはその誘導体を添加する
    ことを特徴とする請求項１または２に記載の測定法。
  4. 【請求項４】 尿中に １３ Ｃラベル又は １４ Ｃラベル３
    −デオキシグルコソンあるいはその誘導体を添加するこ
    とを特徴とする請求項１または２に記載の測定法。
  5. 【請求項５】 一般式（Ｉ ） 【化２】 （式中、＊Ｃは１３Ｃ，１４Ｃ、ＸはＯ，Ｎ−ＯＲ（Ｒ
    はＭｅ，Ｅｔ，又はＨ）、ＹはＨ，ＳｉＭｅ３，ＳｉＭ
    ｅ２ ｔＢｕを示す）３−デオキシグルコソンあるいはそ
    の誘導体。
  6. 【請求項６】 １３ Ｃ−グルコースを原料として合成し
    た一般式（Ｉ）で表される １３ Ｃ−ラベル３−デオキシ
    グルコソンあるいはその誘導体。
  7. 【請求項７】 １４ Ｃ−グルコースを原料として合成した
    一般式（Ｉ）で表される １４ Ｃ−ラベル３−デオキシグ
    ルコソンあるいはその誘導体。
  8. 【請求項８】 １３ Ｃ−グルコースを原料とすることを特
    徴とする一般式（Ｉ）で表される １３ Ｃ−ラベル３−デ
    オキシグルコソンあるいはその誘導体の製造方法 。
  9. 【請求項９】 １４ Ｃ−グルコースを原料とすることを特
    徴とする一般式（Ｉ）で表される １４ Ｃ−ラベル３−デ
    オキシグルコソンあるいはその誘導体の製造方法 。
JP5264092A 1993-09-29 1993-09-29 ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法 Expired - Fee Related JP2727289B2 (ja)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP5264092A JP2727289B2 (ja) 1993-09-29 1993-09-29 ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法
EP94307109A EP0645625A1 (en) 1993-09-29 1994-09-27 3-Deoxyglucosone derivatives and method for determining the same
CA002133130A CA2133130A1 (en) 1993-09-29 1994-09-28 3-deoxyglucosone derivatives and method for determining the same
US08/314,687 US5633356A (en) 1993-09-29 1994-09-29 3-deoxyglucosone derivatives
US08/406,704 US5618734A (en) 1993-09-29 1995-03-20 Method for measuring 3-deoxyglucosone derivatives in a sample
US08/471,751 US5623063A (en) 1993-09-29 1995-06-06 3-Deoxyglucosone derivatives and method for determining the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP5264092A JP2727289B2 (ja) 1993-09-29 1993-09-29 ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0798317A JPH0798317A (ja) 1995-04-11
JP2727289B2 true JP2727289B2 (ja) 1998-03-11

Family

ID=17398402

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP5264092A Expired - Fee Related JP2727289B2 (ja) 1993-09-29 1993-09-29 ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法

Country Status (4)

Country Link
US (3) US5633356A (ja)
EP (1) EP0645625A1 (ja)
JP (1) JP2727289B2 (ja)
CA (1) CA2133130A1 (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60031357T2 (de) * 1999-12-29 2007-08-30 PerkinElmer Life Sciences, Inc., Norton Geräte, Kits und Verfahren zum Testen von Körperflüssigkeiten zum Screening vonNeugeborenen durch Tandem-Massenspektrometrie-Kits
DE10028548C1 (de) * 2000-06-09 2001-08-30 Inst Chemo Biosensorik Verfahren zum Nachweis von alpha-Oxoaldehyden in Vollblut, Blutplasma und/oder Serum eines Patienten
CA2331116A1 (en) * 2001-01-15 2002-07-15 Chenomx, Inc. Compound identification and quantitation in liquid mixtures -- method and process using an automated nuclear magnetic resonance measurement system
JP4954165B2 (ja) * 2007-09-07 2012-06-13 キヤノン株式会社 化合物、診断薬、核磁気共鳴分析方法、核磁気共鳴イメージング方法、質量分析方法及び質量分析イメージング方法
JP6189080B2 (ja) * 2012-04-25 2017-08-30 上野製薬株式会社 終末糖化産物生成抑制剤
CN103267819A (zh) * 2013-04-11 2013-08-28 贵州省烟草科学研究院 一种衍生化法分析烟草糖苷的方法
JP6359365B2 (ja) * 2014-07-09 2018-07-18 国立研究開発法人産業技術総合研究所 アミノ酸のアミノ基及びカルボキシル基を対象としたプレカラム誘導体化ｌｃ−ｍｓ分析法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4224031A (en) * 1977-11-15 1980-09-23 Mee John M L CI Mass spectrometric analysis of physiologically active compounds
US4709016A (en) * 1982-02-01 1987-11-24 Northeastern University Molecular analytical release tags and their use in chemical analysis
JPH04145360A (ja) * 1990-10-06 1992-05-19 Mitsubishi Gas Chem Co Inc ピロロキノリンキノン含有率の測定法
US5302758A (en) * 1993-05-10 1994-04-12 General Electric Company Deuterated dibutyl and monobutyl phosphates

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ＡＲＣＨＩＶＥＳ ＯＦ ＢＩＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＢＩＯＰＨＹＳＩＣＳ ２９４ 〜１！ （１９９２） Ｐ．１３０−１３７

Also Published As

Publication number Publication date
EP0645625A1 (en) 1995-03-29
JPH0798317A (ja) 1995-04-11
US5623063A (en) 1997-04-22
US5618734A (en) 1997-04-08
CA2133130A1 (en) 1995-03-30
US5633356A (en) 1997-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hunter Creatine and creatinine
Chambaz et al. Application of gas chromatography, mass spectrometry, and computer methods in clinical biochemistry
Siegel Applications of reversible covalent chemistry in analytical sample preparation
Hauh-Jyun et al. Mechanism of inhibition of advanced glycosylation by aminoguanidine in vitro
JP2002520580A (ja) 質量分光分析のためのアリールスルフォンリンカー
JP2727289B2 (ja) ３−デオキシグルコソン誘導体及びその定量法
AU2004218127B2 (en) Method of labeling phosphorylated peptide, method of selective adsorption therefor, complex compound for use therein, process for producing the complex compound and starting compound of the complex compound
US5399560A (en) 1,2,4-triazine products resulting from the inhibition of advanced glycosylation
US5750697A (en) Membrane Na+ channel protein and related therapeutic compounds
Tsou et al. New polymer-support method for the synthesis of ribooligonucleotide
JPH01500190A (ja) オール‐トランス‐レチノイン酸及び１３‐シス‐レチノイン酸の誘導体ならびにその製造方法
JP3113440B2 (ja) ピリジニウム誘導体
US4950591A (en) Membrane Na+ channel protein and related therapeutic compounds
US5214138A (en) Imidazopyridinium compound and processes for isolating, identifying, and chemically synthesizing same
AU609518B2 (en) Advanced glycosylation endproducts and associated methods
US5686251A (en) Naphthyridinium derivatives
US5126442A (en) Advanced glycosylation endproducts and associated methods
CN114539136B (zh) 一种可用于圆二色光谱手性识别的分子衍生物、制备方法及应用
EP0216162A2 (en) A method of preparing indoles or indole derivatives, coupled via position 4, 5, 6, or 7, the indoles or indole derivatives concerned, as well as the use thereof
US5374712A (en) Imidazopyridinium compound and processes for isolating, identifying, and chemically synthesizing same
JP4196423B2 (ja) アルキルグリオキサール付加体およびその製造方法
JPS6160698A (ja) イオン感応性物質
JPH01131200A (ja) リン脂質複合体、蛋白質複合体およびそれらの製造法
US5663322A (en) Diadenosine tetraphosphate tetrasodium salt dodecahydrate crystals and process for preparation
JPH0359069B2 (ja)

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees