JP2717940B2 - 改良された免疫分析用洗浄液 - Google Patents
改良された免疫分析用洗浄液Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】抗原抗体反応による免疫分析方法
のひとつであるヘテロジニアスイムノアッセイにおける
被検物質と抗原または抗体の複合物と複合化されていな
い物質を分離する際に使用される免疫分析用水性洗浄液
に関する。
のひとつであるヘテロジニアスイムノアッセイにおける
被検物質と抗原または抗体の複合物と複合化されていな
い物質を分離する際に使用される免疫分析用水性洗浄液
に関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫分析用水性洗浄液としては特開平１
−２４８０６１に示されるドデシル硫酸陰イオンのアル
カリ金属またはアンモニウム陽イオン塩（洗剤）を用い
る方法や生理食塩水などがある。
−２４８０６１に示されるドデシル硫酸陰イオンのアル
カリ金属またはアンモニウム陽イオン塩（洗剤）を用い
る方法や生理食塩水などがある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
洗浄液では免疫反応における非特異的反応物／吸着物な
どを解離させ洗浄することによりバックグラウンドを低
下させる効果はあるものの、一体化していなければなら
ない被検物質と抗原または抗体の複合物をも解離させる
為、検出感度の低下および測定値のバラツキを増大させ
るという欠点があった。
洗浄液では免疫反応における非特異的反応物／吸着物な
どを解離させ洗浄することによりバックグラウンドを低
下させる効果はあるものの、一体化していなければなら
ない被検物質と抗原または抗体の複合物をも解離させる
為、検出感度の低下および測定値のバラツキを増大させ
るという欠点があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、バックグ
ラウンドを低下させる洗浄効果を有し被検物質と抗原ま
たは抗体の複合物に対する影響を減少させた洗浄液を開
発すべく鋭意検討した結果本発明に到達した。
ラウンドを低下させる洗浄効果を有し被検物質と抗原ま
たは抗体の複合物に対する影響を減少させた洗浄液を開
発すべく鋭意検討した結果本発明に到達した。
【０００５】すなわち、本発明は、下記式（１）または
（２）で示される水溶性ポリオキシアルキレンアルコー
ル（Ａ）を含有することを特徴とするｐＨ５〜８に緩衝
化された免疫分析用水性洗浄液である。本発明の洗浄液
は、被検物質と抗原または抗体の複合物への影響を減少
させ、検出感度の低下や測定値のバラツキを改善させ得
るものである。
（２）で示される水溶性ポリオキシアルキレンアルコー
ル（Ａ）を含有することを特徴とするｐＨ５〜８に緩衝
化された免疫分析用水性洗浄液である。本発明の洗浄液
は、被検物質と抗原または抗体の複合物への影響を減少
させ、検出感度の低下や測定値のバラツキを改善させ得
るものである。
【０００６】 Ｒ’［Ｏ（ＡＯ）ｏ（ＥＯ）ｐ］Ｈ （１） ［式中、Ｒ’はＨ原子または炭素数１〜６のアルキル基
であり、ｏは０〜２０００、ｐは３０〜５０００（但
し、ｏ＋ｐは式（１）の化合物の分子量が１０３〜２×
１０５になる数）である。式（１）は、Ｒ’ＯＨにｐモ
ルのエチレンオキサイド（ＥＯ）を単独付加重合、又は
ｐモルのＥＯとｏモルのＥＯ以外のアルキレンオキサイ
ド（ＡＯ）をランダム付加重合させた化合物を示す。］
であり、ｏは０〜２０００、ｐは３０〜５０００（但
し、ｏ＋ｐは式（１）の化合物の分子量が１０３〜２×
１０５になる数）である。式（１）は、Ｒ’ＯＨにｐモ
ルのエチレンオキサイド（ＥＯ）を単独付加重合、又は
ｐモルのＥＯとｏモルのＥＯ以外のアルキレンオキサイ
ド（ＡＯ）をランダム付加重合させた化合物を示す。］
【０００７】 Ｒ”［Ｏ（ＡＯ）ｌ（ＥＯ）ｍＨ］ｎ （２） ［式中、Ｒ”は炭素数２〜１０のアルカンポリオール
Ｒ”（ＯＨ）ｎの水酸基を除いた残基であり、ｎはアル
カンポリオールの水酸基数である。ｌは０〜２０００、
ｍは２０〜１５００（但し、ｌ＋ｍは式（２）の化合物
の分子量が１０３〜１０５になる数である。式（２）
は、Ｒ”（ＯＨ）ｎに１モルのエチレンオキサイド（Ｅ
Ｏ）を単独付加重合、又は１モルのＥＯとｐモルのＥＯ
以外のアルキレンオキサイド（ＡＯ）をランダム付加重
合させた化合物を示す。］
Ｒ”（ＯＨ）ｎの水酸基を除いた残基であり、ｎはアル
カンポリオールの水酸基数である。ｌは０〜２０００、
ｍは２０〜１５００（但し、ｌ＋ｍは式（２）の化合物
の分子量が１０３〜１０５になる数である。式（２）
は、Ｒ”（ＯＨ）ｎに１モルのエチレンオキサイド（Ｅ
Ｏ）を単独付加重合、又は１モルのＥＯとｐモルのＥＯ
以外のアルキレンオキサイド（ＡＯ）をランダム付加重
合させた化合物を示す。］
【０００８】本発明で用いらる水溶性ポリオキシアルキ
レンアルコール（Ａ）の多くは、工業品および医薬品グ
レードで多量に市販されており、式（１）または（２）
で示される。各式中では、エチレンオキサイド（ＥＯ）
のみが結合した化合物、およびエチレンオキサイド以外
のアルキレンオキサイド（ＡＯ）とＥＯがランダムに結
合した化合物も含まれる。式（１）のＲ’がＨの化合物
としては、ＥＯを付加重合させた化合物、具体的にはポ
リエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略す）およびＥ
ＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物がある。一
方Ｒ’がアルキル基の化合物としては、エタノール，ｎ
プロパノール，ｎブタノールまたはｎヘキサノールにＥ
Ｏを付加重合させた化合物およびＥＯとＡＯをランダム
に付加重合させた化合物がある。また式（２）としては
エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリ
ン、ペンタエリスリトール、ヘキシレングリコール、ヘ
キシット等の炭素数２から１０で水酸基価２から６のア
ルカンポリオールに、ＥＯを付加重合させた化合物およ
びＥＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物があ
る。また式（１）のオキシアルキレンの数ｏは０〜２０
００、ｐは３０〜５０００（ただしｏ＋ｐは式（１）の
分子量が１０３〜２×１０５になる数）である。また式
（２）のオキシアルキレンの数ｌは０〜１０００、ｍは
２０〜１５００（ただしｌ＋ｍは式（２）の分子量が１
０３〜１０５になる数）である。
レンアルコール（Ａ）の多くは、工業品および医薬品グ
レードで多量に市販されており、式（１）または（２）
で示される。各式中では、エチレンオキサイド（ＥＯ）
のみが結合した化合物、およびエチレンオキサイド以外
のアルキレンオキサイド（ＡＯ）とＥＯがランダムに結
合した化合物も含まれる。式（１）のＲ’がＨの化合物
としては、ＥＯを付加重合させた化合物、具体的にはポ
リエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略す）およびＥ
ＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物がある。一
方Ｒ’がアルキル基の化合物としては、エタノール，ｎ
プロパノール，ｎブタノールまたはｎヘキサノールにＥ
Ｏを付加重合させた化合物およびＥＯとＡＯをランダム
に付加重合させた化合物がある。また式（２）としては
エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリ
ン、ペンタエリスリトール、ヘキシレングリコール、ヘ
キシット等の炭素数２から１０で水酸基価２から６のア
ルカンポリオールに、ＥＯを付加重合させた化合物およ
びＥＯとＡＯをランダムに付加重合させた化合物があ
る。また式（１）のオキシアルキレンの数ｏは０〜２０
００、ｐは３０〜５０００（ただしｏ＋ｐは式（１）の
分子量が１０３〜２×１０５になる数）である。また式
（２）のオキシアルキレンの数ｌは０〜１０００、ｍは
２０〜１５００（ただしｌ＋ｍは式（２）の分子量が１
０３〜１０５になる数）である。
【０００９】本発明において洗浄液中のポリオキシアル
キレンアルコールは水溶性であるが、溶解度は通常常温
の水に２０重量％以上溶解し、好ましくは５０％、より
好ましくは如何なる割合にも溶解するものである。溶解
濃度は１０−２〜２重量／容量％（以下、特に明示しな
ければ、単に％で示す）で好ましくは０．０５〜０．２
％である。また平均分子量は１０３以上で好ましくは２
×１０３〜１０５である。
キレンアルコールは水溶性であるが、溶解度は通常常温
の水に２０重量％以上溶解し、好ましくは５０％、より
好ましくは如何なる割合にも溶解するものである。溶解
濃度は１０−２〜２重量／容量％（以下、特に明示しな
ければ、単に％で示す）で好ましくは０．０５〜０．２
％である。また平均分子量は１０３以上で好ましくは２
×１０３〜１０５である。
【００１０】本発明の洗浄液は緩衝液を加えてｐＨは５
〜８に調整する。より好ましくは６〜８である。緩衝液
としては、例えばリン酸緩衝液、トリス緩衝液、などの
緩衝液が挙げられるが、緩衝液の種類は特に限定される
ものではなく、その目的、用途に応じて最も適した緩衝
液の種類を選択すればよい。緩衝液がないと測定値がバ
ラツキやすく好ましくない。
〜８に調整する。より好ましくは６〜８である。緩衝液
としては、例えばリン酸緩衝液、トリス緩衝液、などの
緩衝液が挙げられるが、緩衝液の種類は特に限定される
ものではなく、その目的、用途に応じて最も適した緩衝
液の種類を選択すればよい。緩衝液がないと測定値がバ
ラツキやすく好ましくない。
【００１１】本洗浄液は洗浄を必要とする免疫測定法す
なわちヘテロジニアスイムノアッセイ全般に用いること
ができる。ヘテロジニアスイムノアッセイには、放射免
疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光
免疫測定法（ＦＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩ
Ａ、ＣＬＥＩＡ）がある。
なわちヘテロジニアスイムノアッセイ全般に用いること
ができる。ヘテロジニアスイムノアッセイには、放射免
疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光
免疫測定法（ＦＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩ
Ａ、ＣＬＥＩＡ）がある。
【００１２】
【実施例】以下、実施例１，２により本発明をさらに説
明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１３】実施例１ ＰＥＧ含有洗浄液の調製 従来の洗浄液としてリン酸としての濃度が０．０２ｍｏ
ｌ／Ｌ（以下、単位ｍｏｌ／ＬをＭと略す）のｐＨ７．
０のリン酸緩衝液（ａ）を調製した。この緩衝液（ａ）
にＰＥＧ６０００（平均分子量６０００），ＰＥＧ２０
０００（平均分子量２００００）を０．０５％になるよ
うに添加しＰＥＧ含有洗浄液（ｂ），（ｃ）をそれぞれ
調製した。
ｌ／Ｌ（以下、単位ｍｏｌ／ＬをＭと略す）のｐＨ７．
０のリン酸緩衝液（ａ）を調製した。この緩衝液（ａ）
にＰＥＧ６０００（平均分子量６０００），ＰＥＧ２０
０００（平均分子量２００００）を０．０５％になるよ
うに添加しＰＥＧ含有洗浄液（ｂ），（ｃ）をそれぞれ
調製した。
【００１４】免疫反応用緩衝液（Ｒ１）の調製 １％牛血清アルブミン、０．９％塩化ナトリウム含有
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液を調製した。
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液を調製した。
【００１５】酵素標識抗体液（Ｒ２［ＡＦＰ］）の調製 １％牛血清アルブミン、０．９％塩化ナトリウム含有
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液にペルオキシダ
ーゼ標識抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）を０．１５μｇ／ｍｌ
となるように添加し調製した。
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液にペルオキシダ
ーゼ標識抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）を０．１５μｇ／ｍｌ
となるように添加し調製した。
【００１６】抗ＡＦＰ抗体結合ガラスビーズの調製 Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７巻７５１頁
（１９７９）に準じて抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）を平均粒
径６．８〜７．０ｍｍのスリガラスビーズに結合させ調
製した。
（１９７９）に準じて抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）を平均粒
径６．８〜７．０ｍｍのスリガラスビーズに結合させ調
製した。
【００１７】ＥＩＡ−ＡＦＰ測定法（ＥＩＡ−ＡＦＰ） アッセイ用試験管に被検サンプル（標準ＡＦＰ液他）−
３０μｌにＲ１−３００μｌ加え、均一溶液とした後、
抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）結合ガラスビーズを加え、３７
℃で３０分間インキュベートする。反応終了後、未反応
物をアスピレーターで除去後、洗浄液各３ｍｌで３回吸
引洗浄する。次にＲ２［ＡＦＰ］−３００μｌを加え３
７℃で３０分間インキュベートする。反応終了後、未反
応物をアスビレーターで除去後、洗浄液各３ｍｌで３回
吸引洗浄する。その後０．３％ｏ−フェニレンジアミ
ン、０．０４％過酸化水素含有の基質溶液を加え、３７
℃で３０分間インキュベートする。１Ｎ硫酸３ｍｌで反
応を停止させた後、各々についで，４９２ｎｍの吸光度
を測定する。
３０μｌにＲ１−３００μｌ加え、均一溶液とした後、
抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）結合ガラスビーズを加え、３７
℃で３０分間インキュベートする。反応終了後、未反応
物をアスピレーターで除去後、洗浄液各３ｍｌで３回吸
引洗浄する。次にＲ２［ＡＦＰ］−３００μｌを加え３
７℃で３０分間インキュベートする。反応終了後、未反
応物をアスビレーターで除去後、洗浄液各３ｍｌで３回
吸引洗浄する。その後０．３％ｏ−フェニレンジアミ
ン、０．０４％過酸化水素含有の基質溶液を加え、３７
℃で３０分間インキュベートする。１Ｎ硫酸３ｍｌで反
応を停止させた後、各々についで，４９２ｎｍの吸光度
を測定する。
【００１８】比較例１ １．洗浄液組成とＡＦＰアッセイ吸光度（検出感度） 洗浄液（ａ），（ｂ），（ｃ）を使用して標準ＡＦＰ液
０，２０，８０，３２０，６４０ｎｇ／ｍｌのアッセイ
吸光度（ｎ＝３）をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定
した。評価結果は表１に示した。
０，２０，８０，３２０，６４０ｎｇ／ｍｌのアッセイ
吸光度（ｎ＝３）をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定
した。評価結果は表１に示した。
【００１９】
【表１】 ＊ｎ＝３ずつ測定したアッセイ吸光度の平均値
【００２０】洗浄液（ａ）よりも洗浄液（ｂ），（ｃ）
を使用した方がアッセイ吸光度は高く、複合物の解離が
押さえられていることが確認できた。また０ｎｇ／ｍｌ
の吸光度はいずれの洗浄液でも差が認められず洗浄効果
に差はなかった。
を使用した方がアッセイ吸光度は高く、複合物の解離が
押さえられていることが確認できた。また０ｎｇ／ｍｌ
の吸光度はいずれの洗浄液でも差が認められず洗浄効果
に差はなかった。
【００２１】比較例２ ２．洗浄液組成とＡＦＰアッセイ吸光度のバラツキ（同
時再現性） 洗浄液（ａ），（ｂ），（ｃ）を使用して標準ＡＦＰ液
２０，３２０ｎｇ／ｍｌのアッセイ吸光度（ｎ＝２０）
をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定した。評価結果は
表２に示した。
時再現性） 洗浄液（ａ），（ｂ），（ｃ）を使用して標準ＡＦＰ液
２０，３２０ｎｇ／ｍｌのアッセイ吸光度（ｎ＝２０）
をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定した。評価結果は
表２に示した。
【００２２】
【表２】 ＊ｎ＝２０ずつ測定したアッセイ吸光度の同時再現性
【００２３】洗浄液（ａ）よりも洗浄液（ｂ），（ｃ）
を使用した方がアッセイ吸光度のバラツキが減少し同時
再現性の改善効果が確認できた。
を使用した方がアッセイ吸光度のバラツキが減少し同時
再現性の改善効果が確認できた。
【００２４】実施例２ 各種ポリオキシアルキレンアルコール含有洗浄液の調製 従来の洗浄液として０．０２Ｍ，ｐＨ１７．０のリン酸
緩衝液（ａ）を調製した。（ａ）にｎ−ブタノールにＥ
Ｏ２００モルにプロピレンオキサイド（以下、ＰＯと略
す）５０モルをランダムに付加重合させた化合物（平均
分子量８０００），グリセリンにＥＯ８０モルとＰＯ１
０モルを付加重合させた化合物（平均分子量２８０
０），ヘキシレングリコールにＥＯ５００モルとＰＯ５
０モルをランダムに付加重合させた化合物（平均分子量
１７０００）を０．０５％になるように添加しポリオキ
シアルキレンアルコール含有洗浄液（ｄ），（ｅ），
（ｆ）をそれぞれ調製した。
緩衝液（ａ）を調製した。（ａ）にｎ−ブタノールにＥ
Ｏ２００モルにプロピレンオキサイド（以下、ＰＯと略
す）５０モルをランダムに付加重合させた化合物（平均
分子量８０００），グリセリンにＥＯ８０モルとＰＯ１
０モルを付加重合させた化合物（平均分子量２８０
０），ヘキシレングリコールにＥＯ５００モルとＰＯ５
０モルをランダムに付加重合させた化合物（平均分子量
１７０００）を０．０５％になるように添加しポリオキ
シアルキレンアルコール含有洗浄液（ｄ），（ｅ），
（ｆ）をそれぞれ調製した。
【００２５】 ＥＩＡ−ＡＦＰ測定法（ＥＩＡ−ＡＦＰ） 実施例１に準じる。
【００２６】比較例３ １．洗浄液組成とＡＦＰアッセイ吸光度のバラツキ（同
時再現性） 洗浄液（ａ），（ｄ），（ｅ），（ｆ）を使用して標準
ＡＦＰ液２０，３２０ｎｇ／ｍｌのアッセイ吸光度（ｎ
＝２０）をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定した。評
価結果は表３に示した。
時再現性） 洗浄液（ａ），（ｄ），（ｅ），（ｆ）を使用して標準
ＡＦＰ液２０，３２０ｎｇ／ｍｌのアッセイ吸光度（ｎ
＝２０）をＥＩＡ−ＡＦＰ測定法に準じて測定した。評
価結果は表３に示した。
【００２７】
【表３】 ＊ｎ＝２０ずつ測定したアッセイ吸光度の同時再現性
【００２８】洗浄液（ａ）よりも洗浄液（ｄ），
（ｅ），（ｆ）を使用した方がアッセイ吸光度のバラツ
キが減少し同時再現性の改善効果が確認できた。
（ｅ），（ｆ）を使用した方がアッセイ吸光度のバラツ
キが減少し同時再現性の改善効果が確認できた。
【００２９】
【発明の効果】本発明により、被検物質と抗原または抗
体の複合物の洗浄操作における解離を減少させることが
でき、検出感度および同時再現性を向上させることが可
能となった。従って、免疫測定法における性能向上に好
適である。
体の複合物の洗浄操作における解離を減少させることが
でき、検出感度および同時再現性を向上させることが可
能となった。従って、免疫測定法における性能向上に好
適である。
Claims (2)
- 【請求項１】 下記式（１）または（２）で示される水
溶性ポリオキシアルキレンアルコール（Ａ）を含有する
ことを特徴とするｐＨ５〜８に緩衝化された免疫分析用
水性洗浄液。 Ｒ’［Ｏ（ＡＯ）ｏ（ＥＯ）ｐ］Ｈ （１） ［式中、Ｒ’はＨ原子または炭素数１〜６のアルキル基
であり、ｏは０〜２０００、ｐは３０〜５０００（但
し、ｏ＋ｐは式（１）の化合物の分子量が１０３〜２×
１０５になる数）である。式（１）は、Ｒ’ＯＨにｐモ
ルのエチレンオキサイド（ＥＯ）を単独付加重合、又は
ｐモルのＥＯとｏモルのＥＯ以外のアルキレンオキサイ
ド（ＡＯ）をランダム付加重合させた化合物を示す。］ Ｒ”［Ｏ（ＡＯ）ｌ（ＥＯ）ｍＨ］ｎ （２） ［式中、Ｒ”は炭素数２〜１０のアルカンポリオール
Ｒ”（ＯＨ）ｎの水酸基を除いた残基であり、ｎはアル
カンポリオールの水酸基数である。ｌは０〜２０００、
ｍは２０〜１５００（但し、ｌ＋ｍは式（２）の化合物
の分子量が１０３〜１０５になる数である。式（２）
は、Ｒ”（ＯＨ）ｎに１モルのエチレンオキサイド（Ｅ
Ｏ）を単独付加重合、又は１モルのＥＯとｐモルのＥＯ
以外のアルキレンオキサイド（ＡＯ）をランダム付加重
合させた化合物を示す。］ - 【請求項２】 （Ａ）が溶液中１０−２〜２重量／容量
％含有される請求項１記載の洗浄液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6295668A JP2717940B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 改良された免疫分析用洗浄液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6295668A JP2717940B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 改良された免疫分析用洗浄液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08136542A JPH08136542A (ja) | 1996-05-31 |
| JP2717940B2 true JP2717940B2 (ja) | 1998-02-25 |
Family
ID=17823641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6295668A Expired - Fee Related JP2717940B2 (ja) | 1994-11-04 | 1994-11-04 | 改良された免疫分析用洗浄液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2717940B2 (ja) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5124245A (en) * | 1989-02-09 | 1992-06-23 | Eastman Kodak Company | Wash composition, test kit and their use to determine a herpes simplex viral antigen |
| US5225325A (en) * | 1990-03-02 | 1993-07-06 | Ventana Medical Systems, Inc. | Immunohistochemical staining method and reagents therefor |
| JP2613320B2 (ja) * | 1991-02-18 | 1997-05-28 | 帝人株式会社 | ヒト・コンドロカルシンの測定方法 |
-
1994
- 1994-11-04 JP JP6295668A patent/JP2717940B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08136542A (ja) | 1996-05-31 |
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