JP2552942B2

JP2552942B2 - ヒトｂーＦＧＦ受容体遺伝子

Info

Publication number: JP2552942B2
Application number: JP2141490A
Authority: JP
Inventors: 信行伊藤; 登富岡; 智之瀬; 光一郎伏見; 待恵伊原
Original assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Current assignee: Mitsui Toatsu Chemicals Inc
Priority date: 1990-06-01
Filing date: 1990-06-01
Publication date: 1996-11-13
Anticipated expiration: 2011-11-13
Also published as: JPH0436184A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、ヒト塩基性線維芽細胞成長因子（human ba
sic−Fibloblast Growth Factor、以下ヒトｂ−FGFと略
する）に対する細胞表面受容体すなわちヒトｂ−FGF受
容体のポリペプチドをコードするDNA塩基配列を含む新
規DNAに関するものである。

本発明のDNA配列がコードするヒトｂ−FGF受容体は、
火傷・傷の治癒に有用なヒトｂ−FGFに対するアゴニス
ト、アンタゴニストのスクリーニング研究あるいはドラ
ッグデザイン研究に有用であり、本発明のDNA塩基配列
は、組換えDNA技術を使用することにより、微生物ある
いは動物細胞を宿主として組換えヒトｂ−FGF受容体の
製造を可能ならしめるものであり、産業上有用である。

また、ヒトｂ−FGF受容体の脳内発現レベルが高いこ
とが近年明らかにされつつあるので、本発明のヒトｂ−
FGF受容体DNA配列は、老化・痴呆とヒトｂ−FGF受容体
との関連について解明する手段となることが期待される
ものである。

本発明のDNA配列は、ヒトｂ−FGF受容体の本体を初め
て明らかにするものであり、本発明の配列あるいは類似
の変異配列を利用してヒト体内のヒトｂ−FGF受容体の
発現レベルを測定できるので、ヒトｂ−FGF受容体が原
因となる疾患の検査薬を製造する為の材料となり得る
し、また同受容体が原因となる疾患の治療薬を製造する
為の材料となり得るので産業上有用である。

（従来の技術）一般に、ｂ−FGFは、血管新生、細胞分裂あるいは細
胞分化といった多様な生物学的活性を示す物質として知
られており、火傷・傷の治癒あるいは血管新生を目的と
する医薬としての有用性を確認する研究が進められてい
る（Biotechnology,６;25−30,1988,ivid７:793−798,1
989、実験医学８（３）46−48,1990）。

また、ｂ−FGFは特異的な細胞表面受容体、すなわち
ｂ−FGF受容体と結合し、ｂ−FGF受容体を活性化するこ
とで生物学的な応答を伝達する。ｂ−FGF受容体は¹²⁵I
でラベルしたｂ−FGFとの結合性のある蛋白質として同
定がなされた（Annu.Rev.Biochem,58:575−609,1989、
この文献ではｂ−FGFはHBGF−２と分類命名されてい
る）。

ｂ−FGF受容体に対するcDNAはニワトリcDNAライブラ
リーより最初に分離され、同cDNAがコードするペプチド
には、ニワトリｂ−FGF受容体のトリプシン分解物のア
ミノ酸配列に一致するアミノ酸配列が認められ、ｂ−FG
F受容体遺伝子であることが証明された（Science245:57
−60,1989）。

他方、ヒトFLG（fms−like gene）に対するcDNAが、
ヒト外皮細胞由来細胞（endotherial cell）cDNAライブ
ラリーよりｖ−fmsオンコジーンをプローブとして低い
ストリンジエンシーでスクリーニングすることにより分
離されていた（Oncogene３:9−15,1988）。ヒトFLGcDNA
がコードするポリペプチドは全長ではなくＮ末を欠く不
完全なものであったが、ニワトリｂ−FGF受容体cDNAが
コードするポリペプチドのアミノ酸配列とでアミノ酸レ
ベルで93％のホモロジーがあることが明らかとなった。

また、近年にはマウスｂ−FGF様受容体cDNA配列が発
見され、ニワトリｂ−FGF受容体の配列と比較し、アミ
ノ酸レベルで91％のホモロジーがあることが報告された
（Proc.Natl.Acad.Sci.USU,87:1596−1600,1990）。

従って、本発明のｂ−FGF受容体をコードするDNA配列
に関連する配列としてニワトリｂ−FGF受容体cDNA、マ
ウスｂ−FGF様受容体cDNA及びヒトFLGcDNAの各々のDNA
配列がある。本発明の目的とするヒト由来配列に限る
と、ヒトFLGcDNAのDNA配列が関連のある配列であるが、
同配列はＮ末端付近アミノ酸配列を欠き、ヒトｂ−FGF
受容体本体を明らかにする配列とはいえない。

（発明が解決しようとする問題点）ヒトｂ−FGF受容体本体を明らかにすることができ、
それをコードする組換えDNAあるいはcDNA塩基配列を使
用し、遺伝子組換え技術により組換えｂ−FGF受容体を
作製することができれば、現在は材料となるヒトｂ−FG
F受容体が入手できない為不可能であるヒトｂ−FGF受容
体に対するアゴニスト、アンタゴニストのスクリーニン
グ研究あるいはドラッグデザイン研究が可能となる。ま
たヒトｂ−FGF受容体を使用することでヒトの老化・痴
呆の原因となるレセプター性疾患の診断薬あるいは治療
薬の研究が可能となる。

しかしながら、前記した様にヒトｂ−FGF受容体の本
体が明らかにされていないので、本発明者らはホモロジ
ーを指標にしヒトｂ−FGF受容体cDNAをクローン化し、
ヒトｂ−FGF受容体遺伝子を特定し同遺伝子のコードす
るヒトｂ−FGF受容体を特定する点につき鋭意研究を行
った。

（問題点を解決するための手段）本発明者らはFLGの配列に対応するオリゴヌクレオチ
ドを合成し、プローブとして使用し、ヒト胎盤cDNAライ
ブラリーを検索し、ヒトｂ−FGF受容体の全長をコード
するcDNAを得、全塩基配列を決定し、ヒトｂ−FGF受容
体の全アミノ酸配列を解明し本発明を完成した。

以下に本発明の具体例を詳細に説明する。

ヒトｂ−FGF受容体cDNAのクローニングの出発材料
は、ヒトｂ−FGF受容体を発現している、ヒト組織ある
いはヒト培養細胞ならいかなるものでも良い。ヒトｂ−
FGF受容体を発現しているヒト組織としては胎盤、肺、
肝臓、脳等が、ヒト培養細胞としては各種の線維芽細
胞、ヒト上皮細胞、ニューロブラストーマ細胞等が考え
られたが、本発明者らは入手の簡単な胎盤で良好な結果
を得ることができた。

cDNAの作製、λファージを使用してcDNAライブラリー
の作製は実験書に示してある公知の方法で良い。また、
プラスミドを使用したcDNAライブラーもλファージに比
較し効率が落ちるが使用可能である。プラスミドを使用
しかつ効率を高める方法には岡山−バーグの方法（Mol.
Cell.Biol.２,161−170,1982）等がある。簡単には市販
のcDNAライブラリーを使用できる。本発明者等は市販の
ヒト胎盤cDNAで良好な結果を得ている。ここでいう実験
書とは例えばManiatis.T.らの編集したMolecular Cloni
ng,A laboratoyr Manual,1989,Eds.,Sambrook,J,Fritsc
h,E.F.,Maniatis,T.,Cold Spring Harbor Laboratory P
ressをいう。

ヒトｂ−FGF受容体cDNAクローニングに使用するオリ
ゴヌクレオチドプローブは、公知のニワトリｂ−FGF受
容体cDNA（Science,245:57−60,1989）、マウスｂ−FGF
受容体様cDNA（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:1596−160
0,1990）あるいはヒトFLG cDNA（Oncogene,３:9−15,19
88）のDNA配列から適当な部位の配列を選定し、10塩基
長以上、好ましくは15塩基以上の長さのオリゴヌクレオ
チドとして合成DNA法で得ると良い。例えばヒトFLGcDNA
のDNA配列の５′−末端付近を選定し、20塩基長のオリ
ゴヌクレオチドを市販のDNA合成機を使用して合成し、
所定の精製法で精製後、例えばアイソトープで標識し、
目標遺伝子検出のプローブとして使用すると能率よくcD
NAライブラリーのスクリーニングを行うことができる。

ニワトリｂ−FGF受容体cDNA、マウスｂ−FGF受容体様
cDNAあるいはヒトFLGcDNAの一部あるいは全長を例えば
アイソトープで標識化することによってもプローブの作
製が可能である。

プローブとして使用するDNAはアイソトープによる標
識化で、高感度なスクリーニングを可能とならしめる。
アイソトープ標識化は［³²P］γ−ATPとT4ポリヌクレオ
チドを用いた末端ラベルする方法で良いが他のニックト
ランスレーション法、プライマー伸長法等による標識化
でも良い。アイソトープを用いない発色法を利用した非
アイソトープ標識化の方法は感度が若干低下するが使用
可能である。

ヒトｂ−FGF受容体cDNAクローニングに必要なcDNA作
製、ハイブリダイゼーションによるスクリーニング、組
換えDNAの作製、DNAの塩基配列決定等の一連の分子生物
学的な実験は例えば前述のManiatis,T等の編集した実験
書に示してある公知の方法に従って行えば良い。

本発明者等が解明したヒトｂ−FGF受容体のcDNA塩基
配列は第１図にDNAの２本鎖のうち非コード鎖（RNA−li
ke）で示した。第１図に示した塩基配列は、図中で５′
−非翻訳領域（228塩基対長）、ヒトｂ−FGF受容体コー
ド領域（2193塩基対長）及び３′−非翻訳領域（907塩
基対長）に分けて示した。

本発明のヒトｂ−FGF受容体cDNA（第１図）にコード
されるヒトｂ−FGF受容体のアミノ酸配列は第２図にア
ミノ酸の３文字による略号で示した。第２図に示したア
ミノ酸配列（731アミノ酸）は仮定されるシグナルペプ
チド及び仮定される成熟ヒトｂ−FGF受容体にわけて示
した。また、仮定されるトランスメンブレン部材は下線
で示した。

第２図のポリペプチドがヒトｂ−FGF受容体である根
拠は既に同定されているニワトリｂ−FGF受容体cDNA（S
cience,245:57−60,1989）と比較して本発明のDNAに267
塩基対長（89アミノ酸）分の欠除を別にしてアミノ酸レ
ベルで93％のホモロジーがあること、また、マウスｂ−
FGF様受容体cDNA（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,1596−1
600,1990）の短鎖（Short form;267塩基長分の欠除があ
る鎖）と比較しアミノ酸レベルで98％という驚くべき高
いホモロジーが、ヒト及びニワトリあるいはヒト及びマ
ウスといった種差があるにもかかわらず認められること
による。また機能的には、ニワトリ及びマウスで報告さ
れている細胞外イムノグロブリン様ドメイン、トランス
メンブレンドメイン及びチロシンキナーゼドメインが、
本発明のヒトｂ−FGF受容体に認められることによる。

本発明のヒトｂ−FGF受容体のアミノ酸配列（第２図;
731アミノ酸）は、既に報告のあるヒトFLG（Oncogene,
３:9−15,1988;623アミノ酸）のアミノ酸配列に比較し
Ｎ−末端側が108アミノ酸長いこと、またＣ末端側の623
アミノ酸については２ケ所で６アミノ酸に差異が認めら
れることにより、本発明のヒトｂ−FGF受容体はヒトFLG
とは異なる新規アミノ酸配列より成る物質と判断され
た。

本発明でいう成熟ヒトｂ−FGF受容体とはシグナルペ
プチドを除去して得られるポリペプチドである。成熟ヒ
トｂ−FGF受容体のＮ末端アミノ酸は本来ヒトｂ−FGF受
容体をヒトより分離・精製した後に決定が可能となる
が、ヒトｂ−FGF受容体精製物が容易に得られないこ
と、またたとえ得られたとしてもニワトリｂ−FGF受容
体のＮ末端アミノ酸はブロックされていて決定されなか
った報告（Science,245:57−60,1989）があることによ
り、ヒトｂ−FGF受容体の場合もＮ末端アミノ酸を正し
く求めることは容易でない。。

そこで、本発明では、報告されているニワトリｂ−FG
F受容体の仮定されたシグナルペプチドのアミノ酸配列
とマウスｂ−FGF様受容体の仮定されたシグナルペプチ
ドのアミノ酸配列と、本発明のヒトｂ−FGF受容体のｎ
末端付近のアミノ酸配列とを比較し、ヒトｂ−FGF受容
体のシグナルペプチドを仮に１番目のMetから20番目のT
hrまでとしたが、確定されたものでなく本シグナルペプ
チドは、１番目のMetから20番目のThr付近までの20前後
のアミノ酸でシグナルペプチドが構成されると考えて良
い。

本発明のいう“アミノ酸の欠除、付加あるいは置換等
の変異が認められる変異ポリペプチド”とは、本発明の
ヒトｂ−FGF受容体の機能をそこなうことなく変異の入
った、自然界に発見される変異ポリペプチドまたは人為
的に改変した変異ポリペプチドをいう。

本発明のいう“ポリペプチドをコードする組換えDN
A、染色体DNAあるいはcDNA塩基配列を含むことを特徴と
するヒトｂ−FGF受容体DNA塩基配列”とは、目的のヒト
ｂ−FGF受容体をコードするcDNA、イントロン及びエク
ソンを含む染色体DNA、同染色体DNAのイントロンを除去
しエクソンを連結した組換えDNAあるいは合成DNA法で人
為的に作製したオリゴヌクレオチドを連結して得た組換
えDNAを含むことを特徴とするDNA塩基配列である。

合成DNA法で人為的にオリゴヌクレオチドを作製し連
結した組換えDNAとして目的のDNA塩基配列を得る方法を
用いると、遺伝子コードの縮重により、アミノ酸配列を
変化させることなく遺伝子の塩基配列を変化させること
ができる。本発明は目的のポリペプチドに係る遺伝子
の、遺伝子コードの縮重に基づく全ての塩基配列を包含
する。

変異ポリペプチドをコードする組換えDNA、染色体DNA
あるいはcDNAは、自然界で生じる種内変異あるいはアレ
ル変異に基づくアミノ酸レベルの変異のある変異ヒトｂ
−FGF受容体をコードする染色体DNAあるいはcDNAとし
て、及び人為的に作製可能なポイントミューテーション
法をほどこした変異のある変異ヒトｂ−FGF受容体をコ
ードする染色体あるいはcDNA、また合成DNA法で作製し
た変異ヒトｂ−FGF受容体をコードする組換えDNAとして
得られる。

アミノ酸レベルで変異がなくても、自然界より分離し
た染色体DNA、cDNAについては、遺伝子コードの縮重に
よりアミノ酸配列を変化させることなしにDNA塩基配列
の変異の例はしばしば認められるし、また５′−非翻訳
領域及び３′−非翻訳領域はポリペプチドのアミノ酸配
列の規定に関与しないので、DNA塩基配列は変異し易い
ので、これらの塩基配列の変異は本発明に包含される。

マウスｂ−FGF様受容体cDNAには長鎖（long form）と
短鎖（short form）の２つのアイソマーが報告されてい
る（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87,1596−1600,1990）。

ニワトリｂ−FGF受容体のcDNA（Science.245:57−60,
1989）はマウスｂ−FGF様受容体の長鎖に相当するポリ
ペプチドをコードしていた。長鎖及び短鎖の２つのアイ
ソマーは、ドパーミンD₂受容体の例（EMBO J.８:4025−
4034,1989）、インシュリン受容体の例（Proc.Natl.Aca
d.Sci.USA,86,114−118,1989）に認められたアルタナテ
ィブスプライシングに起因すると考えることができる。

本発明のヒトｂ−FGF受容体のcDNAは、短鎖に相当す
るポリペプチドをコードするものであったが、マウスあ
るいはニワトリ同様長鎖に対応するcDNAの存在が予想出
来る。

本発明のDNA塩基配列は、適当な発現ベクターに挿入
し、微生物あるいは動物培養細胞等を宿主とする形質転
換体を得、その形態転換体にヒトｂ−FGF受容体活性を
示すポリペプチドを産生せしめるために使用できる。

大腸菌、枯草菌あるいは酵母等の微生物の菌体内で成
熟ヒトｂ−FGF受容体を産生させる場合シグナルペプチ
ドを除去した成熟ヒトｂ−FGF受容体のＮ末端にMetを付
加させたポリペプチド（Met−ヒトｂ−FGF受容体）とし
て発現させると良い。Metは発現後細胞内あるいは細胞
外で除去できる場合もある。

完全なヒトｂ−FGF受容体を産生することを目的とす
る場合、シグナルペプチドを含む全長の配列を使用し有
核生物、特に動物培養細胞を宿主として発現させるのが
好ましい。得られたヒトｂ−FGF受容体を発現する形質
転換細胞はヒトｂ−FGFに対するアゴニスト、アンタゴ
ニストのスクリーニング研究あるいはドラッグデザイン
研究に使用可能となる。

宿主として使用する動物培養細胞は線維芽細胞であれ
ば最適であるが、容易に入手できるマウスＬ、マウス3T
3、マウスC127、マウスミエローマ、CHO、CHL、Helaあ
るいはヒトミエローマ細胞等でも良好な効果が期待され
る。

発現ベクターとしては、各々の宿主用に開発された公
知のベクターを使用すると良い。

以下実施例により本発明を更に具体的に説明するが、
これは本発明のほんの一例にすぎないものである。

実施例（１）プローブの作製ヒトFLG（Oncogene,３:9−15,1988）のアミノ酸４−1
0及びアミノ酸18−28に対応するDNA配列を基に20塩基長
のオリゴヌクレオチド２本、すなわちflg−４（20mer）
及びflg−18（20mer）を合成した。flg−４の塩基配列
は５′−TAACGGACCTTGTAGCCTCC−３′、flg−18の塩基
配列は５′−TCAGAGGGCACCACAGAGTC−３′であった。

合成オリゴヌクレオチドは固相法を原理とする全自動
DNA合成機を使用して作製した。全自動DNA合成機として
はアプライドバイオシステム社381A型を使用した。ヌク
レオチド、３′−ヌクレオチドを固定した担体、溶液、
試薬は同社の指示に従って使用した。所定のカップリン
グ反応を終了し、トリクロル酢酸で５′−末端の保護基
を除去したオリゴヌクレオチド担体は濃アンモニア中室
温で１時間放置することにより担体からオリゴヌクレオ
チドを遊離せしめた。次に、核酸上及びリン酸上の保護
基を遊離せしめる為核酸を含む反応液を封をしたバイア
ル中で濃アンモニア溶液で55℃、14〜24時間インキュベ
ートした。担体及び保護基を除去・遊離した各々のオリ
ゴヌクレオチドの乾燥を真空中で行った。

乾燥した合成オリゴヌクレオチド各々60μｇを、電気
泳動用緩衝液（10mMトリス−ホウ酸、pH7.6、1mM EDT
A、7M尿素、0.1％ブロモフェニールブルー及び２％サッ
カロース）に溶解せしめ、それぞれ7M尿素−８％ポリア
クリルアミドゲル電気泳動で分画を行った。電気泳動に
よる分画後、UVシャドウ法で各々の合成オリゴヌクレオ
チドの長さを調べ、目的長のオリゴヌクレオチドを含む
ゲル切片を切り出し目的長のオリゴヌクレオチドをそれ
ぞれ電気抽出し、次にイオン変換クロマトグラフィーで
精製して得た。

各々の精製オリゴヌクレオチドを１μｇを供給者の示
す反応液22μに溶解し、T4ポリヌクレオチドキナーゼ
〔タカラ酒造〕15ユニットと３μの〔³²P〕γ−ATP
（Amersham社；〉5,000Ci/mmol）を加えて37℃で１時間
インキュベートし、次に65℃で５分関インキュベートし
０℃に冷却した。ラベル化したオリゴヌクレオチドはイ
オン変換クロマトグラフィーで精製した。得られたプロ
ーブの比活性は各々６×10⁷cpm/μｇ、４×10⁷cpm/μｇ
であった。

（２）ヒト胎盤cDNAライブラリーのスクリーニングヒト胎盤cDNAをλgt11のEcoR I部位に挿入して作製さ
れたヒト胎盤cDNAライブラリー（Clontech Lab.Inc.）
をE.coli Y1090のプレート上にプラークが直径90mmのプ
レート１枚当り10⁴から10⁵出現するまで希釈してプレー
ティングしたところ、約50枚のプレートに10⁶程度のプ
ラークが出現した。

出現した約10⁶のプラークについて、以下に示したプ
ラークハイブリダイゼーション法を用いて候補組換えフ
ァージのスクリーニングを行った。

出現したプラークをナイロンフィルターに転写し、転
写したナイロンフィルターはアルカリ処理を行い（0.5N
NaOH溶液中で５分間３回振とう）、中和し（0.5M Tris
−HCl,pH7.5溶液中で５分間１回振とう）、２×SSC（0.
3M塩化ナトリウム、0.03Mクエン酸ナトリウム）で５分
間洗浄し、最後に90％エタノールで１回、95％エタノー
ルで２回、それぞれ３分間ずつ洗浄し風乾した。フィル
ターはプレハイブリダイゼーション液（50mM Na−PO₄,p
H7.0,2mM EDTA,5×SSC,0.1％SDS,0.5％non−fat dried
milk,100μg/mlの煮沸した超音波処理サケ精子DNAを含
む）100ml中で55℃２時間インキュベートし、プレハイ
ブリダイゼーションを行った。

プリハイブリダイゼーションが終了したフィルター
に、標識プローブflg−４（３×10⁷カウント／分）及び
flg−18（３×10⁷カウント／分）を含むプレハイブリダ
イゼーション液と同一組成の液60mlを加え55℃で16時間
インキュベートしハイブリダイゼーションを行った。

次にフィルターを５×SSC−0.1％SDS溶液で室温で10
分間４回洗浄し、同一組成の溶液で45℃で10分間洗浄し
風乾した。

風乾したフィルターを増感スクリーンを使用し、Ｘ線
フィルムに−70℃で12時間露光した。

オートラジオグラフィーの結果６個のプラークがプロ
ーブと反応した。

これら６個の候補ファージのプラークに＃１〜＃６の
番号を付けE.coli Y1090のプレート上に各々のファージ
を希釈してプレーティングし、プレート当り10²〜10³程
度プラークを出現させ、出現したプラークについて標識
プローブflg−４あるいはflg−18を用いてそれぞれプラ
ークハイブリダイゼーション法で調べたところ＃１〜＃
６の全てが両プローブと反応し目的の配列を含むことが
確かめられた。

６個の候補ファージはE.coli Y1090プレートに希釈し
てプレーテイングし、プラークハイブリダイゼーション
法を繰返すことで単一プラークとして単離した。

＃１〜＃６の組換えファージについて、ファージDNA
を大量に調製し、クローニング部位EcoR Iを利用し挿入
cDNAの長さを調べたところ＃１組換ファージが一番長か
った。

＃１の挿入DNAはEcoR Iで約600塩基対長と約2,000塩
基対長の断片で構成されていた。両者のDNA断片を各々M
13mp18ファージに再クローン化し、各々組換えファージ
DNAを調製した後、合成プライマーを使用しダイデオキ
シ法でウォークしながら塩基配列を調べ、全塩基配列を
決定した。

その結果＃１組換えファージの挿入cDNAは3,328塩基
対長で、５′−非翻訳領域の228塩基対長、ヒトｂ−FGF
受容体コード領域の2193塩基対長及び３′−非翻訳領域
の907塩基対長より構成されていることが判明した（第
１図）。約600塩基長のEcoR I断片と約2,000塩基長のEc
oR I断片をプラスミドpUC19のEcoR I部位に挿入したヒ
トｂ−FGF受容体遺伝子全長を含むプラスミドpFGFR1を
得た。

解明された配列より制限酵素切断地図を作成した（第
３図）。図には示していないが、BamH I、Hind III、Xb
a I、Xho I、Pvu I、Sac I、Sal I、Bal I、Cla I及びN
ru I部位は存在しなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ヒトｂ−FGF受容体cDNAの塩基配列をDNA2本
鎖のうち非コード鎖（RNA−like）で示した。右側の数
字は右端の塩基の番号を示し、５′−非翻訳領域（228
塩基長）、ヒトｂ−FGF受容体コード領域（2193塩基
長）あるいは３′−非翻訳領域（907塩基長）の境界は
図中に示した。第２図は、ヒトｂ−FGF受容体cDNAがコードするヒトｂ
−FGF受容体のアミノ酸配列をアミノ酸の３字による略
号で示した。仮定されるシグナルペプチドの位置、仮定
される成熟ヒトｂ−FGF受容体領域を図中に示し、また
仮定されるトランスメンブレンドメインは下線で示し
た。右端の番号で右端のアミノ酸の番号を示した。第３図では、ヒトｂ−FGF受容体cDNAの制限酵素切断部
位を示した。数字は塩基の番号、コード領域はATGで始
まりと終止コドンTGAで示した。

フロントページの続き (56)参考文献特開平４−506604（ＪＰ，Ａ) ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．18，Ｎｏ．７（1990）Ｐ．1906 Ｏｒｃｏｇｅｎｅ，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．１（1988）Ｐ．９−15

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記のグループから選択されるポリペプチ
ドをコードする組換えDNA塩基配列又はcDNA塩基配列を
含むことを特徴とするヒトｂ−FGF受容体DNA。（ａ）下記のアミノ酸配列より成るポリペプチド。（ｂ）（ａ）で示したアミノ酸配列より１番目のMetか
ら20番目のThr付近までの20前後のアミノ酸で構成する
シグナルペプチドを除去することにより成る成熟ポリペ
プチド。（ｃ）（ｂ）で示したアミノ酸配列の１番目のアミノ酸
の直前にMetが付加されることにより成るポリペプチ
ド。
【請求項２】組換えDNA塩基配列が下記のDNA塩基配列Ｉ
である特許請求の範囲第１項記載のヒトｂ−FGF受容体D
NA。
【請求項３】cDNA塩基配列がDNA塩基配列Ｉの第229番目
から第2421番目の配列である特許請求の範囲第１項記載
のヒトｂ−FGF受容体DNA。