JP2521428B2 - 膜多糖およびその製造方法 - Google Patents
膜多糖およびその製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、細菌由来の膜プロテオグリカンから得られ
る低分子量（約90,000）の多糖およびその製造法ならび
にその薬剤、特に免疫刺激剤、特にNK（ナチュラルキラ
ー）細胞を活性化する免疫刺激剤としての使用法および
ワクチン中のアジュバントとしての使用法に関する。
る低分子量（約90,000）の多糖およびその製造法ならび
にその薬剤、特に免疫刺激剤、特にNK（ナチュラルキラ
ー）細胞を活性化する免疫刺激剤としての使用法および
ワクチン中のアジュバントとしての使用法に関する。
1978年12月19日の出願にかかるフランス特許78/35649
号は、莢膜に包まれておらずかつ非病原性のKlebsiella
pneumoniaeバイオタイプａの突然変異株から単離した
毒性を除去した膜プロテオグリカンについて記載してい
る。このプロテオグリカンは、2,000,000ダルトンを超
える分子量を有し、これと組合される抗原に対する抗体
産生において特徴的なアジュバント特性を発揮する。そ
の反面このプロテオグリカンは有意な程度のNK細胞刺激
活性を有していない。ワクチン処方におけるそのアジュ
バントとしての諸例が記載されている。
号は、莢膜に包まれておらずかつ非病原性のKlebsiella
pneumoniaeバイオタイプａの突然変異株から単離した
毒性を除去した膜プロテオグリカンについて記載してい
る。このプロテオグリカンは、2,000,000ダルトンを超
える分子量を有し、これと組合される抗原に対する抗体
産生において特徴的なアジュバント特性を発揮する。そ
の反面このプロテオグリカンは有意な程度のNK細胞刺激
活性を有していない。ワクチン処方におけるそのアジュ
バントとしての諸例が記載されている。
1982年３月９日出願にかかるフランス特許第82/03921
号は、上記ブロテオグリカンからリゾチームの作用を介
して分子量200,000〜400,000ダルトンのプロテオグリカ
ン画分を製造する方法について記載している。このプロ
テオグリカン画分は、内生インタフェロンの誘起を介し
てNK細胞を強く刺激するという新規な特性を有してい
る。その反面この画分は上記毒性を除去したプロテオグ
リカンが有するアジュバント特性を有しない。
号は、上記ブロテオグリカンからリゾチームの作用を介
して分子量200,000〜400,000ダルトンのプロテオグリカ
ン画分を製造する方法について記載している。このプロ
テオグリカン画分は、内生インタフェロンの誘起を介し
てNK細胞を強く刺激するという新規な特性を有してい
る。その反面この画分は上記毒性を除去したプロテオグ
リカンが有するアジュバント特性を有しない。
本発明は、特に細菌由来の膜から得られる新規な化合
物に関する。それは分子量が80,000〜100,000ダルトン
であり、凍結乾燥した状態で次の組成を有するものであ
る。
物に関する。それは分子量が80,000〜100,000ダルトン
であり、凍結乾燥した状態で次の組成を有するものであ
る。
ガラクトース成分 66±６％ ガラクトース以外のヘキソース成分 ＜１％ ヘキソサミン（グルコサミン）成分 8.5±２％ アミノ酸成分 ５±２％ 脂肪酸成分 ＜１％ 核酸成分 ＜0.005％ タン白質成分 ＜0.3％ 細菌の可溶性膜プロテオグリカンから得たこの新規な
多糖の特徴は、その低い分子量（9,000±10,000）およ
びその特殊な組成である。実質的にそれはただ１つずつ
のヘキソース，ガラクトース，ヘキソサミン，グルコサ
ミンを含みこれらに分析されたアミノ酸に対応するペプ
チドが結合している。またこの多糖は脂肪酸，核酸およ
びタン白質が実質上取除かれており、明瞭に定義される
成生物であり、その構造も特定することが可能であっ
た。
多糖の特徴は、その低い分子量（9,000±10,000）およ
びその特殊な組成である。実質的にそれはただ１つずつ
のヘキソース，ガラクトース，ヘキソサミン，グルコサ
ミンを含みこれらに分析されたアミノ酸に対応するペプ
チドが結合している。またこの多糖は脂肪酸，核酸およ
びタン白質が実質上取除かれており、明瞭に定義される
成生物であり、その構造も特定することが可能であっ
た。
過ヨウ素酸化，メチル化，質量分析とガスクロマトグ
ラフィーの組合せ、NMR等の古典的方法によりこの多糖
の構造を研究した結果、その構成成分の配列がより正確
に判った。
ラフィーの組合せ、NMR等の古典的方法によりこの多糖
の構造を研究した結果、その構成成分の配列がより正確
に判った。
その結果はこの多糖が次の構造を有するモノマー単位
の反復結合からなることを示している。
の反復結合からなることを示している。
ただしGalf＝ガラクトフラノース Galp＝ガラクトピラノース （α型およびβ型） このモノマー構造は次の構造式に相当する。
上記多糖は種々の方法によって製造することができ
る。
る。
本発明によれば、細菌の膜多糖を調整する好ましい方
法は次の工程を含む。
法は次の工程を含む。
ａ）グラム陰性菌の株から出発し、水溶性プロテオグリ
カンをその膜から抽出する工程 ｂ）該水溶性プロテオグリカンから分子量が80,000と10
0,000との間の多糖を単離する工程 ｃ）所望により該単離された多糖の画分からタン白質を
除去することにより該単離された多糖を精製する工程 使用可能なグラム陰性菌としては、たとえばKlebsiel
la pneumoniae,Serratia marcescensおよびEscherichia
coliを挙げることができる。特に、Klebsiella pneumo
niseについてはコレクション、ナショナル、ド、クルチ
ュール、ド、ミクロオルガニズム（Collection Nationa
le de Culture de Microorganismes（CNCM））に寄託番
号145-I-IPとして寄託されている。
カンをその膜から抽出する工程 ｂ）該水溶性プロテオグリカンから分子量が80,000と10
0,000との間の多糖を単離する工程 ｃ）所望により該単離された多糖の画分からタン白質を
除去することにより該単離された多糖を精製する工程 使用可能なグラム陰性菌としては、たとえばKlebsiel
la pneumoniae,Serratia marcescensおよびEscherichia
coliを挙げることができる。特に、Klebsiella pneumo
niseについてはコレクション、ナショナル、ド、クルチ
ュール、ド、ミクロオルガニズム（Collection Nationa
le de Culture de Microorganismes（CNCM））に寄託番
号145-I-IPとして寄託されている。
可溶性プロテオグリカンは公知技術特にフランス特許
第78/35649号に記載された方法により、得られた粗膜プ
ロテオグリカンを可溶化することによって調整すること
が望ましい。この方法は数度の遠心分離を行うことによ
って基礎細胞調整物から膜を除去するものである。
第78/35649号に記載された方法により、得られた粗膜プ
ロテオグリカンを可溶化することによって調整すること
が望ましい。この方法は数度の遠心分離を行うことによ
って基礎細胞調整物から膜を除去するものである。
こうして得られた粗プロテオグリカンを塩基、特に水
酸化アルカリ金属、好ましくはモル濃度0.3〜1M、好ま
しくは0.5Mの水酸化ナトリウムで処理する。この処理は
50℃〜60℃たとえば56℃で数時間たとえば１時間好まし
くは攪拌しながら継続して行う。
酸化アルカリ金属、好ましくはモル濃度0.3〜1M、好ま
しくは0.5Mの水酸化ナトリウムで処理する。この処理は
50℃〜60℃たとえば56℃で数時間たとえば１時間好まし
くは攪拌しながら継続して行う。
上記フランス特許78/35649号に記載された方法に比べ
て、この培地は粗プロテオグリカンをより完全に加水分
解させるため塩基性が強い。
て、この培地は粗プロテオグリカンをより完全に加水分
解させるため塩基性が強い。
過剰な試薬を除去するため、懸濁液は冷却後たとえば
塩酸等の酸で中和し、次いでたとえば60分,30,000gの遠
心分離等の方法により不溶性残基を沈降させて除去する
ことにより清澄なものとする。
塩酸等の酸で中和し、次いでたとえば60分,30,000gの遠
心分離等の方法により不溶性残基を沈降させて除去する
ことにより清澄なものとする。
可溶性プロテオグリカンを構成する上清を採集し凍結
乾燥する。
乾燥する。
この上清から分画法（fractionation process）好ま
しくはクロマトグラフィー分画により所望の分子量を有
する細菌由来膜多糖を単離する。分子量80,000〜100,00
0の多糖を含むカラム溶離物が得られる。
しくはクロマトグラフィー分画により所望の分子量を有
する細菌由来膜多糖を単離する。分子量80,000〜100,00
0の多糖を含むカラム溶離物が得られる。
このクロマトグラフィー分画はSepharose CL-2B等の
アガロース樹脂を用いて行うことができるが、他の分画
方法を使用してもよい。
アガロース樹脂を用いて行うことができるが、他の分画
方法を使用してもよい。
本発明の１実施例においては、次にこの多糖を精製す
ることができる。この精製は特に単離した多糖の分子量
に近い分子量のタン白質を除去することによって行う。
タン白質はたとえば、酵素加水分解、特にプロティナー
ゼの作用による加水分解の後多糖を分画法好ましくはク
ロマトグラフィー分画により分離することによって行わ
れる。
ることができる。この精製は特に単離した多糖の分子量
に近い分子量のタン白質を除去することによって行う。
タン白質はたとえば、酵素加水分解、特にプロティナー
ゼの作用による加水分解の後多糖を分画法好ましくはク
ロマトグラフィー分画により分離することによって行わ
れる。
次いで多糖を含む画分を収集し、所望により凍結乾燥
する。凍結乾燥した画分は本発明の多糖を構成する。
する。凍結乾燥した画分は本発明の多糖を構成する。
本発明はまたこのようなプロテオグリカンを単独でま
たはワクチン剤と組合せて薬剤として使用する使用に関
する。
たはワクチン剤と組合せて薬剤として使用する使用に関
する。
要するに本発明の多糖は免疫刺激特性を有するもので
あり、その主要な特性は次のとおりである。
あり、その主要な特性は次のとおりである。
○非常に僅小な投与量たるワクチン特にリボソームワク
チンに対するアジュバント力 ○インビトロおよびインビボにおいてNK細胞を刺激する
高い能力 かくしてマウスのインビボでのMaloneyリンパ腫（Mal
oney's lymphoma（YAC-1細胞）に対して上記多糖がNK細
胞を強く活性化することが示された。
チンに対するアジュバント力 ○インビトロおよびインビボにおいてNK細胞を刺激する
高い能力 かくしてマウスのインビボでのMaloneyリンパ腫（Mal
oney's lymphoma（YAC-1細胞）に対して上記多糖がNK細
胞を強く活性化することが示された。
さらに、ワクチン、特にリボソームワクチンすなわち
ワクチン剤がリボソームからなるワクチンに対するアジ
ュバント特性が示されたが、上記多糖は他のワクチンに
も使用しうるものである。
ワクチン剤がリボソームからなるワクチンに対するアジ
ュバント特性が示されたが、上記多糖は他のワクチンに
も使用しうるものである。
上記諸特性を考慮に入れると、薬剤としての組成と使
用投与量は広範囲にわたることは明らかである。NK細胞
の活性化は標的細胞と患者の状態に事実上かなり依存す
ることがある。同様にアジュバントの場合は、アジュバ
ントとワクチン剤との比率および投与量は最適条件研究
のみによって決定することができる。
用投与量は広範囲にわたることは明らかである。NK細胞
の活性化は標的細胞と患者の状態に事実上かなり依存す
ることがある。同様にアジュバントの場合は、アジュバ
ントとワクチン剤との比率および投与量は最適条件研究
のみによって決定することができる。
実施例１ 粗膜プロテオグリカンの単離 Klebsiella pneumoniae株CNCM寄託番号145-I-IPのバ
イオマスを0.15M NaClを含む氷冷したpH7の0.01Mトリス
HCl緩衝液に分散し、次いで細胞壁を破砕するため機械
的磨砕にかける。
イオマスを0.15M NaClを含む氷冷したpH7の0.01Mトリス
HCl緩衝液に分散し、次いで細胞壁を破砕するため機械
的磨砕にかける。
細菌分解物を10分間7.500gで遠心分離し、次いで上清
を60分間30,000gで遠心分離する。
を60分間30,000gで遠心分離する。
ペレットを0.15M NaCl水溶液に分散する。得られた懸
濁液を10分間7,500gで再度清澄化し、次いで45分間30,0
00gで遠心分離する。
濁液を10分間7,500gで再度清澄化し、次いで45分間30,0
00gで遠心分離する。
ペレットを蒸溜水中に取上げ再度7,500g、次いで30,0
00gの遠心分離にかける。
00gの遠心分離にかける。
次いで、粗膜プロテインを最初の体積の1/4の無菌蒸
溜水中に取上げ、懸濁液を10分間7.500gで清澄化し、上
清を凍結乾燥する。
溜水中に取上げ、懸濁液を10分間7.500gで清澄化し、上
清を凍結乾燥する。
実施例２ 可溶性膜プロテオグリカンの調整 上記凍結乾燥した粗膜プロテオグリカンをNaOH（0.5
M）中に溶解し56℃で一時間加水分解する。冷却後懸濁
液をHClで中和する。次いで懸濁液を60分間30,000gで遠
心分離することによって清澄化し、上清を収集する。炉
液は凍結乾燥する。
M）中に溶解し56℃で一時間加水分解する。冷却後懸濁
液をHClで中和する。次いで懸濁液を60分間30,000gで遠
心分離することによって清澄化し、上清を収集する。炉
液は凍結乾燥する。
実施例３ クロマトグラフィー分画により多糖の単離 上記凍結乾燥物を0.01MトリスHCl緩衝液（pH7）に分
散し、次いで同じ緩衝液中で平衡化したSepharose CL-2
B（スウェーデンPharmacia）（特定孔径のアガロースゲ
ル）のカラム（60×2.6cm）上で最初のクロマトグラフ
ィー分画にかける。
散し、次いで同じ緩衝液中で平衡化したSepharose CL-2
B（スウェーデンPharmacia）（特定孔径のアガロースゲ
ル）のカラム（60×2.6cm）上で最初のクロマトグラフ
ィー分画にかける。
第１図はこの段階で得られたクロマトグラフィー分離
の１例を示すものであり、多糖のピークの正確な局在化
が破線で示されている。
の１例を示すものであり、多糖のピークの正確な局在化
が破線で示されている。
このクロマトグラム上で、多糖のピーク値ははるかに
大きい分子量のカラム溶離物のピーク値から完全に分離
しており、多糖の後に溶離する多糖に近い低い分子量を
有するタン白質画分の組合せからは不完全に分離してい
る。
大きい分子量のカラム溶離物のピーク値から完全に分離
しており、多糖の後に溶離する多糖に近い低い分子量を
有するタン白質画分の組合せからは不完全に分離してい
る。
多糖を含む溶離画分を収集し蒸溜水に対し透析した後
凍結乾燥する。
凍結乾燥する。
この画分はまだ僅かに多糖の分子量（70,000〜100,00
0）に近い分子量の各種タン白質を含んでいる。これら
タン白質を最後のクロマトグラフィー分画にかける前に
酵素の作用により加水分解する。
0）に近い分子量の各種タン白質を含んでいる。これら
タン白質を最後のクロマトグラフィー分画にかける前に
酵素の作用により加水分解する。
実施例４ 残留タン白質の酵素加水分解 上記凍結乾燥物を1.1mM EDTAを20mg/mlの割合で含むp
H3の0.01MトリスHCl緩衝液に溶解する。次にこの溶液に
プロテナーゼＫ（Tritirachiumアルバムのタン白質分解
酵素）50mg/mlを添加し、攪拌しつつ37℃で２時間イン
キュベートする。
H3の0.01MトリスHCl緩衝液に溶解する。次にこの溶液に
プロテナーゼＫ（Tritirachiumアルバムのタン白質分解
酵素）50mg/mlを添加し、攪拌しつつ37℃で２時間イン
キュベートする。
実施例５ クロマトグラフィー分画による多糖の精製 上記タン白質分解によって分子量が減った混合タン白
質をSephacryl S-200（スウェーデンPharmacia）（所定
孔径のポリアクリルアミドゲル）上でクロマトグラフィ
ー分画することにより多糖から分離する。
質をSephacryl S-200（スウェーデンPharmacia）（所定
孔径のポリアクリルアミドゲル）上でクロマトグラフィ
ー分画することにより多糖から分離する。
第２図はこの段階で得られるクロマトグラフィー分離
の１例を示す。
の１例を示す。
このクロマトグラムにおいて、破線で示す多糖のピー
ク地は実線で示す加水分解されたタン白質のピーク値か
ら今や完全に分離しており、このタン白質のカラムから
の溶離は多糖に比べて非常に遅れていることが示されて
いる。
ク地は実線で示す加水分解されたタン白質のピーク値か
ら今や完全に分離しており、このタン白質のカラムから
の溶離は多糖に比べて非常に遅れていることが示されて
いる。
純粋な多糖を含む画分を収集し、濃縮し、カットオフ
しきい値10,000ダルトンの膜を使用して蒸溜水に対し連
続的に透析し、0.2μの膜で濾過することによって滅菌
する。
しきい値10,000ダルトンの膜を使用して蒸溜水に対し連
続的に透析し、0.2μの膜で濾過することによって滅菌
する。
こうして得られた凍結乾燥物は本発明の対象であるKl
ebsiella pneumoniaeの多糖を構成する。
ebsiella pneumoniaeの多糖を構成する。
実施例６ インビトロでのNK細胞の活性化 操作 ウシ胎児血清５％を添加したRPMI1640培地1mlにつき1
07の正常マウス脾臓細胞を用意する。
07の正常マウス脾臓細胞を用意する。
多糖の量を種々に変えてCO2インキュベーター中で37
℃でインキュベートする。
℃でインキュベートする。
標的細胞としてNK細胞に感受性を有する51Cr標識YAC-
1細胞（マロニーリンパ腫）を用いる。
1細胞（マロニーリンパ腫）を用いる。
エフェクター細胞／標的細胞比率200:1,100:1,50:1で
４時間インキュベートした時に放出される51Crを計測す
ることによって標的細胞の分解を測定する。
４時間インキュベートした時に放出される51Crを計測す
ることによって標的細胞の分解を測定する。
結果 結果はきわめて明らかであり、投与量１μg/ml以上か
ら標的細胞分解率（Ｐ＜0.01）の非常に顕著な増加を示
している。
ら標的細胞分解率（Ｐ＜0.01）の非常に顕著な増加を示
している。
第３図はこの研究において得られた結果の１例を示
す。
す。
実施例７ マウスの腹腔内でのインビボでのNK細胞の活性化 操作 動物:4カ月ないし５カ月のCBA/Jマウス 標的細胞:NK細胞に対し感受性を有するYAC-1（マロニー
リンパ腫） NK活性測定の３日前に緩衝生理食塩水0.2ml中に50μ
ｇの投与量で多糖を腹腔内に注射する。対照マウスに対
しては同一条件で生理食塩水のみを与える。
リンパ腫） NK活性測定の３日前に緩衝生理食塩水0.2ml中に50μ
ｇの投与量で多糖を腹腔内に注射する。対照マウスに対
しては同一条件で生理食塩水のみを与える。
脾臓細胞を取出し、上記のようにエフエクター細胞／
標的細胞比率200:1,100:1,50:1,25:1で51Cr−標識細胞
とともに４時間インキュベートする。放出された51Crを
計測することにより分解した標的細胞の百分比を測る。
標的細胞比率200:1,100:1,50:1,25:1で51Cr−標識細胞
とともに４時間インキュベートする。放出された51Crを
計測することにより分解した標的細胞の百分比を測る。
第４図はこの研究において得られた結果の１例を示
す。
す。
実施例８ 多糖のアジュバント特性 Streptococcus pyogenesグループＡリボソーム抗原に
関する多糖のアジュバント特性の研究例 原理 マウスを一定投与量のStreptococcus pyogenesリボソ
ームで免疫し、このリボソームには異る投与量の多糖を
添加しておく。次いでELISA法により各リポソームに対
する特異的な抗体反応を測定する。
関する多糖のアジュバント特性の研究例 原理 マウスを一定投与量のStreptococcus pyogenesリボソ
ームで免疫し、このリボソームには異る投与量の多糖を
添加しておく。次いでELISA法により各リポソームに対
する特異的な抗体反応を測定する。
対照グループの１つは生理食塩水で処理し、他の１つ
は標準投与量のKlebsiella pneumouiae粗膜プロテオグ
リカン（粗MPG）で処理する。
は標準投与量のKlebsiella pneumouiae粗膜プロテオグ
リカン（粗MPG）で処理する。
操作 生後８週間のメスNMRIマウス10匹で９バッチを用意す
る。各マウスは15日間で５回の注射を受ける。
る。各マウスは15日間で５回の注射を受ける。
バッチ1:生理食塩水 バッチ2:リボソーム10μｇ＋多糖 0.05 μｇ バッチ3: 〃 10μｇ＋〃 0.1 μｇ バッチ4: 〃 10μｇ＋〃 0.5 μｇ バッチ5: 〃 10μｇ＋〃 1.0 μｇ バッチ6: 〃 10μｇ＋〃 2.5 μｇ バッチ7: 〃 10μｇ＋〃 5.0 μｇ バッチ8: 〃 10μｇ＋〃 10.0 μｇ バッチ9: 〃 10μｇ＋粗MPG 15.0 μｇ 21日目にマウスから採血し、ELISA法によりStreptococc
us pyogenesに対する抗体の力価を決定する。
us pyogenesに対する抗体の力価を決定する。
その結果は、血清の最終希釈液はELISA法において正
反応を示しており、第５図の柱状図として示されてい
る。
反応を示しており、第５図の柱状図として示されてい
る。
結果 第５図は抗原と組合わされた多糖の投与量の関数とし
ての特異的な抗体反応のELISA測定法による測定結果を
示す柱状図である 抗原：各注射あたりS.pyogenes10μｇ その結果は多糖2.5μｇの投与量は粗MPG 15μｇ中の
投与量に匹敵するアジュバント効果を有すること、すな
わち上記条件において６倍の特異的活性を有することを
示している。
ての特異的な抗体反応のELISA測定法による測定結果を
示す柱状図である 抗原：各注射あたりS.pyogenes10μｇ その結果は多糖2.5μｇの投与量は粗MPG 15μｇ中の
投与量に匹敵するアジュバント効果を有すること、すな
わち上記条件において６倍の特異的活性を有することを
示している。
添付図面において、第１図は0.5N NaOHで加水分解した
プロテオグリカンのSepharose CL-28上でのクロマトグ
ラフィー曲線を示す図、第２図はプロティナーゼで処理
した多糖のSephacry1 S-200上でのクロマトグラフィー
曲線を示す図、第３図はインビトロでのNK細胞活性（実
施例６）を示す図、第４図はインビボでのNK細胞活性
（実施例７）を示す図、第５図は実施例８で得られるEL
ISA測定法の柱状図を示す図である。
プロテオグリカンのSepharose CL-28上でのクロマトグ
ラフィー曲線を示す図、第２図はプロティナーゼで処理
した多糖のSephacry1 S-200上でのクロマトグラフィー
曲線を示す図、第３図はインビトロでのNK細胞活性（実
施例６）を示す図、第４図はインビボでのNK細胞活性
（実施例７）を示す図、第５図は実施例８で得られるEL
ISA測定法の柱状図を示す図である。
Claims (11)
- 【請求項１】次の定量分析組成を有し分子量が90,0000
±10,000であるKlebsiella属に属する細菌由来の膜多
糖。 ガラクトース成分 66±６％ ガラクトース以外のヘキソース成分 ＜１％ ヘキソサミン（グルコサミン）成分 8.5±２％ アミノ酸成分 ５±２％ 脂肪酸成分 ＜１％ 核酸成分 ＜0.005％ タン白質成分 ＜0.3％。 - 【請求項２】次のモノマーによって規定されるポリマー
構造の請求項１記載の膜多糖。 ただしGalf＝ガラクトフラノース Galp＝ガラクトピラノース （α型およびβ型）。 - 【請求項３】該モノマーは次の構造式で表される特許請
求の範囲第２項記載の多糖。 - 【請求項４】次の工程を含むKlebsiella属に属する細菌
由来の膜多糖を調整する方法。 ａ）グラム陰性菌の株から出発し、水溶性プロテオグリ
カンをその膜から抽出する工程 ｂ）該水溶性プロテオグリカンから分子量が80,000と10
0,000との間の多糖を単離する工程 ｃ）所望により該単離された多糖の画分からタン白質を
除去することにより該単離された多糖を精製する工程 - 【請求項５】該グラム陰性菌はKlebsiella pneumoniae
である特許請求の範囲第４項記載の方法。 - 【請求項６】該水溶性プロテオグリカンを得る前記の工
程ａ）において、粗膜プロテオグリカンを塩基で処理し
水溶性中に存在する可溶性プロテオグリカンを回収する
特許請求の範囲第４項または第５項記載の方法。 - 【請求項７】前記工程ａ）において使用される塩基は濃
度0.3M-1Mの水酸化アルカリ金属である特許請求の範囲
第４項ないし第６項のいずれかに記載の方法。 - 【請求項８】前記工程ｂ）において、前記多糖はクロマ
トグラフィー分画により分子量80,000と100,000との間
の多糖を含む溶離画分を収集することによって単離され
る特許請求の範囲第４項ないし第７項のいずれかに記載
の方法。 - 【請求項９】前記工程ｃ）において、単離画分中に存在
するタン白質をプロティナーゼの作用によって除去した
後クロマトグラフィー分画を行い、次いで分子量が80,0
00と100,000との間の多糖を含む溶離画分を収集する特
許請求の範囲第４項ないし第８項のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項１０】次の定量分析組成を有し分子量が90,000
0±10,000であるKlebsiella属に属する細菌由来の膜多
糖を含む免疫刺激剤。 ガラクトース成分 66±６％ ガラクトース以外のヘキソース成分 ＜１％ ヘキソサミン（グルコサミン）成分 8.5±２％ アミノ酸成分 ５±２％ 脂肪酸成分 ＜１％ 核酸成分 ＜0.005％ タン白質成分 ＜0.3％。 - 【請求項１１】次の定量分析組成を有し分子量が90,000
0±10,000であるKlebsiella属に属する細菌由来の膜多
糖およびワクチン剤を含む薬剤。 ガラクトース成分 66±６％ ガラクトース以外のヘキソース成分 ＜１％ ヘキソサミン（グルコサミン）成分 8.5±２％ アミノ酸成分 ５±２％ 脂肪酸成分 ＜１％ 核酸成分 ＜0.005％ タン白質成分 ＜0.3％。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8413844 | 1984-09-10 | ||
| FR8413844A FR2570081B1 (fr) | 1984-09-10 | 1984-09-10 | Polysaccharides membranaires utiles notamment comme medicament et procede pour leur preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6176420A JPS6176420A (ja) | 1986-04-18 |
| JP2521428B2 true JP2521428B2 (ja) | 1996-08-07 |
Family
ID=9307567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60198699A Expired - Lifetime JP2521428B2 (ja) | 1984-09-10 | 1985-09-10 | 膜多糖およびその製造方法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4734403A (ja) |
| EP (1) | EP0179679B1 (ja) |
| JP (1) | JP2521428B2 (ja) |
| AT (1) | ATE41785T1 (ja) |
| AU (1) | AU571349B2 (ja) |
| CA (1) | CA1259045A (ja) |
| DE (1) | DE3569122D1 (ja) |
| ES (1) | ES8605041A1 (ja) |
| FR (1) | FR2570081B1 (ja) |
| ZA (1) | ZA856804B (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0240098A3 (en) * | 1986-04-04 | 1989-05-10 | Kabushiki Kaisha Ueno Seiyaku Oyo Kenkyujo | Oligo and polysaccharides for the treatment of diseases caused by retroviruses |
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