JP2517956B2 - 血糖低下剤 - Google Patents
血糖低下剤Info
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- buf
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は血糖低下剤に関する。
従来の技術 従来、糖尿病治療には、経口糖尿病薬およびインスリ
ン療法が用いられている。経口糖尿病薬としては、主と
してインスリン分泌促進を介して血糖降下作用を発現す
るスルフォニル尿素剤と、主として糖代謝系を介して血
糖降下作用を示すビグアナイド剤とが汎用されている
が、副作用の点等から必ずしも満足すべきものではな
い。また、インスリン療法は、厳密な血糖制御を必要と
する糖尿病患者に用いられている。インスリンは血糖低
下作用の持続時間が短いため、臨床的にはインスリン頻
回注射療法およびインスリン皮下持続注入療法がインス
リン療法として使用されている。しかし、これは患者に
とって苦痛であるうえ、低血糖、アレルギー、注射部位
の脂肪の萎縮などの副作用を伴うことが知られている。
ン療法が用いられている。経口糖尿病薬としては、主と
してインスリン分泌促進を介して血糖降下作用を発現す
るスルフォニル尿素剤と、主として糖代謝系を介して血
糖降下作用を示すビグアナイド剤とが汎用されている
が、副作用の点等から必ずしも満足すべきものではな
い。また、インスリン療法は、厳密な血糖制御を必要と
する糖尿病患者に用いられている。インスリンは血糖低
下作用の持続時間が短いため、臨床的にはインスリン頻
回注射療法およびインスリン皮下持続注入療法がインス
リン療法として使用されている。しかし、これは患者に
とって苦痛であるうえ、低血糖、アレルギー、注射部位
の脂肪の萎縮などの副作用を伴うことが知られている。
発明が解決しようとする問題点 血糖低下剤として、持効性に優れ、副作用の少ないも
のが望まれている。本発明の課題は、このような条件を
満たし、糖尿病の治療に役立つ有効因子を、ヒト細胞の
産生する種々の蛋白質の中から見つけ出し、新規な血糖
低下剤を提供することにある。
のが望まれている。本発明の課題は、このような条件を
満たし、糖尿病の治療に役立つ有効因子を、ヒト細胞の
産生する種々の蛋白質の中から見つけ出し、新規な血糖
低下剤を提供することにある。
問題を解決するための手段 本発明者等は叙上の問題点を解決するため種々のヒト
細胞の生産物について血糖低下作用物質を検索した結
果、ヒト悪性単球細胞を特定の分化誘導物質の共存下で
培養することによって生産されるポリペプチドBUF−３
がマウスの血糖を低下する作用を有することを見出し、
本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の糖尿病
治療剤は下記の理化学的性質を有するポリペプチドBUF
−３を有効成分として含有することを特徴とする。
細胞の生産物について血糖低下作用物質を検索した結
果、ヒト悪性単球細胞を特定の分化誘導物質の共存下で
培養することによって生産されるポリペプチドBUF−３
がマウスの血糖を低下する作用を有することを見出し、
本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の糖尿病
治療剤は下記の理化学的性質を有するポリペプチドBUF
−３を有効成分として含有することを特徴とする。
（１）分子量；単量体として15,500±500ダルトン （SDS−電気泳動法） 相同のポリペプチドからなる２量体 （２）等電点:pI6.3±0.2（クロマトフォーカシング
法） （３）pH安定性:pH2.0〜10.0の範囲で安定 （４）熱安定性:65℃、60分の加熱で安定 （５）プロテアーゼ耐性：プロナーゼ処理で失活 （６）全アミノ酸配列 尚、本発明に係るポリペプチドBUF−３（以下、BUF−
３と略する）とは、上記アミノ酸配列を有するポリペプ
チド以外にも血糖低下作用を有すれば、上記アミノ酸配
列中の１個又は複数のアミノ酸を他のアミノ酸に置きか
えた構造のポリペプチド及び上記配列において１個もし
くは複数個のアミノ酸がＮ末端又はＣ末端に付加された
ポリペプチド、更には、上記配列のＮ末端又はＣ末端よ
り１個もしくは複数のアミノ酸が欠損し、かつ連続して
いるアミノ酸配列よりなるポリペプチドも含まれる。
法） （３）pH安定性:pH2.0〜10.0の範囲で安定 （４）熱安定性:65℃、60分の加熱で安定 （５）プロテアーゼ耐性：プロナーゼ処理で失活 （６）全アミノ酸配列 尚、本発明に係るポリペプチドBUF−３（以下、BUF−
３と略する）とは、上記アミノ酸配列を有するポリペプ
チド以外にも血糖低下作用を有すれば、上記アミノ酸配
列中の１個又は複数のアミノ酸を他のアミノ酸に置きか
えた構造のポリペプチド及び上記配列において１個もし
くは複数個のアミノ酸がＮ末端又はＣ末端に付加された
ポリペプチド、更には、上記配列のＮ末端又はＣ末端よ
り１個もしくは複数のアミノ酸が欠損し、かつ連続して
いるアミノ酸配列よりなるポリペプチドも含まれる。
BUF−３はマウスフレンドウイルス誘発白血病細胞F5
−５に対する分化誘導作用を指標に精製されたポリペプ
チドである。
−５に対する分化誘導作用を指標に精製されたポリペプ
チドである。
また、BUF−３はマウス白血病細胞を正常細胞に分化
成熟せしめる活性（特願昭61−150033、特願昭61−2554
98）以外にも、貧血防止作用（特願昭60−197276）及び
卵胞刺激ホルモン分泌作用（Nature,321,776−779,（19
86））を合せもつ有用な物質である。
成熟せしめる活性（特願昭61−150033、特願昭61−2554
98）以外にも、貧血防止作用（特願昭60−197276）及び
卵胞刺激ホルモン分泌作用（Nature,321,776−779,（19
86））を合せもつ有用な物質である。
さて、本発明のBUF−３を有効成分とする血糖低下剤
は、動物実験で優れた持効性血糖低下作用を有し、ま
た、マウス及びヒトの培養細胞に対して毒性を示さない
ことより、ヒト糖尿病の予防、治療に有効であると考え
られる。
は、動物実験で優れた持効性血糖低下作用を有し、ま
た、マウス及びヒトの培養細胞に対して毒性を示さない
ことより、ヒト糖尿病の予防、治療に有効であると考え
られる。
本発明の血糖低下剤は主として非経口的（静脈内、皮
下、筋肉内、経皮、経粘膜）に投与される。前記有効成
分BUF−３の投与量は症状により異るが、通常成人当り
0.05mg〜25mgの用量範囲で一般に１回ないし数回に分け
て投与すればよい。従って一日当りの投与量は約0.05〜
50mgである。もちろん、投与量は患者の血糖値、病状、
患者の体重及び当業者が認める他の因子によって変化す
るので、上記投与量を厳守する必要はなく、臨機応変に
決定すればよい。
下、筋肉内、経皮、経粘膜）に投与される。前記有効成
分BUF−３の投与量は症状により異るが、通常成人当り
0.05mg〜25mgの用量範囲で一般に１回ないし数回に分け
て投与すればよい。従って一日当りの投与量は約0.05〜
50mgである。もちろん、投与量は患者の血糖値、病状、
患者の体重及び当業者が認める他の因子によって変化す
るので、上記投与量を厳守する必要はなく、臨機応変に
決定すればよい。
本発明に使用するBUF−３の製剤化は通常の方法によ
って行われ、主として注射剤とされるが、他にカプセル
剤、錠剤等の剤型へ製剤化される。注射剤を調製する場
合には主薬のBUF−３に必要によりpH調整剤、緩衝剤、
安定化剤、保存剤などを添加し常法により静脈内、皮
下、筋肉内用注射剤とすればよい。又、経口用製剤を調
製する場合はBUF−３に賦形剤、さらに必要に応じて、
結合剤、崩壊剤、着色剤等を加え常法により錠剤、カプ
セル剤等とする。
って行われ、主として注射剤とされるが、他にカプセル
剤、錠剤等の剤型へ製剤化される。注射剤を調製する場
合には主薬のBUF−３に必要によりpH調整剤、緩衝剤、
安定化剤、保存剤などを添加し常法により静脈内、皮
下、筋肉内用注射剤とすればよい。又、経口用製剤を調
製する場合はBUF−３に賦形剤、さらに必要に応じて、
結合剤、崩壊剤、着色剤等を加え常法により錠剤、カプ
セル剤等とする。
次に血糖低下作用を有するBUF−３の製造法につい
て、以下に説明する。BUF−３を産生するヒト悪性化単
球細胞としては、ヒト白血病細胞又はヒト骨髄細胞を人
為的に悪性化させたもので、より具体的に例示すれば次
のようなものが有る。ヒト慢性骨髄性白血病細胞（Ｕ−
937 ATCC CRL 1593.Int.J.Cancer 17:565（1976）,K56
2,Blood 45:321（1975））、急性単球性白血病細胞（TH
P−1,Int.J.Cancer 26:171−176（1980））。もちろ
ん、BUF−３を生産していれば、上記以外のヒト白血病
細胞を用いてもかまわない。さて特定の分化誘導物質
は、悪性化単球細胞と接触させた時、この細胞をマクロ
ファージ、顆粒球の単球細胞に分化誘導させると共に、
BUF−３を生産せしめる作用を有する物質であり、具体
的にはアクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、コンカ
ナバリンＡ及びホルボールエステル（TPA）等の特定の
分化誘導物質である。
て、以下に説明する。BUF−３を産生するヒト悪性化単
球細胞としては、ヒト白血病細胞又はヒト骨髄細胞を人
為的に悪性化させたもので、より具体的に例示すれば次
のようなものが有る。ヒト慢性骨髄性白血病細胞（Ｕ−
937 ATCC CRL 1593.Int.J.Cancer 17:565（1976）,K56
2,Blood 45:321（1975））、急性単球性白血病細胞（TH
P−1,Int.J.Cancer 26:171−176（1980））。もちろ
ん、BUF−３を生産していれば、上記以外のヒト白血病
細胞を用いてもかまわない。さて特定の分化誘導物質
は、悪性化単球細胞と接触させた時、この細胞をマクロ
ファージ、顆粒球の単球細胞に分化誘導させると共に、
BUF−３を生産せしめる作用を有する物質であり、具体
的にはアクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、コンカ
ナバリンＡ及びホルボールエステル（TPA）等の特定の
分化誘導物質である。
本発明のBUF−３を生成せしめる方法は、悪性化単球
細胞を少くとも１種又は２種以上の上記特定の分化誘導
物質の共存下で培養することによりなされ、BUF−３は
培養液中（細胞外）に産生される。
細胞を少くとも１種又は２種以上の上記特定の分化誘導
物質の共存下で培養することによりなされ、BUF−３は
培養液中（細胞外）に産生される。
悪性化単球細胞を培養する培地は、動物細胞を培養す
る通常の培地が用いられる。例を挙げれば、ローズウェ
ル・パーク・メモリアル・インスティテュート1640培地
（Roswell Park Memorial Institute 1640、以下RPMI−
1640と略す。）が好適である。
る通常の培地が用いられる。例を挙げれば、ローズウェ
ル・パーク・メモリアル・インスティテュート1640培地
（Roswell Park Memorial Institute 1640、以下RPMI−
1640と略す。）が好適である。
悪性化単球細胞の培養は、通常１〜５×106個/mlの細
胞密度で、35〜38℃にて４〜６％の炭酸ガス気流中でゆ
るやかに撹拌しつつ行われる。特定の分化誘導物質は、
通常培養の最初より培地に添加しても良く又培養の途中
から添加しても良い。添加量は分化誘導物質の種類によ
って異なるがアクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ等
の場合には0.1〜10μg/ml、TPAの場合には１〜500μg/m
lである。このようにして１〜５日間培養するとBUF−３
は培養液中に蓄積される。
胞密度で、35〜38℃にて４〜６％の炭酸ガス気流中でゆ
るやかに撹拌しつつ行われる。特定の分化誘導物質は、
通常培養の最初より培地に添加しても良く又培養の途中
から添加しても良い。添加量は分化誘導物質の種類によ
って異なるがアクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ等
の場合には0.1〜10μg/ml、TPAの場合には１〜500μg/m
lである。このようにして１〜５日間培養するとBUF−３
は培養液中に蓄積される。
BUF−３は、血糖低下作用以外にもFriendウイルス誘
発白血病細胞F5−５（Bibl.Haemat.,43,37（1976））に
対する分化誘導作用を有するので、この作用を利用して
BUF−３の定性及び定量分析ができ、F5−５を用いる分
析は、Proc.Natl.Acad.Sci.,71,98,（1975）に記載の方
法に従って行われる。又活性の表示はF5−５細胞分化が
明瞭に確認される検体原液の稀釈率の逆数の値を原液1.
0ml当りの活性とする。この発明方法でBUF−３を生産し
た時、培養液は４〜1000単位/mlの活性を示す。また上
記方法以外の方法、例えばBUF−３をコードする遺伝子
を含有するプラスミドにより形質転換された真核生物細
胞を培養液中で培養し、培養液中に該BUF−３を製造せ
しめるという方法（昭和62年２月23日出願、出願人、味
の素（株））をもちいてもかまわない。
発白血病細胞F5−５（Bibl.Haemat.,43,37（1976））に
対する分化誘導作用を有するので、この作用を利用して
BUF−３の定性及び定量分析ができ、F5−５を用いる分
析は、Proc.Natl.Acad.Sci.,71,98,（1975）に記載の方
法に従って行われる。又活性の表示はF5−５細胞分化が
明瞭に確認される検体原液の稀釈率の逆数の値を原液1.
0ml当りの活性とする。この発明方法でBUF−３を生産し
た時、培養液は４〜1000単位/mlの活性を示す。また上
記方法以外の方法、例えばBUF−３をコードする遺伝子
を含有するプラスミドにより形質転換された真核生物細
胞を培養液中で培養し、培養液中に該BUF−３を製造せ
しめるという方法（昭和62年２月23日出願、出願人、味
の素（株））をもちいてもかまわない。
さて、このように生産されたBUF−３の精製は通常の
ポリペプチドの精製法に準じて行われる。例えば培養液
を限外濾過法で濃縮し、この濃縮液からポリペプチドを
塩析し、透析後陰イオン交換体を使用するイオン交換ク
ロマトグラフィーを行うことにより粗ポリペプチド標品
が得られる。この粗標品について疎水クロマトグラフィ
ー又はクロマトフォーカシング法により殆んどの夾雑蛋
白が除去される。又この両者を組合せると更に精製倍率
を向上することができる。このようにして精製した標品
について逆相高速液体クロマトグラフィー（HPLC）又は
スーパーローズ又はMono QHR5/5カラムを装備したFPLC
（ファルマシア製Fast Protein Peptide Polynucleotid
e Liquid Chromatography）システムによる高性能ゲル
濾過法又はイオン交換クロマトグラフィーを行うことに
より精製することができる。
ポリペプチドの精製法に準じて行われる。例えば培養液
を限外濾過法で濃縮し、この濃縮液からポリペプチドを
塩析し、透析後陰イオン交換体を使用するイオン交換ク
ロマトグラフィーを行うことにより粗ポリペプチド標品
が得られる。この粗標品について疎水クロマトグラフィ
ー又はクロマトフォーカシング法により殆んどの夾雑蛋
白が除去される。又この両者を組合せると更に精製倍率
を向上することができる。このようにして精製した標品
について逆相高速液体クロマトグラフィー（HPLC）又は
スーパーローズ又はMono QHR5/5カラムを装備したFPLC
（ファルマシア製Fast Protein Peptide Polynucleotid
e Liquid Chromatography）システムによる高性能ゲル
濾過法又はイオン交換クロマトグラフィーを行うことに
より精製することができる。
以下、本発明を実施例に従って具体的に説明する。
実施例１ ５％牛脂児血清を有するRPMI−1640無菌培地5.0を2
0容スピンナーフラスコに張り込み、この培地にTHP−
１細胞を２×105個/mlになるように懸濁した。これを37
℃で４日間培養し、得られた培養液を遠心分離しTHP−
１細胞を無菌的に採取した。この細胞を別のスピンナー
フラスコに入れた血清を含まない上記RPMI−1640倍地5.
0に移し、これにTPAを10ng/ml添加し、ゆるやかに液
を撹拌（100r.p.m.）しつつ、37℃で２日間培養（誘
導）を行った。このようにして得られた培養液を遠心分
離して細胞を分離、除去し20単位/mlの活性を有する培
養液を得た。このようにして得た培養液に硫酸アンモニ
ウムを70％飽和になるように添加し、生ずる沈澱物を遠
心分離（10,000r.p.m、10分間）により採取し、少量の
純水に溶解した。これを0.05Mトリス−塩酸塩緩衝液（p
H7.7）に対して十分透析した（５℃、24時間）。透析内
液を同緩衝液で平衡化したDEAE−トーヨーパール650Mカ
ラム（7.0×70cm）に負荷した。このカラムを同緩衝液
5.0で洗浄した後、0.2Mの食塩を含有する同緩衝液で
溶出した。この溶出区分を集め固型硫安を70％飽和加え
て硫安沈澱させた。遠心分離によりこの沈澱物を集め、
水20mlに溶解した。この液に80％飽和の硫安溶液を20ml
加え、40％飽和硫安を含む0.05Mトリス−HCl緩衝液（pH
7.7）であらかじめ平衡化させたブチルトーヨーパール6
50Mカラム（25×30cm）に負荷した。硫安濃度を段階的
に下げた後、30％エタノールで溶出すると分化誘導活性
物質が溶出された。このブチルトーヨーパールによる疎
水クロマトグラフィーの溶出パターンを第１図に示す。
活性区分を集め減圧下で濃縮してエタノールを除去し、
この濃縮液を0.05Mトリス−HCl緩衝液（pH7.7）に対し
て透析した。透析内液を同緩衝液で平衡化したスーパー
ローズ（ファルマシア社製ゲル濾過用カラム）を用いて
ゲル濾過を行った。そのゲル濾過溶出パターンを第２図
に示す。第２図に示すようにF5−５に対する分化誘導活
性物質の溶出時間は56.0分であり、標準蛋白質の溶出時
間に基づいてBUF−３の分子量を10±0.5kdと算出した。
このサンプルを0.05Mトリス−塩酸塩緩衝液（pH8.0）に
対して透析し、これを同緩衝液で平衡化したMono QHR5/
5カラム（ファルマシア製陰イオン交換体）を使用する
ファルマシアFPLC（Fast Protein,Peptide,Polynucleot
ide,Liquid Chromatography）システムにより精製し
た。溶出は0.05Mから0.1Mまでの食塩のグラジエント溶
出を行った。BUF−３活性は0.1M附近の食塩で溶出され
た。この工程に於る精製倍率は約５倍であり、ほぼ単一
な蛋白に精製された。次にこのサンプルをハイポアRP30
4（バイオラッド社製、Ｃ−４逆相用カラム）を用いて
逆相HPLCを行った。条件は0.1％トリフルオロ酢酸を展
開液としｎ−プロパノールの濃度を０％から80％直線的
に変えて溶出した。その溶出パターンを第３図に示す。
第３図に示す蛋白ピークと活性は完全に一致した。この
活性ピークを集めて約100μｇの精製標品を得た。この
サンプルについてSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動（ゲル濃度15.0％、メルカプトエタノール共存下）を
行った。その結果、15.5kdに単一なバンド（銀染色法）
が認められ、他に蛋白のバンドは検出されなかった。こ
のようにして精製されたサンプルの比活性は約２×106U
/mg蛋白であった。
0容スピンナーフラスコに張り込み、この培地にTHP−
１細胞を２×105個/mlになるように懸濁した。これを37
℃で４日間培養し、得られた培養液を遠心分離しTHP−
１細胞を無菌的に採取した。この細胞を別のスピンナー
フラスコに入れた血清を含まない上記RPMI−1640倍地5.
0に移し、これにTPAを10ng/ml添加し、ゆるやかに液
を撹拌（100r.p.m.）しつつ、37℃で２日間培養（誘
導）を行った。このようにして得られた培養液を遠心分
離して細胞を分離、除去し20単位/mlの活性を有する培
養液を得た。このようにして得た培養液に硫酸アンモニ
ウムを70％飽和になるように添加し、生ずる沈澱物を遠
心分離（10,000r.p.m、10分間）により採取し、少量の
純水に溶解した。これを0.05Mトリス−塩酸塩緩衝液（p
H7.7）に対して十分透析した（５℃、24時間）。透析内
液を同緩衝液で平衡化したDEAE−トーヨーパール650Mカ
ラム（7.0×70cm）に負荷した。このカラムを同緩衝液
5.0で洗浄した後、0.2Mの食塩を含有する同緩衝液で
溶出した。この溶出区分を集め固型硫安を70％飽和加え
て硫安沈澱させた。遠心分離によりこの沈澱物を集め、
水20mlに溶解した。この液に80％飽和の硫安溶液を20ml
加え、40％飽和硫安を含む0.05Mトリス−HCl緩衝液（pH
7.7）であらかじめ平衡化させたブチルトーヨーパール6
50Mカラム（25×30cm）に負荷した。硫安濃度を段階的
に下げた後、30％エタノールで溶出すると分化誘導活性
物質が溶出された。このブチルトーヨーパールによる疎
水クロマトグラフィーの溶出パターンを第１図に示す。
活性区分を集め減圧下で濃縮してエタノールを除去し、
この濃縮液を0.05Mトリス−HCl緩衝液（pH7.7）に対し
て透析した。透析内液を同緩衝液で平衡化したスーパー
ローズ（ファルマシア社製ゲル濾過用カラム）を用いて
ゲル濾過を行った。そのゲル濾過溶出パターンを第２図
に示す。第２図に示すようにF5−５に対する分化誘導活
性物質の溶出時間は56.0分であり、標準蛋白質の溶出時
間に基づいてBUF−３の分子量を10±0.5kdと算出した。
このサンプルを0.05Mトリス−塩酸塩緩衝液（pH8.0）に
対して透析し、これを同緩衝液で平衡化したMono QHR5/
5カラム（ファルマシア製陰イオン交換体）を使用する
ファルマシアFPLC（Fast Protein,Peptide,Polynucleot
ide,Liquid Chromatography）システムにより精製し
た。溶出は0.05Mから0.1Mまでの食塩のグラジエント溶
出を行った。BUF−３活性は0.1M附近の食塩で溶出され
た。この工程に於る精製倍率は約５倍であり、ほぼ単一
な蛋白に精製された。次にこのサンプルをハイポアRP30
4（バイオラッド社製、Ｃ−４逆相用カラム）を用いて
逆相HPLCを行った。条件は0.1％トリフルオロ酢酸を展
開液としｎ−プロパノールの濃度を０％から80％直線的
に変えて溶出した。その溶出パターンを第３図に示す。
第３図に示す蛋白ピークと活性は完全に一致した。この
活性ピークを集めて約100μｇの精製標品を得た。この
サンプルについてSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動（ゲル濃度15.0％、メルカプトエタノール共存下）を
行った。その結果、15.5kdに単一なバンド（銀染色法）
が認められ、他に蛋白のバンドは検出されなかった。こ
のようにして精製されたサンプルの比活性は約２×106U
/mg蛋白であった。
尚、実施例１で使用したTHP−１はInt.J.Cancer,26,1
71−176,（1980）に記載されているものであり、この報
文の著者より分与されたものである。
71−176,（1980）に記載されているものであり、この報
文の著者より分与されたものである。
実施例２ BDF1マウス（雄,10週令，日本チャールズリバー
（株））を用い、１群６匹を被験動物として用いた。実
施例１で得られたBUF−３（賦形剤として６倍量の純化
マウス血清アルブミンを添加した凍結乾燥品）を生理的
食塩水に溶解したのち、過滅菌し、100μg/mlの注射
用投与液を調製した。BUF−３投与群には上記投与液を
１日１回0.1ml（BUF−3 10μｇ）宛５日間、静脈内投与
を行なった。対照群には、純化マウス血清アルブミンの
みを生理的食塩水に溶解したのち過滅菌し、１日１回
0.1ml宛５日間、静脈内投与を行なった。BUF−３投与群
及び対照群のどちらも５日目夕方より絶食させ、６日目
午前中に両群のマウスをエーテル麻酔下で心臓採血し、
全血中血糖値を常法により測定した。また、血糖値以外
のいくつかの血清成分についても同時に常法により測定
した。血糖値の測定結果を第４図に示した。BUF−３投
与群の血糖値は平均115mg/dlであり、対照群の平均148m
g/dlに比べて低値で、明らかな有意差が認められた。
（株））を用い、１群６匹を被験動物として用いた。実
施例１で得られたBUF−３（賦形剤として６倍量の純化
マウス血清アルブミンを添加した凍結乾燥品）を生理的
食塩水に溶解したのち、過滅菌し、100μg/mlの注射
用投与液を調製した。BUF−３投与群には上記投与液を
１日１回0.1ml（BUF−3 10μｇ）宛５日間、静脈内投与
を行なった。対照群には、純化マウス血清アルブミンの
みを生理的食塩水に溶解したのち過滅菌し、１日１回
0.1ml宛５日間、静脈内投与を行なった。BUF−３投与群
及び対照群のどちらも５日目夕方より絶食させ、６日目
午前中に両群のマウスをエーテル麻酔下で心臓採血し、
全血中血糖値を常法により測定した。また、血糖値以外
のいくつかの血清成分についても同時に常法により測定
した。血糖値の測定結果を第４図に示した。BUF−３投
与群の血糖値は平均115mg/dlであり、対照群の平均148m
g/dlに比べて低値で、明らかな有意差が認められた。
血糖値以外の血清成分の測定結果を第１表に示した。
調べられた５種の血清成分はいずれもBUF−３投与群と
対照群の間に有意な差はみられなかった。
調べられた５種の血清成分はいずれもBUF−３投与群と
対照群の間に有意な差はみられなかった。
実施例３ BDF1マウス（雄,10週令，日本チャールズリバー
（株））を用い１群６匹を被験動物として用いた。
（株））を用い１群６匹を被験動物として用いた。
実施例１で得られたBUF−３を用い、実施例２と同じ
方法で400μg/mlの投与液を調製し、ミニ浸透圧ポンプ
（米国ALZA社製Model 2001）に充填した。BUF−３投与
群マウスをペントバルビタール麻酔下で開腹ののち、腹
腔内に上記ミニ浸透圧ポンプを移入し、ただちに開腹部
を縫合した。
方法で400μg/mlの投与液を調製し、ミニ浸透圧ポンプ
（米国ALZA社製Model 2001）に充填した。BUF−３投与
群マウスをペントバルビタール麻酔下で開腹ののち、腹
腔内に上記ミニ浸透圧ポンプを移入し、ただちに開腹部
を縫合した。
対照群には、純化マウス血清アルブミンのみを含む投
与液を充填したミニ浸透圧ポンプを同じ方法で腹腔内に
移入した。ミニ浸透圧ポンプは、充填した投与液を一定
速度で７日間以上にわたって放出しつづける装置であ
る。本実験に用いたModel 2001は、放出速度１μ/hou
rなので、BUF−３は、400ng/hourの速度で連続的に腹腔
内に投与される。投与開始５日目の夕方より絶食し、６
日目午前に両群のマウスをエーテル麻酔下で心臓採血
し、全血中血糖値を常法により測定した。測定結果を第
５図に示した。BUF−３投与群の血糖値は平均67mg/dl
で、対照群の平均144mg/dlに比べて有意に低く、BUF−
３を静脈内に投与したときよりもさらに顕著な血糖の低
下作用が見られた。
与液を充填したミニ浸透圧ポンプを同じ方法で腹腔内に
移入した。ミニ浸透圧ポンプは、充填した投与液を一定
速度で７日間以上にわたって放出しつづける装置であ
る。本実験に用いたModel 2001は、放出速度１μ/hou
rなので、BUF−３は、400ng/hourの速度で連続的に腹腔
内に投与される。投与開始５日目の夕方より絶食し、６
日目午前に両群のマウスをエーテル麻酔下で心臓採血
し、全血中血糖値を常法により測定した。測定結果を第
５図に示した。BUF−３投与群の血糖値は平均67mg/dl
で、対照群の平均144mg/dlに比べて有意に低く、BUF−
３を静脈内に投与したときよりもさらに顕著な血糖の低
下作用が見られた。
本発明の効果 本発明に係るBUF−３を有効成分とする血糖低下剤は
持効性に優れている。従来、臨床で用いられているイン
スリン頻回注射療法では、皮下注射での血糖低下作用持
続時間が２ないし４時間であるのに対し、BUF−３は、
動物実験で静脈内投与24時間後でも血糖低下作用が持続
している。このため、BUF−３は、従来用いられている
インスリン療法に替る糖尿病治療剤として使用できる。
また、BUF−３はヒト由来蛋白なので、抗原性が低く、
アレルギーを起こしにくい為に長期間の使用が可能であ
る。
持効性に優れている。従来、臨床で用いられているイン
スリン頻回注射療法では、皮下注射での血糖低下作用持
続時間が２ないし４時間であるのに対し、BUF−３は、
動物実験で静脈内投与24時間後でも血糖低下作用が持続
している。このため、BUF−３は、従来用いられている
インスリン療法に替る糖尿病治療剤として使用できる。
また、BUF−３はヒト由来蛋白なので、抗原性が低く、
アレルギーを起こしにくい為に長期間の使用が可能であ
る。
本発明の血糖低下剤は、インスリン療法によって症状
改善のみられない糖尿病患者に対しても効果を発揮する
可能性を有する。
改善のみられない糖尿病患者に対しても効果を発揮する
可能性を有する。
第１図は、本発明のBUF−３のブチルトーヨーパールに
よる疎水クロマトグラフィーの溶出パターンである。 第２図は、本発明のBUF−３のゲル濾過クロマトグラフ
ィーの溶出パターンである。 第３図は本発明BUF−３の逆相高速液体クロマトグラフ
ィーの溶出パターンである。 第４図はBUF−３を静脈内投与した場合の血糖低下作用
を示すものである。 第５図はBUF−３を腹腔内に投与した場合の血糖低下作
用を示すものである。
よる疎水クロマトグラフィーの溶出パターンである。 第２図は、本発明のBUF−３のゲル濾過クロマトグラフ
ィーの溶出パターンである。 第３図は本発明BUF−３の逆相高速液体クロマトグラフ
ィーの溶出パターンである。 第４図はBUF−３を静脈内投与した場合の血糖低下作用
を示すものである。 第５図はBUF−３を腹腔内に投与した場合の血糖低下作
用を示すものである。
Claims (1)
- 【請求項１】下記のアミノ酸配列を有するポリペプチド
BUF−３を有効成分として含有する血糖低下剤。 アミノ酸配列：
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62091245A JP2517956B2 (ja) | 1987-04-14 | 1987-04-14 | 血糖低下剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62091245A JP2517956B2 (ja) | 1987-04-14 | 1987-04-14 | 血糖低下剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63255236A JPS63255236A (ja) | 1988-10-21 |
| JP2517956B2 true JP2517956B2 (ja) | 1996-07-24 |
Family
ID=14021035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62091245A Expired - Lifetime JP2517956B2 (ja) | 1987-04-14 | 1987-04-14 | 血糖低下剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2517956B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2653125B2 (ja) | 1988-09-22 | 1997-09-10 | 味の素株式会社 | 血糖低下剤 |
-
1987
- 1987-04-14 JP JP62091245A patent/JP2517956B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2653125B2 (ja) | 1988-09-22 | 1997-09-10 | 味の素株式会社 | 血糖低下剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63255236A (ja) | 1988-10-21 |
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