JP2024529474A

JP2024529474A - キメラＴｉｍ４受容体およびその使用

Info

Publication number: JP2024529474A
Application number: JP2024505181A
Authority: JP
Inventors: マークコリー，ダニエル; シェニエヴィシュ，ブランドン; トーマス，スニル
Original assignee: Cero Therapeutics Inc
Current assignee: Cero Therapeutics Holdings Inc
Priority date: 2021-07-28
Filing date: 2022-07-28
Publication date: 2024-08-06
Also published as: WO2023010097A1; KR20240119868A; EP4376874A1

Abstract

本開示は、キメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体分子を含むように改変された宿主細胞、ならびにそのような受容体分子および改変細胞を製造および使用する方法に関する。

Description

電子的配列リストに対する参照
電子的配列リスト（２００２６５＿４１８０１ＷＯ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ；サイズ：２６６，８４７バイト；および作成日：２０２２年７月２８日）の内容は、その全体を参照により本明細書に組み込む。

抗原への曝露に際して、ナイーブ抗原特異的Ｔ細胞は、それらのクローン拡大増殖、分化、および同族抗原を発現する細胞（例えば腫瘍細胞）を死滅させることができる機能的エフェクターＴ細胞への発達を促進する活性化を受ける。抗原クリアランス後、エフェクターＴ細胞のうちの大部分がアポトーシスを受け、生存するエフェクターＴ細胞のサブセットが、抗原再曝露に対する長期的保護を与え得るメモリーＴ細胞へと分化する。しかしながら、延長された抗原曝露は、Ｔ細胞疲弊を引き起こし、腫瘍細胞の持続性を可能にし得る。Ｔ細胞疲弊とは、免疫チェックポイント分子（例えばＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｔｉｍ－３）のアップレギュレートされた発現、エフェクター機能の低下、乏しい増殖、および代謝障害によって特徴付けられる持続的ＴＣＲ刺激を受けるＴ細胞により獲得される機能不全状態を意味する。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する操作されたＴ細胞もまた、疲弊を発達させ得る。

一態様においては、本開示は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含むキメラＴｉｍ４受容体を提供する。一部の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む一次ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含む二次ＴＬＲ２ＴＩＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１４のアミノ酸配列を含む三次ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン；または（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む一次ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含む二次ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む三次ＴＬＲ２ＴＩＲ細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインとＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１８またはアミノ酸１～２４を欠く配列番号１８のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１９またはアミノ酸１～２４を欠く配列番号１９のアミノ酸配列を含む。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、およびキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞もまた、本明細書において提供される。

適宜追加の治療剤と組み合わせた、対象を治療する方法のための、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞の使用方法もまた、本明細書において提供される。一部の実施形態においては、方法は、がんを治療するために使用される。

図１Ａ～図１Ｄ：Ｔ細胞抗原提示機能を評価するためのインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）共培養系は、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（および適宜のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン）に付加されたＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラＴｉｍ４受容体を含有するＴ細胞の添加が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）として機能する向上した能力を示すことを示す。図１Ａ：ｐＣＴＸ２４７（ＣＥＲ２４７とも本明細書において呼ばれる）およびｐＣＴＸ１１０７（ＣＥＲ１１０７またはＣＥＲ１２３６とも本明細書において呼ばれる）キメラＴｉｍ４受容体ならびにＥ７ペプチドによってパルスされたｐＣＴＸ１１０７Ｔ細胞およびそれらの抗原提示能力を評価するためのＥ７特異的Ｔ細胞との共培養の模式図。図１Ｂ：Ｅ７特異的増殖応答を、Ｅ７ペプチドによってパルスされた自家ＣＥＲ－Ｔ（ＴＬＲ含有または非含有ＣＥＲ）の存在下での６日間後に、ＣＴＶｉｏｌｅｔ色素希釈物により測定した。図１Ｃ：ＴＬＲ－２ＩＣＤ（ｐＣＴＸ１１０７）の添加は、Ｅ７特異的ＴＣＲの増殖応答を誘発したが、非ＴＬＲ含有ＣＥＲは、比較的刺激性が低かった。全てのデータは、ＦＡＣＳにより収集した。細胞トレーシングは、抗マウスＴＣＲｂを用いてＥ７ＴＣＲ－Ｔ細胞を示す。Ｅ７ＴＣＲ－Ｔ細胞を、共培養の時点でＣＴＶｉｏｌｅｔにより標識した。図１Ｄ：ｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ低Ｅ７ＴＣＲｂ^＋細胞の染色に基づいて、フローサイトメトリーによって決定される生存ＣＤ３^＋細胞のうちの培養中のＥ７ＴＣＲ細胞のパーセンテージ。図２：ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（および適宜のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン）に付加されたＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラＴｉｍ４受容体を含有するＴ細胞は、自家Ｅ７特異的Ｔ細胞応答の強力な刺激因子である。ＣＥＲ－Ｔ細胞を、Ｅ７ペプチドによってパルスし、自家Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を誘発するそれらの能力について試験した。Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ２５を、ＣＥＲ－Ｔ細胞がＥ７ペプチドによってパルスされた２４時間後に、Ｅ７ＴＣＲ－Ｔ細胞に対して評価した。ＣＥＲ－ＴｐＣＴＸ１１０７はＴＬＲ－２細胞内ドメイン（ＩＣＤ）を含み、かつＥ７特異的活性化の強力な刺激因子である。図３：ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（および適宜のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン）に付加されたＴＬＲ細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラＴｉｍ４受容体を含有するＴ細胞は、自家Ｅ７特異的Ｔ細胞応答の強力な刺激因子である。ＣＥＲ－Ｔ細胞を、Ｅ７ペプチドによってパルスし、自家Ｅ７特異的Ｔ細胞応答を誘発するそれらの能力について試験した。Ｔ細胞活性化の早期マーカーであるＣＤ６９を、ＣＥＲ－Ｔ細胞がＥ７ペプチドによってパルスされた２４時間後に、Ｅ７ＴＣＲ－Ｔ細胞に対して評価した。ＣＥＲ－ＴｐＣＴＸ１１０７はＴＬＲ－２細胞内ドメインを含有し、かつＥ７特異的活性化の強力な刺激因子である。図４：堅牢な細胞表面キメラＴｉｍ４受容体発現および抗Ｔｉｍ４抗体を用いる検出。キメラＴｉｍ４受容体細胞表面染色を、形質導入後５日目に抗Ｔｉｍ４抗体（９Ｆ４）を用いて評価した。ｐＣＴＸ１１０７は、ＴＬＲ－２細胞内配列を含む。レンチウイルスカセットは、ｐ２Ａ断片およびそれに続く切断型ＥＧＦＲｔポリペプチドを含む。図５Ａ～図５Ｃ：ｐＣＴＸ１３１ＣＥＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞の効力を向上させる。図５Ａ：ＣＤ１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞に応答したＪｅＫｏ－１ＭＣＬ細胞に対するＰｔｄ－Ｓｅｒ誘導の動態。ＪｅＫｏ－１ＭＣＬ細胞を、漸増エフェクター：標的比において共培養し、経時的にＰｔｄ－Ｓｅｒ誘導について評価した。動態曲線は、Ｐｔｄ－Ｓｅｒ結合タンパク質であるｒＴｉｍ－４に結合する生存ＪｅＫｏ－１標的のパーセンテージを表す。図５Ｂ上側：ＪｅＫｏ－１細胞を、１：１のＴ細胞：ＪｅＫｏ－１比において、４８時間、ｐＣＴＸ１８４（１９２８ｚ）＋ｐＣＴＸ１３１、ｐＣＴＸ１８４＋ＣＴＸ１５６対照Ｔ細胞またはｐＣＴＸ１８４細胞単独と共培養した。ＣＴＸ１８４＋ＣＥＲ１３１によって処理された試料は、ＣＴＸ１８４単独、またはＣＴＸ１８４＋ＣＴＸ１５６対照Ｔ細胞によって処理された試料と比較した場合、約２日後の培養において実質的に少ない腫瘍細胞を示した。全てのデータを、ＦＡＣＳを介して収集した。図５Ｂ下側：４８時間の共培養後の残留ＪｅＫｏ－１細胞の列挙のための代表的なフロープロット。図５Ｂ上側：残留ＪｅＫｏ－１細胞の棒グラフを計算するために用いた図５Ｂ下側からの生フローデータ。図５Ｃ：ＪｅＫｏ－１細胞を、０．５：１のＴ細胞：ＪｅＫｏ－１比において、４８時間、ｐＣＴＸ１８４（１９２８ｚ）＋ｐＣＴＸ１３１、ｐＣＴＸ１８４＋ＣＴＸ１５６対照Ｔ細胞またはｐＣＴＸ１８４細胞単独と共培養した。ＣＴＸ１８４＋ＣＥＲ１３１によって処理された試料は、ＣＴＸ１８４単独、またはＣＴＸ１８４＋ＣＴＸ１５６対照Ｔ細胞によって処理された試料と比較して、増大したＩＦＮ－γ分泌を示した。

図６Ａ～図６Ｂ：ｐＣＴＸ１３１キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞は、ＣＤ１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞の効力を向上させる。ＣＤ１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ（ｐＣＴＸ１８４、ＣＡＲ１８４とも呼ばれる）＋ｐＣＴＸ１３１キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞の混合物を評価する細胞傷害応答。図６Ａ：ｐＣＴＸ１３１キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞を、様々な比においてＣＤ１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞（ｐＣＴＸ１８４）と組み合わせ、ＪｅｋＯ－１細胞カウントを経時的に定量化した。図６Ｂ：カスパーゼ３／７応答。全てのデータは、ｉｎｃｕｃｙｔｅを介して収集した。図７Ａ～図７Ｂ：ｐＣＴＸ１３３、キメラＴｉｍ４受容体を含有するＴＬＲ－２が、卵巣がんモデルにおいてニラパリブの効力を向上させる。図７Ａ：表面ＰｔｄＳｅｒのフローサイトメトリー測定。Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ細胞を、１．５６もしくは２５μＭニラパリブを用いて、または同等の容量のＤＭＳＯ（対照）を用いて処理した。４８時間後の試料をトリプシン処理し、Ｔｉｍ４－Ｆｃおよびそれに続くＴｉｍ４－Ｆｃに対する蛍光標識二次抗体を用いて染色した。図７Ｂ：１．５６μＭニラパリブを用いて約２０時間にわたって前処理されたＫｕｒａｍｏｃｈｉ細胞を、２：１のＴ細胞：Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ比および１．５６μＭの最終ニラパリブ濃度において、ｐＣＴＸ１３３およびドナー３２由来の未形質導入ＣＤ４Ｔ細胞と共に共培養した。ニラパリブ＋ｐＣＴＸ１３３を用いて処理された試料は、ニラパリブ単独、またはニラパリブ＋未形質導入Ｔ細胞を用いて処理した試料と比較したとき、約３日後の培養において、相当少ない腫瘍細胞を示した。全てのデータは、ＩｎｃｕＣｙｔｅを介して収集した。図８Ａ～図８Ｂ：血液系腫瘍に対するキメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞＋ＢＴＫ阻害剤（イブルチニブ）の組合せ。図８Ａ：イブルチニブは、標的細胞上でのホスファチジルセリンの発現を誘導する。図８Ｂ：ＢＴＫ阻害剤小分子と組み合わせた相乗的キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞媒介細胞死滅。イブルチニブの存在下で３：１、２：１および１：１のＥ：Ｔにおいて共培養されたＣＴＸ１３６（Ｔｉｍ４－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）Ｔ細胞は、空ベクター形質導入細胞またはイブルチニブ処理単独と比較して、死滅の実質的な増大を示した。図９Ａ～図９Ｂは、様々なキメラＴｉｍ４受容体コンストラクト、ｐＣＴＸ１１８３、ｐＣＴＸ１１６１、ｐＣＴＸ１１８９、ｐＣＴＸ１１８４、ｐＣＴＸ１１６３、ｐＣＴＸ１１６２、ｐＣＴＸ１１９０、ｐＣＴＸ１１８６、ｐＣＴＸ１１８７、ｐＣＴＸ１１６４、ｐＣＴＸ１１８５、およびｐＣＴＸ１１６５によるＪｕｒｋａｔ細胞のトランスフェクションを示す。図９Ｂは、未トランスフェクション細胞に対して標準化（正規化）されている。図１０は、キメラＴｉｍ４－Ｔ細胞による抗原提示によって媒介されるＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞の活性化が、抗ＨＬＡ－Ｉ抗体により遮断されることを示す棒グラフである。図１１は、設計された様々なキメラＴｉｍ４受容体（キメラ貪食受容体（ＣＥＲ）とも本明細書において呼ばれる）を示す。ＳＰ＝シグナルペプチド；ＴＭＤ＝膜貫通ドメイン。図１２Ａ～図１２Ｂは、２４時間（図１２Ａ）および４８時間（図１２Ｂ）でのイブルチニブ（ｉｂｒｕｔｉｎｉｃ）処理によるＲＥＣ－１細胞およびＪＥＫＯ－１細胞におけるホスファチジルセリン曝露の誘導を示す。図１３Ａ～図１３Ｄは、イブルチニブ処理後のＣＥＲＴ細胞によるＲＥＣ－１細胞の食作用活性を示す。図１３Ａ：ＣＥＲ１２３４、ＣＥＲ１１６１、およびＣＥＲ１１８３Ｔ細胞によるｐＨｒｏｄｏｒｅｄ標識ＲＥＣ－１標的細胞の貪食を示す代表的なフローサイトメトリーヒストグラム。図１３Ｂ：ＣＥＲ１２３４、ＣＥＲ１１６１、およびＣＥＲ１１８３Ｔ細胞によるｐＨｒｏｄｏｒｅｄ標識ＲＥＣ－１標的細胞の貪食を示すフローサイトメトリーデータの図式的概要。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊Ｐ＜０．００１、^＊＊＊Ｐ＜０．０００１；平均＋ＳＤ、ｎ＝４。図１３Ｃ：ＣＥＲ１２３４、ＣＥＲ１１６１、およびＣＥＲ１１８３Ｔ細胞によるｐＨｒｏｄｏｒｅｄ標識ＲＥＣ－１標的細胞の貪食を示す代表的な蛍光顕微鏡画像（４０倍）。図１３Ｄ：貪食されたｐＨｒｏｄｏｇｒｅｅｎ標識ＲＥＣ－１腫瘍断片は、Ｌｙｓｏ－ｔｒａｃｋｅｒｒｅｄ標識リソソームと共局在する。

図１４Ａ～図１４Ｂ：ＲＥＣ－１細胞に対するイブルチニブを用いるＣＥＲ１１８３およびＣＥＲ１２３４Ｔ細胞の細胞傷害活性。図１４Ａ：媒体前処理およびそれに続く＋／－０．５μＭイブルチニブ。図１４Ｂ：μＭイブルチニブ前処理およびそれに続く＋／－０．５μＭイブルチニブ。図１５Ａ～図１５Ｂ：ＣＥＲ１１８３およびＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＲＥＣ－１標的細胞とのイブルチニブ処理共培養におけるＴ細胞活性化の細胞表面マーカーの誘導。棒グラフに示される試料は、左から右へと、未形質導入、ＣＥＲ－１１８３、およびＣＥＲ－１２３４である。図１５Ａ：共培養におけるＰＤ－１発現。図１５Ｂ：共培養における４－１ＢＢ発現。図１６Ａ～図１６Ｈ：ＣＥＲ１１８３およびＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＲＥＣ－１標的細胞とのイブルチニブ処理共培養におけるサイトカインの誘導。棒グラフに示される試料は、左から右へと、未形質導入、ＣＥＲ－１１８３、およびＣＥＲ－１２３４である。図１６Ａ：ＴＮＦα誘導。図１６Ｂ：ＩＬ－２誘導。図１６Ｃ：ＩＦＮγ。図１６Ｄ：ＩＬ－５誘導。図１６Ｅ：ＩＬ－６誘導。図１６Ｆ：ＩＬ－１０誘導。図１６Ｇ：ＩＬ－４誘導。図１６Ｈ：グランザイムＢ誘導。図１７Ａ～図１７Ｂ：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の発現。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｉｏｎ）６日間後の形質導入されたＴ細胞上にＴｉｍ４を直ちに発現する。ＣＥＲＴ細胞特性決定。上側グラフ：上側から下側に向かって、Ｔｅｍｒａ、Ｔｅｍ、Ｔｃｍ、ナイーブのメモリーＴ細胞サブセット。図１９Ａ～図１９Ｃ：ＣＥＲＴ細胞は、無細胞インビトロ系において、ホスファチジルセリン貪食に応答して活性化され、かつＩＦＮ－γを産生する。図１９Ａ：ホスファチジルセリン（ＰＳ）に応答したＩＦＮ－γ産生。ＩＦＮ－γ産生は、ＰＳによって刺激されたＣＥＲ－１２３６およびＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞において誘導されたが（図１９Ａ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）によって誘導されなかった（図１９Ｂ）。ドナー３８および４１由来のＣＥＲ－１２３４およびＣＥＲ－１２３６に関するＰＳＥＣ５０値は、以下の通りであった：ＣＥＲ－１２３４、それぞれ３．５２μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．１３）および１．８８μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．４８）；ＣＥＲ－１２３６、それぞれ４．７４μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．０２）、および３．１６μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．０９）。図１９Ｃ：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、インビトロにおける反復刺激が可能である。最初の刺激後の２４時間の休息後の示された時点での３回の連続的刺激による反復的ＩＦＮ－γ誘導。図２０：ｐＨｒｏｄｏ色素標識腫瘍細胞食作用およびエンドサイトーシスのＦＡＳＣおよびイメージングに基づく検出。図２１：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞の増大した貪食を示す（左側パネル：蛍光顕微鏡画像；右側パネル：食作用指数値）。図２２：ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ｉｎｃｕｃｙｔｅアッセイにより測定される場合に、Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－ＭＣＬ細胞に対する細胞傷害機能を示す。図２３：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、イブルチニブとの相乗作用を示し、ＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞の死滅を向上させる。図２４：イブルチニブ誘導ホスファチジルセリン曝露は、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞サイトカイン応答を向上させる（ＩＦＮ－γ：左側グラフ；グランザイムＢ：右側グラフ；未形質導入左側試料、ＣＥＲ－１２３４右側試料）。図２５Ａ～図２５Ｂ：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｉ依存的様式で、腫瘍細胞由来Ｅ７抗原の提示を介してＥ７ＴＣＲＴ細胞を活性化する。図２５Ａ：Ｅ７がんタンパク質陽性／ＰＳ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞との共培養後、ＣＥＲ－１２３６はＥ７ＴＣＲ細胞上のＨＬＡ－ＤＲを誘導したが、未形質導入Ｔ細胞または抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞は誘導しなかった。図２５Ｂ：別々の実験において、Ｅ７がんタンパク質陽性／ＰＳ陽性ＳＣＣ１５２細胞とのＣＥＲ－１２３６の共培養後のＥ７ＴＣＲ細胞上のＨＬＡ－ＤＲの誘導は、ＨＬＡ－Ｉ遮断抗体により遮断されたが、対照アイソタイプ抗体により遮断されなかった。バーは、活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲを発現するＥ７ＴＣＲＴ細胞のパーセンテージを示す。エラーバーはＳＥＭを示す。図２６：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＭＣＬ異種移植片（Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞）における抗腫瘍効果を媒介する（左上）。右上グラフは、インビボ（ｉｎｖｉｖｏ）拡大増殖データを示す。下側グラフは、細胞傷害性データを示す。図２７Ａ～図２７Ｂは、（図２７Ａ）本開示のキメラＴｉｍ４受容体、ＣＥＲ－１２３４およびＣＥＲ１２３６の模式図；ならびに（図２７Ｂ）ＰＡＲＰ阻害剤処理卵巣がん細胞との共培養におけるキメラＴｉｍ４受容体の免疫表現型を評価するためのアッセイ設定の模式図を示す。ＣＥＲ－１２３４およびＣＥＲ１２３６は、細胞外Ｔｉｍ４結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有し、キメラＴｉｍ４受容体コンストラクト中のシグナル伝達ドメインの方向を示す。Ｔｉｍ４細胞外結合ドメイン、Ｔｉｍ４膜貫通ドメイン、およびＴｉｍ４シグナル伝達ドメインを有する対照分子ＣＥＲ－１１８３もまた示される。

図２８は、ＣＥＲ－１２３４、ＣＥＲ－１２３６、および対照ＣＥＲ－１１８３によるドナーＴ細胞の形質導入から創出された様々なＴ細胞生成物、感染多重度（ＭＯＩ）、およびＣＥＲ＋である％Ｔ細胞を示す。図２９Ａ～図２９Ｃは、キメラＴｉｍ４受容体形質導入Ｔ細胞、オラパリブまたはニラパリブと、標的Ａ２７８０卵巣がん細胞との共培養の１２０時間での、Ｔｉｍ４＋Ｔ細胞（ＣＥＲ－１２３４、ＣＥＲ－１２３６、または対照ＣＥＲ－１１８３によって形質導入されたＴ細胞）におけるＣＣＲ７＋発現細胞の％を示す。棒グラフ上の試料は、左から右へと、Ａ２７８０＋Ｔ細胞、Ａ２７８０＋Ｔ細胞＋ニラパリブ、およびＡ２７８０＋Ｔ細胞＋オラパリブである。図２９Ａは、ドナー４１由来のＴｉｍ４＋Ｔ細胞上でのＣＣＲ７発現を示す。図２９Ｂは、ドナー３８由来のＴｉｍ４＋Ｔ細胞上でのＣＣＲ７発現を示す。図２９Ｃは、ドナー４５由来のＴｉｍ４＋Ｔ細胞上でのＣＣＲ７発現を示す。図２９Ａ～図２９Ｃに関して、共培養条件Ａ２７８０＋Ｔ細胞；Ａ２７８０＋Ｔ細胞＋ニラパリブ；Ａ２７０８０＋Ｔ細胞＋オラパリブが、各ドナーＴ細胞試料に関して棒グラフにおいて左から右へと示される。図３０Ａ～図３０Ｃは、キメラＴｉｍ４受容体形質導入Ｔ細胞、オラパリブまたはニラパリブと、標的Ａ２７８０卵巣がん細胞との共培養の１２０時間での、ＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を示す。棒グラフ上の試料は、左から右へと、Ａ２７８０＋Ｔ細胞、Ａ２７８０＋Ｔ細胞＋ニラパリブ、およびＡ２７８０＋Ｔ細胞＋オラパリブである。図３０Ａは、ドナー４１由来のＴ細胞におけるＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を示す。図３０Ｂは、ドナー３８由来のＴ細胞におけるＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を示す。図３０Ｃは、ドナー４５由来のＴ細胞におけるＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を示す。図３０Ａ～図３０Ｃに関して、共培養条件Ａ２７８０＋Ｔ細胞；Ａ２７８０＋Ｔ細胞＋ニラパリブ；Ａ２７０８０＋Ｔ細胞＋オラパリブが、各ドナーＴ細胞試料に関して棒グラフにおいて左から右へと示される。図３１Ａ～図３１Ｂ：ＰＡＲＰ阻害剤は、Ａ２７８０卵巣がん細胞上でのホスファチジルセリンを誘導する。９６時間でのニラパリブまたはオラパリブ（両方とも０．２５～６μＭ）によって処理したＡ２７８０細胞の生存率（図３１Ａ）およびホスファチジルセリン（ＰＳ）曝露（図３１Ｂ）。図３２：ＣＥＲＴ細胞特徴。図３３Ａ～図３３Ｃ：ＣＥＲＴ細胞は、無細胞インビトロ系において、ホスファチジルセリン貪食に応答して活性化され、かつＩＦＮ－γを産生する。図３３Ａ：ホスファチジルセリン（ＰＳ）に応答したＩＦＮ－γ産生。ＩＦＮ－γ産生は、ＰＳによって刺激されたＣＥＲ－１２３６およびＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞において誘導されたが（図３３Ａ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）によって誘導されなかった（図３３Ｂ）。ドナー３８および４１由来のＣＥＲ－１２３４およびＣＥＲ－１２３６に関するＰＳＥＣ５０値は、以下の通りであった：ＣＥＲ－１２３４、それぞれ３．５２μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．１３）および１．８８μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．４８）；ＣＥＲ－１２３６、それぞれ４．７４μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．０２）、および３．１６μｇ／ｍＬ（ＳＥ±０．０９）。図３３Ｃ：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、インビトロにおける反復刺激が可能である。最初の刺激後の２４時間の休息後の示された時点での３回の連続的刺激による反復的ＩＦＮ－γ誘導。図３４Ａ～図３４Ｃ：ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせたＣＥＲＴ細胞は、Ａ２７８０細胞に対して細胞傷害性である。図３４Ａ：Ａ２７８０細胞の低減した増殖が、２名のドナーに関して、ｉｎｃｕｃｙｔｅにより測定されるＣＥＲとＰＡＲＰｉとの共培養後、１２０時間で観察される。図３４Ｂ：１２０時間では、未処理Ａ２７８０試料と比較して処理試料中に留まる細胞の比率を、図３４Ａからのｉｎｃｕｃｙｔｅデータを用いて定量化した。図３４Ｃ：共培養アッセイにおけるＣＥＲＴ細胞の増殖。図３５Ａ～図３５Ｃ：ＰＡＲＰ阻害剤処理Ａ２７８０卵巣がん細胞との共培養に応答した、ＣＥＲＴ細胞によるサイトカイン産生。試料は、左から右へと、薬物なし、ニラパリブ処理、およびオラパリブ処理である。図３５Ａ：ＩＦＮ－γ。図３５Ｂ：ＴＮＦ－α。図３５Ｃ：グランザイムＢ。図３６Ａ～図３６Ｂ：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｉ依存的様式で、腫瘍細胞由来Ｅ７抗原の提示を介してＥ７ＴＣＲＴ細胞を活性化する。図３６Ａ：Ｅ７がんタンパク質陽性／ＰＳ陽性ＳＣＣ１５２標的細胞との共培養後、ＣＥＲ－１２３６はＥ７ＴＣＲ細胞上のＨＬＡ－ＤＲを誘導したが、未形質導入Ｔ細胞または抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞は誘導しなかった。図３６Ｂ：別々の実験において、Ｅ７がんタンパク質陽性／ＰＳ陽性ＳＣＣ１５２細胞とのＣＥＲ－１２３６の共培養後のＥ７ＴＣＲ細胞上のＨＬＡ－ＤＲの誘導は、ＨＬＡ－Ｉ遮断抗体により遮断されたが、対照アイソタイプ抗体により遮断されなかった。バーは、活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲを発現するＥ７ＴＣＲＴ細胞のパーセンテージを示す。エラーバーはＳＥＭを示す。

図３７：イブルチニブ誘導ホスファチジルセリン曝露は、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞ＩＦＮ－γ応答を向上させる。未形質導入細胞に関して、応答は見られなかった。ＪｅＫｏ－１ＭＣＬｍＣｈｅｒｒｙ＋細胞を、２０μＭイブルチニブまたは媒体によって４８時間前処理した。続いて、Ｊｅｋｏ－１ＭＣＬ細胞を、０．５μＭイブルチニブまたは媒体を含む無血清培地＋２００ＩＵ／ｍＬＩＬ－２中でＣＥＲ１２３６Ｔ細胞と共に共培養した。１２０時間後、ＩＦＮ－γ分泌を、ＥＬＬＡ自動化ＥＬＩＳＡを用いて測定した。図３８：ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、イブルチニブ処理ＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞に対して向上したより完全な細胞傷害効果を有するが、未処理ＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞に対しては有しない。図３９：１００ｎＭオシメルチニブまたは媒体によって前処理され、続いてＣＥＲ１２３６Ｔ細胞と共に共培養された細胞に関するＮＳＣＬＣＨ１９７５細胞増殖を示すグラフ。図４０：１００ｎＭオシメルチニブまたは媒体と供に、ＮＳＣＬＣＨ１９７５細胞と共に共培養されたＣＥＲ１２３６Ｔ細胞によりサイトカイン産生を示すグラフ（左から右へと：グランザイムＢ、ＴＮＦα、ＩＬ－６、およびＩＦＮγ）。図４１：時間経過（４８時間、９６時間、１２０時間、および１４４時間）にわたる定量化ビーズを用いる定量的フローサイトメトリーにより決定された総ＣＤ３＋Ｔ細胞（未形質導入＋媒体、未形質導入＋オシメルチニブ、ＣＥＲ１２３６＋媒体、ＣＥＲ１２３６＋オシメルチニブ）の拡大増殖倍率を示す棒グラフ。図４２：媒体もしくはオシメルチニブ（４．８８ｎＭ、１９．５３ｎＭ）によって前処理されたＨ１９７５細胞と未形質導入Ｔ細胞（上側行）またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞（下側行）とを用いる共培養実験におけるＣＤ３＋細胞（ｙ軸）およびＨ１９７５細胞（ｘ軸）を測定するフローサイトメトリープロット。図４３は、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の反復ホスファチジルセリン刺激による刺激に応答したＣＥＲ１２３６活性化の測定およびＩＦＮγ産生の測定のためのアッセイ設計を描写する模式図である。図４４は、滴定用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、３名のドナー由来のＣＥＲ１２３４Ｔ細胞（左側）またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞（右側）におけるＩＦＮγ産生を示すグラフである。図４５は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ドナーによるＣＥＲ１２３４Ｔ細胞またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を示すグラフである。図４６は、融解後１４日目での漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ドナーによるＣＥＲ１２３４Ｔ細胞またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を示すグラフである。図４７は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＴ細胞拡大増殖（左側）、ＩＦＮγ産生（中央）、および細胞生存率（右側）を示すグラフである。図４８は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞におけるＴ細胞拡大増殖（左側）、ＩＦＮγ産生（中央）、および細胞生存率（右側）を示すグラフである。図４９は、抗原提示実験において用いられる例示的なキメラＴｉｍ４コンストラクトの設計を描写する模式図である。図５０は、フローサイトメトリーにより測定される場合に、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５（左側）およびＨＬＡ－ＤＲ（右側）を測定する棒グラフを示す。ＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、４８時間、単独で培養するか、またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）と共に共培養し、その後、Ｔ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞を用いる４日間の共培養を行った。エラーバーはＳＥＭを示す。図５１は、フローサイトメトリーにより測定される場合に、Ｔ細胞活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲを測定する棒グラフを示す。ＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、４８時間、単独で培養するか、またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）と共に共培養し、その後、Ｔ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞を用いる４日間（図５１、左側グラフ）または６日間（図５１、右側グラフ）の共培養を行った。エラーバーはＳＥＭを示す。図５２は、フローサイトメトリーにより測定される場合に、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５（左側グラフ）およびＨＬＡ－ＤＲ（右側グラフ）を測定する棒グラフを示す。ＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、４８時間、単独で培養するか、またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）と共に共培養し、その後、Ｔ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞を用いる４日間の共培養を行った。エラーバーはＳＥＭを示す。図５３は、フローサイトメトリーにより測定される場合に、Ｔ細胞活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲを測定する棒グラフを示す。ＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、４８時間、単独で培養するか、またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）と共に共培養し、その後、Ｔ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞を用いる６日間の共培養を行った。エラーバーはＳＥＭを示す。図５４は、フローサイトメトリーにより測定される場合に、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５（左側グラフ）およびＨＬＡ－ＤＲ（右側グラフ）を測定する棒グラフを示す。ＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、４８時間、単独で培養するか、またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）と共に共培養し、その後、Ｔ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞を用いる４日間の共培養を行った。エラーバーはＳＥＭを示す。

一態様においては、本開示は、キメラ貪食受容体（ＣＥＲ）とも称されるキメラＴ細胞免疫グロブリンムチンタンパク質４（Ｔｉｍ４）受容体を提供する。本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞（例えばＴ細胞）に貪食および／または細胞傷害活性を与え、細胞傷害活性は、その標的抗原であるホスファチジルセリンに対するキメラＴｉｍ４受容体の結合に際して誘導される。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、改変宿主細胞（例えばＴ細胞）に、貪食、細胞傷害性、ならびに向上された抗原捕捉、抗原プロセシング、および抗原提示活性を与える。

一部の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）（ｉ）Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインおよびＴｉｍ４ムチンドメインを含む結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有シグナル伝達ドメイン、共刺激性シグナル伝達ドメイン；およびＴＬＲシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと含む単鎖キメラタンパク質を含む。

一部の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。ある特定の実施形態においては、本明細書において記載するキメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。一部の実施形態においては、そのようなキメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。一部の実施形態においては、そのようなキメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。

一部の実施形態においては、Ｔ細胞などの宿主細胞において発現される場合、本開示のキメラＴｉｍ４受容体はまた、宿主細胞に対して貪食活性も与える。例えば、ある特定のそのような実施形態においては、ホスファチジルセリン標的に対する宿主細胞において発現されるキメラＴｉｍ４受容体の結合は、宿主細胞による細胞溶解応答および貪食応答の両方を誘導することができる。本明細書において説明する改変宿主細胞の特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を用いる改変前に、宿主細胞は、天然には貪食表現型を示さない。

別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体を用いて改変された宿主細胞は、例えばがんの治療のために、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する標的細胞を除去するための方法において用いることができる。正常な健康細胞において、ホスファチジルセリンは、形質膜の内側リーフレット中に位置する。しかしながら、損傷、アポトーシス、壊死、およびストレスなどのある特定の細胞イベントは、細胞表面上にホスファチジルセリンを迅速に曝露させる「スクランブラーゼ」を活性化し、スクランブラーゼは、Ｔｉｍ４などの受容体に結合することができる。内因性腫瘍特異的Ｔエフェクター細胞は、細胞溶解中にターゲティングされる腫瘍細胞の外膜上でのホスファチジルセリンの曝露を誘導することができる。さらに、ある特定のがん療法（例えば化学療法、分子ターゲティング療法、放射線療法、ＣＡＲ－Ｔ細胞など）は、アポトーシス、細胞ストレス、細胞損傷などを誘導することにより、ターゲティングされた腫瘍細胞または腫瘍微小環境中の細胞上でのホスファチジルセリンの曝露を誘導することができる。本開示のキメラＴｉｍ４受容体を発現する操作された宿主細胞は、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘導することにより、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する、損傷腫瘍細胞、ストレスを受けた腫瘍細胞、アポトーシス腫瘍細胞、または壊死腫瘍細胞を一掃することができる。ある特定の実施形態においては、本明細書において開示されるキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、アポトーシスを誘導することにより、および貪食により、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する損傷腫瘍細胞、ストレスを受けた腫瘍細胞、アポトーシス腫瘍細胞、または壊死腫瘍細胞を一掃する。本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体を含む操作された宿主細胞は、単独で、または例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ、抗体、放射線療法、化学療法、分子ターゲティング療法、小分子、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法等を含む１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。

別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞は、エフェクター応答（例えば腫瘍特異的免疫応答）を向上させるための方法において使用され得る。実施形態においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞は、抗腫瘍有効性（例えば腫瘍輸送、拡大増殖および持続性）を向上させるための方法において使用され得る。本開示のキメラＴｉｍ４受容体の実施形態は、ホスファチジルセリンの結合に際して、少なくとも１つの共刺激性シグナル伝達経路を介して、Ｔ細胞を共刺激することができる。ある特定の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体は、少なくとも２つの異なるシグナル伝達経路を介して、共刺激性シグナルを提供する。ある特定の実施形態においては、向上したエフェクター応答は、向上したＴ細胞増殖、サイトカイン産生、細胞傷害活性、持続性またはそれらの任意の組合せである。本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、単独で、または例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ、抗体、放射線療法、化学療法、小分子、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法等を含む１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。

別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞は、免疫細胞疲弊を阻害または低減するための方法において使用され得る。ある特定の実施形態においては、免疫細胞疲弊は、Ｔ細胞疲弊、ＮＫ細胞疲弊、またはその両方を指す。腫瘍細胞は、多くの場合、免疫細胞疲弊（例えば低減した増殖能力、低減したエフェクター機能および免疫抑制性分子のアップレギュレーション）を生じ得る共刺激性リガンドの非存在下において、免疫細胞に対して連続的な抗原刺激を提供し得る。また、がん療法、例として化学療法、分子ターゲティング療法、放射線療法、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法等は、共刺激性シグナルの非存在下において、または共刺激性シグナルの強度もしくは持続期間が制限される場合に、抗原刺激延長を提供し得る。本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、ホスファチジルセリンの結合に際して、少なくとも１つの共刺激性シグナル伝達ドメインを介して、免疫細胞を共刺激することができる。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、少なくとも２つの異なるシグナル伝達経路を介して、共刺激性シグナルを提供する。キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、単独で、または例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ、抗体、放射線療法、化学療法、小分子、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法等を含む１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。

一部の実施形態においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞（例えばＴ細胞）は、向上した抗原捕捉、抗原プロセシングおよび／または抗原提示活性を示す。キメラＴｉｍ４受容体の食作用受容体部分へのリガンド結合は、Ｔ細胞活性化、シグナル伝達、細胞溶解機能、サイトカインおよびケモカインの産生、標的細胞の部分的貪食、および標的細胞抗原の提示をもたらす下流転写プログラムを含む事象のカスケードを媒介する。非食作用性または弱食作用性免疫細胞、例として成熟ポリクローナルＴ細胞におけるキメラＴｉｍ４受容体の発現は、標的細胞断片の貪食を通した抗原特異的捕捉を可能にし、かつこれを向上させ得る。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体媒介抗原捕捉の追加される機能性は、プライミングされた腫瘍細胞標的に対する直接的な細胞溶解活性を誘発しながら、非ターゲティング抗原の向上された提示を支持する。

本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体と細胞免疫療法、例えばＣＡＲまたはＴＣＲとを含む組合せ療法組成物および方法のために、キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲまたはＴＣＲ）は、二重特異性多機能性操作細胞を生成するために、別々の操作細胞上に発現されるか、または同じ操作細胞上に発現され得る。同じ操作細胞上に発現されるキメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤は、別々のベクターから、またはマルチシストロン性コンストラクトと同じベクター上で発現され得る。

別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞は、細胞ストレス、損傷、壊死またはアポトーシスを誘導する治療剤の効果を向上させるために使用され得る。例えば、ある特定の治療剤、例として化学療法、がんと関連付けられるドライバー変異の特異的阻害剤（例えば分子ターゲティング療法、例としてＢＲＡＦ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ／ＲＯＳ１キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤）、放射線療法、ＵＶ光療法、電気パルス療法、養子細胞免疫療法（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ）および腫瘍溶解性ウイルス療法は、腫瘍細胞または疾患細胞において細胞損傷または細胞死を誘導し得る。本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞は、そのような治療剤のうちの任意の１つまたは複数から生じる損傷細胞または死滅過程の細胞の外側リーフレット上に曝露されるホスファチジルセリン部分に結合し、かつターゲティングされた細胞の細胞溶解または細胞溶解と貪食との両方を誘導することができる。

別の態様においては、本開示は、がんを有する対象においてＣＣＲ７＋発現Ｔ細胞を向上させるための方法を提供し、がんは、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫であり、方法は、有効量の本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体および（ｉｉ）ポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を対象に投与することを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。ケモカイン受容体ＣＣＲ７は、早期分化状態のＴ細胞、例えば、ナイーブ、幹細胞メモリー（Ｔ_ＳＣＭ）およびセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）Ｔ細胞上で発現される。治療用Ｔ細胞を用いる初期前臨床研究は、ナイーブおよび早期分化型Ｔ細胞が、長期持続性に対する向上した能力を有し、かつ強力な抗腫瘍応答を誘発することができるＴ細胞を有することを示してきた。したがって、ＣＣＲ７キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞を向上させることは、インビボにおける貪食および持続性もまた向上させる可能性がある。

別の態様においては、本開示は、がんを有する対象においてＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を向上させるための方法を提供し、がんは、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫であり、方法は、有効量の本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体および適宜のポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を対象に投与することを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。ＣＤ４Ｔ細胞は、そのヘルパー機能に関して公知であり、サイトカイン産生を通してＣＤ８Ｔ細胞活性を向上させることにより細胞溶解活性を誘発する。しかしながら、ＣＤ４Ｔ細胞［キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）］を用いる養子細胞療法は、インビトロおよびインビボの両方において標的腫瘍細胞の直接的な死滅における同等な有効性を実証した。ＣＤ４Ｔ細胞（ＣＡＲ）を用いる養子細胞療法は、抗原曝露後に比較的良好な持続性をＣＤ４ＣＡＲＴ細胞に与えるＣＤ８対応物と比較して、当初のゆっくりとしたグランザイムＢ分泌および腫瘍死滅を示すが、活性化誘導型細胞死および疲弊に対する傾向が少ない。したがって、キメラＴｉｍ４受容体養子細胞療法のためのＣＤ４Ｔ細胞サブセットを向上させることは、改善された持続性および比較的弱い疲弊を与える可能性がある。

別の態様においては、本明細書に開示されるキメラＴｉｍ受容体を発現する宿主細胞は、アポトーシスを誘導することにより、および貪食により、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する損傷腫瘍細胞、ストレスを受けた腫瘍細胞、アポトーシス腫瘍細胞、または壊死腫瘍細胞を一掃する。別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ受容体により改変した宿主細胞は、細胞ストレス、損傷、壊死、またはアポトーシスを誘導するＰＡＲＰ阻害剤の効果を向上させるために使用され得る。例えば、ＰＡＲＰ阻害剤の投与は、表面ホスファチジルセリンのレベルを増大させ、したがって、相乗的組合せをもたらし得る。本明細書において説明するキメラＴｉｍ受容体を発現する細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与から生じる損傷細胞または死滅過程の細胞の外側リーフレット上に曝露されるホスファチジルセリン部分に結合し、かつターゲティングされた細胞の細胞溶解または細胞溶解と貪食との両方を誘導することができる。

別の態様においては、本開示は、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の阻害剤と組み合わせたキメラＴｉｍ４受容体を投与することを含む、対象におけるがんの治療のための方法を提供する。キメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を含む操作された宿主細胞、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターのキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物であって、薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい組成物として投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒｅｄ）され得る。ＰＡＲＰ阻害剤は、治療量未満の投与量で投与され得る。別の態様においては、本開示は、キメラＴｉｍ４受容体とＰＡＲＰ阻害剤とを含む医薬組成物または組合せを提供する。本開示の組成物および方法において有用なキメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞（例えばＴ細胞）に貪食、細胞傷害性および／または抗原提示活性を与え、細胞傷害活性は、その標的抗原であるホスファチジルセリンに対するキメラＴｉｍ４受容体の結合に際して誘導される。ＤＮＡ損傷剤、例としてＰＡＲＰ阻害剤は、キメラＴｉｍ４受容体のエフェクター機能、例として貪食、細胞傷害性、共刺激活性、抗原提示、またはそれらの組合せを誘導する、細胞損傷およびホスファチジルセリンの外面化により、キメラＴｉｍ４受容体との相乗作用を示し得る。

本開示をより詳細に示す前に、本明細書において使用されるある特定の用語の定義を提供することは本開示の理解に役立ち得る。

本説明において、任意の濃度範囲、割合範囲、比の範囲または整数範囲は、別に示されない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その分数（例として整数の１０分の１および１００分の１）を含むと理解されるべきである。また、任意の物理的特色、例としてポリマーサブユニット、サイズまたは厚さに関する本明細書において列挙される任意の数値範囲は、別に示されない限り、列挙される範囲内の任意の整数を含むと理解されるべきである。本明細書において使用されるとき、「約」という用語は、別に示されない限り、示される範囲、値または構造の±２０％を意味する。「ａ」および「ａｎ」という用語は、本明細書において使用されるとき、列挙される成分のうちの「１つまたは複数」を指すことが理解されるべきである。選択肢［例えば「または（ｏｒ）」］の使用は、選択肢のいずれか１つ、両方またはその任意の組合せを意味すると理解されるべきである。本明細書において使用されるとき、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「～を有する（ｈａｖｅ）」および「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、同義的に使用され、その用語およびその変形は、非限定的であると解釈されることが意図される。

抗体技術の分野における当業者によって理解される用語は各々、本明細書において明確に異なって定義されない限り、当該技術分野において得られる意味を与えられる。「抗体」という用語は、最も広範な意味において使用され、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含むインタクトな抗体、および標的分子を結合する能力を有するか、または保持するインタクトな抗体の抗原結合性部分（または抗原結合性ドメイン）を指し得る。抗体は、免疫グロブリンの天然、組換え産生、遺伝子操作または改変形態、例えばイントラボディ、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体、ディアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、ＡＤＡＰＴＩＲ）であり得る。モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、非ヒト、キメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分、好ましくはヒト化またはヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であり得る。免疫グロブリン構造および機能は、例えばHarlow et al., Eds., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1988)において概略されている。インタクトな抗体の「抗原結合性部分」または「抗原結合性ドメイン」は、「抗体断片」を包含することを意味し、これは、インタクトな抗体の一部を示し、インタクトな抗体の抗原性決定可変領域または相補性決定領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｖ断片、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ディアボディ、線形抗体、ｓｃＦｖ抗体、ＶＨならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔａｎｔｉｇｅｎｂｉｎｄｉｎｇ）」は、抗原に結合する抗体の一部であり、可変性領域と鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に連結された重鎖のＣＨ１とを含む。抗体は、ＩｇＧおよびそのサブクラス（ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡならびにＩｇＤを含む任意のクラスまたはサブクラスの抗体であり得る。

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般的に、同様の構造を有し、各ドメインは４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ：ｆｒａｍｅｗｏｒｋｒｅｇｉｏｎ）および３つのＣＤＲを含む［例えばKindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照のこと］。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を与えるために十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングしてもよい。例えばPortolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照されたい。

「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義である「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および／または結合親和性を与える、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すことが当該技術分野において公知である。一般的に、各重鎖可変領域における３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）および各軽鎖可変領域における３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する。

本明細書において使用されるとき、「結合ドメイン」、「結合領域」および「結合部分」という用語は、標的分子（例えばホスファチジルセリン）と特異的かつ非共有結合的に結合、会合、合体、認識または合同する能力を有する分子、例としてペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質を指す。結合ドメインは、目的の生体分子または他の標的についての任意の天然、合成、半合成または組換え産生結合パートナーを含む。一部の実施形態においては、結合ドメインは、抗原結合性ドメイン、例として抗体またはその機能的結合ドメインもしくは抗原結合性部分である。例示的な結合ドメインには、単鎖抗体可変領域（例えばドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ）、受容体外部ドメイン（例えばＴｉｍ４）、リガンド（例えばサイトカイン、ケモカイン）または生体分子に結合する特異的能力について選択される合成ポリペプチドが含まれる。

「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ：Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ）とは、一般的に主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ：ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘ）分子に結合した抗原を認識することの原因である、Ｔ細胞（Ｔリンパ球とも呼ばれる）の表面上に見られる分子を指す。ＴＣＲは一般的に、ほとんどのＴ細胞において高度に可変性のαおよびβ鎖（それぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても公知）のジスルフィド結合ヘテロ二量体からなる。Ｔ細胞の小サブセットにおいては、ＴＣＲは、γおよびδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても公知）のヘテロ二量体からなる。ＴＣＲの各鎖は、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員であり、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域およびＣ末端の短い細胞質尾部を有する（Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3^rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997を参照のこと）。本開示のＴＣＲは、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヤギ、ウマまたは他の哺乳動物を含む様々な動物種からのＴＣＲであり得る。ＴＣＲは、細胞結合性（すなわち、膜貫通領域またはドメインを有する）であっても、可溶性形態であってもよい。ＴＣＲには、例えばｓｃＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ、ＴＣＲ融合コンストラクト［ＴＲｕＣ（商標）；米国特許出願公開第２０１７／０１６６６２２号を参照のこと］を含むＴＣＲの組換え産生、遺伝子操作、融合または改変形態が含まれる。

ＴＣＲ α鎖（Ｖα）およびβ鎖（Ｖβ）、またはγδＴＣＲのＶγおよびＶδの「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、ＴＣＲの抗原への結合に関与する。ネイティブＴＣＲのＶ_αおよびＶ_βは一般的に、同様の構造を有し、各可変ドメインは４つの保存されたＦＲおよび３つのＣＤＲを含む。Ｖ_αドメインは、２つの別々のＤＮＡセグメントである、可変遺伝子セグメント（Ｖ遺伝子）および接合遺伝子セグメント（Ｊ遺伝子）によってコードされ；Ｖ_βドメインは、３つの別々のＤＮＡセグメントである、可変遺伝子セグメント（Ｖ遺伝子）、多様性遺伝子セグメント（Ｄ遺伝子）および接合遺伝子セグメント（Ｊ遺伝子）によってコードされる。単一のＶ_αまたはＶ_βドメインは、抗原結合特異性を与えるために十分であり得る。「主要組織適合抗原複合体分子（ＭＨＣ分子）」とは、ペプチド抗原を細胞表面へデリバリーする糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜貫通α鎖（３つのαドメインを有する）および非共有結合的に会合したβ２ミクログロブリンからなるヘテロ二量体である。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２つの膜貫通糖タンパク質、αおよびβからなり、その両方は膜を貫通している。各鎖は、２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞質ゾルに起源を有するペプチドを細胞表面へデリバリーし、細胞表面においてペプチド：ＭＨＣ複合体は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、小胞系に起源を有するペプチドを細胞表面へデリバリーし、細胞表面においてそれらは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ分子は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物を含む様々な動物種からのＭＨＣ分子であり得る。

「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）とは、２つまたはそれよりも多い別個のドメインを含むキメラタンパク質を指し、細胞表面上に発現した場合、受容体として機能し得る。ＣＡＲは一般的に、標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、適宜の細胞外スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメイン［例えば免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ：ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｍｏｔｉｆ）含有Ｔ細胞活性化モチーフ、および適宜、細胞内共刺激性ドメイン］からなる。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有Ｔ細胞活性化ドメイン（例えばＣＤ３ζ）および細胞内共刺激性ドメイン（例えばＣＤ２８）を有する。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、単一のポリペプチド鎖として合成されるか、または単鎖ポリペプチドとして核酸分子によってコードされる。

特定の標的に特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するため、および結合ドメイン親和性を決定するための様々なアッセイ、例としてウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、およびＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析が公知である（また、例えばScatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949；および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号またはその均等物を参照のこと）。本明細書において使用されるとき、「特異的に結合する」とは、結合ドメインまたはその融合タンパク質の、標的分子への、１０^５Ｍ^－１に等しいか、またはそれよりも大きい親和性またはＫ_ａ（すなわち、１／Ｍの単位による特定の結合相互作用の平衡会合定数）による会合または合体であって、一方で、試料中の他の任意の分子または成分とは顕著に会合または合体しないことを指す。

「抗原」および「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘導することができる分子を指す。誘導される免疫応答は、抗体産生、特異的免疫学的コンピテント細胞の活性化またはこの両方を含み得る。タンパク質、糖タンパク質および糖脂質を含む高分子は、抗原として働き得る。抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。本明細書において企図されるとき、抗原は、（ｉ）遺伝子の全長ヌクレオチド配列によって単独で、または（ｉｉ）「遺伝子」によって、コードされる必要は全くない。抗原は生成されても、合成されてもよく、または抗原は生体試料に由来してもよい。そのような生体試料は、組織試料、腫瘍試料、細胞または生体体液を含み得るが、これらに限定されない。

「エピトープ」または「抗原性エピトープ」という用語には、同族免疫結合分子、例として抗体もしくはその断片（例えばｓｃＦｖ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラＴｉｍ４受容体または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質が特異的に結合する任意の分子、構造、アミノ酸配列または抗原内のタンパク質決定基が含まれる。エピトープ決定基は一般的に、分子の化学的活性表面群、例としてアミノ酸または糖側鎖を含有し、特異的三次元構造特徴および特異的電荷特徴を有し得る。エピトープは、線形エピトープまたはコンフォメーションエピトープであり得る。

本明細書において使用されるとき、「ＴｉｍＤ４」としても知られる「Ｔｉｍ４」（Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有タンパク質４）という用語は、マクロファージおよび樹状細胞などの抗原提示細胞上に典型的に発現されるホスファチジルセリン受容体を指す。Ｔｉｍ４は、細胞膜の外表面（外側）リーフレット上にホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）を提示する、アポトーシス細胞、壊死細胞、損傷細胞、傷害細胞、またはストレスを受けた細胞の食作用を媒介する。Ｔｉｍ４はまた、Ｔ細胞の表面上に発現するＴｉｍ１に結合し、かつ増殖および生存を誘導することもできる。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４とは、ヒトＴｉｍ４を指す。例示的なヒトＴｉｍ４タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

本明細書において使用されるとき、「Ｔｉｍ４結合ドメイン」という用語は、ＰｔｄＳｅｒに選択的に結合する金属イオン依存的ポケットを保有する、Ｔｉｍ４のＮ末端免疫グロブリンフォールドドメインを指す。例示的なヒトＴｉｍ４結合ドメインは配列番号５のアミノ酸配列を含み、かつ例示的なマウスＴｉｍ４結合ドメインは配列番号２のアミノ酸配列を含む。

Ｔｉｍ４結合ドメインは、可変免疫グロブリン（ＩｇＶ）様ドメイン（「ＩｇＶドメイン」と本明細書において呼ばれる）およびムチン様ドメイン（「ムチンドメイン」と本明細書において呼ばれる）を含む。例示的なヒトＴｉｍ４ＩｇＶドメインは配列番号３のアミノ酸配列を含み、かつ例示的なヒトＴｉｍ４ムチンドメインは配列番号４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、シグナルペプチドを含まない。例示的なヒトＴｉｍ４シグナルペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を有する。例示的なマウスＴｉｍ４シグナルペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有する。

本明細書において使用されるとき、「エフェクタードメイン」は、適切なシグナルを受容した場合エフェクタードメインを発現する細胞内の生物応答または生理応答を直接的または間接的に促進し得る融合タンパク質または受容体の細胞内部分である。ある特定の実施形態においては、エフェクタードメインは、結合した場合シグナルを受容するタンパク質またはタンパク質複合体の部分であるか、またはエフェクタードメインからのシグナルを誘発する標的分子に直接的に結合する。エフェクタードメインは、それが免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）などの１つまたは複数のシグナル伝達ドメインまたはモチーフを含有する場合、細胞応答を直接的に促進し得る。他の実施形態においては、エフェクタードメインは、細胞応答を直接的に促進する１つまたは複数の他のタンパク質と会合することによって細胞応答を間接的に促進する。

本明細書において使用されるとき、「共刺激性シグナル伝達ドメイン」とは、主要な、または古典的な（例えばＩＴＡＭ駆動）活性化シグナル（例えば、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインにより提供される）と共に活性化された場合、Ｔ細胞応答、例としてＴ細胞活性化、サイトカイン産生、増殖、分化、生存、エフェクター機能、またはそれらの組合せを促進する、または向上させる、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的部分を指す。共刺激性シグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、またはそれらの任意の組合せが含まれる。

本明細書において使用されるとき、「免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）活性化ドメイン」とは、免疫細胞受容体もしくは細胞表面マーカー上に天然または内因的に存在し、かつ少なくとも１つの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的部分を指す。ＩＴＡＭとは、ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉの保存されたモチーフを指す。ある特定の実施形態においては、ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインは、１、２、３、４つまたはそれよりも多いＩＴＡＭを含有する。ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインは、抗原結合またはリガンドエンゲージメント後、Ｔ細胞活性化シグナル伝達を開始し得る。ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ７９ａ、およびＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。

「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」とは、ポリペプチドの２つの隣接モチーフ、領域またはドメイン間の１つまたは複数の（例えば約２～２０個の）アミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、キメラタンパク質のコンストラクト設計から生じ得る（例えばキメラタンパク質をコードする核酸分子の構築中の制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基）。

「核酸分子」および「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡを含むＤＮＡの形態であり得る。核酸分子は、天然ヌクレオチド（例としてデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチド）、天然ヌクレオチドのアナログ（例えば天然ヌクレオチドのα－エナンチオマー形態）またはその両方の組合せからなり得る。修飾ヌクレオチドは、糖部分、またはピリミジンもしくはプリン塩基部分における修飾またはこれらの部分の置換を有し得る。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合またはそのような結合のアナログによって連結され得る。ホスホジエステル結合のアナログには、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニリデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌｉｄａｔｅ）、ホスホラミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）等が含まれる。核酸分子は、二本鎖であっても、一本鎖であってもよく、一本鎖の場合、コード鎖であっても、非コード（アンチセンス鎖）であってもよい。コード分子は、当該技術分野において公知のコード配列と同一のコード配列を有してもよく、または遺伝子コードの重複または縮重の結果として、またはスプライシングによって、同じポリペプチドをコードし得る異なるコード配列を有してもよい。

「コードする」とは、特定のポリヌクレオチド配列、例としてＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびｍＲＮＡ配列の、生物学的プロセスにおいて規定のヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または規定のアミノ酸配列のいずれかを有する他のポリマーおよび高分子の合成のための鋳型として働く固有の特性、およびそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、ポリヌクレオチドは、細胞または他の生体系においてそのポリヌクレオチドに対応するｍＲＮＡの転写および翻訳がタンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。コード鎖および非コード鎖の両方は、タンパク質またはポリヌクレオチドの他の生成物をコードすると言及され得る。別に指定しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いの縮重型であり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。

本明細書において使用されるとき、「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列またはペプチドの配列を構成し得るアミノ酸の最大数について限定はない。ポリペプチドには、ペプチド結合によって互いに接合された２つまたはそれよりも多いアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書において使用されるとき、この用語は、当該技術分野において例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも通常呼ばれる短鎖、および一般的に当該技術分野においてタンパク質と呼ばれ、多くの種類がある長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」には、中でも、例えば生物活性断片、実質的同種ポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異型、改変ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質が含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチドまたはそれらの組合せが含まれる。

本明細書において使用されるとき、「成熟ポリペプチド」または「成熟タンパク質」という用語は、分泌されるか、または細胞膜に、またはある特定の細胞小器官（例えば小胞体、ゴルジ体またはエンドソーム）内に局在化し、かつＮ末端シグナルペプチドを含まないタンパク質またはポリペプチドを指す。

「シグナルペプチド」は、「シグナル配列」、「リーダー配列」、「リーダーペプチド」、「局在化シグナル」または「局在化配列」とも呼ばれ、分泌経路に運命付けられた新規合成タンパク質のＮ末端に存在する短いペプチド（長さが通常１５～３０個のアミノ酸）である。シグナルペプチドは典型的に、Ｎ末端における短い範囲の親水性正電荷アミノ酸、５～１５個の残基の中心疎水性ドメインおよびシグナルペプチダーゼのための切断部位を有するＣ末端領域を含む。真核生物においては、シグナルペプチドは、新規合成タンパク質の小胞体への移行を誘発し、小胞体においてそれはシグナルペプチダーゼによって切断され、成熟タンパク質を創出し、その後成熟タンパク質はその適切な目的地へ進行する。

「キメラ」という用語は、内因性ではなく、かつ天然においては通常、互いに接合または連結されたかたちでは見られない、互いに接合または連結された配列を含む、任意の核酸分子またはタンパク質を指す。例えば、キメラ核酸分子は、異なる供給源に由来する調節配列およびコード配列、または同じ供給源に由来するが、天然に見られる様式とは異なる様式において配置されている調節配列およびコード配列を含み得る。

本明細書において使用されるとき、「内因性」または「ネイティブ」という用語は、遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性の天然変異型を含む、宿主または宿主細胞に通常存在する遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性を指す。

本明細書において使用されるとき、「同種の」または「ホモログ」とは、宿主細胞からの、例えば同じ宿主細胞からの、異なる宿主細胞からの、異なる生物からの、異なる系統からの、異なる種からの、第２の遺伝子または活性に祖先によって関連する分子または活性を指す。例えば、異種の分子、または分子をコードする異種の遺伝子は、それぞれ、ネイティブ宿主細胞分子または分子をコードする遺伝子と同種である場合があり、変更された構造、配列、発現レベルまたはその任意の組合せを有してもよい。

本明細書において使用されるとき、「異種の」核酸分子、コンストラクトまたは配列とは、宿主細胞にとってネイティブではないが、宿主細胞からの核酸分子または核酸分子の部分にとって同種であり得る核酸分子または核酸分子の部分を指す。異種の核酸分子、コンストラクトまたは配列の供給源は、異なる属または種からの供給源であり得る。一部の実施形態においては、異種の核酸分子は、天然ではない。ある特定の実施形態においては、異種の核酸分子は、例えばコンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーションその他によって、宿主細胞または宿主ゲノムに添加され（すなわち、内因性またはネイティブではなく）、添加された分子は、宿主細胞ゲノムに統合されても、染色体外遺伝子材料として（例えばプラスミドまたは自己複製ベクターの他の形態として）存在してもよく、多数のコピーにおいて存在してもよい。加えて、「異種の」とは、宿主細胞が同種のタンパク質または活性をコードするとしても、宿主細胞に導入された非内因性核酸分子によってコードされる非ネイティブ酵素、タンパク質または他の活性を指す。

本明細書において使用されるとき、「操作した」、「組換え」、「改変」または「非天然」という用語は、異種の核酸分子の導入によって改変された生物、微生物、細胞、核酸分子またはベクターを指すか、あるいはヒトの介入によって遺伝子操作された、すなわち、異種の核酸分子の導入によって改変された細胞または微生物を指すか、あるいは内因性核酸分子または遺伝子の発現が制御されるか、調節解除されるか、もしくは構成的であるように変更され、そのような変更または改変が遺伝子操作によって導入され得る細胞または微生物を指す。ヒトが生成した遺伝子変更は、例えば、１つまたは複数のタンパク質、キメラ受容体または酵素をコードする核酸分子（プロモーター等の発現制御エレメントを含み得る）を導入する改変；または他の核酸分子の付加、欠失、置換；または細胞の遺伝子材料の他の機能的破壊もしくは細胞の遺伝子材料への付加を含み得る。例示的な改変は、コード領域またはその機能的断片における改変、参照分子または親分子とは異種の、または同種のポリペプチドを含む。追加の例示的な改変には、例えば、改変が遺伝子またはオペロンの発現を変更する、非コード調節領域における改変が含まれる。

本明細書において使用されるとき、「導入遺伝子」という用語は、発現が宿主細胞において所望され、遺伝子操作技術によって細胞に移行された、目的のタンパク質（例えばキメラＴｉｍ４受容体）をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドを指す。導入遺伝子は、治療目的のタンパク質、およびレポーター、タグ、マーカー、自殺タンパク質等であるタンパク質をコードし得る。導入遺伝子は、天然供給源からの導入遺伝子、天然遺伝子の改変であってもよく、組換えまたは合成分子であってもよい。ある特定の実施形態においては、導入遺伝子は、ベクターの成分である。

「過剰発現した」抗原または抗原の「過剰発現」という用語は、細胞における異常に高レベルの抗原を指す。過剰発現した抗原または抗原の過剰発現は多くの場合、血液系腫瘍、および対象の特定の組織または器官内の固形腫瘍を形成する細胞における疾患状態等の、疾患状態と関連付けられる。腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられる固形腫瘍または血液系腫瘍は、当該技術分野において公知の標準のアッセイによって決定することができる。

２つまたはそれよりも多い核酸またはアミノ酸配列間の「同一性パーセント」は、２つまたはそれよりも多い配列の整列を最適化するために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、それらの配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数ｘ１００）。２つまたはそれよりも多い配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴプログラム等の数学的アルゴリズムをそれらのデフォルトパラメータを用いて使用して達成することができる（例えばAltschul et al., J. Mol. Biol. 215:403, 1990；また、www.ncbi.nlm.nih.gov/BLASTのＢＬＡＳＴＮを参照のこと）。

「保存的置換」は、当該技術分野において、１つのアミノ酸の、同様の特性を有する別のアミノ酸への置換として認識されている。例示的な保存的置換は、当該技術分野において周知である［例えば１９９７年３月１３日公開のＷＯ９７／０９４３３、１０ページ；Lehninger, Biochemistry, Second Edition; Worth Publishers, Inc. NY:NY (1975), pp.71-77；Lewin, Genes IV, Oxford University Press, NY and Cell Press, Cambridge, MA (1990), p. 8を参照のこと］。

「プロモーター」という用語は、本明細書において使用されるとき、細胞の合成機構によって認識されるか、または合成機構に導入される、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するために必要とされるＤＮＡ配列として定義される。

本明細書において使用されるとき、「プロモーター／調節配列」という用語は、プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要とされる核酸配列を意味する。一部の場合、この配列は、コアプロモーター配列であってもよく、他の場合、また、この配列は、エンハンサー配列、および遺伝子産物の発現に必要とされる他の調節エレメントを含んでもよい。プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的様式において遺伝子産物を発現するプロモーター／調節配列であってもよい。

「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか、または特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、細胞のほとんどまたは全ての生理学的条件下において遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。

「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか、または特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、実質的にプロモーターに対応するインデューサーが細胞内に存在する場合のみ、遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。

「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか、または遺伝子によって特定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織タイプの細胞である場合のみ、遺伝子産物が細胞内で産生されることをもたらすヌクレオチド配列である。

「転写制御下」または「作動可能に連結された」という句は、本明細書において使用されるとき、プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始およびポリヌクレオチドの発現を制御するためにポリヌクレオチドに関して正しい場所および方向において存在することを意味する。

「ベクター」は、別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、例えばプラスミド、コスミド、ウイルスまたはファージであり得る。また、この用語は、核酸の細胞への移行を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。「発現ベクター」は、ベクターが適切な環境に存在する場合、ベクターが有する１つまたは複数の遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を方向付けることができるベクターである。

ある特定の実施形態においては、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例には、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ガンマレトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。「レトロウイルス」は、ＲＮＡゲノムを有するウイルスである。「ガンマレトロウイルス」とは、レトロウイルス科ファミリーの属を指す。ガンマレトロウイルスの例には、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルスおよび鳥類細網内皮症ウイルスが含まれる。「レンチウイルス」とは、分裂細胞および非分裂細胞に感染することができるレトロウイルスの属を指す。レンチウイルスの例には、ＨＩＶ（ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ）（ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含むヒト免疫不全ウイルス）、ウマ伝染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ：ｆｅｌｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ：ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ：ｓｉｍｉａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ）が含まれるが、これらに限定されない。

他の実施形態においては、ベクターは、非ウイルスベクターである。非ウイルスベクターの例には、脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、閉鎖末端直鎖状二本鎖（ＣＥＬｉＤ：ｃｌｏｓｅｄ－ｅｎｄｅｄｌｉｎｅａｒｄｕｐｌｅｘ）ＤＮＡおよびトランスポゾン媒介遺伝子移行（ＰｉｇｇｙＢａｃ、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ）が含まれる。非ウイルスデリバリー系が使用される場合、デリバリー媒体は、リポソームであり得る。脂質製剤は、インビトロ、エクスビボまたはインビボで核酸を宿主細胞に導入するために使用され得る。核酸は、リポソームの内部に封入されていてもよく、リポソームの脂質二重層内に散在していてもよく、リポソームおよび核酸の両方と会合する連結分子を介してリポソームに結合していてもよく、ミセルに含有されるか、もしくはミセルと複合体形成していてもよく、別の方法で脂質と会合していてもよい。

本明細書において使用されるとき、「貪食」という用語は、直径が１００ｎｍを超える内因性または外因性細胞または粒子が、本開示の食細胞または宿主細胞によって内部移行される、受容体媒介プロセスを指す。貪食は典型的に、多ステップ：（１）貪食受容体の、標的細胞または粒子上のプロ貪食マーカーまたは抗原性マーカーへの直接的または間接的（架橋分子を介する）結合を介する標的細胞または粒子の繋留；および（２）標的細胞全体もしくは粒子全体またはそれらの部分の内部移行または貪食からなる。ある特定の実施形態においては、内部移行は、食細胞または宿主細胞の細胞骨格再配置を介して起こり、内部移行された標的を含有する膜結合区画であるファゴソームを形成し得る。貪食は、ファゴソームがますます酸性になり、リソソームと融合する（ファゴリソソームを形成する）ファゴソームの成熟をさらに含む場合があり、これに際して、貪食された標的は分解される（例えば「食作用」）。あるいは、ファゴソーム－リソソーム融合は、貪食において観察されない場合がある。また別の実施形態においては、ファゴソームは、その内容物を、完全な分解前に細胞外環境へ吐き戻すか、または排出し得る。一部の実施形態においては、貪食とは、食作用を指す。一部の実施形態においては、貪食は、本開示の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留を含むが、内部移行は含まない。一部の実施形態においては、貪食は、本開示の宿主細胞の食細胞による標的細胞または粒子の繋留、および標的細胞または粒子の部分の内部移行を含む。

本明細書において使用されるとき、「食作用」という用語は、標的細胞または粒子の繋留、標的細胞または粒子の貪食および内部移行された標的細胞または粒子の分解が起こる、細胞または大粒子（０．５μｍ以上）の貪食プロセスを指す。ある特定の実施形態においては、食作用は、内部移行された標的細胞または粒子を包含するファゴソームの形成、および中の内容物が分解されるファゴリソソームを形成するリソソームとのファゴソーム融合を含む。ある特定の実施形態においては、食作用中に、標的細胞または粒子によって発現されるホスファチジルセリンへの本開示の宿主細胞上に発現するキメラＴｉｍ４受容体の結合後、食作用シナプスが形成され；食作用シナプスにおいてアクチンリッチ食作用カップが生成し；細胞骨格再配置を通して食作用アームが標的細胞または粒子の周囲に伸長し；最終的に、モータータンパク質によって生成した力を通して標的細胞または粒子が食細胞または宿主細胞に引き込まれる。本明細書において使用されるとき、「食作用」には、非炎症様式におけるアポトーシス細胞または壊死細胞の食作用を特に指す「エフェロサイトーシス」のプロセスが含まれる。

「免疫系細胞」または「免疫細胞」という用語は、骨髄の造血幹細胞に由来する免疫系の任意の細胞を意味する。造血幹細胞は、２つの主要な系統：骨髄系前駆細胞（骨髄細胞、例として単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球および顆粒球を生じる）およびリンパ球前駆細胞［リンパ球細胞、例としてＴ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を生じる］を生じる。例示的な免疫系細胞には、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－二種陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞および樹状細胞が含まれる。マクロファージおよび樹状細胞は、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ（ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ）」とも呼ばれる場合があり、これらは、ペプチドと複合体形成したＡＰＣの表面上の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）受容体が、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲと相互作用するとき、Ｔ細胞を活性化し得る特殊化細胞である。

「Ｔ細胞」という用語は、Ｔ細胞系統の細胞を指す。「Ｔ細胞系統の細胞」とは、細胞を他のリンパ球および赤血球系統または骨髄系統の細胞から区別する、Ｔ細胞またはその前駆体もしくは前駆細胞の少なくとも１つの表現型特徴を示す細胞を指す。そのような表現型特徴は、Ｔ細胞に特異的な１つまたは複数のタンパク質（例えばＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋）の発現、またはＴ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的または免疫学的特色を含み得る。例えば、Ｔ細胞系統の細胞は、Ｔ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞；ＣＤ２５^＋未成熟かつ不活性化Ｔ細胞；ＣＤ４またはＣＤ８系統コミットメントを受けた細胞；ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋二種陽性である胸腺前駆細胞；単一陽性ＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋；ＴＣＲαβもしくはＴＣＲγδ；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｔ細胞であり得る。「Ｔ細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ８^＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、Ｔｒｅｇ、ナチュラルキラーＴ細胞および組織レジデントＴ細胞を包含する。

「Ｂ細胞」という用語は、Ｂ細胞系統の細胞を指す。「Ｂ細胞系統の細胞」とは、細胞を他のリンパ球および赤血球系統または骨髄系統の細胞から区別する、Ｂ細胞またはその前駆体もしくは前駆細胞の少なくとも１つの表現型特徴を示す細胞を指す。そのような表現型特徴は、Ｂ細胞に特異的な１つまたは複数のタンパク質（例えばＣＤ１９^＋、ＣＤ７２＋、ＣＤ２４＋、ＣＤ２０^＋）の発現、またはＢ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的または免疫学的特色を含み得る。例えば、Ｂ細胞系統の細胞は、Ｂ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞（例えばプレプロＢ細胞、プロＢ細胞およびプレＢ細胞）；未成熟かつ不活性化Ｂ細胞；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｂ細胞であり得る。したがって、「Ｂ細胞」は、ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞およびメモリーＢ細胞（例えばＣＤ２７^＋、ＩｇＤ^－）を包含する。

表面上に免疫受容体（例えばＴＣＲ）または本開示に記載されるキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞（例えばＴ細胞またはＮＫ細胞）についての「細胞傷害活性」という用語は、「細胞溶解活性」とも呼ばれ、細胞が、抗原特異的シグナル伝達に際して（例えばＴＣＲ、キメラＴｉｍ４受容体を介して）、標的細胞がアポトーシスを受けるように誘導することを意味する。一部の実施形態においては、細胞傷害性細胞は、顆粒からの細胞毒、例としてパーフォリン、グランザイムおよびグラニュライシンの放出を介して標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。パーフォリンは、標的細胞膜に挿入し、水および塩が標的細胞に迅速に入ることを可能にする孔を形成する。グランザイムは、標的細胞においてアポトーシスを誘導するセリンプロテアーゼである。また、グラニュライシンは、標的細胞膜において孔を形成することができ、炎症促進性分子である。一部の実施形態においては、細胞傷害性細胞は、抗原特異的シグナル伝達後にＴ細胞上でアップレギュレートされるＦａｓリガンドと、標的細胞上に発現されるＦａｓ分子との相互作用を介して、標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。Ｆａｓは、いくつかの異なる細胞の表面上のアポトーシスシグナル伝達受容体分子である。

免疫細胞についての「疲弊」という用語は、乏しいエフェクター機能（例えば低減したサイトカイン産生、低減した細胞傷害活性）、低減した増殖能力、免疫チェックポイント分子の増大した発現、および機能的なエフェクター細胞またはメモリー細胞のものとは異なる転写状態により定義される免疫細胞機能不全の状態を指す。ある特定の実施形態においては、疲弊した免疫細胞は、その標的抗原の存在に対して非応答性となる。免疫細胞疲弊は、標的抗原への慢性的曝露から（例えば慢性感染から生じ得る通り）、またはそれが免疫抑制性環境（例えば腫瘍微小環境）に侵入した場合に、生じ得る。ある特定の実施形態においては、免疫細胞疲弊とは、Ｔ細胞疲弊、ＮＫ細胞疲弊、またはその両方を指す。ある特定の実施形態においては、疲弊したＴ細胞は、（ａ）ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの増大した発現；（ｂ）ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、もしくはそれらの任意の組合せの減少した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を示す。ある特定の実施形態においては、疲弊したＮＫ細胞は、（ａ）ＰＤ－１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの増大した発現；（ｂ）ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、もしくはその両方の減少した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を示す。

「疾患」は、対象が恒常性を維持することができない、かつ疾患が改善しない場合その後、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態である。対照的に、対象における「障害」または「望ましくない状態」は、対象が恒常性を維持することができるが、対象の健康状態が、それが障害または望ましくない状態の非存在下にある場合よりも好ましくない、健康状態である。処置されないままの場合、障害または望ましくない状態は、対象の健康状態のさらなる減少を必ずしももたらさない。

「がん」という用語は、本明細書において使用されるとき、異常な細胞の迅速かつ制御されていない増殖によって特徴付けられる疾患として定義される。異常な細胞は、固形腫瘍を形成するか、または血液系腫瘍を構成し得る。がん細胞は、局所的に、または血流およびリンパ系を通して身体の他の部分に広がり得る。様々ながんの例には、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵がん、結腸直腸がん、腎がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、肺がん等が含まれるが、これらに限定されない。

「対象」、「患者」および「個体」という用語は、本明細書において互換的に使用され、免疫応答が誘発され得る生存生物（例えば哺乳動物）を含むと意図される。対象の例には、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそのトランスジェニック種が含まれる。

「養子細胞免疫療法」または「養子免疫療法」は、天然の、または遺伝子操作した、疾患抗原特異的免疫細胞（例えばＴ細胞）の投与を指す。養子細胞免疫療法は、自家（免疫細胞が受容者からの細胞である）、同種異系（免疫細胞が同じ種のドナーからの細胞である）または同系（免疫細胞が受容者と遺伝的に同一のドナーからの細胞である）であり得る。

「自家」とは、材料が後に再導入される同じ対象に由来する任意の材料（例えば器官、組織、細胞のグラフト）を指す。

「同種異系」とは、同じ種の異なる対象に由来するグラフトを指す。

本開示のキメラタンパク質またはキメラタンパク質を発現する細胞（例えばキメラＴｉｍ４受容体またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞）の「治療有効量」または「有効量」とは、治療される疾患、障害または望ましくない状態の１つまたは複数の症状の改善をもたらすために十分なタンパク質または細胞の量を指す。単独で投与される、個々の活性成分、または単一の活性成分を発現する細胞について言及する場合、治療有効用量とは、その成分またはその成分を発現する細胞の単独の効果を指す。組合せについて言及する場合、治療有効用量とは、連続投与されるか、同時投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす、活性成分または組み合わせた付属の活性成分の、活性成分を発現する細胞と組み合わせた量を指す。

「治療する」または「治療」または「改善する」とは、対象の疾患、障害または望ましくない状態の医療管理を指す。一般的に、本開示のキメラタンパク質を発現する宿主細胞を含む適切な用量または治療レジメンは、治療利益または予防利益を誘発するために十分な量において投与される。治療利益または予防／防止利益には、臨床アウトカムの改善；疾患、障害または望ましくない状態と関連付けられる症状の減少または軽減；症状の発生の減少；クオリティ・オブ・ライフの改善；より長い無疾患状態；疾患、障害または望ましくない状態の程度の縮減；疾患状態の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；生存延長；またはそれらの任意の組合せが含まれる。

「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍容量における減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加またはがん性状態と関連付けられる様々な生理学的症状の改善によって証明され得る生物学的効果を指す。また、「抗腫瘍効果」は、血液系腫瘍または腫瘍形成の予防によって証明され得る。

「自己免疫疾患」とは、自己免疫応答から生じる障害を指す。自己免疫疾患は、自己抗原に対する不適切に過剰な応答の結果である。自己免疫応答は、自己抗体、自己反応性Ｔ細胞、またはその両方を生成する自己反応性Ｂ細胞を含み得る。本明細書において使用されるとき、「自己抗体」は、これもまた対象により生成される自己抗原に結合する、対象によって生成される抗体である。

追加の定義は、本開示全体を通して提供される。

キメラＴｉｍ４受容体
本開示は、（ａ）Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインおよびＴｉｍ４ムチンドメインを含む結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有シグナル伝達ドメイン、共刺激性シグナル伝達ドメイン；およびＴＬＲシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含むキメラＴｉｍ４受容体を提供する。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。ある特定の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。ある特定の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質を含む。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

追加のキメラＴｉｍ４受容体が、本開示において提供される。

ある特定の実施形態においては、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する細胞外スペーサードメインを含んでもよい。

宿主細胞において発現される場合、本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、食作用ならびに抗原プロセシングおよび提示の生得的機能を有する、改変された宿主細胞、例としてＴ細胞に対して、ホスファチジルセリン特異的なＴ細胞の細胞傷害性を与え得る（例えば、宿主細胞が、その表面上にホスファチジルセリンを発現するストレスを受けた細胞、損傷細胞、傷害細胞、アポトーシス細胞、または壊死細胞に対して細胞傷害性になる）。細胞内ＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞アクチベーターとして機能する。細胞内ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、外因性可溶性抗原を提示し、かつクラスＩ制限Ｔ細胞を活性化する宿主細胞の能力を向上させる。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシン、またはそれらの任意の組合せの放出を介してターゲティングされた細胞においてアポトーシスを誘導する。一部の実施形態においては、本説明に記載のキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞は、ホスファチジルセリン提示細胞に対して特異的な貪食表現型を示す。一部の実施形態においては、本開示に記載のキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞、例えばＴ細胞は、向上した抗原提示活性を示す。理論に拘泥することを望まないが、単一Ｔ細胞におけるＴ細胞抗原捕捉および提示能力と誘導性かつ標的特異的細胞傷害機能との組合せは、内因性抗腫瘍免疫の活性化および向上を介する二次的免疫応答の可能性を示唆する。

Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインとを含むキメラＴｉｍ４受容体、例として、例えば、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むキメラＴｉｍ４受容体を含むＴ細胞は、インビトロにおいて追加の抗原曝露に際して再活性化される能力を示し、このことは、インビボにおける持続的な作用を示唆する。さらに、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインとを含むキメラＴｉｍ４受容体、例として、例えば、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むキメラＴｉｍ４受容体は、Ｎ末端からＣ末端へと、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８膜貫通ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインと、（ｄ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインとを含むキメラＴｉｍ４受容体、例として、例えば、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むキメラＴｉｍ４受容体と比較して、より一貫した抗原提示機能を示した。

細胞内シグナル伝達ドメインは、キメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインのホスファチジルセリンへの結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達することができる、１つまたは複数のエフェクタードメインを含み得る。細胞内シグナル伝達ドメインによるシグナル伝達は、ホスファチジルセリンへの細胞外ドメインの結合により誘発される。細胞内シグナル伝達ドメインによって伝達されるシグナルは、キメラＴｉｍ４受容体含有細胞のエフェクター機能を促進する。エフェクター機能の例には、細胞傷害活性、サイトカインの分泌、増殖、抗アポトーシスシグナル伝達、持続性、拡大増殖、その表面上にホスファチジルセリンを発現する標的細胞もしくは粒子の貪食、抗原提示、またはそれらの任意の組合せが含まれる。

ある特定の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、第１の細胞内シグナル伝達ドメインと、第２の細胞内シグナル伝達ドメインと、第３の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。本開示に記載のキメラＴｉｍ４受容体は、細胞免疫応答を向上させるか、免疫細胞疲弊を低減させるか、またはその両方を行う共刺激を提供しながら、アポトーシス細胞、壊死細胞、損傷細胞、またはストレスを受けた細胞のクリアランスが有益である、様々な治療方法において用いることができる。

本開示の融合タンパク質の成分部分は、本明細書において詳細にさらに説明される。

細胞外ドメイン
本明細書において説明する通り、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインを含む。Ｔｉｍ４結合ドメインは、負に荷電した頭部基を有するリン脂質であり、かつ細胞膜の成分であるホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）に対する特異性を与える。健康な細胞においては、ホスファチジルセリンは、細胞膜の内側リーフレットにおいて優勢的に見出される。しかしながら、細胞がストレスを受けるか、損傷するかまたはアポトーシスもしくは壊死を受けたとき、ホスファチジルセリンは細胞膜の外側リーフレット上に曝露される。したがって、ホスファチジルセリンは、ストレスを受けた細胞、損傷細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞、ピロトーシス細胞、または腫張細胞を区別するためのマーカーとして用いることができる。Ｔｉｍ結合ドメインによるホスファチジルセリンの結合は、ホスファチジルセリンと別の分子との間の相互作用を遮断し、かつ例えば、ホスファチジルセリンのある特定の機能（例えばシグナル伝達）を妨害、低減または除去し得る。一部の実施形態においては、ホスファチジルセリンの結合は、除去のために、ある特定の生物学的経路を誘導するか、またはホスファチジルセリン分子またはホスファチジルセリンを発現する細胞を特定し得る。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体における使用のために好適なＴｉｍ４結合ドメインは、ホスファチジルセリンに特異的に結合するＴｉｍ４分子に由来する任意のポリペプチドまたはペプチドであり得る。実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、Ｔｉｍ４に由来するＩｇＶドメイン、およびＴｉｍ４に由来するムチンドメインを含む。

ホスファチジルセリン結合は一般的に、ＩｇＶドメインによって調節される。コアホスファチジルセリン結合ドメインは、ＩｇＶドメインにおける４つのアミノ酸配列（例えば配列番号３のアミノ酸９５～９８）である。Ｔｉｍ４結合ドメインは、低ホスファチジルセリン密度を有する細胞に最小限に結合する。

一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、ヒトＴｉｍ４から取得されるかまたはこれに由来する。例示的なヒトＴｉｍ４分子は、Ｕｎｉｐｒｏｔ．Ｒｅｆ．Ｑ９６Ｈ１５（配列番号１）において提供される。例示的なヒトＴｉｍ４結合ドメインは、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。例示的なマウスＴｉｍ４結合ドメインは、配列番号２または配列番号２のアミノ酸２３～２７９のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、配列番号２または配列番号２のアミノ酸２３～２７９について少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、配列番号２または配列番号２のアミノ酸２３～２７９のアミノ酸配列について少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０箇所のアミノ酸改変（例えば欠失、付加、置換）を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、Ｔｉｍ４由来のＩｇＶドメインを含む。例示的なヒトＴｉｍ４ＩｇＶドメインは、配列番号３において提供される。一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインは、配列番号３について少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインは、配列番号３のアミノ酸配列について少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０箇所のアミノ酸改変（例えば欠失、付加、置換）を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインは、Ｔｉｍ４由来のムチンドメインを含む。例示的なヒトＴｉｍ４ムチンドメインは、配列番号４において提供される。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４ムチンドメインは、配列番号４について少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、Ｔｉｍ４ムチンドメインは、配列番号４のアミノ酸配列について少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０箇所のアミノ酸改変（例えば欠失、付加、置換）を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、Ｔｉｍ結合ドメインは、Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインおよびＴｉｍ４ムチンドメインを含む。一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインは配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなり、かつＴｉｍ４ムチンドメインは配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４ＩｇＶドメインとＴｉｍ４ムチンドメインとが共に、配列番号５または配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、Ｔｉｍ４結合ドメインまたはＴｉｍ４ＩｇＶドメインは、配列番号７のＴｉｍ４シグナル配列をさらに含む。

一部の実施形態においては、細胞外ドメインは、細胞外非シグナル伝達スペーサーまたはリンカードメインを含んでもよい。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを宿主細胞表面から離れるように位置させて、適切な細胞／細胞接触、結合および活性化をさらに可能にし得る。本明細書において説明するキメラ受容体に含まれる場合、細胞外スペーサードメインは一般的に、キメラＴｉｍ４受容体の細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて、標的分子結合を最適化するために変動し得る（例えばGuest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照のこと）。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域、または変更された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ_４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号において説明されており、当該ヒンジ領域は、その全体を参照により本明細書に組み込む。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号９）のアミノ酸配列を有する改変ＩｇＧ_４ヒンジ領域を含む。本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体において使用され得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異型であり得る１型膜タンパク質、例としてＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域からのヒンジ領域が含まれる。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤ２８ヒンジ領域を含む。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全てまたは一部を含む（例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照されたく、当該スペーサーは、その全体を参照により本明細書に組み込む）。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。

一部の実施形態においては、細胞外ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインは、マウス、ヒトまたはキメラである。

細胞内シグナル伝達ドメイン
本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、キメラＴｉｍ４受容体の細胞外ドメインのホスファチジルセリンへの結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達することができる。細胞内シグナル伝達ドメインによって伝達されるシグナルは、キメラＴｉｍ４受容体含有細胞のエフェクター機能を促進する。エフェクター機能の例には、細胞傷害活性、サイトカインの分泌、増殖、抗アポトーシスシグナル伝達、持続性、拡大増殖、その表面上にホスファチジルセリンを発現する標的細胞もしくは粒子の貪食、抗原捕捉、抗原プロセシング、抗原提示、またはそれらの任意の組合せが含まれる。

細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインと、二次細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインと、二次細胞内シグナル伝達ドメインと、三次細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一次、二次、および／または三次細胞内シグナル伝達ドメインは独立して、十分なシグナル伝達活性を保持するシグナル伝達分子の任意の部分であり得る。一部の実施形態においては、全長シグナル伝達分子またはシグナル伝達分子の全長細胞内成分が使用される。一部の実施形態においては、シグナル伝達分子またはシグナル伝達分子の細胞内成分の切断部分が使用され、但し、その切断部分は十分なシグナル伝達活性を保持する。一部の実施形態においては、シグナル伝達ドメインは、シグナル伝達分子の全部分または切断部分の変異型であり、但し、その変異型は十分なシグナル伝達活性を保持する（すなわち、機能的変異型である）。

一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインのＮ末端からＨＲＦＨＧＬＷＹＭＫＭＭＷＡＷＬＱＡＫＲＫＰＲＫＡＰＳＲＮのペプチド配列が除去されたＴＬＲ２シグナル伝達ドメインである。

本明細書において使用されるとき、一次、二次、および三次細胞内シグナル伝達ドメインの指定には、キメラＴｉｍ４受容体の細胞内部分のＮ末端における一次細胞内シグナル伝達ドメイン、中央における二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣ末端における三次細胞内シグナル伝達ドメインの配置が含まれるが、これらに限定されない。したがって、一次細胞内シグナル伝達ドメインの指定は、キメラＴｉｍ４受容体の細胞内部分のＮ末端における選択された細胞内シグナル伝達ドメインの使用を限定しない。二次細胞内シグナル伝達ドメインの指定は、キメラＴｉｍ４受容体の細胞内部分の中央における（または２つの細胞内シグナル伝達ドメインのみを有するそれらのキメラＴｉｍ４受容体に関してＣ末端における）選択された細胞内シグナル伝達ドメインの使用を限定しない。三次細胞内シグナル伝達ドメインの指定は、キメラＴｉｍ４受容体の細胞内部分のＣ末端における選択された細胞内シグナル伝達ドメインの使用を限定しない。したがって、キメラＴｉｍ４受容体の細胞内部分内の一次、二次、および／または三次細胞内シグナル伝達ドメインの異なる配置が企図される。

例示的なＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。例示的なＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。例示的なＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１６または配列番号１７のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。

一部の実施形態においては、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むかまたはからなるＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へと、ＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へと、ＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインである。

一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３９または配列番号４０に示される一次、二次、および三次細胞内シグナル伝達ドメインの組合せを含む。

細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタおよびそれらのトランスジェニック種を含む哺乳動物種に由来し得る。

膜貫通ドメイン
キメラＴｉｍ４受容体の膜貫通ドメインは、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続し、かつこれらの間に位置する。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断する疎水性アルファヘリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインに、または存在する場合細胞外スペーサードメインに直接的に融合され得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、膜内在性タンパク質［例えば受容体、表面抗原分類（ＣＤ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子その他］に由来する。一実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインが由来する分子と同じ分子から選択される。別の実施形態においては、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインが由来する分子と同じ分子から選択される。例えば、キメラＴｉｍ４受容体は、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインが異なる分子に由来するか；膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインが異なる分子に由来するか；または膜貫通ドメイン、細胞外ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインの全部が異なる分子に由来する。一部の実施形態においては、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。例示的なＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、配列番号１１について少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはからなる。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列について少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０箇所のアミノ酸改変（例えば欠失、付加、置換）を有するアミノ酸配列を含む。

膜貫通ドメインは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、およびそれらのトランスジェニック種を含む任意の哺乳動物種に由来し得る。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種、またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するポリヌクレオチド配列によりコードされる。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化である。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体の１つのドメインの別のドメインへの直接的融合は、介在性接合部アミノ酸の存在を排除しないと理解される。接合部アミノ酸は、天然または非天然（例えばキメラタンパク質のコンストラクト設計から生じる）であり得る。例えば、接合部アミノ酸は、１つのドメインの別のドメインへの接合またはベクターへのキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドのクローニングのために用いられる制限酵素部位から生じ得る。

例示的キメラＴｉｍ４受容体
例示的キメラＴｉｍ４受容体および成分配列は、表１および表２において記載される。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１８のアミノ酸配列またはシグナル配列（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１９のアミノ酸配列またはシグナル配列（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１９のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、ＴＬＲ２ＴＩＲ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号５を含むＴｉｍ４結合ドメイン、配列番号１１を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１２を含むＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１７を含むＴＬＲ２ＴＩＲ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１４を含むＣＤ３ζ三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号７のＮ末端シグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１８またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１８を含むかまたはからなる。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、Ｔｉｍ４結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２ＴＩＲ三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号５を含むＴｉｍ４結合ドメイン、配列番号１１を含むＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１２を含むＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１４を含むＣＤ３ζ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１７を含むＴＬＲ２ＴＩＲ三次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号７のＮ末端シグナルペプチドをさらに含む。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、配列番号１９またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１９を含むかまたはからなる。

特異的ドメインならびにＮ末端からＣ末端へとＴｉｍ４結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８一次細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζ二次細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２ＴＩＲ三次細胞内シグナル伝達ドメインの配置を有するキメラＴｉｍ４受容体、例として配列番号１９またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１９に示されるアミノ酸配列により提供されるものは、同じドメインを含むが、ＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインの位置が交換されているキメラＴｉｍ４受容体、例として配列番号１８またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１８に示されるアミノ酸配列により提供されるもの（ＣＥＲ１２３４とも呼ばれる）と比較して改善された特性を有し得る。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞とも呼ばれる、配列番号１９またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１９に記載のキメラ貪食受容体によって形質導入されたＴ細胞は、以下：（ｉ）多数のドナーＴ細胞試料にわたるホスファチジルセリン刺激に応答したより一貫しかつより高い（ｈｉｇｅｒ）誘導性；（ｉｉ）より一貫した抗原提示機能；（ｉｉｉ）ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞と比較して多数のドナーにわたるより高いＣＤ４：ＣＤ８Ｔ細胞比の任意の組合せを示す。さらに、配列番号１９またはシグナルペプチド（アミノ酸１～２４）を欠く配列番号１９に記載のキメラ貪食受容体によって形質導入されたＴ細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、またはＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせた場合に、主にセントラルメモリーおよびエフェクターメモリーである表現型、連続的ホスファチジルセリン曝露に応答した反復的活性化、ならびに標的細胞に対する相乗的活性を示した。

ポリヌクレオチド、ベクターおよび宿主細胞
本開示は、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体のうちの任意の１つまたは複数をコードする核酸分子を提供する。核酸とは、一本鎖または二本鎖ＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡを指す場合があり、アンチセンスＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびＲＮＡを含む互いに相補する核酸の正の鎖および負の鎖を含み得る。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡの天然形態または合成形態であり得る。所望のキメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸配列は、例えばSambrook et al. (1989 and 2001 editions; Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY)およびAusubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, 2003)において説明される通り、標準技術を使用する当該技術分野において公知の組換え法を使用して、例として所望の配列またはその一部を発現する細胞からのライブラリーをスクリーニングすることによって、所望の配列またはその一部を含むことが公知のベクターからの配列を派生させることによって、または所望の配列またはその一部を含有する細胞または組織から直接的に配列またはその一部を単離することによって、取得または産生することができる。あるいは、目的の配列は、クローニングするのではなく、合成産生することができる。

本明細書において提供されるキメラＴｉｍ４受容体組成をコードするポリヌクレオチドは、任意の動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタまたはそれらの組合せに由来し得る。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドが挿入される宿主細胞と同じ動物種からのポリヌクレオチドである。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドは、発現制御配列に作動可能に連結することができる。発現制御配列には、適切な転写開始、終止、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、例としてスプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を向上させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を向上させる配列；および場合によって、タンパク質分泌を向上させる配列が含まれ得る。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドは、前駆体タンパク質の分泌経路へのターゲティングのための５’末端におけるシグナルペプチド（リーダーペプチドまたはシグナル配列とも呼ばれる）をコードする配列を含む。シグナルペプチドは、細胞プロセシングおよびキメラＴｉｍ４受容体の宿主細胞膜への局在化中に細胞外ドメインのＮ末端から切断されてもよい。シグナルペプチド配列が切断または除去されたポリペプチドは、成熟ポリペプチドとも呼ばれ得る。本開示のキメラＴｉｍ４受容体において使用され得るシグナルペプチドの例には、例えばＧＭ－ＣＳＦ（配列番号２７のアミノ酸配列）、Ｔｉｍ１（配列番号２８のアミノ酸配列）またはＴｉｍ４（配列番号７または８のアミノ酸配列）を含む、内因性分泌タンパク質由来のシグナルペプチドが含まれる。ある特定の実施形態においては、ポリヌクレオチド配列が成熟キメラＴｉｍ４受容体ポリペプチドをコードするか、またはポリペプチド配列が成熟キメラＴｉｍ４受容体ポリペプチドを含む。シグナルペプチド配列を含む本明細書において開示される配列について、シグナルペプチド配列は、コードされるタンパク質を細胞外膜へ輸送することができる別のシグナルペプチドで置き換えてもよいことが当業者によって理解される。

ある特定の実施形態においては、本開示のポリヌクレオチドをコードするキメラＴｉｍ４受容体は、ポリヌクレオチドを含む標的宿主細胞における効率的な発現のためにコドン最適化される［例えばScholten et al., Clin. Immunol. 119:135-145 (2006)を参照のこと］。本明細書において使用されるとき、「コドン最適化した」ポリヌクレオチドは、目的の宿主細胞におけるｔＲＮＡの存在量に対応するサイレント変異により改変したコドンを有する異種のポリヌクレオチドを含む。

単一のポリヌクレオチド分子が、本明細書において開示される実施形態のうちのいずれかに記載の１つ、２つ、またはそれよりも多いキメラＴｉｍ４受容体をコードし得る。２つ以上の導入遺伝子をコードするポリヌクレオチドは、マルチシストロン性発現のために各遺伝子間に配置される配列（例えばＩＲＥＳ、ウイルス２Ａペプチド）を含み得る。

本開示において提供される少なくとも２つの導入遺伝子（例えばキメラＴｉｍ４受容体およびＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドは、タンデム発現カセットを構成するために使用され得る。タンデム発現カセットとは、少なくとも２つの導入遺伝子のタンデム発現または共発現のための、同じ組の調節配列の制御下の、または同じ組の調節配列に作動可能に連結された少なくとも２つの導入遺伝子を含むベクター核酸の成分を指す。本開示のタンデム発現カセットにおいて使用され得る調節配列には、適切な転写開始、終止、プロモーターおよびエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、例としてスプライシングおよびポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を向上させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を向上させる配列；タンパク質分泌を向上させる配列；またはそれらの任意の組合せが含まれる。

一態様においては、本開示は、本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドと、細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ、ＴＣＲ等）をコードするポリヌクレオチドとを含むタンデム発現カセットを提供する。

ある特定の実施形態においては、タンデム発現カセットは、空間的制御および時間的制御を最適化するように構築され得る。例えば、タンデム発現カセットは、空間的制御および時間的制御を最適化するプロモーターエレメントを含み得る。一部の実施形態においては、タンデム発現カセットは、タンデム発現カセットの器官、細胞種（例えば免疫細胞）または病理学的微小環境、例として腫瘍または感染組織への特異的誘導を可能にする組織特異的プロモーターまたはエンハンサーを含む。「エンハンサー」は、協同的に、または独立して機能して転写を活性化し得る追加のプロモーターエレメントである。ある特定の実施形態においては、タンデム発現カセットは、構成的プロモーターを含む。本開示のタンデム発現カセットにおける使用のための例示的な構成的プロモーターは、ＥＦ－１αプロモーターである。ある特定の実施形態においては、タンデム発現カセットは、誘導性プロモーターを含む。ある特定の実施形態においては、タンデム発現カセットは、組織特異的プロモーターを含む。

タンデム発現カセット内に含有される少なくとも２つの導入遺伝子は、任意の順序で存在し得る。例えば、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドとＣＡＲをコードするポリヌクレオチドとを含むタンデム発現カセットは、５’～３’へ：キメラＴｉｍ４受容体－ＣＡＲまたはＣＡＲ－キメラＴｉｍ４受容体のように配置され得る。

ある特定の実施形態においては、会合して多量体または複合体を形成する２つまたはそれよりも多いポリペプチド鎖を含む受容体は、タンデム発現コンストラクト内の２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチド分子によってコードされ得る。本開示のタンデム発現コンストラクトにおいて発現のために企図される例示的な多量体受容体には、多重鎖ＣＡＲ、ＴＣＲ、ＴＣＲ－ＣＡＲおよびＴＲｕＣ（商標）コンストラクトが含まれる。したがって、キメラＴｉｍ４受容体およびＴＣＲをコードする例示的なタンデム発現カセット実施形態は、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、ＴＣＲα鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよびＴＣＲβ鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。

ある特定の実施形態においては、本開示のタンデム発現カセットは、単一のｍＲＮＡからの多数のタンパク質の共発現を可能にするために、タンデム発現カセット内に含有される各ポリヌクレオチド間に配置される配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはペプチド切断部位、例としてフューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドを含み得る。例えば、ＩＲＥＳ、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドは、タンデム発現カセット内のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドとＣＡＲをコードするポリヌクレオチドとの間に配置され得る。別の例においては、ＩＲＥＳ、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドは、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、ＴＣＲα鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよびＴＣＲβ鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの各々の間に配置され得る。ある特定の実施形態においては、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａ）ウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）またはそれらの変異型である。例示的なＴ２Ａペプチドは、配列番号２９～３３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例示的なＰ２Ａペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含む。例示的なＥ２Ａペプチド配列は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。例示的なＦ２Ａペプチド配列は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。

本開示のタンデム発現カセットのある特定の実施形態は、標的抗原（例えば腫瘍抗原）に対して特異的なＣＡＲ／またはＴＣＲをコードするポリヌクレオチドと、本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドとを含む。ＣＡＲ／またはＴＣＲによる標的抗原を発現する標的細胞の結合に際して、そのようなタンデム発現カセットを発現するように改変した細胞は、標的細胞のアポトーシスを誘導する。アポトーシスは、標的細胞上のプロ貪食マーカー、例としてホスファチジルセリンの曝露を誘導し、その後、ホスファチジルセリンは、損傷細胞またはアポトーシス細胞をキメラＴｉｍ４受容体による貪食にターゲティングし得る。

所望のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドは、目的の宿主細胞（例えば免疫細胞）への導入のために、適切なベクター、例えばウイルスベクター、非ウイルスプラスミドベクターおよび非ウイルスベクター、例として脂質ベースのＤＮＡベクター、修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ、ＣＥＬｉＤおよびトランスポゾン媒介遺伝子移行（ＰｉｇｇｙＢａｃ、ＳｌｅｅｐｉｎｇＢｅａｕｔｙ）に挿入され得る。本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドは、任意の好適なベクター、例として発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクターまたはシークエンシングベクターにクローニングされ得る。ある特定の実施形態においては、細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチド、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチド、および細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、互いに接合されて単一のポリヌクレオチドになり、その後、ベクターに挿入される。他の実施形態においては、細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチド、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチド、および細胞内シグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチドは、発現されるアミノ酸配列が機能的キメラＴｉｍ４受容体を産生するように、ベクターに別々に挿入され得る。キメラＴｉｍ４受容体をコードするベクターは、「キメラＴｉｍ４受容体ベクター」と本明細書において呼ばれる。

ある特定の実施形態においては、ベクターは、１つのキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態においては、ベクターは、２つまたはそれよりも多いキメラＴｉｍ４受容体をコードする１つのポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態においては、２つまたはそれよりも多いキメラＴｉｍ４受容体をコードする単一のポリヌクレオチドがクローニング部位にクローニングされ、かつ単一のプロモーターから発現され、各キメラＴｉｍ４受容体配列は、単一のオープンリーディングフレームからの複数遺伝子の共発現を可能にするために（例えばマルチシストロン性ベクター）、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドによって互いに分離されている。ある特定の実施形態においては、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａ）ウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）またはそれらの変異型である。例示的なＴ２Ａペプチドは、配列番号２９～３３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。例示的なＰ２Ａペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含む。例示的なＥ２Ａペプチド配列は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。例示的なＦ２Ａペプチド配列は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態においては、ベクターは、各ポリヌクレオチドがキメラＴｉｍ４受容体をコードする、２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチドを含む。キメラＴｉｍ４受容体をコードする２つまたはそれよりも多いポリヌクレオチドは、異なるクローニング部位においてベクターへと連続的にクローニングすることができ、各キメラＴｉｍ４受容体は、異なるプロモーターの調節下で発現される。ある特定の実施形態においては、導入遺伝子の長期統合および娘細胞への伝播を可能にするベクターが利用される。例には、ウイルスベクター、例として、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、ポックスウイルスまたはレトロウイルス、例としてレンチウイルスベクターが含まれる。レンチウイルスに由来するベクターは、長期遺伝子移行を達成するために使用され、非増殖細胞、例として肝細胞に形質導入する能力、および低免疫原性を含む、ベクターに優る付加利益を有し得る。

ある特定の実施形態においては、ベクターは、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドおよび細胞免疫療法剤（例えばキメラ抗原受容体、組換えＴＣＲ等）をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）をコードする単一のポリヌクレオチドが、クローニング部位にクローニングされ、かつ単一のプロモーターから発現され、キメラＴｉｍ４受容体配列と細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）配列とは、単一のオープンリーディングフレームからの複数遺伝子の共発現を可能にするために（例えばマルチシストロン性ベクター）、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位またはウイルス２Ａペプチドによって互いに分離されている。ある特定の実施形態においては、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、トセア・アシグナウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）またはそれらの変異型である。例示的なＴ２Ａペプチドは、配列番号２９～３３のアミノ酸配列を含む。例示的なＰ２Ａペプチドは、配列番号３４または３５のアミノ酸配列を含む。例示的なＥ２Ａペプチド配列は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。例示的なＦ２Ａペプチド配列は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドおよび細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、互いに接合されて単一のポリヌクレオチドになり、その後、ベクターに挿入される。他の実施形態においては、ＣＥＲをコードするポリヌクレオチドおよびＣＡＲまたはＴＣＲ結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、発現されるアミノ酸配列が機能的ＣＥＲおよびＣＡＲ／またはＴＣＲを産生するように、同じかまたは異なるクローニング部位においてベクターに別々に挿入され得る。タンデム発現カセットをコードするベクターは、「タンデム発現ベクター」と本明細書において呼ばれる。

ある特定の実施形態においては、ベクターは、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドおよび細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含む。キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドは、異なるクローニング部位においてベクターに連続的にクローニングすることができ、キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ）は、異なるプロモーターの調節下で発現される。

コアウイルスをコードするベクターは、「ウイルスベクター」と本明細書において呼ばれる。ヒト遺伝子療法適用のために特定されたウイルスベクターを含む、本開示の組成物との使用のために好適な多数の使用可能なウイルスベクターがある（Pfeifer and Verme, Ann. Rev. Genomics Hum. Genet. 2:177, 2001を参照のこと）。好適なウイルスベクターには、ＲＮＡウイルスに基づくベクター、例としてレトロウイルス由来ベクター、例えばマロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ：Ｍａｌｏｎｅｙｍｕｒｉｎｅｌｅｕｋｅｍｉａｖｉｒｕｓ）由来ベクターが含まれ、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えばレンチウイルス由来ベクターが含まれる。ＨＩＶ－１由来ベクターは、このカテゴリーに属する。他の例には、ＨＩＶ－２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶおよびマエディビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが含まれる。レトロウイルス性およびレンチウイルス性ウイルスベクターを使用する方法、および哺乳動物宿主細胞にキメラ受容体導入遺伝子を含有するウイルス粒子を形質導入するための細胞をパッケージングする方法は、当該技術分野において公知であり、例えば米国特許第８，１１９，７７２号；Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011；Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005；Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003；Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010；Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009において以前に説明されている。また、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターのコンストラクトおよび発現系は、市販されている。

ある特定の実施形態においては、ウイルスベクターは、キメラＴｉｍ４受容体をコードする非内因性ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するために使用される。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターであり得る。また、ウイルスベクターは、形質導入についてのマーカーをコードする核酸配列を含み得る。ウイルスベクターのための形質導入マーカーは、当該技術分野において公知であり、薬物抵抗性を与え得る選択マーカー、または検出可能なマーカー、例として蛍光マーカー、もしくはフローサイトメトリー等の方法によって検出され得る細胞表面タンパク質を含む。特定の実施形態においては、ウイルスベクターは、蛍光タンパク質（例えば緑色、黄色）を含む形質導入についての遺伝子マーカー、ヒトＣＤ２の細胞外ドメインまたは切断型ヒトＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔまたはｔＥＧＦＲ；Wang et al., Blood 118:1255, 2011を参照のこと）をさらに含む。例示的なｔＥＧＦＲは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。ウイルスベクターゲノムが単一の転写産物からの別個のタンパク質として宿主細胞において発現される複数の遺伝子を含む場合、ウイルスベクターはまた、マルチシストロン性発現を可能にする２つの（またはそれよりも多い）遺伝子間に追加の配列も含み得る。ウイルスベクターにおいて用いられるそのような配列の例には、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド（例えばＴ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ）、またはそれらの任意の組合せが含まれる。

また、ポリヌクレオチドデリバリーのために、例えばアデノウイルスベースのベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ：ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ）ベースのベクター；アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶを含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ：ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）由来のベクターを含むＤＮＡウイルスベクターを含む他のウイルスベクターを使用することができる（Krisky et al., Gene Ther. 5: 1517, 1998）。

また、遺伝子療法のために最近開発された他のウイルスベクターは、本開示の組成物および方法と共に使用することができる。そのようなベクターには、バキュロウイルスおよびα－ウイルス由来のベクター（Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40, Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab）またはプラスミドベクター（例としてｓｌｅｅｐｉｎｇｂｅａｕｔｙまたは他のトランスポゾンベクター）が含まれる。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、空間的制御および時間的制御を最適化するように構築され得る。例えば、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、空間的制御および時間的制御を最適化するプロモーターエレメントを含み得る。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、キメラＴｉｍ４受容体の器官、細胞種（例えば免疫細胞）または病理学的微小環境、例として腫瘍または感染組織への特異的誘導を可能にする組織特異的プロモーターまたはエンハンサーを含む。「エンハンサー」は、協同的に、または独立して機能して転写を活性化し得る追加のプロモーターエレメントである。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、構成的プロモーターを含む。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、誘導性プロモーターを含む。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、組織特異的プロモーターを含む。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、インビボにおけるホーミングおよび抗腫瘍活性を改善するために、ホーミング受容体、例としてＣＣＲ４またはＣＸＣＲ４をコードする遺伝子を含み得る。

時間的な制御が所望される場合、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、形質導入された細胞の誘導性枯渇を可能にするエレメントを含み得る。例えば、そのようなベクターは、誘導性自殺遺伝子を含み得る。自殺遺伝子は、アポトーシス遺伝子または剤（例えば薬物）への感受性を与える遺伝子であり得る。例示的な自殺遺伝子には、化学誘導性カスパーゼ９（ｉＣＡＳＰ９）（米国特許公開公報第２０１３／００７１４１４号）、化学誘導性Ｆａｓ、またはガンシクロビルへの感受性を与える単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ＴＫ）が含まれる。さらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、関連抗体の注入に際して、形質導入された細胞の枯渇を可能にする公知の細胞表面抗原を発現するように設計され得る。形質導入された細胞の枯渇のために使用され得る細胞表面抗原およびそれらの関連抗体の例には、ＣＤ２０およびリツキシマブ、ＲＱＲ８（ＣＤ３４選択および抗ＣＤ２０枯渇を可能にする混合ＣＤ３４およびＣＤ２０エピトープ）およびリツキシマブ、ならびにＥＧＦＲおよびセツキシマブが含まれる。

また、誘導性ベクター系、例として、ドキシサイクリンにより導入遺伝子発現を活性化するテトラサイクリン（Ｔｅｔ）－Ｏｎベクター系（Heinz et al., Hum. Gene Ther. 2011, 22:166-76）は、誘導性のキメラＴｉｍ４受容体発現のために使用され得る。また、誘導性のキメラＴｉｍ４受容体発現は、キメラＴｉｍ４受容体構造に導入したフックおよびストレプトアビジン結合タンパク質を通して小胞体膜に固定したストレプトアビジンに基づく選択フック（ＲＵＳＨ）系を使用する保持を介して達成することができ、ここでは、ビオチンの系への添加は、小胞体からのキメラＴｉｍ４受容体の放出をもたらす［Agaugue et al., 2015, Mol. Ther. 23(Suppl. 1):S88］。

ある特定の実施形態においては、また、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、１つまたは複数の小ＧＴＰアーゼを共発現するように改変され得る。ＲｈｏＧＴＰアーゼ、小（約２１ｋＤａ）シグナル伝達Ｇタンパク質のファミリーおよびまた、Ｒａｓスーパーファミリーのサブファミリーは、様々な細胞種におけるアクチン細胞骨格組織化を調節し、食作用中の偽足伸長およびファゴソーム閉鎖を促進する（例えばCastellano et al., 2000, J. Cell Sci. 113:2955-2961を参照のこと）。貪食は、繋ぎ止められた細胞または粒子の下のＦ－アクチン動員、および細胞または粒子内部移行をもたらす膜伸長を可能にするＦ－アクチン再配置を必要とする。ＲｈｏＧＴＰアーゼには、ＲｈｏＡ、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、ＲｈｏＧおよびＣＤＣ４２が含まれる。他の小ＧＴＰアーゼ、例としてＲａｐ１は、補体媒介食作用の調節に関与する。小ＧＴＰアーゼとキメラＴｉｍ４受容体との共発現は、宿主細胞による標的細胞または粒子内部移行および／またはファゴソーム形成を促進し得る。一部の実施形態においては、ＧＴＰアーゼをコードする組換え核酸分子は、キメラＴｉｍ４受容体含有ベクターとは別々のベクターにコードされる。他の実施形態においては、ＧＴＰアーゼをコードする組換え核酸分子は、キメラＴｉｍ４受容体と同じベクターにコードされる。ＧＴＰアーゼおよびキメラＴｉｍ４受容体は、同じベクターの異なるプロモーターの調節下で（例えば異なるマルチクローニング部位において）発現され得る。あるいは、キメラＴｉｍ４受容体およびＧＴＰアーゼは、マルチシストロン性ベクターにおいて１つのプロモーターの調節下で発現され得る。キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド配列および小ＧＴＰアーゼをコードするポリヌクレオチド配列は、マルチシストロン性ベクターにおいてＩＲＥＳまたはウイルス２Ａペプチドにより互いに分離され得る。例示的な２Ａペプチドには、Ｔ２Ａ（配列番号２９～３３）、Ｐ２Ａ（配列番号３４または３５）、Ｅ２Ａ（配列番号３６）、Ｆ２Ａ（配列番号３７）が含まれる。キメラＴｉｍ４受容体と共に共発現され得るＧＴＰアーゼの例には、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｂ５（Ｒａｂ５ａとも呼ばれる）、Ｒａｂ７、Ｒａｐ１、ＲｈｏＡ、ＲｈｏＧ、ＣＤＣ４２またはそれらの任意の組合せが含まれる。特定の実施形態においては、ＧＴＰアーゼは、配列番号４１のＲａｃ１アミノ酸配列、配列番号４２のＲａｂ５アミノ酸配列、配列番号４３のＲａｂ７アミノ酸配列、配列番号４４のＲａｐ１アミノ酸配列、配列番号４５のＲｈｏＡアミノ酸配列、配列番号４６のＣＤＣ４２アミノ酸配列またはそれらの任意の組合せと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一である配列を含むか、またはその配列である。

ある特定の実施形態においては、対象から得られた免疫細胞等の細胞は、本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを導入することによって、非天然または組換え細胞（例えば非天然または組換え免疫細胞）へと操作される場合があり、それによって、細胞は、細胞表面局在化キメラＴｉｍ４受容体を発現する。ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞、例として骨髄系前駆細胞またはリンパ球前駆細胞である。キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドまたはキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含むように改変され得る例示的な免疫細胞には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、リンパ球前駆体細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆体細胞、成熟骨髄細胞、単球またはマクロファージが含まれる。

ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、１つまたは複数のキメラＴｉｍ４受容体を発現するように遺伝子改変される。Ｂ細胞は、炎症部位への輸送、抗原を内部移行および提示することができること、Ｔ細胞を共刺激することができること、高増殖性および自己再生性（生涯持続する）を含む宿主細胞として有益であり得るある特定の特性を有する。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変Ｂ細胞は、貪食された標的細胞または貪食された標的粒子をより小さいペプチドに消化し、それらを、ＭＨＣ分子を介してＴ細胞に提示することができる。キメラＴｉｍ４受容体改変Ｂ細胞による抗原提示は、免疫応答の非ターゲティング抗原への抗原拡張に寄与し得る。Ｂ細胞は、Ｂ細胞系統にコミットされた前駆細胞もしくは前駆体細胞（例えばプレプロＢ細胞、プロＢ細胞およびプレＢ細胞）；未成熟かつ不活性化Ｂ細胞；または成熟かつ機能的もしくは活性化Ｂ細胞を含む。ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞、メモリーＢ細胞またはそれらの任意の組合せであり得る。メモリーＢ細胞は、ナイーブＢ細胞においては非存在であるＣＤ２７の発現によってナイーブＢ細胞から区別され得る。ある特定の実施形態においては、Ｂ細胞は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物由来の初代細胞または細胞系であり得る。Ｂ細胞系は、当該技術分野において周知である。哺乳動物から得られる場合、Ｂ細胞は、血液、骨髄、脾臓、リンパ節または他の組織もしくは体液を含む多くの供給源から得ることができる。Ｂ細胞組成物は、富化または精製され得る。

ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、１つまたは複数のキメラＴｉｍ４受容体を発現するように遺伝子改変される。例示的なＴ細胞には、ＣＤ４^＋ヘルパー、ＣＤ８^＋エフェクター（細胞傷害性）、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ８^＋）、エフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、Ｔメモリー幹、制御性、粘膜関連インバリアント（ＭＡＩＴ）、γδ（ｇｄ）、組織レジデントＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞またはそれらの任意の組合せが含まれる。ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物由来の初代細胞または細胞系であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺または他の組織もしくは体液を含む多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞組成物は、富化または精製され得る。Ｔ細胞系は、当該技術分野において周知であり、それらのうちの一部は、Sandberg et al., Leukemia 21:230, 2000において説明されている。ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子またはそれらの両方の内因性発現を欠く。そのようなＴ細胞は、ＴＣＲαおよびβ鎖の内因性発現を天然に欠いていてもよく、発現を遮断するように（例えば、ＴＣＲαおよびβ鎖を発現しないトランスジェニックマウスからのＴ細胞、またはＴＣＲαおよびβ鎖の発現を阻害するように操作された細胞）、またはＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖またはそれらの両方の遺伝子をノックアウトするように改変されていてもよい。

ある特定の実施形態においては、細胞表面上に本開示のキメラＴｉｍタンパク質を発現する宿主細胞は、Ｔ細胞またはＴ細胞系統の細胞ではないが、細胞表面抗ＣＤ３を発現するように改変された前駆細胞、幹細胞または細胞である、細胞である。

ある特定の実施形態においては、また、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ、ＴＣＲ等）を共発現するように改変され得る。一部の実施形態においては、細胞免疫療法剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。ＣＡＲは、一般的に：標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン；細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＴＡＭ含有細胞内シグナル伝達ドメインおよび適宜の細胞内共刺激性ドメインを含む）、および細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する膜貫通ドメインを含む組換え受容体である。

本開示のＣＡＲにおける使用のために好適な結合ドメインには、任意の抗原結合性ポリペプチドが含まれる。結合ドメインは、例えば全長重鎖、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ＣＤＲおよびｓｃＦｖを含む抗体またはその抗原結合性断片を含み得る。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲ結合ドメインは、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化ＣＡＲ結合ドメインである。

ある特定の実施形態においては、ＣＡＲの結合ドメインは、がんまたは腫瘍抗原をターゲティングする。ＣＡＲがターゲティングし得る例示的な抗原には、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ－１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ－３、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＲＡＧＥ－１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ－２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ－アセチル－ＧＤ２およびＧＤ２が含まれる。

ある特定の実施形態においては、本開示において提供されるＣＡＲの細胞外ドメインは、細胞外非シグナル伝達スペーサーまたはリンカードメインを含んでもよい。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを、宿主細胞表面から離れるように位置させて、適切な細胞－細胞接触、結合および活性化をさらに可能にし得る。細胞外スペーサードメインは一般的に、ＣＡＲの細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて、標的分子結合を最適化するために変動し得る（例えばGuest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照のこと）。ある特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域または変更された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ_４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号において説明されており、当該ヒンジ領域は、その全体を参照により本明細書に組み込む。特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、配列番号９のアミノ酸配列を有する改変ＩｇＧ_４ヒンジ領域を含む。

本明細書において説明するＣＡＲにおいて使用され得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異型であり得る１型膜タンパク質、例としてＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域からのヒンジ領域が含まれる。特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤ８ａヒンジ領域を含む。別の特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤ２８ヒンジ領域を含む。さらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全てまたは一部を含む（例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照されたく、当該スペーサーは、その全体を参照により本明細書に組み込む）。またさらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。

本開示のＣＡＲは、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続し、かつこれらの間に位置する膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸の長さの範囲である。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断し、かつ宿主細胞膜においてＣＡＲを固定する疎水性アルファヘリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインに、または存在する場合細胞外スペーサードメインに直接的に融合され得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、膜内在性タンパク質［例えば受容体、表面抗原分類（ＣＤ：ｃｌｕｓｔｅｒｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子その他］に由来する。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインと同じ分子から選択され得る（例えば、ＣＡＲはＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８膜貫通ドメインを含む）。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは各々、異なる分子から選択される。他の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。また他の実施形態においては、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。

本開示のＣＡＲにおける使用のための例示的な膜貫通ドメインには、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ５、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５およびＺａｐ７０膜貫通ドメインが含まれる。例示的なＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤ８ａ膜貫通ドメインを含む。

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、ＣＡＲの細胞外ドメインの標的分子（例えばがん抗原）への結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達し、かつＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞、例えばＴ細胞の通常のエフェクター機能または応答のうちの少なくとも１つを活性化することができる。一部の実施形態においては、ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、例として、細胞溶解活性またはＴヘルパー活性、例として、サイトカインまたは他の因子の分泌を誘導する。細胞内シグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持する細胞内シグナル伝達分子の任意の部分であり得る。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体成分（例えばＴＣＲ）または共刺激性分子から得られる。一部の実施形態においては、抗原受容体または共刺激性分子の全長細胞内シグナル伝達ドメインが使用される。一部の実施形態においては、抗原受容体または共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用され、但し、その切断部分は十分なシグナル伝達活性を保持する。さらなる実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインの全長または切断部分の変異型であり、但し、その変異型は十分なシグナル伝達活性を保持する（すなわち、機能的変異型である）。

一部の実施形態においては、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有シグナル伝達ドメインを含む。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは一般的に、少なくとも１つの（１、２、３、４つまたはそれよりも多い）ＩＴＡＭを含有し、これは、ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉの保存されたモチーフを指す。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは、抗原結合またはリガンドエンゲージメント後、Ｔ細胞活性化シグナル伝達を開始し得る。ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１２、ＦｃＲγおよびＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１７７または配列番号１７８のアミノ酸配列を含む。

ＣＡＲ細胞内シグナル伝達ドメインは、主要な、または古典的な（例えばＩＴＡＭ駆動）活性化シグナルと共に活性化された場合、Ｔ細胞応答、例としてＴ細胞活性化、サイトカイン産生、増殖、分化、生存、エフェクター機能またはそれらの組合せを促進する、または向上させる共刺激性シグナル伝達ドメインを含んでもよい。ＣＡＲにおける使用のための共刺激性シグナル伝達ドメインには、例えばＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０またはそれらの任意の組合せが含まれる。一部の実施形態においては、共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）シグナル伝達ドメインを含む。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１７９または１８０のアミノ酸配列を含む。例示的な４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、１、２つまたはそれよりも多い共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態においては、ＣＡＲは、抗体に由来するｓｃＦｖ結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインからなる組換え受容体である。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲに由来する。

ある特定の実施形態においては、キメラ抗原受容体は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、キメラ抗原受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化である。

ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲまたは第３世代ＣＡＲである。第１世代ＣＡＲは一般的に、ＣＤ３ζ、ＦｃγＲＩの細胞内シグナル伝達ドメインまたは他のＩＴＡＭ含有活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有して、Ｔ細胞活性化シグナルを提供する。第２世代ＣＡＲは、共刺激性シグナル伝達ドメイン（例えば内因性Ｔ細胞共刺激性受容体、例としてＣＤ２８、４－１ＢＢまたはＩＣＯＳからの共刺激性シグナル伝達ドメイン）をさらに含む。第３世代ＣＡＲは、ＩＴＡＭ含有活性化ドメイン、第１の共刺激性シグナル伝達ドメインおよび第２の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態においては、細胞外ドメイン、結合ドメイン、リンカー、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、または共刺激性ドメインのうちの１つまたは複数は、接合部アミノ酸を含む。「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」とは、タンパク質の２つの隣接ドメイン、モチーフ、領域、モジュールまたは断片間、例として結合ドメインと隣接リンカーとの間、膜貫通ドメインと隣接細胞外もしくは細胞内ドメインとの間、あるいは２つのドメイン、モチーフ、領域、モジュールもしくは断片を連結するリンカーの一方または両方の末端（例えばリンカーと隣接結合ドメインとの間またはリンカーと隣接ヒンジとの間）の１つまたは複数の（例えば約２～２０個の）アミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、融合タンパク質のコンストラクト設計から生じ得る（例えば融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの構築中の制限酵素部位または自己切断ペプチド配列の使用から生じるアミノ酸残基）。例えば、融合タンパク質の膜貫通ドメインは、アミノ末端、カルボキシ末端、またはその両方において、１つまたは複数の接合部アミノ酸を有し得る。

ある特定の実施形態においては、操作された宿主細胞は、キメラＴｉｍ４受容体および抗ＣＤ７２ＣＡＲを共発現する。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、組換えＴＣＲを共発現する。組換えＴＣＲタンパク質には、α鎖ポリペプチドとβ鎖ポリペプチドとのヘテロ二量体またはγ鎖ポリペプチドとδ鎖ポリペプチドとのヘテロ二量体からなる「伝統的な」ＴＣＲ、例えば単鎖ＴＣＲ、単一ドメインＴＣＲ、可溶性ＴＣＲ融合ＴＣＲタンパク質およびＴＣＲ融合コンストラクト［ＴＲｕＣ（商標）］を含む、その結合性断片および融合タンパク質が含まれる。ある特定の実施形態においては、タンデム発現カセットは、ＴＣＲベータ可変領域およびＴＣＲベータ定常領域を含む組換えＴＣＲベータ鎖をコードするポリヌクレオチドと、ＴＣＲアルファ可変領域およびＴＣＲアルファ定常領域を含む組換えＴＣＲアルファ鎖をコードするポリヌクレオチドとを含む。ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲは、高親和性ＴＣＲである。一実施形態においては、組換えＴＣＲは、高親和性ＴＣＲである。

ある特定の実施形態においては、組換えＴＣＲ結合タンパク質は、フレキシブルリンカーによってＶβに接合されたＶαを含む単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ：ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎＴＣＲ）である。一部の実施形態においては、ｓｃＴＣＲは、Ｖα－リンカー－Ｖβポリペプチドを含む。他の実施形態においては、ｓｃＴＣＲは、Ｖβ－リンカー－Ｖαポリペプチドを含む。

ある特定の実施形態においては、また、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）融合タンパク質を共発現するように改変され得る。ｓｃＴＣＲ融合タンパク質は、ｓｃＴＣＲを含む結合ドメイン（ＴＣＲＶβドメインに連結したＴＣＲＶαドメイン）と、適宜の細胞外スペーサーと、膜貫通ドメインと、Ｔ細胞活性化シグナル（例えばＣＤ３ζ ＩＴＡＭ含有活性化ドメイン）および適宜の共刺激性シグナル伝達ドメインを提供する単一の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内成分とを含む（Aggen et al., 2012, Gene Ther. 19:365-374；Stone et al., Cancer Immunol. Immunother. 2014, 63:1163-76を参照のこと）。

ある特定の実施形態においては、また、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、Ｔ細胞受容体ベースのキメラ抗原受容体（ＴＣＲ－ＣＡＲ）を共発現するように改変され得る。ＴＣＲ－ＣＡＲは、可溶性ＴＣＲを一般的に含むヘテロ二量体融合タンパク質であり（ＶαドメインおよびＣαドメインを含むポリペプチド鎖、およびＶβドメインおよびＣβドメインを含むポリペプチド鎖）、ＶβＣβポリペプチド鎖は、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達成分（例えばＩＴＡＭ含有活性化ドメインおよび適宜、共刺激性シグナル伝達ドメイン）に連結されている（例えばWalseng et al., 2017 Scientific Reports 7:10713を参照のこと）。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体と細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ、ＴＣＲ等）とを共発現する操作された宿主細胞は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする組換え核酸および細胞免疫療法剤をコードする組換え核酸分子を、操作された宿主細胞内で別々のベクター上に含む。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体と細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ、ＴＣＲ等）とを共発現する操作された宿主細胞は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする組換え核酸および細胞免疫療法剤をコードする組換え核酸分子を、操作された宿主細胞内でキメラＴｉｍ４受容体と同じベクター上に含む。キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤は、同じベクターの異なるプロモーターの調節下で（例えば異なるマルチクローニング部位において）発現され得る。あるいは、キメラＴｉｍ４受容体および細胞免疫療法剤は、マルチシストロン性ベクター（例えばタンデム発現ベクター）において１つのプロモーターの調節下で発現され得る。キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド配列および細胞免疫療法剤をコードするポリヌクレオチド配列は、マルチシストロン性ベクターにおいてＩＲＥＳまたはウイルス２Ａペプチドにより分離され得る。

タンデム発現カセット、タンデム発現ベクター、およびそれを含む操作された宿主細胞は、その全体を参照により本明細書に組み込む、国際出願公開公報ＷＯ２０１９／１９１３３９号において説明されている。

ある特定の実施形態においては、宿主細胞ゲノムを本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むように改変するために、遺伝子編集法が使用される。遺伝子編集またはゲノム編集は、遺伝子操作エンドヌクレアーゼを使用してＤＮＡが挿入されるか、置き換えられるか、または宿主細胞のゲノムから除去される遺伝子操作法である。ヌクレアーゼは、ゲノムにおけるターゲティングされた遺伝子座において特異的二本鎖切断を創出する。その後、宿主細胞の内因性ＤＮＡ修復経路は、例えば非相同末端結合（ＮＨＥＪ：ｎｏｎ－ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｅｎｄｉｎｇｊｏｉｎｉｎｇ）および相同組換えによって、誘導された切断（複数可）を修復する。遺伝子編集に有用な例示的なエンドヌクレアーゼには、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ：ｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒｎｕｃｌｅａｓｅ）、転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｃｔｉｖａｔｏｒ－ｌｉｋｅｅｆｆｅｃｔｏｒ）ヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄｒｅｇｕｌａｒｌｙｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄｓｈｏｒｔｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃｒｅｐｅａｔｓ：クラスター化規則的配置短回文反復配列）／Ｃａｓヌクレアーゼ系（例えばＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９）、メガヌクレアーゼまたはそれらの組合せが含まれる。遺伝子編集エンドヌクレアーゼを使用して、Ｂ細胞およびＴ細胞を含む免疫細胞において遺伝子または遺伝子発現を破壊またはノックアウトする方法は、当該技術分野において公知であり、例えば国際出願公開公報ＷＯ２０１５／０６６２６２号；ＷＯ２０１３／０７４９１６号；ＷＯ２０１４／０５９１７３号；Cheong et al., Nat. Comm. 2016 7:10934；Chu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016 113:12514-12519において説明されており、そのうちの各々からの方法は、その全体を参照により本明細書に組み込む。

ある特定の実施形態においては、宿主細胞の内因性遺伝子の発現は、阻害、ノックダウンまたはノックアウトされる。Ｂ細胞において阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る内因性遺伝子の例には、ＩＧＨ、ＩＧκ、ＩＧλまたはそれらの任意の組合せが含まれる。Ｔ細胞において阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る内因性遺伝子の例には、ＴＣＲ遺伝子（ＴＲＡまたはＴＲＢ）、ＨＬＡ遺伝子（ＨＬＡクラスＩ遺伝子またはＨＬＡクラスＩＩ遺伝子）、免疫チェックポイント分子（ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１またはＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ）またはそれらの任意の組合せが含まれる。内因性遺伝子の発現は、遺伝子レベル、転写レベル、翻訳レベルまたはそれらの組合せにおいて阻害、ノックダウンまたはノックアウトされ得る。内因性遺伝子を阻害、ノックダウンまたはノックアウトする方法は、例えばＲＮＡ干渉剤（例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等）もしくは操作されたエンドヌクレアーゼ［例えばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ］またはそれらの任意の組合せによって達成され得る。ある特定の実施形態においては、内因性Ｂ細胞遺伝子（例えばＩＧＨ、ＩＧκまたはＩＧλ）は、操作されたエンドヌクレアーゼを介する等の、本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドの内因性Ｂ細胞遺伝子の遺伝子座への挿入によってノックアウトされる。ある特定の実施形態においては、内因性Ｔ細胞遺伝子（例えばＴＣＲ遺伝子、ＨＬＡ遺伝子または免疫チェックポイント分子遺伝子）は、操作されたエンドヌクレアーゼを介する等の、本開示のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドの内因性Ｔ細胞遺伝子の遺伝子座への挿入によってノックアウトされる。

ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、１種類のキメラＴｉｍ４受容体を発現するように遺伝子改変することができる。他の実施形態においては、宿主細胞は、少なくとも２つまたはそれよりも多い異なるキメラＴｉｍ４受容体を発現し得る。

また、本開示は、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞の集団を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞の集団は、Ｂ細胞集団、Ｔ細胞集団、ナチュラルキラー細胞集団、リンパ球前駆体細胞集団、抗原提示細胞集団、樹状細胞集団、ランゲルハンス細胞集団、骨髄前駆体細胞集団、成熟骨髄細胞集団またはそれらの任意の組合せであり得る。さらに、特定の細胞種のキメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞の集団は、１つまたは複数のサブタイプからなり得る。例えば、Ｂ細胞集団は、キメラＴｉｍ４受容体改変ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞性細胞、形質芽細胞、メモリーＢ細胞またはそれらの任意の組合せからなり得る。別の例においては、Ｔ細胞集団は、キメラＴｉｍ４受容体改変ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８^＋エフェクター（細胞傷害性）Ｔ細胞、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）Ｔ細胞、セントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ８^＋）Ｔ細胞、エフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）Ｔ細胞、Ｔメモリー幹細胞、制御性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、γδ（ｇｄ）細胞、組織レジデントＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞またはそれらの任意の組合せからなり得る。

ある特定の実施形態においては、宿主細胞集団は、各々が同じキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞からなる。他の実施形態においては、宿主細胞集団は、宿主細胞の２つまたはそれよりも多いサブ集団の混合物からなり、各サブ集団は、異なるキメラＴｉｍ４受容体またはキメラＴｉｍ４受容体のセットを発現する。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞を調製する場合、宿主細胞、例えばＢ細胞またはＴ細胞の増殖を促進する１つまたは複数の増殖因子サイトカインが、細胞培養物に添加され得る。サイトカインは、ヒトまたは非ヒトサイトカインであり得る。Ｔ細胞増殖を促進するために使用され得る例示的な増殖因子サイトカインには、ＩＬ－２、ＩＬ－１５その他が含まれる。Ｂ細胞増殖を促進するために使用され得る例示的な増殖因子サイトカインには、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＢＡＦＦその他が含まれる。

宿主細胞のキメラＴｉｍ４受容体ベクターによる遺伝子改変の前に、宿主細胞（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞等）の供給源は、対象から得られ（例えば全血、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織）、これらから宿主細胞が、当該技術分野において公知の方法を使用して単離される。特定の宿主細胞サブセットは、抗体への親和性結合、フローサイトメトリーおよび／または免疫磁気選択等の公知の技術に従って収集され、公知の技術によって富化または枯渇され得る。富化および／または枯渇工程ならびにキメラＴｉｍ４受容体の導入後、公知の技術または当業者に明らかであるその変形に従って、所望の改変宿主細胞のインビトロ拡大増殖を行ってもよい。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、ホスファチジルセリンに特異的なキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞に対して、細胞傷害活性を与える。したがって、標的細胞の表面上に曝露されたホスファチジルセリンへの結合に際して、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、標的細胞のアポトーシスを誘導することができる。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシンまたはそれらの任意の組合せの放出；Ｆａｓリガンド－Ｆａｓ相互作用；またはその両方を介して、標的細胞のアポトーシスを誘導する。さらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞に対して、ホスファチジルセリン特異的貪食活性をさらに与える。またさらなる実施形態においては、宿主細胞は、キメラＴｉｍ４受容体による改変前に、天然に貪食表現型を示さない。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体はまた、少なくとも１つのシグナル伝達経路を介してＴ細胞を共刺激することもできる場合がある。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、少なくとも２つの異なるシグナル伝達経路を介して（例えばキメラＴｉｍ４受容体中の選択された共刺激性シグナル伝達ドメインを介して）、Ｔ細胞に共刺激性シグナルを提供する。例えば、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインを含むキメラＴｉｍ４受容体は、ＣＤ２８およびＴｉｍ１を介して共刺激性シグナルを提供することができる場合がある。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主免疫細胞は、免疫細胞疲弊の低減または阻害を示す。ある特定の実施形態においては、宿主免疫細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。ある特定の実施形態においては、疲弊したＴ細胞は、（ａ）ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの増大した発現；（ｂ）ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、もしくはそれらの任意の組合せの減少した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を示す。ある特定の実施形態においては、疲弊したＮＫ細胞は、（ａ）ＰＤ－１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの増大した発現；（ｂ）ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、もしくはその両方の減少した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を示す。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、向上されたエフェクター応答（例えば腫瘍特異的）を示す。ある特定の実施形態においては、エフェクター応答は、向上されたＴ細胞増殖、サイトカイン産生（例えばＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α）、細胞傷害活性、持続性、またはそれらの任意の組合せである。

キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、単独で、または例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ、抗体、放射線療法、化学療法、小分子、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法等を含む他の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、ホスファチジルセリンに対する低減した免疫抑制性応答を示す。ホスファチジルセリンは、食細胞に対して「食せよ」というシグナルを送る、主要なアポトーシス性細胞リガンドのうちの１つである。食細胞によるアポトーシス細胞の除去は一般的に、抗炎症性サイトカインＩＬ－１０およびＴＧＦ－βの分泌、ならびに炎症性サイトカインＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＩＬ－１２の分泌の減少を介する炎症性応答を低減させるかまたは妨げる。したがって、ホスファチジルセリンは、アポトーシス細胞のクリアランス中に免疫抑制性シグナルとして作用し得る。ある特定の実施形態においては、ホスファチジルセリンへの結合時に、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、増大した抗原特異的サイトカイン産生（例えばＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α）を示し、それによって、ホスファチジルセリンに対する免疫抑制性応答を低減させる。

一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現するＴ細胞は、増大したまたは向上された抗原捕捉、抗原プロセシングおよび／または抗原提示活性を示す。標的ペプチド抗原を提示しかつ標的ペプチド特異的Ｔ細胞に対して標的ペプチド特異的活性化を誘導するキメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞の能力を測定する方法は、実施例２および４において説明されている。

宿主細胞上でのキメラＴｉｍ４受容体の発現は、Ｔ細胞結合、活性化または誘導の決定を含む、およびまた、抗原特異的であるＴ細胞応答の決定を含む、宿主細胞（例えばＴ細胞）活性をアッセイするための多数の当該技術分野において許容される方法のいずれかに従って機能的に特徴付けてもよい。例は、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン放出、抗原特異的Ｔ細胞刺激、ＣＴＬ活性（例えば、事前にロードした標的細胞からの^５１Ｃｒまたはユーロピウム放出を検出することによって）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化およびＴ細胞機能の他の測定値の決定を含む。これらおよび同様のアッセイを行うための手技は、例えばLefkovits (Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques, 1998)において見出すことができる。また、Current Protocols in Immunology; Weir, Handbook of Experimental Immunology, Blackwell Scientific, Boston, MA (1986)；Mishell and Shigii (eds.) Selected Methods in Cellular Immunology, Freeman Publishing, San Francisco, CA (1979)；Green and Reed, Science 281:1309 (1998)およびそれらの中で引用される参考文献を参照されたい。サイトカインレベルは、例えばＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、フローサイトメトリーおよびそれらの任意の組合せ（例えば細胞内サイトカイン染色およびフローサイトメトリー）を含む当該技術分野において公知の方法に従って決定され得る。免疫応答の抗原特異的誘発または刺激から生ずる免疫細胞増殖およびクローン拡大増殖は、末梢血細胞またはリンパ節からの細胞の試料中の循環リンパ球等のリンパ球を単離し、細胞を抗原により刺激し、トリチウム化チミジンの組込みまたはＭＴＴアッセイ等の非放射性アッセイ等による等、サイトカイン産生、細胞増殖および／または細胞生存率を測定することによって決定され得る。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、標的細胞について約２０～約１，５００の食作用指数を有する。「食作用指数」は、培地中の標的細胞または粒子とキメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞との懸濁液のインキュベーションの設定期間中の、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞当たりの摂取された標的細胞または粒子の数をカウントすることによって決定される、形質導入された宿主細胞の食作用活性の測定値である。食作用指数は、［貪食された標的細胞の総数／カウントされたキメラＴｉｍ４受容体改変細胞の総数（例えば食作用頻度）］ｘ［キメラＴｉｍ４受容体^＋宿主細胞当たりの標的細胞または粒子染色の平均面積ｘ１００（例えばハイブリッドキャプチャー）］または［貪食された粒子の総数／カウントされたキメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞の総数］ｘ［貪食された粒子を含有するキメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞数／カウントされたキメラＴｉｍ４受容体^＋細胞の総数］ｘ１００を掛けることによって計算され得る。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、約３０～約１，５００；約４０～約１，５００；約５０～約１，５００；約７５～約１，５００；約１００～約１，５００；約２００～約１，５００；約３００～約１，５００；約４００～約１，５００；約５００～約１，５００；約２０～約１，４００；約３０～約１，４００；約４０～約１，４００；約５０～約１，４００；約１００～約１，４００；約２００～約１，４００；約３００～約１，４００；約４００～約１，４００；約５００～約１，４００；約２０～約１，３００；約３０～約１，３００；約４０～約１，３００；約５０～約１，３００；約１００～約１，３００；約２００～約１，３００；約３００～約１，３００；約４００～約１，３００；約５００～約１，３００；約２０～約１，２００；約３０～約１，２００；約４０～約１，２００；約５０～約１，２００；約１００～約１，２００；約２００～約１，２００；約３００～約１，２００；約４００～約１，２００；約５００～約１，２００；約２０～約１，１００；約３０～約１，１００；約４０～約１，１００；約５０～約１，１００；約１００～約１，１００；約２００～約１，１００；約３００～約１，１００；約４００～約１，１００；または約５００～約１，１００；約２０～約１，０００；約３０～約１，０００；約４０～約１，０００；約５０～約１，０００；約１００～約１，０００；約２００～約１，０００；約３００～約１，０００；約４００～約１，０００；または約５００～約１，０００；約２０～約７５０；約３０～約７５０；約４０～約７５０；約５０～約７５０；約１００～約７５０；約２００～約７５０；約３００～約７５０；約４００～約７５０；または約５００～約７５０；約２０～約５００；約３０～約５００；約４０～約５００；約５０～約５００；約１００～約５００；約２００～約５００；または約３００～約５００の食作用指数を有する。さらなる実施形態においては、インキュベーション時間は、約２時間～約４時間、約２時間、約３時間または約４時間である。またさらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、切断型ＥＧＦＲ対照を形質導入した細胞よりも統計的に有意に高い食作用指数を示す。食作用指数は、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡による定量を含む、当該技術分野において公知の、かつ実施例およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５３５５３号（その全体を参照により本明細書に組み込む）においてさらに説明される方法を使用して計算され得る。

宿主細胞は、動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタまたはそれらの組合せからの宿主細胞であり得る。好ましい実施形態においては、動物は、ヒトである。宿主細胞は、健康な対象、または抗原の発現または過剰発現と関連付けられる疾患を有する対象から得てもよい。

使用方法
一態様においては、本開示は、本明細書において説明する実施形態のうちのいずれかに記載の少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターを宿主細胞に導入することと；宿主細胞において少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体を発現させることとを含む、細胞のホスファチジルセリン特異的細胞傷害活性を与えるかまたは向上させるための方法を提供し、少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ４受容体を発現するための改変前の宿主細胞と比較して、宿主細胞のホスファチジルセリン特異的細胞傷害活性を向上させる。ある特定の実施形態においては、宿主細胞の細胞傷害活性は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターによる改変前の宿主細胞と比較して、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％またはそれよりも多く増大する。一部の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞である。一部の実施形態においては、宿主細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。宿主細胞、特にＴ細胞およびＮＫ細胞等の免疫細胞の細胞傷害活性を測定する方法には、標的細胞死およびエフェクター細胞活性を媒介する、クロミウム（５１Ｃｒ）放出アッセイ、β－ｇａｌまたはホタルルシフェラーゼ放出アッセイ、フローサイトメトリー法が含まれる（例えばExpert Rev. Vaccines, 2010, 9:601-616を参照のこと）。

ある特定の実施形態においては、細胞のホスファチジルセリン特異的細胞傷害活性を与えるかまたは向上させるための方法は、少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞のホスファチジルセリン特異的貪食活性を与えるかまたは向上させることをさらに含む。ある特定のそのような実施形態においては、宿主細胞は、キメラＴｉｍ４受容体による改変前に、天然には貪食表現型を示さない。例えば、ある特定のそのような実施形態においては、宿主細胞の貪食活性は、キメラＴｉｍ４受容体ベクターを発現するための改変前の宿主細胞と比較して、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％またはそれよりも多く増大する。ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、天然には貪食活性を有しない。一部の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞である。一部の実施形態においては、宿主細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。宿主細胞の貪食活性を測定する方法は、国際出願公開公報ＷＯ２０１８／０６４０７６（その全体を参照により本明細書に組み込む）に説明される方法を含む。

別の態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、宿主細胞のエフェクター機能を向上させる方法において使用され得る。ある特定の実施形態においては、向上されたエフェクター機能は、増大した細胞傷害活性、増大した抗原特異的サイトカイン産生（例えばＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－αまたはそれらの任意の組合せである）、増大した抗アポトーシスシグナル伝達、増大した持続性、増大した拡大増殖、増大した増殖、またはそれらの任意の組合せを含む。ある特定の実施形態においては、宿主細胞のエフェクター機能は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターにより改変されていない宿主細胞と比較して、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％またはそれよりも多く向上される。一部の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞である。ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。

別の態様においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体により改変した宿主細胞は、免疫細胞疲弊を阻害または低減するための方法において使用され得る。一部の実施形態においては、免疫細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。ある特定の実施形態においては、Ｔ細胞における低減した疲弊は、（ａ）Ｔ細胞におけるＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの減少した発現；（ｂ）Ｔ細胞におけるＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、もしくはそれらの任意の組合せの増大した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を含む。ある特定の実施形態においては、ＮＫ細胞における低減した疲弊は、（ａ）ＮＫ細胞におけるＰＤ－１、ＮＫＧ２Ａ、ＴＩＭ３、もしくはそれらの任意の組合せの減少した発現；（ｂ）ＮＫ細胞におけるＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、もしくはその両方の増大した産生；または（ａ）と（ｂ）との両方を含む。ある特定の実施形態においては、免疫チェックポイント分子の発現は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターにより改変されていない宿主免疫細胞と比較して、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主免疫細胞において少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％減少する。ある特定の実施形態においては、サイトカインの発現は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターにより改変されていない宿主免疫細胞と比較して、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主免疫細胞において少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％またはそれよりも多く増大する。

別の態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、宿主細胞においてホスファチジルセリンに対する免疫抑制性応答を低減させる方法において使用され得る。ある特定の実施形態においては、免疫抑制性応答は、抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、またはその両方）の分泌、炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＩＬ－１２）の分泌の減少、またはその両方を含む。ある特定の実施形態においては、ホスファチジルセリンに対する宿主細胞の免疫抑制性応答は、キメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターにより改変されていない宿主細胞と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％減少する。一部の実施形態においては、宿主細胞は、免疫細胞である。ある特定の実施形態においては、宿主細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。

また別の態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する標的細胞を除去するための、例えば、表面提示されたホスファチジルセリンを保持するがん細胞を除去するための方法において使用され得る。ある特定の実施形態においては、標的細胞は、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する損傷細胞、ストレスを受けた細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞（例えば腫瘍細胞）である。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、アポトーシスを誘導すること、またはアポトーシスおよび貪食の両方を誘導することを介して、表面曝露されたホスファチジルセリンを保持する損傷標的細胞、ストレスを受けた標的細胞、アポトーシス標的細胞、または壊死標的細胞を一掃する。キメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、単独で、または例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ、抗体、放射線療法、化学療法、小分子、腫瘍溶解性ウイルス、電気パルス療法等を含む他の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。

別の態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、細胞ストレス、損傷、壊死、またはアポトーシスを誘導する治療剤の効果を向上させるための方法において使用され得る。ある特定の療法、例として化学療法、放射線療法、ＵＶ光療法、電気パルス療法、養子細胞免疫療法（例えばＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ）および腫瘍溶解性ウイルス療法は、腫瘍細胞、疾患細胞、およびそれらの周囲環境における細胞に対して、細胞損傷または細胞死を誘導し得る。キメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞は、ターゲティング細胞の外側リーフレット上に曝露されたホスファチジルセリン部分に結合する細胞損傷性／細胞傷害性療法と組み合わせて投与され、かつストレスを受けた細胞、損傷細胞、疾患細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞を一掃することができる。

別の態様においては、本開示は、本明細書において説明する実施形態のうちのいずれかに記載の少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体をコードする核酸分子またはキメラＴｉｍ４受容体ベクターを宿主細胞に導入することと；宿主細胞において少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体を発現させることとを含む、細胞の抗原捕捉、抗原プロセシング、および／もしくは抗原提示活性を与えるかまたは向上させるための方法を提供し、少なくとも１つのキメラＴｉｍ４受容体は、キメラＴｉｍ４受容体を発現するための改変前の宿主細胞と比較して、宿主細胞の抗原捕捉、抗原プロセシング、および／または抗原提示活性を向上させる。

本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ受容体ベクター、キメラＴｉｍ受容体を発現する宿主細胞、またはその医薬組成物は、適宜ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて、がんを有する対象においてＣＣＲ７＋発現Ｔ細胞を向上させるための方法において使用され得る。一部の実施形態においては、がんは、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫である。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質である。

キメラＴｉｍ４発現Ｔ細胞上でのＣＣＲ７発現の向上は、ＰＡＲＰ阻害剤と共に投与されないキメラＴｉｍ４発現Ｔ細胞上での発現と比較した場合に、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、４００％またはそれ以上のＣＣＲ７発現（ｅｘｐｒｅｓｉｏｎ）であり得る。

本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ受容体ベクター、キメラＴｉｍ受容体を発現する宿主細胞、またはその医薬組成物は、適宜ＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて、がんを有する対象においてＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を向上するための方法において使用され得る。一部の実施形態（ｅｍｂｏｄｉｍｅｔｎｓ）においては、がんは、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫である。一部の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、（ａ）Ｔｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと；（ｂ）ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、およびＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと；（ｃ）細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続するＣＤ２８膜貫通ドメインとを含む、単鎖キメラタンパク質である。

キメラＴｉｍ４発現Ｔ細胞におけるＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比の向上は、ＰＡＲＰ阻害剤と共に投与されないキメラＴｉｍ４発現Ｔ細胞上での発現と比較した場合に、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれ以上のＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比であり得る。

本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせたキメラＴｉｍ受容体、キメラＴｉｍ受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ受容体を発現する宿主細胞は、疾患、障害または望ましくない状態を患う対象を治療する方法において使用され得る。これらの方法の実施形態は、（ｉ）治療有効量の、本説明に記載の１つもしくは複数のキメラＴｉｍ受容体、１つもしくは複数のキメラＴｉｍ受容体をコードするポリヌクレオチド、１つもしくは複数のキメラＴｉｍ受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、または１つもしくは複数のキメラＴｉｍ受容体を発現するように遺伝子改変された宿主細胞集団を含む医薬組成物；および（ｉｉ）治療有効量の、ＰＡＲＰ阻害剤を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体組成物は、ＰＡＲＰ阻害剤療法の前（例えばＰＡＲＰ阻害剤療法の１日～３０日前またはそれよりも前）、ＰＡＲＰ阻害剤療法と同時（同日）、またはＰＡＲＰ阻害剤療法の後（例えばＰＡＲＰ阻害剤療法の１日～３０日後またはそれよりも後）に投与され得る。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与後に投与される。さらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。またさらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤療法の投与後４週間以内、３週間以内、２週間以内または１週間以内に投与される。ＰＡＲＰ阻害剤療法が多数の用量を含む場合、キメラＴｉｍ受容体改変細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤の初回用量後に、ＰＡＲＰ阻害剤の最終用量後に、またはＰＡＲＰ阻害剤の多数の用量間において投与され得る。

別の態様においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞は、疾患、障害または望ましくない状態を患う対象を治療する方法において使用され得る。これらの方法の実施形態は、治療有効量の、本説明に記載の１つもしくは複数のキメラＴｉｍ４受容体、１つもしくは複数のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、１つもしくは複数のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、または１つもしくは複数のキメラＴｉｍ４受容体を発現するように遺伝子改変された宿主細胞集団を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

本開示において説明するキメラＴｉｍ４受容体を発現する細胞により治療され得る疾患は、がんおよび感染性疾患（ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、原生動物感染）を含む。養子免疫療法および遺伝子療法は、様々な種類のがん（Morgan et al., Science 314:126, 2006；Schmitt et al., Hum. Gene Ther. 20:1240, 2009；June, J. Clin. Invest. 117:1466, 2007）および感染性疾患（Kitchen et al., PLoS One 4:38208, 2009；Rossi et al., Nat. Biotechnol. 25:1444, 2007；Zhang et al., PLoS Pathog. 6:e1001018, 2010；Luo et al., J. Mol. Med. 89:903, 2011）のための有望な治療である。

固形腫瘍および白血病を含む多種多様ながんは、本明細書において開示される組成物および方法に適している。本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用して治療され得る例示的ながんには、乳房、前立腺および結腸の腺癌；全ての形態の気管支原性肺癌；骨髄性白血病；黒色腫；肝細胞腫；神経芽細胞腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；ならびに癌腫（例えば、ウォーカー癌腫、基底細胞癌、基底扁平細胞癌、ブラウン・ピアース癌、腺管癌、エールリッヒ癌、クレブス２癌、メルケル細胞癌、粘液性癌、非小細胞肺癌、燕麦細胞癌、乳頭癌、硬性癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、扁平上皮癌および移行上皮癌）が含まれる。本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用して治療され得る追加のがんの種類は、組織球性障害；悪性組織球症；白血病；ホジキン病；免疫増殖性小（ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｓｍａｌｌ）；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；多発性骨髄腫；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；形質細胞腫；細網内皮症；黒色腫；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント質腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；絨毛性腫瘍を含む。さらに、また、以下の種類のがん：腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫（ｃｙｃｌｉｎｄｒｏｍａ）；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；男性胚腫；肝細胞腫；汗腺腫；膵島腫瘍；ライディッヒ細胞腫；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫（ｌｅｉｍｙｏｍａ）；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫（ｍｙｏｍｍａ）；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節腫；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クローム親和性傍神経節腫は、本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用する治療に適することが企図される。また、治療され得るがんの種類は、被角血管腫；好酸球増加症を伴う血管リンパ様過形成；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管外皮腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ管肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；葉状嚢胞肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣癌；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症（ｎｅｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ）；子宮頸部異形成、および腹膜がんを含む。

本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用する治療に適する高増殖性障害の例には、Ｂ細胞リンパ腫［例として様々な形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または中枢神経系リンパ腫］を含むＢ細胞がん（Ｂ細胞腫瘍）、白血病［例として急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽細胞化、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病］および骨髄腫（例として多発性骨髄腫）が含まれる。本明細書において説明する受容体、改変宿主細胞および組成物を使用して治療され得る追加のＢ細胞がんには、小リンパ球性リンパ腫、小リンパ球性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性化の可能性をもつＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症および移植後リンパ増殖性障害が含まれる。

一部の実施形態においては、本明細書において提供される実施形態のいずれかに記載のキメラＴｉｍ４受容体、キメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド、キメラＴｉｍ４受容体ベクター、またはキメラＴｉｍ４受容体を発現する宿主細胞およびＰＡＲＰ阻害剤を含む組合せ療法は、固形腫瘍を治療するために有用である。一部の実施形態においては、固形腫瘍がんは、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、または前立腺がんである。一部の実施形態においては、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。一部の実施形態においては、卵巣がんは、進行卵巣がんである。一部の実施形態においては、前立腺がんは、進行前立腺がんである。一部の実施形態においては、固形腫瘍がんは、黒色腫である。一部の実施形態においては、固形腫瘍がんは、肺がんである。一部の実施形態においては、肺がんは、非小細胞肺がんである。一部の実施形態においては、固形腫瘍がんは、Ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ（ＢＲＣＡ）変異がんである。一部の実施形態においては、がんは、ＢＲＣＡ１変異がん、ＢＲＣＡ２変異がん、またはその両方である。

感染性疾患は、感染病原体と関連付けられる感染性疾患を含み、様々な細菌［例えば病原性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、炭疽菌（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ボツリヌス菌（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ディフィシル菌（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、ウェルシュ菌（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、ピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）、コレラ菌（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ）、リステリア属種（Ｌｉｓｔｅｒｉａｓｐｐ．）、リケッチア属種（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｓｐｐ．）、クラミジア属種（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｓｐｐ．）等］、マイコバクテリアおよび寄生生物（原生動物の公知の任意の寄生性メンバーを含む）のいずれかを含む。感染性ウイルスには、真核細胞ウイルス、例としてアデノウイルス、ブニヤウイルス、ヘルペスウイルス、パポーバウイルス、パピローマウイルス（例えばＨＰＶ）、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、ラブドウイルス（例えば狂犬病）、オルトミクソウイルス（例えばインフルエンザ）、ポックスウイルス（例えばワクシニア）、レオウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス（例えばＨＩＶ）、フラビウイルス（例えばＨＣＶ、ＨＢＶ）その他が含まれる。ある特定の実施形態においては、本開示に記載のキメラＴｉｍ４受容体を含む組成物は、対象において持続的感染を確立することができる微生物による感染を治療するために使用される。

本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、細胞結合形態（例えば標的細胞集団の遺伝子療法）において対象に投与され得る。したがって、例えば、本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、それらのサブセットを含むＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、リンパ球前駆体細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、骨髄系前駆体細胞、成熟骨髄細胞、またはそれらの任意の組合せの表面上に発現されて、対象に投与され得る。ある特定の実施形態においては、対象を治療する方法は、有効量のキメラＴｉｍ４受容体改変細胞（すなわち、１つまたは複数のキメラＴｉｍ４受容体を発現する組換え細胞）を投与することを含む。キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、対象にとって異種、同系、同種異系または自家であり得る。

キメラＴｉｍ４受容体改変細胞を含む医薬組成物は、医療分野の熟練者によって決定される通り、治療（または予防）されるべき疾患または状態に適切な様式において投与され得る。組成物の適切な用量、好適な持続期間および投与頻度は、患者の状態、サイズ、体重、体表面積、年齢、性別、疾患の種類および重症度、投与される特定の治療、活性成分の特定の形態、投与時間および方法ならびに同時に投与される他の薬物等の因子によって決定される。本開示は、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好適な賦形剤には、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールその他およびそれらの組合せが含まれる。他の好適な点滴媒体は、生理食塩水、ＮｏｒｍｏｓｏｌＲ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｐｌａｓｍａ－ＬｙｔｅＡ（Ｂａｘｔｅｒ）、水中の５％デキストロースまたは乳酸リンゲル液を含む任意の等張媒体製剤であり得る。

医薬組成物中の治療有効量の細胞は、少なくとも１つの細胞（例えば１つのキメラＴｉｍ４受容体改変Ｔ細胞）であるか、またはより典型的には１０^２個の細胞よりも多く、例えば最高で１０^６個、最高で１０^７個、最高で１０^８個の細胞、最高で１０^９個の細胞、最高で１０^１０個の細胞もしくは最高で１０^１１個の細胞またはそれよりも多い。ある特定の実施形態においては、細胞は、約１０^６個～約１０^１０個の細胞／ｍ^２の範囲内、好ましくは約１０^７個～約１０^９個の細胞／ｍ^２の範囲内で投与される。細胞数は、組成物に含まれる細胞種はもちろん、組成物が意図される最終使用に依存する。例えば、キメラＴｉｍ４受容体を含有するように改変された細胞を含む組成物は、約５％～約９５％またはそれよりも多くのそのような細胞を含有する細胞集団を含む。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれよりも多くのそのような細胞を含む細胞集団を含む。本明細書において提供される使用のために、細胞は一般的に、１リットルもしくはそれ未満、５００ｍｌもしくはそれ未満、２５０ｍｌもしくはそれ未満、または１００ｍｌもしくはそれ未満の容量において存在する。それゆえ、所望の細胞の密度は典型的に、１０^４個の細胞／ｍｌよりも高く、一般的には１０^７個の細胞／ｍｌよりも高く、一般的に１０^８個の細胞／ｍｌまたはそれよりも高い。細胞は、１回の点滴として、またはある時間範囲にわたる多数回の点滴において投与され得る。キメラＴｉｍ４受容体改変細胞の反復点滴は、日、週、月またはさらには疾患または疾患活性の再発が存在する場合には年単位で分離され得る。臨床関連免疫細胞数は、累積的に１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０または１０^１１個の細胞に等しいか、またはこれを超える多数回点滴に配分され得る。本明細書において説明する組換え発現ベクターを含む宿主細胞の投与のために好ましい用量は、約１０^７個の細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^７個の細胞／ｍ^２、約１０^８個の細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^８個の細胞／ｍ^２、約１０^９個の細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^９個の細胞／ｍ^２、約１０^１０個の細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^１０個の細胞／ｍ^２または約１０^１１個の細胞／ｍ^２である。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体組成物は、静脈内に、腹腔内に、鼻内に、腫瘍内に、骨髄中に、リンパ節中に、および／または脳脊髄液中に投与され得る。

キメラＴｉｍ４受容体組成物は、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて、対象に投与され得る。本説明に記載のキメラＴｉｍ組成物と組み合わせて投与され得る治療剤の例には、放射線療法、養子細胞免疫療法剤（例えば組換えＴＣＲ、高親和性ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＴＣＲ－ＣＡＲ、ｓｃＴＣＲ融合タンパク質、樹状細胞ワクチン）、抗体療法、免疫チェックポイント分子阻害剤療法、ＵＶ光療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法または医薬療法、例として化学療法剤、治療用ペプチド、ホルモン、アプタマー、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、小分子療法、またはそれらの任意の組合せが含まれる。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変宿主細胞は、１つまたは複数の追加の治療剤により誘導される表面ホスファチジルセリンを提示する、ストレスを受けた細胞、損傷細胞、アポトーシス細胞、壊死細胞、感染細胞、死亡細胞を一掃し得る。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体および養子細胞免疫療法剤（例えば、上記に説明するＣＡＲ、ＴＣＲ－ＣＡＲ、ＴＣＲ等）は、同じ宿主細胞または異なる宿主細胞において対象に投与される。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体および養子細胞免疫療法剤は、同じベクターからまたは別々のベクターから、同じ宿主細胞において発現される。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体および養子細胞免疫療法剤は、マルチシストロン性ベクターから、同じ宿主細胞において発現される。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、養子細胞免疫療法剤と同じ宿主細胞種において発現される（例えば、キメラＴｉｍ４受容体がＣＤ４Ｔ細胞において発現され、かつＣＡＲ／またはＴＣＲがＣＤ４Ｔ細胞において発現されるか、またはキメラＴｉｍ４受容体がＣＤ８Ｔ細胞において発現され、かつＣＡＲ／またはＴＣＲがＣＤ８Ｔ細胞において発現される）。他の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体は、養子免疫療法剤とは異なる宿主細胞種において発現される（例えば、キメラＴｉｍ４受容体がＣＤ４Ｔ細胞において発現され、かつＣＡＲ／またはＴＣＲがＣＤ８Ｔ細胞において発現される）。キメラＴｉｍ４受容体により操作された免疫細胞または細胞サブセットと細胞免疫療法剤（例えばＣＡＲ、ＴＣＲ等）との組合せを含む細胞免疫療法組成物、製造方法、および使用方法は、その全体を参照により本明細書に組み込む、ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ２０１９／１９１３４０号において説明されている。

組換えＴＣＲ、高親和性ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＴＣＲ－ＣＡＲ、またはｓｃＴＣＲ融合タンパク質がターゲティングし得る例示的な抗原には、ＷＴ－１、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＨＰＶＥ７、サバイビン、α－フェトプロテインおよび腫瘍特異的新生抗原が含まれる。

本開示のＣＡＲは、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生生物抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患抗原を含む様々な抗原をターゲティングし得る。ＣＡＲがターゲティングし得る例示的な抗原には、ＣＤ１３８、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＢＣＭＡ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ－１６、Ｌ１ＣＡＭ、ＣＤ２２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３０、ＣＡ１２５、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＧＤ－３、ＨＰＶＥ６、ＨＰＶＥ７、ＭＵＣ－１、ＨＥＲ２、葉酸受容体α、ＣＤ９７、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ４４ｖ６、ＷＴ１、ＶＥＧＦ－α、ＶＥＧＦＲ１、ＩＬ－１３Ｒα１、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－１１Ｒα、ＰＳＡ、ＦｃＲＨ５、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＡＧ－７２、ＣＥＡ、エフリンＡ２、エフリンＢ２、ルイス式Ａ抗原、ルイス式Ｙ抗原、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＲＡＧＥ－１、葉酸受容体β、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、ＶＥＧＦＲ－２、ＬＧＲ５、ＳＳＸ２、ＡＫＡＰ－４、ＦＬＴ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ３、ｏ－アセチル－ＧＤ２およびＧＤ２が含まれる。

一部の実施形態においては、本開示のキメラＴｉｍ４受容体は、ＣＤ７２特異的ＣＡＲと組み合わせて対象に投与される。一部の実施形態においては、ＣＤ７２特異的ＣＡＲの結合ドメインは、
（ｉ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｉｉ）配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｉｉｉ）配列番号３０２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３０３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３０４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３０５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３０６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３０７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｉｖ）配列番号３０８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３０９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３１０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３１１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３１２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｖ）配列番号３１４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３１５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３１６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３１８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３１９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｖｉ）配列番号３２０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３２１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３２２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３２３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３２４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３２５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｖｉｉ）配列番号３２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３２７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３２８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３２９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３３０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３３１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｖｉｉｉ）配列番号３３２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３３３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３３４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３３５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３３６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３３７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；
（ｉｘ）配列番号３３８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３３９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３４０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３４１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３４２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３４３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域；または
（ｘ）配列番号３４４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ－１）；配列番号３４５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ－２）；および配列番号３４６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ－３）を含む重鎖可変（ＶＨ）領域；ならびに配列番号３４７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ－１）；配列番号３４８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ－２）；および配列番号３４９に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ－３）を含む軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む。

一部の実施形態においては、ＣＡＲの結合ドメインは、
（ｉ）配列番号１１３に示されるアミノ酸配列または配列番号１１３について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１４に示されるアミノ酸配列または配列番号１１４について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｉｉ）配列番号１１５に示されるアミノ酸配列または配列番号１１５について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１６に示されるアミノ酸配列または配列番号１１６について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｉｉｉ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列または配列番号１１７について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１１８に示されるアミノ酸配列または配列番号１１８について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｉｖ）配列番号１１９に示されるアミノ酸配列または配列番号１１９について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１２０に示されるアミノ酸配列または配列番号１２０について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｖ）配列番号１２１に示されるアミノ酸配列または配列番号１２１について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１２２に示されるアミノ酸配列または配列番号１２２について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｖｉ）配列番号１２３に示されるアミノ酸配列または配列番号１２３について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１２４に示されるアミノ酸配列または配列番号１２４について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｖｉｉ）配列番号１２５に示されるアミノ酸配列または配列番号１２５について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列または配列番号１２６について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；
（ｖｉｉｉ）配列番号１２７に示されるアミノ酸配列または配列番号１２７について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１２８に示されるアミノ酸配列または配列番号１２８について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域；あるいは
（ｉｘ）配列番号１２９に示されるアミノ酸配列または配列番号１２９について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ領域、および配列番号１３０に示されるアミノ酸配列または配列番号１３０について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含むＶＬ領域
を含む。

一部の実施形態においては、ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレキシブルリンカーにより接合される。一部の実施形態においては、結合ドメインは、ＶＨ－リンカー－ＶＬ方向またはＶＬ－リンカー－ＶＨ方向（ｏｒｉｅｎｔｉａｔｉｏｎ）であり得る、ＶＨ領域、ＶＬ領域、およびフレキシブルリンカーを含むｓｃＦｖを含む。一部の実施形態においては、フレキシブルリンカーは、約５～約５０アミノ酸長を有し、かつグリシン、セリン、および／またはトレオニンがリッチな配列を含む。例示的リンカーには、（ＧＧＧＧＳ）_ｘまたは（ＧＧＧＳ）_ｘ、式中ｘ＝２～５を有するリンカーが含まれる。一部の実施形態においては、フレキシブルリンカーは、配列番号１６５～１７０のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、結合ドメインは、配列番号１３１～１６４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列または配列番号１３１～１６４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列について少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する配列を含む。

ある特定の実施形態においては、本開示において提供されるＣＡＲの細胞外ドメインは、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に細胞外非シグナル伝達スペーサーまたはリンカードメインを含んでもよい。含まれる場合、そのようなスペーサーまたはリンカードメインは、結合ドメインを、宿主細胞表面から離れるように位置させて、適切な細胞－細胞接触、結合および活性化をさらに可能にし得る。細胞外スペーサードメインは一般的に、ＣＡＲの細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。細胞外スペーサーの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインサイズおよび親和性に基づいて、標的分子結合を最適化するために変動し得る（例えばGuest et al., J. Immunother. 28:203-11, 2005；ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照のこと）。ある特定の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンヒンジ領域または変更された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ４ヒンジ領域は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号において説明されており、当該ヒンジ領域は、その全体を参照により本明細書に組み込む。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号９）のアミノ酸配列を有する改変ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。

本明細書において説明するＣＡＲにおいて使用され得るヒンジ領域の他の例には、野生型またはその変異型であり得る１型膜タンパク質、例としてＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域からのヒンジ領域が含まれる。例示的なＣＤ８ａヒンジ領域は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。例示的なＣＤ２８ヒンジ領域は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはそれらの組合せから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全てまたは一部を含む（例えばＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号を参照されたく、当該スペーサーは、その全体を参照により本明細書に組み込む）。またさらなる実施形態においては、細胞外スペーサードメインは、ＩＩ型Ｃレクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃレクチンには、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２ＡおよびＮＫＧ２Ｄが含まれる。

本開示のＣＡＲは、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続し、かつこれらの間に位置する膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸の長さの範囲である。膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断し、かつ宿主細胞膜においてＣＡＲを固定する疎水性アルファヘリックスである。膜貫通ドメインは、結合ドメインに、または存在する場合細胞外スペーサードメインに直接的に融合され得る。ある特定の実施形態においては、膜貫通ドメインは、膜内在性タンパク質［例えば受容体、表面抗原分類（ＣＤ：ｃｌｕｓｔｅｒｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子その他］に由来する。膜貫通ドメインは、細胞外ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインと同じ分子から選択され得る（例えば、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８膜貫通ドメインを含むＣＡＲ）。一部の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインは各々、異なる分子から選択される。一部の実施形態においては、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。また他の実施形態においては、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインは各々、異なる分子から選択される。

本開示のＣＡＲにおける使用のための例示的な膜貫通ドメインには、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ５、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５およびＺａｐ７０膜貫通ドメインが含まれる。例示的なＣＤ８ａ膜貫通ドメインは、配列番号１７４のアミノ酸配列を含む。例示的なＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、ＣＡＲの細胞外ドメインの標的分子（例えばＣＤ７２）への結合に応答して、機能的シグナルを細胞に伝達し、かつＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞、例えばＴ細胞の通常のエフェクター機能または応答のうちの少なくとも１つを活性化することができる。一部の実施形態においては、ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、例として、細胞溶解活性またはＴヘルパー活性、例として、サイトカインまたは他の因子の分泌を誘導する。細胞内シグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持する細胞内シグナル伝達分子の任意の部分であり得る。一部の実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体成分（例えばＴＣＲ）または共刺激性分子から得られる。一部の実施形態においては、抗原受容体または共刺激性分子の全長細胞内シグナル伝達ドメインが使用される。一部の実施形態においては、抗原受容体または共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用され、但し、その切断部分は十分なシグナル伝達活性を保持する。さらなる実施形態においては、細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインの全長または切断部分の変異型であり、但し、その変異型は十分なシグナル伝達活性を保持する（すなわち、機能的変異型である）。

ある特定の実施形態においては、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）含有シグナル伝達ドメインを含む。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは一般的に、少なくとも１つの（１、２、３、４つまたはそれよりも多い）ＩＴＡＭを含有し、これは、ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉの保存されたモチーフを指す。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは、抗原結合またはリガンドエンゲージメント後、Ｔ細胞活性化シグナル伝達を開始し得る。ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインには、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲγおよびＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインが含まれる。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１７７または配列番号１７８のアミノ酸配列を含む。

ＣＡＲ細胞内シグナル伝達ドメインは、主要な、または古典的な（例えばＩＴＡＭ駆動）活性化シグナルと共に活性化された場合、Ｔ細胞応答、例としてＴ細胞活性化、サイトカイン産生、増殖、分化、生存、エフェクター機能またはそれらの組合せを促進する、または向上させる共刺激性シグナル伝達ドメインを含んでもよい。ＣＡＲにおける使用のための共刺激性シグナル伝達ドメインには、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０またはそれらの任意の組合せが含まれる。特定の実施形態においては、共刺激性シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）シグナル伝達ドメインを含む。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１７９または配列番号１８０に示されるアミノ酸配列（ネイティブＣＤ２８タンパク質のＬ１８６Ｇ、Ｌ１８７Ｇ変異を含有する変異型）を含む。例示的な４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメインは、配列番号１８１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態においては、ＣＡＲは、１、２つまたはそれよりも多い共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態においては、本開示のＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲまたは第３世代ＣＡＲである。第１世代ＣＡＲは一般的に、ＣＤ３ζ、ＦｃγＲＩの細胞内シグナル伝達ドメインまたは他のＩＴＡＭ含有活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有して、Ｔ細胞活性化シグナルを提供する。第２世代ＣＡＲは、共刺激性シグナル伝達ドメイン（例えば内因性Ｔ細胞共刺激性受容体、例としてＣＤ２８、４－１ＢＢまたはＩＣＯＳからの共刺激性シグナル伝達ドメイン）をさらに含む。第３世代ＣＡＲは、ＩＴＡＭ含有活性化ドメイン、第１の共刺激性シグナル伝達ドメインおよび第２の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。

本開示のＣＡＲは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種、またはそれらの任意の組合せを含む任意の哺乳動物種に由来するポリヌクレオチド配列を含み得る。一部の実施形態においては、キメラ抗原受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化である。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８２またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８３またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８４またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８５またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８５に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ２８ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８６またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８６に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ２８ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８７またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ２８ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８８またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ２８ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１８９またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１８９に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９０またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９０に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９１またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９１に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ８ａヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９２またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９２に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ８ａヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９３またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９３に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９４またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９４に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９５またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ８ａヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９６またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＣＤ８ａヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９７またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９７に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９８またはアミノ酸１～２１を含まない配列番号１９８に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号１９９またはアミノ酸１～２０を含まない配列番号１９９に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号２００またはアミノ酸１～１８を含まない配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含む。

本開示に記載の例示的なＣＡＲは、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインおよびＩｇＧ４ヒンジを含む細胞外スペーサードメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激性シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。一実施形態においては、ＣＡＲは、配列番号２０１またはアミノ酸１～２０を含まない配列番号２０１に示されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態においては、ＣＡＲは、表３、例えば配列番号１８２～２３４のうちのいずれか１つに示されるＣＡＲのアミノ酸配列、またはシグナルペプチドを欠く配列番号１８２～２３４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。

本開示のＣＡＲにおける使用のためのシグナルペプチド、結合ドメイン、細胞外スペーサー、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインに関する例示的配列および例示的ＣＡＲ配列は、表３に示される。

一部の実施形態においては、本開示のＣＤ７２ＣＡＲは、ペプチドタグ、例として、例えばＭｙｃタグ（配列番号２３９）を含有する。一部の実施形態においては、Ｍｙｃタグは、シグナルペプチドの後ろであるが、ｓｃＦｖ結合ドメインの第１の可変領域の前で、ＣＤ７２ＣＡＲへと挿入される。Ｍｙｃタグを含む本明細書において提供されるＣＡＲ配列に関して、配列内に挿入されたＭｙｃタグを含まない同じＣＡＲ配列が企図されることが理解される。

放射線療法には、体外照射療法（例えば従来型体外照射療法、定位放射線、３次元原体照射療法、強度変調放射線療法、強度変調振子照射療法、粒子線療法、陽子線療法およびオーガー療法）、近接照射療法、体系的放射性同位体療法、手術中の放射線療法またはそれらの任意の組合せが含まれる。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ組成物と組み合わせた使用のための例示的な抗体には、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｍａｂ）、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、ベバシズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレファセプト、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｚｉｍａｂ）、ベリムマブ、ベズロトクスマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、オララツマブ、パリビズマブ、パニツムマブおよびトシリズマブが含まれる。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ組成物と組み合わせた使用のためであり得る例示的な免疫チェックポイント分子の阻害剤には、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒまたはそれらの任意の組合せをターゲティングするチェックポイント阻害剤が含まれる。ある特定の実施形態においては、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、ペプチド、ＲＮＡｉ剤または小分子であり得る。ＣＴＬＡ－４に特異的な抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブであり得る。ＰＤ－１に特異的な抗体は、ピディリズマブ、ニボルマブまたはペンブロリズマブであり得る。ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブまたはアベルマブであり得る。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体組成物と組み合わせた使用のための例示的な化学療法剤は、アルキル化剤、プラチナベースの剤、細胞傷害剤、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬（例として葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび糖修飾アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例として挿入剤）およびＤＮＡ修復阻害剤を含み得る。

化学療法剤には、有糸分裂または細胞分裂を阻害する非特異的細胞傷害剤、および腫瘍増殖、進行および転移に関与する特定の分子（例えば癌遺伝子）をターゲティングすることによってがん細胞の増殖および広がりを遮断する分子ターゲティング療法が含まれる。本明細書において説明する発現カセット組成物と組み合わせた使用のための例示的な非特異的化学療法剤は、アルキル化剤、プラチナベースの剤、細胞傷害剤、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗薬（例として葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび糖修飾アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例として挿入剤）、低メチル化剤およびＤＮＡ修復阻害剤を含み得る。

本明細書において企図される組合せ療法における使用のために考えられる化学療法剤の例には、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、アナストロゾール［アリミデックス（登録商標）］、ビカルタミド［カソデックス（登録商標）］、硫酸ブレオマイシン［ブレノキサン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標）］、ブスルファン［ミレラン（登録商標）］、ブスルファン注射［ブスルフェクス（登録商標）］、カペシタビン［ゼローダ（登録商標）］、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン［パラプラチン（登録商標）］、カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］、クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］、シスプラチン［プラチノール（登録商標）］、クラドリビン［ロイスタチン（登録商標）］、シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）またはネオサル（Ｎｅｏｓａｒ）（登録商標）］、シタラビン、シトシンアラビノシド［シトサル（Ｃｙｔｏｓａｒ）－Ｕ（登録商標）］、シタラビンリポソーム注射［デポサイト（登録商標）］、ダカルバジン［ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）］、ダクチノマイシン［アクチノマイシンＤ、コスメゲン（Ｃｏｓｍｅｇａｎ）］、ダウノルビシン塩酸塩［セルビジン（登録商標）］、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射［ダウノゾーム（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ）（登録商標）］、デキサメタゾン、ドセタキセル［タキソテール（登録商標）］、ドキソルビシン塩酸塩［アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（Ｒｕｂｅｘ）（登録商標）］、エトポシド［ベプシド（登録商標）］、リン酸フルダラビン［フルダラ（登録商標）］、５－フルオロウラシル［アドルシル（Ａｄｒｕｃｉｌ）（登録商標）、エフデックス（Ｅｆｕｄｅｘ）（登録商標）］、フルタミド［ユーレキシン（Ｅｕｌｅｘｉｎ）（登録商標）］、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素［ハイドレア（登録商標）］、イダルビシン［イダマイシン（登録商標）］、イホスファミド［ＩＦＥＸ（登録商標）］、イリノテカン［カンプト（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）（登録商標）］、Ｌ－アスパラギナーゼ［ＥＬＳＰＡＲ（登録商標）］、ロイコボリンカルシウム、メルファラン［アルケラン（登録商標）］、６－メルカプトプリン［ピュリネソール（登録商標）］、メトトレキセート［フォレックス（Ｆｏｌｅｘ）（登録商標）］、ミトキサントロン［ノバントロン（登録商標）］、マイロターグ、パクリタキセル［タキソール（登録商標）］、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０カルムスチンインプラント［ギリアデル（登録商標）］、ｆｄａｂｒａクエン酸タモキシフェン［ノルバデックス（登録商標）］、テニポシド［ブモン（Ｖｕｍｏｎ）（登録商標）］、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン［チラゾン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ）（登録商標）］、トポテカン塩酸塩注射［ハイカムチン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ）（登録商標）］、ビンブラスチン［ベルバン（登録商標）］、ビンクリスチン［オンコビン（登録商標）］、イブルチニブ、ベネトクラクス、クリゾチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、セリチニブおよびビノレルビン［ナベルビン（登録商標）］が含まれる。

本明細書において企図される組合せ療法における使用のための例示的なアルキル化剤には、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼン：ウラシルマスタード［アミノウラシルマスタード（登録商標）、クロレタミナシル（Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ）（登録商標）、デメチルドパン（Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ）（登録商標）、デスメチルドパン（Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ）（登録商標）、ヘマンタミン（Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ）（登録商標）、ノルドパン（Ｎｏｒｄｏｐａｎ）（登録商標）、ウラシルナイトロジェンマスタード（登録商標）、ウラシロスト（Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ）（登録商標）、ウラシルモスタザ（Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ）（登録商標）、ウラムスチン（Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ）（登録商標）、ウラムスチン（Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ）（登録商標）］、クロルメチン［マスタージェン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）（登録商標）］、シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）、ネオサル（登録商標）、クラフェン（Ｃｌａｆｅｎ）（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、プロサイトクス（Ｐｒｏｃｙｔｏｘ）（登録商標）、レビミューン（Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ）（商標）］、イホスファミド［ミトキサナ（Ｍｉｔｏｘａｎａ）（登録商標）］、メルファラン［アルケラン（登録商標）］、クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］、ピポブロマン［アメデール（登録商標）、バーサイト（Ｖｅｒｃｙｔｅ）（登録商標）］、トリエチレンメラミン［ヘメル（登録商標）、ヘキサレン（Ｈｅｘａｌｅｎ）（登録商標）、ヘキサスタット（Ｈｅｘａｓｔａｔ）（登録商標）］、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド［テモダール（登録商標）］、チオテパ［チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標）］、ブスルファン［ブシルベックス（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ）（登録商標）、ミレラン（登録商標）］、カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］、ロムスチン［ＣｅｅＮＵ（登録商標）］、ストレプトゾシン［ザノサー（Ｚａｎｏｓａｒ）（登録商標）］およびダカルバジン［ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）］が含まれる。本明細書において企図される組合せ療法における使用のための追加の例示的なアルキル化剤には、オキサリプラチン［エロキサチン（登録商標）］；テモゾロミド［テモダール（Ｔｅｍｏｄａｒ）（登録商標）およびテモダール（Ｔｅｍｏｄａｌ）（登録商標）］；ダクチノマイシン［アクチノマイシン－Ｄとしても公知、コスメゲン（登録商標）］；メルファラン［Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタードとしても公知、アルケラン（登録商標）］；アルトレタミン［ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ：ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ）としても公知、ヘキサレン（登録商標）］；カルムスチン［ＢｉＣＮＵ（登録商標）］；ベンダムスチン［トレアンダ（登録商標）］；ブスルファン［ブスルフェクス（登録商標）およびミレラン（登録商標）］；カルボプラチン［パラプラチン（登録商標）］；ロムスチン［ＣＣＮＵとしても公知、ＣｅｅＮＵ（登録商標）］；シスプラチン［ＣＤＤＰとしても公知、プラチノール（登録商標）およびプラチノール（登録商標）－ＡＱ］；クロラムブシル［ロイケラン（登録商標）］；シクロホスファミド［シトキサン（登録商標）およびネオサル（登録商標）］；ダカルバジン［ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても公知、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標）］；アルトレタミン［ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、ヘキサレン（登録商標）］；イホスファミド［イフェクス（Ｉｆｅｘ）（登録商標）］；プレドニムスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン［マチュレーン（Ｍａｔｕｌａｎｅ）（登録商標）］；メクロレタミン［ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよびメクロレタミン塩酸塩としても公知、マスタージェン（登録商標）］；ストレプトゾシン［ザノサー（登録商標）］；チオテパ［チオホスホアミド（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｅ）、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても公知、チオプレックス（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ）（登録商標）］；シクロホスファミド［エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ネオサル（登録商標）、プロシトクス（登録商標）、レビミューン（登録商標）］；およびベンダムスチンＨＣｌ［トレアンダ（登録商標）］が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書において企図される組合せ療法における使用のための例示的なプラチナベースの剤には、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、フェナントリプラチン（ｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｐｌａｔｉｎ）およびトリプラチン四硝酸塩（ｔｒｉｐｌａｔｉｎｔｅｔｒａｎｉｔｒａｔｅ）が含まれる。

組合せ療法における使用のための例示的な低メチル化剤には、アザシチジンおよびデシタビンが含まれる。

本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体組成物と組み合わせた使用のための例示的な分子ターゲティング阻害剤には、例えば受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤およびＲＥＴ阻害剤を含むがん細胞増殖および生存に関与する分子をターゲティングする小分子が含まれる。

例示的な分子ターゲティング療法には、ホルモンアンタゴニスト、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現阻害剤（例えば翻訳阻害剤）、アポトーシスインデューサー、血管新生阻害剤（例えばＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦ／ＥＧＦＲ経路阻害剤）、増殖因子阻害剤、ＧＴＰアーゼ阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、がんと関連付けられるドライバー変異の阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アデノシン経路阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤およびＲＥＴ阻害剤が含まれる。ある特定の実施形態においては、分子ターゲティング療法の使用は、分子標的に特異的な分子ターゲティング療法を、分子標的（例えばドライバー癌遺伝子）を有する腫瘍を有すると特定された対象に投与することを含む。ある特定の実施形態においては、分子標的は、活性化変異を有する。ある特定の実施形態においては、分子ターゲティング阻害剤と組み合わせたキメラＴｉｍ４受容体改変細胞の使用は、抗腫瘍応答の大きさ、抗腫瘍応答の持続力またはこれらの両方を増大する。ある特定の実施形態においては、典型的な用量よりも低い分子ターゲティング療法が、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞と組み合わせて使用される。

例示的な血管新生阻害剤は、Ａ６（ＡｎｇｓｔｒｏｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＢＴ－５１０（ＡｂｂｏｔｔＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＡＢＴ－６２７（アトラセンタン）（ＡｂｂｏｔｔＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／Ｘｉｎｌａｙ）、ＡＢＴ－８６９（ＡｂｂｏｔｔＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、アクチミド（Ａｃｔｉｍｉｄ）（ＣＣ４０４７、ポマリドマイド）（ＣｅｌｇｅｎｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄ（ＧｅｎＶｅｃ）、ＡＤＨ－１［エキセリン（Ｅｘｈｅｒｉｎ）］（ＡｄｈｅｒｅｘＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＡＥＥ７８８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＧ－０１３７３６（アキシチニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＡＧ３３４０（プリノマスタット）（ＡｇｏｕｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＧＸ１０５３（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＧＸ５１（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＬＮ－ＶＳＰ（ＡＬＮ－ＶＳＰＯ２）（ＡｌｎｙｌａｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＭＧ３８６（Ａｍｇｅｎ）、ＡＭＧ７０６（Ａｍｇｅｎ）、アパチニブ（Ａｐａｔｉｎｉｂ）（ＹＮ９６８Ｄ１）（ＪｉａｎｇｓｕＨｅｎｇｒｕｉＭｅｄｉｃｉｎｅ）、ＡＰ２３５７３（リダフォロリムス／ＭＫ８６６９）（ＡｒｉａｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＱ４Ｎ（Ｎｏｖａｖｅａ）、ＡＲＱ１９７（ＡｒＱｕｌｅ）、ＡＳＡ４０４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ａｎｔｉｓｏｍａ）、アチプリモド（ＣａｌｌｉｓｔｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＴＮ－１６１（Ａｔｔｅｎｕｏｎ）、ＡＶ－４１２（ＡｖｅｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＶ－９５１（ＡｖｅｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アバスチン（ベバシズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＺＤ２１７１［セディラニブ／レセンチン（Ｒｅｃｅｎｔｉｎ）］（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＡＹ５７－９３５２［テラチニブ（Ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）］（Ｂａｙｅｒ）、ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＩＢＦ１１２０（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＩＢＷ２９９２（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＭＳ－２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ－５８２６６４（ブリバニブ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ－６９０５１４（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、カルシトリオール、ＣＣＩ－７７９（トーリセル）（Ｗｙｅｔｈ）、ＣＤＰ－７９１（ＩｍＣｌｏｎｅＳｙｓｔｅｍｓ）、セフラトニン（Ｃｅｆｌａｔｏｎｉｎ）（ホモハリントニン／ＨＨＴ）（ＣｈｅｍＧｅｎｅｘＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、セレブレックス（セレコキシブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＥＰ－７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）、ＣＨＩＲ－２６５（ＣｈｉｒｏｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＮＧＲ－ＴＮＦ、ＣＯＬ－３［メタスタット（Ｍｅｔａｓｔａｔ）］（ＣｏｌｌａｇｅｎｅｘＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、コンブレタスタチン（Ｏｘｉｇｅｎｅ）、ＣＰ－７５１，８７１（フィギツムマブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＰ－５４７，６３２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＳ－７０１７（第一三共）、ＣＴ－３２２［アンジオセプト（Ａｎｇｉｏｃｅｐｔ）］（Ａｄｎｅｘｕｓ）、クルクミン、ダルテパリン（フラグミン）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ジスルフィラム（Ａｎｔａｂｕｓｅ）、Ｅ７８２０（エーザイ株式会社）、Ｅ７０８０（エーザイ株式会社）、ＥＭＤ１２１９７４（シレンジタイド）（ＥＭＤＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＮＭＤ－１１９８（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＥＮＭＤ－２０７６（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、エンドスター（Ｅｎｄｏｓｔａｒ）（Ｓｉｍｃｅｒｅ）、アービタックス（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、ＥＺＮ－２２０８（ＥｎｚｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＺＮ－２９６８（ＥｎｚｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＧＣ１００８（Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ゲニステイン、ＧＳＫ１３６３０８９［フォレチニブ（Ｆｏｒｅｔｉｎｉｂ）］（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＷ７８６０３４（パゾパニブ）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＴ－１１１（ＶａｓｃｕｌａｒＢｉｏｇｅｎｉｃｓＬｔｄ．）、ＩＭＣ－１１２１Ｂ（ラムシルマブ）（ＩｍＣｌｏｎｅＳｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ－１８Ｆ１（ＩｍＣｌｏｎｅＳｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ－３Ｇ３（ＩｍＣｌｏｎｅＬＬＣ）、ＩＮＣＢ００７８３９（ＩｎｃｙｔｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＩＮＧＮ２４１（ＩｎｔｒｏｇｅｎＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、イレッサ（ＺＤ１８３９／ゲフィチニブ）、ＬＢＨ５８９［ファリダク（Ｆａｒｉｄａｋ）／パノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔｓｔ）］（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ルセンティス（ラニビズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＬＹ３１７６１５（エンザスタウリン）（ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏｍｐａｎｙ）、マクジェン（ペガプタニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＭＥＤＩ５２２［アベグリン（Ａｂｅｇｒｉｎ）］（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＭＬＮ５１８（タンデュチニブ）（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ネオバスタット（Ｎｅｏｖａｓｔａｔ）（ＡＥ９４１／ベネフィン）（ＡｅｔｅｒｎａＺｅｎｔａｒｉｓ）、ネクサバール（Ｂａｙｅｒ／Ｏｎｙｘ）、ＮＭ－３（ＧｅｎｚｙｍｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ノスカピン（ＣｏｕｇａｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＮＰＩ－２３５８（ＮｅｒｅｕｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＯＳＩ－９３０（ＯＳＩ）、パロミド（Ｐａｌｏｍｉｄ）５２９（ＰａｌｏｍａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、パンゼム（Ｐａｎｚｅｍ）カプセル（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、パンゼムＮＣＤ（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＰＦ－０２３４１０６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＦ－０４５５４８７８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＩ－８８（ＰｒｏｇｅｎＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ／ＭｅｄｉｇｅｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＰＫＣ４１２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ポリフェノンＥ（緑茶抽出物）（ＰｏｌｙｐｈｅｎｏＥＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ）、ＰＰＩ－２４５８（ＰｒａｅｃｉｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＴＣ２９９（ＰＴＣＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＴＫ７８７（バタラニブ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＸＤ１０１（ベリノスタット）（ＣｕｒａＧｅｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６）（Ｂａｙｅｒ）、レブリミド（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、レタアネ（Ｒｅｔａａｎｅ）（ＡｌｃｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ）、ＳＮ３８（リポソーム製剤）（Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、ＳＮＳ－０３２（ＢＭＳ－３８７０３２）（Ｓｕｎｅｓｉｓ）、ＳＯＭ２３０（パシレオチド）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、スクアラミン（Ｇｅｎａｅｒａ）、スラミン、スーテント（Ｐｆｉｚｅｒ）、タルセバ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＴＢ－４０３（Ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃｓ）、テムポスタチン（Ｔｅｍｐｏｓｔａｔｉｎ）（ＣｏｌｌａｒｄＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、テトラチオモリブデート（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＴＧ１００８０１（ＴａｒｇｅＧｅｎ）、サリドマイド（ＣｅｌｇｅｎｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、チンザパリンナトリウム、ＴＫＩ２５８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＲＣ０９３（ＴｒａｃｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＩｎｃ．）、ＶＥＧＦＴｒａｐ（アフリバーセプト）（ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＶＥＧＦＴｒａｐ－Ｅｙｅ（ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ベグリン（Ｖｅｇｌｉｎ）（ＶａｓＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ボルテゾミブ（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ＸＬ１８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ６４７（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ７８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ８２０（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ９９９（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ボリノスタット（Ｍｅｒｃｋ）およびＺＳＴＫ４７４を含むが、これらに限定されない。

例示的なＢ－Ｒａｆ阻害剤には、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびエンコラフェニブが含まれる。

例示的なＭＥＫ阻害剤には、ビニメチニブ、コビメチニブ、レファメチニブ、セルメチニブおよびトラメチニブが含まれる。

例示的なＢＴＫ阻害剤には、イブルチニブ、ピルトブルチニブ（Ｌｏｘｏ－３０５）、チラブルチニブ、トレブルチニブ、エボブルチニブ、フェネブルチニブ（ＧＤＣ－０８５３）、アカラブルチニブ、ベカブルチニブ（ＳＮＳ－０６２）、ＯＮＯ－４０５９、スペブルチニブ、ザヌブルチニブ（ＢＧＢ－３１１１）、ＨＭ７１２２４およびＭ７５８３が含まれる。

例示的なＴＲＫ阻害剤には、エヌトレクチニブ、ラロトレクチニブ、ＣＨ７０５７２８８、ＯＮＯ－７５７９、ＬＯＸＯ－１０１、レスタウルチニブおよびＬＯＸＯ－１９５が含まれる。

例示的なｃ－ＫＩＴ阻害剤には、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｂ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｂ）およびポナチニブが含まれる。

例示的なｃ－ＭＥＴ阻害剤には、カプマチニブ、クリゾチニブ、チバンチニブ、オナルツズマブ、ＩＮＣＢ２８０６０、ＡＭＧ－４５８、サボリチニブおよびテポチニブが含まれる。

例示的なＣＤＫ４／６阻害剤には、パルボシクリブ、リボシクリブ、アベマシクリブおよびトリラシクリブが含まれる。

例示的なＦＡＫ阻害剤には、デファクチニブ、ＧＳＫ２２５６０９８、ＢＩ８５３５２０およびＰＦ－００５６２２７１が含まれる。

例示的なＦＧＦＲ阻害剤には、エルダフィチニブ、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ロガラチニブ、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＦＰ－１０３９およびＡＲＱ０８７が含まれる。

例示的なＦＬＴ－３阻害剤には、キザルチニブ、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリンおよびレスタウルチニブが含まれる。

例示的なＩＤＨ１阻害剤には、イボシデニブ、ＢＡＹ－１４３６０３２およびＡＧＩ－５１９８が含まれる。

例示的なＩＤＨ２阻害剤には、エナシデニブが含まれる。

例示的なＰＡＲＰ阻害剤には、タラゾパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、オラパリブ（ＡＺ２２８１またはＫＵ５９４３６）、ベリパリブ（ＡＢＴ８８８）、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＡＧ０１４６９９、ＭＫ４８２７、ＢＭＮ－６７３、およびパミパリブ（ＢＧＢ－２９０）が含まれる。例示的なＰＤＧＦＲＡ阻害剤には、イマチニブ、レゴラフェニブ、クレノラニブおよびオララツマブが含まれる。

例示的な汎ＲＡＦ阻害剤には、ベルバラフェニブ（ｂｅｌｖａｒａｆｅｎｉｂ）、ＬＸＨ２５４、ＬＹ３００９１２０、ＩＮＵ－１５２およびＨＭ９５５７３が含まれる。

例示的なＲＥＴ阻害剤には、レンバチニブ、アレクチニブ、バンデタニブ、カボザンチニブ、ＢＬＵ－６６７およびＬＯＸＯ－２９２が含まれる。

例示的なＲＯＳ１阻害剤には、セリチニブ、ロルラチニブ、エヌトレクチニブ、クリゾチニブ、ＴＰＸ－０００５およびＤＳ－６０５１ｂが含まれる。

例示的な血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ：ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ）受容体阻害剤は、ベバシズマブ［アバスチン（登録商標）］、アキシチニブ［インライタ（登録商標）］；ブリバニブアラニネート［ＢＭＳ－５８２６６４、（Ｓ）－（（Ｒ）－１－（４－（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノエート］；ソラフェニブ［ネクサバール（登録商標）］；パゾパニブ［ヴォトリエント（登録商標）］；リンゴ酸スニチニブ［スーテント（登録商標）］；セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ２８８３８３－２０－１）；バラガテフ（Ｖａｒｇａｔｅｆ）（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ９２８３２６－８３－４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ３３２０１２－４０－５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ８１１８０３－０５－１）；イマチニブ［グリベック（登録商標）］；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ９４３３１９－７０－８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ４７５１０８－１８－０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ７５５０３７－０３－７）；バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ２１２１４１－５１－０）；ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ６４９７３５－４６－６）；バンデタニブ［カプレルサ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４］；モテサニブ二リン酸塩［ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ８５７８７６－３０－３、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０２／０６６４７０号において説明されているＮ－（２，３－ジヒドロ－３，３－ジメチル－１Ｈ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド］；ドビチニブ二乳酸（Ｄｏｖｉｔｉｎｉｂｄｉｌａｃｔｉｃａｃｉｄ）（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ８５２４３３－８４－２）；リンファニブ（Ｌｉｎｆａｎｉｂ）（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ７９６９６７－１６－３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ８４９２１７－６８－１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ１１１３５８－８８－４）；Ｎ－［５－［［［５－（１，１－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ３４５６２７－８０－７）；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）；４－メチル－３－［［１－メチル－６－（３－ピリジニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３－（トリフルオロメチル）フェニル］－ベンザミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ９４０３１０－８５－０）；およびアフリバーセプト［アイリーア（登録商標）］を含むが、これらに限定されない。

例示的なＥＧＦ経路阻害剤は、チルホスチン４６、ＥＫＢ－５６９、エルロチニブ［タルセバ（登録商標）］、ゲフィチニブ［イレッサ（登録商標）］、アービタックス、ニモツズマブ、ラパチニブ［タイケルブ（登録商標）］、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲｍＡｂ）、^１８８Ｒｅ－標識ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲｍＡｂ）およびＷＯ９７／０２２６６、ＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、米国特許第５，７４７，４９８号、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３およびＷＯ９６／３３９８０において一般的かつ特異的に開示されている化合物を含むが、これらに限定されない。例示的なＥＧＦＲ抗体には、セツキシマブ［アービタックス（登録商標）］；パニツムマブ［ベクチビックス（登録商標）］；マツズマブ（ＥＭＤ－７２０００）；トラスツズマブ［ハーセプチン（登録商標）］；ニモツズマブ（ｈＲ３）；ザルツムマブ；ＴｈｅｒａＣＩＭｈ－Ｒ３；ＭＤＸ０４４７（ＣＡＳ３３９１５１－９６－１）；およびｃｈ８０６（ｍＡｂ－８０６、ＣＡＳ９４６４１４－０９－１）が含まれるが、これらに限定されない。例示的な上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤には、エルロチニブ塩酸塩［タルセバ（登録商標）］、セリチニブ、ブリグチニブ、オシメルチニブ、ダコミチニブ、イコチニブ、ゲフィチニブ［イレッサ（登録商標）］；Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［［（３’’Ｓ’’）－テトラヒドロ－３－フラニル］オキシ］－６－キナゾリニル］－４（ジメチルアミノ）－２－ブテンアミド、トボック（Ｔｏｖｏｋ）（登録商標）；バンデタニブ［カプレルサ（登録商標）］；ラパチニブ［タイケルブ（登録商標）］；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；カネルチニブ二塩酸塩（ＣＩ－１０３３）；６－［４－［（４－エチル－１－ピペラジニル）メチル］フェニル］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（ＡＥＥ７８８、ＣＡＳ４９７８３９－６２－０）；ムブリチニブ（ＴＡＫ１６５）；ペリチニブ（Ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ）（ＥＫＢ５６９）；アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）；ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）；Ｎ－［４－［［１－［（３－フルオロフェニル）メチル］－１Ｈ－インダゾール－５－イル］アミノ］－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イル］－カルバミン酸、（３Ｓ）－３－モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ５９９６２６）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）；４－［４－［［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール（ＰＫＩ１６６、ＣＡＳ１８７７２４－６１－４）；ロシレチニブ（ｒｏｃｅｌｉｔｉｎｉｂ）が含まれるが、これらに限定されない。

例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン［ラパミューン（登録商標）］ならびにそのアナログおよび誘導体；ＳＤＺ－ＲＡＤ；テムシロリムス［トーリセル（登録商標）；ＣＣＩ－７７９としても公知］；リダフォロリムス［デフォロリムス（ｄｅｆｅｒｏｌｉｍｕｓ）として以前に公知、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０^４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０３／０６４３８３号において説明されている］；エベロリムス［アフィニトール（登録商標）またはＲＡＤ００１］；ラパマイシン［ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標）］；シマピモド（Ｓｉｍａｐｉｍｏｄ）（ＣＡＳ１６４３０１－５１－３）；（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ１０１３１０１－３６－４）；およびＮ^２－［１，４－ジオキソ－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチルＬ－セリン－，分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ９３６４８７－６７－１）を含むが、これらに限定されない。

例示的なホスホイノシチド３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤は、デュベリシブ、イデラリシブ、４－［２－（１Ｈ－インダゾール－４－イル）－６－［［４－（メチルスルホニル）ピペラジン－１－イル］メチル］チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル］モルホリン（ＧＤＣ０９４１としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０９／０３６０８２号およびＷＯ０９／０５５７３０号において説明されている）；２－メチル－２－［４－［３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロイミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－１－イル］フェニル］プロピオニトリル（ＢＥＺ２３５またはＮＶＰ－ＢＥＺ２３５としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０６／１２２８０６号において説明されている）；４－（トリフルオロメチル）－５－（２，６－ジモルホリノピリミジン－４－イル）ピリジン－２－アミン（ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ－ＢＫＭ１２０としても公知であり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２００７／０８４７８６号において説明されている）；トザセルチブ（Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）（ＶＸ６８０またはＭＫ－０４５７、ＣＡＳ６３９０８９－５４－６）；（５Ｚ）－５－［［４－（４－ピリジニル）－６－キノリニル］メチレン］－２，４－チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ９５８８５２－０１－２）；（１Ｅ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）－５－（アセチルオキシ）－１－［（ジ－２－プロペニルアミノ）メチレン］－４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ－オクタヒドロ－１１－ヒドロキシ－４－（メトキシメチル）－４ａ，６ａ－ジメチル－シクロペンタ［５，６］ナフト［１，２－ｃ］ピラン－２，７，１０（１Ｈ）－トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ５０２６３２－６６－８）；および８－フェニル－２－（モルホリン－４－イル）－クロメン－４－オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ１５４４４７－３６－６）を含むが、これらに限定されない。例示的なタンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ：ＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅＢ）またはＡＫＴ阻害剤には、８－［４－（１－アミノシクロブチル）フェニル］－９－フェニル－１，２，４－トリアゾロ［３，４－ｆ］［１，６］ナフチリジン－３（２Ｈ）－オン（ＭＫ－２２０６、ＣＡＳ１０３２３４９－９３－１）；ペリホシン（ＫＲＸ０４０１）；４－ドデシル－Ｎ－１，３，４－チアジアゾール－２－イル－ベンゼンスルホンアミド（ＰＨＴ－４２７、ＣＡＳ１１９１９５１－５７－１）；４－［２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）－１－エチル－７－［（３Ｓ）－３－ピペリジニルメトキシ］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－４－イル］－２－メチル－３－ブチン－２－オール（ＧＳＫ６９０６９３、ＣＡＳ９３７１７４－７６－０）；８－（１－ヒドロキシエチル）－２－メトキシ－３－［（４－メトキシフェニル）メトキシ］－６Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン－６－オン（パロミド５２９、Ｐ５２９またはＳＧ－００５２９）；トリシルビン（Ｔｒｉｃｉｒｂｉｎｅ）（６－アミノ－４－メチル－８－（β－Ｄ－リボフラノシル）－４Ｈ，８Ｈ－ピロロ［４，３，２－デ］ピリミド［４，５－ｃ］ピリダジン）；（αＳ）－α－［［［５－（３－メチル－１Ｈ－インダゾール－５－イル）－３－ピリジニル］オキシ］メチル］－ベンゼンエタンアミン（Ａ６７４５６３、ＣＡＳ５５２３２５－７３－２）；４－［（４－クロロフェニル）メチル］－１－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－４－ピペリジンアミン（ＣＣＴ１２８９３０、ＣＡＳ８８５４９９－６１－６）；４－（４－クロロフェニル）－４－［４－（１Ｈピラゾール－４－イル）フェニル］－ピペリジン（ＡＴ７８６７、ＣＡＳ８５７５３１－００－１）；およびアルケキシン（Ａｒｃｈｅｘｉｎ）（ＲＸ－０２０１、ＣＡＳ６６３２３２－２７－７）が含まれるが、これらに限定されない。

ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞と組み合わせて使用されるチロシンキナーゼ阻害剤は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ：ａｎａｐｌａｓｔｉｃｌｙｍｐｈｏｍａｋｉｎａｓｅ）阻害剤である。例示的なＡＬＫ阻害剤には、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ダランテルセプト（ｄａｌａｎｔｅｒｃｅｐｔ）、エントレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）およびロルラチニブが含まれる。

キメラＴｉｍ４受容体改変細胞が１つまたは複数の追加の療法と組み合わせて投与されるある特定の実施形態においては、１つまたは複数の追加の療法は、別の方法で単独療法として投与された場合に治療量未満であると考えられ得る用量において投与され得る。そのような実施形態においては、１つまたは複数の追加の療法がより低い用量において投与され得るように、キメラＴｉｍ４受容体組成物は、相加的または相乗的効果を提供し得る。組合せ療法は、追加の療法の前（例えば追加の療法の１日～３０日前またはそれよりも前）の、追加の療法と同時（同日）の、または追加の療法の後（例えば追加の療法の１日～３０日後またはそれよりも後）の本明細書において説明するキメラＴｉｍ４受容体組成物の投与を含む。ある特定の実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、１つまたは複数の追加の療法の投与後に投与される。さらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、１つまたは複数の追加の療法の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０日後に投与される。またさらなる実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、１つまたは複数の追加の療法の投与後４週間以内、３週間以内、２週間以内または１週間以内に投与される。１つまたは複数の追加の療法が多数の用量を含む場合、キメラＴｉｍ４受容体改変細胞は、１つまたは複数の追加の療法の初回用量後に、１つまたは複数の追加の療法の最終用量後に、または１つまたは複数の追加の療法の多数の用量間において投与され得る。

ある特定の実施形態においては、本開示の方法は、枯渇工程を含む。キメラＴｉｍ４受容体を対象から除去するための枯渇工程は、対象への毒性を軽減するために、治療利益に十分な時間後に行い得る。そのような実施形態においては、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、誘導性自殺遺伝子、例としてｉＣＡＳＰ９、誘導性ＦａｓまたはＨＳＶ－ＴＫを含み得る。同様に、キメラＴｉｍ４受容体ベクターは、関連付けられるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）、例えばＣＤ２０についてのリツキシマブまたはＥＧＦＲについてのセツキシマブの点滴を通して、形質導入された細胞の枯渇を促進する公知の細胞表面抗原、例としてＣＤ２０または切断型ＥＧＦＲ（配列番号３８）の発現のために設計され得る。また、成熟リンパ球の表面上に存在するＣＤ５２をターゲティングするアレムツズマブは、形質導入されたＢ細胞、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞を枯渇するために使用され得る。

本開示の組成物および方法によって治療され得る対象には、動物、例としてヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモットまたはブタが含まれる。対象は、男性であっても、女性であってもよく、幼児、若年、青年、成人および老年の対象を含む任意の好適な年齢であり得る。

［実施例１］
ＣＥＲ－Ｔ細胞はプライミングされたＰＴＤ－ＳＥＲ＋腫瘍細胞に対して細胞傷害効果を誘発する
ＴＬＲ含有キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞は、上昇したレベルの細胞膜ストレスシグナル、ホスファチジルセリン（Ｐｔｄ－Ｓｅｒ）を提示する細胞をターゲティングするように操作される。Ｐｔｄ－Ｓｅｒは、形質細胞膜の内側リーフレット上に通常見出されるリン脂質である。ある特定の下流シグナルの活性化（例えばカスパーゼ３／７活性化）に際して、Ｐｔｄ－Ｓｅｒは外側細胞膜へと外面化される。プロフェッショナル食細胞／抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＰｔｄ－Ｓｅｒ特異的受容体によるそのエンゲージメントは、多成分シグナル伝達複合体を誘発し、これは最終的にアクチン細胞骨格の再構成につながる。Ｔｉｍ－４（Ｔ細胞免疫グロブリンムチン－４）は、Ｐｔｄ－Ｓｅｒに特異的に結合する数種類の受容体のうちの１つである。常在および腹腔マクロファージにおけるその発現は、正常組織ホメオスタシス中にアポトーシス細胞のクリアランスに関係している。樹状細胞（ＤＣ）においては、Ｔｉｍ－４－Ｐｔｄ－Ｓｅｒ相互作用は、Ｔ細胞の交差プライミングのための抗原の捕捉および貪食を媒介する。

様々な腫瘍細胞株上でＰｔｄ－Ｓｅｒを効率よく誘導またはプライミングするために、数種類の戦略を開発した。このプライミング工程は、細胞ストレスおよび／またはアポトーシスを誘導するために、ケア治療剤の標準、例としてターゲティングされた小分子阻害剤を用いる。誘導されたら、Ｐｔｄ－Ｓｅｒは、キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞エンゲージメント、活性化および細胞溶解機能に対する標的として働く。この二工程「プライミング－死滅」戦略は、様々な小分子阻害剤－キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞生成物の組合せ、ならびに操作されたＣＡＲＴおよびＴＣＲ生成物との組合せを用いて示される。

卵巣腫瘍においては、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、例としてニラパリブは、ＤＮＡ損傷応答経路をターゲティングする、臨床的に承認された薬物である。奏効は稀にしか完全奏効でなく、かつ治療後の再発が一般的である。Ｐｔｄ－Ｓｅｒ曝露を誘導するために、ＢＲＣＡ－２変異Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ細胞株を、治療用量のＰＡＲＰ阻害剤ニラパリブを用いて処理した。ニラパリブへの簡潔な曝露は、用量依存的様式で膜リン脂質対称性における変化を誘発し、Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ細胞の増殖の阻害において有効である（図７Ａ）。低いエフェクター：標的比（１：１）におけるキメラＴｉｍ４受容体ｐＣＴＸ１３３（Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ｚシグナル伝達ドメイン）の添加は、形質導入対照と比較して、インビトロでニラパリブの効力を向上させ、このことは、標的細胞に対して直接的な細胞傷害効果を誘発するｐＣＴＸ１３３の能力を実証した（図７Ｂ）。

マントル細胞リンパ腫においては、ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤、例としてイブルチニブは、プロサバイバルキナーゼをターゲティングする、臨床的に承認された薬物である。奏効は稀にしか完全奏効でなく、かつ治療後の再発が一般的である。イブルチニブを用いるＪｅＫｏ－１ＭＣＬの処理は、組換えマウスＴｉｍ４タンパク質を用いる免疫組織化学により決定される場合に、Ｐｔｄ－Ｓｅｒを曝露する（図８Ａ）。ＪｅＫｏ－１マントル細胞リンパ腫細胞株を、２５μＭイブルチニブによって２４時間処理し、続いて、薬物を洗い流し、３：１、２：１または１：１のＥ：Ｔ比において、キメラＴｉｍ４受容体ｐＣＴＸ１３６（Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ｚシグナル伝達ドメイン）または対照細胞と共に、０．５μＭイブルチニブを用いて共培養した。キメラＴｉｍ４受容体細胞との共培養は、イブルチニブ処理または対照Ｔ細胞を用いる処理と比較して、ＪｅＫｏ－１標的細胞の除去を概ね誘導した（図８Ｂ）。

ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメインまたはＴＬＲ８細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインまたはＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを有するキメラＴｉｍ－４受容体を、腫瘍細胞獲得を促進し、かつ細胞傷害機能およびＡＰＣ様機能を誘発するそれらの能力について試験した。抗原獲得を評価するために、標的細胞を、キメラＴｉｍ－４受容体Ｔ細胞と共に共培養し、透過型電子顕微鏡観察（ＴＥＭ）またはフローサイトメトリーにより評価した。標的細胞を、Ｐｔｄ－Ｓｅｒ外面化を誘導するために小分子阻害剤を用いて処理し、かつｐＨ指示色素（ｐＨｒｏｄｏＲｅｄ）を用いてリソソーム取り込みについて評価した。

代替的なプライミング－死滅治療剤戦略は、ＴＬＲ含有キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞とキメラ抗原受容体－Ｔ（ＣＡＲ）－Ｔ細胞とを組み合わせる。この組合せアプローチは、腫瘍細胞を特異的にターゲティングするためにＣＡＲを利用し、これはＰｔｄ－Ｓｅｒのアップレギュレーションをもたらす。ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞生成物（抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ－－ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン；「１９２８ｚＣＡＲ」）は、用量依存的様式において、ＣＤ１９＋マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞上で迅速にＰｔｄ－Ｓｅｒを誘導する（図５Ａ）。共培養研究においては、ｉｎｃｕｃｙｔｅおよびＦＡＣＳにより測定される場合、１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞（ｐＣＴＸ１８４）とｐＣＴＸ１３１（Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８－ＣＤ３ｚ）との組合せは、高い効力を示した。１９２８ｚＣＡＲＴ細胞を、ｐＣＴＸ１３１（Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８－ＣＤ３ｚ）細胞を用いて、複数のＣＡＲ：ＣＥＲ比において、低いエフェクター：標的比で組み合わせた（図５Ｂ、図６Ａ）。ｐＣＴＸ１５６は、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）対照である。炎症性サイトカイン、例としてＩＦＮ－γの増加が、観察された細胞溶解機能の増大と並行して、上清から観察された（図５Ｃ）。加えて、共培養研究においては、ｉｎｃｕｃｙｔｅにより測定される場合、１９２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞とｐＣＴＸ１３１（Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８－ＣＤ３ｚ）との組合せは、標的細胞において切断型カスパーゼの向上した誘導を示した。１９２８ｚＣＡＲＴ細胞を、ｐＣＴＸ１３１（Ｔｉｍ４－ＴＬＲ８－ＣＤ３ｚ）細胞を用いて、複数のＣＡＲ：ＣＥＲ比において、低いエフェクター：標的比で組み合わせた（図６Ｂ）。

したがって、この実施例は、ｐＣＴＸ１３３およびｐＣＴＸ１３１（ＴＬＲ２およびＴＬＲ８）含有キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞が、細胞表面Ｐｔｄ－Ｓｅｒを発現するプライミングされた固形腫瘍および血液系標的細胞株に向かう細胞溶解活性を誘発し、かつ小分子およびＣＡＲベース治療剤アプローチを強化し得る。

［実施例２］
キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞は抗原捕捉および提示を媒介する
活性化されたＴ細胞は、クラスＩＩ分子を発現し、細胞表面上に抗原を提示し、かつ他のＴ細胞へと共刺激性シグナルを送達し得るので^１０、Ａｇプロセシングおよび提示が可能であることが示されている。しかしながら、プロフェッショナルＡＰＣとは異なり、Ｔ細胞は、可溶性抗原のそれらの非効率な捕捉により制限される^９。対照的に、ＡＰＣは、その後の分解およびＭＨＣロードのために抗原を捕捉および貪食するために、構成的に発現されたＡｇ取り込み受容体を利用する^１２１３。可溶性抗原の捕捉は、高親和性を有するＡｇに結合する表面受容体の存在下では、１０^３倍まで、より効率的であり得る^１４。

樹状細胞（ＤＣ）においては、Ｔｉｍ－４－Ｐｔｄ－Ｓｅｒ相互作用は、抗原の捕捉、貪食および濃縮を媒介し、ＤＣが高い効率を伴ってＴ細胞へと抗原を提示することを可能にする。実際には、前臨床的ＮＳＣＬＣモデルにおけるＴｉｍ－４受容体遮断は、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を傷害し、かつ腫瘍進行を促進する^１２。さらに、遺伝子発現プロファイリングは、進行腫瘍細胞におけるＴｉｍ－４発現のダウンレギュレーションを示し、低下した抗原取り込み、提示およびＴ細胞活性化と合致する。

本明細書において提示される実験結果は、Ｔ細胞が、それらの抗原取り込み、捕捉および共刺激能力を向上させることにより、免疫療法のための抗原提示Ｔ細胞として再方向付けされ得ることを示す。抗原取り込みならびに抗原プロセシングおよび提示を駆動する細胞内シグナル伝達配列へのヒトＴｉｍ４食作用取り込み受容体の融合は、向上されたＡＰＣ能力をＴ細胞に加える。キメラＴｉｍ４受容体のモジュール設計は、多成分シグナル伝達複合体、例としてＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＴＡＭおよびＴＬＲシグナル伝達を駆動して、細胞活性化、細胞溶解機能、サイトカインおよびケモカインの分泌、接着および共刺激性分子のアップレギュレーション、ならびに効率的なＴ細胞活性化を媒介するために必要とされる抗原分解プロセスを誘導する細胞内ドメインを組み込む^１５。

キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞を、可溶性抗原を捕捉および提示し、かつ共培養系において組換えＥ７制限Ｔ細胞クローンの活性化および増殖を誘発することができるか否かを決定するために試験した。最初に、Ｔｉｍ４の発現を、フローサイトメトリーによって、形質導入ＣＥＲＴ細胞上で確認した。Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８膜貫通－ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ｚシグナル伝達ドメイン（ＣＴＸ２４７、ＣＥＲ１１６１とも呼ばれる）およびＴｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ｚシグナル伝達ドメイン－ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（ＣＴＸ１１０７、ＣＥＲ１１０７またはＣＥＲ１２３６とも呼ばれる－配列番号１９）を、Ｔｉｍ４および各ベクター上にコードされる形質導入マーカーであるＥＧＦＲについて染色した。ＣＥＲ１１０７およびＣＥＲ１２３６は、同じアミノ酸配列を有するが、異なるベクター骨格を有する。Ｔｉｍ４発現は、ＣＴＸ２４７またはＣＴＸ１１０７形質導入細胞上で観察されたが、モック形質導入対照では観察されなかった（図４）。Ｅ７制限ＴＣＲは、ＨＰＶ１６由来Ｅ７タンパク質をターゲティングし、かつ配列番号２４１において提供されるＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖配列を有する。Ｅ７ＴＣＲは、ＭＨＣクラスＩを通して、Ｅ７ペプチドを用いてパルスされたＡＰＣに応答して増殖する。自家ＡＰＣに関して、異なるＴｉｍ－４キメラ受容体によって形質導入されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞生成物を、ＨＰＶ１６由来Ｅ７タンパク質に由来する１１ｍｅｒ重複部を含む１５ｍｅｒペプチドのプールまたは媒体を用いてパルスした。キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞を、Ｅ７ペプチドを用いて３７℃で４時間パルスし、Ｅ７特異的活性化および増殖を誘発するそれらの能力について試験した。Ｅ７－ＴＣＲ細胞表面活性化マーカー応答を、キメラＴｉｍ４受容体－Ｔ細胞生成物との共培養の２４時間後に、フローサイトメトリーにより評価した。さらなる５日間の共培養後、増殖応答を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（ＣＴ）Ｖｉｏｌｅｔ希釈物により評価した。

図１Ｂ～図１Ｄは、ｐＣＴＸ１１０７（Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン－ＴＬＲ２細胞内シグナル伝達ドメイン；配列番号１９）ＣＥＲＴ細胞が、Ｅ７特異的Ｔ細胞に対して実際に刺激性であったが、ｐＣＴＸ２４７（Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン－ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン）または未形質導入Ｔ細胞は、高濃度のＥ７ペプチドによってパルスした場合でさえ、刺激性でなかったことを示す。これらの実験においては、ｐＣＴＸ２４７とｐＣＴＸ１１０７との間のコンストラクト設計における唯一の差異は、ＴＬＲ－２細胞内配列の付加であり（図１Ａ）、このことは、可溶性抗原のＴ細胞提示の増幅、およびＥ７ＴＣＲの誘発におけるＴＬＲシグナル伝達を暗示した。ＣＥＲＴ細胞誘導型増殖はＨＬＡ依存的であり、ＣＥＲ媒介活性における抗原提示の役割を確認する。

ｐＣＴＸ１１０７がＥ７特異的活性化について強く刺激性である証拠はまた、フローサイトメトリーにより測定されるＣＤ２５およびＣＤ６９アップレギュレーションにおいても見られた（図２）。より高い頻度のＥ７－ＴＣＲ含有Ｔ細胞が、共培養の２４時間後に、両方の活性化マーカーを発現した（図２）。Ｅ７ＴＣＲ－Ｔ細胞表面活性化マーカーＣＤ２５およびＣＤ６９は、キメラＴｉｍ４受容体－Ｔとの共培養の２４時間後に、対照と比較して４１．２％および２３．１％アップレギュレートされ、６日間までの分裂Ｅ７－ＴＣＲ－Ｔ細胞のパーセンテージは、ＴＩＭ４／ＣＤ２８／ＣＤ３ｚ／ＴＬＲ２キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞に関して４４％であり、対照に関して８％であった。

ＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ標識Ｅ７特異的ＴＣＲＴ細胞を、ＨＰＶ１６Ｅ７タンパク質由来の１１ａａ重複部を含む１５ｍｅｒペプチドのプール（１００ｎｇ各ペプチド）の存在下で、１：２：２比において、未形質導入Ｔ細胞（ＵＴ）、Ｔｉｍ４－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚコンストラクト（ＣＴＸ２４７）またはＴｉｍ４－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ－ＴＬＲ２コンストラクト（ＣＴＸ１１０７）によって形質導入したＴ細胞およびＪｅＫｏ－１細胞と共に、４日間培養した。二重反復培養物を、培養の持続期間にわたって、ＨＬＡＡ、Ｂ、Ｃ遮断抗体（クローンＷ６／３２）またはマッチしたマウスＩｇＧ２ａ抗体と共にインキュベートした。図１０は、マウスＴＣＲｂ＋細胞の染色に基づくフローサイトメトリーによって決定される場合、生存細胞のうちの培養中のＥ７ＴＣＲ細胞のパーセントを示す。キメラＴｉｍ４受容体抗原提示により媒介されるＥ７特異的ＴＣＲＴ細胞の活性化は、抗ＨＬＡ－Ｉ抗体により遮断される。

［実施例３］
キメラＴｉｍ４受容体を用いるＴ細胞のトランスフェクション
キメラＴｉｍ４受容体ｐＣＴＸ１１８３、ｐＣＴＸ１１６１、ｐＣＴＸ１１８９、ｐＣＴＸ１１８４、ｐＣＴＸ１１６３、ｐＣＴＸ１１６２、ｐＣＴＸ１１９０、ｐＣＴＸ１１８６、ｐＣＴＸ１１８７、ｐＣＴＸ１１６４、ｐＣＴＸ１１８５、およびｐＣＴＸ１１６５（表８を参照のこと）を、ＪｕｒｋａｔＴリンパ球細胞株へとトランスフェクトした（図９Ａ～図９Ｂ）。

［実施例４］
キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞による向上された抗原捕捉、抗原提示細胞様機能、および細胞傷害応答
方法：
様々な膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに融合されたＴｉｍ４受容体を含有するキメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞（ＣＥＲＴ細胞とも呼ばれる）を、健康ドナーＴ細胞を用いて生成した（図１１）。ＣＥＲ１２３４は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する。ＣＥＲ１１０７（ＣＴＸ１１０７またはＣＥＲ１２３６とも本明細書において呼ばれる）は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有する。ＣＥＲ１１０７およびＣＥＲ１２３６は、同じアミノ酸配列を有するが、それらのレンチウイルス骨格によって異なる。ＣＥＲ２４７およびＣＥＲ１１６１（Ｔｉｍ４結合ドメイン－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２８ｉｃｄ－ＣＤ３ｚＩＣＤ、配列番号２１）は、同じアミノ酸配列を有するが、それらのレンチウイルス骨格およびプロモーター系によって異なる。

ＣＥＲＴ細胞生成物を、形質導入後６日目に、Ｔｉｍ－４、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７の発現、およびＣＤ４／ＣＤ８比に関して特性決定し、全てを市販の蛍光色素コンジュゲート化抗体を用いるフローサイトメトリー（ＦＣ）により測定した。

イブルチニブによって処理したＲＥＣ－１およびＪｅＫｏ－１マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞株の表面ホスファチジルセリン発現の誘導を、ヒスチジンタグ付け組換えマウスＴｉｍ４を用いるＦＣによって測定し；二次検出を、抗ヒスチジン抗体を用いて行った。

食作用をＣＥＲＴ細胞とのＲＥＣ－１細胞の共培養アッセイにおいて評価した。ＲＥＣ－１細胞を、１０μＭイブルチニブによって２４時間にわたって前処理し、ｐＨｒｏｄｏｒｅｄによって標識し、０．１～１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で未形質導入Ｔ細胞またはＣＥＲＴ細胞と共に培養した。ｐＨｒｏｄｏｒｅｄ陽性細胞のパーセンテージを、共培養の１６時間または４０時間後にフローサイトメトリーにより決定した。ＣＥＲＴ細胞リソソーム区画における腫瘍断片の局在化を、ｐＨｒｏｄｏｇｒｅｅｎによって標識したＲＥＣ－１細胞を用いる別々の実験において評価し；共培養後、全ての細胞を、Ｌｙｓｏ－ｔｒａｃｋｅｒｒｅｄによって標識した。貪食の可視化を、蛍光顕微鏡により行った。ダネット事後検定による一元配置分散分析を、未形質導入Ｔ細胞と比較して行った。

ＣＥＲＴ細胞の細胞傷害機能を、ＲＥＣ－１細胞との共培養アッセイにおいて、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）生存細胞分析系を用いて評価した。ｍＣｈｅｒｒｙを構成的に発現するように操作されたＲＥＣ－１細胞（ＲＥＣ－１ｍＣｈｅｒｒｙ）を、１０μＭイブルチニブまたは媒体（２０％２－ＯＨ β－シクロデキストリン）によって２４時間にわたって前処理した。イブルチニブを洗い流し、その後、ＣＥＲＴ細胞と共に共培養した。ＣＥＲＴ細胞（形質導入後６日間拡大増殖）を、０．５μＭイブルチニブまたは媒体の存在下で、１：１のＥ：Ｔ比でイブルチニブ前処理ＲＥＣ－１細胞と共に共培養した。ＲＥＣ－１ｍＣｈｅｒｒｙ細胞の総蛍光は、細胞傷害性が生じると減少した。

Ｔ細胞活性化マーカーであるプログラム細胞死－１（ＰＤ－１）および４－１ＢＢを、市販の蛍光色素コンジュゲート化抗体を用いるフローサイトメトリーにより、生存ＣＤ３＋Ｔ細胞に対して評価した。ＲＥＣ－１ｍＣｈｅｒｒｙ細胞を、１０μＭイブルチニブまたは媒体によって２４時間にわたって前処理し；洗浄後、０．５μＭイブルチニブまたは媒体を用いて共培養を開始した。ＲＥＣ－１細胞とのＣＥＲＴ細胞の共培養の開始９６時間後に、アッセイを行った。

サイトカイン誘導を、上記に説明する細胞傷害性アッセイにおいて、９６時間後に回収した馴化上清を用いるマルチパラメトリックＥＬＩＳＡによって評価した。

ＣＥＲＴ細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ）様機能を、以下の通りに評価した（図１Ａ）。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）標識Ｅ７Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞を、ＨＰＶ１６Ｅ７タンパク質由来の１１アミノ酸重複部を含む１５ｍｅｒペプチドのプール（１００ｎｇ各ペプチド）の存在下で、１：２：２比において、未形質導入Ｔ細胞またはＣＥＲＴ細胞およびＪｅＫｏ－１細胞と共に、６日間培養した。主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗原提示の役割を実証するために、上記に説明する通りの培養物を、分析前の４日間にわたって、マウス抗ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）遮断抗体（クローンＷ６／３２）またはマッチしたマウスＩｇＧ２ａ抗体と共にインキュベートした。

結果：
ＣＥＲを、Ｔ細胞により発現させた（表４）。高比率のＣＥＲＴ細胞が、操作されたＴｉｍ４受容体を発現する。ＣＥＲＴ細胞の形質導入および拡大増殖後のＣＤ４／ＣＤ８比は、未形質導入Ｔ細胞と同様であった。ＣＥＲＴ細胞は、ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡにより測定する場合に、主にセントラルメモリーおよびエフェクターメモリーである表現型を示す。

イブルチニブはＲＥＣ－１およびＪＥＫＯ－１細胞においてホスファチジルセリン曝露を誘導する
イブルチニブ（０．０５～５０μＭ、２４～４８時間）は、フローサイトメトリーにより測定されるＰＳ曝露を誘導した（図１２Ａ～図１２Ｂ）。ＲＥＣ－１細胞は、イブルチニブ誘導型ホスファチジルセリン曝露に対してＪｅＫｏ－１細胞よりも感受性であった。

ＣＥＲ１１６１およびＣＥＲ１２３４Ｔ細胞は食作用機能を示す
ＣＥＲ－１１６１およびＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞は、フローサイトメトリーおよび蛍光顕微鏡により測定される場合に、１６時間および４０時間の共培養後に、未形質導入Ｔ細胞と比較してｐＨｒｏｄｏｒｅｄ＋標的細胞の貪食を増大させた（図１３Ａ～図１３Ｄ）。細胞内シグナル伝達ドメイン（すなわち、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＴＬＲ２）を含有するＣＥＲコンストラクトは、細胞溶解機能を向上させ、向上した食作用をもたらし得る。

ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞はイブルチニブによる細胞傷害活性を示す
腫瘍細胞死滅は、ＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞とイブルチニブの組合せによって向上された（前処理、共培養中、またはその両方；図１４Ａおよび図１４Ｂ）。０．５μＭイブルチニブを含む共培養は、標準的投薬（５６０ｍｇ、１日１回）後の濃度（Ｃｍａｘ）を反映し、かつイブルチニブによる前処理単独または前処理と共培養の両方と同様の細胞傷害作用を有した。ＣＥＲ－１１８３Ｔ細胞（細胞内シグナル伝達ドメインなし）は、イブルチニブによる相加作用を示さない。ＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞単独では、制限された細胞傷害活性を示した。

ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞はイブルチニブ処理ＲＥＣ－１細胞と共培養される場合にＴ細胞活性化の細胞表面マーカーを発現する
０．５μＭイブルチニブの存在下でのＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞と標的ＲＥＣ－１細胞との共培養は、Ｔ細胞表面上でのＰＤ－１および４－１ＢＢ発現を増大させた（図１５ＡおよびＢ）。ＰＤ－１および４－１ＢＢは、細胞内シグナル伝達ドメインを欠くＣＥＲ－１１８３Ｔ細胞を含有する共培養においては増大しなかった。

サイトカイン発現はＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とイブルチニブ処理ＲＥＣ１細胞との共培養において誘導された
以下のカテゴリーのサイトカインが、０．５μＭイブルチニブの存在下でＣＥＲ－１２３４Ｔ細胞と標的ＲＥＣ－１細胞との共培養において誘導された（図１６Ａ～図１６Ｈ）：Ｔ１－腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、およびインターロイキン（ＩＬ）－１０；Ｔ２－ＩＬ－５；エフェクター－グランザイムＢ。サイトカイン発現は、Ｔｉｍ４を含有するが細胞内シグナル伝達ドメインを欠くＣＥＲ－１１８３Ｔ細胞を含有する共培養において誘導されなかった。ＩＬ－２（恒常性）、ＩＬ－４（Ｔ２）、およびＩＬ－６（炎症性）は、名目上増大した。ＩＬ－１２ｐ７０（ＡＰＣ）、ＩＬ－１７Ａ（炎症性）、およびＩＬ－１β（炎症性）は、全ての共培養条件に関して検出限界であった。

［実施例５］
キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞療法はホスファチジルセリン依存的細胞傷害性および抗原提示細胞様機能を誘発し、かつ血液系腫瘍に対する承認されたＢＴＫ阻害剤との相乗作用を示す
腫瘍微小環境は、部分的には抗原提示の機能不全に起因して、免疫応答を大きく抑制する。活性化された従来型αβＴ細胞は、名目上は抗原をプロセシングおよび提示することができるが、不十分な抗原捕捉に起因して、抗原提示能力は限られている。キメラＴｉｍ４受容体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）様機能を促進し、かつ標的依存的細胞傷害応答を与える。腫瘍抗原取り込みを駆動し、かつＡＰＣ様機能を向上させるために、樹状細胞のサブセットにおける交差提示において中心的な役割を果たすホスファチジルセリン（ＰＳ）受容体Ｔｉｍ４を、生得的シグナル伝達ドメインと融合させた。ｔｏｌｌ／インターロイキン－１（ＴＩＲ）ドメインならびにＴ細胞由来シグナル伝達ドメインＣＤ２８およびＣＤ３ζと融合させたＴｉｍ４結合ドメインにより操作されたキメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞を用いて、ＡＰＣ様応答および細胞傷害応答を、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞株に対して試験した。

標的依存的食作用および細胞傷害性を向上させるために、キメラＴｉｍ４受容体コンストラクトを設計した。構成的ホスファチジルセリン曝露を有する操作されたＴＭＥＭ３０ａリン脂質フリッパーゼノックアウトＪｅＫｏ－１リンパ腫細胞株（ＪｅＫｏ－１ＰＳ^＋）を用いて、腫瘍断片取り込み、細胞傷害性、サイトカイン分泌（ＧｒＢ、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦ－α）、およびＡＰＣ様活性を、インビトロで評価した。腫瘍細胞の取り込みを定量化するために、ＪｅＫｏ－１ＰＳ^＋細胞を、ｐＨ感受性ｐＨｒｏｄｏ（商標）色素によって標識した。キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞を、ＪｅＫｏＰＳ^＋細胞およびＨＰＶ由来ペプチドとのキメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞共培養後の自家ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞活性化および増殖を評価することにより、抗原提示能力に関して試験した。最後に、キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞抗腫瘍活性を、異種移植されたＭＣＬモデルにおいて調べた。統計解析を、二元配置分散分析を用いて行った。

ＣＥＲ－１２３４（配列番号１８）およびＣＥＲ－１２３６（配列番号１９）発現Ｔ細胞を、細胞表面上にＴｉｍ４を直ちに発現し、かつＴ細胞由来シグナル伝達ドメインＣＤ２８およびＣＤ３ζに対するＴＬＲ２ＴＩＲシグナル伝達ドメインの方向において異なるように操作した。ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の両方が、インビトロにおいて共培養に際してＪｅＫｏ－１ＰＳ^＋腫瘍細胞断片の増大した取り込みを示した（ｐ＜０．００１）。ｐＨｒｏｄｏ^＋ＪｅＫｏ－１断片の内部移行は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）結合に依存し、かつアクチン重合の阻害剤であるサイトカラシンＤ、またはリソソーム阻害剤であるバフィロマイシンＡによる処理は、腫瘍細胞断片取り込みを遮断した（ｐ＜０．０００１およびｐ＜０．０００１）。ＢＴＫ阻害剤（ＢＴＫｉ）によってプライミングされたＲＥＣ－１細胞において、ＣＥＲ－１２３４内部移行断片は、リソソーム区画に局在化した。

ＪｅＫｏ－１ＰＳ^＋細胞とのインビトロ共培養に際して、両方のＣＥＲＴ細胞コンストラクトが細胞傷害機能を示し、ＣＥＲ－１２３４は低いエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比において９６時間で標的のうちの９０％を除去し、ＣＥＲ－１２３４と組み合わせたＢＴＫｉ処理は、９０％超の細胞傷害性を示し、Ｔｈ１サイトカイン（ＧｒＢ、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦ－α）の産生を伴った。最後に、ＣＥＲＴ細胞を、インビトロにおいてＡＰＣ様活性に関して評価した。ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞は、対照と比較して７２時間で増殖の有意な増大を示し（ｐ＜０．０５）、このことは、Ｔｉｍ４ＣＥＲＴ細胞が抗原特異的Ｔ細胞のプロセシング、提示、および増殖を誘発できることを示した。インビボにおいて、ＣＥＲＴ細胞は、観察された明白な病的状態を伴わずに、ＭＣＬの異種移植片モデルにおいて、対照と比較して腫瘍量を低減させた。

ＣＥＲ１２３４および／またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、抗原獲得、ＡＰＣ様機能、および細胞傷害応答を向上させることにより、腫瘍微小環境における抗原提示障害を克服する。これらのＣＥＲＴ細胞は、インビトロにおいてこれらの組み合わせた機能を示し、ＢＴＫ阻害との相乗作用を示し、かつマントル細胞リンパ腫の臨床関連モデルと比較して顕著な抗腫瘍効果をインビボにおいて媒介する。

単一Ｔ細胞において誘導性かつ標的特異的細胞傷害機能と組み合わせたＴ細胞抗原捕捉および提示能力は、内因性抗腫瘍免疫の活性化および向上を介する二次的免疫応答に関する可能性を示唆する。

方法
様々な膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに融合されたＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－４（ＴＩＭ－４）受容体を含有するＣＥＲＴ細胞を、健康ドナーＴ細胞を用いて生成した（以下の表５を参照のこと）。

ＣＥＲＴ細胞活性化を、プレートおよび細胞に基づくアッセイによってＩＦＮ－ガンマの誘導を測定することにより評価した。単回誘導プレートアッセイ：ホスファチジルセリン（ＰＳ）またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の濃度を変更して、野生型ＴＩＭ－４（ｗｔＴＩＭ－４）により認識されない対照膜リン脂質を、高結合性組織培養プレート上にコーティングした。ＣＥＲＴ細胞を添加し、ＩＦＮ－γレベルを、ＥＬＩＳＡによってリガンド曝露の２４時間後に測定した。ＥＣ５０濃度を、非線形回帰により決定した［アゴニスト対応答－可変勾配（４パラメータ）］。反復刺激による誘導のプレートアッセイ：ＣＥＲＴ細胞をホスファチジルセリンコーティングプレートに添加した（２．５～２０μｇ／ｍＬＰＳコーティング）。５日後、ＣＥＲＴ細胞を、新鮮Ｔ細胞ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ培地と共に、２４時間にわたって未コーティングプレートへと移した。続いて、ＣＥＲＴ細胞を、新たなＰＳコーティングプレートへと再び移した。再刺激中の様々な時点（２４、７２、および１２０時間）で、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ－γ誘導を評価するために、上清を回収した。細胞ベースアッセイ：サイトカイン誘導を、以下に説明する細胞傷害性アッセイから１２０時間後に回収された馴化上清を用いるマルチパラメトリックＥＬＩＳＡにより評価した。

ＣＥＲＴ細胞の細胞傷害機能を、Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞［ＴＭＥＭ３０Ａ遺伝子（ホスファチジルセリン（ＰＳ）内部移行に必要とされるフリッパーゼシャペロン）のノックアウトによって操作された］またはＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞との共培養アッセイにおいて、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）生存細胞分析系を用いて評価した。ｍＣｈｅｒｒｙを構成的に発現するように操作されたＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞を、１００ｎＭイブルチニブによって、または薬物なしで、９６時間にわたって前処理した。ＩＬ－２、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５を含有するＴ細胞ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ培地中のＣＥＲＴ細胞（形質導入後に６日間拡大増殖させた）を、同じ濃度のイブルチニブの存在下で、０．２５：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比においてＡ２７８０細胞と共に共培養した。

ＴＩＭ－４、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＣＲ７の発現ならびにＣＤ４／ＣＤ８比を、市販の蛍光色素コンジュゲート化抗体を用いるフローサイトメトリーにより評価した。共培養の終了時に生存Ｔ細胞の絶対的カウントを決定するために、ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｃｏｕｎｔビーズを用いるフローサイトメトリーにより、増殖を測定した。Ｔ細胞増殖は、０時間と比較して１２０時間でのＴ細胞カウントの拡大増殖倍率として報告される。

ＣＥＲＴ細胞の抗原提示細胞（ＡＰＣ）様機能を、ホスファチジルセリン陽性Ｅ７がんタンパク質陽性細胞との４８時間の共培養後に評価した。Ｔ細胞を分離し、ｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識Ｅ７ＴＣＲＴ細胞と共に４日間共培養した。Ｅ７ＴＣＲＴ細胞上の活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲを、フローサイトメトリーを用いて分析した。ホスファチジルセリン陽性ＳＣＣ１５２扁平上皮癌細胞を、ＴＭＥＭ３０Ａ遺伝子（ＰＳ内部移行に必要とされるフリッパーゼシャペロン）のノックアウトにより操作した。ＡＰＣ様機能におけるＨＬＡ－Ｉの役割を、ＨＬＡ－Ｉ遮断抗体または対応するアイソタイプ抗体の存在下で同じ実験を行うことにより決定した。

結果：
表５に記載のＣＥＲ（ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６）を構築し、Ｔ細胞において発現させた。ＣＥＲＴ細胞は、形質導入６日後に形質導入Ｔ細胞上でＴＩＭ－４を直ちに発現する（図１７Ａ）。ＣＥＲＴ細胞の形質導入および拡大増殖後のＣＤ４：ＣＤ８比は、未形質導入Ｔ細胞と同様であった。ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡ発現により測定される場合に、主にナイーブおよびセントラルメモリーである表現型を示した（図１８）。

ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）に対する結合に応答して、用量依存的様式でＩＦＮ－γを特異的に産生するが、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）に対する結合に応答しては産生しない（図１９Ａ～図１９Ｂ）。細胞内Ｔ細胞シグナル伝達部分を欠くｗｔＴＩＭ－４は、ホスファチジルセリン刺激に際してＩＦＮ－γを誘導しなかった。ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞は、ホスファチジルセリンへの曝露の３回の連続ラウンドに際して、反復するＩＦＮ－γ応答を誘発した（図１９Ｃ）。アッセイ設計を、図４３に示す。インビトロにおいて追加の抗原曝露に際して再活性化されるＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞の能力は、インビボでの持続的作用を示唆する。

ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞によるｐＨｒｏｄｏ色素標識腫瘍細胞（Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞）食作用およびエンドサイトーシスのＦＡＣＳおよびイメージングベースの検出を、図２０に示す。

ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、Ｊｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞の増大した貪食を示した（図２１）。貪食は、ｗｔＴＩＭ－４Ｔ細胞と比較してＣＥＲ１２３６Ｔ細胞に関して向上される。貪食は、ＴＩＭ－４ホスファチジルセリン結合ドメイン（ＣＥＲ１２５０）の変異またはアクチン重合阻害剤によって遮断される。ＣＥＲ－１２５０（Ｔｉｍ－４結合性突然変異体／ＣＤ２８／ＴＬＲ２／ＣＤ３ｚ；配列番号２４）は、ＣＥＲ１２３６と同じ細胞内シグナル伝達ドメインを有するが、ホスファチジルセリン結合性を破棄するためにＡＡＡＡ置換によって変異したＩｇＶドメインを有する。取り込み（食作用指数）のより高い頻度および大きさが、ｗｔＴｉｍ－４、ＣＥＲ１２５０およびＣＥＲ１２３６＋アクチン重合阻害剤と比較して、ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞により観察された。

ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、共培養アッセイにおいてＪｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞を効率よく除去する（図２２）。

ＣＥＲ１２３６Ｔは、ＲＥＣ－１マントル細胞リンパ腫細胞の死滅を向上させるために、イブルチニブとの相乗作用を示す。ＢＴＫ経路阻害は、細胞ストレスおよび膜ホスファチジルセリン曝露を誘発する。プライミングされたら、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、腫瘍細胞を除去する（図２３）。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、イブルチニブ処理されたＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞に対しては、向上され、かつより完全な細胞傷害作用を有するが、未処理ＲＥＣ－１ＭＣＬ細胞に対しては有しない（図３８）。未処理ＲＥＣ－１細胞に対する幾分かのＣＥＲ１２３６Ｔ細胞傷害性が観察され、この細胞株に対して測定される構成的なホスファチジルセリン曝露と合致する。ＣＥＲ１２５１（Ｔｉｍ－４結合性突然変異体／ＣＤ２８／ＣＤ３ｚ／ＴＬＲ２；配列番号２５）は、ＣＥＲ１２３６と同じ細胞内シグナル伝達ドメインおよび方向を有するが、ホスファチジルセリン結合性を破棄するためにＡＡＡＡ置換によって変異したＩｇＶドメインを有する。

細胞傷害性相乗作用と並行して、ＣＥＲ１２３４細胞またはＣＥＲ１２３６細胞＋イブルチニブによるＢＴＫ阻害は、誘導性サイトカイン産生を示す（図２４および図３７）。

ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、インビトロ系において抗原提示細胞様機能を示す。Ｅ７ＨＬＡ２制限ＴＣＲ系において、ＣＥＲ１２３６－Ｔ細胞は、自家Ｅ７ＴＣＲＴ細胞のより大きな活性化を支持し、このことは、未形質導入Ｔ細胞または抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞と比較した場合、ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞により向上したＥ７抗原提示を示した（図２５Ａ）。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞誘導型Ｅ７ＴＣＲ活性化は、ＨＬＡクラスＩ系を介する抗原提示に依存する（図２５Ｂ）。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は抗原を獲得することができ、この機能は、ナイーブＴ細胞に対して抗原をプロセシングおよび提示するそれらの能力における障壁であると考えられた。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の操作された抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能は、インビボにおいて二次免疫応答の開始をもたらし得る。

ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、マントル細胞リンパ腫マウスモデルにおけるＪｅｋｏ１ＴＭＥＭ３０Ａ^－／－細胞皮下腫瘍生着に対する抗腫瘍効果を示した（図２６）。

［実施例６］
ＰＡＲＰ阻害剤および標的卵巣がん細胞と共に共培養されたキメラＴｉｍ４受容体形質導入Ｔ細胞に対するＴ細胞表現型決定
本明細書において説明するアッセイに関して、Ａ２７８０（ヒト卵巣がん細胞株）細胞をプレートし、接着させ、－２日目に２５％の細胞を死滅させた有効濃度（ＥＣ２５）でのＰＡＲＰ阻害剤（ＰＡＲＰｉ）、０．５μＭでのニラパリブまたは１．５μＭでのオラパリブによって（ｗｏｔｊ）処理した。０日目に、培地を交換し、ＣＥＲ－１２３４、ＣＥＲ－１２３６、または対照ＣＥＲ－１１８３（図２７Ａ）によって形質導入された３名の対象由来のドナーＴ細胞（図２８）を、様々なエフェクター：標的比で、ＰＡＲＰｉによって処理されたＡ２７８０細胞に添加し、キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞活性化、サイトカイン産生、増殖、および細胞傷害応答を評価した。キメラＴｉｍ４受容体Ｔ細胞免疫表現型決定およびバルク上清分析を、共培養の開始後２日目および５日目に行った。

Ｔｉｍ４＋Ｔ細胞において％ＣＣＲ７＋細胞を測定することにより、１２０時間の共培養後にＣＣＲ７発現を測定した（図２９Ａ～図２９Ｃ）。オラパリブ処理Ａ２７８０細胞と共に共培養されたＣＥＲ－１２３４およびＣＥＲ－１２３６を発現するＴ細胞に対して、より高いＣＣＲ７発現が観察された。ＣＣＲ７は、ナイーブおよびセントラルメモリーＴ細胞上で高レベルで発現されて、恒常性（ｈｏｍｅｓｔａｓｉｓ）Ｔ細胞サブセットが再循環し、リンパ器官、例として脾臓およびリンパ節の白髄領域中のＴ細胞領域へとホーミングすることを可能にする。ＣＣＲ７発現Ｔ細胞は、早期分化状態のＴ細胞の集団を反映し得る。

ＰＡＲＰｉによって処理されたＡ２８０細胞との１２０時間の共培養後に、ＣＤ４／ＣＤ８比を測定した（図３０Ａ～図３０Ｃ）。ＣＥＲ－１２３６形質導入Ｔ細胞は、ドナー３８およびドナー４１試料の両方において、ＣＥＲ－１２３４または対照ＣＥＲ－１１８３によって形質導入されたＴ細胞と比較して、高いＣＤ４／ＣＤ８比を有した。

［実施例７］
Ｔｉｍ４キメラ受容体Ｔ細胞はホスファチジルセリン依存的細胞傷害性および生得的様機能を誘発し、かつ卵巣がんモデルにおいて承認されたＰＡＲＰ阻害剤との相乗作用を示す
ＣＥＲＴ細胞を、ＰＡＲＰ感受性卵巣がんモデルにおいて、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）酵素の承認された小分子阻害剤と組み合わせて評価した。

小分子ＰＡＲＰ阻害剤ニラパリブまたはオラパリブによる処理に際するＡ２７８０卵巣がん細胞上でのホスファチジルセリン曝露を、アネキシンｖ染色により評価し、適切な薬物用量を決定した。細胞傷害性および標的依存的腫瘍細胞断片取り込みを向上させるために設計されたホスファチジルセリンターゲティングＴｉｍ－４ＣＥＲコンストラクトを操作した。ＣＥＲＴ細胞設計は、以下の通りであった：ＣＥＲ－１２３４（Ｔｉｍ－４／ＣＤ２８／ＴＬＲ２／ＣＤ３ｚ；配列番号１８）；ＣＥＲ－１２３６（Ｔｉｍ－４／ＣＤ２８／ＣＤ３ｚ／ＴＬＲ２；配列番号１９）；およびＣＥＲ－１２５０（Ｔｉｍ－４結合性突然変異体／ＣＤ２８／ＴＬＲ２／ＣＤ３ｚ；配列番号２４）。ＣＥＲ－１２５０は、ＣＥＲ１２３６と同じ細胞内シグナル伝達ドメインを有するが、ホスファチジルセリン結合性を破棄するためにＡＡＡＡ置換によって変異したＩｇＶドメインを有する。ニラパリブ（０．５μＭ）およびオラパリブ（１．５μＭ）を用いて、ＣＥＲＴ細胞認識および細胞傷害性のためのＡ２７８０細胞の表面上にホスファチジルセリンを曝露させ、Ｔ細胞活性化、およびサイトカイン応答を評価した。ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞による抗原の取り込みを、ヒトパピローマウイルスＥ７抗原発現性扁平上皮癌（ＳＣＣ１５２）ＴＭＥＭ３０Ａリン脂質フリッパーゼノックアウト細胞を用いてモデル化した。これらの細胞は、外表面ホスファチジルセリンを構成的に曝露した。ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞によるＥ７抗原提示を、自家ＨＬＡ－Ａ２制限Ｅ７ＴＣＲＴ細胞上でのＴ細胞活性化のマーカーであるＨＬＡ－ＤＲの表面発現によりアッセイした。

ＰＡＲＰ阻害剤は、９６時間の処置後の生存Ａ２７８０細胞において治療用量未満で、外側細胞表面上でのホスファチジルセリン曝露を誘導した。未処理細胞と比較して、ニラパリブの添加後にＡ２７８０細胞のうちの２３％が除去され、オラパリブ添加後に３４％が除去された。ＣＥＲ－１２３４またはＣＥＲ－１２３６は、それぞれ、３９％または１９％までＡ２７８０細胞を除去した。ニラパリブはＣＥＲ－１２３４またはＣＥＲ－１２３６との相乗作用を示し、５日間の共培養後に５８％または８１％までＡ２７８０細胞を除去したが、オラパリブはＣＥＲ－１２３４によって標的のうちの６６％またはＣＥＲ－１２３６によって７３％を除去した。薬物なしでのＣＥＲ－１２３４と比較して、９６時間でＣＥＲ－１２３４と組み合わせたいずれかの薬物に関して、インターフェロン－γは７倍増大し、グランザイムＢは５～７倍増大した。ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞単独と比較して、ＴＭＥＭ３０Ａ^－ＳＣＣ１５２がん細胞に曝露されたＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞は、Ｅ７ＴＣＲＴ細胞の活性化状態を５倍増大させ、このことは、ＨＬＡ－Ａ２同族ペプチドの部分的貪食、抗原プロセシングおよび提示を示した。

ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、適応的および生得的機能性を示す。ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、治療用量未満のＰＡＲＰ阻害剤によって処理されたＡ２７８０卵巣がん細胞に対する細胞溶解活性を示した。ＣＥＲ１２３６は、ＨＰＶＥ７モデルにおいて示された向上したＡＰＣ様機能性を示した。ＣＥＲＴ細胞生成物の組み合わせた機能性は、承認されたＰＡＲＰ阻害剤を投与されている卵巣がんを有する患者に対する治療オプションとして、有望な臨床応用を提供する。

方法
ＰＡＲＰ阻害剤オラパリブおよびニラパリブによって処理されたＡ２７８０卵巣細胞上での表面ホスファチジルセリン発現の誘導を、アネキシンＶを用いるフローサイトメトリー（ＦＣ）によって測定した。

様々な膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに融合されたＴ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－４（ＴＩＭ－４）受容体を含有するＣＥＲＴ細胞を、健康ドナーＴ細胞を用いて生成した（表５を参照のこと）。

ＣＥＲＴ細胞の細胞傷害機能を、Ａ２７８０細胞との共培養アッセイにおいて、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）生存細胞分析系を用いて評価した。ｍＣｈｅｒｒｙを構成的に発現するように操作されたＡ２７８０細胞を、１．５μＭオラパリブ、０．５μＭニラパリブによって、または薬物なしで、９６時間にわたって前処理した。ＩＬ－２、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５を含有するＴ細胞ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ培地中のＣＥＲＴ細胞（形質導入後に６日間拡大増殖させた）を、同じ濃度のオラパリブまたはニラパリブの存在下で、１：２のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比においてＡ２７８０細胞と共に共培養した。

結果
治療用量未満のニラパリブおよびオラパリブは、生存Ａ２７８０細胞上でのホスファチジルセリン曝露を誘導する（図３１Ａ～図３１Ｂ）。これらの曲線に基づいて、点線により示される通りのＣＥＲＴ細胞との組合せ療法のために、オラパリブに関して１．５μＭの用量を選択し、ニラパリブに関して０．５μＭの用量を選択した。

ＣＥＲコンストラクトを、表５に記載の単鎖キメラタンパク質として設計した。ＣＥＲＴ細胞の表現型は、２名のドナー間で概ね一致した（図３２）。高比率のＣＥＲＴ細胞が、操作されたＴｉｍ４受容体を発現する。ＣＥＲＴ細胞の形質導入および拡大増殖後のＣＤ４：ＣＤ８比は、未形質導入Ｔ細胞と同様であった。ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＡ発現により測定する場合に、主にナイーブおよびセントラルメモリーである表現型を示した。

ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ホスファチジルセリンによる刺激に際して、濃度依存的なＩＦＮ－γ応答を生じた（図３３Ａ～図３３Ｂ）。ＣＥＲＴ細胞は、ホスファチジルセリンに対しては標的特異的サイトカイン誘導を示したが、ホスファチジルエタノールアミンに対しては示さなかった。ＣＥＲＴ細胞によるＩＦＮ－γ誘導の飽和は、５～１０μｇ／ｍＬのホスファチジルセリンで起こった。細胞内Ｔ細胞シグナル伝達部分を欠くｗｔＴＩＭ－４は、ホスファチジルセリン刺激に際してＩＦＮ－γを誘導しなかった。ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞は、ホスファチジルセリンへの曝露の３回の連続ラウンドに際して、反復するＩＦＮ－γ応答を誘発した（図３３Ｃ）。インビトロにおいて追加の抗原曝露に際して再活性化されるＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞の能力は、インビボでの持続的作用を示唆する。

ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、Ａ２７８０細胞に対する（ａｇｉｎｓｔ）ニラパリブおよびオラパリブとの相乗的細胞傷害活性を示した。腫瘍細胞死滅は、ＣＥＲ１２３６またはＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とニラパリブまたはオラパリブとの組合せにより向上した（図３４Ａ～図３４Ｂ）。ｗｔＴＩＭ－４Ｔ細胞（細胞内シグナル伝達ドメインなし）は、ニラパリブまたはオラパリブとの相加作用を示さない。ＣＥＲ１２３６およびＣＥＲ１２３４Ｔ細胞単独では、制限された細胞傷害活性を示した。ＣＥＲ１２３４およびＣＥＲ１２３６は、ｗｔＴＩＭ－４発現Ｔ細胞との共培養または薬物なしと比較して、ＰＡＲＰｉによって処理された共培養において増殖した（ｐｒｏｌｉｌｆｅｒａｔｅｄ）（図３４Ｃ）。共培養の０日間、０時間、および０分間に対して標準化（正規化）した。Ａ２７８０細胞はｍＣｈｅｒｒｙを発現する。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比は、図３４Ａおよび図３４Ｂに関して１：２である。Ｅ：Ｔ比は、図３４Ｃに関して１：１である。ニラパリブ＝０．５μＭ、オラパリブ＝１．５μＭ。

ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＰＡＲＰ阻害剤処理されたＡ２７８０卵巣がん細胞との共培養に応答して、活性化され、かつＩＦＮ－γを産生する。ＴＮＦ－α（図３５Ａ）、ＩＦＮ－γ（図３５Ｂ）、グランザイムＢ（図３５Ｃ）は、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞によって誘導されたが、未形質導入またはｗｔＴＩＭ－４Ｔ細胞によっては誘導されなかった。ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、およびグランザイムＢは、ＰＡＲＰ阻害剤の存在下で誘導されたが、媒体によっては誘導されなかった。エフェクター：標的比は、１：１である；ニラパリブ。ニラパリブ＝０．５μＭ、オラパリブ＝１．５μＭ。

ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、インビトロ系における抗原提示細胞様機能を示す。Ｅ７ＨＬＡ２制限ＴＣＲ系においては、ＣＥＲ１２３６－Ｔ細胞は、自家Ｅ７ＴＣＲＴ細胞のより大きな活性化を支持し、このことは、未形質導入Ｔ細胞または抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞と比較した場合、ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞により向上したＥ７抗原提示を示した（図３６Ａ）。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞誘導型Ｅ７ＴＣＲ活性化は、ＨＬＡクラスＩ系を介する抗原提示に依存する（図３６Ｂ）。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は抗原を獲得することができ、この機能は、ナイーブＴ細胞に対して抗原をプロセシングおよび提示するそれらの能力における障壁であると考えられた。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の操作された抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能は、インビボにおいて二次免疫応答の開始をもたらし得る。

［実施例８］
オシメルチニブと組み合わせたＣＥＲ１２３６Ｔ細胞のインビトロ研究
ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株に対して、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤オシメルチニブと組み合わせて試験した。１万個のＮＳＣＬＣＨ１９７５細胞を、１００ｎＭオシメルチニブまたは媒体（ＤＭＳＯ）と共に２４時間培養し、続いて、４．８８ｎＭオシメルチニブまたは媒体の存在下または非存在下において、０．２５：１のエフェクター：標的細胞比で２５００個のＣＥＲ１２３６Ｔ細胞と共に共培養した。腫瘍細胞増殖を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅアッセイにおいて１２０時間に関して示される通りにモニタリングした。図３９に示される通り、オシメルチニブとＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との組合せは、インビトロにおいてＨ１９７５ＮＳＣＬＣ細胞を阻害するために相乗作用を示す。

オシメルチニブまたは媒体によって前処理したＨ１９７５ＮＳＣＬＣ細胞と共に共培養したＣＥＲ１２３６Ｔ細胞において、サイトカイン産生も測定した。１万個のＮＳＣＬＣＨ１９７５細胞を、１００ｎＭオシメルチニブまたは媒体（ＤＭＳＯ）と共に２４時間培養し、続いて、４．８８ｎＭオシメルチニブまたは媒体の存在下または非存在下において、１：４のＥ：Ｔで９６時間にわたってＣＥＲＴ細胞と共培養した。エフェクター：標的比は１：４であり、Ｈ１９７５細胞は１０，０００細胞／ウェルでプレートした。サイトカイン産生を、Ｅｌｌａアッセイにより決定した。図４０に示される通り、増大したサイトカイン産生（グランザイムＢ、ＴＮＦα、ＩＬ－６およびＩＦＮγ）が、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞＋媒体およびオシメルチニブを伴うかまたは伴わない未形質導入Ｔ細胞と比較して、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞＋オシメルチニブで観察された。

オシメルチニブまたは媒体によって前処理したＨ１９７５ＮＳＣＬＣ細胞と共に共培養したＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の増殖もまた測定した。ＮＳＣＬＣＨ１９７５細胞を、１００ｎＭオシメルチニブまたはＤＭＳＯによって２４時間前処理し、続いて、１：４のエフェクター：標的比の未形質導入Ｔ細胞またはＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞の存在下で連続的な比較的低用量の４．８８ｎＭオシメルチニブ／ＤＭＳＯ処理を行った。総ＣＤ３＋Ｔ細胞拡大増殖倍率を、時間経過（４８時間、９６時間、１２０時間、および１４４時間）にわたる定量化ビーズを用いる定量的フローサイトメトリーにより決定した。実験は２回行い、１回は５，０００個の標的Ｈ１９７５細胞を用い、１回は１０，０００個の標的Ｈ１９７５細胞を用いた。図４１に示される通り、オシメルチニブは、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞＋媒体およびオシメルチニブを伴うかまたは伴わない未形質導入Ｔ細胞と比較して、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞増殖を駆動した。

図４２は、フローサイトメトリーにより測定される場合の、オシメルチニブまたは媒体によって前処理したＨ１９７５ＮＳＣＬＣ細胞（４：１エフェクター：標的比）と共に１２０時間共培養したＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を用いる実験における、ＣＤ３＋Ｔ細胞の拡大増殖およびＨ１９７５標的細胞の低減を示す。図４２、下側行に示される通り、オシメルチニブによって処理されたＨ１９７５細胞と共に共培養されたＣＥＲ１２３６Ｔ細胞を含む試料において、ＣＤ３＋Ｔ細胞増殖は最も高く、かつＨ１９７５細胞数は最も低かった。

［実施例９］
ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との比較
３名の異なるドナーから取得したＴ細胞を、ＣＥＲ１２３４またはＣＥＲ１２３６によって形質導入し、滴定用量のプレート結合型ホスファチジルセリン上でインキュベートした。図４４に示される通り、プレート結合型ホスファチジルセリンは、ＣＥＲ１２３６によって形質導入した全てのドナーＴ細胞においてＩＦＮγを誘導することができ、この誘導された応答は、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞よりもＣＥＲ１２３６Ｔ細胞においてより一貫しているように見える。図４５は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答して、ドナーによるＣＥＲ１２３４Ｔ細胞またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を示す。全てのドナー由来のＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、強力な活性化を示す。ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞は、ドナー３２および３８に対して比較的低い活性化を示したが、ドナー３１由来のＣＥＲ１２３４Ｔ細胞は合格しなかった。図４６は、融解後１４日目での漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ドナーによるＣＥＲ１２３４Ｔ細胞またはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生を示す。ここで再び、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞と比較して、全てのドナー間でより多くのＩＦＮγを産生する。

図４７は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞におけるＴ細胞拡大増殖（左側）、ＩＦＮγ産生（中央）、および細胞生存率（右側）を示す。プレート結合型ホスファチジルセリンによる２４時間のＩＦＮγ刺激は、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞に関して活性化後５日目での拡大増殖と一致する。図４８は、漸増用量のプレート結合型ホスファチジルセリンに応答した、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞におけるＴ細胞拡大増殖（左側）、ＩＦＮγ産生（中央）、および細胞生存率（右側）を示す。プレート結合型ホスファチジルセリンによる２４時間のＩＦＮγ刺激は、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞に関して活性化後５日目での拡大増殖と一致する。

未形質導入Ｔ細胞またはＣＥＲ１１８３、ＣＥＲ１１６１、ＣＥＲ１２３４もしくはＣＥＲ１２３６Ｔ細胞（コンストラクトの模式図に関して、図４９）の抗原提示細胞（ＡＰＣ）様機能を、４８時間にわたる単独での培養またはホスファチジルセリン陽性ＨＰＶＥ７がんタンパク質陽性細胞（ＴＭＥＭ３０Ａ－／－ＳＣＣ１５２）との共培養、およびそれに続くＴ細胞の陽性選択およびｃｅｌｌｔｒａｃｅｖｉｏｌｅｔ標識ＨＰＶＥ７ＴＣＲＴ細胞との４～６日間の期間にわたる共培養後に評価した。Ｅ７ＴＣＲＴ細胞上の活性化マーカーＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ２５を、反復実験においてフローサイトメトリーを用いて分析した（図５０～図５４）。

図５０において、ＨＬＡ－ＤＲＭＦＩにおける有意差が、未形質導入Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との間で観察された。ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との間では、有意差は観察されなかった。図５１において、ＨＬＡ－ＤＲＭＦＩにおける有意差が、未形質導入Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との間で観察され、かつＣＥＲ１２３６は、２回の異なる実験においてＣＥＲ１２３４よりも良好な抗原提示機能を有するように見える。図５２において、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の両方が、未形質導入Ｔ細胞よりも良好な抗原提示機能を示す。ＣＥＲ１２３４とＣＥＲ１２３６との間では、有意差は観察されなかった。図５３において、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞の両方が、未形質導入Ｔ細胞よりも良好な抗原提示機能を示す。ＣＥＲ１２３４とＣＥＲ１２３６との間では、有意差は観察されなかった。図５４において、ＨＬＡ－ＤＲＭＦＩにおける有意差が、未形質導入Ｔ細胞とＣＥＲ１２３６Ｔ細胞との間で観察された。ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞はまた、ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞と比較して、ＣＤ２５およびＨＬＡ－ＤＲにより測定される場合に、改善された抗原提示機能を示した。

全体として、これらの結果は、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞が、未形質導入Ｔ細胞またはホスファチジルセリン（ｐｈｏｓｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ）に結合できなかったコンストラクトを有するＴ細胞と比較して、一貫してより良好な抗原提示機能を有したことを示す。ＣＥＲ１２３４は、一部の実験において、未形質導入Ｔ細胞と比較して、いかなる抗原提示機能も示さなかった。ＣＥＲ１２３４Ｔ細胞と比較して、ＣＥＲ１２３６Ｔ細胞は、一貫して抗原提示機能を示した。

実施例５において上述した通り、ＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞は、ホスファチジルセリンへの曝露の３回の連続ラウンドに際して、反復するＩＦＮ－γ応答を示した（図１９Ｃ）。インビトロにおいて追加の抗原曝露に際して再活性化されるＣＥＲ－１２３６Ｔ細胞の能力は、インビボでの持続的作用を示唆する。

（参考文献）
上記に説明する様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。２０２１年７月２８日出願の米国仮特許出願第６３／２２６，６４３号、２０２１年７月２８日出願の米国仮特許出願第６３／２２６，７１２号、２０２１年７月２８日出願の米国仮特許出願第６３／２２６，７３６号、２０２２年２月１６日出願の米国仮特許出願第６３／３１１，０１６号、２０２２年２月１６日出願の米国仮特許出願第６３／３１１，０４２号、２０２２年２月１６日出願の米国仮特許出願第６３／３１１，０４３号、２０２２年２月１６日出願の米国仮特許出願第６３／３１１，０４５号、２０２２年４月２９日出願の米国仮特許出願第６３／３３６，９７２号、２０２２年４月２９日出願の米国仮特許出願第６３／３３６，９８０号、２０２２年５月１３日出願の米国仮特許出願第６３／３４１，９９９号、２０２２年５月１３日出願の米国仮特許出願第６３／３４２，０３１号、２０２１年８月１３日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０４６０４３号、２０２１年８月１３日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０４６０１４号、および２０２１年８月１３日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０４６０４１号を含む、本明細書において参照および／または出願データシートに列挙される全ての米国特許、米国特許出願公開公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は、その全体を参照により本明細書に組み込む。実施形態の態様は、様々な特許、出願および刊行物の概念を用いて、またさらなる実施形態を提供するために必要な場合、改変され得る。

これらおよび他の変化は、上記に詳述される説明に照らして実施形態についてなされ得る。一般的に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、明細書および特許請求の範囲において開示されている特定の実施形態に限定すると解釈されるべきではないが、そのような特許請求の範囲が権利を与える均等物の全範囲に沿った全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

Claims

（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＴｉｍ４結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む一次ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１７のアミノ酸配列を含む二次ＴＬＲ２ＴＩＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１４のアミノ酸配列を含む三次ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン；または
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む一次ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含む二次ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号１７のアミノ酸配列を含む三次ＴＬＲ２ＴＩＲ細胞内シグナル伝達ドメイン
を含む細胞内シグナル伝達ドメインと；
（ｃ）細胞外ドメインとＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインとの間に位置し、かつこれらを接続する、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインと
を含む単鎖キメラタンパク質を含む、キメラＴ細胞免疫グロブリンおよびムチン４（Ｔｉｍ４）受容体。
Ｎ末端におけるシグナルペプチドをさらに含み、適宜、シグナルペプチドはＴｉｍ４シグナルペプチドであり、さらに適宜、Ｔｉｍ４シグナルペプチドは配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラＴｉｍ４受容体。
配列番号１８またはアミノ酸１～２４を欠く配列番号１８のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のキメラＴｉｍ４受容体。
配列番号１９またはアミノ酸１～２４を欠く配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のキメラＴｉｍ４受容体。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体をコードするポリヌクレオチド。
請求項５に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
ウイルスベクターであり、適宜、ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項６に記載の発現ベクター。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、または請求項６もしくは７に記載の発現ベクターを含む、操作された細胞。
免疫細胞である、請求項８に記載の操作された細胞。
Ｔ細胞である、請求項９に記載の操作された細胞。
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項１０に記載の操作された細胞。
ヒト細胞である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の操作された細胞。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、請求項６もしくは７に記載のベクター、または請求項８～１２のいずれか一項に記載の操作された細胞を含む組成物。
薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、請求項６もしくは７に記載のベクター、または請求項８～１２のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１３もしくは１４に記載の組成物を投与することを含む、対象において疾患を治療する方法。
疾患ががんである、請求項１５に記載の方法。
がんが、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎がん、肝がん、脳がん、リンパ腫、白血病、もしくは肺がん；乳房、前立腺および結腸の腺癌；全ての形態の気管支原性肺癌；骨髄性白血病；黒色腫；肝細胞腫；神経芽細胞腫；乳頭腫；アプドーマ；分離腫；鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患；ならびに癌腫（例えば、ウォーカー癌腫、基底細胞癌、基底扁平細胞癌、ブラウン・ピアース癌、腺管癌、エールリッヒ癌、クレブス２癌、メルケル細胞癌、粘液性癌、非小細胞肺癌、燕麦細胞癌、乳頭癌、硬性癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、扁平上皮癌および移行上皮癌）；組織球性障害；悪性組織球症；白血病；ホジキン病；免疫増殖性小；非ホジキンリンパ腫；形質細胞腫；多発性骨髄腫；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；形質細胞腫；細網内皮症；黒色腫；軟骨芽細胞腫；軟骨腫；軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；脊索腫；頭蓋咽頭腫；未分化胚細胞腫；過誤腫；間葉腫；中腎腫；筋肉腫；エナメル上皮腫；セメント質腫；歯牙腫；奇形腫；胸腺腫；絨毛性腫瘍、腺腫；胆管腫；真珠腫；円柱腫（ｃｙｃｌｉｎｄｒｏｍａ）；嚢胞腺癌；嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；男性胚腫；肝細胞腫；汗腺腫；膵島腫瘍；ライディッヒ細胞腫；乳頭腫；セルトリ細胞腫；莢膜細胞腫；平滑筋腫（ｌｅｉｍｙｏｍａ）；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫（ｍｙｏｍｍａ）；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節腫；神経膠腫；髄芽腫；髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫；神経線維腫；神経腫；傍神経節腫；非クローム親和性傍神経節腫；被角血管腫；好酸球増加症を伴う血管リンパ様過形成；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管外皮腫；血管肉腫；リンパ管腫；リンパ管筋腫；リンパ管肉腫；松果体腫；癌肉腫；軟骨肉腫；葉状嚢胞肉腫；線維肉腫；血管肉腫；平滑筋肉腫；白血肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；筋肉腫；粘液肉腫；卵巣癌；横紋筋肉腫；肉腫；新生物；神経線維腫症（ｎｅｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ）；子宮頸部異形成、および腹膜がん；Ｂ細胞リンパ腫［例として様々な形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または中枢神経系リンパ腫］を含むＢ細胞がん、白血病［例として急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽細胞化］および骨髄腫（例として多発性骨髄腫）；小リンパ球性リンパ腫、小リンパ球性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性化の可能性をもつＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、および移植後リンパ増殖性障害である、請求項１６に記載の方法。
がんがＢ細胞がんであり、適宜、Ｂ細胞がんがＢ細胞リンパ腫であり、さらに（ｆｕｔｈｅｒ）適宜、Ｂ細胞リンパ腫がマントル細胞リンパ腫である、請求項１７に記載の方法。
追加の治療剤の投与をさらに含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤が、放射線照射、細胞免疫療法、抗体、免疫チェックポイント分子阻害剤、化学療法、ホルモン療法、ペプチド、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、ＵＶ光療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、小分子療法、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１９に記載の方法。
細胞免疫療法がキメラ抗原受容体である、請求項１９または２０に記載の方法。
追加の治療剤が、血管新生阻害剤（例えばＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦ経路阻害剤）、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、ＧＴＰアーゼ阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤、またはＲＥＴ阻害剤を含む、請求項１９または２０に記載の方法。
阻害剤がＢＴＫ阻害剤である、請求項２２に記載の方法。
ＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブ、ピルトブルチニブ（Ｌｏｘｏ－３０５）、チラブルチニブ、トレブルチニブ、エボブルチニブ、フェネブルチニブ（ＧＤＣ－０８５３）、アカラブルチニブ、ＯＮＯ－４０５９、スペブルチニブ、ザヌブルチニブ（ＢＧＢ－３１１１）、ＨＭ７１２２４またはＭ７５８３である、請求項２３に記載の方法。
がんが、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、小リンパ球性リンパ腫、小リンパ球性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、および辺縁帯リンパ腫である、請求項２３または２４に記載の方法。
阻害剤がＥＧＦＲ阻害剤である、請求項２２に記載の方法。
ＥＧＦＲ阻害剤が、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、またはダコミチニブである、請求項２６に記載の方法。
がんが非小細胞肺がんである、請求項２６または２７に記載の方法。
阻害剤がポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤である、請求項２２に記載の方法。
ＰＡＲＰ阻害剤が、タラゾパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、オラパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＡＧ０１４６９９、ＭＫ４８２７、ＢＭＮ－６７３、またはパミパリブである、請求項２９に記載の方法。
がんが、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫である、請求項２９または３０に記載の方法。
乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項３１に記載の方法。
卵巣がんが進行卵巣がんである、請求項３１に記載の方法。
前立腺がんが進行前立腺がんである、請求項３１に記載の方法。
肺がんが非小細胞肺がんである、請求項３１に記載の方法。
がんがＢＲｅａｓｔＣＡｎｃｅｒ遺伝子（ＢＲＣＡ）変異がんである、請求項２９～３５のいずれか一項に記載の方法。
がんが、ＢＲＣＡ１変異がん、ＢＲＣＡ２変異がん、またはその両方である、請求項３６に記載の方法。
キメラ抗原受容体が抗ＣＤ７２キメラ抗原受容体である、請求項２１に記載の方法。
抗ＣＤ７２キメラ抗原受容体が、表３において提供される重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む結合ドメインを有する、請求項３８に記載の方法。
抗ＣＤ７２キメラ抗原受容体が、配列番号１３１～１６４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む結合ドメインを有する、請求項３８または３９に記載の方法。
抗ＣＤ７２キメラ抗原受容体が、配列番号１８２～２３４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む結合ドメインを含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
がんがＢ細胞悪性腫瘍である、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
Ｂ細胞悪性腫瘍が、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、Ｃｏｍｍｏｎ型急性リンパ性白血病、Ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群より選択される、請求項４２に記載の方法。
対象が難治性Ｂ細胞悪性腫瘍を有する、請求項４２または４３に記載の方法。
対象が、ＣＤ１９またはＣＤ２２をターゲティングするキメラ抗原受容体を以前に投与された、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤が、治療用量未満で投与される、請求項１５～４５のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤が、キメラＴｉｍ４受容体と連続的または同時に対象に投与される、請求項１５～４６のいずれか一項に記載の方法。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、請求項６もしくは７に記載の発現ベクター、または請求項８～１２のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１３もしくは１４に記載の組成物を投与することを含む、対象においてエフェクター応答または抗腫瘍効力を向上させる方法。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、請求項６もしくは７に記載のベクター、または請求項８～１２のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１３もしくは１４に記載の組成物；および適宜のポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を対象に投与することを含む、がんを有する対象においてＣＣＲ７＋発現Ｔ細胞を向上させるための方法。
がんが、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫である、請求項４９に記載の方法。
乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項５０に記載の方法。
卵巣がんが進行卵巣がんである、請求項５０に記載の方法。
前立腺がんが進行前立腺がんである、請求項５０に記載の方法。
肺がんが非小細胞肺がんである、請求項５０に記載の方法。
がんがＢＲｅａｓｔＣＡｎｃｅｒ遺伝子（ＢＲＣＡ）変異がんである、請求項４９～５４のいずれか一項に記載の方法。
がんが、ＢＲＣＡ１変異がん、ＢＲＣＡ２変異がん、またはその両方である、請求項５５に記載の方法。
ＰＡＲＰ阻害剤が、タラゾパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、オラパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＡＧ０１４６９９、ＭＫ４８２７、ＢＭＮ－６７３、パミパリブ、またはそれらの組合せである、請求項４９～５６のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項４９～５７のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤が、放射線照射、細胞免疫療法、抗体、免疫チェックポイント分子阻害剤、化学療法、ホルモン療法、ペプチド、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、ＵＶ光療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、小分子療法、またはそれらの組合せを含む、請求項５８に記載の方法。
細胞免疫療法がキメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体である、請求項５９に記載の方法。
追加の治療剤が、血管新生阻害剤（例えばＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦ経路阻害剤）、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、ＧＴＰアーゼ阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤、またはＲＥＴ阻害剤を含む、請求項５８または５９に記載の方法。
向上したＣＣＲ７＋発現Ｔ細胞がキメラＴｉｍ４受容体を発現する、請求項４９～６１のいずれか一項に記載の方法。
請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラＴｉｍ４受容体、請求項５に記載のポリヌクレオチド、請求項６もしくは７に記載の発現ベクター、または請求項８～１２のいずれか一項に記載の操作された細胞、または請求項１３もしくは１４に記載の組成物；および適宜のポリＡＤＰ－リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を対象に投与することを含む、がんを有する対象においてＣＤ４／ＣＤ８Ｔ細胞比を向上させるための方法。
がんが、乳がん、卵巣がん、結腸直腸がん、卵管がん、腹膜がん、前立腺がん、肺がん、または黒色腫である、請求項６３に記載の方法。
乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項６４に記載の方法。
卵巣がんが進行卵巣がんである、請求項６４に記載の方法。
前立腺がんが進行前立腺がんである、請求項６４に記載の方法。
肺がんが非小細胞肺がんである、請求項６４に記載の方法。
がんがＢＲｅａｓｔＣＡｎｃｅｒ遺伝子（ＢＲＣＡ）変異がんである、請求項６３～６８のいずれか一項に記載の方法。
がんが、ＢＲＣＡ１変異がん、ＢＲＣＡ２変異がん、またはその両方である、請求項５５に記載の方法。
ＰＡＲＰ阻害剤が、タラゾパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、オラパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＡＧ０１４６９９、ＭＫ４８２７、ＢＭＮ－６７３、パミパリブ、またはそれらの組合せである、請求項６３～７０のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項６３～７１のいずれか一項に記載の方法。
追加の治療剤が、放射線照射、細胞免疫療法、抗体、免疫チェックポイント分子阻害剤、化学療法、ホルモン療法、ペプチド、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、ＵＶ光療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、小分子療法、またはそれらの組合せを含む、請求項７２に記載の方法。
細胞免疫療法がキメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体である、請求項７３に記載の方法。
追加の治療剤が、血管新生阻害剤（例えばＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えばＥＧＦ経路阻害剤）、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、ＧＴＰアーゼ阻害剤、セリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤、またはＲＥＴ阻害剤を含む、請求項７２または７３に記載の方法。
向上したＣＤ４Ｔ細胞がキメラＴｉｍ４受容体を発現する、請求項６３～７５のいずれか一項に記載の方法。