JP2024522360A

JP2024522360A - 抗ｃｃｒ８抗体及びその使用

Info

Publication number: JP2024522360A
Application number: JP2023574361A
Authority: JP
Inventors: ウィリアムピアース，ネイサン; キェチェウスカ，アグニエシュカ; チェン，ウェンタオ; ノーラン－ステヴォー，オリヴィエ; エル．ベイツ，ダレン; ウィンケル，リサ; ダールホフ，クリストフ; ラウム，トビアス; ブルーメル，クラウディア; カール－ヨーゼフホーナー，ヨナス
Original assignee: アムジエン・インコーポレーテツド; アムジェンリサーチ（ミュニック）ゲゼルシャフトミットベシュレンクテルハフツング
Priority date: 2021-06-04
Filing date: 2022-06-02
Publication date: 2024-06-18
Also published as: KR20240017912A; US20220403037A1; CR20230581A; WO2022256563A1; TW202313684A; IL308808A; UY39798A; PE20240363A1; AU2022285741A1; CO2023018064A2; BR112023025433A2; EP4347655A1; MX2023014458A; CA3222764A1

Abstract

本発明は、抗ＣＣＲ８抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに前記抗ＣＣＲ８抗体及びその抗原結合フラグメントの製造及び使用方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年６月４日に出願された米国仮特許出願第６３／１９７，２７１号及び２０２１年８月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／２３６，５５１号の利益を主張するものであり、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本発明は、腫瘍学の分野に関連する。本発明は、ＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＣＲ８抗体、及び前記抗体によるがん患者の治療に関する。本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、固有のエピトープに結合し、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない。本発明はまた、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、並びに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうちの１つ以上による治療方法に関する。

発明の背景
Ｃ－Ｃケモカイン受容体型８（ＣＣＲ８）は、βケモカイン受容体ファミリーのメンバーであり、３５個のアミノ酸の細胞外Ｎ末端を有する７回膜貫通型のＧタンパク質共役受容体である。ＣＣＬ１はＣＣＲ８、ｃｃｒ８のリガンドであり、ＣＣＬ１によって誘導されるＣＣＲ８のシグナル伝達は、Ｇタンパク質を介して生じる。ＣＣＬ１がＣＣＲ８と結合すると、百日咳毒素によって阻害され得る細胞内カルシウム流出が生じる。ＣＣＲ８発現細胞株において、ＲＡＳ／ＥＲＫ１／２ＭＡＰキナーゼ経路の下流が活性化することが実証されている（例えば、Louahed et al.(2003) “CCR8-dependent activation of the RAS/MAPK paｔhway mediates anti-apoptotic activity of I-309/CCL1 and vMIP-I”, European J. of Immunology; 33(2): 494-501を参照されたい）。

ケモカインとそれらの受容体は、様々な種類の細胞型が炎症部位に移動するのに重要なものである。ＣＣＲ８とそのリガンドに関するこれまでの研究から、活性化Ｔ細胞が、抗原チャレンジ部位並びに末梢組織及びリンパ系組織の特定の領域内の適切な位置決めにおける役割を有することを示唆している。ＣＣＲ８はまた、単核細胞の走化性と胸腺細胞のアポトーシスの制御にも寄与する可能性がある（Tiffany et al.(1997) “Identification of CCR8: a human monocyte and thymus receptor for the CC chemokine I-309”, J Exp Med; Jul 7; 186(1):165-70）。

ＣＣＲ８の発現が腫瘍特異的なＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞のマーカーとなることは、複数の腫瘍型における最近のデータから証明されている（例えば、Plitas et al. (2016) “Regulatory T Cells Exhibit Distinct Features in Human Breast Cancer”, Immunity; 45(5):1122-1134; Villarreal et al. (Sept. 2018) “Targeting CCR8 Induces Protective Antitumor Immunity and Enhances Vaccine-Induced Responses in Colon Cancer” Tumor Biol. And Immun.を参照されたい）。ＣＣＲ８は、循環血液中又は正常組織中のＴｒｅｇ、及び従来のＴエフェクター（Ｔｅｆｆ）細胞と比較して、腫瘍常在Ｔｒｅｇの表面上で、はるかに高頻度且つ高レベルで発現している。固形腫瘍におけるＴｒｅｇ細胞の浸潤は、臨床転帰の不良と関連し、Ｔｒｅｇは、Ｔｅｆｆ細胞の細胞毒性を阻害することによって抗がん免疫応答を抑制する。

一部のデータでは、ＣＣＲ８の機能を阻害することにより、腫瘍における免疫応答のＴｒｅｇによる抑制を低減し、それによって炎症応答が促進され、腫瘍体積を減少させることが可能であることが示唆されている。別の治療方法は、抗ＣＣＲ８抗体依存性の細胞死（ＡＤＣＣなど）によって腫瘍のＴｒｅｇ細胞を枯渇させることである。ＡＤＣＣでは、抗ＣＣＲ８抗体は、腫瘍常在Ｔｒｅｇ上のＣＣＲ８に優先的に結合し、ＡＤＣＣによってこれらの腫瘍常在Ｔｒｅｇを枯渇させることにより、ＣＣＲ８をほとんど或いは全く発現しない正常組織のＴｒｅｇを温存しながら、腫瘍常在ＣＣＲ８＋ＴｒｅｇのリダイレクトされたＴ細胞溶解を誘発させることができる。（例えば、Tanaka et al.(2019) “Targeting Treg cells in cancer immunotherapy” European J. of Immun.; 49(8)1140-1146）。

抗ＣＣＲ８抗体などのＴｒｅｇ枯渇抗体は当技術分野において公知である。例えば、ＰＣＴ出願公開の国際公開第２０１８／１８１４２５号では、がんの治療に使用するためのＡＤＣＣ活性を有するＣＣＲ８に対する抗体が記載されており、市販のラット抗マウスＣＣＲ８抗体（ＳＡ２１４Ｇ２）が開示されている。

１）腫瘍常在Ｔｒｅｇ細胞上のヒト及びカニクイザルＣＣＲ８と結合することができ、２）腫瘍常在Ｔｒｅｇ細胞の特異的枯渇をもたらし、３）（異なるエピトープと結合する抗ＣＣＲ８抗体と比較して）容認できる薬物動態プロファイルを示し、及び／又は４）がんの治療に十分な効力を示す、代替となる抗ＣＣＲ８抗体が求められている。

また、リガンド（ＣＣＬ１など）がＣＣＲ８に結合するのを阻害せず、及び／又は配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基を含むＣＣＲ８のエピトープに結合する抗ＣＣＲ８抗体が求められている。

発明の概要
本発明は、ヒトＣ－Ｃケモカイン受容体型８（ＣＣＲ８）に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、（ａ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１アミノ酸配列と、（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、（ｄ）ＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＸ_１ＮＹＬＡ（配列番号１２３５）（式中、Ｘ_１はＫ又はＲである）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１アミノ酸配列と、（ｅ）配列番号５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列と、以下のアミノ酸配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＸ_１ＮＹＬＡＷＹＸ_２ＱＫＰＧＱＸ_３ＰＫＬＬＩＳＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＩＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
（配列番号１２３６）（式中、Ｘ_１はＫ若しくはＲであり、Ｘ_２はＨ若しくはＱであり、及び／又はＸ_３はＳ若しくはＰである）を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列と、配列番号１４又は配列番号３６３の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１５の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、配列番号１６又は配列番号３６５の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列とを含む。他の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、両ＨＣは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、両ＨＣは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供し、ＨＣは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは、配列番号１４又は配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣは、配列番号１５又は配列番号５７３のアミノ酸配列を有し、ＬＣは、配列番号１６により与えられるアミノ酸配列を有する。別の実施形態では、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、各ＨＣは、配列番号１５又は配列番号５７３のアミノ酸配列を有し、各ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明はまた、配列番号８３９のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号８４０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号８４１のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、配列番号８４２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号８４３のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号８４４のＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１０１７のＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号１０１８のＬＣＶＲアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１２５又は配列番号１２３７のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２６のＬＣアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１２５のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２６のＬＣアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２３７のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２６のＬＣアミノ酸配列とを含む。例えば、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含んでよく、両ＨＣは、配列番号１１２５又は配列番号１２３７のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明はまた、配列番号８４５のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号８４６のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号８４７のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、配列番号８４８のＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、配列番号８４９のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、配列番号８５０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１０１９のＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号１０２０のＬＣＶＲアミノ酸配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１２７又は配列番号１２３８のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２８のＬＣアミノ酸配列とを含む。

本発明は更に、（ａ）Ｘ_１Ｘ_２ＧＸ_４Ｈ（配列番号１２３３）（式中、（ｉ）Ｘ_１はＮ、Ｓ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、又はＲであり、（ｉｉ）Ｘ_２はＣ、Ｎ、Ｙ、Ｓ、又はＦであり、及び（ｉｉｉ）Ｘ_４はＭ又はＦである）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、（ｂ）配列番号６４８、６５４、６６０、６６６、６７２、６７８、６８４、６９０、６９６、７０２、７０８、７１４、７２０、７２６、７３２、７３８、７４４、７５０、７５６、７６２、７６８、７７４、７８０、７８６、７９２、７９８、８０４、８１０、８１６、８２２、８２８、８３４、８４０、８４６、８５２、８５８、８６７、８７３、８７９、８８５、８９１、８９７、９０３、９０９、９１５、９２１、９２７、９３３、９３９、若しくは９４５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、（ｃ）配列番号６４９、６５５、６６１、６６７、６７３、６７９、６８５、６９１、６９７、７０３、７０９、７１５、７２１、７２７、７３３、７３９、７４５、７５１、７５７、７６３、７６９、７７５、７８１、７８７、７９３、７９９、８０５、８１１、８１７、８２３、８２９、８３５、８４７、８５３、８５９、８６８、８７４、８８０、８８６、８９２、８９８、９０４、９１０、９１６、９２２、９２８、９３４、９４０、若しくは９４６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、（ｄ）配列番号６５０、６５６、６６２、６６８、６７４、６８０、６８６、６９２、６９８、７０４、７１０、７１６、７２２、７２８、７３４、７４０、７４６、７５２、７５８、７６４、７７０、７７６、７８２、７８８、７９４、８００、８０６、８１２、８１８、８２４、８３０、８３６、８４８、８５４、８６０、８６３、８６９、８７５、８８１、８８７、８９３、８９９、９０５、９１１、９１７、９２３、９２９、９３５、若しくは９４１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、（ｅ）ＲＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＲＰＳ（配列番号１２３４）（式中、（ｉ）Ｘ_２はＡ、Ｎ、Ｄ、Ｓ、又はＱであり、（ｉｉ）Ｘ_３はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｉ、Ｆ、又はＡであり、（ｉｉｉ）Ｘ_４はＮ又はＶである）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、（ｆ）配列番号６５２、６５８、６６４、６７０、６７６、６８２、６８８、６９４、７００、７０６、７１２、７１８、７２４、７３０、７３６、７４２、７４８、７５４、７６０、７６６、７７２、７７８、７８４、７９０、７９６、８０２、８０８、８１４、８２０、８２６、８３２、８３８、８５０、８５６、８６２、８６５、８７１、８７７、８８３、８８９、８９５、９０１、９０７、９１３、９１９、９２５、９３１、９３７、若しくは９４３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体とを含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号６４７、６５３、６５９、６６５、６７１、６７７、６８３、６８９、６９５、７０１、７０７、７１３、７１９、７２５、７３１、７３７、７４３、７４９、７５５、７６１、７６７、７７３、７７９、７８５、７９１、７９７、８０３、８０９、８１５、８２１、８２７、８３３、８４５、８５１、８５７、８６６、８７２、８７８、８８４、８９０、８９６、９０２、９０８、９１４、９２０、９２６、９３２、９３８、又は９４４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列番号６５１、６５７、６６３、６６９、６７５、６８１、６８７、６９３、６９９、７０５、７１１、７１７、７２３、７２９、７３５、７４１、７４７、７５３、７５９、７６５、７７１、７７７、７８３、７８９、７９５、８０１、８０７、８１３、８１９、８２５、８３１、８３７、８４９、８５５、８６１、８６４、８７０、８７６、８８２、８８８、８９４、９００、９０６、９１２、９１８、９２４、９３０、９３６、又は９４２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号９５３、９５５、９５７、９５９、９６１、９６３、９６５、９６７、９６９、９７１、９７３、９７５、９７７、９７９、９８１、９８３、９８５、９８７、９８９、９９１、９９３、９９５、９９７、９９９、１００１、１００３、１００５、１００７、１００９、１０１１、１０１３、１０１５、１０１９、１０２１、１０２３、１０２６、１０２８、１０３０、１０３２、１０３４、１０３６、１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、又は１０５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号９６４、９６６、９６８、９７０、９７２、９７４、９７６、９７８、９８０、９８２、９８４、９８６、９８８、９９０、９９２、９９４、９９６、９９８、１０００、１００２、１００４、１００６、１００８、１０１０、１０１２、１０１４、１０１６、１０２０、１０２２、１０２４、１０２５、１０２７、１０２９、１０３１、１０３３、１０３５、１０３７、１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、又は１０５１のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号１０１９のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２０のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、（ｂ）配列番号１０２１のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２２のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｃ）配列番号１０２３のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２４のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｄ）配列番号１０２６のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２５のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｅ）配列番号１０２８のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２７のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｆ）配列番号１０３０のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２９のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｇ）配列番号１０３２のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３１のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｈ）配列番号１０３４のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３３のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｉ）配列番号１０３６のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３５のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｊ）配列番号１０３８のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３７のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｋ）配列番号１０４０のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３９のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｌ）配列番号１０４２のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４１のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｍ）配列番号１０４４のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４３のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｎ）配列番号１０４６のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４５のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｏ）配列番号１０４８のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４７のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、（ｐ）配列番号１０５０のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４９のアミノ配列を含むＬＣＶＲ、又は（ｑ）配列番号１０５２のアミノ配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０５１のアミノ配列を含むＬＣＶＲを含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、１１６０、又は１２３８～１２５４のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、又は１１５９のＬＣアミノ酸配列とを含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１１２７若しくは配列番号１２３８のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１２８のＬＣアミノ酸配列、（ｂ）配列番号１１２９若しくは配列番号１２３９のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３０のＬＣアミノ酸配列、（ｃ）配列番号１１３１若しくは配列番号１２４０のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３２のＬＣアミノ酸配列、（ｄ）配列番号１１３４若しくは配列番号１２４１のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３３のＬＣアミノ酸配列、（ｅ）配列番号１１３６若しくは配列番号１２４２のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３５のＬＣアミノ酸配列、（ｆ）配列番号１１３８若しくは配列番号１２４３のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３７のＬＣアミノ酸配列、（ｇ）配列番号１１４０若しくは配列番号１２４４のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３９のＬＣアミノ酸配列、（ｈ）配列番号１１４２若しくは配列番号１２４５のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４１のＬＣアミノ酸配列、（ｉ）配列番号１１４４若しくは配列番号１２４６のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４３のＬＣアミノ酸配列、（ｊ）配列番号１１４６若しくは配列番号１２４７のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４５のＬＣアミノ酸配列、（ｋ）配列番号１１４８若しくは配列番号１２４８のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４７のＬＣアミノ酸配列、（ｌ）配列番号１１５０若しくは配列番号１２４９のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４９のＬＣアミノ酸配列、（ｍ）配列番号１１５２若しくは配列番号１２５０のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５１のＬＣアミノ酸配列、（ｎ）配列番号１１５４若しくは配列番号１２５１のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５３のＬＣアミノ酸配列、（ｏ）配列番号１１５６若しくは配列番号１２５２のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５５のＬＣアミノ酸配列、（ｐ）配列番号１１５８若しくは配列番号１２５３のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５７のＬＣアミノ酸配列、又は（ｑ）配列番号１１６０若しくは配列番号１２５４のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５９のＬＣアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、その抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、Ｆａｂである。特定の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

本発明はまた、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、ＨＣは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号８、配列番号３６７、又は配列番号３７７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１０、配列番号３６９、又は配列番号３７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列番号３６７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列番号３７７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号３６９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号３７９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号１７、配列番号３７２、又は配列番号３８２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは、配列番号１８、配列番号３７３、又は配列番号３８３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号３７２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号３８２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号３７３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号３８３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣは、配列番号１９、配列番号３７４、又は配列番号３８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２０、配列番号３７５、又は配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣは、配列番号３７４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＣは、配列番号３８４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣは、配列番号３７５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＬＣは、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、各ＨＣは、配列番号１９、配列番号３７４、又は配列番号３８４のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号２０、配列番号３７５、又は配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＨＣは、配列番号３７４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＨＣは、配列番号３８４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＬＣは、配列番号３７５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、各ＬＣは、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３５２及び配列番号３５３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３５４及び３５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７３及び３５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３６２及び配列番号３６３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３６４及び３６５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７４及び３６５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体１．１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３６６、配列番号３６７、配列番号３６８、配列番号３６９、配列番号３７０、及び配列番号３７１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３７２及び配列番号３７３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３７４及び３７５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７５及び３７５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体２．１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３７６、配列番号３７７、配列番号３７８、配列番号３７９、配列番号３８０、及び配列番号３８１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３８２及び配列番号３８３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３８４及び３８５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７６及び３８５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体２．２のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３８６、配列番号３８７、配列番号３８８、配列番号３８９、配列番号３９０、及び配列番号３９１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３９２及び配列番号３９３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３９４及び３９５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７７及び３９５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体３．０のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号３９６、配列番号３９７、配列番号３９８、配列番号３９９、配列番号４００、及び配列番号４０１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４０２及び配列番号４０３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４０４及び４０５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７８及び４０５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体４．０のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４０６、配列番号４０７、配列番号４０８、配列番号４０９、配列番号４１０、及び配列番号４１１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４１２及び配列番号４１３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４１４及び４１５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５７９及び４１５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体４．１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４１６、配列番号４１７、配列番号４１８、配列番号４１９、配列番号４２０、及び配列番号４２１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４２２及び配列番号４２３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４２４及び４２５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８０及び４２５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体４．２のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４２６、配列番号４２７、配列番号４２８、配列番号４２９、配列番号４３０、及び配列番号４３１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４３２及び配列番号４３３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４３４及び４３５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８１及び４３５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．０のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、及び配列番号４４１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４４２及び配列番号４４３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４４４及び４４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８２及び４４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号４５０、及び配列番号４５１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４５２及び配列番号４５３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４５４及び４５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８３及び４５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．２のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４５６、配列番号４５７、配列番号４５８、配列番号４５９、配列番号４６０、及び配列番号４６１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４６２及び配列番号４６３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４６４及び４６５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８４及び４６５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．３のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４６６、配列番号４６７、配列番号４６８、配列番号４６９、配列番号４７０、及び配列番号４７１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４７２及び配列番号４７３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４７４及び４７５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８５及び４７５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．４のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４７６、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、及び配列番号４８１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４８２及び配列番号４８３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４８４及び４８５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８６及び４８５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．５のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４８６、配列番号４８７、配列番号４８８、配列番号４８９、配列番号４９０、及び配列番号４９１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４９２及び配列番号４９３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４９４及び４９５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８７及び４９５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．６のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、及び配列番号５０１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５０２及び配列番号５０３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５０４及び５０５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８８及び５０５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．７のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０８、配列番号５０９、配列番号５１０、及び配列番号５１１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５１２及び配列番号５１３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５１４及び５１５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５８９及び５１５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．８のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５１６、配列番号５１７、配列番号５１８、配列番号５１９、配列番号５２０、及び配列番号５２１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５２２及び配列番号５２３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５２４及び５２５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５９０及び５２５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体５．９のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５２６、配列番号５２７、配列番号５２８、配列番号５２９、配列番号５３０、及び配列番号５３１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５３２及び配列番号５３３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５３４及び５３５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５９１及び５３５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体６．０のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５３６、配列番号５３７、配列番号５３８、配列番号５３９、配列番号５４０、及び配列番号５４１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５４２及び配列番号５４３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５４４及び５４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５９２及び５４５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体６．１のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、ＣＣＲ８に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５４６、配列番号５４７、配列番号５４８、配列番号５４９、配列番号５５０、及び配列番号５５１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号５５２及び配列番号５５３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５５４及び５５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号５９３及び５５５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ及びＬＣを含む。一実施形態では、抗体は、抗体６．２のＩｇＧ１である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、表１６、表１７、表１９、及び／又は表２０に開示されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣ、及び／又はＬＣアミノ酸残基を含む。

別の実施形態では、本発明の抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３は、本明細書に列挙される本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３配列の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも８０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９０％同一である。別の実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９５％同一である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

別の実施形態では、ＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲは、本明細書に列挙される本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲ配列の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも８０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９０％同一である。別の実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９５％同一である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

別の実施形態では、ＨＣ及び／又はＬＣは、本明細書に列挙される本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣ及び／又はＬＣ配列の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも８０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９０％同一である。別の実施形態では、アミノ酸配列は、少なくとも９５％同一である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

一実施形態では、本発明は、本発明のアフコシル化抗体を提供する。一実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、ヒト又はヒト化抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、化学療法剤、非化学療法剤（例えば、アンタゴニスト抗体などの抗ＰＤ－１若しくは抗ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含むチェックポイント阻害剤）、抗悪性腫瘍剤、及び／又は放射線などのがんの治療に広く使用されている様々な薬物及び治療と同時に、その前又はその後に投与することができる。例えば、本明細書に記載される治療のいずれかの前、その間及び／又はその後に投与を行うことができる。化学療法剤の例は本明細書で説明されており、シスプラチン、タキソール、エトポシド、ミトキサントロン（Novantrone（登録商標））、アクチノマイシンＤ、シクロヘキシミド、カンプトテシン（又はこれらの水溶性誘導体）、メトトレキサート、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、抗悪性腫瘍性抗生物質、例えばアドリアマイシン（ドキソルビシン）及びダウノマイシン、並びに本明細書で述べられた全ての化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体などのチェックポイント阻害剤と同時に、その前又はその後に投与され得る。「ＰＤ－１アンタゴニスト抗体」という用語は、ＰＤ－１に特異的に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２などの１つ以上のそのリガンドとの相互作用から生じるシグナル伝達を低下、遮断、阻害、抑制、又は干渉する抗体を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２との結合を阻害する。「ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体」という用語は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１受容体との相互作用から生じるシグナル伝達を低下、遮断、阻害、抑制、又は干渉する抗体を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、抗体２０Ｃ１．００６（それぞれ配列番号７２～７７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号７８及び７９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号８０及び８１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、ゼルバリマブ（それぞれ配列番号３２～３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号３８及び３９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；配列番号４０のＬＣアミノ酸配列；並びに配列番号４１若しくは６３６のＨＣアミノ酸配列を含む）、抗体２０Ａ２．００３（それぞれ配列番号４２～４７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号４８及び４９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号５０及び５１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、抗体２２Ｄ４．００６（それぞれ配列番号５２～５７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号５８及び５９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号６０及び６１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、又は抗体２２Ｄ４．０１７（それぞれ配列番号６２～６７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号６８及び６９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号７０及び７１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）のいずれか１つである。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ペムブロリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ニボルマブである。更に別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、セミプリマブである。特定の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ゼルバリマブである。ゼルバリマブは、ＡＭＧ４０４としても公知であり、２０Ｃ１．００９としても公知である。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントを投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体は、ＡＤＣＣを有する。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害せず、ＡＤＣＣを有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、容認できるＰＫを更に有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基を含むエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンを含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体によって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザル細胞ＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害せず、ＡＤＣＣを有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、容認できるＰＫを更に有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基からなるエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンからなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体によって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害せず、ＡＤＣＣを有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、容認できるＰＫを更に有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号８２の少なくとも１個の残基を含むエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基を含む。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンを含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体によって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。

本発明は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供し、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害せず、ＡＤＣＣを有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、容認できるＰＫを更に有する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号８２の少なくとも１個の残基からなるエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンからなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体によって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。

本発明はまた、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントを患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供する。一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。より特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がんである。一実施形態では、がんは、結腸直腸がんである。一実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮癌である。いくつかの実施形態では、方法は、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体を患者に投与することを更に含む。このようないくつかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体は、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントの投与前、投与と同時に、及び／又は投与後に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、又はゼルバリマブである。他の特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、又はデュルバルマブである。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、方法は、化学療法剤を患者に投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメント及び化学療法剤を患者に投与することを含む。このようないくつかの実施形態では、化学療法剤は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントの投与前、投与と同時に、又は投与後に投与され得る。いくつかの実施形態では、方法は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体、及び化学療法剤を患者に投与することを含む。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及び／又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、患者は、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうち２つを投与される。いくつかの実施形態では、患者は、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうち３つを投与される。いくつかの実施形態では、患者は、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストの各々を投与される。いくつかの実施形態では、患者は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを投与される。

本発明はまた、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、並びに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうちの１つ以上を患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体及びＴ細胞共刺激受容体のアゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニスト、及びＴ細胞共刺激受容体のアゴニストを患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、抗ＣＣＲ８抗体である。いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、抗ＣＴＬＡ４抗体である。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＴＬＡ－４抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを患者に投与することを含む。このようないくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストは、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体である。抗体２０Ｃ１．００６（それぞれ配列番号７２～７７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号７８及び７９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号８０及び８１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、ゼルバリマブ（それぞれ配列番号３２～３７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号３８及び３９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；配列番号４０のＬＣアミノ酸配列；並びに配列番号４１若しくは６３６のＨＣアミノ酸配列を含む）、抗体２０Ａ２．００３（それぞれ配列番号４２～４７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号４８及び４９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号５０及び５１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、抗体２２Ｄ４．００６（それぞれ配列番号５２～５７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号５８及び５９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号６０及び６１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）、又は抗体２２Ｄ４．０１７（それぞれ配列番号６２～６７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列；それぞれ配列番号６８及び６９のＶＬ及びＶＨアミノ酸配列；並びにそれぞれ配列番号７０及び７１のＬＣ及びＨＣアミノ酸配列を含む）。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ペムブロリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ニボルマブである。更に別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、セミプリマブである。特定の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ゼルバリマブである。

一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及びＰＤ－１アンタゴニスト抗体を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及びＰＤ－１アンタゴニスト抗体を患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＴＬＡ－４抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及びＰＤ－１アンタゴニスト抗体を患者に投与することを含む。

一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＣＲ８抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、及びＴ細胞共刺激受容体のアゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、及びＴ細胞共刺激受容体のアゴニストを患者に投与することを含む。一実施形態では、本方法は、有効量の抗ＣＴＬＡ－４抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、及びＴ細胞共刺激受容体のアゴニストを患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニストは、４－１ＢＢのアゴニストである。

いくつかの実施形態では、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、表１５の配列番号８７～３４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、ＣＴＬＡ－４、ＣＣＲ８、ＣＤ２５、ＴＩＧＩＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＬＡＹＮ、ＩＬ１Ｒ２、又はＩＬ２１Ｒに対する抗体である。

いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。

いくつかの実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、抗ＣＣＲ８抗体である。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＡＤＣＣ活性を有する抗ＣＣＲ８抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、腫瘍常在Ｔｒｅｇ細胞上のヒト及びカニクイザルＣＣＲ８と結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８のエピトープに結合し、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８のエピトープに結合し、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体によって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、容認できる薬物動態プロファイルを示す。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体である。

一実施形態では、免疫細胞共刺激受容体のアゴニストは、ＣＤ２、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ）、ＴＮＦＲ２、又はＩＣＯＳのアゴニストである。特定の実施形態では、免疫細胞共刺激受容体のアゴニストは、４－１ＢＢアゴニスト抗体である。

一実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストは、本明細書に記載されるようなＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、抗体２０Ｃ１．００６、ゼルバリマブ、抗体２０Ａ２．００３、抗体２２Ｄ４．００６、又は抗体２２Ｄ４．０１７のいずれか１つである。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ペムブロリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ニボルマブである。更に別の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、セミプリマブである。特定の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ゼルバリマブである。

一実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、免疫細胞共刺激受容体のアゴニスト、及び／又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストと同時に投与される。一実施形態では、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、免疫細胞共刺激受容体のアゴニスト、及び／又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストが、異なる時間に投与される。特定の実施形態では、患者は、Ｔｒｅｇ枯渇抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、免疫細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを投与される。別の特定の実施形態では、患者は、抗ＣＣＲ８抗体、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、４－１ＢＢアゴニスト抗体、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを投与される。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体である。

一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。より特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がんである。一実施形態では、がんは、結腸直腸がんである。一実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮癌である。

本発明は、治療における使用のための本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。本発明はまた、がんの治療における使用のための本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである。より特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである。いくつかの実施形態では、使用は、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体を患者に投与することを更に含む。このようないくつかの実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体は、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントの投与前、投与と同時に、及び／又は投与後に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、又はゼルバリマブである。他の特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、又はデュルバルマブである。いくつかの実施形態では、使用は、化学療法剤を患者に投与することを更に含む。このようないくつかの実施形態では、化学療法剤は、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントの投与前、投与と同時に、又は投与後に投与され得る。いくつかの実施形態では、使用は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメント及び化学療法剤を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、使用は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメント、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体、及び化学療法剤を患者に投与することを含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、がんを治療するための医薬の製造のための本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである。より特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明はまた、本発明の抗ＣＣＲ８抗体、又はその抗原結合フラグメント、及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、若しくは賦形剤を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

一実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、配列番号５９４を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号５９５を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号３５４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７３のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９６を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号５９７を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号３６４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５９８を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号５９９を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号３７４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３７５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７５のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３７５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６００を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６０１を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号３８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７６のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３８５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０２を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６０３を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号３９４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３９５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７７のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３９５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０４を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６０５を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４０４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７８のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０６を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６０７を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４１４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５７９のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６０８を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６０９を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４２４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４２５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８０のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４２５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１０を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６１１を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４３４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４３５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８１のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４３５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１２を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６１３を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４４４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４４５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８２のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４４５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１４を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６１５を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４５４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４５５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８３のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４５５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１６を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６１７を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４６４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４６５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６１８を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６１９を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４７４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４７５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８５のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４７５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２０を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６２１を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４８４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４８５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８６のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４８５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２２を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６２３を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号４９４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４９５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８７のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号４９５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２４を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６２５を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５０４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５０５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８８のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５０５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２６を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６２７を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５１４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５１５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５８９のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５１５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６２８を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６２９を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５２４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５９０のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５２５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６３０を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６３１を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５３４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５３５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５９１のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５３５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６３２を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６３３を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５４４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５４５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５９２のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５４５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６３４を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＨＣと、配列番号６３５を含むポリヌクレオチド配列によってコードされるＬＣとを含む。特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５５４のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５５５のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＨＣは、配列番号５９３のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号５５５のアミノ酸配列を含む。

また、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントをコードする１つ以上の核酸配列が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本発明はまた、本発明の抗体のＬＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本発明はまた、本発明の抗体のＬＣ及び本発明の抗体のＨＣの両方をコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、又は１１６０の重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、又は１１５９の軽鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を提供する。

本発明はまた、抗体のＬＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供し、ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号２８のポリヌクレオチド配列を含む。本発明はまた、一方のＤＮＡ分子が、配列番号１５のアミノ酸配列を有する抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドを含み、別のＤＮＡ分子が、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣをコードするポリヌクレオチドを含む。一実施形態では、抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２７のポリヌクレオチド配列を含み、ＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２８のポリヌクレオチド配列を含む。

本発明は更に、本発明のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物細胞を提供し、形質転換された哺乳動物細胞は、本発明の抗体を発現することができ、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む。

本発明は更に、本発明のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物細胞を提供し、形質転換された哺乳動物細胞は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を発現することができ、各ＨＣは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。

本発明はまた、本発明の抗体を産生するためのプロセスを提供し、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、プロセスは、抗体を発現させ、この発現させた抗体を回収するような条件下で哺乳動物細胞を培養することを含む。一実施形態では、哺乳動物細胞は、本発明のＤＮＡ分子で形質転換され、形質転換された哺乳動物細胞は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む本発明の抗体を発現することができる。本発明はまた、このプロセスにより得られる抗体を提供する。

本発明はまた、抗体を産生するためのプロセスを提供し、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、各ＨＣは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、プロセスは、抗体を発現させ、発現させた抗体を回収するような条件下で哺乳動物細胞を培養することを含み、哺乳動物細胞は、本発明のＤＮＡ分子で形質転換され、形質転換された哺乳動物細胞は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を発現することができ、各ＨＣは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。本発明はまた、このプロセスにより得られる抗体を提供する。

本発明は、抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供し、ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、配列番号２９を含む。

本発明は、抗体のＬＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供し、ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、配列番号３０を含む。

本発明は、抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供し、ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、抗体のＨＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２９のポリヌクレオチド配列を含む。本発明はまた、抗体のＬＣをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供し、ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号３０のポリヌクレオチド配列を含む。本発明はまた、本発明のＤＮＡ分子で形質転換された哺乳動物細胞を提供し、形質転換された哺乳動物細胞は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を発現することができ、各ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＨＣをコードする核酸配列は、配列番号１１９５、１１９７、１１９９、１２０１、１２０４、１２０６、１２０８、１２１０、１２１２、１２１４、１２１６、１２１８、１２２０、１２２２、１２２４、１２２６、１２２８、又は１２３０のいずれか１つを含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＬＣをコードする核酸配列は、配列番号１１９６、１１９８、１２００、１２０２、１２０３、１２０５、１２０７、１２０９、１２１１、１２１３、１２１５、１２１７、１２１９、１２２１、１２２３、１２２５、１２２７、又は１２２９のいずれか１つを含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓｃＦｖをコードする核酸配列は、配列番号１１６３～１１９４のいずれか１つを含み得る。

本発明はまた、抗体を産生するためのプロセスを提供し、抗体は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含み、各ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、プロセスは、抗体を発現させ、発現させた抗体を回収するような条件下で哺乳動物細胞を培養することを含み、哺乳動物細胞は、本発明のＤＮＡ分子で形質転換される。一実施形態では、形質転換された哺乳動物細胞は、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を発現することができ、各ＨＣは、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、各ＬＣは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。本発明はまた、このプロセスにより得られる抗体を提供する。

本発明はまた、２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を産生するためのプロセスを提供し、プロセスは、抗体を発現させ、発現させた抗体を回収するような条件下で上記に記載される哺乳動物細胞を培養することを含み、（ａ）両ＨＣは、配列番号１５、１１２５、１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、若しくは１１６０のアミノ酸配列、又は前述のＨＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｂ）両ＬＣは、配列番号１６、３６５、１１２６、１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、若しくは１１５９のアミノ酸配列、又は前述のＬＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

別の実施形態では、本発明は、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、前記エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンを含む。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。別の実施形態では、本発明は、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンからなる。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントによって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、抗体である。

別の実施形態では、本発明は、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンを含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントによって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、抗体である。

別の実施形態では、本発明は、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンからなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体は、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、エピトープは、エピトープビニングによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定される。一実施形態では、エピトープは、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される。一実施形態では、エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定され、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントによって決定される。一実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異への結合は、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体を、野生型カニクイザルＣＣＲ８（４位のスレオニンを含む）を発現する細胞に結合する抗体と比較する、細胞ベースの親和性アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことを示す場合、４位のスレオニンと結合する。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が検出不能であることを示す場合、４位のスレオニンと結合する。いくつかの実施形態では、野生型カニクイザルＣＣＲ８は、配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８は、配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８３のアミノ酸を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８６のアミノ酸を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８４のアミノ酸を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号８５、配列番号８３、配列番号８６、及び／又は配列番号８４のアミノ酸のペプチドに結合する抗体によって決定される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３～３５位のアミノ酸を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３、１４、又は１５位のアミノ酸を含むエピトープに結合しない。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８３のアミノ酸からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８６のアミノ酸からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号８４のアミノ酸からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号８５、配列番号８３、配列番号８６、及び／又は配列番号８４のアミノ酸のペプチドに結合する抗体によって決定される。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３～３５位のアミノ酸からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３、１４、又は１５位のアミノ酸からなるエピトープに結合しない。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３～２４位のアミノ酸残基を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１９～３０位のアミノ酸残基を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の２５～３５位のアミノ酸残基を含むエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号８５、配列番号８３、配列番号８６、及び／又は配列番号８４のアミノ酸のペプチドに結合する抗体によって決定される。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１３～２４位のアミノ酸残基からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の１９～３０位のアミノ酸残基からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントは、配列番号３１の２５～３５位のアミノ酸残基からなるエピトープに結合しない。いくつかの実施形態では、エピトープは、配列番号８５、配列番号８３、配列番号８６、及び／又は配列番号８４のアミノ酸のペプチドに結合する抗体によって決定される。

本明細書で使用する場合、「エピトープ」という用語は、抗体の可変領域と接触する抗原の部位を指す。エピトープは、連続していても、非連続であってもよく、ペプチドに結合した抗体のフローサイトメトリー、水素重水素交換、アラニンスキャニング、及び／又はＸ線結晶構造解析を含む、当業者に公知の方法によって決定され得る。

エピトープは、本明細書に記載されるようなペプチドに結合する抗体によって決定されるアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープであり得る。このようないくつかの実施形態では、ペプチドは、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。このようないくつかの実施形態では、ペプチドは、配列番号３１の１～１２位の残基のアミノ酸配列を含む。

エピトープは、エピトープビニングによって決定されるアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープであり得る。このようないくつかの実施形態では、エピトープビニングは、ビオチン化Ｎ末端ＣＣＲ８ペプチドを用いて行われる。

エピトープは、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合する抗体によって決定されるアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープであり得る。

エピトープは、ＣＣＲ８に結合する抗体をファージディスプレイによりスクリーニングすることによって決定されるアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープであり得る。

エピトープは、野生型ＣＣＲ８への結合と比較して、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減したことによって決定されるような、ＣＣＲ８のＮ末端領域の４位のスレオニンを含むか又はそれからなるエピトープであり得る。例えば、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８（配列番号５５６により与えられるアミノ酸配列を含む）への結合と比較して、野生型カニクイザルＣＣＲ８（配列番号２２により与えられるアミノ酸配列を含む）への結合を測定することにより、Ｔ４Ｒ突然変異への結合を検証してもよい。

エピトープは、ヒト細胞に発現したＣＣＲ８ペプチドへの結合を測定することによって決定されるアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープであってよく、ペプチドは、配列番号８２により与えられるアミノ酸配列を含む。ＣＣＲ８ペプチドは、ヒト細胞内で発現させるために、ナノボディ、又は他のタンパク質若しくはＦｃに融合させてもよい。

本発明は更に、ヒトＣＣＲ８上のエピトープに結合する抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、前記エピトープは、配列番号８２を含むか又はそれからなる。いくつかの実施形態では、本発明はまた、（ａ）ヒトＣＣＲ８上の配列番号８２を含むか又はそれからなるエピトープに結合し、（ｂ）ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない抗体又は抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントとＣＣＲ８への結合が競合する分子を提供する。このような結合が競合する分子は、例えば、抗体、抗体フラグメント、又はポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントと同一のエピトープに結合する分子を提供する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又は抗原結合フラグメントを患者に投与することを含み、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基を含む方法を提供する。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンを含む。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又は抗原結合フラグメントを患者に投与することを含み、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも１個の残基からなる方法を提供する。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号３１の１～１２位の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号３１の４位のスレオニンからなる。配列番号３１のアミノ酸残基１～１２のアミノ酸配列は、配列番号８２である。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又は抗原結合フラグメントを患者に投与することを含み、エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基を含む方法を提供する。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基を含む。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンを含む。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンを含む。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

本発明は、患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又は抗原結合フラグメントを患者に投与することを含み、エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基からなる方法を提供する。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも２個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも３個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも４個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の少なくとも５個の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の６個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の７個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の８個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の９個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１０個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の１１個以上の残基からなる。一実施形態では、エピトープは、配列番号８２の全１２個のアミノ酸残基からなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンからなる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号２２の４位のスレオニンからなる。このようないくつかの実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントとＣＣＲ８への結合が競合する、有効量の分子を患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法を提供する。このような結合が競合する分子は、例えば、抗体、抗体フラグメント、又はポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体と同一のエピトープに結合する分子を提供する。一実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、非ヒト種由来のＣＣＲ８に結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、カニクイザルＣＣＲ８に結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、マウスＣＣＲ８に結合する。いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、カニクイザルＣＣＲ８及びヒトＣＣＲ８の両方に結合する。特定の実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は抗原結合フラグメントは、互いに１０倍以内の親和性でカニクイザルＣＣＲ８及びヒトＣＣＲ８に結合する。一実施形態では、抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体である。

図面の簡単な説明
ＫＰＣ－Ｍ５モデルにおける単剤のｍｕＣＬＤＮ１８．２二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子（BiTE^{（商標登録）}）分子（□）、ｍｕＣＬＤＮ１８．２ＢｉＴＥ分子／抗ＣＴＬＡ４の二重併用（△）、ｍｕＣＬＤＮ１８．２ＢｉＴＥ分子／抗ＰＤ－１／抗４－１ＢＢの三重併用（◇）、対照のＢｉＴＥ分子／抗ＰＤ－１／抗４－１ＢＢ／抗ＣＴＬＡ４の四重併用（〇）、又はｍｕＣＬＤＮ１８．２ＢｉＴＥ分子／抗ＰＤ－１／抗４－１ＢＢ／抗ＣＴＬＡ４の四重併用（▽）療法の抗腫瘍活性。ＭＣ３８同系マウスモデルにおけるＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体の抗腫瘍活性。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（破線）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（実線）の個々の腫瘍増殖を、それぞれ図２Ｃ及び２Ｂに示す。図２Ａは、各群の２４日目までの平均腫瘍体積を示す。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。ＭＣ３８同系マウスモデルにおけるＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体の抗腫瘍活性。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（破線）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（実線）の個々の腫瘍増殖を、それぞれ図２Ｃ及び２Ｂに示す。図２Ａは、各群の２４日目までの平均腫瘍体積を示す。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。ＭＣ３８同系マウスモデルにおけるＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体の抗腫瘍活性。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（破線）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（実線）の個々の腫瘍増殖を、それぞれ図２Ｃ及び２Ｂに示す。図２Ａは、各群の２４日目までの平均腫瘍体積を示す。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。ＭＣ３８腫瘍細胞を接種し、アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（破線）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（実線）のいずれかで治療したマウスの生存率。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（○）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（●）のいずれかで治療したＭＣ３８腫瘍担持マウスにおけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比。図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、及び４Ｄはそれぞれ、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ８／Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３＋）、及びＣＤ８／Ｔｒｅｇ（ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）を示す。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（○）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（●）のいずれかで治療したＭＣ３８腫瘍担持マウスにおけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比。図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、及び４Ｄはそれぞれ、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ８／Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３＋）、及びＣＤ８／Ｔｒｅｇ（ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）を示す。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（○）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（●）のいずれかで治療したＭＣ３８腫瘍担持マウスにおけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比。図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、及び４Ｄはそれぞれ、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ８／Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３＋）、及びＣＤ８／Ｔｒｅｇ（ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）を示す。アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ抗体（○）又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（●）のいずれかで治療したＭＣ３８腫瘍担持マウスにおけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比。図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、及び４Ｄはそれぞれ、Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの割合、ＣＤ８／Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘｐ３＋）、及びＣＤ８／Ｔｒｅｇ（ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）を示す。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するＢ１６Ｆ１０同系腫瘍モデルにおける、単剤療法として、及びＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子と併用したＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性。治療群の個々の腫瘍増殖をスパイダープロットとして表す（図５Ａ～５Ｄ）。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を４８日目まで評価した。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するＢ１６Ｆ１０同系腫瘍モデルにおける、単剤療法として、及びＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子と併用したＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性。治療群の個々の腫瘍増殖をスパイダープロットとして表す（図５Ａ～５Ｄ）。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を４８日目まで評価した。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するＢ１６Ｆ１０同系腫瘍モデルにおける、単剤療法として、及びＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子と併用したＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性。治療群の個々の腫瘍増殖をスパイダープロットとして表す（図５Ａ～５Ｄ）。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を４８日目まで評価した。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するＢ１６Ｆ１０同系腫瘍モデルにおける、単剤療法として、及びＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子と併用したＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性。治療群の個々の腫瘍増殖をスパイダープロットとして表す（図５Ａ～５Ｄ）。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を４８日目まで評価した。

詳細な説明
本開示は、抗ＣＣＲ８抗体並びに前記抗体の製造及び使用方法を提供する。本明細書に開示される抗ＣＣＲ８抗体は、１）腫瘍常在Ｔｒｅｇ細胞上のヒト及びカニクイザルＣＣＲ８と結合することができ、２）腫瘍常在Ｔｒｅｇ細胞の特異的枯渇をもたらし、３）容認できる薬物動態プロファイルを示し、及び／又は４）がんの治療に十分な効力を示す。本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、腫瘍常在Ｔｒｅｇを特異的に枯渇しない他のマーカーを標的化する他のＴｒｅｇ枯渇治療用分子と比較して、向上した安全性プロファイルを有する。加えて、抗ＣＣＲ８枯渇抗体による治療により、腫瘍におけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比の著しい増大がもたらされ、それによって抗腫瘍免疫の増強が促進された。

本発明は、ＣＣＲ８上の固有のエピトープに結合し、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害せず、従って中和抗体ではない抗ＣＣＲ８抗体を含む。この固有のエピトープへの結合は、異なるエピトープに結合する抗体と比較して、抗ＣＣＲ８抗体の高い親和性及び生物活性、また容認できる薬物動態プロファイルに寄与すると考えられている。

リガンド（ＣＣＬ１）の存在下で、ＣＣＲ８上の固有のエピトープに結合し、リガンド結合を阻害しない本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、インビトロで検証した最大濃度のリガンドであってもＡＤＣＣ活性を示す。これに対して、異なるエピトープに結合する（及びリガンド結合を阻害する）抗ＣＣＲ８抗体は、上昇させたＣＣＬ１レベルの存在下ではＡＤＣＣ活性が低下することを示している。従って、この固有のエピトープへの結合は、濃度を上昇させたリガンドの存在下であっても、本発明の抗ＣＣＲ８抗体のより良好な効力（ＡＤＣＣによる）に寄与すると考えられている。ＣＣＬ１は乳がんなどの腫瘍で高発現するものであるため（例えば、Kuehnemuth et al., BMC Cancer 18, Article number: 1278 (2018)を参照されたい）、濃度を上昇させたリガンドの存在下でＡＤＣＣ活性を示す抗ＣＣＲ８抗体は好ましいものである。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、アフコシル化され、増強されたＡＤＣＣ活性を示すことが好ましい。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントに想定される、Ｔｒｅｇを枯渇させるための更なる作用機序としては、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に連結された２つの重鎖（ＨＣ）と２つの軽鎖（ＬＣ）とを含む免疫グロブリン分子である。各ＬＣ及びＨＣのアミノ末端部分は、そこに含まれるＣＤＲを介して抗原を認識するのに主に関与する約１００～１２０個のアミノ酸の可変領域を含む。ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と称される、より保存的な領域によって点在されている。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端に対して、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。ＬＣの３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称し、ＨＣの３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲには、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分が含まれている。従って、抗体が特定の抗原と結合する機能的な能力は、６つのＣＤＲ内のアミノ酸残基によって大きく影響を受ける。本発明の抗体のＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインに対するアミノ酸の割り当ては、よく知られているＫａｂａｔ番号付け規則（Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)）に基づくものである。例えば、Chothia（Chothia et al., “Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins”, Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987); Al-Lazikani et al., “Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins”, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)）、及び／又はNorth （North et al., “A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations”, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011)）などの他の番号付け規則も使用され得ることが理解されよう。「抗ＣＣＲ８抗体」は、ＣＣＲ８に結合する抗体である。

本発明の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４であり得る。好ましくは、本発明の抗体はＩｇＧ１である。ＩｇＧ１抗体は、ＡＤＣＣを誘発することが知られている。本発明の抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であり得る。モノクローナル抗体の文脈において、「ヒト」及び「ヒト化」という用語は当業者によく知られている（Weiner L J, J. Immunother. 2006; 29: 1-9; Mallbris L, et al., J. Clin. Aesthet. Dermatol. 2016; 9: 13-15）。

加えて、本発明の抗体は、アフコシル化されていることが好ましい。Ｆｃに結合した二分岐の複合型オリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合性又はＣＤＣのエフェクター機能が変化することなくＡＤＣＣエフェクター機能が著しく増大した。Ｆｃ含有分子、例えば抗体のフコシル化を減少又は消失させる複数の方法が知られている。これらの方法には、ＦＵＴ８ノックアウト細胞株、変異型ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３、ラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０、ＦＵＴ８遺伝子に特異的な低分子干渉ＲＮＡを含む細胞株、及びα－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジα－マンノシダーゼＩＩとを共発現する細胞株を含む特定の哺乳動物細胞株における組換え発現が挙げられる。或いは、植物細胞、酵母、又は原核細胞、例えば、大腸菌（E.coli）などの非哺乳動物細胞にＦｃ含有分子を発現させてもよい。ジンクフィンガーヌクレアーゼは、アフコシル化抗体を生成する別の公知の方法である。例えば、Haryadi et al., Bioengineered 4:2, 90-94; March/April 2013; Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Pereira et al. mAbs 2018 Jul; 10(5): 693-711を参照されたい。

抗ＣＣＲ８抗体又はそのフラグメントはまた、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及び二重特異性抗体（同一の抗原上の異なる２つのエピトープに結合するか、又は異なる２つの抗原に結合する）を含む形式であることが想定される。

ｓｃＦｖ又はＦａｂは、公知の方法（例えば、Reader et al., Molec. Bio. 61, 801-815 (2019)を参照されたい）によって抗体に変換することができる。定常領域配列は、当技術分野において公知である。定常領域配列も本明細書に例示されており、例えば、ＬＣ及びＨＣ定常領域のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１０７９及び配列番号１０８０により与えられる。

特定の実施形態では、本発明の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヘテロ二量体抗体（本明細書では「ヘテロ免疫グロブリン」又は「ヘテロＩｇ」と互換的に使用される）であり、異なる２本の軽鎖と異なる２本の重鎖とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロＩｇは、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、２つのＦａｂが、それぞれＦｃ領域に対してＮ末端にある。いくつかの実施形態では、２つのＦａｂが、それぞれＦｃ領域に対してＣ末端にある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＦａｂが、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。

ヘテロ二量体抗体は、任意の免疫グロブリン定常領域を含み得る。本明細書で使用する場合、「定常領域」という用語は、抗体の可変領域以外の全てのドメインを指す。定常領域は、抗原の結合に直接関与するものではないが、種々のエフェクター機能を発揮する。上記で説明したように、抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、特定のアイソタイプ（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）並びにサブタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）に分けられる。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ又はラムダ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ又はラムダ軽鎖定常領域であってよく、これらは抗体の５つのアイソタイプ全てに見られるものである。

ヘテロ二量体抗体の重鎖定常領域は、例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ又はミュー重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ又はミュー重鎖定常領域であり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４免疫グロブリン由来の重鎖定常領域を含む。

ヘテロ二量体抗体の一例は、Duobody（商標）である。Duobodyは、例えば、国際公開第２００８／１１９３５３号、国際公開第２０１１／１３１７４６号、国際公開第２０１１／１４７９８６号、及び国際公開第２０１３／０６０８６７号、Labrijn A F et al., PNAS, 110(13): 5145-5150 (2013)、Gramer et al., mAbs, 5(6): 962-973 (2013)、及びLabrijn et al., Nature Protocols, 9(10): 2450-2463 (2014)に記載されているように、Duobody（商標）テクノロジープラットフォーム（ＧｅｎｍａｂＡ／Ｓ）によって作製することができる。この技術を用いて、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含有する第１の単一特異性抗体の半分と、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含有する第２の単一特異性抗体の半分とを組み合わせることができる。結果として生じたヘテロ二量体は、第１の抗体に由来する１本の重鎖及び１本の軽鎖を、第２の抗体に由来する１本の重鎖及び１本の軽鎖と対合して含有する。双方の単一特異性抗体が異なる抗原上の異なるエピトープを認識する場合、結果として生じるヘテロ二量体は多重特異性抗体である。

多重特異性抗体を生成する別の例示的な方法は、ノブ・イントゥ・ホール技術（Ridgway et al., Protein Eng., 9:617-621 (1996)；国際公開第２００６／０２８９３６号）によるものである。多重特異性抗体を作製するのに主な欠点となるＩｇ重鎖の誤対合の問題は、この技術では、ＩｇＧ内で重鎖の界面を形成する選択されたアミノ酸を変異させることによって低減される。２本の重鎖が直接相互作用する重鎖内の位置で、小さい側鎖を有するアミノ酸（ホール）が一方の重鎖の配列に導入され、大きい側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が他方の重鎖上の相互作用する残基の対応する位置に導入される。いくつかの例では、本開示の抗体は、多重特異性抗体を優先的に形成するように、２つのポリペプチド間の界面で相互作用する選択されたアミノ酸を変異させることにより重鎖が改変された免疫グロブリン鎖を有する。多重特異性抗体は、同一のサブクラス又は異なるサブクラスの免疫グロブリン鎖から構成され得る。

多重特異性抗体を生成する更に別の方法は、CrossMab技術である。CrossMabは、２つの完全長抗体の各半分で構成されるキメラ抗体である。この技術は、鎖を正しく対合させるために、次の２つの技術：（ｉ）２本の重鎖間を正確に対合するのに有利なノブ・イントゥ・ホールと、（ｉｉ）軽鎖の誤対合を回避する非対称性を導入するための、２つのＦａｂの一方の重鎖と軽鎖との間の交換とを組み合わせたものである。Ridgway et al., Protein Eng., 9:617-621 (1996); Schaefer et al., PNAS, 108:11187-11192 (2011)を参照されたい。CrossMabは、２つ以上の標的を標的化するために、又は１つの標的に対して２：１の構成のような二価性を導入するために、２つ以上の抗原結合ドメインを組み合わせることができる。

ヘテロＩｇ分子はまた、本発明の抗体に使用され得る特定の突然変異の組も開示する国際公開第２０２２／０４０４６６号に記載されているように、非標準的なジスルフィド結合及び非対称的なシステイン界面の生成を含み得る。特定の重鎖がそれと関連する軽鎖と会合するのを促進するために、重鎖及び軽鎖はいずれも相補的アミノ酸置換を含有し得る。本明細書で使用する場合、「相補的アミノ酸置換」とは、一方の鎖における正荷電アミノ酸への置換と他方の鎖における負荷電アミノ酸置換とが対合することを指す。例えば、重鎖は、荷電アミノ酸を導入するために少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、対応する軽鎖は、荷電アミノ酸を導入するために少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、重鎖に導入される荷電アミノ酸は、軽鎖に導入されるアミノ酸と反対の電荷を有する。１つ以上の正荷電残基（例えば、リシン、ヒスチジン、又はアルギニン）を第１の軽鎖（ＬＣ１）に導入することができ、１つ以上の負荷電残基（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を対応する重鎖（ＨＣ１）にＬＣ１／ＨＣ１の結合界面で導入することができるが、その一方で、１つ以上の負荷電残基（例えば、アスパラギン酸又はグルタミン酸）を第２の軽鎖（ＬＣ２）に導入することができ、１つ以上の正荷電残基（例えば、リシン、ヒスチジン、又はアルギニン）を対応する重鎖（ＨＣ２）にＬＣ２／ＨＣ２の結合界面で導入することができる。この静電相互作用により、界面で反対に荷電した残基同士（極性）が引き合うため、ＬＣ１がＨＣ１と対合し、ＬＣ２がＨＣ２と対合するように誘導されることとなる。界面で同じ荷電残基（極性）を有する重鎖／軽鎖対（例えば、ＬＣ１／ＨＣ２及びＬＣ２／ＨＣ１）は反発し、結果として所望されないＨＣ／ＬＣの対合が抑制されることとなる。

いくつかの実施形態では、ヘテロＩｇは、少なくとも１つの本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体フラグメントは、Ｆａｂである。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体フラグメントは、ｓｃＦａｂである。特定の実施形態では、抗ＣＣＲ８抗体フラグメントは、ｓｃＦｖである。例示的な抗ＣＣＲ８ｓｃＦｖアミノ酸配列としては、配列番号１０９３～１１２４のいずれか１つが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ヘテロＩｇには、ヘテロＩｇに結合された本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントが含まれる。前記抗ＣＣＲ８抗体フラグメントは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、又はｓｃＦａｂを含む、本明細書に記載されるようなあらゆる形式であり得る。このような結合は、Ｆｃ領域に対してＣ末端若しくはＮ末端、又はヘテロＩｇの別の結合ドメイン（例えば、Ｆａｂ）に対してＮ末端若しくはＣ末端のリンカーを介して行われ得る。いくつかの実施形態では、ヘテロＩｇは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントと、更にｓｃＦａｂ又はｓｃＦｖとを含む単鎖である、少なくとも１つの結合アームを含む。

本発明はまた、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントを含むＴ細胞エンゲージャー（「ＴＣＥ」）分子を想定する。このようなＴＣＥ分子は、好ましくは単鎖ＴＣＥ分子である。以下の配向：ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）、リンカー、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）を有する単鎖ＴＣＥ分子が想定される。一実施形態では、ＴＣＥ分子は更にｓｃＦｃを含み、以下の配向：ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）、リンカー、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）－リンカー－Ｆｃ１（ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）、リンカー、Ｆｃ２（ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３）を有する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。

本発明はまた、Ｎ末端からＣ末端に対して以下の配向：ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）－リンカー－ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）－リンカー－Ｆｃ１（ＣＨ２－ＣＨ３）－リンカー－Ｆｃ２（ＣＨ２－ＣＨ３）を有するＴＣＥ分子が想定される。一実施形態では、ＴＣＥ分子は、ＣＣＲ８及びＣＤ３と結合する。本発明はまた、Ｎ末端からＣ末端に対して以下の配向：ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ（ＶＬ－リンカー－ＶＨ）－リンカー－ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ－リンカー－ＶＬ）－リンカー－Ｆｃ１（ＣＨ２－ＣＨ３）－リンカー－Ｆｃ２（ＣＨ２－ＣＨ３）を有するＴＣＥ分子を提供する。一実施形態では、ＴＣＥ分子は、ＣＣＲ８及びＣＤ３と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。

本発明は、Ｎ末端からＣ末端に対して、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦａｂ（ＶＨ、ＣＨ１、リンカー、ＶＬ、Ｃκ又はＣλのいずれか）、リンカー、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）の配向を含むＴＣＥ分子が想定される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦａｂは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。

ｓｃＦＣは、ＣＨ２及びＣＨ３（Ｆｃ１）がリンカーを介してもう一方のＣＨ２及びＣＨ３（Ｆｃ２）と結合して連続的なタンパク鎖を形成する融合タンパク質であり、リンカーは、タンパク鎖がそれ自体で再び折り畳まれることができるのに十分な長さを持つ。

「単鎖抗原結合フラグメント」（「ｓｃＦａｂ」）は、ＶＨ及びＣＨ１がリンカーを介してＶＬ及びＣκと結合して連続的なタンパク鎖を形成する融合タンパク質であり、リンカーは、タンパク鎖がそれ自体で再び折り畳まれ、一価の抗原結合部位を形成することができるのに十分な長さを持つ。リンカーは、例えば、（Ｇ４Ｓ）６、（Ｇ４Ｓ）７、又は（Ｇ４Ｓ）８リンカーであり得る。

ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、及び／又はｓｃＦｃはまた、システインクランプを有し得る。「システインクランプ」とは、典型的には、特定の位置の既存のアミノ酸を置き換えることにより、システインを特定の位置のポリペプチドドメインに導入することに関し、これにより、特定の位置に導入されたシステインを同様に有する別のポリペプチドドメインと接近したときに、この２つのドメイン間にジスルフィド結合（「システインクランプ」）を形成することができる。特定の実施形態では、ｓｃＦＣは、ＣＨ２ドメインの両方にまたがるジスルフィド結合を生じさせる、少なくとも１つのシステインクランプを含む。更なる特定の実施形態では、ｓｃＦＣは、ＣＨ２ドメインの両方にまたがるジスルフィド結合を生じさせる、少なくとも２つのシステインクランプを含む。他の実施形態では、結合構築物のＶＨ及びＶＬドメインは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にジスルフィド結合の形成を生じさせるためにシステインクランプを含み得る。これらのシステインクランプにより、抗原結合構成においてＶＨ及びＶＬドメインが安定化することになる。

システインクランプは天然に存在するものであってもよく、又はシステインを含むように改変された分子の結果として生じるものであってもよい。例えば、ｓｃＦａｂは、重鎖定常ドメインと軽鎖定常ドメインとの間に天然のシステインクランプを有し得る。ｓｃＦａｂはまた、重鎖定常ドメインと軽鎖定常ドメインとの間に天然のシステインクランプを有してもよく、重鎖可変領域の残基４４及び軽鎖可変領域の残基１００のシステインの間に改変されたシステインクランプを有してもよい。加えて、抗標的ｓｃＦｖはまた、重鎖可変領域の残基４４及び軽鎖可変領域の残基１００のシステインの間にシステインクランプを含み得るが、その一方で、抗ＣＤ３ｓｃＦｖは、改変されたシステインクランプを含まない。ｓｃＦＣは、ヒンジシステインクランプ、天然のＣＨ２／ＣＨ３システインクランプ、及び／又は改変されたＣＨ２システインクランプ（鎖内）を含み得る。

抗体由来の抗原結合フラグメントは、例えば、抗体のタンパク質分解性の加水分解によって、例えば、従来の方法による全抗体のペプシン又はパパイン消化によって得ることができる。例として、抗体をペプシンにより酵素的開裂させることによって抗体フラグメントを生成し、Ｆ（ａｂ’）２と称される５Ｓフラグメントを提供することができる。このフラグメントをチオール還元剤を使用して更に切断し、３．５ＳＦａｂ’１価フラグメントを生成することができる。任意選択により、切断反応は、ジスルフィド結合の切断によって生じるスルフヒドリル基にブロック基を使用して実施することができる。別の方法として、パパインを使用した酵素的切断により、２つの１価Ｆａｂフラグメント及びＦｃフラグメントが直接生成される。これらの方法は、例えば、Goldenberg、米国特許第４，３３１，６４７号、Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys. 89:230, 1960; Porter, Biochem. J. 73:119, 1959; Edelman et al., in Methods in Enzymology 1:422 (Academic Press 1967); and by Andrews, S. M. and Titus, J. A. in Current Protocols in Immunology (Coligan J. E., et al., eds), John Wiley & Sons, New York (2003). pages 2.8.1-2.8.10 and 2.10A.1-2.10A.5に記載されている。１価軽鎖－重鎖フラグメント（Ｆｄ）を形成するために重鎖を分離するか、フラグメントを更に切断するか、又は他の酵素的技術、化学的技術若しくは遺伝子技術などの抗体を切断するための他の方法も、フラグメントがインタクト抗体によって認識される抗原に結合する限り使用され得る。

抗体フラグメントはまた、任意の合成タンパク質であってもよく、又は遺伝子改変タンパク質であってもよい。例えば、抗体フラグメントとしては、軽鎖可変領域を含む単離フラグメント、重鎖及び軽鎖可変領域を含む「Ｆｖ」フラグメント、並びに軽鎖及び重鎖可変領域がペプチドリンカーで連結された組換え単鎖ポリペプチド分子（ｓｃＦｖタンパク質）が挙げられる。

抗体フラグメントの別の形態は、抗体の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むペプチドである。ＣＤＲ（「最小認識単位」、又は「超可変領域」とも称される）は、目的のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドを構築することによって得ることができる。このようなポリヌクレオチドは、例えば、抗体産生細胞のｍＲＮＡを鋳型として使用して可変領域を合成するポリメラーゼ連鎖反応を使用することによって調製される（例えば、Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106, 1991; Courtenay-Luck, “Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page 166 (Cambridge University Press 1995)；及びWard et al., “Genetic Manipulation and Expression of Antibodies,” in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), page 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)を参照されたい）。

本発明の抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＣＣＲ８に結合する。好ましくは、本発明の抗原結合フラグメントは、配列番号８２のアミノ酸残基を含むか又はそれからなるエピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する。特に、本発明の抗原結合フラグメントは、ヒトＣＣＲ８に結合し、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない。

最も一般的には、本明細書に記載されるようなＴ細胞エンゲージャー（「ＴＣＥ」）分子は、異なる２つの抗原に結合することができる単鎖ポリペプチドを含む。「ＴＣＥ分子」は、「ＢｉＴＥ分子」と互換的に使用され得る。ＢｉＴＥ分子は、二重特異性である限り、ｓｃＦｖ又はｓｃＦａｂを含むことができ、２つの標的（標的抗原（ここではＣＣＲ８）及びＣＤ３）に同時に結合することを意味する。ＴＣＥ分子は、抗原結合分子である。本発明のＴＣＥ分子は、標的（例えば、腫瘍又は標的抗原；ＣＣＲ８）と結合するｓｃＦａｂと、ＣＤ３と結合するｓｃＦｖとを含み得る。このような分子は、Ｎ末端からＣ末端に対して、ｓｃＦａｂ（ＶＨ、ＣＨ１、リンカー、ＶＬ、Ｃκ又はＣλのいずれか）、リンカー、ｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）の配向を有し得る。或いは、このような分子は、Ｎ末端からＣ末端に対して、ｓｃＦａｂ（ＶＬ、Ｃκ又はＣλのいずれか、リンカー、ＶＨ、ＣＨ１）、リンカー、ｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）の配向を有し得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦａｂは、ＣＣＲ８に結合する。特定の実施形態では、ＴＣＥ分子は、Ｃκを含む。このようなＴＣＥ分子は、Ｎ末端からＣ末端に対して以下の配向：ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）、リンカー、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖ（ＶＨ、リンカー、ＶＬ）を有し得る。このようないくつかの実施形態では、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖ又はｓｃＦａｂは、本発明の抗ＣＣＲ８抗体フラグメントである。

本発明のＴＣＥ分子はまた、半減期延長（ＨＬＥ）部分を有し得る。ＨＬＥ部位により、本発明のＴＣＥ分子のインビボ半減期を延長することができる。半減期延長部分の非限定的な例としては、Ｆｃポリペプチド、単鎖Ｆｃポリペプチド（ｓｃＦｃ）、アルブミン、アルブミンフラグメント、アルブミン若しくは新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合する部分、アルブミン若しくはそのフラグメントに結合するように改変されたフィブロネクチンの誘導体、血清半減期を増大させることができるペプチド、単一ドメインタンパク質フラグメント、又は他のポリペプチドが挙げられる。他の実施形態では、半減期延長部分は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリペプチドではない分子であり得る。いくつかの実施形態では、ＨＬＥは、単鎖Ｆｃ（ｓｃＦｃ）である。

「核酸配列」は、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマー、すなわちポリヌクレオチドを包含することが意図され、一本鎖又は二本鎖であってよく、非天然又は改変されたヌクレオチドを含み得る。「核酸」、「核酸分子」、「核酸配列」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書では、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）又はデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）のいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指すために互換的に使用され得る。これらの用語は、分子の一次構造を指すものであり、従って、二本鎖ＤＮＡ及び一本鎖ＤＮＡ、並びに二本鎖ＲＮＡ及び一本鎖ＲＮＡが含まれる。この用語には、ヌクレオチド類似体から作製されるＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの類似体、並びに、限定されるものではないが、メチル化及び／又は末端保護されたポリヌクレオチドなどの修飾されたポリヌクレオチドが等価物として含まれる。

本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗ＣＣＲ８抗体のポリペプチド（例えば、重鎖、軽鎖、可変重鎖、及び可変軽鎖）のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする、天然に存在しないポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子である。

重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを作動可能に連結することにより、ＨＣＶＲ領域をコードする単離されたＤＮＡを完全長の重鎖遺伝子に変換することができる。ヒトと同様に、他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において公知である。これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。

軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを作動可能に連結することにより、ＬＣＶＲ領域をコードする単離されたＤＮＡを完全長の軽鎖遺伝子に変換することができる。ヒトと同様に、他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において公知である。これらの領域を含むＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ又はラムダ定常領域であり得る。いくつかの実施形態では、軽鎖定常領域は、カッパ定常領域である。

「コードしている」又は「コードする」という用語は、１つ以上のアミノ酸をコードするポリヌクレオチド配列を指す。この用語は、開始コドン又は終止コドンを必要としない。本発明は、抗ＣＣＲ８抗体のポリペプチド配列をコードする核酸分子を包含する。

本発明のポリヌクレオチドは、配列を発現制御配列に作動可能に連結した後に、宿主細胞で発現させることができる。発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、又は宿主染色体ＤＮＡの不可欠部分としてのいずれかで、宿主生物内で複製することができる。通常、発現ベクターには、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたこれらの細胞を検出することができるように、選択マーカー、例えばテトラサイクリン、ネオマイシン、及びジヒドロ葉酸レダクターゼが含まれる。

ポリペプチドの発現を促進する条件下で形質転換細胞を培養することができ、このポリペプチドは従来のタンパク質精製手順によって回収することができる。本明細書で使用することが想定されるポリペプチドは、内在性物質の混入を実質的に含まない、実質的に均質な組換え哺乳動物のポリペプチドを含む。本発明の抗ＣＣＲ８抗体をコードする核酸を含有する細胞には、ハイブリドーマも含まれる。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、所望の使用又は機能に適した任意の長さであってよく、１つ以上の更なる配列、例えば調節配列を含んでもよく、及び／又はより大型の核酸、例えばベクターの一部であってよい。当業者であれば、遺伝暗号の縮重によって、本明細書で開示されるポリペプチド配列のそれぞれが多数の他の核酸配列によってコードされていることが理解されよう。また、突然変異も、コードするポリペプチドの生物学的活性を大きく変えることなく、核酸に導入することができる。例えば、非必須アミノ酸残基にアミノ酸置換を生じさせるヌクレオチド置換を行うことができる。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、抗ＣＣＲ８抗体が同一の又はより良好な所望の結合特異性（例えばＣＣＲ８への結合）を保持する限り、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し得るということが理解されよう。従って、抗ＣＣＲ８抗体に対する修飾が本発明の範囲内に包含される。このような修飾は、結合構築物の所望の結合能力を損なうことのない、保存的又は非保存的であり得るアミノ酸置換を含み得る。保存的アミノ酸置換は、天然に存在しないアミノ酸残基を包含してもよく、これらは通常、生体系における合成によってではなく、化学的なペプチド合成によって組み込まれる。これらには、ペプチド模倣体及びアミノ酸部分が逆転又は反転した他の形態が含まれる。保存的アミノ酸置換には、その位置におけるアミノ酸残基の極性又は電荷にほとんど又は全く影響しないような、標準的な残基による天然アミノ酸残基の置換も含まれ得る。

ヒトＣＣＲ８には、野生型ヒトＣＣＲ８配列、並びにその変異体及びアイソフォームが含まれる。ヒトＣＣＲ８のアミノ酸配列は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。核酸配列に関して本明細書で使用する場合、「変異体」という用語は、（ｉ）参照されるヌクレオチド配列の一部若しくはフラグメント、（ｉｉ）参照されるヌクレオチド配列若しくはその一部の相補体、（ｉｉｉ）参照される核酸若しくはその相補体と実質的に同一である核酸、又は（ｉｖ）参照される核酸、その相補体、若しくはそれと実質的に同一である配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸を意味する。ペプチド又はポリペプチドに関する「変異体」という用語は、本明細書で使用する場合、アミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換によってアミノ酸配列内の参照ペプチド又はポリペプチドが異なるが、参照ペプチド又はポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドを指す。変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照されるタンパク質と実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味し得る。「アイソフォーム」という用語は、本明細書では、ポリペプチド又はタンパク質の変異体を指すものとして使用され得る。典型的には、タンパク質のアイソフォームは、単一の遺伝子又は遺伝子ファミリーに由来し、遺伝的差異の結果である、極めて類似した一連のタンパク質のメンバーである。あるタンパク質のアイソフォームが同一又は類似した生物学的機能を示す一方で、あるアイソフォームは独自の機能を有する。アイソフォームは、単一の遺伝子の選択的スプライシング、可変プロモーターの使用、又は他の転写後修飾から生成され得る。

変異体は、全遺伝子配列又はそのフラグメントの全長にわたって実質的に同一な核酸配列であり得る。核酸配列は、遺伝子配列又はそのフラグメントの全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり得る。他の実施形態では、変異体は、アミノ酸配列又はそのフラグメントの全長にわたって実質的に同一なアミノ酸配列であり得る。アミノ酸配列は、アミノ酸配列又はそのフラグメントの全長にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり得る。

カニクイザルＣＣＲ８のアミノ酸配列は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。

本発明の抗体は、哺乳動物細胞で容易に産生することができ、その非限定的な例としては、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞又はＣＯＳ細胞が挙げられる。宿主細胞は、当技術分野においてよく知られた技法を使用して培養される。

目的のポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド及び発現制御配列）を含むベクターは、細胞宿主の種類に応じて異なる、よく知られた方法によって宿主細胞に導入することができる。ベクターの例としては、限定されるものではないが、プラスミド、ウイルスベクター、非エピソーム哺乳動物ベクター及び発現ベクター、例えば、組換え発現ベクターが挙げられる。

本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞に核酸を発現させるのに好適な形態の本発明の核酸を含み得る。組換え発現ベクターは、発現のために使用される宿主細胞に基づいて選択された１つ以上の調節配列を含み、この調節配列は、発現される核酸配列に作動可能に連結されている。調節配列としては、多くの種類の宿主細胞にヌクレオチド配列の恒常的発現を誘導するもの（例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサー、ラウス肉腫ウイルスプロモーター及びサイトメガロウイルスプロモーター）、特定の宿主細胞だけにヌクレオチド配列の発現を誘導するもの（例えば組織特異的調節配列であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれるVoss et al., 1986, Trends Biochem. Sci. 11:287, Maniatis et al., 1987, Science 236:1237を参照されたい）、並びに特定の処理又は条件に応じてヌクレオチド配列の誘導性発現を誘導するもの（例えば、哺乳動物細胞におけるメタロチオネイン（metallothionin）プロモーター及び原核生物系と真核生物系の両方におけるｔｅｔ応答性プロモーター及び／又はストレプトマイシン応答性プロモーター（同文献を参照されたい）が挙げられる。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどのような要因に依存する可能性があることが、当業者によって理解されよう。本発明の発現ベクターを宿主細胞に導入することにより、本明細書に記載されるような核酸によってコードされる融合タンパク質又はペプチドを含むタンパク質又はペプチドを産生することができる。

典型的には、宿主細胞のいずれかに使用される発現ベクターは、プラスミドを維持するための配列、及び外来性ヌクレオチド配列をクローニングして発現させるための配列を含有する。まとめて「隣接配列」と称されるこのような配列としては、特定の実施形態では、典型的には以下のヌクレオチド配列：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及びアクセプタースプライス部位を含有する完全なイントロン配列、ポリペプチドを分泌するためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現させるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、並びに選択マーカーエレメントの１つ以上が挙げられる。リーダー配列は、配列番号５５８（ａｔｇｇａｃａｔｇａｇａｇｔｇｃｃｔｇｃａｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａｔｇｃ）によってコードされる配列番号５５７（ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ）のアミノ酸配列を含み得る。リーダー配列は、配列番号５６０（ａｔｇｇｃｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｃａｃｃｃｔｃｃｔｃａｃｔｃａｇｇｇｃａｃａｇｇｇｔｃｃｔｇｇｇｃｃ）によってコードされる配列番号５５９（ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡ）のアミノ酸配列を含み得る。本発明は、リーダー配列を含まない抗体のタンパク質配列を想定する。

本発明はまた、抗体のＨＣのＣ末端リシン残基のクリッピングを有する本発明の抗ＣＣＲ８抗体を想定する。Ｃ末端リシン残基を欠く抗体のＨＣアミノ酸配列を含む抗ＣＣＲ８抗体が想定される。

抗体を含むがこれらに限定されないタンパク質を精製するために、様々なタンパク質精製方法を利用してもよく、このような方法は当技術分野において公知である。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、よく知られた方法によって投与用に生合成、精製、及び製剤化することができる。例えば、ＨＥＫ２９３又はＣＨＯなどの適切な宿主細胞を、２つのベクターを使用する場合は所定のＨＣ：ＬＣベクター比を使用するか、又は重鎖と軽鎖の両方をコードする単一のベクター系を使用して、抗体を分泌させるための発現系により一過性に又は安定的にトランスフェクトする。これらの一般に使用される宿主細胞から抗体を発現及び分泌させるのに好適なベクターは、よく知られている。抗体を発現及び分泌させた後、培地を清澄化して細胞を除去し、一般に使用される多くの技法のいずれかを使用して、清澄化した培地を精製する。例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）などの緩衝液で平衡化されているプロテインＡ又はＧカラムに、培地を加えてもよい。カラムを洗浄し、非特異的結合成分を除去する。例えば、ｐＨ勾配（０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．８から０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ２．５など）によって結合抗体を溶出する。例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥによって抗体画分を検出し、次いでプールする。更なる精製は、使用目的に応じて任意で行う。一般的な技法を使用して、抗体を濃縮及び／又は滅菌濾過してもよい。宿主細胞及び増殖培地成分、並びに抗体の可溶性凝集体及び多量体などの抗体以外の他の物質を、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、又はハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技法によって効率的に低減又は除去してもよい。これらのクロマトグラフィー工程後の抗体の純度は、典型的には９５％超である。生成物を－７０℃で冷凍してもよく、又は凍結乾燥してもよい。

例示的な態様では、本発明の抗体は、配列番号３５４、３６４、３７４、３８４、３９４、４０４、４１４、４２４、４３４、４４４、４５４、４６４、４７４、４８４、４９４、５０４、５１４、５２４、５３４、５４４、５５４、１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、又は１１６０のようなＣ末端リシンを含むＨＣを含む。代替的な態様では、抗体は、配列番号５７３～５９２又は配列番号１２３８～１２５４のようなＣ末端リシンを含まないＨＣを含む。加えて、ＨＣのＮ末端グルタミン及び／又はＮ末端グルタミン酸を、ピログルタミン酸に変換してもよい。本発明の抗体には、いずれかの形態が想定される。

同様に、例示的な態様では、抗ＰＤ－１抗体は、例えば、配列番号４１のようなＣ末端リシンを含む重鎖を含む。代替的な態様では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｃ末端リシンを含まない配列番号６３６の重鎖を含む。他の例示的な態様では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｃ末端リシンを含む重鎖を含む。代替的な態様では、抗ＰＤ－１抗体は、Ｃ末端リシンを含まない重鎖を含む。

本発明の抗ＣＣＲ８抗体、又はそれを含む医薬組成物は、非経口経路によって投与してもよく、その非限定的な例は皮下投与及び静脈内投与である。他の実行可能な投与経路は、筋肉内、動脈内、病巣内、及び腹膜ボーラス注射である。抗ＣＣＲ８抗体は、注入、例えば静脈内注入又は皮下注入によって投与することもできる。本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に、単回用量又は複数用量で患者に投与され得る。任意選択により、組成物は更に、１つ以上の生理学的活性剤を含む。本発明の医薬組成物は、当技術分野においてよく知られた方法（例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press）によって調製することができ、本明細書で開示されるような抗体及び１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。

本明細書において互換的に用いられるような、「治療」及び／又は「治療すること」及び／又は「治療する」は、本明細書に記載される障害の進行を遅延、妨害、阻止、制御、停止、又は逆転させる可能性のある全てのプロセスを指すことが意図されるが、必ずしも全ての障害の症状を完全に排除することを示すものではない。治療には、本発明の抗ＣＣＲ８抗体の活性から恩恵を受け、（ａ）疾患の更なる進行を阻害すること；及び（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち疾患若しくは障害の退行を引き起こすこと、又はその症状若しくは合併症を緩和することを含む、ヒトの疾患又は状態を治療するための本発明の抗ＣＣＲ８抗体の投与が含まれる。

治療有効量（又は用量）の本発明の抗ＣＣＲ８抗体を投与することができる。本明細書で使用する場合、「有効量」は、研究者、医師、又は他の臨床医によって求められる、組織、系、動物、哺乳動物、又はヒトに生物学的若しくは医学的応答を誘発するか、又は所望の治療効果を誘発するこのような抗体を含む本発明の抗ＣＣＲ８抗体又は医薬組成物の量を意味する。有効量の抗体は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体に所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に応じて変動し得る。有効量はまた、抗体のあらゆる有毒又は有害な影響を、治療的に有益な効果が上回る量である。このような利益には、がんの徴候又は症状の改善も含まれる。有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体は、単回用量又は複数用量で投与され得る。患者に対する有効量を決定するには、患者の体格（例えば、体重又は質量）、体表面積、年齢、及び一般的な健康状態；関与する特定の疾患又は障害；疾患又は障害の程度、又は合併症、又は重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与方法；投与される製剤のバイオアベイラビリティ特性；選択される投与レジメン；併用薬の使用；並びに医師に公知の他の関連する状況を含むがこれらに限定されない多くの要因が、担当医師によって考慮される。

用量、投与頻度、製剤、並びにＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニスト、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、及び／又は免疫細胞共刺激受容体のアゴニストの有効量は、本明細書に記載されるように決定することもできる。

本発明の方法で使用するのに好適なＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体としては、アテゾリズマブ、アベルマブ、又はデュルバルマブが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法で使用するのに好適なＰＤ－１アンタゴニスト抗体の例としては、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ピジリズマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、チスレリズマブ、トリパリマブ、ドスタルリマブ、抗体２０Ｃ１．００６、ゼルバリマブ、抗体２０Ａ２．００３、抗体２２Ｄ４．００６、又は抗体２２Ｄ４．０１７、及び国際公開第２０１９／１４０１９６号に記載されるＰＤ－１アンタゴニスト抗体のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。このような方法には、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体及びＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト抗体又はＰＤ－１アンタゴニスト抗体を投与することを含む、患者のがんを治療する方法が含まれる。また、このような方法には、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、並びに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうちの１つ以上を患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法が含まれる。

二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、結合ドメインに由来する２つの柔軟に連結された抗体から作製された組換えタンパク質構築物である。「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子」は、「BiTE^{（商標登録）}分子」と互換的に使用され得る。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーの一方の結合ドメインは、標的細胞上の選択された腫瘍関連表面抗原に特異的であり、第２の結合ドメインは、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体複合体のサブユニットであるＣＤ３に特異的である。それらの特別な設計により、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は、Ｔ細胞を標的細胞と一時的に結び付け、同時に標的細胞に対するＴ細胞の固有の細胞溶解能を強力に活性化するのに比類なく適している（Yang, Fa; Wen, Weihong; Qin, Weijun (2016). “Bispecific Antibodies as a Development Platform for New Concepts and Treatment Strategies”. International Journal of Molecular Sciences. 18 (1): 48 (2016)）。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子は二重特異性であり、同時に２つの標的（標的抗原及びＣＤ３）に結合することを意味する。ＣＤ３に結合する例示的なｓｃＦｖの配列としては、Ｉ２ＥとＩ２Ｃが挙げられ、表１５に記載されている。本発明の方法で使用するのに好適な二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子としては、表１５に与えられる二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子が挙げられるが、これらに限定されない。

ＣＤ３結合ドメインであるＩ２Ｃは、配列番号８７～９５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＶＨ、ＶＬ、及びＶＨ－ＶＬアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＣＤ３結合ドメインであるＩ２Ｅは、配列番号９６～１０３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＶＨ、及びＶＬアミノ酸配列をそれぞれ含む。ＣＤ３３Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１０４～１１８のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＥＧＦＲｖＩＩＩＴ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１１９～１２９のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＭＳＬＮＴ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１３０～１４１のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＤＨ１９Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１４２～１５９のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＦＬＴ３Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１６０～１７０のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＤＬＬ３Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１７１～１８１のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＤ１９Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１８２～１９１のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＢＣＭＡＴ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号１９２～２０２のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＰＳＭＡＴ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号２０３～２４０のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＤ７０Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号２４１～２５０のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＬＤＮ１８．２Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号２５１～２６６のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＭＵＣ１７Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号２６７～３０２のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＤＨ３Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号３０３～３１３のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。ＣＤ１９Ｔ細胞エンゲージャー分子の一例は、配列番号３１４～３３２のＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬ領域、及び二重特異性単鎖分子のアミノ酸配列を含むものである。

本発明の方法は、有効量の本発明の抗ＣＣＲ８抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を投与することを含む、患者のがんを治療する方法を含む。また、このような方法は、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、並びに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうちの１つ以上を患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法を含む。

免疫細胞共刺激受容体のアゴニストとは、免疫細胞（例えば活性化Ｔ細胞）上の共刺激受容体に結合し、受容体の活性を促進する分子のことである。共刺激受容体の例としては、ＣＤ２、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ）、及びＩＣＯＳが挙げられる。

実施例
実施例１：ＣＣＲ８特異性
宿主ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３Ｔ細胞にフローサイトメトリーを用いて抗体の結合特異性を評価するために、トランスフェクト細胞を使用した。製造業者の指示に従って、ヒトＣＣＲ８（配列番号２１）、Ａ２７Ｇ点変異を有するヒトＣＣＲ８（配列番号２３）、マウスＣＣＲ８（配列番号２４）、ラットＣＣＲ８（配列番号２５）、ヒトＣＣＲ４（配列番号２６）、又は対照発現ベクター、Gibco^（商標）Opti-MEM（登録商標）培地（Gibco）、及び２９３Fectin^（商標）試薬（Invitrogen）を使用したトランスフェクションにより、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にタンパク質を発現させた。内在的に発現されたＣＣＲ８に対する特異性を測定するために、ヒトＴ細胞リンパ腫（ＨｕＴ７８）細胞株も使用した。

トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞（トランスフェクションの２４時間後）又はＨｕＴ７８細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ウシ胎仔血清）に再懸濁し、９６ウェルプレートに加えた。対照抗体である４３３Ｈ（BD Biosciences）若しくはＬ２６３Ｇ８（BioLegend）、抗体１のＩｇＧ２、又は抗体２のＩｇＧ２を含むハイブリドーマ上清試料を５．０μｇ／ｍｌの最終濃度で加え、細胞を再懸濁し、４℃で１時間インキュベートした。プレートをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、遠心分離して細胞をペレット化し、上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、結合していない抗体を除去した。

５．０μｇ／ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液中で作製した（Ｆｃγフラグメントに特異的な）Alexa Fluor 647ヤギ抗ヒト又はラットＩｇＧ二次抗体（Jackson ImmunoResearch）を各ウェルに加え、細胞を再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。プレートをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、遠心分離して細胞をペレット化し、上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、結合していない二次抗体を除去した。試料をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、Intellicyt HyperCytオートサンプラーを用いてIntelliCyt（登録商標）iQue又はBD Accuri^（商標）フローサイトメーターのいずれかで読み取った。免疫動物の３つのコホートから導き出されたデータを表２に示す。

これらのデータは、抗体１のＩｇＧ２又は抗体２のＩｇＧ２を含むハイブリドーマ上清が、Ａ２７Ｇ突然変異を有するヒトＣＣＲ８を含むヒトＣＣＲ８、ラット、及びマウスＣＣＲ８に結合したことを示している。試験された上清中の抗体のいずれもが、対照発現ベクターでトランスフェクトしたヒトＣＣＲ４又は２９３Ｔ細胞には結合しなかった。

実施例２：ヒト及びカニクイザル制御性Ｔ細胞への抗体結合
初代ヒト及びカニクイザル制御性Ｔ細胞（ヒト又はカニクイザルＴ－ｒｅｇ）により発現させた内在性ＣＣＲ８に対する抗ＣＣＲ８抗体の結合を、フローサイトメトリーで評価した。新たに単離したヒト（ｎ＝３）及びカニクイザル（Ｎ＝２）の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ヒトＦｃＢｌｏｃｋの存在下、２０％の最終濃度の抗ＣＣＲ８ハイブリドーマ培養上清と４℃で１時間インキュベートした。細胞から一次抗体を洗浄し、二次抗ヒト又は抗ラットＩｇＧＦｃ抗体、及びヒト／カニクイザル交差反応性抗ＣＤ４／抗ＣＤ２５／抗ＣＤ１２７抗体のカクテルを加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターを用いて２００，０００イベントを収集し、ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＣＤ１２７－をゲーティングした生存細胞上で結合を検出した。陽性細胞の割合は、検証中の抗体を含有するハイブリドーマ培養上清により染色されたヒト又はカニクイザルＴｒｅｇの割合を示す。対照抗体である４３３Ｈを精製し、２０μｇ／ｍｌの濃度で使用した。結果を表３に示す。

これらのデータは、本発明の抗体を含有するハイブリドーマ上清が、初代Ｔ細胞上に発現させた内在的に発現されたヒト及びカニクイザルＣＣＲ８に結合することを示している。

実施例３：エピトープビニング
抗ＣＣＲ８抗体のエピトープマッピングを可能にするため、ヒトＣＣＲ８に結合したハイブリドーマ上清を、ＣＣＲ８（配列番号３１）の１～３５アミノ酸のＮ末端部分から生成された５つのビオチン化Ｎ末端ＣＣＲ８ペプチドとの結合について試験した。５つのペプチドの各々は１２アミノ酸長であり、６つのアミノ酸が重複していた。ペプチド１、ペプチド２、ペプチド３、ペプチド４、及びペプチド５のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３１のアミノ酸１～１２（配列番号８２）、７～１８（配列番号８５）、１３～２４（配列番号８３）、１９～３０（配列番号８６）、及び２５～３５（配列番号８４）を含む。

ビオチン化ヒトＣＣＲ８ペプチドを、５０～１００ｎｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度で、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ウシ胎仔血清）中のストレプトアビジンポリスチレンビーズ（Spherotech）上に捕捉し、室温で３０分間インキュベートした。ビーズをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄して、結合していないタンパク質を除去し、遠心分離してビーズをペレット化し、再懸濁してStabilGuard（SurModics）中で共にプールした。プールしたビオチン化ヒトＣＣＲ８をコートしたビーズを、最終抗体濃度が５．０μｇ／ｍＬとなるように９６ウェルプレート中のハイブリドーマ上清試料に加え、次いで室温で１時間インキュベートした。

プレートをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、遠心分離してビーズをペレット化し、上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、結合していない抗体を除去した。５．０μｇ／ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液中で作製した（Ｆｃγフラグメントに特異的な）ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ヤギ抗ヒト又はラットＩｇＧ二次抗体（Jackson ImmunoResearch）を各ウェルに加え、ビーズと共に再懸濁し、室温で１５分間インキュベートした。プレートをＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、遠心分離してビーズをペレット化し、上清を除去し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、結合していない二次抗体を除去した。次いで、試料をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、IntelliCyt（登録商標）ｉＱｕｅフローサイトメーターのいずれかで読み取った。

結果を表４に示す。データは、特異的ペプチドでコートしたビーズに対する結合の幾何平均を、陰性対照ペプチド（無関係な配列を有するペプチド）でコートしたビーズに対する結合の幾何平均で除算した比率として示されている。２を上回る値は、結合性があることを示している。

興味深いことに、抗体１のＩｇＧ２を含有するハイブリドーマ上清は、最もＮ末端の領域（１～１２）に結合しており、このことは、抗体１のＩｇＧ２がＣＣＲ８上の固有のエピトープに結合することを示唆し、抗体１のＩｇＧ２の高い親和性及び生物活性に寄与するものと考えられる。

実施例４：エピトープクラスタリング
ヒトＣＣＲ８の細胞外ドメインは、３つのループと３５アミノ酸のＮ末端ペプチドとを含む。エピトープマッピングのために、ヒトＣＣＲ８のＮ末端ペプチド（Ｐ＿１－３５（配列番号３１）と表記する）を、３つの連続セグメントに分割した（Ｐ＿１－１２（配列番号８２）、Ｐ＿１３－２４（配列番号８３）、及びＰ＿２５－３５（配列番号８４）と表記する）。連続セグメントの隣接するＮ末端又はＣ末端領域をカバーするために、追加の２つの重複するフラグメント（Ｐ＿７－１８（配列番号８５）及びＰ＿１９－３０（配列番号８６）と表記する）を作製した。上記に記載されるヒトＣＣＲ８の完全長のＮ末端ペプチド及び全ての切断されたＮ末端ペプチドのＣ末端の端部に、Ｇ４Ｓリンカーを介してＶ５タグを融合した。Ｖ５タグに続いて、更にＧ４Ｓリンカーを介してニワトリアルブミンを融合し、その後ＦＬＡＧタグ、インビボでビオチン化するためのＢＡＰ（ビオチン受容体タンパク質）、及びＨ３Ｇが続き、それぞれをＳＧリンカーを介して融合した。上記に記載される全ての構築物をｐＥＦＤＨＦＲベクターにクローニングし、ＨＥＫ２９３細胞に一過性にトランスフェクトした。

１００ｍｌのFreeStyle発現培地（Gibco １２３３８－０１８）にＨＥＫ２９３細胞（１×１０^８）を再懸濁し、製造業者のプロトコールに従って、４ｍｌのOptiMEM（Gibco ３１９８５－０４７）、１００μｌの２９３ｆｅｃｔｉｎ（Invitrogen １２３４７－０１９）、及び完全長又は切断されたＮ末端のいずれかのＣＣＲ８構築物をコードする５０μｇのＤＮＡでトランスフェクトした。細胞を、８％ＣＯ^２による加湿インキュベーター内で、１３０ｒｐｍで７２時間、FreeStyle発現培地中で増殖させた。細胞を１，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を採取した。１０ｍｌのトランスフェクト細胞の各々の上清、又は９ｍｌの陰性対照としてのＨＥＫ２９３細胞の上清を、Amicon Ultra-15チューブ（ＵＦＣ９０１００８）で５００μＬとなるまで２０倍に濃縮した。完全長及び切断されたＮ末端のＣＣＲ８構築物、並びにＨＥＫ２９３陰性対照のそれぞれに対し、１８×１０^６個の洗浄したストレプトアビジンビーズ（Streptavidin Microspheres、６μｍ；Polysciences ２４１７２－１）を５００μｌの濃縮された上清に再懸濁し、ゆっくりと振盪しながら１時間インキュベートした。それぞれの抗原又は陰性対照と結合したビーズを洗浄し、４℃で一晩保存した。

完全長及び切断されたＮ末端のＣＣＲ８構築物の発現とストレプトアビジンビーズへの結合を検証するため、染色毎に２×１０^５個のビーズを５μｇ／ｍＬの抗ＦＬＡＧ抗体（クローンＭ２、Sigma Ｆ３１６５／Ｆ１８０４）、５μｇ／ｍＬの抗Ｖ５抗体（クローンＳＶ５－Ｐｋ１；ＡｂＤ Serotec、MCA １３６０）、及び１：１００希釈率のＰＥ標識抗マウスＦｃγ二次抗体（Jackson １１５－１１６－０７１）とインキュベートした。抗原に結合したビーズを、異なる３つの抗ヒトＣＣＲ８抗体とインキュベートした。抗ヒトＣＣＲ８抗体（クローンＬ２６３Ｇ８；BioLegend、３６０６０２及びクローン４３３Ｈ；ＢＤ７４７５７８；それぞれ５μｇ／ｍｌ）の２つの結合を、１：１００希釈率のＰＥ標識抗マウスＦｃγ二次抗体（Jackson １１５－１１６－０７１）によって検出した。抗ヒトＣＣＲ８抗体（ポリクローナル；Ａｂｃａｍ、ａｂ１４０７９６）の結合を、１：５０希釈率のＰＥ標識抗ヤギＦｃγ二次抗体（Jackson １０９－１１６－０９８）によって検出した。

ストレプトアビジンビーズに結合した完全長及び切断されたＮ末端のＣＣＲ８構築物に対するＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子及びｓｃＦａｂ含有ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子の結合を測定した。最も一般的には、Ｔ細胞エンゲージャー（「ＴＣＥ」）分子は、異なる２つの抗原に結合することができる単鎖ポリペプチドを含む。「ＴＣＥ分子」という用語は、「BiTE^{（商標登録）}分子」又は「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー」分子という用語と互換的に使用され得る。試験したＴＣＥ分子には、ＣＣＲ８に結合するｓｃＦａｂとＣＤ３に結合するｓｃＦｖとを含む分子（ｓｃＦａｂ含有ＴＣＥ分子）、及びＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖとＣＤ３に結合するｓｃＦｖとを含む分子が含まれていた。また、試験したＴＣＥ分子には、半減期延長（ＨＬＥ）部位としてＣ末端にｓｃＦｃが含まれていた。抗体１の抗体のＣＤＲは、ＴＣＥ１のＣＤＲと同一である（ＴＣＥ１のＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号５６１～５６６を有する）。抗体２のＩｇＧ２のＣＤＲは、ＴＣＥ２のＣＤＲと同一である（ＴＣＥ２のＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号５６７～５７２を有する）。

それぞれのＴＣＥ分子５μｇ／ｍＬとビーズをインキュベートした。これらのＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子とｓｃＦａｂ含有ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子の結合は、２μｇ／ｍｌの抗ヒスチジン抗体（クローンＡＤ１．１．１０；ＡｂＤ Serotec MCA １３９６）及び１：１００希釈率のＰＥ標識抗マウスＦｃγ二次抗体（Jackson １１５－１１６－０７１）を用いて検出した。全ての抗体、ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子、及びｓｃＦａｂ含有ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子を２％ＦＢＳを含むＰＢＳで希釈し、全てのインキュベーションを４℃で４５分間（一次抗体）又は３０分間（二次抗体）で行った。２％ＦＢＳを含むＰＢＳを使用して洗浄を行い、ＦＡＣＳ分析前の最終的な懸濁緩衝液も２％ＦＢＳを含むＰＢＳであった。抗体とＴＣＥの結合はIntellicyte IQueを用いて検出した。平均蛍光の変化は、Intellicyte IQue及びFlowJoによって分析した。様々な完全長及び切断されたＮ末端のＣＣＲ８構築物に対する結合は、フローサイトメトリーで検出された陽性シグナルとして反映された。

表５及び表６に示すように、完全長及び様々な切断されたＮ末端のＣＣＲ８構築物の発現及びストレプトアビジンビーズに対する結合を、フローサイトメトリーによって検証した。

表５のデータは、抗ヒトＣＣＲ８抗体が、ヒトＣＣＲ８の完全長のＮ末端ペプチドであるＰ＿１－３５に結合することを示しており、このことは、抗ヒトＣＣＲ８抗体がヒトＣＣＲ８のＮ末端ペプチドを認識したことを示している。抗体はいずれも、ストレプトアビジンビーズ単独、又はＨＥＫ２９３対照のいずれにも結合しなかったことを示した。抗ヒトＣＣＲ８抗体（クローンＬ２６３Ｇ８及びクローン４３３Ｈ）は同一の結合パターンを示したが、ポリクローナル抗ヒトＣＣＲ８抗体は、重複したフラグメントであるＰ＿７－１８に更に結合したことを示した。

表６のデータは、ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子及びｓｃＦａｂ含有ＣＣＲ８結合ＴＣＥ分子が、完全長のＮ末端のＣＣＲ８ペプチドであるＰ＿１－３５に結合したことを示している。ＴＣＥ２は、切断されたＮ末端のＣＣＲ８ペプチドであるＰ＿１３－２４と結合した。興味深いことに、ＴＣＥ１は切断されたＮ末端のＣＣＲ８ペプチドであるＰ＿１－１２と結合し、このことは、ＴＣＥ１がＣＣＲ８上の固有のエピトープに結合することを示している。

実施例５：抗体機能活性
ハイブリドーマ上清を、ＨＵＴ７８細胞（ＣＣＲ８を内在的に発現するヒトＴリンパ球細胞株）においてＣＬＬ－１依存性の走化性を阻害するか試験した。完全ＨＵＴ－７８増殖培地中の孔径５μｍの９６ウェルトランスウェルプレート内で試験を行った。細胞を精製抗体と３０分間プレインキュベートし、上部トランスウェルチャンバーに移した（総容量５０μｌ、１ウェル当たり５０，０００細胞）。

組換えＨｕＣＣＬ１（Ｒ＆Ｄ）を１００ｐＭの最適下限濃度で調製し、１ウェル当たり１００μｌで下部トランスウェルチャンバーに加えた。トランスウェルプレートを５％ＣＯ_２で３７℃にて一晩インキュベートした。ＣＣＬ１の最適下限濃度を、細胞の走化性用量反応曲線に基づいて設定し、ＩＣ_５０≦１００ｐＭの抗体の選択ができるようにした。インキュベーションの終了時に、上部チャンバーを取り除き、遊走した細胞を含む下部チャンバーに５０μｌ／ウェルのCellTiterGlo試薬（Promega）を加えた。室温で１０分間インキュベートした後、発光を読み出す（Envisionプレートリーダー）ために下部チャンバーの１００μｌの混合物を黒色ウェルクリアボトムプレートに移した。走化性阻害率は、各プレートに存在するBasal及びMax走化性対照ウェルを用いて算出した。Screener解析ソフトウェアを使用して、阻害率及びＩＣ_５０値を計算した。３つの実験の平均を表７に示す。

これらのデータは、固有のエピトープと結合する抗体１が、ＣＣＲ８と結合するにもかかわらず、走化性活性を阻害せず、また中和抗体ではないことを示している。これらのデータは、抗体１がＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しないことを示している。同様のデータが、ハイブリドーマ上清中の抗体を試験した実験でも観察された。

実施例６：抗体媒介性細胞毒性アッセイ
抗ＣＣＲ８抗体が抗体媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介できるかどうかを判定するために、ルシフェラーゼレポーター遺伝子で安定的にトランスフェクトされ、内在性ヒトＣＣＲ８を発現するＨＵＴ７８．ｌｕｃ標的細胞を用いて死滅アッセイを展開した。異なる６つのドナー由来のＶＦ表現型を有する初代ＮＫ細胞をエフェクター細胞として使用し（表８ａ及び表８ｂのデータに関する）、異なる２つのドナー由来のＶＦ表現型を有する初代ＮＫ細胞をエフェクター細胞として使用し（表８ｃのデータに関する）、又は異なる３つのドナー由来のＦＦ表現型を有する初代ＮＫ細胞をそれらの１つに対して個別の３つのブリードと共にエフェクター細胞として使用した（表８ｄのデータに関する）。ＮＫ細胞のネガティブセレクションは、StemCell EasySep Hu ＮＫ分離キットを用いてロイコパックにより行った。

精製抗体を、５μｇ／ｍｌ（１：１０希釈率で３５ｎＭ）から開始する濃度範囲で試験した。抗体を、加湿インキュベーター内で５％ＣＯ_２、３７℃にて３８４ウェルプレート中の標的細胞及びエフェクター細胞と一晩インキュベートした。エフェクターと標的の比率は５：１であり、１ウェル当たり合計５０μｌ中に１ウェル当たり２０，０００個の標的細胞が含まれていた。インキュベーションの終了時、１ウェル当たり３０μｌのBioGlo試薬（表８ａ及び８ｂ）又はSteadyGlo試薬（表８ｃ）を加えて混合し、Envisionプレートリーダーで発光を読み取った。発光シグナルは、生存標的細胞の量に比例するものであった。ＡＤＣＣの割合は、（１－（Ａｂ存在下の発光シグナル／Ｔ＋Ｅ細胞単独での発光シグナル））×１００として計算した。GraphPad Prism 7を使用してＥＣ_５０を計算した。結果を図８ａ、８ｂ、８ｃ、及び８ｄに示す（Ｎ．Ｄ．は測定されなかったことを意味する）。

これらのデータは、本発明の抗体が、ＨＵＴ７８細胞の表面に発現するＣＣＲ８受容体を介してＡＤＣＣに基づいた殺傷を提示することを示している。

実施例７：抗ＣＣＲ８抗体の親和性
抗体１のＩｇＧ２、抗体２のＩｇＧ２、又は抗体４のＩｇＧ２を含有するハイブリドーマ上清を、２９３Ｔ細胞上に一過性に発現させた天然カニクイザルＣＣＲ８、又はＨＵＴ７８細胞上に発現させた天然ヒトＣＣＲ８に対するそれらの親和性について結合平衡除外法（KinExA）により評価した。

カニクイザルＣＣＲ８：２９３Ｔ細胞
KinExAを実施し、抗体と細胞表面に発現した抗原との間に平衡が確立された後に溶液中に残存する遊離抗体の濃度からＫ_ｄを測定した。KinExAにより、可溶性のＣＣＲ８と比較して、天然型のＣＣＲ８に対する結合親和性の高感度な測定が提供される。結合平衡除外法は、基本的にはRathanaswami et al. Anal. Biochem: 373(1): 52-60 (2008)に記載されているように実行した。

手短に言えば、ヒトＣＣＲ８発現ＨＵＴ７８細胞又はカニクイザルＣＣＲ８発現２９３Ｔ細胞のいずれかを使用して、各抗体で平衡セットを設定した。血球計数器を使用して細胞を計数した。ＨＵＴ７８細胞を滴定し、２つの異なる一定の抗体濃度（一方は４８ｐＭ、他方は２ｎＭ）で、ＨＵＴ培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＢＳ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＬ－Ｇｌｕｔ、１ｍＭのＳｏｄ．Ｐｙｒ、０．１ｍＭのＮＥＡＡ、５０μＭの２－ＭＥ）中で０．０５％アジ化ナトリウムとインキュベートした。高［Ａｂ］平衡セットでは、ＨＵＴ７８細胞をエッペンドルフチューブ内で１０ポイントに対して１：２の１ミリリットル当たり６２５０万個の濃度から滴定し、総容量４００μｌ中２ｎＭの抗体で平衡化した。低［Ａｂ］平衡セットでは、ＨＵＴ７８細胞を５０ｍｌのFulconチューブ内で１０ポイントに対して１：２の１ミリリットル当たり３８９万個の濃度から滴定し、総容量１５．５ｍＬ中４８ｐＭの抗体で平衡化した。

カニクイザルＣＣＲ８発現２９３Ｔ細胞を滴定し、２つの異なる一定の抗体濃度（一方は１１８ｐＭ、他方は５ｎＭ）で、２９３Ｔ培地（２％ＦＢＳ及び５０μｇ／ｍｌのＧ４１８を含むFreestyle発現２９３Ｔ培地）中で０．０５％アジ化ナトリウムとインキュベートした。高［Ａｂ］平衡セットでは、２９３Ｔ細胞をエッペンドルフチューブ内で１０ポイントに対して１：３の１ミリリットル当たり２５００万個の濃度から滴定し、総容量２００μｌ中５ｎＭの抗体で平衡化した。低［Ａｂ］平衡セットでは、２９３Ｔ細胞を１５ｍｌのFulconチューブ内で１０ポイントに対して１：３の１ミリリットル当たり９８万個の濃度から滴定し、総容量１０．２ｍＬ中１１８ｐＭの抗体で平衡化した。

各平衡セットでは、基準点対照には、細胞培地のみを含む試料と細胞を含まない試料とが含まれていた。平衡セットを、振盪しながら室温で２４時間インキュベートした。インキュベートして２４時間後、５００×ｇで５分間遠心分離することにより、細胞ペレットから上清を分離した。次いで、高［Ａｂ］平衡セット及び低［Ａｂ］平衡セットの両方の上清をKinExA ３２００装置にかけた。

各平衡試料セットをKinExA装置で二度読み取った。低［Ａｂ］平衡試料では、ヒト及びカニクイザルＣＣＲ８の平衡実験に対して、６．８ｍＬ及び４．６ｍＬの各試料をそれぞれ二度行った。高［Ａｂ］平衡試料では、ヒト及びカニクイザルＣＣＲ８の平衡実験に対して、１６μＬ及び７５μＬの各試料をそれぞれ二度行った。

ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート粒子）ビーズをヤギ抗ヒトＦｃＡｂ又はヤギ抗ｈＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）Ａｂでコートし、続いてブロッキング溶液（１×ＰＢＳｐＨ７．４＋１０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ＋０．０５％アジ化ナトリウム）でブロッキングした。各平衡試料に対し、コートされたビーズに平衡試料を通した後、ランニング緩衝液（１×ＰＢＳｐＨ７．４＋１％ＢＳＡ＋０．０５％アジ化ナトリウム）で素早く洗浄することによって遊離［Ａｂ］を検出した。二次検出抗体（ヤギ抗ｈｕＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）であるＡｌｅｘａ６４７）を、６８０ｎｇ／ｍＬ及び１回当たり５００μＬでフローセルに通した。KinExA電圧出力信号をKinExAソフトウェアに使用してＫ_ｄを計算した。異なる２つの初期総［Ａｂ］濃度におけるプロットから、KinExA Ｐｒｏソフトウェアバージョン４．３．１１（Sapidyne Instruments Inc.）のｎ曲線解析を用いたカーブフィッティングによりＫ_ｄを得た。９５％信頼区間を、低Ｋ_Ｄ及び高Ｋ_Ｄとして得た。結果を表９に示す。

ＨＵＴ７８細胞に発現させた天然ヒトＣＣＲ８
培地中の細胞を連続希釈し、４８ｐＭ又は２ｎＭの濃度の抗体の活性結合部位と０．０５％ＮａＮ３の存在下の培地中でインキュベートし、平衡化した。上清に残った遊離ｍＡｂを、上記に記載されるように測定した。遊離抗体の割合を細胞濃度に対してプロットした。平衡を用いてＮ曲線解析を実施し、Ｋ_ｄ及び抗原発現レベルの最適値を決定するために全細胞法を実施した。ソフトウェアにより、他のパラメータをそれらの最適値に保持しながら、Ｋ_ｄ又は抗原発現レベルの最適化された値を繰り返して変更することによって９５％信頼区間を求めた。

ＨＵＴ７８細胞に発現させた内在性ヒトＣＣＲ８に対する試験抗体の親和性を表１０に示す。

ＩｇＧ２抗体を、ヒト及び／又はカニクイザルＣＣＲ８への親和性を高めるために更に改変した。

実施例８：カニクイザルＣＣＲ８のＴ４Ｒ変異体：ＣＨＯ細胞
カニクイザルＣＣＲ８（４位にスレオニンを含む；配列番号２２）又はカニクイザルＣＣＲ８（Ｔ４Ｒ；４位にアルギニンを含む；配列番号５５６）を発現するＣＨＯ細胞を、抗ＣＣＲ８抗体の濃度を下げながら（０．００５～１００ｎＭ、工程１：３、１０工程）４℃で３０分間インキュベートした。結合した抗ＣＣＲ８抗体分子を、Alexa Fluor 647結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）によって検出した。続いて、細胞をZombie Violet生存率色素で染色し、氷上で４％ＰＦＡにより固定し、蛍光サイトメトリーで検出した。GraphPad Prismソフトウェアの一部位特異的結合評価ツールによる非線形回帰から、平衡解離定数（Ｋ_ｄ）値を計算した。抗ＣＣＲ８抗体の親和性を表１１に示す。「Ｎ．Ｄ．」は検出不能を意味する。

これらのデータは、抗体１の抗体のカニクイザルＣＣＲ８への結合がＴ４Ｒ突然変異によって低減する一方で、抗体２は影響を受けなかったことを示しており、上記で決定されたそれぞれのエピトープビニング及びクラスタリングと一致するものであった。これらのデータは、本明細書に記載されるような固有のエピトープに結合する抗体が、４位のスレオニンでＣＣＲ８に結合することを示している。

実施例９：ＩｇＧ１アフコシル化抗体
アフコシル化された抗ＣＣＲ８ＩｇＧ１抗体を生成した。アフコシル化抗体の抗体アミノ酸配列の例は、配列番号３４６～５５５、配列番号１１２５～１１６０、及び配列番号１２３８～１２５４である。配列番号５７３～５９２及び配列番号１２３７～１２５４は、Ｃ末端リシンを含まない抗体のＨＣに対応する。抗体を親分子に従って表記した。例えば、抗体５．１、抗体５．２、抗体５．３、抗体５．４、抗体５．５、抗体５．６、抗体５．７、抗体５．８、及び抗体５．９は全て、抗体５から改変された抗体を指す。「抗体１のＩｇＧ２」及び「抗体２のＩｇＧ２」は、ＩｇＧ２抗体を指す一方で、「抗体１のＩｇＧ１」及び「抗体２のＩｇＧ１」は、ＩｇＧ１アフコシル化抗体を指す。加えて、例えば、抗体２．１及び抗体２．２のＩｇＧ１アフコシル化抗体を得るために、配列表（表１６）に記載されているように、抗体２のＩｇＧ１分子を更に抗体２のＩｇＧ２抗体から改変した。抗体２．２のＩｇＧ１は、例えば、配列番号３７６～３８５に記載されるようなＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣ、及びＬＣアミノ酸配列をそれぞれ含む。

改変された分子は、ヒト及び／又はカニクイザルに対する親和性を高めるなどであるがこれらに限定されない、望ましい特性を示し得る。改変部位を、配列表（表１９）に記載する。

本明細書に記載される実施例は、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体の活性、例えばＡＤＣＣ活性（実施例１６）、抗腫瘍活性（実施例１１）及び生存期間の増加（実施例１２）を示すインビボ試験を実証するものである。

実施例１０：Ｔｒｅｇ枯渇併用療法
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、４－１ＢＢアゴニスト抗体、及びＴｒｅｇ枯渇抗体の投与の有効性を測定した。Ｔ細胞の表面にヒト化ＣＤ３ε分子を発現するように遺伝子改変したマウスに、５０μｌのマトリゲルと混合した５０μｌのＰＢＳ中のＫＰＣ－Ｍ５がん細胞１０^５個からなる接種物によって、ＫＰＣ－Ｍ５同系腫瘍細胞株を皮下注入した。腫瘍が５０～１００ｍｍ^３の体積に到達した時点で、マウスに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子（ＣＤ３及び標的抗原に結合する二重特異性分子）、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、４－１ＢＢアゴニスト抗体、並びにＴｒｅｇ枯渇抗体のうちの１つ以上を注射し、腫瘍体積を経時的に測定した。投与される二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子に応じて、１５～５，０００μｇ／ｋｇの範囲の用量で二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を投与した。

抗マウスＣＬＤＮ１８．２ BiTE^{（商標登録）}分子を、腫瘍担持マウスに静脈内投与により１５０μｇ／ｋｇの用量で週１回注射した。抗マウスＰＤ－１ｍＩｇＧ１アンタゴニスト抗体をマウス当たり１００μｇの用量で、４－１ＢＢ共刺激受容体に対するアゴニスト抗体（抗マウス４１ＢＢｒＩｇＧ１（クローンＬＯＢ１２．３、BioXcell）をマウス当たり１５０μｇの用量で、及び／又はＴｒｅｇ枯渇抗体（ｍＩｇＧ１）をマウス当たり３００μｇの用量で、３日毎に静脈内投与によりマウスに同時注射した。注入後の７、１０、１４、１７、及び２０日目に腫瘍体積を測定した。

図１のデータは、４－１ＢＢアゴニスト＋抗ＰＤ－１又はＣＬＤＮ１８．２ BiTE（登録商標）分子単独との抗ＣＴＬＡ４の併用では最小限の活性が観察され、ＣＬＤＮ１８．２ BiTE（登録商標）分子＋４－１ＢＢアゴニスト＋抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ４を４つ併用すると、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の枯渇で観察されたものと同様の強固な有効性が示されたことを示している。注目すべきことに、この抗腫瘍効果は、腫瘍内のＣＤ８^＋Ｔ細胞：Ｔｒｅｇ比の明らかな増加と関連するものであった。まとめると、これらのデータは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞における二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子の選択的活性及び依存性を示すものであり、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子により媒介された抗腫瘍効果にＣＤ４^＋Ｔ細胞が状況依存的な阻害的役割を果たすことを示唆している。この結果は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー＋抗４－１ＢＢ＋抗ＰＤ－１併用免疫療法の活性の抑制に、Ｔｒｅｇが主要な役割を果たす可能性があることも示唆している。

実施例１１：ＣＣＲ８枯渇抗体はＭＣ３８インビボ腫瘍モデルに有効である
ＭＣ３８同系腫瘍モデルにおけるアフコシル化抗ＣＣＲ８のｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性を測定した。ＭＣ３８腫瘍細胞を、雌のｈＣＤ３ｅＫＩ動物の右脇腹に試験の０日目に皮下注入した。１０日目に、腫瘍を９９．９３ｍｍ^３の平均腫瘍体積で異なる治療群（ｎ＝１０／群）に割り当てた。試験の１１、１４、１７及び２０日目（Ｑ３Ｄ×４）に、対照のアイソタイプｍＩｇＧ２ａ又は抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａのいずれか１０ｍｇ／ｋｇを動物に腹腔内投与した。抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体は、配列番号６３７～６４６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣ、及びＨＣアミノ酸配列をそれぞれ含む。

腫瘍体積を毎週２回測定した。アイソタイプ対照と比較した抗ＣＣＲ８抗体の腫瘍サイズにおける経時的な治療の効果を評価する統計解析を、Dunnettの事後分析による線形混合効果（ＬＭＥ）モデルを用いて実施した。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。

治療群の個々の腫瘍増殖を、図２Ｃ及び２Ｂでスパイダープロットとして表す。図２Ａは、最終時点（２４日目）までの各群の平均腫瘍体積＋／－ＳＥＭを示す。抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体で治療したマウスは、アイソタイプ対照で治療した動物と比較して、２４日目までに腫瘍体積が統計的に減少したことを示した。図２Ｂに示されるように、完全奏効者が１例存在した。この完全奏効動物を４８日目まで評価したが、その時点では測定可能な腫瘍が存在しなかった。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を、４８日目まで評価した。これらのデータは、ＭＣ３８腫瘍担持動物が、抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体で治療した場合に、アイソタイプ対照と比較して腫瘍体積の有意な減少を示した（６６．４４％のＴＧＩ、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）ことを示している。

実施例１２：ＣＣＲ８枯渇抗体治療によりインビでの生存期間が延長される
ＭＣ３８腫瘍細胞を、雌のｈＣＤ３ｅＫＩ動物の右脇腹に試験の０日目に皮下注入した。１０日目に、腫瘍を９９．９３ｍｍ^３の平均腫瘍体積で異なる治療群（ｎ＝１０／群）に割り当てた。試験の１１、１４、１７及び２０日目（Ｑ３Ｄ×４）に、アイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ又は抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体のいずれか１０ｍｇ／ｋｇを動物に腹腔内投与した。全ての動物を、それらの腫瘍が８００ｍｍ^３に到達するまで、又は動物保護に関するＩＡＣＵＣ基準に従って評価した。ログランク（Mantel-Cox）検定を用いて統計解析を実施し、抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体（治療群２）とアイソタイプ対照であるｍＩｇＧ２ａ（対照群１）を比較した。＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す。

生存期間データを図３に示す。アイソタイプ対照のｍＩｇＧ２ａで治療された動物の生存期間中央値は２４日であった一方で、抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体で治療された動物の生存期間中央値は２７日であった（＊＊＊ｐ＜０．０００１）。これらのデータは、ＭＣ３８腫瘍担持動物が、抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体で治療した場合に、アイソタイプ対照抗体で治療した動物と比較して生存期間が増大したことを示している。

実施例１３：ＣＣＲ８ｍＩｇＧ２ａ抗体によるＴｒｅｇの枯渇により、腫瘍におけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比の増強がもたらされる
試験の１１日目に、対照のアイソタイプｍＩｇＧ２ａ又は抗ＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａのいずれかの１０ｍｇ／ｋｇの単回用量を腹腔内投与することによって、ＭＣ３８腫瘍担持動物を治療した。治療後４８時間（１３日目）でＰＤ評価を行った。異なる群で採取中に腫瘍重量を収集し、これを腫瘍中の絶対細胞数を決定するための正規化に使用した。Ｔ細胞の割合及び表現型をフローサイトメトリーで分析するために、腫瘍、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）、及び脾臓の単一細胞懸濁液を調製した。

総Ｔ細胞を、生存／ＣＤ４５＋画分内でＴＣＲβ＋Ｔｈｙ１．２＋染色を用いてゲーティングした。Ｆｏｘｐ３＋ゲーティングとＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ゲーティングの両方を用いて、図４Ａに示すＴｒｅｇ細胞の割合及び絶対数をＣＤ４＋Ｔ細胞区画内で評価した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を総Ｔ細胞でゲーティングし、図４Ｂに示すような腫瘍中のＣＤ８／Ｔｒｅｇ比を計算した。各点は、個々のマウスから得られたデータを示す。対応のないＴ検定（両側検定）を用いて統計解析を実施し、治療群と対照群を比較した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。

これらのデータは、Ｆｏｘｐ３＋及びＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ゲーティングスキームの両方を用いて評価した場合、抗ＣＣＲ８アフコシル化抗体の単回投与後にＴｒｅｇの割合が減少することを示している（図４Ａ及び４Ｂ）。重要なことに、抗ＣＣＲ８枯渇抗体による治療により、腫瘍におけるＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比の著しい増大がもたらされ（図４Ｃ及び４Ｄ）、それによって抗腫瘍免疫の増強が促進された。

実施例１４：ファージディスプレイによりスクリーニングされたＣＣＲ８結合ｓｃＦｖ
本明細書に記載されるＣＣＲ８結合分子の好ましい種類のアミノ酸置換変異には、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上のＣＤＲ残基の置換が含まれる。一般に、更なる開発のために選択される、結果として生じる変異体は、それらが生成される親抗体と比較して向上した生物学的特性を有する。そのような置換変異体を生成するための１つの方法には、ファージディスプレイを使用した親和性成熟が含まれる。手短に言えば、各側で全ての可能なアミノ酸置換を生成するために、いくつかのＣＤＲ側（例えば６～７側）を変異させた。このようにして生成された抗体変異体が、例えば、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合体として、繊維状ファージ粒子から一価形式で提示された。次いで、ファージにより提示された変異体を、本明細書で開示されているような生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングした。改変するＣＤＲ側の候補を特定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発を行い、抗原結合に大いに寄与するＣＤＲ残基を特定した。

そのような変異体を生成してから、この変異体のパネルに本明細書に記載されるようなスクリーニングを施し、１つ以上の関連するアッセイで優れた特性を有する抗体を更なる開発のために選択した。ファージディスプレイは、例えば、Ladner et al., 米国特許第５，２２３，４０９号；Smith (1985) Science 228:1315-1317, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)及びMarks et al., J. Mol.Biol., 222: 581-597 (1991)に記載されている。

１～１２アミノ酸エピトープ（配列番号８２により与えられるアミノ酸配列）に結合する抗ＣＣＲ８ｓｃＦｖを生成し、上記に基本的に記載されているようにファージディスプレイによりエピトープ結合をスクリーニングした。１～１２アミノ酸エピトープクラスターにおいてＣＣＲ８に結合するｓｃＦｖの重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を表１２に示す。

抗ＣＣＲ８ｓｃＦｖＭＰＫ２０２９９－Ａ４を更に改変し、アフコシル化抗ＣＣＲ８抗体に変換して、１～１２に結合する更なる抗ＣＣＲ８抗体を生成した。

実施例１５：ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に対するＣＣＲ８結合抗体の親和性
ＣＣＲ８の１～１２エピトープ（配列番号８２）－ナノボディ（Ｎｂ）融合タンパク質に対する抗体１のＦａｂ及び本発明のＣＣＲ８結合モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の結合親和性（Ｋ_Ｄ平衡解離定数）及び速度定数（ｋ_ａ結合速度定数、ｋ_ｄ解離速度定数）を、OCTET（登録商標）Biolayer Interferometryシステム（Sartorius AG、Gottingen、Germany）を使用して測定した。ＣＣＲ８－ナノボディ融合タンパク質をヒト細胞で発現させた。Ｆａｂの結合については、ビオチン化ＣＣＲ８ペプチド－Ｎｂ融合体を、２～４ｎｍの充填濃度でストレプトアビジンＳＡＸバイオセンサー上に捕捉し、次いで可溶性Ｆａｂの希釈系列（最高１００ｎＭ、６ポイント、１：３連続希釈）と３００秒間インキュベートした後、解離のために緩衝液中で５００秒間インキュベートした。ｍＡｂの結合については、ｍＡｂを１～２ｎｍの充填濃度で抗ｈｕＩｇＧＦｃ取り込みバイオセンサー上に捕捉し、次いで非ビオチン化ＣＣＲ８ペプチド－Ｎｂ融合体の希釈系列（最高１００ｎＭ、６ポイント、１：３連続希釈）と３００秒間インキュベートした後、解離のために緩衝液中で５００秒間インキュベートした。

OCTET（登録商標）システムは、バイオレイヤー干渉法と呼ばれるメカニズムを使用して経時的（秒）にデータを取得するものであり、タンパク質がバイオセンサーチップに結合すると、高感度な結合シグナルがこの装置によってｎｍで測定される。光ファイバーチップは全て、一度使用すると廃棄した。すなわち再生しなかった。OCTET（登録商標）緩衝液ベースライン、解離工程、及びタンパク質の希釈は、OCTET（登録商標）緩衝液（１０ｍＭのＴＲＩＳｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ_２、０．１３％（ｖ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎＸ－１００、及び０．１０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中で行った。

OCTET（登録商標）装置のデータ解析ソフトウェアと同一のデータ処理（カラム毎に２つの参照ウェルの平均を差し引く、Ｙ軸をベースラインに合わせる、工程間補正を解離に合わせる、及びSavitzky-Golayフィルタリング）を用いるGeneData Screener v18 SPRパッケージによって、生データを処理した。結合速度定数（ｋ_ａ；単位はＭ^－１ｓｅｃ^－１）及び解離速度定数（ｋ_ｄ；単位はｓｅｃ^－１）を求めるために、各Ｆａｂ又はｍＡｂの相互作用を、それ自身のセンサーグラムにグループ化し、１：１結合モデルでグローバルフィッティングした。次いで、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ；単位はナノモル（ｎＭ）＝１×１０^－９ｍｏｌ／Ｌ）をｋ_ｄ／ｋ_ａ比率として計算した。

結果を図１３ａ及び１３ｂに示す。処理されたデータに対する１：１モデル適合における誤差を標準誤差として報告した（すなわち、ｋ_ａ誤差は結合速度定数測定値の標準誤差であるが、ｋ_ｄ誤差は解離速度定数測定値の標準誤差である）。平衡解離定数の標準誤差（ΔＫ_Ｄ）は、２つの測定された変数とそれらの標準誤差（ｋ_ａ、Δｋ_ａ、ｋ_ｄ、Δｋ_ｄ）の比率について定義したように、統計的な誤差の伝搬から算出される。

これらのデータは、本発明のＣＣＲ８結合抗体が、ヒト細胞で発現させたアミノ酸１～１２（配列番号８２）及びアミノ酸１～２５（配列番号３１の残基１～２５）を含むヒトＣＣＲ８のＮ末端ペプチドに高い親和性で結合することを示している。

実施例１６：リガンドの存在下又は非存在下におけるＡＤＣＣ
リガンド結合を阻害する、又はリガンド結合を阻害しないいずれかの抗ＣＣＲ８抗体によるＡＤＣＣを測定するために、フローサイトメトリーを利用して、様々な濃度のリガンド及び抗ＣＣＲ８抗体の存在下で生細胞及び死細胞を測定した。実験（「試験Ａ」）では、固有のエピトープに結合し、リガンド結合を阻害しない本発明のアフコシル化抗ＣＣＲ８抗体（配列番号１～６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体；「非阻害性ｍＡｂ」）又はリガンド結合を阻害する３つの抗ＣＣＲ８抗体（「阻害性ｍＡｂ」）１００ｐＭを、ＣＣＲ８を発現するＨＵＴ７８細胞、ＣＤ１６を発現するＮＫ細胞株ＮＫ９２ＭＩ（エフェクター細胞）、及び０．１２８ｐＭ～５０ｎＭまで濃度を増加させたＣＣＬ１（リガンド）とインキュベートした。別の実験（「試験Ｂ」）では、濃度を増加させたＣＣＬ１を最初にＨＵＴ７８細胞に３０分間加え、その後１００ｐＭの抗体及びエフェクター細胞を加えたことを除いて、上記で記載されるような同様の手順に従った。ＩＣ_５０値及び最低死滅率の値を表１４に報告する。
基本的に記載されているような手順に従って、以下のデータを得た。

これらのデータは、リガンドの存在下の試験Ａ及び試験Ｂの両方で、固有のエピトープに結合し、リガンド結合を阻害しない本発明の抗ＣＣＲ８抗体に高い効力があったことを示しており、また、高濃度のＣＣＬ１においてＡＤＣＣ能力を測定する最低死滅率が最も高かったことを示している。

実施例１７：インビボでの抗ＣＣＲ８分子及びBiTE^{（商標登録）}分子の併用
Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける抗腫瘍活性を増強する能力について、ＣＣＲ８枯渇マウス代替抗体を代替ＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子と併用して評価した。Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルは、チェックポイント阻害剤（抗ＰＤ１及び抗ＣＴＬＡ４）に対して難治性であり、従って本実施例におけるＢｉＴＥ分子及び抗ＣＣＲ８ｍＡｂの併用療法による意味のある差異を評価するために使用することができるため、本併用有効性試験のためにＢ１６Ｆ１０腫瘍モデルが選択された。

Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞をＢｉＴＥ分子腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現するように改変し、ヒトＣＤ３ｅを認識するＩ２Ｃ抗ＣＤ３ｓｃＦｖによってＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子を評価することが可能な免疫適格性ヒト化ＣＤ３ｅＫＩ株に注入した。Ｂ１６Ｆ１０－ＴＡＡ腫瘍担持動物を、ＣＣＲ８枯渇ｍＩｇＧ２ａ抗体、ＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子の単剤、又はＣＣＲ８枯渇ｍＩｇＧ２ａ抗体及びＴＡＡ－ＢｉＴＥ分子の併用のいずれかで治療した。

Ｂ１６Ｆ１０－ＴＡＡ発現腫瘍細胞を、ヒト化ＣＤ３ｅ鎖を発現する免疫適格性マウスモデル（ｈｕＣＤ３ｅＫＩ）に０日目に皮下注入した。１２日目、腫瘍を１０８．３７ｍｍ^３の平均腫瘍体積で異なる治療群（ｎ＝１０／群）に割り当てた。試験の１３日目と２０日目（ＱＷｋ×２）に、動物に対照のＢｉＴＥ分子又はＴＡＡ－ＢｉＴＥのいずれか５０μｇ／ｋｇを後眼窩から投与した。動物はまた、試験の１３、１６、及び１９日目（Ｑ３Ｄ×３）に、対照のアイソタイプｍＩｇＧ２ａ又はＣＣＲ８アフコシル化ｍＩｇＧ２ａ抗体のいずれか１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与を受けた。

腫瘍体積を毎週２回測定した。治療群の個々の腫瘍増殖を、図５でスパイダープロットとして表す。完全奏効者（ＣＲ）として定義された測定可能な腫瘍のない動物を４８日目まで評価した。

図５に示すように、この抗ＣＴＬＡ４に難治性の冷たい腫瘍モデルには、ＣＣＲ８ｍＩｇＧ２ａの単剤療法（群３；図５Ｃ）は有効でなかった。ＴＡＡ－ＢｉＴＥによる単剤療法（群２；図５Ｂ）では、試験終了時に腫瘍増殖の遅延及び１例の無腫瘍／完全奏効者（ＣＲ）がもたらされた。興味深いことに、ＣＣＲ８ｍＩｇＧ２ａ及びＴＡＡ－ＢｉＴＥを併用すると（群４；図５Ｄ）、７例のＣＲがもたらされ、このことは、抗腫瘍免疫を増強するためにＢｉＴＥ分子とＣＣＲ８枯渇ｍＡｂを併用することに大きな利益があることを示すものであった。

配列
抗体１のＩｇＧ２ＨＣＤＲ１（配列番号１）
ＮＡＲＭＧ
抗体１のＩｇＧ２ＨＣＤＲ２（配列番号２）
ＲＩＫＳＫＴＥＧＧＴＲＤＹＡＡＰＶＫＧ
抗体１のＩｇＧ２ＨＣＤＲ３（配列番号３）
ＹＳＧＶ
抗体１のＩｇＧ２ＬＣＤＲ１（配列番号４）
ＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡ
抗体１のＩｇＧ２ＬＣＤＲ２（配列番号５）
ＷＡＳＴＲＥＳ
抗体１のＩｇＧ２ＬＣＤＲ３（配列番号６）
ＱＱＹＹＳＩＰＩＴ
抗体２のＩｇＧ２ＨＣＤＲ１（配列番号７）
ＮＹＧＭＨ
抗体２のＩｇＧ２ＨＣＤＲ２（配列番号８）
ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＦＹＡＤＳＶＫＧ
抗体２のＩｇＧ２ＨＣＤＲ３（配列番号９）
ＡＧＧＩＧＲＦＤＹ
抗体２のＩｇＧ２ＬＣＤＲ１（配列番号１０）
ＫＹＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＴＹＬＦ
抗体２のＩｇＧ２ＬＣＤＲ２（配列番号１１）
ＥＶＳＮＲＦＳ
抗体２のＩｇＧ２ＬＣＤＲ３（配列番号１２）
ＭＱＴＬＫＬＰＬＴ
抗体１のＩｇＧ２ＨＣＶＲ（配列番号１３）

抗体１のＩｇＧ２ＬＣＶＲ（配列番号１４）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡＷＹＨＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＳＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＩＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
抗体１のＩｇＧ２ＨＣ（配列番号１５）

抗体１のＩｇＧ２ＬＣ（配列番号１６）

抗体２のＩｇＧ２ＨＣＶＲ（配列番号１７）

抗体２のＩｇＧ２ＬＣＶＲ（配列番号１８）
ＤＦＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＹＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＴＹＬＦＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＨＬＬＩＹＥＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＬＹＹＣＭＱＴＬＫＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＮ
抗体２のＩｇＧ２ＨＣ（配列番号１９）

抗体２のＩｇＧ２ＬＣ（配列番号２０）

ｈＣＣＲ８（配列番号２１）

カニクイザルＣＣＲ８（配列番号２２）

ヒトＣＣＲ８［Ａ２７Ｇ］（配列番号２３）

ｍＣＣＲ８（配列番号２４）

ラットＣＣＲ８（配列番号２５）

ｈＣＣＲ４（配列番号２６）

抗体１のＩｇＧ２ＨＣＤＮＡ（配列番号２７）

抗体１のＩｇＧ２ＬＣＤＮＡ（配列番号２８）

抗体２のＩｇＧ２ＨＣＤＮＡ（配列番号２９）

抗体２のＩｇＧ２ＬＣＤＮＡ（配列番号３０）

ヒトＣＣＲ８１～３５（配列番号３１）
ＭＤＹＴＬＤＬＳＶＴＴＶＴＤＹＹＹＰＤＩＦＳＳＰＣＤＡＥＬＩＱＴＮＧＫ
ゼルバリマブＬＣＤＲ１（配列番号３２）
ＲＡＳＱＧＩＳＮＷＬＡ
ゼルバリマブＬＣＤＲ２（配列番号３３）
ＡＡＳＳＬＱＳ
ゼルバリマブＬＣＤＲ３（配列番号３４）
ＱＱＡＥＳＦＰＨＴ
ゼルバリマブＨＣＤＲ１（配列番号３５）
ＳＹＤＭＳ
ゼルバリマブＨＣＤＲ２（配列番号３６）
ＬＩＳＧＧＧＳＱＴＹＹＡＥＳＶＫＧ
ゼルバリマブＨＣＤＲ３（配列番号３７）
ＰＳＧＨＹＦＹＡＭＤＶ
ゼルバリマブＶＬ（配列番号３８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＥＳＦＰＨＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ゼルバリマブＶＨ（配列番号３９）

ゼルバリマブＬＣ（配列番号４０）

ゼルバリマブＨＣ（配列番号４１）

抗体２０Ａ２．００３ＬＣＤＲ１（配列番号４２）
ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ
抗体２０Ａ２．００３ＬＣＤＲ２（配列番号４３）
ＱＤＲＫＲＰＳ
抗体２０Ａ２．００３ＬＣＤＲ３（配列番号４４）
ＱＡＦＥＳＳＴＥＶ
抗体２０Ａ２．００３ＨＣＤＲ１（配列番号４５）
ＮＹＧＭＨ
抗体２０Ａ２．００３ＨＣＤＲ２（配列番号４６）
ＬＩＷＹＤＡＳＫＫＹＹＡＥＳＶＫＧ
抗体２０Ａ２．００３ＨＣＤＲ３（配列番号４７）
ＤＰＳＳＬＴＧＳＴＧＹＹＧＭＤＶ
抗体２０Ａ２．００３ＶＬ（配列番号４８）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＲＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＦＥＳＳＴＥＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
抗体２０Ａ２．００３ＶＨ（配列番号４９）

抗体２０Ａ２．００３ＬＣ（配列番号５０）

抗体２０Ａ２．００３ＨＣ（配列番号５１）

抗体２２Ｄ４．００６ＬＣＤＲ１（配列番号５２）
ＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹ
抗体２２Ｄ４．００６ＬＣＤＲ２（配列番号５３）
ＥＤＡＫＲＰＳ
抗体２２Ｄ４．００６ＬＣＤＲ３（配列番号５４）
ＹＳＴＤＡＳＧＮＨＲＶ
抗体２２Ｄ４．００６ＨＣＤＲ１（配列番号５５）
ＤＹＳＭＳ
抗体２２Ｄ４．００６ＨＣＤＲ２（配列番号５６）
ＧＩＮＷＮＧＧＲＴＲＹＡＤＡＶＫＧ
抗体２２Ｄ４．００６ＨＣＤＲ３（配列番号５７）
ＥＦＮＮＦＥＳＮＷＦＤＰ
抗体２２Ｄ４．００６ＶＬ（配列番号５８）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＳＥＤＡＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＡＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
抗体２２Ｄ４．００６ＶＨ（配列番号５９）

抗体２２Ｄ４．００６ＬＣ（配列番号６０）

抗体２２Ｄ４．００６ＨＣ（配列番号６１）

抗体２２Ｄ４．０１７ＬＣＤＲ１（配列番号６２）
ＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹ
抗体２２Ｄ４．０１７ＬＣＤＲ２（配列番号６３）
ＥＤＡＫＲＰＳ
抗体２２Ｄ４．０１７ＬＣＤＲ３（配列番号６４）
ＹＳＴＤＡＳＧＮＨＲＶ
抗体２２Ｄ４．０１７ＨＣＤＲ１（配列番号６５）
ＤＹＳＭＳ
抗体２２Ｄ４．０１７ＨＣＤＲ２（配列番号６６）
ＧＩＮＷＮＡＧＲＴＲＹＡＤＡＶＫＧ
抗体２２Ｄ４．０１７ＨＣＤＲ３（配列番号６７）
ＥＦＮＮＦＥＳＮＷＦＤＰ
抗体２２Ｄ４．０１７ＶＬ（配列番号６８）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＳＥＤＡＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＡＳＧＮＨＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
抗体２２Ｄ４．０１７ＶＨ（配列番号６９）

抗体２２Ｄ４．０１７ＬＣ（配列番号７０）

抗体２２Ｄ４．０１７ＨＣ（配列番号７１）

抗体２０Ｃ１．００６ＬＣＤＲ１（配列番号７２）
ＲＡＳＱＧＩＳＮＷＬＡ
抗体２０Ｃ１．００６ＬＣＤＲ２（配列番号７３）
ＡＡＳＳＬＱＳ
抗体２０Ｃ１．００６ＬＣＤＲ３（配列番号７４）
ＱＱＡＥＳＦＰＨＴ
抗体２０Ｃ１．００６ＨＣＤＲ１（配列番号７５）
ＳＹＤＭＳ
抗体２０Ｃ１．００６ＨＣＤＲ２（配列番号７６）
ＬＩＳＧＧＧＳＮＴＹＹＡＥＳＶＫＧ
抗体２０Ｃ１．００６ＨＣＤＲ３（配列番号７７）
ＰＳＧＨＹＦＹＡＭＤＶ
抗体２０Ｃ１．００６ＶＬ（配列番号７８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＥＳＦＰＨＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
抗体２０Ｃ１．００６ＶＨ（配列番号７９）

抗体２０Ｃ１．００６ＬＣ（配列番号８０）

抗体２０Ｃ１．００６ＨＣ（配列番号８１）

ＣＣＲ８Ｐ＿１－１２ペプチド（配列番号８２）
ＭＤＹＴＬＤＬＳＶＴＴＶ
ＣＣＲ８Ｐ＿１３－２４ペプチド（配列番号８３）
ＴＤＹＹＹＰＤＩＦＳＳＰ
ＣＣＲ８Ｐ＿２５－３５ペプチド（配列番号８４）
ＣＤＡＥＬＩＱＴＮＧＫ
ＣＣＲ８Ｐ＿７－１８ペプチド（配列番号８５）
ＬＳＶＴＴＶＴＤＹＹＹＰ
ＣＣＲ８Ｐ＿１９－３０ペプチド（配列番号８６）
ＤＩＦＳＳＰＣＤＡＥＬＩ

カニクイザルモーリシャス原産Ｔ４ＲＣＣＲ８（配列番号５５６）

リーダー配列（配列番号５５７）
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣ
配列番号５５７のリーダー配列をコードするＤＮＡ（配列番号５５８）
ａｔｇｇａｃａｔｇａｇａｇｔｇｃｃｔｇｃａｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａｔｇｃ
リーダー配列（配列番号５５９）
ＭＡＷＡＬＬＬＬＴＬＬＴＱＧＴＧＳＷＡ
配列番号５５９のリーダー配列をコードするＤＮＡ（配列番号５６０）
ａｔｇｇｃｃｔｇｇｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｔｃｃｔｃａｃｃｃｔｃｃｔｃａｃｔｃａｇｇｇｃａｃａｇｇｇｔｃｃｔｇｇｇｃｃ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＨＣＤＲ１（配列番号５６１）
ＮＡＲＭＧ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＨＣＤＲ２（配列番号５６２）
ＲＩＫＳＫＴＥＧＧＴＲＤＹＡＡＰＶＫＧ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＨＣＤＲ３（配列番号５６３）
ＹＳＧＶ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＬＣＤＲ１（配列番号５６４）
ＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＬＣＤＲ２（配列番号５６５）
ＷＡＳＴＲＥＳ
ＴＣＥ１ＣＣＲ８ＬＣＤＲ３（配列番号５６６）
ＱＱＹＹＳＩＰＩＴ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＨＣＤＲ１（配列番号５６７）
ＮＹＧＭＨ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＨＣＤＲ２（配列番号５６８）
ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＦＹＡＤＳＶＫＧ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＨＣＤＲ３（配列番号５６９）
ＡＧＧＩＧＲＦＤＹ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＬＣＤＲ１（配列番号５７０）
ＫＹＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＴＹＬＦ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＬＣＤＲ２（配列番号５７１）
ＥＶＳＮＲＦＳ
ＴＣＥ２ＣＣＲ８ＬＣＤＲ３（配列番号５７２）
ＭＱＴＬＫＬＰＬＴ

Ｃ末端リシンを含まないゼルバリマブＨＣ（配列番号６３６）

Claims

ヒトＣ－Ｃケモカイン受容体型８（ＣＣＲ８）に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、
（ａ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、
（ｄ）ＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＸ_１ＮＹＬＡ（配列番号１２３５）（式中、Ｘ_１はＫ又はＲである）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１アミノ酸配列と、
（ｅ）配列番号５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、
（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列と
を含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
配列番号４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列と、以下のアミノ酸配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＸ_１ＮＹＬＡＷＹＸ_２ＱＫＰＧＱＸ_３ＰＫＬＬＩＳＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＳＩＰＩＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１２３６）（式中、Ｘ_１はＫ若しくはＲであり、Ｘ_２はＨ若しくはＱであり、及び／又はＸ_３はＳ若しくはＰである）
を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む、請求項１又は請求項２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１３の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列と、配列番号１４又は配列番号３６３の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列とを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１５又は配列番号５７３の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、配列番号１６又は配列番号３６５の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列とを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントであって、両ＨＣは、配列番号１５又は配列番号５７３のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、抗体又は抗原結合フラグメント。
２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントであって、両ＨＣは、配列番号１５又は配列番号５７３のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号３６５のアミノ酸配列を含む、抗体又は抗原結合フラグメント。
（ａ）配列番号８３９のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、（ｂ）配列番号８４０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列と、（ｃ）配列番号８４１のＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、（ｄ）配列番号８４２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列と、（ｅ）配列番号８４３のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、（ｆ）配列番号８４４のＬＣＤＲ３アミノ酸配列とを含む、ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメント。
配列番号１０１７のＨＣＶＲアミノ酸配列と、配列番号１０１８のＬＣＶＲアミノ酸配列とを含む、請求項８に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１１２５又は配列番号１２３７のＨＣアミノ酸配列と、配列番号１１２６のＬＣアミノ酸配列とを含む、請求項８又は請求項９に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントであって、両ＨＣは、配列番号１１２５又は配列番号１２２７のアミノ酸配列を含み、両ＬＣは、配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む、抗体又は抗原結合フラグメント。
ヒトＣＣＲ８に結合する抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、
（ａ）Ｘ_１Ｘ_２ＧＸ_４Ｈ（配列番号１２３３）［式中、（ｉ）Ｘ_１はＮ、Ｓ、Ｄ、Ｇ、Ｔ、又はＲであり、（ｉｉ）Ｘ_２はＣ、Ｎ、Ｙ、Ｓ、又はＦであり、（ｉｉｉ）Ｘ_４はＭ又はＦである］のＨＣＤＲ１アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号６４８、６５４、６６０、６６６、６７２、６７８、６８４、６９０、６９６、７０２、７０８、７１４、７２０、７２６、７３２、７３８、７４４、７５０、７５６、７６２、７６８、７７４、７８０、７８６、７９２、７９８、８０４、８１０、８１６、８２２、８２８、８３４、８４０、８４６、８５２、８５８、８６７、８７３、８７９、８８５、８９１、８９７、９０３、９０９、９１５、９２１、９２７、９３３、９３９、若しくは９４５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、
（ｃ）配列番号６４９、６５５、６６１、６６７、６７３、６７９、６８５、６９１、６９７、７０３、７０９、７１５、７２１、７２７、７３３、７３９、７４５、７５１、７５７、７６３、７６９、７７５、７８１、７８７、７９３、７９９、８０５、８１１、８１７、８２３、８２９、８３５、８４７、８５３、８５９、８６８、８７４、８８０、８８６、８９２、８９８、９０４、９１０、９１６、９２２、９２８、９３４、９４０、若しくは９４６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、
（ｄ）配列番号６５０、６５６、６６２、６６８、６７４、６８０、６８６、６９２、６９８、７０４、７１０、７１６、７２２、７２８、７３４、７４０、７４６、７５２、７５８、７６４、７７０、７７６、７８２、７８８、７９４、８００、８０６、８１２、８１８、８２４、８３０、８３６、８４８、８５４、８６０、８６３、８６９、８７５、８８１、８８７、８９３、８９９、９０５、９１１、９１７、９２３、９２９、９３５、若しくは９４１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と、
（ｅ）ＲＸ_２Ｘ_３Ｘ_４ＲＰＳ（配列番号１２３４）［式中、（ｉ）Ｘ_２はＡ、Ｎ、Ｄ、Ｓ、又はＱであり、（ｉｉ）Ｘ_３はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｉ、Ｆ、又はＡであり、（ｉｉｉ）Ｘ_４はＮ又はＶである］のＬＣＤＲ２アミノ酸配列と、
（ｆ）配列番号６５２、６５８、６６４、６７０、６７６、６８２、６８８、６９４、７００、７０６、７１２、７１８、７２４、７３０、７３６、７４２、７４８、７５４、７６０、７６６、７７２、７７８、７８４、７９０、７９６、８０２、８０８、８１４、８２０、８２６、８３２、８３８、８５０、８５６、８６２、８６５、８７１、８７７、８８３、８８９、８９５、９０１、９０７、９１３、９１９、９２５、９３１、９３７、若しくは９４３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列、又は１～４個のアミノ酸置換を含むか、若しくは前述のＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるその変異体と
を含む、抗体又はその抗原結合フラグメント。
配列番号６４７、６５３、６５９、６６５、６７１、６７７、６８３、６８９、６９５、７０１、７０７、７１３、７１９、７２５、７３１、７３７、７４３、７４９、７５５、７６１、７６７、７７３、７７９、７８５、７９１、７９７、８０３、８０９、８１５、８２１、８２７、８３３、８４５、８５１、８５７、８６６、８７２、８７８、８８４、８９０、８９６、９０２、９０８、９１４、９２０、９２６、９３２、９３８、又は９４４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号６５１、６５７、６６３、６６９、６７５、６８１、６８７、６９３、６９９、７０５、７１１、７１７、７２３、７２９、７３５、７４１、７４７、７５３、７５９、７６５、７７１、７７７、７８３、７８９、７９５、８０１、８０７、８１３、８１９、８２５、８３１、８３７、８４９、８５５、８６１、８６４、８７０、８７６、８８２、８８８、８９４、９００、９０６、９１２、９１８、９２４、９３０、９３６、又は９４２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列を含む、請求項１２又は請求項１３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号９５３、９５５、９５７、９５９、９６１、９６３、９６５、９６７、９６９、９７１、９７３、９７５、９７７、９７９、９８１、９８３、９８５、９８７、９８９、９９１、９９３、９９５、９９７、９９９、１００１、１００３、１００５、１００７、１００９、１０１１、１０１３、１０１５、１０１９、１０２１、１０２３、１０２６、１０２８、１０３０、１０３２、１０３４、１０３６、１０３８、１０４０、１０４２、１０４４、１０４６、１０４８、１０５０、若しくは１０５２のいずれか１つを含むＨＣＶＲアミノ酸配列、又は前述のＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号９６４、９６６、９６８、９７０、９７２、９７４、９７６、９７８、９８０、９８２、９８４、９８６、９８８、９９０、９９２、９９４、９９６、９９８、１０００、１００２、１００４、１００６、１００８、１０１０、１０１２、１０１４、１０１６、１０２０、１０２２、１０２４、１０２５、１０２７、１０２９、１０３１、１０３３、１０３５、１０３７、１０３９、１０４１、１０４３、１０４５、１０４７、１０４９、若しくは１０５１のいずれか１つを含むＬＣＶＲアミノ酸配列、又は前述のＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
請求項１５又は請求項１６に記載の抗体又は抗原結合フラグメントであって、
（ａ）配列番号１０１９のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２０のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｂ）配列番号１０２１のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２２のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｃ）配列番号１０２３のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｄ）配列番号１０２６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｅ）配列番号１０２８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２７のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｆ）配列番号１０３０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０２９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｇ）配列番号１０３２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３１のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｈ）配列番号１０３４のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３３のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｉ）配列番号１０３６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｊ）配列番号１０３８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３７のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｋ）配列番号１０４０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０３９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｌ）配列番号１０４２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４１のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｍ）配列番号１０４４のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４３のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｎ）配列番号１０４６のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４５のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｏ）配列番号１０４８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４７のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；
（ｐ）配列番号１０５０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０４９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ；又は
（ｑ）配列番号１０５２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１０５１のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ
を含む、抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、１１６０、１２３８～１２５４のＨＣアミノ酸配列、又は前述のＨＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、若しくは１１５９のＬＣアミノ酸配列、又は前述のＬＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
請求項１８又は請求項１９に記載の抗体又は抗原結合フラグメントであって、
（ａ）配列番号１１２７若しくは配列番号１２３８のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１２８のＬＣアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号１１２９若しくは配列番号１２３９のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３０のＬＣアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号１１３１若しくは配列番号１２４０のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３２のＬＣアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号１１３４若しくは配列番号１２４１のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３３のＬＣアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号１１３６若しくは配列番号１２４２のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３５のＬＣアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号１１３８若しくは配列番号１２４３のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３７のＬＣアミノ酸配列；
（ｇ）配列番号１１４０若しくは配列番号１２４４のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１３９のＬＣアミノ酸配列；
（ｈ）配列番号１１４２若しくは配列番号１２４５のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４１のＬＣアミノ酸配列；
（ｉ）配列番号１１４４若しくは配列番号１２４６のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４３のＬＣアミノ酸配列；
（ｊ）配列番号１１４６若しくは配列番号１２４７のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４５のＬＣアミノ酸配列；
（ｋ）配列番号１１４８若しくは配列番号１２４８のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４７のＬＣアミノ酸配列；
（ｌ）配列番号１１５０若しくは配列番号１２４９のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１４９のＬＣアミノ酸配列；
（ｍ）配列番号１１５２若しくは配列番号１２５０のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５１のＬＣアミノ酸配列；
（ｎ）配列番号１１５４若しくは配列番号１２５１のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５３のＬＣアミノ酸配列；
（ｏ）配列番号１１５６若しくは配列番号１２５２のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５５のＬＣアミノ酸配列；
（ｐ）配列番号１１５８若しくは配列番号１２５３のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５７のＬＣアミノ酸配列；又は
（ｑ）配列番号１１６０若しくは配列番号１２５４のＨＣアミノ酸配列及び配列番号１１５９のＬＣアミノ酸配列
を含む、抗体又は抗原結合フラグメント。
配列番号１０９３～１１２４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１５又は請求項１６に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
抗体である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
抗体の抗原結合フラグメントである、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする、核酸配列。
配列番号１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、１１６０、又は１２３８～１２５４の重鎖アミノ酸配列をコードする、核酸配列。
配列番号１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、又は１１５９の軽鎖アミノ酸配列をコードする、核酸配列。
請求項２４～２６のいずれか一項に記載の核酸配列を含むベクター。
請求項２４～２６のいずれか一項に記載の核酸配列又は請求項２７に記載のベクターを含む、哺乳動物細胞。
請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
患者のがんを治療する方法であって、有効量の請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項２９に記載の組成物を前記患者に投与することを含む方法。
前記がんが固形腫瘍である、請求項３０に記載の方法。
前記がんが、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである、請求項３０に記載の方法。
有効量のＰＤ－１アンタゴニスト抗体を前記患者に投与することをさらに含む、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の方法。
前記ＰＤ－１アンタゴニスト抗体がモノクローナル抗体である、請求項３３に記載の方法。
前記ＰＤ－１アンタゴニスト抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、又はゼルバリマブである、請求項３３又は３４に記載の方法。
２つのＨＣ及び２つのＬＣを含む抗体を産生するためのプロセスであって、前記抗体を発現させ、前記発現させた抗体を回収するような条件下で請求項２８に記載の哺乳動物細胞を培養することを含み、
（ａ）両ＨＣは、配列番号１５、５７３、１１２５、１１２７、１１２９、１１３１、１１３４、１１３６、１１３８、１１４０、１１４２、１１４４、１１４６、１１４８、１１５０、１１５２、１１５４、１１５６、１１５８、１１６０、１２３８～１２５４のアミノ酸配列、又は前述のＨＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）両ＬＣは、配列番号１６、３６５、１１２６、１１２８、１１３０、１１３２、１１３３、１１３５、１１３７、１１３９、１１４１、１１４３、１１４５、１１４７、１１４９、１１５１、１１５３、１１５５、１１５７、若しくは１１５９のアミノ酸配列、又は前述のＬＣアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、プロセス。
請求項３６に記載のプロセスによって得られる抗体。
アフコシル化されている、請求項１～２３又は３７のいずれか一項に記載の抗体。
治療における使用のための、請求項１～２３又は３７のいずれか一項に記載の抗体。
がんの治療における使用のための、請求項１～２３又は３７のいずれか一項に記載の抗体。
前記がんが固形腫瘍である、請求項４０に記載の抗体。
前記がんが、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである、請求項４０又は４１に記載の抗体。
前記がんが、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである、請求項４１に記載の抗体。
がんを治療するための医薬の製造のための、請求項１～２３又は３７のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記がんが固形腫瘍である、請求項４４に記載の使用。
前記がんが、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、膵臓がん、又は転移性去勢抵抗性前立腺がんである、請求項４４に記載の使用。
前記がんが、非小細胞肺がん、胃がん、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌、又はトリプルネガティブ乳がんである、請求項４４に記載の使用。
患者のがんを治療する方法であって、有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体、並びに二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子、Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニスト、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストのうちの１つ以上を前記患者に投与することを含む方法。
有効量のＴｒｅｇ枯渇抗体及び二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー分子を投与することを含む、請求項４８に記載の方法。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項４９に記載の方法。
Ｔ細胞共刺激受容体のアゴニストを投与することをさらに含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
前記Ｔｒｅｇ枯渇抗体が抗ＣＣＲ８抗体である、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
前記Ｔｒｅｇ枯渇抗体が、請求項１～２３又は３７のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体である、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
前記Ｔｒｅｇ枯渇抗体が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項４８～５１のいずれか一項に記載の方法。
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のアンタゴニストが、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体である、請求項４８又は５０～５４のいずれか一項に記載の方法。
前記ＰＤ－１アンタゴニスト抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、又はゼルバリマブである、請求項５５に記載の方法。
免疫細胞共刺激受容体のアゴニストが、４－１ＢＢアゴニスト抗体である、請求項４８又は５１～５６のいずれか一項に記載の方法。
患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又はその抗原結合フラグメントを前記患者に投与することを含み、前記エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基を含む方法。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも２個の残基を含む、請求項５８に記載の方法。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも３個の残基を含む、請求項５８又は請求項５９に記載の方法。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも４個の残基を含む、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の方法。
前記エピトープが、配列番号８２の４位にスレオニンを含む、請求項５８～６１のいずれか一項に記載の方法。
前記抗体が、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
患者のがんを治療する方法であって、エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する有効量の抗体又はその抗原結合フラグメントを前記患者に投与することを含み、前記エピトープは、配列番号８２の４位のスレオニンからなる方法。
前記エピトープが、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントによって決定される、請求項５８～６４のいずれか一項に記載の方法。
前記エピトープが、細胞ベースの親和性アッセイによって決定され、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体が、野生型カニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体と比較される、請求項６５に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合するエピトープビニング、及び／又はファージディスプレイによりＣＣＲ８への結合をスクリーニングすることによって決定される、請求項５８～６４のいずれか一項に記載の方法。
前記抗体が、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない、請求項６４～６８のいずれか一項に記載の方法。
エピトープにおいてヒトＣＣＲ８に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記エピトープは、配列番号８２の少なくとも１個の残基を含む、抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも２個の残基を含む、請求項６９に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも３個の残基を含む、請求項６９又は７０に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも４個の残基を含む、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも５個の残基を含む、請求項６９～７２のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも６個の残基を含む、請求項６９～７３のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも７個の残基を含む、請求項６９～７４のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも８個の残基を含む、請求項６９～７５のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも９個の残基を含む、請求項６９～７６のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも１０個の残基を含む、請求項６９～７７のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の少なくとも１１個の残基を含む、請求項６９～７８のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の１２個の残基を含む、請求項６９～７９のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、配列番号８２の４位のスレオニンを含む、請求項６９～８０のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記抗ＣＣＲ８抗体が、ＣＣＲ８へのＣＣＬ１の結合を阻害しない、請求項６９～８１のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、エピトープビニングによって決定される、請求項６９～８２のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、ＣＣＲ８ペプチド－ナノボディ複合体に結合することによって決定される、請求項６９～８２のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、ファージディスプレイによりＣＣＲ８に結合する抗体をスクリーニングすることによって決定される、請求項６９～８２のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、カニクイザルＣＣＲ８内のＴ４Ｒ突然変異に結合する抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントによって決定される、請求項６９～８１のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記エピトープが、細胞ベースの親和性アッセイによって決定され、Ｔ４Ｒ突然変異を含むカニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体が、野生型カニクイザルＣＣＲ８を発現する細胞に結合する抗体と比較される、請求項８６に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記抗体又は抗原結合フラグメントが、Ｔ４Ｒ突然変異を含むＣＣＲ８への結合が低減されたか又は検出不能であることを示す、請求項８６又は請求項８７に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＣＣＲ８へのリガンド結合を阻害しない、請求項６９～８５のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記リガンドがＣＣＬ１である、請求項８９に記載の抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメント。
前記抗ＣＣＲ８抗体又はその抗原結合フラグメントが抗体である、請求項５８～９０のいずれか一項に記載の抗ＣＣＲ８抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は方法。