JP2024521619A - 操作されたｈｌａ－ｅまたはｈｌａ－ｇを含む低免疫原性細胞 - Google Patents

操作されたｈｌａ－ｅまたはｈｌａ－ｇを含む低免疫原性細胞 Download PDF

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Abstract

本明細書では、ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含む、操作された細胞、及び／または低免疫原性幹細胞、それから分化した低免疫原性細胞及び低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む低免疫原性細胞、ならびにそれらの使用及び生成の関連方法が開示される。本明細書では、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原、及びＴ細胞受容体の低減された発現を更に示す細胞が提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年５月２７日出願の米国仮出願第６３／１９４，１０６号及び２０２１年１０月１４日出願の米国仮出願第６３／２５５，９１２号の利益を主張するものであり、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
既製のＣＡＲ－Ｔ細胞及び他の治療細胞は、製造の容易性、品質管理ならびに有害な汚染及びＴ細胞機能不全の回避を含め、自己移植細胞ベースのストラテジーを上回る利点を提供し得る。しかしながら、組織不適合細胞に対する頑強な宿主対移植片免疫応答は、同種異系細胞の増殖及び持続性を妨げ、このアプローチの有効性を軽減する。
動物モデル及びヒト患者の両方において、低免疫原性細胞移植が多数の障害、病態、及び疾患の治療への科学的に実現可能で臨床的に有望なアプローチであるという確固たる証拠がある。
レシピエントの免疫系による検出を避ける細胞ベースの治療法を生み出すための新規のアプローチ、組成物、及び方法に対する必要性が依然として存在する。
ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含む操作された細胞が提供される。
いくつかの実施形態では、操作された細胞は、ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む。
いくつかの実施形態では、操作された細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を更に含む。
（ｉ）未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減；ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含む、低免疫原性細胞が提供される。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む。いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較してタンパク質の安定性を増加させる改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較してタンパク質の安定性を増加させる改変を含む。
いくつかの実施形態では、ｉ）ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質がより長期間細胞表面に留まるように、非抗原結合ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のリサイクル速度を上昇させる改変を含み、及び／またはｉｉ）ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質がより長期間細胞表面に留まるように、非抗原結合ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のリサイクル速度を上昇させる改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を防止し、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。
いくつかの実施形態では、第１のデコイペプチドと第２のデコイペプチドは異なるペプチドである。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／またはＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する。
いくつかの実施形態では、ｉ）ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、リンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、第１のリンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続し、第２のリンカーは、Ｂ２Ｍサブユニットを抗原ペプチドに接続する。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現しない。いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ及び／またはＨＬＡ－ＤＲ抗原を発現しない。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）及び／またはＭＨＣクラスＩＩトランスアクチベーター（ＣＩＩＴＡ）の発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを発現しない。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び／または第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座のうちのいずれか２つは、同じ遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して操作された細胞または低免疫原性細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、ヒト細胞または動物細胞に由来する。いくつかの実施形態では、操作された細胞または低免疫原性細胞は、人工多能性幹細胞またはその子孫に由来する分化細胞である。いくつかの実施形態では、分化細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び内皮細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、操作された細胞及び低免疫原性細胞は、初代免疫細胞またはその子孫である。いくつかの実施形態では、初代免疫細胞またはその子孫は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ、Ｔ細胞がＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２０特異的ＣＡＲ、Ｔ細胞がＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２２特異的ＣＡＲ、及びＴ細胞がＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞がＣＤ１９／ＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、２つの別個のポリヌクレオチドによってコードされる。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レンチウイルスベクターを使用してＴ細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レシピエント患者のｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞に導入される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、及び（ｉｉ）１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによってＴ細胞に導入され、レシピエント患者のＴ細胞は、１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用してＴ細胞に導入される。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、ドナー対象からｅｘ ｖｉｖｏで行われる。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レンチウイルスベクターを使用して行われる。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、（ｉｉ）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集成分をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって行われ、レシピエント患者のＴ細胞は、レンチウイルスベクターで形質導入される。
いくつかの実施形態では、分化細胞もしくはその子孫、または初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時にＮＫ細胞媒介細胞毒性を回避する。いくつかの実施形態では、分化細胞もしくはその子孫、または初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時に成熟ＮＫ細胞による細胞溶解から保護される。いくつかの実施形態では、分化細胞もしくはその子孫、あるいは初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時に細胞に対する免疫応答を誘導しない。
本明細書に記載される操作された細胞のいずれかの集団または本明細書に記載される低免疫原性細胞のいずれかの集団、及び医薬的に許容される添加剤、担体、希釈剤もしくは賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
患者に本明細書に記載される分化細胞のいずれかの集団を投与することを含む、状態または疾患を治療することを必要とする患者における状態または疾患を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、分化細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び内皮細胞からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ９４、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＰＤ－１、阻害性ＮＫ細胞受容体、及び活性化ＮＫ受容体からなる群から選択されるＮＫ細胞上の１つ以上の受容体に結合し、及び／またはそれと相互作用する治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、治療剤は、抗体ならびにその断片及び変異体、抗体模倣体、小分子、遮断ペプチド、ならびに受容体アンタゴニストからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、状態または疾患は、がん、心血管疾患、脳卒中、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）、頸動脈疾患（ＣＡＤ）、動静脈奇形（ＡＶＭ）、包括的高度慢性下肢虚血（ＣＬＴＩ）、肺塞栓症（血栓）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、慢性静脈不全（ＣＶＩ）、及び任意の別の血管障害／状態からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、投与は、静脈内注射、筋肉内注射、血管内注射、及び移植からなる群から選択される。
患者に本明細書に記載される初代免疫細胞のいずれかの集団を投与することを含む、がんを治療することを必要とする患者におけるがんを治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、初代免疫細胞は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本技術は、レシピエント患者における疾患または状態を治療するための操作されたＴ細胞の集団の使用に関し、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体、ならびに未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含み、操作されたＴ細胞は、初代Ｔ細胞もしくはその子孫から増殖するか、またはｉＰＳＣもしくはその子孫に由来する。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。
いくつかの実施形態において、操作されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、操作されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を防止し、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。いくつかの実施形態では、第１のデコイペプチドと第２のデコイペプチドは異なるペプチドである。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／またはＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する。
いくつかの実施形態では、ｉ）ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、リンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、第１のリンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続し、第２のリンカーは、Ｂ２Ｍサブユニットを抗原ペプチドに接続する。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入され、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び／または第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座のうちのいずれか２つは、同じ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して操作されたＴ細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して操作されたＴ細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、操作されたＴ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ、操作されたＴ細胞がＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２０特異的ＣＡＲ、操作されたＴ細胞がＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２２特異的ＣＡＲ、及び操作されたＴ細胞がＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、細胞がＣＤ１９／ＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、２つの別個のポリヌクレオチドによってコードされる。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レンチウイルスベクターを使用して操作されたＴ細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レシピエント患者のｉｎ ｖｉｖｏで操作されたＴ細胞に導入される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、及び（ｉｉ）１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって操作されたＴ細胞に導入され、レシピエント患者の操作されたＴ細胞は、１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して操作されたＴ細胞に導入される。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、ドナー対象からｅｘ ｖｉｖｏで行われる。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レンチウイルスベクターを使用して行われる。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで行われる。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、（ｉｉ）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集成分をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって行われ、レシピエント患者のＴ細胞は、１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される。
いくつかの実施形態では、本技術は、レシピエント患者における疾患または状態を治療するための操作された分化細胞の集団の使用に関し、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体、ならびに未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含み、操作された分化細胞は、ｉＰＳＣまたはその子孫に由来する。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む。
いくつかの実施形態において、操作された分化細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、操作された分化細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を妨げ、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドのＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。いくつかの実施形態では、第１のデコイペプチドと第２のデコイペプチドは異なるペプチドである。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／またはＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／またはＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する。
いくつかの実施形態では、ｉ）ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、リンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、第１のリンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続し、第２のリンカーは、Ｂ２Ｍサブユニットを抗原ペプチドに接続する。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入され、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドは、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び／または第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座のうちのいずれか２つは、同じ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、第１、第２及び第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、操作された分化細胞は、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して操作された分化細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド、第２のポリヌクレオチド及び／または第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して操作された分化細胞に導入される。
抗原結合クレフトに改変を含むヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質が、提供される。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドが変異体タンパク質に結合するのを妨げる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質はデコイペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞内ドメインの１つ以上に欠失を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、リンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、第１のリンカーは、ＨＬＡ－Ｅ重鎖とＢ２Ｍサブユニットを接続し、第２のリンカーは、Ｂ２Ｍサブユニットを抗原ペプチドに接続する。
いくつかの実施形態では、抗原結合クレフトに改変を含むヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドが変異体タンパク質に結合するのを妨げる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質はデコイペプチドに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のデコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、細胞内ドメインの１つ以上に欠失を含む。
記載されるＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド構築物が、本明細書に提供される。記載されるＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド構築物が、本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
記載されたＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のいずれかをコードする第１のポリヌクレオチドと、記載されたＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のいずれかをコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物が、提供される。記載されたＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のいずれかをコードする第１のポリヌクレオチドと、ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物が、提供される。
いくつかの実施形態では、構築物はプロモーターを更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、組織型特異的プロモーターである。
低免疫原性細胞、その生成方法、及びその使用方法の詳細な説明は、２０２０年８月１３日出願の米国仮出願第６３／０６５，３４２号、２０２０年１２月３１日出願の米国仮出願第６３／１３６，１５２号、２０２１年４月１４日出願の米国仮出願第６３／１７５，０３０号、２０２１年４月１４出願の米国仮出願第６３／１７５，００３号、及び２０２１年１月１１日出願の米国仮出願（代理人整理番号１８６１５－３００４６．００）、２０１５年５月９日出願のＷＯ２０１６／１８３０４１、２０１８年１月１４日出願のＷＯ２０１８／１３２７８３、２０１９年７月１７日出願のＷＯ２０２０／０１８６１５、２０１９年７月１７日出願のＷＯ２０２０／０１８６２０、２０２０年２月１６日出願のＷＯ２０２０／１６８３１７、２０２１年４月２７日出願のＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０２９４４３に記載されており、実施例、配列表及び図面を含むその開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＮＫ細胞回避を媒介できる例示的な分子を示す概略図である。ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩの発現が欠如しているＫ５６２細胞におけるＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７などの様々な分子の過剰発現は、ＮＫ細胞媒介の自然免疫応答の活性化を妨げ得る。 Ａ～Ｄは、アイソタイプ対照と比較した、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでＫ５６２細胞上のＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ及びＨＬＡ－ＩＩレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩの発現は、Ｋ５６２細胞ではｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで検出されなかった。 Ａ～Ｄは、アイソタイプ対照と比較した、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでＫ５６２細胞上のＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ及びＨＬＡ－ＩＩレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩの発現は、Ｋ５６２細胞ではｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで検出されなかった。 Ａ～Ｄは、アイソタイプ対照と比較した、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでＫ５６２細胞上のＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ及びＨＬＡ－ＩＩレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩの発現は、Ｋ５６２細胞ではｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで検出されなかった。 Ａ～Ｄは、アイソタイプ対照と比較した、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでＫ５６２細胞上のＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ及びＨＬＡ－ＩＩレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。ＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩの発現は、Ｋ５６２細胞ではｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで検出されなかった。 Ａ～Ｂは、アイソタイプ対照と比較した、外因性ＨＬＡ－Ｅタンパク質を発現する未改変Ｋ５６２細胞及び改変Ｋ５６２細胞における、ＨＬＡ－Ｅレベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。 Ａ～Ｂは、アイソタイプ対照と比較した、外因性ＨＬＡ－Ｇタンパク質を発現する未改変Ｋ５６２細胞及び改変Ｋ５６２細胞における、ＨＬＡ－Ｇレベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。 Ａ～Ｂは、アイソタイプ対照と比較した、外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を発現する未改変Ｋ５６２細胞及び改変Ｋ５６２細胞における、ＰＤ－Ｌ１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。 Ａ～Ｃは、アイソタイプ対照と比較した、未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞（「未成熟ＮＫ細胞」とも称される）及びＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞（「成熟ＮＫ細胞」とも称される）におけるＫＩＲ２ＤＬレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。 Ａ～Ｃは、アイソタイプ対照と比較した、未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞（「未成熟ＮＫ細胞」とも称される）及びＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞（「成熟ＮＫ細胞」とも称される）におけるＫＩＲ２ＤＬレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。 Ａ～Ｃは、アイソタイプ対照と比較した、未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞（「未成熟ＮＫ細胞」とも称される）及びＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞（「成熟ＮＫ細胞」とも称される）におけるＫＩＲ２ＤＬレベルを測定したフローサイトメトリーデータを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ９４対ＣＤ５６のＦＡＣＳプロットを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＣＤ９４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＫＩＲ２ＤＬ４対ＣＤ５６のＦＡＣＳプロットを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＫＩＲ２ＤＬ４レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＰＤ－１対ＣＤ５６のＦＡＣＳプロットを示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞上のＣＤ５６及びＰＤ－１レベルを測定するフローサイトメトリーデータを示す。ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞の割合を示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞亜集団によるＫ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞の細胞死滅データを示す。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって決定された、ＮＫ細胞によるグランザイムＢ及びパーフォリン放出レベルを示す。レベルは、未選別ＮＫ細胞、ならびに未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）に曝露された特異的ＮＫ細胞亜集団から評価した。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 未改変Ｋ５６２細胞（Ａ）、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（Ｂ）、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞（Ｃ）及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞（Ｄ）を含む未刺激細胞ならびに刺激細胞における、ＮＫ細胞阻害リガンドならびにＮＫ細胞活性化リガンドの発現レベルを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 （ｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物（Ａ）または（ｉｉ）ヒトｍｏｃｋ Ｔ細胞と、ＨＬＡ－Ｅ（Ｂ）、ＨＬＡ－Ｇ（Ｃ）もしくはＰＤ－Ｌ１（Ｄ）のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞との混合物のいずれかと共に、ヒトＮＫ細胞を免疫不全ＮＳＧマウスに養子移入した後のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫回避のデータを示す。 ヒトＴ細胞、ＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ欠損細胞、またはＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－ＧもしくはＰＤ－Ｌ１のいずれかを過剰発現するＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞のいずれかを注射されたヒト化マウスからの試料において検出されたＴ細胞活性化及びドナー特異的抗体結合のレベルを示す。Ａは、ＩＦＮｇ（ＴＨ１）ＥＬＩＳＰＯＴアッセイからのデータを示す。Ｂは、ＩｇＭ抗体結合からのデータを示す。
本技術の他の目的、利点、及び実施形態は、以下の詳細な説明から明らかとなろう。
Ｉ．序論
本明細書には、ＷＯ２０１８１３２７８３に記載の低免疫編集プラットフォームに部分的に基づく操作または改変されたヒト免疫回避細胞が記載される。これらの幹細胞由来移植の対象の免疫拒絶反応の問題を解消するために、発明者は、任意の移植可能な細胞タイプのための生存可能源を表す低免疫原性細胞（例えば、低免疫原性多能性細胞、そのようなものに由来する分化細胞、及び初代細胞）を開発し、本明細書に記載する。かかる細胞は、レシピエント対象への投与後に適応及び／または自然免疫拒絶反応から保護される。有利なことに、本明細書に開示される細胞は、対象の遺伝子構成を問わず、レシピエント対象の免疫系によって拒絶されない。かかる細胞は、レシピエント対象への投与時に適応免疫及び自然免疫による拒絶反応から保護される。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、ＭＨＣ Ｉ及び／またはＩＩ抗原及び／またはＴ細胞受容体を発現しない。多くの実施形態では、低免疫原性細胞は、ＭＨＣ Ｉ及びＩＩ抗原及び／またはＴ細胞受容体を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現する。多くの実施形態では、低免疫原性ｉＰＳＣまたは初代Ｔ細胞に由来するものを含む低免疫原性Ｔ細胞などの低免疫原性細胞は、ＭＨＣ Ｉ及びＩＩ抗原及び／またはＴ細胞受容体を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、外因性ＣＡＲを発現する。
いくつかの実施形態では、本明細書で概説される低免疫原性細胞は、自然免疫細胞拒絶反応を受けない。一部の事例では、低免疫原性細胞は、ＮＫ細胞媒介性溶解に感受性ではない。一部の事例では、低免疫原性細胞は、マクロファージ貪食に感受性ではない。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、免疫抑制剤をほとんどあるいはまったく必要とすることなくレシピエント対象に移植される、普遍的に適合性の細胞または組織（例えば、普遍的ドナー細胞または組織）の供給源として有用である。かかる低免疫原性細胞は、移植時に細胞特異的性質及び特徴を保持する。
本明細書に開示される技術は、寛容原性因子の発現及びヒト細胞におけるＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、及び／またはＴＣＲ発現の調節（例えば、低減または排除）を利用する。いくつかの実施形態では、レアカット（ｒａｒｅ－ｃｕｔｔｉｎｇ）エンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、及びホーミングエンドヌクレアーゼシステム）を利用したゲノム編集技術を使用して、細胞において必要不可欠な免疫遺伝子の発現もまた（例えば、必要不可欠な免疫遺伝子のゲノムＤＮＡを欠失させることによって）低減または排除される。いくつかの実施形態では、ゲノム編集技術または他の遺伝子調節技術は、ヒト細胞における忍容性誘導（寛容原性）因子を挿入するために使用され、細胞及びそれらの子孫（それから調製された任意の分化細胞を含む）は、レシピエント対象に移植すると免疫認識を回避することができるようになる。このように、本明細書に記載の細胞は、ＭＨＣ Ｉ、ＭＨＣ ＩＩ、及び／またはＴＣＲ発現に影響を及ぼし、レシピエント対象の免疫系を回避する１つ以上の遺伝子及び因子の調節された発現を示す。
ゲノム編集技術は、所望の遺伝子座部位での二本鎖ＤＮＡ切断を可能にする。これらの制御された二本鎖切断は、特定の遺伝子座部位にて相同組換えを促進する。このプロセスは、当配列を認識してそれに結合し、当核酸分子における二本鎖切断を誘導するエンドヌクレアーゼによる、染色体などの核酸分子の特定の配列の標的化に焦点を当てる。二本鎖切断は、エラープローン非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同組換え（ＨＲ）のいずれかによって修復される。
多数の実施形態の実施は、特にそれとは反対の指示がない限り、当業者の技能の範囲内である化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法、遺伝学、免疫学、及び細胞生物学の従来の方法を用いることになり、これらのうちの多くが例示説明の目的で下記に記載される。かかる技法は、文献において完全に説明される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ Ｊｕｌｙ ２００８）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）；Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；及びＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどの刊行物におけるモノグラフを参照されたい。
ＩＩ．定義
本明細書で細胞を特徴付けるために使用されるとき、「低免疫原性」という用語は、一般に、かかる細胞が、かかる細胞を移植される対象による、自然免疫または適応免疫拒絶反応を受けにくい、例えば、細胞が、かかる細胞を移植される対象による同種異系拒絶反応を受けにくいことを意味する。例えば、未変化または未改変の野生型細胞と比べて、かかる低免疫原性細胞は、かかる細胞を移植される対象による免疫拒絶反応を約２．５％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７．５％、９９％、またはそれを超えて、受けにくい可能性がある。いくつかの実施形態では、ゲノム編集技術を使用して、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣ ＩＩ遺伝子の発現が調節され、ひいては低免疫原性細胞が生成される。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントにおいて免疫拒絶反応を回避する。一部の事例では、本明細書に概説される低免疫原性幹細胞から生産される分化細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントに投与された（例えば、移植された（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植された（ｇｒａｆｔｅｄ））ときに免疫拒絶反応を回避する。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、Ｔ細胞媒介性適応免疫拒絶反応及び／または自然免疫細胞拒絶反応から保護される。低免疫原性細胞、その生産方法、及びその使用方法の詳細な説明は、２０１５年５月９日出願のＷＯ２０１６１８３０４１、２０１８年１月１４日出願のＷＯ２０１８１３２７８３、２０１８年３月２０日出願のＷＯ２０１８１７６３９０、２０１９年７月１７日出願のＷＯ２０２００１８６１５、２０１９年７月１７日出願のＷＯ２０２００１８６２０、２０２０年７月３１日出願のＰＣＴ／ＵＳ２０２０／４４６３５、２０１９年８月１日出願のＵＳ６２／８８１，８４０、２０１９年８月２３日出願のＵＳ６２／８９１，１８０、２０２０年４月２７日出願のＵＳ６３／０１６，１９０、及び２０２０年７月１５日出願のＵＳ６３／０５２，３６０に見出され、実施例、配列表、及び図を含めたこれらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
細胞の低免疫原性は、細胞が適応免疫応答及び自然免疫応答を誘発する能力などの細胞の免疫原性を評価することによって決定することができる。かかる免疫応答は、当業者に認識されるアッセイを使用して測定することができる。いくつかの実施形態では、免疫応答アッセイは、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞殺傷、ＮＫ細胞増殖、ＮＫ細胞活性化、及びマクロファージ活性に対する低免疫原性細胞の効果を測定する。場合によっては、低免疫原性細胞及びその誘導体は、対象に投与されるとＴ細胞及び／またはＮＫ細胞による殺傷の減少を経る。一部の事例では、細胞及びその誘導体は、未改変または野生型細胞と比較してマクロファージの貪食の減少を示す。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、対応する未改変野生型細胞と比較してレシピエント対象において低減または減弱した免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、非免疫原性であるか、またはレシピエント対象において免疫応答を誘発することができない。
本明細書で使用される「免疫抑制因子」または「免疫制御因子」または「寛容原性因子」とは、細胞が投与、移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、または移植（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）時に宿主またはレシピエント対象の免疫系によって認識される能力を調節するかまたはそれに影響を及ぼす、低免疫因子、補体インヒビター、及び他の因子を含む。
本明細書で使用される「免疫シグナル伝達因子」とは、場合によっては、免疫シグナル伝達経路を活性化する分子、タンパク質、ペプチドなどを指す。
本明細書で使用される「セーフハーバー遺伝子座」とは、導入遺伝子または外因性遺伝子の安全な発現を可能にする遺伝子座を指す。例示の「セーフハーバー」遺伝子座には、ＣＣＲ５遺伝子、ＣＸＣＲ４遺伝子、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（別名ＡＡＶＳ１）遺伝子、アルブミン遺伝子、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子、Ｒｏｓａ遺伝子（例えば、ＲＯＳＡ２６）、Ｆ３遺伝子（別名ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ遺伝子、ＭＩＣＢ遺伝子、ＬＲＰ１遺伝子（別名ＣＤ９１）、ＨＭＧＢ１遺伝子、ＡＢＯ遺伝子、ＲＨＤ遺伝子、ＦＵＴ１遺伝子、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子（別名ＨＹ）が含まれるが、これらに限定されない。外因性遺伝子は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ、ＣＣＲ５、Ｆ３（すなわち、ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＬＲＰ１、ＨＭＧＢ１、ＡＢＯ、ＲＨＤ、ＦＵＴ１、またはＫＤＭ５Ｄ（すなわち、ＨＹ）のＣＤＳ領域に挿入され得る。外因性遺伝子は、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（すなわち、ＡＡＶＳ１）またはＣＣＲ５のイントロン１または２に挿入され得る。外因性遺伝子は、ＣＣＲ５のエクソン１または２または３に挿入され得る。外因性遺伝子は、ＣＬＹＢＬのイントロン２に挿入され得る。外因性遺伝子は、Ｃｈ－４：５８，９７６，６１３（すなわち、ＳＨＳ２３１）における５００ｂｐウィンドウに挿入され得る。外因性遺伝子は、例えば、セーフハーバー遺伝子座内のイントロン、エクソン、またはコード配列領域を含めた、外因性遺伝子の発現を可能にする前述のセーフハーバー遺伝子座の任意の好適な領域に挿入され得る。
本開示の目的において、「遺伝子」は、遺伝子産物をコードするＤＮＡ領域、ならびに遺伝子産物の産生を制御するすべてのＤＮＡ領域（かかる制御配列がコード配列及び／または転写された配列に隣接するか否かにかかわらず）を含む。したがって、遺伝子には、プロモーター配列、ターミネーター、翻訳制御配列、例えば、リボソーム結合部位及び内部リボソーム進入部位、エンハンサー、サイレンサー、インシュレーター、境界エレメント、複製起点、マトリックス付着部位、ならびに遺伝子座制御領域が含まれるが、必ずしもこれらに限定されない。
「遺伝子発現」とは、遺伝子に含まれる情報の遺伝子産物への変換を指す。遺伝子産物は、遺伝子の直接転写産物（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡ、または任意の他の種類のＲＮＡ）、またはｍＲＮＡの翻訳によって産生されるタンパク質であり得る。遺伝子産物にはまた、キャッピング、ポリアデニル化、メチル化、及び編集などのプロセスによって修飾されるＲＮＡ、ならびに、例えば、メチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、ＡＤＰリボシル化、ミリストイル化、及びグリコシル化によって改変されるタンパク質も含まれる。
本明細書で使用される「遺伝子改変」という用語及びその文法上の同等物は、核酸、例えば、生物のゲノム内の核酸の１つ以上の変化を指し得る。例えば、遺伝子改変と、遺伝子もしくは遺伝子の一部分または他の核酸配列の変化、付加、及び／または欠失を指し得る。遺伝子改変された細胞とはまた、遺伝子または遺伝子の一部分の付加、欠失、及び／または変化を有する細胞も指し得る。遺伝子改変された細胞とはまた、遺伝子または遺伝子部分ではない核酸配列の付加を有する細胞も指し得る。遺伝子改変には、例えば、一過性ノックインまたはノックダウンメカニズム、及び標的遺伝子または遺伝子もしくは核酸配列の一部分の永続的ノックイン、ノックダウン、またはノックアウトをもたらすメカニズムの両方が含まれる。遺伝子改変には、例えば、一過性ノックイン及び核酸配列の永続的ノックインをもたらすメカニズムの両方が含まれる。遺伝子改変にはまた、例えば、低減または増加した転写、低減または増加したｍＲＮＡ安定性、低減または増加した翻訳、及び低減または増加したタンパク質の安定性が含まれる。
遺伝子発現の「調節」とは、遺伝子の発現レベルの変化を指す。発現の調節には、遺伝子活性化及び遺伝子抑制が含まれ得るが、これらに限定されない。調節はまた、完全であってもよく（すなわち、遺伝子発現が完全に不活性化されるか、または野生型のレベル以上まで活性化される）、またはそれは部分的であってもよい（遺伝子発現が部分的に低減されるか、または野生型のレベルのある割合まで部分的に活性化される）。
「作動的に連結された」または「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上の構成要素（配列エレメントなど）の並置に関して互換的に使用され、これらの構成要素は、両方の構成要素が正常に機能し、構成要素のうちの少なくとも１つが、その他の構成要素のうちの少なくとも１つに及ぼす機能を媒介し得るという可能性を許容するように配置される。例示説明として、プロモーターなどの転写制御配列は、その転写制御配列が１つ以上の転写制御因子の存否に応答してコード配列の転写レベルを制御する場合、コード配列に作動的に連結されている。転写制御配列は通常、コード配列とシスで作動的に連結されるが、それに直接的に隣接する必要はない。例えば、エンハンサーは、コード配列に、それらが連続していない場合であっても、作動的に連結されている転写制御配列である。
「ベクター」または「構築物」は、遺伝子配列を標的細胞に移入することができる。典型的には、「ベクター構築物」、「発現ベクター」、及び「遺伝子移入ベクター」とは、目的の遺伝子の発現を導くことができ、遺伝子配列を標的細胞に移入し得る、任意の核酸構築物を意味する。したがって、この用語は、クローニング、及び発現ビヒクル、ならびに組み込みベクターを含む。ベクターまたは構築物を細胞に導入するための方法は、当業者に既知であり、これには脂質媒介性移入（すなわち、中性及びカチオン性脂質を含むリポソーム）、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、粒子ボンバードメント、リン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介性移入、及びウイルスベクター媒介性移入が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「多能性幹細胞」は、内胚葉（例えば、胃壁、消化管、肺など）、中胚葉（例えば、筋肉、骨、血液、泌尿生殖器系組織など）、または外胚葉（例えば、上皮組織及び神経系組織）の３種の胚葉のうちのいずれかへと分化する潜在能力を有する。本明細書で使用される「多能性幹細胞」という用語はまた、「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」、「胚性幹細胞」または「ＥＳＣ」、すなわち非多能性細胞に由来する多能性幹細胞の一種も包含する。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞は、多能性細胞ではない細胞から産生または生成される。換言すれば、多能性幹細胞は、非多能性細胞の直接的または間接的な子孫であり得る。親細胞の例には、様々な手段によって多能性で未分化の表現型を誘導するように再プログラム化された体細胞が含まれる。かかる「ＥＳＣ」、「ＥＳＣ」、「ｉＰＳ」、または「ｉＰＳＣ」細胞は、特定の制御遺伝子の発現を誘導することによって、または特定のタンパク質の外因性の適用によって作出することができる。ｉＰＳ細胞の誘導のための方法は、当技術分野で既知であり、下記に更に記載される（例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２７（１１）：２６６７－７４（２００９）、Ｈｕａｎｇｆｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６（７）：７９５（２００８）、Ｗｏｌｔｊｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５８（７２３９）：７６６－７７０（２００９）、及びＺｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ８：３８１－３８４（２００９）を参照されたく、同文献のそれぞれは参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）の生成は、下記に概説される。本明細書で使用される場合、「ｈｉＰＳＣ」とは、ヒト人工多能性幹細胞である。いくつかの実施形態では、「多能性幹細胞」はまた、本明細書で使用される場合、間葉幹細胞（ＭＳＣ）、及び／または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を包含する。
いくつかの実施形態では、細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比べて１つ以上の標的の低減または増加した発現を有するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比べて１つ以上の標的の構成的な低減または増加した発現を有するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比べて１つ以上の標的の制御可能な低減または増加した発現を有するように操作される。細胞の文脈における「野生型（ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ）」または「野生型（ｗｔ）」または「対照」と、自然界で見出される任意の細胞を意味する。野生型または対照細胞の例には、天然に見られる初代細胞及びＴ細胞が含まれる。
「ＨＬＡ」または「ヒト白血球抗原」複合体とは、ヒトにおいて主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質をコードする遺伝子複合体である。ＨＬＡ複合体を構成するこれらの細胞表面タンパク質は、抗原に対する免疫応答の制御を担う。ヒトにおいては、クラスＩ及びクラスＩＩの２種のＭＨＣ、「ＨＬＡ－Ｉ」及び「ＨＬＡ－ＩＩ」が存在する。ＨＬＡ－Ｉには、細胞の内側からペプチドを提示するＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃの３種のタンパク質が含まれ、ＨＬＡ－Ｉ複合体によって提示される抗原が、キラーＴ細胞（別名、ＣＤ８＋Ｔ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）を引き付ける。ＨＬＡ－Ｉタンパク質は、β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）に会合している。ＨＬＡ－ＩＩには、細胞の外側から抗原をＴリンパ球に提示するＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲの５種のタンパク質が含まれる。これは、ＣＤ４＋細胞（別名、ヘルパーＴ細胞）を刺激する。「ＭＨＣ」または「ＨＬＡ」のいずれかの使用は、遺伝子がヒト（ＨＬＡ）またはマウス（ＭＨＣ）のどちらに由来するかに依存するため、限定することは意図されないことを理解されたい。よって、それが哺乳動物細胞に関する場合、これらの用語は、本明細書で互換的に使用され得る。
本明細書で使用される場合、「タンパク質変異体」または「変異体タンパク質」という用語、ならびにその文法上の変化形は、改変、置換、挿入または欠失を含む少なくとも１つのアミノ酸変異によって親タンパク質とは異なるタンパク質を指すために互換的に使用される。本明細書で使用される「アミノ酸改変」または「改変」または「アミノ酸置換」または「置換」という用語は、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入及び／または欠失を指す。本明細書で使用される「アミノ酸置換」または「置換」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にあるアミノ酸を別の（例えば、異なる）アミノ酸で置換することを指す。本明細書で使用される「アミノ酸挿入」または「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置でのアミノ酸の付加を指す。本明細書で使用される「アミノ酸欠失」または「欠失」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にあるアミノ酸の除去を指す。
本明細書で使用される場合、「移植すること（ｇｒａｆｔｉｎｇ）」、「投与すること」、「導入すること」、「埋め込むこと」、及び「移植すること（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ）」という用語、ならびにその文法的変形は、導入された細胞の所望の部位での少なくとも部分的な局在化をもたらす方法または経路による、細胞（例えば、本明細書に記載の細胞）の、対象内への配置の文脈において互換的に使用される。細胞は、対象内の所望の部位に直接埋め込まれ得るか、または代替として、所望の箇所への送達をもたらす任意の適切な経路によって投与され得、埋め込まれた細胞または細胞の構成要素の少なくとも一部分は、生存したままである。対象への投与後の細胞の生存期間は、数時間、例えば、２４時間ほどの短期間から、数日、数年ほどの長期間であり得る。いくつかの実施形態では、細胞はまた、例えば、埋め込まれた細胞を埋め込み箇所に維持すると共に、埋め込まれた細胞の移動を回避するためにカプセル中で、脳内または皮下などの所望の部位以外の箇所に投与する（例えば、注射する）こともできる。
本明細書で使用される場合、「治療すること」及び「治療」という用語は、対象が疾患の少なくとも１つの症状の低減または疾患の改善、例えば、有益なまたは所望の治療または臨床結果を有するように、治療的または臨床的有効量の本明細書に記載の細胞を対象に投与することを含む。本技術の目的において、有益なまたは所望の治療または臨床結果には、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減弱、安定化した（すなわち、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善または一時的緩和、及び寛解（部分的か完全かにかかわらず）が含まれるが、これらに限定されない。治療することは、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することを指し得る。したがって、当業者は、治療が病態を改善し得るが、疾患に対する完全な治癒ではない場合があることを認識している。いくつかの実施形態では、病態、疾患、または障害の１つ以上の症状は、病態、疾患、または障害の治療により少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％緩和される。
本技術の目的において、疾患治療の有益なまたは所望の治療または臨床結果には、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減弱、安定化した（すなわち、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善または一時的緩和、及び寛解（部分的か完全かにかかわらず）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「がん」という用語は、細胞の過剰増殖であって、その固有の形質（例えば、正常な制御の喪失）が無制御な成長、分化の欠如、局所組織浸潤、及び転移をもたらすものとして定義される。本発明の方法に関して、がんは、急性リンパ性癌、急性骨髄性白血病、胞巣型横紋筋肉腫、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、肛門、肛門管、または肛門直腸の癌、眼癌、肝内胆管癌、関節の癌、頸部、胆嚢、または胸膜の癌、鼻、鼻腔、または中耳の癌、口腔癌、外陰部の癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性癌、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、線維肉腫、消化管カルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎臓癌、喉頭癌、白血病、液体腫瘍、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、悪性中皮腫、肥満細胞腫、黒色腫、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、大網、及び腸間膜の癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織癌、固形腫瘍、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿管癌、及び膀胱癌のうちのいずれも含む、任意のがんであり得る。本明細書で使用される場合、「腫瘍」という用語は、別途具体的に示されない限り、悪性型の細胞または組織の異常な成長を指し、良性型の組織を含まない。
「慢性感染性疾患」という用語は、感染因子によって引き起こされる疾患であって、感染が持続しているものを指す。かかる疾患には、肝炎（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、及びＥＢＶ）、及びＨＩＶ／ＡＩＤＳが含まれ得る。非ウイルス性の例としては、アスペルギルス症、カンジダ症、コクシジオイデス症、ならびにクリプトコッカス及びヒストプラズマ症に関連する疾患のような慢性真菌性疾患が挙げられ得る。慢性細菌性感染因子の非限定的な例は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓであり得る。いくつかの実施形態では、障害は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症である。いくつかの実施形態では、障害は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）である。
「自己免疫疾患」という用語は、対象がそれ自身の組織に対して破壊的な免疫応答を発動する任意の疾患または障害を指す。自己免疫障害は、神経系、胃腸管系、及び内分泌系、ならびに皮膚及び他の結合組織、眼、血液及び血管の疾患を含むが、これらに限定されない、対象（例えば、ヒト）におけるほぼすべての臓器系を侵す可能性がある。自己免疫疾患の例としては、橋本甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、グレーブス病、強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、重症筋無力症、及び糖尿病が挙げられるが、これらに限定されない。
追加のまたは代替の実施形態では、本技術は、当業者に利用可能な任意の様態で、例えば、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システムまたはＲＮＡ誘導型トランスポザーゼなどのヌクレアーゼシステムを利用して、標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ（例えば、Ｃａｓ９及びＣａｓ１２ａ）及びＴＡＬＥＮを利用した方法の例が本明細書に詳述されているが、本技術は、これらの方法／システムの使用に限定されないことを理解されたい。標的細胞における発現を低減または消失させるために、当業者に既知の他の標的化方法を本明細書で利用することができる。本明細書で提供される方法を使用して、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることができる。本技術は、任意の目的で細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、変異細胞を生産するように変化させられる。本明細書で使用される場合、「変異細胞」とは、結果として生じる遺伝型がその元の遺伝型とは異なる細胞を指す。一部の事例では、「変異細胞」は、例えば、正常に機能している遺伝子が本開示の遺伝子編集システム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）システムを使用して変化させられる場合、変異表現型を示す。他の事例では「変異細胞」は、例えば、本開示の遺伝子編集システム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）が変異伝子型を修正するために使用される場合、野生型表現型を示す。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を補正または修復するように（例えば、細胞に正常な表現型を取り戻すように）変化させられる。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を誘導するように（例えば、遺伝子またはゲノムエレメントの機能を破壊するように）変化させられる。
本技術の方法を使用して、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることができる。本技術は、任意の目的で細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、変異細胞を生産するように変化させられる。本明細書で使用される場合、「変異細胞」とは、結果として生じる遺伝型がその元の遺伝型とは異なる細胞を指す。一部の事例では、「変異細胞」は、例えば、正常に機能している遺伝子が本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して変化される場合、変異表現型を示す。他の事例では、「変異細胞」は、例えば、本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して変異遺伝型が補正される場合、野生型表現型を示す。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を補正または修復するように（例えば、細胞に正常な表現型を取り戻すように）変化させられる。いくつかの実施形態では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を誘導するように（例えば、遺伝子またはゲノムエレメントの機能を破壊するように）変化させられる。
いくつかの実施形態では、変化は、インデルである。本明細書で使用される場合、「インデル」とは、挿入、欠失、またはこれらの組み合わせからもたらされる変異を指す。当業者には理解されようが、ゲノム配列のコード領域におけるインデルは、インデルの長さが３の倍数でない限り、フレームシフト変異をもたらすことになる。いくつかの実施形態では、変化は、点変異である。本明細書で使用される場合、「点変異」とは、ヌクレオチドのうちの１つを置き換える置換を指す。本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して、標的ポリヌクレオチド配列において任意の長さのインデルまたは点変異を誘導することができる。
本明細書で使用される場合、「ノックアウト」または「ノック－アウト」は、標的ポリヌクレオチド配列の機能を妨げるように、標的ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部分を欠失させることを含む。例えば、ノックアウトは、標的ポリヌクレオチド配列の機能的ドメイン（例えば、ＤＮＡ結合ドメイン）における標的ポリヌクレオチド配列内に挿入または欠失（「インデル」）を誘導することにより標的ポリヌクレオチド配列を変化させることによって、達成され得る。当業者であれば、本明細書に記載の詳細に基づいて、本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムをどのように使用して、標的ポリヌクレオチド配列またはその一部分をノックアウトするかについて容易に理解しよう。
いくつかの実施形態では、変化は、標的ポリヌクレオチド配列またはその一部分のノックアウトまたはノックダウンをもたらす。本技術の遺伝子編集システム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）を使用した標的ポリヌクレオチド配列またはその一部分のノックアウトは、様々な用途に有用であり得る。例えば、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列のノックアウトを研究目的のためにｉｎ ｖｉｔｒｏで実施することができる。ｅｘ ｖｉｖｏ目的では、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列のノックアウトは、（例えば、細胞における変異対立遺伝子をｅｘ ｖｉｖｏでノックアウトし、ノックアウトされた変異対立遺伝子を含むそれらの細胞を対象に導入することによって）標的ポリヌクレオチド配列の発現に関連する障害を治療もしくは予防するか、または細胞の遺伝型もしくは表現型を変更するのに有用であり得る。
本明細書における「ノックイン（ｋｎｏｃｋ ｉｎ）」または「ノックイン（ｋｎｏｃｋ－ｉｎ）」は、宿主細胞に遺伝的機能を付加するプロセス、及び宿主細胞における染色体遺伝子座へのＤＮＡ配列の挿入からもたらされる遺伝子改変を意味する。これは、ノックインされた遺伝子、遺伝子の一部分、または核酸配列挿入産物の発現レベルの増加、例えば、ＲＮＡ転写物レベル及び／またはコードされたタンパク質レベルの増加を引き起こす。当業者には理解されようが、これは、遺伝子の１つ以上の追加のコピーを宿主細胞に付加すること、または内在性遺伝子の制御構成要素を変化させることにより、作製されるタンパク質の発現を増加させること、または発現が所望される特定の核酸配列を挿入することを含めた、いくつかの方式で遂行することができる。これは、プロモーターを改変すること、異なるプロモーターを付加すること、エンハンサーを付加すること、または他の遺伝子発現配列を改変することによって遂行されてもよい。
いくつかの実施形態では、変化は、標的ポリヌクレオチド配列及び／または標的ポリペプチド配列の発現の低減または発現の減少をもたらす。「減少する」、「低減された」、「低減」、及び「減少」という用語はすべて、統計学的に有意な量の減少を一般に意味するように本明細書で使用される。しかしながら、疑義を回避するために、「減少する」、「低減された」、「低減」、または「減少」とは、参照レベルと比較して少なくとも１０％の減少、例えば、参照レベルと比較して少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の減少、または最大１００％かつこれを含む減少（すなわち、参照試料と比較して不在のレベル）、または１０～１００％の間の任意の減少を意味する。発現の低減または発現の減少は、遺伝子発現の低減、タンパク質／ポリペプチド発現の低減、ｍＲＮＡ翻訳の低減、ｍＲＮＡ安定性の低減、タンパク質／ポリペプチドの表面発現の低減、ならびに例えばタンパク質／ポリペプチドの活性、機能及び／または安定性の低減による機能的発現の低減に起因し得る。
「増加した」、「増加」、「強化する」または「活性化する」という用語はすべて、本明細書で統計学的に有意な量の増加を一般に意味するように使用される。疑義を避けるために、「増加した」、「増加」、または「強化する」もしくは「活性化する」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の増加、例えば、参照レベルと比較して少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の増加、または最大１００％かつこれを含む増加、または１０～１００％の任意の増加、または参照レベルと比較して少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約１０倍の増加、または２倍～１０倍超の任意の増加を意味する。
本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、指示対象の分子または指示対象のポリペプチドが目的の細胞に導入されることを意味することが意図される。ポリペプチドは、例えば、コーディング核酸を、染色体内への組み込みによって、またはプラスミドもしくは発現ベクターなどの非染色体遺伝物質としてなどで、細胞の遺伝物質に導入することによって導入され得る。したがって、この用語は、コーディング核酸の発現に関して使用されるとき、発現可能な形態でのコーディング核酸の細胞への導入を指す。
「内在性」という用語は、細胞内に存在する指示対象の分子またはポリペプチドを指す。同様に、コーディング核酸の発現に関して使用される場合のこの用語は、細胞内に含まれる、外因的に導入されたのではないコーディング核酸の発現を指す。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一性」パーセントという用語は、下記に記載される配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮまたは当業者に利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用してまたは目視検査によって測定したとき、最大限に対応するように比較及びアライメントした場合に同じであるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の指定のパーセンテージを有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。用途に応じて、「同一性」パーセントは、比較されている配列のある領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在し得るか、または代替として、比較される２つの配列の全長にわたって存在し得る。配列比較のために、典型的には、一方の配列は、試験配列の比較対象となる参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列がコンピュータに入力され、サブ配列座標が指定され、必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次いで配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列と比べた試験配列（複数可）の配列同一率を計算する。
比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装によって（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、または目視検査によって、実施することができる（全般的にはＡｕｓｕｂｅｌら（下記）を参照されたい）。
配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載される、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して一般公開されている。
「対象」及び「個体」という用語は、本明細書で互換的に使用され、細胞を得ることができる及び／または本明細書に記載されるような細胞による治療（予防的治療を含む）が提供される、動物、例えば、ヒトを指す。ヒト対象などの特定の動物に特有である感染症、病態、または疾患状態の治療の場合、対象という用語は、その特定の動物を指す。本明細書で互換的に使用される「非ヒト動物」及び「非ヒト哺乳動物」は、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、及び非ヒト霊長類などの哺乳動物を含む。「対象」という用語はまた、哺乳動物、爬虫類、両生類、及び魚類を含むがこれらに限定されない、任意の脊椎動物を包含する。しかしながら、有利には、対象は、ヒトなどの哺乳動物、または、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどの飼育哺乳動物、もしくは、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタなどの生産哺乳動物などの他の哺乳動物である。
特許請求の範囲は、いずれの任意選択的な要素も除外するように起草され得ることに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連した「単に」、「のみ」などのような排他的な専門用語の使用のため、または「否定的な」制限の使用のための先行詞として役立つよう意図される。本開示を読むと当業者には明らかであるように、本明細書に記載及び例示される個々の実施形態の各々は、本技術の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のうちのいずれかの特徴から容易に切り離されるか、またはそれと組み合わされる別々の構成要素及び特徴を有する。いずれの列挙される方法も、列挙される事象の順序で、または論理的に可能な任意の他の順序で実施され得る。本明細書に記載される方法及び材料と類似または同等の任意の方法及び材料が、本技術の実施または試験においても使用され得るが、代表的な例示的方法及び材料が次に記載される。
本技術で説明されるとき、以下の用語を用いることになり、これらは下記に示されるように定義される。
本技術を更に説明する前に、本技術が記載される多数の実施形態に限定されず、かくして当然のことながら、様々であり得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、いくつかの実施形態を説明するためのものにすぎず、本技術の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定するものとしては意図されないことも理解されたい。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。値の範囲が提供される場合、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本技術内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は独立して、より小さい範囲内に含まれてもよく、また、表示範囲内の任意の具体的に除外される限界値を条件として、本技術内に包含されてもよい。表示範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の片方または両方を除外する範囲もまた、本技術に含まれる。特定の範囲は、本明細書で、数値の前に「約」という用語を付けて提示される。「約」という用語は、それが前に付く数そのもの、ならびにこの用語が前に付く数に近いまたはそれに近似する数に文字通りの支持を提供するように本明細書で使用される。ある数が具体的に列挙される数に近いまたはそれに近似するかどうかを決定する際、その近いまたは近似する列挙されていない数は、提示される文脈において、具体的に列挙される数の実質的な同等値を提供する数であり得る。約という用語は、値のプラスまたはマイナス１０パーセント（１０％）を意味するために本明細書で使用される。例えば、「約１００」は、９０と１１０との間の任意の数を指す。
本明細書で引用されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが明確かつ個別に示された場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。更に、引用される各刊行物、特許、または特許出願は、それらの刊行物が関連して引用される内容を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。いずれの刊行物の引用も、出願日より前のその開示のためのものであり、本明細書に記載の技術が、先行技術に基づいてかかる刊行物に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されるべきではない。更に、提供される刊行物の日付は、実際の刊行物の日付とは異なる場合があり、独立して確認する必要があり得る。
ＩＩＩ．実施形態の詳細な説明
Ａ．低免疫原性細胞
いくつかの実施形態では、本技術は、細胞がＮＫ細胞媒介免疫応答を活性化することを回避できるように１つ以上の外因性受容体を発現する、操作された（例えば、改変及び遺伝子改変された）細胞を提供する。いくつかの実施形態では、外因性受容体には、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質が含まれるが、これらに限定されない。場合によっては、外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、野生型ＰＤ－Ｌ１タンパク質またはその変異体である。
いくつかの実施形態では、細胞は、人工多能性幹細胞、その任意の種類の分化細胞、初代免疫細胞、及び任意の組織の他の初代細胞である。いくつかの実施形態では、分化細胞は、Ｔ細胞及びその亜集団、ＮＫ細胞及びその亜集団、ならびに内皮細胞及びその亜集団である。いくつかの実施形態では、初代免疫細胞は、Ｔ細胞及びその亜集団、ならびにＮＫ細胞及びその亜集団である。いくつかの実施形態では、初代組織細胞には、初代内皮細胞及びその亜集団が含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を発現し、その結果、外因性受容体（複数可）をコードするポリヌクレオチド（複数可）は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座に挿入される（例えば、ノックインされる）。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチド及びＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチド及びＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチド及びＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、及びセーフハーバー遺伝子座からなる群から選択される遺伝子座にノックインされる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体ポリヌクレオチドは、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリヌクレオチドは、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１変異体は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１変異体は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１変異体は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１変異体は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、外因性ＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドは、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１変異体は、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及びＨＬＡ－Ｇ変異体は、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入され、ＣＤ１５５遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入され、Ｂ２Ｍ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入され、ＣＩＩＴＡ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＲＨＤ遺伝子座に挿入され、ＲＨＤ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＡＣ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、ＴＲＢＣ遺伝子座に挿入され、ＴＲＢ遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び外因性ＰＤ－Ｌ１は、セーフハーバー遺伝子座に挿入され、セーフハーバー遺伝子の一方または両方の対立遺伝子を破壊する。
いくつかの実施形態では、本技術は、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、限定されないが、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）、及び初代細胞（例えば、限定されないが、初代Ｔ細胞及び初代ＮＫ細胞）を対象とする。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、それに由来する分化細胞、ならびに初代細胞、例えば、初代Ｔ細胞及び初代ＮＫ細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如のため、及び一部の事例では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現または発現の欠如のために操作される。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、ならびに（ｉ）ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減または発現の欠如、ならびに（ｉｉ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の発現の低減または発現の欠如を示す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択されるいずれか１つに結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２特異的ＣＡＲである。いくつかの事例では、ＣＡＲは、ＣＤ３８特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲである。いくつかの事例では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、二重特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、二重特異的ＣＡＲは、ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、二重特異的ＣＡＲは、ＢＣＭＡ／ＣＤ３８二重特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ２２特異的ＣＡＲ、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ、及びＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ２２特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ１９特異的ＣＡＲ、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ、及びＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ２２特異的ＣＡＲ、ＣＤ１８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ、及びＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ２２特異的ＣＡＲ、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ、及びＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ２２特異的ＣＡＲ、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ、及びＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ及び異なるＣＡＲ、例えば、限定されないがＣＤ２２特異的ＣＡＲ、ＣＤ３８特異的ＣＡＲ、ＣＤ１２３特異的ＣＡＲ、ＣＤ１３８特異的ＣＡＲ、及びＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現する。
いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、ＣＤ１５５遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を過剰発現し、Ｂ２Ｍ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＣＩＩＴＡ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＴＲＡＣ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ細胞及び初代Ｔ細胞由来の低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ｂ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ｃ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＣＤ１５５－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｂ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－、ＣＤ１５５－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ｂ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ｃ－／－、ＣＤ１５５－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ｂ－／－、ＣＤ１５５－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ＣＤ１５５－／－細胞である。
いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＢ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞は、低免疫原性人工多能性幹細胞などの人工多能性幹細胞を分化させることによって産生される。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ及び初代Ｔ細胞に由来する低免疫Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＢ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現するＢ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質ならびにＣＡＲも発現する、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。
いくつかの実施形態では、記載される操作されたまたは改変された細胞は、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞から分化したＮＫ細胞、かかる多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞、初代Ｔ細胞、または初代Ｔ細胞である。Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞の非限定的な例には、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、非制御性Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔｃｍ）細胞、エフェクターメモリーＴ（Ｔｅｍ）細胞、ＣＤ４５ＲＡを発現するエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ細胞）、組織耐性メモリー（Ｔｒｍ）細胞、バーチャルメモリーＴ細胞、自然メモリーＴ細胞、メモリー幹細胞（Ｔｓｃ）、γδＴ細胞、及び任意の他のサブタイプのＴ細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、及びこれらの組み合わせを含む群から選択される。ＮＫ細胞及び初代ＮＫ細胞の非限定的な例には、未成熟ＮＫ細胞及び成熟ＮＫ細胞が含まれる。
いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、レシピエント対象（例えば、細胞を投与される患者）とは異なる１以上のドナー対象からの初代Ｔ細胞のプールからのものである。初代Ｔ細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、１００、またはそれよりも多くのドナー対象から得、一緒にプールすることができる。初代Ｔ細胞は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、２０以上、５０以上、または１００以上のドナー対象から得、一緒にプールすることができる。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、１以上の個体から採取され、一部の事例では、初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を外因性で発現するように操作され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。
多くの実施形態では、初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。ＣＡＲは、当業者に既知のいずれでもあり得る。有用なＣＡＲには、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡを含む群から選択される抗原に結合するものが含まれる。一部の場合では、ＣＡＲは、ＦＤＡが承認したＣＡＲ－Ｔ細胞療法におけるもの、例えば、限定されないが、チサゲンレクルユーセル及びアキシカブタゲンシロルユーセルにおいて使用されるもの、または臨床試験において調査中の他のものと同じまたは同等である。
いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、未改変の初代Ｔ細胞と比較して、内在性Ｔ細胞受容体の低減された発現を示すように操作される。多くの実施形態では、初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、未改変の初代Ｔ細胞と比較して、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１の両方の低減された発現を示すように操作される。Ｔ細胞を含めた細胞を遺伝子改変する方法は、例えば、ＷＯ２０２０／０１８６２０及びＷＯ２０１６／１８３０４１に詳述され、この開示は参照により、表、付録、配列表、及び図を含めてそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、（ａ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む第１世代ＣＡＲ、（ｂ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも２つのシグナル伝達ドメインを含む第２世代ＣＡＲ、（ｃ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも３つのシグナル伝達ドメインを含む第３世代ＣＡＲ、ならびに（ｄ）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、３つまたは４つのシグナル伝達ドメイン、及びＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含む第４世代ＣＡＲを含む群から選択されるＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、これらに限定されないが、（ａ）新生細胞に特有の抗原を標的とする抗原結合ドメイン、（ｂ）Ｔ細胞に特有の抗原を標的とする抗原結合ドメイン、（ｃ）自己免疫障害または炎症性障害に特有の抗原を標的とする抗原結合ドメイン、（ｄ）老化細胞に特有の抗原を標的とする抗原結合ドメイン、（ｅ）感染性疾患に特有の抗原を標的とする抗原結合ドメイン、及び（ｆ）細胞の細胞表面抗原に結合する抗原結合ドメインを含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、抗原結合部分またはその断片、ｓｃＦｖ、及びＦａｂを含む群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、またはＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、例えば、限定されないが、ＦＭＣ６３である。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＦｃεＲＩγ、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、ＦＧＦＲ２Ｂ、及びそれらの機能的変異体の膜貫通領域を含む群から選択される１つを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメイン（複数可）は、共刺激ドメイン（複数可）を含む。例えば、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインを含有し得る。または、シグナル伝達ドメインは、１つ以上の共刺激ドメインを含有し得る。多くの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、１つの共刺激ドメインを含む。他の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、複数の共刺激ドメインを含む。一部の場合では、ＣＡＲが２つ以上の共刺激ドメインを含む場合、２つの共刺激ドメインは、同じではない。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、同じではない２つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞存続を強化する。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞存続を強化する。
本明細書に記載されるように、第４世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、３または４つのシグナル伝達ドメイン、及びＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含有し得る。一部の事例では、サイトカイン遺伝子は、低免疫原性細胞の内在性または外因性サイトカイン遺伝子である。一部の場合では、サイトカイン遺伝子は、炎症誘発性サイトカインをコードする。いくつかの実施形態では、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＴＮＦ、ＩＦＮ－ガンマ、及びこれらの機能的断片を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインは、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）ドメインまたは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはそれらの機能的変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメイン、または４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体を含む。他の実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。多くの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体、（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体、及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、（ｉｉ）ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通ドメインまたはその機能的変異体、（ｉｉｉ）４－１ＢＢ共刺激ドメインまたはその機能的変異体、ならびに（ｉｖ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインまたはその機能的変異体を含む。
ＣＡＲ構築物を導入する方法またはＣＡＲ－Ｔ細胞を生産する方法は、当業者に周知である。詳細な説明は、例えば、Ｖｏｒｍｉｔｔａｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１８，５３，１６２－１８１、及びＥｙｑｕｅｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１７，５４３，１１３－１１７に見出される。
いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞に由来する細胞は、例えば、内在性Ｔ細胞受容体遺伝子（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ定常領域（「ＴＲＡＣ」）またはＴ細胞受容体ベータ定常領域（「ＴＲＢ」）の破壊によって、内在性Ｔ細胞受容体の低減された発現を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、破壊されたＴ細胞受容体遺伝子にて挿入される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードする外因性核酸は、ＴＲＡＣまたはＴＲＢ遺伝子座にて挿入される。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、細胞の予め選択された遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、細胞の予め選択された遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、細胞の予め選択された遺伝子座に挿入される。予め選択された遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座であり得る。セーフハーバー遺伝子座の非限定的な例には、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（別名ＡＡＶＳ１）遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座（例えば、ＲＯＳＡ２６遺伝子座）、Ｆ３遺伝子座（別名ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１遺伝子座（別名ＣＤ９１遺伝子座）、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座が挙げられるが、これらに限定されない。ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（すなわち、ＡＡＶＳ１）もしくはＣＣＲ５のイントロン１または２に挿入できる。ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＣＲ５のイントロン１または２または３に挿入できる。ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＬＹＢＬのイントロン２に挿入できる。ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、Ｃｈ－４：５８，９７６，６１３（すなわち、ＳＨＳ２３１）の５００ｂｐウィンドウに挿入できる。ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、例えば、セーフハーバー遺伝子座内のイントロン、エクソンもしくはコード配列領域を含めた、外因性遺伝子の発現を可能にする前述のセーフハーバー遺伝子座の任意の好適な領域に挿入され得る。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＣＤ１５５遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＴＲＢ遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、同じ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、異なる遺伝子座に挿入される。多くの事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子はセーフハーバー遺伝子座に挿入される。多くの事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。一部の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。特定の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入される。特定の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入される。特定の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。特定の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。多くの他の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。多くの他の事例では、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座（例えば、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座に挿入される。
多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、セーフハーバー遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、セーフハーバー遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。他の実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。他の実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。他の実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＣＩＩＴＡ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、単一のプロモーターによって制御され、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、それら自身のプロモーターによって制御され、ＣＤ１５５遺伝子座に挿入される。
一部の事例では、記載される任意の導入遺伝子の発現を制御するプロモーターは、構成的プロモーターである。他の事例では、記載される任意の導入遺伝子のためのプロモーターは、誘導性プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１αプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、いずれも構成的プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子は、いずれも誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、構成的プロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、誘導性プロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、構成的プロモーターによって制御される。様々な実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＥＦ１αプロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＥＦ１αプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＡＧプロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＡＧプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＣＡＧプロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＥＦ１αプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＥＦ１αプロモーターによって制御され、ＣＡＲをコードする導入遺伝子は、ＣＡＧプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子の発現はいずれも、単一のＥＦ１αプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする導入遺伝子の発現はいずれも、単一のＣＡＧプロモーターによって制御される。
別の実施形態では、本明細書に開示される本技術は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を過剰発現し（例えば、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を外因的に発現し）、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如を有し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現または発現の欠如を有する多能性幹細胞、（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞を対象とする。いくつかの実施形態では、低免疫Ｔ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を過剰発現し（例えば、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を外因的に発現し）、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如を有し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現または発現の欠如を有する。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＣＤ１５５遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、Ｂ２Ｍ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＣＩＩＴＡ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＴＲＡＣ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＡＣ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ－／－、ＨＬＡ－Ｂ－／－、ＨＬＡ－Ｃ－／－、ＣＤ１５５－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。
多くの実施形態では、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞に由来する分化細胞及び初代Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。多くの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル、ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体＋、ＨＬＡ－Ｇ変異体＋、及び／またはＰＤ－Ｌ１＋細胞である。いくつかの実施形態では、記載される操作されたまたは改変された細胞は、多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞から分化したＴ細胞または初代Ｔ細胞である。初代Ｔ細胞の非限定的な例には、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、非制御性Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔｃｍ）細胞、エフェクターメモリーＴ（Ｔｅｍ）細胞、ＣＤ４５ＲＡを発現するエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ細胞）、組織耐性メモリー（Ｔｒｍ）細胞、バーチャルメモリーＴ細胞、自然メモリーＴ細胞、メモリー幹細胞（Ｔｓｃ）、γδＴ細胞、及び任意の他のサブタイプのＴ細胞が含まれる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、細胞の予め選択された遺伝子座に挿入される。予め選択された遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座であり得る。セーフハーバー遺伝子座の非限定的な例には、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座が含まれる。いくつかの実施形態では、予め選択された遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座（例えば、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＣＤ４７導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座に挿入される。多くの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座に挿入される。
一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子の発現は、構成的プロモーターによって制御される。他の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子の発現は、誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＥＦ１アルファ（ＥＦ１α）プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターＣＡＧプロモーターである。
更に別の実施形態では、本明細書に開示される本技術は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現または発現の欠如を有し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の低減された発現または発現の欠如を有する多能性幹細胞、（例えば、多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））、かかる多能性幹細胞に由来するＴ細胞（例えば、低免疫Ｔ細胞）、及び初代Ｔ細胞に関する。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、及びＴＣＲ複合体の発現の低減または欠如を有する。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものに由来する分化細胞（例えば、そのようなものから分化したＴ細胞）、及び初代Ｔ細胞には、Ｂ２Ｍ遺伝子のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものに由来する分化細胞（例えば、そのようなものから分化したＴ細胞）、及び初代Ｔ細胞には、ＣＩＩＴＡ遺伝子のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞には、ＴＲＡＣ遺伝子のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞には、ＴＲＢ遺伝子のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞には、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＡＣ遺伝子からなる群から選択される１つ以上のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞には、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞には、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上のゲノム改変が含まれる。多くの実施形態では、ｉＰＳＣ、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞を含む細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－細胞である。多くの実施形態では、ｉＰＳＣ、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞を含む細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞を含む細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞を含む細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、そのようなものから分化したＴ細胞、及び初代Ｔ細胞を含む細胞は、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、記載される改変された細胞は、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、かかる多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞、または初代Ｔ細胞である。初代Ｔ細胞の非限定的な例には、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、非制御性Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔｃｍ）細胞、エフェクターメモリーＴ（Ｔｅｍ）細胞、ＣＤ４５ＲＡを発現するエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ細胞）、組織耐性メモリー（Ｔｒｍ）細胞、バーチャルメモリーＴ細胞、自然メモリーＴ細胞、メモリー幹細胞（Ｔｓｃ）、γδＴ細胞、及び任意の他のサブタイプのＴ細胞が含まれる。
本技術の細胞は、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、及び／またはＴＣＲ複合体の発現の低減または欠如を有する。ＭＨＣ Ｉ及び／またはＭＨＣ ＩＩ発現の低減は、例えば、以下のうちの１つ以上によって遂行することができる：（１）多型ＨＬＡ対立遺伝子（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ）及びＭＨＣ－ＩＩ遺伝子を直接標的化すること、（２）Ｂ２Ｍの除去により、すべてのＭＨＣ－Ｉ分子の表面輸送を阻止すること、（３）ＣＩＩＴＡの除去により、すべてのＭＨＣ－ＩＩ分子の表面輸送を阻止すること、及び／または（４）ＨＬＡ発現に必要不可欠である、ＬＲＣ５、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＮＫ、ＲＦＸＡＰ、ＩＲＦ１、ＮＦ－Ｙ（ＮＦＹ－Ａ、ＮＦＹ－Ｂ、ＮＦＹ－Ｃを含む）、及びＣＩＩＴＡなどのＭＨＣエンハンセオソームの構成要素の欠失。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ発現は、個々のＨＬＡを標的化すること（例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、及び／またはＨＬＡ－ＤＲの発現をノックアウトすること）、ＨＬＡ発現の転写レギュレーターを標的化すること（例えば、ＮＬＲＣ５、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、ＲＦＸＡＰ、ＲＦＸＡＮＫ、ＮＦＹ－Ａ、ＮＦＹ－Ｂ、ＮＦＹ－Ｃ、及び／またはＩＲＦ－１の発現をノックアウトすること）、ＭＨＣクラスＩ分子の表面輸送を遮断すること（例えば、Ｂ２Ｍ及び／またはＴＡＰ１の発現をノックアウトすること）、及び／またはＨＬＡ－Ｒａｚｏｒで標的化すること（例えば、ＷＯ２０１６１８３０４１を参照されたい）によって妨害される。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、かかる幹細胞に由来する分化細胞、及び初代Ｔ細胞を含むが、これらに限定されない、本明細書に開示される細胞は、ＭＨＣ－Ｉ及び／またはＭＨＣ－ＩＩに対応する１つ以上のヒト白血球抗原（例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、及び／またはＨＬＡ－ＤＲ）を発現せず、したがって、低免疫原性であるとして特徴付けされる。例えば、多くの実施形態では、開示される多能性幹細胞及び人工多能性幹細胞は、該幹細胞またはそれから調製される分化した幹細胞が以下のＭＨＣ－Ｉ分子、すなわちＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上を発現しないか、またはその発現の低減を示すように改変されている。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上は、細胞から「ノックアウト」され得る。ＨＬＡ－Ａ遺伝子、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子、及び／またはＨＬＡ－Ｃ遺伝子がノックアウトされた細胞は、ノックアウトされた各遺伝子の発現の低減または排除を示し得る。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ遺伝子における保存領域を標的とすることによってすべてのＭＨＣクラスＩ対立遺伝子の同時欠失を可能にするガイドＲＮＡは、ＨＬＡ Ｒａｚｏｒとして特定される。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲシステムの一部である。代替的な実施形態では、ｇＲＮＡは、ＴＡＬＥＮシステムの一部である。いくつかの実施形態では、ＨＬＡにおける同定された保存領域を標的とするＨＬＡ Ｒａｚｏｒは、ＷＯ２０１６１８３０４１に記載されている。いくつかの実施形態では、同定された保存領域を標的とする複数のＨＬＡ Ｒａｚｏｒが利用される。一般に、ＨＬＡにおける保存領域を標的とする任意のガイドがＨＬＡ Ｒａｚｏｒとしての機能を果たし得ることが理解される。
提供される方法は、細胞、例えば、限定されないが、多能性幹細胞、分化細胞、及び初代Ｔ細胞におけるＭＨＣクラスＩ発現及び／またはＭＨＣクラスＩＩ発現の不活性化または消失のために有用である。いくつかの実施形態では、レアカット（ｒａｒｅ－ｃｕｔｔｉｎｇ）エンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、及びホーミングエンドヌクレアーゼシステム）を利用したゲノム編集技術を使用して、細胞において必要不可欠な免疫遺伝子の発現もまた（例えば、必要不可欠な免疫遺伝子のゲノムＤＮＡを欠失させることによって）低減または排除される。多くの実施形態では、ゲノム編集技術または他の遺伝子調節技術は、ヒト細胞における忍容性誘導因子を挿入するために使用され、これによりそれら及びそれから調製された分化細胞は、低免疫原性細胞となる。このように、低免疫原性細胞は、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣ ＩＩ発現の低減または排除された発現を有する。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象において非免疫原性である（例えば、免疫応答を誘導しない）。
いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、ならびにＤＵＸ４、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１－インヒビター、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＩＬ－３９、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、Ｍｆｇｅ８、及びセルピンｂ９からなる群から選択される１つ以上の因子の発現を増加させるための改変を含む。
いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子のいずれか、またはＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩ分子の発現を制御する、１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列のゲノム改変を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムを使用して、１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列が改変される。いくつかの実施形態では、標的化ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＮＬＲＣ５を含む群から選択される１つ以上である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＮＬＲＣ５遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ及びＮＬＲＣ５遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＩＩＴＡ及びＮＬＲＣ５遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。多数の実施形態では、細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＮＬＲＣ５遺伝子に対する遺伝子編集改変を含む。多くの実施形態では、細胞のゲノムは、ＨＬＡ発現の重要な構成要素を低減または欠失させるように変化させられている。
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ分子の表面発現を低減または排除するように編集されたゲノムを含む細胞（例えば、幹細胞、人工多能性幹細胞、分化細胞、造血幹細胞、初代ＮＫ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、初代Ｔ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）またはその集団を提供する。特定の実施形態では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ分子の表面発現を低減または排除するように編集されたゲノムを含む細胞（例えば、幹細胞、人工多能性幹細胞、分化細胞、造血幹細胞、初代ＮＫ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、初代Ｔ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）またはその集団を提供する。多数の実施形態では、本開示は、１つ以上の遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ及びＩＩ分子の表面発現を低減または排除するように編集されたゲノムを含む細胞（例えば、幹細胞、人工多能性幹細胞、分化細胞、造血幹細胞、初代ＮＫ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、初代Ｔ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞）またはその集団を提供する。
多くの実施形態では、ＭＨＣ Ｉ分子及び／またはＭＨＣ ＩＩ分子の発現は、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を標的化して欠失させ、それによってＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＮＬＲＣ５からなる群から選択される標的遺伝子の発現が低減または排除されることによって調節される。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、及び不活性化もしくは改変されたＣＩＩＴＡ遺伝子配列、ならびに一部の事例では、Ｂ２Ｍ遺伝子配列を不活性化または改変する追加の遺伝子改変を含む、遺伝子編集された細胞（例えば、改変されたヒト細胞）が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、及び不活性化もしくは改変されたＣＩＩＴＡ遺伝子配列、ならびに一部の事例では、ＮＬＲＣ５遺伝子配列を不活性化または改変する追加の遺伝子改変を含む、遺伝子編集された細胞が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、及び不活性化もしくは改変されたＢ２Ｍ遺伝子配列、ならびに一部の事例では、ＮＬＲＣ５遺伝子配列を不活性化または改変する追加の遺伝子改変を含む、遺伝子編集された細胞が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、外因性ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、及び不活性化もしくは改変されたＢ２Ｍ遺伝子配列、ならびに一部の事例では、ＣＩＩＴＡ遺伝子配列及びＮＬＲＣ５遺伝子配列を不活性化または改変する追加の遺伝子改変を含む、遺伝子編集された細胞が本明細書に記載される。
本明細書では、以下のいずれか１つの発現を制御する１つ以上の標的化ポリヌクレオチド配列の改変を示す細胞が提供される：（ａ）ＭＨＣ Ｉ抗原、（ｂ）ＭＨＣ ＩＩ抗原、（ｃ）ＴＣＲ複合体、（ｄ）ＭＨＣ Ｉ及びＩＩ抗原の両方、ならびに（ｅ）ＭＨＣ Ｉ及びＩＩ抗原ならびにＴＣＲ複合体。特定の実施形態では、改変には、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質の発現を増加させることが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞には、外因性または組換えＨＬＡ－Ｅ変異体ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｇ変異体ポリペプチド、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドが含まれる。多くの実施形態では、改変には、キメラ抗原受容体の発現が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、外因性または組換えキメラ抗原受容体ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、細胞には、ＭＨＣ Ｉ抗原、ＭＨＣ ＩＩ抗原及び／またはＴＣＲ複合体の発現を制御する１つ以上の標的化ポリヌクレオチド配列のゲノム改変が含まれる。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムを使用して、１つ以上の標的化ポリヌクレオチド配列が改変される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢからなる群から選択される１つ以上の遺伝子を標的とする。多くの実施形態では、Ｔ細胞（例えば、低免疫原性ｉＰＳＣから分化したＴ細胞及び初代Ｔ細胞）のゲノムは、ＨＬＡ及びＴＣＲ発現の重要な構成要素、例えば、ＨＬＡ－Ａ抗原、ＨＬＡ－Ｂ抗原、ＨＬＡ－Ｃ抗原、ＨＬＡ－ＤＰ抗原、ＨＬＡ－ＤＱ抗原、ＨＬＡ－ＤＲ抗原、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータを低減または欠失させるように変化させられている。
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ分子の表面発現を低減もしくは排除するように編集されたゲノムを含む細胞またはその集団を提供する。特定の実施形態では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現を低減もしくは排除するように編集されたゲノムを含む細胞またはその集団を提供する。多くの実施形態では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞またはその集団におけるＴＣＲ分子の表面発現を低減もしくは排除するように編集されたゲノムを含む細胞またはその集団を提供する。多数の実施形態では、本開示は、１つ以上の遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続伸長部を欠失させ、それにより細胞もしくはその集団におけるＭＨＣクラスＩ及びＩＩ分子ならびにＴＣＲ複合体分子の表面発現を低減もしくは排除するように編集されたゲノムを含む細胞またはその集団を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法には、ＣＩＩＴＡ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム的に編集すること及び１つ以上の追加の標的ポリヌクレオチド配列、例えば、限定されないが、Ｂ２Ｍ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢを変化させるようにかかる細胞のゲノムを編集することが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法には、Ｂ２Ｍ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム的に編集すること及び１つ以上の追加の標的ポリヌクレオチド配列、例えば、限定されないが、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢを変化させるようにかかる細胞のゲノムを編集することが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法には、ＴＲＡＣ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム的に編集すること及び１つ以上の追加の標的ポリヌクレオチド配列、例えば、限定されないが、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢを変化させるようにかかる細胞のゲノムを編集することが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法には、ＴＲＢ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム的に編集すること及び１つ以上の追加の標的ポリヌクレオチド配列、例えば、限定されないが、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣを変化させるようにかかる細胞のゲノムを編集することが含まれる。
本明細書では、野生型幹細胞と比較して、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＩＩＴＡ、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータの発現の低減を含む、低免疫原性幹細胞が提供される。いくつかの実施形態では、低免疫原性幹細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第１の遺伝子と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の遺伝子と、を含む外因性遺伝子のセットを更に含み、第１及び／または第２の遺伝子は、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入される。また、本明細書では、野生型初代Ｔ細胞と比較して、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＩＩＴＡ、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータの発現の低減を含む、初代Ｔ細胞の任意のサブタイプを含む低免疫原性初代Ｔ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、低免疫原性幹細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第１の遺伝子と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の遺伝子と、を含む外因性遺伝子のセットを更に含み、第１及び／または第２の遺伝子は、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入される。更に、野生型初代Ｔ細胞と比較して、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＩＩＴＡ、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータの発現の低減を含む、低免疫原性人工多能性幹細胞から分化した低免疫原性Ｔ細胞が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、低免疫原性幹細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第１の遺伝子と、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第２の遺伝子と、を含む外因性遺伝子のセットを更に含み、第１及び／または第２の遺伝子は、細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、記載される操作された細胞の集団は、レシピエント患者への投与時にＮＫ細胞媒介性細胞傷害を回避する。いくつかの実施形態では、操作された細胞の集団は、ＮＫ細胞の１つ以上のサブ集団によるＮＫ細胞媒介性細胞傷害を回避する。いくつかの実施形態では、操作された細胞の集団は、レシピエント患者への投与後に未成熟及び／または成熟ＮＫ細胞を含むＮＫ細胞による細胞溶解から保護される。いくつかの実施形態では、操作された細胞の集団は、レシピエント患者への投与時に細胞に対する免疫応答を誘導しない。
いくつかの実施形態では、記載される操作された細胞の集団は、レシピエント対象への投与時に低減されたレベルの免疫活性化を誘発するか、または免疫活性化を誘発しない。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象において低減されたレベルの全身性のＴＨ１活性化を誘発するか、または全身性のＴＨ１活性化を誘発しない。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象において低減されたレベルの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の免疫活性化を誘発するか、またはＰＢＭＣの免疫活性化を誘発しない。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象への投与時に細胞に対する低減されたレベルのドナー特異的ＩｇＧ抗体を誘発するか、またはドナー特異的ＩｇＧ抗体を誘発しない。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象において細胞に対する低減されたレベルのＩｇＭ及びＩｇＧ抗体産生を誘発するか、またはＩｇＭ及びＩｇＧ抗体産生を誘発しない。いくつかの実施形態では、細胞は、レシピエント対象への投与時に細胞の低減されたレベルの細胞傷害性Ｔ細胞による殺傷を誘発する。
Ｂ．ＨＬＡ－Ｅ変異体
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、その抗原結合クレフトにおいて改変（例えば、１つ以上の欠失、切断、挿入及び／または置換）を有する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、その抗原結合クレフトにおいて改変を有し、その結果、変異体は、未改変ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、抗原ペプチドに対して低減された結合親和性を有するか、または結合親和性を有しない。いくつかの実施形態では、改変は、野生型同等物と比較して、変異体タンパク質の特徴及び／または性質を変えることができる。一部の事例では、改変によって、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、タンパク質の安定性が増加する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅタンパク質の安定性は、タンパク質の細胞表面発現に関連する。換言すれば、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、未改変ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、より高いレベル、より高い頻度などで細胞の表面に存在する。いくつかの実施形態では、改変は、非抗原ペプチド結合ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のリサイクル速度（例えば、代謝回転速度または細胞内リサイクル速度）を上昇させる。一部の事例では、リサイクル速度の上昇は、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、受容体エンドサイトーシス及び細胞表面へのリサイクルの増加に対応する。
いくつかの実施形態では、抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドがＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に結合するのを妨げる。この改変により、デコイペプチドが抗原結合クレフトなどでＨＬＡ－Ｅ変異体に結合できるようになる。いくつかの実施形態では、デコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に共有結合していない。いくつかの実施形態では、デコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｅ変異体に結合される。一部の事例では、デコイペプチドは、可撓性リンカーによって前記変異体タンパク質に結合される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、タンパク質の細胞内ドメインに１つ以上の欠失（切断を含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、複数のタンパク質の細胞内ドメインに１つ以上の欠失（切断を含む）を含む。一部の事例では、このような欠失により、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達が低減する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞外ドメイン内に改変（例えば、１つ以上の欠失、切断、挿入及び／または置換）を含み、その結果、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合した場合にＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が別のタンパク質（例えば、結合パートナー）に結合できない。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｒｎａｌｕｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１７，３５，７６５－７７２に記載されている、ＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体またはＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体と実質的に類似している。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体は、ＨＬＡ－Ｅ単鎖（重鎖）、Ｂ２Ｍタンパク質またはその断片、及び任意選択でＨＬＡ－Ｅ単鎖をＢ２Ｍタンパク質に結合するリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体は、ＨＬＡ－Ｅ単鎖、Ｂ２Ｍタンパク質またはその断片、及び抗原ペプチドを含み、その結果、ＨＬＡ－Ｅ単鎖は、（任意のリンカーを介して）Ｂ２Ｍタンパク質に結合し、抗原ペプチドは、（任意のリンカーを介して）Ｂ２Ｍタンパク質に結合する。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅポリヌクレオチド、またはＨＬＡ－Ｅポリヌクレオチドの変異体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅポリヌクレオチド配列は、ＨＬＡ－Ｅのホモログである。いくつかの実施形態では、前記ポリヌクレオチド配列は、ＨＬＡ－Ｅのオルソログである。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される細胞は、ＨＬＡ－Ｅポリペプチドをコードする遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。多くの実施形態では、これらに限定されないが、初代Ｔ細胞、初代ＮＫ細胞、初代内皮細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞、及びｉＰＳＣ由来の内皮細胞などの本技術の細胞は、ＨＬＡ－Ｅ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。遺伝子改変は、初代Ｔ細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞及びＣＡＲ－Ｔ細胞を含むＴ細胞におけるＨＬＡ－ＥポリヌクレオチドならびにＨＬＡ－Ｅポリペプチドの発現を誘導し得る。遺伝子改変は、初代ＮＫ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞及びＣＡＲ－ＮＫ細胞を含むＮＫ細胞におけるＨＬＡ－ＥポリヌクレオチドならびにＨＬＡ－Ｅポリペプチドの発現を誘導し得る。
ＨＬＡ－Ｅ遺伝子が活性化されているか、または不活性化されているかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＨＬＡ－Ｅ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｅ発現の低減または促進はＦＡＣＳ解析によって、アッセイすることができる。別の実施形態では、ＨＬＡ－Ｅタンパク質発現は、ＨＬＡ－Ｅタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞可溶化物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、活性化または不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
細胞内のＢ２Ｍ遺伝子の両方の対立遺伝子を破壊／除去すると、すべてのＭＨＣクラスＩ分子の表面発現が除去され、細胞がＮＫ細胞媒介溶解に対して脆弱になり得る。この反応は「自己喪失」反応と呼ばれており（Ｇｏｒｎａｌｕｓｓｅら、前出を参照）、いくつかの実施形態では、この反応は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の過剰発現によって妨げられ得る。
Ｃ．ＨＬＡ－Ｇ変異体
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、その抗原結合クレフトにおいて改変（例えば、１つ以上の欠失、切断、挿入及び／または置換）を有する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、その抗原結合クレフトにおいて改変を有し、その結果、変異体は、未改変ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、抗原ペプチドに対して低減された結合親和性を有するか、または結合親和性を有しない。
いくつかの実施形態では、改変は、野生型同等物と比較して、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の特徴及び／または性質を変えることができる。一部の事例では、改変によって、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、タンパク質の安定性が増加する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇタンパク質の安定性は、タンパク質の細胞表面発現に関連する。換言すれば、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、未改変ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、より高いレベル、より高い頻度などで細胞の表面に存在する。いくつかの実施形態では、改変は、非抗原ペプチド結合ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のリサイクル速度（例えば、代謝回転速度または細胞内リサイクル速度）を上昇させる。一部の事例では、リサイクル速度の上昇は、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、受容体エンドサイトーシス及び細胞表面へのリサイクルの増加に対応する。
いくつかの実施形態では、抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドがＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に結合するのを妨げる。この改変により、デコイペプチドが抗原結合クレフトなどでＨＬＡ－Ｇ変異体に結合できるようになる。いくつかの実施形態では、デコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に共有結合していない。いくつかの実施形態では、デコイペプチドは、ＨＬＡ－Ｇ変異体に結合される。一部の事例では、デコイペプチドは、可撓性リンカーによって前記変異体タンパク質に結合される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、タンパク質の細胞内ドメインに１つ以上の欠失（切断を含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、複数のタンパク質の細胞内ドメインに１つ以上の欠失（切断を含む）を含む。一部の事例では、このような欠失または切断により、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達が低減する。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、細胞外ドメイン内に改変（例えば、１つ以上の欠失、切断、挿入及び／または置換）を含み、その結果、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合した場合にＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が別のタンパク質（例えば、結合パートナー）に結合できない。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリヌクレオチド、またはＨＬＡ－Ｇポリヌクレオチドの変異体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｇポリヌクレオチド配列は、ＨＬＡ－Ｅのホモログである。いくつかの実施形態では、前記ポリヌクレオチド配列は、ＨＬＡ－Ｇのオルソログである。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される細胞は、ＨＬＡ－Ｇポリペプチドをコードする遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。多くの実施形態では、これらに限定されないが、初代Ｔ細胞、初代ＮＫ細胞、初代内皮細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞、及びｉＰＳＣ由来の内皮細胞などの本技術の細胞は、ＨＬＡ－Ｇ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。遺伝子改変は、初代Ｔ細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞及びＣＡＲ－Ｔ細胞を含むＴ細胞におけるＨＬＡ－ＧポリヌクレオチドならびにＨＬＡ－Ｇポリペプチドの発現を誘導し得る。遺伝子改変は、初代ＮＫ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞及びＣＡＲ－ＮＫ細胞を含むＮＫ細胞におけるＨＬＡ－ＧポリヌクレオチドならびにＨＬＡ－Ｇポリペプチドの発現を誘導し得る。
ＨＬＡ－Ｇ遺伝子が活性化されているか、または不活性化されているかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＨＬＡ－Ｇ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｇ発現の低減または促進はＦＡＣＳ解析によって、アッセイすることができる。別の実施形態では、ＨＬＡ－Ｇタンパク質発現は、ＨＬＡ－Ｇタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞可溶化物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、活性化または不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｄ．ＰＤ－Ｌ１
いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ１の変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＰＤ－Ｌ１のホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＰＤ－Ｌ１のオルソログである。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される細胞は、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドをコードする遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。多くの実施形態では、これらに限定されないが、初代Ｔ細胞、初代ＮＫ細胞、初代内皮細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞、及びｉＰＳＣ由来の内皮細胞などの本技術の細胞は、ＰＤ－Ｌ１遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。遺伝子改変は、初代Ｔ細胞、ｉＰＳＣ由来のＴ細胞及びＣＡＲ－Ｔ細胞を含むＴ細胞におけるＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドならびにＰＤ－Ｌ１ポリペプチドの発現を誘導し得る。遺伝子改変は、初代ＮＫ細胞、ｉＰＳＣ由来のＮＫ細胞及びＣＡＲ－ＮＫ細胞を含むＮＫ細胞におけるＰＤ－Ｌ１ポリヌクレオチドならびにＰＤ－Ｌ１ポリペプチドの発現を誘導し得る。
ＣＤ２７４（Ｂ７－Ｈ、Ｂ７Ｈ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＣＤ１ＬＧ１、ＰＤＬ１、及びｈＰＤ－Ｌ１としても知られる）遺伝子が活性化されているか、または不活性化されているかを試験するためのアッセイは既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＰＤＣＤ１遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＰＤ－１発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＰＤ－１タンパク質発現は、ＰＤ－１タンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
ＣＤ２７４遺伝子を含むヒトＰＤ－Ｌ１についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０９Ｐ００５４５０、ＨＧＮＣ１７６３５、ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子２９１２６、Ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＧ０００００１２０２１７、ＯＭＩＭ（登録商標）６０５４０２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｑ９ＮＺＱ７、ＮＰ＿０５４８６２．１及びＮＭ＿０１４１４３．４で提供される。
Ｅ．ＨＬＡ－Ａ
いくつかの実施形態では、本技術は、ＨＬＡ－Ｉ発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によって、ＭＨＣ Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減または排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＨＬＡ－Ａは、ＭＨＣクラスＩ膜貫通タンパク質の３つの主要なタイプのうちの１つである。ＨＬＡ－Ａタンパク質は、ベータ２ミクログロブリン及び抗原ペプチドに結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＨＬＡ－Ａタンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＨＬＡ－Ａタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿００１２４２７５８．１及びＮＭ＿００２１１６．７、ならびにＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｕ０３８６２．１に記載されている。一部の事例では、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ番号３１０５に記載されている。場合によっては、ＨＬＡ－Ａのアミノ酸配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＰ＿００１２２９６８７．１及びＮＰ＿００２１０７．３に記載されている。ＨＬＡ－Ａタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０４４３９、ＨＧＮＣ参照番号４９３１、及びＯＭＩＭ参照番号１４２８００に見出し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＨＬＡ－Ａ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＨＬＡ－Ａ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ａ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表８及び付録１の配列番号２～１４１８からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子にて挿入される。
ＨＬＡ－Ａ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＨＬＡ－Ａ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＨＬＡ－Ａタンパク質発現は、ＨＬＡ－Ａタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｆ．ＨＬＡ－Ｂ
いくつかの実施形態では、本技術は、ＨＬＡ－Ｉ発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によって、ＭＨＣ Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減または排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＨＬＡ－Ｂは、ＭＨＣクラスＩ膜貫通タンパク質の３つの主要なタイプの別の１つである。ＭＨＣクラスＩヘテロ二量体分子では、ＨＬＡ－Ｂタンパク質は、重鎖として機能し、軽鎖と呼ばれ得るベータ２ミクログロブリンに結合する。ＨＬＡ－Ｂタンパク質は、約４５ｋＤａであり、８つのエクソンによってコードされる。エクソン１はリーダーペプチドをコードし、エクソン２及び３は、両方とも抗原ペプチドに結合するアルファ１ドメイン及びアルファ２ドメインをコードし、エクソン４はアルファ３ドメインをコードし、エクソン５は膜貫通領域をコードし、エクソン６及び７は細胞質側末端をコードする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＨＬＡ－Ｂタンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座にて遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｂタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿００５５１４、及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｕ０３６９８．１に記載されている。
一部の事例では、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号３１０６に記載されている。場合によっては、ＨＬＡ－Ｂのアミノ酸配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＰ＿００５５０５．２に記載されている。
ＨＬＡ－Ｂタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８８９、ＨＧＮＣ参照番号４９３２、及びＯＭＩＭ参照番号１４２８３０に見出せ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＨＬＡ－Ｂ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＨＬＡ－Ｂ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表９及び付録２の配列番号１４１９～３２７７からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子にて挿入される。
ＨＬＡ－Ｂ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＨＬＡ－Ｂ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＨＬＡ－Ｂタンパク質発現は、ＨＬＡ－Ｂタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｇ．ＨＬＡ－Ｃ
いくつかの実施形態では、本技術は、ＨＬＡ－Ｉ発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によって、ＭＨＣ Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減または排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＨＬＡ－Ｃは、ＭＨＣクラスＩ膜貫通タンパク質の３つの主要なタイプの別の１つである。ＭＨＣクラスＩヘテロ二量体分子では、ＨＬＡ－Ｃタンパク質は、重鎖として機能し、軽鎖と呼ばれ得るベータ２ミクログロブリンに結合する。ＨＬＡ－Ｃタンパク質は、約４５ｋＤａであり、８つのエクソンによってコードされる。エクソン１はリーダーペプチドをコードし、エクソン２及び３は、両方とも抗原ペプチドに結合するアルファ１ドメイン及びアルファ２ドメインをコードし、エクソン４はアルファ３ドメインをコードし、エクソン５は膜貫通領域をコードし、エクソン６及び７は細胞質側末端をコードする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＨＬＡ－Ｃタンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座にて遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｃタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿００２１１７．５、及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｍ２４０９７．１に記載されている。
一部の事例では、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号３１０７に記載されている。場合によっては、ＨＬＡ－Ｃのアミノ酸配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＰ＿００２１０８．４に記載されている。
ＨＬＡ－Ｃタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１０３２１、ＨＧＮＣ参照番号４９３３、及びＯＭＩＭ参照番号１４２８４０に記載されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＨＬＡ－Ｃ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＨＬＡ－Ｃ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１０及び付録３の配列番号３２７８～５１８３からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子にて挿入される。
ＨＬＡ－Ｃ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、結果として生じるＨＬＡ－Ｃ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＨＬＡ－Ｃタンパク質発現は、ＨＬＡ－Ｃタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｈ．ＣＤ１５５
いくつかの実施形態では、本技術は、ＣＤ１５５の発現を調節する（例えば、低減または排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＣＤ１５５は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ１５５がＮＫ細胞接着を媒介し、ＮＫ細胞エフェクター機能を誘発することは、当技術分野において認識されている。ＣＤ１５５は、ＣＤ９６及びＣＤ２２などの２つの異なるＮＫ細胞受容体に結合できる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＣＤ１５５タンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＣＤ１５５遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＣＤ１５５タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿００１１３５７６８．２、ＮＭ＿００１１３５７６９．２及びＮＭ＿００１１３５７７０．３、ならびにＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｍ２４０９７．１に記載されている。一部の事例では、ＣＤ１５５遺伝子座は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ番号５８１７に記載されている。場合によっては、ＣＤ１５５のアミノ酸配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＰ＿１１２９２４０．１、ＮＰ＿１１２９２４１．１、及びＮＰ＿１１２９２４２．１に記載されている。ＣＤ１５５タンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１５１５１、ＨＧＮＣ参照番号９７０５、及びＯＭＩＭ参照番号１７３８５０に見出し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＣＤ１５５遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＣＤ１５５遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＣＤ１５５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１５５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１に記載のものからなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＣＤ１５５遺伝子にて挿入される。
ＣＤ１５５遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＣＤ１５５遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＣＤ１５５タンパク質発現は、ＣＤ１５５タンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｉ．ＣＩＩＴＡ
いくつかの実施形態では、本技術は、クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によって、ＭＨＣ ＩＩ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減または排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＣＩＩＴＡは、ＬＲ、またはヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）ロイシンリッチ反復配列（ＬＲＲ）ファミリーのタンパク質のメンバーであり、ＭＨＣエンハンセオソームと会合することによってＭＨＣ ＩＩの転写を制御する。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡの変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡのホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡのオルソログである。
いくつかの実施形態では、ＣＩＩＴＡの低減された発現またはその排除は、以下のＭＨＣクラスＩＩ、すなわちＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、ＣＩＩＴＡタンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＣＩＩＴＡタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿０００２４６．４及びＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｕ１８２５９に記載されている。一部の事例では、ＣＩＩＴＡ遺伝子座は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号４２６１に記載されている。特定の事例では、ＣＩＩＴＡのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＡＡ８８８６１．１として示される。ＣＩＩＴＡタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ３３０７６、ＨＧＮＣ参照番号７０６７、及びＯＭＩＭ参照番号６００００５に見出し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＣＩＩＴＡ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＣＩＩＴＡ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＩＩＴＡ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１２の配列番号５１８４～３６３５２からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＣＩＩＴＡ遺伝子にて挿入される。
ＣＩＩＴＡ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＣＩＩＴＡ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－ＩＩ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＣＩＩＴＡタンパク質発現は、ＣＩＩＴＡタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｊ．Ｂ２Ｍ
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される技術は、付属鎖Ｂ２Ｍの発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によってＭＨＣ－Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。Ｂ２Ｍの発現を調節すること（例えば、低減または欠失させること）によって、ＭＨＣ－Ｉ分子の表面輸送が遮断され、細胞を低免疫原性にする。いくつかの実施形態では、前記細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減されている。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍの変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍのホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍのオルソログである。
いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍの発現の減少または排除は、以下のＭＨＣ Ｉ分子：ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、Ｂ２Ｍタンパク質をコードする遺伝子座で遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、Ｂ２Ｍタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＭ＿００４０４８．４及びＧｅｎｂａｎｋ番号ＡＢ０２１２８８．１に記載されている。一部の事例では、Ｂ２Ｍ遺伝子座は、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号５６７に記載されている。特定の場合では、Ｂ２Ｍのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＡ３５１８２．１として示される。Ｂ２Ｍタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ６１７６９、ＨＧＮＣ参照番号９１４、及びＯＭＩＭ参照番号１０９７００に見出せ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＢ２Ｍ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＢ２Ｍ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１５の配列番号８１２４０～８５６４４からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、Ｂ２Ｍ遺伝子にて挿入される。
Ｂ２Ｍ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＢ２Ｍ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、Ｂ２Ｍタンパク質発現は、Ｂ２Ｍタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｋ．ＮＬＲＣ５
多くの実施形態では、本明細書に開示される技術は、ＮＬＲファミリー、ＣＡＲＤドメイン含有５／ＮＯＤ２７／ＣＬＲ１６．１（ＮＬＲＣ５）の発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によってＭＨＣ－Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＮＬＲＣ５は、ＭＨＣ－Ｉ媒介性免疫応答の重要なレギュレーターであり、ＣＩＩＴＡと同様に、ＮＬＲＣ５は、ＩＦＮ－γによって高度に誘導性であり、核内に移行することができる。ＮＬＲＣ５は、ＭＨＣ－Ｉ遺伝子のプロモーターを活性化し、ＭＨＣ－Ｉのみならず、ＭＨＣ－Ｉ抗原提示に関与する関連遺伝子の転写を誘導する。
いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５の変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５のホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５のオルソログである。
いくつかの実施形態では、ＮＬＲＣ５の発現の減少または排除は、以下のＭＨＣ Ｉ分子、すなわちＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される細胞は、ＮＬＲＣ５遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＮＬＲＣ５遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＮＬＲＣ５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＬＲＣ５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６１８３０４１の付録３または表１４の配列番号３６３５３～８１２３９からなる群から選択され、この開示は参照によりその全体が組み込まれる。
ＮＬＲＣ５遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＮＬＲＣ５遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＨＬＡ－Ｉ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＮＬＲＣ５タンパク質発現は、ＮＬＲＣ５タンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｌ．ＴＲＡＣ
多くの実施形態では、本明細書に開示される技術は、Ｔ細胞受容体アルファ鎖の定常領域の発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によってＴＲＡＣ遺伝子ＴＣＲ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＴＲＡＣの発現を調節すること（例えば、低減するまたは欠失させること）によって、ＴＣＲ分子の表面輸送が遮断される。いくつかの実施形態では、前記細胞はまた、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力も低減されている。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣの変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣのホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣのオルソログである。
いくつかの実施形態では、ＴＲＡＣの発現の減少または排除は、ＴＣＲの表面発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、限定されないが、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、人工多能性幹細胞から分化させたＴ細胞、初代Ｔ細胞、及び初代Ｔ細胞に由来する細胞などの細胞は、ＴＲＡＣタンパク質をコードする遺伝子座にて遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＴＲＡＣタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｘ０２５９２．１に記載されている。一部の事例では、ＴＲＡＣ遺伝子座は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＧ＿００１３３２．３及びＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号２８７５５に記載される。特定の場合では、ＴＲＡＣのアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８として示される。ＴＲＡＣタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８、ＨＧＮＣ参照番号１２０２９、及びＯＭＩＭ参照番号１８６８８０に見出し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＴＲＡＣ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＴＲＡＣ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＡＣ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＵＳ２０１６０３４８０７３の配列番号５３２～６０９及び９１０２～９７９７からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
ＴＲＡＣ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＴＲＡＣ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＴＣＲ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＴＲＡＣタンパク質発現は、ＴＲＡＣタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｍ．ＴＲＢ
多くの実施形態では、本明細書に開示される技術は、Ｔ細胞受容体ベータ鎖の定常領域の発現を標的化しかつ調節すること（例えば、低減または排除すること）によってＴ細胞抗原受容体、ベータ鎖をコードする遺伝子（例えば、ＴＲＢ、ＴＲＢＣ、またはＴＣＲＢ遺伝子）を含むＴＣＲ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの実施形態では、調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して行われる。ＴＲＢの発現を調節すること（例えば、低減するまたは欠失させること）によって、ＴＣＲ分子の表面輸送が遮断される。いくつかの実施形態では、前記細胞はまた、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力も低減されている。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢの変異体である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢのホモログである。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢのオルソログである。
いくつかの実施形態では、ＴＲＢの発現の減少または排除は、ＴＣＲの表面発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、限定されないが、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、人工多能性幹細胞から分化させたＴ細胞、初代Ｔ細胞、及び初代Ｔ細胞に由来する細胞などの細胞は、ＴＲＢタンパク質をコードする遺伝子座にて遺伝子改変を含む。換言すれば、細胞は、ＴＲＢ遺伝子座で遺伝子改変を含む。一部の事例では、ＴＲＢタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０ＤＳＥ２に記載されている。一部の事例では、ＴＲＢ遺伝子座は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＧ＿００１３３３．２及びＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号６９５７に記載されている。特定の場合では、ＴＲＢのアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８として示される。ＴＲＢタンパク質及び遺伝子座の追加の説明は、ＧｅｎＢａｎｋ番号Ｌ３６０９２．２、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０ＤＳＥ２、及びＨＧＮＣ参照番号１２１５５に見出し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、ＴＲＢ遺伝子を標的とする遺伝子改変を含む。いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼによるＴＲＢ遺伝子を標的とする遺伝子改変は、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＴＲＢ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＲＢ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＵＳ２０１６０３４８０７３の配列番号６１０～７６５及び９７９８～１０５３２からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
ＴＲＢ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは、既知であると共に、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結果として生じるＴＲＢ遺伝子の遺伝子改変はＰＣＲによって、ＴＣＲ発現の低減はＦＡＣＳ解析によってアッセイすることができる。別の実施形態では、ＴＲＢタンパク質発現は、ＴＲＢタンパク質に対する抗体によりプロービングされる細胞ライセートのウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子改変の存在が確認される。
Ｎ．追加の寛容原性因子
多くの実施形態では、１つ以上の寛容原性因子をゲノム編集された細胞に挿入または再挿入して、普遍的ドナー幹細胞、普遍的ドナーＴ細胞、または普遍的ドナー細胞などの、免疫特権が備わった普遍的ドナー細胞を作成することができる。多くの実施形態では、本明細書に開示される低免疫原性細胞は、１つ以上の寛容原性因子を発現するように更に改変されている。例となる寛容原性因子には、限定されないが、ＣＤ４７、ＤＵＸ４、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１－インヒビター、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、Ｍｆｇｅ８、及びセルピンｂ９のうちの１つ以上が含まれる。いくつかの実施形態では、寛容原性因子は、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦａｓＬ、セルピンｂ９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、及びＭｆｇｅ８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、寛容原性因子は、ＤＵＸ４、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４－Ｉｇ、Ｃ１－インヒビター、及びＩＬ－３５からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、寛容原性因子は、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４－Ｉｇ、Ｃ１－インヒビター、及びＩＬ－３５からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、寛容原性因子は、ＣＤ４７、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１－インヒビター、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、Ｍｆｇｅ８、及びセルピンｂ９を含む群から選択される。
ヒトＣＤ２７（別名ＣＤ２７Ｌ受容体、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７（ＴＮＦＳＦ７）、Ｔ細胞活性化抗原Ｓ１５２、Ｔｐ５５、及びＴ１４）についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ１２Ｐ００８１４４、ＨＧＮＣ番号１１９２２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ９３９、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２６８４２、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿００１２４２．４及びＮＰ＿００１２３３．１で提供される。
ヒトＣＤ４６についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０１Ｐ２０７７５２、ＨＧＮＣ番号６９５３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ４１７９、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１５５２９、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿００２３８９．４、ＮＭ＿１５３８２６．３、ＮＭ＿１７２３５０．２、ＮＭ＿１７２３５１．２、ＮＭ＿１７２３５２．２、ＮＰ＿７５８８６０．１、ＮＭ＿１７２３５３．２、ＮＭ＿１７２３５９．２、ＮＭ＿１７２３６１．２、ＮＰ＿００２３８０．３、ＮＰ＿７２２５４８．１、ＮＰ＿７５８８６０．１、ＮＰ＿７５８８６１．１、ＮＰ＿７５８８６２．１、ＮＰ＿７５８８６３．１、ＮＰ＿７５８８６９．１、及びＮＰ＿７５８８７１．１で提供される。
ヒトＣＤ５５（別名、補体崩壊促進因子）についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０１Ｐ２０７３２１、ＨＧＮＣ番号２６６５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ１６０４、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０８１７４、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＭ＿０００５７４．４、ＮＭ＿００１１１４７５２．２、ＮＭ＿００１３００９０３．１、ＮＭ＿００１３００９０４．１、ＮＰ＿０００５６５．１、ＮＰ＿００１１０８２２４．１、ＮＰ＿００１２８７８３２．１、及びＮＰ＿００１２８７８３３．１で提供される。
ヒトＣＤ５９についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ１１Ｍ０３３７０４、ＨＧＮＣ番号１６８９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ９６６、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１３９８７、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿０００６０２．１、ＮＭ＿０００６１１．５、ＮＰ＿００１１２０６９５．１、ＮＭ＿００１１２７２２３．１、ＮＰ＿００１１２０６９７．１、ＮＭ＿００１１２７２２５．１、ＮＰ＿００１１２０６９８．１、ＮＭ＿００１１２７２２６．１、ＮＰ＿００１１２０６９９．１、ＮＭ＿００１１２７２２７．１、ＮＰ＿９７６０７４．１、ＮＭ＿２０３３２９．２、ＮＰ＿９７６０７５．１、ＮＭ＿２０３３３０．２、ＮＰ＿９７６０７６．１、及びＮＭ＿２０３３３１．２で提供される。
ヒトＣＤ２００についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０３Ｐ１１２３３２、ＨＧＮＣ番号７２０３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ４３４５、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ４１２１７、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００１００４１９６．２、ＮＭ＿００１００４１９６．３、ＮＰ＿００１３０５７５７．１、ＮＭ＿００１３１８８２８．１、ＮＰ＿００５９３５．４、ＮＭ＿００５９４４．６、ＸＰ＿００５２４７５３９．１、及びＸＭ＿００５２４７４８２．２で提供される。
ヒトＨＬＡ－Ｃについての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０６Ｍ０３１２７２、ＨＧＮＣ番号４９３３、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３１０７、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１０３２１、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００２１０８．４及びＮＭ＿００２１１７．５で提供される。
ヒトＨＬＡ－Ｅについての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０６Ｐ０４７２８１、ＨＧＮＣ番号４９６２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３１３３、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１３７４７、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００５５０７．３及びＮＭ＿００５５１６．５で提供される。
ヒトＨＬＡ－Ｇについての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０６Ｐ０４７２５６、ＨＧＮＣ番号４９６４、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３１３５、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１７６９３、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００２１１８．１及びＮＭ＿００２１２７．５で提供される。
ヒトＰＤ－Ｌ１またはＣＤ２７４についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０９Ｐ００５４５０、ＨＧＮＣ番号１７６３５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ２９１２６、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｑ９ＮＺＱ７、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００１２５４６３５．１、ＮＭ＿００１２６７７０６．１、ＮＰ＿０５４８６２．１、及びＮＭ＿０１４１４３．３で提供される。
ヒトＩＤＯ１についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０８Ｐ０３９８９１、ＨＧＮＣ番号６０５９、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３６２０、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ１４９０２、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００２１５５．１及びＮＭ＿００２１６４．５で提供される。
ヒトＩＬ－１０についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０１Ｍ２０６７６７、ＨＧＮＣ番号５９６２、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３５８６、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２２３０１、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿０００５６３．１及びＮＭ＿０００５７２．２で提供される。
ヒトＦａｓリガンド（ＦａｓＬ、ＦＡＳＬＧ、ＣＤ１７８、ＴＮＦＳＦ６などとして知られる）についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０１Ｐ１７２６２８、ＨＧＮＣ番号１１９３６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ３５６、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ４８０２３、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿０００６３０．１、ＮＭ＿０００６３９．２、ＮＰ＿００１２８９６７５．１、及びＮＭ＿００１３０２７４６．１で提供される。
ヒトＣＣＬ２１についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０９Ｍ０３４７０９、ＨＧＮＣ番号１０６２０、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ６３６６、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｏ００５８５、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００２９８０．１及びＮＭ＿００２９８９．３で提供される。
ヒトＣＣＬ２２についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ１６Ｐ０５７３５９、ＨＧＮＣ番号１０６２１、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ６３６７、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｏ００６２６、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００２９８１．２、ＮＭ＿００２９９０．４、ＸＰ＿０１６８７９０２０．１、及びＸＭ＿０１７０２３５３１．１で提供される。
ヒトＭｆｇｅ８についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ１５Ｍ０８８８９８、ＨＧＮＣ番号７０３６、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ４２４０、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｑ０８４３１、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００１１０８０８６．１、ＮＭ＿００１１１４６１４．２、ＮＰ＿００１２９７２４８．１、ＮＭ＿００１３１０３１９．１、ＮＰ＿００１２９７２４９．１、ＮＭ＿００１３１０３２０．１、ＮＰ＿００１２９７２５０．１、ＮＭ＿００１３１０３２１．１、ＮＰ＿００５９１９．２、及びＮＭ＿００５９２８．３で提供される。
ヒトセルピンＢ９についての有用なゲノム、ポリヌクレオチド、及びポリペプチドの情報は、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄ識別記号ＧＣ０６Ｍ００２８８７、ＨＧＮＣ番号８９５５、ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ５２７２、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ５０４５３、ならびにＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号ＮＰ＿００４１４６．１、ＮＭ＿００４１５５．５、ＸＰ＿００５２４９２４１．１、及びＸＭ＿００５２４９１８４．４で提供される。
遺伝子及び因子（タンパク質）の発現を調節するための方法には、ゲノム編集技術、及びＲＮＡまたはタンパク質発現技術などが含まれる。これらの技術のすべてについて、周知の組換え技法を使用して、本明細書に概説されるような組換え核酸が生成される。
一部の事例では、免疫拒絶反応を能動的に阻害するために、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムなどの遺伝子編集システムを使用して、ＡＡＶＳ１遺伝子座などのセーフハーバー遺伝子座内への寛容原性因子などの、寛容原性因子の挿入が容易にされる。一部の事例では、寛容原性因子は、発現ベクターを使用してセーフハーバー遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＲＯＳＡ２６、ＳＨＳ２３１、Ｆ３（別名ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＬＲＰ１（別名ＣＤ９１）、ＨＭＧＢ１、ＡＢＯ、ＲＨＤ、ＦＵＴ１、またはＫＤＭ５Ｄ遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、標的遺伝子（例えば、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、または別の寛容原性因子遺伝子）の発現は、（１）内在性標的遺伝子（例えば、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、または別の寛容原性因子遺伝子）に特異的な部位特異的結合ドメイン、及び（２）転写活性化因子を含有する、融合タンパク質またはタンパク質複合体の発現によって増加させられる。
いくつかの実施形態では、制御因子は、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）などの部位特異的ＤＮＡ結合核酸分子から構成される。いくつかの実施形態では、前記方法は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）としても知られるジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）またはＺＦＰを含有する融合タンパク質などの、部位特異的ＤＮＡ結合標的タンパク質によって達成される。
いくつかの実施形態では、制御因子は、標的領域にて遺伝子に特異的に結合またはハイブリダイズする、例えばＤＮＡ結合タンパク質またはＤＮＡ結合核酸を使用した、部位特異的結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、提供されるポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、改変ヌクレアーゼなどの部位特異的ヌクレアーゼに連結されるかまたはそれと複合体化される。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、改変ヌクレアーゼ、例えば、メガヌクレアーゼまたはＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼ、例えば、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖回文配列核酸（ＣＲＩＳＰＲ）－Ｃａｓシステム、例えば、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムのＤＮＡ標的化タンパク質を含む融合体を使用して成し遂げられる。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼは、ヌクレアーゼ活性を欠くように改変される。いくつかの実施形態では、改変ヌクレアーゼは、触媒的に死んだｄＣａｓ９である。
いくつかの実施形態では、部位特異的結合ドメインは、ヌクレアーゼに由来し得る。例えば、Ｉ－ＳｃｅＩ、Ｉ－ＣｅｕＩ、ＰＩ－ＰｓｐＩ、ＰＩ－Ｓｃｅ、Ｉ－ＳｃｅＩＶ、Ｉ－ＣｓｍＩ、Ｉ－ＰａｎＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩ、Ｉ－ＰｐｏＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩＩ、Ｉ－ＣｒｅＩ、Ｉ－ＴｅｖＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩ、及びＩ－ＴｅｖＩＩＩなどのホーミングエンドヌクレアーゼ及びメガヌクレアーゼの認識配列。米国特許第５，４２０，０３２号；米国特許第６，８３３，２５２号；Ｂｅｌｆｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３７９－３３８８；Ｄｕｊｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｇｅｎｅ８２：１１５－１１８；Ｐｅｒｌｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２，１１２５－１１２７；Ｊａｓｉｎ（１９９６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１２：２２４－２２８；Ｇｉｍｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：１６３－１８０；Ａｒｇａｓｔ ｅｔ ａｌ，（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８０：３４５－３５３及びｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ ｃａｔａｌｏｇｕｅも参照されたい。加えて、ホーミングエンドヌクレアーゼ及びメガヌクレアーゼのＤＮＡ結合特異性は、非天然標的部位に結合するように操作され得る。例えば、Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ，（２００２）Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ １０：８９５－９０５；Ｅｐｉｎａｔ ｅｔ ａｌ，（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１：２９５２－２９６２；Ａｓｈｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ，（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１：６５６－６５９；Ｐａｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ，（２００７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：４９－６６；米国特許公開番号２００７／０１１７１２８を参照されたい。
ジンクフィンガー、ＴＡＬＥ、及びＣＲＩＳＰＲシステムの結合ドメインは、例えば、天然型ジンクフィンガーまたはＴＡＬＥタンパク質の認識ヘリックス領域を操作すること（１つ以上のアミノ酸を変化させること）によって、既定のヌクレオチド配列に結合するように「操作」され得る。操作されたＤＮＡ結合タンパク質（ジンクフィンガーまたはＴＡＬＥ）は、天然に存在しないタンパク質である。設計のための合理的基準は、置換規則の適用、ならびに既存のＺＦＰ及び／またはＴＡＬＥ設計及び結合データの情報を格納するデータベース内の情報を処理するためのコンピュータ化アルゴリズムを含む。例えば、米国特許第６，１４０，０８１号；第６，４５３，２４２号；及び第６，５３４，２６１号を参照されたい；また、ＷＯ９８／５３０５８；ＷＯ９８／５３０５９；ＷＯ９８／５３０６０；ＷＯ０２／０１６５３６及びＷＯ０３／０１６４９６及び米国公開番号２０１１０３０１０７３を参照されたい。
いくつかの実施形態では、部位特異的結合ドメインは、配列特異的様態でＤＮＡに結合する１つ以上のジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）またはそのドメインを含む。ＺＦＰまたはそのドメインは、亜鉛イオンの配位により構造が安定化される結合ドメイン内のアミノ酸配列の領域である、１つ以上のジンクフィンガーを介して配列特異的様態でＤＮＡに結合するタンパク質、またはより大きなタンパク質内のドメインである。
ＺＦＰの中には、個々のフィンガーの集合によって生成される、典型的には９～１８ヌクレオチド長の特異的ＤＮＡ配列を標的とする人工ＺＦＰドメインがある。ＺＦＰには、単一のフィンガードメインの長さがおよそ３０アミノ酸であり、単一のベータターンの２つのシステインと共に亜鉛へと配位結合した２つの不変のヒスチジン残基を含有するアルファヘリックスを含有し、２、３、４、５、または６つのフィンガーを有するものが含まれる。一般に、ＺＦＰの配列特異性は、ジンクフィンガーの認識ヘリックス上の４つのヘリックス位置（－１、２、３、及び６）にてアミノ酸置換を行うことによって変化させてもよい。故に、いくつかの実施形態では、ＺＦＰまたはＺＦＰ含有分子は、非天然型であり、例えば、選択する標的部位に結合するように操作される。例えば、Ｂｅｅｒｌｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１３５－１４１、Ｐａｂｏ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７０：３１３－３４０、Ｉｓａｌａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：６５６－６６０、Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２：６３２－６３７；Ｃｈｏｏ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１０：４１１－４１６、米国特許第６，４５３，２４２号、同第６，５３４，２６１号、同第６，５９９，６９２号、同第６，５０３，７１７号、同第６，６８９，５５８号、同第７，０３０，２１５号、同第６，７９４，１３６号、同第７，０６７，３１７号、同第７，２６２，０５４号、同第７，０７０，９３４号、同第７，３６１，６３５号、同第７，２５３，２７３号、及び米国特許公開第２００５／００６４４７４号、同第２００７／０２１８５２８号、同第２００５／０２６７０６１号を参照されたく、すべて参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
多くの遺伝子特異的な操作されたジンクフィンガーが市販されている。例えば、Ｓａｎｇａｍｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）と提携して、研究者がジンクフィンガーの構築及び検証を完全に省略することを可能にするジンクフィンガー構築のためのプラットフォーム（ＣｏｍｐｏＺｒ）を開発し、何千ものタンパク質に対して特異的に標的化されたジンクフィンガーを提供する（Ｇａｊ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３１（７），３９７－４０５）。いくつかの実施形態では、市販のジンクフィンガーが使用されるか、またはカスタム設計される。
いくつかの実施形態では、部位特異的結合ドメインは、天然に存在するまたは操作された（天然に存在しない）転写活性化因子様タンパク質（ＴＡＬ）ＤＮＡ結合ドメイン、例えば、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）タンパク質におけるものを含む。例えば、米国特許公開番号２０１１０３０１０７３（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、部位特異的結合ドメインは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムに由来する。一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステム」は、Ｃａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒＲＮＡまたは活性な部分的ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内在性ＣＲＩＳＰＲシステムの関連において「ダイレクトリピート」及びｔｒａｃｒＲＮＡによりプロセシングされた部分的ダイレクトリピートを包含する）、ガイド配列（内在性ＣＲＩＳＰＲシステムの関連において「スペーサー」、または「標的化配列」とも称される）、及び／またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列及び転写物を含めた、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現に関与するかまたはその活性を導く転写物及び他のエレメントを総称的に指す。
一般に、ガイド配列は、標的配列とハイブリダイズして、ＣＲＩＳＰＲ複合体の標的配列への配列特異的結合を導くのに十分な標的ポリヌクレオチド配列との相補性を有するポリヌクレオチド配列を含む、標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ガイド配列とその対応する標的配列との間の相補性の程度は、好適なアライメントアルゴリズムを使用して最適にアライメントされたときに、約５０％以上、約６０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７．５％以上、約９９％以上、またはそれを超える。一部の例では、ｇＲＮＡの標的化ドメインは、標的核酸上の標的配列に相補的、例えば、少なくとも８０、８５、９０、９５、９８、または９９％相補的、例えば、完全に相補的である。
いくつかの実施形態では、標的部位は、標的遺伝子の転写開始部位の上流にある。いくつかの実施形態では、標的部位は、遺伝子の転写開始部位に隣接している。いくつかの実施形態では、標的部位は、遺伝子の転写開始部位の下流のＲＮＡポリメラーゼ休止部位に隣接している。
いくつかの実施形態では、標的化ドメインは、転写開始、１つ以上の転写エンハンサーもしくは活性化因子、及び／またはＲＮＡポリメラーゼの結合を促進するための標的遺伝子のプロモーター領域を標的とするように構成される。１つ以上のｇＲＮＡを使用して、遺伝子のプロモーター領域を標的化することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子の１つ以上の領域が標的とされ得る。特定の態様では、標的部位は、遺伝子の転写開始部位（ＴＳＳ）のいずれかの側の６００塩基対以内にある。
エクソン配列ならびにプロモーター及び活性化因子を含む制御領域の配列を含めた、遺伝子を標的とする配列であるかまたはその配列を含むｇＲＮＡ配列を設計または同定することは、当業者の技能水準の範囲内である。ＣＲＩＳＰＲゲノム編集のためのゲノムワイドのｇＲＮＡデータベースは公共に利用可能であり、ヒトゲノムまたはマウスゲノムにおける遺伝子の構成的エクソンにおける例となる単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）標的配列を含有する（例えば、ｇｅｎｅｓｃｒｉｐｔ．ｃｏｍ／ｇＲＮＡ－ｄａｔａｂａｓｅ．ｈｔｍｌを参照されたい；Ｓａｎｊａｎａ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１１：７８３－４；ｗｗｗ．ｅ－ｃｒｉｓｐ．ｏｒｇ／Ｅ－ＣＲＩＳＰ／；ｃｒｉｓｐｒ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／も参照されたい）。いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡ配列は、非標的遺伝子へのオフターゲット結合が最小である配列であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、制御因子は、機能的ドメイン、例えば、転写活性化因子を更に含む。
いくつかの実施形態では、転写活性化因子は、標的遺伝子の１つ以上の転写制御要素などの１つ以上の制御要素であるか、またはそれを含有し、それによって、上記で提供されるような部位特異的ドメインが認識されて、かかる遺伝子の発現を駆動する。いくつかの実施形態では、転写活性化因子は、標的遺伝子の発現を駆動する。場合によっては、転写活性化因子は、異種トランス活性化ドメインの全部または一部分であり得るか、またはそれを含有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、転写活性化因子は、単純ヘルペス由来トランス活性化ドメイン、Ｄｎｍｔ３ａメチルトランスフェラーゼドメイン、ｐ６５、ＶＰ１６、及びＶＰ６４から選択される。
いくつかの実施形態では、制御因子は、ジンクフィンガー転写因子（ＺＦ－ＴＦ）である。いくつかの実施形態では、制御因子は、ＶＰ６４－ｐ６５－Ｒｔａ（ＶＰＲ）である。
特定の実施形態では、制御因子は、転写制御ドメインを更に含む。一般的なドメインには、例えば、転写因子ドメイン（活性化因子、抑制因子、共活性化因子、共抑制因子）、サイレンサー、発がん遺伝子（例えば、ｍｙｃ、ｊｕｎ、ｆｏｓ、ｍｙｂ、ｍａｘ、ｍａｄ、ｒｅｌ、ｅｔｓ、ｂｃｌ、ｍｙｂ、ｍｏｓファミリーメンバーなど）；ＤＮＡ修復酵素ならびにそれらの関連因子及び修飾因子；ＤＮＡ再構成酵素ならびにそれらの関連因子及び修飾因子；クロマチン関連タンパク質及びそれらの修飾因子（例えば、キナーゼ、アセチラーゼ、及びデアセチラーゼ）；ならびにＤＮＡ修飾酵素（例えば、ＤＮＭＴファミリーのメンバーなどのメチルトランスフェラーゼ（例えば、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＤＮＭＴ３Ｌなど、トポイソメラーゼ、ヘリカーゼ、リガーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、ポリメラーゼ、エンドヌクレアーゼ）ならびにそれらの関連因子及び修飾因子が含まれる。例えば、米国公開第２０１３／０２５３０４０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
活性化を達成するための好適なドメインには、ＨＳＶ ＶＰ１６活性化ドメイン（例えば、Ｈａｇｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１，５９５２－５９６２（１ ９７）を参照されたい）核ホルモン受容体（例えば、Ｔｏｒｃｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：３７３－３８３（１９９８）を参照されたい）；核因子カッパＢのｐ６５サブユニット（Ｂｉｔｋｏ ＆ Ｂａｎｋ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５６１０－５６１８（１９９８）及びＤｏｙｌｅ ＆ Ｈｕｎｔ，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ８：２９３７－２９４２（１９９７））；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５：３－２８（１９９８））、または人工キメラ機能的ドメイン、例えば、ＶＰ６４（Ｂｅｅｒｌｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：１４６２３－３３）、及びデグロン（Ｍｏｌｉｎａｒｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）ＥＭＢＯ Ｊ．１８，６４３９－６４４７）が含まれる。追加の例となる活性化ドメインには、Ｏｃｔ １、Ｏｃｔ－２Ａ、Ｓｐｌ、ＡＰ－２、及びＣＴＦ１（Ｓｅｉｐｅｌ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯＪ．１１，４９６１－４９６８（１９９２）、ならびにｐ３００、ＣＢＰ、ＰＣＡＦ、ＳＲＣ１ ＰｖＡＬＦ、ＡｔＨＤ２Ａ、及びＥＲＦ－２が含まれる。例えば、Ｒｏｂｙｒ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４：３２９－３４７；Ｃｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ２３：２５５－２７５；Ｌｅｏ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｇｅｎｅ２４５：１－１１；Ｍａｎｔｅｕｆｆｅｌ－Ｃｙｍｂｏｒｏｗｓｋａ（１９９９）Ａｃｔａ Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｐｏｌ．４６：７７－８９；ＭｃＫｅｎｎａ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６９：３－１２；Ｍａｌｉｋ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２５：２７７－２８３；及びＬｅｍｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．９：４９９－５０４を参照されたい。追加の例となる活性化ドメインには、ＯｓＧＡＩ、ＨＡＬＦ－１、Ｃｌ、ＡＰ１、ＡＲＦ－５、－６、－１、及び－８、ＣＰＲＦ１、ＣＰＲＦ４、ＭＹＣ－ＲＰ／ＧＰ、及びＴＲＡＢ１が含まれるが、これらに限定されず、例えば、Ｏｇａｗａ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｇｅｎｅ２４５：２１－２９；Ｏｋａｎａｍｉ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｇｅｎｅｓ Ｃｅｌｌｓ １：８７－９９；Ｇｏｆｆ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．５：２９８－３０９；Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ４０：４１９－４２９；Ｕｌｍａｓｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：５８４４－５８４９；Ｓｐｒｅｎｇｅｒ－Ｈａｕｓｓｅｌｓ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｐｌａｎｔ Ｊ．２２：１－８；Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４１：３３－４４；及びＨｏｂｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６：１５，３４８－１５，３５３を参照されたい。
遺伝子抑制因子を作製するために使用され得る、例となる抑制ドメインには、ＫＲＡＢ Ａ／Ｂ、ＫＯＸ、ＴＧＦ－ベータ誘導性初期遺伝子（ＴＩＥＧ）、ｖ－ｅｒｂＡ、ＳＩＤ、ＭＢＤ２、ＭＢＤ３、ＤＮＭＴファミリーのメンバー（例えば、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＤＮＭＴ３Ｌなど）、Ｒｂ、及びＭｅＣＰ２が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｃｅｌｌ ９９：４５１－４５４；Ｔｙｌｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｃｅｌｌ ９９：４４３－４４６；Ｋｎｏｅｐｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｃｅｌｌ ９９：４４７－４５０；及びＲｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．２５：３３８－３４２を参照されたい。追加の例となる抑制ドメインには、ＲＯＭ２及びＡｔＨＤ２Ａが含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ８：３０５－３２１；及びＷｕ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｐｌａｎｔ Ｊ．２２：１９－２７を参照されたい。
一部の事例では、ドメインは、染色体の後成的制御に関与する。いくつかの実施形態では、ドメインは、核局在性のヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）（例えば、Ａ型）、例えば、ＭＹＳＴファミリーメンバーＭＯＺ、Ｙｂｆ２／Ｓａｓ３、ＭＯＦ、及びＴｉｐ６０、ＧＮＡＴファミリーメンバーＧｃｎ５またはｐＣＡＦ、ｐ３００ファミリーメンバーＣＢＰ、ｐ３００、またはＲｔｔｌ０９（Ｂｅｍｄｓｅｎ ａｎｄ Ｄｅｎｕ（２００８）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １８（６）：６８２－６８９）である。他の事例では、ドメインは、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤ ＡＣ）、例えば、クラスＩ（ＨＤＡＣ－ｌ、２、３、及び８）、クラスＩＩ（ＨＤＡＣ ＩＩＡ（ＨＤＡＣ－４、５、７及び９）、ＨＤ ＡＣ ＩＩＢ（ＨＤＡＣ６及び１０））、クラスＩＶ（ＨＤＡＣ－ｌ１）、クラスＩＩＩ（サーチュイン（ＳＩＲＴ）；別名ＳＩＲＴ１－７）である（Ｍｏｔｔａｍａｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０（３）：３８９８－３９４ｌを参照されたい）。いくつかの実施形態で使用される別のドメインは、ヒストンホスホリラーゼまたはキナーゼであり、例としては、ＭＳＫ１、ＭＳＫ２、ＡＴＲ、ＡＴＭ、ＤＮＡ－ＰＫ、Ｂｕｂｌ、ＶｐｒＢＰ、ＩＫＫ－ａ、ＰＫＣｐｉ、Ｄｉｋ／Ｚｉｐ、ＪＡＫ２、ＰＫＣ５、ＷＳＴＦ、及びＣＫ２が挙げられる。いくつかの実施形態では、メチル化ドメインが使用され、Ｅｚｈ２、ＰＲＭＴ１／６、ＰＲＭＴ５／７、ＰＲＭＴ２／６、ＣＡＲＭ１、ｓｅｔ７／９、ＭＬＬ、ＡＬＬ－１、Ｓｕｖ３９ｈ、Ｇ９ａ、ＳＥＴＤＢ１、Ｅｚｈ２、Ｓｅｔ２、Ｄｏｔｌ、ＰＲＭＴ１／６、ＰＲＭＴ５／７、ＰＲ－Ｓｅｔ７及びＳｕｖ４－２０ｈなどの群から選択され得る。スモ化及びビオチン化に関与するドメイン（Ｌｙｓ９、１３、４、１８及び１２）もいくつかの実施形態で使用され得る（Ｋｏｕｓａｒｉｄｅｓ（２００７）Ｃｅｌｌ １２８：６９３－７０５）。
融合分子は、当業者に周知であるクローニング方法及び生化学的コンジュゲーション方法によって構築される。融合分子は、ＤＮＡ結合ドメイン及び機能的ドメイン（例えば、転写活性化または抑制ドメイン）を含む。融合分子はまた、任意選択で、核局在化シグナル（例えば、ＳＶ４０中型Ｔ抗原からのシグナルなど）及びエピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧ及びヘマグルチニンなど）を含む。融合タンパク質（及びそれらをコードする核酸）は、融合体の構成要素の間で翻訳リーディングフレームが保存されるように設計される。
一方で機能的ドメイン（またはその機能的断片）のポリペプチド構成要素と、他方で非タンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（例えば、抗生物質、インターカレーター、副溝結合剤、核酸）との間の融合体は、当業者に既知の生化学的コンジュゲーション方法によって構築される。例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）Ｃａｔａｌｏｇｕｅを参照されたい。副溝結合剤とポリペプチドとの間の融合体を作製するための方法及び組成物が記載されている。Ｍａｐｐ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：３９３０－３９３５。同様に、ポリペプチド構成要素である機能ドメインと関連付けてｓｇＲＮＡ核酸である構成要素を含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ ＴＦ及びヌクレアーゼもまた、当業者に既知であると共に、本明細書に詳述される。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸が、細胞株へのＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の挿入を容易にするために利用され得る。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表２９の配列番号２００７８４～２３１８８５からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＨＬＡ－Ｃを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＬＡ－Ｃを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、細胞株内へのＨＬＡ－Ｃの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１０の配列番号３２７８～５１８３からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＨＬＡ－Ｅを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＬＡ－Ｅを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、細胞株内へのＨＬＡ－Ｅの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１９の配列番号１８９８５９～１９３１８３からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＨＬＡ－Ｆを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＬＡ－Ｆを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、細胞株内へのＨＬＡ－Ｆの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表４５の配列番号６８８８０８～３９９７５４からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＨＬＡ－Ｇを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＬＡ－Ｇを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、幹細胞株内へのＨＬＡ－Ｇの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表１８の配列番号１８８３７２～１８９８５８からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＰＤ－Ｌ１を発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＤ－Ｌ１を発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、幹細胞株内へのＰＤ－Ｌ１の挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、ＷＯ２０１６１８３０４１の表２１の配列番号１９３１８４～２００７８３からなる群から選択され、同文献は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＣＴＬＡ４－Ｉｇを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、幹細胞株内へのＣＴＬＡ４－Ｉｇの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、配列表を含むＷＯ２０１６１８３０４１に開示されるいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＣ１－インヒビターを発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ｃ１－インヒビターを発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、幹細胞株内へのＣ１－インヒビターの挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、配列表を含むＷＯ２０１６１８３０４１に開示されるいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞ゲノムがＩＬ－３５を発現するように改変されたゲノムを含む、細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性幹細胞ならびにその派生物）またはその集団を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＩＬ－３５を発現するように細胞のゲノムを変化させるための方法を提供する。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸を利用して、幹細胞株内へのＩＬ－３５の挿入を容易にしてもよい。多くの実施形態では、少なくとも１つのリボ核酸または少なくとも１対のリボ核酸は、配列表を含むＷＯ２０１６１８３０４１に開示されるいずれか１つから選択される。
いくつかの実施形態では、寛容原性因子は、発現ベクターを使用して細胞において発現される。例えば、細胞内でＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を発現させるための発現ベクターは、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードするポリヌクレオチド配列を含む。発現ベクターは、誘導性発現ベクターであり得る。発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、限定されないが、レンチウイルスベクターであり得る。
いくつかの実施形態では、好適な遺伝子編集システム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、または本明細書に記載の遺伝子編集システムのうちのいずれか）を使用して、低免疫原性細胞のゲノム遺伝子座内への、寛容原性因子をコードするポリヌクレオチドの挿入が容易にされる。一部の場合では、寛容原性因子をコードするポリヌクレオチドは、セーフハーバー遺伝子座、例えば、限定されないが、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＲＯＳＡ２６、ＳＨＳ２３１、Ｆ３（ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）、ＨＭＧＢ１、ＡＢＯ、ＲＨＤ、ＦＵＴ１、またはＫＤＭ５Ｄ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、寛容原性因子をコードするポリヌクレオチドは、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、またはＴＲＢ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、寛容原性因子をコードするポリヌクレオチドは、本明細書で提供される表１に示される遺伝子座のうちのいずれか１つに挿入される。多くの実施形態では、寛容原性因子をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結されている。
Ｏ．キメラ抗原受容体
本明細書では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む低免疫原性細胞が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、第３世代ＣＡＲ、及び第４世代ＣＡＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲには、単一の標的抗原に結合する単一の結合ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲには、複数の標的抗原、例えば、２つ、３つ、またはそれを超える標的抗原に結合する単一の結合ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲには、各結合ドメインが異なる標的抗原に結合するように２つの結合ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲには、各結合ドメインが同じ標的抗原に結合するように２つの結合ドメインが含まれる。ＣＤ１９特異的、ＣＤ２２特異的及びＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲを含む例となるＣＡＲの詳細な説明は、ＷＯ２０１２／０７９０００、ＷＯ２０１６／１４９５７８及びＷＯ２０２０／０１４４８２（配列表及び図を含む開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）で見ることができる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲには、抗ＣＤ１９一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）、膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αに由来するもの、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ＣＡＲには、抗ＣＤ２２ｓｃＦｖ、膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αに由来するもの、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９／ＣＤ２２二重特異的ＣＡＲには、抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ、抗ＣＤ２２ｓｃＦｖ、膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αに由来するもの、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインが含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の低免疫原性細胞は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の低免疫原性細胞は、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも１つのシグナル伝達ドメイン（例えば、１、２、または３つのシグナル伝達ドメイン）を含む第１世代ＣＡＲであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも２つのシグナル伝達ドメインを含む第２世代ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも３つのシグナル伝達ドメインを含む第３世代ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、３つまたは４つのシグナル伝達ドメイン、及びＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含む第４世代ＣＡＲ。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖまたはＦａｂであるか、またはそれを含む。
１．抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）は、新生物またはがん細胞に特有の抗原を標的とする
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）は、新生細胞に特有の抗原を標的とする。換言すれば、抗原結合ドメインは、新生細胞またはがん細胞によって発現される抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、腫瘍関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、新生細胞に特有の抗原（例えば、新生細胞またはがん細胞に関連する抗原）または腫瘍関連抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結型受容体、酵素連結型受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３、及びＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４を含む）、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）（ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ１８、及びＦＧＦ２１を含む）、血管内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）（ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及びＰＩＧＦを含む）、ＲＥＴ受容体及びＥｐｈ受容体ファミリー（ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＡ９、ＥｐｈＡ１０、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、及びＥｐｈＢ６）、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ８、ＣＦＴＲ、ＣＩＣ－１、ＣＩＣ－２、ＣＩＣ－４、ＣＩＣ－５、ＣＩＣ－７、ＣＩＣ－Ｋａ、ＣＩＣ－Ｋｂ、ベストロフィン、ＴＭＥＭ１６Ａ、ＧＡＢＡ受容体、グリシン受容体、ＡＢＣトランスポーター、ＮＡＶ１．１、ＮＡＶ１．２、ＮＡＶ１．３、ＮＡＶ１．４、ＮＡＶ１．５、ＮＡＶ１．６、ＮＡＶ１．７、ＮＡＶ１．８、ＮＡＶ１．９、スフィンゴシン－１－ホスフェート受容体（Ｓ１Ｐ１Ｒ）、ＮＭＤＡチャネル、膜貫通タンパク質、マルチスパン膜貫通タンパク質、Ｔ細胞受容体モチーフ、Ｔ細胞アルファ鎖、Ｔ細胞β鎖、Ｔ細胞γ鎖、Ｔ細胞δ鎖、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ４０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６８、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２７、ＣＤ１３３、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１６３、Ｆ４／８０、ＩＬ－４Ｒａ、Ｓｃａ－１、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＧＡＲＰ、ＬＡＰ、グランザイムＢ、ＬＦＡ－１、トランスフェリン受容体、ＮＫｐ４６、パーフォリン、ＣＤ４＋、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、Ｔｈ４０、Ｔｈ２２、Ｔｈ９、Ｔｆｈ、古典的Ｔｒｅｇ、ＦｏｘＰ３＋、Ｔｒ１、Ｔｈ３、Ｔｒｅｇ１７、ＴＲＥＧ；ＣＤＣＰ、ＮＴ５Ｅ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ－７２、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ガングリオシド（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＧＭ２）、ルイス－γ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１／２／３、αＶβ３、α５β１、ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１／ＨＥＲ２、ＥｒＢ３、ｃ－ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥｐｈＡ３、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、ＰＤＬ－１、ＢＡＦＦ、ＨＤＡＣ、ＡＢＬ、ＦＬＴ３、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＩＬ－１β、ＡＬＫ、ＲＡＮＫＬ、ｍＴＯＲ、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＪＡＫ３、ＢＲＡＦ、ＰＴＣＨ、スムーズンド、ＰＩＧＦ、ＡＮＰＥＰ、ＴＩＭＰ１、ＰＬＡＵＲ、ＰＴＰＲＪ、ＬＴＢＲ、ＡＮＴＸＲ１、葉酸受容体アルファ（ＦＲａ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｐｈＡ２、ＩＬ－１３Ｒａ２、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、メソテリン、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＭＵＣ１６（ＣＡ１２５）、Ｌ１ＣＡＭ、ＬｅＹ、ＭＳＬＮ、ＩＬ１３Ｒα１、Ｌ１－ＣＡＭ、Ｔｎ Ａｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、インターロイキン－１１受容体（ＩＬ－１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来成長因子受容体－ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、ＭＵＣ１、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－１受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐｌ００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣｌ、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精液タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、主要組織適合性複合体クラスＩ関連遺伝子タンパク質（ＭＲ１）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、スルビビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰＩＢＩ、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、新抗原、ＣＤ１３３、ＣＤ１５、ＣＤ１８４、ＣＤ２４、ＣＤ５６、ＣＤ２６、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、（ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、Ｃ）ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１５１、ＣＤ３４０、ＣＤ２００、ｔｋｒＡ、ｔｒｋＢ、もしくはｔｒｋＣ、またはそれらの抗原性断片もしくは抗原性部分から選択される。
２．ＡＢＤは、Ｔ細胞に特有の抗原を標的とする
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、Ｔ細胞に関連する抗原に結合する。いくつかの事例では、かかる抗原は、Ｔ細胞によって発現されるか、またはＴ細胞の表面上に位置する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原すなわちＴ細胞関連抗原は、Ｔ細胞に特有の細胞表面受容体、膜輸送タンパク質（例えば、イオンチャネルタンパク質、膜孔形成タンパク質などといった、例えば、能動または受動輸送タンパク質）、膜貫通型受容体、膜酵素、及び／または細胞接着タンパク質から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、ＡＫＴ１；ＡＫＴ２；ＡＫＴ３；ＡＴＦ２；ＢＣＬ１０；ＣＡＬＭ１；ＣＤ３Ｄ（ＣＤ３δ）；ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３ε）；ＣＤ３Ｇ（ＣＤ３γ）；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５；ＣＤ８０（Ｂ７－１）；ＣＤ８６（Ｂ７－２）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ζ）；ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）；ＥＬＫ１；ＥＲＫ１（ＭＡＰＫ３）；ＥＲＫ２；ＦＯＳ；ＦＹＮ；ＧＲＡＰ２（ＧＡＤＳ）；ＧＲＢ２；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＬＡ－ＤＲＢ１；ＨＬＡ－ＤＲＢ３；ＨＬＡ－ＤＲＢ４；ＨＬＡ－ＤＲＢ５；ＨＲＡＳ；ＩＫＢＫＡ（ＣＨＵＫ）；ＩＫＢＫＢ；ＩＫＢＫＥ；ＩＫＢＫＧ（ＮＥＭＯ）；ＩＬ２；ＩＴＰＲ１；ＩＴＫ；ＪＵＮ；ＫＲＡＳ２；ＬＡＴ；ＬＣＫ；ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）；ＭＡＰ２Ｋ２（ＭＥＫ２）；ＭＡＰ２Ｋ３（ＭＫＫ３）；ＭＡＰ２Ｋ４（ＭＫＫ４）；ＭＡＰ２Ｋ６（ＭＫＫ６）；ＭＡＰ２Ｋ７（ＭＫＫ７）；ＭＡＰ３Ｋ１（ＭＥＫＫ１）；ＭＡＰ３Ｋ３；ＭＡＰ３Ｋ４；ＭＡＰ３Ｋ５；ＭＡＰ３Ｋ８；ＭＡＰ３Ｋ１４（ＮＩＫ）；ＭＡＰＫ８（ＪＮＫ１）；ＭＡＰＫ９（ＪＮＫ２）；ＭＡＰＫ１０（ＪＮＫ３）；ＭＡＰＫ１１（ｐ３８β）；ＭＡＰＫ１２（ｐ３８γ）；ＭＡＰＫ１３（ｐ３８δ）；ＭＡＰＫ１４（ｐ３８α）；ＮＣＫ；ＮＦＡＴ１；ＮＦＡＴ２；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＦＫＢＩＡ；ＮＲＡＳ；ＰＡＫ１；ＰＡＫ２；ＰＡＫ３；ＰＡＫ４；ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ；ＰＩＫ３Ｃ３（ＶＰＳ３４）；ＰＩＫ３ＣＡ；ＰＩＫ３ＣＢ；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＫ３Ｒ１；ＰＫＣＡ；ＰＫＣＢ；ＰＫＣＭ；ＰＫＣＱ；ＰＬＣＹ１；ＰＲＦ１（パーフォリン）；ＰＴＥＮ；ＲＡＣ１；ＲＡＦ１；ＲＥＬＡ；ＳＤＦ１；ＳＨＰ２；ＳＬＰ７６；ＳＯＳ；ＳＲＣ；ＴＢＫ１；ＴＣＲＡ；ＴＥＣ；ＴＲＡＦ６；ＶＡＶ１；ＶＡＶ２；またはＺＡＰ７０であり得る。
３．ＡＢＤは、自己免疫障害または炎症性障害に特有の抗原を標的とする
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、自己免疫障害または炎症性障害に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、自己免疫障害または炎症性障害に関連する抗原に結合する。一部の事例では、抗原は、自己免疫障害または炎症性障害に関連する細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、自己免疫障害または炎症性障害は、慢性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ループス、関節炎、免疫複合体糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、ブドウ膜炎、肝炎、全身性硬化症または強皮症、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、寒冷凝集素症、尋常性天疱瘡、グレーブス病、自己免疫溶血性貧血、血友病Ａ、原発性シェーグレン症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、視神経脊髄炎、エバンス症候群、ＩｇＭ媒介性ニューロパチー、クリオグロブリン血症、皮膚筋炎、特発性血小板減少症、強直性脊椎炎、水疱性類天疱瘡、後天性血管性浮腫、慢性蕁麻疹、抗リン脂質脱髄性多発ニューロパチー、及び自己免疫血小板減少症または好中球減少症または赤芽球癆から選択され、一方で、同種異系免疫疾患の例となる非限定的例としては、造血または実質臓器移植、輸血による同種異系感作（ａｌｌｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）（例えば、Ｂｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１５（４）：９３１－４１を参照されたい）及び／または異種感作、胎児同種異系感作を伴う妊娠、新生児の同種異系免疫性血小板減少症、新生児溶血性疾患、酵素またはタンパク質補充療法、血液製剤、または遺伝子療法で治療される遺伝性または後天性欠損障害の補充に伴い起こり得るものなどの外来抗原への感作が挙げられる。いくつかの実施形態では、自己免疫性または炎症性障害に特有の抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結受容体、酵素連結受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ関連受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体セリン／トレオニンキナーゼ、受容体グアニル酸シクラーゼ、またはヒスチジンキナーゼ関連受容体から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｂ細胞、形質細胞、または形質芽細胞上に発現したリガンドに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３８、ＣＤ４５Ｒ、ＣＤ１３８、ＣＤ３１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２８、ＴＮＦ、インターフェロン受容体、ＧＭ－ＣＳＦ、ＺＡＰ－７０、ＬＦＡ－１、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ５、またはＣＤ２に結合する。例えば、ＵＳ２００３／００７７２４９、ＷＯ２０１７／０５８７５３、ＷＯ２０１７／０５８８５０を参照されたく、同文献の内容は参照により本明細書に組み込まれる。
４．ＡＢＤは、老化細胞に特有の抗原を標的とする
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、老化細胞に特有の抗原、例えば、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、老化細胞に関連する抗原に結合する。一部の事例では、抗原は、老化細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、老化細胞の異常な蓄積を特徴とする障害、例えば、肝臓及び肺線維症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、ならびに骨関節炎の治療または予防に使用されてもよい。
５．ＡＢＤは、感染性疾患に特有の抗原を標的とする
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、感染性疾患に特有の抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、ＡＢＤは、感染性疾患に関連する抗原に結合する。一部の事例では、抗原は、感染性疾患に罹患した細胞によって発現される。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒトヘルペスウイルス、ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ－８、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ））、ヒトＴリンパ向性ウイルス－１（ＨＴＬＶ－１）、メルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、エプスタイン・バーウイルス、ＣＭＶ、ヒトパピローマウイルスから選択される。いくつかの実施形態では、感染性疾患に特有の抗原は、細胞表面受容体、イオンチャネル連結型受容体、酵素連結型受容体、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体型チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ会合型受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体型セリン／トレオニンキナーゼ、受容体型グアニリルシクラーゼ、ヒスチジンキナーゼ会合型受容体、ＨＩＶ Ｅｎｖ、ＨＩＶ－１ Ｅｎｖ上のｇｐｌ２０またはＣＤ４誘導性エピトープから選択される。
６．ＡＢＤは、細胞の細胞表面抗原に結合する
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、細胞の細胞表面抗原に結合する。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、特定のまたは具体的な細胞種に特有である（例えば、それによって発現される）。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、複数のタイプの細胞に特有である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｔ細胞上の細胞表面抗原などの、Ｔ細胞に特有の細胞表面抗原に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｔ細胞に特有の細胞表面受容体、膜輸送タンパク質（例えば、能動的または受動的輸送タンパク質、例えば、イオンチャネルタンパク質、孔形成タンパク質など）、膜貫通受容体、膜酵素、及び／または細胞接着タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に特有の抗原は、Ｇタンパク質共役型受容体、受容体チロシンキナーゼ、チロシンキナーゼ関連受容体、受容体様チロシンホスファターゼ、受容体セリン／トレオニンキナーゼ、受容体グアニル酸シクラーゼ、またはヒスチジンキナーゼ関連受容体であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体に結合する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体は、ＡＫＴ１；ＡＫＴ２；ＡＫＴ３；ＡＴＦ２；ＢＣＬ１０；ＣＡＬＭ１；ＣＤ３Ｄ（ＣＤ３δ）；ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３ε）；ＣＤ３Ｇ（ＣＤ３γ）；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５；ＣＤ８０（Ｂ７－１）；ＣＤ８６（Ｂ７－２）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ζ）；ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）；ＥＬＫ１；ＥＲＫ１（ＭＡＰＫ３）；ＥＲＫ２；ＦＯＳ；ＦＹＮ；ＧＲＡＰ２（ＧＡＤＳ）；ＧＲＢ２；ＨＬＡ－ＤＲＡ；ＨＬＡ－ＤＲＢ１；ＨＬＡ－ＤＲＢ３；ＨＬＡ－ＤＲＢ４；ＨＬＡ－ＤＲＢ５；ＨＲＡＳ；ＩＫＢＫＡ（ＣＨＵＫ）；ＩＫＢＫＢ；ＩＫＢＫＥ；ＩＫＢＫＧ（ＮＥＭＯ）；ＩＬ２；ＩＴＰＲ１；ＩＴＫ；ＪＵＮ；ＫＲＡＳ２；ＬＡＴ；ＬＣＫ；ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）；ＭＡＰ２Ｋ２（ＭＥＫ２）；ＭＡＰ２Ｋ３（ＭＫＫ３）；ＭＡＰ２Ｋ４（ＭＫＫ４）；ＭＡＰ２Ｋ６（ＭＫＫ６）；ＭＡＰ２Ｋ７（ＭＫＫ７）；ＭＡＰ３Ｋ１（ＭＥＫＫ１）；ＭＡＰ３Ｋ３；ＭＡＰ３Ｋ４；ＭＡＰ３Ｋ５；ＭＡＰ３Ｋ８；ＭＡＰ３Ｋ１４（ＮＩＫ）；ＭＡＰＫ８（ＪＮＫ１）；ＭＡＰＫ９（ＪＮＫ２）；ＭＡＰＫ１０（ＪＮＫ３）；ＭＡＰＫ１１（ｐ３８β）；ＭＡＰＫ１２（ｐ３８γ）；ＭＡＰＫ１３（ｐ３８δ）；ＭＡＰＫ１４（ｐ３８α）；ＮＣＫ；ＮＦＡＴ１；ＮＦＡＴ２；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＦＫＢＩＡ；ＮＲＡＳ；ＰＡＫ１；ＰＡＫ２；ＰＡＫ３；ＰＡＫ４；ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ；ＰＩＫ３Ｃ３（ＶＰＳ３４）；ＰＩＫ３ＣＡ；ＰＩＫ３ＣＢ；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＫ３Ｒ１；ＰＫＣＡ；ＰＫＣＢ；ＰＫＣＭ；ＰＫＣＱ；ＰＬＣＹ１；ＰＲＦ１（パーフォリン）；ＰＴＥＮ；ＲＡＣ１；ＲＡＦ１；ＲＥＬＡ；ＳＤＦ１；ＳＨＰ２；ＳＬＰ７６；ＳＯＳ；ＳＲＣ；ＴＢＫ１；ＴＣＲＡ；ＴＥＣ；ＴＲＡＦ６；ＶＡＶ１；ＶＡＶ２；またはＺＡＰ７０であり得る。
７．膜貫通ドメイン
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、またはその機能的変異体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖の少なくとも膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、及びＦＧＦＲ２Ｂ、またはその機能的変異体の少なくとも膜貫通領域（複数可）を含む。抗原結合ドメインが結合する
８．シグナル伝達ドメインまたは複数のシグナル伝達ドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、Ｂ７－１／ＣＤ８０；Ｂ７－２／ＣＤ８６；Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１；Ｂ７－Ｈ２；Ｂ７－Ｈ３；Ｂ７－Ｈ４；Ｂ７－Ｈ６；Ｂ７－Ｈ７；ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２；ＣＤ２８；ＣＴＬＡ－４；Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５；ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８；ＰＤ－１；ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ；ＰＤＣＤ６）；４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７；４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９；ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ；ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７；ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７；ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８；ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８；ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５；ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５；ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５；ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５；ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８；ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８；ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４；ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４；リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦ－ベータ；ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４；ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４；ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ；ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ；ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５；ＴＮＦ－アルファ；ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４；ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８；ＣＤ２；ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９；ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２；ＣＤ５８／ＬＦＡ－３；ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５；ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３；ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７；ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６；ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ＣＤ２；ＣＤ７；ＣＤ５３；ＣＤ８２／Ｋａｉ－１；ＣＤ９０／Ｔｈｙ１；ＣＤ９６；ＣＤ１６０；ＣＤ２００；ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１；ＨＬＡクラスＩ；ＨＬＡ－ＤＲ；Ｉｋａｒｏｓ；インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ；インテグリンアルファ４ベータ１；インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１；ＬＡＧ－３；ＴＣＬ１Ａ；ＴＣＬ１Ｂ；ＣＲＴＡＭ；ＤＡＰ１２；デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ；ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６；ＥｐｈＢ６；ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ；ＴＩＭ－４；ＴＳＬＰ；ＴＳＬＰ Ｒ；リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）；ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ３ゼータドメイン、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの機能的断片のうちの１つ以上から選択される１つまたは少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはそれらの機能的変異体を含む。他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体を含む。更に他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体；（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体；及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはそれらの機能的変異体を含む。他の実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体を含む。更に他の実施形態では、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体；（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体；及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはそれらの機能的変異体を含む。他の実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインもしくは４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体を含む。更に他の実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメインもしくは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体、及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメインもしくはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも３つのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体；（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体；及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータドメインまたは免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；及び（ｉｉ）ＣＤ２８ドメイン、または４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体；及び（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメイン、または４－１ＢＢドメイン、またはその機能的変異体、及び／または（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３ゼータドメイン、または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、またはその機能的変異体；（ｉｉ）ＣＤ２８ドメインまたはその機能的変異体；（ｉｉｉ）４－１ＢＢドメイン、またはＣＤ１３４ドメイン、またはその機能的変異体；及び（ｉｖ）サイトカインまたは共刺激リガンド導入遺伝子を含む。
９．ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメイン
いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、または第４世代ＣＡＲは、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインを含むＣＡＲを含む標的細胞に対して内在性または外因性である。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、炎症誘発性サイトカインをコードする。いくつかの実施形態では、サイトカイン遺伝子は、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＴＮＦ、またはＩＦＮ－ガンマ、またはそれらの機能的断片をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインは、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達の成功時にサイトカイン遺伝子の発現を誘導するドメインは、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、転写因子またはその機能的ドメインもしくは断片は、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）、ＮＦ－ｋＢ、またはその機能的ドメインもしくは断片であるか、またはそれを含む。例えば、Ｚｈａｎｇ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５：２２（２０１７）；ＷＯ２０１６１２６６０８；Ｓｈａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｃｈｉｍａｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｕｍｏｕｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ Ｊａｎ ２７，２０１７，３７（１）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上のスペーサーを更に含み、例えば、スペーサーは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の第１のスペーサーである。いくつかの実施形態では、第１のスペーサーには、免疫グロブリン定常領域もしくは変異体またはその改変されたバージョンの少なくとも一部分が含まれる。いくつかの実施形態では、スペーサーは、膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインとの間の第２のスペーサーである。いくつかの実施形態では、第２のスペーサーは、オリゴペプチドであり、例えば、オリゴペプチドは、グリシン及びセリン残基、例えば、限定されないが、グリシン－セリンダブレットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、２つ以上のスペーサー、例えば、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間のスペーサー及び膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインとの間のスペーサーを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のいずれか１つは、ＣＡＲまたは第１世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中に下流シグナル伝達を媒介する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のいずれか１つは、ＣＡＲまたは第２世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び２つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中に下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞持続を強化する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のいずれか１つは、ＣＡＲまたは第３世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第３世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも３つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中に下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞持続を強化する。いくつかの実施形態では、第３世代ＣＡＲは、少なくとも２つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの共刺激ドメインは、同じではない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞のいずれか１つは、ＣＡＲまたは第４世代ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、第４世代ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも２、３、または４つのシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化中に下流シグナル伝達を媒介する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、Ｔ細胞活性化中のサイトカイン産生、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＡＲ－Ｔ細胞持続を強化する。
１０．抗体またはその抗原結合部分を含むＡＢＤ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、抗体またはその抗原結合部分であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたはＦａｂであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗原結合ドメインは、ＣＤ１９抗体；ＣＤ２２抗体；Ｔ細胞アルファ鎖抗体；Ｔ細胞β鎖抗体；Ｔ細胞γ鎖抗体；Ｔ細胞δ鎖抗体；ＣＣＲ７抗体；ＣＤ３抗体；ＣＤ４抗体；ＣＤ５抗体；ＣＤ７抗体；ＣＤ８抗体；ＣＤ１１ｂ抗体；ＣＤ１１ｃ抗体；ＣＤ１６抗体；ＣＤ２０抗体；ＣＤ２１抗体；ＣＤ２５抗体；ＣＤ２８抗体；ＣＤ３４抗体；ＣＤ３５抗体；ＣＤ４０抗体；ＣＤ４５ＲＡ抗体；ＣＤ４５ＲＯ抗体；ＣＤ５２抗体；ＣＤ５６抗体；ＣＤ６２Ｌ抗体；ＣＤ６８抗体；ＣＤ８０抗体；ＣＤ９５抗体；ＣＤ１１７抗体；ＣＤ１２７抗体；ＣＤ１３３抗体；ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）抗体；ＣＤ１６３抗体；Ｆ４／８０抗体；ＩＬ－４Ｒａ抗体；Ｓｃａ－１抗体；ＣＴＬＡ－４抗体；ＧＩＴＲ抗体ＧＡＲＰ抗体；ＬＡＰ抗体；グランザイムＢ抗体；ＬＦＡ－１抗体；ＭＲ１抗体；ｕＰＡＲ抗体；またはトランスフェリン受容体抗体のｓｃＦｖまたはＦａｂ断片を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメインであるシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、第２の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも２つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも３つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドのうちの１つ以上から選択される共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲが２つ以上の共刺激ドメインを含む場合、２つの共刺激ドメインは、異なる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲが２つ以上の共刺激ドメインを含む場合、２つの共刺激ドメインは、同じである。
本明細書に記載のＣＡＲに加えて、様々なキメラ抗原受容体及びそれをコードするヌクレオチド配列が当技術分野で知られており、本明細書に記載されるｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏでの標的細胞のフソソーム送達及び再プログラム化に好適であろう。例えば、ＷＯ２０１３０４０５５７；ＷＯ２０１２０７９０００；ＷＯ２０１６０３０４１４；Ｓｍｉｔｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１７．ＤＯＩ：１０．１０３８／ＮＮＡＮＯ．２０１７．５７（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
１１．ＣＡＲ
特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲをコードする外因性遺伝子を含み得る。ＣＡＲ（別名キメラ免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、または人工Ｔ細胞受容体）は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）に、特定のタンパク質を標的とする新たな能力を付与するように操作された受容体タンパク質である。その受容体は、抗原結合及びＴ細胞活性化機能の両方を単一の受容体に組み合わせるのでキメラである。本技術のポリシストロン性ベクターは、様々な標的抗原に対する細胞ベースの療法において使用するための宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）において１つ以上のＣＡＲを発現させるために使用され得る。１つ以上の発現カセットによって発現するＣＡＲは、同じであり得るか、または異なり得る。これらの実施形態では、ＣＡＲは、標的抗原、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインに特異的に結合する細胞外結合ドメイン（「結合因子」とも称される）を含み得る。特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上のシグナルペプチド、１つ以上の細胞外ヒンジドメイン、及び／または１つ以上の細胞内共刺激ドメインを含む１つ以上の追加の要素を更に含み得る。ドメインは、互いに直接的に隣接している場合があり、またはドメインを連結させる１つ以上のアミノ酸が存在し得る。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、哺乳動物配列、例えば、マウス配列、霊長類配列、ヒト配列、またはこれらの組み合わせに由来し得る。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列が非ヒトである場合、ＣＡＲの配列は、ヒト化され得る。ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列はまた、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞における発現のためにコドン最適化され得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列は、本明細書に開示されるヌクレオチド配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり得る。配列バリエーションは、コドン最適化、ヒト化、制限酵素ベースのクローニング痕、及び／または機能的ドメインを連結させる追加のアミノ酸残基などに起因し得る。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、Ｎ末端でシグナルペプチドを含み得る。シグナルペプチドの非限定的な例には、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＩｇＫシグナルペプチド、及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体サブユニットアルファ（ＧＭＣＳＦＲ－α、別名コロニー刺激因子２受容体サブユニットアルファ（ＣＳＦ２ＲＡ））シグナルペプチド、及びそれらの変異体が含まれ、そのアミノ酸配列は、以下の表２で提供される。
特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つの標的抗原または複数の標的抗原に特異的な１つ以上の抗体を含み得る。抗体は、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、またはシングルドメイン抗体断片、例えば、ＶＨＨであり得る。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーによって接続された抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。ＶＨ及びＶＬは、いずれかの順序、すなわち、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨで接続され得る。リンカーの非限定的な例には、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー、（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは、正の整数、例えば、１、２、３、４、５、６などであり得る）リンカー、及びその変異体が含まれる。特定の実施形態では、抗原は、腫瘍細胞上で独占的または優先的に発現する抗原、または自己免疫性または炎症性疾患に特有の抗原であり得る。例となる標的抗原には、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７０、カッパ、ラムダ、及びＢ細胞成熟因子（ＢＣＭＡ）、Ｇ－タンパク質結合受容体ファミリーＣ群５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）（白血病に関連する）；ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＴＡＣＩ、及びＢＣＭＡ（骨髄腫に関連する）；ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｂ７Ｈ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＰＨＡ２、ＦＡＰ、ＦＲα、ＩＬ－１３Ｒα、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、及びＲＯＲ１（固形腫瘍に関連する）が含まれるが、これらに限定されない。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化され、または細胞外結合ドメインの機能を増加させるための変異体配列を有し得る。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、スペーサーとも称されるヒンジドメインを含み得る。「ヒンジ」及び「スペーサー」という用語は、本開示において互換的に使用され得る。ヒンジドメインの非限定的な例には、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及びそれらの変異体が含まれ、そのアミノ酸配列は、以下の表３で提供される。
特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、またはそれらの機能的変異体（これらの配列の各々のヒトバージョンを含む）の膜貫通領域を含み得る。他の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、及びＦＧＦＲ２Ｂ、またはそれらの機能的変異体（これらの配列の各々のヒトバージョンを含む）の膜貫通領域を含み得る。表４は、数個の例となる膜貫通ドメインのアミノ酸配列を提供する。
特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、ＰＤＣＤ６、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦβ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦα、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ３ζ、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びこれらの配列の各々のヒトバージョンを含むそれらの機能的変異体から選択される１つ以上のシグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ３ζドメイン、ＩＴＡＭ、ＣＤ２８ドメイン、４－１ＢＢドメイン、またはそれらの機能的変異体から選択される１つ以上のシグナル伝達ドメインを含む。表５は、数個の例となる細胞内共刺激及び／またはシグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を提供する。特定の実施形態では、以下に記載されるチサゲンレクルユーセルの場合のように、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、アミノ酸位置１４で変異、例えば、グルタミン（Ｑ）からリジン（Ｋ）への変異を有し得る（配列番号１１５を参照されたい）。
ポリシストロン性ベクターが２つ以上のＣＡＲをコードする特定の実施形態では、２つ以上のＣＡＲは、記載されるように、同じ機能的ドメイン、または１つ以上の異なる機能的ドメインを含み得る。例えば、２つ以上のＣＡＲは、配列類似性による組換えのリスクを最小化するために、異なるシグナルペプチド、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。または、代替的に、２つ以上のＣＡＲは、同じドメインを含み得る。同じドメイン（複数可）及び／または骨格が使用される場合、組換えのリスクを最小化するためにヌクレオチド配列レベルでコドン相違を導入することは任意である。
ＣＤ１９ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲであり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に定められるアミノ酸配列または配列番号６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に定められるアミノ酸配列または配列番号７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に定められるアミノ酸配列または配列番号８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ１９、例えば、ヒトＣＤ１９に特異的である。ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにまたは細胞外結合ドメインの機能を増加させるための変異体配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたＦＭＣ６３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むＦＭＣ６３モノクローナル抗体（ＦＭＣ６３）に由来するｓｃＦｖを含む。ＦＭＣ６３及び誘導されたｓｃＦｖは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）及びＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１８／２１３３３７（各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態では、ＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖ（ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖとも称される）全体及びその様々な部分のアミノ酸配列は、以下の表６で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１９、２０、または２５に定められるアミノ酸配列または配列番号１９、２０、または２５に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２１～２３及び２６～２８に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２１～２３に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２６～２８に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ部分を連結させるリンカーは、配列番号２４に定められるアミノ酸配列を有するＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーは、異なるリンカー、例えば、配列番号３０に定められるアミノ酸配列を有する３ｘＧ４Ｓリンカーによって置き換えられ得、これは、配列番号２９に定められるアミノ酸配列を有する異なるＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖを生じさせる。これらの実施形態の特定のものでは、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２９に定められるアミノ酸配列または配列番号２９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＪ２５Ｃ１（Ｂｅｊｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：２３４６－２３５１（１９９５））、ＨＤ３７（Ｐｅｚｕｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８（９）：２７９３－２７９９（１９８７））、４Ｇ７（Ｍｅｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ３：３０５－３２０（１９８４））、Ｂ４３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５）），ＢＬＹ３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５））、Ｂ４（Ｆｒｅｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７０：４１８－４２７（１９８７））、Ｂ４ ＨＢ１２ｂ（Ｋａｎｓａｓ ＆ Ｔｅｄｄｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：４０９４－４１０２（１９９１）；Ｙａｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１５１７８－１５１８３（２００５）；Ｈｅｒｂｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３３５：２１３－２２２（２０１０））、ＢＵ１２（Ｃａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４８（１０）：２９８３－２９８７（１９９２））、及びＣＬＢ－ＣＤ１９（Ｄｅ Ｒｉｅ Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１８：３６８－３８１（１９８９））を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、その抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に定められるアミノ酸配列または配列番号９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に定められるアミノ酸配列または配列番号１０に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列または配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に定められるアミノ酸配列または配列番号１３に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に定められるアミノ酸配列または配列番号１４に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に定められるアミノ酸配列または配列番号１５に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。ＣＤ１３７としても知られている４－１ＢＢは、Ｔ細胞に強力な共刺激シグナルを伝達し、Ｔリンパ球の分化を促進し、その長期生存を強化する。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に定められるアミノ酸配列または配列番号１６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む。ＣＤ２８は、Ｔ細胞上の別の共刺激分子である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に定められるアミノ酸配列または配列番号１７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン及び記載されるＣＤ２８共刺激ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ３ζは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲｓ）と会合してシグナルを生成し、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するために十分なゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に定められるアミノ酸配列または配列番号１８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１９または配列番号２９に定められる配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含む、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるようなシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１９または配列番号２９に定められる配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含む、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるようなシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号１９または配列番号２９に定められる配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１７のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ１９ ＣＡＲを含む、ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ１９ ＣＡＲは、記載されるようなシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１１６に定められるＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有し、または配列番号１１６に定められるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である発現カセットを含む（表７を参照されたい）。コードされるＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１７に定められる対応するアミノ酸配列を有し、または配列番号１１７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり、以下の構成要素：ＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ１９ ＣＡＲの市販の実施形態をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。Ｔ細胞によって発現及び／またはコードされるＣＤ１９ ＣＡＲの市販の実施形態の非限定的な例には、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタゲンアウトルーセルが含まれる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、チサゲンレクルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。チサゲンレクルユーセルは、以下の構成要素：ＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－３ｘＧ４Ｓリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲを含む。チサゲンレクルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列は、表８で提供される配列のアノテーションと共に、表７で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、リソカブタゲンマラルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。リソカブタゲンマラルユーセルは、以下の構成要素：ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲを含む。リソカブタゲンマラルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列は、表９で提供される配列のアノテーションと共に、表７で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、アキシカブタゲンシロルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。アキシカブタゲンシロルユーセルは、以下の構成要素：ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲを含む。アキシカブタゲンシロルユーセルにおけるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列は、表１０で提供される配列のアノテーションと共に、表７で提供される。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ブレクスカブタゲンアウトルーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ブレクスカブタゲンアウトルーセルは、以下の構成要素：ＧＭＣＳＦＲ－αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号３１、３３、または３５に定められるＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有し、または配列番号３１、３３、または３５に定められるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である発現カセットを含む。コードされるＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号３２、３４、または３６にそれぞれ定められる対応するアミノ酸配列を有し、または配列番号３２、３４、または３６にそれぞれ定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号３１、３３、または３５に定められるＣＤ１９ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有し、または配列番号３１、３３、または３５に定められるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である発現カセットを含む。コードされるＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号３２、３４、または３６にそれぞれ定められる対応するアミノ酸配列を有し、または配列番号３２、３４、または３６にそれぞれ定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である。
ＣＤ２０ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２０ ＣＡＲであり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ＣＤ２０は、プロＢ段階で早期に及びＢ細胞成熟まで増加するレベルで徐々にＢ細胞の表面上に見られ、ほとんどのＢ細胞新生物の細胞上にも見られる抗原である。ＣＤ２０陽性細胞はまた、ホジキン病、骨髄腫、及び胸腺腫の場合に時に見られる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２０に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に定められるアミノ酸配列または配列番号６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に定められるアミノ酸配列または配列番号７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に定められるアミノ酸配列または配列番号８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２０、例えば、ヒトＣＤ２０に特異的である。ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにまたは細胞外結合ドメインの機能を増加させるための変異体配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、Ｌｅｕ１６、ＩＦ５、１．５．３、リツキシマブ、オビヌツズマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツムマブ、オドロネクスタマブ、ベルツズマブ、ウブリツキシマブ、及びオクレリズマブを含む、ＣＤ２０に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、その抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたＬｅｕ１６の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むＬｅｕ１６モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖを含む。Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．１４（１２）：１０２５－１０３３（２００１）を参照されたい。いくつかの実施形態では、リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、リンカーは、本明細書に記載されるＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｌｅｕ１６由来ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ１６ ｓｃＦｖとも称される）全体の様々な部分及びその様々な部分のアミノ酸配列は、以下の表１１で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３７、３８、または４２に定められるアミノ酸配列または配列番号３７、３８、または４２に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３９～４１、４３及び４４に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３９～４１に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号４３～４４に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に定められるアミノ酸配列または配列番号９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に定められるアミノ酸配列または配列番号１０に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列または配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に定められるアミノ酸配列または配列番号１３に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に定められるアミノ酸配列または配列番号１４に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に定められるアミノ酸配列または配列番号１５に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に定められるアミノ酸配列または配列番号１６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に定められるアミノ酸配列または配列番号１７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に定められるアミノ酸配列または配列番号１８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号３７に定められる配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２０ ＣＡＲを含む、ＣＤ２０ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
ＣＤ２２ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２ ＣＡＲであり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達のための阻害性受容体として機能する成熟Ｂ細胞の表面上に大抵見られる膜貫通タンパク質であるＣＤ２２。ＣＤ２２は、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病（例えば、Ｂ－慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、及びバーキットリンパ腫）の６０～７０％で発現し、Ｂ細胞発達の早期段階における細胞表面上または幹細胞上には存在しない。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２２に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に定められるアミノ酸配列または配列番号６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に定められるアミノ酸配列または配列番号７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に定められるアミノ酸配列または配列番号８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２２、例えば、ヒトＣＤ２２に特異的である。ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにまたは細胞外結合ドメインの機能を増加させるための変異体配列を有するようにコドン最適化され得る。いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＭ０３、イノツズマブ、エプラツズマブ、モキセツモマブ、及びピナツズマブを含むＣＤ２２に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、その抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、リンカーによって接続されたｍ９７１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むｍ９７１モノクローナル抗体（ｍ９７１）に由来するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用され得る。いくつかの実施形態では、ｍ９７１由来ｓｃＦｖ（ｍ９７１ ｓｃＦｖとも称される）全体及びその様々な部分のアミノ酸配列は、以下の表１２で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４５、４６、または５０に定められるアミノ酸配列または配列番号４５、４６、または５０に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４７～４９及び５１～５３に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４７～４９に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５１～５３に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、親抗体ｍ９７１と比較して有意に改善した（約２ｎＭから５０ｐＭ未満に改善した）ＣＤ２２結合親和性を有するｍ９７１の親和性成熟変異体であるｍ９７１－Ｌ７に由来するｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｍ９７１－Ｌ７に由来するｓｃＦｖは、３ｘＧ４Ｓリンカーによって接続されたｍ９７１－Ｌ７のＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用され得る。いくつかの実施形態では、ｍ９７１－Ｌ７由来ｓｃＦｖ（ｍ９７１－Ｌ７ ｓｃＦｖとも称される）全体及びその様々な部分のアミノ酸配列は、以下の表１２で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５４、５５、または５９に定められるアミノ酸配列または配列番号５４、５５、または５９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５６～５８及び６０～６２に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５６～５８に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号６０～６２に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲは、イムノトキシンＨＡ２２またはＢＬ２２の細胞外結合ドメインを含む。イムノトキシンＢＬ２２及びＨＡ２２は、細菌毒素に融合されたＣＤ２２に特異的なｓｃＦｖを含む治療剤であり、よって、ＣＤ２２を発現するがん細胞の表面に結合し、がん細胞を殺傷し得る。ＢＬ２２は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａの３８ｋＤａの切断型形態に融合された抗ＣＤ２２抗体ＲＦＢ４のｄｓＦｖを含む（Ｂａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１１：１５４５－５０（２００５））。ＨＡ２２（ＣＡＴ８０１５、モキセツモマブパスードトクス）は、ＢＬ２２の変異したより高い親和性バージョンである（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（１）：６０７－１７（２００５））。ＣＤ２２に特異的なＨＡ２２及びＢＬ２２の抗原結合ドメインの好適な配列は、例えば、米国特許第７，５４１，０３４号；第７，３５５，０１２号；及び第７，９８２，０１１号（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に定められるアミノ酸配列または配列番号９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に定められるアミノ酸配列または配列番号１０に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列または配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に定められるアミノ酸配列または配列番号１３に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に定められるアミノ酸配列または配列番号１４に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に定められるアミノ酸配列または配列番号１５に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に定められるアミノ酸配列または配列番号１６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に定められるアミノ酸配列または配列番号１７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に定められるアミノ酸配列または配列番号１８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、配列番号４５または配列番号５４に定められる配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＣＤ２２ ＣＡＲを含む、ＣＤ２２ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。
ＢＣＭＡ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲであり、これらの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞系統の細胞上に発現する腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）メンバーであり、最終的に分化したＢ細胞または成熟Ｂリンパ球上で最も高い発現を有する。ＢＣＭＡは、長期体液性免疫を維持するための血漿細胞の生存を媒介することに関与する。ＢＣＭＡの発現は最近、多数のがん、例えば、多発性骨髄腫、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、様々な白血病、ならびに膠芽腫に関連付けられた。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＢＣＭＡに特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインをタンデムで含み得る。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に定められるアミノ酸配列または配列番号６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に定められるアミノ酸配列または配列番号７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に定められるアミノ酸配列または配列番号８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに特異的である。ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにまたは細胞外結合ドメインの機能を増加させるための変異体配列を有するようにコドン最適化され得る。
いくつかの実施形態では、細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ベランタマブ、エルラナタマブ、テクリスタマブ、ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ、及びシルタカブタゲンを含む、ＢＣＭＡに特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、その抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）に記載されるマウスモノクローナル抗体であるＣ１１Ｄ５．３に由来するｓｃＦｖを含む。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１０／１０４９４９も参照されたい。Ｃ１１Ｄ５．３由来ｓｃＦｖは、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーによって接続されたＣ１１Ｄ５．３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得、そのアミノ酸配列は、以下の表１３で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６３、６４、または６８に定められるアミノ酸配列または配列番号６３、６４、または６８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６５～６７及び６９～７１に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６５～６７に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６９～７１に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）及びＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１０／１０４９４９に記載される別のマウスモノクローナル抗体Ｃ１２Ａ３．２に由来するｓｃＦｖを含み、そのアミノ酸配列はまた、以下の表１３で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７２、７３、または７７に定められるアミノ酸配列または配列番号７２、７３、または７７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７４～７６及び７８～８０に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７４～７６に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７８～８０に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２９（５）：５８５－６０１（２０１８））においてＢＢ２１２１と称される、ヒトＢＣＭＡに対する高い特異性を有するマウスモノクローナル抗体を含む。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１２１６３８０５も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍとも称される、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１（１）：１４１（２０１８）に記載されるようなＢＣＭＡの２つのエピトープに結合し得る２つの重鎖（ＶＨＨ）の単一可変断片を含む。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１８／０２８６４７も参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＦＨＶＨ３３とも称される、Ｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１（１）：２８３（２０２０）に記載されるような完全ヒト重鎖可変ドメイン（ＦＨＶＨ）を含む。ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１９／００６０７２も参照されたい。ＦＨＶＨ３３及びそのＣＤＲのアミノ酸配列は、以下の表１３で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号８１に定められるアミノ酸配列または配列番号８１に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号８２～８４に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、米国特許第１１，０２６，９７５Ｂ２号に記載されるようなＣＴ１０３Ａ（またはＣＡＲ００８５）に由来するｓｃＦｖであり、アミノ酸配列は、以下の表１３で提供される。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１１８、１１９、または１２３に定められるアミノ酸配列または配列番号１１８、１１９、または１２３に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２０～１２２及び１２４～１２６に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２０～１２２に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２４～１２６に定められるアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを有する重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含む、または特定された配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）の配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲを含み、またはそれからなる。
また、ＢＣＭＡに仕向けられたＣＡＲ及び結合因子は、米国出願公開番号２０２０／０２４６３８１Ａ１及び２０２０／０３３９６９９Ａ１に記載されており、各々の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に定められるアミノ酸配列または配列番号９に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に定められるアミノ酸配列または配列番号１０に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列または配列番号１１または配列番号１２に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に定められるアミノ酸配列または配列番号１３に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に定められるアミノ酸配列または配列番号１４に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に定められるアミノ酸配列または配列番号１５に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に定められるアミノ酸配列または配列番号１６に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に定められるアミノ酸配列または配列番号１７に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に定められるアミノ酸配列または配列番号１８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であるアミノ酸配列を含み、またはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、記載されるＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのいずれか、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＢＣＭＡ ＣＡＲを含む、ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載されるようなシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を追加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、記載されるＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのいずれか、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１７のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはその変異体（すなわち、開示される配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９同一である配列を有する）を含むＢＣＭＡ ＣＡＲを含む、ＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。これらの実施形態のいずれかでは、ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載されるようなシグナルペプチドを追加的に含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、配列番号１２７に定められるＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするヌクレオチド配列を含有し、または配列番号１２７に定められるヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である発現カセットを含む（表１４を参照されたい）。コードされるＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号１２８に定められる対応するアミノ酸配列を有し、または配列番号１２８に定められるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）であり、以下の構成要素：ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＴ１０３Ａ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル（ｂｂ２１２１とも呼ばれるｉｄｅ－ｃｅｌ）を含む、ＢＣＭＡ ＣＡＲの市販の実施形態をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、ポリシストロン性ベクターは、イデカブタゲンビクルユーセルまたはその一部分をコードするヌクレオチド配列を含有する発現カセットを含む。イデカブタゲンビクルユーセルは、以下の構成要素：ＢＢ２１２１結合因子、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。
Ｐ．低免疫原性細胞の特徴
いくつかの実施形態では、低免疫原性幹細胞の集団は、対照幹細胞（例えば、野生型幹細胞または免疫原性幹細胞）と比較して多能性を保持する。いくつかの実施形態では、低免疫原性幹細胞の集団は、対照幹細胞（例えば、野生型幹細胞または免疫原性幹細胞）比較して分化潜在性を保持する。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルの免疫活性化を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発された免疫活性化のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成された免疫活性化のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において免疫活性化を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのＴ細胞反応を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＴ細胞反応のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＴ細胞反応のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてその細胞に対するＴ細胞反応を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのＮＫ細胞反応を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＮＫ細胞反応のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＮＫ細胞反応のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてその細胞に対するＮＫ細胞反応を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのマクロファージ貪食を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＮＫ細胞反応のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたマクロファージ貪食のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてその細胞のマクロファージ貪食を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルの全身性ＴＨ１活性化を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発された全身性ＴＨ１活性化のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成された全身性ＴＨ１活性化のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において全身性ＴＨ１活性化を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのＮＫ細胞殺傷を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＮＫ細胞殺傷のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＮＫ細胞殺傷のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてＮＫ細胞殺傷を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の減少したまたはより低いレベルの免疫活性化を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＰＢＭＣの免疫活性化のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＰＢＭＣの免疫活性化のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてＰＢＭＣの免疫活性化を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのドナー特異的ＩｇＧ抗体を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたドナー特異的ＩｇＧ抗体のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたドナー特異的ＩｇＧ抗体のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてドナー特異的ＩｇＧ抗体を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのドナー特異的ＩｇＭ抗体を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたドナー特異的ＩｇＭ抗体のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたドナー特異的ＩｇＭ抗体のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてドナー特異的ＩｇＭ抗体を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルのＩｇＭ及びＩｇＧ抗体生成を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＩｇＭ及びＩｇＧ抗体生成のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＩｇＭ及びＩｇＧ抗体生成のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてＩｇＭ及びＩｇＧ抗体生成を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルの細胞傷害性Ｔ細胞殺傷を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発された細胞傷害性Ｔ細胞殺傷のレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成された細胞傷害性Ｔ細胞殺傷のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において細胞傷害性Ｔ細胞殺傷を誘発しない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞などの低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者において減少したまたはより低いレベルの補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘発する。一部の事例では、細胞によって誘発されたＣＤＣのレベルは、免疫原性細胞の投与によって生成されたＣＤＣのレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低い。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の投与された集団は、対象または患者においてＣＤＣを誘発しない。
Ｑ．初代Ｔ細胞からの治療細胞
本明細書では、免疫認識を回避する初代Ｔ細胞を含むがこれに限定されない低免疫原性細胞が提供される。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、Ｔ細胞、例えば、初代Ｔ細胞から産生される（例えば、生成される、培養される、または誘導される）。一部の事例では、初代Ｔ細胞は、対象または個体から得られ（例えば、採取され、抽出され、除去され、または取得され）得る。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、Ｔ細胞が１つ以上の対象（例えば、１つ以上の健康なヒトを含む１つ以上のヒト）に由来するようにＴ細胞のプールから生成される。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞のプールは、１～１００、１～５０、１～２０、１～１０、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、または１００以上の対象からのものである。いくつかの実施形態では、ドナー対象は、患者（例えば、治療細胞が投与されるレシピエント）とは異なる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプールは、患者からの細胞を含まない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプールが得られるドナー対象のうちの１つ以上は、患者とは異なる。
いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、患者（例えば、投与時にレシピエント）において免疫応答を活性化しない。低免疫原性細胞の集団を、低免疫原性細胞の集団を必要とする対象（例えば、レシピエント）または患者に投与することによって障害を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の低免疫原性細胞は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を含むが、これらに限定されないキメラ抗原受容体を発現するように操作された（例えば、改変される）Ｔ細胞を含む。一部の事例では、Ｔ細胞は、１つ以上の個体からの初代Ｔ細胞の集団またはサブ集団である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞は、内在性Ｔ細胞受容体の低減された発現を含む。
いくつかの実施形態では、本技術は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現すると共に、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を有するかまたはその発現を欠いており、ＴＣＲ複合体分子の低減された発現を有するかまたはその発現を欠いている、低免疫原性初代Ｔ細胞を対象とする。本明細書で概説される細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、免疫認識を回避する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、及び／またはＴＣＲ複合体分子の低減したレベルまたは活性を示す。多くの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＣＩＩＴＡ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＴＲＡＣ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＴＲＢ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、以下の遺伝子：Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つ以上におけるゲノム改変を保有する。
いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、以下の遺伝子：ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子のうちの１つ以上におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、以下の遺伝子：ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５遺伝子のうちの１つ以上におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｃ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃ遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＤ１５５遺伝子におけるゲノム改変を保有する。いくつかの実施形態では、初代Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲを過剰発現し、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５遺伝子におけるゲノム改変を保有する。
本開示の例となるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、メモリーＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、組織浸潤リンパ球、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。多くの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、及びＣＤ４５ＲＡを発現する。いくつかの実施形態では、セントラルＴ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、及びＣＤ４５ＲＯを発現する。他の実施形態では、エフェクターメモリーＴ細胞は、ＰＤ－１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、及びＣＤ４５ＲＯを発現する。他の実施形態では、エフェクターメモリーＲＡ Ｔ細胞は、ＰＤ－１、ＣＤ５７、及びＣＤ４５ＲＡを発現する。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、改変された（例えば、操作された）Ｔ細胞である。一部の場合では、改変されたＴ細胞は、損傷細胞、異形成細胞、感染細胞、免疫原性細胞、炎症細胞、悪性細胞、化生細胞、変異細胞、及びこれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの表面上に発現する目的の抗原またはエピトープに特異的に結合する少なくとも１つのキメラ抗原受容体を細胞に発現させる改変を含む。他の場合では、改変されたＴ細胞は、細胞が隣接する細胞、組織、または器官と近接する場合に隣接する細胞、組織、または器官において目的の生物学的効果を調節する少なくとも１つのタンパク質を細胞に発現させる改変を含む。初代Ｔ細胞に対する有用な改変は、ＵＳ２０１６／０３４８０７３及びＷＯ２０２０／０１８６２０に詳細に記載されており、その開示は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の低免疫原性細胞は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体を含むが、これらに限定されないキメラ抗原受容体を発現するように操作された（例えば、改変される）Ｔ細胞を含む。一部の事例では、Ｔ細胞は、１つ以上の個体からの初代Ｔ細胞の集団またはサブ集団である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞には、内在性Ｔ細胞受容体の低減された発現が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞には、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）の低減された発現が含まれる。他の実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞には、プログラム細胞死（ＰＤ－１）の低減された発現が含まれる。多くの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞には、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１の低減された発現が含まれる。ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１ならびにＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１の両方の発現を低減または排除する方法には、限定されないが、レアカットエンドヌクレアーゼを利用する遺伝子改変技術、及びＲＮＡサイレンシングまたはＲＮＡ干渉技術などの、当業者に認識されるいずれも含まれ得る。レアカットエンドヌクレアーゼの非限定的な例としては、任意のＣａｓタンパク質、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、及びホーミングエンドヌクレアーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、または本明細書に開示される別の寛容原性因子）をコードする外因性核酸は、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ－１遺伝子座にて挿入される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞、例えば、操作されたまたは改変されたＴ細胞には、ＰＤ－Ｌ１の強化した発現が含まれる。
いくつかの実施形態では、低免疫原性Ｔ細胞は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含み、ポリヌクレオチドは、ゲノム遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、セーフハーバー遺伝子座、例えば、限定されないが、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＲＯＳＡ２６、ＳＨＳ２３１、Ｆ３（別名ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＬＲＰ１（別名ＣＤ９１）、ＨＭＧＢ１、ＡＢＯ、ＲＨＤ、ＦＵＴ１、またはＫＤＭ５Ｄ遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－ＣまたはＣＤ１５５遺伝子に挿入される。
本明細書で提供される低免疫原性Ｔ細胞は、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、肝臓癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、急性骨髄性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、胃癌、胃腺癌、膵臓腺癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肺扁平上皮癌、肝細胞癌、及び膀胱癌を含むが、これらに限定されない、好適ながんの治療に有用である。
Ｒ．低免疫原性多能性幹細胞から分化した治療細胞
本明細書では、免疫認識を回避する、多能性幹細胞に由来する細胞を含む低免疫原性細胞が提供される。いくつかの実施形態では、前記細胞は、患者または対象（例えば、投与時にレシピエント）において免疫応答を活性化しない。障害を治療する方法であって、低免疫原性細胞の集団の反復投与を必要とするレシピエント対象への低免疫原性細胞の集団の反復投与を含む、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。他の実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。多くの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＴＣＲ複合体の低減された発現を示すように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原ならびにＴＣＲ複合体の低減された発現を示すように改変される。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。他の実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。多くの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＴＣＲ複合体の低減された発現を示すように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原ならびにＴＣＲ複合体の低減された発現を示すように改変される。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示し、かつ増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように改変される。一部の事例では、細胞は、１つ以上のＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子を保有することにより、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１を過剰発現する。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示し、かつ増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原ならびにＴＣＲ複合体の低減された発現を示し、かつ増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように改変される。
いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように、増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように、及びキメラ抗原受容体を外因的に発現するように改変される。一部の事例では、細胞は、１つ以上のＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子を保有することにより、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを過剰発現する。一部の事例では、細胞は、１つ以上のＣＡＲ導入遺伝子を保有することにより、ＣＡＲポリペプチドを過剰発現する。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原の低減された発現を示すように、増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように、及びキメラ抗原受容体を外因的に発現するように改変される。いくつかの実施形態では、多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化させた任意の細胞は、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩヒト白血球抗原、ならびにＴＣＲ複合体の低減された発現を示すように、増加したＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現を示すように、及びキメラ抗原受容体を外因的に発現するように改変される。
かかる多能性幹細胞は、低免疫原性幹細胞である。かかる分化細胞は、低免疫原性細胞である。
本明細書に記載の多能性幹細胞のうちのいずれも、生物及び組織の任意の細胞に分化させることができる。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩヒト白血球抗原の低減された発現及びＴＣＲ複合体の低減された発現を示す。一部の事例では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩヒト白血球抗原の発現は、同じ細胞種の未改変または野生型の細胞と比較して低減される。一部の事例では、ＴＣＲ複合体の発現は、同じ細胞種の未改変または野生型細胞と比較して低減される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１発現の増加を示す。一部の事例では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１の発現は、本技術によって包含される細胞において、同じ細胞種の未改変または野生型の細胞と比較して増加する。いくつかの実施形態では、細胞は、外因性ＣＡＲ発現を示す。ＭＨＣクラスＩ及び／またはＩＩヒト白血球抗原及びＴＣＲ複合体のレベルを低減すると共に、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１、ならびにＣＡＲの発現を増加させるための方法が、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法において使用される細胞は、患者（例えば、レシピエント対象）に投与されたときに免疫認識及び反応を回避する。細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで免疫細胞による殺傷を回避し得る。いくつかの実施形態では、細胞は、マクロファージ及びＮＫ細胞による殺傷を回避する。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞または対象の免疫系によって無視される。換言すれば、本明細書に記載の方法に従って投与される細胞は、免疫系の免疫細胞によって検出可能でない。いくつかの実施形態では、細胞は、覆い隠され、したがって免疫拒絶反応を回避する。
多能性幹細胞及びかかる多能性幹細胞から分化した任意の細胞が免疫認識を回避するかどうかを決定する方法には、ＩＦＮ－γ Ｅｌｉｓｐｏｔアッセイ、ミクログリア殺傷アッセイ、細胞移植動物モデル、サイトカイン放出アッセイ、ＥＬＩＳＡ、生物発光イメージング使用した殺傷アッセイまたはクロム放出アッセイまたは細胞分析のためのリアルタイム定量マイクロ電子バイオセンサーシステム（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（登録商標）ＲＴＣＡシステム、Ａｇｉｌｅｎｔ）、混合リンパ球反応、免疫蛍光分析などが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に概説される治療用細胞は、限定されないが、がん、遺伝子障害、慢性感染性疾患、自己免疫障害、神経学的障害などといった障害を治療するのに有用である。
１．心臓細胞
本明細書では、対象（例えば、レシピエント）へのその後の移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）用に人工多能性（ＨＩＰ）細胞から分化させた心臓細胞種が提供される。当業者には理解されようが、分化のための方法は、既知の技法を使用して所望の細胞種に依存する。例となる心臓細胞種には、心筋細胞、結節心筋細胞、伝導心筋細胞（ｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ）、稼働心筋細胞（ｗｏｒｋｉｎｇ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ）、心筋細胞の前駆体細胞、心筋細胞の前駆細胞、心臓幹細胞、心筋細胞、心房心臓幹細胞、心室心臓幹細胞、心外膜細胞、造血細胞、血管内皮細胞、心内膜内皮細胞、心臓弁間質細胞、心臓ペースメーカー細胞などが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の心臓細胞は、小児期心筋症、加齢性心筋症、拡張型心筋症、肥大型心筋症、拘束型心筋症、慢性虚血性心筋症、周産期心筋症、炎症性心筋症、特発性心筋症、他の心筋症、心筋虚血再灌流傷害、心室機能不全、心不全、うっ血性心不全、冠動脈疾患、末期心疾患、アテローム性動脈硬化症、虚血、高血圧症、再狭窄、狭心症、リウマチ性心臓、動脈炎症、心血管疾患、心筋梗塞、心筋虚血、うっ血性心不全、心筋梗塞、心虚血、心外傷、心筋虚血、血管疾患、後天性心疾患、先天性心疾患、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、機能不全の伝導系、機能不全の冠動脈、肺高血圧症、心不整脈、筋ジストロフィー、筋肉量異常、筋肉変性、心筋炎、感染性心筋炎、薬物または毒素誘発性筋肉異常、過敏性心筋炎、及び自己免疫心内膜炎からなる群から選択される心障害を治療するために、レシピエント対象に投与される。
したがって、本明細書では、心外傷または心疾患もしくは障害の治療及び予防を必要とする対象における、心外傷または心疾患もしくは障害の治療及び予防のための方法が提供される。本明細書に記載の方法を使用して、いくつかの心疾患またはそれらの症状、例えば、心臓の構造及び／または機能への病理学的損傷をもたらすものを治療するか、改善させるか、予防するか、またはその進行を緩徐化することができる。「心臓疾患」、「心臓障害」、及び「心臓外傷」という用語は、本明細書で互換的に使用され、弁、内皮、梗塞領域、または心臓の他の構成要素もしくは構造を含めた心臓に関係する病態及び／または障害を指す。かかる心臓疾患または心臓関連疾患には、とりわけ、心筋梗塞、心不全、心筋症、先天性心臓欠陥、心臓弁疾患または機能不全、心内膜炎、リウマチ熱、僧帽弁逸脱症、感染性心内膜炎、肥大型心筋症、拡張型心筋症、心筋炎、心肥大、及び／または僧帽弁閉鎖不全症が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、心筋細胞前駆体には、成熟（最終段階）心筋細胞を含む子孫を生じさせることができる細胞が含まれる。心筋細胞の前駆体細胞は、多くの場合、ＧＡＴＡ－４、Ｎｋｘ２．５、及びＭＥＦ－２ファミリーの転写因子から選択される１つ以上のマーカーを使用して特定することができる。一部の事例では、心筋細胞は、以下のリストからの１つ以上のマーカー（ときには少なくとも２、３、４、または５つのマーカー）を発現する未成熟心筋細胞または成熟心筋細胞を指す：心臓トロポニンＩ（ｃＴｎｌ）、心臓トロポニンＴ（ｃＴｎＴ）、サルコメリックミオシン重鎖（ＭＨＣ）、ＧＡＴＡ－４、Ｎｋｘ２．５、Ｎ－カドヘリン、β２－アドレナリン受容体、ＡＮＦ、ＭＥＦ－２ファミリーの転写因子、クレアチンキナーゼＭＢ（ＣＫ－ＭＢ）、ミオグロビン、及び心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ）。いくつかの実施形態では、心臓細胞は、自発的な周期的収縮活動を示す。場合によっては、その心臓細胞が、適切なＣａ２＋濃度及び電解質の均衡を有する好適な組織培養環境で培養される場合、細胞は、培養培地にいずれの追加の構成成分も添加する必要なしに、細胞の一軸方向に周期的様態で収縮し、次いで収縮を解除することが観察され得る。いくつかの実施形態では、心臓細胞は、低免疫原性心臓細胞である。
いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの分化によって低免疫原性人工多能性幹細胞の集団から低免疫原性心臓細胞の集団を生産する方法は、（ａ）ＧＳＫ阻害剤を含む培養培地中で低免疫原性人工多能性幹細胞の集団を培養することと、（ｂ）ＷＮＴアンタゴニストを含む培養培地中で低免疫原性人工多能性幹細胞の集団を培養して、心臓前駆細胞（ｐｒｅ－ｃａｒｄｉａｃ ｃｅｌｌ）の集団を生産することと、（ｃ）インスリンを含む培養培地中で心臓前駆細胞の集団を培養して、低免疫心臓細胞の集団を生産することとを含む。いくつかの実施形態では、ＧＳＫ阻害剤は、ＣＨＩＲ－９９０２１、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＧＳＫ阻害剤は、約２ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、ＷＮＴアンタゴニストは、ＩＷＲ１、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＷＮＴアンタゴニストは、約２ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の濃度である。
いくつかの実施形態では、低免疫原性心臓細胞の集団は、非心臓細胞から単離される。いくつかの実施形態では、低免疫原性心臓細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられる。多くの実施形態では、低免疫原性心臓細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられ、凍結保存される。
人工多能性幹細胞または多能性幹細胞を心臓細胞に分化させるための他の有用な方法は、例えば、ＵＳ２０１７／０１５２４８５、ＵＳ２０１７／００５８２６３、ＵＳ２０１７／０００２３２５、ＵＳ２０１６／０３６２６６１、ＵＳ２０１６／００６８８１４、ＵＳ９，０６２，２８９、ＵＳ７，８９７，３８９、及びＵＳ７，４５２，７１８に記載される。人工多能性幹細胞または多能性幹細胞から心臓細胞を生産するための追加の方法は、例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００６，１５（５）：６３１－９、Ｂｕｒｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２０１２，１０：１６－２８、及びＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２０１５，ｌ５（２）：３６５－３７５に記載される。
様々な実施形態では、低免疫原性心臓細胞は、ＢＭＰ経路阻害剤、ＷＮＴシグナル伝達活性化剤、ＷＮＴシグナル伝達阻害剤、ＷＮＴアゴニスト、ＷＮＴアンタゴニスト、Ｓｒｃ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＣＫ活性化剤、サイトカイン、成長因子、心臓作用性剤（ｃａｒｄｉｏｔｒｏｐｉｃ ａｇｅｎｔ）、化合物などを含む培養培地中で培養され得る。
ＷＮＴシグナル伝達活性化剤には、ＣＨＩＲ９９０２１が含まれるが、これらに限定されない。ＰＣＫ活性化剤には、ＰＭＡが含まれるが、これらに限定されない。ＷＮＴシグナル伝達阻害剤には、ＫＹ０２１１１、ＳＯ３０３１（ＫＹ０１－Ｉ）、ＳＯ２０３１（ＫＹ０２－Ｉ）、及びＳＯ３０４２（ＫＹ０３－Ｉ）、及びＸＡＶ９３９から選択される化合物が含まれるが、これらに限定されない。Ｓｒｃ阻害剤には、Ａ４１９２５９が含まれるが、これらに限定されない。ＥＧＦＲ阻害剤には、ＡＧ１４７８が含まれるが、これらに限定されない。
ｉＰＳＣから心臓細胞を生成するための薬剤の非限定的な例としては、アクチビンＡ、ＢＭＰ４、Ｗｎｔ３ａ、ＶＥＧＦ、可溶性フリズルドタンパク質、シクロスポリンＡ、アンジオテンシンＩＩ、フェニルエフリン、アスコルビン酸、ジメチルスルホキシド、５－アザ－２’－デオキシシチジンなどが挙げられる。
本明細書で提供される細胞は、低免疫原性多能性細胞の心臓細胞への分化を補助及び／または促進するための合成表面などの表面上で培養することができる。いくつかの実施形態では、表面は、選択される１つ以上のアクリレートモノマーのホモポリマーまたはコポリマーを含むがこれらに限定されない、ポリマー材料を含む。アクリレートモノマー及びメタクリレートモノマーの非限定的な例としては、テトラ（エチレングリコール）ジアクリレート、グリセロールジメタクリレート、１，４－ブタンジオールジメタクリレート、ポリ（エチレングリコール）ジアクリレート、ジ（エチレングリコール）ジメタクリレート、テトラ（エチレン（ｅｔｈｙｉｅｎｅ）グリコール）ジメタクリレート、１，６－ヘキサンジオールプロポキシレートジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、トリメチロールプロパンベンゾエートジアクリレート、トリメチロールプロパンエトキシレート（ｅｉｈｏｘｙｌａｔｅ）（１ＥＯ／ＱＨ）メチル、トリシクロ［５．２．１．０２，６］デカンジメタノールジアクリレート、ネオペンチルグリコールエトキシレートジアクリレート、及びトリメチロールプロパントリアクリレートが挙げられる。アクリレートは、当技術分野で既知のように合成されるか、またはＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．、及びＳａｒｔｏｍｅｒ，Ｉｎｃ．などの商業的供給業者から得られる。
ポリマー材料は、支持材料の表面上に分散させることができる。細胞を培養するのに好適である有用な支持材料には、セラミック物質、ガラス、プラスチック、ポリマーもしくはコポリマー、これらの任意の組み合わせ、または１つの材料の別の材料上へのコーティングが含まれる。一部の事例では、ガラスには、ソーダ石灰ガラス、パイレックスガラス、バイコールガラス、石英ガラス、ケイ素、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。
一部の事例では、プラスチック、または樹枝状ポリマーを含めたポリマーには、ポリ（塩化ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（酢酸ビニル－無水マレイン酸）、ポリ（ジメチルシロキサン）モノメタクリレート、環状オレフィンポリマー、フルオロカーボンポリマー、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンイミン、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。一部の事例では、コポリマーには、ポリ（酢酸ビニル－ｃｏ－無水マレイン酸）、ポリ（スチレン－ｃｏ－無水マレイン酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－アクリル酸）、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。
本明細書に記載されるように調製された心臓細胞の有効性は、治療なしでは左室壁組織の５５％が瘢痕組織となることにつながる心臓凍結損傷の動物モデルにおいて評定することができる（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．６２：６５４，１９９６、Ｓａｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．８：２０７４，１９９９、Ｓａｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｏｒａｃ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１１８：７１５，１９９９）。治療の成功は、瘢痕の面積を低減し、瘢痕の拡大を制限し、収縮期圧、拡張期圧、及び最大圧によって決定されるような心臓機能を改善し得る。心臓外傷はまた、左前下行枝の遠位部において塞栓コイルを使用してモデル化することもでき（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．７：２３９，１９９８）、治療の有効性を組織学的検査及び心臓機能によって評価することができる。
いくつかの実施形態では、投与は、対象の心臓組織内への埋め込み、静脈内注射、動脈内注射、冠動脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、心筋内注射、経心内膜注射、経心外膜注射、または輸注を含む。
いくつかの実施形態では、操作された心臓細胞を投与される患者はまた、心臓薬も投与される。併用療法において使用するのに好適である心臓薬の例示的な例としては、成長因子、成長因子をコードするポリヌクレオチド、血管新生剤、カルシウムチャネル遮断薬、血圧降下剤、有糸分裂阻害剤、変力作用剤、アテローム生成抑制剤、抗凝血薬、ベータ遮断薬、抗不整脈剤、抗炎症剤、血管拡張剤、血栓溶解剤、強心配糖体、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、原虫を阻害する薬剤、硝酸塩、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）；抗新生細胞剤、ステロイドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で提供される方法による療法の効果は、様々な方式で監視され得る。例えば、心電図（ＥＣＧ）またはホルターモニター（ｈｏｌｉｅｒ ｍｏｎｉｔｏｒ）を利用して、治療の有効性を決定することができる。ＥＣＧは、心臓のリズム及び電気インパルスの尺度であり、療法が対象の心臓における電気伝導を改善もしくは維持、予防、またはその性能低下を緩徐化したかどうかを決定するために非常に有効で非侵襲的な方法である。心臓異常、不整脈障害などを監視するために長時間にわたって装着され得る携帯型ＥＣＧであるホルターモニターの使用もまた、療法の有効性を評定するための信頼のおける方法である。ＥＣＧまたは核研究を使用して、心室機能の改善を決定することができる。
２．神経細胞
本明細書では、レシピエント対象へのその後の移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）に有用である、人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞から分化させた異なる神経細胞種が提供される。当業者には理解されようが、分化のための方法は、既知の技法を使用して所望の細胞種に依存する。例となる神経細胞種には、脳内皮細胞、ニューロン（例えば、ドーパミン作動性ニューロン）、グリア細胞などが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、人工多能性幹細胞の分化は、目的とする特定の所望の系列及び／または細胞種にそれらの分化を標的指向化するように、特定の細胞系列（複数可）を生み出すことが知られている特定の因子に細胞を曝露または接触させることによって実施される。いくつかの実施形態では、最終分化した細胞は、特化した表現型の特性または特徴を示す。多くの実施形態では、本明細書に記載の幹細胞は、神経外胚葉性、ニューロン、神経内分泌、ドーパミン作動性、コリン作動性、セロトニン作動性（５－ＨＴ）、グルタミン酸作動性、ＧＡＢＡ作動性、アドレナリン作動性、ノルアドレナリン作動性、交感神経ニューロン、副交感神経ニューロン、交感神経末梢ニューロン、またはグリア細胞集団に分化させられる。一部の事例では、グリア細胞集団には、ミクログリア（例えば、アメボイド型、ラミファイド型、活性化した食作用性、及び活性化した非食作用性）細胞集団、もしくはマクログリア（中枢神経系細胞：星状細胞、乏突起膠細胞、上衣細胞、及び放射状グリア；ならびに末梢神経系細胞：シュワン細胞及び衛星細胞）細胞集団、または前述の細胞のうちのいずれかの前駆体及び前駆細胞が含まれる。
異なる種類の神経細胞を生成するためのプロトコルは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１０１４４６９６号、米国特許第９，０５７，０５３号、同第９，３７６，６６４号、及び同第１０，２３３，４２２号に記載される。低免疫原性多能性細胞を分化させるための方法の追加の説明は、例えば、Ｄｅｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１９，３７，２５２－２５８及びＨａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１９，１１６（２１），１０４４１－１０４４６に見出すことができる。神経学的障害または神経学的病態の動物モデルにおける神経細胞移植の効果を決定するための方法は、以下の参考文献に記載される：脊髄損傷については、Ｃｕｒｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２０１８，２２，９４１－９５０、パーキンソン病については、Ｋｉｋｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１７，５４８：５９２－５９６、ＡＬＳについては、Ｉｚｒａｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１８，９（１）：１５２及びＩｚｒａｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＩｎｔｅｃｈＯｐｅｎ，ＤＯＩ：１０．５７７２／ｉｎｔｅｃｈｏｐｅｎ．７２８６２、癲癇については、Ｕｐａｄｈｙａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１９，１１６（１）：２８７－２９６。
３．脳内皮細胞
いくつかの実施形態では、神経細胞は、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、他の神経変性疾患または病態、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群（ＴＳ）、統合失調症、精神病、うつ病、他の神経精神性障害を治療するために対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の神経細胞は、脳卒中を治療または改善するために対象に投与される。いくつかの実施形態では、ニューロン及びグリア細胞が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、脳内皮細胞が、脳出血の症状または影響を緩和するために投与される。いくつかの実施形態では、ドーパミン作動性ニューロンが、パーキンソン病を有する患者に投与される。いくつかの実施形態では、ノルアドレナリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性介在ニューロンが、癲癇発作を経験した患者に投与される。いくつかの実施形態では、運動ニューロン、介在ニューロン、シュワン細胞、乏突起膠細胞、及びミクログリアが、脊髄損傷を経験した患者に投与される。
いくつかの実施形態では、脳内皮細胞（ＥＣ）、その前駆体、及び前駆細胞は、脳ＥＣまたは神経細胞の生成を促進する１つ以上の因子を含む培地中で細胞を培養することによって、表面上で多能性幹細胞（例えば、人工多能性幹細胞）から分化させられる。一部の事例では、培地は、以下のうちの１つ以上を含む：ＣＨＩＲ－９９０２１、ＶＥＧＦ、塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ）、及びＹ－２７６３２。いくつかの実施形態では、培地は、神経細胞の生存及び機能性を促進するように設計されたサプリメントを含む。
いくつかの実施形態では、脳内皮細胞（ＥＣ）、その前駆体、及び前駆細胞は、非馴化または馴化培地中で細胞を培養することによって、表面上で多能性幹細胞から分化させられる。一部の事例では、培地は、分化を促進または容易にする因子または低分子を含む。いくつかの実施形態では、培地は、ＶＥＧＲ、ＦＧＦ、ＳＤＦ－１、ＣＨＩＲ－９９０２１、Ｙ－２７６３２、ＳＢ４３１５４２、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の因子または低分子を含む。いくつかの実施形態では、分化用の表面は、１つ以上の細胞外マトリックスタンパク質を含む。表面を１つ以上の細胞外マトリックスタンパク質でコーティングすることができる。細胞は、懸濁液中で分化させ、次いで細胞生存を容易にするためにマトリゲル、ゼラチン、またはフィブリン／トロンビン形態などのゲルマトリックス形態に入れることができる。場合によっては、分化が、一般に細胞特異的マーカーの存在を評価することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイされる。
いくつかの実施形態では、脳内皮細胞は、ＣＤ３１、ＶＥカドヘリン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される因子を発現または分泌する。多くの実施形態では、脳内皮細胞は、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１７（ｃ－ｋｉｔ）、ＣＤ１４６、ＣＸＣＲ４、ＶＥＧＦ、ＳＤＦ－１、ＰＤＧＦ、ＧＬＵＴ－１、ＰＥＣＡＭ－１、ｅＮＯＳ、クローディン－５、オクルディン、ＺＯ－１、ｐ－糖タンパク質、フォン・ヴィレブランド因子、ＶＥ－カドヘリン、低密度リポタンパク質受容体ＬＤＬＲ、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１ ＬＲＰ１、インスリン受容体ＩＮＳＲ、レプチン受容体ＬＥＰＲ、基底細胞接着分子ＢＣＡＭ、トランスフェリン受容体ＴＦＲＣ、終末糖化産物特異的受容体ＡＧＥＲ、レチノール取り込み受容体ＳＴＲＡ６、大型中性アミノ酸輸送体小サブユニット１ ＳＬＣ７Ａ５、興奮性アミノ酸輸送体３ ＳＬＣ１Ａ１、ナトリウム共役中性アミノ酸輸送体５ ＳＬＣ３８Ａ５、溶質キャリアファミリー１６メンバー１ ＳＬＣ１６Ａ１、ＡＴＰ依存性トランスロカーゼＡＢＣＢ１、ＡＴＰ－ＡＢＣＣ２結合カセット輸送体ＡＢＣＧ２、多剤耐性関連タンパク質１ ＡＢＣＣ１、小管多重特異性有機アニオン輸送体１ ＡＢＣＣ２、多剤耐性関連タンパク質４ ＡＢＣＣ４、及び多剤耐性関連タンパク質５ ＡＢＣＣ５からなる群から選択される因子のうちの１つ以上を発現または分泌する。
いくつかの実施形態では、脳ＥＣは、タイトジャンクションの高発現、高い電気抵抗、低窓性、小さな血管周囲腔、インスリン及びトランスフェリン受容体の高い分布率、ならびに多数のミトコンドリアからなる群から選択される特徴のうちの１つ以上を特徴とする。
いくつかの実施形態では、脳ＥＣは、正の選択戦略を使用して選択または精製される。一部の事例では、脳ＥＣは、限定されないがＣＤ３１などの内皮細胞マーカーに照らし合わせて選別される。換言すれば、ＣＤ３１陽性脳ＥＣが単離される。いくつかの実施形態では、脳ＥＣは、負の選択戦略を使用して選択または精製される。いくつかの実施形態では、ＴＲＡ－１－６０及びＳＳＥＡ－１を含むがこれらに限定されない多能性マーカーを発現する細胞について選択することによって、未分化または多能性幹細胞が除去される。
４．ドーパミン作動性ニューロン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞は、ニューロン幹細胞、ニューロン前駆細胞、未成熟ドーパミン作動性ニューロン、及び成熟ドーパミン作動性ニューロンを含めたドーパミン作動性ニューロンに分化させられる。
場合によっては、「ドーパミン作動性ニューロン」という用語は、ドーパミン合成のための律速酵素であるチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）を発現するニューロン細胞を含む。いくつかの実施形態では、ドーパミン作動性ニューロンは、神経伝達物質ドーパミンを分泌し、ドーパミンヒドロキシラーゼをほとんどまたはまったく発現しない。ドーパミン作動性（ＤＡ）ニューロンは、以下のマーカーのうちの１つ以上を発現することができる：ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、１－芳香族アミノ酸脱炭酸酵素、小胞モノアミン輸送体２、ドーパミン輸送体、Ｎｕｒｒ－ｌ、及びドーパミン－２受容体（Ｄ２受容体）。特定の実例では、「神経幹細胞」という用語は、神経細胞経路に沿って部分的に分化させられており、例えば、ネスチンを含めた１つ以上の神経マーカーを発現する、多能性細胞の集団を含む。神経幹細胞は、ニューロンまたはグリア細胞（例えば、星状細胞及び乏突起膠細胞）に分化させられてもよい。「神経前駆細胞」という用語は、ＦＯＸＡ２及び低レベルのｂ－チューブリンを発現するが、チロシンヒドロキシラーゼは発現しない培養細胞を含む。かかる神経前駆細胞は、本明細書に記載の因子などの適切な因子の培養時に、様々なニューロンサブタイプ、特に様々なドーパミン作動性ニューロンサブタイプに分化する能力を有する。
いくつかの実施形態では、低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞に由来するＤＡニューロンは、神経変性疾患または病態を治療するために患者、例えば、ヒト患者に投与される。場合によっては、神経変性疾患または病態は、パーキンソン病、ハンチントン病、及び多発性硬化症からなる群から選択される。他の実施形態では、ＤＡニューロンは、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群（ＴＳ）、統合失調症、精神病、及びうつ病などの神経精神性障害の１つ以上の症状を治療または改善するために使用される。なおも他の実施形態では、ＤＡニューロンは、障害のあるＤＡニューロンを有する患者を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、ＤＡニューロン、その前駆体、及び前駆細胞は、１つ以上の因子または添加剤を含む培地中で幹細胞を培養することによって多能性幹細胞から分化させられる。ＤＡニューロンの分化、成長、増殖、維持、及び／または成熟を促進する有用な因子及び添加剤には、Ｗｎｔｌ、ＦＧＦ２、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８ａ、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ－ａ）、ＴＧＦ－ｂ、インターロイキン１ベータ、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ＧＳＫ－３阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ－９９０２１）、ＴＧＦ－ｂ阻害剤（例えば、ＳＢ－４３１５４２）、Ｂ－２７サプリメント、ドルソモルフィン、プルモルファミン、ノギン、レチノイン酸、ｃＡＭＰ、アスコルビン酸、ニュールツリン、ノックアウト血清置換、Ｎ－アセチルシステイン、ｃ－ｋｉｔリガンド、それらの改変形態、それらの模倣体、それらの類似体、及びそれらの変異体が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＤＡニューロンは、ＷＮＴ経路、ＮＯＴＣＨ経路、ＳＨＨ経路、ＢＭＰ経路、ＦＧＦ経路などを活性化または阻害する１つ以上の因子の存在下で分化させられる。分化プロトコル及びその詳細な説明は、例えば、ＵＳ９，９６８，６３７、ＵＳ７，６７４，６２０、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４１８，５０－５６、Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００２，９９（４），２３４４－２３４９、Ｇｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１６，５（９）：１１３３－４４、ならびにＣｈｏ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，２００８，１０５：３３９２－３３９７で提供され、実施例、方法、図、及び結果の詳細な説明を含めたそれらの全体的な開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、低免疫原性ドーパミン作動性ニューロンの集団は、非ニューロン細胞から単離される。いくつかの実施形態では、低免疫原性ドーパミン作動性ニューロンの単離された集団は、投与前に増殖させられる。多くの実施形態では、低免疫原性ドーパミン作動性ニューロンの単離された集団は、投与前に増殖させられ、凍結保存される。
ＤＡの分化を特性評価及び監視すると共に、ＤＡの表現型を評定するために、任意の数の分子マーカー及び遺伝子マーカーの発現を評価することができる。例えば、遺伝子マーカーの存在は、当業者に既知の種々の方法によって決定することができる。分子マーカーの発現は、限定されないが、ｑＰＣＲベースのアッセイ、イムノアッセイ、免疫細胞化学アッセイ、免疫ブロットアッセイなどといった定量法によって決定することができる。ＤＡニューロンに対する例となるマーカーには、ＴＨ、ｂ－チューブリン、ペアードボックスタンパク質（Ｐａｘ６）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（Ｉｓｌ１）、ネスチン、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、Ｇタンパク質活性化内向き整流カリウムチャネル２（ＧＩＲＫ２）、微小管関連タンパク質２（ＭＡＰ－２）、ＮＵＲＲ１、ドーパミン輸送体（ＤＡＴ）、フォークヘッドボックスタンパク質Ａ２（ＦＯＸＡ２）、ＦＯＸ３、ダブルコルチン、及びＬＩＭホメオボックス転写因子ｌ－ベータ（ＬＭＸ１Ｂ）などが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＤＡニューロンは、コリン、ＦＯＸＡ２、ＴｕＪ１、ＮＵＲＲ１、及びこれらの任意の組み合わせから選択されるマーカーのうちの１つ以上を発現する。
いくつかの実施形態では、ＤＡニューロンは、細胞の電気生理学的活性に従って評定される。細胞の電気生理学は、当業者に既知のアッセイを使用することによって評価することができる。例えば、全細胞及び穿孔パッチクランプ法、細胞の電気生理学的活性を検出するためのアッセイ、細胞の活動電位の規模及び持続期間を測定するためのアッセイ、ならびにＤＡ細胞のドーパミン産生を検出するための機能アッセイ。
いくつかの実施形態では、ＤＡニューロンの分化は、自発性律動的活動電位、及び脱分極電流の注入時のスパイク周波数適応を伴う高周波活動電位を特徴とする。他の実施形態では、ＤＡの分化は、ドーパミンの産生を特徴とする。産生されるドーパミンのレベルは、それが最大振幅の半分に達した時点での活動電位の幅（スパイク半値幅）を測定することによって算出される。
いくつかの実施形態では、分化したＤＡニューロンは、患者において静脈内にまたは特定の箇所での注射によってのいずれかで移植される。いくつかの実施形態では、分化したＤＡ細胞は、パーキンソン病をもたらした変性を有するＤＡニューロンを置換するために、脳の黒質（特に緻密部内にまたはそれに隣接して）、腹側被蓋野（ＶＴＡ）、尾状核、被殻、側坐核、視床下核、またはこれらの任意の組み合わせに移植される。分化したＤＡ細胞は、細胞懸濁液として標的領域に注射することができる。代替として、分化したＤＡ細胞は、支持マトリックスまたは足場に（かかる送達デバイス内に収容された場合）埋め込むことができる。いくつかの実施形態では、足場は、生分解性である。他の実施形態では、足場は、生分解性ではない。足場は、天然または合成（人工）材料を含み得る。
ＤＡニューロンの送達は、限定されないがリポソーム、微粒子、またはマイクロカプセルなどの好適なビヒクルを使用することによって達成することができる。他の実施形態では、分化したＤＡニューロンは、等張性賦形剤を含む医薬組成物中で投与される。医薬組成物は、ヒト投与のために十分に滅菌された条件下で調製される。いくつかの実施形態では、ＨＩＰ細胞から分化させたＤＡニューロンは、医薬組成物の形態で供給される。細胞組成物の治療用製剤の一般原則は、Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｇ．Ｍｏｒｓｔｙｎ ＆ Ｗ．Ｓｈｅｒｉｄａｎ ｅｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６、及びＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｅ．Ｂａｌｌ，Ｊ．Ｌｉｓｔｅｒ ＆ Ｐ．Ｌａｗ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，２０００に見出され、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
幹細胞に由来するニューロンの有用な説明及びその作製方法は、例えば、Ｋｉｒｋｅｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ，２０１２，１：７０３－７１４、Ｋｒｉｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，４８０：５４７－５５１、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１８，１１（１）：１７１－１８２、Ｌｏｒｅｎｚ Ｓｔｕｄｅｒ，“Ｃｈａｐｔｅｒ ８－Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｂｒｉｎｇｉｎｇ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｄｏｐａｍｉｎｅ Ｎｅｕｒｏｎｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃ－Ｔｈｅ ＮＹＳＴＥＭ Ｔｒｉａｌ”ｉｎ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７，ｖｏｌｕｍｅ ２３０，ｐｇ．１９１－２１２、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ，２０１３，８：１６７０－１６７９、Ｕｐａｄｈｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，３８，２Ｄ．７．１－２Ｄ．７．４７、米国公開出願第２０１６０１１５４４８号、ならびにＵＳ８，２５２，５８６、ＵＳ８，２７３，５７０、ＵＳ９，４８７，７５２、及びＵＳ１０，０９３，８９７に見出すことができ、これらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
ＤＡニューロンに加えて、他のニューロン細胞、その前駆体、及び前駆細胞が、１つ以上の因子または添加剤を含む培地中で細胞を培養することによって、本明細書に概説されるＨＩＰ細胞から分化させられ得る。因子及び添加剤の非限定的な例としては、ＧＤＮＦ、ＢＤＮＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ２７、塩基性ＦＧＦ、塩基性ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＣＮＴＦ、ＳＭＡＤ阻害剤、Ｗｎｔアンタゴニスト、ＳＨＨシグナル伝達活性化剤、及びこれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＭＡＤ阻害剤は、ＳＢ４３１５４２、ＬＤＮ－１９３１８９、ノギンＰＤ１６９３１６、ＳＢ２０３５８０、ＬＹ３６４９４７、Ａ７７－０１、Ａ－８３－０１、ＢＭＰ４、ＧＷ７８８３８８、ＧＷ６６０４、ＳＢ－５０５１２４、レルデリムマブ、メテリムマブ、ＧＣ－Ｉ００８、ＡＰ－１２００９、ＡＰ－１１０Ｉ４、ＬＹ５５０４１０、ＬＹ５８０２７６、ＬＹ３６４９４７、ＬＹ２１０９７６１、ＳＢ－５０５１２４、Ｅ－６１６４５２（ＲｅｐＳｏｘ ＡＬＫ阻害剤）、ＳＤ－２０８、ＳＭＩ６、ＮＰＣ－３０３４５、Ｋ２６８９４、ＳＢ－２０３５８０、ＳＤ－０９３、アクチビン－Ｍ１０８Ａ、Ｐ１４４、可溶性ＴＢＲ２－Ｆｃ、ＤＭＨ－１、ドルソモルフィン二塩酸塩、及びこれらの誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｗｎｔアンタゴニストは、ＸＡＶ９３９、ＤＫＫ１、ＤＫＫ－２、ＤＫＫ－３、ＤＫＫ－４、ＳＦＲＰ－１、ＳＦＲＰ－２、ＳＦＲＰ－３、ＳＦＲＰ－４、ＳＦＲＰ－５、ＷＩＦ－１、Ｓｏｇｇｙ、ＩＷＰ－２、ＩＷＲ１、ＩＣＧ－００１、ＫＹ０２１１、Ｗｎｔ－０５９、ＬＧＫ９７４、ＩＷＰ－Ｌ６、及びその誘導体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＨＨシグナル伝達活性化因子は、平滑化アゴニスト（ＳＡＧ）、ＳＡＧ類似体、ＳＨＨ、Ｃ２５－ＳＨＨ、Ｃ２４－ＳＨＨ、プルモルファミン、Ｈｇ－Ａｇ、及び／またはこれらの誘導体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ニューロンは、グルタミン酸イオンチャネル型受容体ＮＭＤＡ型サブユニット１ ＧＲＩＮ１、グルタミン酸脱炭酸酵素１ ＧＡＤ１、ガンマ－アミノ酪酸ＧＡＢＡ、チロシンヒドロキシラーゼＴＨ、ＬＩＭホメオボックス転写因子１－アルファＬＭＸ１Ａ、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ１ ＦＯＸＯ１、フォークヘッドボックスタンパク質Ａ２ ＦＯＸＡ２、フォークヘッドボックスタンパク質Ｏ４ ＦＯＸＯ４、ＦＯＸＧ１、２’，３’－環状－ヌクレオチド３’－ホスホジエステラーゼＣＮＰ、ミエリン塩基性タンパク質ＭＢＰ、チューブリンベータ鎖３ ＴＵＢ３、チューブリンベータ鎖３ ＮＥＵＮ、溶質キャリアファミリー１メンバー６ ＳＬＣ１Ａ６、ＳＳＴ、ＰＶ、カルビンジン、ＲＡＸ、ＬＨＸ６、ＬＨＸ８、ＤＬＸ１、ＤＬＸ２、ＤＬＸ５、ＤＬＸ６、ＳＯＸ６、ＭＡＦＢ、ＮＰＡＳ１、ＡＳＣＬ１、ＳＩＸ６、ＯＬＩＧ２、ＮＫＸ２．１、ＮＫＸ２．２、ＮＫＸ６．２、ＶＧＬＵＴ１、ＭＡＰ２、ＣＴＩＰ２、ＳＡＴＢ２、ＴＢＲ１、ＤＬＸ２、ＡＳＣＬ１、ＣｈＡＴ、ＮＧＦＩ－Ｂ、ｃ－ｆｏｓ、ＣＲＦ、ＲＡＸ、ＰＯＭＣ、ヒポクレチン、ＮＡＤＰＨ、ＮＧＦ、Ａｃｈ、ＶＡＣｈＴ、ＰＡＸ６、ＥＭＸ２ｐ７５、ＣＯＲＩＮ、ＴＵＪ１、ＮＵＲＲ１、及び／またはこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるマーカーのうちの１つ以上を発現する。
５．グリア細胞
いくつかの実施形態では、記載される神経細胞には、限定されないが、多能性幹細胞を治療上有効なグリア細胞などに分化させることによって生産されるミクログリア、星状細胞、乏突起膠細胞、上衣細胞、及びシュワン細胞、そのグリア前駆体、及びグリア前駆細胞などのグリア細胞が含まれる。低免疫原性多能性幹細胞の分化は、低免疫原性グリア細胞などの低免疫原性神経細胞を生産する。
いくつかの実施形態では、グリア細胞、その前駆体、及び前駆細胞は、レチノイン酸、ＩＬ－３４、Ｍ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３リガンド、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＣＬ２、ＴＧＦベータ阻害剤、ＢＭＰシグナル伝達阻害剤、ＳＨＨシグナル伝達活性化因子、ＦＧＦ、血小板由来増殖因子ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ－アルファ、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ノギン、ＳＨＨ、ドルソモルフィン、ノギン、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の作用物質を含む培地中で多能性幹細胞を培養することによって生成される。特定の事例では、ＢＭＰシグナル伝達阻害剤は、ＬＤＮ１９３１８９、ＳＢ４３１５４２、またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、グリア細胞は、ＮＫＸ２．２、ＰＡＸ６、ＳＯＸ１０、脳由来神経栄養因子ＢＤＮＦ、ニューロトロフィン（ｎｅｕｔｒｏｔｒｏｐｈｉｎ）－３ ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＥＧＦ、毛様体神経栄養因子ＣＮＴＦ、神経増殖因子ＮＧＦ、ＦＧＦ８、ＥＧＦＲ、ＯＬＩＧ１、ＯＬＩＧ２、ミエリン塩基性タンパク質ＭＢＰ、ＧＡＰ－４３、ＬＮＧＦＲ、ネスチン、ＧＦＡＰ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＸ３ＣＲ１、Ｐ２ＲＹ１２、ＩＢＡ－１、ＴＭＥＭ１１９、ＣＤ４５、及びこれらの任意の組み合わせを発現する。例となる分化培地は、当業者によって認識されるような、グリア細胞種の生成を容易または可能にし得る任意の特定の因子及び／または低分子を含むことができる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ分化プロトコルに従って生成された細胞がグリア細胞の性質及び特徴を示すかどうかを決定するために、細胞を動物モデルに移植することができる。いくつかの実施形態では、グリア細胞は、免疫無防備状態のマウス、例えば、免疫無防備状態のシバラーマウスに注射される。グリア細胞は、マウスの脳に投与され、予め選択された一定時間後に、移植された細胞が評価される。一部の事例では、脳内の移植された細胞は、免疫染色及びイメージング法を使用することによって可視化される。いくつかの実施形態では、グリア細胞が既知のグリア細胞バイオマーカーを発現することが決定される。
幹細胞からグリア細胞、その前駆体、及び前駆細胞を生成するための有用な方法は、例えば、ＵＳ７，５７９，１８８、ＵＳ７，５９５，１９４、ＵＳ８，２６３，４０２、ＵＳ８，２０６，６９９、ＵＳ８，２５２，５８６、ＵＳ９，１９３，９５１、ＵＳ９，８６２，９２５、ＵＳ８，２２７，２４７、ＵＳ９，７０９，５５３、ＵＳ２０１８／０１８７１４８、ＵＳ２０１７／０１９８２５５、ＵＳ２０１７／０１８３６２７、ＵＳ２０１７／０１８２０９７、ＵＳ２０１７／２５３８５６、ＵＳ２０１８／０２３６００４、ＷＯ２０１７／１７２９７６、及びＷＯ２０１８／０９３６８１に見出される。多能性幹細胞を分化させるための方法は、例えば、Ｋｉｋｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１７，５４８，５９２－５９６、Ｋｒｉｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１１，５４７－５５１、Ｄｏｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１４，２，３３７－５０、Ｐｅｒｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００４，１０１，１２５４３－１２５４８、Ｃｈａｍｂｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００９，２７，２７５－２８０、及びＫｉｒｋｅｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１２，１，７０３－７１４に記載される。
脊髄損傷に対する神経細胞移植の有効性は、例えば、ＭｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９９，５：１４１０及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４１８：５０によって記載されるような、急性脊髄損傷のラットモデルにおいて評定することができる。例えば、移植の成功は、２～５週間後の病変における移植由来の細胞の存在、星状細胞、乏突起膠細胞、及び／またはニューロンへの分化、病変端部から脊髄に沿った移動、ならびに歩行、協調、及び体重負荷の改善を示し得る。具体的な動物モデルは、神経細胞種及び治療される神経学的疾患または神経学的病態に基づいて選択される。
神経細胞は、それらが意図される組織部位に生着し、機能的に不全の領域を再構成または再生することを可能にする様態で投与することができる。例えば、神経細胞は、治療されている疾患に応じて、中枢神経系の実質部位または髄腔内部位に直接移植することができる。いくつかの実施形態では、脳内皮細胞、ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、上衣細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、乏突起膠細胞、及びシュワン細胞を含めた、本明細書に記載の神経細胞のうちのいずれも、静脈内、脊髄内、脳室内、髄腔内、動脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、筋肉内、腹部内、眼内、眼球後、及びこれらの組み合わせを介して患者に注射される。いくつかの実施形態では、細胞は、ボーラス注射または持続注入の形態で注射または移植（ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）される。多くの実施形態では、神経細胞は、脳内に、脳に適切（ａｐｐｏｓｉｔｅ）に、及びこれらの組み合わせへの注射によって投与される。注射は、例えば、対象の頭蓋に作製された穿頭孔を通して行うことができる。脳への神経細胞の投与に好適な部位には、脳室、側脳室、大槽、被殻、基底核、海馬皮質、線条体、脳の尾状領域、及びこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
本技術における使用に向けたドーパミン作動性ニューロンを含めた神経細胞の追加の説明は、ＷＯ２０２０／０１８６１５に見出され、この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
６．内皮細胞
本明細書では、対象（例えば、レシピエント）へのその後の移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）または移植（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）用に種々の内皮細胞種に分化させられる低免疫原性多能性細胞が提供される。当業者には理解されようが、分化のための方法は、既知の技法を使用して所望の細胞種に依存する。
いくつかの実施形態では、対象となる低免疫原性多能性細胞から分化させられた内皮細胞は、患者、例えば、投与の必要があるヒト患者に投与される。内皮細胞は、限定されないが、心血管疾患、血管疾患、末梢血管疾患、虚血性疾患、心筋梗塞、うっ血性心不全、末梢血管閉塞性疾患、脳卒中、再灌流損傷、肢虚血、ニューロパチー（例えば、末梢ニューロパチーまたは糖尿病性ニューロパチー）、臓器不全（例えば、肝臓不全、腎臓不全など）、糖尿病、関節リウマチ、骨粗鬆症、血管損傷、組織損傷、高血圧症、冠動脈疾患に起因する狭心症及び心筋梗塞、腎血管性高血圧症、腎動脈狭窄に起因する腎不全、下肢の跛行などのような疾患または病態を患う患者に投与することができる。多くの実施形態では、患者は、一過性の虚血性発作または脳卒中を患ったことがあるか、またはそれを患っており、これは場合によっては、脳血管疾患に起因し得る。いくつかの実施形態では、操作された内皮細胞は、例えば、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、及び肢虚血において起こるような組織虚血を治療するため、ならびに損傷した血管を修復するために投与される。一部の事例では、前記細胞は、移植片の生体工学で使用される。
例えば、内皮細胞は、虚血組織の修復、血管及び心臓弁の形成、人工血管の工学、損傷を受けた血管の修復、ならびに操作された組織における血管の形成の誘導（例えば、移植前）のために細胞療法で使用され得る。追加として、内皮細胞は、作用物質を標的に送達し、腫瘍を治療するように更に改変され得る。
多くの実施形態では、血管細胞または血管新生を必要とする組織の修復または置換方法が本明細書で提供される。前記方法は、かかる治療を必要とするヒト患者に、かかる組織における血管新生を促進するために単離された内皮細胞を含有する組成物を投与することを伴う。血管細胞または血管新生を必要とする組織は、とりわけ、心臓組織、肝臓組織、膵臓組織、腎組織、筋組織、神経組織、骨組織であり得、これは損傷を受けた、過剰な細胞死を特徴とする組織、損傷の危険性がある組織、または人工的に操作された組織であり得る。
いくつかの実施形態では、心疾患または障害に関連し得る血管疾患は、限定されないが、本明細書に記載されるように派生させた最終的な血管内皮細胞及び心内膜内皮細胞などの内皮細胞を投与することによって治療することができる。かかる血管疾患には、冠動脈疾患、脳血管疾患、大動脈狭窄、大動脈瘤、末梢動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、静脈瘤、血管障害、冠灌流を欠いた心臓の梗塞領域、非治癒性創傷、糖尿病性もしくは非糖尿病性潰瘍、または血管の形成の誘導が望ましい任意の他の疾患もしくは障害が含まれるが、これらに限定されない。
多くの実施形態では、内皮細胞は、血管再建手術で使用される補綴インプラント（例えば、Ｄａｃｒｏｎ及びＧｏｒｔｅｘなどの合成材料で作製された血管）を改善するために使用される。例えば、重要な臓器または肢を灌流する病変動脈を置換するために、補綴動脈移植片が使用される場合が多い。他の実施形態では、操作された内皮細胞は、弁表面での血栓形成性を下げることによって塞栓形成の危険性を低下させるように補綴心臓弁の表面を覆うために使用される。
概説される内皮細胞は、組織及び／または単離された細胞を血管に移植するための周知の外科的技法を使用して、患者に移植することができる。いくつかの実施形態では、前記細胞は、注射（例えば、心筋内注射、冠動脈内注射、経心内膜注射、経心外膜注射、経皮注射）、注入、移植、及び埋め込みによって患者の心臓組織に導入される。
内皮細胞の投与（送達）には、静脈内、動脈内（例えば、冠動脈内）、筋肉内、腹腔内、心筋内、経心内膜、経心外膜、鼻腔内投与ならびに髄腔内、及び注入技法を含む、皮下または非経口が含まれるが、これらに限定されない。
当業者には理解されようが、ＨＩＰ派生物は、細胞種及びこれらの細胞の最終的用途の両方に依存する当技術分野で既知の技法を使用して移植される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される対象ＨＩＰから分化した細胞は、静脈内または注射によって患者の特定の箇所に移植される。特定の箇所に移植する場合、細胞は、それらが定着する間の分散を防止するためにゲルマトリックス中に懸濁させてもよい。
例となる内皮細胞種には、毛細血管内皮細胞、血管内皮細胞、大動脈内皮細胞、動脈内皮細胞、静脈内皮細胞、腎内皮細胞、脳内皮細胞、肝臓内皮細胞などが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に概説される内皮細胞は、１つ以上の内皮細胞マーカーを発現し得る。かかるマーカーの非限定的な例としては、ＶＥ－カドヘリン（ＣＤ１４４）、ＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）（ＣＤ１４３）、ＢＮＨ９／ＢＮＦ１３、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ－ｌ）、ＣＤ６２Ｅ（Ｅ－セレクチン）、ＣＤ１０５（エンドグリン）、ＣＤ１４６、エンドカン（ＥＳＭ－ｌ）、エンドグリクス－ｌ、エンドムチン、エオタキシン－３、ＥＰＡＳ１（内皮ＰＡＳドメインタンパク質１）、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、ＦＬＩ－ｌ、Ｆｌｋ－ｌ（ＫＤＲ、ＶＥＧＦＲ－２）、ＦＬＴ－ｌ（ＶＥＧＦＲ－ｌ）、ＧＡＴＡ２、ＧＢＰ－ｌ（グアニル酸結合タンパク質－ｌ）、ＧＲＯ－アルファ、ＨＥＸ、ＩＣＡＭ－２（細胞間接着分子２）、ＬＭ０２、ＬＹＶＥ－ｌ、ＭＲＢ（マジックラウンドアバウト（ｍａｇｉｃ ｒｏｕｎｄａｂｏｕｔ））、ヌクレオリン、ＰＡＬ－Ｅ（病理解剖学的ライデン内皮（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｃｈｅ ａｎａｔｏｍｉｅ Ｌｅｉｄｅｎ－ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）、ＲＴＫ、ｓＶＣＡＭ－ｌ、ＴＡＬＩ、ＴＥＭ１（腫瘍内皮マーカー１）、ＴＥＭ５（腫瘍内皮マーカー５）、ＴＥＭ７（腫瘍内皮マーカー７）、トロンボモジュリン（ＴＭ、ＣＤ１４１）、ＶＣＡＭ－ｌ（血管細胞接着分子－１）（ＣＤ１０６）、ＶＥＧＦ、ｖＷＦ（フォン・ヴィレブランド因子）、ＺＯ－ｌ、内皮細胞選択的接着分子（ＥＳＡＭ）、ＣＤ１０２、ＣＤ９３、ＣＤ１８４、ＣＤ３０４、及びＤＬＬ４が挙げられる。
いくつかの実施形態では、内皮細胞は、障害／病態を治療するかまたは障害／病態の症状を改善させるのに有用である、限定されないが酵素、ホルモン、受容体、リガンド、または薬物などの目的のタンパク質をコードする外因性遺伝子を発現するように遺伝子改変される。内皮細胞を遺伝子改変するための標準的方法は、例えば、ＵＳ５，６７４，７２２に記載される。
かかる内皮細胞を使用して、疾患の予防または治療において有用であるポリペプチドまたはタンパク質の構成的合成及び送達を提供することができる。このようにして、ポリペプチドは、個体の血流または身体の他の領域（例えば、中枢神経系）中に直接分泌される。いくつかの実施形態では、内皮細胞は、インスリン、血液凝固因子（例えば、第ＶＩＩＩ因子またはフォン・ヴィレブランド因子）、アルファ－１抗トリプシン、アデノシンデアミナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３）などを分泌するように改変され得る。
多くの実施形態では、内皮細胞は、埋め込まれた移植片の関連においてそれらの性能を改善するように改変され得る。非限定的で例示的な例としては、管腔内血塊形成を予防するための血栓溶解物質の分泌もしくは発現、平滑筋肥大に起因する管腔狭窄を予防するための平滑筋増殖の阻害物質の分泌、ならびに内皮細胞増殖を刺激し、移植片管腔の内皮細胞による裏打ちの範囲もしくは持続期間を改善するための内皮細胞分裂促進因子もしくは自己分泌因子の発現及び／または分泌が挙げられる。
いくつかの実施形態では、操作された内皮細胞は、治療的レベルの分泌産物を特定の臓器または肢に送達するのに利用される。例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで操作された（形質導入された）内皮細胞で裏打ちされた血管インプラントが、特定の臓器または肢に移植され得る。形質導入された内皮細胞の分泌産物は、灌流組織に高濃度で送達され、それによって標的とする解剖学的位置への所望の効果を達成するであろう。
他の実施形態では、内皮細胞は、血管新生化している腫瘍において、内皮細胞によって発現されるときに血管新生を妨害または阻害する遺伝子を含有するように遺伝子改変される。場合によっては、内皮細胞はまた、腫瘍治療の完了時に移植された内皮細胞の負の選択を可能にする、本明細書に記載の選択可能自殺遺伝子のうちのいずれか１つを発現するように遺伝子改変され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の内皮細胞は、血管損傷、心血管疾患、血管疾患、末梢血管疾患、虚血性疾患、心筋梗塞、うっ血性心不全、末梢血管閉塞性疾患、高血圧症、虚血性組織損傷、再灌流損傷、肢虚血、脳卒中、ニューロパチー（例えば、末梢ニューロパチーまたは糖尿病性ニューロパチー）、臓器不全（例えば、肝不全、腎不全など）、糖尿病、関節リウマチ、骨粗鬆症、脳血管疾患、高血圧症、冠動脈疾患に起因する狭心症及び心筋梗塞、腎血管高血圧症、腎動脈狭窄に起因する腎不全、下肢の跛行、他の血管病態または疾患からなる群から選択される血管障害を治療するためにレシピエント対象に投与される。
いくつかの実施形態では、低免疫原性多能性細胞は、末梢動脈疾患に対処するために新たな血管を形成させるための内皮コロニー形成細胞（ＥＣＦＣ）に分化させられる。内皮細胞への分化のための技法は、既知である。例えば、Ｐｒａｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．３０４８を参照されたい（参照によりその全体が、特にヒト多能性幹細胞からの内皮細胞の生成のための方法及び試薬に関して、また移植技法に関して本明細書に組み込まれる）。分化は、一般に内皮細胞関連もしくは特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイすることができる。
いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの分化によって低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞の集団から低免疫原性内皮細胞の集団を生産する方法は、（ａ）ＧＳＫ阻害剤を含む第１の培養培地中でＨＩＰ細胞の集団を培養することと、（ｂ）ＶＥＧＦ及びｂＦＧＦを含む第２の培養培地中でＨＩＰ細胞の集団を培養して、内皮前駆細胞（ｐｒｅ－ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）の集団を生産することと、（ｃ）ＲＯＣＫ阻害剤及びＡＬＫ阻害剤を含む第３の培養培地中で内皮前駆細胞の集団を培養して、低免疫原性内皮細胞の集団を生産することとを含む。
いくつかの実施形態では、ＧＳＫ阻害剤は、ＣＨＩＲ－９９０２１、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＧＳＫ阻害剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、Ｙ－２７６３２、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＲＯＣＫ阻害剤は、約１ｐＭ～約２０ｐＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ阻害剤は、ＳＢ－４３１５４２、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＡＬＫ阻害剤は、約０．５ｐＭ～約１０ｐＭの範囲の濃度である。
いくつかの実施形態では、第１の培養培地は、２ｐＭ～約１０ｐＭのＣＨＩＲ－９９０２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の培養培地は、５０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦ及び１０ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを含む。他の実施形態では、第２の培養培地は、Ｙ－２７６３２及びＳＢ－４３１５４２を更に含む。様々な実施形態では、第３の培養培地は、１０ｐＭのＹ－２７６３２及び１ｐＭのＳＢ－４３１５４２を含む。多くの実施形態では、第３の培養培地は、ＶＥＧＦ及びｂＦＧＦを更に含む。特定の事例では、第１の培養培地及び／または第２の培地は、インスリンを含まない。
本明細書で提供される細胞は、低免疫原性多能性細胞の心臓細胞への分化を補助及び／または促進するための合成表面などの表面上で培養することができる。いくつかの実施形態では、表面は、選択される１つ以上のアクリレートモノマーのホモポリマーまたはコポリマーを含むがこれらに限定されない、ポリマー材料を含む。アクリレートモノマー及びメタクリレートモノマーの非限定的な例としては、テトラ（エチレングリコール）ジアクリレート、グリセロールジメタクリレート、１，４－ブタンジオールジメタクリレート、ポリ（エチレングリコール）ジアクリレート、ジ（エチレングリコール）ジメタクリレート、テトラ（エチレン（ｅｔｈｙｉｅｎｅ）グリコール）ジメタクリレート、１，６－ヘキサンジオールプロポキシレートジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、トリメチロールプロパンベンゾエートジアクリレート、トリメチロールプロパンエトキシレート（ｅｉｈｏｘｙｌａｔｅ）（１ＥＯ／ＱＨ）メチル、トリシクロ［５．２．１．０２，６］デカンジメタノールジアクリレート、ネオペンチルグリコールエトキシレート（ｅｘｈｏｘｙｌａｔｅ）ジアクリレート、及びトリメチロールプロパントリアクリレートが挙げられる。アクリレートは、当技術分野で既知のように合成されるか、またはＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．、及びＳａｒｔｏｍｅｒ，Ｉｎｃ．などの商業的供給業者から得られる。
いくつかの実施形態では、内皮細胞は、ポリマーマトリックス上に播種されてもよい。場合によっては、ポリマーマトリックスは、生分解性である。好適な生分解性マトリックスは、当技術分野で周知であり、これにはコラーゲン－ＧＡＧ、コラーゲン、フィブリン、ＰＬＡ、ＰＧＡ、及びＰＬＡ／ＰＧＡコポリマーが含まれる。追加の生分解性材料には、ポリ（無水物）、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（プロピルフマレート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリアミド、ポリアミノ酸、ポリアセタール、生分解性ポリシアノアクリレート、生分解性ポリウレタン、及び多糖類が含まれる。
非生分解性ポリマーも同様に使用されてもよい。他の非生分解性であるが、それでも生体適合性であるポリマーには、ポリピロール、ポリアニブン（ｐｏｌｙａｎｉｂｎｅ）、ポリチオフェン、ポリスチレン、ポリエステル、非生分解性ポリウレタン、ポリ尿素、ポリ（エチレン酢酸ビニル）、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリカーボネート、及びポリ（エチレンオキシド）が含まれる。ポリマーマトリックスは、任意の形状で、例えば、粒子、スポンジ、管、球、ストランド、コイル状ストランド、毛細管網目構造、フィルム、繊維、メッシュ、またはシートとして、形成され得る。ポリマーマトリックスは、天然または合成の細胞外マトリックス材料及び因子を含むように改変され得る。
ポリマー材料は、支持材料の表面上に分散させることができる。細胞を培養するのに好適である有用な支持材料には、セラミック物質、ガラス、プラスチック、ポリマーもしくはコポリマー、これらの任意の組み合わせ、または１つの材料の別の材料上へのコーティングが含まれる。一部の事例では、ガラスには、ソーダ石灰ガラス、パイレックスガラス、バイコールガラス、石英ガラス、ケイ素、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。
一部の事例では、プラスチック、または樹枝状ポリマーを含めたポリマーには、ポリ（塩化ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（酢酸ビニル－無水マレイン酸）、ポリ（ジメチルシロキサン）モノメタクリレート、環状オレフィンポリマー、フルオロカーボンポリマー、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンイミン、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。一部の事例では、コポリマーには、ポリ（酢酸ビニル－ｃｏ－無水マレイン酸）、ポリ（スチレン－ｃｏ－無水マレイン酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－アクリル酸）、またはこれらの誘導体もしくは同等物が含まれる。
いくつかの実施形態では、低免疫原性内皮細胞の集団は、非内皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、低免疫原性内皮細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられる。多くの実施形態では、低免疫原性内皮細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられ、凍結保存される。
本明細書で提供される方法における使用に向けた内皮細胞の追加の説明は、ＷＯ２０２０／０１８６１５に見出され、この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
７．甲状腺細胞
いくつかの実施形態では、低免疫原性多能性細胞は、自己免疫性甲状腺炎に対処するために甲状腺ホルモンを分泌することができる甲状腺前駆細胞及び甲状腺濾胞オルガノイドに分化させられる。甲状腺細胞への分化のための技法は、当技術分野で既知である。例えば、Ｋｕｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２０１５ Ｎｏｖ ５；１７（５）：５２７－４２を参照されたい（参照によりその全体が、特にヒト多能性幹細胞からの甲状腺細胞の生成のための方法及び試薬に関して、また移植技法に関して本明細書に組み込まれる）。分化は、一般に甲状腺細胞関連もしくは特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイすることができる。
８．肝細胞
いくつかの実施形態では、低免疫原性多能性幹（ＨＩＰ）細胞は、肝細胞機能の喪失または肝硬変に対処するために肝細胞に分化させられる。ＨＩＰ細胞を肝細胞に分化させるために使用され得るいくつかの技法が存在する。例えば、Ｐｅｔｔｉｎａｔｏ ｅｔ ａｌ，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｐｒｅ３２８８８，Ｓｎｙｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１１ ６９８：３０５－３１４，Ｓｉ－Ｔａｙｅｂ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１０，５１：２９７－３０５及びＡｓｇａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｖ，２０１３，９（４）：４９３－５０４を参照されたく、同文献のすべては参照によりそれらの全体が、特に分化のための手法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる。分化は、一般にアルブミン、アルファフェトプロテイン、及びフィブリノゲンを含むが、これらに限定されない肝細胞関連及び／または特異的マーカーの存在を評価することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイすることができる。分化はまた、アンモニアの代謝、ＬＤＬ貯蔵及び取り込み、ＩＣＧ取り込み及び放出、ならびにグリコーゲン貯蔵など、機能的に測定することもできる。
９．膵島細胞
いくつかの実施形態では、膵島細胞（別称、膵臓ベータ細胞）は、本明細書に記載の低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞に由来する。一部の事例では、様々な膵島細胞種に分化させられる低免疫原性多能性細胞は、対象（例えば、レシピエント）に移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植（ｅｎｇｒａｆｔｅｄ）される。当業者には理解されようが、分化のための方法は、既知の技法を使用して所望の細胞種に依存する。例となる膵島細胞種には、膵島前駆細胞、未成熟膵島細胞、成熟膵島細胞などが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の膵臓細胞は、糖尿病を治療するために対象に投与される。
いくつかの実施形態では、膵島細胞は、本明細書に記載の低免疫原性多能性細胞に由来する。多能性幹細胞を膵島細胞に分化させるための有用な方法は、例えば、ＵＳ９，６８３，２１５、ＵＳ９，１５７，０６２、及びＵＳ８，９２７，２８０に記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法によって生産される膵島細胞は、インスリンを分泌する。いくつかの実施形態では、膵島細胞は、内在性膵島細胞の少なくとも２つの性質、例えば、限定されないが、グルコースに応答したインスリンの分泌、及びベータ細胞マーカーの発現を示す。
例となるベータ細胞マーカーまたはベータ細胞前駆細胞マーカーには、ｃ－ペプチド、Ｐｄｘ１、グルコース輸送体２（Ｇｌｕｔ２）、ＨＮＦ６、ＶＥＧＦ、グルコキナーゼ（ＧＣＫ）、プロホルモン変換酵素（ＰＣ１／３）、Ｃｄｃｐｌ、ＮｅｕｒｏＤ、Ｎｇｎ３、Ｎｋｘ２．２、Ｎｋｘ６．１、Ｎｋｘ６．２、Ｐａｘ４、Ｐａｘ６、Ｐｔｆ１ａ、Ｉｓｌ１、Ｓｏｘ９、Ｓｏｘ１７、及びＦｏｘＡ２が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、単離された膵島細胞は、グルコースの増加に応答してインスリンを産生する。様々な実施形態では、単離された膵島細胞は、グルコースの増加に応答してインスリンを分泌する。いくつかの実施形態では、この細胞は、敷石の細胞形態及び／または約１７ｐｍ～約２５ｐｍの直径などの特有の形態を有する。
いくつかの実施形態では、低免疫原性多能性細胞は、Ｉ型真性糖尿病（Ｔ１ＤＭ）に対処するための移植用にベータ様細胞または島オルガノイドに分化させられる。細胞システムは、Ｔ１ＤＭに対処するための有望な方法である。例えば、Ｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１７ Ｏｃｔ；１４（１０）：６１２－６２８を参照されたい（参照により本明細書に組み込まれる）。更に、Ｐａｇｌｉｕｃａら（Ｃｅｌｌ，２０１４，１５９（２）：４２８－３９）は、ヒトｉＰＳＣからのβ細胞の分化の成功に関して報告している（この内容は、参照によりその全体が、特にヒト多能性幹細胞からの機能的ヒトβ細胞の大規模生産について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる）。更に、Ｖｅｇａｓらは、ヒト多能性幹細胞からのヒトβ細胞の生産、続いて宿主による免疫拒絶反応を回避するための封入について示している（Ｖｅｇａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ，２０１６，２２（３）：３０６－１１（参照によりその全体が、特にヒト多能性幹細胞からの機能的ヒトβ細胞の大規模生産について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの分化によって低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞の集団から低免疫原性膵島細胞の集団を生産する方法は、（ａ）インスリン様成長因子、形質転換成長因子、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＳＨＨ、ＶＥＧＦ、形質転換成長因子－ｂスーパーファミリー、ＢＭＰ２、ＢＭＰ７、ＧＳＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＭＰ１型受容体阻害剤、ならびにレチノイン酸からなる群から選択される１つ以上の因子を含む第１の培養培地中でＨＩＰ細胞の集団を培養して、未成熟膵島細胞の集団を生産することと、（ｂ）第１の培養培地とは異なる第２の培養培地中で未成熟膵島細胞の集団を培養して、低免疫膵島細胞の集団を生産することとを含む。いくつかの実施形態では、ＧＳＫ阻害剤は、ＣＨＩＲ－９９０２１、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＧＳＫ阻害剤は、約２ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ阻害剤は、ＳＢ－４３１５４２、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＡＬＫ阻害剤は、約１ｐＭ～約１０ｐＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、第１の培養培地及び／または第２の培養培地は、動物血清を含まない。
いくつかの実施形態では、低免疫原性膵島細胞の集団は、非膵島細胞から単離される。いくつかの実施形態では、低免疫原性膵島細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられる。多くの実施形態では、低免疫原性膵島細胞の単離された集団は、投与前に増殖させられ、凍結保存される。
分化は、一般にインスリンを含むがこれらに限定されないβ細胞関連または特異的マーカーの存在を評価することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイされる。分化はまた、グルコース代謝の測定など、機能的に測定することもできる。一般に、Ｍｕｒａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔ．２０１６ Ｏｃｔ ２６；３（４）：３８５－３９４．ｅ３を参照されたい（参照によりその全体が、特に同文献で概説されるバイオマーカーに関して本明細書に組み込まれる）。ひとたびベータ細胞が生成されると、それらは、門脈／肝臓、大網、胃腸粘膜、骨髄、筋肉、または皮下嚢に移植され得る（細胞懸濁液としてまたは本明細書で考察されるゲルマトリックス内でのいずれかで）。
本技術における使用に向けたドーパミン作動性ニューロンを含めた膵島細胞の追加の説明は、ＷＯ２０２０／０１８６１５に見出され、この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
１０．網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞
本明細書では、記載した低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞に由来する網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が提供される。例えば、ヒトＲＰＥ細胞は、ヒトＨＩＰ細胞を分化させることによって生産することができる。いくつかの実施形態では、種々のＲＰＥ細胞種に分化させられる低免疫原性多能性細胞は、対象（例えば、レシピエント）に移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植（ｅｎｇｒａｆｔｅｄ）される。当業者には理解されようが、分化のための方法は、既知の技法を使用して所望の細胞種に依存する。
「ＲＰＥ」細胞という用語は、天然ＲＰＥ細胞の遺伝子発現プロファイルに類似または実質的に類似した遺伝子発現プロファイルを有する色素性網膜上皮細胞（ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ）を指す。多能性幹細胞に由来するかかるＲＰＥ細胞は、平面基板上でコンフルエントの状態まで増殖させたときに天然ＲＰＥ細胞の多角形で平面状のシートの形態をもつことが可能である。
ＲＰＥ細胞は、黄斑変性を患う患者または損傷を受けたＲＰＥ細胞を有する患者に移植することができる。いくつかの実施形態では、患者は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、初期ＡＭＤ、中期ＡＭＤ、後期ＡＭＤ、新生血管を伴わない加齢黄斑変性、ドライ型黄斑変性（ドライ型加齢黄斑変性）、ウェット型黄斑変性（ウェット型加齢黄斑変性）、若年性黄斑変性（ＪＭＤ）（例えば、スターガルト病、ベスト病、及び若年性網膜分離症）、レーバー先天性黒内障、または網膜色素変性症を有する。他の実施形態では、患者は、網膜剥離を患う。
例となるＲＰＥ細胞種には、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、ＲＰＥ前駆細胞、未成熟ＲＰＥ細胞、成熟ＲＰＥ細胞、機能的ＲＰＥ細胞などが含まれるが、これらに限定されない。
多能性幹細胞をＲＰＥ細胞に分化させるための有用な方法は、例えば、ＵＳ９，４５８，４２８及びＵＳ９，８５０，４６３に記載され、これらの開示は、明細書を含めてそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ヒト人工多能性幹細胞からＲＰＥ細胞を生産するための追加の方法は、例えば、Ｌａｍｂａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（３４）：１２７６９－１２７７４、Ｍｅｌｌｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，２０１２，３０（４）：６７３－６８６、Ｉｄｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，２００９，５（４）：３９６－４０８、Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１２，２２７（２）：４５７－４６６、Ｂｕｃｈｈｏｌｚ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓ Ｍｅｄ，２０１３，２（５）：３８４－３９３、及びｄａ Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，２０１８，３６：３２８－３３７に見出すことができる。
ヒト多能性幹細胞は、Ｋａｍａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１４：２：２０５－１８に概説される技法を使用して、ＲＰＥ細胞に分化させられた（参照によりその全体が、特に分化技法及び試薬について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる）。また、Ｍａｎｄａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２０１７，３７６：１０３８－１０４６も参照されたい（この内容は参照によりその全体が、ＲＰＥ細胞のシートの生成及び患者への移植のための技法に関して本明細書に組み込まれる）。分化は、一般にＲＰＥ関連及び／または特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイすることができる。例えば、Ｋａｍａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１４，２（２）：２０５－１８を参照されたい（この内容は参照によりその全体が、特に結果の節の第１段落に概説されるマーカーに関して本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの分化によって低免疫原性多能性細胞の集団から低免疫原性網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞の集団を生産する方法は、（ａ）アクチビンＡ、ｂＦＧＦ、ＢＭＰ４／７、ＤＫＫ１、ＩＧＦ１、ノギン、ＢＭＰ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、及びＶＥＧＦＲ阻害剤からなる群から選択される因子のうちのいずれか１つを含む第１の培養培地中で低免疫原性多能性細胞の集団を培養して、ＲＰＥ前駆細胞（ｐｒｅ－ＲＰＥ ｃｅｌｌ）の集団を生産することと、（ｂ）第１の培養培地とは異なる第２の培養培地中でＲＰＥ前駆細胞の集団を培養して、低免疫原性ＲＰＥ細胞の集団を生産することと、を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＫ阻害剤は、ＳＢ－４３１５４２、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＡＬＫ阻害剤は、約２ｍＭ～約１０ｐＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤は、Ｙ－２７６３２、その誘導体、またはその変異体である。一部の事例では、ＲＯＣＫ阻害剤は、約１ｐＭ～約１０ｐＭの範囲の濃度である。いくつかの実施形態では、第１の培養培地及び／または第２の培養培地は、動物血清を含まない。
分化は、一般にＲＰＥ関連及び／または特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で既知であるようにアッセイすることができる。例えば、Ｋａｍａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１４，２（２）：２０５－１８を参照されたい（この内容は参照によりその全体が、特に結果の節に関して本明細書に組み込まれる）。
本技術における使用に向けたＲＰＥ細胞の追加の説明は、ＷＯ２０２０／０１８６１５に見出され、この開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
治療用途では、開示される方法に従って調製された細胞は、典型的には、等張性賦形剤を含む医薬組成物の形態で供給することができ、ヒト投与のために十分に滅菌された条件下で調製される。細胞組成物の医薬製剤における一般原則については、“Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”ｂｙ Ｍｏｒｓｔｙｎ ＆ Ｓｈｅｒｉｄａｎ ｅｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６、及び“Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｅ．Ｄ．Ｂａｌｌ，Ｊ．Ｌｉｓｔｅｒ ＆ Ｐ．Ｌａｗ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，２０００を参照されたい。細胞は、分布または臨床的使用のために好適なデバイスまたは容器に包装され得る。
１１．Ｔリンパ球
本明細書で提供される、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、記載される低免疫原性人工多能性幹（ＨＩＰ）細胞に由来する。多能性幹細胞（例えば、ｉＰＳＣ）からＣＡＲ－Ｔ細胞を含めたＴ細胞を生成するための方法は、例えば、Ｉｒｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １２，４３０（２０２１）、Ｔｈｅｍｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ，１６（４）：３５７－３６６（２０１５）、Ｔｈｅｍｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１：９２８－９３３（２０１３）に記載される。
いくつかの実施形態では、低免疫原性人工多能性幹細胞由来のＴ細胞には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が含まれる。本明細書に記載のＣＡＲを含めて、任意の好適なＣＡＲが、低免疫原性人工多能性幹細胞由来のＴ細胞に含まれ得る。いくつかの実施形態では、低免疫原性人工多能性幹細胞由来Ｔ細胞には、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドが含まれ、そのポリヌクレオチドは、ゲノム遺伝子座に挿入されている。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、セーフハーバー遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢ、ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ－４遺伝子に挿入される。本明細書に記載の遺伝子編集法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）を含めて、任意の好適な方法を使用して、ＣＡＲを低免疫原性細胞のゲノム遺伝子座内に挿入することができる。
本明細書で提供されるＨＩＰ由来のＴ細胞は、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、肝臓癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、急性骨髄性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、胃癌、胃腺癌、膵臓腺癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、肺扁平上皮癌、肝細胞癌、及び膀胱癌を含むが、これらに限定されない、好適ながんの治療に有用である。
Ｓ．遺伝子改変の方法
いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼは、レアカットエンドヌクレアーゼをコードする核酸の形態で、標的ポリヌクレオチド配列を含有する細胞に導入される。核酸を細胞に導入するプロセスは、任意の好適な技法によって達成され得る。好適な技法には、リン酸カルシウムまたは脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が含まれる。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書に記載されるような改変ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書に記載されるような改変ｍＲＮＡ（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）を含む。
本技術は、当業者に利用可能な任意の様態で、本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを利用して、標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることが可能な任意のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが使用され得る。かかるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムは、多様なＣａｓタンパク質を用い得る（Ｈａｆｔ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．２００５；１（６）ｅ６０）。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを可能にするかかるＣａｓタンパク質の分子機構には、ＲＮＡ結合タンパク質、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、ならびにポリメラーゼが含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＣＲＩＳＰＲ Ｉ型システムである。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＣＲＩＳＰＲ ＩＩ型システムである。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、ＣＲＩＳＰＲ Ｖ型システムである。
本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、細胞内の任意の標的ポリヌクレオチド配列を変化させるために使用され得る。当業者であれば、任意の特定の細胞において変化させるのに望ましい標的ポリヌクレオチド配列は、ゲノム配列の発現が障害に関連するかまたはさもなければ細胞内への病原体の進入を容易にする、任意のゲノム配列に対応してもよいことを容易に理解しよう。例えば、細胞において変化させるのに望ましい標的ポリヌクレオチド配列は、疾患に関連する単一ポリヌクレオチド多型を含有するゲノム配列に対応するポリヌクレオチド配列であってもよい。かかる例では、本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して、細胞において疾患に関連するＳＮＰを、それを野生型対立遺伝子と置き換えることによって補正することができる。別の例では、細胞内への病原体の進入または増殖の原因となる標的遺伝子のポリヌクレオチド配列が、標的遺伝子の機能を破壊して、病原体が細胞に進入するかまたは細胞の内部で増殖することを阻止するための好適な欠失または挿入の標的であり得る。
いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ゲノム配列である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、ヒトゲノム配列である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、哺乳動物ゲノム配列である。いくつかの実施形態では、標的ポリヌクレオチド配列は、脊椎動物ゲノム配列である。
いくつかの実施形態では、本技術のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓタンパク質、及びＣａｓタンパク質を標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズすることができる少なくとも１～２つのリボ核酸を含む。本明細書で使用される場合、「タンパク質」及び「ポリペプチド」とは、ペプチド結合によって接合された一続きのアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸のポリマー）を指して互換的に使用され、修飾されたアミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化など）及びアミノ酸類似体を含む。例となるポリペプチドまたはタンパク質には、遺伝子産物、天然型タンパク質、ホモログ、パラログ、断片、ならびに上記のものの他の同等物、変異体、及び類似体が含まれる。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換または改変を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含む。一部の事例では、置換及び／または改変は、タンパク質分解を防止または低減し、及び／または細胞内のポリペプチドの半減期を延長し得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ペプチド結合の置き換え（例えば、尿素、チオ尿素、カルバメート、スルホニル尿素など）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、天然に存在するアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、代替のアミノ酸（例えば、Ｄ－アミノ酸、ベータ－アミノ酸、ホモシステイン、ホスホセリンなど）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、部位（例えば、ＰＥＧ化、グリコシル化、脂質化、アセチル化、エンドキャッピングなど）を含めるような改変を含み得る。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、コアＣａｓタンパク質を含む。例となるＣａｓコアタンパク質には、Ｃａｓ１、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、及びＣａｓ９が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｖ型Ｃａｓタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ２）を含む。Ｅ．Ｃｏｌｉサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｅ３、Ｃｓｅ４、及びＣａｓ５ｅが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＹｐｅｓｔサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ３）を含む。Ｙｐｅｓｔサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、及びＣｓｙ４が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＮｍｅｎｉサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ４）を含む。Ｎｍｅｎｉサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｎ１及びＣｓｎ２が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＤｖｕｌｇサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ１）を含む。Ｄｖｕｌｇサブタイプの例となるＣａｓタンパク質は、Ｃｓｄ１、Ｃｓｄ２、及びＣａｓ５ｄが含まれる。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＴｎｅａｐサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ７）を含む。Ｔｎｅａｐサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｔ１、Ｃｓｔ２、Ｃａｓ５ｔが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＨｍａｒｉサブタイプのＣａｓタンパク質を含む。Ｈｍａｒｉサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｈ１、Ｃｓｈ２、及びＣａｓ５ｈが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＡｐｅｒｎサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ５）を含む。Ａｐｅｒｎサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓａ１、Ｃｓａ２、Ｃｓａ３、Ｃｓａ４、Ｃｓａ５、及びＣａｓ５ａが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＭｔｕｂｅサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ６）を含む。Ｍｔｕｂｅサブタイプの例となるＣａｓタンパク質には、Ｃｓｍ１、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、及びＣｓｍ５が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＲＡＭＰモジュールＣａｓタンパク質を含む。例となるＲＡＭＰモジュールＣａｓタンパク質には、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ２、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、及びＣｍｒ６が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｋｌｏｍｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５７１，２１９－２２５（２０１９）、Ｓｔｒｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６５，４８－５３（２０１９）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載のＣａｓタンパク質のうちのいずれか１つまたはその機能的部分を含む。本明細書で使用される場合、「機能的部分」とは、少なくとも１つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））と複合体化して、標的ポリヌクレオチド配列を切断するその能力を保持するペプチドの一部分を指す。いくつかの実施形態では、機能的部分は、ＤＮＡ結合ドメイン、少なくとも１つのＲＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、及びエンドヌクレアーゼドメインからなる群から選択される、作動可能に連結されたＣａｓ９タンパク質の機能的ドメインの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、機能的部分は、ＤＮＡ結合ドメイン、少なくとも１つのＲＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、及びエンドヌクレアーゼドメインからなる群から選択される、作動可能に連結されたＣａｓ１２ａ（別名、Ｃｐｆ１）タンパク質の機能的ドメインの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、機能的ドメインは、複合体を形成する。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質の機能的部分は、ＲｕｖＣ様ドメインの機能的部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質の機能的部分は、ＨＮＨヌクレアーゼドメインの機能的部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質の機能的部分は、ＲｕｖＣ様ドメインの機能的部分を含む。
いくつかの実施形態では、外因性Ｃａｓタンパク質は、ポリペプチド形態で細胞に導入され得る。多くの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、細胞透過ポリペプチドまたは細胞透過ペプチドにコンジュゲートまたは融合され得る。本明細書で使用される場合、「細胞透過ポリペプチド」及び「細胞透過ペプチド」とは、細胞内への分子の取り込みを容易にするポリペプチドまたはペプチドをそれぞれ指す。細胞透過ポリペプチドは、検出可能な標識を含有し得る。
多くの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、荷電タンパク質（例えば、正電荷、負電荷、または全体的に中性の電荷を保有する）にコンジュゲートまたは融合され得る。かかる連結は、共有結合性であり得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓタンパク質が細胞を透過する能力を顕著に増加させるために、超陽性荷電したＧＦＰに融合され得る（Ｃｒｏｎｉｃａｎ ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．２０１０；５（８）：７４７－５２）。多くの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、細胞内へのその進入を容易にするためにタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）に融合され得る。例となるＰＴＤには、Ｔａｔ、オリゴアルギニン、及びペネトラチンが含まれる。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、細胞透過ペプチドに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、ＰＴＤに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、ｔａｔドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、オリゴアルギニンドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、ペネトラチンドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９タンパク質は、超陽性荷電したＧＦＰに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、細胞透過ペプチドに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、ＰＴＤに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、ｔａｔドメインに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、オリゴアルギニンドメインに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、ペネトラチンドメインに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃａｓ１２ａタンパク質は、超陽性荷電したＧＦＰに融合されたＣａｓ１２ａポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｃａｓタンパク質をコードする核酸の形態で、標的ポリヌクレオチド配列を含有する細胞に導入され得る。核酸を細胞に導入するプロセスは、任意の好適な技法によって達成され得る。好適な技法には、リン酸カルシウムまたは脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が含まれる。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書に記載されるような改変ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書に記載されるような改変ｍＲＮＡ（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１～２つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、２つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載されるような改変核酸（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）によってコードされる。
本技術の方法は、Ｃａｓタンパク質を標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズすることができる、任意のリボ核酸の使用を企図する。いくつかの実施形態では、リボ核酸のうちの少なくとも１つは、ｔｒａｃｒＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、リボ核酸のうちの少なくとも１つは、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、単一のリボ核酸は、Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、リボ核酸の少なくとも１つは、Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、１～２つのリボ核酸の両方が、Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。当業者には理解されようが、本技術のリボ核酸は、用いられる特定のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム、及び標的ポリヌクレオチドの配列に応じて様々な異なる標的モチーフにハイブリダイズするように選択され得る。１～２つのリボ核酸はまた、標的ポリヌクレオチド配列以外の核酸配列とのハイブリダイゼーションを最小限に抑えるようにも選択され得る。いくつかの実施形態では、１～２つのリボ核酸は、細胞におけるすべての他のゲノムヌクレオチド配列と比較したときに少なくとも２つのミスマッチを含有する標的モチーフにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１～２つのリボ核酸は、細胞におけるすべての他のゲノムヌクレオチド配列と比較したときに少なくとも１つのミスマッチを含有する標的モチーフにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１～２個のリボ核酸は、Ｃａｓタンパク質によって認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計される。いくつかの実施形態では、１～２つのリボ核酸の各々は、標的モチーフ間に位置する変異対立遺伝子を挟む、Ｃａｓタンパク質によって認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計される。
いくつかの実施形態では、１～２つのリボ核酸の各々が、Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くと共にそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の同じ鎖上の配列に相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の反対の鎖上の配列に相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の反対の鎖上の配列には相補的でなく、及び／またはそれにはハイブリダイズしない。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の重複する標的モチーフに相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列のオフセット標的モチーフに相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質をコードする核酸及び少なくとも１～２つのリボ核酸をコードする核酸は、ウイルス形質導入（例えば、レンチウイルス形質導入）を介して細胞に導入される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１～２つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、２つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１つのリボ核酸と複合体化される。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載されるような改変核酸（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）によってコードされる。
本明細書に記載の遺伝子のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの標的化に有用な例となるｇＲＮＡ配列が、表１５で提供される。これらの配列は、２０１６年５月９日に出願されたＷＯ２０１６１８３０４１に見出すことができ、表、付録、及び配列表を含めたこの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本技術の細胞は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）手法を使用して作製される。
「ＴＡＬＥ－ヌクレアーゼ」（ＴＡＬＥＮ）とは、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）に典型的に由来する核酸結合ドメイン及び核酸標的配列を切断するための１つのヌクレアーゼ触媒ドメインからなる融合タンパク質を意図する。触媒ドメインは、好ましくはヌクレアーゼドメイン、より好ましくは、例えば、Ｉ－ＴｅｖＩ、ＣｏｌＥ７、ＮｕｃＡ、及びＦｏｋ－Ｉのような、エンドヌクレアーゼ活性を有するドメインである。多数の実施形態では、ＴＡＬＥドメインは、例えば、Ｉ－ＣｒｅＩ及びＩ－ＯｎｕＩまたはそれらの機能的変異体のような、メガヌクレアーゼに融合され得る。より好ましい実施形態では、前記ヌクレアーゼは、モノマーＴＡＬＥ－ヌクレアーゼである。モノマーＴＡＬＥ－ヌクレアーゼは、ＷＯ２０１２１３８９２７に記載される操作されたＴＡＬリピートとＩ－ＴｅｖＩの触媒ドメインとの融合体などの、特異的認識及び切断のために二量体化を必要としないＴＡＬＥ－ヌクレアーゼである。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、細菌種Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ由来のタンパク質であり、複数のリピート配列を含み、各リピートが、１２位及び１３位において核酸標的配列の各ヌクレオチド塩基に特異的である二残基（ＲＶＤ）を含む。同様のモジュール式塩基対塩基核酸結合特性を有する結合ドメイン（ＭＢＢＢＤ）もまた、異なる細菌種において出願人によって最近発見された新たなモジュール式タンパク質に由来し得る。この新たなモジュール式タンパク質は、ＴＡＬリピートよりも大きな配列可変性を示すという利点を有する。好ましくは、異なるヌクレオチドの認識に関連するＲＶＤは、Ｃを認識するためのＨＤ、Ｔを認識するためのＮＧ、Ａを認識するためのＮＩ、ＧまたはＡを認識するためのＮＮ、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＴを認識するためのＮＳ、Ｔを認識するためのＨＧ、Ｔを認識するためのＩＧ、Ｇを認識するためのＮＫ、Ｃを認識するためのＨＡ、Ｃを認識するためのＮＤ、Ｃを認識するためのＨＩ、Ｇを認識するためのＨＮ、Ｇを認識するためのＮＡ、ＧまたはＡを認識するためのＳＮ及びＴを認識するためのＹＧ、Ａを認識するためのＴＬ、ＡまたはＧを認識するためのＶＴ、ならびにＡを認識するためのＳＷである。別の実施形態では、必要不可欠なアミノ酸１２及び１３は、ヌクレオチドＡ、Ｔ、Ｃ、及びＧに対するそれらの特異性を調節するため、ならびに特にこの特異性を強化するために、他のアミノ酸残基に向けて変異させることができる。ＴＡＬＥＮキットは、市販されている。
いくつかの実施形態では、該細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して操作される。「ジンクフィンガー結合タンパク質」とは、亜鉛イオンの配位によるタンパク質構造の安定化の結果として、好ましくは配列特異的様態で、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／またはタンパク質に結合するタンパク質またはポリペプチドである。ジンクフィンガー結合タンパク質という用語は、ジンクフィンガータンパク質またはＺＦＰと略称される場合が多い。個々のＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、「フィンガー」と称される。ＺＦＰは、少なくとも１つのフィンガー、典型的には２つのフィンガー、３つのフィンガー、または６つのフィンガーを有する。各フィンガーは、２～４塩基対のＤＮＡ、典型的には３または４塩基対のＤＮＡに結合する。ＺＦＰは、標的部位または標的セグメントと呼ばれる核酸配列に結合する。各フィンガーは、典型的には、およそ３０アミノ酸の亜鉛キレート化ＤＮＡ結合サブドメインを含む。このクラスの単一のジンクフィンガーは、単一のベータターンの２つのシステイン残基と共に亜鉛と配位結合した２つの不変のヒスチジン残基を含むアルファヘリックスからなることが、研究により実証されている（例えば、Ｂｅｒｇ ＆ Ｓｈｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７１：１０８１－１０８５（１９９６）を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本技術の細胞は、ホーミングエンドヌクレアーゼを使用して作製される。かかるホーミングエンドヌクレアーゼは、当技術分野で周知である（Ｓｔｏｄｄａｒｄ ２００５）。ホーミングエンドヌクレアーゼは、ＤＮＡ標的配列を認識し、一本鎖または二本鎖切断を生じさせる。ホーミングエンドヌクレアーゼは、高度に特異的であり、長さ１２～４５塩基対（ｂｐ）の範囲、通常は長さ１４～４０ｂｐの範囲のＤＮＡ標的部位を認識する。本技術によるホーミングエンドヌクレアーゼは、例えば、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧエンドヌクレアーゼ、ＨＮＨエンドヌクレアーゼ、またはＧＩＹ－ＹＩＧエンドヌクレアーゼに対応し得る。本技術による好ましいホーミングエンドヌクレアーゼは、Ｉ－ＣｒｅＩ変異体であり得る。
いくつかの実施形態では、本技術の細胞は、メガヌクレアーゼを使用して作製される。メガヌクレアーゼは、定義上、大きな配列を認識する配列特異的エンドヌクレアーゼである（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｂ．Ｌ．Ｓｔｏｄｄａｒｄ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００１，２９，３７５７－３７７４）。それらは、生細胞において固有の部位を切断し、それによって切断部位の近傍で遺伝子の標的化を１０００倍以上強化することができる（Ｐｕｃｈｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９３，２１，５０３４－５０４０、Ｒｏｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４，８０９６－８１０６；Ｃｈｏｕｌｉｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５，１９６８－１９７３；Ｐｕｃｈｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３，５０５５－５０６０；Ｓａｒｇｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９７，１７，２６７－７７；Ｄｏｎｏｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ，１９９８，１８，４０７０－４０７８；Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，９３－１０１；Ｃｏｈｅｎ－Ｔａｎｎｏｕｄｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，１４４４－１４４８）．
いくつかの実施形態では、本技術の細胞は、寛容原性因子などのポリペプチドの発現をノックダウンする（例えば、減少させる、排除する、または阻害する）ためのＲＮＡサイレンシングまたはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を使用して作製される。有用なＲＮＡｉ法は、合成ＲＮＡｉ分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＰＩＷＩ相互作用ＮＲＡ（ｐｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及び当業者に認識される他の一過性ノックダウン法を利用するものを含む。配列特異的ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどを含めたＲＮＡｉのための試薬は、市販されている。例えば、多能性幹細胞において、細胞にＣＩＩＴＡ ｓｉＲＮＡを導入するかまたはＣＩＩＴＡ ｓｈＲＮＡ発現ウイルスを形質導入することによって、ＣＩＩＴＡをノックダウンすることができる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ干渉を用いて、ＣＩＩＴＡ、Ｂ２Ｍ、ＮＬＲＣ５、ＴＣＲ－アルファ、及びＴＣＲ－ベータからなる群から選択される少なくとも１つの発現が低減または阻害される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される細胞は、免疫特権が備わった細胞または低免疫原性細胞を作出するために、１つ以上の免疫因子（標的ポリペプチドを含む）の発現を低減するように遺伝子改変される。多くの実施形態では、本明細書に開示される細胞（例えば、幹細胞、人工多能性幹細胞、分化細胞、造血幹細胞、初代Ｔ細胞、及びＣＡＲ－Ｔ細胞）は、１つ以上の標的ポリヌクレオチドの発現を低減するような１つ以上の遺伝子改変を含む。かかる標的ポリヌクレオチド及びポリペプチドの非限定的な例としては、ＣＩＩＴＡ、Ｂ２Ｍ、ＮＬＲＣ５、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＢＭ、ＨＬＡ－Ｃ、ＲＦＸ－ＡＮＫ、ＮＦＹ－Ａ、ＲＦＸ５、ＲＦＸ－ＡＰ、ＮＦＹ－Ｂ、ＮＦＹ－Ｃ、ＩＲＦ１、及びＴＡＰ１が挙げられる。
いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して起こる。１つ以上の標的ポリヌクレオチドの発現を調節すること（例えば、低減するまたは欠失させること）によって、かかる細胞は、レシピエント対象に移植されたときに減少した免疫活性化を示す。いくつかの実施形態では、細胞は、例えば、投与時にレシピエント対象または患者において低免疫原性と見なされる。
ａ．遺伝子編集システムの追加説明
いくつかの実施形態では、１つ以上の遺伝子をノックアウト、ノックダウン、または別様に改変するように細胞を遺伝子改変するための方法は、当技術分野で既知の、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、トランスポザーゼ、及び規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓシステムを含めた部位特異的ヌクレアーゼ、ならびにニッカーゼシステム、塩基編集システム、プライム編集システム、及び遺伝子ライティングシステムを使用することを含む。
ｉ．ＺＦＮ
ＺＦＮは、細菌ＦｏｋＩ制限酵素のエンドヌクレアーゼドメインに結合したジンクフィンガー含有転写因子から適応された数々の部位特異的ＤＮＡ結合ドメインを含む融合タンパク質である。ＺＦＮは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも多く）のＤＮＡ結合ドメインまたはジンクフィンガードメインを有してもよい。例えば、Ｃａｒｒｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１１）１８８：７７３－７８２、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９６）９３：１１５６－１１６０を参照されたい。各ジンクフィンガードメインは、１つ以上の亜鉛イオンによって安定化された小さなタンパク質の構造モチーフであり、通常、３～４ｂｐのＤＮＡ配列を認識する。タンデムドメインは、故に、細胞のゲノム内で固有である長いヌクレオチド配列に結合する可能性があり得る。
特異性が知られている種々のジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５、または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを生み出すことができる。ファジーディスプレイ、酵母ワンハイブリッドシステム、細菌ワンハイブリッド及びツーハイブリッドシステム、ならびに哺乳類細胞を含む、特定の配列を認識するジンクフィンガー（及びこれらの組み合わせ）を生成するための種々の選択及びモジュール式組立て技法が利用可能である。ジンクフィンガーは、既定の核酸配列に結合するように操作され得る。既定の核酸配列に結合するようにジンクフィンガーを操作するための基準は、当技術分野で既知である。例えば、Ｓｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００２）４１：７０７４－７０８１、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２００８）２４：１８５０－１８５７を参照されたい。
ＦｏｋＩヌクレアーゼドメインまたは他の二量体ヌクレアーゼドメインを含有するＺＦＮは、二量体として機能する。故に、非回文型ＤＮＡ部位を標的とするためにＺＦＮの対が必要とされる。２つの個々のＺＦＮは、それらのヌクレアーゼが適切に離間した状態でＤＮＡのそれぞれ反対の鎖に結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９８）９５：１０５７０－１０５７５を参照されたい。ゲノム内の特定の部位を切断するために、ＺＦＮの対は、一方が順方向鎖上、他方が逆方向鎖上で、前記部位の両側に位置する２つの配列を認識するように設計される。ＺＦＮが前記部位のそれぞれの側で結合すると、ヌクレアーゼドメインは二量体化し、前記部位にてＤＮＡを切断して、５’オーバーハングを伴うＤＳＢを生じさせる。次いでＨＤＲを使用して、相同性アームが両側に位置する所望の変異を含有する修復鋳型の一助により、特定の変異を誘導することができる。修復鋳型は通常、細胞に導入される外因性二本鎖ＤＮＡベクターである。Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１１）２９：１４３－１４８、Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１１）２９：７３１－７３４を参照されたい。
ｉｉ．ＴＡＬＥＮ
ＴＡＬＥＮは、標的遺伝子を編集するために使用され得る人工ヌクレアーゼの別の例である。ＴＡＬＥＮは、長いＤＮＡ配列に結合し、それを認識する１０～３０個のリピートを有するタンデムアレイを通常含む、ＴＡＬＥリピートと呼ばれるＤＮＡ結合ドメインに由来する。各リピートは、３３～３５アミノ酸長であり、このうち２つの隣接するアミノ酸（反復可変性二残基（ｒｅｐｅａｔ－ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｉ－ｒｅｓｉｄｕｅ）またはＲＶＤと呼ばれる）が４つのＤＮＡ塩基対のうちの１つに対する特異性を付与する。故に、標的ＤＮＡ配列においてリピートと塩基対との間に１対１の対応関係が存在する。
ＴＡＬＥＮは、１つ以上のＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメイン（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれよりも多く）をヌクレアーゼドメイン、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼドメインに融合することによって人工的に生産される。Ｚｈａｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２０１１）２９：１４９－１５３を参照されたい。ＴＡＬＥＮにおける使用に向けてＦｏｋＩに対するいくつかの変異が作製されており、これらは、例えば、切断特異性または活性を改善する。Ｃｅｒｍａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１１）３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２０１１）２９：１４３－１４８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２０１１）２９：７３１－７３４；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１１）３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ （２０１０）８：７４－７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００７）２５：７８６－７９３；Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０１０）２００：９６を参照されたい。ＦｏｋＩドメインは二量体として機能するため、適切な向き及び間隔での、標的ゲノム内の部位に対する固有のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩヌクレアーゼドメインとの間のアミノ酸残基の数、及び２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基の数の両方が、高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであるようである。Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２０１１）２９：１４３－１４８。
操作されたＴＡＬＥリピートをヌクレアーゼドメインと組み合わせることによって、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な部位特異的ヌクレアーゼを生産することができる。ＺＦＮに類似して、ＴＡＬＥＮを細胞に導入して、ゲノム内の所望の標的部位にてＤＳＢを生じさせることができるため、これを使用して、類似のＨＤＲ媒介性経路で遺伝子をノックアウトまたは変異をノックインすることができる。Ｂｏｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２０１１）２９：１３５－１３６、Ｂｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）３２６：１５０９－１５１２、Ｍｏｓｃｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）３２６：３５０１を参照されたい。
ｉｉｉ．メガヌクレアーゼ
メガヌクレアーゼは、大きなＤＮＡ配列（１４～４０塩基対）を認識し、切断するそれらの能力によって特性化されるエンドヌクレアーゼファミリーにおける酵素である。メガヌクレアーゼは、ヌクレアーゼ活性及び／またはＤＮＡ認識に影響を及ぼすそれらの構造的モチーフに基づいてファミリーにグループ化される。最も広く、また、最もよく知られているメガヌクレアーゼは、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧファミリーにおけるタンパク質であり、それらの名称は保存されたアミノ酸配列に由来する。Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００１）２９（１８）：３７５７－３７７４を参照されたい。一方、ＧＩＹ－ＹＩＧファミリーメンバーは、７０～１００残基長であるＧＩＹ－ＹＩＧモジュールを有し、４つの不変残基を有する４または５つの保存配列モチーフを含み、そのうち２つは、活性に必要とされる。Ｖａｎ Ｒｏｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．（２００２）９：８０６－８１１を参照されたい。Ｈｉｓ－Ｃｙｓファミリーメガヌクレアーゼは、数百のアミノ酸残基を包含する領域にわたる高度に保存された一連のヒスチジン及びシステインによって特性化される。Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００１）２９（１８）：３７５７－３７７４を参照されたい。ＮＨＮファミリーのメンバーは、アスパラギン残基によって囲まれた２対の保存されたヒスチジンを含有するモチーフによって定義される。Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００１）２９（１８）：３７５７－３７７４を参照されたい。
特定の標的ＤＮＡ配列のための天然メガヌクレアーゼを同定するための可能性は、高い特異性が必要であるため低いので、変異誘発及びハイスループットスクリーニング法を含む様々な方法が、独自の配列を認識するメガヌクレアーゼ変異体を生成するために使用されてきた。例えば、既定の核酸配列に結合するように変化したＤＮＡ結合特異性を有するメガヌクレアーゼを操作するためのストラテジーが当技術分野で知られている。例えば、Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．（２００２）１０：８９５－９０５；Ｅｐｉｎａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ（２００３）３１：２９５２－２９６２；Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００６）３６１：７４４－７５４；Ｓｅｌｉｇｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ（２００２）３０：３８７０－３８７９；Ｓｕｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２００４）３４２：３１－４１；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ（２００６）１２８：２４７７－２４８４；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ（２００９）２２：２４９－２５６；Ａｒｎｏｕｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（２００６）３５５：４４３－４５８；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００６）３６３（２）：２８３－２９４を参照されたい。
ＺＦＮ及びＴＡＬＥＮのように、メガヌクレアーゼは、ゲノムＤＮＡにおけるＤＳＢを生成し得、これは、例えば、ＮＨＥＪを介して、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を生成し、細胞における標的遺伝子の発現の減少をもたらし得る。代替的には、外来ＤＮＡは、メガヌクレアーゼと共に細胞に導入され得る。外来ＤＮＡの配列及び染色体配列に応じて、このプロセスは、標的遺伝子を改変するために使用され得る。Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１１）１１：１１－２７を参照されたい。
ｉｖ．トランスポザーゼ
トランスポザーゼは、トランスポゾンの末端に結合し、切り貼りメカニズムまたは複製的転座メカニズムによってゲノムの別の部分へのその移動を触媒する酵素である。トランスポサーゼを他のシステム、例えば、ＣＲＩＳＰＥＲ／Ｃａｓシステムと連結させることによって、ゲノムＤＮＡの部位特異的挿入または操作を可能とするために新たな遺伝子編集ツールが開発され得る。非活性Ｃａｓエフェクタータンパク質及びＴｎ７様トランスポゾンを触媒的に使用するトランスポゾンを使用する２つの既知のＤＮＡ組み込み方法が存在する。トランスポザーゼ依存性ＤＮＡ組み込みは、ゲノムにおいてＤＳＢを誘発せず、これはより安全かつより特異的なＤＮＡ組み込みを保証し得る。
ｖ．ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム
ＣＲＩＳＰＲシステムは元々、獲得免疫の一形態を提供する、侵入するファージ及びプラスミドに対する防御に関与するシステムとして原核生物（例えば、細菌及び古細菌）において発見された。現在では、研究及び臨床的用途において人気のある遺伝子編集ツールとして適応され、使用されている。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは通常、少なくとも２つの構成要素：１つ以上のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）及びＣａｓタンパク質を含む。Ｃａｓタンパク質は、標的部位にＤＳＢを導入するヌクレアーゼである。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムは、２つの主要なクラスに分類される：クラス１システムは、核酸を分解するために複数のＣａｓタンパク質の複合体を使用する；クラス２システムは、同じ目的のために単一の大きなＣａｓタンパク質を使用する。クラス１は、タイプＩ、ＩＩＩ、及びＩＶに分けられ；クラス２は、タイプＩＩ、Ｖ、及びＶＩに分けられる。遺伝子編集用途のために適応された様々なＣａｓタンパク質には、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ８ａ、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１２、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１２ｂ（Ｃ２ｃ１）、Ｃａｓ１２ｃ（Ｃ２ｃ３）、Ｃａｓ１２ｄ（ＣａｓＹ）、Ｃａｓ１２ｅ（ＣａｓＸ）、Ｃａｓ１２ｆ（Ｃ２ｃ１０）、Ｃａｓ１２ｇ、Ｃａｓ１２ｈ、Ｃａｓ１２ｉ、Ｃａｓ１２ｋ（Ｃ２ｃ５）、Ｃａｓ１３、Ｃａｓ１３ａ（Ｃ２ｃ２）、Ｃａｓ１３ｂ、Ｃａｓ１３ｃ、Ｃａｓ１３ｄ、Ｃ２ｃ４、Ｃ２ｃ８、Ｃ２ｃ９、Ｃｍｒ５、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｆ１、Ｃｓｍ２、Ｃｓｎ２、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１１、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、及びＭａｄ７が含まれるが、これらに限定されない。最も広く使用されているＣａｓ９は、例示として本明細書に記載されている。これらのＣａｓタンパク質は、異なる源種を起源とし得る。例えば、Ｃａｓ９は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓまたはＳ．ａｕｒｅｕｓに由来し得る。
元の微生物ゲノムにおいて、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲシステムは、宿主ゲノム内のアレイとしてコードされるＣＲＩＳＰＲリピート配列間に侵入ＤＮＡからの配列を組み込んでいる。ＣＲＩＳＰＲリピートアレイからの転写産物は、「プロトスペーサー」配列として知られている、侵入ＤＮＡから転写された可変要素配列、及びＣＲＩＳＰＲリピートの一部をそれぞれ保有するＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）へとプロセシングされる。各ｃｒＲＮＡは、第２のトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）とハイブリダイズし、これらの２つのＲＮＡは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと複合体を形成する。ｃｒＲＮＡのプロトスペーサーコード部分は、相補的標的ＤＮＡ配列を切断するようにＣａｓ９複合体を誘導するが、但し、それらは、「プロトスペーサー隣接モチーフ」（ＰＡＭ）として知られている短い配列に隣接する。
その発見から、ＣＲＩＳＰＲシステムは、細菌からヒト細胞を含む真核細胞にわたる広範囲の細胞及び生物において配列特異的ＤＳＢ及び標的化ゲノム編集を誘導するために適応されてきた。遺伝子編集用途におけるその使用では、人工的に設計された合成ｇＲＮＡが、元来のｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体に置き換わっている。例えば、ｇＲＮＡは、ｃｒＲＮＡ、テトラループ、及びｔｒａｃｒＲＮＡから構成される単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）であり得る。ｃｒＲＮＡは通常、目的の標的ＤＮＡを認識するようにユーザが設計した相補的領域（スペーサーとも呼ばれ、通常は長さが約２０ヌクレオチド）を含む。ｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、Ｃａｓヌクレアーゼ結合のための骨格領域を含む。ｃｒＲＮＡ配列及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、テトラループによって連結され、各々は、互いのハイブリダイゼーションのための短いリピート配列を有し、よって、キメラｓｇＲＮＡを生成する。ｇＲＮＡに存在するスペーサーまたは相補的領域配列を単純に変更することによってＣａｓヌクレアーゼのゲノム標的を変更し得る。相補的領域は、標準的なＲＮＡ－ＤＮＡ相補的塩基対合規則を介して標的ＤＮＡ部位にＣａｓヌクレアーゼを導く。
Ｃａｓヌクレアーゼが機能するために、ゲノムＤＮＡにおいて標的配列のすぐ下流にＰＡＭが存在しなければならない。Ｃａｓタンパク質によるＰＡＭの認識は、隣接するゲノム配列を不安定化し、ｇＲＮＡによる配列の調査を可能にし、一致する配列が存在する場合にｇＲＮＡ－ＤＮＡ対合をもたらすと考えられている。ＰＡＭの具体的な配列は、Ｃａｓ遺伝子の種に応じて様々である。例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに由来する最も一般的に使用されるＣａｓ９ヌクレアーゼは、５’－ＮＧＧ－３’のＰＡＭ配列または、あまり効率的ではない速度では、５’－ＮＡＧ－３’（「Ｎ」は任意のヌクレオチドであり得る）を認識する。代替的ＰＡＭを有する他のＣａｓヌクレアーゼ変異体もまた特性化されており、ゲノム編集のために成功裏に使用されており、それは以下の表１６にまとめられている。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓヌクレアーゼは、それらの活性、特異性、認識、及び／または他の特徴を変化させるための１つ以上の変異を含み得る。例えば、Ｃａｓヌクレアーゼは、オフターゲット効果を軽減するためにその忠実度を変化させる１つ以上の変異を有してもよい（例えば、ｅＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ１、ＨｙｐａＳｐＣａｓ９、ＨｅＦＳｐＣａｓ９、及びｅｖｏＳｐＣａｓ９は、ＳｐＣａｓ９の高忠実度変異体である）。別の例として、Ｃａｓヌクレアーゼは、そのＰＡＭ特異性を変化させる１つ以上の変異を有してもよい。
ｖｉ．ニッカーゼ
Ｃａｓのヌクレアーゼドメイン、特にＣａｓ９のヌクレアーゼは、ＤＮＡ「ニッカーゼ」と称される酵素を生成するために独立して変異させられ得る。ニッカーゼは、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む、通常のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムと同じ特異性で一本鎖切断を導入することが可能である。ニッカーゼは、遺伝子編集システムに利用され得る二本鎖破断を生成するために用いられ得る（Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（９）：８３３－８３８（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１０：９５７－９６３（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３９（６１２１）：８２３－８２６（２０１３））。一部の事例では、２つのＣａｓニッカーゼが使用される場合、正確な遺伝子組み込み及び挿入にわたって追加の制御を可能とする平滑末端の代わりの切断末端の各々に長いオーバーハングが生成される（Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（９）：８３３－８３８（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１０：９５７－９６３（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３９（６１２１）：８２３－８２６（２０１３））。両方のニッキングＣａｓ酵素は、それらの標的ＤＮＡを有効に切り目を入れなければならないので、対合したニッカーゼは、二本鎖を切断するＣａｓベースのシステムと比較してより低いオフターゲット効果を有し得る（Ｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１５５（２）：４７９－４８０（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３１（９）：８３３－８３８（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１０：９５７－９６３（２０１３）；Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３３９（６１２１）：８２３－８２６（２０１３））。
Ｔ．寛容原性因子及び／またはキメラ抗原受容体の過剰発現
これらの技術のすべてについて、周知の組換え技法を使用して、本明細書に概説されるような組換え核酸が生成される。多くの実施形態では、寛容原性因子またはキメラ抗原受容体をコードする組換え核酸は、発現構築物における１つ以上の制御性ヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。制御性ヌクレオチド配列は通常、治療される宿主細胞及びレシピエント対象にとって適切である。多数のタイプの適切な発現ベクター及び好適な制御配列は、多様な宿主細胞についての当技術分野で知られている。典型的には、１つ以上の制御性ヌクレオチド配列には、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列、及びエンハンサーまたは活性化因子配列が含まれ得るが、これらに限定されない。当技術分野で知られている構成的または誘導性プロモーターも企図される。プロモーターは、天然に存在するプロモーター、複数のプロモーターの要素を組み合わせるハイブリッドプロモーター、または合成プロモーターであり得る。発現構築物は、プラスミドなどのエピソーム上で細胞内に存在し得、例えば、または発現構築物は、染色体、例えば、遺伝子座に挿入され得る。いくつかの実施形態では、発現ベクターには、形質転換した宿主細胞の選択を可能とする選択マーカー遺伝子が含まれる。いくつかの実施形態には、少なくとも１つの制御配列に作動可能に連結された変異体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターが含まれる。本明細書において使用するための制御配列には、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御要素が含まれる。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、形質転換される宿主細胞の選択、発現することが所望とされる特定の変異体ポリペプチド、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、及び／またはベクターによってコードされる任意の他のタンパク質、例えば、抗生物質マーカーの発現のために設計される。
好適な哺乳動物プロモーターの例には、例えば、以下の遺伝子からのプロモーター：延長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター、ＣＡＧプロモーター、ハムスターのユビキチン／Ｓ２７ａプロモーター（ＷＯ９７／１５６６４）、サル空胞化ウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、マウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の長い末端反復領域、マウス乳房腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ）、モロニーマウス白血病ウイルスの長い末端反復領域、及びヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターが含まれる。他の異種哺乳動物プロモーターの例は、アクチン、免疫グロブリンまたはヒートショックプロモーター（複数可）である。追加の実施形態では、哺乳動物宿主細胞において使用するためのプロモーターは、ウイルス、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（１９８９年７月５日に発行されたＵＫ２，２１１，５０４）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから得られ得る。更なる実施形態では、異種哺乳動物プロモーターが使用される。例としては、アクチンプロモーター、免疫グロブリンプロモーター、及び熱ショックプロモーターが挙げられる。ＳＶ４０の初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる（Ｆｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ２７３：１１３－１２０（１９７８））。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素断片として好都合に得られる（Ｇｒｅｅｎａｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １８：３５５－３６０（１９８２））。前述の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。
いくつかの実施形態では、発現ベクターは、バイシストロン性または多シストロン性発現ベクターである。バイシストロン性または多シストロン性発現ベクターには、（１）オープンリーディングフレームの各々に融合された複数のプロモーター；（２）遺伝子間のスプライシングシグナルの挿入；（３）発現が単一プロモーターによって駆動される遺伝子の融合；及び（４）遺伝子間のタンパク質分解切断部位（自己切断ペプチド）の挿入または遺伝子間の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の挿入が含まれ得る。
本明細書に記載のポリヌクレオチドを細胞に導入するプロセスは、任意の好適な技法によって達成され得る。好適な技術には、リン酸カルシウムまたは脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、フソゲン、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が含まれる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウイルス形質導入を介して細胞に導入されるか（例えば、レンチウイルス形質導入）、またはウイルスベクター上で別様に送達される（例えば、フソゲン媒介性送達）。
活性化細胞、例えば、活性化Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を通常含む細胞に本明細書に記載のポリヌクレオチドを導入する特定の方法とは異なり、ポリヌクレオチドを非活性化Ｔ細胞に導入するために好適な技術が利用され得る。好適な技術には、ビーズに結合したまたは結合していない場合があるＣＤ３、ＣＤ８、及び／またはＣＤ２８、またはその断片もしくは部分（例えば、ｓｃＦｖ及びＶＨＨ）に結合する１つ以上の抗体でのＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化が含まれるが、これらに限定されない。驚くべきことに、Ｔ細胞へのポリヌクレオチドのフソゲン媒介性導入は、１つ以上の活性化抗体またはその断片もしくは部分（例えば、ＣＤ３、ＣＤ８、及び／またはＣＤ２８）と先に接触していない非活性化Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）において実施される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞へのポリヌクレオチドのフソゲン媒介性導入は、ｉｎ ｖｉｖｏで（例えば、Ｔ細胞が対象に投与された後に）実施される。他の実施形態では、Ｔ細胞へのポリヌクレオチドのフソゲン媒介性導入は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで（例えば、Ｔ細胞が対象に投与される前に）実施される。
本明細書では、野生型Ｔ細胞と比べて低減されたＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＩＩＴＡ、ＴＣＲ－アルファ、及び／またはＴＣＲ－ベータの発現を含む非活性化Ｔ細胞が提供され、活性化Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の遺伝子を更に含む。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、Ｔ細胞活性化サイトカイン、または可溶性Ｔ細胞共刺激分子で処理されていない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、活性化マーカーを発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＤ３及びＣＤ２８を発現し、ＣＤ３及び／またはＣＤ２８は、非活性である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、ＯＫＴ３である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２８抗体は、ＣＤ２８．２である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１からなるＴ細胞活性化サイトカインの群から選択される。いくつかの実施形態では、可溶性Ｔ細胞共刺激分子は、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗ＣＤ１３７Ｌ抗体、及び抗ＩＣＯＳ－Ｌ抗体からなる可溶性Ｔ細胞共刺激分子の群から選択される。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞である。他の実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、本技術の低免疫原性細胞から分化させられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、第１の遺伝子は、ＣＤ８結合因子を含むレンチウイルスベクターによって運搬される。いくつかの実施形態では、第１の遺伝子は、ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１として第２の遺伝子を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の遺伝子及び／または第２の遺伝子は、Ｔ細胞の少なくとも一方の対立遺伝子の特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、異なる遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、同じ遺伝子座内に挿入される。
いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＣＤ１５５遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子及びＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及び／またはＨＬＡ－Ｃ抗原を発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍを発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、及び／またはＨＬＡ－ＤＲ抗原を発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＩＩＴＡを発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＣＲ－アルファを発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＣＲ－ベータを発現しない。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータを発現しない。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、特定の遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、ＨＬＡ－Ａインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｂインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、特定の遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、ＨＬＡ－Ａインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｂインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｃインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、特定の遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、ＨＬＡ－Ａインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｂインデル／インデル、ＣＤ１５５インデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、特定の遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、ＨＬＡ－Ａインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｂインデル／インデル、ＨＬＡ－Ｃインデル／インデル、ＣＤ１５５インデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子座は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、またはＴＲＢ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択されるセーフハーバー遺伝子座である。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＴＲＢ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。
本明細書では、野生型Ｔ細胞と比べて低減されたＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＣＩＩＴＡ、ＴＣＲ－アルファ、及び／またはＴＣＲ－ベータの発現を含む操作されたＴ細胞が提供され、操作されたＴ細胞は、ＣＤ８結合因子を含むレンチウイルスベクターによって運搬される、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする第１の遺伝子を更に含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、初代Ｔ細胞である。他の実施形態では、操作されたＴ細胞は、本技術の低免疫原性細胞から分化させられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、活性化マーカーを発現しない。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＣＤ３及びＣＤ２８を発現し、ＣＤ３及び／またはＣＤ２８は、非活性である。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、Ｔ細胞活性化サイトカイン、または可溶性Ｔ細胞共刺激分子で治療されていない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、ＯＫＴ３であり、抗ＣＤ２８抗体は、ＣＤ２８．２であり、Ｔ細胞活性化サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１からなるＴ細胞活性化サイトカインの群から選択され、可溶性Ｔ細胞共刺激分子は、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗ＣＤ１３７Ｌ抗体、及び抗ＩＣＯＳ－Ｌ抗体からなる可溶性Ｔ細胞共刺激分子の群から選択される。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１からなる群から選択される１つ以上のＴ細胞活性化サイトカインで治療されていない。一部の事例では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２ならびにＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１からなる群から選択される別のものである。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体、及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１である第２の遺伝子を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の遺伝子及び／または第２の遺伝子は、Ｔ細胞の少なくとも一方の対立遺伝子の特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、ＣＤ１５５遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、セーフハーバー遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、及びＴＲＢ遺伝子座からなる群から選択される特定の遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、異なる遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、同じ遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、ならびにＣＡＲをコードする第１の遺伝子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、またはセーフハーバー遺伝子座内に挿入される。いくつかの実施形態では、セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、アルブミン遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２２特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択されるいずれか１つに結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及び／またはＨＬＡ－Ｃ抗原を発現せず、操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、及び／またはＨＬＡ－ＤＲ抗原を発現せず、操作されたＴ細胞は、ＣＩＩＴＡを発現せず、及び／または操作されたＴ細胞は、ＴＣＲ－アルファ及びＴＣＲ－ベータを発現しない。
いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内、ＴＲＢ遺伝子座内、Ｂ２Ｍ遺伝子座内、またはＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＡＣインデル／インデル細胞である。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座内、ＴＲＢ遺伝子座内、Ｂ２Ｍ遺伝子座内、またはＣＩＩＴＡ遺伝子座内に挿入されたＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする第２の遺伝子、及び／またはＣＡＲをコードする第１の遺伝子を含む、Ｂ２Ｍインデル／インデル、ＣＩＩＴＡインデル／インデル、ＴＲＢインデル／インデル細胞である。
いくつかの実施形態では、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞は、対象内にある。他の実施形態では、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏである。
いくつかの実施形態では、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞は、ＣＤ８結合因子を発現する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合因子は、抗ＣＤ８抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ８抗体は、マウス抗ＣＤ８抗体、ウサギ抗ＣＤ８抗体、ヒト抗ＣＤ８抗体、ヒト化抗ＣＤ８抗体、ラクダ科動物（例えば、リャマ、アルパカ、ラクダ）抗ＣＤ８抗体、及びその断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、その断片は、ｓｃＦｖまたはＶＨＨである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合因子は、ＣＤ８アルファ鎖及び／またはＣＤ８ベータ鎖に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８結合因子は、ウイルスエンベロープに組み込まれた膜貫通ドメインに融合される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ウイルス融合タンパク質でシュードタイプ化される。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、そのネイティブ受容体への結合を低減するための１つ以上の改変を含む。
いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ＣＤ８結合因子に融合される。いくつかの実施形態では、ウイルス融合タンパク質は、ＣＤ８結合因子に融合されたニパウイルスＦ糖タンパク質及びニパウイルスＧ糖タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｔ細胞活性化分子またはＴ細胞共刺激分子を含まない。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、第１の遺伝子及び／または第２の遺伝子をコードする。
いくつかの実施形態では、第１の対象への移入後に、非活性化Ｔ細胞または操作されたＴ細胞は、第２の対象への移入後の野生型細胞と比較して低減される、（ａ）Ｔ細胞応答、（ｂ）ＮＫ細胞応答、及び（ｃ）マクロファージ応答からなる群から選択される１つ以上の応答を示す。いくつかの実施形態では、第１の対象及び第２の対象は、異なる対象である。いくつかの実施形態では、マクロファージ反応は、貪食である。
いくつかの実施形態では、対象への移入後に、非活性化Ｔ細胞または操作されたＴ細胞は、対象への移入後の野生型細胞と比較して、（ａ）対象における低減されたＴＨ１活性化、（ｂ）対象における低減されたＮＫ細胞殺傷、及び（ｃ）対象における全ＰＢＭＣによる低減された殺傷からなる群から選択される１つ以上を示す。
いくつかの実施形態では、対象への移入後に、非活性化Ｔ細胞または操作されたＴ細胞は、対象への移入後の野生型細胞と比較して、（ａ）対象における低減されたドナー特異的抗体、（ｂ）対象における低減されたＩｇＭまたはＩｇＧ抗体、及び（ｃ）対象における低減された補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）からなる群から選択される１つ以上を誘発する。
いくつかの実施形態では、非活性化Ｔ細胞または操作されたＴ細胞は、対象の内部で、ＣＤ８結合因子を含むレンチウイルスベクターにより形質導入される。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターは、ＣＡＲ、及び／またはＨＬＡ－Ｅ変異体、ＨＬＡ－Ｇ変異体及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１をコードする遺伝子を運搬する。
本明細書では、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞の集団と、医薬的に許容される添加剤、担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物が提供される。
本明細書では、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞の集団、または本技術の１つ以上の医薬組成物を含む組成物を対象に投与することを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態では、対象は、組成物の投与の前、後、及び／またはそれと同時にＴ細胞活性化治療が施与されない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化治療は、リンパ球枯渇を含む。
本明細書では、がんを罹患している対象を治療する方法であって、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞の集団を含む組成物、または本技術の１つ以上の医薬組成物を対象に投与することを含み、対象は、組成物の投与の前、後、及び／またはそれと同時にＴ細胞活性化治療が施与されない、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化治療は、リンパ球枯渇を含む。
本明細書では、腫瘍細胞を認識し、殺傷することが可能なＴ細胞の増殖を、それを必要とする対象において対象の内部で行うための方法であって、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞の集団を含む組成物、または本技術の１つ以上の医薬組成物を対象に投与することを含み、対象は、組成物の投与の前、後、及び／またはそれと同時にＴ細胞活性化治療が施与されない、方法が提供される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化治療は、リンパ球枯渇を含む。
本明細書では、対象における病態、疾患または障害を治療するための投薬レジメンであって、本技術の非活性化Ｔ細胞及び／または操作されたＴ細胞の集団、または本技術の１つ以上の医薬組成物、及び医薬的に許容される添加剤、担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物の投与を含み、医薬組成物は、約１～３回の用量で投与される、投薬レジメンが提供される。
ひとたび変化させられると、本明細書に記載の分子のうちのいずれかの発現の存在について、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＦＡＣＳアッセイなどといった既知の技法を使用してアッセイすることができる。
Ｕ．人工多能性幹細胞の生成
本技術は、低免疫原性多能性細胞を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、多能性幹細胞を生成することを含む。マウス及びヒト多能性幹細胞（一般にｉＰＳＣ；マウス細胞の場合はｍｉＰＳＣまたはヒト細胞の場合はｈｉＰＳＣと称される）の生成は一般的に、当技術分野で知られている。当業者によって理解されるように、ｉＰＣＳの生成のための多様な異なる方法が存在する。元来の誘導は、４つの転写因子であるＯｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ及びＫｌｆ４のウイルス導入を使用してマウス胚または成人線維芽細胞から行われる；Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｙａｍａｎａｋａ Ｃｅｌｌ １２６：６６３－６７６（２００６）（それに概説された技術のためにその全体が具体的に参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。それ以来、いくつかの方法が開発されてきた。概観についてはＳｅｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ７（１）：１１６－１２５（２０１５）、及びＬａｋｓｈｍｉｐａｔｈｙ ａｎｄ Ｖｅｒｍｕｒｉ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ２０１３を参照されたく、同文献はいずれも、参照によりそれらの全体が、とりわけｈｉＰＳＣを生成するための方法（例えば、後者の参考文献の第３章を参照されたい）に関して本明細書に明示的に組み込まれる。
一般に、ｉＰＳＣは、通常はエピソームベクターを使用して導入される、宿主細胞における１つ以上の再プログラミング因子の一過性発現によって生成される。これらの条件下では、少量の細胞が誘導されて、ｉＰＳＣとなる（一般に、このステップの効率は低いため、選択マーカーは使用されない）。ひとたび細胞が「再プログラミング」され、多能性となると、それらはエピソームベクター（複数可）を喪失し、内在性遺伝子を使用して当因子を産生する。
同じく当業者には理解されようが、使用され得るまたは使用される再プログラミング因子の数は、様々であり得る。一般的に、より少数の再プログラミング因子が使用される場合、多能性状態への細胞の形質転換の効率、ならびに「多能性」は下がり、例えば、より少数の再プログラミング因子は、完全に多能性でないが、より少数の細胞種に分化することのみ可能であり得る細胞をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、単一の再プログラミング因子、ＯＣＴ４が使用される。他の実施形態では、２つの再プログラミング因子ＯＣＴ４及びＫＬＦ４が使用される。他の実施形態では、３つの再プログラミング因子ＯＣＴ４、ＫＬＦ４及びＳＯＸ２が使用される。他の実施形態では、４つの再プログラミング因子ＯＣＴ４、ＫＬＦ４、ＳＯＸ２及びｃ－Ｍｙｃが使用される。他の実施形態では、ＳＯＫＭＮＬＴ；ＳＯＸ２、ＯＣＴ４（ＰＯＵ５Ｆ１）、ＫＬＦ４、ＭＹＣ、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、及びＳＶ４０Ｌ Ｔ抗原から選択される５、６または７つの再プログラミング因子が使用され得る。通常、これらの再プログラミング因子遺伝子は、当技術分野で知られており、市販されているものなどのエピソームベクター上で提供される。
通常、当技術分野で知られているように、ｉＰＳＣは、本明細書に記載される再プログラミング因子を一時的に発現させることによって、非多能性細胞、例えば、限定されないが、血液細胞、線維芽細胞などから作製される。
Ｖ．低免疫原性表現型及び多能性の保持のためのアッセイ
低免疫原性細胞が生成されると、それらは、ＷＯ２０１６１８３０４１及びＷＯ２０１８１３２７８３に記載されているように、それらの低免疫原性及び／または多能性の保持についてアッセイされ得る。
いくつかの実施形態では、低免疫原性は、ＷＯ２０１８１３２７８３の図１３及び図１５に例示される多数の技術を使用してアッセイされる。これらの技術には、同種異系宿主への移植及び宿主免疫系を回避する低免疫原性多能性細胞成長（例えば、奇形腫）についてのモニタリングが含まれる。一部の事例では、低免疫原性多能性細胞派生物は、ルシフェラーゼを発現するように形質導入され、次いで生物発光イメージングを使用して追跡され得る。同様に、かかる細胞に対する宿主動物のＴ細胞及び／またはＢ細胞反応は、細胞が宿主動物における免疫応答を引き起こさないことを確認するために試験される。Ｔ細胞反応は、Ｅｌｉｓｐｏｔ、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、ＰＣＲ、またはマスサイトメトリー（ＣＹＴＯＦ）によって評価され得る。Ｂ細胞反応または抗体反応は、ＦＡＣＳまたはＬｕｍｉｎｅｘを使用して評価される。追加的にまたは代替的に、細胞は、ＷＯ２０１８１３２７８３の図１４及び１５に全般的に示されるように、自然免疫応答、例えば、ＮＫ細胞殺傷を回避するそれらの能力についてアッセイされ得る。
いくつかの実施形態では、細胞の免疫原性は、例えば、当業者によって認識されているＴ細胞増殖アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、及びＴ細胞殺傷アッセイなどのＴ細胞イムノアッセイを使用して評価される。一部の場合では、Ｔ細胞増殖アッセイには、細胞をインターフェロン－ガンマで事前治療すること及び細胞を標識Ｔ細胞と共培養すること及び事前選択された時間後にＴ細胞集団（または増殖しているＴ細胞集団）の存在をアッセイすることが含まれる。一部の場合では、Ｔ細胞活性化アッセイには、Ｔ細胞を本明細書で概説される細胞と共培養すること及びＴ細胞におけるＴ細胞活性化マーカーの発現レベルを決定することが含まれる。
ｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、本明細書で概説される細胞の免疫原性を評価するために実施され得る。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞の生存及び免疫原性は、同種異系ヒト化免疫不全マウスモデルを使用して決定される。一部の事例では、低免疫原性多能性幹細胞は、同種異系ヒト化ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスに移植され、細胞拒絶反応、細胞生存、及び奇形腫形成についてアッセイされる。一部の事例では、移植された低免疫原性多能性幹細胞またはその分化細胞は、マウスモデルにおいて長期生存を示す。
細胞の低免疫原性を含む免疫原性を決定するための追加の技術は、例えば、Ｄｅｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１９，３７，２５２－２５８及びＨａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１９，１１６（２１），１０４４１－１０４４６に記載されており、図、図の凡例、及び方法の説明を含むその開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
同様に、多能性の保持は、多数の方法で試験される。いくつかの実施形態では、多能性は、本明細書に全般的に記載され、ＷＯ２０１８１３２７８３の図２９に示されるように特定の多能性特異的因子の発現によってアッセイされる。追加的にまたは代替的に、多能性細胞は、多能性の指標として１つ以上の細胞タイプに分化される。
当業者によって理解されるように、多能性細胞におけるＭＨＣ Ｉ機能（細胞がヒト細胞に由来する場合はＨＬＡ Ｉ）の成功裏の低減は、当技術分野で知られている及び以下に記載される技術を使用して測定され得る；例えば、ＨＬＡ複合体に結合する標識抗体を使用する；例えば、ヒト主要組織適合性ＨＬＡクラスＩ抗原のアルファ鎖に結合する市販のＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃ抗体を使用するＦＡＣＳ技術。
また、細胞は、ＨＬＡ Ｉ複合体が細胞表面上に発現していないことを確認するために試験され得る。これは、上で論述される１つ以上のＨＬＡ細胞表面構成要素に対する抗体を使用してＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。
多能性細胞またはそれらの派生物におけるＭＨＣ ＩＩ機能（細胞がヒト細胞に由来する場合はＨＬＡ ＩＩ）の成功裏の低減は、当技術分野で知られている技術、例えば、タンパク質に対する抗体を使用するウェスタンブロット、ＦＡＣＳ技術、ＲＴ－ＰＣＲ技術などを使用して測定され得る。
また、細胞は、ＨＬＡ ＩＩ複合体が細胞表面上に発現していないことを確認するために試験され得る。この場合もまた、このアッセイは、当技術分野で知られているように行われ（例えば、ＷＯ２０１８１３２７８３の図２１を参照されたい）、ヒトＨＬＡクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＰ及びほとんどのＤＱ抗原に結合する市販の抗体に基づいてウェスタンブロットまたはＦＡＣＳ分析のいずれかを使用して一般的に行われる。
ＨＬＡ Ｉ及びＩＩ（またはＭＨＣ Ｉ及びＩＩ）の低減に加えて、その技術の低免疫原性細胞は、マクロファージ貪食及びＮＫ細胞殺傷に対する低減された感受性を有する。得られる低免疫原性細胞は、ＴＣＲ複合体の低減または欠如ならびに１つ以上のＨＬＡ－Ｅ変異導入遺伝子、ＨＬＡ－Ｇ変異導入遺伝子及び／または外因性ＰＤ－Ｌ１導入遺伝子の発現により、免疫マクロファージ及び自然経路を「回避」する。
Ｗ．外因性ポリヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本明細書における低免疫原性細胞は、低免疫原性細胞の１つ以上のゲノム遺伝子座に挿入された１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含むように遺伝子改変される。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、目的のタンパク質、例えば、キメラ抗原受容体をコードする。本明細書に記載の遺伝子編集法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）を含めて、任意の好適な方法を使用して、外因性ポリヌクレオチドを低免疫原性細胞のゲノム遺伝子座内に挿入することができる。
外因性ポリヌクレオチドは、低免疫原性細胞の任意の好適なゲノム遺伝子座に挿入され得る。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるセーフハーバー遺伝子座に挿入される。好適なセーフハーバー遺伝子座には、ＣＣＲ５遺伝子、ＣＸＣＲ４遺伝子、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（別名ＡＡＶＳ１）遺伝子、アルブミン遺伝子、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子、Ｒｏｓａ遺伝子（例えば、ＲＯＳＡ２６）、Ｆ３遺伝子（別名ＣＤ１４２）、ＭＩＣＡ遺伝子、ＭＩＣＢ遺伝子、ＬＲＰ１遺伝子（別名ＣＤ９１）、ＨＭＧＢ１遺伝子、ＡＢＯ遺伝子、ＲＨＤ遺伝子、ＦＵＴ１、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、内在性遺伝子に挿入され、挿入は、内在性遺伝子のサイレンシングまたは低減された発現を引き起こす。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、ＴＲＢ、ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ－４遺伝子に挿入される。外因性ポリヌクレオチドの挿入のための例となるゲノム遺伝子座が、表１７に示されている。
いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドを含む低免疫原性細胞は、例えば、本明細書に記載される、低免疫原性誘導多能性細胞（ＨＩＰ）に由来する。かかる低免疫原性細胞には、例えば、心臓細胞、神経細胞、脳内皮細胞、ドーパミン作動性ニューロン、グリア細胞、内皮細胞、甲状腺細胞、膵島細胞（ベータ細胞）、網膜色素上皮細胞、及びＴ細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドを含む低免疫原性細胞は、膵臓ベータ細胞、Ｔ細胞（例えば、初代Ｔ細胞）、またはグリア前駆細胞である。
いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドを含む低免疫原性細胞は、初代Ｔ細胞または低免疫原性人工多能性細胞（例えば、低免疫原性ｉＰＳＣ）に由来するＴ細胞である。例となる実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、キメラ抗原受容体（例えば、本明細書に記載のＣＡＲのいずれか）である。いくつかの実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、低免疫原性細胞における外因性ポリヌクレオチドの発現のためのプロモーターに作動可能に連結される。
Ｘ．医薬的に許容される担体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、医薬的に許容される担体を更に含む。許容される担体、賦形剤、または安定化剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（ＴＷＥＥＮ（商標））、ポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、医薬的に許容される緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）が含まれる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の低免疫原性細胞ならびに３１．２５％（ｖ／ｖ）のＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、３１．２５％（ｖ／ｖ）の５％デキストロース／０．４５％塩化ナトリウム、１０％デキストラン４０（ＬＭＤ）／５％デキストロース、２０％（ｖ／ｖ）の２５％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、及び７．５％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む医薬的に許容される担体を含む。
Ｙ．配合及び投薬レジメン
任意の治療上有効量の本明細書に記載の細胞は、治療されている適応症に応じて医薬組成物に含まれ得る。細胞の非限定的な例には、初代Ｔ細胞、低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞、及び本明細書に記載の低免疫原性人工多能性幹細胞から分化した他の細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、少なくとも約１×１０２、５×１０２、１×１０３、５×１０３、１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、または５×１０１０個の細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、最大で約１×１０２、５×１０２、１×１０３、５×１０３、１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、または５×１０１０個の細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、最大で約６．０×１０８個の細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、最大で約８．０×１０８個の細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物には、少なくとも約１×１０２～５×１０２、５×１０２～１×１０３、１×１０３～５×１０３、５×１０３～１×１０４、１×１０４～５×１０４、５×１０４～１×１０５、１×１０５～５×１０５、５×１０５～１×１０６、１×１０６～５×１０６、５×１０６～１×１０７、１×１０７～５×１０７、５×１０７～１×１０８、１×１０８～５×１０８、５×１０８～１×１０９、１×１０９～５×１０９、５×１０９～１×１０１０、または１×１０１０～５×１０１０個の細胞が含まれる。例となる実施形態では、医薬組成物には、約１．０×１０６～約２．５×１０８個の細胞が含まれる。多くの実施形態では、医薬組成物には、約２．０×１０６～約２．０×１０８個の細胞、例えば、限定されないが、初代Ｔ細胞、低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞が含まれる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または５００ｍｌの体積を有する。例となる実施形態では、医薬組成物は、最大で約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または５００ｍｌの体積を有する。例となる実施形態では、医薬組成物は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または５００ｍｌの体積を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１～５０ｍｌ、５０～１００ｍｌ、１００～１５０ｍｌ、１５０～２００ｍｌ、２００～２５０ｍｌ、２５０～３００ｍｌ、３００～３５０ｍｌ、３５０～４００ｍｌ、４００～４５０ｍｌ、または４５０～５００ｍｌの体積を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１～５０ｍｌ、５０～１００ｍｌ、１００～１５０ｍｌ、１５０～２００ｍｌ、２００～２５０ｍｌ、２５０～３００ｍｌ、３００～３５０ｍｌ、３５０～４００ｍｌ、４００～４５０ｍｌ、または４５０～５００ｍｌの体積を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１～１０ｍｌ、１０～２０ｍｌ、２０～３０ｍｌ、３０～４０ｍｌ、４０～５０ｍｌ、５０～６０ｍｌ、６０～７０ｍｌ、７０～８０ｍｌ、７０～８０ｍｌ、８０～９０ｍｌ、または９０～１００ｍｌの体積を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約５ｍｌ～約８０ｍｌの範囲の体積を有する。例となる実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｌ～約７０ｍｌの範囲の体積を有する。多くの実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｌ～約５０ｍｌの範囲の体積を有する。
具体的な量／投薬レジメンは、個体の体重、性別、年齢及び健康；配合、生化学的特質、生物活性、バイオアベイラビリティ及び細胞の副作用ならびに完全な治療レジームにおける細胞の数及び同一性に応じて様々である。
いくつかの実施形態では、１用量の医薬組成物には、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積の約１．０×１０５～約２．５×１０８個の細胞が含まれ、医薬組成物は、単一用量として投与される。一部の場合では、用量には、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積の約１．０×１０５～約２．５×１０８個の本明細書に記載の初代Ｔ細胞が含まれる。いくつかの場合では、用量には、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積の約１．０×１０５～約２．５×１０８個の上述した初代Ｔ細胞が含まれる。様々な場合では、用量には、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積の約１．０×１０５～約２．５×１０８個の本明細書に記載の低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞が含まれる。他の場合では、用量は、初代Ｔ細胞または低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞を含む、約１．０×１０５～約２．５×１０８個のＴ細胞よりも低い範囲である。更に他の場合では、用量は、初代Ｔ細胞及び低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞を含む、約１．０×１０５～約２．５×１０８個のＴ細胞よりも高い範囲である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約１．０×１０５～約１．０×１０７個の細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞）の単一用量として投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約０．５×１０５～約１．０×１０７、約１．０×１０５～約１．０×１０７、約１．０×１０５～約１．０×１０７、約５．０×１０５～約１×１０７、約１．０×１０６～約１×１０７、約５．０×１０６～約１．０×１０７、約１．０×１０５～約５．０×１０６、約１．０×１０５～約１．０×１０６、約１．０×１０５～約５．０×１０５、約１．０×１０５～約５．０×１０６、約２．０×１０５～約５．０×１０６、約３．０×１０５～約５．０×１０６、約４．０×１０５～約５．０×１０６、約５．０×１０５～約５．０×１０６、約６．０×１０５～約５．０×１０６、約７．０×１０５～約５．０×１０６、約８．０×１０５～約５．０×１０６、または約９．０×１０５～約５．０×１０６個の細胞の単一用量として投与される。いくつかの実施形態では、用量は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約０．２×１０６～約５．０×１０６個の細胞である。多くの実施形態では、用量は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約０．２×１０６～約５．０×１０６個よりも低い範囲である。多くの実施形態では、用量は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約０．２×１０６～約５．０×１０６個よりも高い範囲である。例となる実施形態では、単一用量は、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積のものである。いくつかの実施形態では、用量は、静脈内に投与される。
例となる実施形態では、細胞は、５０ｋｇを超える対象の場合は約１．０×１０６～約５．０×１０８個の細胞（例えば、初代Ｔ細胞及び低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞）の単一用量で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、５０ｋｇ以下の対象の場合は体重１ｋｇ当たり約０．５×１０６～約１．０×１０９、約１．０×１０６～約１．０×１０９、約１．０×１０６～約１．０×１０９、約５．０×１０６～約１．０×１０９、約１．０×１０７～約１．０×１０９、約５．０×１０７～約１．０×１０９、約１．０×１０６～約５．０×１０７、約１．０×１０６～約１．０×１０７、約１．０×１０６～約５．０×１０７、約１．０×１０７～約５．０×１０８、約２．０×１０７～約５．０×１０８、約３．０×１０７～約５．０×１０８、約４．０×１０７～約５．０×１０８、約５．０×１０７～約５．０×１０８、約６．０×１０７～約５．０×１０８、約７．０×１０７～約５．０×１０８、約８．０×１０７～約５．０×１０８、または約９．０×１０７～約５．０×１０８個の細胞の単一用量として投与される。多くの実施形態では、細胞は、５０ｋｇを超える対象の場合は約１．０×１０７～約２．５×１０８個の細胞の単一用量で投与される。いくつかの実施形態では、細胞は、５０ｋｇを超える対象の場合は約１．０×１０７～約２．５×１０８個の細胞よりも低い範囲の単一用量で投与される。いくつかの実施形態では、細胞は、５０ｋｇを超える対象の場合は約１．０×１０７～約２．５×１０８個の細胞よりも高い範囲の単一用量で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、静脈内に投与される。例となる実施形態では、単一用量は、約１０ｍｌ～５０ｍｌの体積のものである。いくつかの実施形態では、用量は、静脈内に投与される。
例となる実施形態では、用量は、１分当たり約１～５０ｍｌ、１分当たり１～４０ｍｌ、１分当たり１～３０ｍｌ、１分当たり１～２０ｍｌ、１分当たり１０～２０ｍｌ、１分当たり１０～３０ｍｌ、１分当たり１０～４０ｍｌ、１分当たり１０～５０ｍｌ、１分当たり２０～５０ｍｌ、１分当たり３０～５０ｍｌ、１分当たり４０～５０ｍｌの速度で静脈内に投与される。多数の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与のための１つ以上の注入袋内で保管される。いくつかの実施形態では、用量は、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、６０分、７０分、８０分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分、２４０分、または３００分以下で完全に投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の単一用量は、単一の注入袋に存在する。他の実施形態では、医薬組成物の単一用量は、２、３、４または５個の別個の注入袋に分割される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、２、３、４、５、６回またはそれ以上の用量などの複数回の用量で投与される。いくつかの実施形態では、複数の用量の各用量は、１～２４時間の範囲空けて対象に投与される。一部の事例では、後続の用量は、最初または先行の用量から約１時間～約２４時間（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または約２４時間）後に投与される。いくつかの実施形態では、複数の用量の各用量は、約１日～２８日の範囲空けて対象に投与される。一部の事例では、後続の用量は、最初または先行の用量から約１日～約２８日（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または約２８日）後に投与される。多くの実施形態では、複数の用量の各用量は、１週～約６週の範囲空けて対象に投与される。特定の事例では後続の用量は、最初または先行の用量から約１週～約６週（例えば、約１、２、３、４、５、または６週）後に投与される。いくつかの実施形態では、複数の用量の各用量は、約１ヶ月～約１２ヶ月の範囲空けて対象に投与される。いくつかの事例では後続の用量は、最初または先行の用量から約１ヶ月～約１２ヶ月（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月）後に投与される。
いくつかの実施形態では、対象は、第１の時点で第１の投薬レジメンが投与され、次いでその後、第２の時点で第２の投薬レジメンが投与される。いくつかの実施形態では、第１の投薬レジメンは、第２の投薬レジメンと同じである。他の実施形態では、第１の投薬レジメンは、第２の投薬レジメンとは異なる。一部の事例では、第１の投薬レジメン及び第２の投薬レジメンにおける細胞の数は、同じである。一部の事例では、第１の投薬レジメン及び第２の投薬レジメンにおける細胞の数は、異なる。一部の場合では、第１の投薬レジメン及び第２の投薬レジメンにおける用量の数は、同じである。一部の場合では、第１の投薬レジメン及び第２の投薬レジメンにおける用量の数は、異なる。
いくつかの実施形態では、第１の投薬レジメンには、第１のＣＡＲを発現する低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞が含まれ、第２の投薬レジメンには、第２のＣＡＲを発現する低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞が含まれ、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは異なる。例えば、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは、異なる標的抗原に結合する。一部の場合では、第１のＣＡＲには、抗原に結合するｓｃＦｖが含まれ、第２のＣＡＲには、異なる抗原に結合するｓｃＦｖが含まれる。いくつかの実施形態では、第１の投薬レジメンには、第１のＣＡＲを発現する低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞が含まれ、第２の投薬レジメンには、第２のＣＡＲを発現する低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞が含まれ、第１のＣＡＲ及び第２のＣＡＲは同じである。第１の投薬レジメンは、第２の投薬レジメンから少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１～３ヶ月、１～６ヶ月、４～６ヶ月、３～９ヶ月、３～１２ヶ月、またはそれを超える月数空けて対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、疾患（例えば、がん）の過程中に複数の投薬レジメンが投与され、投薬レジメンの少なくとも２つは、本明細書に記載の同じタイプの低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞を含む。他の実施形態では、複数の投薬レジメンの少なくとも２つは、本明細書に記載の異なるタイプの低免疫Ｔ細胞または初代Ｔ細胞を含む。
Ｚ．Ｔ細胞を含む低免疫原性細胞を投与するための方法
本明細書に更に詳細に記載されているように、本明細書では、低免疫原性細胞、特に低免疫原性Ｔ細胞の投与を介して病態、障害、または障害を有する患者を治療するための方法が提供される。理解されるように、療法のタイミング及び／または組み合わせに関する本明細書に記載の複数の実施形態のすべてについて、細胞の投与は、所望の部位での導入された細胞の少なくとも部分的局在化をもたらす方法または経路によって達成される。細胞は、所望の部位に直接注入され、埋め込まれ、または移植され得るか、または代替として、所望の箇所への送達をもたらす任意の適切な経路によって投与され得、埋め込まれた細胞または細胞の構成要素の少なくとも一部分は、生存したままである。
本明細書では、病態、障害、または障害を有する患者を治療するための方法であって、対象、例えば、ヒト患者への低免疫原性細胞（例えば、初代Ｔ細胞、低免疫原性人工多能性幹細胞から分化したＴ細胞、または本明細書に記載の低免疫原性人工多能性幹細胞から分化した他の細胞）の集団の投与を含む、方法が提供される。例えば、低免疫原性初代Ｔ細胞、例えば、限定されないが、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、非制御性Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ９細胞、Ｔｈ１７細胞、Ｔ濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、セントラルメモリーＴ（Ｔｃｍ）細胞、エフェクターメモリーＴ（Ｔｅｍ）細胞、ＣＤ４５ＲＡを発現するエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＲＡ細胞）、組織耐性メモリー（Ｔｒｍ）細胞、バーチャルメモリーＴ細胞、自然メモリーＴ細胞、メモリー幹細胞（Ｔｓｃ）、γδＴ細胞、及び任意の他のサブタイプのＴ細胞の集団が、病態、障害、または障害を治療するために患者に投与される。いくつかの実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤（例えば、限定されないがリンパ球枯渇剤）は、低免疫原性細胞の集団の投与の前に患者に投与されない。いくつかの実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤は、細胞の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日またはそれ以上前に投与される。いくつかの実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤は、細胞の投与の少なくとも１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週またはそれ以上前に投与される。多数の実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤は、細胞の投与の後に患者に投与されず、または細胞の投与の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日またはそれ以上後に投与される。いくつかの実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤は、細胞の投与の少なくとも１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週またはそれ以上後に投与される。免疫抑制及び／または免疫調節剤が細胞の投与の前または後に患者に投与されるいくつかの実施形態では、投与は、ＭＨＣ Ｉ及び／またはＭＨＣ ＩＩ発現を有し、かつＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７などからなる群から選択される１つ以上の受容体の外因的発現を有しない細胞のために必要とされるであろうものよりも少ない投薬量である。
免疫抑制及び／または免疫調節剤（例えば、限定されないがリンパ球枯渇剤）の非限定的な例には、シクロスポリン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、メトトレキサート、金塩、スルファサラジン、抗マラリア剤、ブレキナー、レフルノミド、ミゾリビン、１５－デオキシスペルグアリン、６－メルカプトプリン、シクロホスファミド、ラパマイシン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン、チモペンチン、チモシン－α及び同様の薬剤が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫抑制及び／または免疫調節剤は、ＩＬ－２受容体のｐ７５に結合する抗体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６、ＩＧＦ、ＩＧＦＲ１、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＣＤ１１ａ、またはＣＤ５８に結合する抗体、及びそれらのリガンドのいずれかに結合する抗体からなる免疫抑制性抗体の群から選択される。いくつかの実施形態では、かかる免疫抑制及び／または免疫調節剤は、可溶性ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１０、Ｂ７分子（例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、その変異体、及びその断片）、ＩＣＯＳ、及びＯＸ４０、ネガティブＴ細胞調節因子の阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ－４に対する抗体）ならびに同様の薬剤から選択され得る。
免疫抑制及び／または免疫調節剤が細胞の投与の前または後に患者に投与されるいくつかの実施形態では、投与は、ＭＨＣ Ｉ及び／またはＭＨＣ ＩＩ発現、ＴＣＲ発現を有し、かつＣＤ４７の外因的発現を有しない細胞のために必要とされるであろうものよりも少ない投薬量である。免疫抑制及び／または免疫調節剤が細胞の第１の投与の前または後に患者に投与されるいくつかの実施形態では、投与は、ＭＨＣ Ｉ及びＭＨＣ ＩＩ発現、ＴＣＲ発現を有し、かつＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７などからなる群から選択される１つ以上の受容体の外因的発現を有しない細胞のために必要とされるであろうものよりも少ない投薬量である。
いくつかの実施形態では、記載される細胞は、ＣＤ９４、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＰＤ－１、阻害性ＮＫ細胞受容体、及び活性化ＮＫ受容体からなる群から選択される１つ以上の受容体に結合し、及び／またはそれと相互作用する治療剤と共投与される。一部の事例では、治療剤は、ＮＫ細胞の１つ以上のサブ集団を含む、ＮＫ細胞の表面上の受容体に結合する。いくつかの実施形態では、治療剤は、抗体ならびにその断片及び変異体、抗体模倣体、小分子、遮断ペプチド、及び受容体アンタゴニストからなる群から選択される。
治療用途では、開示される方法に従って調製された細胞は、典型的には、等張性賦形剤を含む医薬組成物の形態で供給され得、ヒト投与のために十分に無菌である条件下で調製される。細胞組成物の医薬製剤における一般原則については、“Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，”ｂｙ Ｍｏｒｓｔｙｎ ＆ Ｓｈｅｒｉｄａｎ ｅｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６、及び“Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｅ．Ｄ．Ｂａｌｌ，Ｊ．Ｌｉｓｔｅｒ ＆ Ｐ．Ｌａｗ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，２０００を参照されたい。細胞は、分布または臨床的使用のために好適なデバイスまたは容器に包装され得る。
実施例１：ＭＨＣ Ｉ／ＩＩノックアウト細胞におけるＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、またはＰＤ－Ｌ１の過剰発現
様々な例示的分子の過剰発現がＮＫ細胞媒介自然免疫応答の活性化を妨げ得るかどうかを決定するために、実験が行われた。Ｋ５６２細胞などのＨＬＡ－Ｉ／ＨＬＡ－ＩＩノックアウト（ＭＨＣクラスＩ／ＩＩノックアウト）細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで適応自然応答を誘発しないことが、当技術分野で認識されている。Ｋ５６２細胞におけるＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、及びＰＤ－Ｌ１などの様々な分子の過剰発現は、ＮＫ細胞媒介細胞毒性の活性化を防ぐために研究された。簡単に言うと、標準的なノックイン技術によって、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１のいずれかを過剰発現するように、Ｋ５６２細胞を操作した。得られた改変されたＫ５６２細胞を分析し、ＮＫ細胞によるＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ誘導性殺傷を阻害できるかどうかを決定した。図１を参照されたい。
未改変Ｋ５６２細胞のＨＬＡ－Ｉ、ＨＬＡ－ＩＩ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｇ及びＰＤ－Ｌ１の表面発現、ならびにそれらのＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－ＧまたはＰＤ－Ｌ１のいずれかの過剰発現を、標準的なフローサイトメトリー法を使用して測定した（図２～図５）。データは、未改変Ｋ５６２細胞と比較して、Ｋ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ細胞がより高いレベルのＨＬＡ－Ｅタンパク質を発現することを示した。Ｋ５６２＋ＨＬＡ－ＧＫＩ細胞、Ｋ５６２＋ＰＤ－Ｌ１ＫＩ細胞、及びＫ５６２＋ＣＤ４７ＫＩ細胞についても同様のデータが得られた。
ＨＬＡ－Ｉ及び／またはＨＬＡ－ＩＩ抗原が「ｉｎ ｖｉｖｏ」細胞上で発現されることも決定された（図２Ａ～２Ｄ）。「ｉｎ ｖｉｖｏ」Ｋ５６２細胞を得るために、Ｋ５６２細胞をヒト化マウスに注射し、２４時間または７２時間後にＫ５６２細胞を回収した。ＨＬＡ－Ｉ抗原及びＨＬＡ－ＩＩ抗原は、マウスへのｉｎ ｖｉｖｏ移植後に上方制御されなかった。
ＮＫ細胞によるＫＩＲ受容体の発現を評価し、これらの細胞が「自己喪失」応答に関与していることを確認した。ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞などの未成熟ＮＫ細胞は、ＫＩＲ２ＤＬ受容体を発現せず、おそらく「自己喪失」反応には関与していない。しかし、ＣＤ５６ ｄｉｍ ＮＫ細胞などの成熟ＮＫ細胞は、ＫＩＲ２ＤＬ受容体を発現し、「自己喪失」反応に関与している。未選別ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ未成熟ＮＫ細胞、及びＣＤ５６ ｄｉｍ 成熟ＮＫ細胞におけるＫＩＲ２ＤＬの表面発現を、標準的なフローサイトメトリー法を使用して測定した（図６Ａ～６Ｃ）。成熟ＮＫ細胞は、アイソタイプ対照と比較して、より高いレベル（３７倍高い）でＫＩＲ２ＤＬを発現した。
ＣＤ５６及びＣＤ９４の発現を、様々なＮＫ細胞亜集団を含む刺激されたＮＫ細胞において評価した（図８Ａ～８Ｊ）。未成熟ＮＫ細胞、成熟ＮＫ細胞、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、及びＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞集団の割合を決定した（図７Ａ～７Ｅ）。ＣＤ９４がＨＬＡ－Ｅの受容体であることは当業者には認識されている。
標準的な細胞死滅アッセイを実施し、特定のＮＫ細胞亜集団がＨＬＡ－Ｅを過剰発現する改変Ｋ５６２細胞を認識して死滅させることができるかどうかを決定した（図８Ａ～８Ｊ）。ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞（図８Ａ～８Ｊの「Ｋ５６２＋ＨＬＡ－ＥＫＩ」）は、未選別ＮＫ細胞及び成熟ＮＫ細胞（すなわち、ＣＤ５６ ｄｉｍ／ＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞）によるＮＫ細胞媒介溶解から保護されなかった。未成熟ＮＫ細胞（つまり、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ／ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞）は、未改変Ｋ５６２細胞及びＨＬＡ－Ｅノックイン Ｋ５６２細胞を認識して死滅させることができなかった。ＨＬＡ－Ｅを過剰発現するＫ５６２細胞は、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によって死滅しなかったが、ＣＤ９４ ｄｉｍ ＮＫ細胞によって死滅した（図８Ａ～８Ｊ）。言い換えれば、ＨＬＡ－Ｅを過剰発現するＫ５６２細胞は、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によるＮＫ細胞媒介溶解を回避した。
ＫＩＲ２ＤＬ４及びＣＤ５６の発現を、ＮＫ細胞亜集団を含む刺激されたＮＫ細胞において評価した（図９Ａ）。未成熟ＮＫ細胞、成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞、ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞集団の割合（図９Ｂ～９Ｇ）。ＮＫ細胞の２０％未満がＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ細胞であり（図９Ｂ～９Ｄ）、ＮＫ細胞の８０％超がＫＩＲ２ＤＬ４ ｄｉｍ細胞であった（図９Ｅ～９Ｇ）。ＫＩＲ２ＤＬ４がＨＬＡ－Ｇの受容体であることは、当業者には認識されている。
標準的な細胞死滅アッセイを実施し、特定のＮＫ細胞亜集団がＨＬＡ－Ｇを過剰発現する改変Ｋ５６２細胞を認識して死滅させることができるかどうかを決定した（図１０Ａ～１０Ｊ）。ＨＬＡ－Ｇを過剰発現するＫ５６２細胞は、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によって死滅しなかったが、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｄｉｍ ＮＫ細胞によって死滅した（図１０Ｄ～１０Ｊ）。ＨＬＡ－Ｇを過剰発現するＫ５６２細胞は、ＫＩＲ３ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によるＮＫ細胞媒介溶解を回避した。
ＰＤ－１及びＣＤ５６の発現を、ＮＫ細胞亜集団を含む刺激されたＮＫ細胞において評価した（図１１Ａ）。未成熟ＮＫ細胞、成熟ＮＫ細胞、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞及びＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞を含む様々なＮＫ細胞集団の割合（図１１Ｂ～１１Ｇ）。
標準的な細胞死滅アッセイを実施し、特定のＮＫ細胞亜集団がＰＤ－Ｌ１を過剰発現する改変Ｋ５６２細胞を認識して死滅させることができるかどうかを決定した（図１２Ａ～１２Ｊ）。ＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＫ５６２細胞は、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によって死滅しなかったが、ＰＤ－１ ｄｉｍ ＮＫ細胞によって死滅した（図１２Ａ～１２Ｊ）。
ＮＫ細胞媒介死滅を測定するために、標準的なアッセイを使用してグランザイムＢ及びパーフォリン放出アッセイを実施した。未成熟ＮＫ細胞は自己喪失シグナルを認識できず、したがって低レベルのグランザイムＢ及びパーフォリンしか放出しないことが判明した（図１３Ａ～１３Ｄ）。データは、未選別初代ＮＫ細胞が、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞、及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞を死滅させることができることを示した。また、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞、及びＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞では、非刺激条件及び刺激条件において、ＮＫ細胞刺激リガンド及び抑制リガンドの発現が影響を受けないことも判明した（図１４Ａ～１４Ｄ）。
ｉｎ ｖｉｖｏ死滅アッセイは、（ｉ）Ｔ細胞とＭＨＣ Ｉ／ＩＩ欠損細胞の混合物、または（ｉｉ）Ｔ細胞とＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－ＧまたはＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ欠損細胞の混合物のいずれかを使用して実行された。ヒトＮＫ細胞（ＣＤ９４について未選別または選別されたものなど）の養子移入後、細胞の混合物をＮＳＧマウスの腹膜に注射した。４８時間後、腹膜細胞を回収し、選別した。細胞の比率を計算し、プロットした（図１５Ａ～１５Ｄ）。Ｋ５６２細胞はｉｎ ｖｉｖｏ死滅を受け、ＨＬＡ－Ｅを過剰発現するＫ５６２細胞は、ＣＤ９４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞による死滅から保護された（図１５Ｂ）。ＨＬＡ－Ｇを過剰発現するＫ５６２細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏでＮＫ細胞死滅によって保護されなかったが、改変Ｋ５６２細胞は、ＫＩＲ２ＤＬ４ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によるＮＫ細胞死滅から保護された（図１５Ｃ）。ＰＤ－Ｌ１を過剰発現するＫ５６２細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏでＮＫ細胞死滅によって保護されなかったが、改変Ｋ５６２細胞は、ＰＤ－１ ｈｉｇｈ ＮＫ細胞によるＮＫ細胞死滅から保護された（図１５Ｄ）。
ヒト化マウスのＴ細胞活性化とドナー特異的抗体（ＤＳＡ）を測定するために、マウスに、ヒトＴ細胞、Ｋ５６２細胞、ＨＬＡ－ＥノックインＫ５６２細胞、ＨＬＡ－ＧノックインＫ５６２細胞、またはＰＤ－Ｌ１ノックインＫ５６２細胞のいずれかを注射した。６日後、脾細胞にドナー細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで再曝露し、スポット頻度によりヒトＩＦＮｇ放出を測定した（Ｔ細胞の活性化を示す）。図１６Ａを参照されたい。ドナー特異的抗体（ＤＳＡ）を分析するために、血清をｉｎ ｖｉｔｒｏで注入細胞とインキュベートし、ＦＩＴＣ ＩｇＭ抗体で標識した。ＩｇＭは、フロー（平均蛍光強度）によって測定した。図１６Ｂを参照されたい。ＨＬＡ－ＥまたはＨＬＡ－Ｇのいずれかの過剰発現により、アロペプチドの提示が生じ、それによってＴ細胞及びＢ細胞の活性化がもたらされた。
結果
実験の結果から、ＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ抗原を発現しない細胞（Ｋ５６２細胞など）によるＨＬＡ－Ｅの過剰発現は、ＮＫ細胞がＣＤ９４（ＨＬＡ－Ｅの受容体；図８Ａ～８Ｊを参照）を発現している場合、そのような細胞をＮＫ細胞媒介細胞溶解から保護することが示された。フローサイトメトリーデータは、ＮＫ細胞の亜集団（全ＮＫ細胞の約４０％未満）がＣＤ９４を発現することを示した（図７Ａ～７Ｇ）。ＨＬＡ－Ｅ過剰発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで初代ＮＫ細胞によるＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ誘発性殺傷を阻害するのに十分ではなかった（図１３Ｂ、図１４Ｂ及び図１５Ｂ）。
ＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ抗原を発現しない細胞によるＨＬＡ－Ｇの過剰発現は、ＮＫ細胞がＫＩＲ２ＤＬ４（ＨＬＡ－Ｇの受容体；図１０Ａ～１０Ｊを参照）を発現する場合、そのような細胞をＮＫ細胞媒介細胞溶解から保護した。ＮＫ細胞の亜集団（全ＮＫ細胞の約２０％未満）は、高レベルのＫＩＲ２ＤＬ４を発現する（図９Ａ～９Ｇ）。ＨＬＡ－Ｇ過剰発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで初代ＮＫ細胞によるＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ誘発性殺傷を阻害するのに十分ではなかった（図１３Ｃ、図１４Ｃ及び図１５Ｃ）。
ＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ抗原を発現しない細胞によるＰＤ－Ｌ１の過剰発現は、ＮＫ細胞がＰＤ－１（ＰＤ－Ｌ１の受容体；図１１Ａを参照）を発現する場合、そのような細胞をＮＫ細胞媒介細胞溶解から保護した。すべてのＮＫ細胞のうちの亜集団のみ、例えば約４５％未満のみがＰＤ－１を発現する（図１１Ａ～１１Ｇ）。ＰＤ－Ｌ１過剰発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで初代ＮＫ細胞によるＨＬＡ－Ｉ／－ＩＩ誘発性殺傷を阻害するのに十分ではなかった（図１３、図１４及び図１５）。
ＨＬＡ－Ｅ過剰発現、ＨＬＡ－Ｇ過剰発現、またはＰＤ－Ｌ１過剰発現は、適応免疫系へのアロペプチド提示を防ぐ免疫回避の概念に影響を及ぼさないことが判明した。
すべての見出し及び節の指定は、明確性及び参照目的のためにのみ使用され、いかようにも限定するものとして解釈されるべきではない。例えば、当業者は、本明細書に記載の技術の趣旨及び範囲に従って適切な場合には異なる見出し及び節から様々な実施形態を組み合わせる有用性を理解するであろう。
本明細書で引用されるすべての参考文献は、各々の個々の刊行物または特許もしくは特許出願がすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度にそれらの全体が本明細書に参照により及びすべての目的のために組み込まれる。
本出願の多くの改変及び類型は、当業者に明らかになるように、その趣旨及び範囲から逸脱することなく作出され得る。本明細書に記載の特定の実施形態及び実施例は、例示として提供されるにすぎず、出願は、特許請求の範囲に権利が与えられる均等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定される。

Claims (205)

  1. ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含む操作された細胞。
  2. 前記操作された細胞は、ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む、請求項１に記載の操作された細胞。
  3. 未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を更に含む、請求項１に記載の操作された細胞。
  4. （ｉ）未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減；ならびにＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含む、低免疫原性細胞。
  5. ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む、請求項１～４に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  6. ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む、請求項１～５に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  7. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は抗原結合クレフトに改変を含む、請求項１～６に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  8. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、タンパク質の安定性を増加させる改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、タンパク質の安定性を増加させる改変を含む、請求項１～７に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  9. ｉ）前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｅタンパク質と比較して、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質がより長期間細胞表面に留まるように、前記非抗原結合ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のリサイクル速度を上昇させる改変を含み、及び／またはｉｉ）前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、野生型ＨＬＡ－Ｇタンパク質と比較して、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質がより長期間細胞表面に留まるように、前記非抗原結合ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のリサイクル速度を上昇させる改変を含む、請求項１～８に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  10. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を妨げ、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる、請求項１～９のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  11. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  12. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１１に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  13. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１１または１２に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  14. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１１に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  15. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１１または１４に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  16. 前記第１のデコイペプチドと前記第２のデコイペプチドは、異なるペプチドである、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  17. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  18. 前記ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する、請求項１７に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  19. ｉ）前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む、請求項１１～１８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  20. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、前記リンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  21. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、前記第１のリンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続し、前記第２のリンカーは、前記Ｂ２Ｍサブユニットを前記抗原ペプチドに接続する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  22. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現しない、請求項１～２１のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  23. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ及び／またはＨＬＡ－ＤＲ抗原を発現しない、請求項１～２２のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  24. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、未変化または未改変の野生型細胞と比較して、ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）及び／またはＭＨＣクラスＩＩトランスアクチベーター（ＣＩＩＴＡ）の発現の低減を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  25. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを発現しない、請求項１～２４のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  26. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の操作された細胞または前記低免疫原性細胞。
  27. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の操作された細胞または前記低免疫原性細胞。
  28. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする前記第１のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入される、請求項２６または２７に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  29. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入される、請求項２６または２７に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  30. 前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする前記第３のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される、請求項２６～２９のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  31. 前記第１、前記第２及び／または前記第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  32. 前記セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される、請求項３１に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  33. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座のうちのいずれか２つは、同じ遺伝子座である、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  34. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  35. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  36. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び前記第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む、請求項２６～３４のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  37. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び／または前記第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞に導入される、請求項２６～３６のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  38. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、ヒト細胞または動物細胞に由来する、請求項１～３７のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  39. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、人工多能性幹細胞またはその子孫に由来する分化細胞である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  40. 前記分化細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び内皮細胞からなる群から選択される、請求項３９に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  41. 前記操作された細胞または前記低免疫原性細胞は、初代免疫細胞またはその子孫である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  42. 前記初代免疫細胞またはその子孫は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項４１に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  43. 前記Ｔ細胞は、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項４０または４２に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  44. 前記１つ以上のＣＡＲは、前記Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ、前記Ｔ細胞がＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２０特異的ＣＡＲ、前記Ｔ細胞がＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２２特異的ＣＡＲ、及び前記Ｔ細胞がＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４３に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  45. 前記Ｔ細胞は、前記細胞がＣＤ１９／ＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるような、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲを含む、請求項４４に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  46. 前記ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドによってコードされる、請求項４５に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  47. 前記ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、２つの別個のポリヌクレオチドによってコードされる、請求項４５に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  48. 前記１つ以上のＣＡＲは、レンチウイルスベクターを使用して前記Ｔ細胞に導入される、請求項４０及び４２～４７のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  49. 前記１つ以上のＣＡＲは、レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで前記Ｔ細胞に導入される、請求項４０及び４２～４８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  50. 前記１つ以上のＣＡＲは、前記レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、及び（ｉｉ）前記１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって前記Ｔ細胞に導入され、前記レシピエント患者の前記操作されたＴ細胞は、前記１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される、請求項４９に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  51. 前記１つ以上のＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して前記Ｔ細胞に導入される、請求項４０及び４２～４８のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  52. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、ドナー対象からｅｘ ｖｉｖｏで行われる、請求項５１に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  53. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レンチウイルスベクターを使用して行われる、請求項５２に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  54. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで実施される、請求項５３記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  55. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、前記レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、（ｉｉ）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集成分をコードするポリヌクレオチド、及び（ｉｉｉ）前記１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって行われ、前記レシピエント患者のＴ細胞は、前記レンチウイルスベクターで形質導入される、請求項５４に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  56. 前記分化細胞もしくはその子孫、または前記初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時にＮＫ細胞媒介細胞毒性を回避する、請求項３９～５５のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  57. 前記分化細胞もしくはその子孫、または前記初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時に成熟ＮＫ細胞による細胞溶解から保護される、請求項３９～５６のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  58. 前記分化細胞もしくはその子孫、または前記初代免疫細胞もしくはその子孫は、レシピエント患者への投与時に、前記細胞に対する免疫応答を誘導しない、請求項３９～５７のいずれか一項に記載の操作された細胞または低免疫原性細胞。
  59. 請求項１～５８のいずれか一項に記載の操作された細胞の集団、または請求項４～５８のいずれか一項に記載の低免疫原性細胞の集団、及び医薬的に許容される添加剤、担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
  60. 状態または疾患の治療を必要とする患者の前記状態または疾患を治療する方法であって、前記患者に、請求項３９～５８のいずれか一項に記載の分化細胞の集団を投与することを含む、前記方法。
  61. 前記分化細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び内皮細胞からなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
  62. ＣＤ９４、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＰＤ－１、阻害性ＮＫ細胞受容体、及び活性化ＮＫ受容体からなる群から選択されるＮＫ細胞上の１つ以上の受容体に結合し、及び／またはそれと相互作用する治療剤を更に投与する、請求項６０に記載の方法。
  63. 前記治療剤は、抗体ならびにその断片及び変異体、抗体模倣体、小分子、遮断ペプチド、ならびに受容体アンタゴニストからなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
  64. 前記状態または前記疾患は、がん、心血管疾患、脳卒中、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、腹部大動脈瘤（ＡＡＡ）、頸動脈疾患（ＣＡＤ）、動静脈奇形（ＡＶＭ）、包括的高度慢性下肢虚血（ＣＬＴＩ）、肺塞栓症（血栓）、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、慢性静脈不全（ＣＶＩ）、及び任意の別の血管障害／状態からなる群から選択される、請求項６０または６１に記載の方法。
  65. 前記投与は、静脈内注射、筋肉内注射、血管内注射、及び移植からなる群から選択される、請求項６０～６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記患者に請求項４１～５８のいずれか一項に記載される初代免疫細胞の集団を投与することを含む、がんを治療することを必要とする患者におけるがんを治療する方法。
  67. 前記初代免疫細胞は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
  68. レシピエント患者における疾患または状態を治療するための操作されたＴ細胞の集団の使用であって、前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含み、前記操作されたＴ細胞は、初代Ｔ細胞もしくはその子孫から増殖するか、またはｉＰＳＣもしくはその子孫に由来する、前記使用。
  69. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む、請求項６８に記載の使用。
  70. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む、請求項６８または６９に記載の使用。
  71. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の使用。
  72. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  73. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項６８～７２のいずれか一項に記載の使用。
  74. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  75. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項６８～７１及び７４のいずれか一項に記載の使用。
  76. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  77. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項６８～７１及び７６のいずれか一項に記載の使用。
  78. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  79. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  80. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の使用。
  81. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１及び７８のいずれか一項に記載の使用。
  82. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１及び７９のいずれか一項に記載の使用。
  83. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１及び８０のいずれか一項に記載の使用。
  84. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１、７８及び８１のいずれか一項に記載の使用。
  85. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１、７９及び８２のいずれか一項に記載の使用。
  86. 前記操作されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項６８～７１、８０及び８３のいずれか一項に記載の使用。
  87. 前記操作されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む、請求項６８～７１、７８、８１及び８４のいずれか一項に記載の使用。
  88. 前記操作されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項６８～７１、７９、８２及び８５のいずれか一項に記載の使用。
  89. 前記操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項６８～７１、８０、８３及び８６のいずれか一項に記載の使用。
  90. 前記操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む、請求項６８～７１、７８、８１、８４及び８７のいずれか一項に記載の使用。
  91. 前記操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項６８～７１、７９、８２、８５及び８８のいずれか一項に記載の使用。
  92. 前記操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項６８～７１、８０、８３、８６及び８９のいずれか一項に記載の使用。
  93. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は前記抗原結合クレフトに改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は前記抗原結合クレフトに改変を含む、請求項６８～９２のいずれか一項に記載の使用。
  94. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を妨げ、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる、請求項６８～９３のいずれか一項に記載の使用。
  95. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む、請求項６８～９４のいずれか一項に記載の使用。
  96. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている、請求項９５に記載の使用。
  97. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項９５または９６に記載の使用。
  98. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている、請求項９５に記載の使用。
  99. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項９５または９８に記載の使用。
  100. 前記第１のデコイペプチドと前記第２のデコイペプチドは、異なるペプチドである、請求項９５～９９のいずれか一項に記載の使用。
  101. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む、請求項６８～１００のいずれか一項に記載の使用。
  102. 前記ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する、請求項６８～１０１のいずれか一項に記載の使用。
  103. ｉ）前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む、請求項６８～１０２のいずれか一項に記載の使用。
  104. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、前記リンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続する、請求項６８～８１、８２、８４、８５、８７、８８、９０、９１、９３～９７及び１００～１０３のいずれか一項に記載の使用。
  105. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、前記第１のリンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続し、前記第２のリンカーは、前記Ｂ２Ｍサブユニットを前記抗原ペプチドに接続する、請求項６８～８１、８２、８４、８５、８７、８８、９０、９１、９３～９７及び１００～１０３のいずれか一項に記載の使用。
  106. 前記操作されたＴ細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項６８～１０５のいずれか一項に記載の使用。
  107. 前記操作されたＴ細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項６８～１０５のいずれか一項に記載の使用。
  108. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする前記第１のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入され、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入され、及び／または前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする前記第３のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される、請求項１０６または１０７に記載の使用。
  109. 前記第１、前記第２及び／または前記第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される、請求項１０８に記載の使用。
  110. 前記セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される、請求項１０９に記載の使用。
  111. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座のうちの任意の２つは、同じ遺伝子座である、請求項１０８～１１０のいずれか一項に記載の使用。
  112. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である、請求項１０８～１１０のいずれか一項に記載の使用。
  113. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である、請求項１０８～１１０のいずれか一項に記載の使用。
  114. 前記操作されたＴ細胞は、前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び前記第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む、請求項１０８～１１２のいずれか一項に記載の使用。
  115. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び／または前記第３のポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して前記操作されたＴ細胞に導入される、請求項１０６～１１４のいずれか一項に記載の使用。
  116. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び／または前記第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して前記操作されたＴ細胞に導入される、請求項１０６～１１４のいずれか一項に記載の使用。
  117. 前記操作されたＴ細胞は、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項１０６～１１６のいずれか一項に記載の使用。
  118. 前記１つ以上のＣＡＲは、前記操作されたＴ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ１９特異的ＣＡＲ、前記操作されたＴ細胞がＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２０特異的ＣＡＲ、前記操作されたＴ細胞がＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＣＤ２２特異的ＣＡＲ、及び前記操作されたＴ細胞がＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞であるようなＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１７に記載の使用。
  119. 前記操作されたＴ細胞は、前記細胞がＣＤ１９／ＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞であるような、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲを含む、請求項１１７または１１８に記載の使用。
  120. 前記ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドによってコードされる、請求項１１７～１１９のいずれか一項に記載の使用。
  121. 前記ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ２２特異的ＣＡＲは、２つの別個のポリヌクレオチドによってコードされる、請求項１１７～１１９のいずれか一項に記載の使用。
  122. 前記１つ以上のＣＡＲは、レンチウイルスベクターを使用して前記操作されたＴ細胞に導入される、請求項１１７～１２１のいずれか一項に記載の使用。
  123. 前記１つ以上のＣＡＲは、前記レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで前記操作されたＴ細胞に導入される、請求項１１７～１２２のいずれか一項に記載の使用。
  124. 前記１つ以上のＣＡＲは、前記レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、及び（ｉｉ）１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって前記Ｔ細胞に導入され、前記レシピエント患者の前記操作されたＴ細胞は、前記１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される、請求項１２３に記載の使用。
  125. 前記１つ以上のＣＡＲは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して操作されたＴ細胞に導入される、請求項１１７～１２２のいずれか一項に記載の使用。
  126. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、ドナー対象からｅｘ ｖｉｖｏで行われる、請求項１２５に記載の使用。
  127. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、レンチウイルスベクターを使用して行われる、請求項１２５または１２６に記載の使用。
  128. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、前記レシピエント患者においてｉｎ ｖｉｖｏで行われる、請求項１２５に記載の使用。
  129. 前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集は、前記レシピエント患者を、（ｉ）ＣＤ４結合剤またはＣＤ８結合剤、（ｉｉ）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集成分をコードするポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）前記１つ以上のＣＡＲをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のレンチウイルスベクターを含む組成物と接触させることによって行われ、前記レシピエント患者のＴ細胞は、前記１つ以上のレンチウイルスベクターで形質導入される、請求項１２８に記載の使用。
  130. レシピエント患者における疾患または状態を治療するための操作された分化細胞の集団の使用であって、前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される１つ以上の外因性受容体、ならびに未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含み、前記操作された分化細胞は、ｉＰＳＣまたはその子孫に由来する、前記使用。
  131. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質、及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質からなる群から選択される２つ以上の外因性受容体を含む、請求項１３０に記載の使用。
  132. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を更に含む、請求項１３０または１３１に記載の使用。
  133. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を更に含む、請求項１３０～１３２のいずれか一項に記載の使用。
  134. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項１３０～１３３のいずれか一項に記載の使用。
  135. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項１３０～１３４のいずれか一項に記載の使用。
  136. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項１３０～１３３のいずれか一項に記載の使用。
  137. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項１３０～１３３及び１３６のいずれか一項に記載の使用。
  138. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ及びＣＤ１５５からなる群から選択される１つ以上の受容体の発現の低減及び／または発現の欠如を含む、請求項１３０～１３３のいずれか一項に記載の使用。
  139. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、ＨＬＡ－Ａ及びＨＬＡ－Ｂの発現の欠如を含む、請求項１３０～１３３及び１３８のいずれか一項に記載の使用。
  140. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項１３０または１３１に記載の使用。
  141. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項１３０または１３１に記載の使用。
  142. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原の発現の低減を含む、請求項１３０または１３１に記載の使用。
  143. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１及び１４０のいずれか一項に記載の使用。
  144. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１及び１４１のいずれか一項に記載の使用。
  145. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１及び１４２のいずれか一項に記載の使用。
  146. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１、１４０及び１４３のいずれか一項に記載の使用。
  147. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１、１４１及び１４４のいずれか一項に記載の使用。
  148. 前記操作された分化細胞は、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含み、未変化または未改変の野生型細胞と比較してＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡの発現の低減を含む、請求項１３０、１３１、１４２及び１４５のいずれか一項に記載の使用。
  149. 前記操作された分化細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４０、１４３及び１４６のいずれか一項に記載の使用。
  150. 前記操作された分化細胞は、ＭＨＣクラスＩヒト白血球抗原を発現せず、ＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４２、１４４及び１４７のいずれか一項に記載の使用。
  151. 前記操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４２、１４５及び１４８のいずれか一項に記載の使用。
  152. 前記操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及びＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４０、１４３、１４６及び１４９のいずれか一項に記載の使用。
  153. 前記操作された分化細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４２、１４４、１４７及び１５０のいずれか一項に記載の使用。
  154. 前記操作されたＴ細胞は、Ｂ２Ｍを発現せず、ＣＩＩＴＡを発現せず、ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質及び外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質を含む、請求項１３０、１３１、１４２、１４５、１４８及び１５１のいずれか一項に記載の使用。
  155. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は前記抗原結合クレフトに改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は前記抗原結合クレフトに改変を含む、請求項１３０～１５４のいずれか一項に記載の使用。
  156. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質への結合を妨げ、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトにおける改変は、抗原ペプチドの前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質への結合を妨げる、請求項１３０～１５５のいずれか一項に記載の使用。
  157. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が第１のデコイペプチドに結合するような改変を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が第２のデコイペプチドに結合するような改変を含む、請求項１３０～１５６のいずれか一項に記載の使用。
  158. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１５７に記載の使用。
  159. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の第１のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１５７または１５８に記載の使用。
  160. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１５７に記載の使用。
  161. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の第２のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１５７または１６０に記載の使用。
  162. 前記第１のデコイペプチドと前記第２のデコイペプチドは、異なるペプチドである、請求項１５７～１６１のいずれか一項に記載の使用。
  163. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含み、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む、請求項１３０～１６２のいずれか一項に記載の使用。
  164. 前記ＨＬＡ－Ｅの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｅシグナル伝達を低減させるかもしくは除去し、及び／または前記ＨＬＡ－Ｇの細胞内ドメインのうちの１つ以上の欠失は、ＨＬＡ－Ｇシグナル伝達を低減させるかもしくは除去する、請求項１６３に記載の使用。
  165. ｉ）前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含み、及び／またはｉｉ）前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質が抗原ペプチドに結合するときに前記変異体タンパク質が別の結合パートナーを認識しないように、前記変異体タンパク質の細胞外抗原結合ドメイン領域に欠失もしくは他の改変を含む、請求項１３０～１６４のいずれか一項に記載の使用。
  166. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、前記リンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続する、請求項１３０～１３７、１３９～１４１、１４３、１４４、１４６、１４７、１４９、１５０、１５２、１５３、１５５～１５９及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の使用。
  167. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、前記第１のリンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続し、前記第２のリンカーは、前記Ｂ２Ｍサブユニットを前記抗原ペプチドに接続する、請求項１３０～１３７、１３９～１４１、１４３、１４４、１４６、１４７、１４９、１５０、１５２、１５３、１５５～１５９及び１６３～１６５のいずれか一項に記載の使用。
  168. 前記操作された分化細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される１つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１３０～１６７のいずれか一項に記載の使用。
  169. 前記操作された分化細胞は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、及び前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つ以上の外因性ポリヌクレオチドを含む、請求項１３０～１６７のいずれか一項に記載の使用。
  170. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする前記第１のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第１の特定の遺伝子座に挿入され、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第２の特定の遺伝子座に挿入され、及び／または前記外因性ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする前記第３のポリヌクレオチドは、前記細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の第３の特定の遺伝子座に挿入される、請求項１６８または１６９に記載の使用。
  171. 前記第１、前記第２及び／または前記第３の特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される、請求項１７０に記載の使用。
  172. 前記セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される、請求項１７１に記載の使用。
  173. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座のうちの任意の２つは、同じ遺伝子座である、請求項１７０～１７２のいずれか一項に記載の使用。
  174. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、同じ遺伝子座である、請求項１７０～１７３のいずれか一項に記載の使用。
  175. 前記第１、前記第２及び前記第３の遺伝子座は、異なる遺伝子座である、請求項１７０～１７２のいずれか一項に記載の使用。
  176. 前記操作された分化細胞は、前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び前記第３のポリヌクレオチドからなる群から選択される２つのポリヌクレオチドを含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチドを更に含む、請求項１６８～１７４のいずれか一項に記載の使用。
  177. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び／または前記第３のポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集を使用して前記操作された分化細胞に導入される、請求項１６８～１７６のいずれか一項に記載の使用。
  178. 前記第１のポリヌクレオチド、前記第２のポリヌクレオチド及び／または前記第３のポリヌクレオチドは、レンチウイルスベクターを使用して前記操作された分化細胞に導入される、請求項１６８～１７７のいずれか一項に記載の使用。
  179. 抗原結合クレフトに改変を含む、ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）変異体タンパク質。
  180. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドが前記変異体タンパク質に結合するのを妨げる、請求項１７９に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  181. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、デコイペプチドに結合する、請求項１７９または１８０に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  182. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１７９～１８１のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  183. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１７９～１８２のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  184. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む、請求項１７９～１８３のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  185. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット及びリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖二量体を含み、前記リンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続する、請求項１７９～１８４のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  186. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、Ｂ２Ｍサブユニット、抗原ペプチド、第１のリンカー及び第２のリンカーを含むＨＬＡ－Ｅ単鎖三量体を含み、前記第１のリンカーは、前記ＨＬＡ－Ｅ重鎖と前記Ｂ２Ｍサブユニットを接続し、前記第２のリンカーは、前記Ｂ２Ｍサブユニットを前記抗原ペプチドに接続する、請求項１７９～１８４のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質。
  187. 抗原結合クレフトに改変を含む、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）変異体タンパク質。
  188. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトの改変は、抗原ペプチドが前記変異体タンパク質に結合するのを妨げる、請求項１８７に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質。
  189. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、デコイペプチドに結合する、請求項１８７または１８８に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質。
  190. 前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質に繋留されている、請求項１８９に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質。
  191. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質のデコイペプチドは、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質の抗原結合クレフトに結合する、請求項１８９または１９０に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質。
  192. 前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質は、前記細胞内ドメインのうちの１つ以上に欠失を含む、請求項１８７～１９１のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質。
  193. 請求項１７９～１８６のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチド構築物。
  194. 請求項１８７～１９２のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチド構築物。
  195. 前記ポリヌクレオチド構築物は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む、請求項１９３または１９４に記載のポリヌクレオチド構築物。
  196. 前記ポリヌクレオチド構築物は、前記ＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む、請求項１９５に記載のポリヌクレオチド構築物。
  197. 前記ポリヌクレオチド構築物は、前記ＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを細胞の少なくとも１つの対立遺伝子の特定の遺伝子座に挿入するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集のための１つ以上のポリヌクレオチドを更に含む、請求項１９５に記載のポリヌクレオチド構築物。
  198. 前記特定の遺伝子座は、セーフハーバー遺伝子座、ＲＨＤ遺伝子座、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢ遺伝子座、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｂ遺伝子座、ＨＬＡ－Ｃ遺伝子座、及びＣＤ１５５遺伝子座からなる群から選択される、請求項１９６または１９７に記載のポリヌクレオチド構築物。
  199. 前記セーフハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座、ＣＸＣＲ４遺伝子座、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ遺伝子座、ＡＬＢ遺伝子座、ＳＨＳ２３１遺伝子座、ＣＬＹＢＬ遺伝子座、Ｒｏｓａ遺伝子座、Ｆ３（ＣＤ１４２）遺伝子座、ＭＩＣＡ遺伝子座、ＭＩＣＢ遺伝子座、ＬＲＰ１（ＣＤ９１）遺伝子座、ＨＭＧＢ１遺伝子座、ＡＢＯ遺伝子座、ＦＵＴ１遺伝子座、及びＫＤＭ５Ｄ遺伝子座からなる群から選択される、請求項１９８に記載のポリヌクレオチド構築物。
  200. 請求項１７９～１８６のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、請求項１８７～１９２のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
  201. 請求項１７９～１８６のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｅ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
  202. 請求項１８７～１９２のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ｇ変異体タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、ＰＤ－Ｌ１タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと、を含む、単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
  203. プロモーターを更に含む、請求項１７９～１９９に記載の核酸構築物、または請求項２００～２０２に記載の単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
  204. 前記プロモーターは、構成的プロモーターである、請求項１７９～１９９に記載の核酸構築物、または請求項２００～２０２に記載の単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
  205. 前記プロモーターは、組織型特異的プロモーターである、請求項１７９～１９９に記載の核酸構築物、または請求項２００～２０２に記載の単一のバイシストロン性ポリヌクレオチド構築物。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023069790A1 (en) * 2021-10-22 2023-04-27 Sana Biotechnology, Inc. Methods of engineering allogeneic t cells with a transgene in a tcr locus and associated compositions and methods

Family Cites Families (104)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8724885D0 (en) 1987-10-23 1987-11-25 Binns M M Fowlpox virus promotors
US5674722A (en) 1987-12-11 1997-10-07 Somatix Therapy Corporation Genetic modification of endothelial cells
US5420032A (en) 1991-12-23 1995-05-30 Universitge Laval Homing endonuclease which originates from chlamydomonas eugametos and recognizes and cleaves a 15, 17 or 19 degenerate double stranded nucleotide sequence
US5792632A (en) 1992-05-05 1998-08-11 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
DE19539493A1 (de) 1995-10-24 1997-04-30 Thomae Gmbh Dr K Starker homologer Promotor aus Hamster
GB9526131D0 (en) 1995-12-21 1996-02-21 Celltech Therapeutics Ltd Recombinant chimeric receptors
WO1998041641A1 (en) 1997-03-20 1998-09-24 The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Recombinant antibodies and immunoconjugates targeted to cd-22 bearing cells and tumors
US6361996B1 (en) 1997-05-07 2002-03-26 University Of Utah Research Foundation Neuroepithelial stem cells and glial-restricted intermediate precursors
GB9710809D0 (en) 1997-05-23 1997-07-23 Medical Res Council Nucleic acid binding proteins
GB9710807D0 (en) 1997-05-23 1997-07-23 Medical Res Council Nucleic acid binding proteins
US6140081A (en) 1998-10-16 2000-10-31 The Scripps Research Institute Zinc finger binding domains for GNN
US8263402B1 (en) 1998-10-19 2012-09-11 Cornell Research Foundation, Inc. Method for isolating and purifying oligodendrocytes and oligodendrocyte progenitor cells
US6667176B1 (en) 2000-01-11 2003-12-23 Geron Corporation cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells
US6534261B1 (en) 1999-01-12 2003-03-18 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of endogenous gene expression in cells using zinc finger proteins
US6599692B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Sangamo Bioscience, Inc. Functional genomics using zinc finger proteins
US7070934B2 (en) 1999-01-12 2006-07-04 Sangamo Biosciences, Inc. Ligand-controlled regulation of endogenous gene expression
US6453242B1 (en) 1999-01-12 2002-09-17 Sangamo Biosciences, Inc. Selection of sites for targeting by zinc finger proteins and methods of designing zinc finger proteins to bind to preselected sites
US7030215B2 (en) 1999-03-24 2006-04-18 Sangamo Biosciences, Inc. Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
US6794136B1 (en) 2000-11-20 2004-09-21 Sangamo Biosciences, Inc. Iterative optimization in the design of binding proteins
ATE309536T1 (de) 1999-12-06 2005-11-15 Sangamo Biosciences Inc Methoden zur verwendung von randomisierten zinkfingerprotein-bibliotheken zur identifizierung von genfunktionen
WO2001059450A2 (en) 2000-02-08 2001-08-16 Sangamo Biosciences, Inc. Cells expressing zinc finger protein for drug discovery
US8273570B2 (en) 2000-05-16 2012-09-25 Riken Process of inducing differentiation of embryonic cell to cell expressing neural surface marker using OP9 or PA6 cells
JP2002060786A (ja) 2000-08-23 2002-02-26 Kao Corp 硬質表面用殺菌防汚剤
US7067317B2 (en) 2000-12-07 2006-06-27 Sangamo Biosciences, Inc. Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins
US20040224385A1 (en) 2001-08-20 2004-11-11 Barbas Carlos F Zinc finger binding domains for cnn
ES2342929T3 (es) 2001-09-26 2010-07-19 The Government of the United States of America as represented by the Secretary of Health and Human Anticuerpos anti-cd22 con afinidad aumentada por las celulas leucemicas que expresan cd22.
US7262054B2 (en) 2002-01-22 2007-08-28 Sangamo Biosciences, Inc. Zinc finger proteins for DNA binding and gene regulation in plants
WO2003070171A2 (en) 2002-02-15 2003-08-28 Cornell Research Foundation, Inc. Myelination of congenitally dysmyelinated forebrains using oligodendrocyte progenitor cells
US20050101014A1 (en) 2002-07-11 2005-05-12 Keirstead Hans S. Oligodendrocytes derived from human embryonic stem cells for remyelination and treatment of spinal cord injury
US7361635B2 (en) 2002-08-29 2008-04-22 Sangamo Biosciences, Inc. Simultaneous modulation of multiple genes
AU2004219851B2 (en) 2003-03-12 2009-12-17 Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. Derivation of terminally differentiated dopaminergic neurons from human embryonic stem cells
US7888121B2 (en) 2003-08-08 2011-02-15 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
EP1689783B1 (en) 2003-11-25 2010-05-19 The Government Of The United States, As Represented by The Secretary Of Health And Human Services Mutated anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
US7972854B2 (en) 2004-02-05 2011-07-05 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
US7452718B2 (en) 2004-03-26 2008-11-18 Geron Corporation Direct differentiation method for making cardiomyocytes from human embryonic stem cells
EP1737498A2 (en) 2004-04-08 2007-01-03 Sangamo Biosciences Inc. Zinc finger proteins for treatment of neuropathic pain
WO2005099771A2 (en) 2004-04-08 2005-10-27 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for treating neuropathic and neurodegenerative conditions
US9062289B2 (en) 2005-06-22 2015-06-23 Asterias Biotherapeutics, Inc. Differentiation of primate pluripotent stem cells to cardiomyocyte-lineage cells
US20070036773A1 (en) * 2005-08-09 2007-02-15 City Of Hope Generation and application of universal T cells for B-ALL
EP2484758B1 (en) 2005-10-18 2013-10-02 Precision Biosciences Rationally-designed meganucleases with altered sequence specificity and DNA-binding affinity
EP2028268A1 (en) 2007-08-20 2009-02-25 Université Libre De Bruxelles Generation of neuronal cells from pluripotent stem cells
US9862925B2 (en) 2007-10-29 2018-01-09 Hadasit Medical Research Services & Development Limited Human stem cell-derived neural precursors for treatment of autoimmune diseases of the central nervous system
US8227247B2 (en) 2007-12-20 2012-07-24 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of generating myelinating oligodendrocytes
WO2009132083A2 (en) 2008-04-22 2009-10-29 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for promoting the generation of pdx1+ pancreatic cells
CA2723382A1 (en) 2008-05-08 2009-11-12 University Of Rochester Treating myelin diseases with optimized cell preparations
WO2010008486A2 (en) 2008-06-24 2010-01-21 Parkinsons Institute Pluripotent cell lines and methods of use thereof
US9683215B2 (en) 2008-08-22 2017-06-20 President And Fellows Of Harvard College Methods of reprogramming cells
EP3187581A1 (en) 2008-12-23 2017-07-05 BOCO Silicon Valley, Inc. Target populations of oligodendrocyte precursor cells and methods of making and using same
WO2010091241A2 (en) 2009-02-06 2010-08-12 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for promoting the generation of definitive endoderm
MX341884B (es) 2009-03-10 2016-09-07 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-antigeno de maduracion de celulas b (bcma).
US20110002897A1 (en) 2009-06-11 2011-01-06 Burnham Institute For Medical Research Directed differentiation of stem cells
WO2011091048A1 (en) 2010-01-19 2011-07-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Direct conversion of cells to cells of other lineages
US20130108669A1 (en) 2010-04-16 2013-05-02 The Mclean Hospital Corporation Dopaminergic neurons differentiated from pluripotent stem cells and uses of thereof
AU2011256838B2 (en) 2010-05-17 2014-10-09 Sangamo Therapeutics, Inc. Novel DNA-binding proteins and uses thereof
WO2011159726A2 (en) 2010-06-14 2011-12-22 The Scripps Research Institute Reprogramming of cells to a new fate
CA2815223A1 (en) 2010-10-26 2012-07-19 Case Western Reserve University Differentiation methods for production of glial cell populations
KR20230133410A (ko) 2010-12-09 2023-09-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도
WO2012135253A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Geron Corporation Enriched populations of cardiomyocyte lineage cells from pluripotent stem cells
WO2012135621A2 (en) 2011-03-30 2012-10-04 Cellular Dynamics International. Inc Priming of pluripotent stem cells for neural differentiation
US20140115726A1 (en) 2011-04-05 2014-04-24 Cellectis New tale-protein scaffolds and uses thereof
ES2953190T3 (es) 2011-05-27 2023-11-08 Glaxo Group Ltd Proteínas de unión a BCMA (CD269/TNFRSF17)
JP6388537B2 (ja) 2011-07-21 2018-09-12 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 患者由来の人工多能性幹細胞由来の心筋細胞および使用方法
EP2756521A4 (en) 2011-09-16 2015-04-22 Univ Pennsylvania RNA-MANIPULATED T-CELLS FOR THE TREATMENT OF CANCER
WO2013056072A1 (en) 2011-10-13 2013-04-18 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of cardiomyocytes from human pluripotent stem cells
US9850463B2 (en) 2012-02-01 2017-12-26 The Regents Of The University Of California Methods of culturing retinal pigmented epithelium cells, including xeno-free production, RPE enrichment, and cryopreservation
CN108285491B (zh) 2012-02-29 2021-08-10 桑格摩生物科学股份有限公司 治疗亨廷顿氏病的方法和组合物
EP2882846B1 (en) 2012-06-05 2018-09-05 The Regents of the University of California Methods and compositions for the rapid production of retinal pigmented epithelial cells from pluripotent cells
EP2954046A4 (en) 2013-02-06 2016-07-20 Univ Rochester Oligodendrocyte precursor cells derived from isolated pluripotent cells to treat myelin disease
WO2014176606A1 (en) 2013-04-26 2014-10-30 Memorial Sloan-Kettering Center Center Cortical interneurons and other neuronal cells produced by the directed differentiation of pluripotent and multipotent cells
CN106456672B (zh) 2014-05-22 2020-03-13 纽约干细胞基金会有限公司 源于多能干细胞的功能性少突胶质细胞及其制备和使用方法
WO2015182765A1 (ja) 2014-05-30 2015-12-03 国立大学法人京都大学 低分子化合物を用いた多能性幹細胞の心筋分化誘導法
EP2990416B1 (en) 2014-08-29 2018-06-20 GEMoaB Monoclonals GmbH Universal chimeric antigen receptor expressing immune cells for targeting of diverse multiple antigens and method of manufacturing the same and use of the same for treatment of cancer, infections and autoimmune disorders
US9765299B2 (en) 2014-09-10 2017-09-19 Wisconsin Alumni Research Foundation Chemically defined albumin-free conditions for cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells
US11161907B2 (en) 2015-02-02 2021-11-02 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
WO2016149578A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Dual specific anti-cd22-anti-cd19 chimeric antigen receptors
IL302341A (en) 2015-03-27 2023-06-01 Harvard College Modified T cells and methods for their preparation and use
US9724432B2 (en) 2015-04-30 2017-08-08 University Of Rochester Non-human mammal model of human degenerative disorder, uses thereof, and method of treating human degenerative disorder
CN107921148A (zh) 2015-05-08 2018-04-17 哈佛学院校长同事会 通用供体干细胞和相关方法
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
US20180236004A1 (en) 2015-08-15 2018-08-23 Asterias Biotherapeutics, Inc. Stem cell-derived oligodendrocyte progenitor cells for the treatment of white matter stroke
WO2017058753A1 (en) 2015-09-28 2017-04-06 Trustees Of Dartmouth College Chimeric antigen receptor, regulatory cells and methods of use
EP3355937A4 (en) 2015-09-28 2019-04-17 Regents of the University of Minnesota CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (CAR) T CELLS AS THERAPEUTIC INTERVENTIONS AT AUTO AND ALLO IMMUNITY
AU2017228466B2 (en) 2016-03-03 2023-05-25 New York Stem Cell Foundation, Inc. Microglia derived from pluripotent stem cells and methods of making and using the same
WO2017172976A1 (en) 2016-03-29 2017-10-05 The Regents Of The University Of California Methods for promoting oligodendrocyte regeneration and remyelination
WO2018093681A1 (en) 2016-11-15 2018-05-24 Neuralstem, Inc. Multipotent neural stem cells that express platelet derived growth factor (pdgf) receptor and methods of use thereof
US20190376045A1 (en) 2017-01-13 2019-12-12 The Regents Of The University Of California Immunoengineered pluripotent cells
WO2018176390A1 (zh) 2017-03-31 2018-10-04 深圳市立昌机电设备有限公司 绕线机的安全防备方法及系统
CA3062433A1 (en) 2017-05-15 2018-11-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bicistronic chimeric antigen receptors and their uses
CN111094345B (zh) 2017-06-30 2023-10-27 美国卫生和人力服务部 具有人结构域的抗b细胞成熟抗原嵌合抗原受体
CA3083109A1 (en) * 2017-12-08 2019-06-13 Fate Therapeutics, Inc. Immunotherapies using enhanced ipsc derived effector cells
US11266690B2 (en) 2018-02-01 2022-03-08 Nanjing Iaso Biotherapeutics Co., Ltd. Chimeric antigen receptor (CAR) binding to BCMA, and uses thereof
US11026975B2 (en) 2018-02-01 2021-06-08 Nanjing Iaso Biotherapeutics Co., Ltd. Chimeric antigen receptor (CAR) binding to BCMA, and uses thereof
AU2019214183B2 (en) 2018-02-01 2022-04-07 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Fully human anti-B cell maturation antigen (BCMA) single chain variable fragment, and application thereof
JP7459043B2 (ja) 2018-07-12 2024-04-01 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 親和性成熟ｃｄ２２特異的モノクローナル抗体およびその使用
CA3109078A1 (en) 2018-07-17 2020-01-23 The Regents Of The University Of California Cells differentiated from immunoengineered pluripotent cells
MX2021000607A (es) 2018-07-17 2021-06-23 Univ California Células t con receptor de antígeno quimérico derivadas de células madre pluripotentes inmunomodificadas.
CN113366102A (zh) * 2018-12-03 2021-09-07 鲁比厄斯治疗法股份有限公司 包含hla-e和hla-g分子的人工抗原呈递细胞和使用方法
WO2020118447A1 (en) * 2018-12-13 2020-06-18 Sinai Health System Immunomodulatory cells and uses thereof
SG11202108891QA (en) 2019-02-15 2021-09-29 Harvard College Universal donor stem cells and related methods
JP2022546317A (ja) * 2019-08-23 2022-11-04 サナ バイオテクノロジー，インコーポレイテッド Ｃｄ２４発現細胞およびそれらの用途
US11104918B2 (en) * 2019-09-05 2021-08-31 Crispr Therapeutics Ag Universal donor cells
WO2021055985A1 (en) * 2019-09-22 2021-03-25 Cellerant Therapeutics, Inc. Ipsc-derived, hypoimmunogenic, myeloid progenitor cells
AU2020364139A1 (en) * 2019-10-10 2022-05-26 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Modified stem cells and methods of use thereof
TW202237826A (zh) * 2020-11-30 2022-10-01 瑞士商克里斯珀醫療股份公司 基因編輯的自然殺手細胞

Also Published As

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EP4347797A1 (en) 2024-04-10
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