JP2024518464A - 寛容誘導構築物及び組成物並びに免疫障害の処置のためのそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶の予防的又は治療的処置などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置において使用するための、構築物及び組成物に関する。

Description

本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶の予防的又は治療的処置などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置において使用するための、構築物及び組成物に関する。

免疫応答は、疾患、例えば、ウイルス、細菌又は寄生虫のような病原体によって引き起こされる疾患に対する防御に必要である。しかしながら、望ましくない免疫活性化は、自分自身の組織の損傷又は破壊につながる過程を引き起こし得る。望ましくない免疫活性化は、例えば、抗体及び／又はＴリンパ球が自己抗原と反応して、例えば、組織損傷及び病理をもたらす自己免疫疾患において起こる。望ましくない免疫活性化はまた、典型的には、環境中の無害な物質に対する過剰な免疫応答を特徴とし、組織破壊をもたらす炎症応答をもたらし得る、アレルギー反応において起こる。さらに、望ましくない免疫活性化は、移植片拒絶、例えば、供与体同種抗原又は異種抗原を認識し、移植臓器又は組織の破壊をもたらす、宿主中に存在する同種反応性Ｔ細胞によって有意に媒介される移植臓器又は組織の拒絶反応において生じる。免疫寛容は、所与の生物において免疫応答を誘発する能力を有する、物質又は組織に対する特異的免疫応答の後天的欠如である。

典型的には、特定の抗原に対する寛容を誘導するために、抗原は、活性化シグナルの非存在下で、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって他の免疫細胞に提示されなければならず、これは、抗原特異的リンパ球の死、若しくは機能的不活性化、又は寛容を維持する抗原特異的細胞の生成をもたらす。この過程は一般に、自己抗原に対する寛容、又は自己寛容を説明する。免疫抑制薬は、例えば、自己免疫疾患を有する患者又は同種移植を有する患者の処置において、望ましくない免疫応答の予防又は低減に有用である。

望ましくない免疫応答の免疫抑制を生成するための従来の戦略は、広範に作用する免疫抑制薬に基づく。さらに、免疫抑制を維持するために、免疫抑制薬療法は、多くの場合、生涯にわたる命題である。残念ながら、広範に作用する免疫抑制薬の使用は、それらの殆どが非選択的に作用し、感染に対する感受性の増加及びがん免疫監視の減少をもたらすため、免疫不全などの重篤な副作用のリスクと関連する。したがって、抗原特異的寛容を誘導する新規化合物及び組成物は、有益であろう。

樹状細胞などのＡＰＣは、免疫応答の調節において重要な役割を果たし、樹状細胞（サイトカイン及び増殖因子）の活性化状態及び微小環境に応じて、抗原特異的Ｔ細胞シグナルを与えて、提示された抗原（推定病原体）と戦うか、又は提示された抗原（推定非病原性抗原）に対する反応を抑制し、末梢寛容を誘導する。寛容原性免疫療法を開発する際の課題は、炎症又は炎症性免疫応答などの免疫応答を誘発しない様式で、樹状細胞などのＡＰＣに抗原を効率的に送達することである。

科学論文「Ｓｃｈｊｅｔｎｅ ＫＷ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（１１），３１４２－３１５２，２００５」では、「トロイボディ」と呼ばれる組換え抗体構築物を開示している。これらのトロイボディは、ＡＰＣ表面分子に特異的なＶ領域を有する組換え抗体であり、Ｔ細胞エピトープは、それらのＣドメイン中のβ鎖間のループに生着している。

本開示は、炎症性活性化などの活性化の非存在下で抗原の提示をもたらす、非炎症性又は寛容原性の方法で、樹状細胞などのＡＰＣ上の表面分子と相互作用する、抗原性ユニット及び標的化ユニットを含む寛容誘導構築物に関する。

本発明者らは、驚くべきことに、Ｖａｃｃｉｂｏｄｙプラットフォームが、選択された抗原特異的寛容応答の誘導のための最適な様式で、構築物を内部移行し、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の誘導並びにメモリーＴ細胞応答及びエフェクターＴ細胞応答の抑制などの、寛容誘導様式で抗原を提示する、ＡＰＣ上の選択された表面受容体への結合及びシグナル伝達を介して、疾患関連抗原を抗原提示細胞（ＡＰＣ）に送達することができることを見出した。

本開示の寛容誘導構築物は、Ｓｃｈｊｅｔｎｅ Ｋ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５（１１），３１４２－３１５２，２００５に開示されている「トロイボディ」などの既知の構築物と比較して、可動性が改善されていてもよい。例えば、開示される構築物の標的化ユニットは、抗体由来のＶ領域に限定されず、多種多様な異なるユニットであり得る。

既知の構築物と比較した本開示の寛容誘導構築物の更なる利点は、１回の用量などのより少ない用量が、同じ機能的効果に達するのに十分であり得ることである。例えば、免疫応答のレベルを低下させる、免疫応答の発症若しくは進行を遅延させる、及び／又は免疫応答の発症若しくは進行のリスクを低下させるためには、１回の用量などのより少ない用量で十分であり得る。

Ｖａｃｃｉｂｏｄｙ構築物は、複数のポリペプチド、例えば、２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質からなる多量体タンパク質であり、それぞれが抗原提示細胞を標的とする標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットを含む－例えば、ＷＯ２００４／０７６４８９Ａ１、ＷＯ２０１１／１６１２４４Ａ１、ＷＯ２０１３／０９２８７５Ａ１又はＷＯ２０１７／１１８６９５Ａ１を参照されたい。これらの構築物は、抗原性ユニットに含まれる抗原又はエピトープに対する免疫応答を生成するのに効率的であることが示されている。

本開示のＶａｃｃｉｂｏｄｙ又は寛容誘導構築物は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡプラスミド）の形態で対象に投与され得る。宿主細胞、例えばヒトの筋細胞への投与後、ポリペプチドは、発現され、多量体化ユニットにより、多量体タンパク質を形成し；二量体化ユニットが使用される場合、ポリペプチドは、発現されると、二量体タンパク質を形成する。

本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶などの免疫疾患の予防的又は治療的処置に使用するための、Ｖａｃｃｉｂｏｄｙ構造に基づく寛容誘導構築物を提供する。

本開示の寛容誘導構築物は、自己抗原、アレルゲン又は同種抗原／異種抗原の１個以上のＴ細胞エピトープを含む抗原性ユニットと、多量体化ユニット、例えば二量体化ユニットと、ＡＰＣを標的とする標的化ユニットと、を含む。標的化ユニットは、構築物が内部移行され、抗原性ユニット中のエピトープが寛容誘導様式で提示されるように、ＡＰＣ上の表面分子と相互作用する。

したがって、第１の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）２個のポリペプチドなどの、（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

別の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる多量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

別の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質を提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の核酸によってコードされるポリペプチドを提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の寛容誘導構築物と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物を調製するための方法を提供し、医薬組成物は、本明細書に記載のポリペプチド、又は本明細書に記載の二量体タンパク質などの多量体を含み、本方法は、
ａ）本明細書に記載のポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトすることと、
ｂ）細胞を培養することと、
ｃ）二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、又は細胞から発現されるポリペプチドを収集及び精製することと、
ｄ）二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、又は工程ｃ）から得られたポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の医薬組成物を調製するための方法を提供し、医薬組成物は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含み、本方法は、
ａ）ポリヌクレオチドを調製することと、
ｂ）任意で、ポリヌクレオチドを発現ベクター中にクローニングすることと、
ｃ）工程ａ）から得られたポリヌクレオチド、又は工程ｂ）から得られたベクターを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

別の態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患若しくは移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態に罹患しているか、又はその予防を必要としている対象を処置するための方法であって、本方法は、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む。

別の態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置に使用するための、本明細書に記載の医薬組成物を提供する。

例示的な寛容誘導構築物の概略図。図１は、本開示の寛容誘導構築物の例を示す。本開示の寛容誘導構築物は、Ｎ末端開始及びＣ末端を有するポリペプチドとして記載することができる（図１に図示）。ポリペプチド－標的化ユニット（ＴＵ）、二量体化ユニット（ＤｉｍＵ）及び抗原性ユニット－の要素は、抗原性ユニットがポリペプチドのＣ末端に位置するように（図１Ａ）、又はポリペプチドのＮ末端開始に位置するように（図１Ｂ）、ポリペプチド中に配置され得る。抗原性ユニットは、１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、複数のＴ細胞エピトープが存在する場合、１つ以上のＴ細胞エピトープリンカーを含み得る。ユニットリンカー（ＵＬ）は、二量体化ユニットと、抗原性ユニットとを連結し得る。図１は、Ｔ細胞エピトープリンカー（ＴＬ）によって分離された、２つのＴ細胞エピトープ（Ｔ１、Ｔ２）を有する抗原性ユニットを示す。上記のユニット及び要素の順序及び配向は、多量体タンパク質、二量体タンパク質及びポリヌクレオチドにおいて同じである。 例示的な寛容誘導構築物の概略図。図１は、本開示の寛容誘導構築物の例を示す。本開示の寛容誘導構築物は、Ｎ末端開始及びＣ末端を有するポリペプチドとして記載することができる（図１に図示）。ポリペプチド－標的化ユニット（ＴＵ）、二量体化ユニット（ＤｉｍＵ）及び抗原性ユニット－の要素は、抗原性ユニットがポリペプチドのＣ末端に位置するように（図１Ａ）、又はポリペプチドのＮ末端開始に位置するように（図１Ｂ）、ポリペプチド中に配置され得る。抗原性ユニットは、１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、複数のＴ細胞エピトープが存在する場合、１つ以上のＴ細胞エピトープリンカーを含み得る。ユニットリンカー（ＵＬ）は、二量体化ユニットと、抗原性ユニットとを連結し得る。図１は、Ｔ細胞エピトープリンカー（ＴＬ）によって分離された、２つのＴ細胞エピトープ（Ｔ１、Ｔ２）を有する抗原性ユニットを示す。上記のユニット及び要素の順序及び配向は、多量体タンパク質、二量体タンパク質及びポリヌクレオチドにおいて同じである。 ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の発現及び分泌。図２Ａ及び２Ｂは、（Ａ）ＤＮＡベクターＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００３ｂ、ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０１２ｂで一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、（Ｂ）ＤＮＡベクターＶＢ５０５２、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０４８、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０、ＶＢ５０６１及びＶＢ５０７１で一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清、を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ（捕捉抗体：抗ＭＯＧ抗体、検出抗体：抗ｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン抗体）によって検出された、ＭＯＧ含有寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５０５２のタンパク質発現及び分泌レベルを示す。全てのＭＯＧ含有構築物は、高度に発現され、分泌された。（Ａ）における陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清であり、（Ｂ）トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の発現及び分泌。図２Ａ及び２Ｂは、（Ａ）ＤＮＡベクターＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００３ｂ、ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０１２ｂで一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、（Ｂ）ＤＮＡベクターＶＢ５０５２、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０４８、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０、ＶＢ５０６１及びＶＢ５０７１で一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清、を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ（捕捉抗体：抗ＭＯＧ抗体、検出抗体：抗ｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン抗体）によって検出された、ＭＯＧ含有寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５０５２のタンパク質発現及び分泌レベルを示す。全てのＭＯＧ含有構築物は、高度に発現され、分泌された。（Ａ）における陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清であり、（Ｂ）における陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ａ）０．２μｇ／ｍＬヤギ抗マウスＩＬ－１０ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ４１７、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｂ）０．２μｇ／ｍＬヤギ抗マウスＩＬ－１０ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ４１７、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｃ）０．８μｇ／ｍＬニワトリ抗ヒトＴＧＦ－β１ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ２４０、ＲＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｄ）０．８３μｇ／ｍＬヤギ抗マウスＳＣＧＢ３Ａ２ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ３４６５、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｅ）０．８μｇ／ｍＬヤギ抗マウスＣＴＬＡ－４ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ４７６、ＲＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｆ）０．２９μｇ／ｍＬヤギ抗マウスＰＤ－１ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＤＹ１０２１、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 図３：異なる標的化ユニットを有する完全長ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の分泌。図３は、ベクターＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ（ＨＥＫ２９３細胞）、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０及びＶＢ５０６１（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞）で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞又はＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出された、異なる標的化ユニットを有する、完全長寛容誘導構築物及び炎症誘発性対照構築物ＶＢ５０５２の高レベル分泌を示す。捕捉抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。検出抗体：（Ｇ）０．２μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＣＣＬ３ビオチン化抗体、１００μＬ／ウェル、ＢＡＦ２７０、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＨＥＫ２９３細胞由来の上清、又はトランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 ＭＯＧ（２７－６３）ペプチドの分泌。ＤＮＡベクターＶＢ５０５１中にコードされるＭＯＧ（２７－６３）ペプチドの分泌は、ＤＮＡベクターＶＢ５０５１で一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清の直接ＥＬＩＳＡ（検出抗体：マウス抗ＭＯＧ抗体、３．３μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって確認した。陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 Ｍｅｔ ｅ１含有寛容誘導構築物の発現及び分泌。図５は、Ｍｅｔ ｅ１含有ＤＮＡベクターＶＢ５０２４、ＶＢ５０３０及びＶＢ５０７９で一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清の、サンドイッチＥＬＩＳＡ（捕捉抗体：抗ヒトＩｇＧ３（ＣＨ３ドメイン）抗体、検出抗体：ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ビオチン抗ＩｇＧ－Ｆｃ（ヒト）結合体）によって検出された、Ｍｅｔ ｅ１含有寛容誘導構築物のタンパク質発現及び分泌レベルを示す。全てのＭｅｔ ｅ１含有寛容誘導構築物を発現させ、分泌させた。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。 標的化ユニットとしてｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５を含む寛容誘導構築物は、組換えＤＥＣ２０５受容体に結合する。図６は、ｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５標的化ユニットを含む寛容誘導タンパク質が、ｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５含有ＤＮＡベクターＶＢ５００４ｂで一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の上清の、直接ＥＬＩＳＡ（コート：組換えＤＥＣ２０５（２１６－５０３）、検出抗体：抗ＭＯＧ抗体又は抗ｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン抗体）によって組換えＤＥＣ２０５受容体に結合することを示す。受容体への結合は、両方の抗体によって確認され、抗ＭＯＧ抗体は、全長タンパク質の分泌を確認した。 標的化ユニットとしてＩＬ－１０を含む寛容誘導構築物は、組換えＩＬ－１０受容体に結合する。図７は、標的化ユニットとしてＩＬ－１０を含む寛容誘導タンパク質が、ＩＬ－１０含有ＤＮＡベクターＶＢ５００６ｂで一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の上清の、直接ＥＬＩＳＡ（コート：組換えＩＬ－１０受容体、検出抗体：抗ＭＯＧ抗体又は抗ｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン抗体）によって組換えＩＬ－１０受容体に結合することを示す。受容体への結合は、両方の抗体によって確認され、抗ＭＯＧ抗体は、全長タンパク質の分泌を確認した。 分泌寛容誘導構築物のサイズ、タンパク質完全性及び二量体形成の特性評価。図８は、還元及び非還元条件下で、ＭＯＧ含有ＤＮＡベクターで一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清のウェスタンブロット（ＷＢ）分析を示す。陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（トランスフェクション対照）で処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。図８Ａ：ウェスタンブロット分析は、寛容誘導タンパク質の発現及び全長分泌を示す。トランスフェクトされたＥｘｐｔｉ２９３Ｆ細胞由来の還元上清試料（２５μＬ充填）。一次抗体：マウス抗ＭＯＧ（ｓｃ－７３３３０）。二次抗体：Ｄｏｎｋｅｙ抗マウス、Ｄｙｌｉｇｈｔ８００（ＳＡ５－１０１７２）。タンパク質標準は、ＣｈｅｍｉｄｏｃチャネルＤｙｌｉｇｈｔ６５０（シグナルは示されていない）及びＣｈｅｍｉｄｏｃチャネルＤｙｌｉｇｈｔ８００において検出された。 分泌寛容誘導構築物のサイズ、タンパク質完全性及び二量体形成の特性評価。図８は、還元及び非還元条件下で、ＭＯＧ含有ＤＮＡベクターで一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清のウェスタンブロット（ＷＢ）分析を示す。陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（トランスフェクション対照）で処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。図８Ｂ：ウェスタンブロット分析は、寛容誘導タンパク質の二量体化を示す（黒矢印）。トランスフェクトされたＥｘｐｅｃｔｉ２９３Ｆ細胞由来の非還元上清試料（２５μＬ充填）。一次抗体：マウス抗ＭＯＧ（ｓｃ－７３３３０）。二次抗体：Ｄｏｎｋｅｙ抗マウス、Ｄｙｌｉｇｈｔ８００（ＳＡ５－１０１７２）。ＣｈｅｍｉｄｏｃチャネルＤｙｌｉｇｈｔ６５０（タンパク質標準用）及び８００。 分泌寛容誘導構築物のサイズ、タンパク質完全性及び二量体形成の特性評価。図８は、還元及び非還元条件下で、ＭＯＧ含有ＤＮＡベクターで一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清のウェスタンブロット（ＷＢ）分析を示す。陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（トランスフェクション対照）で処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。図８Ｃ：ウェスタンブロット分析は、寛容誘導タンパク質の発現及び完全長分泌を示す。トランスフェクトされたＥｘｐｔｉ２９３Ｆ細胞由来の還元上清試料（２５μＬ対照）。一次抗体：ラット抗ＩＬ１０（ＭＡＢ４１７）。二次抗体：Ｄｏｎｋｅｙ抗ラット、Ｄｙｌｉｇｈｔ４８８（ＳＡ５－１００２６）。ＣｈｅｍｉｄｏｃチャネルＤｙｌｉｇｈｔ６５０（タンパク質標準用）及び４８８。 分泌寛容誘導構築物のサイズ、タンパク質完全性及び二量体形成の特性評価。図８は、還元及び非還元条件下で、ＭＯＧ含有ＤＮＡベクターで一過的にトランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清のウェスタンブロット（ＷＢ）分析を示す。陰性対照は、トランスフェクション試薬ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（トランスフェクション対照）で処理したＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞由来の上清である。図８Ｄ：ウェスタンブロット分析は、寛容誘導タンパク質の発現及び全長分泌を示す（黒矢印）。トランスフェクトされたＥｘｐｔｉ２９３Ｆ細胞由来の還元上清試料（３５μＬ充填）。一次抗体：ヤギ抗ＣＴＬＡ－４（ＡＦ４７６）。二次抗体：Ｄｏｎｋｅｙ抗ヤギ、Ｄｙｌｉｇｈｔ８００（ＳＡ５－１００９２）。ＣｈｅｍｉｄｏｃチャネルＤｙｌｉｇｈｔ６５０（タンパク質標準用）及び８００。 デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５００１ｂ）を１回（０日目）ワクチン接種し、ワクチン接種後７日目に脾臓を採取した。(Ａ)ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激の際に、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０分泌について試験したマウスの脾細胞（ＳＦＵ／１０６脾細胞）とデュアルカラーＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。基につきｎ＝４（ＶＢ５００１ｂ）、５（ＶＢ５００４ｂ及びＶＢ５００２ｂ）又は２（ＰＢＳ）の個々のマウスを示す。(Ｂ)ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を（Ａ）のデータからプロットする。個々のマウス及び平均±範囲を示し、^＊（ｐ＜０．０５）^＊＊（ｐ＜０．０１）、両側マンホイットニー検定を示す。 デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５００１ｂ）を１回（０日目）ワクチン接種し、ワクチン接種後７日目に脾臓を採取した。(Ａ)ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激の際に、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０分泌について試験したマウスの脾細胞（ＳＦＵ／１０６脾細胞）とデュアルカラーＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。基につきｎ＝４（ＶＢ５００１ｂ）、５（ＶＢ５００４ｂ及びＶＢ５００２ｂ）又は２（ＰＢＳ）の個々のマウスを示す。(Ｂ)ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を（Ａ）のデータからプロットする。個々のマウス及び平均±範囲を示し、^＊（ｐ＜０．０５）^＊＊（ｐ＜０．０１）、両側マンホイットニー検定を示す。 フローサイトメトリーによる％Ｆｏｘｐ３＋、％ＩＦＮ－γ及び％ ＩＬ－１７産生ＣＤ４^＋Ｔ細胞の検出。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００１ｂ）を１回（０日目）ワクチン接種し、ワクチン接種後７日目に脾臓を採取した。ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激時の合計ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団中の（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋、（Ｂ）ＩＦＮ－γ＋及び（Ｃ）ＩＬ－１７＋脾細胞の割合［％］を示す。データは、４匹（ＶＢ５００１ｂ）、５匹（ＶＢ５００４ｂ及びＶＢ５００２ｂ）又は２匹（ＰＢＳ）マウス／群のプールから得た。構築物ＩＤ数は、ｘ軸に示される。 フローサイトメトリーによる％Ｆｏｘｐ３＋、％ＩＦＮ－γ及び％ ＩＬ－１７産生ＣＤ４^＋Ｔ細胞の検出。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００１ｂ）を１回（０日目）ワクチン接種し、ワクチン接種後７日目に脾臓を採取した。ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激時の合計ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団中の（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋、（Ｂ）ＩＦＮ－γ＋及び（Ｃ）ＩＬ－１７＋脾細胞の割合［％］を示す。データは、４匹（ＶＢ５００１ｂ）、５匹（ＶＢ５００４ｂ及びＶＢ５００２ｂ）又は２匹（ＰＢＳ）マウス／群のプールから得た。構築物ＩＤ数は、ｘ軸に示される。 フローサイトメトリーによる％Ｆｏｘｐ３＋、％ＩＦＮ－γ及び％ ＩＬ－１７産生ＣＤ４^＋Ｔ細胞の検出。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００１ｂ）を１回（０日目）ワクチン接種し、ワクチン接種後７日目に脾臓を採取した。ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激時の合計ＣＤ４^＋Ｔ細胞集団中の（Ａ）Ｆｏｘｐ３＋、（Ｂ）ＩＦＮ－γ＋及び（Ｃ）ＩＬ－１７＋脾細胞の割合［％］を示す。データは、４匹（ＶＢ５００１ｂ）、５匹（ＶＢ５００４ｂ及びＶＢ５００２ｂ）又は２匹（ＰＢＳ）マウス／群のプールから得た。構築物ＩＤ数は、ｘ軸に示される。 デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５１）を２回（０日目及び４日目）ワクチン接種し、脾臓をプライムワクチン接種後１０日目に採取した。(Ａ)ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激の際に、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０分泌について試験したマウスの脾細胞（ＳＦＵ／１０６脾細胞）とデュアルカラーＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。個々のマウスを示す。(Ｂ)ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を（Ａ）のデータからプロットする。個々のマウス及び平均±範囲を示し、各群ｎ＝５又はｎ＝２（ＰＢＳ）、^＊（ｐ＜０．０５）^＊＊（ｐ＜０．０１）、両側マンホイットニー検定を示す。 デュアルカラーＩＬ－１０／ＩＦＮγ ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５１）を２回（０日目及び４日目）ワクチン接種し、脾臓をプライムワクチン接種後１０日目に採取した。(Ａ)ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激の際に、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０分泌について試験したマウスの脾細胞（ＳＦＵ／１０６脾細胞）とデュアルカラーＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ。個々のマウスを示す。(Ｂ)ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を（Ａ）のデータからプロットする。個々のマウス及び平均±範囲を示し、各群ｎ＝５又はｎ＝２（ＰＢＳ）、^＊（ｐ＜０．０５）^＊＊（ｐ＜０．０１）、両側マンホイットニー検定を示す。 ＭＯＧ（３８－４９）特異的Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の検出。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、５０μｇの示されたＤＮＡベクター（ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０５１）を２回（０日目及び４日目）ワクチン接種し、脾臓をプライムワクチン接種後１０日目に採取した。合計ＣＤ４^＋集団のＨ－２ Ｉａｂ／ＭＯＧ（３８－４９）四量体によってｅｘ ｖｉｖｏで検出された脾臓Ｆｏｘｐ３＋細胞の割合。データは、基あたり５匹のマウス又は２匹のマウス（ＰＢＳ）のプールから得た。構築物ＩＤ数は、ｘ軸上に示される。 ＭＯＧ含有寛容誘導構築物の発現及び分泌。図１３は、ＶＢ５００９で一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞由来の上清のサンドイッチＥＬＩＳＡ（捕捉抗体：ウサギ抗ヒトＴＧＦβ１（ｏｒｂ７７２１６，Ｂｉｏｒｂｙｔｅ）、検出抗体：ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ（０５－４２４０，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））によって検出された、ＴＧＦβ１を標的化ユニットとするＭＯＧ含有寛容誘導構築物ＶＢ５００９のタンパク質発現及び分泌レベルを示す。陰性対照は、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅのみで処理したＨＥＫ２９３細胞由来の上清である。

したがって、第１の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチド、例えば２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

別の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる多量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

別の態様では、本開示は、
ｉ)抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物を提供し、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

このような構築物は、一度対象に投与されると、抗原性ユニット中のエピトープを寛容誘導様式で提示することを可能にし、したがって、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶などの免疫疾患の予防的又は治療的処置としての使用に適している。

寛容誘導構築物は、問題の免疫疾患を引き起こす免疫系の疾患特異的細胞のダウンレギュレーションを引き起こすので、一般的な免疫系を抑制しない。したがって、本開示の構築物を用いて問題の免疫疾患を処置しても、感染に対する感受性の増加及びがん免疫監視の減少をもたらさない。しかしながら、誘導された抗原特異的調節細胞との細胞間接触による短距離阻害性サイトカインの遊離により、関連疾患抗原に特異的な免疫細胞のバイスタンダー抑制が期待される。

本開示の寛容誘導構築物は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶などの免疫疾患の予防的又は治療的処置における使用のために、本開示の構築物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物の形式で投与され得る。

「ヌクレオチド配列」とは、ヌクレオチドからなる配列である。「ヌクレオチド配列」及び「核酸配列」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

「寛容誘導構築物」とは、投与に適した形態及び寛容を誘導するのに有効な量（すなわち、有効量）で対象に投与された場合、炎症性免疫応答などの免疫応答を誘発せず、むしろ抗原性ユニットに含まれるＴ細胞エピトープに対する寛容を誘導するものである。

本明細書で使用される「寛容」という用語は、炎症性免疫応答などの免疫応答のレベルの低下、炎症性免疫応答などの免疫応答の発症又は進行の遅延、及び／又は炎症性免疫応答などの免疫応答の発症又は進行のリスクの低下を指す。

「対象」とは、動物又はヒトである。対象は、治療的処置を必要とする患者、すなわち、自己免疫疾患、アレルギー又は移植片拒絶のような免疫疾患に罹患しているヒトであり得る。「対象」及び「個体」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

「疾患」とは、疾患に罹患している対象における特定の徴候及び症状に典型的に関連する異常な医学的状態である。

本明細書で使用される「免疫疾患」とは、自己免疫疾患、アレルギー又は移植片拒絶、すなわち、宿主に移植された同じ（同種）種又は異なる（異種）種由来の細胞、組織又は器官の宿主による拒絶などの同種移植片又は異種移植片の拒絶を含む、望ましくない免疫反応が関与する状態、障害又は疾患を指す。

本明細書で使用される「同種抗原」又は「同種移植抗原」という用語は、ドナーからレシピエントに移されたときに、レシピエントのＢ細胞受容体又はＴ細胞受容体の抗体によって認識及び結合され得る、細胞又は組織に由来する（そこから排出され、及び／又はそこに存在する）抗原を指す。同種抗原は、典型的には多型遺伝子の産物である。同種抗原は、ドナーとレシピエント（同じ種に属する）との間で比較した場合、わずかな構造的差異を示すタンパク質又はペプチドである。レシピエントの体内におけるそのようなドナー抗原の存在は、レシピエントにおいて免疫応答を誘発することができる。そのような同種反応性免疫応答は、同種抗原に特異的である。

「マウス（ｍｕｒｉｎｅ）」及び「マウス（ｍｏｕｓｅ）」という用語は、マウス由来のペプチド、タンパク質、核酸などの物質を指すために互換的に使用される。

本明細書で使用される「異種抗原」という用語は、異なる種の個体に由来する抗原を指す。

「処置」とは、予防的処置又は治療的処置である。

「予防的処置」とは、免疫疾患の徴候若しくは症状を示さないか、又は免疫疾患の初期の徴候若しくは症状のみを示す対象に投与される処置であり、そのため、処置は、疾患を予防するか、又は疾患を発症するリスクを少なくとも減少させる目的で投与される。予防的処置は、免疫疾患に対する予防的処置として、又は免疫疾患及び／若しくはその関連症状の更なる発症若しくは増強を阻害若しくは低減する処置として機能する。用語「予防的処置」、「予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、本明細書において互換的に使用される。

「治療的処置」とは、免疫疾患の症状又は徴候を示す対象に投与される処置であり、この場合、処置は、これらの徴候又は症状を減少又は排除する目的で、及び／又は疾患進行を遅延又は停止させる目的で、対象に投与される。

「部分」とは、抗原の部分若しくはフラグメント、すなわち、抗原のアミノ酸配列の部分若しくはフラグメント、又はそれをコードするヌクレオチド配列、例えば、エピトープを指し、好ましくは、抗原の部分若しくはフラグメントは、免疫原性である。これらの用語は、全体を通して互換的に使用される。

本明細書で使用される「Ｔ細胞エピトープ」とは、単一のＴ細胞エピトープ、又は複数のＴ細胞エピトープ、例えば、複数の最小エピトープを含有する抗原の一部若しくは領域を指す。

「ワクチン接種」及び「投与」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

「最小エピトープ」という用語は、ＭＨＣ Ｉ又はＭＨＣ ＩＩに結合すると予測されるエピトープの部分配列を指す。言い換えれば、最小エピトープは、免疫原性、すなわち、免疫応答を誘発することができるものであり得る。したがって、最小エピトープという用語は、ＭＨＣ Ｉ又はＭＨＣ ＩＩに結合すると予測される、エピトープの短い部分配列を指し得る。したがって、２７－ｍｅｒエピトープは、それぞれ２７個のアミノ酸より短い長さを有してもよく、それぞれが免疫原性で幾つかの最小エピトープを包含することができる。例えば、最小エピトープは、ＭＨＣ Ｉ又はＭＨＣ ＩＩに結合すると予測される場合には、エピトープの最初の１４個のアミノ酸からなることができ、又はＭＨＣ Ｉ又はＭＨＣ ＩＩに結合すると予測される場合には、エピトープのアミノ酸９～１８、又はアミノ酸７～２２からなることができる。

本明細書で使用される項目見出しは、構成的な目的のためでしかなく、説明される主題を限定すると解釈すべきではない。

寛容誘導構築物
図１は、本開示の寛容誘導構築物の例を示す。本開示の寛容誘導構築物は、Ｎ末端開始及びＣ末端を有するポリペプチドとして記載することができる（図１に図示）。ポリペプチド－標的化ユニット（ＴＵ）、二量体化ユニット（ＤｉｍＵ）及び抗原性ユニット－の要素は、抗原性ユニットがポリペプチドのＣ末端に位置するように（図１Ａ）、又はポリペプチドのＮ末端開始に位置するように（図１Ｂ）、ポリペプチド中に配置され得る。好ましくは、抗原性ユニットは、ポリペプチドのＣ末端に位置する。

抗原性ユニットは、１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、複数のＴ細胞エピトープが存在する場合、１つ以上のＴ細胞エピトープリンカー（ＴＬ）を含み得る。ユニットリンカー（ＵＬ）は、二量体化ユニットと、抗原性ユニットとを連結し得る。図１は、ＴＬによって分離された、２つのＴ細胞エピトープ（Ｔ１、Ｔ２）を有する抗原性ユニットを示す。上記のユニット及び要素の順序及び配向は、二量体タンパク質及びポリヌクレオチドにおいて同じである。

以下では、構築物の様々なユニットについて詳細に説明する。これらのユニットは、ポリペプチド、多量体タンパク質又は二量体タンパク質中にアミノ酸配列として存在する間に、ユニットをコードする核酸配列としてポリヌクレオチド中に存在する。読みやすくするために、以下では、構築物のユニットを、主に、ポリペプチド、多量体タンパク質又は二量体タンパク質に関して、すなわち、それらのアミノ酸配列に基づいて説明する。

標的化ユニット
本開示の寛容誘導構築物は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を標的とする標的化ユニットを含む。

本明細書で使用される「標的化ユニット」という用語は、本開示の構築物をＡＰＣに送達し、ＡＰＣ上の表面分子と相互作用する、例えば、細胞を活性化することなく、及び／又は細胞の成熟を誘導することなく、ＡＰＣ上の表面受容体に結合するユニットを指す。ＡＰＣは、構築物を内部移行させ、例えば、補助刺激シグナルをアップレギュレートせず、及び／又は阻害性表面受容体及び／若しくは阻害性サイトカインの分泌をアップレギュレートしないことによって、その表面上のＭＨＣ上の抗原性ユニットに含まれるＴ細胞エピトープを、抗炎症性、寛容原性の様式で提示する。

幾つかの実施形態では、標的化ユニットは、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、又はＴＧＦβＲ３などのＴＧＦβＲ受容体、ＩＬ１０ＲＡ及びＩＬ１０ＲＢなどのＩＬ１０Ｒ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１１Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ２７Ｒ、ＩＬ３５Ｒ、ＩＬ３７Ｒ、ＧＭ－ＣＳＦＲ、ＦＬＴ３、ＣＣＲ７、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１０３、ＣＤ１４、ＣＤ３６、ＣＤ２０５、ＣＤ１０９、ＶＩＳＴＡ、ＭＡＲＣＯ、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８３、ＳＩＧＬＥＣ、ＭＧＬ／Ｃｌｅｃ１０Ａ、ＡＳＧＲ(ＡＳＧＲ１／ＡＳＧＲ２）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ｂ、ＤＣＩＲ２、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＭＲ、ＤＣ－Ｓｉｇｎ、Ｔｒｅｍｌ４、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６３及びＣＤ１４１からなる群から選択される受容体に結合する部分を含むか、又はそれらからなる。

幾つかの実施形態では、標的化ユニットがｈＴＧＦβＲ１、ｈＴＧＦβＲ２、又はｈＴＧＦβＲ３などのｈＴＧＦβ受容体、ｈＩＬ－１０ＲＡ及びｈＩＬ－１０ＲＢなどのｈＩＬ－１０Ｒ、ｈＩＬ２Ｒ、ｈＩＬ４Ｒ、ｈＩＬ６Ｒ、ｈＩＬ１１Ｒ、ｈＩＬ１３Ｒ、ｈＩＬ２７Ｒ、ｈＩＬ３５Ｒ、ｈＩＬ３７Ｒ、ｈＧＭ－ＣＳＦＲ、ｈＦＬＴ３、ｈＣＣＲ７、ｈＣＤ１１ｂ、ｈＣＤ１１ｃ、ｈＣＤ１０３、ｈＣＤ１４、ｈＣＤ３６、ｈＣＤ２０５、ｈＣＤ１０９、ｈＶＩＳＴＡ、ｈＭＡＲＣＯ、ｈＭＨＣＩＩ、ｈＣＤ８３、ｈＳＩＧＬＥＣ、ｈＭＧＬ／ｈＣｌｅｃ１０Ａ、ｈＡＳＧＲ（ｈＡＳＧＲ１／ｈＡＳＧＲ２）、ｈＣＤ８０、ｈＣＤ８６、ｈＣｌｅｃ９Ａ、ｈＣｌｅｃ１２Ａ、ｈＣｌｅｃ１２Ｂ、ｈＤＣＩＲ２、ｈＬａｎｇｅｒｉｎ、ｈＭＲ、ｈＤＣ－Ｓｉｇｎ、ｈＴｒｅｍｌ４、ｈＤｅｃｔｉｎ－１、ｈＰＤＬ１、ｈＰＤＬ２、ｈＨＶＥＭ、ｈＣＤ１６３及びｈＣＤ１４１からなる群から選択されるヒト（ｈ）受容体に結合する部分を含むか、又はそれらからなる。

部分は、天然リガンド、抗体又はその一部、例えば、ｓｃＦｖ、又は合成リガンドであってもよい。

幾つかの実施形態では、部分は、前述の受容体のいずれかに対して特異性を有する抗体又はその一部、例えばｓｃＦｖであり、受容体に結合すると、抗炎症性寛容原性様式で提示される抗原及び／又はＴ細胞エピトープをもたらす。

他の実施形態では、部分は、前述の受容体のいずれかに対して特異性を有する合成リガンドであり、受容体に結合すると、抗炎症性寛容原性様式で提示される抗原及び／又はＴ細胞エピトープをもたらす。タンパク質モデリングを使用して、そのような合成リガンドを設計することができる。

他の実施形態では、部分は、天然リガンドである。

幾つかの実施形態では、天然リガンドは、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２又はＴＧＦβ３などのＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ１３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ３７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４としても知られる細胞間接着分子１）、ケラチン、ＶＳＩＧ－３、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＣＴＬＡ－４好ましくはＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１の細胞外ドメイン、好ましくはＰＤ－１及びＢＴＬＡの細胞外ドメイン、好ましくはＢＴＬＡの細胞外ドメインからなる群から選択される。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ＩＬ２、好ましくはヒトＩＬ２であるか、又はそれを含む。他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号３３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ２の配列同一性に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号３６のヌクレオチド配列などの、ヒトＩＬ２をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ＩＬ－１０又はＴＧＦβ、好ましくはヒトＩＬ－１０、又はアイソフォームＴＧＦβ－１、ＴＧＦβ－２及びＴＧＦβ－３を含む、ヒトＴＧＦβであるか、又はそれらを含む。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２０５～２０７のいずれかと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＴＧＦβの配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＴＧＦβのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２０５～２０７のいずれかに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

別の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２０５～２０７から選択されるアミノ酸配列などの、ヒトＴＧＦβのアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＴＧＦβのアミノ酸配列、又はヒトＴＧＦβをコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２０８～２１０から選択されるヌクレオチド配列などの、ヒトＴＧＦβをコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１７７に記載のマウスＴＧＦβなどの、マウスＴＧＦβの配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１１のアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列、又はヒトＩＬ－１０をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１２のヌクレオチド配列などの、ヒトＩＬ－１０をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１６９に記載のマウスＩＬ－１０などの、マウスＩＬ－１０の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

幾つかの実施形態では、標的化ユニットは、ＳＣＧＢ３Ａ２又はＶＳＩＧ－３、好ましくはヒトＶＳＩＧ－３又はヒトＳＣＧＢ３Ａ２であるか、又はそれを含む。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１３と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例え少なくとも９２％、例えば、少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例え少なくとも９６％、例えば、少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１３のアミノ酸配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のアミノ酸配列、又はヒトＳＣＧＢ３Ａ２をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１４のヌクレオチド配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１７１に記載のマウスＳＣＧＢ３Ａ２などの、マウスＳＣＧＢ３Ａ２の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３の配列同一性に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＶＳＩＧ－３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

別の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１５のアミノ酸配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＶＳＩＧ－３のアミノ酸配列、又はヒトＶＳＩＧ－３をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１６のヌクレオチド配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１７３に記載のマウスＶＳＩＧ－３などのマウスＶＳＩＧ－３の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ＣＤ２０５に対して特異性を有する抗体又はその一部、例えば、ヒト又はマウスＣＤ２０５に対して特異性を有するｓｃＦｖなどのｓｃＦｖ、又はｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５であるか、又はそれを含む。幾つかの実施形態では、マウスＣＤ２０５に対する特異性を有するｓｃＦｖは、配列番号４９を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１７と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＣＴＬＡ４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％例えば、少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１７のアミノ酸配列などの、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＣＴＬＡ４のアミノ酸配列、又はヒトＣＴＬＡ４をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１８のヌクレオチド配列などの、ヒトＣＴＬＡ４をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１７５に記載のマウスＣＴＬＡ４などの、マウスＣＴＬＡ４の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１９と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＰＤ－１の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１９のアミノ酸配列などの、ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＰＤ－１のアミノ酸配列、又はヒトＰＤ－１をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２２０のヌクレオチド配列などの、ヒトＰＤ－１をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号１７９に記載のマウスＰＤ－１などの、マウスＰＤ－１の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

更に他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば配列番号２１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１１のアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列、又はヒトＩＬ－１０をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

他の実施形態では、標的化ユニットは、配列番号２１２のヌクレオチド配列などの、ヒトＩＬ－１０をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

抗原性ユニット
本開示の寛容誘導構築物の抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

抗原性ユニットへの包含に適したＴ細胞エピトープは、当該技術分野で公知であり、すなわち、ある免疫疾患に関与し、関連することが研究され、提案され、及び／又は検証され、文献に公開されている。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、自己抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、自己抗原の１つのＴ細胞エピトープ、又は自己抗原の２つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、自己抗原の複数のＴ細胞エピトープを含む。幾つかの実施形態では、複数のＴ細胞エピトープが同じ自己抗原のものであり、すなわち、同じ自己抗原に含まれる。他の実施形態では、複数のＴ細胞エピトープは、複数の異なる自己抗原であり、すなわち、異なる自己抗原に含まれる。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、Ｔｒｅｇエピトープ又は阻害性ネオ抗原などの、自己抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットが２つ以上のＴ細胞エピトープを含む場合、抗原性ユニットは、Ｔ細胞エピトープを分離する１つ以上のリンカーを含む。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含み、Ｔ細胞エピトープは、好ましくはリンカーによって分離される。更に他の実施形態では、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含み、各Ｔ細胞エピトープは、リンカーによって他のＴ細胞エピトープから分離される。リンカーによる他のＴ細胞エピトープからの自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の各Ｔ細胞エピトープの分離を記載するための代替的な方法は、末端Ｔ細胞エピトープ、すなわち、ポリペプチドのＮ末端開始又はポリペプチドのＣ末端（すなわち、二量体化ユニットに連結されていない抗原性ユニットの端部に位置する）におけるＴ細胞エピトープを除く全てが、サブユニットに配置され、各サブユニットは、本明細書に記載されるようなＴ細胞エピトープ及びリンカーを含むか、又はそれらからなることである。

したがって、ｎ個の抗原を含む抗原性ユニットは、ｎ－１個のサブユニットを含み、各サブユニットは、自己抗原のＴ細胞エピトープ、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原、及びリンカーを含み、末端Ｔ細胞エピトープを更に含む。幾つかの実施形態では、ｎは、１から５０、例えば３から５０、又は１５から４０、又は１０から３０、又は１０から２５、又は１０から２０、又は１５から３０、又は１５から２５、又は１５から２０の整数である。

抗原性ユニット中のリンカーは、それに含まれる抗原、例えばエピトープを分離する。上記のように、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の全てのＴ細胞エピトープは、リンカーによって互いに分離され、サブユニットに配置され得る。

幾つかの実施形態では、リンカーは、非免疫原性であるように設計される。それは、連結する２つのアミノ酸配列が互いに対して実質的に自由に動くことを可能にしないことを意味する、剛性リンカーであってもよい。あるいは、それは可動性リンカー、すなわち、連結する２つのアミノ酸配列が互いに対して実質的に自由に動くことを可能にするリンカーであってもよい。

両方の種類のリンカーが有用である。一実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、たとえ抗原性ユニットが多数のＴ細胞エピトープを含む場合であっても、Ｔ細胞エピトープをＴ細胞に最適な様式で提示することを可能にする、可動性リンカーである。

リンカーによるＴ細胞エピトープの分離により、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の各Ｔ細胞エピトープは、免疫系に対して最適な方法で提示される。

例として、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、ミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）及びミエリン関連塩基性オリゴデンドロサイトタンパク質（ＭＯＢＰ）は全て、多発性硬化症（ＭＳ）に関与する自己抗原として研究及び提案されており、抗原性ユニットは、例えば、ＭＢＰの１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、ＭＢＰの１つのＴ細胞エピトープ又はＭＢＰの複数のＴ細胞エピトープを含み得る。さらに、抗原性ユニットは、例えば、ＭＯＧ及びＰＬＰの複数のＴ細胞エピトープ、例えば、ＭＯＧの１つ又は複数のＴ細胞エピトープ及びＰＬＰの１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、配列番号１８０～１８２からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなるＭＯＧの１つ又は複数のＴ細胞エピトープなどの、ＭＯＧの１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。

他の実施形態では、抗原性ユニットは、アレルゲンの１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、アレルゲンの１つのＴ細胞エピトープ又はアレルゲンの１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、アレルゲンの複数のＴ細胞エピトープを含む。幾つかの実施形態では、複数のＴ細胞エピトープが同じアレルゲンのもの、すなわち、同じアレルゲンに含まれるものである。他の実施形態では、複数のＴ細胞エピトープは、複数の異なるアレルゲンであり、すなわち、異なるアレルゲンに含まれる。

例として、Ｆｅｌ ｄ１、Ｆｅｌ ｄ４及びＦｅｌ ｄ７は、ヒトネコアレルギーの大部分を占める、最も顕著なネコアレルゲンのうちの３つであり、抗原性ユニットは、例えば、Ｆｅｌ ｄ１の１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、Ｆｅｌ ｄ１の１つのＴ細胞エピトープ又はＦｅｌ ｄ１の複数のＴ細胞エピトープを含み得る。さらに、抗原性ユニットは、例えば、Ｆｅｌ ｄ４及びＦｅｌ ｄ７の複数のＴ細胞エピトープ、例えば、Ｆｅｌ ｄ４の１つ又は複数のＴ細胞エピトープ及びＦｅｌ ｄ７の１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、配列番号１８４に含まれる１つ又は複数のＴ細胞エピトープなどの、Ｍｅｔ ｅ１の１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、Ｍｅｔ ｅ１（１６－３５）、Ｍｅｔ ｅ１（４６－６５）、Ｍｅｔ ｅ１（７６－９５）、Ｍｅｔ ｅ１（１３６－１５５）、Ｍｅｔ ｅ １（２１０－２３０）及び／又はＭｅｔ ｅ１（２４１－２６０）などのＭｅｔ ｅ１の１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、配列番号１８５～１９０のいずれかから選択される配列を含むか、又はそれからなる１つ又は複数のＴ細胞エピトープなどの、Ｍｅｔ ｅ１の１つ又は複数のＴ細胞エピトープを含み得る。

他の実施形態では、抗原性ユニットは、同種抗原／異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、同種抗原／異種抗原の１つのＴ細胞エピトープ、又は同種抗原／異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、同種抗原／異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含む。幾つかの実施形態では、複数のＴ細胞エピトープは、同じ同種抗原／異種抗原であり、すなわち、同じ同種抗原／異種抗原に含まれる。他の実施形態では、複数のＴ細胞エピトープは、複数の異なる同種抗原／異種抗原であり、すなわち、異なる同種抗原／異種抗原に含まれる。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、１つのＴ細胞エピトープを含む。他の実施形態では、抗原性ユニットは、２つ以上のＴ細胞エピトープ、すなわち、複数のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の寛容誘導構築物は、個別化された処置、すなわち、特定の対象／１人の患者のために設計された処置であってもよい。他の実施形態では、本開示の寛容誘導構築物は、患者集団又は患者における一般的な使用、すなわち、既製の処置のためのものである。

個別化された寛容誘導構築物
個別化された寛容誘導構築物について、Ｔ細胞エピトープは、抗原性ユニットへの包含のために選択され、このＴ細胞エピトープは、構築物による処置を受ける患者に対して最適化される。これは、寛容誘導構築物を含む既製の処置と比較して治療効果を増加させる。

個別化された寛容誘導構築物の抗原性ユニットは、ＭＳに罹患している患者について例示されるように、以下のように設計され得る。
１)患者のＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子を決定する
２)Ｔ細胞エピトープは、１つ以上の自己抗原（例えば、ＭＳに関与する自己抗原として研究、提案、及び／又は検証されている自己抗原）に含まれると同定される
３)Ｔ細胞エピトープは、患者のＨＬＡクラスＩ及び／又はクラスＩＩ対立遺伝子への予測される結合に基づいて選択される
４)１つ以上の寛容誘導試験構築物は、設計及び産生され、Ｔ細胞エピトープは、場合により、本出願に記載されるような構築物の抗原性ユニット中に配置される。

Ｔ細胞エピトープは、患者のＨＬＡクラスＩ／ＩＩ対立遺伝子に結合するそれらの予測される能力に基づいて、すなわち、予測ＨＬＡ結合アルゴリズムを使用してｉｎ ｓｉｌｉｃｏで選択される、上記の方法において選択される。関連するエピトープを同定した後、エピトープを、患者のＨＬＡクラスＩ／ＩＩ対立遺伝子に結合するそれらの能力に従ってランク付けし、最良に結合すると予測されるエピトープを、試験構築物の抗原性ユニットに含まれるように選択する。

任意の適切なＨＬＡ結合アルゴリズム、例えば、以下の１つが使用され得る：ペプチド－ＭＨＣ結合の利用可能なソフトウェア分析（ＩＥＤＢ、ＮｅｔＭＨＣｐａｎ及びＮｅｔＭＨＣＩＩｐａｎ）は、以下のウェブサイトからオンラインでダウンロード又は使用することができる。
ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ／
ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅ．ｐｈｐ？ＮｅｔＭＨＣｐａｎ－４．０
ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅ．ｐｈｐ？ＮｅｔＭＨＣＩＩｐａｎ－３．２

既製の寛容誘導構築物
既製の寛容誘導構築物の抗原性ユニットは、好ましくは最小Ｔ細胞エピトープのホットスポット、すなわち、様々なＨＬＡ対立遺伝子によって提示されると予測される複数の最小Ｔ細胞エピトープ（例えば、７個～１５個のアミノ酸の長さを有する）を含有する抗原の１つ以上の領域を含み、広範囲の対象、例えば、民族集団、又は更には世界集団若しくは世界集団をカバーする。

そのようなホットスポットを含めることによって、構築物は、広範囲の対象において寛容を誘導する可能性が最大化される。

抗原性ユニットの更なる説明
本開示の構築物の抗原性ユニットに含まれるＴ細胞エピトープは、７個～約２００個のアミノ酸の長さを有し、より長いＴ細胞エピトープは、おそらく最小エピトープのホットスポットを含む。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、７個～１５０個のアミノ酸、好ましくは７個～１００個のアミノ酸、例えば、９個～１００個のアミノ酸又は１５個～１００個のアミノ酸又は９個～６０個のアミノ酸又は９個～３０個のアミノ酸又は１５個～６０個又は１５個～３０個又は２０個～７５個のアミノ酸又は２５個～５０個のアミノ酸、例えば２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個又は５０個のアミノ酸の長さを有するＴ細胞エピトープを含む。

約６０個～２００個のアミノ酸の長さを有するＴ細胞エピトープは、より短い配列に分割されてもよく、本明細書に記載されるリンカーによって分離された抗原性ユニットに含まれてもよい。一例として、１５０個のアミノ酸の長さを有するＴ細胞エピトープは、それぞれ５０個のアミノ酸の３つの配列に分割されてもよく、３つの配列を互いに分離するリンカーと共に、抗原性ユニットに含まれてもよい。

幾つかの実施形態では、１つのＴ細胞エピトープの長さは、タンパク質が正しく折り畳まれないような長さである。例えば、最も顕著なネコアレルゲンであるＦｅｌ ｄ１は、２つのヘテロ二量体によって形成されるタンパク質であり、各二量体は、２つの鎖から構成され、鎖１は、７０個のアミノ酸残基を含み、鎖２は、９０個又は９２個の残基を含む。両方の鎖の長いＴ細胞エピトープを抗原性ユニットに含めると、タンパク質が正しく折りたたまれ、対象の肥満細胞及び好塩基球上の２つ以上のＩｇＥが構築物の抗原性ユニットに結合する場合、アレルギー反応を誘発する可能性がある。

より長いＴ細胞エピトープが抗原性ユニットに含まれる場合、タンパク質フォールディングは、タンパク質に対する抗体（例えば、ネコアレルゲン）を使用して、例えばＥＬＩＳＡによってｉｎ ｖｉｔｒｏで試験され、抗体がＴ細胞エピトープに結合するかどうかを決定することができる。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣ(主要組織適合性複合体）による提示に適した長さを有する。ＭＨＣ分子には、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩの２つの主要なクラスがある。ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩという用語は、本明細書において、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩと互換的に使用される。ＨＬＡ（ヒト白血球抗原）は、ヒトにおける主要な組織適合性複合体である。したがって、１つには、抗原性ユニットは、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ上での特異的提示に適した長さを有するＴ細胞エピトープを含む。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣクラスＩ提示のために、７個～１１個のアミノ酸の長さを有する。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープ配列は、ＭＨＣクラスＩＩ提示のために、９個～６０個のアミノ酸、例えば９個～３０個のアミノ酸、例えば１５個～６０個のアミノ酸、例えば１５個～３０個のアミノ酸の長さを有する。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣクラスＩＩ提示のために、１５個のアミノ酸の長さを有する。

抗原性ユニット中のＴ細胞エピトープの数は、変化してもよく、抗原性ユニット中に含まれる他の要素、例えば、本出願に記載されるようなＴ細胞エピトープリンカーの長さ及び数に依存する。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、最大３５００個のアミノ酸、例えば、６０個～３５００個のアミノ酸、例えば、約８０個又は約１００個又は約１５０個のアミノ酸～約３０００個のアミノ酸、例えば、約２００個～約２５００個のアミノ酸、例えば、約３００個～約２０００個のアミノ酸、又は約４００個～約１５００個のアミノ酸、又は約５００個～約１０００個のアミノ酸を含む。

幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、１個～１０個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のＴ細胞エピトープ、又は１１個～２０個のＴ細胞エピトープ、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個若しくは２０個のＴ細胞エピトープ、又は２１個～３０個のＴ細胞エピトープ、例えば、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個若しくは３０個のＴ細胞エピトープ、又は３１個～４０個のＴ細胞エピトープ、例えば、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個若しくは４０個のＴ細胞エピトープ、又は４１個～５０個のＴ細胞エピトープ、例えば、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個若しくは５０個のＴ細胞エピトープを含む。他の実施形態では、抗原性ユニットは、１個～３個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個のＴ細胞エピトープ、又は１個～５個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個のＴ細胞エピトープ、又は３個～６個のＴ細胞エピトープ、例えば、３個、４個、５個、６個のＴ細胞エピトープ、又は５個～１５個のＴ細胞エピトープ、例えば、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個若しくは１５個のＴ細胞エピトープ、又は７個～１７個のＴ細胞エピトープ、例えば、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個若しくは１７個のＴ細胞エピトープ、又は９個～１９個のＴ細胞エピトープ、例えば、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個若しくは１９個のＴ細胞エピトープを含む。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、抗原性ユニット中に無作為に配置される。他の実施形態では、抗原性ユニット中にＴ細胞エピトープを配置するための以下の方法の１つ以上を使用することができる。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、二量体化ユニットなどの多量体化ユニットから抗原性ユニットの末端までの方向に、より抗原性が高い方からより抗原性が低い順に配置される。あるいは特に、親水性／疎水性がＴ細胞エピトープ間で大きく変化する場合、最も疎水性のＴ細胞エピトープは、抗原性ユニットの実質的に中央に位置することができ、最も親水性のＴ細胞エピトープは、二量体化ユニット、又は抗原性ユニットの末端などの多量体化ユニットに最も近接して位置することができる。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、多量体化ユニットから抗原性ユニットの末端までの方向に、より抗原性が高い方からより抗原性が低い順に配置される。あるいは特に、親水性／疎水性がＴ細胞エピトープ間で大きく変化する場合、最も疎水性のＴ細胞エピトープは、抗原性ユニットの実質的に中央に位置することができ、最も親水性のＴ細胞エピトープは、多量体化ユニット又は抗原性ユニットの末端に最も近接して位置することができる。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープは、二量体化ユニットから抗原性ユニットの末端までの方向に、より抗原性が高い方からより抗原性が低い順に配置される（図１を参照されたい）。あるいは特に、親水性／疎水性がＴ細胞エピトープ間で大きく変化する場合、最も疎水性のＴ細胞エピトープは、抗原性ユニットの実質的に中央に位置することができ、最も親水性のＴ細胞エピトープは、二量体化ユニット又は抗原性ユニットの末端に最も近接して位置することができる。

抗原性ユニットの中央における真の位置決めは、抗原性ユニットが奇数のＴ細胞エピトープを含む場合にのみ可能であるので、この文脈における「実質的に」という用語は、偶数のＴ細胞エピトープを含む抗原性ユニットを指し、最も疎水性のＴ細胞エピトープは、可能な限り中央の近くに位置する。

例として、抗原性ユニットは、以下のように配列される５つのＴ細胞エピトープを含む：１－２－３^＊－４－５；１、２、３^＊、４及び５は、それぞれ異なるＴ細胞エピトープであり、－は、Ｔ細胞エピトープリンカーであり、^＊は、抗原性ユニットの中央に位置する、最も疎水性のＴ細胞エピトープを示す。

別の例では、抗原性ユニットは、以下のように配列される６つのＴ細胞エピトープを含む：１－２－３^＊－４－５－６、又は代わりに以下のように配列される：１－２－４－３^＊－５－６；１、２、３^＊、４、５及び６は、それぞれＴ細胞エピトープであり、－は、Ｔ細胞エピトープリンカーであり、^＊は、抗原性ユニットの実質的に中央に位置する、最も疎水性のＴ細胞エピトープを示す。

あるいは、Ｔ細胞エピトープは、親水性Ｔ細胞エピトープと疎水性のＴ細胞エピトープとの間で交互に配置され得る。任意で、ＧＣリッチＴ細胞エピトープは、ＧＣクラスターが回避されるように配置される。好ましい実施形態では、ＧＣリッチＴ細胞エピトープは、それらの間に少なくとも１つの非ＧＣリッチＴ細胞エピトープが存在するように配置される。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープをコードするＧＣリッチ配列は、それらの間に少なくとも１つの非ＧＣリッチＴ細胞配列が存在するように配置される。ＧＣリッチ配列は、６０％以上、例えば６５％以上、例えば７０％以上、例えば７５％以上、例えば８０％以上のＧＣ含有量を有する配列である。

抗原性ユニットは、複数のＴ細胞エピトープを含む場合、エピトープは、好ましくはＴ細胞エピトープリンカーによって分離される。これは、各Ｔ細胞エピトープが、免疫系に対して最適な方法で提示されることを確実にする。抗原性ユニットがｎ個のＴ細胞エピトープを含む場合、それは、好ましくはｎ－１個のＴ細胞エピトープリンカーを含み、各Ｔ細胞エピトープを１つ又は２つの他のＴ細胞エピトープから分離する。

Ｔ細胞エピトープリンカーは、非免疫原性であるように設計され、好ましくは可動性リンカーでもあり、これは、たとえ抗原性ユニットが多数のＴ細胞エピトープを含むとしても、Ｔ細胞エピトープを免疫系に最適な様式で提示することを可能にする。

好ましくは、Ｔ細胞エピトープリンカーは、４個～２０個のアミノ酸、例えば、５個～２０個のアミノ酸、又は５個～１５個のアミノ酸、又は８個～２０個のアミノ酸、又は８～１５個のアミノ酸、例えば、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、又は１５個のアミノ酸、１０個～１５個のアミノ酸、又は８個～１２個のアミノ酸、例えば、８個、９個、１０個、１１個、又は１２個のアミノ酸からなるペプチドである。特定の好ましい実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、１０個のアミノ酸からなる。

抗原性ユニットに含まれる全てのＴ細胞エピトープリンカーは、好ましくは同一である。しかしながら、１つ以上のＴ細胞エピトープが、リンカーの配列と同様の配列を含む場合、隣接するＴ細胞エピトープリンカーを異なる配列のリンカーで置換することが有利である。また、Ｔ細胞エピトープ／リンカー接合部が、エピトープを構成すると予測される場合、異なる配列のＴ細胞エピトープリンカーを使用することが好ましい。

一実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、非免疫原性であるように設計される。それは、連結する２つのアミノ酸配列が互いに対して実質的に自由に動くことを可能にしないことを意味する、剛性リンカーであってもよい。あるいは、それは可動性リンカー、すなわち、それが結合する２つのアミノ酸配列が互いに対して実質的に自由に動くことを可能にするリンカーであってもよい。

両方の種類のリンカーが有用である。一実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーが、たとえ抗原性ユニットが多数のＴ細胞エピトープを含むとしても、Ｔ細胞エピトープをＴ細胞に最適な様式で提示することを可能にする可動性リンカーである。

好ましくは、Ｔ細胞エピトープリンカーは、セリン（Ｓ）及び／又はグリシン（Ｇ）リッチリンカー、すなわち、幾つかのセリン及び／又は幾つかのグリシン残基を含むリンカーである。好ましい例は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＳＳ（配列番号５１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号５２）、ＧＧＧＧＳ（配列番号５３）、ＳＧＳＳＧＳ（配列番号５４）、ＧＧＳＧＧ（配列番号５５）又はその複数の変異体、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５６）、（ＧＧＧＧＳ）ｍ（配列番号５３、及び５６～５９）、（ＧＧＧＳＳ）ｍ（配列番号６０～６４）、（ＧＧＧＳＧ）ｍ（配列番号５２、及び６５～６８）、又は（ＳＧＳＳＧＳ）ｍ（配列番号５４、及び６９～７２）であり、式中、ｍは１～５、例えば１、２、３、４、又は５の整数であり、好ましい実施形態では、ｍは２である。他の好ましい実施形態では、セリン及び／又はグリシンリッチリンカーは、少なくとも１個又は少なくとも２個又は少なくとも３個のロイシン残基などの、少なくとも１個のロイシン（Ｌ）残基、例えば、１個、２個、３個又は４個のロイシン残基を更に含む。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＧＳ(配列番号７３）、ＧＬＧＧＳ(配列番号７４）、ＧＧＬＧＳ(配列番号７５）、ＧＧＧＬＳ(配列番号７６）、又はＧＧＧＧＬ(配列番号７７）を含むか、又はそれらからなる。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＧ(配列番号７８）、ＧＬＧＳＧ(配列番号７９）、ＧＧＬＳＧ(配列番号８０）、ＧＧＧＬＧ(配列番号８１）、又はＧＧＧＳＬ(配列番号８２）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＳ(配列番号８３）、ＧＬＧＳＳ(配列番号８４）、又はＧＧＬＳＳ(配列番号８５）を含むか、又はそれらからなる。

更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＬＧＳ(配列番号８６）、ＧＬＧＬＳ(配列番号８７）、ＧＬＬＧＳ(配列番号８８）、ＬＧＧＬＳ(配列番号８９）、ＧＬＧＧＬ(配列番号９０）、又は(ＧＬＧＧＬ)ｍ(配列番号９０～９４）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＬＳＧ(配列番号９５）、ＧＬＬＳＧ(配列番号９６）、ＧＧＬＳＬ(配列番号９７）、ＧＧＬＬＧ(配列番号９８）、又はＧＬＧＳＬ(配列番号９９）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＬＳＳ(配列番号１００）、又はＧＧＬＬＳ(配列番号１０１）を含むか、又はそれらからなる。

他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーが１０個のアミノ酸の長さを有し、１個又は２個のロイシン残基を含むセリン－グリシンリンカーである。

幾つかの実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）、ＧＬＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０３）、ＧＧＬＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０４）、ＧＧＧＬＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０５）、又はＧＧＧＧＬＧＧＧＧＳ（配列番号１０６）を含むか、又はそれらからなる。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号１０７）、ＧＬＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号１０８）、ＧＧＬＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号１０９）、ＧＧＧＬＧＧＧＧＳＧ（配列番号１１０）、又はＧＧＧＳＬＧＧＧＳＧ（配列番号１１１）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＳＧＧＧＳＳ（配列番号１１２）、ＧＬＧＳＳＧＧＧＳＳ（配列番号１１３）、ＧＧＬＳＳＧＧＧＳＳ（配列番号１１４）、ＧＧＧＬＳＧＧＧＳＳ（配列番号１１５）、又はＧＧＧＳＬＧＧＧＳＳ（配列番号１１６）を含むか、又はそれらからなる。

更なる実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＧＳＬＧＧＧＳ（配列番号１１７）、ＧＬＧＧＳＧＬＧＧＳ（配列番号１１８）、ＧＧＬＧＳＧＧＬＧＳ（配列番号１１９）、ＧＧＧＬＳＧＧＧＬＳ（配列番号１２０）、又はＧＧＧＧＬＧＧＧＧＬ（配列番号１２１）を含むか、又はそれらからなる。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＧＬＧＧＳＧ（配列番号１２２）、ＧＬＧＳＧＧＬＧＳＧ（配列番号１２３）、ＧＧＬＳＧＧＧＬＳＧ（配列番号１２４）、ＧＧＧＬＧＧＧＧＬＧ（配列番号１２５）、又はＧＧＧＳＬＧＧＧＳＬ（配列番号１２６）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＬＧＧＳＳＬＧＧＳＳ（配列番号１２７）、ＧＬＧＳＳＧＬＧＳＳ（配列番号１２８）、又はＧＧＬＳＳＧＧＬＳＳ（配列番号１２９）を含むか、又はそれらからなる。

更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＧＳＧＧＧＡ（配列番号１３０）、ＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡ（配列番号１３１）、ＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡ（配列番号１３２）、ＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡＧＳＧＧＧＡ（配列番号１３３）、又はＧＥＮＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号１３４）を含むか、又はそれらからなる。更に他の実施形態では、可動性ユニットは、ＳＧＧＧＳＳＧＧＧＳ（配列番号１３５）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５６）、ＳＳＧＧＧＳＳＧＧＧ（配列番号１３６）、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１３７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１３８）、ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）、ＧＧＧＳＳＳ（配列番号１４０）、ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＳＧＧＧＳＳ（配列番号６２）、又はＧＬＧＧＬＡＡＡ（配列番号１４１）を含むか、又はそれらからなる。

他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、剛性リンカーである。このような剛性リンカーは、（より大きい）抗原を効率的に分離し、それらの相互干渉を防止するために有用であり得る。一実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＫＰＥＰＫＰＡＰＡＰＫＰ（配列番号１４２）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１４３）、（ＥＡＡＡＫ）ｍ（配列番号１４４～１４８）、ＰＳＲＬＥＥＥＬＲＲＲＬＴＥＰ（配列番号１４９）、又はＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号１５０）を含むか、又はそれらからなる。

他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、配列ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＬＧＧＬ（配列番号１５１）を含むか、又はそれからなる。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、配列ＳＬＳＬＳＰＧＫＧＬＧＧＬ（配列番号１５２）を含むか、又はそれからなる。他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＡＡＹ又はＧＰＧＰＧ(配列番号１５３）を含むか、又はそれらからなる。

更に他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、ＧＳＡＴリンカー、すなわち、１つ以上のグリシン、セリン、アラニン及びスレオニン残基を含むリンカー、例えば、配列ＧＧＳＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号１５４）を含むか、又はそれからなるリンカー、又はＳＥＧリンカー、すなわち、１つ以上のセリン、グルタミン酸及びグリシン残基を含むリンカー、例えば、配列ＧＧＳＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１５５）又はＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ（配列番号１５６）を含むか、又はそれからなるリンカーである。

他の実施形態では、Ｔ細胞エピトープリンカーは、切断可能なリンカー、例えば、エンドペプチダーゼ、例えば、フューリン、カスパーゼ、カテプシンなどのエンドペプチダーゼのための１つ以上の認識部位を含むリンカーである。切断可能なリンカーは、遊離の機能性タンパク質ドメイン（例えば、より大きな抗原によってコードされる）を放出するために導入することができ、これは、そのようなドメイン間の立体障害、又は生物活性の低下、生体内分布の変化のような、そのようなドメインの干渉による他の欠点を克服することができる。

Ｔ細胞エピトープリンカーの例は、段落［００９８］、［００９９］及び参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０２０／１７６７９７Ａ１号（特に、配列番号３７～６５及び配列番号６７～７６）の列挙された配列、並びに参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１９／００２２２０２Ａ１号の段落［０１３５］～［０１３９］に開示されている。

アレルゲン
本明細書に記載の寛容誘導構築物は、様々なタンパク質アレルゲン、例えば、翻訳後修飾を受けるタンパク質アレルゲンを含む、本開示の構築物のポリヌクレオチドに含まれる核酸配列によってコードされ得るアレルゲンに対する寛容を誘導するのに有用である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、食物アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、貝類アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、トロポミオシンであり、他の実施形態では、アレルゲンは、アルギニンキナーゼ、ミオシン軽鎖、筋形質カルシウム結合タンパク質、トロポニンＣ又はトリオースリン酸イソメラーゼ又はアクチンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、Ｐａｎ ｂ１である。幾つかの実施形態において、抗原性ユニットは、Ｐａｎ ｂ１ Ｔ細胞エピトープ（２５１～２７０）である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、牛乳アレルゲンである。幾つかの実施形態では、牛乳アレルゲンは、Ｂｏｓ ｄ４、Ｂｏｓ ｄ５、Ｂｏｓ ｄ６、Ｂｏｓ ｄ７、Ｂｏｓ ｄ８、Ｂｏｓ ｄ９、Ｂｏｓ ｄ１０、Ｂｏｓ ｄ１１又はＢｏｓ ｄ１２である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、卵アレルゲンである。幾つかの実施形態では、卵アレルゲンは、オボムコイドであり、他の実施形態では、卵アレルゲンは、オボアルブミン、オボトランスフェリン、コンアルブミン、Ｇａｌ ３ ３、卵リアオザイム又はオボムチンである。

当該技術分野において公知であり、卵アレルギーとの関連で研究されている１つのＴ細胞エピトープは、アミノ酸配列ＳＩＩＮＦＥＫＬ(配列番号４５）を有するＯＶＡ(２５７～２６４）である。

幾つかの実施形態では、本開示による構築物の抗原性ユニットは、Ｔ細胞エピトープＯＶＡ(２５７～２６４）を含む。前記Ｔ細胞エピトープを含む医薬組成物は、卵アレルギーの処置に使用することができる。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、魚アレルゲンである。幾つかの実施形態では、魚アレルゲンは、パルブアルブミンである。他の実施形態では、魚アレルゲンは、エノラーゼ、アルドラーゼ又はビテロゲニンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、果実アレルゲンである。幾つかの実施形態では、果実アレルゲンは、病因関連タンパク質１０、プロフィリン、ｎｓＬＴＰ、タウマチン様タンパク質、ジベレリン調節タンパク質、イソフラボンレダクターゼ関連タンパク質、クラス１キチナーゼ、β－１，３グルカナーゼ、ゲルミン様タンパク質、アルカリセリンプロテアーゼ、病因関連タンパク質１、アクチニジン、フィトシクタチン、キウェルリン、主要ラテックスタンパク質、クピン又は２Ｓアルブミンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、植物アレルゲンである。幾つかの実施形態では、植物アレルゲンは、経路発生関連タンパク質１０、プロフィリン、ｎｓＬＴＰ１型、ｎｓＬＴＰ２型タンパク質、オスモチン様タンパク質、イソフラボンレダクターゼ様タンパク質、β－フルクトフラノシダーゼ、ＰＲタンパク質ＴＳＩ－１、シクロフィリン又はＦＡＤ含有オキシダーゼである。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、小麦アレルゲンである。幾つかの実施形態では、小麦アレルゲンは、Ｔｒｉ ａ１２、Ｔｒｉ ａ１４、Ｔｒｉ ａ１５、Ｔｒｉ ａ１８、Ｔｒｉ ａ１９、Ｔｒｉ ａ２０、Ｔｒｉ ａ２１、Ｔｒｉ ａ２５、Ｔｒｉ ａ２６、Ｔｒｉ ａ２７、Ｔｒｉ ａ２８、Ｔｒｉ ａ２９、Ｔｒｉ ａ３０、Ｔｒｉ ａ３１、Ｔｒｉ ａ３２、Ｔｒｉ ａ３３、Ｔｒｉ ａ３４、Ｔｒｉ ａ３５、Ｔｒｉ ａ３６、Ｔｒｉ ａ３７、又はＴｒｉ ａ３８である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、大豆アレルゲンである。幾つかの実施形態では、大豆アレルゲンは、Ｇｌｙ ｍ１、Ｇｌｙ ｍ２、Ｇｌｙ ｍ３、Ｇｌｙ ｍ４、Ｇｌｙ ｍ５、Ｇｌｙ ｍ６、Ｇｌｙ ｍ７、又はＧｌｙ ｍ８である。他の実施形態では、大豆アレルゲンは、Ｇｌｙ ｍアグルチニン、Ｇｌｙ ｍ Ｂｄ２８Ｋ、Ｇｌｙ ｍ３０ｋＤ、Ｇｌｙ ｍ ＣＰＩ、又はＧｌｙ ｍ ＴＩである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ピーナッツアレルゲンである。幾つかの実施形態では、ピーナッツアレルゲンは、Ａｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、Ａｒａ ｈ３、Ａｒａ ｈ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ７、Ａｒａ ｈ８、Ａｒａ ｈ９、Ａｒａ ｈ１０、Ａｒａ ｈ１１、Ａｒａ ｈ１２、Ａｒａ ｈ１３、Ａｒａ ｈ１４、Ａｒａ ｈ１５、Ａｒａ ｈ１６、又はＡｒａ ｈ１７である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、木の実又は種子アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、１１Ｓグロブリン、７Ｓグロブリン、２Ｓグロブリン、ＰＲ１０、ＰＲ－１４ ｎｓＬＴＰ、オレオシン又はプロフィリンである。

他の実施形態では、食品アレルゲンは、ソバ、セロリ、着色添加物、ニンニク、グルテン、オート麦、マメ科植物、トウモロコシ、マスタード、家禽、肉、米、ゴマであり、又はソバ、セロリ、着色添加物、ニンニク、グルテン、オート麦、マメ科植物、トウモロコシ、マスタード、家禽、肉、米、ゴマに由来する。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ハチ毒アレルゲンである。幾つかの実施形態では、ハチ毒アレルゲンは、ホスホリパーゼＡ２、ヒアルロニダーゼ、酸性ホスファターゼ、メリチン、アレルゲンＣ／ＤＰＰ、ＣＲＰ／ルカラピン又はビテロゲニンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、スズメバチアレルゲンである。幾つかの実施形態では、スズメバチアレルゲンは、ホスホリパーゼＡ１、ヒアルロニダーゼ、プロテアーゼ、アンチゲン５、ＤＰＰ ＩＶ又はビテロゲニンである。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ラテックスアレルゲンである。幾つかの実施形態では、ラテックスアレルゲンは、Ｈｅｖ ｂ１、Ｈｅｖ ｂ２、Ｈｅｖ ｂ３、Ｈｅｖ ｂ４、Ｈｅｖ ｂ５、Ｈｅｖ ｂ６、Ｈｅｖ ｂ７、Ｈｅｖ ｂ８、Ｈｅｖ ｂ９、Ｈｅｖ ｂ１０、Ｈｅｖ ｂ１１、Ｈｅｖ ｂ１２、Ｈｅｖ ｂ１３、Ｈｅｖ ｂ１４、Ｈｅｖ ｂ１５である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、チリダニアレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ヒョウヒダニアレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、貯蔵庫チリ（ｓｔｏｒａｇｅ ｄｕｓｔ）アレルゲンである。幾つかの実施形態では、ヒョウヒダニアレルゲンは、Ｄｅｒ ｐ１、Ｄｅｒ ｐ２、Ｄｅｒ ｐ３、Ｄｅｒ ｐ４、Ｄｅｒ ｐ５、Ｄｅｒ ｐ７、Ｄｅｒ ｐ８、Ｄｅｒ ｐ１０、Ｄｅｒ ｐ１１、Ｄｅｒ ｐ２１、又はＤｅｒ ｐ ２３である。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、Ｄｅｒ ｐ１ Ｔ細胞エピトープ（１１１～１３９）である。幾つかの実施形態では、ヒョウヒダニアレルゲンは、Ｄｅｒ ｆ１、Ｄｅｒ ｆ２、Ｄｅｒ ｆ３、Ｄｅｒ ｆ７、Ｄｅｒ ｆ８又はＤｅｒ ｆ１０である。幾つかの実施形態では、ヒョウヒダニアレルゲンは、Ｂｌｏｔ ｔ１、Ｂｌｏｔ ｔ２、Ｂｌｏｔ ｔ３、Ｂｌｏｔ ｔ４、Ｂｌｏｔ ｔ５、Ｂｌｏｔ ｔ８、Ｂｌｏｔ ｔ１０、Ｂｌｏｔ ｔ２又はＢｌｏｔ ｔ２１である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ゴキブリアレルゲンである。幾つかの実施形態では、ゴキブリアレルゲンがＢｌａ ｇ１、Ｂｌａ ｇ２、Ｂｌａ ｇ３、Ｂｌａ ｇ４、Ｂｌａ ｇ５、Ｂｌａ ｇ６、Ｂｌａ ｇ７、Ｂｌａ ｇ８又はＢｌａ ｇ１１である。幾つかの実施形態では、ゴキブリアレルゲンは、Ｐｅｒ ａ１、Ｐｅｒ ａ２、Ｐｅｒ ａ３、Ｐｅｒ ａ６、Ｐｅｒ ａ７、Ｐｅｒ ａ９又はＰｅｒ ａ１０である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、カビアレルゲンである。幾つかの実施形態では、カビアレルゲンは、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アスペルギルス・フミガーツスアレルゲンは、Ａｓｐ ｆ１、Ａｓｐ ｆ２、Ａｓｐ ｆ３、Ａｓｐ ｆ４、Ａｓｐ ｆ５、Ａｓｐ ｆ６、Ａｓｐ ｆ７、Ａｓｐ ｆ８、Ａｓｐ ｆ９、Ａｓｐ ｆ １０、Ａｓｐ ｆ １１、Ａｓｐ ｆ １２、Ａｓｐ ｆ１３、Ａｓｐ ｆ１４、Ａｓｐ ｆ１５、Ａｓｐ ｆ１６、Ａｓｐ ｆ１７、Ａｓｐ ｆ１８、Ａｓｐ ｆ２２、Ａｓｐ ｆ２３、Ａｓｐ ｆ２７、Ａｓｐ ｆ２８、Ａｓｐ ｆ２９又はＡｓｐ ｆ３４である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、真菌アレルゲンである。幾つかの実施形態では、真菌アレルゲンは、マラセチア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）アレルゲンである。幾つかの実施形態では、マラセチアアレルゲンは、Ｍａｌａ ｆ１、Ｍａｌａ ｆ２、Ｍａｌａ ｆ３、Ｍａｌａ ｆ４、Ｍａｌａ ｆ５、Ｍａｌａ ｆ６、Ｍａｌａ ｆ７、Ｍａｌａ ｆ８、Ｍａｌａ ｆ９、Ｍａｌａ ｆ１０、Ｍａｌａ ｆ１１、Ｍａｌａ ｆ１２又はＭａｌａ ｆ１３又はＭＧＬ＿１２０４である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは毛皮動物アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、イヌアレルゲンである。幾つかの実施形態では、イヌアレルゲンは、Ｃａｎ ｆ１、Ｃａｎ ｆ２、Ｃａｎ ｆ３、Ｃａｎ ｆ４、Ｃａｎ ｆ５又はＣａｎ ｆ６である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ウマアレルゲンである。幾つかの実施形態では、ウマアレルゲンは、Ｅｃｕ ｃ１、Ｅｃｕ ｃ２、Ｅｃｕ ｃ３又はＥｃｕ ｃ４である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、ネコアレルゲンである。幾つかの実施形態では、ネコアレルゲンは、Ｆｅｌ ｄ１、Ｆｅｌ ｄ２、Ｆｅｌ ｄ３、Ｆｅｌ ｄ４、Ｆｅｌ ｄ５、Ｆｅｌ ｄ６、Ｆｅｌ ｄ７又はＦｅｌ ｄ８である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、実験動物アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、リポカリン、尿中プレアルブミン、セクレトグロブリン又は血清アルブミンである。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、草花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、草花粉アレルゲンは、チモシーグラスアレルゲン、カモガヤアレルゲン、ケンタッキーブルーグラスアレルゲン、ペレニアルライアレルゲン、ハルガヤアレルゲン、バヒアグラスアレルゲン、ジョンソングラスアレルゲン又はギョウギシバアレルゲンである。幾つかの実施形態では、草花粉アレルゲンは、Ｐｈｌ ｐ１、Ｐｈｌ ｐ２、Ｐｈｌ ｐ３、Ｐｈｌ ｐ４、Ｐｈｌ ｐ５、Ｐｈｌ ｐ６、Ｐｈｌ ｐ７、Ｐｈｌ ｐ１１、Ｐｈｌ ｐ１２又はＰｈｌ ｐ１３である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、樹木花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、樹木花粉アレルゲンは、ハンノキ花粉アレルゲン、カバノキ花粉アレルゲン、ホームビーン花粉アレルゲン、ヘーゼル花粉アレルゲン、ヨーロッパホームビーン花粉アレルゲン、クリ花粉アレルゲン、ヨーロッパブナ花粉アレルゲン、ホワイトオーク花粉アレルゲン、トネリコ花粉アレルゲン、イボタノキ花粉アレルゲン、オリーブ花粉アレルゲン、ライラック花粉アレルゲン、ヒノキ花粉アレルゲン又はイトスギ花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、樹木花粉アレルゲンは、Ａｌｎ ｇ１又はＡｌｎ ｇ４、Ｂｅｔ ｖ１、Ｂｅｔ ｖ２、Ｂｅｔ ｖ３、Ｂｅｔ ｖ４、Ｂｅｔ ｖ６又はＢｅｔ ｖ７、Ｃａｒ ｂ１、Ｃｏｒ ａ１、Ｃｏｒ ａ２、Ｃｏｒ ａ６、Ｃｏｒ ａ８、Ｃｏｒ ａ９、Ｃｏｒ ａ１０、Ｃｏｒ ａ１１、Ｃｏｒ ａ１２、Ｃｏｒ ａ１３、Ｃｏｒ ａ１４、Ｏｓｔ ｃ１、Ｃａｓ １、Ｃａｓ ５、Ｃａｓ ８又はＣａｓ ９、Ｆａｇ ｓ１、Ｑｕｅ ａ１、Ｆｒａ ｅ１、Ｌｉｇ ｖ１、Ｏｌｅ ｅ１、Ｏｌｅ ｅ２、３ Ｏｌｅ ｅ、４、Ｏｌｅ ｅ５、Ｏｌｅ ｅ６、Ｏｌｅ ｅ７、Ｏｌｅ ｅ８、Ｏｌｅ ｅ９、Ｏｌｅ ｅ１０、Ｏｌｅ ｅ１１又はＯｌｅ ｅ１２、Ｓｙｒ ｖ１、Ｃｈａ ｏ１、Ｃｈａ ｏ２、Ｃｒｙ ｊ１、Ｃｒｙ ｊ２、Ｃｕｐ ｓ１、Ｃｕｐ ｓ３、Ｊｕｎ ａ１、Ｊｕｎ ａ２、Ｊｕｎ ａ３、Ｊｕｎ ｏ４、Ｊｕｎ ｖ１、Ｊｕｎ ｖ３、Ｐｌａ ａ１、Ｐｌａ ａ２又はＰｌａ ａ３又はＰｌａ ｏｒ １、Ｐｌａ ｏｒ２又はＰｌａ ｏｒ３である。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、Ｂｅｔ ｖ１ Ｔ細胞エピトープ（１３９～１５２）である。

幾つかの実施形態では、アレルゲンは、雑草花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、雑草アレルゲンは、ブタクサ花粉アレルゲン、ヨモギ花粉アレルゲン、ヒマワリ花粉アレルゲン、フィーバーフュー花粉アレルゲン、ピレトリウム花粉アレルゲン、イギリスオオバコ花粉アレルゲン、セイヨウヤマアイ（ａｎｎｕａｌ ｍｅｒｃｕｒｙ）花粉アレルゲン、アカザ花粉アレルゲン、ロシアアザミ花粉アレルゲン又はアマランサス花粉アレルゲンである。幾つかの実施形態では、ブタクサ花粉アレルゲンは、Ａｍｂ ａ１、Ａｍｂ ａ４、Ａｍｂ ａ６、Ａｍｂ ａ８、Ａｍｂ ａ９、Ａｍｂ ａ１０又はＡｍｂ ａ１１である。幾つかの実施形態では、ヨモギ花粉アレルゲンは、Ａｒｔ ｖ１、Ａｒｔ ｖ３、Ａｒｔ ｖ４、Ａｒｔ ｖ５又はＡｒｔ ｖ６である。幾つかの実施形態では、ヒマワリ花粉アレルゲンは、Ｈｅｌ ａ１又はＨｅｌ ａ２である。幾つかの実施形態では、ピレトリウム花粉アレルゲンは、Ｐａｒ ｊ１、Ｐａｒ ｊ２、Ｐａｒ ｊ３又はＰａｒ ｊ４である。幾つかの実施形態では、イギリスオオバコ花粉アレルゲンは、Ｐｌａ ｌ１である。幾つかの実施形態では、セイヨウヤマアイ花粉アレルゲンは、Ｍｅｒ ａ１である。幾つかの実施形態では、アカザ花粉アレルゲンは、Ｃｈｅ ａ１、Ｃｈｅ ａ２又はＣｈｅ ａ３である。幾つかの実施形態では、ロシアアザミ花粉アレルゲンは、Ｓａｌ ｋ１、Ｓａｌ ｋ４又はＳａｌ ｋ５である。幾つかの実施形態では、アマランサス花粉アレルゲンは、Ａｍａ ｒ２である。

更に他の実施形態では、アレルゲンは、昆虫、ゴキブリ、ヒョウヒダニ又はカビなどの環境アレルゲンから選択される。

幾つかの実施形態では、アレルギー性疾患は、アレルギー性鼻炎、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性胃腸症、接触性皮膚炎、薬物アレルギー、又はこれらの組み合わせである。

薬物に対するアレルギーは、一般集団の７％超に影響を及ぼす。本開示の構築物は、そのような薬物中に存在する免疫原性エピトープに対する寛容を誘導し、したがって、罹患患者が薬物による処置を継続し、薬物処置から利益を受けることを可能にする。

したがって、幾つかの実施形態では、アレルゲンが望ましくない免疫原性を有する薬物に含まれる。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、第ＶＩＩＩ因子である。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、インスリンである。幾つかの実施形態では、アレルゲンは、治療に使用される１つ以上のモノクローナル抗体である。

自己抗原
他の実施形態では、寛容誘導構築物は、自己免疫疾患に関与する自己アレルゲンに含まれるＴ細胞エピトープを含有する。これは、一般に免疫系を阻害することなく、自己免疫疾患の原因となる免疫系の一部の抗原特異的ダウンレギュレーションを可能にする。

幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症（ＭＳ）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）である。他の実施形態では、自己抗原は、ＭＡＧ、ＭＯＢＰ、ＣＮＰａｓｅ、Ｓ１００β又はトランスアルドラーゼである。幾つかの実施形態では、自己抗原は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、ミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）である。

実施例において、本発明者らは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）由来の短い（３５～５５個のアミノ酸）又はより長い（２７～６３個のアミノ酸）Ｔ細胞エピトープのいずれかを含む、多発性硬化症の構築物を提供する。ＭＯＧは、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、中枢神経系においてのみ発現される。ＭＯＧ（３５－５５）は、自己抗体産生及び再発寛解神経疾患を誘導することができ、広範なプラーク様脱髄を引き起こす。ＭＯＧ（３５－５５）に対する自己抗体応答が、ＭＳ患者で観察され、ＭＯＧ（３５－５５）誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、Ｃ５７／ＢＬ６マウス及びＬｅｗｉｓラットで観察された。

当該技術分野で知られており、研究されている他のＭＳ関連Ｔ細胞エピトープは、以下のようなものが挙げられる。

好ましい態様において、本開示の構築物の抗原性ユニットは、ＭＯＧ(３５－５５）、ＭＯＧ(２７－６３）、ＰＬＰ(１３９－１５１）、ＰＬＰ(１３１－１５９）、ＰＬＰ(１７８－１９１）、ＰＬＰ(１７０－１９９）、ＭＢＰ(８４－１０４）及びＭＢＰ(７６－１１２）からなる群より選択される１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。このような構築物を含む医薬組成物は、ＭＳの処置に使用することができる。

幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は、１型糖尿病である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、１型糖尿病に関与する自己抗原であるグルタミン酸デカルボキシラーゼ６５キロダルトンアイソフォーム（ＧＡＤ６５）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、インスリン、ＩＡ－２又はＺｎＴ８である。更に幾つかの実施形態では、自己抗原は、ＩＧＲＰ、ＣｈｇＡ、ＩＡＰＰ、ペリフェリン、テトラスパニン－７、ＧＲＰ７８、ウロコルチン－３又はインスリン遺伝子エンハンサータンパク質ｉｓｌ－１である。

幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は、セリアック病である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、α－グリアジン、γ－グリアジン、ω－グリアジン、低分子量グルテニン、高分子量グルテニン、ホルデイン、セカリン又はアベニンｂである。幾つかの実施形態では、抗原性ユニットは、Ｔ細胞エピトープα－グリアジン（７６～９５）を含む。

幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチである。幾つかの実施形態では、自己抗原は、コラーゲンである。幾つかの実施形態では、自己抗原は、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、Ｂａｎｄ ３である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、小型核リボ核タンパク質Ｄ１（ＳｍＤ１）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）である。幾つかの実施形態では、自己抗原は、ミエリンタンパク質ゼロ（Ｐ０）である。

幾つかの実施形態では、自己免疫疾患は、慢性炎症性脱髄性多発神経根ニューロパチー（ＣＩＤＰ）であり、自己抗原は、ｎｅｕｒｏｆａｓｃｉｎ－１５５である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、橋本甲状腺炎（ＨＴ）であり、自己抗原は、甲状腺ペルオキシダーゼ及び／又はサイログロブリンである。他の実施形態では、自己免疫疾患は、落葉性天疱瘡であり、自己抗原は、デスモソーム関連糖タンパク質である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡であり、自己抗原は、デスモグレイン３である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、甲状腺眼症（ＴＥＤ）であり、自己抗原は、カルシウム結合タンパク質（カルセクエストリン）である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、グレーブス病であり、自己抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）であり、自己抗原は、抗ミトコンドリア抗体（ＡＭＡ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、Ｒｉｍ様／膜（ＲＬ／Ｍ）及び／又は多核ドット（ＭＮＤ）である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、重症筋無力症であり、自己抗原は、アセチルコリン受容体である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、インスリン抵抗性糖尿病であり、自己抗原は、インスリン受容体である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、自己免疫性溶血性貧血であり、自己抗原は、赤血球である。他の実施形態では、自己免疫疾患は、関節リウマチであり、自己抗原は、シトルリン化ホモシトルリン化タンパク質及び／又はＩｇＧのＦｃ部分である。

他の実施形態では、自己免疫疾患は、乾癬であり、自己抗原は、カテリシジン（ＬＬ－３７）、ディスインテグリン様及びメタロプロテアーゼドメイン含有トロンボスポンジン１型モチーフ様５（ＡＤＡＭＴＳＬ５）、ホスホリパーゼＡ２基ＩＶＤ(ＰＬＡ２Ｇ４Ｄ）、ヘテロ核リボ核タンパク質Ａ１（ｈｎＲＮＰ－Ａ１）及びケラチン１７である。

ユニットリンカー
二量体化ユニットなどの抗原性ユニット及び多量体化ユニットは、好ましくはユニットリンカーによって連結される。ユニットリンカーは、ポリヌクレオチドの構築を容易にするために、制限部位を含んでもよい。ユニットリンカーは、ＧＬＧＧＬリンカー（配列番号９０）又はＧＬＳＧＬリンカー（配列番号１６３）であることが好ましい。幾つかの実施形態では、ユニットリンカーは、配列番号２０４に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

抗原性ユニット及び多量体化ユニットは、好ましくはユニットリンカーによって連結される。ユニットリンカーは、ポリヌクレオチドの構築を容易にするために、制限部位を含んでもよい。ユニットリンカーは、ＧＬＧＧＬリンカー（配列番号９０）又はＧＬＳＧＬリンカー（配列番号１６３）であることが好ましい。幾つかの実施形態では、ユニットリンカーは、配列番号２０４に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

抗原性ユニット及び二量体化ユニットは、好ましくはユニットリンカーによって連結される。ユニットリンカーは、ポリヌクレオチドの構築を容易にするために、制限部位を含んでもよい。ユニットリンカーは、ＧＬＧＧＬリンカー（配列番号９０）又はＧＬＳＧＬリンカー（配列番号１６３）であることが好ましい。幾つかの実施形態では、ユニットリンカーは、配列番号２０４に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

幾つかの実施形態では、ユニットリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号５３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５６）、（ＧＧＧＧＳ）ｍ（配列番号１６４）、ＥＡＡＡＫ（配列番号１４４）、（ＥＡＡＡＫ）ｍ（配列番号１６５）、（ＥＡＡＡＫ）ｍＧＳ（配列番号１６６）、又は（ＥＡＡＫ）ｍＧＳ（配列番号３１）であって、ｍは１以上の整数であるもの、ＧＰＳＲＬＥＥＥＬＲＲＲＬＴＥＰＧ（配列番号１６７）、ＡＡＹ又はＨＥＹＧＡＥＡＬＥＲＡＧ（配列番号１６８）を含むか、又はそれらからなる。

多量体化ユニット及び二量体化ユニット
本開示の構築物は、二量体化ユニットなどの多量体化ユニットを含む。

幾つかの実施形態では、本開示の構築物は、多量体化ユニットを含む。

幾つかの実施形態では、本開示の構築物は、二量体化ユニットを含む。

「多量体化ユニット」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原性ユニットと標的化ユニットとの間のヌクレオチド又はアミノ酸の配列を指す。抗原性ユニットと標的化ユニットとを連結することに加えて、多量体化ユニットは、二量体タンパク質、三量体タンパク質又は四量体タンパク質などの多量体タンパク質への、２個、３個、４個又はそれ以上のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドの多量体化／結合を容易にする。多量体化ユニットはまた、たとえ可変距離に位置していても、ＡＰＣ上の表面分子への標的化ユニットの最適な結合を可能にするために、多量体タンパク質における可動性を提供する。多量体化ユニットは、これらの要件の１つ以上を満たす任意のユニットであってもよい。

３個以上のポリペプチドの多量体化／結合を促進する多量体化ユニット
一実施形態では、多量体化ユニットは、三量体化ユニット、例えば、コラーゲン由来三量体化ユニット、例えば、ヒトコラーゲン由来三量体化ドメイン、例えば、ヒトコラーゲン由来ＸＶＩＩＩ三量体化ドメイン（例えば、Ａ．Ａｌｖａｒｅｚ－Ｃｉｅｎｆｕｅｇｏｓら、Ｓｃｉ Ｒｅｐ ６，２８６４３（２０１６）を参照されたい）又はヒトコラーゲンＸＶ三量体化ドメインである。したがって、一実施形態では、多量体化ユニットは、配列番号４２を有するヌクレオチド配列、又は前記ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる三量体化ユニットである。別の実施形態では、三量体化ユニットは、Ｔ４フィブリチンのＣ末端ドメインである。したがって、一実施形態では、多量体化ユニットは、配列番号４３のアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる三量体化ユニットである。

別の実施形態では、多量体化ユニットは、ｐ５３に由来するドメインなどの四量体化ユニットであり、任意で、以下に記載されるヒンジ領域を更に含む。したがって、一実施形態では、多量体化ユニットは、配列番号４３を有する核酸配列、又は前記核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる四量体化ユニットであり、任意で、以下に記載されるヒンジ領域をさらに含む。

多量体化ユニットに関連する用語「ヒンジ領域」は、２個以上のポリペプチド、例えば、３個又は４個のポリペプチドの連結に寄与する、すなわち、多量体又は二量体タンパク質の形成に寄与する、及び／又は可動性スペーサーとして機能する多量体化ユニットに含まれるアミノ酸配列を指し、たとえこれらの表面分子が可変距離に位置していても、多量体タンパク質の標的化ユニットがＡＰＣ上の複数の表面分子に同時に結合することを可能にする。

二量体化ユニット
本明細書で使用される「二量体化ユニット」という用語は、抗原性ユニットと標的化ユニットとの間のヌクレオチド又はアミノ酸の配列を指す。抗原性ユニットと標的化ユニットとを連結することに加えて、二量体化ユニットは、２個のポリペプチドの二量体化／二量体タンパク質への連結を促進する。二量体化ユニットはまた、たとえ可変距離に位置していても、ＡＰＣ上の表面分子への標的化ユニットの最適な結合を可能にするために、二量体タンパク質における可動性を提供する。二量体化ユニットは、これらの要件の１つ以上を満たす任意のユニットであってもよい。

したがって、幾つかの実施形態では、本開示の構築物は、ヒンジ領域を含む二量体化ユニットを含む。他の実施形態では、二量体化ユニットは、ヒンジ領域と、二量体化を促進する別のドメインとを含む。更に他の実施形態では、二量体化ユニットは、ヒンジ領域、二量体化ユニットリンカー、及び二量体化を促進する別のドメインを含み、二量体化ユニットリンカーは、ヒンジ領域を、二量体化を促進する別のドメインに接続する。他の実施形態では、二量体化ユニットは、ヒンジ領域、二量体化ユニットリンカー、及び二量体化を促進する別のドメインを含み、二量体化ユニットリンカーは、ヒンジ領域を、二量体化を促進する別のドメインに接続する。二量体化ユニットリンカーについては、以下で更に説明する。

幾つかの実施形態では、二量体化ユニットリンカーは、グリシン－セリンリッチリンカー、好ましくはＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）であり、すなわち、二量体化ユニットは、グリシン－セリンリッチ二量体化ユニットリンカー、好ましくは二量体化ユニットリンカーＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）を含む。幾つかの実施形態では、二量体化ユニットリンカーは、配列番号２０１に記載のヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる。

「ヒンジ領域」という用語は、ポリペプチドの２つの結合に寄与する、すなわち二量体タンパク質の形成に寄与する、二量体化ユニットに含まれるアミノ酸配列を指す。

さらに、ヒンジ領域は、可動性スペーサーとして機能し、二量体タンパク質の２つの標的化ユニットが、可変距離に位置していても、ＡＰＣ上の２つの表面分子に同時に結合することを可能にする。ヒンジ領域は、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ３に由来するようなＩｇ由来であってもよい。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＭに由来し、例えば、配列番号４７を有するヌクレオチド配列、又は前記核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。ヒンジ領域は、共有結合、例えば、システイン間のジスルフィド架橋の形成を介して、二量体化（又は多量体化）に寄与し得る。したがって、幾つかの実施形態では、ヒンジ領域は、１つ以上の共有結合を形成する能力を有する。好ましくは、共有結合は、ジスルフィド架橋である。

幾つか実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列１～２７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４（ヒトヒンジ領域１及びヒトヒンジ領域４）を含むか、又はそれらからなる。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列１～２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４を含むか、又はそれらからなる。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列１～２７を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、最大で１０個のアミノ酸、例えば最大で９個のアミノ酸、例えば最大で８個のアミノ酸、例えば最大で７個のアミノ酸、例えば最大で６個のアミノ酸、例えば最大で５個のアミノ酸、例えば最大で４個のアミノ酸、例えば最大で３個のアミノ酸、例えば最大で２個のアミノ酸、又は例えば最大で１個のアミノ酸などが置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列１～２７を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４を含むか、又はそれらからなる。

幾つかの実施形態では、二量体化ユニットは、アミノ酸配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴ(配列番号１５６）及び／又はＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ（配列番号４６）、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる。幾つかの実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号２００又は配列番号２８に記載されるヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる。

他の実施形態では、二量体化ユニットは、二量体化を促進する別のドメインを含み、好ましくは前記別のドメインが免疫グロブリンドメイン、例えば、免疫グロブリン定常ドメイン（Ｃドメイン）、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン若しくはカルボキシ末端Ｃドメイン（すなわち、ＣＨ３ドメイン）、又はそのようなＣドメイン若しくはその変異体と実質的に同一である配列である。好ましくは、二量体化を促進する他のドメインは、ＩｇＧに由来するカルボキシ末端Ｃドメインである。より好ましくは、二量体化を促進する他のドメインは、ＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインである。

幾つかの実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメイン、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインを含むか、又はそれらからなる。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインを含むか、又はそれからなる。

１つの好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、最大１６個のアミノ酸、例えば、最大１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４を含むか、又はそれらからなる。

免疫グロブリンドメインは、非共有相互作用、例えば、疎水性相互作用を介して二量体化に寄与する。したがって、幾つかの実施形態では、免疫グロブリンドメインは、非共有相互作用を介して二量体を形成する能力を有する。好ましくは、非共有相互作用は、疎水性相互作用である。

二量体化ユニットは、ＣＨ３ドメインを含む場合、それはＣＨ２ドメインを含まず、逆もまた同様であることが好ましい。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、ヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びヒトＩｇＧ３のＣＨ３ドメインを含む。更に好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、ヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びヒトＩｇＧ３のＣＨ３ドメインからなるポリペプチドを含む。

他の好ましい態様では、二量体化ユニットは、ヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びヒトＩｇＧ３のＣＨ３ドメインからなるポリペプチドからなる。

幾つかの実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

より好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる。

更により好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、配列番号１のアミノ酸配列、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなる。

１つの好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

１つの好ましい実施形態では、二量体化ユニットは、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列からなる。

幾つかの実施形態では、二量体化ユニットリンカーは、グリシン－セリンリッチリンカー、好ましくはＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）であり、すなわち、二量体化ユニットは、グリシン－セリンリッチ二量体化ユニットリンカー、好ましくは二量体化ユニットリンカーＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）を含む。

シグナルペプチド
好ましい実施形態では、本開示の構築物は、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を更に含むポリヌクレオチドである。シグナルペプチドは、ポリペプチド中の標的化ユニットの配向に応じて、標的化ユニットのＮ末端又は標的化ユニットのＣ末端のいずれかに位置する（図１）。シグナルペプチドは、前記ポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞中のポリヌクレオチドに含まれる核酸によってコードされるポリペプチドの分泌を可能にするように設計される。

任意の適切なシグナルペプチドを使用することができる。適切なペプチドの例は、ヒトＩｇ ＶＨシグナルペプチド又は本明細書に記載の標的化ユニットのいずれかのＮ末端に天然に存在するシグナルペプチド、例えばヒトＩＬ－１０のヒトシグナルペプチド又はヒトＴＧＦβのヒトシグナルペプチドである。

したがって、幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒトＩＬ－１０シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくはヒトＩＬ－１０標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含む。他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒトＩｇ ＶＨシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくはｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列、例えば、ヒト抗ＤＥＣ２０５を含む。

幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

好ましい態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を含むシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は少なくとも９９％を有するアミノ酸配列からなるシグナルペプチドを含む。

他の好ましい実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、最大５個のアミノ酸、例えば最大４個のアミノ酸、例えば最大３個のアミノ酸、例えば最大２個のアミノ酸、又は最大１個のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を含むか又はそれからなるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５０に記載のＩＬ－１０シグナルペプチドなどのマウスＩＬ－１０シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくは配列番号１６９に記載のマウスＩＬ－１０標的化ユニットなどの、マウスＩＬ－１０標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含む。

幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩＬ－１０シグナルペプチド、ＳＣＧＢ３Ａ２シグナルペプチド、ＶＳＩＧ－３シグナルペプチド、ＣＴＬＡ４シグナルペプチド、又はＰＤ－１シグナルペプチドからなる群から選択され、例えば、マウスＩＬ－１０シグナルペプチド、マウスＳＣＧＢ３Ａ２シグナルペプチド、マウスＶＳＩＧ－３シグナルペプチド、マウスＣＴＬＡ４シグナルペプチド、又はマウスＰＤ－１シグナルペプチドからなる群から選択される。幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号５０、１７０、１７２、１７４、１７６及び１７８からなる群から選択される配列に対して８０％の配列同一性を有する配列を含む。

配列同一性
配列同一性は、以下のように決定され得る：高いレベルの配列同一性は、第２の配列が第１の配列に由来する可能性を示す。アミノ酸配列同一性は、２つの整列された配列間で同一のアミノ酸配列を必要とする。したがって、参照配列と７０％のアミノ酸同一性を共有する候補配列は、整列後、候補配列中のアミノ酸の７０％が、参照配列中の対応するアミノ酸と同一であることを必要とする。同一性は、制限されるものではないが、ＣｌｕｓｔａｌＷコンピュータアラインメントプログラム（Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｊ．，Ｇｉｂｓｏｎ Ｊ．Ｄ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．，Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，１９９４．ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗ：シークエンスウェイト付け、位置特異的ギャップペナルティ及び重量マトリックス選択を介して、プログレッシブ多重配列アラインメントの感度を改善する。Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６７３－４６８０）、及びそこで提案されているデフォルトパラメータなどの、コンピュータ解析の助けを借りて決定することができる。デフォルト設定でこのプログラムを使用して、クエリーの成熟（生物活性）部分と参照ポリペプチドを整列させる。完全に保存された残渣の数をカウントし、参照ポリペプチドの長さで割る。そうすることで、クエリー配列の一部を形成する任意のタグ又は融合タンパク質配列は、配列同一性の整列及びその後の判定において無視される。

ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムを同様に使用して、ヌクレオチド配列を整列することができる。配列同一性は、アミノ酸配列について示したのと同様の方法で計算することができる。

配列の比較に利用される別の好ましい数学的アルゴリズムは、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＦＡＳＴＡ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる（Ｐｅａｒｓｏｎ ＷＲ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０００，１３２：１８５－２１９）。Ａｌｉｇｎは、グローバルアラインメントに基づいて配列同一性を算出する。Ａｌｉｇｎ０は、配列の最後の隙間をペナルティにしない。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮ及びＡｌｉｇｎ０プログラムを利用する場合、－１２／－２の隙間開口部／伸長ペナルティを有するＢＬＯＳＵＭ５０置換マトリックスが好ましく使用される。

アミノ酸配列変異体は、寛容誘導構築物をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾には、例えば、アミノ酸配列内の残渣からの欠失、及び／又はその中への挿入、及び／又はその置換が含まれる。アミノ酸配列及び配列同一性に関して本明細書で使用される、置換された／置換、欠失された／欠失及び挿入された／挿入という用語は、当業者に周知であり、明白である。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が所望の特徴を有するという条件で、最終構築物に到達するように行うことができる。例えば、アミノ酸残基の欠失、挿入又は置換は、サイレント変化を生じることができ、機能的に当量なペプチド／ポリペプチドを生じ得る。

物質の二次結合活性が保持される限り、極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は残渣の両親媒性の性質の類似性に基づいて、意図的なアミノ酸置換を行うことができる。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられ；正に荷電したアミノ酸としてはリジン及びアルギニンが挙げられ；同様の親水性値を有する非荷電極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、及びチロシンが挙げられる。

本明細書には、保存的置換、すなわち塩基性、酸性、極性などの酸性、極性などの酸性、及び非保存的置換、すなわち、あるクラスの残渣から別の残渣への塩基性、又はオルニチン、ジアミノ酪酸オルニチン、ノルロイシン、オルニチン、ピリルアラニン、チエニルアラニン、ナフチルアラニン及びフェニルグリシンなどの非天然アミノ酸の包含を含む類似の置換が包含される。保存的置換は、例えば、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン及びヒスチジン）、酸性アミノ酸（グルタミン酸及びアスパラギン酸）、脂肪族アミノ酸（アラニン、バリン（ａａｌｉｎｅ）、ロイシン、イソロイシン）、極性アミノ酸（グルタミン、アスパラギン、セリン、トレオニン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）、ヒドロキシルアミノ酸（セリン、トレオニン）、大きなアミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファン）及び小さなアミノ酸（グリシン、アラニン）のグループ内で行うことができる。

非天然アミノ酸による置換も可能であり、置換残基としては、α^＊及びα－二置換^＊アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸^＊、乳酸^＊、トリフルオロチロシン^＊などの天然アミノ酸のハロゲン化物誘導体、ｐ－Ｃｌ－フェニルアラニン^＊、ｐ－Ｂｒ－フェニルアラニン^＊、ｐ－Ｉ－フェニルアラニン^＊、Ｌ－アリルグリシン^＊、β－アラニン^＊、Ｌ－α－アミノ酪酸^＊、Ｌ－γ－アミノ酪酸^＊、Ｌ－α－アミノイソ酪酸^＊、Ｌ－ε－アミノカプロン酸^＊、７－アミノヘプタン酸^＊、Ｌ－メチオニンスルホン^＊、Ｌ－ノルロイシン^＊、Ｌ－ノルバリン^＊、ｐ－ニトロ－Ｌ－フェニルアラニン^＊、Ｌ－ヒドロキシプロリン^＊、Ｌ－チオプロリン^＊、４－メチルフェニルアラニン^＊、ペンタメチルフェニルアラニン^＊、Ｌ－フェニルアラニン（４－アミノ）＃、Ｌ－Ｔｙｒ（メチル）^＊、Ｌ－フェニルアラニン（４－イソプロピル）^＊、Ｌ－Ｔｉｃ（ｌ，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸）^＊、Ｌ－ジアミノプロピオン酸^＊及びＬ－フェニルアラニン（４－ベンジル）^＊などのフェニルアラニン（Ｐｈｅ）のメチル誘導体が挙げられる。

上記段落において、^＊は、置換残渣の疎水性を示し、＃は、置換残渣の親水性を示し、＃^＊は、置換残渣の両親媒性を示す。変異体アミノ酸配列は、グリシン又はβ－アラニン残基などのアミノ酸スペーサーに加えて、メチル基、エチル基又はプロピル基などのアルキル基を含む配列の任意の２つのアミノ酸残基の間に挿入され得る、適切なスペーサー基を含んでもよい。変異の更なる形態は、ペプトイド形態の１つ以上のアミノ酸残基の存在を含む。

ポリヌクレオチド
本開示の寛容誘導構築物は、ポリヌクレオチドの形であってもよい。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列であるポリヌクレオチドであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

ポリヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びｍＲＮＡを含むＤＮＡ又はＲＮＡであってもよく、二本鎖又は一本鎖のいずれかである。好ましい実施形態では、構築物はＤＮＡプラスミドであり、すなわち、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。

ポリヌクレオチドは、それが投与される種における使用のために最適化されることが好ましい。したがって、ヒトへの投与のためには、ポリヌクレオチド配列がヒトコドン最適化されていることが好ましい。

ポリペプチド及び多量体／二量体タンパク質
本開示の構築物は、上記のポリヌクレオチドに含まれるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの形であってもよい。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの多量体化と、抗原性ユニットと、を含むポリペプチドであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化と、抗原性ユニットと、を含むポリペプチドであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、を含むポリペプチドであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

ポリペプチドは、例えば、構築物を含む医薬組成物の産生のために、寛容誘導構築物の産生のためにｉｎ ｖｉｔｒｏで発現されてもよく、又はポリペプチドは、上記のように、対象へのポリヌクレオチドの投与の結果としてｉｎ ｖｉｖｏで発現されてもよい。多量体化／二量体化ユニットの存在により、多量体化／二量体タンパク質は、ポリペプチドが発現されるときに、すなわち、それぞれの多量体化／二量体化ユニットを介して複数のポリペプチドを連結することによって形成される。

本開示の更なる態様は、２個のポリペプチドなどの複数のポリペプチドを含む、二量体タンパク質などの多量体であり、その各々は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、を含み、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、複数のポリペプチドを含む多量体であって、その各々は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、を含み、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、複数のポリペプチドを含み、その各々は、抗原提示細胞を標的化するか、又は標的化することができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、を含み、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

多量体タンパク質は、ホモ多量体、すなわち、複数のポリペプチド鎖が同一であり、したがって同一のユニットを含み、したがって同一の抗原配列を含む多量体タンパク質であってもよく、又は多量体タンパク質は、複数のポリペプチド鎖を含むヘテロ多量体であってもよく、各ポリペプチド鎖は、その抗原性ユニット中に異なる抗原配列を含んでもよい。二量体タンパク質は、ホモ二量体、すなわち、２個のポリペプチド鎖が同一であり、したがって同一のユニットを含み、したがって抗原配列を含む二量体タンパク質であってもよく、又は二量体タンパク質は、２個のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体であってもよく、ポリペプチド鎖１は、ポリペプチド２とは異なるＴ細胞エピトープをその抗原性ユニット中に含む。後者は、抗原性ユニットに含めるためのＴ細胞エピトープの数が抗原性ユニットの上限サイズを超える場合に関連し得る。多量体／二量体タンパク質は、ホモ多量体／ホモ二量体タンパク質であることが好ましい。

ベクター
構築物のポリヌクレオチド配列は、宿主細胞をトランスフェクトするのに適したベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチド、及びポリヌクレオチドに含まれる核酸配列によってコードされるポリペプチド又は多量体／二量体タンパク質、すなわち発現ベクター、好ましくはＤＮＡプラスミドであり得る。別の実施形態では、ベクターは、宿主細胞をトランスフェクトし、ポリペプチド／多量体タンパク質をコードするｍＲＮＡの発現に適している。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと、二量体化ユニットなどの多量体化と、抗原性ユニットと、を含むベクターであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと、多量体化と、抗原性ユニットと、を含むベクターであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、を含むベクターであって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

好ましくは、ベクターは、上記の様々なユニット、特に抗原性ユニットの容易な交換を可能にする。

幾つかの実施形態では、ベクターは、ｐＡＬＤ－ＣＶ７７、又は対象に導入されたときに、好ましくない方法で免疫応答を誘発することが知られている細菌ヌクレオチド配列を含まない任意の他のベクターであってもよい。抗原性ユニットは、便利な制限酵素によって制限される抗原性ユニットカセット、例えば、５’部位は、ＧＬＧＧＬ(配列番号９０）及び／又はＧＬＳＧＬ（配列番号１６３）ユニットリンカーをコードするヌクレオチド配列に組み込まれ、３’部位は、ベクター中の終止コドンの後に含まれるＳｆｉＩ制限酵素カセットと交換され得る。

本開示のベクターは、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの外来核酸配列を、それらが発現され得る細胞中に運ぶのに適した任意の分子、すなわち発現ベクターであってもよい。

幾つかの実施形態では、ベクターは、ＤＮＡプラスミドなどのＤＮＡベクター、又はアデノウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、サイトメガロウイルス及びセンダイウイルスからなる群から選択されるＤＮＡウイルスベクターなどのＤＮＡウイルスベクターである。

他の実施形態では、ベクターは、ＲＮＡプラスミドなどのＲＮＡベクター、又はレトロウイルスベクター、例えば、アルファウイルス、レンチウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス及びラブドウイルスからなる群から選択されるレトロウイルスベクターなどの、ＲＮＡウイルスベクターである。

好ましい実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクター、より好ましくはＤＮＡプラスミドである。好ましい実施形態では、ベクターは、ＤＮＡプラスミドであり、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである。

プラスミド
プラスミドは、染色体ＤＮＡから物理的に分離され、独立して複製することができる、細胞内の小さな染色体外ＤＮＡ分子である。プラスミドは、大部分が細菌の小さな円形状の二本鎖ＤＮＡ分子として見られるが、古細菌や真核生物にはプラスミドが存在することもある。人工プラスミドは、分子クローニングにおけるベクターとして広く使用されており、宿主生物内での組換えＤＮＡ配列の高発現を送達し、確実にする働きをする。プラスミドは、例えば、抗生物質耐性のための遺伝子、複製起点、多重クローニング部位（ＭＣＳ）、及び目的の挿入遺伝子の発現を駆動するためのプロモーターなどの、プラスミドを含む細胞の選択のための特徴を含む、幾つかの重要な特徴を含む。

一般に、プロモーターは、遺伝子が転写されるように、開始因子及びポリメラーゼをプロモーターに引きつけることができる配列である。プロモーターは、ＤＮＡ上の上流の、遺伝子の転写開始部位の近くに位置する。プロモーターは、約１００個以上約１０００個以下の塩基対長であり得る。プロモーターの性質は、通常、転写の遺伝子及び産物、並びに部位に動員されるＲＮＡポリメラーゼの種類又はクラスに依存する。ＲＮＡポリメラーゼがプラスミドのＤＮＡを読み取ると、ＲＮＡ分子が転写される。プロセシング後、リボソームがｍＲＮＡをタンパク質に翻訳するとき、ｍＲＮＡは、何度も翻訳することができ、したがって、目的の遺伝子によってコードされるタンパク質の多くのコピーを生じる。一般に、リボソームは、相補的ｔＲＮＡアンチコドン配列のｍＲＮＡコドンへの結合を誘導することによって、デコードを容易にする。ｔＲＮＡは、ｍＲＮＡが通過し、リボソームによって「読み取られる」につれて、ポリペプチドに一緒に連鎖する特定のアミノ酸を運ぶ。翻訳は、開始、伸長、終結の３段階で進行する。翻訳プロセスに続いて、ポリペプチドは、活性タンパク質に折り畳まれ、細胞内でその機能を果たすか、又は細胞から排出され、時にはかなりの数の翻訳後修飾を経て、他の場所でその機能を果たす。

タンパク質が細胞外への排出の運命にある場合、シグナルペプチドは、タンパク質を小胞体に導き、そこでシグナルペプチドは切断され、タンパク質は、翻訳が終了した後、細胞末梢に移される。

本開示のＤＮＡプラスミドは、任意の特定のプラスミドに限定されず、当業者は、適切な骨格を有する任意のプラスミドが、本開示の要素及びユニットを含むように、当技術分野で公知の方法によって選択され、操作され得ることを理解するであろう。

宿主細胞
本開示の更なる態様は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、ポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）２個のポリペプチドなどの、（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む宿主細胞である。

本開示の更なる態様は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、ポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含む宿主細胞である。

本開示の更なる態様は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、ポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含む宿主細胞である。

適切な宿主細胞には、原核生物、酵母、昆虫又は高等真核細胞が含まれる。好ましい実施形態では、宿主細胞は、ヒト細胞、好ましくは免疫疾患に罹患し、本開示の構築物による予防的又は治療的処置を必要とするヒト個体の細胞である。

医薬組成物
本開示の構築物は、構築物、例えば、ポリヌクレオチド又は多量体／二量体タンパク質及び薬学的に許容される担体の形成を含む医薬組成物として、対象に投与され得る。

本開示の更なる態様は、薬学的に許容される担体、及び
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）２個のポリペプチドなどの、（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物であって、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、薬学的に許容される担体、及び
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物であって、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

本開示の更なる態様は、薬学的に許容される担体、及び
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含む医薬組成物であって、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

適切な薬学的に許容される担体には、生理食塩水、ＰＢＳなどの緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、滅菌等張水性緩衝液、及びこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

幾つかの実施形態では、組成物は、１つ以上のアジュバントを含んでもよい。適切なアジュバントとしては、デキサメタゾン、エンテロトキシンコレラ毒素（ＣＴＢ）のＢサブユニット、ＴＬＲ２配位子、蠕虫由来の排泄物／分泌物（ＥＳ）産物、ラパマイシン、又はビタミンＤ３類似体及びアリール炭化水素受容体配位子が挙げられるが、これらに限定されない。

幾つかの特定の実施形態では、組成物は、ポリ（エチレンオキシド）及びポリプロピレンオキシドのブロックを含む、薬学的に許容される両親媒性ブロックコポリマーを含むことができる。

本明細書で使用するとき、「両親媒性ブロックコポリマー」は、ポリ（エチレンオキシド）（「ＰＥＯ」）のブロックと、ポリ（プロピレンオキシド）（「ＰＰＯ」）のブロックと、を含むか又はそれらからなる直鎖又は分岐コポリマーである。有用なＰＥＯ－ＰＰＯ両親媒性ブロックコポリマーの典型的な例は、一般構造ＰＥＯ－ＰＰＯ－ＰＥＯ（ポロキサマー）、ＰＰＯ ＰＥＯ ＰＰＯ、（ＰＥＯ ＰＰＯ－）４ＥＤ（ポロキサミン）、及び（ＰＰＯ ＰＥＯ－）４ＥＤ（逆方向ポロキサミン）を有し、「ＥＤ」は、エチレンジアミニル基である。

「ポロキサマー」は、ＰＥＯの１つのブロックに結合したポリ（プロピレンオキシド）の１つのブロック、すなわち、式ＥＯａ－ＰＯｂ－ＥＯａに結合したポリ（エチレンオキシド）の１つのブロックによって構成される直鎖状両親媒性ブロックコポリマーであって、式中、ＥＯはエチレンオキシドであり、ＰＯはプロピレンオキシドであり、Ａは２以上１３０以下の整数であり、ｂは１５以上６７以下の整数である。ポロキサマーは、従来、３桁の識別子を使用することによって命名され、最初の２桁に１００を乗じたものはＰＰＯ含有量の近似分子量を提供し、最後の数字に１０を乗じたものはＰＥＯ含有量の近似割合を示す。例えば、「ポロキサマー１８８」は、約１８００の分子量のＰＰＯブロック（ｂは、約３１ ＰＰＯであることに対応する）と、約８０％（ｗ／ｗ）のＰＥＯ（ａは、約８２であることに対応する）を含むポリマーを指す。しかしながら、値は、ある程度変動することが知られており、製造者のデータシートによると、どちらもポロキサマー１８８である、研究グレードのＬｕｔｒｏｌ（登録商標）Ｆ６８や臨床グレードのＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）Ｐ１８８などの市販製品は、分子量に大きなばらつきがあり（７，６８０～９，５１０）、これらの特定の製品について提供されているａ及びｂの値は、それぞれ約７９及び２８である。これは、ブロックコポリマーの不均一な性質を反映しており、ａ及びｂの値が最終配合物中に見出される平均であることを意味する。

「ポロキサミン」又は「連続ポロキサミン」（Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）の商品名で市販されている）は、ＰＥＯ－ＰＰＯ－アームに含まれる遊離ＯＨ基と、エチレンジアミン部分の一級アミン基との間の結合を介して中央エチレンジアミン部分に連結された４つのＰＥＯ－ＰＰＯアームを有するＸ字型ブロックコポリマーである。逆方向ポロキサミンは、同様に、ＰＰＯ－ＰＥＯアームに含まれる遊離ＯＨ基と、エチレンジアミン中の第一級アミン基との間の結合を介して中央エチレンジアミン部分に連結された４つのＰＰＯ－ＰＥＯアームを有するＸ形状ブロックコポリマーである。

好ましい両親媒性ブロックコポリマーは、ポロキサマー又はポロキサミンである。好ましいのは、ポロキサマー４０７及び１８８、特にポロキサマー１８８である。好ましいポロキサミンは、式（ＰＥＯ－ＰＰＯ）４－ＥＤの連続ポロキサミンである。特に好ましいポロキサミンは、それぞれＴｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）９０４、７０４、及び３０４の登録商標で市販されているものである。これらのポロキサミンの特性は、以下のとおりである：Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）９０４は、６７００の総平均分子量、４０２０のＰＰＯユニットの総平均重量、及び約４０％のＰＥＯ割合を有する。Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）７０４は、５５００の総平均分子量、３３００のＰＰＯユニットの総平均重量、及び約４０％のＰＥＯ割合を有し、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）３０４は、１６５０の総平均分子量、９９０のＰＰＯユニットの総平均重量、及び約４０％のＰＥＯ割合を有する。

幾つかの実施形態では、組成物は、０．２％ｗ／ｖ以上２０％ｗ／ｖ以下、例えば０．２％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上１６％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上１４％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上１２％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上１０％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上８％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上６％ｗ／ｖ以下、０．２％ｗ／ｖ以上４％ｗ／ｖ以下、０．４％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、０．６％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、０．８％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、１％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、２％ｗ／ｖ以上１８％ｗ／ｖ以下、１％ｗ／ｖ以上５％ｗ／ｖ以下、又は２％ｗ／ｖ以上４％ｗ／ｖ以下、の量の両親媒性ブロックコポリマーを含む。特に好ましいのは、０．５％ｗ／ｖ以上５％ｗ／ｖ以下の範囲の量である。他の実施形態では、組成物は、２％ｗ／ｖ以上５％ｗ／ｖ以下、例えば、約３％ｗ／ｖの量の両親媒性ブロックコポリマーを含む。

ポリヌクレオチドを含む医薬組成物の場合、組成物は、細胞のトランスフェクションを容易にする分子を更に含むことができる。

医薬組成物は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶に罹患しているか、又は罹患していると疑われる患者などの、対象への投与に適した任意の方法で、例えば、注射用、例えば、皮内又は筋肉内注射用の液体製剤などで製剤化することができる。

幾つかの実施形態では、例えば、ベクターに含まれる、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物は、皮内、筋肉内、若しくは皮下注射によって、又は鼻腔内若しくは経口投与などの粘膜若しくは上皮用途によって投与されるなど、対象への投与に適した任意の方法で投与され得る。

好ましい実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含み、任意で、ベクターに含まれ、筋肉内又は皮内注射によって投与される。

本開示の医薬組成物は、典型的には、０．１μｇ以上１０ｍｇ以下、例えば、約０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、０．７５μｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、７５μｇ、又はそれ以上；例えば、０．１ｍｇ以上１０ｍｇ以下、例えば、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ又は１ｍｇ、又は例えば、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ又は１０ｍｇの範囲にあるポリヌクレオチドを含む。本開示の医薬組成物は、典型的には、５μｇ以上５ｍｇ以下の範囲にあるポリペプチド／二量体タンパク質を含む。

ポリヌクレオチド、ポリペプチド、二量体タンパク質又は多量体タンパク質の量は、医薬組成物が予防的又は治療的処置のために投与されるかどうか、それに罹患している個体における免疫疾患の重症度、並びに年齢、体重、性別、病歴及び既存の状態などのパラメータに応じて変化し得る。

医薬組成物の製造方法
本開示による医薬組成物又はワクチンを調製するための適切な方法は、基準により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４／０７６４８９Ａ１、ＷＯ２０１１／１６１２４４Ａ１、ＷＯ２０１３／０９２８７５Ａ１及びＷＯ２０１７／１１８６９５Ａ１に開示されている。

一態様では、本開示がｉｎ ｖｉｔｒｏでポリペプチドを産生することによって、上記に記載の多量体／二量体タンパク質又はポリペプチドを含む医薬組成物を調製するための方法に関する。ポリペプチド及びタンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ合成は、当業者に公知の任意の適切な方法、例えば、様々な発現系におけるポリペプチドのペプチド合成又は発現、その後の精製によって行うことができる。

一態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでポリペプチドを産生することによって、上記に記載の多量体タンパク質又はポリペプチドを含む医薬組成物を調製方法に関する。ポリペプチド及びタンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ合成は、当業者に公知の任意の適切な方法、例えば、様々な発現系におけるポリペプチドのペプチド合成又は発現、その後の精製によって行うことができる。

一態様では、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでポリペプチドを産生することによって、上記に記載の二量体タンパク質又はポリペプチドを含む医薬組成物を調製するための方法に関する。ポリペプチド及びタンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ合成は、当業者に公知の任意の適切な方法、例えば、様々な発現系におけるポリペプチドのペプチド合成又は発現、その後の精製によって行うことができる。

したがって、本開示の更なる態様は、２個、３個、４個又はそれ以上のポリペプチドなどの複数のポリペプチドからなる多量体タンパク質又は二量体タンパク質；又はポリペプチドを含む医薬組成物の調製方法であって、本方法は、
ａ) 抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトすることと、
ｂ)細胞を培養することと、
ｃ)多量体タンパク質又は二量体タンパク質又は細胞から発現されたポリペプチドを収集及び精製することと、
ｄ）工程ｃ）から得られた多量体タンパク質又は二量体タンパク質又はポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

したがって、本開示の更なる態様は、２個、３個、４個又はそれ以上のポリペプチドなどの複数のポリペプチドからなる多量体タンパク質；又はポリペプチドを含む医薬組成物の調製方法であって、本方法は、
ａ) 抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトすることと、
ｂ)細胞を培養することと、
ｃ)多量体タンパク質又は二量体タンパク質又は細胞から発現されたポリペプチドを収集及び精製することと、
ｄ）工程ｃ）から得られた多量体タンパク質又は二量体タンパク質又はポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

したがって、本開示の更なる態様は、二量体タンパク質、２個のポリペプチド；又はポリペプチドを含む医薬組成物の調製方法であって、本方法は、
ａ) 抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトすることと、
ｂ)細胞を培養することと、
ｃ)多量体タンパク質又は二量体タンパク質又は細胞から発現されたポリペプチドを収集及び精製することと、
ｄ）工程ｃ）から得られた多量体タンパク質又は二量体タンパク質又はポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

好ましい実施形態では、工程ｃ）から得られた多量体タンパク質、二量体タンパク質又はポリペプチドは、前記薬学的に許容される担体に溶解される。

好ましい実施形態では、工程ｃ）から得られた多量体タンパク質又はポリペプチドは、前記薬学的に許容される担体に溶解される。

好ましい実施形態では、工程ｃ）から得られた二量体タンパク質又はポリペプチドは、前記薬学的に許容される担体に溶解される。

精製は、クロマトグラフィー、遠心分離、又は示差溶解性などの任意の適切な方法に従って実施することができる。

別の態様では、本開示は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む医薬組成物の調製方法であって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、本方法は、
ａ）ポリヌクレオチドを調製することと、
ｂ）任意で、ポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングすることと、
ｃ）工程ａ）から得られたポリヌクレオチド、又は工程ｂ）から得られたベクターを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

別の態様では、本開示は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む医薬組成物の調製方法であって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、本方法は、
ａ）ポリヌクレオチドを調製することと、
ｂ）任意で、ポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングすることと、
ｃ）工程ａ）から得られたポリヌクレオチド、又は工程ｂ）から得られたベクターを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

別の態様では、本開示は、抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む医薬組成物の調製方法であって、抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含み、本方法は、
ａ）ポリヌクレオチドを調製することと、
ｂ）任意で、ポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングすることと、
ｃ）工程ａ）から得られたポリヌクレオチド、又は工程ｂ）から得られたベクターを、薬学的に許容される担体と混合することと、
を含む。

ポリヌクレオチドは、当業者に公知の任意の適切な方法によって調製することができる。例えば、ポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドシンセサイザーを使用する化学合成によって調製され得る。

特に、標的化ユニット及び／又は二量体化ユニットをコードするヌクレオチド配列は、個々に合成され、次いで、抗原性ユニットをコードする核酸配列をベクターに連結することによって、ベクター骨格に連結されて、最終ポリヌクレオチドを生成し得る。

一態様では、本開示は、本明細書に記載される構築物、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、又は二量体タンパク質などの、多量体タンパク質の医薬としての使用に関する。

一態様では、本開示は、本明細書に記載される構築物、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、又は多量体タンパク質の医薬としての使用に関する。

一態様では、本開示は、本明細書に記載される構築物、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、又は二量体タンパク質の医薬としての使用に関する。

処置
本開示の構築物又は医薬組成物を使用して、自己免疫疾患、アレルギー性疾患又は移植片拒絶を処置することができ、処置は、予防又は治療目的のいずれかであり得る。

構築物／医薬組成物は、このような医薬組成物と共に投与される個体において寛容を誘導するように投与される。寛容は、単回投与、好ましくは適切に時間隔を空けた複数回投与のいずれかによって誘導される。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象を処置するための方法を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象を処置するための方法を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象を処置するための方法を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、二量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

薬学組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更に別の態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置に使用するための医薬組成物を提供し、医薬組成物は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更に別の態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置に使用するための医薬組成物を提供し、医薬組成物は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更に別の態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置に使用するための医薬組成物を提供し、医薬組成物は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、本方法は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象における、又はその予防を必要としている対象における、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置のための医薬品の製造のための医薬組成物の使用を提供し、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドからなる、二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象における、又はその予防を必要としている対象における、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置のための医薬品の製造のための医薬組成物の使用を提供し、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、免疫疾患に罹患しているか、又は罹患している疑いがある対象における、又はその予防を必要としている対象における、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置のための医薬品の製造のための医薬組成物の使用を提供し、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、処置は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、処置は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬組成物の使用を提供し、処置は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含む医薬組成物を対象に投与することを含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬品を提供し、医薬品は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドからなる、二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬品を提供し、医薬品は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患を有するか、又は有することが疑われる対象、又はその予防を必要としている対象の予防的又は治療的処置のための医薬品を提供し、医薬品は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含み、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドなどの、複数のポリペプチドからなる、二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を提供し、
自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置において使用される場合、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる、多量体タンパク質、
を含む医薬組成物を提供し、
自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置において使用される場合、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

更なる態様では、本開示は、
ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされる、ポリペプチド、又は
ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質、
を含む医薬組成物を提供し、
自己免疫疾患、アレルギー性疾患及び移植片拒絶からなる群から選択される免疫疾患の予防的又は治療的処置において使用される場合、
抗原性ユニットは、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む。

医薬組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。

幾つかの実施形態では、医薬品の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

更なる態様では、本開示は、本開示による寛容誘導構築物を使用して、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための方法を提供する。

更なる態様では、本開示は対象における自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための方法を提供し、本方法は、対象に、本開示による寛容誘導構築物又は医薬組成物を投与することを含む。

幾つかの実施形態では、本開示による寛容誘導構築物又は医薬組成物の１用量が対象に投与される。幾つかの実施形態では、本開示による寛容誘導構築物又は医薬組成物の反復投与が対象に投与される。

処置成功の指標は、抗原特異的制御性Ｔ細胞のレベルの増加、抗原特異的エフェクターＴ細胞のレベルの減少（及び制御性Ｔ細胞のレベルの増加）、エフェクターＴ細胞のレベルの減少、抗原性ユニット中の抗原性ユニット／Ｔ細胞エピトープで刺激された場合のＥＬＩＳＰＯＴにおけるＴ細胞活性化のレベルの減少、好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）における好塩基球活性化のレベルの減少などが、当該技術分野で公知である。

放射性アレルギー吸収試験（ＲＡＳＴ）を同様に使用して、免疫療法構築物の投与の前後に、対象由来の血液サンプル中のアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体レベルを比較することができ、下側アレルゲン特異的ＩｇＥ抗体レベルは、寛容誘導の成功を示す。

実施例１：本開示によるベクターの設計及び製造
実施例１ａ、１ｂ及び１ｃに記載の全ての遺伝子配列を、発現ベクターｐＡＬＤ－ＣＶ７７にクローニングしたＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳ）から注文した。

実施例１ａ：多発性硬化症の処置に使用するための、本開示によるベクターの設計及び製造
ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）は、中枢神経系に位置するタンパク質である。ＭＯＧの免疫優性３５－５５エピトープ（ＭＯＧ３５－５５）は、多発性硬化症の間の細胞性及び体液性免疫応答の両方の主要な標的である。ＭＯＧ（３５－５５）誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症の最も一般的に使用される動物モデルである（Ｈｕｎｔｅｒｍａｎ，Ｈ．ら、２０２２）。

表１に記載されるように、以下のユニット／部分をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡベクターを設計した。

ＤＮＡベクターＶＢ５００３ｂ、ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ、ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０４８、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０、ＶＢ５０６１及びＶＢ５０７１は、表１に特定されるような標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットを含む寛容誘導構築物をコードする。マウスＭＯＧ（２７－６３）抗原性ユニットは、Ｔ細胞エピトープＭＯＧ（３５－５５）を含む。

ＤＮＡベクターＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５０５２は、ＡＰＣを炎症誘発性様式で標的化することが知られている、ヒトＣＣＬ３Ｌ１標的化ユニットを含む構築物（「Ｖａｃｃｉｂｏｄｙ」）をコードし、すなわち、このような標的化ユニットを含む構築物は、それらが投与される対象において増強された免疫応答を誘導し、この化合物がＩＦＮ－γ産生の増加を伴う活性化された免疫応答を誘導することが予想される（例えば、ＷＯ２０１１１６１２４４Ａ１を参照されたい）。

ＤＮＡベクターＶＢ５００１ｂ及びＶＢ５０５１は、標的化ユニット又は二量体化ユニットをコードせず、抗原性ユニットとしてＭＯＧ（２７－６３）のみ、すなわち単一のタンパク質／ペプチドをコードする。

実施例１ｂ：真性糖尿病の処置に使用するための、本開示によるベクターの設計及び製造
グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５（ＧＡＤ６５）は、糖尿病における主要な自己抗原と考えられている。ペプチドＧＡＤ６５（２０１－２２０）は、ＧＡＤ６５での免疫化後、主要組織適合性複合体クラスＩＩ対立遺伝子ＨＬＡ－ＤＱ８を発現するトランスジェニックマウスにおいて最大のＴ細胞応答を与えた。ＧＡＤ６５（２０６－２２０）は、ＮＯＤマウスにおけるＧＡＤ６５の免疫優性Ｔ細胞エピトープである（Ｌｉｕ，Ｊ．ら、１９９９）。

表２に記載されるように、以下のユニット／部分をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡベクターを設計した。

ＤＮＡベクターＶＢ５０１６ｂは、表２に記載されるように、標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットを含む寛容誘導構築物をコードする。

ＤＮＡベクターＶＢ５０１５ｂは、ＡＰＣを炎症誘発性様式で標的化することが知られている、ヒトＣＣＬ３Ｌ１標的化ユニットを含む構築物（「Ｖａｃｃｉｂｏｄｙ」）をコードし、すなわち、このような標的化ユニットを含む構築物は、それらが投与される対象において炎症性免疫応答を誘導し、この化合物がＩＦＮ－γ産生を誘導することが予想される（例えば、ＷＯ２０１１１６１２４４ Ａ１を参照されたい）。

ＤＮＡベクターＶＢ５０１４ｂは、標的化ユニット又は二量体化ユニットをコードせず、抗原性ユニットとしてＧＡＤ６５（２０２－２２１）のみ、すなわち単一のタンパク質／ペプチドをコードする。

マウスグルタミン酸デカルボキシラーゼ６５（ＧＡＤ６５）２０２－２２１（配列番号１８３）抗原性ユニットは、公知のＴ細胞エピトープＧＡＤ６５（２０６－２２０）及びＧＡＤ６５（２０２－２２１）を含む。

実施例１ｃ：エビアレルギーの処置に使用するための、本開示によるベクターの設計及び製造
トロポミオシンは、貝類の主要なアレルゲンである。Ｍｅｔ ｅ １過敏症のＢａｌｂ／ｃマウスモデルにおいて、ヨシエビ（Ｍｅｔａｐｅｎａｅｕｓ ｅｎｓｉｓ）（Ｍｅｔ ｅ １）種由来のトロポミオシンについて６つの主要なＴ細胞エピトープが同定された。６つのＴ細胞エピトープのペプチドによる経口免疫療法は、エビトロポミオシンに対するアレルギー応答を効果的に低下させた（Ｗａｉ，Ｃ．Ｙ．Ｙら、２０１５）。

表３に記載されるように、以下のユニット／部分をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡベクターを設計した。

抗原性ユニットの配列は、以下の表３ａに更に明記されている。

ＤＮＡベクターＶＢ５０２４、ＶＢ５０３０及びＶＢ５０７９は、表３に記載の標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットを含む寛容誘導構築物をコードする。

Ｍｅｔ ｅ １ （２４１－２６０）、（２１０－２３０）、（１３６－１５５）、（７６－９５）、（４６－６５）、（１６－３５）抗原性ユニット（配列番号２９）は、Ｔ細胞エピトープ間にＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５６）リンカーを含む。Ｍｅｔ ｅ １（１－２７４）抗原性ユニット（配列番号３０）は、完了Ｍｅｔ ｅ １アレルゲンを含む。

実施例１ｄ：多発性硬化症の処置に使用するための、本開示のＤＮＡ構築物の設計及び製造
実施例１ｄ及び１ｅに記載の試験した構築物の全ての遺伝子配列を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（８６０ Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ Ａｖｅ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ ０８８５４，ＵＳＡ）から注文し、発現ベクターｐＵＭＶＣ４ａ及び／又はｐＡＬＤ－ＣＶ７７にクローニングしたが、発現ベクターｐＡＬＤ－ＣＶ７７のみにクローニングした構築物ＶＢ５０１７は別としてクローニングした。

種々のマウスシグナルペプチド及び標的化ユニット、同一のマウス二量体化ユニット、並びにマウス多発性硬化症（ＭＳ）自己抗原ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）の短いＴ細胞エピトープ、すなわちＭＯＧ（３５－５５）又はマウスＭＯＧのより長いＴ細胞エピトープ、すなわちＭＯＧ（２７－６３）を含む抗原性ユニットを含む、８つの構築物（ＤＮＡプラスミド）をマウスにおいて使用するために設計した。

実施例１ｅ：真性糖尿病の処置に使用するための、本開示のＤＮＡ構築物の設計及び製造
マウスグルタミン酸デカルボキシラーゼＧＡＤ６５（２０２－２２１）由来のＴ細胞エピトープを含む、マウスにおける使用のために１つの構築物（ＤＮＡプラスミド）を設計した。ＧＡＤ６５は、重要な糖尿病自己抗原である。構築物は、以下の表に示される要素（全てのマウスタンパク質）を更に含む。

実施例１ｆ：エビアレルギーの処置に使用するための、本開示のＤＮＡ構築物の設計及び製造
構築物（ＤＮＡプラスミド）は、トロポミオシン（Ｐａｎ ｂ １エピトープ）由来のＴ細胞エピトープを含む、マウスにおける使用のために設計される。このエピトープは、重要な貝類アレルゲンである。構築物は、以下の表に示される要素（全てのマウスタンパク質）を更に含む。

実施例２ａ：ＭＯＧ含有構築物のタンパク質発現及び分泌のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
本試験の目的は、哺乳動物細胞の一過性トランスフェクション後に、ＭＯＧ含有ＤＮＡベクターによってコードされるタンパク質の発現及び分泌の特性を明らかにすることであった。

ＨＥＫ２９３細胞をＡＴＣＣから入手し、ＤＮＡベクター（ＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００３ｂ、ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０１２ｂ）を含むＭＯＧで一過的にトランスフェクトした。簡潔に述べると、２×１０^５細胞／ウェルを、１０％ ＦＢＳ増殖培地を含む２４ウェル組織培養プレートに播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬を使用して、製造業者（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって示唆される条件下で、１μｇのそれぞれのＤＮＡベクターでトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で５日間維持し、細胞上清を回収した。

Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞をＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから入手し、ＤＮＡベクター（ＶＢ５０５２、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０４８、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６０、ＶＢ５０６１及びＶＢ５０７１）を含むＭＯＧ（２７－６３）で一過的にトランスフェクトした。簡潔に述べると、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（１．７×１０^６細胞／ｍＬ、１ｍＬ）を９６ウェル培養プレートに播種した。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．）を使用して、細胞に０．６４μｇ／ｍＬプラスミドＤＮＡをトランスフェクトし、プレートを、オービタルシェーカー（直径３ｍｍ、９００ｒｐｍ）上で、加湿ＣＯ２細胞インキュベーター（８％ＣＯ_２、３７℃）中でインキュベートした。トランスフェクションの７２時間後に上清を回収した。

ＭＯＧ含有ベクターによってコードされるタンパク質の発現及び分泌を、ＭＯＧに対する抗体（捕捉抗体、マウス抗ＭＯＧ抗体、０．２５μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン（検出抗体、マウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体、ビオチン、０．１μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、０５－４２４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって特徴付けた。図２Ａ及び図２Ｂは、全ての１４個のＭＯＧ含有構築物が、高レベルで発現及び分泌されたことを示す。

ＭＯＧ抗原性ユニット及び６つの異なる標的化ユニットを有する完全長寛容誘導タンパク質の分泌を、ＭＯＧに対する抗体及びＩＬ－１０、ＴＧＦβ１、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１及びＣＣＬ１Ｌ３のマウス配列を有する標的化ユニットをそれぞれ有する上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって確認した。寛容誘導タンパク質の結果を図３Ａ～３Ｆに示し、炎症誘発性対照を図３Ｇに示す。

ＭＯＧの検出と組み合わせた、それぞれＩＬ－１０（ＶＢ５００５ｂ、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０５８）、ＴＧＦβ１（ＶＢ５０５９）、ＳＣＧＢ３Ａ２（ＶＢ５０６０）、ＣＴＬＡ－４（ＶＢ５０６１）、ＰＤ－１（ＶＢ５０７１）及びＣＣＬ３Ｌ１（ＶＢ５０５２）の検出は、高レベルでの完全長寛容誘導タンパク質及び炎症誘発性対照の分泌を示す。

ベクターＶＢ５０５１によってコードされるＭＯＧ（２７－６３）抗原単独対照ペプチドの分泌及び発現を評価するために、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞をＶＢ５０５１で一過性にトランスフェクトし、上清を３日後に回収した。ＶＢ５０５１の分泌及び発現を、コーティングとしての上清の使用による直接ＥＬＩＳＡ、及びＭＯＧに対する抗体（マウス抗ＭＯＧ抗体、３．３μｇ／ｍＬ、１００μＬ／ウェル、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用する検出によって評価した。図４は、ＭＯＧ（２７－６３）ペプチドが哺乳動物細胞にＶＢ５０５１をトランスフェクションすると分泌されることを示す。

実施例２ｂ：本開示の構築物のタンパク質発現及び分泌のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
本試験の目的は、ＤＮＡプラスミドによる哺乳動物細胞の一過性トランスフェクション後のタンパク質発現レベルを、タンパク質の標的化、二量体化及び抗原性ユニットに対する特異的抗体の結合を使用するＥＬＩＳＡアッセイによって、細胞上清中のタンパク質の存在を測定することによって、特徴付けることであった。ＨＥＫ２９３細胞をＡＴＣＣから得た。ＨＥＫ２９３細胞を構築物に一過的にトランスフェクトした。簡潔に述べると、２×１０^５細胞／ウェルを、１０％ ＦＢＳ増殖培地を含む２４ウェル組織培養プレートに播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬を使用して、製造業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって示唆される条件下で１μｇのＤＮＡプラスミドでトランスフェクトした。次いで、トランスフェクトされた細胞を、５％ＣＯ_２で、３７℃で６日間維持し、細胞上清を、タンパク質発現の特性付けのために回収した。

ＥＬＩＳＡを実施して、ＨＥＫ２９３細胞によって産生され、細胞上清中に分泌されたタンパク質の量を確認した。ＭａｘｉＳｏｒｐ Ｎｕｎｃ－ｉｍｍｕｎｏプレートを、１００μＬ／ウェルを有する１×ＰＢＳ中の捕捉抗体として０．０６μｇ／ｍＬのウサギ抗ヒトＴＧＦβ１（ｏｒｂ７７２１６、Ｂｉｏｒｂｙｔｅ）でコーティングし、プレートを４℃で一晩インキュベートした。１×ＰＢＳ中の２００μＬ／ウェル４％ＢＳＡの添加により、マイクロタイターウェルを遮断した。ＤＮＡプラスミドから発現されたタンパク質を含有するトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞からの細胞上清１００μＬを、プレートに添加した。

検出抗体のために、１μｇ／ｍＬのビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ（ＨＰ６０１７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、構築物に含まれる二量体化ユニットのＣＨ３ドメインに結合する）を添加し、インキュベートした。その後、ＳＡ－ＨＲＰ（ストレプトアビジンホースラディッシュペルオキシダーゼ、Ｓ２４３８－２５０ＵＧ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、１：３０００）を添加し、インキュベートした。特に指定しない限り、全ての培養を３７℃で１時間行い、続いてＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（登録商標）で３回洗浄した。その後、１００μＬ／ウェルのＴＭＢ溶液を添加し、１００μＬ／ウェルの１Ｍ ＨＣｌを添加して、５～１５分後に発色を停止させた。４５０ｎｍでの光学濃度を自動プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ ＧＯ）で測定した。

図１３は、構築物ＶＢ５００９が発現され、タンパク質として分泌されたことを示す。

実施例３：Ｍｅｔ ｅ１含有構築物のタンパク質発現及び分泌のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
本試験の目的は、哺乳動物細胞の一過性トランスフェクション後に、Ｍｅｔ ｅ １含有ＤＮＡベクター（表３参照）によってコードされる寛容誘導タンパク質のタンパク質発現及び分泌を特徴付けることであった。

簡単に説明すると、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（１．７×１０^６細胞／ｍＬ、１ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．）を９６ウェル培養プレートに播種した。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．）を使用して、細胞に０．６４μｇ／ｍＬプラスミドＤＮＡをトランスフェクトし、プレートを、オービタルシェーカー（直径３ｍｍ、９００ｒｐｍ）上で、加湿ＣＯ２細胞インキュベーター（８％ＣＯ_２、３７℃）中でインキュベートした。トランスフェクションの７２時間後に上清を回収した。

Ｍｅｔ ｅ １含有ベクターによってコードされる分泌タンパク質を、ｈＩｇＧ ＣＨ３ドメインに対する抗体（捕捉抗体、０．５μｇ／ｍＬマウス抗ヒトＩｇＧ３（ＣＨ３ドメイン）抗体、１００μＬ／ウェル、ＭＣＡ８７８Ｇ、ＢｉｏＲａｄ）及びｈＩｇＧ Ｆｃドメインに対する抗体（検出抗体、０．２５０μｇ／ｍＬ ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｂｉｏｔｉｎ Ａｎｔｉ－ＩｇＧ－Ｆｃ（Ｈｕｍａｎ）Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、１００μＬ／ウェル、７１０３２６２１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、上清のサンドイッチＥＬＩＳＡによって特徴付けられた。結果を図５に示す。

図５から明らかなように、寛容誘導タンパク質（ＶＢ５０２４、ＶＢ５０３０及びＶＢ５０７９）を含有する全てのＭｅｔ ｅ １が発現及び分泌された。

実施例４：ＤＥＣ２０５受容体への寛容誘導構築物の結合のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
本試験の目的は、組換えＤＥＣ２０５受容体に対するＶＢ５００４ｂのｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５標的化ユニット（表１参照）の機能的結合を特徴付けることであった。標的化ユニットの機能的結合は、ＥＬＩＳＡ－プレートに組換えＤＥＣ２０５受容体をコーティングし、抗原性ユニット又は二量体化ユニットに対する抗体を検出抗体として使用することにより、標的化ユニットとしてｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５をコードする寛容誘導ＤＮＡベクターを一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清を用いたＥＬＩＳＡで評価した。

ＨＥＫ２９３細胞をＡＴＣＣから入手し、ＤＮＡベクターＶＢ５００４ｂをコードするｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５で一過的にトランスフェクトした。簡潔に述べると、２×１０^５ＨＥＫ２９３細胞／ウェルを、１０％ＦＢＳ増殖培地を含む２４ウェル組織培養プレートに播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬を使用して、製造業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって示唆される条件下で、１μｇのそれぞれのＤＮＡベクターでトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で５日間維持し、細胞上清を回収した。ｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５含有ベクターによってコードされる分泌タンパク質を、上清の直接ＥＬＩＳＡによって特徴付けた。ＥＬＩＳＡプレートを１００μＬ／ウェルの５μｇ／ｍＬ組換えＤＥＣ２０５（２１６－５０３）（ＯＰＣＤ０５０７２、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ）でコーティングし、上清を添加する前に遮断した。組換え受容体への結合は、ＭＯＧ（１００μＬ／ウェル、１μｇ／ｍＬマウス抗ＭＯＧ抗体、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）又はｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン（１００μＬ／ウェル、０．１μｇ／ｍＬマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体、ビオチン、０５－４２４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に対する抗体によって検出された。結果を図６に示す。

図６は、寛容誘導タンパク質ＶＢ５００４ｂを含有するｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５のＤＥＣ２０５受容体への結合、及び完全長寛容誘導タンパク質の分泌を確認する。

実施例５：ＩＬ－１０受容体への寛容誘導構築物の結合のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
本試験の目的は、組換えＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）に対するＶＢ５００６ｂのＩＬ－１０標的化ユニット（表１参照）の機能的結合を特徴付けることであった。標的化ユニットの機能的結合は、ＥＬＩＳＡ－プレートに組換えＩＬ－１０受容体をコーティングし、抗原性ユニット又は二量体化ユニットに対する抗体を検出抗体として使用することにより、標的化ユニットとしてＩＬ－１０をコードするＤＮＡベクターを一過的にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞の上清を用いたＥＬＩＳＡで評価した。

簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞をＡＴＣＣから入手し、ＩＬ－１０含有ＤＮＡベクターＶＢ５００６ｂで一過的にトランスフェクトした。簡潔に述べると、２×１０^５細胞／ウェルを、１０％ＦＢＳ増殖培地を含む２４ウェル組織培養プレートに播種し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬を使用して、製造業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって示唆される条件下で、１μｇのそれぞれのＤＮＡベクターでトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で５日間維持し、細胞上清を回収した。ＩＬ－１０含有ベクターによってコードされる分泌タンパク質は、上清の直接ＥＬＩＳＡによって特徴付けられた。ＥＬＩＳＡプレートを１００μＬ／ウェルの２．５μｇ／ｍＬ組換えＩＬ－１０受容体でコーティングし、上清を添加する前に遮断した。組換え受容体への結合は、ＭＯＧ（１００μＬ／ウェル、１μｇ／ｍＬマウス抗ＭＯＧ抗体、ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）又はｈＩｇＧ ＣＨ３ドメイン（１００μＬ／ウェル、０．１μｇ／ｍＬマウス抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体、ビオチン、０５－４２４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に対する抗体によって検出された。ＶＢ５００６ｂの結果を図７に示す。

図７は、ＩＬ－１０含有寛容誘導タンパク質ＶＢ５００６ｂのＩＬ－１０受容体への結合、及び完全長寛容誘導タンパク質の分泌を確認する。

実施例６：寛容誘導構築物のサイズ及びタンパク質完全性のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性付け
ＶＢ５０４６、ＶＢ５０５２、ＶＢ５０５８、ＶＢ５０５９、ＶＢ５０６１及びＶＢ５０７１によってコードされるタンパク質を更に特徴付けるために、トランスフェクトされたｉ２９３Ｆ細胞からの上清試料に対してウェスタンブロット分析を行った。

簡潔に述べると、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（１．７×１０^６細胞／ｍＬ、１ｍＬ）を９６ウェル培養プレートに播種した。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．）を使用して、細胞に０．６４μｇ／ｍＬプラスミドＤＮＡをトランスフェクトし、プレートを、オービタルシェーカー（直径３ｍｍ、９００ｒｐｍ）上で、加湿ＣＯ_２細胞インキュベーター（８％ＣＯ_２、３７℃）中でインキュベートした。トランスフェクションの７２時間後に上清を回収した。

試料は、トランスフェクトされたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞からの１４μＬの上清を、それぞれ還元条件及び非還元条件のために、５μＬの４× Ｌａｅｍｍｌｉ試料緩衝液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）と１μＬのＤＴＴ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）又は１μＬの超純水と混合することによって調製された（所与の比での総試料体積のスケールアップ）。試料（還元又は非還元）を７０℃で１０分間加熱し、その後、４％～２０％判定基準ＴＧＸ Ｓｔａｉｎ－Ｆｒｅｅプレキャストゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に添加した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、プレシジョンＰｌｕｓプロテインオールブループレステインドプロテインスタンダード（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を含む１×Ｔｒｉｓ／Ｇｌｙｃｉｎｅ／ＳＤＳランニングバッファー（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて行った。タンパク質を、トランスブロットＴｕｒｂｏセミドライ転写システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用することによって、ゲルからＥｔＯＨ活性化低蛍光（ＬＦ）０．４５μｍ ＰＶＤＦ膜（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に移した。ＰＶＤＦ膜をＥｖｅｒｙＢｌｏｔ緩衝液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）中で５分間遮断し、マウス抗ＭＯＧ（ｓｃ－７３３３０、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ラット抗マウスＩＬ－１０（ＭＡＢ４１７、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はヤギ抗マウスＣＴＬＡ－４（ＡＦ４６７、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）でプローブし、それぞれＭＯＧ、ＩＬ－１０又はＣＴＬＡ－４を検出した。膜を、室温で１時間、蛍光色素結合種特異的二次抗体と共にインキュベートし、次いで洗浄し、乾燥させた。Ｄｙｌｉｇｈｔ ４８８チャネルにおけるＩＬ－１０検出のために、膜をＤｙｌｉｇｈｔ－４８８二次抗体で再プローブした。膜をエタノール及びＴＢＳＴ中で再活性化した。膜を遮断し、Ｄｙｌｉｇｈｔ ４８８結合二次抗体と共に室温で１時間インキュベートし、次いで洗浄し、乾燥させた。画像は、ＣｈｅｍｉＤｏｃ（商標）ＭＰ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用して取得した。

抗ＭＯＧ抗体を用いたウェスタンブロット分析は、寛容誘導タンパク質及びＶＢ５０５２の完全長分泌を示す（図８Ａ）。ＶＢ５０５９を除く全てのタンパク質は、タンパク質配列に基づいて予想されるよりも分子量が高いようであり、これは、翻訳後修飾に起因する可能性が高い。ＶＢ５０５９は、ＴＧＦβ１を標的化ユニットとして有し、これは、潜伏関連ペプチド及び成熟ＴＧＦβ１への切断時に、そのサイズを２８ｋＤａ減少させることが知られている。図８Ｂは、タンパク質が非還元条件下で二量体を形成することを示す。図８Ｂはまた、非還元条件下でのタンパク質の単量体形成の存在を示す。抗ＩＬ－１０及び抗ＣＴＬＡ－４でプローブした膜（それぞれ図８Ｃ及び図８Ｄ）は、抗ＭＯＧでプローブした膜で検出されたバンドと同じ分子量に対応するバンドを示した（図８Ａ）。したがって、図８Ｃ及び図８Ｄは、それぞれＭＯＧ及びＩＬ－１０又はＣＴＬＡ－４が同じ融合タンパク質の一部であることを確認する。図８Ｃ及び８Ｄにおいて、それぞれ抗ＩＬ－１０及び抗ＣＴＬＡ－４が非特異的にタンパク質に結合しないことを示すために、ＶＢ５０４８を対照として含めた。

実施例７：本開示のＤＮＡベクターの寛容誘導能の評価
ＶＢ５００４ｂ（表１に記載）の寛容誘導能を、ＶＢ５００４ｂをワクチン接種したマウス由来の脾臓において評価し、誘導されたＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を計算することによって決定した。ＩＬ－１０（免疫寛容に関連する非炎症性サイトカイン）及びＩＦＮ－γ（炎症性免疫応答を誘導するためのマーカー）信号を、ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドをワクチン接種したマウスから採取した脾細胞の再刺激後、二色ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔアッセイにおいて決定した。ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比は、ＤＮＡベクターによって誘導される免疫応答が、寛容原性応答に向かって歪められる程度を示す。寛容原性プロファイルを、誘導されたＦｏｘｐ３＋細胞の頻度、及びＶＢ５００４ｂワクチン接種後のＣＤ４^＋Ｔ細胞からのＩＦＮ－γ＋及びＩＬ－１７＋産生の欠如によってさらに評価した。得られた結果を、炎症誘発性対照ワクチンＶＢ５００２ｂによって誘導された応答（表１に記載）及びＶＢ５００１ｂの寛容誘導能（表１に記載）と比較した。

ネズミのワクチン接種及びＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ
以下の試験設計を適用した：
雌の６週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ（フランス）から入手した。全ての動物は、Ｒａｄｉｕｍ病院（ノルウェー、オスロ）の動物施設に収容した。全ての動物プロトコールは、ノルウェー食品安全当局（ノルウェー、オスロ）によって承認された。ＶＢ５００４ｂ、ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５００１ｂの試験には４、５匹／群のマウスを用い、陰性対照（ＰＢＳのみ）には２匹／群を用いた。ＶＢ５００２ｂは、ＡＰＣを標的とし、炎症性免疫応答を誘導することが知られているヒトＣＣＬ３Ｌ１標的化ユニットを含む、ＭＯＧ（２７－６３）構築物の炎症誘発性バージョンとして含まれ、すなわち、そのような標的化ユニットを含む構築物は、それらが投与される対象において炎症誘発性免疫応答を誘導し、この化合物が、コードされた抗原に特異的なＴ細胞においてＩＦＮ－γ産生を誘導することが予想される。ＭＯＧ（２７－６３）ペプチド単独、ＶＢ５００１ｂをコードするＤＮＡベクターを、ＶＢ５００４ｂとの比較として含めた。

無菌ＰＢＳに溶解した５０μｇのＶＢ５００４ｂ又は対照ＤＮＡベクターＶＢ５００１ｂ及びＶＢ５００２ｂの１回用量を、各前脛骨筋への筋肉内針注射によって投与し（２×２５μＬ、１０００μｇ／ｍＬ）、その後、ＡｇｉｌｅＰｕｌｓｅ ｉｎ ｖｉｖｏエレクトロポレーションシステム（ＢＴＸ、ＵＳＡ）でエレクトロポレーションした。

ワクチン接種の７日後に脾臓を採取し、細胞ストレーナー中でマッシングして、単細胞懸濁液を得た。赤血球を、塩化アンモニウムカリウム（ＡＣＫ）溶解緩衝液を使用して溶解した。洗浄後、ＮｕｃｌｅｏＣｏｕｎｔｅｒ ＮＣ－２０２（ＣｈｅｍｏＭｅｔｅｃ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用して脾細胞を計数し、６×１０^６細胞／ｍＬの最終濃度に再懸濁し、９６ウェルＩＦＮ－γ／ＩＬ－１０デュアルカラーＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔプレートに６×１０^５細胞／ウェルとして播種した。次いで、脾細胞を１６．６７μｇ／ｍＬのＭＯＧ（３５－５５）ペプチドで４４時間再刺激した後、製造業者のプロトコール（Ｍａｂｔｅｃｈ ＡＢ、スウェーデン）に従って、二色ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔアッセイにおいてＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０サイトカイン産生について試験した。スポット形成細胞を、ＩＲＩＳ Ｆｌｕｏｒｏｓｐｏｔ及びＥＬＩＳｐｏｔプレートリーダー（Ｍａｂｔｅｃｈ ＡＢ）で測定し、Ａｐｅｘソフトウェア（Ｍａｂｔｅｃｈ ＡＢ）を使用して分析した。結果を、ＩＬ－１０＋又はＩＦＮ－γ＋スポット／１０^６脾細胞の３回の平均数として示す。

図９Ａから分かるように、ＶＢ５００４ｂは、ＶＢ５００１ｂによって誘導されるレベルと比較して、より高いレベルのＩＬ－１０を誘導した。さらに、高レベルのＩＦＮ－γを誘導するＶＢ５００２ｂとは対照的に、低いバックグラウンドレベルのＩＦＮ－γが、ＶＢ５００４ｂワクチン接種に応答して検出された。図９Ｂは、図９Ａに示された値から計算されたＩＬ－１０／ＩＦＮ－γの比を示す。ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γの比がＶＢ５００４ｂについて高く、ＶＢ５００４ｂが炎症性サイトカインＩＦＮ－γよりも有意に高いレベルの免疫抑制性サイトカインＩＬ－１０を誘導したことを示す。対照的に、ＶＢ５００２ｂを投与されたマウスからの脾細胞は、約１のＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比を示し、両方のサイトカインがＭＯＧ（３５－５５）ペプチドでの再刺激後に同等のレベルで産生されることを示した。過剰な炎症を回避し、炎症の最終的な解像度を確実にするために、ＩＦＮ－γなどの炎症促進性サイトカインの産生が、ＩＬ－１０などの抗炎症性サイトカインの産生を含む負のフィードバック機構によって調節されることが重要である（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ＭＡ ｅｔ ａｌ ２０１６）。したがって、ＶＢ５００２ｂに応答して観察されるＩＬ－１０のレベルの増加は、誘導される炎症応答を制御するためのそのようなフィードバック機構によって説明され得る。有意に増加したＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比は、ＶＢ５００１ｂと比較してＶＢ５００４ｂについても検出され、ＶＢ５００２ｂ及びＶＢ５００１ｂの両方と比較して、ＶＢ５００４ｂのより高い寛容誘導能を示した。

フローサイトメトリー
脾細胞を、Ｆｏｘｐ３、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１７の発現についてフローサイトメトリーによって更に分析した。Ｆｏｘｐ３は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の発生及び機能における抑制経路のマスターレギュレーターとして作用する。

簡単に述べると、ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる１６時間の再刺激の後、細胞を採取し、計数し、洗浄した後、固定可能な生存性染料（ＦＶＤ）と暗所で１０分間インキュベートした。その後、細胞を遠心分離し、洗浄した後、表面染色混合物：抗ＣＤ３（ＢＵＶ３９５）、抗ＣＤ４（ＢＶ７８５）、及び抗ＣＤ８を添加し、暗所で、４℃で３０分間インキュベートした。培養後、細胞を遠心分離し、細胞ペレットを再懸濁し、フロー緩衝液（ＰＢＳ、１０％ ＦＢＳ及び２ｍＭ ＥＤＴＡ）中で洗浄した。Ｆｏｘｐ３固定／透過溶液を細胞に添加し、暗所で、４℃で６０分間インキュベートした。遠心分離工程の後、細胞を再懸濁し、透過緩衝液中で洗浄した後、遠心分離し、細胞内抗体混合物：抗Ｆｏｘｐ３（Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ７００）、抗ＩＦＮ－γ（ＡＰＣ）、抗ＩＬ－１７（Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ４８８）を添加し、暗所で、４℃で３０分間インキュベートした。その後、細胞を洗浄し、獲得するまでフロー緩衝液に再懸濁した。単一染色したＵｌｔｒａ ｃｏｍｐ ｅＢｅａｄ及びＡｒＣ反応性ビーズを用いて、固定可能な生存性染料のための補正を行った。染色の質を評価するために、流体不整合、細胞破片、二重線、及び死細胞を除外するゲーティング戦略を考案した。本発明者らはさらに、ＣＤ３の発現に基づいてＴ細胞を定義した。ＣＤ３＋Ｔ細胞をＣＤ４の発現について調べ、次いで、細胞をＦｏｘｐ３及びサイトカイン発現について分析した。各群からの非刺激細胞を使用して、アッセイにおけるサイトカイン産生のバックグラウンドレベルを評価した。フローサイトメトリーファイル（ＦＣＳ）をＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）ソフトウェアからエクスポートし、ＦｌｏｗＪｏを用いて分析した。フローサイトメトリー分析から得られたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ ９を使用して分析した。

図１０Ａに示すように、ＣＤ４＋Ｔ細胞中のＦｏｘｐ３＋細胞の割合は、ＶＢ５００４ｂをワクチン接種したマウスにおいて、ＶＢ５００２ｂ、ＶＢ５００１ｂ又はＰＢＳをワクチン接種したマウスにおいて検出されたレベルと比較して、高度に増加した。ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１７は両方とも、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）及び多発性硬化症を含む慢性炎症性疾患及び自己免疫疾患の病因に寄与する炎症促進性サイトカインである（Ｇｏｂｅｌ Ｋ ｅｔ ａｌ ２０１８）。したがって、寛容原性ワクチンは、自己免疫を悪化させ得る、例えば、炎症誘発性サイトカインを誘導することによって、自己抗原免疫応答を不注意に感作することなく、確実に寛容を誘導しなければならない。図１０Ｂ及び図１０Ｃに見られるように、上昇したＩＦＮ－γ及びＩＬ－１７発現は、ＶＢ５００２ｂに応答して検出されたが、これらの炎症誘発性サイトカインの欠如は、ＶＢ５００４ｂをワクチン接種したマウスにおいて確認された。

したがって、実施例７は、ｓｃＦｖ抗ＤＥＣ２０５標的化ユニット及びＭＯＧ（２７－６３）抗原性ユニットをコードするＶＢ５００４ｂが、炎症性サイトカイン比（ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ）に対してより高い非炎症性を誘導し、炎症誘発性バージョンＶＢ５００２ｂと比較して、炎症性サイトカイン産生の欠如を示すことを示す。実施例７は、ＶＢ５００４ｂがＰＢＳワクチン接種マウスにおいて、ＶＢ５００１ｂ、ＶＢ５００２ｂ及びバックグラウンドレベルと比較して、より高い頻度のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導することを更に示し、対照と比較して、ＶＢ５００４ｂによって誘導されるＴｒｅｇのより高い存在を示す。

実施例８：本開示によるＤＮＡベクターの寛容誘導能の評価
ＶＢ５０１２ｂ（表１に記載）の寛容誘導能は、実施例７に記載のようにＩＬ－１０／ＩＦＮ－γの比を計算することによって決定した。ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５０５８及びＶＢ５０４６（表１に記載の全ての構築物）の寛容原性プロファイルを、ワクチン接種に応答して誘導されたＭＯＧ（３８－４９）特異的Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞の割合によって更に評価した。

ネズミのワクチン接種及びＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔ
以下の試験設計を適用した：
雌の６週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ（フランス）から入手した。全ての動物は、Ｒａｄｉｕｍ病院（ノルウェー、オスロ）の動物施設に収容した。全ての動物プロトコールは、ノルウェー食品安全当局（オスロ、ノルウェー）により承認された。ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０５２及びＶＢ５０５１の試験には、５匹／群のマウスを使用したが、陰性対照（ＰＢＳワクチン接種マウスのみ）には２匹／群のマウスを使用した。実施例７と同様に、ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０４６と比較するために、ＶＢ５０５２を炎症促進性ＭＯＧ（２７－６３）コード構築物として含め、ＶＢ５０５１をＭＯＧ（２７－６３）コード抗原単独として含めた。

５０μｇの用量のＤＮＡベクターＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ、ＶＢ５０４６、ＶＢ５０５１又はＶＢ５０５２を筋肉内に２回（０日目及び４日目）投与し、続いてエレクトロポレーションを行い、最初のワクチン接種の１０日後に脾臓を採取し、セルストレーナー中でマッシュして、実施例７に記載のように単細胞懸濁液を得た。脾細胞をＭＯＧ（３５－５５）ペプチドで４４時間再刺激し、実施例７に記載されるように、二色ＦｌｕｏｒｏＳｐｏｔアッセイにおいて、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１０サイトカイン産生について試験した。

図１１Ａは、ＶＢ５０１２ｂをワクチン接種したマウスの脾臓において産生されたＩＬ－１０のレベルの上昇を、ＭＯＧ（３５－５５）ペプチドによる再刺激時のＩＦＮ－γ産生の欠如と共に示す。これは、ワクチン接種マウス由来の脾細胞においてＩＦＮ－γレベルの増加を示すＶＢ５０５２とは対照的である。図１１Ｂに示されるように、ＶＢ５０５２と比較してＶＢ５０１２ｂについて有意に高いＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比が検出され、ＶＢ５０５１と比較してより高いＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ比傾向が検出された。

四量体（Ｈ－２ＩＡｂ／ＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨ）を使用したワクチン接種マウス由来の脾細胞におけるＭＯＧ（３８－４９）特異的ＣＤ４^＋Ｔ細胞のフローサイトメトリー分析
ＭＯＧ特異的炎症性免疫応答を抑制及び制御するように作用するＴｒｅｇ細胞を示し、それによって自己寛容を維持する、ＭＯＧ特異的Ｆｏｘｐ３＋細胞の生成は、ＭＯＧ特異的四量体染色及びフローサイトメトリー（ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３＋ＭＯＧ（３８－４９）－ｔｅｔ＋細胞）によって同定された。

簡潔に述べると、各群からプールした２×１０^６個の脾細胞を９６ウェルＶ底プレートに移した。四量体及びＡｂを、使用前に５％ＦＢＳを含むＰＢＳ中で希釈し、光から保護した。細胞洗浄を必要とする全ての工程は、特に明記しない限り、５％ＦＢＳを含むＰＢＳを用いて行った。まず、ＭＯＧ（３８－４９）に特異的なＰｒｏＴ２（登録商標）ＭＨＣクラスＩＩ四量体（１μｇ／ｍｌ、Ｈ－２ ＩＡｂ－ＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨ－ＰｒｏＴ２（登録商標）四量体ＰＥ、２９５８、Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）で細胞を染色し、プレートを加湿ＣＯ_２細胞インキュベーター（５％ＣＯ_２、３７℃）中で２時間インキュベートした。細胞を洗浄せずに、ＦＣ受容体を氷上で５分間遮断して、Ｆｃ受容体（０．２５μｇ／ｍＬ、ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）ＰＬＵＳ（抗マウスＣＤ１６／３２）抗体、１５６６０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）へのフローサイトメトリー抗体（Ａｂ）の非特異的結合を防止した。細胞を洗浄せずに、細胞を、抗マウスＣＤ８ ＰＥ－Ｃｙ７（０．２５μｇ／ｍｌ、クローン：５３－６．７、１００７２１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗マウスＣＤ４ ｅＦｌｕｏｒ４５０（０．２５μｇ／ｍｌ、クローン：ＧＫ１．５、４８－００４１－８２、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ／ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗マウスＣＤ２５ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（０．２５μｇ／ｍｌ、クローン：ＰＣ６１、１０２０３０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有する表面Ａｂカクテルで、３０分間氷上で染色した。細胞をＰＢＳで２回洗浄した。次に、細胞を氷上で１０分間、固定可能な生存性染料（ウェルあたり１５０μＬ、ＰＢＳ中１：８０００希釈、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｓｔａｉｎ ７８０、５６５３８８、ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。細胞をＰＢＳのみで２回洗浄し、製造業者の指示に従ってＦｏｘｐ３／転写因子染色バッファーセットを使用して固定し、透過処理した（ウェルあたり２００μＬ、００－５５２３－００、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ／ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。細胞を洗浄し、抗マウスＦＯＸＰ３ ｅＦｌｕｏｒ ６６０（０．２５μｇ／ｍＬ、クローン：ＦＪＫ－１６ｓ、５０－５７７３－８２、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ／ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗マウスＫｉ－６７ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（０．２５μｇ／ｍＬ、クローン：クローン：１１Ｆ６、１５１２０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有する細胞内Ａｂカクテルで、氷上で３０分間染色した。細胞を洗浄し、５％ＦＢＳを含む１５０μＬのＰＢＳに再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳｙｍｐｈｏｎｙ（商標）Ａ３ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒで分析した。以下の対照を、ＦｌｏｗＪｏ（商標）ｖ１０．８ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢＤ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、非染色対照（＝細胞はいかなるＡｂも受けなかった）、及び蛍光Ｍｉｎｕｓ Ｏｎｅ（ＦＭＯ）対照（＝陽性シグナル対陰性シグナルを正確に識別するために、全てのフルオロフォア標識Ａｂで染色された試料のうちの１つを除く）を使用して、所望の集団をゲーティングするためのガイドとして使用した。

図１２に示されるように、ＶＢ５０５１又はＰＢＳによるワクチン接種と比較して、寛容誘導構築物ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０４６による２投与ワクチン接種レジメン（０日目＋４日目）の後、より高いパーセンテージのＭＯＧ(３８－４９）特異的Ｆｏｘｐ３＋細胞が観察され得る。

したがって、実施例８は、標的化ユニットとしてＭＡＲＣＯ配位子ＳＣＧＢ３Ａ２をコードし、抗原性ユニットとしてＭＯＧ(２７－６３）をコードするＶＢ５０１２ｂが、炎症誘発性バージョンＶＢ５０５２と比較して、より高い非炎症性サイトカイン対炎症性サイトカイン比（ＩＬ－１０／ＩＦＮ－γ）を誘導したことを示す。実施例８はさらに、寛容誘導構築物ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５０４８、ＶＢ５００６ｂ又はＶＢ５０４６によるワクチン接種が、より高い割合のＭＯＧ（３８－４９）特異的Ｆｏｘｐ３＋細胞を誘導し、ＰＢＳワクチン接種マウスにおけるＶＢ５０５１によるワクチン接種及びバックグラウンドレベルと比較して、誘導されるＴｒｅｇのレベルがより高いことを示すことを示す。これらの結果は、ＤＮＡベクターＶＢ５０４８、ＶＢ５０１２ｂ、ＶＢ５００６ｂ及びＶＢ５０４６が寛容原性応答を誘発し得ることを示す。

配列
配列番号１

配列番号２
ＶＢ５００３
マウスＩｇＶＨシグナルペプチド（１－１９）、マウス抗ＤＥＣ２０５ ｓｃＦｖ（２０－２６５）、二量体化ユニット（２６６－４４２）、ユニットリンカー（４４３－４４７）、マウスＭＯＧ ３５－５５（４４８－４６８）

配列番号３
ＶＢ５００４
マウスＩｇＶＨシグナルペプチド（１－１９）、マウス抗ＤＥＣ２０５ ｓｃＦｖ（２０－２６５）、二量体化ユニット（２６６－４４２）、ユニットリンカー（４４３－４４７）、マウスＭＯＧ ２７－６３（４４８－４８４）

配列番号４
ＶＢ５０１２
マウスＳＣＧＢ３Ａ２シグナルペプチド（１－２１）、マウスＳＣＧＢ３Ａ２（２２－９１）、二量体化ユニット（９２－２６８）、ユニットリンカー（２６９－２７３）、マウスＭＯＧ ３５－５５（２７４－２９４）

配列番号５
ＶＢ５０１３
マウスＶＳＩＧ－３シグナルペプチド（１－２２）、マウスＶＳＩＧ－３（２３－４２８）、二量体化ユニット（４２９－６０５）、ユニットリンカー（６０６－６１０）、マウスＭＯＧ ３５－５５（６１１－６３１）

配列番号６
マウスＩｇＶＨシグナルペプチド（１－１９）
ＭＮＦＧＬＲＬＩＦＬＶＬＴＬＫＧＶＱＣ

配列番号７
ＶＢ５０１６
マウスＩｇＶＨシグナルペプチド（１－１９）、マウス抗ＤＥＣ２０５ ｓｃＦｖ（２０－２６５）、二量体化ユニット（２６６－４４２）、ユニットリンカー（４４３－４４７）、マウスＧＡＤ６５ ２０２－２２１（４４８－４６７）

配列番号８
ＶＢ５００５
マウスＩＬ１０シグナルペプチド（１－１８）、マウスＩＬ１０（２－１７８）、二量体化ユニット（１７９－３５５）、ユニットリンカー（３５６－３６０）、マウスＭＯＧ ３５－５５（３６１－３８１）

配列番号９
ＶＢ５００６
マウスＩＬ１０シグナルペプチド（１－１８）、マウスＩＬ１０（２－１７８）、二量体化ユニット（１７９－３５５）、ユニットリンカー（３５６－３６０）、マウスＭＯＧ ２７－６３（３６１－３９７）

配列番号１０
ＶＢ５００９
マウスＴＧＦβ１シグナルペプチド（１－２９）、マウスＴＧＦβ１（３０－３９０）、二量体化ユニット（３９１－５６７）、ユニットリンカー（５６８－５７２）、マウスＭＯＧ ３５－５５（５７３－５９３）

配列番号１１
ＶＢ５０１７
マウスＣＴＬＡ４シグナルペプチド（１－３５）、マウスＣＴＬＡ４（３６－１６１）、二量体化ユニット（１６２－３３８）、ユニットリンカー（３３９－３４３）、マウスＭＯＧ ３５－５５（３４４－３６４）

配列番号１２
ＶＢ５０２２
マウスＩｇＶＨシグナルペプチド（１－１９）、マウス抗ＤＥＣ２０５ ｓｃＦｖ（２０－２６５）、二量体化ユニット（２６６－４４２）、ユニットリンカー（４４３－４４７）、マウスＰａｎ ｂ １エピトープ（４４８－４６８）

実施形態
１．
ｉ）抗原提示細胞（ＡＰＣ）を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
ｉｉｉ）２個のポリペプチドなどの、（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
を含む、寛容誘導構築物であって、
抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、
寛容誘導構築物。

２．前記構築物が、多量体化ユニットを含む、実施形態１に記載の寛容誘導構築物。

３．前記構築物が、二量体化ユニットを含み、及び／又は前記多量体タンパク質が、二量体タンパク質である、実施形態１に記載の寛容誘導構築物。

４．前記標的化ユニットが、構築物を抗原提示細胞に送達することができ、ＡＰＣを活性化することなく、ＡＰＣ上の表面分子と相互作用する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５．前記標的化ユニットが、ＡＰＣ上の表面受容体に結合することができる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６．前記標的化ユニットが、ＴＧＦβ受容体、例えば、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、又はＴＧＦβＲ３、ＩＬ１０Ｒ、例えば、ＩＬ－１０ＲＡ及びＩＬ１０－ＲＢ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１１Ｒ及びＩＬ１３Ｒ、ＩＬ２７Ｒ、ＩＬ３５Ｒ、ＩＬ３７Ｒ、ＣＣＲ７、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１０３、ＣＤ１４、ＣＤ３６、ＣＤ２０５、ＣＤ１０９、ＶＩＳＴＡ、ＭＡＲＣＯ、ＭＨＣＩＩ、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８３、ＳＩＧＬＥＣ、ＭＧＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ｂ、ＤＣＩＲ２、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＭＲ、ＤＣ－Ｓｉｇｎ、Ｔｒｅｍｌ４、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、及びＨＶＥＭからなる群から選択される受容体に結合する部分を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７．前記部分が、天然リガンド、合成リガンド及び抗体又はその一部、例えばｓｃＦｖから選択される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８．前記部分が、前記受容体に対して特異性を有する抗体又はその一部、例えばｓｃＦｖであり、前記受容体への結合が、抗炎症性寛容原性様式で提示される抗原をもたらす、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９．前記部分が、前記受容体に対する特異性を有する合成リガンドであり、前記受容体への結合が、抗炎症性寛容原性様式で提示される抗原をもたらす、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０．前記部分が、天然リガンドである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１．前記天然リガンドが、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２又はＴＧＦβ３などのＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ１３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ３７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３Ｌ、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４としても知られる細胞間接着分子１）、ケラチン、ＶＳＩＧ－３、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインなどのＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１の細胞外ドメインなどのＰＤ－１、及びＢＴＬＡからなる群から選択される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２．前記天然リガンドが、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメインなどのＣＴＬＡ－４からなる群から選択される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３．前記天然リガンドが、ＢＴＬＡの細胞外ドメインである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４．前記標的化ユニットが、ＩＬ－１０又はＴＧＦβ、好ましくはヒトＩＬ－１０又はヒトＴＧＦβからなるか、又はそれらを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５．前記標的化ユニットが、配列番号２０５～２０７から選択されるアミノ酸配列などの、ヒトＴＧＦβの配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６．前記標的化ユニットが、ヒトＴＧＦβのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば、配列番号２０５～２０７から選択されるアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７．前記標的化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２０５～２０７から選択されるアミノ酸配列などの、ヒトＴＧＦβのアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８．前記標的化ユニットが、配列番号２１１のアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０のものと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１９．前記標的化ユニットが、配列番号２１１のアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を含むか、又はこれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２０．前記標的化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１１のアミノ酸配列などの、ヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２１．前記標的化ユニットが、ＳＣＧＢ３Ａ２又はＶＳＩＧ－３、例えば、ヒトＶＳＩＧ－３又はヒトＳＣＧＢ３Ａ２であるか、又はそれらを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２２．前記標的化ユニットが、配列番号２１５のアミノ酸配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３のものと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２３．前記標的化ユニットが、配列番号２１５のアミノ酸配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２４．前記標的化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１５から選択されるアミノ酸配列などの、ヒトＶＳＩＧ－３のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２５．前記標的化ユニットが、配列番号２１３のアミノ酸配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のものと少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２６．前記標的化ユニットが、配列番号２１３のアミノ酸配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２７．前記標的化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号２１３から選択されるアミノ酸配列などの、ヒトＳＣＧＢ３Ａ２のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２８．前記標的化ユニットが、ＣＤ２０５に対する特異性を有する抗体又はその一部からなるか、又はそれらを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

２９．前記標的化ユニットが、ＣＤ２０５に対する特異性を有するｓｃＦｖ、例えば抗ＤＥＣ２０５ ｓｃＦｖ、例えば配列番号４９を含むか、又はそれからなるｓｃＦｖからなるか、又はそれを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３０．抗原性ユニットが、自己抗原の１つのＴ細胞エピトープ又は自己抗原の複数のＴ細胞エピトープなどの、自己抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３１．複数のＴ細胞エピトープが、同じ自己抗原であるか、又は複数の異なる自己抗原である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３２．抗原性ユニットが、Ｔ細胞エピトープを分離する１つ以上のリンカーを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３３．抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含み、Ｔ細胞エピトープが、リンカーによって分離されている、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３４．末端Ｔ細胞エピトープを除く全てのＴ細胞エピトープが、サブユニットに配置され、各サブユニットが、Ｔ細胞エピトープ及びリンカーを含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３５．Ｎ末端Ｔ細胞エピトープを除く全てのＴ細胞エピトープが、サブユニットに配置され、各サブユニットが、Ｔ細胞エピトープ及びリンカーを含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３６．Ｃ末端Ｔ細胞エピトープを除く全てのＴ細胞エピトープが、サブユニットに配置され、各サブユニットが、Ｔ細胞エピトープ及びリンカーを含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３７．抗原性ユニットが、ｎ抗原及びｎ－１サブユニットを含み、各サブユニットが、自己抗原のＴ細胞エピトープ、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原、及びリンカーを含み、末端Ｔ細胞エピトープを更に含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３８．ｎが、１～５０、例えば、３～５０、１５～４０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１５～３０、１５～２５、１５～２０の整数である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

３９．リンカーが、非免疫原性である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４０．リンカーが、剛性リンカー又は可動性リンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４１．抗原性ユニットが、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の１つ以上のＴ細胞エピトープ、例えば、ＭＢＰの１つのＴ細胞エピトープ又はＭＢＰの複数のＴ細胞エピトープ、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、例えば、ＭＯＧの１つのＴ細胞エピトープ又はＭＯＧの複数のＴ細胞エピトープ、又はプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、例えば、ＰＬＰの１つのＴ細胞エピトープ又はＰＬＰの複数のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４２．抗原性ユニットが、ＭＯＧの１つ以上のＴ細胞エピトープ、例えば、配列番号１８０～１８２からなる群から選択される配列を含むか、又はそれらからなるＭＯＧの１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４３．抗原性ユニットが、アレルゲンの１つ以上のＴ細胞エピトープ、例えば、アレルゲンの１つのＴ細胞エピトープ又はアレルゲンの複数のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４４．複数のＴ細胞エピトープが、同じアレルゲン又は複数の異なるアレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４５．抗原性ユニットが、Ｆｅｌ ｄ１の１つ以上のＴ細胞エピトープ、例えば、Ｆｅｌ ｄ１の１つのＴ細胞エピトープ又はＦｅｌ ｄ１の複数のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４６．抗原性ユニットが、Ｆｅｌ ｄ４及び／又はＦｅｌ ｄ７の１つ以上のＴ細胞エピトープ、例えば、Ｆｅｌ ｄ４の１つ以上のＴ細胞エピトープ及び／又はＦｅｌ ｄ７の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４７．抗原性ユニットが、同種抗原／異種抗原の１つのＴ細胞エピトープ又は同種抗原／異種抗原の複数のＴ細胞エピトープなどの、同種抗原／異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４８．複数のＴ細胞エピトープが、同じ同種抗原／異種抗原又は複数の異なる同種抗原／異種抗原である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

４９．１つ又はＴ細胞エピトープが、７個～約２００個のアミノ酸の長さを有する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５０．１つ又はＴ細胞エピトープが、７～１５０個のアミノ酸、好ましくは７～１００個のアミノ酸、例えば９～１００個のアミノ酸、又は１５～１００個のアミノ酸、又は９～６０個のアミノ酸、又は９～３０個のアミノ酸、又は１５～６０個のアミノ酸、又は１５～３０個のアミノ酸、又は２０～７５個のアミノ酸、又は２５～５０個のアミノ酸の長さを有する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５１．１つ又はＴ細胞エピトープが、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、又は５０個のアミノ酸の長さを有する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５２．抗原性ユニットが、７～１１個のアミノ酸の長さを有する１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５３．抗原性ユニットが、９～６０個のアミノ酸、例えば９～３０個のアミノ酸、例えば１５～６０個のアミノ酸、例えば１５～３０個のアミノ酸の長さを有する１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５４．抗原性ユニットが、１５個のアミノ酸の長さを有する１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５５．抗原性ユニットが、最大３５００個のアミノ酸、例えば６０個～３５００個のアミノ酸、例えば約８０個又は約１００個又は約１５０個のアミノ酸～約３０００個のアミノ酸、例えば約２００個～約２５００個のアミノ酸、例えば約３００個～約２０００個のアミノ酸、又は約４００個～約１５００個のアミノ酸、又は約５００個～約１０００個のアミノ酸を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５６．抗原性ユニットが、１個～１０個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のＴ細胞エピトープ、又は１１個～２０個のＴ細胞エピトープ、例えば、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個若しくは２０個のＴ細胞エピトープ、又は２１個～３０個のＴ細胞エピトープ、例えば、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個若しくは３０個のＴ細胞エピトープ、又は３１個～４０個のＴ細胞エピトープ、例えば、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個若しくは４０個のＴ細胞エピトープ、又は４１個～５０個のＴ細胞エピトープ、例えば、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個若しくは５０個のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５７．抗原性ユニットが、１個～３個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個、又は１～５個のＴ細胞エピトープ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は３個～６個のＴ細胞エピトープ、例えば、３個、４個、５個、６個、又は５個～１５個のＴ細胞エピトープ、例えば、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、又は１５個のＴ細胞エピトープ、又は７個～１７個のＴ細胞エピトープ、例えば、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、又は１９個のＴ細胞エピトープ、例えば、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、又は１９個のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５８．１つ以上のＴ細胞エピトープが、抗原性ユニット中に無作為に配置される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

５９．１つ以上のＴ細胞エピトープが、多量体化ユニットから抗原性ユニットの末端までの方向に、より抗原性が高い方からより抗原性が低い順に配置される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６０．最も疎水性のＴ細胞エピトープが、抗原性ユニットの実質的に中央に位置し、最も親水性のＴ細胞エピトープが、多量体化ユニット又は抗原性ユニットの端部に最も近接して位置する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６１．Ｔ細胞エピトープが、二量体化ユニットから抗原性ユニットの末端までの方向に、より抗原性が高い方からより抗原性が低い順に配置される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６２．最も疎水性のＴ細胞エピトープが、抗原性ユニットの実質的に中央に位置し、最も親水性のＴ細胞エピトープが、二量体化ユニット又は抗原性ユニットの端部に最も近接して位置する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６３．１つ以上のＴ細胞エピトープが、親水性Ｔ細胞エピトープと疎水性のＴ細胞エピトープとの間で交互に配置される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６４．ＧＣリッチＴ細胞エピトープが、それらの間に少なくとも１つの非ＧＣリッチＴ細胞エピトープが存在するように配置される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６５．複数のＴ細胞エピトープが、Ｔ細胞エピトープリンカーによって分離されている、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６６．抗原性ユニットが、ｎ個のＴ細胞エピトープ及びｎ－１個のＴ細胞エピトープリンカーを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６７．Ｔ細胞エピトープリンカーが、非免疫原性である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６８．Ｔ細胞エピトープリンカーが、可動性リンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

６９．Ｔ細胞エピトープリンカーが、４個～２０個のアミノ酸、例えば５個～２０個のアミノ酸、又は５個～１５個のアミノ酸、又は８個～２０個のアミノ酸、又は８個～１５個のアミノ酸、例えば８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、又は１５個のアミノ酸、１０個～１５個のアミノ酸、又は８個～１２個のアミノ酸、例えば８個、９個、１０個、１１個、又は１２個のアミノ酸からなるペプチドである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７０．Ｔ細胞エピトープリンカーが、１０個のアミノ酸からなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７１．抗原性ユニットに含まれる全てのＴ細胞エピトープリンカーが、好ましくは同一である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７２．Ｔ細胞エピトープリンカーが、セリン（Ｓ）及び／又はグリシン（Ｇ）リッチリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７３．セリン及び／又はグリシンリッチＴ細胞エピトープリンカーが、少なくとも１個のロイシン（Ｌ）残基、例えば、少なくとも１個又は少なくとも２個又は少なくとも３個又は少なくとも４個のロイシン残基を更に含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７４．Ｔ細胞エピトープリンカーが、１０個のアミノ酸の長さを有し、１個又は２個のロイシン残基を含むセリン－グリシンリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７５．Ｔ細胞エピトープリンカーが、ＧＳＡＴリンカー又はＳＥＧリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７６．Ｔ細胞エピトープリンカーが、ＧＬＧＧＬ（配列番号９０）を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７７．Ｔ細胞エピトープリンカーが、切断可能なリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７８．アレルゲンが、食物アレルゲン、例えば、貝類アレルゲン、例えば、トロポミオシン、アルギニンキナーゼ、ミオシン軽鎖、筋形質カルシウム結合タンパク質、トロポニンＣ、トリオースリン酸イソメラーゼ又はアクチンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

７９．前記アレルゲンが、Ｐａｎ ｂ １であり、任意で、前記抗原性ユニットが、Ｐａｎ ｂ １ Ｔ細胞エピトープ（２５１－２７０）からなるか、又はそれを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８０．牛乳アレルゲンが、Ｂｏｓ ｄ ４、Ｂｏｓ ｄ ５、Ｂｏｓ ｄ ６、Ｂｏｓ ｄ ７、Ｂｏｓ ｄ ８、Ｂｏｓ ｄ ９、Ｂｏｓ ｄ １０、Ｂｏｓ ｄ １１又はＢｏｓ ｄ １２などである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８１．アレルゲンが、卵アレルゲン、例えばオボムコイド、オボアルブミン、オボトランスフェリン、コンアルブミン、Ｇａｌ ３、卵リアオザイム又はオボムチンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８２．アレルゲンが、アミノ酸配列ＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号４５）を含むＯＶＡ（２５７－２６４）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８３．抗原性ユニットが、Ｔ細胞エピトープＯＶＡ（２５７－２６４）を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８４．アレルゲンが、パルブアルブミン、エノラーゼ、アルドラーゼ又はビテロゲニンなどの魚アレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８５．アレルゲンが、フルーツアレルゲン、例えば、パスゲネシス関連タンパク質１０、プロフィリン、ｎｓＬＴＰ、タウマチン様タンパク質、ジベレリン調節タンパク質、イソフラボンレダクターゼ関連タンパク質、クラス１キチナーゼ、β－１，３グルカナーゼ、ゲルミン様タンパク質、アルカリセリンプロテアーゼ、病原性関連タンパク質１、アクチニジン、フィトシクタチン、キウェルリン、主要ラテックスタンパク質、クピン又は２Ｓアルブミンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８６．アレルゲンが、植物アレルゲン、例えば、経路形成関連タンパク質１０、プロフィリン、ｎｓＬＴＰ１型、ｎｓＬＴＰ２型タンパク質、浸透圧様タンパク質、イソフラボンレダクターゼ様タンパク質、β－フルクトフラノシダーゼ、ＰＲタンパク質ＴＳＩ－１、シクロフィリン又はＦＡＤ含有オキシダーゼである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８７．アレルゲンが、コムギアレルゲン、例えば、Ｔｒｉ ａ １２、Ｔｒｉ ａ １４、Ｔｒｉ ａ １５、Ｔｒｉ ａ １８、Ｔｒｉ ａ １９、Ｔｒｉ ａ ２０、Ｔｒｉ ａ ２１、Ｔｒｉ ａ ２５、Ｔｒｉ ａ ２６、Ｔｒｉ ａ ２７、Ｔｒｉ ａ ２８、Ｔｒｉ ａ ２９、Ｔｒｉ ａ ３０、Ｔｒｉ ａ ３１、Ｔｒｉ ａ ３２、Ｔｒｉ ａ ３３、Ｔｒｉ ａ ３４、Ｔｒｉ ａ ３５、Ｔｒｉ ａ ３６、Ｔｒｉ ａ ３７又はＴｒｉ ａ ３８である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８８．アレルゲンが、Ｇｌｙ ｍ１、Ｇｌｙ ｍ２、Ｇｌｙ ｍ３、Ｇｌｙ ｍ４、Ｇｌｙ ｍ５、Ｇｌｙ ｍ６、Ｇｌｙ ｍ７又はＧｌｙ ｍ８、Ｇｌｙ ｍアグルチニン、Ｇｌｙ ｍ Ｂｄ２８Ｋ、Ｇｌｙ ｍ ３０ ｋＤ、Ｇｌｙ ｍ ＣＰＩ又はＧｌｙ ｍ ＴＩなどの大豆アレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

８９．アレルゲンが、Ａｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、Ａｒａ ｈ３、Ａｒａ ｈ５、Ａｒａ ｈ６、Ａｒａ ｈ７、Ａｒａ ｈ８、Ａｒａ ｈ９、Ａｒａ ｈ １０、Ａｒａ ｈ １１、Ａｒａ ｈ １２、Ａｒａ ｈ １３、Ａｒａ ｈ １４、Ａｒａ ｈ １５、Ａｒａ ｈ １６、又はＡｒａ ｈ １７などのピーナッツアレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９０．アレルゲンが、木の実又は種子アレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９１．前記アレルゲンが、１１Ｓグロブリン、７Ｓグロブリン、２Ｓグロブリン、ＰＲ１０、ＰＲ－１４ ｎｓＬＴＰ、オレオシン又はプロフィリンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９２．食物アレルゲンが、ソバ、セロリ、着色添加剤、ニンニク、グルテン、オート麦、マメ科植物、トウモロコシ、マスタード、家禽、肉、米又はゴマである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９３．アレルゲンが、ハチ毒アレルゲン、例えば、ホスホリパーゼＡ２、ヒアルロニダーゼ、酸性ホスファターゼ、メリチン、アレルゲンＣ／ＤＰＰ、ＣＲＰ／ルカラピン又はビテロゲニンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９４．アレルゲンが、ホスホリパーゼＡ１、ヒアルロニダーゼ、プロテアーゼ、抗原５、ＤＰＰ ＩＶ又はビテロゲニンなどのベスピドアレルゲンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９５．アレルゲンが、ラテックスアレルゲン、例えば、Ｈｅｖ ｂ １、Ｈｅｖ ｂ ２、Ｈｅｖ ｂ ３、Ｈｅｖ ｂ ４、Ｈｅｖ ｂ ５、Ｈｅｖ ｂ ６、Ｈｅｖ ｂ ７、Ｈｅｖ ｂ ８、Ｈｅｖ ｂ ９、Ｈｅｖ ｂ １０、Ｈｅｖ ｂ １１、Ｈｅｖ ｂ １２、Ｈｅｖ ｂ １３、Ｈｅｖ ｂ １４又はＨｅｖ ｂ １５である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９６．アレルゲンが、チリダニアレルゲン、例えば、ヒョウヒダニアレルゲン又は貯蔵庫チリアレルゲン、例えば、Ｄｅｒ ｐ１、Ｄｅｒ ｐ２、Ｄｅｒ ｐ３、Ｄｅｒ ｐ４、Ｄｅｒ ｐ５、Ｄｅｒ ｐ７、Ｄｅｒ ｐ８、Ｄｅｒ ｐ１０、Ｄｅｒ ｐ１１、Ｄｅｒ ｐ２１、Ｄｅｒ ｐ ２３、Ｄｅｒ ｆ１、Ｄｅｒ ｆ２、Ｄｅｒ ｆ３、Ｄｅｒ ｆ７、Ｄｅｒ ｆ８、Ｄｅｒ ｆ１０、Ｂｌｏｔ ｔ１、Ｂｌｏｔ ｔ２、Ｂｌｏｔ ｔ３、Ｂｌｏｔ ｔ４、Ｂｌｏｔ ｔ５、Ｂｌｏｔ ｔ８、Ｂｌｏｔ ｔ１０、Ｂｌｏｔ ｔ２、Ｂｌｏｔ ｔ２１である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９７．抗原性ユニットが、Ｄｅｒ ｐ １ Ｔ細胞エピトープ（１１１－１３９）からなるか、又はそれを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９８．アレルゲンが、ゴキブリアレルゲン、例えば、Ｂｌａ ｇ １、Ｂｌａ ｇ ２、Ｂｌａ ｇ ３、Ｂｌａ ｇ ４、Ｂｌａ ｇ ５、Ｂｌａ ｇ ６、Ｂｌａ ｇ ７、Ｂｌａ ｇ ８、Ｂｌａ ｇ １１、Ｐｅｒ ａ １、Ｐｅｒ ａ ２、Ｐｅｒ ａ ３、Ｐｅｒ ａ ６、Ｐｅｒ ａ ７、Ｐｅｒ ａ ９又はＰｅｒ ａ １０である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

９９．アレルゲンが、カビアレルゲン、例えば、アスペルギルス・フミガーツスアレルゲン、例えば、Ａｓｐ ｆ１、Ａｓｐ ｆ２、Ａｓｐ ｆ３、Ａｓｐ ｆ４、Ａｓｐ ｆ５、Ａｓｐ ｆ６、Ａｓｐ ｆ７、Ａｓｐ ｆ８、Ａｓｐ ｆ９、Ａｓｐ ｆ １０、Ａｓｐ ｆ １１、Ａｓｐ ｆ １２、Ａｓｐ ｆ１３、Ａｓｐ ｆ１４、Ａｓｐ ｆ１５、Ａｓｐ ｆ１６、Ａｓｐ ｆ１７、Ａｓｐ ｆ１８、Ａｓｐ ｆ２２、Ａｓｐ ｆ２３、Ａｓｐ ｆ２７、Ａｓｐ ｆ２８、Ａｓｐ ｆ２９又はＡｓｐ ｆ３４である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１００．アレルゲンが、真菌アレルゲン、例えば、マラセチアアレルゲン、例えば、Ｍａｌａ ｆ１、Ｍａｌａ ｆ２、Ｍａｌａ ｆ３、Ｍａｌａ ｆ４、Ｍａｌａ ｆ５、Ｍａｌａ ｆ６、Ｍａｌａ ｆ７、Ｍａｌａ ｆ８、Ｍａｌａ ｆ９、Ｍａｌａ ｆ１０、Ｍａｌａ ｆ１１、Ｍａｌａ ｆ１２又はＭａｌａ ｆ１３又はＭＧＬ＿１２０４である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０１．アレルゲンが、イヌアレルゲン、例えば、Ｃａｎ ｆ１、Ｃａｎ ｆ２、Ｃａｎ ｆ３、Ｃａｎ ｆ４、Ｃａｎ ｆ５若しくはＣａｎ ｆ６であるか、又はアレルゲンがウマアレルゲン、例えば、Ｅｃｕ ｃ１、Ｅｃｕ ｃ２、Ｅｃｕ ｃ３若しくはＥｃｕ ｃ４であるか、又はアレルゲンがネコアレルゲン、例えば、Ｆｅｌ ｄ１、Ｆｅｌ ｄ２、Ｆｅｌ ｄ３、Ｆｅｌ ｄ４、Ｆｅｌ ｄ５、Ｆｅｌ ｄ６、Ｆｅｌ ｄ７、も若しくはＦｅｌ ｄ８であるか、又はアレルゲンが実験動物アレルゲン、例えば、リポカリン、尿中プレアルブミン、セクレトグロブリン若しくは血清アルブミンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０２．アレルゲンが、花粉アレルゲン、例えば、草花粉アレルゲン、例えば、チモシーグラスアレルゲン、カモガヤアレルゲン、ケンタッキーブルーグラスアレルゲン、ペレニアルライアレルゲン、ハルガヤアレルゲン、バヒアグラスアレルゲン、ジョンソングラスアレルゲン、ギョウギシバアレルゲン、Ｐｈｌ ｐ１、Ｐｈｌ ｐ２、Ｐｈｌ ｐ３、Ｐｈｌ ｐ４、Ｐｈｌ ｐ５、Ｐｈｌ ｐ６、Ｐｈｌ ｐ７、Ｐｈｌ ｐ１１、Ｐｈｌ ｐ１２又はＰｈｌ ｐ１３である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０３．アレルゲンが、樹木花粉アレルゲン、ハンノキ花粉アレルゲン、カバノキ花粉アレルゲン、ホームビーン花粉アレルゲン、ヘーゼル花粉アレルゲン、ヨーロッパホームビーン花粉アレルゲン、クリ花粉アレルゲン、ヨーロッパブナ花粉アレルゲン、ホワイトオーク花粉アレルゲン、トネリコ花粉アレルゲン、イボタノキ花粉アレルゲン、オリーブ花粉アレルゲン、ライラック花粉アレルゲン、ヒノキ花粉アレルゲン又はイトスギ花粉アレルゲン、例えば、Ａｌｎ ｇ１又はＡｌｎ ｇ４、Ｂｅｔ ｖ１、Ｂｅｔ ｖ２、Ｂｅｔ ｖ３、Ｂｅｔ ｖ４、Ｂｅｔ ｖ６又はＢｅｔ ｖ７、Ｃａｒ ｂ１、Ｃｏｒ ａ１、Ｃｏｒ ａ２、Ｃｏｒ ａ６、Ｃｏｒ ａ８、Ｃｏｒ ａ９、Ｃｏｒ ａ１０、Ｃｏｒ ａ１１、Ｃｏｒ ａ１２、Ｃｏｒ ａ１３、Ｃｏｒ ａ１４、Ｏｓｔ ｃ１、Ｃａｓ １、Ｃａｓ ５、Ｃａｓ ８又はＣａｓ ９、Ｆａｇ ｓ１、Ｑｕｅ ａ１、Ｆｒａ ｅ１、Ｌｉｇ ｖ１、Ｏｌｅ ｅ１、Ｏｌｅ ｅ２、３ Ｏｌｅ ｅ、４、Ｏｌｅ ｅ５、Ｏｌｅ ｅ６、Ｏｌｅ ｅ７、Ｏｌｅ ｅ８、Ｏｌｅ ｅ９、Ｏｌｅ ｅ１０、Ｏｌｅ ｅ１１又はＯｌｅ ｅ１２、Ｓｙｒ ｖ１、Ｃｈａ ｏ１、Ｃｈａ ｏ２、Ｃｒｙ ｊ１、Ｃｒｙ ｊ２、Ｃｕｐ ｓ１、Ｃｕｐ ｓ３、Ｊｕｎ ａ１、Ｊｕｎ ａ２、Ｊｕｎ ａ３、Ｊｕｎ ｏ４、Ｊｕｎ ｖ１、Ｊｕｎ ｖ３、Ｐｌａ ａ１、Ｐｌａ ａ２又はＰｌａ ａ３又はＰｌａ ｏｒ １、Ｐｌａ ｏｒ２又はＰｌａ ｏｒ３である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０４．抗原性ユニットが、Ｂｅｔ ｖ１ Ｔ細胞エピトープ（１３９－１５２）からなるか、又はそれを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０５．アレルゲンが、雑草花粉アレルゲン、例えば、ブタクサ花粉アレルゲン、ヨモギ花粉アレルゲン、ヒマワリ花粉アレルゲン、フィーバーフュー花粉アレルゲン、ピレトリウム花粉アレルゲン、イギリスオオバコ花粉アレルゲン、セイヨウヤマアイ花粉アレルゲン、アカザ花粉アレルゲン、ロシアアザミ花粉アレルゲン又はアマランサス花粉アレルゲン、例えば、Ａｍｂ ａ１、Ａｍｂ ａ４、Ａｍｂ ａ６、Ａｍｂ ａ８、Ａｍｂ ａ９、Ａｍｂ ａ１０又はＡｍｂ ａ１１、Ａｒｔ ｖ１、Ａｒｔ ｖ３、Ａｒｔ ｖ４、Ａｒｔ ｖ５又はＡｒｔ ｖ６、Ｈｅｌ ａ１又はＨｅｌ ａ２、Ｐａｒ ｊ１、Ｐａｒ ｊ２、Ｐａｒ ｊ３又はＰａｒ ｊ４、Ｐｌａ ｌ１、Ｍｅｒ ａ１、Ｃｈｅ ａ１、Ｃｈｅ ａ２又はＣｈｅ ａ３、Ｓａｌ ｋ１、Ｓａｌ ｋ４又はＳａｌ ｋ５、又はＡｍａ ｒ２である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０６．アレルゲンが、昆虫、ゴキブリ、ヒョウヒダニ又はカビなどの環境アレルゲンから選択される、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０７．アレルゲンが、アレルギー性鼻炎、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性胃腸症、接触性皮膚炎、薬物アレルギー、又はこれらの組み合わせから選択されるアレルギー性疾患を引き起こす、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０８．アレルゲンが、望ましくない免疫原性を有する薬物に含まれる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１０９．アレルゲンが、第ＶＩＩＩ因子である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１０．アレルゲンが、インスリンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１１．アレルゲンが、治療に使用される１つ以上のモノクローナル抗体である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１２．構築物が、自己抗原が自己免疫疾患に関与する自己アレルゲンに含まれるＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１３．自己抗原が、多発性硬化症（ＭＳ）に関与する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１４．自己抗原が、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）、ＭＡＧ、ＭＯＢＰ、ＣＮＰａｓｅ、Ｓ１００β、トランスアルドラーゼ、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１５．抗原性ユニットが、ＭＯＧ（３５－５５）、ＭＯＧ（２７－６３）、ＰＬＰ（１３９－１５１）、ＰＬＰ（１３１－１５９）、ＰＬＰ（１７８－１９１）、ＰＬＰ（１７０－１９９）、ＭＢＰ（８４－１０４）及びＭＢＰ（７６－１１２）からなる群から選択される１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１６．抗原性ユニットが、配列番号１８５～１９０又は１９２～１９７からなる群から選択される１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１７．自己抗原が、１型糖尿病に関与する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１８．自己抗原が、グルタミン酸デカルボキシラーゼ６５－キロダルトンアイソフォーム（ＧＡＤ６５）、インスリン、ＩＡ－２又はＺｎＴ８、ＩＧＲＰ、ＣｈｇＡ、ＩＡＰＰ、ペリフェリン、テトラスパニン－７、ＧＲＰ７８、ウロコルチン－３又はインスリン遺伝子エンハンサータンパク質ｉｓｌ－１である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１１９．自己抗原が、セリアック病に関与する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２０．自己抗原が、α－グリアジン、γ－グリアジン、ω－グリアジン、低分子量グルテニン、高分子量グルテニン、ホルデイン、セカリン又はアベニンｂである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２１．抗原性ユニットが、Ｔ細胞エピトープα－グリアジン（７６－９５）を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２２．自己抗原が、関節リウマチに関与する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２３．自己抗原が、コラーゲン、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）、バンド３、小型核リボ核タンパク質Ｄ１（ＳｍＤ１）、アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）又はミエリンタンパク質ゼロ（Ｐ０）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２４．自己抗原が、慢性炎症性脱髄性多発神経根ニューロパチー（ＣＩＤＰ）に関与し、自己抗原がニューロファシン１５５である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２５．自己抗原が、橋本甲状腺炎（ＨＴ）に関与し、自己抗原が、甲状腺ペルオキシダーゼ及び／又はサイログロブリンである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２６．自己抗原が、落葉天疱瘡に関与し、自己抗原が、デスモソーム関連糖タンパク質である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２７．自己抗原が、尋常性天疱瘡に関与し、自己抗原が、デスモグレイン３である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２８．自己抗原が、甲状腺眼症（ＴＥＤ）に関与し、自己抗原が、カルシウム結合タンパク質（カルセケストリン）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１２９．自己抗原が、グレーブス病に関与し、自己抗原が、甲状腺刺激ホルモン受容体である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３０．自己抗原が、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）に関与し、自己抗原が、抗ミトコンドリア抗体（ＡＭＡ）、抗核抗体（ＡＮＡ）、Ｒｉｍ様／膜（ＲＬ／Ｍ）及び／又は多重核ドット（ＭＮＤ）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３１．自己抗原が、重症筋無力症に関与し、自己抗原が、アセチルコリン受容体である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３２．自己抗原が、インスリン抵抗性糖尿病に関与し、自己抗原が、インスリン受容体である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３３．自己抗原が、自己免疫性溶血性貧血に関与し、自己抗原が、赤血球である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３４．自己抗原が、関節リウマチに関与し、自己抗原が、シトルリン化ホモシトルリン化タンパク質及びＩｇＧのＦｃ部分である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３５．抗原性ユニット及び多量体化ユニットが、ユニットリンカーによって連結されている、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３６．抗原性ユニット及び二量体化ユニットが、ユニットリンカーによって連結されている、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３７．ユニットリンカーが、制限部位を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３８．ユニットリンカーが、ＧＬＧＧＬリンカー（配列番号９０）又はＧＬＳＧＬリンカー（配列番号１６３）である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１３９．ユニットリンカーが、ＧＧＧＧＳ（配列番号５３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５６）、（ＧＧＧＧＳ）ｍ（配列番号１６４）、ＥＡＡＡＫ（配列番号１４４）、（ＥＡＡＡＫ）ｍ（配列番号１６５）、（ＥＡＡＡＫ）ｍＧＳ（配列番号１６６）、又は（ＥＡＡＫ）ｍＧＳ（配列番号３１）であって、ｍは１以上の整数であるもの、ＧＰＳＲＬＥＥＥＬＲＲＲＬＴＥＰＧ（配列番号１６７）、ＡＡＹ又はＨＥＹＧＡＥＡＬＥＲＡＧ（配列番号１６８）を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４０．構築物が、多量体化ユニットを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４１．構築物が、二量体化ユニットを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４２．多量体化ユニットが、三量体化ユニット又は四量体化ユニットである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４３．多量体化ユニットが、三量体化ユニット、例えば、コラーゲン由来三量体化ユニット、例えば、ヒトコラーゲン由来三量体化ドメイン、例えば、ヒトコラーゲン由来ＸＶＩＩＩ三量体化ドメイン又はヒトコラーゲンＸＶ三量体化ドメインである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４４．多量体化ユニットが、配列番号４２を有するヌクレオチド配列、又はヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる三量体化ユニットである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４５．多量体化ユニットが、Ｔ４フィブリチンのＣ末端ドメインである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４６．多量体化ユニットが、配列番号４３のアミノ酸配列、又は前記アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる三量体化ユニットである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４７．多量体化ユニットが、ｐ５３に由来するドメインなどの四量体化ユニットである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４８．多量体化ユニットが、配列番号４４を有する核酸配列、又は前記核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる四量体化ユニットである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１４９．二量体化ユニットが、ヒンジ領域を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５０．二量体化ユニットが、ヒンジ領域と、二量体化を促進する別のドメインと、を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５１．二量体化ユニットが、ヒンジ領域と、二量体化ユニットリンカーと、二量体化を促進する別のドメインと、を含み、二量体化ユニットリンカーが、ヒンジ領域を、二量体化を促進する別のドメインに連結する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５２．二量体化ユニットが、ヒンジ領域と、二量体化ユニットリンカーと、二量体化を促進する別のドメインと、を含み、二量体化ユニットリンカーが、ヒンジ領域を、二量体化を促進する別のドメインに連結する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５３．二量体化ユニットリンカーが、ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）などのグリシン－セリンリッチリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５４．ヒンジ領域が、ＩｇＧ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ３に由来するなどのＩｇ由来である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５５．ヒンジ領域が、ＩｇＭに由来し、任意で、配列番号４７を有するヌクレオチド配列、又は前記核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５６．ヒンジ領域が、１つ以上のジスルフィド架橋などの、１つ以上の共有結合を形成する能力を有する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５７．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列１～２７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４（ヒトヒンジ領域１及びヒトヒンジ領域４）を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５８．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列１～２７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１５９．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列１～２７を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６０．好ましい実施形態では、二量体化ユニットが、最大で１０個のアミノ酸、例えば最大で９個のアミノ酸、例えば最大で８個のアミノ酸、例えば最大で７個のアミノ酸、例えば最大で６個のアミノ酸、例えば最大で５個のアミノ酸、例えば最大で４個のアミノ酸、例えば最大で３個のアミノ酸、例えば最大で２個のアミノ酸、又は例えば最大で１個のアミノ酸などが置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列１～２７を有するヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６１．二量体化ユニットが、免疫グロブリンドメイン、例えば、免疫グロブリン定常ドメイン（Ｃドメイン）、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン若しくはカルボキシ末端Ｃドメイン（すなわち、ＣＨ３ドメイン）、又はそのようなＣドメイン若しくはその変異体と実質的に同一である配列などの、二量体化を促進する別のドメインを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６２．二量体化を促進する他のドメインが、ＩｇＧに由来するカルボキシ末端Ｃドメイン、例えば、ＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６３．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメイン、又はそのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６４. 二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメイン、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６５. 二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４を有するＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインを含むか、又はそれからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６６. 二量体化ユニットが、最大１６個のアミノ酸、例えば、最大１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列３９～１４４を含むか、又はそれらからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６７. 免疫グロブリンドメインが、疎水性相互作用などの非共有相互作用を介して二量体を形成する能力を有する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６８．二量体化ユニットが、ＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ２ドメインを含まないか、又は二量体化ユニットが、ＣＨ２ドメインを含み、ＣＨ３ドメインを含まない、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１６９．二量体化ユニットが、ヒトＩｇＧ３のヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びＣＨ３ドメインを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７０．二量体化ユニットが、ヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びヒトＩｇＧ３のＣＨ３ドメインからなるポリペプチドを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７１．二量体化ユニットが、ヒンジエクソンｈ１、ヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びヒトＩｇＧ３のＣＨ３ドメインからなるポリペプチドからなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７２．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７３．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７４．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は例えば少なくとも９９％からなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７５．二量体化ユニットが、配列番号１のアミノ酸配列、又はアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７６．二量体化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７７．二量体化ユニットが、最大２２個のアミノ酸、例えば、最大２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個のアミノ酸が置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号１のアミノ酸配列からなる、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７８．二量体化ユニットリンカーが、ＧＧＧＳＳＧＧＧＳＧ（配列番号１３９）などのグリシン－セリンリッチリンカーである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１７９．ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を更に含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８０．シグナルペプチドが、標的化ユニットのＮ末端又は標的化ユニットのＣ末端に位置する、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８１．シグナルペプチドが、ヒトＩＬ－１０のヒトシグナルペプチド又はヒトＴＧＦβのヒトシグナルペプチドなどの、本明細書に記載の標的化ユニットのいずれかのＮ末端に天然に存在する、ヒトＩｇ ＶＨシグナルペプチド又はシグナルペプチドである、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８２．ポリヌクレオチドが、ヒトＩＬ－１０シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくは、ヒトＩＬ－１０標的化ユニットをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８３．ポリヌクレオチドが、ヒトＩｇ ＶＨシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、好ましくはｓｃＦｖ、例えばヒト抗ＤＥＣ２０５をコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８４．ポリヌクレオチドが、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８５．ポリヌクレオチドが、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を含むシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８６．ポリヌクレオチドが、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、例えば少なくとも８６％、例えば少なくとも８７％、例えば少なくとも８８％、例えば少なくとも８９％、例えば少なくとも９０％、例えば少なくとも９１％、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、又は少なくとも９９％を有するアミノ酸配列からなるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８７．ポリヌクレオチドが、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を有するシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８８．ポリヌクレオチドが、最大で５個のアミノ酸、例えば、最大で４個のアミノ酸、例えば、最大で３個のアミノ酸、例えば、最大で２個のアミノ酸、又は最大で１個のアミノ酸などが置換、欠失又は挿入されていることを除いて、配列番号６又は配列番号４８のアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１８９．ポリヌクレオチドが、ＤＮＡ配列又はＲＮＡ配列である、前述の実施形態のいずれかに記載の寛容誘導構築物。

１９０．前述の実施形態のいずれかに記載される、ポリヌクレオチド。

１９１．実施形態１９０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

１９２．実施形態１９０に記載のポリヌクレオチド及び／又は実施形態１９１に記載のベクターを含む、宿主細胞。

１９３．実施形態１～１８９のいずれかに記載されるヌクレオチド配列によってコードされる、ポリペプチド。

１９４．２個のポリペプチドからなる、実施形態１～１８９のいずれかに記載の二量体タンパク質。

１９５．２個以上のポリペプチドからなる、実施形態１～１８９のいずれかに記載の多量体タンパク質。

１９６．実施形態１～１８９のいずれかに記載の寛容誘導構築物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

１９７．実施形態１～１８９のいずれかに記載のポリヌクレオチド、実施形態１９１に記載のベクター、実施形態１９３に記載のポリペプチド、実施形態１９４に記載の二量体タンパク質、又は実施形態１９５に記載の多量体タンパク質、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

１９８．１つ以上の薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を更に含む、実施形態１９６～１９７のいずれかに記載の医薬組成物。

１９９．薬学的に許容される担体が、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ＰＢＳ、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、滅菌等張水性緩衝液、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態１９６～１９８のいずれかに記載の医薬組成物。

２００．多量体タンパク質、二量体タンパク質又はポリペプチドを含む、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物の調製方法であって、当該方法は、
ｉ）実施形態１９０に記載のポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトする工程と、
ｉｉ）細胞を培養する工程と、
ｉｉｉ）多量体タンパク質、二量体タンパク質、又は細胞から発現されたポリペプチドを収集し、精製する工程と、
ｉｖ）工程ｉｉｉ）から得られた二量体タンパク質又はポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合する工程と、
を含む、方法。

２０１．実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物の調製方法であって、医薬組成物は、実施形態１９０に記載のポリヌクレオチドを含み、当該方法は、
ｉ）ポリヌクレオチドを調製する工程と、
ｉｉ）任意で、ポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングする工程と、
ｉｉｉ）工程ｉ）から得られたポリヌクレオチド又は工程ｉｉ）から得られたベクターを、薬学的に許容される担体と混合する工程と、
を含む、方法。

２０２．自己免疫疾患、アレルギー性疾患、若しくは移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態に罹患しているか、又はその予防を必要とする対象を処置するための方法であって、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。

２０３．自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置に使用するための、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物。

２０４．自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置のための、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物の使用。

２０５．自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置のための医薬品を製造するための、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物の使用。

２０６．自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態を有する対象を処置するための、実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物の使用。

２０７. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態を処置するための、実施形態１～１８９のいずれかに記載の寛容誘導構築物を含む、医薬品。

２０８. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態を有する対象を処置するための医薬品を製造するための、実施形態１～１８９のいずれかに記載の薬学的に許容される担体及び寛容誘導構築物を含む、医薬組成物の使用。

２０９. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態を有する対象の処置のための、実施形態１～１８９のいずれかに記載の薬学的に許容される担体及び寛容誘導構築物を含む、医薬組成物の使用。

２１０. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置に使用される場合の、実施形態１～１８９のいずれかに記載の薬学的に許容される担体及び寛容誘導構築物を含む、医薬組成物。

２１１. 実施形態１～１８９のいずれかに記載の寛容誘導構築物を使用して、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための方法。

２１２.対象における自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための方法であって、実施形態１～１８９のいずれかに記載の寛容誘導構築物又は実施形態１９６～１９９のいずれかに記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。

Claims (63)

1. ｉ）抗原提示細胞を標的とするか、又は標的とすることができる標的化ユニットと、二量体化ユニットなどの、多量体化ユニットと、抗原性ユニットと、をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、又は
   ｉｉ）（ｉ）に記載の核酸配列によってコードされるポリペプチド、又は
   ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の複数のポリペプチド、例えば２個のポリペプチドからなる二量体タンパク質などの、多量体タンパク質、
   を含む、寛容誘導構築物であって、
   前記抗原性ユニットが、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、
   寛容誘導構築物。
2. 前記標的化ユニットが、前記細胞を活性化することなく、前記抗原提示細胞上の表面分子と相互作用する、請求項１に記載の寛容誘導構築物。
3. 前記構築物が多量体化ユニットを含む、請求項１又は２に記載の寛容誘導構築物。
4. 前記構築物が二量体化ユニットを含み、及び／又は前記多量体タンパク質が二量体タンパク質である、請求項１～３のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
5. 前記標的化ユニットが、ＴＧＦβＲ１、ＴＧＦβＲ２、ＴＧＦβＲ３、ＩＬ１０Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ及びＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ１１Ｒ及びＩＬ１３Ｒ、ＩＬ２７Ｒ、ＩＬ３５Ｒ、ＩＬ３７Ｒ、ＣＣＲ７、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１０３、ＣＤ１４、ＣＤ３６、ＣＤ２０５、ＣＤ１０９、ＶＩＳＴＡ、ＭＡＲＣＯ、ＭＨＣＩＩ、ＭＨＣＩＩ、ＣＤ８３、ＳＩＧＬＥＣ、ＭＧＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｃｌｅｃ９Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ａ、Ｃｌｅｃ１２Ｂ、ＤＣＩＲ２、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＭＲ、ＤＣ－Ｓｉｇｎ、Ｔｒｅｍｌ４、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２及びＨＶＥＭからなる群から選択される受容体に結合する部分を含むか、又はそれらからなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
6. 前記部分が抗体又はその一部、例えばｓｃＦｖである、請求項５に記載の寛容誘導構築物。
7. 前記部分が、ＣＤ２０５に対する特異性を有する抗体、又はＣＤ２０５に対する特異性を有する抗体の一部、例えばｓｃＦｖである、請求項５又は６に記載の寛容誘導構築物。
8. 前記部分が合成リガンドである、請求項５に記載の寛容誘導構築物。
9. 前記部分が天然リガンドである、請求項５に記載の寛容誘導構築物。
10. 前記天然リガンドが、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ１３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ３７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＩＣＡＭ－１、ケラチン、ＶＳＩＧ－３、ＳＣＧＢ３Ａ２、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１及びＢＴＬＡからなる群から選択される、請求項９に記載の寛容誘導構築物。
11. 前記天然リガンドが、ＣＴＬＡ－４の細胞外ドメイン、ＰＤ－１の細胞外ドメイン及びＢＴＬＡの細胞外ドメインからなる群から選択される、請求項９に記載の寛容誘導構築物。
12. 前記天然リガンドが、ＩＬ－１０、ＴＧＦβ、ＳＣＧＢ３Ａ２及びＶＳＩＧ－３からなる群から選択される、請求項９に記載の寛容誘導構築物。
13. 前記抗原性ユニットが、１つの自己抗原又は１つのアレルゲン又は１つの同種抗原又は１つの異種抗原の１つのＴ細胞エピトープを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
14. 前記抗原性ユニットが、１つの自己抗原又は１つのアレルゲン又は１つの同種抗原又は１つの異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
15. 前記抗原性ユニットが、複数の異なる自己抗原又は複数の異なるアレルゲン又は複数の異なる同種抗原又は複数の異なる異種抗原の複数のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
16. 前記Ｔ細胞エピトープが、７個～約２００個のアミノ酸、例えば７個～１５０個のアミノ酸、好ましくは７個～１００個のアミノ酸、例えば９個～１００個のアミノ酸、又は１５個～１００個のアミノ酸、又は９個～６０個のアミノ酸、又は９個～３０個のアミノ酸、又は１５個～６０個のアミノ酸、又は１５個～３０個のアミノ酸、又は２０個～７５個のアミノ酸、又は２５個～５０個のアミノ酸の長さを有する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
17. 前記Ｔ細胞エピトープが、ＭＨＣクラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩ上での特異的提示に適した長さ、例えば、ＭＨＣクラスＩ提示のために７個～１１個のアミノ酸の長さ、又はＭＨＣクラスＩＩ提示のために１５個のアミノ酸の長さを有する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
18. 前記抗原性ユニットが、最大３５００個のアミノ酸、例えば６０個～３５００個のアミノ酸、例えば約８０個又は約１００個又は約１５０個のアミノ酸～約３０００個のアミノ酸、例えば約２００個～約２５００個のアミノ酸、例えば約３００個～約２０００個のアミノ酸、又は約４００個～約１５００個のアミノ酸、又は約５００個～約１０００個のアミノ酸を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
19. 前記抗原性ユニットが、１個～１０個のＴ細胞エピトープ、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のＴ細胞エピトープ、又は１１個～２０個のＴ細胞エピトープ、例えば１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個若しくは２０個のＴ細胞エピトープ、又は２１個～３０個のＴ細胞エピトープ、例えば２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個若しくは３０個のＴ細胞エピトープ、又は３１個～４０個のＴ細胞エピトープ、例えば３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個若しくは４０個のＴ細胞エピトープ、又は４１個～５０個のＴ細胞エピトープ、例えば４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個若しくは５０個のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
20. 前記抗原性ユニットが、Ｔ細胞エピトープリンカーによって分離された複数のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
21. 前記Ｔ細胞エピトープリンカーが非免疫原性であり、好ましくは可動性でもある、請求項２０に記載の寛容誘導構築物。
22. 前記Ｔ細胞エピトープリンカーが、４個～２０個のアミノ酸、例えば、５個～２０個のアミノ酸、又は５個～１５個のアミノ酸、又は８個～２０個のアミノ酸、又は８個～１５個のアミノ酸、１０個～１５個のアミノ酸、又は８個～１２個のアミノ酸からなる、請求項２０又は２１に記載の寛容誘導構築物。
23. 前記構築物が個別化された寛容誘導構築物である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
24. 前記構築物が既製の寛容誘導構築物である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
25. 前記抗原性ユニットが、アレルゲンの１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
26. 前記アレルゲンが、食物アレルゲン、ハチ毒アレルゲン、ラテックスアレルゲン、チリダニアレルゲン、ゴキブリアレルゲン、カビアレルゲン、真菌アレルゲン、毛皮動物アレルゲン、花粉アレルゲン及び薬物に含まれるアレルゲンからなる群から選択される、請求項２５に記載の寛容誘導構築物。
27. 前記抗原性ユニットが、自己抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
28. 前記自己抗原が、多発性硬化症自己抗原、１型糖尿病自己抗原、セリアック病自己抗原、関節リウマチ自己抗原、慢性炎症性脱髄性多発神経根ニューロパチー自己抗原、橋本甲状腺炎自己抗原、落葉状天疱瘡自己抗原、尋常性天疱瘡自己抗原、甲状腺眼症自己抗原、グレーブス病自己抗原、原発性胆汁性肝硬変自己抗原、重症筋無力症自己抗原、インスリン抵抗性糖尿病自己抗原及び溶血性貧血自己抗原からなる群から選択される、請求項２７に記載の寛容誘導構築物。
29. 前記抗原性ユニットが、同種抗原又は異種抗原の１つ以上のＴ細胞エピトープを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
30. 前記二量体化ユニットがヒンジ領域を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
31. 前記ヒンジ領域が、１つ以上の共有結合を形成する能力を有する、請求項３０に記載の寛容誘導構築物。
32. 前記ヒンジ領域がＩｇ由来である、請求項３０又は３１に記載の寛容誘導構築物。
33. 前記二量体化ユニットが、二量体化を促進する他のドメインを更に含む、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
34. 前記他のドメインが、免疫グロブリンドメイン、好ましくは免疫グロブリン定常ドメインである、請求項３３に記載の寛容誘導構築物。
35. 前記他のドメインが、ＩｇＧ、好ましくはＩｇＧ３に由来するカルボキシ末端Ｃドメインである、請求項３３又は３４に記載の寛容誘導構築物。
36. 前記二量体化ユニットが二量体化ユニットリンカーを更に含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
37. 前記二量体化ユニットリンカーが、前記ヒンジ領域と、二量体化を促進する前記他のドメインとを連結する、請求項３６に記載の寛容誘導構築物。
38. 前記二量体化ユニットが、ヒトＩｇＧ３のヒンジエクソンｈ１及びヒンジエクソンｈ４、二量体化ユニットリンカー及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
39. 前記多量体化ユニットが、三量体化ユニット、例えばコラーゲン由来三量体化ユニット、例えばヒトコラーゲン由来三量体化ドメイン、例えばヒトコラーゲン由来ＸＶＩＩＩ三量体化ドメイン又はヒトコラーゲンＸＶ三量体化ドメインである、請求項１～３８のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
40. 前記多量体化ユニットがＴ４フィブリチンのＣ末端ドメインである、三量体化ユニットである、請求項１～３９のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
41. 前記多量体化ユニットが、ｐ５３に由来するドメインなどの、四量体化ユニットである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
42. 前記構築物がポリヌクレオチド（ｉ）である、請求項１～４１のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物。
43. 前記ポリヌクレオチドが、ＲＮＡ又はＤＮＡ、好ましくはＤＮＡである、請求項４２に記載の寛容誘導構築物。
44. 前記ポリヌクレオチドが、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を更に含む、請求項４２又は４３に記載の寛容誘導構築物。
45. 請求項１～４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
46. 請求項４５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
47. 請求項４５に記載のポリヌクレオチド又は請求項４６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
48. 請求項１～４４のいずれか一項に記載の核酸によってコードされる、ポリペプチド。
49. 請求項４８に記載の２個のポリペプチドからなる、二量体タンパク質。
50. 前記二量体タンパク質が、ホモ二量体タンパク質である、請求項４９に記載の二量体タンパク質。
51. 請求項４８に記載の２個以上のポリペプチドからなる、多量体タンパク質。
52. 前記ポリペプチド又は二量体タンパク質中の前記標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットが、標的化ユニット、二量体化ユニット及び抗原性ユニットのＮ末端からＣ末端の順である、請求項４８～５１のいずれか一項に記載のポリペプチド、二量体タンパク質又は多量体タンパク質。
53. 医薬品としての使用のための、請求項１～４４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物、請求項４５に記載のポリヌクレオチド、請求項４６に記載のベクター、請求項４８に記載のポリペプチド、請求項４９若しくは５０に記載の二量体タンパク質、又は請求項５１に記載の多量体タンパク質。
54. 請求項１～４４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
55. 前記薬学的に許容される担体が、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ＰＢＳ、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、滅菌等張水性緩衝液、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５４に記載の医薬組成物。
56. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、及び移植片拒絶の処置などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置に使用するための、請求項１～４４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物又は請求項５４若しくは５５に記載の医薬組成物。
57. 前記処置が、予防的処置又は治療的処置である、請求項５６に記載の使用のための寛容誘導構築物又は医薬組成物。
58. 請求項５４又は５５に記載の医薬組成物の調製方法であって、前記医薬組成物が、請求項４８に記載のポリペプチド又は請求項４９若しくは５０に記載の二量体タンパク質を含み、前記方法が、
    ａ）請求項４５に記載のポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトする工程と、
    ｂ)前記細胞を培養する工程と、
    ｃ)前記細胞から発現された前記二量体タンパク質又は前記ポリペプチドを収集及び精製する工程と、
    ｄ）工程ｃ）から得られた前記二量体タンパク質又は前記ポリペプチドを、薬学的に許容される担体と混合する工程と、
    を含む、方法。
59. 請求項５４又は５５に記載の医薬組成物の調製方法であって、前記医薬組成物が、請求項４５に記載のポリヌクレオチドを含み、前記方法が、
    ａ）ポリヌクレオチドを調製する工程と、
    ｂ）任意で、前記ポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングする工程と、
    ｃ）工程ａ）又は工程ｂ）から得られた前記ポリヌクレオチドを、薬学的に許容される担体と混合する工程と、
    を含む、方法。
60. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、若しくは移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態に罹患しているか、又はその予防を必要とする対象を処置するための方法であって、前記方法が、請求項５４又は５５に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
61. 自己免疫疾患、アレルギー性疾患、又は移植片拒絶などの、望ましくない免疫反応が関与する状態の処置に使用するための、請求項５４又は５５に記載の医薬組成物。
62. 請求項１～４４のいずれかに記載の寛容誘導構築物を使用して、自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための、方法。
63. 対象における自己抗原、アレルゲン、同種抗原又は異種抗原に対する寛容を改善するための方法であって、前記方法が、請求項１～４４のいずれか一項に記載の寛容誘導構築物又は請求項５４若しくは５５に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。