JP2024513754A

JP2024513754A - インクレチン類似体含有組成物及びその使用

Info

Publication number: JP2024513754A
Application number: JP2023558406A
Authority: JP
Inventors: ゴパラトナム，ガナパシ; シアーズミニー，クリストファー
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2021-03-23
Filing date: 2022-03-22
Publication date: 2024-03-27
Also published as: CR20230452A; CA3213230A1; TW202302139A; DOP2023000200A; PE20240238A1; TW202423476A; AR125086A1; AU2022246002A1; CO2023012373A2; MX2023011278A; IL305688A; TWI837615B; CL2023002808A1; KR20230146645A; WO2022204117A1; EP4312982A1; US20240173250A1; BR112023016083A2; CN117042754A; ECSP23071867A

Abstract

グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、及びグルカゴン（ＧＣＧ）受容体（すなわち、トリ受容体アゴニスト）の各々での活性を有するインクレチン類似体と、等張化剤及び防腐剤などの１つ以上の追加の薬剤と、を含む組成物が提供される。２型糖尿病、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、及び肥満などの疾患を当該組成物で治療するための方法も提供される。

Description

本開示は、グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（glucose-dependent insulinotropic polypeptide、ＧＩＰ）受容体、グルカゴン様ペプチド－１（glucagon-like peptide-1、ＧＬＰ－１）受容体、及びグルカゴン（glucagon、ＧＣＧ）受容体の各々での活性を有するインクレチン類似体を有する組成物に関する。組成物は更に、商業的に許容可能な貯蔵寿命安定性、使用中安定性、及び許容可能な患者注射部位経験を提供する薬剤を含む。そのようなインクレチン類似体含有組成物は、糖尿病（特に、２型糖尿病（type 2 diabetes mellitus、Ｔ２ＤＭ））、脂質異常症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（non-alcoholic fatty liver disease、ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis、ＮＡＳＨ）、及び／又は肥満を含む状態、疾患、及び障害を治療するために使用され得る。

過去数十年にわたって、インスリン分泌、インスリン作用、又はその両方の欠陥から生じる高血糖を特徴とする慢性疾患である糖尿病の有病率は、上昇し続けている。Ｔ２ＤＭは、全ての糖尿病の約９０％を占める、糖尿病の最も一般的な形態である。Ｔ２ＤＭでは、インスリン分泌障害及びインスリン抵抗性の複合効果は、上昇した血糖値と関連している。

制御されていない糖尿病は、そのような個体の罹患率及び死亡率に影響を与える１つ以上の状態を引き起こし得る。Ｔ２ＤＭの主な危険因子のうちの１つは肥満であり、Ｔ２ＤＭを有する個体の多く（約９０％）は、過体重又は肥満である。体脂肪蓄積の低下は、高血糖及び心血管事象を含む肥満関連併存症の改善をもたらすであろうことが実証されている。

Ｔ２ＤＭの現在の標準治療としては、食事制限及び運動、並びに経口薬、及びＧＬＰ－１受容体アゴニスト及びＧＩＰ／ＧＬＰ－１（ＧＧ）受容体アゴニストなどのインクレチンベースの療法を含む注射可能な血糖降下薬での治療が挙げられる。利用可能な治療選択肢にもかかわらず、承認された療法を受けている著しい数の個体が、血糖制御目標に達していない（例えば、Ｃａｓａｇｒａｎｄｅｅｔａｌ．（２０１３）ＤｉａｂｅｔｅｓＣａｒｅ３６：２２７１－２２７９参照）。

国際特許出願公開第２０１９／１２５９２９号及び同第２０１９／１２５９３８号、並びに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４５１２号は、ＧＣＧ、ＧＬＰ－１、及びＧＩＰ（ＧＧＧ）トリ受容体アゴニストとして作用し、Ｔ２ＤＭを治療するために使用することができるインクレチン類似体を記載している。したがって、Ｔ２ＤＭ疾患管理におけるグルコース制御及び体重減少において有効であるために、受容可能な安定性及び受容可能な注射部位経験を有するそのようなＧＧＧトリ受容体アゴニストを含む組成物が、それを受ける個体のために必要とされている。

この必要性に対処するために、本開示は、最初に、インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩、等張化剤、及び任意選択で防腐剤を含む薬学的に許容される組成物を記載する。

いくつかの例では、インクレチン類似体は、配列番号１又はその薬学的に許容される塩であり得る。いくつかの例では、インクレチン類似体は、約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。ある特定の例では、インクレチン類似体は、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、又は３０ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。いくつかの例では、本明細書での使用のための薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、及び／又は酢酸塩から選択されてもよい。いくつかの例では、薬学的に許容される塩は、四ナトリウム塩であってもよい。

いくつかの例では、等張化剤は、グリセリン、マンニトール、及びプロピレングリコールから選択され得る。等張化剤がグリセリンである場合、等張化剤は、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、特に２０ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。等張化剤がマンニトールである場合、等張化剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、特に４６ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。等張化剤がプロピレングリコールである場合、等張化剤は、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、特に１５ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。ある特定の例では、等張化剤は、４６ｍｇ／ｍＬのマンニトールである。

いくつかの例では、防腐剤は、ｍ－クレゾール及びフェノールから選択され得る。防腐剤がｍ－クレゾールである場合、防腐剤は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、特に３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。防腐剤がフェノールである場合、防腐剤は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、特に５ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。ある特定の例では、防腐剤は、３．１５ｍｇ／ｍＬのｍ－クレゾールである。

いくつかの例では、組成物は、約７．０～約８．０、特に約７．５のｐＨであり得る。ある特定の例では、ｐＨを維持するために緩衝系、特にＴＲＩＳ緩衝系を約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、特に１０ｍＭの濃度で使用することができる。

上記を考慮して、ある特定の例では、組成物は、約７．５のｐＨのＴＲＩＳ緩衝系中の約２ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度のインクレチン類似体及び１０～５０ｍｇ／ｍＬの濃度の等張化剤を含む。いくつかの例では、インクレチン類似体は、配列番号１である。いくつかの例では、等張化剤は、４６ｍｇ／ｍＬの濃度のマンニトールである。いくつかの例では、組成物はまた、ｍ－クレゾールなどの防腐剤を３．１５ｍｇ／ｍＬからの濃度で含む。他の例では、組成物はまた、フェノールなどの防腐剤を５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。

本開示はまた、糖尿病を治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。いくつかの例では、糖尿病は、Ｔ２ＤＭである。代替として、本開示は、肥満を治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、脂質異常症を治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、脂肪性肝疾患を治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、メタボリックシンドロームを治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、ＮＡＦＬＤを治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、ＮＡＳＨを治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、治療的減量を提供する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、非治療的減量を提供する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に投与するステップを含む。代替として、本開示は、ＧＧＧトリ受容体アゴニスト活性によって媒介される状態を治療する方法を記載し、そのような方法は、少なくとも、有効量／用量の本明細書の組成物を、必要とする個体に有効量の本明細書の組成物を投与するステップを含む。

いくつかの例では、組成物は、約１週間に１回投与される。他の例では、組成物は、７日毎に１回投与される。

本開示は更に、医薬として使用するための本明細書の組成物を記載する。

本開示は更に、糖尿病の治療において使用するための本明細書の組成物を記載する。代替として、本開示は、肥満の治療において使用するための本明細書の組成物を記載する。代替として、本開示は、治療的減量を提供する際に使用するための本明細書の組成物を記載する。代替として、本開示は、非治療的減量を提供する際に使用するための本明細書の組成物を記載する。

本開示は更に、本明細書の組成物を含む製品を記載する。いくつかの例では、製品は、複数回使用バイアルである。いくつかの例では、製品は、プレフィルドシリンジである。いくつかの例では、製品は、自動注射装置（「自動注射器」、例えば、米国特許第８，７３４，３９４号参照）である。いくつかの例では、製品は、連続灌流用ポンプ、特に皮下注入用ポンプである。

概要
ＧＣＧは、アミノ酸、脂質、及び炭水化物の代謝に関与する２９個のアミノ酸ホルモンである。ＧＣＧは、食間の血糖調節及び全体的な体重減少において重要な役割を果たす。ＧＬＰ－１は、インスリン分泌を刺激し、グルカゴン分泌を阻害するインクレチンホルモンである。ＧＩＰは、インスリンのグルコース依存性分泌に対して強いインクレチン効果を示し、グルコース制御及び体重減少を改善するための、ＧＬＰ－１との既知の相補的効果を有する胃抑制ペプチドである。これら３つの受容体に対するＧＧＧトリ受容体アゴニストの相乗効果は、現在の標準治療よりも強力で効果的な治療をもたらすと仮定されている。配列番号１のインクレチン類似体は、脂肪酸アシル化、長時間作用型ＧＧＧトリ受容体アゴニストである。

別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、インクレチン類似体、薬学的組成物、及び方法の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料は、本明細書に記載されている。

また、不定冠詞「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」による要素への言及は、文脈が１つ及び１つのみの要素があることを明確に要求しない限り、複数の要素が存在する可能性を排除しない。したがって、不定冠詞の「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。

定義
本明細書で使用される場合、「約」は、例えば、記載された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、又は体積などの値（複数可）の統計的に有意な範囲内を意味する。そのような値又は範囲は、所与の値又は範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、更により典型的には５％以内の規模以内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究での特定の系に依存し、当業者によって容易に理解され得る。

本明細書で使用される場合、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、又はＧＣＧ受容体のうちの１つ以上に関して、「活性」、「活性化する」、「活性化すること」などは、以下に記載されるインビトロアッセイなどの当該技術分野で知られているアッセイを使用して測定される、受容体に結合する、及び受容体での応答を誘導する、本明細書のインクレチン類似体などの化合物の能力を意味する。

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」は、化学的観点から、１つ以上のアミン基及び１つ以上のカルボン酸基を含むことによって特徴付けられ、他の官能基を含み得る分子を意味する。当該技術分野で知られているように、標準アミノ酸として指定され、あらゆる生物によって産生されるほとんどのペプチド／ポリペプチド／タンパク質の構成要素として使用される２０種のアミノ酸のセットが存在する。

本明細書で使用される場合、「類似体」は、標的受容体を活性化し、天然の受容体アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボ又はインビトロ効果を誘発する、合成のペプチド又はポリペプチドなどの化合物を意味する。

本明細書で使用される場合、「化学的安定性」は、治療剤、物質、又は生成物が、異性化、凝集、酸化、重合、断片化、及び加水分解などの起こり得る化学反応に起因する生成物中の組成の潜在的な変化に抵抗する能力を意味する。

本明細書で使用される場合、「有効量」は、本明細書のインクレチン類似体のうちの１つ以上、又はその薬学的に許容される塩の量、濃度、又は用量を意味し、これは、それを必要とする個体への単回又は複数回投与により、診断又は治療中のそのような個体において所望の効果を提供する（すなわち、例えば、血糖の低下、ＨｂＡ１ｃの低下、体重若しくは体脂肪の低下、及び／又は体の組成の変化など、個体の状態における臨床的に測定可能な差異を生じさせ得る）。有効量は、既知の技法の使用によって、及び同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者であれば容易に決定することができる。個体についての有効量を決定する際には、哺乳動物の種、そのサイズ、年齢、及び健康状態全般、関与する特定の疾患又は障害、疾患又は障害の程度、関与、又は重症度、個体の応答、投与される特定のインクレチン類似体、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能特性、選択される用量レジメン、併用薬の使用、並びに他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の因子が考慮される。

本明細書で使用される場合、「半数効果濃度」又は「ＥＣ_５０」は、用量反応曲線（例えば、ｃＡＭＰ）などのアッセイエンドポイントの５０％の活性化／刺激をもたらす化合物の濃度を意味する。

本明細書で使用される場合、「インクレチン類似体」は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、及びＧＣＧ、特にヒトＧＩＰ、ヒトＧＬＰ－１、及びヒトＧＣＧの各々との構造的類似性を有するが、複数の相違を有する化合物を意味する。本明細書のインクレチン類似体は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、及びＧＣＧ受容体の親和性及びそれらの各々での活性（すなわち、トリプル受容体アゴニスト活性）を有する化合物をもたらすアミノ酸配列を含む。本明細書での使用のための例示的なインクレチン類似体並びにヒトＧＩＰ、ＧＬＰ－１、及びＧＣＧの配列は、国際特許出願公開第２０１９／１２５９２９号及び同第２０１９／１２５９３８号、並びに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４５１２号に記載されている。本明細書で特に有用なのは、国際特許出願公開第２０１９／１２５９３８号の実施例１２であり、これは、以下の配列を有し、
ＹＸ_２ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ_１３ＬＤＫＸ_１７ＡＸ_１９Ｘ_２０ＡＦＩＥＹＬＬＸ_２８Ｘ_２９ＧＰＳＳＸ_３４ＡＰＰＰＳ
式中、Ｘ_２は、Ａｉｂであり、Ｘ_１３は、αＭｅＬであり、Ｘ_１７は、Ｋであり、Ｘ_１９は、Ｑであり、Ｘ_２０は、Ａｉｂであり、Ｘ_２８は、Ｅであり、Ｘ_２９は、Ｇであり、Ｘ_３４は、Ｇであり、Ｘ_１７におけるＫは、（２－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ_２）_１８ＣＯ_２Ｈでの、Ｋ側鎖のイプシロンアミノ基へのコンジュゲーションを介して化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端一級アミド（配列番号１）としてアミド化される。

配列番号１のインクレチン類似体の構造の図を、標準的な１文字のアミノ酸コードを用いて以下に示すが、アミノ酸残基の構造が拡張されている残基Ａｉｂ２、αＭｅＬ１３、Ｋ１７、及びＡｉｂ２０は例外とする。

本明細書で使用する場合、「それを必要とする個体」は、例えば、本明細書に列挙されるものを含む、治療又は療法を必要とする状態、疾患、障害、又は症状を有する、ヒトなどの哺乳動物を意味する。特に、治療される好ましい個体はヒトである。

本明細書で使用される場合、「長時間作用型」は、本明細書のインクレチン類似体の結合親和性及び活性が、天然のヒトＧＩＰ（配列番号２）、ヒトＧＬＰ－１（配列番号３）、及び／又はヒトＧＣＧ（配列番号４）などの参照ペプチドよりも長い期間継続し、少なくとも１日１回、週３回、週２回、週１回、又は更に月に１回ほどの低頻度で投与可能であることを意味する。本明細書に記載のインクレチン類似体の作用時間プロファイルは、以下の実施例で記載されるものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定され得る。

本明細書で使用される場合、「微生物学的安定性」は、治療剤、物質、又は生成物が、環境微生物又は他の微生物に曝露された場合にその無菌性を維持する能力を意味する。

本明細書で使用される場合、「非標準アミノ酸」は、細胞内で自然に発生し得るが、ペプチド合成には関与しないアミノ酸を意味する。非標準アミノ酸は、ペプチドの構成要素であり得、ペプチド内の標準アミノ酸を修飾することによって（すなわち、翻訳後修飾を介して）生成され得る。非標準アミノ酸には、上記の標準Ｌ－アミノ酸とは反対の絶対キラリティーを有するＤ－アミノ酸を含み得る。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、当業者に周知である。薬学的に許容される塩、及びそれらを調製するための一般的な技法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｔａｈｌｅｔａｌ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｓｅ，２ｎｄＲｅｖｉｓｅｄＥｄｉｔｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１）参照）。本明細書での使用のための薬学的に許容される塩には、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、及び／又は酢酸塩が含まれる。

本明細書で使用される場合、「物理的安定性」は、治療剤、物質、又は生成物が、例えば、撹拌及び剪断などのその使用環境において通常遭遇する条件に曝露された場合に、その物理的寸法及び特性を維持する能力を意味する。

本明細書で使用される場合、「プロピレングリコール」は、当業者に周知であり、式、Ｃ_３Ｈ_８Ｏ_２によって表される。

本明細書で使用される場合、「飽和」は、脂肪酸部分が炭素－炭素二重結合又は三重結合を含有しないことを意味する。

本明細書で使用される場合、「貯蔵寿命安定性」は、本明細書のインクレチン類似体などの治療剤が、その元の濃度の約９０％まで崩壊するのに必要な時間を意味する。貯蔵寿命安定性はまた、例えば、約５℃の制御された条件下で測定される、推奨される貯蔵条件下で貯蔵される場合に、治療剤が安定したままである時間を意味する。

本明細書で使用される場合、「治療剤安定性」は、治療剤又は物質又は生成物が、特定の限界内で、その貯蔵及び使用の期間を通して、その製造時に有していたのと同じ特性及び特徴を保持する程度を意味する。評価され得る治療剤安定性についての例示的な特性としては、その化学的、物理的、微生物学的、治療的、及び／又は毒物学的特性が挙げられるが、これらに限定されない。治療剤安定性に影響を及ぼし得る因子としては、濃度、剤形、光、水分、酸素、ｐＨ、及び温度が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、「治療すること」などは、既存の状態、疾患、障害、又は症状の進行又は重症度の抑制、遅延、停止、又は逆転を意味する。

本明細書で使用される場合、インクレチン類似体を参照して、「トリプル受容体アゴニスト活性」は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、及びＧＣＧ受容体の各々での活性を有するインクレチン類似体、特に、その受容体の過剰な活性に関連する望ましくない副作用を回避しながら、その受容体のアゴニズムの利点を提供するために各受容体でバランスのとれた十分な活性を有する類似体を意味する。また、トリプル受容体アゴニスト活性を有するインクレチン類似体は、ＧＩＰ、ＧＬＰ－１、及びＧＣＧ受容体の各々で長期間の作用を有し、これは１日１回、週３回、週２回、又は週１回の低頻度で投与することを有利に可能にする。

ある特定の略語が以下のように定義される。「Ａｉｂ（α－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ）」は、α－アミノイソ酪酸を指し、「αＭｅＬ」は、α－メチルロイシンを指し、「αＭｅＫ」は、α－メチルリジンを指し、「αＭｅＦ」は、α－メチルフェニルアラニンを指し、「αＭｅＦ（２Ｆ）」は、α－メチル２－フルオロフェニルアラニンを指し、「αＭｅＹ」は、α－メチルチロシンを指し、「ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）」は、エチレンジアミン四酢酸を指し、「ＨＩＡＣ（ｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙｌｉｑｕｉｄｐａｒｔｉｃｌｅｃｏｕｎｔｉｎｇ）」は、光遮蔽技術による高精度液体粒子計数を指し、「ｈｒ」は、時間を指し、「ＩＶ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ）」は、静脈内を指し、「Ｉｖａ（ｉｓｏｖａｌｉｎｅ）」は、イソバリンを指し、「ｋＤａ（ｋｉｌｏｄａｌｔｏｎ）」は、キロダルトンを指し、「ＬＣ－ＭＳ（ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）」は、液体クロマトグラフィー－質量分析を指し、「ＭＦＩ（ｍｉｃｒｏｆｌｏｗｉｍａｇｉｎｇ）」は、マイクロフローイメージングを指し、「ｍｉｎ」は、分を指し、「ＭＳ（ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）」は、質量分析を指し、「Ｏｒｎ（ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）」又は「Ｏ（ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）」は、オルニチンを指し、「ＲＰ－ＨＰＬＣ（ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）」は、逆相高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｓｅｃ」は、秒を指し、「ＳＥＭ（ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｏｆｔｈｅｍｅａｎ）」は、平均値の標準誤差を指し、「ＳＰＡ（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎｐｒｏｘｉｍｉｔｙａｓｓａｙ）」は、シンチレーション近接アッセイを指し、「ＳＱ（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）」は、皮下を指し、「ＴＦＡ（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ）」は、トリフルオロ酢酸を指し、「ｔＢｕ（ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ）」は、ｔｅｒｔ－ブチルを指し、「ＴＲＩＳ」は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを指し、「Ｔｒｔ（ｔｒｉｔｙｌ）」は、トリチルを指す。

組成物
本明細書の組成物は、例えば、配列番号１のインクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩を、約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。いくつかの例では、インクレチン類似体の濃度は、約２ｍｇ／ｍＬ～約２９ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ～約２８ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ～約２７ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ～約２６ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ～約２５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ～約２４ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ～約２３ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ～約２２ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～約２１ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ～約１９ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ～約１８ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ～約１７ｍｇ／ｍＬ、又は約１５ｍｇ／ｍＬ～約１６ｍｇ／ｍＬであり得る。他の例では、インクレチン類似体の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１９ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２１ｍｇ／ｍＬ、約２２ｍｇ／ｍＬ、約２３ｍｇ／ｍＬ、約２４ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２７ｍｇ／ｍＬ、約２８ｍｇ／ｍＬ、約２９ｍｇ／ｍＬ、又は約３０ｍｇ／ｍＬであり得る。ある特定の例では、インクレチン類似体の濃度は、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、又は３０ｍｇ／ｍＬであり得る。

いくつかの例では、用量範囲は、約０．５ｍｇ～約１５ｍｇであり得る。他の例では、用量範囲は、約６ｍｇ～約２４ｍｇであり得る。

インクレチン類似体は、組換え産生又は合成産生することができる（例えば、国際特許出願公開第２０１９／１２５９２９号、同第２０１９／１２５９３８号、並びに国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０６４５１２号参照）。

上記に加えて、本明細書の組成物はまた、等浸透圧の製剤を皮下投与に好適なものにするための等張化剤を含む。例示的な等張化剤としては、グリセリン、マンニトール、及びプロピレングリコール、又はそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、等張化剤は、マンニトールである。

等張化剤がグリセリンである場合、等張化剤は、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、特に２０ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。

等張化剤がマンニトールである場合、等張化剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、特に４６ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。

等張化剤がプロピレングリコールである場合、等張化剤は、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ、特に１５ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。

緩衝系
上記に加えて、組成物はまた、適切なｐＨを維持するために緩衝系を含むこともできる。例示的な緩衝系としては、リン酸（ＰＯ_４）緩衝液及びＴＲＩＳ緩衝液、特にＴＲＩＳが挙げられるが、これらに限定されない。

緩衝系がＴＲＩＳである場合、緩衝系は、約１０ｍＭ～約１００ｍＭ、特に１０ｍＭの濃度であり得る。

緩衝系にかかわらず、組成物のｐＨは、約７．０～約８．０、特に７．５であり得る。いくつかの例では、ｐＨは、約７．１～約７．９、約７．２～約７．８、約７．３～約７．７、約７．４～約７．６、又は約７．５である。他の例では、組成物のｐＨは、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、又は約８．０である。

防腐剤
本明細書の組成物は、最初に生成された際に無菌である。そのため、組成物は、組成物の他の成分と適合性であり、適用可能な規制抗菌防腐剤要件を満たすのに十分な強度で添加され得る防腐剤を任意選択で含むことができる。薬学的に許容される防腐剤は、当業者に公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（Ｔｒｏｙ，Ｅｄ．，２１^ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６参照）。

上記を考慮して、組成物はまた、無菌性を維持するため防腐剤を含み得る。例示的な防腐剤としては、ｍ－クレゾール及びフェノール、特にｍ－クレゾールが挙げられるが、これらに限定されない。

防腐剤がｍ－クレゾールである場合、防腐剤は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、特に３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。

防腐剤がフェノールである場合、防腐剤は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、特に５．０ｍｇ／ｍＬの濃度であり得る。

包装／配送デバイス
本明細書の組成物は、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（intramuscularly、ＩＭ）、又は皮下（ＳＱ）に投与することができる。組成物は、典型的には、プレフィルド使い捨てペン、再利用可能なペン、又は自動ペン型注射器を使用して投与される。代替として、組成物は、複数回使用バイアル又はポンプデバイスを使用して投与され得る。いくつかの例では、デバイスは、米国特許第８，７３４，３９４号に記載されるような自動注射装置である。

したがって、本明細書の組成物は、プレフィルドシリンジ／複数回使用バイアルで提供されてもよい。そのようなプレフィルドシリンジ／複数回使用バイアルは、患者１人当たり１用量当たり約０．５ｍＬ～約１ｍＬの組成物を投与するのに有用であり得る。組成物の用量は、臨床医、医師、又は他の訓練された医療専門家によって決定された投薬スケジュールを使用して投与され得る。

代替として、組成物は、カートリッジ用に調製することができ、したがって、防腐剤を含むことによって上記の組成物とは異なるであろう。

代替として、組成物は、組成物を含む製品の一部として調製することができ、製品は、複数回使用バイアル、再利用可能なペン型注射器、プレフィルド使い捨てペン、自動注射器、又はポンプであり得る。

上記を考慮すると、本明細書の組成物は、許容可能な貯蔵寿命安定性、使用中安定性、及び許容可能な注射部位経験に関連する。

方法
本明細書に記載されるインクレチン類似体は、様々な状態、障害、疾患、又は症状を治療するために使用され得る。例えば、本明細書に記載されるインクレチン類似体は、糖尿病（特にＴ２ＤＭ）、脂質異常症、メタボリックシンドローム、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、及び／又は肥満を治療するために使用され得る。特に、個体におけるＴ２ＤＭを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

加えて、個体における肥満を治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

加えて、個体における非治療的減量を誘発するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

加えて、個体におけるメタボリックシンドロームを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

加えて、個体におけるＮＡＳＨを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

加えて、個体におけるＮＡＦＬＤを治療するための方法が提供され、そのような方法は、そのような治療を必要とする個体に、有効量の、本明細書に記載されるインクレチン類似体、又はその薬学的に許容される塩を投与するステップを少なくとも含む。

これらの方法において、組成物の有効性は、例えば、血中グルコースの著しい減少を観察すること、インスリンの著しい増加を観察すること、ＨｂＡ１ｃの著しい減少を観察すること、及び／又は体重の著しい減少を観察することによって評価することができる。

以下の非限定的な実施例は、限定ではなく例示の目的で提供される。

製剤
実施例１：インクレチン類似体、等張化剤、及び任意選択の防腐剤を含有する組成物
組成物は、本質的に本明細書に記載されるように調製される。そのような組成物は、２、６、又は１０ｍｇ／ｍＬの配列番号１のインクレチン類似体と、表１に記載の追加成分と、を含む。固定濃度で各タイプを変化させることによって、防腐剤及び等張化剤の効果を研究する。防腐剤濃度は、ｍ－クレゾール及びフェノールをそれぞれ３．１５ｍｇ／ｍＬ及び５ｍｇ／ｍＬに固定する。等張化剤濃度は、等浸透圧の製剤が皮下投与に好適なものとなるように選択する。

溶液は、配列番号１のインクレチン類似体を適切なマトリックスに加え、溶液への溶解が達成されるまで混合し、次いで、適切なサイズのメスフラスコを使用して溶液を最終体積にすることによって調製する。各製剤溶液を０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターで無菌濾過し、５ｍＬのガラスバイアルに３ｍＬの充填体積で充填する。

サンプルを、後続の実施例に記載されるように更なる研究のために５℃、３０℃、又は４０℃で貯蔵する。

インビトロデータ（化学的及び物理的安定性）
実施例２：使用中安定性の研究
製剤の化学的及び物理的安定性を測定するために選択される安定性指示分析及び特徴付け技術には、サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、ＳＥＣ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（reversed phase high performance liquid chromatography、ＲＰ－ＨＰＬＣ）、及び外観が含まれる。

サンプリングスケジュールを表２に概説する。モデルを使用して、５℃の公称貯蔵温度で２４ヶ月、使用時に３０℃で更に１ヶ月の傾向を推定する。ゼロ次アレニウスモデリングをＳＥＣ（モノマー、凝集体）及びＲＰ－ＨＰＬＣ（純度）に使用する。

Ｘ＝サンプル時点

ＳＥＣ：２１４ｎｍでのＵＶ検出を伴う無勾配サイズ排除ＨＰＬＣ方法を使用し、インクレチン類似体モノマー及び総凝集体の相対量を決定するように設計される。モノマー及び凝集体は、総面積に対するピーク面積パーセントとして報告される。手順は、インクレチン類似体からの既知の不純物を分解するその能力によって測定されるように示す安定性である。安定性研究の結果を表３に示し、表３は、５℃、３０℃、及び４０℃の貯蔵条件での表１の選択された製剤のモノマー値パーセントを示す。安定性データは、８週間までの貯蔵について利用可能である。

温度を上昇させると、８週間後にモノマー純度が低下する。表４に示すように、５℃で８週間後にモノマー純度に本質的な変化はなく、モノマー純度は、温度の関数として減少する。８週の時点、３０℃での製剤１（ｍ－クレゾール／マンニトール）からのＳＥＣ結果は、８週の時点、４０℃でのＳＥＣ結果よりも約１％低い。これらのデータは、異常を示唆しており、したがって、製剤１についての８週間、３０℃の条件データは、モデル予測から除外される。全ての他の条件からのデータを安定性モデリングのために使用し、アレニウス動力学を仮定する。

研究された設計領域にわたる凝集体の製剤因子の傾向は、モノマー純度の傾向に密接に従う。表５は、温度の関数として増加する総凝集体を示す。表６は、５℃で２４ヶ月＋３０℃で１ヶ月にわたる総凝集体％の予測された変化及び予測値に対する入力変数の効果を示す。入力変数は、ＳＥＣによる凝集体に著しい影響を与えない。

ＲＰ－ＨＰＬＣ：ＲＰ－ＨＰＬＣ法は、非極性固定相及び水性中極性移動相を利用する。ＨＰＬＣは、２１４ｎｍでのＵＶ検出を備えている。

表７に示すように、ＲＰ－ＨＰＬＣメインピーク純度パーセントは、温度の関数として著しく減少する。しかしながら、製剤因子は、安定性プロファイルに著しい影響を与えない。更に、予測される純度値は、５℃で２年間貯蔵した後に９５％に近づき、公称条件での製剤空間にわたる強固性を示す。

５℃条件での２４ヶ月＋３０℃での１ヶ月後のＲＰ－ＨＰＬＣの予測値に対する製剤因子の効果を表８に見ることができ、これは、研究変数のいずれもがメインピーク純度に著しい影響を及ぼさなかったことを示す。

表９は、ＲＰ－ＨＰＬＣによる総不純物がより高い温度で増加し、より急速な分解速度をもたらすことを示す。

５℃で貯蔵した２４ヶ月＋３０℃で１ヶ月の時点でのＲＰ－ＨＰＬＣによる総不純物の予測値に対する製剤因子の効果を表１０に見ることができ、これは、研究変数の全体的な影響が著しくないことを示す。

物理的安定性及びＬＣＭＳ：物理的外観及び目に見える微粒子のデータを目視検査によって決定する。いずれの時点／貯蔵条件においても、目に見える微粒子は報告されていない。加えて、溶液は、４０℃条件で８週間の時点まで透明かつ無色のままである。製剤３、８、９、１５、１６、及び１７は、対照（ＷＦＩ）バイアルと比較してわずかに琥珀色に見える。製剤９及び１７は、ＬＣＭＳ分析を受け、製剤１９は、透明かつ無色であるため、比較として更に分析を受ける。色変化を経験した製剤のマトリックスを表１１に示す。

製剤９及び１９は、同じｐＨ、緩衝液、及び等張調節剤を共有するので、更に比較されるが、しかしながら、製剤９は、ｍ－クレゾールを含み、製剤１９は、防腐剤を含まない。４０℃で８週間貯蔵した後、製剤間で特定された総イオンクロマトグラム（Total Ion Chromatogram、ＴＩＣ）種に有意差はない。ＬＣＭＳ分析は、Ｓ８でのクリッピング、Ｓ３２での異性化及び／又はクリッピング、Ａｉｂ２でのクリッピング、並びにＹ１修飾を示す。分解経路は、２つの製剤間で類似しているように見えるが、製剤９は、これらの修飾の比較的高いレベルを示す。これらの製剤間の差異が製剤９中のｍ－クレゾールの存在であることを考慮すると、製剤９における色変化は、防腐剤の分解から生じ得る。

結論：全ての製剤が同様の安定性プロファイルを示す。統計分析は、研究変数から生じる化学的安定性に対する著しい影響を示さない。したがって、賦形剤、防腐剤、及びインクレチン類似体濃度の間に相互作用はない。実際、２ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬのインクレチン類似体濃度は、安定性に影響を与えない。これらのデータは、ｍ－クレゾール及びフェノールがインクレチン類似体の防腐剤であることを示す。製剤１９（防腐剤なし）の安定性プロファイルは、他の全てと同様である。主研究群及び非保存群の予測貯蔵寿命は、５℃で２４ヶ月＋３０℃で１ヶ月までの化学的安定性を示す。保存された製剤のいくつかについて認められた物理的安定性の差異は、インクレチン類似体の特定の分解経路とは対照的に、防腐剤の安定性に関連するようである。本明細書のデータは、２～１０ｍｇ／ｍＬのインクレチン類似体を有する非保存又は保存溶液製剤が、プロピレングリコール、グリセロール、又はマンニトールのいずれかを利用して実現可能であることを示す。更に、データは、貯蔵寿命に関して、等張化剤又は防腐剤選択の著しい利点を示さない。

実施例３：最適化されたプロトタイプ製剤についての使用中安定性研究
最適化：最適化研究は、公称条件、加速条件、及び応力条件における経時的な化学的安定性及び物理的安定性を決定する。ここで、緩衝液及びｐＨは、上記の実施例に基づいて最適化され、１０ｍＭのＴＲＩＳ緩衝液及び７．５のｐＨが選択される。上記の実施例のように、ここでの最適化は、３つの等張調節剤、プロピレングリコール、グリセリン、及びマンニトールを含む。バイアル提示は、最適化のために選択され、シリンジ提示は、プレフィルドシリンジとのインクレチン類似体の適合性を研究するために含まれる。表１２は、配列番号１のインクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩を用いたプロトタイプ製剤最適化パラメータを記載する。

注：全てのサンプルは、２５℃でｐＨ７．５の１０ｍＭのＴＲＩＳ緩衝液中で調製される。

プロトタイプ製剤の安定性試験：サンプルを最大６ヶ月間安定させ、表１３に従って試験する。主な分析アッセイは、ＲＰ－ＨＰＬＣ及びＳＥＣである。直交特性試験としてＡＥＸ法も使用する。

^＊ＭＦＩは、シリンジ提示のみについて試験する。

ＣＳＤ、ＩＳＴＡ３Ａ、及び光分解試験：溶液マトリックスを使用し、上記実施例に基づいて決定する。本明細書における例示的な薬物生成物単位製剤を表１４に要約する。

インクレチン類似体（配列番号１）四ナトリウム塩を、キャピラリー剪断デバイス及びＩＳＴＡ３Ａ試験法を使用して、剪断及び振動感受性について試験する。製造及び包装作業を支持するために、光安定性もこの段階で試験する。キャピラリー剪断デバイスは、製造ユニット操作（混合、ポンピング、充填など）によって引き起こされ得る剪断に類似する剪断をモデル化するように開発されている。ＩＳＴＡ３Ａ試験は、輸送中の振動応力を模倣するように設計された模擬輸送研究である。両方の方法は、それらがモデル化するように設計されたいずれかのタイプの物理的応力に対する最悪の場合と考えられる。両方の研究方法は、標準的な試験プロトコルに従う。光安定性試験を次のように実施する：サンプルを光安定性チャンバに装填し、ＩＣＨガイドラインに従って３つのレベル、ＩＣＨ推奨強度の０％、２０％、及び１００％の強度及びタイプ（ＵＶ及び可視の両方）のうちの１つに曝露する。表１５は、これらの研究のための設計及び試験計画を概説する。

これらの研究において、バイオアッセイ分析（データは示さず）は、時間０でプロトタイプＰ１及びＰ２に対して実施され、また、６ヶ月の時点のみでＰ２に対して実施される。バイオアッセイの結果は、試験したサンプル間で有意差を示さない。全体として、これらの研究は、強固な化学的及び物理的安定性プロファイルを示し、温度が分解において最も大きな役割を果たす。

ＲＰ－ＨＰＬＣの結果：５℃で本質的に変化はなく、メインピーク純度は、温度の関数として減少する。応力条件及び加速条件での製剤間の差異は、方法の変動性の範囲内である。

ＳＥＣの結果：５℃条件でのＳＥＣ結果は、この条件で有意差も識別可能な傾向も示さない。加速条件及び応力条件でのモノマー純度の結果は、２ヶ月及び３ヶ月の時点で減少する。同様に、総凝集体は、加速条件及び応力条件で劇的に増加する。加速条件及び応力条件における全ての条件についてのモノマー純度の結果は、互いに１％以内であり、これは、方法の変動性に近い。

ＡＥＸの結果：５℃条件でのＡＥＸの結果は、６ヶ月後に約２％の酸性変異体の増加を示すが、データにはいくらかの固有の変動がある。酸性変異体は、温度の関数として全体的に増加し、約７％で横ばいになるように見える。

目に見えない粒子状物質の結果：研究全体にわたる微粒子状物質データは、等張調節剤の関数として有意差を示さない。１０μｍ以上及び２５μｍ以下の微粒子状物質は、仕様限界を十分に下回る。表２２は、ＨＩＡＣによる２μｍ以上の微粒子状物質を示す。１ｍＬ当たりの累積カウントは、全ての条件にわたって低いが、バイアル提示中に存在しないシリコーン油の存在に起因して、シリンジ提示において自然に高くなる。シリンジ提示で収集されたＭＦＩによる微粒子状物質データ（データは示さず）は、非常に変動性であり、明確な傾向を示さなかった。しかしながら、カウントは全体として、シリンジ提示中に存在するシリコーン油の増加との相互作用を示さなかった。

外観、ｐＨ、及び目に見える微粒子の結果：全ての条件にわたる外観の結果（データは示さず）は、透明かつ無色である。研究全体を通して目に見える微粒子は報告されていない。ｐＨの結果を表２３に要約し、変動する結果を示し、明確な傾向は示さない。全てのｐＨ値は、目標の０．２ｐＨ単位以内である。

摺動降伏応力及び摺動平衡応力（Break-loose and glide-force、ＢＬＧＦ）の結果：プロトタイプ製剤Ｐ４をＢＬＧＦについて試験する。データは、２５℃条件のみで収集される。表２４は、ＢＬＧＦデータがそれらのそれぞれの機能性限界を十分に下回ったままであることを示しており、このシステムとの良好な適合性を示唆している。機能性限界は、Ｉｒｍａ自動注射器についての確立された摺動降伏応力及び摺動平衡応力の最大操作限界であり、それぞれ１３．６Ｎ及び９．５Ｎである。

化学的安定性の結果：ＲＰ－ＨＰＬＣ及びＳＥＣの結果は、１００％光応力サンプルとその対照サンプルとの間にわずかな差異を示す。純度の変化は、約０．８％である。他の条件は、本方法の変動性の範囲内である。表２６は、ＳＥＣ結果が、１００％光応力サンプルについてより高いレベルの凝集体を示すが、それ以外の凝集体についての結果は全体的に低いことを示す。ＡＥＸの結果は、応力条件に起因する著しい変化を示さない。

物理的安定性の結果：ＨＩＡＣによる微粒子状物質の結果を表２７及び２８に要約する。これらのデータは、対照サンプルと応力サンプルとの間に大きな差異を示さない。目に見える微粒子（データは示さず）が、輸送及び光安定性応力サンプルについて報告されているが、しかしながら、これらの結果は、偽陽性であることが示されている。

本明細書の研究は、公称条件、加速条件、及び応力条件で６ヶ月までのインクレチン類似体製剤の許容される物理的及び化学的安定性を示す。インクレチン類似体分解は、主に温度の関数である。３つのプロトタイプのいずれの間にも有意差はない（注：Ｐ３及びＰ４は、Ｐ４がバイアルの代わりにシリンジに充填されることを除いて、同一の組成物である）。シリンジ提示は、許容可能なＢＬＧＦ結果も示し、第３世代プラットフォームシリンジシステムとの適合性を示す。それを考慮すると、Ｐ２は、臨床研究のための主要な製剤である。

ＣＳＤ及び輸送研究による剪断及び振動応力への曝露後、Ｐ２は、応力サンプルと非応力（対照）サンプルとの間に有意差を示さない。更に、２０％ＩＣＨ条件での光安定性研究は、暗所対照と比較して大きな差異を示さない。しかしながら、１００％のＩＣＨ条件への曝露後に、暗所対照と比較して小さな差異が観察される。

これらのデータに基づいて、４．８％マンニトール及び１０ｍＭトリス緩衝液を含む、ｐＨ７．５の溶液組成物を選択する。インクレチン類似体濃度は、提案された用量範囲（例えば、約０．５ｍｇ～約１２ｍｇ）をカバーするために、２ｍＬの充填体積で６ｍｇ／ｍＬに固定される。臨床研究のための容器／クロージャーサイズは、対応する血清ストッパー及びシール（ＢＴ５９７３／ＶＳ５５５８／ＡＺ５４５０）を有する２ｍＬのＳｃｈｏｔｔバイアルである。Ｐ２の統計分析は、３０日間、３０℃の使用期間を含む２年間の貯蔵後の強固な安定性を予測する。

実施例４：様々なレベルのインクレチン類似体ペプチド濃度及びｐＨ下でのプロトタイプ製剤Ｐ２に対する安定性研究
この実験計画（Design of Experiment、ＤＯＥ）研究の目的は、様々なレベルのインクレチン類似体ペプチド濃度及びｐＨ条件下でのプロトタイプＰ２製剤の強固性を定義及び確認することである。

溶液マトリックス成分は以下の通りである：１０ｍＭのトリス、４．８％マンニトール。ペプチド濃度を、３つの濃度レベル、１、１８、及び３０ｍｇ／ｍＬの配列番号１（四ナトリウム塩）で試験する。ｐＨ効果を、３つのｐＨレベル、７、７．５、及び８で研究する。溶液を調製するために、ペプチドを既知量の緩衝液マトリックスに溶解し、可変経路長延長部を備えたＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計を使用して濃度を測定し、アッセイ結果及び標的製剤の密度に基づいて標的重量を計算し、必要量の緩衝液を添加して、最終標的重量を達成する。使用される一次包装材料は、非積層（第ＩＩ世代）ストッパーと結合された、商用外形（第ＩＩ世代）プレフィルドシリンジバレルである。シリンジを０．５ｍＬの公称容量まで充填する。製剤を以下の表２８に示す。

製剤の化学的及び物理的安定性を測定するために選択される安定性指示分析及び特徴付け技術としては、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、陰イオン交換クロマトグラフィー（Anion Exchange Chromatography、ＡＥＸ）、ＨＩＡＣ、マイクロフローイメージング技術（Microflow Imaging technique、ＭＦＩ）、及び外観が挙げられる。サンプルを２つの温度条件（５℃及び３０℃）で貯蔵する。サンプリングスケジュールを表２９に概説し、データを表３０～３２に示す。貯蔵寿命の終わりにおける分解レベルを予測するために、統計分析に基づいて、５℃で２３ヶ月＋３０℃で３０日までの予測プロットを作成する。

物理的安定性
物理的外観データ及び目に見える微粒子は、全ての製剤、条件、及び時点にわたって一貫している。目に見える微粒子は報告されていない。溶液は透明かつ無色のままである。データを表３０に示す。

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
５℃及び３０℃貯蔵条件からの、全ての研究製剤のＳＥＣモノマー値パーセント及び総凝集体値パーセントを表３１に示す。安定性データは、６ヶ月までの貯蔵について利用可能である。データは、モノマーの損失が主に断片化によることを示している。５℃及び３０℃貯蔵条件からの、全ての研究製剤のＳＥＣ総断片値を表３１に示す。

陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）
５℃及び３０℃貯蔵条件からの、全ての研究製剤のＡＥＸメインピーク値、ＴＡＶ値、及びＴＢＶ値を表３１に示す。

ＲＰ－ＨＰＬＣ
ＲＰ－ＨＰＬＣの結果は、ｐＨが安定性に対して最大の影響を有することを示し、高いｐＨは、より高いレベルの分解をもたらす。５℃及び３０℃貯蔵条件からの、全ての研究製剤のＲＰ－ＨＰＬＣメインピーク値及び総不純物を表３１に示す。

微粒子
全ての製剤についての各時点及び条件でＨＩＡＣ光遮蔽及びＭＦＩによって測定された微粒子データを表３２に示し、方法の変動性に関連する差異を示す。製剤因子に関して特定の傾向は観察されない。ＭＦＩを使用して、各製剤中の微粒子状物質を更に特徴付けて、粒子の形態を決定する。表３２は、０．８５未満のアスペクト比（aspect ratio、ＡＲ）を有する５μｍ以上の微粒子状物質データと比較した、５μｍ以上の微粒子状物質データについての全ての製剤の粒子平均値間の比較を示す。０．８５未満のＡＲの微粒子は、非球状であると考えられ、タンパク質関連凝集体である可能性がより高い。結果は、５μｍ以上での生の微粒子データと、ＡＲを考慮した５μｍ以上の微粒子データとの間に有意差を示す。これらのデータは、溶液中の微粒子の多くが球状であり、プレフィルドシリンジシステムにおける一般的な現象であるシリコーン油滴に起因する可能性が高いことを示唆している。円形粒子画分の結果は、全ての製剤について円形粒子画分が９０％超であったことを考慮すると、この結論を支持する。

結論：研究した全ての製剤からのデータは、研究の過程にわたって同様の安定性プロファイルを示した。この研究は、製剤が７～８の範囲のｐＨ及び１～３０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で安定であることを示す。

配列
以下のアミノ酸配列が本開示において言及されており、参照のために以下に示す。

配列番号１－インクレチン類似体／ＧＧＧトリ受容体アゴニスト
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＫＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ_２）_１８－ＣＯ_２Ｈ）ＡＱ－Ａｉｂ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ_２

配列番号２－ヒトＧＩＰ
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ

配列番号３－ヒトＧＬＰ－１_７－３６アミド
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ－ＮＨ_２

配列番号４－ヒトＧＣＧ
ＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴ

Claims

インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩と、
グリセリン、マンニトール、及びプロピレングリコールからなる群から選択される少なくとも１つの等張化剤と、
ｍ－クレゾール及びフェノールからなる群から選択される任意選択の防腐剤と、を含む、薬学的組成物。
前記インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩が、約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記等張化剤が、グリセリンであり、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
前記グリセリンが、２０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項３に記載の薬学的組成物。
前記等張化剤が、マンニトールであり、約１０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬである濃度である、請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
前記マンニトールが、４８ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項５に記載の薬学的組成物。
前記等張化剤が、プロピレングリコールであり、約５ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬである濃度である、請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
前記プロピレングリコールが、１５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項７に記載の薬学的組成物。
前記任意選択の防腐剤が、ｍ－クレゾールであり、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬである濃度である、請求項１～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記ｍ－クレゾールが、３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項９に記載の薬学的組成物。
前記任意選択の防腐剤が、フェノールであり、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬである濃度である、請求項１～８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記フェノールが、５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
前記インクレチン類似体が、配列番号１を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記インクレチン類似体が、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、及び３０ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される濃度である、請求項１３に記載の薬学的組成物。
リン酸（ＰＯ_４）緩衝液及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）緩衝液からなる群から選択される緩衝液を更に含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記緩衝液が、前記ＴＲＩＳ緩衝液であり、１０ｍＭの濃度である、請求項１５に記載の薬学的組成物。
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を０．３ｍｇ／ｍＬの濃度で更に含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
配列番号１を含むインクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩であって、前記インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩が、約１ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの濃度である、インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩と、
約１０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの濃度のマンニトールと、
約１０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）緩衝液と、を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、約６．５～約７．５のｐＨを有する、請求項１８に記載の薬学的組成物。
マンニトールが、４８ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１８又は１９に記載の薬学的組成物。
前記インクレチン類似体又はその薬学的に許容される塩が、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、９ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２４ｍｇ／ｍＬ、及び３０ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される濃度である、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
ｍ－クレゾール及びフェノールからなる群から選択される防腐剤を更に含み、前記防腐剤が、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を更に含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記組成物の用量が、約０．５ｍＬである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、自動注射装置を使用した投与に好適である、請求項２４に記載の薬学的組成物。
前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、及び酢酸塩から選択される、請求項１～２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的に許容される塩が、四ナトリウム塩である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
糖尿病を治療する方法であって、
糖尿病の治療を必要とする個体に、有効用量の請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与するステップを含む、方法。
前記有効用量が、自動注射装置を使用して投与される、請求項２８に記載の方法。
前記有効用量が、１週間に１回投与される、請求項２８又は２９に記載の方法。
肥満を治療する方法であって、
肥満の治療を必要とする個体に、有効用量の請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物を投与するステップを含む、方法。
前記有効用量が、自動注射装置を使用して投与される、請求項３１に記載の方法。
前記有効用量が、１週間に１回投与される、請求項３１又は３２に記載の方法。
糖尿病、脂質異常症、脂肪性肝疾患、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝炎、及び肥満からなる群から選択される疾患を治療する際に使用するための、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
ＩＩ型糖尿病を治療する際に使用するための、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
肥満を治療する際に使用するための、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
糖尿病、脂質異常症、脂肪性肝疾患、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝炎、及び肥満からなる群から選択される疾患を治療するための薬剤の製造における、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用。
ＩＩ型糖尿病を治療するための薬剤の製造における、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用。
肥満を治療するための薬剤の製造における、請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用。
請求項１～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物を含む製品であって、前記製品が、複数回使用バイアル、再利用可能なペン型注射器、プレフィルド使い捨てペン、自動注射器、及びポンプから選択される、製品。