JP2024513147A - カルシウムハイドロキシアパタイト粒子およびその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ある一定の温度範囲で焼結され、この範囲を超える温度では処理されないカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に関する。さらに、本発明は、そのような粒子を含む注射用組成物およびその使用に関する。驚いたことに、発明の粒子は、生体刺激に関しては、当技術分野で知られているカルシウムハイドロキシアパタイト粒子より優れていることが見出された。【選択図】図１

Description

本発明は、ある一定の温度範囲で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に関し、それらはこの範囲を超える温度では処理されない。好ましくは、本発明は、９１０℃～１０３０℃の範囲の温度で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に関する。好ましくは、粒子は１０３０℃を超える温度で処理されない。さらに、本発明は、そのような粒子を含む注射用組成物およびその使用に関する。驚いたことに、発明の粒子は生体刺激に関しては当技術分野で知られているカルシウムハイドロキシアパタイト粒子より優れていることが見出された。

近年、顔及び身体の再形成、特に望ましくないしわの低減に対する関心がますます高まっている。例えば、しわの充填、乳房再建または豊胸、皮膚の若返り、他の種類の軟組織増大が頻繁に実施されている。この状況での外科的介入の必要性を回避するために、多くの異なる皮膚充填剤を皮下または皮膚のより深い層内に注射することができる。

これらの目的のいくつかのために、充填剤材料が使用されてきた。しかしながら、多くの充填剤成分の主な欠点は、そのような材料の生分解が迅速で、充填剤材料が長期的な解決策に好適でないこと、あるいは、生分解がなく、むしろ、投与された被験体の身体の防御反応があることのどちらかである。多くの充填剤材料は生体異物であり、それらは組織様ではない。

充填された組織領域の少なくとも一部は、投与された被験体自体の組織および／または細胞外マトリクスにより最終的に充填されることが望ましい。これは注射用カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ、Ｃａ_５（ＰＯ_４）_３（ＯＨ））粒子などの製品により達成することができる。そのような充填剤は、例えば、ＵＳ６，５３７，５７４号およびＷＯ２００１／０１２２４７号において記載される。カルシウムハイドロキシアパタイト粒子を含む商品はＲａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）（Ｍｅｒｚ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＧｍｂＨ， Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ， ドイツ）である。Ｒａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）は優れた生体刺激特性を有する皮膚充填剤である。充填剤はカルシウムハイドロキシアパタイト粒子およびカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＮａＣＭＣ）ゲル担体を含む。Ｒａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）の注射は、線維芽細胞の刺激による新コラーゲン生成（ｎｅｏｃｏｌｌａｇｅｎｅｓｉｓ）につながる可能性がある。

それらのカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の線維芽細胞を刺激する可能性は、生成されるコラーゲンの量に不可欠である。投与された被験体においては、コラーゲン生成が刺激される。これにより、分解されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子がコラーゲンに置き換わり、しわの長期充填効果につながる可能性がある。ＷＯ２００８／０８８３８１号は、１１５０℃で焼結された、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子を含む濃厚組成物の使用を教示する。ＵＳ６，５３７，５７４号およびＷＯ２００１／０１２２４７号は、注射用カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、粒子を成形し、これらを約１０５０～１２００℃で少なくとも１時間の焼結ステップに供することにより調製すべきであることを記載する。任意で、また、約８００～１０００℃で約１時間の予備焼結ステップが、凝集を最小に抑えるために追加で適用可能である。１００ｎｍ未満の長さのカルシウムハイドロキシアパタイトナノ針状結晶の９００℃での処理がＥｓｌａｍｉ ｅｔ ａｌ．、（Ｉｒａｎｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， ４（２）：１２７－１３４）において記載される。

Ｎｉｅｈ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｒｏｕｓ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ ｃｏａｔｉｎｇｓ”， Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ： ２００１ Ｍｉｎｅｒａｌｓ， Ｍｅｔａｌｓ ＆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ＆ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｏｒｌｅａｎｓ， ＬＡ （ＵＳ）， ２月１１－１５日， ２００１）は、異なる温度で焼結されるカルシウムハイドロキシアパタイトコーティングおよび大型粒子を調製することを教示し、それらは、好ましくは１００～２００μｍの細孔サイズを有し、骨モデルおよびインプラントのためのコーティングとして使用可能である。

Ｒａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）のいくつかのプラスの効果がｖａｎ Ｌｏｇｈｅｍ ｅｔ ａｌ． （Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２０１５， ８（１）：３８－４９）において要約されている。しわは、被験体にＲａｄｉｅｓｓｅ（登録商標）（カルシウムハイドロキシアパタイト粒子）を真皮下に投与することにより効果的に処置することができる。顔面増大がそのような製品で可能であることが示された（Ｊａｃｏｖｅｌｌａ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｇｉｎｇ， ２００８， ３：１６１－１７４を参照されたい）。コラーゲンは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子を投与すると著しい望ましくない副作用なしで線維芽細胞により組織領域内で生成される（Ｃｏｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ２００８， ３４：Ｓ５３－Ｓ５５； Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ２００８， ３４：Ｓ６４－Ｓ６７を参照されたい）。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の投与は、カルシウムハイドロキシアパタイトが分解された後であっても、長く続く、容量増加効果を有することが見出された。コラーゲン生成は刺激される。注射後数ヶ月で、Ｉ型およびＩＩＩ型コラーゲンが著しく増加されたことが見出された（Ｙｕｔｓｋｏｖｓｋａｙａ ａｎｄ Ｋｏｇａｎ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２０１７， １６：６８－７４）。

薬学的に／美容的に許容され、被験体自体の組織および／または細胞外マトリクスによる充填につながり、かつ、長期活性につながる皮膚充填剤は、興味深い。カルシウムハイドロキシアパタイト粒子をさらに改善することが特に望ましい。例えば、皮膚充填剤のコラーゲン刺激効果などの生理活性をさらに増強させることが望ましい。

驚いたことに、焼結されたが、１０３０℃を超える温度に供されていないカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、特に高いコラーゲン刺激効果を有することが見出されている。

したがって、本発明の第１の態様は、９１０～１０３０℃の範囲の温度で焼結され、１０３０℃を超える温度に供されていないカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に関する。

したがって、材料特性をさらに変えることがある１０３０℃を超える温度までの加熱はない可能性があり、好ましくは、示された焼結温度を超えて加熱されない。本発明はまた、９１０～１０３０℃の範囲の温度で焼結され、１０３０℃を超える温度に供されていないカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に関し、重量平均粒径はふるい分けまたは光散乱により決定すると１～５００μｍである。

本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は明確に定義されたより高い表面積を有することができ（これにより、線維芽細胞のコラーゲン合成の増加が可能となり得る）、よって、特に高い生体刺激を有する。

本明細書では、「カルシウムハイドロキシアパタイト」、「カルシウムハイドロキシルアパタイト」および「塩基性オルトリン酸カルシウム、「カルシウムヒドロキシホスフェート」、「第三リン酸カルシウム」、「ハイドロキシアパタイト」、「ハイドロキシルアパタイト」、および「三塩基性リン酸カルシウム」ならびに略語「ＣａＨＡ」および「ＨＡｐ」という用語は当技術分野で一般的に理解される最も広い意味で同じ意味で理解されるべきである。カルシウムハイドロキシアパタイトは、それぞれ、式Ｃａ_５（ＰＯ_４）_３（ＯＨ）およびＣａ_５［ＯＨ｜（ＰＯ_４）_３］により表すことができる。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は任意の形状を有することができる。これらは、球状、楕円体、結晶、ランダム（不規則ともいう）、またはそれらの２つ以上の混合物であってもよい。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は（本質的に）球状または（本質的に）楕円体である。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は（本質的に）球状である。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は０．７を超えるＤ－比を有する球状である。よって、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は好ましくは、０．７を超える、より好ましくは０．８を超える、特に０．９を超えるＤ－比を有する。この状況では、１．０のＤ－比は完全な真円度を示す。

本明細書では、「球状」という用語は、それぞれ、実質的に球形またはボール形状であると最も広い意味で理解することができる。これは必ずしも完全球形を意味しないが、粒子を鋭いまたは角のある縁を有しないものと特徴付ける。好ましくは０．７を超える、より好ましくは０．８を超える、特に０．９を超えるＤ－比である。よって、３つ全ての空間方向における延長部は典型的には実質的に同じである。

Ｄ－比は任意の手段により決定することができる。本明細書では、それは典型的には、顕微鏡イメージング（顕微鏡法ともいう）により決定される。このために、個々の粒子の顕微鏡画像が撮られる。ソフトウェアが測定を実施する。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は多孔性表面を有する。したがって、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面は好ましくは平滑ではなく、タイル状の外観を有さない。好ましくは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面は多くの空洞を有する。好ましくは、また、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の内側は多くの細孔／空洞を有する。よって、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は好ましくは多孔性である。

細孔は任意の寸法を有し得る。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面は、Ｈｇ－ポロシメトリーにより決定すると、表面に１０～５００ｎｍの平均直径の細孔を有する。あるいは、平均直径は顕微鏡法により決定され得る。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面はＨｇ－ポロシメトリーにより決定すると、表面に１０～１００ｎｍ直径の直径の細孔を有する。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面はＨｇ－ポロシメトリーにより決定すると、表面に１０～４００ｎｍの平均直径の細孔を有する。好ましくは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面はＨｇ－ポロシメトリーにより決定すると、表面に２０～３００ｎｍ、または３０～２５０ｎｍ、または５０～２２０ｎｍの平均直径の細孔を有する。

好ましくは、各カルシウムハイドロキシアパタイト粒子はその表面に少なくとも１０、または少なくとも１００のそのような細孔を有する。そのような細孔の存在は他の寸法を有する１つ以上の細孔の任意的な存在を排除しないことが理解されるであろう。細孔の決定に使用可能な顕微鏡法は好ましくは走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）である。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は任意の粒子サイズを有し得る。好ましくは、本発明との関連で、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は注射されるのに好適である。言い換えれば、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は好ましくは注射用カルシウムハイドロキシアパタイト粒子である。よって、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は典型的には、マイクロメートル範囲の平均粒径を有し（ミクロスフェアであるともいう）、よって、１～１０００μｍの範囲の平均粒径を有する。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、光散乱により決定すると、１～５００μｍ、または５～５００μｍ、１～１５０μｍ、または２～１００μｍ、または５～８０μｍ、または１０～６０μｍ、または１５～５０μｍ、または２０～４５μｍ、または２５～４５μｍの平均粒径を有する。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、ふるい分けまたは光散乱により決定すると、１～５００μｍ、または１～５００μｍ、１～１５０μｍ、または２～１００μｍ、または５～８０μｍ、または１０～６０μｍ、または１５～５０μｍ、または２０～４５μｍ、または２５～４５μｍの重量平均粒径を有する。

好ましくは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の総質量の少なくとも８０重量％が上記サイズ範囲内にあるカルシウムハイドロキシアパタイト粒子により表され、および／または数の上ではカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の少なくとも８０％が上記サイズ範囲内にある。

本明細書では、粒子サイズは任意の手段（例えば、光散乱（光回折）、ふるい分け、顕微鏡法、など）により決定することができる。本明細書で示される数値は、光散乱（ＰＳＡ）により決定される（体積）平均サイズ範囲を示す。

好ましい実施形態では、粒子サイズは光散乱により決定される。

他の実施形態では、粒子サイズは、ふるい分けにより、すなわち、試験用ふるいにより、および、試料を機械的にふるい分けし、その画分を秤量し、何重量％が使用した試験用ふるいより上、または下にあるかを決定することで決定される。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は９１０～１０３０℃の範囲の任意の温度で焼結されていてもよく、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は好ましくは焼結温度を超える温度に供されていない。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は９１０～９９５℃、または９２０～９９５℃、または９３０～９９０℃、または９４０～９８５℃、または９５０～９８０℃、または９６０～９７５℃の範囲の温度で焼結されており、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は焼結温度の温度を超える温度に供されていない。

好ましい実施形態では、粒子は９９５℃を超える、または９８５℃を超える、または９８０℃を超える、または９７５℃を超える温度に供されない。好ましい実施形態では、粒子は、焼結の最高温度を超える温度に供されない。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子が供される焼結時間は焼結温度および／または平均粒径に適合され得る。好ましくは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は数時間焼結されている。好ましくは、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は均一な固体粒子が得られるまで焼結されている。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１～２４時間焼結されている。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は２～１２時間、または３～１６時間焼結されている。好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１時間～２時間、１時間～３時間、２～４時間、３～５時間、４～６時間、５～７時間、６～８時間、７～９時間、８～１０時間、９～１１時間、１０～１２時間、１１～１３時間、１２～１４時間、１３～１５時間、１４～１６時間、または１２～２４時間焼結されている。

好ましい実施形態では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１～２４時間９６０～９７５℃の温度で焼結されている。好ましい実施形態では、光散乱により決定すると、２５～４５μｍの範囲の平均粒径を有するカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１～２４時間９６０～９７５℃の温度で焼結されている。

好ましい実施形態では、光散乱により決定すると、２５～４５μｍの範囲の平均粒径を有し、かつ、顕微鏡法により決定するとその表面上に１０～５００ｎｍの直径の細孔を有するカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１～２４時間、９６０～９７５℃の温度で焼結されている。

任意で、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、ＣａＨＡ粒子結晶構造内にカルシウムに加えて１つ以上の他の金属イオン、例えば、フッ素、ナトリウム、リチウム、カリウム、ケイ素、マグネシウム、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される金属イオンを含み得る。これは任意で、新コラーゲン生成へのプラス効果という結果になり得る。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は当技術分野で知られている任意の手段により調製され得る。好適な手順は、例えば、ＵＳ６，５３７，５７４号およびＷＯ２００１／０１２２４７号において記載される。好ましい実施形態では、小さなサイズのカルシウムハイドロキシアパタイト粒／結晶のスラリーが噴霧乾燥され得る。

そのようなスラリーは噴霧乾燥によりカルシウムハイドロキシアパタイトを調製する目的で使用可能な、任意の含量のカルシウムハイドロキシアパタイトを有し得る。１つの実施形態では、スラリー中のカルシウムハイドロキシアパタイトの含量は５～８０重量％、１０～６０重量％、または２０～４０重量％に設定される。

好ましい実施形態では、このために、スラリーはノズルを通してポンピングすることができ、球状粒子が形成され、これは、加熱空気のカラムを通して案内することができ水分が除去される。粒子のサイズはノズルの選択によって設定することができる。粒子サイズは異なる画分のふるい分けによりさらに改善することができる。

得られた非焼結粒子は所望の温度、本発明によれば、本明細書で規定される９１０～１０３０℃の範囲の温度で、数時間、焼結により、前のサブミクロン粒／結晶が焼かれて均一な固体粒子となるまで焼結され得る。よって、粒／結晶は典型的には融合し、よって、硬度が増強する。好ましい実施形態では、焼結時間は１時間～２４時間の範囲である。

好ましい実施形態では、焼結時間は１時間～２時間、１時間～３時間、２～４時間、３～５時間、４～６時間、５～７時間、６～８時間、７～９時間、８～１０時間、９～１１時間、１０～１２時間、１１～１３時間、１２～１４時間、１３～１５時間、１４～１６時間、または１２～２４時間の範囲にある。粒子のサイズは、異なる画分のふるい分けによりさらに改善され得る。

本明細書では、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子を調製するのに使用可能なカルシウムハイドロキシアパタイト粒子のサブミクロン粒／結晶のスラリーは任意の手段により調製され得る。例えば、それは、任意でサブミクロン粒度の市販カルシウムハイドロキシアパタイト粉末を水または水性緩衝液または水性および／または有機溶液中で浄化することにより調製され得る。あるいは、または加えて、好ましくはサブミクロンサイズの粒／結晶がまた、調製され得る。

これは、可溶性カルシウム塩（例えば、硝酸カルシウム、塩化カルシウム、など）の１つ以上の可溶性溶液、および、可溶性リン酸水素またはリン酸二水素（例えば、リン酸水素二アンモニウム）の１つ以上の可溶性溶液を混合することにより達成され得る。混合は、小さなサイズの粒／結晶を得るために、激しい混合下で実施され得る。任意で、ｐＨは塩基性ｐＨに調整され得る。次いで、スラリーが直接得られ得る。任意で、スラリーはまた、数時間エージングさせてもよい。任意で、結晶は１つ以上の遠心分離／洗浄ステップにより洗浄してもよい。小さなサイズのカルシウムハイドロキシアパタイト結晶を得るための詳細な手順はＥｓｌａｍｉ ｅｔ ａｌ．， （Ｉｒａｎｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， ４（２）：１２７－１３４）に記載される。任意で、スラリーはさらに、１つ以上の湿潤剤および／またはバインダ、例えば、ポリソルベート、シュウ酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、デキストリンおよび／またはカーボンワックスを含むことができ、添加され得る。

任意で、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は内側に、例えば、新コラーゲン生成を刺激するポリペプチドおよび／または小分子量化合物などの、新コラーゲン生成を刺激する１つ以上の作用物質を含みことができ、および／または、これらでコートすることができる。

以上で示されるように、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、注射により、被験体に、特に被験体の皮膚および／または軟組織に投与可能であり得る。

したがって、本発明のさらなる態様は、下記を含む（またはこれから構成される）注射用組成物に関する：
（Ａ）成分Ａとしての、本発明の１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子；および
（Ｂ）成分Ｂとしての、１つ以上の薬学的に許容される担体；
（Ｃ）任意で、成分Ｃとしての、１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
（Ｄ）任意で、成分Ｄとしての、成分Ａ、ＢおよびＣ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物。

本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子との関連で説明された定義および好ましい実施形態は、変更すべきところは変更して、注射用組成物に適用されることが理解されるであろう。

本明細書では、「成分」および「材料成分」という用語は、本発明の組成物の一部として最も広い意味で同じ意味で理解され得る。

本明細書では、「薬学的に許容される」という用語は、医薬および／または化粧品の文脈において合理的に使用可能ものとして、最も広い意味で理解され得る。薬学的に許容される成分または組成物はまた、典型的には、美容的に許容されるとして本質的に使用可能であることが理解されるであろう。薬学的に許容される成分または組成物は低い毒性を有し、ヒトまたは動物（典型的には哺乳類）身体に投与することができ、このヒトまたは動物への深刻なダメージはない。

好ましくは、本発明の注射用組成物は、薬学的および／または美容的に許容される組成物である。本発明の組成物は任意のガレヌス形態を有することができる。本発明の１つの実施形態では、本発明の注射用組成物は液体または粘性である。別の実施形態では、本発明の注射用組成物はペースト状である。そのような組成物は皮膚充填剤と考えることができる。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、皮膚に、または他の軟組織に注射可能である。好ましくは、注射用組成物は、皮膚または他の軟組織改善のために使用可能である。好ましい実施形態では、注射用組成物は（皮下）皮膚性に／（皮下）経皮的に注射可能である。好ましくは、注射用組成物は哺乳類、特にヒトへの注射に好適である。好ましくは、本発明の組成物は好ましくは（本質的に）無菌であり、好ましくは非発熱性である。

本明細書では、「液体」、「粘性」および「ペースト状」という用語は当技術分野における一般的な意味解釈にしたがい理解することができる。好ましくは、本発明との関連で使用される「液体」は１０ｍＰａｓ（ミリパスカル秒、標準条件で、２０℃、１０１３．２５ｈＰａで）未満の粘度を有することを意味する。

好ましくは、発明との関連で使用される「粘性」は１０～１０００ｍＰａｓ（標準条件で、２０℃、１０１３．２５ｈＰａで）の粘度を有することを意味する。「粘性」、「ゲル」および「ゲル状」という用語は同じ意味で理解されるべきである。好ましくは、本発明との関連で使用される「ペースト状」は、１０００～１，０００，０００ｍＰａｓ（標準条件で、２０℃、１０１３．２５ｈＰａで）の粘度を有することを意味する。これらの粘度値は任意の手段により、例えば、回転／振動粘度計により、例えば、ＤＩＮ５３０１９－４：２０１６－１０に従い）決定することができる。本発明によれば、注射用組成物が液体、粘性またはペースト状注射用組成物である場合、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子（成分Ａ）は好ましくは、注射用組成物中に、すなわち、注射用組成物の液体、粘性またはペースト状成分中に分散される。したがって、液体、粘性またはペースト状注射用組成物は典型的には分散物である。

本発明の注射用組成物は、成分Ｂとしての、１つ以上の薬学的に許容される担体を含み、少なくとも１つの担体は好ましくはペースト状、粘性または液体担体である。

本発明による薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は薬学的に許容される任意の担体、よって、ヒトまたは動物（典型的には哺乳類）身体に対して（本質的に）無毒性である任意の担体とすることができる。

１つ以上のペースト状、粘性または液体担体はペースト状、粘性または液体である任意の薬学的に許容される担体とすることができる。例えば、１つ以上のペースト状、粘性または液体担体は任意で、１つ以上の薬学的に許容される溶媒、例えば、例としてグリセロール、水、水性緩衝液（例えば、生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、エタノール、植物油、パラフィン油、またはそれらの組み合わせを含むことができる。本発明の１つの実施形態では、１つ以上のペースト状、粘性または液体担体は、非発熱性等張緩衝液、例えば、生理食塩水または緩衝生理食塩水を含むことができ、またはこれから構成され得る。

好ましい実施形態では、全ての薬学的に許容される担体（成分Ｂ）の合計は、成分Ｂを参照して、少なくとも１０重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、または少なくとも８０重量％、または少なくとも９０重量％の、１つ以上のペースト状、粘性または液体担体を含む。

本明細書では、重量含量（例えば、重量％）は、典型的には、成分をそのようなものとして示す。固体物質の場合、それは典型的には、個々の成分の乾燥物質（重量％、乾燥物質を参照して）を示す。

本発明の１つの実施形態では、薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は、成分Ｂを参照して、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、または少なくとも８０重量％、または少なくとも９０重量％のグリセロールを含む。１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（成分Ａ）はこの担体中に分散され得る。

本明細書では、成分の重量パーセンテージ（重量％）および重量比は、典型的には成分の乾燥物質を参照する。「乾燥物質」、「乾燥重量」および「固体含量（ｃｏｎｔｅｎｄ）」という用語は、当技術分野において一般に理解される最も広い意味で同じ意味で理解され得る。当業者であれば、乾燥物質は溶媒／希釈剤および他の成分なしの個々の成分の重量を示すことができることに気づくであろう。乾燥物質は、個々の成分が溶解され、懸濁され、または、他の成分と共に（ヒドロ）ゲルを形成している場合にも考慮することができる。この場合、理論的乾燥物質は計算することができ、すなわち、溶媒／希釈剤の重量およびさらなる成分が総重量から減算され得る。

好ましい実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は、１つ以上の多糖誘導体またはその薬学的に許容される塩、１つ以上の多糖またはその薬学的に許容される塩、グリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される。

好ましい実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は、１つ以上の液体、粘性またはペースト状成分、例えば、例としてグリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせを含む。これにより、注射用組成物が注射可能にされ得る。

１つ以上の多糖またはその誘導体または薬学的に許容される塩は好ましくは増粘性を有し得る。１つ以上の多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩は任意の分子量を有し得る。好ましくは、それらの分子量は１ｋＤａ～１０ＭＤａ、より好ましくは５ｋＤａ～５ＭＤａの範囲にある。また、多糖またはその誘導体もしくは塩の混合物が使用され得る。そのような混合物は、同じか、または異なるタイプの多糖またはその誘導体もしくは塩を有してもよく、異なる分子サイズを有してもよい。多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩は、架橋されていなくてもよく、または、架橋されていてもよい。

本明細書では、平均分子量は、このために好適な任意のルーチン手段、例えば、例としてゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、増粘効果の測定（粘度測定）、質量分析、などにより決定され得る。多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩の可溶性画分の平均分子質量は好ましくはゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により決定される。多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩の不溶性、ゲル形成画分の平均分子質量は好ましくは、増粘効果の測定（粘度測定）により、ルーチン実験により（例えば、２５℃で、Ｕｂｂｅｌｏｈｅ粘度計上でのＥＰモノグラフ法による）決定される。本明細書では、１０００ｋＤａ（キロダルトン）は１ＭＤａ（メガダルトン）である。

多糖またはその誘導体もしくは薬学的に許容される塩は任意で、１つ以上のペースト状、粘性または液体の薬学的に許容される担体との組み合わせでゲルを形成することができる。多糖またはその誘導体もしくは薬学的に許容される塩は任意で、１つ以上のペースト状、粘性または液体担体との組み合わせで、ヒドロゲルを形成することができる。多糖またはその誘導体もしくは薬学的に許容される塩は任意で、一部、または、完全に１つ以上の粘性または液体担体に溶解させることができる。１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（成分Ａ）は１つ以上のペースト状、粘性または液体担体に分散させることができる。

好ましい実施形態では、成分Ｂは、下記を含む、か、またはこれから構成される：
（Ｂ１）１つ以上の液体、粘性またはペースト状の薬学的に許容される担体、特に、グリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される液体、粘性またはペースト状の薬学的に許容される担体；ならびに
（Ｂ２）１つ以上の固体の薬学的に許容される担体、好ましくは１つ以上の多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩、特に、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース）、セルロース、およびそれらの２つ以上の混合物からなる群より選択される多糖または誘導体。

成分Ｂは成分Ｂ１およびＢ２を任意の含量比で含んでもよい。好ましい実施形態では、成分Ｂは、下記を含む、か、またはこれから構成される：
成分Ｂを参照して、０．１～９９重量％、または５０～９９．９重量％、または７５～９９重量％のＢ１；ならびに
成分Ｂを参照して、０．１～９９重量％、または０．１～５０重量％、または１～２５重量％のＢ２。

好ましい実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は（１つ以上の型の）カルボキシメチルセルロースまたはその薬学的に許容される塩、グリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される。

好ましい実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される担体（成分Ｂ）は、（１つ以上の型の）カルボキシメチルセルロースまたはその薬学的に許容される塩およびグリセロールを含む（またはこれから構成される）。

上述のように、本発明の組成物は任意で、成分Ｃとして１つ以上の局所麻酔薬を含むことができる。よって、本発明の１つの実施形態では、注射用組成物は、１つ以上の局所麻酔薬（成分Ｃ）を含む。

局所麻酔薬（成分Ｃ）は任意の局所麻酔薬であってもよい。好ましくは、局所麻酔薬（成分Ｃ）は、存在する場合、下記からなる群より選択される：
リドカイン、アンブカイン、アモラノン、アミロカイン、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタムベン、ブタニリカイン、ブテタミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン、ジペロドン、ジシクロニン、エクゴニジン、エクゴニン、塩化エチル、エチドカイン、β－ユーカイン、ユプロシン、フェナルコミン、ホルモカイン、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ－アミノ安息香酸イソブチル、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ネパイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、シュードコカイン、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびそれらの２つ以上の組み合わせおよびそれらの塩。

他の局所麻酔薬およびその組合わせおよび塩もまた、成分Ｃとして使用され得る。好ましい実施形態では、局所麻酔薬（成分Ｃ）はリドカインであり、またはこれを含む。前述の麻酔薬の２つ以上の組み合わせ、例えば、リドカインおよび他のプリロカインのような「カイン」－麻酔薬の組み合わせもまた、本明細書で使用され得る。局所麻酔薬は被験体への注射をより快適なものとすることができる。

上述のように、本発明の組成物は任意で、成分Ｄとして成分Ａ、ＢおよびＣ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物を含むことができる。よって、本発明の１つの実施形態では、注射用組成物は、成分Ａ、ＢおよびＣ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）を含む。

そのような薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）は、ヒトまたは動物（典型的には哺乳類）身体に対して（本質的に）無毒性である任意のさらなる作用物質とすることができる。そのような薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）は任意で、生体刺激に対し、例えばコラーゲン生成（新コラーゲン生成因子）および／または細胞増殖（細胞増殖因子）に対し影響を有する生理活性材料成分とすることができる。そのような薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）はまた、生体刺激活性を有さない材料成分とすることができる。

例えば、薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）は、新コラーゲン生成を刺激する１つ以上の作用物質、例えば、例として１つ以上のヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩、１つ以上のポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩、および新コラーゲン生成を刺激する１つ以上の小分子量化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される生理活性材料成分とすることができる。

１つ以上のヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩、１つ以上のポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩は任意の分子量を有し得る。

好ましくは、１つ以上のヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は、１ｋＤａ～１０ＭＤａの範囲、より好ましくは５ｋＤａ～５ＭＤａの範囲、または０．３ＭＤａ～５ＭＤａの範囲、または０．３ＭＤａ～１ＭＤａの範囲、または１ＭＤａ～５ＭＤａの範囲にある分子量を有し得る。ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の混合物もまた、使用され得ることが理解されるであろう。そのような混合物は異なる分子サイズを有し得る。ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は、架橋されていなくてもよく、または、架橋されていてもよく、あるいは、架橋および非架橋の混合物とすることができる。

好ましくは、１つ以上のポリペプチドまたはその薬学的に許容される塩は０．５ｋＤａ～５００ｋＤａの範囲の分子量を有し得る。

小分子量化合物は好ましくは、１０００Ｄａ以下の、７５０Ｄａ以下の、または５００Ｄａ以下の分子量を有する。細胞増殖因子は本発明の投与された組成物への細胞侵入を改善することができる。

例えば、薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）は、生体刺激活性を有さない材料成分とすることができる。そのような薬学的に許容される添加物（成分Ｄ）は例示的に、下記からなる群より選択され得る：１つ以上の洗浄剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）／デシル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｃｅｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ）（ＳＤＳ））、１つ以上の着色剤（例えば、ＴｉＯ_２、食品着色料）、１つ以上のビタミン、１つ以上の塩（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、および／または亜鉛塩）、１つ以上の保水剤（例えば、ソルビトール、グリセロール、マンニトール、プロピレングリコール、ポリデキストロース）、１つ以上の酵素、１つ以上の保存剤（例えば、安息香酸、メチルパラベン）、１つ以上のテクスチャリング剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ソルビトール）、１つ以上の乳化剤、１つ以上の分離剤、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のハーブおよび植物抽出物、１つ以上の安定化剤、１つ以上のポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、１つ以上の取り込みメディエータ（例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）、抗菌ペプチド、など）、１つ以上の抗体、１つ以上の対比染色色素（例えば、フルオレセイン、フルオレセイン誘導体、Ｃｙ色素、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ色素、Ｓ色素、ローダミン、量子ドット、など）、１つ以上の細胞増殖因子、１つ以上のホメオパシー材料成分、およびそれらの２つ以上の組み合わせ。

色素は、注射の局所化（例えば、フルオレセインまたはローダミンのような薬学的に許容される蛍光色素）を改善することができ、または、そうでなければ白っぽい本発明の組成物の不可視性を改善することができる（例えば、それを肌色にすることにより）。

任意的なさらなる成分Ｃおよび／またはＤは一部、または、完全に、注射用組成物の液体、粘性またはペースト状成分中に含めることができ、または、その中に分散させることができる。好ましい実施形態では、本発明の注射用組成物はゲルである。よって、それは好ましくは、ゲル状、すなわち、ペースト状または粘性、注射用組成物である。

成分ＡおよびＢおよび任意でＣおよび任意でＤは、注射用組成物中に任意の含量範囲および比で含めることができる。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、成分Ａとして、注射用組成物を参照して、少なくとも１重量％、または少なくとも５重量％、または少なくとも１０重量％、または少なくとも２０重量％、または少なくとも３０重量％、または少なくとも４０重量％、または少なくとも５０重量％の、１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子を含む。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、成分Ａとして、注射用組成物を参照して、１～８０重量％、５～９０重量％、１０～８０重量％、２０～７７重量％、３０～７５重量％、４０～７３重量％、５０～７２重量％、５０～８０重量％、または５５～７０重量％の１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子を含む。成分Ａに関連する重量パーセンテージは成分Ａの乾燥物質を示す。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、成分Ｂとして、注射用組成物を参照して、最大８０重量％まで、１～８０重量％、２～７５重量％、３～７０重量％、４～６５重量％、５～６０重量％、１０～５５重量％、２０～５０重量％、または３０～５０重量％の１つ以上の型の薬学的に許容される担体を含む。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、成分Ｃとして、注射用組成物を参照して、最大１０重量％まで、０．００１～１０重量％、０．００１～５重量％、０．０１～３重量％、または０．１～２重量の１つ以上の局所麻酔薬を含む。純粋形態の成分Ｃが固体化合物である場合、成分Ｄに関連する重量パーセンテージは成分Ｃの乾燥物質を示すことができる。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、成分Ｄとして、注射用組成物を参照して、最大１０重量％まで、０．００１～１０重量％、０．０１～５重量％、または０．１～２重量％の成分Ａ、ＢおよびＣ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物を含む。純粋形態の成分Ｄが固体化合物である場合、成分Ｄに関連する重量パーセンテージは成分Ｄの乾燥物質を示すことができる。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、下記を含む（またはこれから構成される）：
（Ａ）成分Ａとしての、乾燥物質を参照して、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子；
（Ｂ）成分Ｂとしての、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の１つ以上の薬学的に許容される担体；
（Ｃ）成分Ｃとしての、注射用組成物を参照して、０～１０重量％の、１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
（Ｄ）成分Ｄとしての、注射用組成物を参照して、０～５０重量％の、成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、下記を含む（またはこれから構成される）：
（Ａ）成分Ａとしての、乾燥物質を参照して、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の１つ以上の型の本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子；
（Ｂ）成分Ｂとしての、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の、少なくとも１つのペースト状、粘性または液体担体を含む１つ以上の薬学的に許容される担体；
（Ｃ）成分Ｃとしての、注射用組成物を参照して、０～１０重量％の、１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
（Ｄ）成分Ｄとしての、注射用組成物を参照して、０～５０重量％の、成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物。

好ましい実施形態では、注射用組成物は、下記を含む（またはこれから構成される）：
（Ａ）成分Ａとしての、乾燥物質を参照して、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の、１５～５０μｍの平均粒径を有する１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子；
（Ｂ）成分Ｂとしての、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の、下記を含む、またはこれから構成される１つ以上の薬学的に許容される担体：
（Ｂ１）５０～９９．９重量％の、１つ以上の液体、粘性またはペースト状の薬学的に許容される担体、特に、グリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される液体、粘性またはペースト状の薬学的に許容される担体；ならびに
（Ｂ２）０．１～５０重量％の、１つ以上の固体の薬学的に許容される担体、好ましくは１つ以上の多糖またはその誘導体またはその薬学的に許容される塩、特に、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、カルボキシエチルセルロース（ＣＥＣ））、セルロース、およびそれらの２つ以上の混合物からなる群より選択される多糖または誘導体；
（Ｃ）成分Ｃとしての、注射用組成物を参照して、０～３重量％の１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
（Ｄ）成分Ｄとしての、注射用組成物を参照して、０～５０重量％の、成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物。

任意で、本発明の注射用組成物はパッケージ化されてもよい。例えば、それはシリンジ（使い捨て用）、バイアル、など内でパッケージ化されてもよい。ユーザーマニュアルが任意でそのようなパッケージに付加され得る。よって、本発明はまた、本発明の美容的および／または治療的使用のための、注射用組成物およびユーザーマニュアルを含むキットを示す。

以上で示されるように、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物は任意で、美容（非治療的）および治療目的のために使用され得る。以上で示されるように、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物は、特に軟組織充填剤、特に皮膚充填剤として使用可能である。したがって、本発明はまた、被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するための、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物の使用に関する。特に、本発明はまた、軟組織充填剤、特に皮膚充填剤としての本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物の使用に関する。

増加され、かつ、延長されたコラーゲン生成（新コラーゲン生成）を得るために、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または本発明の注射用組成物が使用され得る。これらの結果により、そのような組成物はコラーゲンの発現を増加させるのに、特によく適することが示される。カルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物は特に良好な生体刺激を有し得る。これは、増加した皮膚品質につながる可能性があり、これには、例えば、しわ、皮膚の粗さ、皮膚のつっぱり感および／または老化の徴候の改善および顔の輪郭形成が含まれ得る。よって、それは特に好適な皮膚および／または軟組織充填剤となる。

したがって、本発明はまた、充填剤、特に皮膚および／または軟組織充填剤としての、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物の使用に関する。本発明はまた、被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するための、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物の使用に関する。

本発明のさらなる態様は、被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するための美容法に関し、前記方法は下記ステップを含む：
（ｉ）本発明の注射用組成物を提供するステップ；ならびに
（ｉｉ）前記注射用組成物を被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚に注射するステップ。

本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および注射用組成物との関連で説明される定義および好ましい実施形態は、変更すべきところは変更して、美容法に当てはまることが理解されるであろう。

本発明はまた、被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するための方法において使用するための本発明の注射用組成物に関し、前記方法は下記ステップを含む：
（ｉ）注射用組成物を提供するステップ；ならびに
（ｉｉ）前記注射用組成物を顔または身体の対象となる部分の皮膚に注射するステップ。

「被験体」（「個体」または「患者」ともいう）という用語は、ヒトまたは動物、典型的には哺乳類、好ましくはヒトまたは飼育哺乳類として、最も広い意味で理解され得、彼等／それらは本発明の注射用組成物を用いる美容法または治療法に供することができる。本明細書では、「哺乳類」という用語は、任意の哺乳動物として、最も広い意味で理解され得る。好ましくは、哺乳類はヒトまたは飼育動物、例えば、マウス、ラット、雌ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマからなる群より選択される動物である。特に好ましくは、本明細書で使用される被験体はヒトである。本発明の注射用組成物を投与されたヒトまたは動物はまた、彼／彼女の健康状態と関係なく、臨床症状が起きたかどうかにかかわらず、患者として指定することができる。

顔または身体の対象となる部分の皮膚への注射は皮膚のいずれの部分での注射であってもよい。本発明の１つの実施形態では、本発明の組成物は軟組織に投与される（特に注射される）。本発明の１つの実施形態では、本発明の組成物は真皮領域、例えば、表皮の下、または、皮下組織の上に投与され（特に注射され）、および、そのようなものとして、皮下／真皮下、皮下組織または皮内に、またはいくつかの組み合わせで投与され得る。本発明の１つの実施形態では、本発明の組成物は皮下、真皮下、および／または皮内に投与される（特に注射される）。好ましい実施形態では、顔または身体の対象となる部分の皮膚への注射は皮下または皮内注射である。注射は、任意の手段により、例えば、例としてシリンジにより実施され得る。

被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善する目的は最も広い意味で理解することができる。

好ましい実施形態では、美容または治療法はさらに、下記からなる群より選択される目的のための方法であることを特徴とする：しわの充填、フェイスラインの改善、乳房再建または豊胸、皮膚の若返り、臀部増大、頬骨の再構築、軟組織増大、顔のしわの充填、眉間のしわの改善、ほうれい線の改善、マリオネットラインの改善、頬交連、口交連の改善、唇周囲のしわの改善、目尻のしわの改善、眉の皮下支持の改善、頬骨および頬脂肪パッド、ティアトラフ、鼻の改善、唇の増大、頬の増大、口周囲領域の増大、ざ瘡瘢痕などの瘢痕の増大、眼窩下領域の増大、顔の非対称性の解消、下顎の輪郭の改善、顎先の増大、およびそれらの２つ以上の組み合わせ。

好ましい実施形態では、美容法はしわの充填、または、フェイスラインの改善、特に、しわの充填のための方法である。好ましい実施形態では、美容または治療法はさらに、それが、被験体の対象となるしわの充填のための方法であることを特徴とし、前記方法は、前記注射用組成物を対象となるしわに皮下または皮内注射する。

好ましい実施形態では、美容法は被験体の対象となるしわの充填のための方法であり、前記方法は下記ステップを含む：
（ｉ）本発明の注射用組成物を提供するステップ；ならびに
（ｉｉ）前記注射用組成物を対象となるしわに皮下または皮内注射するステップ。

美容または治療法の上記目的は任意の細胞メカニズムにより達成することができる。好ましい実施形態では、ステップ（ｉｉ）は注射用組成物を真皮下皮膚の結合組織に注射し、よって、コラーゲン、特に、ＩＩＩ型コラーゲン、Ｉ型コラーゲン、またはＩおよびＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせから選択されるコラーゲンの生成を刺激するステップである。

本明細書では、コラーゲン型などのタンパク質との関連で、「生成」という用語は、１つ以上のコラーゲン型などのタンパク質の生成として最も広い意味で理解され得る。これはまた、タンパク質発現としても理解され得る。

本明細書では、１つのコラーゲン型（特にＩ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲン）の生成の誘導は、本発明の注射用組成物を投与されていない同等細胞または同等組織と比べて、少なくとも１重量％だけ、少なくとも２重量％だけ、または少なくとも５重量％だけ、または少なくとも１０重量％だけ、または少なくとも２０重量％だけ、または、少なくとも５０重量％だけ、または少なくとも１００重量％だけ発現速度を増加させるとして、最も広い意味で理解され得る。

コラーゲン（特に、Ｉ型コラーゲンおよび／またはＩＩＩ型コラーゲン）は典型的には、線維芽細胞により生成される。したがって、細胞は好ましくは線維芽細胞であり、または、組織は好ましくは線維芽細胞を含む組織である。

注射ステップ（ステップ（ｉｉ））は、注射用組成物を真皮下皮膚の結合組織に注射するステップであってもよい。好ましい実施形態では、ステップ（ｉｉ）は、注射用組成物を真皮下皮膚の結合組織に注射し、よって、コラーゲン、特に、ＩＩＩ型コラーゲン、Ｉ型コラーゲン、またはＩおよびＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせから選択されるコラーゲンの生成を刺激するステップである。

以上で示されるように、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物はまた、治療目的のために使用され得る。したがって、本発明の一態様は、薬剤として使用するための本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物に関する。

本発明のさらなる態様は、結合組織の病的悪化と関連する病的状態を治療する方法において使用するための本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物に関する。

言い換えれば、本発明はまた、被験体における結合組織の病的悪化と関連する病的状態を治療する方法に関し、前記被験体は、十分な量の、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子および／または注射用組成物を投与される。

本発明のさらなる態様は、骨材料（すなわち、骨および移植骨）を置換または再生させる、歯根をインプリメント／固定する、または歯を充填する方法において使用するための、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物に関する。

言い換えれば、本発明はまた、被験体において骨材料を置換または再生させる、歯根をインプリメント／固定する、または歯を充填する方法に関し、前記被験体は、十分な量の、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物を投与される。

上記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子、注射用組成物および美容法との関連で説明される定義および好ましい実施形態は、変更すべきところは変更して、使用のための注射用組成物および治療方法に適用されることが理解されるであろう。

好ましい実施形態では、結合組織の病的状態は、尿失禁、膀胱尿管逆流、声帯増大、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を患う患者における脂肪萎縮（ｌｉｐｏｔｒｏｐｈｙ）、結合組織の加齢性または病的悪化と関連する病的状態（結合組織の加齢性悪化と関連する病的状態、または、結合組織の病的悪化と関連する病的状態ともいう）、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される。

好ましい実施形態では、骨材料を置換または再生させることは、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物の、被験体において治療される骨構造、またはその近くへの注射を含む。骨材料を置換または再生させることはまた、骨移植とすることができる。

好ましい実施形態では、歯根をインプリメント／固定することは、歯の固着構造への本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物の投与（例えば、注射）を含む。

好ましい実施形態では、歯根を充填することは、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物の、歯において充填される空洞（例えば、天然空洞、または、ドリルまたはミルによる空洞）中への投与を含む。

記載される図、実施例および特許請求の範囲はさらに、発明を説明する。

９７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子のサイズ分布を示し、それらはおよそ３０μｍの平均粒径を有する。相対サイズ分布（実線）および累積サイズ分布（破線）が図示される。サイズ分布はかなり狭いことが視認可能である。粒子の大半は２５～４５μｍの直径を有する。 １００倍の倍率の顕微鏡画像における、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（図２Ａ、比較例）と９７０℃で焼結されたもの（図２Ｂ、本発明による）の比較を示す。スケールバーは１００μｍを示す。どちらの焼結温度も、本質的に球状で、明確に定義されたサイズ分布の粒子につながることが明らかである。 ５００倍の倍率の顕微鏡画像における、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（図３Ａ、比較例）と９７０℃で焼結されたもの（図３Ｂ、本発明による）の比較を示す。どちらの焼結温度も、本質的に球状で、明確に定義されたサイズ分布の粒子につながることが明らかである。細孔（黒点として見える）が、９７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面上で見られ得る（図３Ｂ、本発明による）。対照的に、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面（図３Ａ、比較例）は本質的に平滑である。 ５２００倍の倍率の顕微鏡画像における、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（図４Ａ、比較例）と９７０℃で焼結されたもの（図４Ｂ、本発明による）の比較を示す。スケールバーは１０μｍを示す。細孔（黒点として見える）が９７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面上で見られ得る（図４Ｂ、本発明による）。対照的に、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面（図４Ａ、比較例）は本質的に平滑である。 サイズおよび焼結温度（９７０℃、１０７０℃および１１７０℃）の観点から、異なるタイプの純粋カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子を用いた、７２時間インキュベーション後の線維芽細胞１細胞あたりの平均ＩＩＩ型コラーゲン発現を示す。対照（ＣＴＲＬ）は同等条件でインキュベートした非刺激線維芽細胞を表す。蛍光シグナルは任意単位（ＡＵ）で描かれる。 異なる温度（１１７０℃または９７０℃）での焼結により調製された、２ｍｇ／ｍｌの２５～４５μｍの平均粒径の同等カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子とのインキュベーション後、７２時間のインキュベーション後（図６Ａ）、および、７日のインキュベーション後（図６Ｂ）の、線維芽細胞のＩＩＩ型コラーゲン発現を示す。対照（ＣＴＲＬ）は同等条件でインキュベートした非刺激線維芽細胞を表す。蛍光シグナルは任意単位（ＡＵ）で描かれる。 異なる温度（１１７０℃または９７０℃）での焼結による、２ｍｇ／ｍｌの２５～４５μｍの平均粒径の同等カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子とのインキュベーション後、７２時間のインキュベーション後（図７Ａ）、および、７日のインキュベーション後（図７Ｂ）の、線維芽細胞のＩ型コラーゲン発現を示す。対照（ＣＴＲＬ）は同等条件でインキュベートした非刺激線維芽細胞を表す。蛍光シグナルは任意単位（ＡＵ）で描かれる。 未処理線維芽細胞の細胞培養物を示す。灰色の点はＩＩＩ型コラーゲン発現が低い細胞を示す。黒色の点はＩＩＩ型コラーゲン発現が高い細胞を示す。数十のうち２つの細胞のみが高いＩＩＩ型コラーゲン発現を有することが視認可能である。 本発明に従い９７０℃で焼結された、２５～４５μｍの平均直径を有するカルシウムハイドロキシアパタイト粒子で処理した線維芽細胞の細胞培養物を示す。灰色の点はＩＩＩ型コラーゲン発現が低い細胞を示す。黒色の点はＩＩＩ型コラーゲン発現が高い細胞を示す。多数の細胞が高いＩＩＩ型コラーゲン発現を有することが視認可能である。 線維芽細胞の細胞培養物におけるＩＩＩ型コラーゲン発現への影響を示す。細胞は、対照（ｃｔｒｌ）試料と比べて、異なる温度で焼結された粒子で処理された。高いＩＩＩ型コラーゲン発現を示す細胞（ＣＯＬＩＩＩ高細胞）のパーセンテージが示される（Ａ）。さらに、高いＩＩＩ型コラーゲン発現を示す細胞（ＣＯＬＩＩＩ高細胞）１つあたりのＩＩＩ型コラーゲン（ＣＯＬＩＩＩ）の発現が、１００％に設定された未処理細胞の対照試料（Ｃｔｒｌ）と比べて描かれる（Ｂ）。

実施例１
カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子の調製および分析
カルシウムハイドロキシアパタイトのスラリーの調製
ａ．）カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）スラリーの調製：
カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）を、Ｎｉｅｈら（Ｎｉｅｈ， Ｃｈｏｉ ａｎｄ Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ， “Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｒｏｕｓ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ ｃｏａｔｉｎｇｓ”， Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ： ２００１ Ｍｉｎｅｒａｌｓ， Ｍｅｔａｌｓ＆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ＆ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｏｒｌｅａｎｓ， ＬＡ （ＵＳ）， ２月１１－１５日， ２００１）により記載されるように水性スラリーを介して沈殿させた。よって、最初に、結晶性ＣａＨＡ粉末を、カルシウムおよびリン（例えば、Ｃａ（ＯＨ）_２およびＨ_３ＰＯ_４）をおよそｐＨ１１のｐＨを有する塩基性水溶液（例えば、ＮＨ_４ＯＨによる）中で混合することにより、調製し、沈殿させた。ＣａＨＡ結晶は室温で沈殿する。沈殿したＣａＨＡスラリーを、Ｎｉｅｈらにより記載されるように脱イオン水を使用して過剰の反応物および副産物を除去することにより精製した。精製ＣａＨＡスラリーをデカントプロセスにより濃縮し、スラリー中のＣａＨＡ結晶は、ボールミルなどのプロセスを使用してサイズをさらに低減させた。

ｂ．）市販のカルシウムハイドロキシアパタイトに基づくスラリーの他の調製：
本発明では、サブミクロン粒度のカルシウムハイドロキシアパタイト粉末が使用される。サブミクロン粒度のそのようなカルシウムハイドロキシアパタイト粉末は例えば、例として、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ ａｎｄ Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ （Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， ドイツ）から市販されている。カルシウムハイドロキシアパタイト粉末のスラリーは、粉末を水と混合することにより調製される。スラリー中のカルシウムハイドロキシアパタイトの含量は２０～４０重量％に設定される。

ｃ．）生成されたカルシウムハイドロキシアパタイトナノ結晶に基づくスラリーの他の調製：
３重量部（ｗｔ部）の硝酸カルシウム４水和物をおよそ４４ｗｔ部の水に溶解する。１ｗｔ部のリン酸水素二アンモニウムを３１ｗｔ部の水に溶解する。得られたリン酸水素二アンモニウムの水溶液を硝酸カルシウムの水溶液に激しく撹拌しながら徐々に添加する。得られた溶液のｐＨを水酸化ナトリウムによりｐＨ１１に調整する。スラリーは数時間エージングさせてもよい。任意で、結晶は１つ以上の遠心分離／洗浄ステップにより洗浄してもよい。そのような手順はＥｓｌａｍｉら（Ｉｒａｎｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００８， ４（２）：１２７－１３４）に記載される。スラリー中のカルシウムハイドロキシアパタイトの含量は２０～４０重量％に設定される。

スラリーからのカルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子の調製および焼結
ＣａＨＡスラリーを、Ｎｉｅｈらにより記載されるように、アトマイザ／噴霧乾燥機を利用してミクロスフェアに形成させた。よって、スラリーはノズルを通して暖かい空間に押し出される。空気分級または機械的ふるい分けを使用して、所望の直径閾値の外側にあるＣａＨＡ粒子を除去した。残りのＣａＨＡ粒子をＮｉｅｈらにより記載されるように、対象となる温度、および、粒子の結晶構造／多孔度を制御するための時間で焼結させる。焼結されたＣａＨＡ粒子を顆粒化し、次いで、洗浄／乾燥／ふるい分けし、所望のサイズ範囲の特異なＣａＨＡ粒子からなる粉末を達成した。

カルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子の調製はまた、ＵＳ６，５３７，５７４号およびＷＯ２００１／０１２２４７号に記載されるように実施され得る。

カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の分析
９７０℃で焼結された、２５～４５μｍの平均粒径を有する、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子（本発明による）を１１７０℃で焼結された比較粒子（比較例）と比較した。サイズおよび形状分布を、顕微鏡手段により、かつ、光散乱を測定することにより定量的に、分析した。

サイズ分布測定のための典型的な例が図１に示される。ここで、サイズ分布はかなり狭いことが視認可能である。粒子の大半は２５～４５μｍの直径を有する。

走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）画像は１試料につき３つのフラクションから撮り、粒子および体積加重サイズ分布を決定するために使用した。そのため、１フラクションあたり４００までのＳＥＭ画像を５００倍の倍率で撮り、さらに、自動画像解析ソフトウェアＩｍａｇｅＪ（バージョン１．５１ｊ８）により処理した。画像処理は全てのフラクション画像に対して、フェレー径およびアスペクト比（Ｄ－比）のようなパラメータを規定した後に、提供した。平均化した結果は最終的に、少なくとも５０，０００を超える同定粒子に基づく粒子および体積加重サイズ分布を表す。

定量的測定の結果が下記表１に示される。＞１２５μｍのサイズを有する粒子は見出されなかった。

結果が図２～４に示される。どちらの焼結温度も、本質的に球状で、明確に定義されたサイズ分布の粒子につながることが視認可能である。しかしながら、驚いたことに、細孔（黒点として見える）が９７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面上で見られ得る（本発明による）が、一方、１１７０℃で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の表面（比較例）は本質的に平滑であることが見出された。

実施例２
細胞培養物のＩおよびＩＩＩ型コラーゲン発現全体に対するカルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子の効果
材料および方法
材料
ヒト初代線維芽細胞／成人／単一ドナー／乳房、ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、＃４１２Ｚ０２０－Ｐ３）；
線維芽細胞増殖培地：１ｍＭのビタミンＣおよび１重量％のＰｅｎＳｔｒｅｐ（ペニシリン－ストレプトマイシン）を含む細胞培地；
抗ＩＩＩ型コラーゲン抗体：ポリクローナル抗体、ウサギ、一次抗体として使用される（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＰＡ５－３４７８７）；
抗ウサギ抗体：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８－標識二次抗体、ヤギ、一次ウサギ抗体を検出（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ１１０３４）；
Ｄａｋｏ抗体溶液（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳ）；
ＤＡＰＩ：４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＳＩＧＭＡ、Ｄ９５４２）；ならびに
ＣｅｌｌＭａｓｋ：深紅細胞膜系統（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃ１００４６）。

細胞培養および試料調製
線維芽細胞を５０００細胞／ウェルの密度で播種した。細胞を、２４時間標準条件で、３７℃で、線維芽細胞増殖培地において培養した。２４時間後、２００μｌのヒアルロン酸含有試料を添加した。試料は異なる量のヒアルロン酸を含んだ。いくつかの試料は、２ｍｇ／ｍｌのカルシウムハイドロキシアパタイト粒子（ＣａＨＡ）をさらに含んだ。

細胞培養および試料調製
ヒト初代線維芽細胞（成人、単一ドナー）を使用する。細胞を、２４時間標準条件で、３７℃で、線維芽細胞増殖培地において培養した。２４時間のインキュベーション後、２ｍｇ／ｍｌの、異なる温度（９７０℃、１０７０℃および１１７０℃）で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子を含む各２００μｌの溶液を添加した。粒子はまた、一部、＜２５μｍから始まって、２５－４５μｍ、４５－７５μｍ、７５－１２５μｍ、および＞１２５μｍとサイズが異なっていた。それぞれ、７２時間後または７日後、培地を細胞から除去し、細胞を冷メタノール（－２０℃）で１０分間固定した。次いで、固定細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、４℃で保存した。

コラーゲン染色および定量化：
ＩＩＩ型コラーゲンおよびＩ型コラーゲンに対する２つの特異抗体を使用した。固定細胞をインキュベートし、蛍光シグナルを定量化のための撮像装置を使用して分析した。ＩＩＩ型コラーゲン定量化については、ウェルプレートにおける細胞の平均発現を分析した。というのも、細胞と同じ平面レベルのシグナルだからである。それとは対照的に、Ｉ型コラーゲン発現をウェル全体の平均蛍光として評価した。というのも、Ｉ型コラーゲンネットワークが細胞よりわずかに上の平面レベルで形成するからである。

加えて、単細胞分析をＩＩＩ型コラーゲン発現に対して実施した。ここで、全ての単細胞を個々に分析し、ＩＩＩ型コラーゲン高発現細胞の量を定量し、そのＩＩＩ型コラーゲン高細胞のＩＩＩ型コラーゲン発現を評価した。

固定細胞の上清を除去した。次いで、細胞を、１００μｌ／ウェルのブロッキング緩衝液（５重量％のアルブミンを含むＰＢＳ）で２時間、室温で（ＲＴ）処理した。ブロッキング緩衝液を除去した。次いで、７０μｌ／ウェルの、個々の抗コラーゲン抗体（例えば、６．７μｇ／ｍｌの一次抗ＩＩＩ型コラーゲン抗体（抗コラーゲンＩＩＩ抗体、ポリクローナル、宿主ウサギ；Ｌ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ； ＰＡ５－３４７８７）を含むＤａｋｏ抗体溶液（１：１００）の溶液を、それぞれ、抗Ｉ型コラーゲン抗体（抗コラーゲンＩ抗体［ＣＯＬ－１］、モノクローナル、宿主マウス；Ａｂｃａｍ；ａｂ９０３９５）を含むＤａｋｏ抗体溶液（１：１００）が使用される）を添加し、一晩暗所で４℃にて水平ミキサ上でインキュベートした。

次の日、処理した固定細胞を３回、ＰＢＳで洗浄した。その後、７０μｌ／ウェルの、個々の標識二次抗体の溶液（例えば、１０μｇ／ｍｌの二次ＡｌｅｘａＦｌｕｏ４８８－標識抗ウサギ抗体を含むＤａｋｏ抗体溶液（１：２００）を含み、共染色のために、ＡｌｅｘａＦｌｕｏ５４６－標識抗マウス抗体を含むＤａｋｏ抗体溶液（１：２００）を添加する）を添加し、１時間ＲＴで暗所でインキュベートした。処理した固定細胞を３回ＰＢＳで洗浄した。その後、７０μｌ／ウェルのＣｅｌｌＭａｓｋ深紅細胞膜系統をＰＢＳ中１：１０００の希釈で添加した（５μｇ／ｍｌ）。固定細胞を３０分間ＲＴで暗所でインキュベートした。その後、７０μｌ／ウェルの、１μｇ／ｍｌ ＤＡＰＩ溶液を含むＰＢＳの溶液（１μｇ／ｍｌ、１：２０００希釈の、２ｍｇ／ｍｌのアリコート）を添加した。固定細胞を１０分間、ＲＴで暗所でインキュベートした。処理した固定細胞を３回ＰＢＳで洗浄した。

個々の二次抗体の蛍光シグナルを、シグナルの定量化のための撮像装置で決定した。さらに、顕微鏡画像を準備した。結果が以下で示される。

結果
結果が図５～７に示される。驚いたことに、より低い温度（ここでは：９７０℃）で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は新コラーゲン生成に対しより高い効果を示したことが見出された。すなわち、Ｉ型コラーゲンならびにＩＩＩ型コラーゲンの形成を増加させる。この効果は全ての試料において見出された。この効果は、７５μｍ以下、特に４５μｍ以下の平均粒径のより小さなサイズの粒子により誘導されるＩＩＩ型コラーゲン発現では特に著しかった。その上、驚いたことに、より低い温度（ここでは：９７０℃）で焼結されたカルシウムハイドロキシアパタイト粒子に誘導されるＩ型コラーゲンの生成は、１１７０℃で焼結された比較カルシウムハイドロキシアパタイト粒子と比べて、７２時間の短いインキュベーション後に著しく増加されたことが見出された。

要約すると、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、有効性において、新コラーゲン生成を増加させ、これは、先行技術のカルシウムハイドロキシアパタイトより優れていることが見出された。コラーゲン生成における特に有効な増加は、Ｉ型コラーゲンおよびＩＩＩ型コラーゲンに当てはまり、どちらも皮膚において主要なコラーゲンを表し、また、肌質改善の主な原動力ともなる。これにより、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子を含む注射用組成物は特に有効な充填剤として使用することができるという証拠が提供される。これは、被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するために特に有益となり得る。

実施例３
単細胞分析における細胞のＩおよびＩＩＩ型コラーゲン発現に対するカルシウムハイドロキシアパタイト（ＣａＨＡ）粒子の効果
方法
２Ｄ線維芽細胞細胞培養物を、以上で記載される通り、９６ウェル細胞培養プレートにおいて培養した。細胞をさらに処理せずにインキュベートし、これを対照とし、または、ある一定の焼結温度で調製したカルシウムハイドロキシアパタイト粒子の試料で処理し、さらにインキュベートした。

Ｉ型またはＩＩＩ型コラーゲンを以上で記載される通り染色した。次いで、顕微鏡画像を準備し、高いＩ型またはＩＩＩ型コラーゲン発現を示す細胞および低いＩ型またはＩＩＩ型コラーゲン発現を示す細胞を識別した。

結果
驚いたことに、９７０℃での焼結により調製したカルシウムハイドロキシアパタイト粒子で処理した線維芽細胞は未処理細胞と比べて非常に高い数の細胞を示し、より高い温度での（１０７０℃および１１７０℃）焼結により調製された同等カルシウムハイドロキシアパタイト粒子で処理した細胞は高い量のＩＩＩ型コラーゲンを発現している（図１０Ａを参照されたい）ことが見出された。さらに、１細胞あたりのＩＩＩ型コラーゲン発現もまた増加される（図１０Ｂを参照されたい）。

よって、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、驚いたことに、コラーゲン発現のためにより高い数の細胞を活性化し、ならびに、１細胞あたりより高いコラーゲン発現を示す。

一般実験所見
驚いたことに、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子はより高い温度で焼結された粒子と比較して、より高い多孔度を有することが見出された。全ての結果を考慮すると、驚いたことに、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、コラーゲンの生成を刺激し、増強させるのに特に有効であることが見出された。これは細胞レベルで、ならびに、細胞培養物全体において見出された。

コラーゲン形成
コラーゲン生成は、皮膚および軟組織充填剤としての有益な適用性と関連する（ｖａｎ Ｌｏｇｈｅｍ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２０１５， ８（１）：３８－４９； Ｃｏｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ２００８， ３４：Ｓ５３－Ｓ５５； Ｂｅｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ， ２００８， ３４：Ｓ６４－Ｓ６７を参照されたい）。本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は主にまたは完全に、無毒性で、広く認可されたカルシウムハイドロキシアパタイトから構成される。したがって、本発明のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子は特に有効な皮膚および軟組織充填剤として使用可能であることが明らかである。

Claims (15)

1. ９１０～１０３０℃の範囲の温度で焼結され、１０３０℃を超える温度に供されていないカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
2. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は球状または楕円体、より好ましくは球状、特に０．７を超えるＤ－比を有する球状である、請求項１に記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
3. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は多孔性表面を有する、請求項１または２のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
4. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子の前記表面は、Ｈｇ－ポロシメトリーにより決定すると、前記表面に１０～５００ｎｍの平均直径の細孔を有する、請求項１～３のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
5. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は、光散乱により決定すると、１～５００μｍ、または５～５００μｍ、１～１５０μｍ、または２～１００μｍ、または５～８０μｍ、または１０～６０μｍ、または１５～５０μｍ、または２０～４５μｍ、または２５～４５μｍの平均粒径を有する、請求項１～４のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
6. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は９１０～９９５℃、または９２０～９９５℃、または９３０～９９０℃、または９４０～９８５℃、または９５０～９８０℃、または９６０～９７５℃の範囲の温度で焼結されており、前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は前記焼結温度を超える温度に供されていない、請求項１～５のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
7. 前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子は１～２４時間、２～１２時間、または３～１６時間焼結されている、請求項１～６のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子。
8. （Ａ）成分Ａとしての、請求項１～７のいずれかに記載の１つ以上の型のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子；ならびに
   （Ｂ）成分Ｂとしての、１つ以上の薬学的に許容される担体；
   （Ｃ）任意で、成分Ｃとしての、１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
   （Ｄ）任意で、成分Ｄとしての、成分Ａ、ＢおよびＣ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物
   を含む、注射用組成物。
9. 前記１つ以上の薬学的に許容される担体は、１つ以上の多糖誘導体またはその薬学的に許容される塩、１つ以上の多糖またはその薬学的に許容される塩、グリセロール、水、１つ以上の水性緩衝液、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項８に記載の注射用組成物。
10. 前記１つ以上の薬学的に許容される担体は、カルボキシメチルセルロースまたはその薬学的に許容される塩、グリセロール、水、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項８または９のいずれかに記載の注射用組成物。
11. 前記注射用組成物は下記から構成される、請求項８～１０のいずれかに記載の注射用組成物：
    （Ａ）成分Ａとしての、乾燥物質を参照して、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の、１つ以上の型の前記カルシウムハイドロキシアパタイト粒子；
    （Ｂ）成分Ｂとしての、注射用組成物を参照して、１～８０重量％の、少なくとも１つのペースト状、粘性または液体担体を含む１つ以上の薬学的に許容される担体；
    （Ｃ）成分Ｃとしての、注射用組成物を参照して、０～１０重量％の、１つ以上の局所麻酔薬；ならびに
    （Ｄ）成分Ｄとしての、注射用組成物を参照して、０～５０重量％の、成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ以外の１つ以上の薬学的に許容される添加物。
12. 被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚および／または輪郭の外観を改善するための美容法であって、下記ステップを含む、美容法：
    （ｉ）請求項８～１１のいずれかに記載の注射用組成物を提供するステップ；ならびに
    （ｉｉ）前記注射用組成物を被験体の顔または身体の対象となる部分の皮膚に注射するステップ。
13. 前記方法は、それはしわの充填、フェイスラインの改善、乳房再建または豊胸、皮膚の若返り、臀部増大、頬骨の再構築、軟組織増大、顔のしわの充填、眉間のしわの改善、ほうれい線の改善、マリオネットラインの改善、頬交連、口交連の改善、唇周囲のしわの改善、目尻のしわの改善、眉の皮下支持の改善、頬骨および頬脂肪パッド、ティアトラフ、鼻の改善、唇の増大、頬の増大、口周囲領域の増大、ざ瘡瘢痕などの瘢痕の増大、眼窩下領域の増大、顔の非対称性の解消、下顎の輪郭の改善、顎先の増大、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される目的のための方法であることをさらに特徴とし、
    特に、前記方法は被験体の対象となるしわの充填のための方法であり、前記方法は、前記注射用組成物を対象となる前記しわに皮下または皮内注射する、請求項１２に記載の美容法。
14. 前記ステップ（ｉｉ）は、前記射用組成物を真皮下皮膚の結合組織に注射し、よって、コラーゲン、特に、ＩＩＩ型コラーゲン、Ｉ型コラーゲン、またはＩおよびＩＩＩ型コラーゲンの組み合わせから選択されるコラーゲンの生成を刺激するステップである、請求項１２または１３のいずれかに記載の美容法。
15. 結合組織の病的悪化と関連する病的状態を治療する方法において使用するための、請求項１～７のいずれかに記載のカルシウムハイドロキシアパタイト粒子、または、請求項８～１１のいずれかに記載の注射用組成物であって、好ましくは、前記病的状態は、尿失禁、膀胱尿管逆流、声帯増大、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を患う患者における脂肪萎縮（ｌｉｐｏｔｒｏｐｈｙ）、結合組織の加齢性または病的悪化と関連する病的状態およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群より選択される、カルシウムハイドロキシアパタイト粒子または注射用組成物。

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