JP2024509910A - Ｍａｇｅ－ａ４ペプチド－ｍｈｃ抗原結合タンパク質 - Google Patents

Ｍａｇｅ－ａ４ペプチド－ｍｈｃ抗原結合タンパク質 Download PDF

Info

Publication number
JP2024509910A
JP2024509910A JP2023555203A JP2023555203A JP2024509910A JP 2024509910 A JP2024509910 A JP 2024509910A JP 2023555203 A JP2023555203 A JP 2023555203A JP 2023555203 A JP2023555203 A JP 2023555203A JP 2024509910 A JP2024509910 A JP 2024509910A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
seq
domain
binding protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023555203A
Other languages
English (en)
Inventor
マリア ソビエライ，アンナ
ベルト シャイフェレ，ファビアン
ユングミヒェル，シュテファニー
ボッラス，レオナルド
ヴァルデマー ヴィンゲ ライスナー，クリスティアン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Cdr-Life AG
Original Assignee
Cdr-Life AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cdr-Life AG filed Critical Cdr-Life AG
Publication of JP2024509910A publication Critical patent/JP2024509910A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質、及びそれをコードする核酸が提供される。標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣを特異的に認識する抗原結合タンパク質を産生する方法、及びそれをコードする核酸ライブラリーも提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月９日に出願された米国仮出願第６３／１５８，６９１号及び２０２１年４月９日に出願された米国仮出願第６３／１７２，８６４号の利益を主張するものであり、その開示全体は、参照により本明細書に援用される。
本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質に関する。
黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）の発現は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、黒色腫、膀胱、頭頸部、及び胃食道癌を含む、多くのがんに存在する（Ｇｒｏｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１６．３７５：１１０９－１１１２）。これは、ＴＣＲをベースにしたＴ細胞療法にとって魅力的な標的であるが、残念ながら、ＴＣＲ分子は、ｐＭＨＣ標的に対する結合親和性が低い。更に、ＴＣＲをベースにしたＴ細胞療法は、開発と使用に手間と費用がかかる。対照的に、単離されたモノクローナル抗体は、これらの標的に対する結合親和性が極めて高く、オフターゲット活性を減少できる可能性がある。しかしながら、ＨＬＡにおける結合ペプチドのエピトープが小さいため、ｐＭＨＣ標的に対するモノクローナル抗体を作製することは困難である。
したがって、高い特異性（すなわち、オフターゲット効果が低いまたは全くない）を保持しながら、高い結合親和性で標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣを特異的に認識する新規抗原結合タンパク質が当該技術分野において必要とされている。
一態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質を提供し、ここで、抗原結合タンパク質は、次の特徴のうちの１つ以上を含む：（ｉ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍ（例えば、約１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、または１０－１４Ｍ）の結合親和性を含む、（ｉｉ）抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む、（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む、ならびに（ｉｖ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍ（例えば、約１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、または１０－１４Ｍ）の結合親和性と、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む。
ある特定の実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドは、ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドとの複合体である。ある特定の実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ベータ－２－ミクログロブインポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１つ以上の変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１、２、３、４、５つの変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１つ以上の変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１、２、３、４、または５つの変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３４５～配列番号３９３のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３４５～配列番号３９３に記載されるアミノ酸配列を含むペプチド混合物に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３４５～配列番号３９３のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３４５～配列番号３９３に記載されるアミノ酸配列を含むペプチド混合物に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、小抗体ミメティックまたは単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－ＮａｒまたはＶＨＨを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表６のＭ０８４８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８４８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）表６のＭ０８４９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８４９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）表６のＭ０８５０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５０に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）表６のＭ０８５１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）表６のＭ０８５２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆ）表６のＭ０８５３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇ）表６のＭ０８５４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈ）表６のＭ０８５５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉ）表６のＭ０８５６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊ）表６のＭ０８５７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５７に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋ）表６のＭ０８５８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｌ）表６のＭ０８５９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｍ）表６のＭ０８６０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６０に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｎ）表６のＭ０８６１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｏ）表６のＭ０８６２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｐ）表６のＭ０８６３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｑ）表６のＭ０８６４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｒ）表６のＭ０８６５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｓ）表６のＭ０８６６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｔ）表６のＭ０７００に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７００に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｕ）表６のＭ０７０１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｖ）表６のＭ０７０２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｗ）表６のＭ０７０３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｘ）表６のＭ０７０４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｙ）表６のＭ０７０５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｚ）表６のＭ０７０６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ａａ）表６のＭ０７０７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０７に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂｂ）表６のＭ０７０８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃｃ）表６のＭ０７０９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７０９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄｄ）表６のＭ０７１０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７１０に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅｅ）表６のＭ０７６２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆｆ）表６のＭ０７６３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇｇ）表６のＭ０７６４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈｈ）表６のＭ０７６５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉｉ）表６のＭ０７６６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊｊ）表６のＭ０７６７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣ
ＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６７に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋｋ）表６のＭ０７６８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｌｌ）表６のＭ０７６９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０７６９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表６のＭ０８４８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８４８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）表６のＭ０８４９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８４９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）表６のＭ０８５０に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５０に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）表６のＭ０８５１に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５１に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）表６のＭ０８５２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆ）表６のＭ０８５３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇ）表６のＭ０８５４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈ）表６のＭ０８５５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉ）表６のＭ０８５６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊ）表６のＭ０８５７に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５７に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋ）表６のＭ０８５８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｌ）表６のＭ０８５９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｍ）表６のＭ０８６０に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６０に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｎ）表６のＭ０８６１に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６１に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｏ）表６のＭ０８６２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｐ）表６のＭ０８６３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｑ）表６のＭ０８６４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｒ）表６のＭ０８６５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｓ）表６のＭ０８６６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｔ）表６のＭ０７００に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７００に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｕ）表６のＭ０７０１に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０１に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｖ）表６のＭ０７０２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｗ）表６のＭ０７０３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｘ）表６のＭ０７０４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｙ）表６のＭ０７０５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｚ）表６のＭ０７０６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ａａ）表６のＭ０７０７に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０７に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂｂ）表６のＭ０７０８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃｃ）表６のＭ０７０９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７０９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄｄ）表６のＭ０７１０に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７１０に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅｅ）表６のＭ０７６２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆｆ）表６のＭ０７６３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇｇ）表６のＭ０７６４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈｈ）表６のＭ０７６５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉｉ）表６のＭ０７６６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊｊ）表６のＭ０７６７に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６７に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋｋ）表６のＭ０７６８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｌｌ）表６のＭ０７６９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０７６９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含まない。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５７５に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号７９７に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８３に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０５に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５７９に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０１に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８２に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０４に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８４に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０６に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５５０に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号７７２に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、ＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
ある特定の実施形態において、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含まない。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８３に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０５に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５７９に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０１に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８４に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０６に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５５０に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号７７２に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、次の特徴のうちの１つ以上を含む：（ｉ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む、（ｉｉ）抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、ならびに（ｉｖ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性と、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む。
ある特定の実施形態において、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、アミノ酸リンカーにより結合される。ある特定の実施形態において、アミノ酸リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５の整数である。ある特定の実施形態において、アミノ酸リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＡＳを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表８のＭ０７３４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｂ）表８のＭ０７３５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｃ）表８のＭ０７３６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｄ）表８のＭ０７３７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｅ）表８のＭ０７３８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｆ）表８のＭ０７３９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｇ）表８のＭ０７４０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｈ）表８のＭ０７４１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｉ）表８のＭ０７４２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｊ）表８のＭ０７４３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｋ）表８のＭ０７４４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｌ）表８のＭ０７４５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｍ）表８のＭ０７４６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｎ）表８のＭ０７４７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｏ）表８のＭ０７４８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｐ）表８のＭ０７４９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｑ）表８のＭ０７５０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｒ）表８のＭ０７５１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、または（ｓ）表８のＭ０７５２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメインを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表８のＭ０７３４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｂ）表８のＭ０７３５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｃ）表８のＭ０７３６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｄ）表８のＭ０７３７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｅ）表８のＭ０７３８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｆ）表８のＭ０７３９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｇ）表８のＭ０７４０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｈ）表８のＭ０７４１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｉ）表８のＭ０７４２に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｊ）表８のＭ０７４３に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｋ）表８のＭ０７４４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｌ）表８のＭ０７４５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｍ）表８のＭ０７４６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｎ）表８のＭ０７４７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｏ）表８のＭ０７４８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｐ）表８のＭ０７４９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｑ）表８のＭ０７５０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｒ）表８のＭ０７５１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、または（ｓ）表８のＭ０７５２に記載される抗体ＶＨＨドメインを含む。
ある特定の実施形態において、ＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
ある特定の実施形態において、ＶＨＨドメインは、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、少なくとも約１０－９Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－１０Ｍ～約１０－１２Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ペプチドを含まないＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＨＬＡポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞表面上のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに特異的に結合する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞表面上の非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する細胞傷害活性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する検出可能な細胞傷害活性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒト化された抗原結合タンパク質である。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒト抗原結合タンパク質である。
ある特定の実施形態において、結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される。
一態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質を含む第１の抗原結合ドメインと、免疫細胞の細胞表面タンパク質に対して特異性を有する第２の抗原結合ドメインとを含む、二重特異性抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、好中球細胞、単球、及びマクロファージからなる群から選択される。
ある特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態において、免疫細胞の細胞表面タンパク質は、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８９、ＣＤ６４、及びＣＤ３２からなる群から選択される。
ある特定の実施形態において、免疫細胞の細胞表面タンパク質は、ＣＤ３である。
ある特定の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨＨを含み、第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
ある特定の実施形態において、二重特異性抗原結合タンパク質は、多価である。
ある特定の実施形態において、二重特異性抗原結合タンパク質は、３つの抗原結合部位を含む。
ある特定の実施形態において、二重特異性抗原結合タンパク質は、免疫チェックポイント阻害剤を更に含む。
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
別の態様において、本開示は、対象におけるＭＡＧＥ－Ａ４関連癌を治療するための医薬組成物を調製するための、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質の使用を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
別の態様において、本開示は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現癌を治療することを、それを必要とする患者において行う方法であって、治療上有効な量の上述の医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態において、方法は、免疫チェックポイント阻害剤を投与することを更に含む。
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質をコードする核酸を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の核酸を含む、発現ベクターを提供する。
別の態様において、本開示は、上述の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質を製造する方法であって、（ｉ）上述の宿主細胞を、抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質の発現が可能な条件下で培養するステップと、（ｉｉ）抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質を回収するステップと、任意選択により、（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質を更に精製及び／または改変及び／または製剤化するステップとを含む、方法を提供する。
本発明の上記及び他の特徴及び利点は、添付の図面と関連して記される以下の例示的な実施形態の詳細な説明から、より完全に理解されるであろう。本特許または出願書類には、カラーで作成された少なくとも１つの図面が含まれる。カラー図面を含む本特許または特許出願公開の複写は、請求及び必要な手数料の支払に応じて特許庁より提供される。
ＩＭＧＴデータベースから取得した６８アレル全てのウサギカッパ軽鎖配列のＤＮＡ配列アライメントを示す。関連するシステイン８０（星印で記す）をコードするコドンの周辺領域は、高い配列保存性を示している。 ミスマッチを特定することによって、設計したプライマーセットの適格性を確認するために使用したウサギ免疫ライブラリーから無作為に選択した対照抗体のＤＮＡ配列アライメントを示す。関連するシステインを星印で示す。 最適化されたウサギ免疫ライブラリーの６２の配列の系統樹を示す。配列多様性の高いカバレッジが示されている。 ウサギ及びラマの免疫化により作製された３８個のユニークなＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４特異的抗体の選択と、それに続く、各ファージライブラリーの構築及びバイオパニングを示す。選択したヒットを、系統分析によって決定されたアミノ酸配列の多様性に従ってグループ分けした。 直接ＥＬＩＳＡによって決定された、選択された抗体のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４または対照複合体への結合を示す。Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７、及びＭ０７６３と命名された抗体は図５Ａに示され、Ｍ０７００～Ｍ０７１０及びＭ０７６２～Ｍ０７６６と命名された抗体は図５Ｂに示されている。 直接ＥＬＩＳＡによって決定された、選択された抗体のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４または対照複合体への結合を示す。Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７、及びＭ０７６３と命名された抗体は図５Ａに示され、Ｍ０７００～Ｍ０７１０及びＭ０７６２～Ｍ０７６６と命名された抗体は図５Ｂに示されている。 ＭＡＧＥ－Ａ４または対照ペプチド１、２及び３を提示するＴ２細胞に対する選択した抗体Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７、Ｍ０７６３の結合を示す。ＴＡＰ欠損Ｔ２細胞をＨＬＡ－Ａ２拘束ペプチド（ＭＡＧＥ－Ａ４または対照ペプチド）でパルスし、ＭＡＧＥ－Ａ４結合剤、続いて、蛍光標識特異的検出抗体とインキュベートし、フローサイトメトリーにより解析した。ペプチドのローディングは、ＰＥ標識抗ＨＬＡ－Ａ２抗体ＢＢ７．２で確認した。ペプチドロード量に対する結合効率の比の結果を相対平均蛍光強度（ＭＦＩ）で示す。 ＣＤＲ４二重特異性０１によって誘導されたＴ細胞媒介細胞毒性を示す。ＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞株とＰＢＭＣをＥ：Ｔ比１０：１で、指定濃度のＣＤＲ４二重特異性０１と４８時間コインキュベーションした後に放出されたＬＤＨを測定することによって、細胞殺傷を決定した。 ＬＤＨアッセイによって決定された、細胞殺傷のＥＣ５０値を示す。ＬＤＨ放出を、ＰＢＭＣとＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞株をＥ：Ｔ比１０：１で、抗ＰＤ－１（ペンブロリズマブ）と併用したまたは併用しないＭＡＧＥ－Ａ４二重特異性０１の存在下にて４８時間コインキュベーションした後に測定した。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの生細胞イメージングによって決定された、ＣＤＲ４二重特異性０１によって誘導されたＴ細胞媒介細胞毒性を示す。ＭＡＧＥ－Ａ４陽性ＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞を、Ｅ：Ｔ比１０：１のＰＢＭＣと、指定濃度のＣＤＲ４二重特異性０１とコインキュベーションした。ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３システムによって、７２時間まで画像を記録した。細胞毒性の定量を、赤色領域のコンフルエンス（細胞株、Ｃｙｔｏｌｉｇｈｔ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄ）に対する画像あたりの緑色のオブジェクト数（死細胞、Ｃｙｔｏｔｏｘ Ｇｒｅｅｎ Ｄｙｅ）の比として報告する。特異的な殺傷を示すために、ＭＡＧＥ－Ａ４陰性／ＨＬＡ－Ａ２陽性Ｈ４４１細胞を二重特異性の最高濃度（６．３ｎＭ）で対照として使用した。 ｉｎ ｖｉｔｒｏでの生細胞イメージングによって決定された、ＣＤＲ４二重特異性０１によって誘導されたＴ細胞媒介細胞毒性を示す。ＭＡＧＥ－Ａ４陽性／ＨＬＡ－Ａ２陽性ＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞またはＭＡＧＥ－Ａ４陰性／ＨＬＡ－Ａ２陽性細胞（Ｈ４４１及びＭＲＣ５）を、Ｅ：Ｔ比１０：１のＰＢＭＣと、０．８ｎＭの単一濃度のＣＤＲ４二重特異性０１とコインキュベートした。ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３システムを用いて７２時間まで画像を記録した。細胞毒性の定量を、赤色領域のコンフルエンス（細胞株、Ｃｙｔｏｌｉｇｈｔ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄ）に対する画像あたりの緑色のオブジェクト数（死細胞、Ｃｙｔｏｔｏｘ Ｇｒｅｅｎ Ｄｙｅ）の比として報告する。 ＣＤＲ４二重特異性０２分子のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。ＮＳＧマウスに５×１０６個のＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞を皮下注射し、８０ｍｍ３の平均腫瘍サイズで、５×１０６個のＰＢＭＣを静脈内投与した（２ドナー、４マウス／群）。マウスを１日１回、ＣＤＲ４二重特異性０２（０～９日目は２．５ｍｇ／ｋｇ、１０～２７日目は５ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳ対照で処置した。
一般に、本明細書に記載される、細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子学ならびにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法は、当該技術分野においてよく知られ、一般的に使用されるものである。本明細書で提供される方法及び技術は、特に記載のない限り、一般に、当該技術分野においてよく知られている従来の方法に従って、また、本明細書全体を通して引用及び考察される一般的かつより具体的な様々な参考文献に記載されるように実施することができる。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施することができる。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにその研究室での手順及び技術は、当該技術分野においてよく知られ、一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化及び送達、ならびに患者の治療には、標準的な技術が使用される。
本明細書で特に定義のない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。何らかの潜在的な曖昧さがある場合、本明細書に提供する定義が、いかなる辞書または外部の定義よりも優先される。別段文脈によって要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。「または」の使用は、別段の指示がない限り、「及び／または」を意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定するものではない。
本発明がより容易に理解され得るように、まず特定の用語を定義しておく。
抗原結合タンパク質
本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合タンパク質」という用語は、抗原またはエピトープに特異的に結合するまたは免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子または免疫グロブリン由来分子を指し、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方を含み、また、限定するものではないが、断片抗原結合（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組み換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、ＶＨＨ）断片を含む機能性抗体断片も含む。したがって、抗体は、単一ドメイン抗体であるか、または少なくとも１つの可変軽鎖及び少なくとも１つの可変重鎖を含む。一実施形態において、少なくとも１つの可変軽鎖及び少なくとも１つの可変重鎖は、単一ポリペプチド鎖として提示される。「抗体」または「抗原結合タンパク質」という用語は、生殖細胞系列に由来する抗体を含む。「抗体」または「抗原結合タンパク質」という用語は、遺伝子操作されたまたは別様に改変された免疫グロブリンの形態、例えば、イントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ）などを含む。別段の指示がない限り、「抗体」または「抗原結合タンパク質」という用語は、その機能性抗体断片を包含することを理解されたい。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、限定するものではないが、可溶性ＴＣＲではない。
特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、多重特異性である（すなわち、２つ以上の異なる標的分子または同じ標的分子上の２つ以上のエピトープに結合する）。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、二重特異性であり、例えば、２つの異なる標的分子または同じ標的分子上の２つのエピトープに結合する。特定の実施形態において、抗体は、三重特異性であり、例えば、少なくとも３つの異なる標的分子に結合する。
抗原結合タンパク質は、一価または多価であり得、すなわち、１つ以上の抗原結合部位を有する。一価の抗原結合タンパク質の非限定的な例としては、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、ｄＡｂ、ＶＨＨ、Ｖ（ＮＡＲ）、ＤＡＲＰｉｎ、アフィリン及びナノボディが挙げられる。多価の抗原結合タンパク質は、２つ、３つ、４つ以上の抗原結合部位を有することができる。多価の抗原結合タンパク質の非限定的な例としては、全長免疫グロブリン、Ｆ（ａｂ’）２断片、ビス－ｓｃＦｖ（またはタンデムｓｃＦｖもしくはＢｉＴＥ）、ＤＡＲＴ、ダイアボディ、ｓｃＤｂ、ＤＶＤ－Ｉｇ、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－Ｆｃ－ｓｃＦａｂ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ｆｃ－ｓｃＦｖ、Ｆｖ２－Ｆｃ、ＦｙｎｏｍＡＢ、クアドローマ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＤｕｏＢｏｄｙ、トリアボディ及びテトラボディが挙げられる。いくつかの実施形態において、多価の抗原結合タンパク質は、二価であり、すなわち、２つの結合部位が存在する。いくつかの実施形態において、多価の抗原結合タンパク質は、二重特異性であり、すなわち、抗原結合タンパク質は、２つの異なる標的または１つの標的分子上の２つの異なる標的部位を指向する。いくつかの実施形態において、多価の抗原結合タンパク質は、２つを超える、例えば、３つまたは４つの異なる抗原に対して、それぞれ３つまたは４つの異なる結合部位を含む。そのような抗原結合タンパク質は、多価であり、かつ多重特異性であり、特に、それぞれ三重または四重特異性である。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり、限定するものではないが、ダイアボディ、一本鎖ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、タンデムｓｃＦｖまたはＩｇＧ様非対称ヘテロ二重特異性抗体などである。ある特定の実施形態において、多重特異性抗原結合タンパク質の１つまたは複数の結合特異性は、免疫細胞エンゲージャーである（すなわち、免疫細胞の細胞表面タンパク質への結合親和性を含む）。動員され得る免疫細胞の例としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、好中球、単球、及びマクロファージが挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞の動員に使用され得る表面タンパク質の例としては、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８９、ＣＤ６４、及びＣＤ３２が挙げられるが、これらに限定されない。そのような免疫細胞リダイレクト多重特異性抗原結合タンパク質は、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインを含み得る。
ある特定の実施形態において、免疫細胞標的抗原は、ＣＤ３である。例示的なＣＤ３抗原結合ドメインは、以下の表７、ならびに参照により援用されるＷＯ２０１６０８６１９６及びＷＯ２０１７２０１４９３に列挙されている。
本明細書で使用される場合、「単鎖可変断片」（ｓｃＦｖ）は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗原結合タンパク質である。ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬドメインは、当該技術分野で認識されている任意の適切なリンカーを介して連結される。そのようなリンカーには、繰り返しのＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアントが含まれるが、これらに限定されない。ｓｃＦｖは、一般に、抗体定常ドメイン領域を含まないが、本開示のｓｃＦｖは、ｓｃＦｖの様々な特性を改変するために、例えば、限定するものではないが、血清または組織半減期を増加させるために、抗体定常ドメイン領域（例えば、抗体Ｆｃドメイン）に連結または結合されてもよい。ｓｃＦｖは、一般に、約２５ｋＤａの分子量を有し、約２．５ｎｍの流体力学的半径を有する。
本明細書で使用される場合、「Ｆａｂ断片」または「Ｆａｂ」は、可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン及び軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖断片と、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む抗体断片である。
本明細書で使用される場合、「ＶＨＨ」、「ナノボディ」、または「重鎖のみ抗体」は、ラクダ、ラマ、アルパカを含むラクダ科の種に由来する単一重鎖可変ドメインを含む、抗原結合タンパク質である。ＶＨＨは、一般に、約１５ｋＤａの分子量を有する。
一実施形態において、抗原結合タンパク質は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインの存在は、細胞傷害性免疫応答を誘導し、及び／または補体（例えば、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰまたはＣＤＣエフェクター機能）を活性化するのに有利であり得る。Ｆｃドメインを含む例示的な抗体形態は、限定するものではないが、全長免疫グロブリン、ＤＶＤ－Ｉｇ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びｓｃＦｖ－Ｆｃ．ｓｃＦｖ融合体、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓｓｃＦｖ、Ｆｖ２－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体（例えば、ｂｓＡｂ、Ｂｓ１Ａｂ、Ｂｓ２Ａｂ、Ｂｓ３Ａｂ、Ｔｓ１Ａｂ、Ｔｓ２Ａｂ、ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）など）、ＤｕｏＢｏｄｙ及び／またはＣｒｏｓｓＭａｂである。活性型Ｆｃドメインは、腫瘍微小環境において、Ｔ細胞及び他のエフェクター細胞による炎症促進性サイトカイン放出の可能性を増加させ得、これは、治療作用機序の一部であると考えられている。Ｆｃドメインは、完全に活性化されてもよいし、免疫系の過剰な刺激を回避するために、部分的にサイレンシングされてもよい。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、不活性であり、炎症促進性サイトカイン放出を刺激しないが、抗原結合タンパク質の半減期及び／または安定性の改善は保たれる。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択される定常領域を含む。他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ＢまたはＩｇＧ３アイソタイプからなる群から選択される定常領域を含む。
本開示の抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質のドメインを連結する（例えば、ｓｃＦｖを形成するためにＶＨ及びＶＬを連結する、または多重特異性抗原結合タンパク質を形成するために複数の結合ドメインを連結する）ための１つ以上のリンカーを含み得る。
リンカーの例示的な例としては、グリシンポリマー（Ｇｌｙ）ｎ；グリシン－セリンポリマー（ＧｌｙｎＳｅｒ）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８の整数である）；グリシン－アラニンポリマー；アラニン－セリンポリマー；及び当該技術分野において知られている他のフレキシブルリンカーが挙げられる。
グリシン及びグリシン－セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、本明細書に記載される抗原結合タンパク質などの融合タンパク質のドメイン間の中性テザーとして機能することが可能であり得る。グリシンは、他の小さな側鎖アミノ酸よりも非常に多くのΦ－Ψ空間を利用でき、より長い側鎖を持つ残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１：１１７３－１４２（１９９２））。当業者であれば、特定の実施形態における抗原結合タンパク質の設計には、完全にまたは部分的に柔軟性のあるリンカーが含まれ得、そのため、リンカーは、所望の構造を提供するために、フレキシブルリンカーのストレッチだけでなく、低い柔軟性を付与する１つ以上のストレッチも含み得ることを認識するであろう。
しかしながら、リンカー配列は、例えば、ヒトＣＨ１及びＣκ配列の最初の部分に対応するアミノ酸ストレッチまたはヒトＩｇＧのヒンジ領域の下部に対応するアミノ酸ストレッチを使用して、天然リンカー配列に類似するように選択することができる。
ｓｃＦｖ部分において、ＶＬドメインとＶＨドメインを接続するペプチドリンカーの設計は、一般に、例えば、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ及びＴｈｒなどの小さな非極性または極性残基からなるフレキシブルリンカーである。ｓｃＦｖ部分の可変ドメインを接続する特定の例示的なリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４リンカーであり、式中、４は、モチーフの例示的な繰り返し数である。
他の例示的なリンカーとしては、次のアミノ酸配列：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ；ＴＧＥＫＰ（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：５５２５－５５３０（１９９７））；ＧＧＲＲ；（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１、２、３、４または５）（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：１１５６－１１６０（１９９６））；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：１０６６－１０７０（１９９０））；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８））、ＧＧＲＲＧＧＧＳ；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ；及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１（４）：１６３７－１６４４（２００３））が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、フレキシブルリンカーは、タンパク質及びペプチドの３Ｄ構造をモデリングすることが可能なコンピュータープログラムを使用して、またはファージディスプレイ法によって、合理的に設計することができる。
抗体は、可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン及び可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含み得る。ＶＬ及びＶＨの各ドメインは、３つのＣＤＲのセットを更に含む。
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指す。一般に、各重鎖可変ドメインには３つのＣＤＲ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）があり、各軽鎖可変ドメインには３つのＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）がある。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、重鎖及び軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ以外の部分を指すものとして当該技術分野において知られている。一般に、各重鎖可変ドメインに４つのＦＲ（ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、及びＨＦＲ４）があり、各軽鎖可変ドメインに４つのＦＲ（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、及びＬＦＲ４）がある。したがって、抗体可変領域アミノ酸配列は、式ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４によって表すことができる。式の各セグメント、すなわち、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４は、別個のアミノ酸配列（またはそれをコードするポリヌクレオチド配列）を表し、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、及び挿入を含む変異がなされてもよい。ある特定の実施形態において、抗体可変軽鎖アミノ酸配列は、式ＬＦＲ１－ＣＤＲＬ１－ＬＦＲ２－ＣＤＲＬ２－ＬＦＲ３－ＣＤＲＬ３－ＬＦＲ４によって表すことができる。ある特定の実施形態において、抗体可変重鎖アミノ酸配列は、式ＨＦＲ１－ＣＤＲＨ１－ＨＦＲ２－ＣＤＲＨ２－ＨＦＲ３－ＣＤＲＨ３－ＨＦＲ４によって表すことができる。
ある特定の実施形態において、本開示の１つ以上のＣＤＲアミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５つまたはそれ以上のアミノ酸置換）を含む。
ある特定の実施形態において、本開示の１つ以上のフレームワーク領域アミノ酸配列は、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のアミノ酸置換）を含む。
所与のＣＤＲまたはＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、いくつかのよく知られているスキームのいずれかを使用して容易に決定することができ、これらには、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，” ５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６），“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２，７３２－７４５． （「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ Ｐ ｅｔ ａｌ．，“ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｖ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ，” Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３ Ｊａｎｕａｒｙ；２７（１）：５５－７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ Ａ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ，“Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ，” Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２００１ Ｊｕｎ．８；３０９（３）：６５７－７０，（「ＡＨｏ」ナンバリングスキーム）によって記載されているものなどが含まれる。
所与のＣＤＲまたはＦＲの境界は、識別に使用されるスキームに応じて変わり得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは、構造的なアライメントに基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは、構造的な情報に基づいている。ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方のスキームのナンバリングは、最も一般的な抗体領域配列長に基づいており、いくつかの抗体では、挿入文字、例えば、「３０ａ」によって提供される挿入及び欠失が生じる。この２つのスキームでは、特定の挿入及び欠失（「ｉｎｄｅｌ」）を異なる位置に配置するため、ナンバリングに差が生じることになる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づいており、多くの点でＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームと類似している。
以下の表１は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及びＣｏｎｔａｃｔスキームによってそれぞれ特定された、抗体のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３及びＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の例示的な位置境界を示す。ＣＤＲＨ１については、残基ナンバリングは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方のナンバリングスキームを使用して記載されている。ＣＤＲは、ＦＲの間に位置し、例えば、ＣＤＲＬ１は、ＬＦＲ１とＬＦＲ２の間に位置するなどである。示されるＫａｂａｔナンバリングスキームは、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くため、示されるＫａｂａｔナンバリング規則を使用して付番した場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲＨ１ループの末端は、ループの長さに応じて、Ｈ３２からＨ３４の間で変化することに留意されたい。
したがって、別段の指定がない限り、抗体またはその断片、例えば、その可変ドメインの「ＣＤＲ」もしくは「相補性決定領域」、または個々の特定のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２）は、既知のスキームのいずれかによって定義される相補性決定領域（または特定の相補性決定領域）を包含すると理解されたい。同様に、別段の指定がない限り、抗体またはその断片、例えば、その可変ドメインの「ＦＲ」もしくは「フレームワーク領域」、または個々の特定のＦＲ（例えば、「ＨＦＲ１」、「ＨＦＲ２」）は、既知のスキームのいずれかによって定義されるフレームワーク領域（または特定のフレームワーク領域）を包含すると理解されたい。いくつかの場合において、特定のＣＤＲまたはＦＲの識別のためのスキームは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＣｏｎｔａｃｔ法によって定義されたＣＤＲのように指定される。他の場合において、ＣＤＲまたはＦＲの特定のアミノ酸配列が与えられる。
特定の実施形態において、本明細書で開示されるウサギ抗原結合タンパク質は、ヒト化される。本明細書で使用される場合、「ヒト化される」または「ヒト化」という用語は、ヒト抗体により類似するように改変された抗原結合タンパク質を指す。本明細書で開示される核酸ライブラリーにコードされるウサギ抗原結合タンパク質などの非ヒト抗原結合タンパク質は、治療のためにヒトに投与すると、負の免疫応答を惹起するであろう。したがって、ウサギ抗原結合タンパク質をヒト化することは、後の治療的使用に有利である。
特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、リサーフェーシングによりヒト化される（すなわち、非ヒトフレームワークの溶媒露出残基を、よりヒトらしくなるようにリモデリングする）。リサーフェーシング戦略は、ＷＯ２００４／０１６７４０、ＷＯ２００８／１４４７５７、及びＷＯ２００５／０１６９５０に詳述されており、そのそれぞれが参照により本明細書に援用される。
特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＣＤＲグラフティングによりヒト化される（すなわち、ウサギ抗原結合タンパク質ＣＤＲをヒト抗体アクセプターフレームワークに挿入する）。グラフティング戦略及びヒトアクセプターフレームワークは、参照により本明細書に援用されるＷＯ２００９／１５５７２６に詳述されている。
本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、抗体の抗原結合部位と、それが結合するエピトープとの間の相互作用の強さを指す。当業者には容易に理解されるように、抗体または抗原結合タンパク質の親和性は、解離定数（ＫＤ）としてモル濃度単位（Ｍ）で報告され得る。本開示の抗体は、１０－８～１０－１４Ｍの範囲のＫＤ値を有し得る。高親和性抗体は、１０－９Ｍ（１ナノモル、ｎＭ）以下のＫＤ値を有する。例えば、高親和性抗体は、約１ｎＭ～約０．０１ｎＭの範囲のＫＤ値を有し得る。高親和性抗体は、約１ｎＭ、約０．９ｎＭ、約０．８ｎＭ、約０．７ｎＭ、約０．６ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．４ｎＭ、約０．３ｎＭ、約０．２ｎＭ、または約０．１ｎＭのＫＤ値を有し得る。非常に親和性の高い抗体は、１０－１２Ｍ（１ピコモル、ｐＭ）以下のＫＤ値を有する。親和性の弱いまたは低い抗体は、１０－１～１０－４Ｍの範囲のＫＤ値を有し得る。低親和性抗体は、１０－４Ｍ以上、例えば、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１ＭのＫＤ値を有し得る。
特定の抗原決定基（例えば、標的のペプチド－ＭＨＣ）に結合する抗体の能力は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または当業者に知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ機器での分析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、及び従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかにより測定することができる。
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、構造上、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する２つの異なる鎖（ＴＣＲα及びＴＣＲβ）で構成されるヘテロ二量体タンパク質を指す。各鎖の細胞外部分は、可変（「Ｖα」及び「Ｖβ」）及び定常（「Ｃα」及び「Ｃβ」）ドメインと、安定化ジスルフィド結合の形成が生じるヒンジ領域とで構成される。細胞内領域は、別の膜貫通型タンパク質であるＣＤ３と非共有結合的な相互作用を形成し、標的認識が正しい場合には、一連の高次構造変化及び第１のＴ細胞活性化シグナルが生じる。ＴＣＲによるペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）の認識及び結合は、ＴＣＲα（ＣＤＲα１、ＣＤＲα２、ＣＤＲα３）及びＴＣＲβ（ＣＤＲβ１、ＣＤＲβ２、ＣＤＲβ３）の可変ドメインに位置する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる６つの超可変ループによって制御されている。ＣＤＲ３ループ（ＣＤＲα３及びＣＤＲβ３）は、提示ペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸をそれぞれ認識することが示されているＣＤＲα１及びＣＤＲβ１の助けを受けて、プロセシングされた抗原の認識をもたらす（Ｒｕｄｏｌｐｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：４１９－６６．２００６）。ＭＨＣの認識は、典型的に、ＣＤＲα２とＣＤＲβ２の相互作用により達成される。ＴＣＲの高い配列多様性は、Ｖ（Ｄ）Ｊ再構成プロセスにより達成される。このプロセスにおいて、可変ドメインは、遺伝子の組み合わせから生成され、ＴＣＲα及びＴＣＲβの両方はＶ（可変）及びＪ（連結）遺伝子から、ＴＣＲβは更なるＤ（多様性）遺伝子から生成される。ＴＣＲの高い抗原特異性は、胸腺での成熟プロセスによって制御され、自己反応性Ｔ細胞はここで負の選択を受ける。特定のｐＭＨＣに対するＴＣＲ親和性及び機能的なアビディティは、Ｔ細胞の活性化を制御する重要な因子である。しかしながら、抗原認識で重要な役割を果たすのは、親和性、すなわち、ＴＣＲと細胞提示ｐＭＨＣとの間の結合の強さである（Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：２９５２－２９６０．２００７）。ＴＣＲの生理学的親和性は、１μＭ～１００μＭの範囲であり（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５２３－５４４．１９９８）、抗体と比較してかなり低い。
本明細書で使用される場合、「ペプチド－ＭＨＣ」という用語は、抗原性ペプチドが主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）のペプチド結合ポケットに結合したＭＨＣ分子（ＭＨＣ－Ｉまたは－ＩＩ）を指す。ある特定の実施形態において、ＭＨＣは、ヒトＭＨＣである。
ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ抗原結合タンパク質
本明細書に記載されるのは、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質である。抗原結合タンパク質は、標的に対する高い特異性を保持しながら、驚くほど高い結合親和性を有する（すなわち、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ、ＨＬＡポリペプチド単独、またはベータ－２－ミクログロブリン単独を含む他の標的に対する結合親和性が低いか全くない）。
一態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質を提供し、ここで、抗原結合タンパク質は、以下の特徴のうちの１つ以上を含む：
（ｉ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍ（例えば、約１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、または１０－１４Ｍ）の結合親和性を含む、
（ｉｉ）抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ペプチド－ＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む、
（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む、ならびに
（ｉｖ）抗原結合タンパク質結合は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍ（例えば、約１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、または１０－１４Ｍ）の結合親和性と、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、非ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣは、ＭＡＧＥ－Ａ４ポリペプチドと約６０％未満の配列同一性を含む。
ある特定の実施形態において、非ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣは、ＭＡＧＥ－Ａ４ポリペプチドと約８０％の配列同一性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、単離される（すなわち、抗原結合タンパク質は、Ｔ細胞などの細胞の表面に会合または結合していない）。ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、可溶性ＴＣＲ（例えば、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、及び定常ドメインのうちの１つ以上を欠くＴＣＲ）ではない。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む。
ある特定の実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドは、ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドとの複合体である。
ある特定の実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、ベータ－２－ミクログロブインポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１つ以上の変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１、２、３、４、５つの変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１つ以上の変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１、２、３、４、または５つの変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）のうちの１つ以上に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３９４（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ）、配列番号３９５（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ）、及び配列番号３９６（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い（例えば、約１０－６Ｍ、１０－５Ｍ、１０－４Ｍ、１０－３Ｍ、１０－２Ｍ、または１０－１Ｍ）結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、小抗体ミメティックまたは単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－ＮａｒまたはＶＨＨを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表６のＭ０８４８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８４８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）表６のＭ０８４９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８４９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）表６のＭ０８５０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５０に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）表６のＭ０８５１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）表６のＭ０８５２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆ）表６のＭ０８５３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇ）表６のＭ０８５４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈ）表６のＭ０８５５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉ）表６のＭ０８５６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊ）表６のＭ０８５７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５７に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋ）表６のＭ０８５８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５８に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｌ）表６のＭ０８５９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８５９に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｍ）表６のＭ０８６０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６０に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｎ）表６のＭ０８６１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６１に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｏ）表６のＭ０８６２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６２に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｐ）表６のＭ０８６３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６３に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｑ）表６のＭ０８６４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６４に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｒ）表６のＭ０８６５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６５に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｓ）表６のＭ０８６６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、表６のＭ０８６６に記載されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、表６のＭ０８４８～Ｍ０８６６のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列類似性または同一性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表６のＭ０８４８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８４８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）表６のＭ０８４９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８４９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）表６のＭ０８５０に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５０に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）表６のＭ０８５１に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５１に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）表６のＭ０８５２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆ）表６のＭ０８５３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇ）表６のＭ０８５４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈ）表６のＭ０８５５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｉ）表６のＭ０８５６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｊ）表６のＭ０８５７に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５７に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｋ）表６のＭ０８５８に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５８に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｌ）表６のＭ０８５９に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８５９に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｍ）表６のＭ０８６０に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６０に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｎ）表６のＭ０８６１に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６１に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｏ）表６のＭ０８６２に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６２に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｐ）表６のＭ０８６３に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６３に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｑ）表６のＭ０８６４に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６４に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｒ）表６のＭ０８６５に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６５に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｓ）表６のＭ０８６６に記載される抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び表６のＭ０８６６に記載される抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。
ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、表６のＭ０８４８～Ｍ０８６６のいずれか１つに記載されるＶＨまたはＶＬアミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列類似性または同一性を含む。
本開示の特定の抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約５ｎＭ以下（例えば、約５ｎＭ、約４．５ｎＭ、約４ｎＭ、約３．５ｎＭ、約３ｎＭ、約２．５ｎＭ、約２ｎＭ、約１．５ｎＭ、約１ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０１ｎＭ以下）の非常に優れた結合親和性を有する。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１ｎＭ以下（例えば、約１ｎＭ、約０．５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０１ｎＭ以下）の結合親和性を含む。当該抗原結合タンパク質は、コンセンサスＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列と、同一のＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ１、及びＬＣＤＲ２アミノ酸配列との６つのＣＤＲ配列のセットを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含まない。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５７５に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号７９７に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８３に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０５に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５７９に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０１に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８２に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０４に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５８４に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号８０６に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号５５０に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨドメインと、（ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）ならびに配列番号７７２に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬドメインとを含む。
ある特定の実施形態において、ＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、ＨＣＤＲ３アミノ酸配列、ＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
ある特定の実施形態において、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換後でも、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含まない。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８３に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０５に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５７９に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０１に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８４に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号８０６に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
別の態様において、本開示は、標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、（ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、（ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＨドメイン及び配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列を含む、抗体ＶＬドメイン、または配列番号５５０に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＨドメイン及び配列番号７７２に対して、少なくとも８０％の同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性）を含む、ＶＬドメインを含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、次の特徴のうちの１つ以上を含む：（ｉ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む、（ｉｉ）抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、ならびに（ｉｖ）抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性と、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む。
特定の実施形態において、ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、アミノ酸リンカーにより結合される。
ある特定の実施形態において、アミノ酸リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５の整数である。
ある特定の実施形態において、アミノ酸リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＡＳを含む。
別の態様において、本開示は、表６のＭ０８４８～Ｍ０８６６のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。
別の態様において、本開示は、表６のＭ０８４８に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８４９に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５０に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５１に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５２に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５３に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５４に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５５に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５６に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５７に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５８に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８５９に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６０に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６１に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６２に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６３に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６４に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６５に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。別の態様において、本開示は、表６のＭ０８６６に由来するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ２配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ３配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ１配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ２配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ３配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、本明細書で開示される配列のバリアントであり、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ３及び／またはＨＣＤＲ３に置換を含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ１及びＬＣＤＲ３配列に置換を含む。そのいくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
ある特定の実施形態において、ヒトまたはヒト化抗原結合タンパク質は、表６に開示されるＭ０７００～Ｍ０８６６のいずれか、特にＭ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７またはＭ０７６３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列に置換を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３配列に置換を更に含む。
誤解を避けるために、上記の組み合わせは、表６に示される抗原結合タンパク質の対応するＶＬ－ＶＨペアのＣＤＲを指す。
ある特定の実施形態において、そのようなバリアント抗原結合タンパク質は、その標的（例えば、ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に対する特異的結合を保持し、及び／またはその標的への結合について本明細書で開示される抗原結合タンパク質と競合する。バリアント、すなわち、変異配列は、その化学的、生物学的、生物物理学的及び／または生化学的特性について、常法によって試験することができる。ある特定の実施形態において、アミノ酸置換は、親配列の機能的及び／または構造的特徴を実質的に変更しない。したがって、そのような保存的置換（複数可）を含む抗原結合タンパク質の結合特性は、少なくとも実質的には変化しない。ある特定の実施形態において、アミノ酸置換（複数可）は、親配列の二次構造を実質的に改変または破壊しない。
ある特定の実施形態において、バリアント抗原結合タンパク質は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を保持し、及び／または非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含み、及び／または非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含み、及び／または標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性と、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
別の態様において、本開示は、標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－ＮａｒまたはＶＨＨ）を提供する。ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体は、従来の抗体よりも小さいため、腫瘍微小環境への透過性が向上し得る。更に、単一ドメイン抗体の結合面積が小さいことで、ペプチド結合ＭＨＣに対する優れた結合親和性及び特異性を付与し得る。
ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質（例えば、単一ドメイン抗体）は、（ａ）表８のＭ０７３４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｂ）表８のＭ０７３５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｃ）表８のＭ０７３６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｄ）表８のＭ０７３７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｅ）表８のＭ０７３８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｆ）表８のＭ０７３９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｇ）表８のＭ０７４０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｈ）表８のＭ０７４１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｉ）表８のＭ０７４２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｊ）表８のＭ０７４３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｋ）表８のＭ０７４４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｌ）表８のＭ０７４５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｍ）表８のＭ０７４６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｎ）表８のＭ０７４７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｏ）表８のＭ０７４８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｐ）表８のＭ０７４９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｑ）表８のＭ０７５０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、（ｒ）表８のＭ０７５１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、または（ｓ）表８のＭ０７５２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメインを含む。
ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、表８のＭ０７３４～Ｍ０７５２のいずれか１つに記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、またはＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列類似性または同一性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、（ａ）表８のＭ０７３４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｂ）表８のＭ０７３５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｃ）表８のＭ０７３６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｄ）表８のＭ０７３７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｅ）表８のＭ０７３８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｆ）表８のＭ０７３９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｇ）表８のＭ０７４０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｈ）表８のＭ０７４１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｉ）表８のＭ０７４２に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｊ）表８のＭ０７４３に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｋ）表８のＭ０７４４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｌ）表８のＭ０７４５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｍ）表８のＭ０７４６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｎ）表８のＭ０７４７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｏ）表８のＭ０７４８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｐ）表８のＭ０７４９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｑ）表８のＭ０７５０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、（ｒ）表８のＭ０７５１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、または（ｓ）表８のＭ０７５２に記載される抗体ＶＨＨドメインを含む。
ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、表８のＭ０７３４～Ｍ０７５２のいずれか１つに記載されるＶＨＨアミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列類似性または同一性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、少なくとも約１０－９Ｍ（例えば、約１０－９Ｍ、約１０－１０Ｍ、約１０－１１Ｍ、約１０－１２Ｍ、約１０－１３Ｍ、約１０－１４Ｍ）の結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－１０Ｍ～約１０－１２Ｍの結合親和性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４タンパク質に由来しないペプチドとの複合体であるＭＨＣ）に対して、検出可能な結合親和性を欠く。検出可能な結合親和性を欠く抗原結合タンパク質は、陰性対照とほぼ同等の結合親和性である。陰性対照は、抗原結合タンパク質を用いて、追加の抗原を含まない結合親和性測定であり得る。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ペプチドを含まないＭＨＣ（例えば、任意の起源のペプチドと複合体を形成していないＭＨＣ）に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ（例えば、配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載される標的ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列などの標的ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドとは異なるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドとの複合体であるＭＨＣ）に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド単独（例えば、ＭＨＣと複合体を形成していないＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド）に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＨＬＡポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞表面上のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに特異的に結合する。ある特定の実施形態において、細胞は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドでパルスされたＴ２細胞である。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞表面上の非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く。ある特定の実施形態において、細胞は、標的のＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドでパルスされたＴ２細胞である。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する細胞傷害活性を含む。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する検出可能な細胞傷害活性を欠く。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質を含む第１の抗原結合ドメインと、免疫細胞の細胞表面タンパク質に対して特異性を有する第２の抗原結合ドメインとを含む、二重特異性抗原結合タンパク質を提供する。
ある特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、好中球細胞、単球、及びマクロファージからなる群から選択される。
ある特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態において、免疫細胞の細胞表面タンパク質は、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８９、ＣＤ６４、及びＣＤ３２からなる群から選択される。
ある特定の実施形態において、免疫細胞の細胞表面タンパク質は、ＣＤ３である。
ある特定の実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖまたはＶＨＨを含み、第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
ある特定の実施形態において、二重特異性抗原結合タンパク質は、免疫チェックポイント阻害剤を更に含む。
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
別の態様において、本開示は、対象におけるＭＡＧＥ－Ａ４関連癌を治療するための医薬組成物を調製するための、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質の使用を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質をコードする核酸を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の核酸を含む、発現ベクターを提供する。
別の態様において、本開示は、上述の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。
別の態様において、本開示は、上述の抗原結合タンパク質または上述の二重特異性抗原結合タンパク質を製造する方法であって、
（ｉ）上述の宿主細胞を、抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質の発現が可能な条件下で培養するステップと、
（ｉｉ）抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質を回収するステップと、任意選択により、
（ｉｉｉ）抗原結合タンパク質または二重特異性抗原結合タンパク質を更に精製及び／または改変及び／または製剤化するステップとを含む、方法を提供する。
ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣ
本明細書に記載される抗原結合タンパク質は、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣに対する結合特異性を有する。
標的ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ複合体（血清型ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＬＡ－ＫまたはＨＬＡ－Ｌ、またはそれらの各サブタイプなど）またはＭＨＣクラスＩＩ複合体（血清型ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＭまたはＤＯ、またはそれらの各サブタイプなど）上に提示され得る。血清型のそれぞれは、異なるサブタイプを含む。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ＊０２（特に配列番号１の細胞外ドメインを含むＨＬＡ－Ａ＊０２：０１）とも呼ばれるＨＬＡ－Ａ２－ＭＨＣ複合体に結合したペプチドを標的とする。
抗原結合タンパク質の発現
一態様において、本明細書で開示される抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは核酸が提供される。これらのポリヌクレオチドを発現させることを含む、抗原結合タンパク質を作製する方法も提供される。
本明細書で開示される抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、典型的に、所望の量の抗原結合タンパク質を産生するために使用され得る宿主細胞に導入するための発現ベクターに挿入される。したがって、特定の態様において、本発明は、本明細書で開示されるポリヌクレオチドを含む発現ベクター、ならびにこれらのベクター及びポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
「ベクター」または「発現ベクター」という用語は、細胞に所望の遺伝子を導入し、発現させるためのビヒクルとして本発明に従って使用されるベクターを意味するために本明細書で使用される。当業者に知られているように、そのようなベクターは、プラスミド、ファージ、ウイルス及びレトロウイルスからなる群から容易に選択され得る。一般に、本発明と適合性のあるベクターは、選択マーカー、所望の遺伝子のクローニングを容易にするための適切な制限部位、ならびに真核細胞または原核細胞に進入する及び／または複製する能力を含む。
本発明の目的のために、数多くの発現ベクター系が採用され得る。例えば、あるクラスのベクターは、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（例えば、ＲＳＶ、ＭＭＴＶ、ＭＯＭＬＶなど）、またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用する。その他は、内部リボソーム結合部位を含むポリシストロン系の使用を伴う。更に、ＤＮＡが染色体に組み込まれた細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択され得る。マーカーは、栄養要求性宿主に対する原栄養、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）または銅などの重金属に対する耐性を付与し得る。選択マーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結させてもよいし、同時形質転換によって同じ細胞に導入してもよい。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加のエレメントを必要とし得る。これらのエレメントには、シグナル配列、スプライスシグナル、更には、転写プロモーター、エンハンサー、及び終結シグナルが含まれ得る。いくつかの実施形態において、クローニングされた可変領域遺伝子は、上で考察されたように合成された重鎖及び軽鎖定常領域遺伝子（例えば、ヒト定常領域遺伝子）とともに発現ベクターに挿入される。
他の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ポリシストロン性構築物を使用して発現され得る。そのような発現系において、抗体の重鎖及び軽鎖などの複数の目的の遺伝子産物が、単一のポリシストロン性構築物から産生され得る。このような系は、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を有利に使用して、真核生物宿主細胞で比較的に高レベルのポリペプチドを提供する。適合するＩＲＥＳ配列は、米国特許第６，１９３，９８０号に記載されており、全ての目的のために、その全体が参照により本明細書に援用される。当業者であれば、そのような発現系を使用して、本出願に開示される全範囲のポリペプチドを効果的に産生することができることを理解するであろう。
より一般的には、抗体またはその断片をコードするベクターまたはＤＮＡ配列が調製されたら、適切な宿主細胞に発現ベクターを導入することができる。すなわち、宿主細胞が形質転換され得る。プラスミドの宿主細胞への導入は、当業者によく知られた様々な技術によって達成することができる。これらには、トランスフェクション（電気泳動及びエレクトロポレーションを含む）、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープＤＮＡとの細胞融合、マイクロインジェクション、及びインタクトウイルスによる感染が含まれるが、これらに限定されない。Ｒｉｄｇｗａｙ，Ａ．Ａ．Ｇ．“Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ” Ｃｈａｐｔｅｒ ２４．２，ｐｐ．４７０－４７２ Ｖｅｃｔｏｒｓ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ａｎｄ Ｄｅｎｈａｒｄｔ，Ｅｄｓ．（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．１９８８）を参照されたい。プラスミドの宿主への導入は、エレクトロポレーションによるものであり得る。形質転換された細胞は、軽鎖及び重鎖の産生に適切な条件下で成長させ、重鎖及び／または軽鎖タンパク質の合成についてアッセイされる。例示的なアッセイ技術としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光標識細胞分取解析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学などが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「形質転換」という用語は、遺伝子型を変化させ、結果としてレシピエント細胞に変化をもたらす、ＤＮＡのレシピエント宿主細胞への導入を指す広い意味で使用されるものとする。
これと同じ意味で、「宿主細胞」は、組み換えＤＮＡ技術を使用して構築され、少なくとも１つの異種遺伝子をコードするベクターで形質転換された細胞を指す。組み換え宿主からポリペプチドを単離するためのプロセスの説明において、「細胞」及び「細胞培養」という用語は、特に明示されない限り、抗体の供給源を示すために区別なく使用される。換言すれば、「細胞」からのポリペプチドの回収とは、遠心した全細胞、または培地と浮遊細胞の両方を含有する細胞培養液からのいずれかからの回収を意味し得る。
一実施形態において、抗体発現に使用される宿主細胞株は、哺乳動物由来のものである。当業者であれば、発現させる所望の遺伝子産物に最も適した特定の宿主細胞株を決定することができる。例示的な宿主細胞株としては、ＤＧ４４及びＤＵＸＢ１１（チャイニーズハムスター卵巣株、ＤＨＦＲマイナス）、ＨＥＬＡ（ヒト子宮頸癌）、ＣＶ－１（サル腎臓株）、ＣＯＳ（ＳＶ４０ Ｔ抗原を含むＣＶ－１の誘導体）、Ｒ１６１０（チャイニーズハムスター線維芽細胞）、ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎臓株）、ＳＰ２／Ｏ（マウス骨髄腫）、ＢＦＡ－１ｃ１ＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球）、２９３（ヒト腎臓）などが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、細胞株は、細胞株から発現される抗体のグリコシル化に変更を与える（例えば、脱フコシル化）（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）（Ｃｒｕｃｅｌｌ）またはＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞株（Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）細胞）（Ｂｉｏｗａ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．））。宿主細胞株は、典型的に、商業的サービス、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、または公開されている文献から入手可能である。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ産生では、所望のポリペプチドを多量に得るためのスケールアップが可能である。組織培養条件下で哺乳動物細胞を培養するための技術は、当該技術分野において知られており、例えば、エアリフトリアクターもしくは連続攪拌リアクターでの均一系懸濁培養、または、例えば、中空繊維、マイクロカプセル、アガロースマイクロビーズもしくはセラミックカートリッジでの固定化もしくは包括細胞培養が含まれる。必要であれば及び／または所望により、ポリペプチドの溶液は、慣用のクロマトグラフィー法、例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥセルロース上のクロマトグラフィー及び／または（イムノ）アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。
本発明で取り上げられる抗原結合タンパク質をコードする遺伝子は、細菌もしくは酵母などの非哺乳動物細胞または植物細胞で発現させることもできる。この点に関して、細菌などの様々な単細胞非哺乳動物微生物、すなわち、培養または発酵で成長可能である微生物も形質転換できることが理解されよう。形質転換しやすい細菌には、腸内細菌科のメンバー、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａの株；Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ；Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、及びＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅが含まれる。細菌で発現される場合、タンパク質は、封入体の一部となり得ることも更に理解されよう。タンパク質は、単離され、精製され、次いで、機能性分子に組み立てられる必要がある。
原核生物に加えて、真核微生物も使用され得る。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、または一般的なパン酵母が真核微生物のなかでも最も一般的に使用されているが、他の多くの菌株も一般的に利用可能である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓでの発現の場合、例えば、プラスミドＹＲｐ７（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０））が一般的に使用される。このプラスミドは、トリプトファン中で成長する能力を欠く酵母の変異株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６またはＰＥＰ４－１に対して選択マーカーを提供するＴＲＰ１遺伝子を既に含有している（Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７））。そのため、酵母宿主細胞ゲノムの特徴であるｔｒｐ１損傷の存在により、トリプトファンの不在下での成長による形質転換体の検出に有効な環境がもたらされる。
抗原結合タンパク質の操作及び最適化
本開示の抗原結合タンパク質は、操作または最適化され得る。本明細書で使用される場合、「最適化される」または「最適化」は、１つ以上の機能特性を改善するために抗原結合タンパク質を改変することを指す。改変には、抗原結合タンパク質内の１つ以上のアミノ酸の欠失、置換、付加、及び／または修飾が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「機能特性」という用語は、例えば、抗原結合タンパク質の製造特性または治療効果を改善するために、当業者にとって、改善（例えば、抗体などの従来の抗原結合タンパク質と比べて）が望ましい及び／または有利である抗原結合タンパク質の特性である。一実施形態において、機能特性は、安定性（例えば、熱安定性）である。別の実施形態において、機能特性は、可溶性（例えば、細胞条件下）である。更に別の実施形態において、機能特性は、凝集挙動である。更に別の実施形態において、機能特性は、タンパク質発現（例えば、原核細胞において）である。更に別の実施形態において、機能特性は、製造プロセスにおける封入体可溶化後のリフォールディング挙動である。ある特定の実施形態において、機能特性は、抗原結合親和性の改善ではない。別の実施形態において、１つ以上の機能特性の改善は、抗原結合タンパク質の結合親和性に実質的な影響を及ぼさない。
ある特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、ｓｃＦｖであり、抗原結合タンパク質の目的のアミノ酸位置（例えば、少なくとも１つの望ましい特性を有するｓｃＦｖ配列、例えば、品質管理（ＱＣ）アッセイにより選択される配列のデータベースを、成熟抗体配列のデータベース、例えば、Ｋａｂａｔデータベースと比較することによって特定されるアミノ酸位置）に、置換、欠失、及び／または付加するのが好ましいアミノ酸残基を特定することによって、最適化される。したがって、本開示は、特定のアミノ酸残基を選択するための「濃縮／排除」法を更に提供する。更に本開示は、本明細書に記載される「機能的コンセンサス」アプローチを使用して特定された特定のフレームワークアミノ酸位置を変異させることによって、抗原結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ）を操作する方法を提供する。ある特定の実施形態において、フレームワークアミノ酸位置は、既存のアミノ酸残基を、本明細書に記載される「濃縮／排除」分析法を使用して「濃縮された」残基であることが見出された残基で置換することによって変異される。一態様において、本開示は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）における変異のためのアミノ酸位置を特定する方法であって、ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有し、方法は、ａ）ｓｃＦｖ ＶＨ、ＶＬまたはＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を、多数の抗体ＶＨ、ＶＬまたはＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含むデータベースに入力して、ｓｃＦｖ ＶＨ、ＶＬまたはＶＨ及びＶＬアミノ酸配列とデータベースの抗体ＶＨ、ＶＬまたはＶＨ及びＶＬアミノ酸配列をアライメントすることと、ｂ）ｓｃＦｖ ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内のアミノ酸位置を、データベースの抗体ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内の対応する位置と比較することと、ｃ）ｓｃＦｖ ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内のアミノ酸位置が、データベースの抗体ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内の対応する位置に保存されているアミノ酸残基で占められているかどうかを決定することと、ｄ）ｓｃＦｖ ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内のアミノ酸位置が、データベースの抗体ＶＨまたはＶＬアミノ酸配列内の対応する位置に保存されていないアミノ酸残基で占められている場合、そのアミノ酸位置を変異のためのアミノ酸位置として特定することとを含む、方法を提供する。ＳｃＦＶ最適化は、ＷＯ２００８１１０３４８、ＷＯ２００９００００９９、ＷＯ２００９００００９８、及びＷＯ２００９１５５７２５に更に詳細に記載されており、その全ては、参照により本明細書に援用される。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、細胞傷害性免疫応答を誘導しない及び／または補体を活性化しないように修飾されたＦｃドメインを含む。例えば、ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰまたはＣＤＣエフェクター機能が不活性化されるように、１つ以上の置換がＦｃドメインに導入され得る。そのような抗原結合タンパク質は、分子量が６０ｋＤａ未満の抗体断片と比較して、細胞傷害性免疫応答を媒介することなく、半減期が増加するという利点がある。
化学的及び／または生物学的修飾
一態様において、抗原結合タンパク質は、化学的及び／または生物学的に修飾される。例えば、抗原結合タンパク質は、グリコシル化、リン酸化、ヒドロキシル化、ＰＥＧ化、ＨＥＳ化、ＰＡＳ化、硫酸化、色素及び／または放射性同位体による標識、酵素及び／または毒素とのコンジュゲート、及び／またはアルブミン融合技術がなされ得る。同様に、本明細書に記載される任意の核酸配列、プラスミドもしくはベクター及び／または宿主細胞も適宜修飾され得る。
そのような修飾は、例えば、薬力学、水溶性を最適化するために、または副作用を低減させるために行うことができる。例えば、ＰＥＧ化、ＰＡＳ化、ＨＥＳ化及び／または血清アルブミンへの融合は、腎クリアランスを遅らせ、それにより、抗原結合タンパク質の血漿半減期を増加させるために適用され得る。一実施形態において、修飾により、抗原結合タンパク質に異なる機能、例えば、診断用の検出標識またはがん細胞と更に効率的に戦うための毒素が付加される。
一実施形態において、抗原結合タンパク質は、グリコシル化される。グリコシル化とは、タンパク質に炭水化物が結合するプロセスを指す。生物系において、このプロセスは、共翻訳及び／または翻訳後修飾の形態として細胞内で酵素的に実施される。タンパク質はまた、化学的にグリコシル化され得る。炭水化物は、アスパラギンもしくはアルギニン側鎖の窒素にＮ連結されるか、セリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシリジン、もしくはヒドロキシプロリン側鎖のヒドロキシ酸素にＯ連結されるか、ホスホセリンに結合したキシロース、フコース、マンノース、及びＮ－アセチルグルコサミンを利用するか、及び／または特定の認識配列に見出されるトリプトファン残基にマンノース糖が付加され得る。グリコシル化パターンは、例えば、適切な細胞株、培養培地、タンパク質工学の製造様式及びプロセス戦略を選択することによって、制御することができる（ＨＯＳＳＬＥＲ，Ｐ．Ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｄ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２００９，ｖｏｌ．１９，ｎｏ．９，ｐ．９３６－９４９参照）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗原結合タンパク質のグリコシル化パターンは、ＡＤＣＣ及びＣＤＣエフェクター機能を増強するように修飾される。
抗原結合タンパク質は、例えば、１つ以上のグリコシル化部位を欠失及び／または付加することによって、グリコシル化パターンを制御または変更するように操作され得る。グリコシル化部位の創出は、例えば、抗原結合タンパク質のアミノ酸配列に、対応する酵素認識配列を導入することによって達成することができる。
いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＰＥＧ化される。ＰＥＧ化により、タンパク質の薬力学及び薬物動態特性が変化し得る。更に、ＰＥＧ化は、ＰＥＧ化された抗原結合タンパク質を免疫系から遮蔽することで免疫原性を低下させ、及び／または、例えば、抗原結合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ安定性を増加させ、タンパク質分解から保護し、その半減期を延長し、その生体内分布を変えることによって、その薬物動態を変えることができる。典型的に、適切な分子量のポリエチレン－グリコール（ＰＥＧ）がタンパク質に共有結合される。同様の効果は、ＰＥＧミメティックを使用すること、例えば、抗原結合タンパク質をＨＥＳ化またはＰＡＳ化することでも達成することができる。ＨＥＳ化は、ヒドロキシエチルデンプン（「ＨＥＳ」）誘導体を利用する。ＰＡＳ化において、抗原結合タンパク質は、アミノ酸プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）及びセリン（Ｓ）で構成される高次構造が固定されていないポリペプチド配列に連結される。
ある特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、１つ以上の補助的機能を抗原結合タンパク質に付与する第２の部分で標識されるか、またはコンジュゲートされる。例えば、第２の部分は、更なる免疫学的エフェクター機能を有し、薬物のターゲティングに効果的であり、または検出に有用であり得る。第２の部分は、例えば、当該技術分野において知られている方法を使用して、抗原結合タンパク質に化学的に連結または遺伝子的に融合することができる。本明細書で使用される場合、「標識」という用語は、直接的または間接的のいずれかで物理的または化学的手段によって検出または測定したときに、抗原結合タンパク質の存在を示す任意の物質またはイオンを指す。例えば、標識は、限定するものではないが、吸光、蛍光、反射率、光散乱、リン光、もしくは発光特性、放射性によって検出可能な分子もしくはイオン、または核磁気共鳴もしくは常磁性によって検出可能な分子もしくはイオンによって、直接的に検出可能であり得る。間接的な検出の例としては、吸光または蛍光が挙げられ、例えば、適切な基質を、例えば、非吸光分子から吸光分子に、または非蛍光分子から蛍光分子に変換させる様々な酵素が挙げられる。標識された抗原結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの検出または診断目的に特に有用である。例えば、好適な放射性同位体、酵素、蛍光団または発色団で標識された抗原結合タンパク質は、それぞれラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、またはフローサイトメトリーによる単一細胞解析（例えば、ＦＡＣＳ解析）によって検出することができる。同様に、本明細書で開示される核酸及び／またはベクターは、検出または診断目的のために標識され得、例えば、ハイブリダイゼーションアッセイにおいて、その標識断片をプローブとして使用することができる。
第２の部分の非限定的な例としては、放射性同位体（３５Ｓ、３２Ｐ、１４Ｃ、１８Ｆ、及び／または１２５Ｉ）、アポ酵素、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ及び／またはアンギオゲニン）、共因子、ペプチド部分（例えば、ＨＩＳタグ）、タンパク質（例えば、レクチン、血清アルブミン）、炭水化物（例えば、マンノース－６－リン酸タグ）、蛍光団（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ））、フィコエリトリン、緑／青／赤または他の蛍光タンパク質、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、発色団、ビタミン（例えば、ビオチン）、キレート剤、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート）、毒素（例えば、細胞傷害性薬物、または放射性毒素）が挙げられる。
一態様において、本発明は、特定の細胞、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞などの効果的な殺傷を更に増強する毒素にコンジュゲートされた本明細書に記載される抗原結合タンパク質を含む、薬物コンジュゲート（特に抗体薬物コンジュゲートＡＤＣ）に関する。毒素部分は、典型的に、アントラサイクリン毒素、タキソール、グラミシジンＤ及び／またはコルヒチンなどの低分子量部分であり、ペプチドリンカーを介して抗原結合タンパク質に連結され得る。
毒素は、抗原結合タンパク質に非部位特異的または部位特異的にコンジュゲートされ得る。非部位特異的コンジュゲーションは、典型的に、抗体のリジンまたはシステインアミノ酸側鎖へのコンジュゲーションを媒介する、例えば、マレイミド官能基を含む化学リンカーの使用を伴う。部位特異的コンジュゲーションは、当該技術分野において知られている化学的、化学酵素的、または酵素的コンジュゲーションを使用して、例えば、二官能性リンカー、細菌トランスグルタミナーゼもしくはソルターゼ酵素、ホルミルグリシン生成酵素で修飾した抗原結合タンパク質上でのＰｉｃｔｅｔ－Ｓｐｅｎｇｌｅｒ化学反応を可能にするリンカー、またはグリカンをリモデリングした抗原結合タンパク質を利用して達成され得る。
キメラ抗原受容体
一態様において、本開示は、本明細書に記載される抗原結合タンパク質を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、及びかかるＣＡＲを発現するように操作された免疫細胞を提供する。本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、抗原結合に応答して免疫細胞を活性化することが可能な受容体を指す。ＣＡＲは、組み換え膜貫通分子であり、免疫細胞上に有利に発現される。その構造は、典型的に、（ｉ）細胞外ドメイン（エクトドメインまたは抗体ドメイン）、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）細胞質ドメイン（エンドドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
エクトドメイン（すなわち、抗体ドメイン）は、典型的にｓｃＦｖを含むが、他の抗原結合タンパク質が使用されてもよい。スペーサーは、エクトドメインと膜貫通ドメインを接続し、更にエンドドメインに接続される。エクトドメインが抗原に結合すると、受容体クラスター及び活性化シグナルが細胞に伝達され、免疫応答が開始される。第一世代ＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータを含む、単純な構造のエンドドメインを有する。活性化シグナルを増加させるために、第二世代ＣＡＲでは、共刺激ドメインが追加され、第三世代ＣＡＲは、２つ以上の共刺激ドメインを含んでいる（Ｍａｕｓ ＭＶ ｅｔ ａｌ（２０１４）Ｂｌｏｏｄ，１２３：２６２５－２６３５）。当該共刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＯＸ４０及び／または４－１ＢＢからなる群から選択され得る。ＣＤ３－ゼータだけでなく、ＩｇＥ－γドメインのＦｃ受容体を含む他のＩＴＡＭ含有ドメインも探索されている。
好適な免疫細胞には、限定するものではないが、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ヒト胚幹細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）または人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）が含まれる。そのようなＴ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔリンパ球、炎症性Ｔリンパ球、またはヘルパーＴリンパ球またはガンマ－デルタＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋細胞もしくはＣＤ８＋細胞、またはＣＤ４＋細胞とＣＤ８＋細胞の混合集団であり得る。
一態様において、本開示は、ｉ）ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＭＨＣに対する特異性を有する抗原結合タンパク質、ｉｉ）膜貫通ドメイン、及びｉｉｉ）細胞内のシグナル伝達ドメインを含む、ペプチド－ＭＨＣを特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
ある特定の実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｉ型膜貫通タンパク質の人工疎水性配列及び膜貫通ドメイン、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ならびにＣＤ１５４からなる群から選択される。
ある特定の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ鎖の細胞質シグナル伝達ドメイン、ＦｃｙＲＩＩＩ、Ｆｃ受容体の細胞質尾部、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞質受容体、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからなる群から選択される。
抗体ドメインは、上で概説される抗原結合タンパク質のいずれかであり得る。したがって、ある特定の実施形態において、抗体ドメインは、式ＬＦＲ１－ＣＤＲＬ１－ＬＦＲ２－ＣＤＲＬ２－ＬＦＲ３－ＣＤＲＬ３－ＬＦＲ４によって表されるアミノ酸配列を含む、抗体可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、抗体ドメインは、式ＨＦＲ１－ＣＤＲＨ１－ＨＦＲ２－ＣＤＲＨ２－ＨＦＲ３－ＣＤＲＨ３－ＨＦＲ４によって表されるアミノ酸配列を含む、抗体可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。ある特定の実施形態において、抗体ドメインは、本明細書に記載されるｓｃＦｖを含む。
抗原結合タンパク質を投与する方法
本開示の抗原結合タンパク質、更には、本明細書に記載される核酸、本明細書に記載されるベクター、本明細書に記載される宿主細胞（特にＣＡＲを持つ免疫細胞）または本明細書に記載される組成物を調製し、対象に投与する方法は、当業者によく知られており、または当業者によって容易に決定される。本開示の抗原結合タンパク質の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入、または局所であり得る。本明細書で使用される非経口という用語は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または膣内投与を含む。本明細書で使用される眼内という用語は、結膜下、硝子体内、球後、または房内を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される局所という用語は、液体または溶液の点眼薬、乳剤（例えば、水中油型乳剤）、懸濁剤、及び軟膏剤による投与を含むが、これらに限定されない。
これらの全ての投与形態は、本開示の範囲内にあることが明確に企図されるが、投与形態は、注射用溶液であり得る。通常、好適な注射用医薬組成物は、緩衝液（例えば、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択により、安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。しかしながら、本明細書における教示に適合する他の方法において、修飾抗体は、有害な細胞集団の部位に直接送達され得、それにより、罹患組織の治療薬剤への曝露が増加する。
関連する状態の治療のための本開示の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、及び治療が予防であるか治療であるかを含む、多くの異なる因子に応じて変化する。通常、患者は、ヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療することができる。治療投薬量は、安全性及び有効性を最適化するために、当業者に知られている常法を使用して滴定され得る。
前述したように、本開示の抗原結合タンパク質、そのコンジュゲートまたは組み換え体は、哺乳動物の障害のｉｎ ｖｉｖｏ治療のために、薬学的に有効な量で投与され得る。この点において、本開示の抗原結合タンパク質は、投与を容易にし、活性剤の安定性を促進するように製剤化されることが理解されよう。
本開示に係る医薬組成物は、典型的に、薬学的に許容される非毒性の無菌担体、例えば、生理食塩水、非毒性の緩衝液、保存剤などを含む。本出願の目的上、抗原結合タンパク質の薬学的に有効な量は、抗原への効果的な結合を達成し、利益を得るのに十分な量、例えば、疾患もしくは障害の症状を改善するか、物質もしくは細胞を検出するのに十分な量を意味するものとする。腫瘍細胞の場合、抗原結合タンパク質は、典型的に、新生物または免疫反応性細胞上の選択された免疫反応性抗原と相互作用することが可能であり、これらの細胞の死滅を増加させる。当然のことながら、本開示の医薬組成物は、修飾結合ポリペプチドの薬学的に有効な量を提供するために、単回用量または多用量で投与され得る。
本開示の範囲に沿って、本開示の抗原結合タンパク質は、前述の治療方法に従って、治療効果または予防効果をもたらすのに十分な量でヒトまたは他の動物に投与され得る。本開示の抗原結合タンパク質は、そのようなヒトまたは他の動物に、既知の技術に従って、本開示の抗原結合タンパク質を従来の薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって調製される従来の剤形で投与することができる。薬学的に許容される担体または希釈剤の形態及び特徴は、組み合わせられる活性成分の量、投与経路及び他のよく知られている変数によって決定されることが当業者には認識されるであろう。更に、当業者であれば、本開示に記載される抗原結合タンパク質を１種以上含むカクテルが特に有効であることが証明され得ることは理解するであろう。同様に、本明細書に記載される核酸、本明細書に記載されるベクター、本明細書に記載される宿主細胞（特に、ＣＡＲを有する免疫細胞）または本明細書に記載される組成物は、上記の治療方法に従って、治療効果または予防効果をもたらすのに十分な量でヒトまたは他の動物に投与され得る。
本明細書で使用される「有効性」または「ｉｎ ｖｉｖｏ有効性」は、例えば、標準的な眼科効果判定基準などの標準的な効果基準を使用した、本開示の医薬組成物による治療に対する応答を指す。本開示の医薬組成物を使用した治療の成功またはｉｎ ｖｉｖｏ有効性は、意図する目的に対する組成物の有効性、すなわち、所望の効果をもたらす組成物の能力を指す。ｉｎ ｖｉｖｏ有効性は、特定の疾患について確立された標準的な方法によってモニタリングすることができる。加えて、疾患に特異的な様々な臨床化学パラメーター及び他の確立された標準的な方法が使用されてもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される化合物及び細胞は、１つ以上の異なる医薬化合物と組み合わせて投与される。一般に、本明細書に記載される化合物及び細胞の治療的使用は、抗体療法、化学療法、サイトカイン療法、樹状細胞療法、遺伝子療法、ホルモン療法、レーザー光療法、放射線療法またはワクチン療法からなる群から選択される１つ以上の治療法との組み合わせであってもよい。
ＭＡＧＥ－Ａ４媒介性疾患及び障害を治療する方法
一態様において、前述の抗原結合タンパク質、核酸、ベクターまたは宿主細胞（特にＣＡＲを発現する免疫細胞）またはベクターは、医薬品として有用である。典型的に、そのような医薬品は、治療上有効な量の本明細書で提供される分子または細胞を含む。したがって、それぞれの分子または宿主細胞は、１つ以上の障害、特にＭＡＧＥ－Ａ４関連障害の治療に有用な医薬品の生産に使用することができる。
一態様において、ＭＡＧＥ－Ａ４関連障害または媒介性障害を治療する方法が提供される。方法は、薬学的に有効な量の本明細書に記載される分子または宿主細胞、特に抗原結合タンパク質または宿主細胞を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。一実施形態において、そのような薬学的に有効な量の抗原結合タンパク質、核酸、ベクターまたは宿主細胞を含む、上記の医薬組成物が対象に投与される。上記の医薬品は、対象に投与され得る。
別の態様において、本開示は、ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現癌を治療することを、それを必要とする患者において行う方法であって、治療上有効な量の上述の抗原結合タンパク質または上述の医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態において、方法は、免疫チェックポイント阻害剤を投与することを更に含む。
ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
治療を必要とする対象は、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。典型的に、対象は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、イヌ、ネコ、サル、類人猿、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ニワトリ、モルモットまたはブタである。典型的な実施形態において、対象は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連障害と診断されているか、またはかかる障害を発症する可能性がある。動物モデルの場合、動物は、ＭＡＧＥ－Ａ４関連障害を発症するように遺伝子操作され得る。動物モデルにおいて、動物はまた、ＭＡＧＥ－Ａ４関連疾患の特徴を示すように遺伝子操作され得る。
ある特定の実施形態において、ＭＡＧＥ－Ａ４媒介性疾患または障害は、黒色腫、頭頸部癌、卵巣癌、精巣癌、Ｔ細胞白血病／リンパ腫（例えば、ＡＴＬＬ）、膀胱癌及び食道癌からなる群から選択される。本発明はまた、対象のＭＡＧＥ－Ａ４媒介性疾患または障害、特にがんを治療する方法において使用するための、本明細書で開示される抗原結合タンパク質に関する。抗原結合タンパク質に関して本開示に記載される技術的特徴は全て適用可能である。
診断及び検出アッセイにおける使用
本明細書で開示される抗原結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの検出または診断目的のために使用され得る。例えば、特定の細胞または組織における発現を検出するために抗体を使用する幅広いイムノアッセイが当業者に知られている。そのような目的のためには、ビオチンのような検出可能な標識に接続された抗原結合タンパク質を使用するのが有利であり得る。
一実施形態において、記載される抗原結合タンパク質は、サンプル中の標的ペプチド－ＭＨＣ複合体、特にＭＡＧＥ－Ａ４の存在を検出するのに有用である。検出は、定量的目的または定性的目的であり得る。サンプルは、好ましくは、生物学的起源のもの、例えば、血液、尿、脳脊髄液、生検、リンパ液及び／または非血液組織などである。ある特定の実施形態において、生体サンプルは、ヒト患者由来の細胞または組織を含む。ある特定の実施形態において、方法は、生体サンプルと抗原結合タンパク質を、阻害剤と標的ペプチド－ＭＨＣの結合を可能にする条件下で接触させ、次いで、阻害剤－標的複合体を検出することを含む。そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法であってもｉｎ ｖｉｖｏ法であってもよい。いくつかの実施形態において、そのような方法は、本明細書に記載される抗原結合タンパク質による治療に適格である対象を選択するために実施される。
キット
また、本明細書に記載される少なくとも１つの核酸ライブラリーまたは抗原結合タンパク質を、典型的には、説明書とともにパッケージ化された試薬の組み合わせと一緒に含む、キットも企図される。一実施形態において、キットは、単位剤形で有効量の当該抗原結合タンパク質を含有する組成物を含む。そのようなキットは、組成物を含む滅菌容器を含み得、そのような容器の非限定的な例としては、限定するものではないが、バイアル、アンプル、ボトル、チューブ、シリンジ、ブリスターパックが挙げられる。いくつかの実施形態において、組成物は、医薬組成物であり、容器は、医薬品を保持するのに好適な材料で作製されている。一実施形態において、キットは、第１の容器に凍結乾燥形態の抗原結合タンパク質を含み、第２の容器に抗原結合タンパク質を再構成または希釈するための希釈剤（例えば、滅菌水）を含み得る。いくつかの実施形態において、当該希釈剤は、薬学的に許容される希釈剤である。一実施形態において、キットは、診断を目的にするものであり、抗原結合タンパク質は、診断用途のために製剤化される。一実施形態において、キットは、治療を目的にするものであり、抗原結合タンパク質は、治療用途のために製剤化される。
典型的に、キットは、容器内または容器とともに提供される使用説明書が記載された別個のシート、パンフレットまたはカードを更に含む。キットが医薬としての使用を意図している場合、キットは、次のうちの１つ以上を更に含み得る：関連疾患または障害（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ４媒介性疾患または障害）を有する対象に組成物を投与するための情報及び投与スケジュール、治療剤の説明、注意事項、警告、適応症、禁忌、過剰摂取情報及び／または副作用。
本明細書に記載される方法の他の好適な改変及び適合は、本明細書で開示される実施形態の範囲から逸脱することなく、好適な等価物を使用して行うことができることは、当業者には容易に明らかであろう。ここまで特定の実施形態を詳細に説明してきたが、実施形態は、以下の実施例を参照することにより、より明確に理解されるであろう。実施例は、例示のみを目的に含まれるものであり、限定を意図するものではない。
実施例１－免疫抗原としてのＭＨＣ複合体の産生
標準的な分子生物学技術を使用して、ＭＨＣクラスＩ重鎖及びβ２ｍをｐＥＴ－２４Ｄ（＋）ベクターにクローニングした（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９５ Ｊａｎ １３；２７０（２）：９７１－７）。Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ－２１（ＤＥ３）を、供給元のプロトコルに従って発現ベクターで形質転換した。タンパク質発現は、供給元の説明に従って、ＭａｇｉｃＭｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、２２０ｒｐｍで振盪しながら３７℃で１６～１８時間実施した。細胞を回収し、ＢｕｇＢｕｓｔｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で溶解し、封入体を０．５％ＬＤＡＯ含有ＴＢＳで２回、ＴＢＳで２回洗浄した。このように調製した封入体を変性緩衝液（８Ｍ尿素、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ８）中に１ｇの封入体ペレットあたり５ｍＬの緩衝液を使用して可溶化した。標的ペプチド（ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１細胞外ドメイン、ヒトβ２Ｍ、及びＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド２３０－２３９）を含むＭＨＣのリフォールディング及び精製を、基本的にＲｏｄｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．（２００６）に記載されるように実施した。ｐＭＨＣ抗原の各要素のアミノ酸配列を以下の表２に示す。
実施例２－ウサギ免疫化
ＨＬＡ複合体と関連した標的ペプチドを特異的に認識することが可能な多数の抗体を作製するために、組み換え産生されたＭＨＣ複合体で３匹のニュージーランドホワイトウサギを免疫した。各動物に、異なる時点で、完全または不完全フロイントアジュバントを含むｐＭＨＣ複合体の注射を４回行った。動物の免疫応答をＥＬＩＳＡで試験して、免疫動物の血清サンプル中に存在する抗ｐＭＨＣ抗体を定量した。血清中の抗体力価は、優れた免疫応答を示した。
実施例３－ウサギ由来免疫ライブラリーの構築
ウサギから単離したＰＢＭＣ及び脾臓リンパ球から抽出したＲＮＡをＰＣＲ増幅することにより、ｓｃＦｖ抗体ｃＤＮＡライブラリーを構築した。可変軽鎖及び重鎖ドメインのコーディング配列を別々に増幅し、一連のオーバーラップポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ステップにより連結して、最終的なｓｃＦｖ産物を得た。ウサギ由来のｓｃＦｖをコードする増幅ＤＮＡ配列を適切な制限酵素を使用して消化し、その後、ファージミドベクターにライゲートした。このファージミドベクターを、抗体ファージディスプレイライブラリーの作製によく適したＥ．ｃｏｌｉ ＴＧ１エレクトロコンピテントセルに形質転換した。これらのプロセスにより、２つの抗体ライブラリーが得られ、カッパベースのライブラリーは、５．２×１０８の多様性と８７．５％の配列精度、ラムダベースのライブラリーは、２．０×１０９の多様性と９１．７％の精度であった。
実施例４－カッパ軽鎖アレルのアライメント
ＩＭＧＴデータベースには、６８のウサギカッパ軽鎖アレルが掲載されている。全６８アレルのＤＮＡ配列をエクスポートし、アライメントした。６８のアレルのうち、位置８０（Ｋａｂａｔナンバリングによる）にシステインを持たないのは４つのみであり、これは、ウサギカッパ軽鎖レパートリーを含むｓｃＦｖ免疫ライブラリーを最適化することの重要性を示している。このシステインフランキング領域のヌクレオチド配列は、高い配列保存性を示している。これにより、ナイーブウサギカッパ軽鎖レパートリーを完全に網羅するプライマーセットの設計が可能となる。配列のアライメントを図１に示す。
実施例５－プライマーの設計
ウサギカッパ軽鎖の位置８０にあるシステインをアラニンに変異させるようにプライマーを設計した。ヌクレオチド置換Ｃ８０Ａを含む２つのフォワードプライマーを設計した。加えて、カッパ軽鎖レパートリーを全て網羅するには、１０個のリバースプライマーが必要である。以下の表３を参照されたい。プライマーの設計は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏｌａｂｓのＱ５部位特異的プロトコルに従って行った。
概念実証のために、社内のウサギ免疫ライブラリーから２０のクローンを無作為に選んだ。これらのバリアントの配列を決定し、ナイーブウサギカッパ軽鎖レパートリー（ＩＭＧＴデータベース）とアライメントした。成熟抗体の配列アライメントを図２に示す。体細胞超変異プロセス及びウサギ免疫応答における配列再構成を経たこれらの抗体に基づいて、高い多様性を回復しながら免疫ライブラリーレパートリーを変異させる機能について、設計したプライマーセットを評価するために使用した。
選択した２０の配列のうち、１／２０で配列の品質が劣っていた。残りの１９の配列のうち、いかなるミスマッチなくプライマーセットで完全に網羅されたのは、１１／１９（５８％）であった。残りのバリアントのうち、５／１９（２６％）では、フォワードプライマーまたはリバースプライマーのいずれかに１つのヌクレオチドミスマッチが認められた。他の３／１９（１６％）は、２つまたは３つのミスマッチを示した。プライマーアニーリング領域にミスマッチが１つだけある場合でもＰＣＲが機能する可能性があると仮定すると、ライブラリーの回収率は、１６／１９（８４％）であった。
実施例６－社内ウサギｓｃＦｖ免疫ライブラリーの最適化
社内ウサギｓｃＦｖ免疫ライブラリーのＤＮＡ（ファージミド）を鋳型ＤＮＡとして使用して、説明したプライマーセットの全ての可能なプライマー組み合わせを実行した（２０回のＰＣＲ反応）。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏｌａｂｓのＱ５ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキットを提供されたプロトコルに従って使用した。アニーリング温度を６３℃に設定し、３５サイクルを使用し、１ｎｇの元のファージミドＤＮＡを鋳型とした。ＰＣＲ後、ＫＬＤ反応（Ｑ５ Ｓｉｔｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓプロトコルの一部）を各サンプルに対して行い、室温で３０分間、続いて１６℃で３０分間インキュベートした。次いで、ＫＬＤ反応物をＰＣＲ精製の使用により精製し、続いてＴＧ１細胞にエレクトロポレーションした。形質転換した細菌を、１００μｇ／ｍｌのアンピシリン＋１％グルコースを含有する２ｘＹＴプレート上にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。細菌を回収した後、標準的なプロトコルに従ってファージ増幅を開始した。加えて、細菌の連続希釈を行い、形質転換力価を決定すると、元のライブラリーの８．５倍を超えるライブラリーのカバレッジを示した。品質管理のために、各反応のクローン数個の配列を決定した。
実施例７－最適化ライブラリーの品質
最適化ライブラリーの品質を確認するために、２０回のＰＣＲ反応のそれぞれ（合計９６）について、配列を決定した。全てのＰＣＲ反応について、首尾良く最適化されたバリアントが利用可能であった。全体として、予期された置換Ｃ８０Ａを含む正しいインサートは、６４／９６（６７％）特定された。残りの３２配列は、フレームシフト、シーケンシングの問題、及びプライマーのミスマッチなどの様々な問題がある。正しいインサートのパーセンテージが６７％と特定された細菌形質転換のリードアウト内における元のライブラリーの８．５倍の多様性と合わせると、ライブラリー全体のカバレッジは約６倍と決定された。
加えて、配列決定されたバリアント（６４／９６）を、円形系統樹を作成することによって更に分析したところ、図３に示されるように、様々なウサギカッパ軽鎖サブタイプの良好な分布が示された。
実施例８－最適化ライブラリーによるバイオパニング
最適化した社内ウサギｓｃＦｖ免疫ライブラリーを特定のｐＭＨＣ標的に対するバイオパニングに使用した。並行して、元のウサギｓｃＦｖ免疫ライブラリーを最適化ライブラリーの品質及び有効性に対する直接対照として使用した。ファージディスプレイを３ラウンド実施し、その後、特異的なヒットについて、ライブラリーをスクリーニングした。スクリーニングは、特異的標的及び非特異的標的に対するモノクローナルファージＥＬＩＳＡで行った。次いで、非特異的結合からのシグナルに対する特異的標的結合からのシグナルの比を算出し、標的に特異的に結合するヒットを見つけた。データは、表４（元のウサギライブラリー）及び表５（最適化ライブラリー）で確認することができる。
具体的には、表４及び表５は、Ｃｙｓ８０を除去したウサギ由来抗体ライブラリーに対してバイオパニングを３ラウンド行った後のモノクローナルファージＥＬＩＳＡの出力を示している。値は、ＨＬＡ複合体と関連した標的ペプチドＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ複合体と関連した４９個の異なる無関係のペプチド（表９に示される配列番号３４５～３９３）の混合物の結合シグナル比を示す。２．５よりも高い比が灰色で強調され、各データポイントは、提示された１つのファージクローンを表す。
元のライブラリーでは３ラウンドのバイオパニング後に１つの結合剤しか特定されなかったが、最適化ライブラリーでは１３の結合剤が見出された。これは、ウサギ免疫ライブラリーの多様性を完全に利用するために、遊離システインを除去することの証拠を明確に示している。
ラムダライブラリー及び最適化カッパライブラリーを使用して、更なるパニングラウンドを実施した。１９のユニークで標的特異的な抗体が特定された。バイオパニングスクリーニングで特定された１９の抗体ｓｃＦｖ配列を以下の表６に示す。


















































実施例９－一価の単一特異性Ｆａｂまたは二重特異性抗体の抗体発現
一価の単一特異性抗体をＦａｂフォーマットで発現させた。更に、ＣＤ３結合部分を含む二重特異性抗体を、極めて安定で効率的なヘテロ二量体スカフォールドであるＦａｂフォーマットに基づいて発現させた。ＦａｂのＣ末端領域にｓｃＦｖまたはｓｄＡｂを融合させた。ウサギ可変ドメインをヒト定常ドメイン（重鎖及びカッパ軽鎖）と対合させ、標的ｐＭＨＣに結合するキメラＦａｂを作製した。Ｆａｂの軽鎖定常領域のＣ末端に、ＣＤ３に対する結合特異性を持つｓｃＦｖを連結させた。定常ドメイン、アミノ酸リンカー、及びＣＤ３ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を以下の表７に示す。

異なる抗体鎖（すなわち、重鎖及び軽鎖）をコードする合成遺伝子をＴｗｉｓｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎで構築し、ＨＥＫ２９３ ６Ｅ細胞における一過性発現のために発現ベクターに別々にクローニングした。発現ベクターＤＮＡは、従来のプラスミドＤＮＡ精製法（例えば、Ｑｉａｇｅｎ ＨｉＳｐｅｅｄ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ Ｋｉｔ、カタログ番号１２６６２）を使用して調製した。
単一特異性抗原結合タンパク質及びＣＤ３結合部分を含む二重特異性抗原結合タンパク質を、浮遊培養したＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞にそれぞれの哺乳動物発現ベクターをポリエチレンイミン（線状ＰＥＩ ４０ｋＤ）を使用して一過性コトランスフェクションすることによって発現させた。ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞を２ｍＭ Ｌ－グルタミンを添加したＦｒｅｅｓｔｙｌｅ Ｆ１７培地中に１．７×１０６細胞／ｍＬで播種した。最終生産量の１ｍＬごとのＤＮＡを、添加物のない５０μＬの培地にＤＮＡ及びＰＥＩを別々に加えることによって調製した。両方のフラクションを混合し、ボルテックス処理し、１５分間静置すると、１：２．５（１μｇ ＤＮＡ／ｍＬ細胞）のＤＮＡ：ＰＥＩ比となった。細胞とＤＮＡ／ＰＥＩ混合物を一緒にし、次いで、適切な容器に移し、振盪装置内に置いた（３７℃、５％ＣＯ２、８０％ＲＨ）。２４時間後、最終生産量１ｍＬあたり２５μＬのＴｒｙｐｔｏｎｅ Ｎ１を加えた。
７日後、細胞を遠心分離によって回収し、滅菌濾過した。抗原結合タンパク質をアフィニティーステップによって精製した。Ｆａｂベースの構築物をアフィニティー精製するために、上清を、６ＣＶのＰＢＳ（ｐＨ７．４）で平衡化したタンパク質ＣＨカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃４９４３２０００５）にロードした。同じ緩衝液による洗浄ステップの後、１００ｍＭクエン酸（ｐＨ３．０）による段階溶出によって抗原結合タンパク質をカラムから溶出した。所望の抗原結合タンパク質を含むフラクションを１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ９．０）によって１：１０の比率で直ちに中和し、次いで、プールし、透析し、遠心分離によって濃縮した。
濃縮し、ＰＢＳ緩衝液に対して透析した後、精製タンパク質の含有量及び純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びサイズ排除ＨＰＬＣによって評価した。ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞での発現後、タンパク質を１回の捕捉ステップによって精製し、分析的サイズ排除クロマトグラフィーによって分析した。
実施例１０－ラマ由来抗体の作製
ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド複合体を特異的に認識することが可能な抗体を特定する確率をより高めるために、２頭のラマをＨＬＡ Ａ＊０２：０１／ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ複合体で免疫した。各動物に、異なる時点で、完全または不完全フロイントアジュバントを含む、実施例１に記載のｐＭＨＣ複合体タンパク質の注射を４回行った。動物の免疫応答をＥＬＩＳＡで試験して、免疫動物の血清サンプル中に存在する抗ＨＬＡ Ａ＊０２：０１／ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ抗体を定量した。血清中の抗体力価は、優れた免疫応答を示した。
ラマから血液サンプルを採取し、免疫動物の形質細胞からＲＮＡを単離し、逆転写酵素キットを使用してｃＤＮＡに転写した。重鎖断片のｃＤＮＡを、リーダー配列領域及びＣＨ２領域にアニーリングするプライマーを使用して増幅した。ラマ由来のＶＨＨ抗体をコードする増幅ＤＮＡ配列を抗体ライブラリー構築のレパートリー源として使用した。簡潔に述べると、ＤＮＡ配列を適切な制限酵素を使用して消化し、その後、ファージミドベクターにライゲートした。抗体ライブラリーを実施例８に記載されるとおりにスクリーニングした。抗体のアミノ酸配列を以下の表８に示す。

























実施例１１－ヒットの特性評価
ウサギ及びラマ免疫ライブラリーに由来する３８個の選択したＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４結合ヒットの系統分析を、Ｊｏｎｅｓ－Ｔａｙｌｏｒ－Ｔｈｏｒｎｔｏｎ（ＪＴＴ）モデル（ＭＥＧＡＸソフトウェア）に基づく最尤法を使用して実施した。選択した結合剤の配列多様性を図４に示す。選択したヒットは、高い配列多様性及び異なる起源を持つＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４結合剤のコレクションを表している。
ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ２複合体及び対照ペプチド／ＨＬＡ－Ａ２複合体に結合する能力について、利用可能なヒット全てを直接結合ＥＬＩＳＡアッセイで評価した。このアッセイにおける対照ペプチド／ＨＬＡ－Ａ２複合体には、表９（配列番号３４５～３９３）に記載される４９個の無関係のペプチドの混合物がロードされたＨＬＡ－Ａ２複合体を含めた。簡潔に述べると、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに、精製したヒトＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ２複合体または対照ＨＬＡ－Ａ２複合体をコーティングした。抗体分子の連続希釈液をプレートに加え、抗カッパ軽鎖－ＨＲＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）または精製したウサギ抗ＶＨＨ（ＱＶＱ）で検出し、続いて、ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で検出した。結合剤は、ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ２複合体への高い結合を示し、対照ペプチド／ＨＬＡ－Ａ２複合体への結合を示さない場合、更なる特性評価の対象とした。ＥＬＩＳＡで決定した６つの選択抗体Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７及びＭ０７６３のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４複合体への結合を図５Ａに示す。ＥＬＩＳＡで決定したＭ０７００～Ｍ０７１０及びＭ０７６２～Ｍ０７６６と命名した追加の抗体のＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４複合体への結合を図５Ｂに示す。試験した全ての分子は、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４複合体への特異的な結合を示し、対照ＨＬＡ－Ａ２複合体への結合を示さなかった。試験した各抗体は、カッパ軽鎖を含有していたが、Ｍ０７０９及びＭ０７６３は例外としてラムダ軽鎖を含有していた。
細胞上に提示されたＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド－ＨＬＡ－Ａ２複合体に対する特異的抗体Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７及びＭ０７６３の結合を決定した。簡潔に述べると、Ｔ－ＢハイブリッドＴ２細胞を、ＭＡＧＥ－Ａ４または対照ペプチドを含む血清不含ＲＰＭＩ１６４０とインキュベートした。対照ペプチドは、ＭＡＧＥ－Ａ４と同一性の高い配列から構成され、健康なヒト組織で以前に特定されているものである（すなわち、対照１（ＧＬＡＤＧＲＴＨＴＶ；配列番号３９４）、対照２（ＧＬＹＤＧＰＶＨＥＶ；配列番号３９５）及び対照３（ＧＶＦＤＧＬＨＴＶ；配列番号３９６）（ＵＳ２０１８０１７１０２４；参照により本明細書に援用される））。ペプチドのローディング効率は、ペプチドがロードされたＴ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２結合抗体ＢＢ７．２の平均蛍光強度（ＭＦＩ）とロードのないＴ２細胞のＭＦＩ（＞１）との比を使用して検証した。Ｔ２細胞を特異的抗体のそれぞれとインキュベートし、続いて、蛍光標識検出抗体（抗カッパ軽鎖または抗Ｆｌａｇ）とインキュベートした。細胞を固定し、フローサイトメトリーによって蛍光を測定した。ＭＡＧＥ－Ａ４または対照ペプチド１、２及び３を提示するＴ２細胞に対する選択した抗体Ｍ０７０９、Ｍ０７３９、Ｍ０７４２、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７、Ｍ０７６３の結合及び特異性を図６に示す。試験した全ての分子が、Ｔ２細胞上に提示されたＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４への結合を示した。更に、Ｍ０７４３、Ｍ０７４７及びＭ０７６３は、ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、非常に高い特異性を示し、Ｔ２細胞上のＨＬＡ－Ａ２によって提示された対照ペプチドのいずれにも結合を示さなかった。Ｍ０７０９は、試験した全ての分子のなかで最も低い特異性を示し、対照ペプチド１及び２にも結合した。Ｍ０７３９及びＭ０７４２はいずれもＭＡＧＥ－Ａ４提示ペプチドだけでなく対照ペプチド２にも結合した。
実施例１２－ｐＨＬＡ－ターゲティング二重特異性抗体を使用した抗原陽性細胞株及び抗原陰性細胞株のリダイレクトＴ細胞殺傷
ペプチド－ＨＬＡ（ｐＨＬＡ）ターゲティング二重特異性抗体による腫瘍細胞株のリダイレクトＴ細胞殺傷をエンドポイントにおける細胞毒性測定（ＬＤＨ放出）及びリアルタイムイメージング（ＩｎｃｕＣｙｔｅ）によって決定した。
乳酸脱水素酵素放出アッセイを実施した。簡潔に述べると、標的細胞とエフェクター細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を約１０：１のＥ：Ｔ比で共培養した。０．４ｎＭ～４０ｎＭの濃度範囲をカバーするＣＤＲ４二重特異性０１抗体Ｍ０７１９の溶液を該当するウェルに加えた。細胞毒性を、４８時間後に損傷を受けた細胞から培地中に放出されるＬＤＨの量を比色吸光光度で測定することによって定量した。分析は、ＨＬＡ－Ａ２発現抗原陽性細胞株（例えば、Ａ３７５（黒色腫）、Ｕ２０Ｓ（骨肉腫）、ＳＣａＢＥＲ（膀胱癌）及びＮＣＩ－Ｈ１７０３（非小細胞肺腺癌）で実施した。得られたデータを図７に示す。試験した抗体ＣＤＲ４二重特異性０１は、低濃度でも、抗原陽性腫瘍細胞に対する強力なＴ細胞媒介殺傷を示した。
更に、ＣＤＲ４二重特異性０１については、免疫チェックポイント阻害剤であるペンブロリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）との組み合わせにおいてもＬＤＨアッセイで試験した。簡潔に述べると、ＬＤＨアッセイは、上記のように実施した。細胞殺傷のＥＣ５０を、ＰＢＭＣとＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞株Ａ３７５、Ｕ２０Ｓ、ＳＣａＢＥＲ及びＮＣＩ－Ｈ１７０３をＥ：Ｔ比１０：１で、３００ｎＭ 抗ＰＤ－１抗体（ペンブロリズマブ）と併用したまたは併用しないＭＡＧＥ－Ａ４二重特異性０１（濃度範囲０．０７８～４０ｎＭ）の存在下にて４８時間コインキュベーションした後のＬＤＨ放出によって決定した。ＣＤＲ４二重特異性０１及びペンブロリズマブとＣＤＲ４二重特異性０１の組み合わせによる細胞殺傷のＥＣ５０値をプロットし、図８に示す。ＣＤＲ４二重特異性０１は、ペンブロリズマブと組み合わせると、ＨＬＡ－Ａ２／ＭＡＧＥ－Ａ４陽性細胞の相乗的な殺傷を示し、ＥＣ５０値は、ＣＤＲ４二重特異性０１単独よりも１．４倍～２．７倍高かった。加えて、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３システムを使用して、細胞殺傷を時間分解的に分析した。簡潔に述べると、上記のように、細胞をエフェクター細胞とともに播種し、二重特異性抗体で処理した。簡潔に述べると、抗原陽性標的細胞（例えば、ＮＣＩ－Ｈ１７０３、Ａ３７５）または抗原陰性標的細胞（例えば、ＮＣＩ－Ｈ４４１、Ｐａｎｃ－１）をＣｙｔｏｌｉｇｈｔ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、＃４７０６）とインキュベートした。ＣＤＲ４二重特異性抗体０１溶液を６．２５ｎＭ～０．１ｎＭの最終濃度で調製し、該当するウェルに加えた。Ｃｙｔｏｔｏｘ Ｇｒｅｅｎ Ｄｙｅ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、＃４６３３）をＰＢＭＣに加えた。細胞成長をモニタリングするために、プレートを経時的に撮像した。各画像におけるがん細胞の成長を、時間０に対して正規化した赤色領域のコンフルエントとして決定し、記録した。各画像におけるアポトーシス細胞数を、時間０に対して正規化した赤色領域あたりの緑色領域として決定し、記録した。試験した二重特異性抗体ＣＤＲ４二重特異性０１は、抗原陽性腫瘍細胞に対して、強力な用量依存的Ｔ細胞媒介殺傷を経時的に示し、抗原陰性細胞の殺傷は観察されなかった（図９）。
加えて、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性／ＨＬＡ－Ａ２陽性ＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞及びＭＡＧＥ－Ａ４陰性／ＨＬＡ－Ａ２陽性細胞（ＮＣＩ－Ｈ４４１（肺腺癌）及びＭＲＣ５（正常ヒト線維芽細胞））を、ＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ１０：１）と、濃度０．８ｎＭのＣＤＲ４二重特異性０１とコインキュベートした。ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３システムを用いて７２時間まで画像を記録した。それぞれの細胞毒性を図１０に示す。ＣＤＲ４二重特異性０１は、ＭＡＧＥ－Ａ４陽性／ＨＬＡ－Ａ２陽性ＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞に対して強力な殺傷を示し、対照ＭＡＧＥ－Ａ４陰性／ＨＬＡ－Ａ２陽性癌細胞ＮＣＩ－Ｈ４４１及び正常線維芽細胞ＭＲＣ５に対しては殺傷を示さなかったことから、良好な有効性及び安全性が示された。
実施例１３－マウスの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に対するｐＨＬＡ－ターゲティング二重特異性抗体の有効性
ＮＳＧマウスに５×１０６個のＮＣＩ－Ｈ１７０３細胞を皮下移植した。平均腫瘍サイズが８０ｍｍ３になったら（０日目と記す）、動物を無作為化し、５×１０６個のＰＢＭＣを静脈内投与した。ＰＢＭＣは合計２ドナーに由来し、１ドナーにつき１群あたりマウス２匹とした。マウスを１日１回、ＣＤＲ４二重特異性０２（０～９日目は２．５ｍｇ／ｋｇ、１０～２７日目は５ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳ対照で処置した。体重及び腫瘍体積（ノギスによる）を週２回測定した。ＣＤＲ４二重特異性０２のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を図１１に示す。ＣＤＲ４二重特異性０２は、肺癌腫瘍異種移植マウスにおいて完全な退縮を示した。

実施例１４－選択ウサギ抗体の親和性向上
Ｍ０７６３と命名したウサギ抗体を使用して、選択したＣＤＲ領域内に置換を含む多くの親和性成熟バリアントを作製した。ＣＤＲＬ１（ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ、配列番号４７２）、ＣＤＲＬ２（ＲＤＴＳＲＰＳ、配列番号４７３）、及びＣＤＲＨ１（ＳＮＹＡＭＳ、配列番号４６９）は変化させず、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３にのみ置換を加えた。
Ｍ０７６３抗体のヒト化バージョンに基づいて、ヒト化抗体ライブラリーから親和性向上バリアントを特定した。簡潔に述べると、６つの全ＣＤＲの全長にわたって連続する３つのアミノ酸を一度にランダム化するように、複数の抗体ライブラリーを設計した。部位飽和変異導入用のプライマーを使用してライブラリーを作製した。したがって、ランダム化の対象となった３つのアミノ酸位置には、１９の可能なアミノ酸バリエーションのうちの１つが含まれた。Ｅ．ｃｏｌｉ ＴＧ－１細胞にエレクトロポレーションした後、トランスフェクトしたＴＧ－１細胞の連続希釈を使用して、寒天プレート上にライブラリーをプレーティングすることによって、ライブラリーの多様性を推定した。各Ｅ．ｃｏｌｉコロニーに１つのプラスミドが挿入されていると仮定して、プレート上で成長したコロニー数をライブラリー多様性の指標として使用した。更に、ライブラリー品質を、ライブラリーあたりおよそ１０個のクローンのサンプルをシーケンシングすることによって評価した。
軽鎖に部位飽和変異導入を含むライブラリーを１つのライブラリーにまとめ、重鎖に部位飽和変異導入を含むライブラリーをもう１つのライブラリーにまとめた。軽鎖及び重鎖のＣＤＲをランダム化して得られた２つのライブラリーを、ヒト組み換え産生ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ０２複合体タンパク質に対する親和性選択（以後、バイオパニングと呼ぶ）に供した。ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ０２特異的ファージライブラリーは、ポリスチレンチューブまたはプレート上に吸着させた抗原におけるパニング（選択）に供される。あるいは、可溶性ビオチン化抗原を使用して、溶液中でパニングを実施することもできる。所望の特異性を有する抗体が得られるまで、典型的に２～５ラウンドである数回の選択ラウンドを行うことができる。バイオパニング条件のストリンジェンシーは、特に後続の選択ラウンドにおいて、例えば、固相にコーティングする抗原の密度を減らすか、または洗浄ステップの量を増やすことによって調整することができる。ファージの表面への非特異的結合を回避するために、２％スキムミルク及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したＰＢＳをブロック剤として使用することができる。
選択したファージ抗体クローンを９６ウェルプレートで成長させ、ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ０２複合体タンパク質に特異的に結合する能力をＥＬＩＳＡによってアッセイした。ファージ抗体クローンの特異性を評価するために、無関係のペプチドとの複合体であるＨＬＡ－Ａ０２に対するカウンタースクリーニングをＥＬＩＳＡによって実施した。次いで、ファージ抗体クローンを、ＥＬＩＳＡで、標的複合体タンパク質及び無関係のペプチドとの複合体であるＨＬＡ－Ａ０２に対するシグナルについて、高シグナル、中シグナル、低シグナルに分類した。標的複合体に対する結合シグナルが高く、無関係のペプチド－ＨＬＡ－Ａ０２複合体に対する結合が低いクローンの配列を決定した。配列解析により、ユニークなクローンの特定が容易になり、次いで、これを抗ＣＤ３ ＦＡＢ×抗ＭＡＧＥ－Ａ４ ｓｃＦｖの二重特異性フォーマットで組み換え的に発現させるために選択した。次いで、得られた構築物を、ＭＡＧＥ－Ａ４／ＨＬＡ－Ａ０２複合体に対する結合親和性についてＳＰＲで評価した（表１０）。親和性成熟クローンは、２桁のピコモルという低い結合親和性を示し、親Ｍ０７６３抗体と比較して結合親和性がほぼ１０００倍改善した。
バリアントＶＨドメイン及びＶＬドメインのアミノ酸配列を以下に示す。














































































































































ＣＤＲ領域に稀に生じるアミノ酸の最適化
追加ステップにおいて、免疫原性のリスクを低減するために抗ＭＡＧＥ－Ａ４抗体を操作した。このために、ヒトレパートリーには稀にしか生じないアミノ酸残基の存在について、抗ＭＡＧＥ－Ａ４抗体のＣＤＲ配列を調べた。通常とは異なるＣＤＲ配列中のアミノ酸配列を、ヒト抗体のデータベースで頻繁に見られるアミノ酸残基で置き換えた（これらの残基は、ヒト抗体中に天然に存在することから、免疫原性のリスクが低いと思われる）。生殖細胞系列解析及び比較的保存された位置における定義されたアミノ酸の出現頻度により、ＣＤＲＨ２中にはヒト抗体レパートリーには稀にしか生じない３つのアミノ酸が存在することが明らかになり、したがって、免疫原性の危険因子が増加していると考えられる。
関連するＨＣＤＲ２配列は、
である。親ウサギ抗体Ｍ０７６３中に存在する下線で示したＳＷＡモチーフを、ヒト抗体のデータベースで頻繁に見られる配列ストレッチであるＤＳＶで置換した。このモチーフが免疫原性に及ぼす生物学的関連性や潜在的な影響は依然として不明であるが、ＳＷＡをＤＳＶに置換することによって、稀にしか生じないモチーフであるＳＷＡを欠く２つのバリアントを作製した。Ｍ１３３５及びＭ１３４２と命名されたバリアントをＳＰＲで更に特性評価を行ったところ、この置換が結合親和性に及ぼす影響は有意でないとみなされた。バリアントＭ１３３５及びＭ１３４２のＶＨ、ＶＬ、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列は、上記のとおりである。

Claims (78)

  1. 標的の黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、以下の特徴のうちの１つ以上を含む、前記抗原結合タンパク質：
    （ｉ）前記抗原結合タンパク質は、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む、
    （ｉｉ）前記抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、
    （ｉｉｉ）前記抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、ならびに
    （ｉｖ）前記抗原結合タンパク質は、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性と、前記ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
  2. 配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
  3. 前記ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドが、ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドとの複合体である、請求項１または２に記載の抗原結合タンパク質。
  4. 前記ＨＬＡ－Ａ２ポリペプチドが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗原結合タンパク質。
  5. 前記ベータ－２－ミクログロブリンポリペプチドが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗原結合タンパク質。
  6. 配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるアミノ酸配列中に１つ以上の変異（例えば、置換、欠失、及び／または挿入）を含むＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドに対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  7. 単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、小抗体ミメティックまたは単一ドメイン抗体、例えばｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ、Ｖ－ＮａｒまたはＶＨＨを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  8. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  9. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  10. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  11. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  12. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  13. （ａ）ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号４７０）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号４７１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    （ｂ）ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＳＤＧＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号４７４）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  14. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５７５に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７９７に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号７９７に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  15. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５８３に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号８０５に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  16. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５７９に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号８０１に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  17. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５８２に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号８０４に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  18. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５８４に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列、または配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号８０６に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  19. （ａ）フレームワーク領域、ＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであって、配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列、または配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号５５０に記載されるＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域、及びＨＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＨドメインと、
    （ｂ）フレームワーク領域、ＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであって、配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列、または配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列のフレームワーク領域に対して少なくとも８０％の同一性ならびに配列番号７７２に記載されるＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域、及びＬＣＤＲ３領域に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ＶＬドメインと
    を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  20. 前記ＨＣＤＲ１アミノ酸配列、前記ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、前記ＨＣＤＲ３アミノ酸配列、前記ＬＣＤＲ１アミノ酸配列、前記ＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び前記ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つ以上が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項８～１９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  21. 前記抗原結合タンパク質が、前記１つ以上のアミノ酸置換後でも、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する、請求項２０に記載の抗原結合タンパク質。
  22. 前記ＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインのうちの１つ以上が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項８～２１のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  23. 前記抗原結合タンパク質が、前記１つ以上のアミノ酸置換後でも、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する、請求項２２に記載の抗原結合タンパク質。
  24. 標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、
    ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＸ１Ｘ２Ｘ３ＫＧ（配列番号８８１）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列（式中、Ｘ１は、アミノ酸ＳまたはＤに対応し、Ｘ２は、アミノ酸ＷまたはＳに対応し、Ｘ３は、アミノ酸ＡまたはＶに対応する）、及びＤＬＹＹＧＰＸ４ＴＸ５ＹＸ６Ｘ７Ｘ８ＮＬ（配列番号８８２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ４は、アミノ酸Ｔ、Ｎ、またはＳに対応し、Ｘ５は、アミノ酸Ｄに対応するか、または不在であり、Ｘ６は、アミノ酸ＳまたはＦに対応し、Ｘ７は、アミノ酸ＡまたはＶに対応し、Ｘ８は、アミノ酸ＦまたはＡに対応する）を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＳＧＳＮＦＱＸ１２（配列番号８８３）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列（式中、Ｘ９は、アミノ酸ＳまたはＲに対応し、Ｘ１０は、アミノ酸ＤまたはＰに対応し、Ｘ１１は、アミノ酸Ｇ、Ｓ、またはＦに対応し、Ｘ１２は、アミノ酸ＬまたはＡに対応する）を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、前記抗原結合タンパク質。
  25. 標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、
    ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５７）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＳＴＹＦＶＡＮＬ（配列番号７３１）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７９）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、前記抗原結合タンパク質。
  26. 配列番号５８３に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０５に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８３に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＨドメイン及び配列番号８０５に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＬドメインを含む、請求項２５に記載の抗原結合タンパク質。
  27. 標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、
    ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＡＮＬ（配列番号７２７）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＤＦＳＧＳＮＦＱＬ（配列番号８７５）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、前記抗原結合タンパク質。
  28. 配列番号５７９に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０１に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬドメイン、または配列番号５７９に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＨドメイン及び配列番号８０１に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＬドメインを含む、請求項２７に記載の抗原結合タンパク質。
  29. 標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、
    ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５８）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＮＴＤＹＳＡＡＮＬ（配列番号７３２）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８８０）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、前記抗原結合タンパク質。
  30. 配列番号５８４に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨドメイン及び配列番号８０６に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬドメイン、または配列番号５８４に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＨドメイン及び配列番号８０６に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＬドメインを含む、請求項２９に記載の抗原結合タンパク質。
  31. 標的黒色腫関連抗原Ａ４（ＭＡＧＥ－Ａ４）ペプチド－ＭＨＣ（ｐＭＨＣ）を特異的に認識する抗原結合タンパク質であって、
    ＳＮＹＡＭＳ（配列番号４６９）のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＩＶＳＳＧＧＴＴＹＹＡＳＷＡＫＧ（配列番号６２４）のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＤＬＹＹＧＰＴＴＹＳＡＦＮＬ（配列番号６９８）のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、
    ＴＡＤＴＬＳＲＳＹＡＳ（配列番号４７２）のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、ＲＤＴＳＲＰＳ（配列番号４７３）のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＡＴＲＰＳＳＧＳＮＦＱＡ（配列番号８４６）のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインと
    を含む、前記抗原結合タンパク質。
  32. 配列番号５５０に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＨドメイン及び配列番号７７２に記載されるアミノ酸配列を含む抗体ＶＬドメイン、または配列番号５５０に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＨドメイン及び配列番号７７２に対して少なくとも８０％の同一性を含むＶＬドメインを含む、請求項３１に記載の抗原結合タンパク質。
  33. 前記抗原結合タンパク質が、以下の特徴のうちの１つ以上を含む、請求項２４～３２のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質：
    （ｉ）前記抗原結合タンパク質は、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む、
    （ｉｉ）前記抗原結合タンパク質は、非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ及び／またはペプチドを含まないＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、
    （ｉｉｉ）前記抗原結合タンパク質は、非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む、ならびに
    （ｉｖ）前記抗原結合タンパク質は、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性と、前記ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド、ＨＬＡポリペプチド、及びベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、約１０－６Ｍまたはそれよりも弱い結合親和性を含む。
  34. 配列番号３（ＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶ）に記載されるＭＡＧＥ－Ａ４ペプチドアミノ酸配列に対する特異性を含む、請求項２４～３２のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  35. 前記ＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインが、アミノ酸リンカーにより結合される、請求項８～３４のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  36. 前記アミノ酸リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、式中、ｎは、１～５の整数である、請求項３５に記載の抗原結合タンパク質。
  37. 前記アミノ酸リンカーが、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＡＳを含む、請求項３５または３６に記載の抗原結合タンパク質。
  38. （ａ）表８のＭ０７３４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｂ）表８のＭ０７３５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｃ）表８のＭ０７３６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｄ）表８のＭ０７３７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｅ）表８のＭ０７３８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｆ）表８のＭ０７３９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｇ）表８のＭ０７４０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｈ）表８のＭ０７４１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｉ）表８のＭ０７４２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｊ）表８のＭ０７４３に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｋ）表８のＭ０７４４に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｌ）表８のＭ０７４５に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｍ）表８のＭ０７４６に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｎ）表８のＭ０７４７に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｏ）表８のＭ０７４８に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｐ）表８のＭ０７４９に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｑ）表８のＭ０７５０に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｒ）表８のＭ０７５１に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン、または
    （ｓ）表８のＭ０７５２に記載されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列、ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、抗体ＶＨＨドメイン
    を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  39. （ａ）表８のＭ０７３４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｂ）表８のＭ０７３５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｃ）表８のＭ０７３６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｄ）表８のＭ０７３７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｅ）表８のＭ０７３８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｆ）表８のＭ０７３９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｇ）表８のＭ０７４０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｈ）表８のＭ０７４１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｉ）表８のＭ０７４２に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｊ）表８のＭ０７４３に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｋ）表８のＭ０７４４に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｌ）表８のＭ０７４５に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｍ）表８のＭ０７４６に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｎ）表８のＭ０７４７に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｏ）表８のＭ０７４８に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｐ）表８のＭ０７４９に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｑ）表８のＭ０７５０に記載される抗体ＶＨＨドメイン、
    （ｒ）表８のＭ０７５１に記載される抗体ＶＨＨドメイン、または
    （ｓ）表８のＭ０７５２に記載される抗体ＶＨＨドメイン
    を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  40. 前記ＨＣＤＲ１アミノ酸配列、前記ＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び前記ＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちの１つ以上が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項３８に記載の抗原結合タンパク質。
  41. 前記抗原結合タンパク質が、前記１つ以上のアミノ酸置換後でも、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する、請求項４０に記載の抗原結合タンパク質。
  42. 前記ＶＨＨドメインが、１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項３９に記載の抗原結合タンパク質。
  43. 前記抗原結合タンパク質が、前記１つ以上のアミノ酸置換後でも、前記標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対する結合特異性を保持する、請求項４２に記載の抗原結合タンパク質。
  44. 前記ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、少なくとも約１０－９Ｍの結合親和性を含む、請求項１～４３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  45. 前記ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－９Ｍ～約１０－１４Ｍの結合親和性を含む、請求項１～４３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  46. 前記ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、約１０－１０Ｍ～約１０－１２Ｍの結合親和性を含む、請求項１～４３のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  47. 非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  48. ペプチドを含まないＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  49. 非標的のＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  50. ＭＡＧＥ－Ａ４ペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  51. ＨＬＡポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  52. ベータ－２－ミクログロブリンポリペプチド単独に対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  53. 前記抗原結合タンパク質が、細胞表面上の前記ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに特異的に結合する、請求項１～５２のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  54. 細胞表面上の非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣに対して、検出可能な結合親和性を欠く、請求項１～５２のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  55. ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する細胞傷害活性を含む、請求項１～５４のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  56. 非ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現細胞に対する検出可能な細胞傷害活性を欠く、請求項１～５５のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  57. 前記抗原結合タンパク質が、ヒト化抗原結合タンパク質である、請求項１～５６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  58. 前記抗原結合タンパク質が、ヒト抗原結合タンパク質である、請求項１～５６のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  59. 前記結合親和性が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される、請求項１～５８のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質。
  60. 請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質を含む少なくとも第１の抗原結合ドメインと、免疫細胞の細胞表面タンパク質に対して特異性を有する少なくとも第２の抗原結合ドメインとを含む、二重特異性抗原結合タンパク質。
  61. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、好中球細胞、単球、及びマクロファージからなる群から選択される、請求項６０に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  62. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項６０または６１に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  63. 免疫細胞の細胞表面タンパク質が、ＣＤ３、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ８９、ＣＤ６４、及びＣＤ３２からなる群から選択される、請求項６０～６２のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  64. 免疫細胞の細胞表面タンパク質が、ＣＤ３である、請求項６０～６３のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  65. 前記少なくとも第１の抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖまたはＶＨＨを含み、前記少なくとも第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂを含む、請求項６０～６４のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  66. 前記二重特異性抗原結合タンパク質が、多価である、請求項６０～６５のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  67. 前記二重特異性抗原結合タンパク質が、３つの抗原結合部位を含む、請求項６０～６５のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  68. 免疫チェックポイント阻害剤を更に含む、請求項６０～６７のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  69. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６８に記載の二重特異性抗原結合タンパク質。
  70. 対象におけるＭＡＧＥ－Ａ４関連癌を治療するための医薬組成物を調製するための、請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質または請求項６０～６９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質の使用。
  71. 請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質または請求項６０～６９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  72. ＭＡＧＥ－Ａ４ ｐＭＨＣ発現癌を治療することを、それを必要とする患者において行う方法であって、治療上有効な量の請求項７１に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。
  73. 免疫チェックポイント阻害剤を投与することを更に含む、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
  75. 請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質または請求項６０～６９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質をコードする核酸。
  76. 請求項７５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
  77. 請求項７６に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
  78. 請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質または請求項６０～６９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質を製造する方法であって、
    （ｉ）請求項７７に記載の宿主細胞を、請求項１～５９のいずれか１項に記載の抗原結合タンパク質または請求項６０～６９のいずれか１項に記載の二重特異性抗原結合タンパク質の発現が可能な条件下で培養するステップと、
    （ｉｉ）前記抗原結合タンパク質または前記二重特異性抗原結合タンパク質を回収するステップと、任意選択により、
    （ｉｉｉ）前記抗原結合タンパク質または前記二重特異性抗原結合タンパク質を更に精製及び／または改変及び／または製剤化するステップと
    を含む、前記方法。
JP2023555203A 2021-03-09 2022-03-09 Ｍａｇｅ－ａ４ペプチド－ｍｈｃ抗原結合タンパク質 Pending JP2024509910A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163158691P 2021-03-09 2021-03-09
US63/158,691 2021-03-09
US202163172864P 2021-04-09 2021-04-09
US63/172,864 2021-04-09
PCT/IB2022/052119 WO2022190009A1 (en) 2021-03-09 2022-03-09 Mage-a4 peptide-mhc antigen binding proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024509910A true JP2024509910A (ja) 2024-03-05

Family

ID=80787264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023555203A Pending JP2024509910A (ja) 2021-03-09 2022-03-09 Ｍａｇｅ－ａ４ペプチド－ｍｈｃ抗原結合タンパク質

Country Status (7)

Country Link
US (1) US11912771B2 (ja)
EP (1) EP4304726A1 (ja)
JP (1) JP2024509910A (ja)
KR (1) KR20230169944A (ja)
AU (1) AU2022233285A1 (ja)
CA (1) CA3210289A1 (ja)
WO (1) WO2022190009A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022190009A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Cdr-Life Ag Mage-a4 peptide-mhc antigen binding proteins
WO2023110918A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Cdr-Life Ag Dual mhc-targeting t cell engager

Family Cites Families (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7199231B1 (en) 1991-05-23 2007-04-03 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor MAGE-4 and 41 and uses thereof
GB9524973D0 (en) 1995-12-06 1996-02-07 Lynxvale Ltd Viral vectors
AU5992999A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Ludwig Institute For Cancer Research Tumor antigens and ctl clones isolated by a novel procedure
US7311914B2 (en) 2002-08-13 2007-12-25 Ludwig Institute For Cancer Research MAGE-A4 antigenic peptides and uses thereof
AU2003264009A1 (en) 2002-08-15 2004-03-03 Epitomics, Inc. Humanized rabbit antibodies
US20050033031A1 (en) 2003-08-07 2005-02-10 Couto Fernando Jose Rebelo Do Methods for humanizing rabbit monoclonal antibodies
US7807392B1 (en) 2003-09-15 2010-10-05 Celera Corporation Lung disease targets and uses thereof
KR101130597B1 (ko) 2005-09-13 2012-04-02 다카라 바이오 가부시키가이샤 Ｔ 세포 리셉터 및 그 리셉터를 코드하는 핵산
EP3202786A3 (en) 2007-03-12 2017-10-11 ESBATech, an Alcon Biomedical Research Unit LLC Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
NZ601583A (en) 2007-05-21 2013-08-30 Bristol Myers Squibb Co Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
US9908945B2 (en) 2007-06-25 2018-03-06 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Sequence based engineering and optimization of single chain antibodies
CA2689941C (en) 2007-06-25 2019-10-29 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
EP3241843B1 (en) 2008-06-25 2021-07-28 Novartis AG Solubility optimization of immunobinders
PL2307458T3 (pl) 2008-06-25 2018-08-31 Esbatech, An Alcon Biomedical Research Unit Llc Humanizacja przeciwciał króliczych z zastosowaniem uniwersalnego zrębu przeciwciała
EP2470568A2 (en) * 2009-08-29 2012-07-04 Abbott Laboratories Therapeutic dll4 binding proteins
JP2014530009A (ja) 2011-09-29 2014-11-17 エーピーオー‐ティー ビー．ヴイ． 異常細胞を標的とする多重特異性結合分子
CA2968878A1 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
GB201505305D0 (en) 2015-03-27 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against various tumors
NL2014935B1 (en) 2015-06-08 2017-02-03 Applied Immune Tech Ltd T cell receptor like antibodies having fine specificity.
DK3440106T3 (da) 2016-04-08 2021-10-04 Adaptimmune Ltd T-cellereceptorer
KR102473964B1 (ko) 2016-04-08 2022-12-06 이뮤노코어 리미티드 T 세포 수용체
MX2018012268A (es) 2016-04-08 2019-02-07 Adaptimmune Ltd Receptores de celulas t.
JP7042467B2 (ja) 2016-05-20 2022-03-28 ハープーン セラピューティクス，インク． 単鎖可変フラグメントｃｄ３結合タンパク質
CA3055791A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 Genocea Biosciences, Inc. Treatment methods
WO2018225732A1 (ja) 2017-06-05 2018-12-13 国立大学法人三重大学 Ｍａｇｅ－ａ４由来ペプチドを認識する抗原結合性タンパク質
CA3072816A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Gritstone Oncology, Inc. Antigen-binding proteins targeting shared antigens
WO2019133853A1 (en) 2017-12-28 2019-07-04 Gritstone Oncology, Inc. Antigen-binding proteins targeting shared antigens
GB201803750D0 (en) 2018-03-08 2018-04-25 Immunocore Ltd Method
JP7326764B2 (ja) 2018-03-09 2023-08-16 東ソー株式会社 腫瘍マーカーならびに腫瘍細胞を夾雑細胞と区別して回収および検出する方法
US20210238543A1 (en) 2018-06-04 2021-08-05 Apo-T B.V. Methods and means for attracting immune effector cells to tumor cells
CN108866098A (zh) 2018-07-27 2018-11-23 北京安斯晨睿生物科技有限公司 携带mage-a4突变抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用
GB201819540D0 (en) 2018-11-30 2019-01-16 Adaptimmune Ltd T cell modification
GB201901306D0 (en) 2019-01-30 2019-03-20 Immunocore Ltd Multi-domain binding molecules
EP3714941A1 (en) 2019-03-27 2020-09-30 Medigene Immunotherapies GmbH Mage-a4 tcrs
CN114585646A (zh) 2019-06-18 2022-06-03 里珍纳龙药品有限公司 Mage-a4 t细胞受体及其使用方法
WO2021016585A1 (en) 2019-07-24 2021-01-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors with mage-a4 specificity and uses thereof
DE102019121007A1 (de) 2019-08-02 2021-02-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Antigenbindende Proteine, die spezifisch an MAGE-A binden
US20210032370A1 (en) 2019-08-02 2021-02-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Recruiting agent further binding an mhc molecule
CN110333352A (zh) 2019-08-07 2019-10-15 基因科技（上海）股份有限公司 肿瘤相关自身抗体及肿瘤标志物联合检测试剂盒
US20210230278A1 (en) 2019-12-18 2021-07-29 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies binding to HLA-A2/MAGE-A4
CA3176391A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Memorial Sloan-Kettering Cancer-Center Anti-cd3 antibodies and uses thereof
BR112022022369A2 (pt) 2020-05-04 2023-03-14 Immunorizon Ltd Construtos precursores de anticorpo triespecífico e métodos de uso destes
CA3178582A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Dennis Robert WILLIAMS Method of treatment of cancer or tumour
CA3178588A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Mark Edward DUDLEY Method of treatment of cancer or tumour
CN114524878A (zh) 2020-11-23 2022-05-24 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
WO2022190009A1 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Cdr-Life Ag Mage-a4 peptide-mhc antigen binding proteins
EP4304725A1 (en) 2021-03-09 2024-01-17 CDR-Life AG Rabbit-derived antigen binding protein nucleic acid libraries
BR112023023067A2 (pt) 2021-05-04 2024-01-30 Regeneron Pharma Receptores de antigénios quiméricos com especificidade mage-a4 e usos dos mesmos
WO2022262678A1 (zh) 2021-06-15 2022-12-22 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多特异性抗原结合蛋白及其应用
WO2023011273A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多特异性抗原结合蛋白及其应用
WO2023011268A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种多特异性抗原结合蛋白及其应用
AU2022323246A1 (en) 2021-08-04 2024-02-15 Abpro Corporation Cd3 targeting antibodies and uses thereof
WO2023044402A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Adimab, Llc Anti-cd3 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
CA3210289A1 (en) 2022-09-15
US11912771B2 (en) 2024-02-27
KR20230169944A (ko) 2023-12-18
WO2022190009A1 (en) 2022-09-15
AU2022233285A1 (en) 2023-10-19
US20220380472A1 (en) 2022-12-01
EP4304726A1 (en) 2024-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210040177A1 (en) Multi-Specific Molecules
CN105555804B (zh) 对EGFRvIII有特异性的抗体结合位点
AU2018218753A1 (en) Anti-GPRC5D antibody and molecule containing same
CN110229232B (zh) 双特异性抗体及其用途
WO2017180713A1 (en) Anti-psma antibodies and use thereof
US20200024358A1 (en) Trispecific antigen binding proteins
JP7457822B2 (ja) 抗ｃｄ３および抗ｃｄ１２３二重特異性抗体およびその使用
US11912771B2 (en) MAGE-A4 peptide-MHC antigen binding proteins
US20220340894A1 (en) Rabbit-derived antigen binding protein nucleic acid libraries and methods of making the same
WO2023125888A1 (zh) 一种gprc5d抗体及其应用
TW202016143A (zh) 全人源的抗ｌａｇ－３抗體及其應用
TW202132351A (zh) 抗cd47/抗pd-l1抗體及其應用
WO2022127844A1 (zh) Cd5抗体及其应用
WO2022135536A1 (zh) Cd3人源化抗体及其应用
CN116234559A (zh) 抗cd22单结构域抗体和治疗性构建体
US20240091262A1 (en) Mage-a4 peptide dual t cell engagers
CN117751146A (zh) Mage-a4肽-mhc抗原结合蛋白
WO2023186100A1 (zh) 抗ror1的抗体及其用途
WO2022117032A1 (zh) 抗cd22的纳米抗体及其用途
WO2023110918A1 (en) Dual mhc-targeting t cell engager
WO2024017326A1 (zh) 抗gprc5d纳米抗体及其应用
WO2023088295A1 (zh) 一种多特异性抗体及其药物用途
WO2022121941A1 (zh) 抗人msln的抗体及其用途
WO2022002006A1 (zh) Fab-HCAb结构的结合蛋白
TW202246340A (zh) 抗ctla-4抗體及其應用