JP2024067566A - Piezo2 receptor gene expression promoter, and piezo2 receptor protein production promoter - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤、化粧料、及び化粧料の使用感の評価方法に関する。 The present invention relates to a Piezo2 receptor gene expression promoter, a Piezo2 receptor protein production promoter, a cosmetic product, and a method for evaluating the usability of a cosmetic product.
化粧料は、保湿等の機能価値だけでなく、塗布する際の香りや使用感等といった感情価値も重要であるとされている。感情価値は、化粧料の使用時における満足感を高めるとともに、継続使用や高級感の演出等においても欠かせない要素と考えられている。 Cosmetics are considered to have not only functional value, such as moisturizing, but also emotional value, such as the scent and feel when applied. Emotional value not only increases satisfaction when using cosmetics, but is also considered an essential element in encouraging continued use and creating a sense of luxury.
化粧料を皮膚に塗布する際には、手で撫でるような軽い接触圧等が伴う。この接触圧等に起因する皮膚への機械刺激は、皮膚内の各種受容器・受容体に受容され、触覚として認識される。 When applying cosmetics to the skin, light contact pressure is applied, like stroking with the hand. The mechanical stimulation to the skin caused by this contact pressure is received by various receptors and receptors in the skin and is recognized as a sense of touch.
上記触覚機能を担う受容体の一つとして、ヒト表皮に存在するメルケル細胞に発現するＰｉｅｚｏ２受容体が知られている。Ｐｉｅｚｏ２受容体は、特に、優しくゆっくりと押される弱機械刺激を受容し、その弱機械刺激はＡβ神経線維を介して脳の一次等の体性感覚野に伝達される。このように、Ｐｉｅｚｏ２受容体は、皮膚に加えられた弱機械刺激を脳に伝達する弱機械刺激伝達機能を有する。また、手で撫でられる際に発生する別の弱機械刺激伝達においては、例えば、Ｃ神経線維を介した刺激信号も関わっており、その刺激信号は脳の島皮質後部等に伝達される。そして、体性感覚野と島皮質後部との間における双方向の情報処理を通じて、換言すると、お互いに影響し合うことによって、気持ち良い、心地良い等の感情が想起されると考えられている（非文献特許１参照）。 One of the receptors responsible for the above-mentioned tactile function is the Piezo2 receptor, which is expressed in Merkel cells present in the human epidermis. The Piezo2 receptor, in particular, receives weak mechanical stimuli from gentle, slow pressure, and the weak mechanical stimuli are transmitted to the primary somatosensory cortex of the brain via Aβ nerve fibers. In this way, the Piezo2 receptor has a weak mechanical stimuli transmission function that transmits weak mechanical stimuli applied to the skin to the brain. In addition, in another weak mechanical stimuli transmission that occurs when being stroked with the hand, for example, a stimulation signal via C nerve fibers is also involved, and the stimulation signal is transmitted to the posterior insular cortex of the brain. It is believed that feelings such as good feeling and comfortableness are evoked through bidirectional information processing between the somatosensory cortex and the posterior insular cortex, in other words, by mutual influence (see Non-Patent Document Patent 1).
このＰｉｅｚｏ２受容体が機械刺激を受容することによって発揮される触覚機能は、加齢に伴って鈍化（低下）するため、かかる機能鈍化を改善することが検討されている。 The tactile function exerted by the Piezo2 receptor receiving mechanical stimuli weakens (decreases) with age, so research is being conducted to improve this weakening of function.
例えば、人工的に作製された合成ペプチド（デカペプチド：構成成分はアルギニン、グルタミン酸等）を用いてメルケル細胞のＰｉｅｚｏ２受容体等の遺伝子発現量を増加させることにより、老化によって低下するメルケル細胞の機能の向上に寄与し得る可能性を示唆したものがある（非特許文献２参照）。 For example, it has been suggested that the use of an artificially produced synthetic peptide (decapeptide: components include arginine, glutamic acid, etc.) to increase gene expression levels of the Piezo2 receptor and other genes in Merkel cells may contribute to improving the function of Merkel cells, which declines with age (see Non-Patent Document 2).
非特許文献２は、Ｐｉｅｚｏ２受容体と、感情価値との関係に着目したものではない。また、非特許文献２で用いられる合成ペプチドは、自然由来のものではない。 Non-Patent Document 2 does not focus on the relationship between the Piezo2 receptor and emotional value. In addition, the synthetic peptide used in Non-Patent Document 2 is not of natural origin.
このため、自然由来でありながら、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、化粧料の使用時の満足感（感情価値）を高め得る材料は、これまでに無く、そのような材料が要望されている。 For this reason, there has not been a material to date that is naturally derived yet enhances the tactile function when applied to human skin and increases the sense of satisfaction (emotional value) when using cosmetics, and there is a demand for such a material.
また、上記のような材料があれば、生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において、メルケル細胞のＰｉｅｚｏ２受容体を比較的多く産生することが可能となるため、Ｐｉｅｚｏ２受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。 Furthermore, the availability of such materials would make it possible to produce relatively large amounts of Piezo2 receptors in Merkel cells outside the body (in vitro), which would also promote research and development using the Piezo2 receptor.
一方、ショウガ（根茎）の抽出物は、血行促進作用をはじめ抗菌作用、抗炎症作用を有するとされており、加えて、表皮角化細胞やＣ神経線維をはじめとする求心性神経に発現するＴＲＰＶ１受容体を刺激して温感刺激を伝達するとされている。ウンシュウミカンの抽出物は、血流促進作用、抗アレルギー作用を有するとされている。 On the other hand, ginger (rhizome) extract is said to have blood circulation promoting effects as well as antibacterial and anti-inflammatory effects, and in addition, it is said to stimulate the TRPV1 receptor expressed in epidermal keratinocytes and afferent nerves such as C nerve fibers, thereby transmitting thermal stimuli. Unshu mandarin extract is said to have blood flow promoting effects and anti-allergic effects.
しかし、ショウガの抽出物やウンシュウミカンの抽出物と、これらを塗布した際に脳内で想起される触覚機能や感情価値との関係は、何ら検討されていない。 However, no research has been done into the relationship between ginger extract or satsuma mandarin extract and the tactile functions or emotional values evoked in the brain when they are applied.
本発明は、上記事情に鑑み、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進し得るＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進し得るＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤、ヒトの皮膚に塗布した際の感情価値を高め得る化粧料、及び化粧料の使用感の評価方法を提供することを目的とする。 In view of the above circumstances, the present invention aims to provide a Piezo2 receptor gene expression promoter that is naturally derived and can promote the expression of the Piezo2 receptor gene, a Piezo2 receptor protein production promoter that is naturally derived and can promote the production of the Piezo2 receptor protein, a cosmetic that can enhance the emotional value when applied to human skin, and a method for evaluating the usability of a cosmetic.
上記課題を解決するための本発明に係るＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤の特徴構成は、
ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにある。
The Piezo2 receptor gene expression promoter according to the present invention for solving the above problems has the following characteristic features:
The present invention is characterized by containing an extract of ginger and/or satsuma mandarin as an active ingredient.
本構成のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤によれば、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進することができる。これにより、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現量が増加するため、その遺伝子が有する遺伝情報に基づいて産生されるＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。その結果、例えばＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を皮膚に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができる。具体的には例えば、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を化粧料に配合する場合、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。また、例えばＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を比較的多く産生可能となるため、Ｐｉｅｚｏ２受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。 According to the Piezo2 receptor gene expression promoter of this configuration, by containing naturally derived ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient, it is possible to promote the expression of the Piezo2 receptor gene while being naturally derived. This increases the expression amount of the Piezo2 receptor gene, and therefore it is possible to promote the production of the Piezo2 receptor protein produced based on the genetic information possessed by the gene. As a result, for example, when the Piezo2 receptor gene expression promoter is applied to the skin, it is possible to enhance the weak stimulus transmission function (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulus signal) inherent to the Piezo2 receptor protein. Specifically, for example, when the Piezo2 receptor gene expression promoter is blended into a cosmetic, it is possible to enhance the tactile function when applied to human skin and to enhance the emotional value. Furthermore, for example, when a Piezo2 receptor gene expression promoter is applied to Merkel cells outside the body (in vitro), it becomes possible to produce a relatively large amount of Piezo2 receptor protein, which will also lead to the promotion of research and development using the Piezo2 receptor.
本発明に係るＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤において、
前記抽出物は、水及びエタノールの混合液による抽出物であることが好ましい。
In the Piezo2 receptor gene expression promoter according to the present invention,
The extract is preferably an extract with a mixture of water and ethanol.
本構成のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤によれば、上記抽出物が水及びエタノールの混合液による抽出物であることによって、ショウガ及び／又はウンシュウミカンからの有効成分の抽出効率が高められたものとなる。 According to the Piezo2 receptor gene expression promoter of this configuration, the extract is an extract from a mixture of water and ethanol, which increases the extraction efficiency of the active ingredients from ginger and/or satsuma mandarin.
本発明に係るＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤において、
前記抽出物の濃度が１～５００μｇ／ｍＬとなるように調整してあることが好ましい。
In the Piezo2 receptor gene expression promoter according to the present invention,
It is preferable that the concentration of the extract is adjusted to 1 to 500 μg/mL.
本構成のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤によれば、抽出物の濃度（含有量）を上記の適切な範囲となるように調整することにより、メルケル細胞に直接接触させることで、細胞毒性を抑えつつ、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現をより促進することができる。 According to the Piezo2 receptor gene expression promoter of this configuration, by adjusting the extract concentration (content) to the appropriate range described above and directly contacting it with Merkel cells, it is possible to further promote the expression of the Piezo2 receptor gene while suppressing cytotoxicity.
上記課題を解決するための別の本発明に係るＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤の特徴構成は、
ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにある。
The Piezo2 receptor protein production promoter according to another aspect of the present invention for solving the above problems has the following characteristic features:
The present invention is characterized by containing an extract of ginger and/or satsuma mandarin as an active ingredient.
本構成のＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤によれば、上述したように、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。この産生促進により、例えばＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を皮膚に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができる。具体的には例えば、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を化粧料に配合する場合、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。また、例えばＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を比較的多く産生可能となるため、Ｐｉｅｚｏ２受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。 According to the Piezo2 receptor protein production promoter of this configuration, as described above, by containing the naturally derived ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient, it is possible to promote the production of Piezo2 receptor protein through the promotion of expression of the Piezo2 receptor gene, even though it is naturally derived. By this promotion of production, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is applied to the skin, it is possible to enhance the weak stimulus transmission function (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulus signal) inherent to the Piezo2 receptor protein. Specifically, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is blended into a cosmetic, it is possible to enhance the tactile function when applied to human skin and to enhance the emotional value. In addition, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is applied to Merkel cells outside the body (in vitro), it is possible to produce a relatively large amount of Piezo2 receptor protein, which also leads to the promotion of research and development using the Piezo2 receptor.
上記課題を解決するための別の本発明に係る化粧料の特徴構成は、
ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物をＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進するための有効成分として含有することにある。
Another characteristic feature of the cosmetic composition according to the present invention for solving the above problems is as follows:
The present invention is characterized in that it contains an extract of ginger and/or satsuma mandarin as an active ingredient for promoting the expression of the Piezo2 receptor gene.
本構成の化粧料によれば、上述したように、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物をＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進するための有効成分として含有することにより、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。その結果、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができるため、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。 As described above, the cosmetic composition of this configuration contains naturally occurring ginger and/or satsuma mandarin extracts as active ingredients for promoting the expression of the Piezo2 receptor gene, and thus the production of the Piezo2 receptor protein can be promoted through the promotion of the expression of the Piezo2 receptor gene. As a result, the weak stimulus transmission function inherent to the Piezo2 receptor protein (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulating signal) can be enhanced, thereby enhancing the tactile function when applied to human skin and increasing the emotional value.
本発明に係る化粧料において、
前記抽出物の濃度が０．００２～６ｍｇ／ｍＬとなるように調整してあることが好ましい。
In the cosmetic composition according to the present invention,
It is preferable that the concentration of the extract is adjusted to 0.002 to 6 mg/mL.
本構成の化粧料によれば、抽出物の濃度（含有量）を上記の適切な範囲となるように調整することにより、ヒトの皮膚に塗布した際の感情価値をより高めることができる。 According to the cosmetic composition of this configuration, by adjusting the concentration (content) of the extract to fall within the appropriate range described above, it is possible to further increase the emotional value when applied to human skin.
上記課題を解決するための別の本発明に係る化粧料の使用感の評価方法の特徴構成は、
上述した化粧料の使用感の評価方法であって、
前記化粧料を手の甲に塗布した後、前記化粧料の使用感を、前記化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を選択することによって評価することにある。
The method for evaluating the usability of a cosmetic product according to another aspect of the present invention for solving the above problems is characterized by the following features:
A method for evaluating the usability of the above-mentioned cosmetic product, comprising:
After applying the cosmetic to the back of the hand, the feeling of use of the cosmetic is evaluated by selecting a plurality of words that indicate the feelings evoked when applying the cosmetic.
本構成の化粧料の使用感の評価方法によれば、化粧料を手の甲に塗布した後、化粧料の使用感を、化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を選択することによって評価することにより、ヒトの皮膚に塗布した際の使用感に基づいて、感情価値を適切に評価することができる。 According to the method for evaluating the usability of cosmetics of this configuration, after applying the cosmetic to the back of the hand, the usability of the cosmetic is evaluated by selecting a number of words that indicate the emotions evoked when applying the cosmetic, so that the emotional value can be appropriately evaluated based on the usability when applied to human skin.
本発明者らは、後述する実施例欄に挙げる植物抽出物以外にも種々の多数の植物抽出物を用い、メルケル細胞に含まれるＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進するうえで有効な植物抽出物のスクリーニングを行った。その結果、ショウガの抽出物、ウンシュウミカンの抽出物がＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進に有効であることを確認し、本発明を完成するに至った。 The inventors used a variety of plant extracts other than those listed in the Examples section below to screen for plant extracts that are effective in promoting the expression of the Piezo2 receptor gene contained in Merkel cells. As a result, they confirmed that ginger extract and Satsuma mandarin extract are effective in promoting the expression of the Piezo2 receptor gene, leading to the completion of the present invention.
本発明のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤、化粧料、及び化粧料の使用感の評価方法の実施形態について、以下に説明する。ただし、本発明は、以下に説明する実施形態に記載される構成に限定されることを意図しない。なお、本明細書において数値範囲を示す表記「～」がある場合、その数値範囲には、「～」を挟む各数値が上限値及び下限値として含まれることを意味し、また、各上限値及び各下限値を適宜組み合わせて数値範囲としてもよい。 The following describes embodiments of the Piezo2 receptor gene expression promoter, Piezo2 receptor protein production promoter, cosmetic, and method for evaluating the usability of a cosmetic according to the present invention. However, the present invention is not intended to be limited to the configurations described in the embodiments described below. In this specification, when a numerical range is indicated by "~", this means that the numerical range includes the numerical values between "~" as upper and lower limit values, and each upper limit value and each lower limit value may be appropriately combined to form a numerical range.
［Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤］
Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有する。Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、ヒトの皮膚のメルケル細胞に含まれるＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進することができる。Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、液状のエキス剤であることが好ましい。
[Piezo2 receptor gene expression promoter]
The Piezo2 receptor gene expression promoter contains an extract of ginger and/or satsuma mandarin as an active ingredient. The Piezo2 receptor gene expression promoter can promote the expression of the Piezo2 receptor gene contained in Merkel cells of human skin. The Piezo2 receptor gene expression promoter is preferably a liquid extract.
＜Ｐｉｅｚｏ２受容体＞
Ｐｉｅｚｏ２受容体は、ヒトの皮膚の表皮に存在するメルケル細胞の細胞膜に存在する受容体である。上述したように、化粧料を皮膚に塗布する際に、手で撫でるような軽い接触圧等が伴い、この接触圧等に起因する皮膚への弱い機械刺激（弱機械刺激）を、メルケル細胞のＰｉｅｚｏ２受容体が受容する。Ｐｉｅｚｏ２受容体は、上記弱機械刺激を受容すると、その刺激をＡβ神経線維に伝達する。上記刺激は、さらに中枢神経系を介して脳に伝達され、手で撫でるような軽い接触圧等に関する触覚が認識される。Ｐｉｅｚｏ２受容体は、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を、その機能面に着目して称したものである。
<Piezo2 Receptor>
The Piezo2 receptor is a receptor present in the cell membrane of Merkel cells present in the epidermis of human skin. As described above, when applying a cosmetic to the skin, a light contact pressure such as stroking with a hand is applied, and the Piezo2 receptor of the Merkel cell receives a weak mechanical stimulus (weak mechanical stimulus) to the skin caused by this contact pressure. When the Piezo2 receptor receives the weak mechanical stimulus, it transmits the stimulus to Aβ nerve fibers. The stimulus is further transmitted to the brain via the central nervous system, and the tactile sensation related to the light contact pressure such as stroking with a hand is recognized. The Piezo2 receptor is a name given to the Piezo2 receptor protein in terms of its function.
＜Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子＞
Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子は、メルケル細胞に含まれている核酸である。Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子は、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を産生するための遺伝情報を有しており、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子が有する上記遺伝情報に基づいて、メルケル細胞は、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を産生させる。
<Piezo2 receptor gene>
The Piezo2 receptor gene is a nucleic acid contained in Merkel cells. The Piezo2 receptor gene has genetic information for producing the Piezo2 receptor protein, and the Merkel cells produce the Piezo2 receptor protein based on the genetic information contained in the Piezo2 receptor gene.
＜ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物＞
ショウガは、ショウガ科ショウガ属の多年草である。ショウガの抽出物としては、ショウガの根茎の抽出物を用いる。ショウガの抽出物は、Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）の根茎を細切した後に、粗末にして、任意の濃度でエタノールを含有するエタノール及び水の混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって得ることができる。また、得られた抽出物は、水やエタノール等の有機溶媒を使用して一定の濃度に調整（希釈）することができる。例えば、ショウガの抽出物の含有量が２０ｍｇ／ｍＬである液（濃度が調整されてなる濃度調整液）を作製することができる。
<Ginger and/or Unshu mandarin extract>
Ginger is a perennial plant of the Zingiberaceae family. As the ginger extract, an extract of ginger rhizome is used. The ginger extract can be obtained by shredding the rhizome of Zingiber officinal Roscoe (Zingiberaceae) into a coarse powder, immersing it in a mixture of ethanol and water containing ethanol at an arbitrary concentration for several days at room temperature, extracting, then filtering, and then concentrating under reduced pressure or freeze-drying. The obtained extract can also be adjusted (diluted) to a certain concentration using an organic solvent such as water or ethanol. For example, a liquid containing 20 mg/mL of ginger extract (a concentration-adjusted liquid in which the concentration is adjusted) can be prepared.
ウンシュウミカンは、ミカン科ミカン属の常緑低木である。ウンシュウミカンの抽出物としては、ウンシュウミカンの果実及び／又は果皮の抽出物を用いる。ウンシュウミカンの抽出物は、Ｃｉｔｒｕｓ ｕｎｓｈｉｕ（Ｓｗｉｎｇｌｅ） Ｍａｒｃｏｗ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の成熟した果皮を風乾し、細かく粉砕した後に、任意の濃度のエタノールを含有するエタノール及び水の混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって得ることができる。また、得られた抽出物は、水やエタノール等の有機溶媒を使用して一定の濃度に調整することができる。例えば、ウンシュウミカンの抽出物の濃度（含有量）が６０ｍｇ／ｍＬである濃度調整液を作製することができる。 Satsuma mandarins are evergreen shrubs of the genus Citrus in the family Rutaceae. As an extract of Satsuma mandarins, an extract of the fruit and/or peel of Satsuma mandarins is used. The extract of Satsuma mandarins can be obtained by air-drying the mature peel of Citrus unshiu (Swingle) Marcow (Rutaceae), finely crushing it, immersing it in a mixture of ethanol and water containing any concentration of ethanol for several days at room temperature, extracting it, filtering it, and then concentrating it under reduced pressure or freeze-drying it. The obtained extract can also be adjusted to a certain concentration using an organic solvent such as water or ethanol. For example, a concentration-adjusted solution with a concentration (content) of Satsuma mandarin extract of 60 mg/mL can be prepared.
ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物は、通常、水や有機溶媒による抽出物であるが、とりわけ、水及びエタノールの混合液による抽出物であることが好ましい。上記抽出物が、水及びエタノールの混合液による抽出物であることによって、ショウガ及び／又はウンシュウミカンからの有効成分の抽出効率が高められたものとなる。また、水及びエタノールの混合液におけるエタノールの濃度を適切に設定することにより、上記有効成分の抽出効率がより高められたものとなる。 Extracts of ginger and/or satsuma mandarin are usually extracted with water or an organic solvent, but are preferably extracted with a mixture of water and ethanol. By extracting the above with a mixture of water and ethanol, the efficiency of extraction of the active ingredients from ginger and/or satsuma mandarin is improved. In addition, by appropriately setting the concentration of ethanol in the mixture of water and ethanol, the efficiency of extraction of the active ingredients can be further improved.
Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤には、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の他、これらを溶解、又は希釈するための水や有機溶媒を配合することができる。有機溶媒としては、上述したように、ヒトの皮膚や細胞に対する刺激を低減することができる点で、エタノール等の低級アルコールが好ましい。 The Piezo2 receptor gene expression promoter can contain extracts of ginger and/or satsuma mandarin, as well as water or an organic solvent for dissolving or diluting them. As the organic solvent, as mentioned above, a lower alcohol such as ethanol is preferable because it can reduce irritation to human skin and cells.
＜ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の含有量＞
Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、例えば上記濃度調整液をさらに適切な溶媒に溶解又は分散させて、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の濃度が１～５００μｇ／ｍＬとなるように調整してあることが好ましく、１～２００μｇ／ｍＬとなるように調整してあることがより好ましく、１０～１２０μｇ／ｍＬとなるように調整してあることがさらに好ましい。ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の濃度（含有量）を上記の適切な範囲となるように調整することにより、メルケル細胞に直接接触させることで、細胞毒性を抑えつつ、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現をより促進することができる。なお、上記抽出物を溶解又は分散させる溶媒としては、水、エタノール等が挙げられ、抽出に使用した溶媒や、希釈（濃度の調整）に使用した溶媒をそのまま使用してもよい。また、上記抽出物の濃度は、有効成分としての濃度である。
<Content of ginger and/or satsuma mandarin extract>
The Piezo2 receptor gene expression promoter is, for example, prepared by dissolving or dispersing the concentration-adjusting solution in a suitable solvent, so that the concentration of the ginger and/or satsuma mandarin extract is adjusted to 1 to 500 μg/mL, more preferably 1 to 200 μg/mL, and even more preferably 10 to 120 μg/mL. By adjusting the concentration (content) of the ginger and/or satsuma mandarin extract to the above suitable range, the expression of the Piezo2 receptor gene can be further promoted while suppressing cytotoxicity by directly contacting the extract with Merkel cells. Examples of the solvent for dissolving or dispersing the extract include water, ethanol, etc., and the solvent used for extraction or dilution (adjustment of concentration) may be used as it is. The concentration of the extract is the concentration of the active ingredient.
＜Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤の利点＞
Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進することができる。これにより、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現量が増加するため、その遺伝子が有する遺伝情報に基づいて産生されるＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。その結果、例えばＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を皮膚に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができる。具体的には例えば、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を化粧料に配合する場合、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。また、例えばＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を比較的多く産生可能となるため、Ｐｉｅｚｏ２受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。
<Advantages of the Piezo2 receptor gene expression promoter>
The Piezo2 receptor gene expression promoter contains naturally derived ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient, and thus can promote the expression of the Piezo2 receptor gene while being naturally derived. This increases the expression level of the Piezo2 receptor gene, and can promote the production of the Piezo2 receptor protein produced based on the genetic information of the gene. As a result, for example, when the Piezo2 receptor gene expression promoter is applied to the skin, the weak stimulus transmission function inherent to the Piezo2 receptor protein (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulating signal) can be enhanced. Specifically, for example, when the Piezo2 receptor gene expression promoter is incorporated into a cosmetic, it can enhance the tactile function when applied to human skin and also enhance the emotional value. In addition, for example, when a Piezo2 receptor gene expression promoter is applied to Merkel cells in vitro, it becomes possible to produce a relatively large amount of Piezo2 receptor protein, which leads to the promotion of research and development using the Piezo2 receptor.
このように、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤は、生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に接触させることによってＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進する方法（発現促進方法）に用いることもできる。 In this way, the Piezo2 receptor gene expression promoter can also be used in a method for promoting the expression of the Piezo2 receptor gene (expression promotion method) by contacting it with Merkel cells outside the body (in vitro).
［Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤］
Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有する。Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、ヒトの皮膚のメルケル細胞に含まれるＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、液状のエキス剤であることが好ましい。
[Piezo2 receptor protein production promoter]
The Piezo2 receptor protein production promoter contains an extract of ginger and/or satsuma mandarin as an active ingredient. The Piezo2 receptor protein production promoter can promote the production of Piezo2 receptor protein contained in Merkel cells of human skin. The Piezo2 receptor protein production promoter is preferably a liquid extract.
Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、ヒトの皮膚のメルケル細胞においてＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現の促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。この点において、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、上述したＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤を、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤に適用したものといえる。Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤の構成は、上述したＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤の構成と同様であるため、詳細な説明については省略する。 The Piezo2 receptor protein production promoter can promote the production of Piezo2 receptor protein by promoting the expression of the Piezo2 receptor gene in Merkel cells of human skin. In this respect, the Piezo2 receptor protein production promoter can be said to be an application of the above-mentioned Piezo2 receptor gene expression promoter to the Piezo2 receptor protein production promoter. The configuration of the Piezo2 receptor protein production promoter is the same as that of the above-mentioned Piezo2 receptor gene expression promoter, so a detailed description will be omitted.
Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、上述したように、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、自然由来でありながら、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。この産生促進により、例えばＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を皮膚に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができる。具体的には例えば、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を化粧料に配合する場合、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高めると共に、感情価値を高めることができる。また、例えばＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に適用する場合、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質を比較的多く産生可能となるため、Ｐｉｅｚｏ２受容体を用いた研究開発の促進にも繋がる。 As described above, the Piezo2 receptor protein production promoter contains naturally derived ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient, and thus, although it is naturally derived, it can promote the production of Piezo2 receptor protein through the promotion of expression of the Piezo2 receptor gene. This promotion of production can enhance the weak stimulus transmission function (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulus signal) inherent to the Piezo2 receptor protein, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is applied to the skin. Specifically, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is blended into a cosmetic, it can enhance the tactile function when applied to human skin and increase the emotional value. In addition, for example, when the Piezo2 receptor protein production promoter is applied to Merkel cells outside the body (in vitro), it is possible to produce a relatively large amount of Piezo2 receptor protein, which also leads to the promotion of research and development using the Piezo2 receptor.
このように、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、生体外（インビトロ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ）においてメルケル細胞に接触させることによってＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進する方法（産生促進方法）に用いることもできる。 In this way, the Piezo2 receptor protein production promoter can also be used in a method for promoting the production of Piezo2 receptor protein (production promotion method) by contacting it with Merkel cells outside the body (in vitro).
［化粧料］
本実施形態の化粧料は、上述したショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物をＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進するための有効成分として含有する。より具体的には、当該化粧料は、上述したショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物をＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進するための有効成分として含有する。
[Cosmetics]
The cosmetic of the present embodiment contains the above-mentioned ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient for promoting the expression of the Piezo2 receptor gene. More specifically, the cosmetic contains the above-mentioned ginger and/or satsuma mandarin extract as an active ingredient for promoting the production of the Piezo2 receptor protein through the promotion of the expression of the Piezo2 receptor gene.
この化粧料には、例えば上述したＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤又は上述したＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤を配合することによって、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を配合してもよい。この他、化粧料には、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を含有することによる効果（感情価値の向上等）を妨げない範囲において、従来公知の化粧料に配合させる成分（保湿剤、可溶化剤、乳化剤、油分、薬剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等）を適宜配合することができる。 This cosmetic may contain an extract of ginger and/or satsuma mandarin, for example, by blending the above-mentioned Piezo2 receptor gene expression promoter or the above-mentioned Piezo2 receptor protein production promoter. In addition, the cosmetic may contain, as appropriate, ingredients that are blended into conventionally known cosmetic preparations (humectants, solubilizers, emulsifiers, oils, drugs, thickeners, stabilizers, preservatives, etc.) within a range that does not impede the effects (e.g., improved emotional value) of containing ginger and/or satsuma mandarin extract.
化粧料におけるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の濃度は、０．００２～６ｍｇ／ｍＬであることが好ましく、０．０２～３ｍｇ／ｍＬがより好ましく、０．１～１．２ｍｇ／ｍＬがさらに好ましい。ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物の濃度（含有量）を上記の適切な範囲に設定することにより、ヒトの皮膚に塗布した際の感情価値をより高めることができる。例えば、化粧料中に上記濃度調整液（抽出物の濃度２０～６０ｍｇ／ｍＬ）を０．０１～１０質量％配合することにより、化粧料における抽出物の濃度を０．００２～６ｍｇ／ｍＬに設定することができる。化粧料中に上記濃度調整液（抽出物の濃度２０～６０ｍｇ／ｍＬ）を０．１～５質量％配合することにより、化粧料における抽出物の濃度を０．０２～３ｍｇ／ｍＬに設定することができる。化粧料中に上記濃度調整液（抽出物の濃度２０～６０ｍｇ／ｍＬ）を０．５～２質量％配合することにより、化粧料における抽出物の濃度を０．１～１．２ｍｇ／ｍＬに設定することができる。
The concentration of the ginger and/or satsuma mandarin extract in the cosmetic is preferably 0.002 to 6 mg/mL, more preferably 0.02 to 3 mg/mL, and even more preferably 0.1 to 1.2 mg/mL. By setting the concentration (content) of the ginger and/or satsuma mandarin extract in the above appropriate range, the emotional value when applied to human skin can be further increased. For example, by blending the above concentration adjustment liquid (extract
化粧料は、ショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物と、その他の添加剤とを従来公知の方法を用いて攪拌混合することによって得られる。 The cosmetic preparation is obtained by stirring and mixing ginger and/or satsuma mandarin extract with other additives using a conventionally known method.
当該化粧料は、上述したように、自然由来であるショウガ及び／又はウンシュウミカンの抽出物を有効成分として含有することにより、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現促進を介してＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進することができる。その結果、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が本来的に有する弱刺激伝達機能（皮膚での弱い機械刺激を、刺激信号として中枢神経系に伝達する機能）を高めることができるため、ヒトの皮膚に塗布した際の触覚機能を高め、そして、感情価値をも高めることができる。 As described above, the cosmetic contains naturally derived ginger and/or satsuma mandarin extracts as active ingredients, which promotes the production of Piezo2 receptor protein by promoting the expression of the Piezo2 receptor gene. As a result, the weak stimulus transmission function inherent to the Piezo2 receptor protein (the function of transmitting weak mechanical stimuli on the skin to the central nervous system as a stimulating signal) can be enhanced, thereby enhancing the tactile function when applied to human skin and also increasing emotional value.
［化粧料の使用感の評価方法］ [Method for evaluating the usability of cosmetics]
本実施形態の化粧料の使用感の評価方法は、上述した化粧料の使用感の評価方法であって、化粧料を手の甲に塗布した後、化粧料の使用感を、化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を選択することによって評価する方法である。 The method for evaluating the usability of cosmetics in this embodiment is the same as the method for evaluating the usability of cosmetics described above, in which the cosmetic is applied to the back of the hand, and then the usability of the cosmetic is evaluated by selecting multiple words that represent the emotions evoked when applying the cosmetic.
「使用感」とは、ヒトの皮膚に化粧料を塗布した際、皮膚との接触によってメルケル細胞のＰｉｅｚｏ２受容体や他の受容体・受容器に受容されて発生した刺激信号が、上述したように中枢神経系を介して脳に伝達されることによって、脳において想起される感情である。 The "usage sensation" is the feeling that is evoked in the brain when a cosmetic product is applied to human skin and a stimulation signal is generated when the cosmetic product comes into contact with the skin and is received by the Piezo2 receptors in Merkel cells and other receptors and receptors. This is then transmitted to the brain via the central nervous system as described above.
化粧料の使用感の評価方法は、具体的には、例えば化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を、ランダムに列挙しておく。列挙する言葉の数は、多くなるほど評価の精度は高まるが、被験者の負担を考慮すると３０～６０個程度が適切である。被験者の手の甲の皮膚に化粧料を１日１回、１週間連用して塗布した後、塗布によって想起された感情を、複数選択（回答）が可能であるとの条件下において、上記複数の言葉から選択させる。そして、選択された言葉を集計する。この評価方法によれば、ヒトの皮膚に塗布した際の使用感に基づいて、感情価値を適切に評価することができる。化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉としては、化粧品業界において慣用的に使用されている言葉を採用することができる。 Specifically, the method for evaluating the feel of cosmetics in use involves randomly listing multiple words that indicate emotions evoked when the cosmetic is applied. The more words listed, the higher the accuracy of the evaluation, but considering the burden on the subject, approximately 30 to 60 words are appropriate. After applying the cosmetic to the skin on the back of the subject's hand once a day for one week, the subject is asked to select from the multiple words the emotions evoked by the application, under the condition that multiple choices (answers) are possible. The selected words are then tallied. This evaluation method makes it possible to appropriately evaluate the emotional value based on the feel when applied to human skin. Words commonly used in the cosmetics industry can be used as the multiple words that indicate emotions evoked when the cosmetic is applied.
以下、実施例を示しつつ本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。 The present invention will be described in more detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
［ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａの調製］
ショウガとしてのＺｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）の根茎を細切した後に、粗末にして、水及びエタノールの混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって、ショウガの抽出物を得た。得られた抽出物を、上記混合液で希釈（濃度を調整）して、エキス剤Ａを得た。エキス剤Ａにおけるショウガの抽出物の含有量は、２０ｍｇ／ｍＬであった。
[Preparation of Extract A Containing Ginger Extract]
The rhizome of Zingiber officinale Roscoe (Zingiberaceae) as ginger was cut into fine pieces, then crushed into a coarse powder, soaked in a mixture of water and ethanol for several days at room temperature, extracted, filtered, and then concentrated under reduced pressure or freeze-dried to obtain a ginger extract. The obtained extract was diluted with the above mixture (to adjust the concentration) to obtain extract A. The content of ginger extract in extract A was 20 mg/mL.
［ウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂの調製］
ウンシュウミカンとしてのＣｉｔｒｕｓ ｕｎｓｈｉｕ（Ｓｗｉｎｇｌｅ） Ｍａｒｃｏｗ（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の成熟した果皮を風乾し、細かく粉砕した後に、水及びエタノールの混合液に浸漬して数日間、室温にて抽出し、次いでろ過し、その後、減圧濃縮又は凍結乾固することによって、ウンシュウミカンの抽出物を得た。得られた抽出物を、上記混合液で希釈（濃度を調整）して、エキス剤Ｂを得た。エキス剤Ｂにおけるウンシュウミカンの抽出物の含有量は、６０ｍｇ／ｍＬであった。
[Preparation of Extract B Containing Extract of Unshu Mandarin Orange]
The mature peel of Citrus unshiu (Swingle) Marcow (Rutaceae) as the unshiu mandarin was air-dried and finely crushed, then immersed in a mixture of water and ethanol for several days at room temperature for extraction, then filtered, and then concentrated under reduced pressure or freeze-dried to obtain an unshiu mandarin extract. The obtained extract was diluted with the above mixture (to adjust the concentration) to obtain extract B. The content of the unshiu mandarin extract in extract B was 60 mg/mL.
［試験例１］
８種のエキス剤（エキス剤Ａ、Ｂ、１～５、及びコントロール）を用い、各エキス剤によるＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を、下記の試験方法によって評価した。エキス剤１～５に関しては、水と１価又は多価のアルコールとの混合液を用いて抽出物を得た後、抽出で使用した上記混合液で希釈（濃度を調整）してエキス剤１～５を得た。
[Test Example 1]
Eight kinds of extracts (extracts A, B, 1-5, and control) were used to evaluate the expression of Piezo2 receptor gene by each extract by the following test method. Extracts 1-5 were obtained by using a mixture of water and monohydric or polyhydric alcohol, and then diluted (to adjust the concentration) with the mixture used for extraction to obtain extracts 1-5.
（使用したエキス剤）
・エキス剤Ａ（ショウガの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤Ｂ（ウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤１（ローズマリーの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤２（セージの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤３（ボタンピの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤４（タイムの抽出物を含有するエキス剤）
・エキス剤５（ペパーミントの抽出物を含有するエキス剤）
・コントロール（エキス剤Ａ又はＢの溶媒である水及びエタノールの混合液のみ）
(Extract used)
・Extract A (extract containing ginger extract)
・Extract B (Extract containing Unshu mandarin extract)
・Extract 1 (Extract containing rosemary extract)
・Extract 2 (Extract containing sage extract)
・Extract 3 (Extract containing extract of Peony)
Extract 4 (Extract containing thyme extract)
Extract 5 (extract containing peppermint extract)
- Control (a mixture of water and ethanol, the solvent for extract A or B, only)
（試験方法）
ヒトメルケル細胞癌（ＭＣＣ１４／２）のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を確認・評価するため、ＲＴ－ｑＰＣＲ（半定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応）法を活用して検討した。検討は、以下に説明する（１）～（４）の操作手順で行った。
（１）増殖培地（ＲＰＭＩ－１６４０培地に２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５％ＦＢＳを添加したもの）で懸濁した一定数のＭＣＣ１４／２細胞調製液を１２ウェル（ｗｅｌｌ）培養プレートに播種した。
（２）２４時間後、基礎培地（ＲＰＭＩ－１６４０培地に２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．５％ＦＢＳを添加したもの）に置換した。
（３）さらに２４時間後、各エキス剤を基礎培地に加えて表１に示す濃度に調整した後、ＭＣＣ１４／２細胞調製液に添加した。
（４）各エキス剤の添加から２４時間後に遺伝子を回収し、ＲＴ－ｑＰＣＲによってＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現量を測定した。発現量の補正は、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨを使用した。結果を表１及び図１に示す。
(Test method)
In order to confirm and evaluate the expression of the Piezo2 receptor gene in human Merkel cell carcinoma (MCC14/2), we used the RT-qPCR (semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction) method. The study was carried out according to the following procedures (1) to (4).
(1) A certain number of MCC14/2 cell preparations suspended in growth medium (RPMI-1640 medium supplemented with 2 mM L-Glutamine, 25 mM HEPES, and 15% FBS) were seeded into 12-well culture plates.
(2) After 24 hours, the medium was replaced with basal medium (RPMI-1640 medium supplemented with 2 mM L-Glutamine, 25 mM HEPES, and 0.5% FBS).
(3) After another 24 hours, each extract was added to the basal medium to adjust the concentration shown in Table 1, and then added to the MCC14/2 cell preparation.
(4) 24 hours after the addition of each extract, the gene was collected and the expression level of the Piezo2 receptor gene was measured by RT-qPCR. The expression level was normalized using the housekeeping gene GAPDH. The results are shown in Table 1 and Figure 1.
表１及び図１に示すように、ＭＣＣ１４／２細胞におけるＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現について、ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａ、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂは、ローズマリーの抽出物を含有するエキス剤１、セージの抽出物を含有するエキス剤２、ボタンピの抽出物を含有するエキス剤３、タイムの抽出物を含有するエキス剤４、及びペパーミントの抽出物を含有するエキス剤５と比較して、有意な増加が認められた。このように、ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａ、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂは、Ｐｉｅｚｏ２受容体遺伝子の発現を促進し得ることが示された。 As shown in Table 1 and Figure 1, the expression of the Piezo2 receptor gene in MCC14/2 cells was significantly increased in Extract A containing ginger extract and Extract B containing Satsuma mandarin extract, compared with Extract 1 containing rosemary extract, Extract 2 containing sage extract, Extract 3 containing moutan extract, Extract 4 containing thyme extract, and Extract 5 containing peppermint extract. Thus, it was shown that Extract A containing ginger extract and Extract B containing Satsuma mandarin extract can promote the expression of the Piezo2 receptor gene.
［試験例２］
試験例１で使用したエキス剤Ａ、Ｂ、及びコントロールを用い、各エキス剤によるＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を評価した。
[Test Example 2]
The extracts A and B used in Test Example 1, as well as the control, were used to evaluate the production of Piezo2 receptor protein by each extract.
（試験方法）
ＭＣＣ１４／２細胞におけるＰｉｅｚｏ２受容体のタンパク質の産生量を確認・評価するため、Ｐｉｅｚｏ２受容体に対する一次抗体と蛍光標識二次抗体とを使用し、以下に説明する（１）～（８）の操作手順による試験を行った。
（１）試験例１と同様の増殖培地を用い、この増殖培地で懸濁した一定数のＭＣＣ１４／２細胞調製液を２ウェル（ｗｅｌｌ）チャンバースライドに播種した。
（２）２４時間後、試験例１と同様の基礎培地に置換した。
（３）さらに２４時間後、各エキス剤を基礎培地に加えて一定濃度に調整した後、ＭＣＣ１４／２細胞調製液に添加した。
（４）各エキス剤の添加から３０時間経過後に培養液を除去し、氷冷した無水メタノールで細胞を固定した。
（５）その後、スキムミルクで調製したブロッキングバッファー液で細胞を６０分間ブロッキングし、続いてブロッキングバッファー液で調製したＰｉｅｚｏ２抗体液（一次抗体）を添加し、一晩、４℃で処理（放置）した。
（６）翌日、ブロッキングバッファー液を除去した後、同じくブロッキングバッファー液で調製した二次抗体液（緑色蛍光標識抗体）を２時間、室温で処理（放置）し、細胞を緑色に蛍光染色した。これにより、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質が緑色に蛍光染色された。
（７）反応終了後、さらにナイルレッド（赤色蛍光）及びＤＡＰＩ（青色蛍光）の各液で細胞膜及び細胞核を蛍光染色した（上記（６）と合わせて計３色の蛍光染色）。
（８）蛍光顕微鏡を使用して、上記（６）において緑色に蛍光染色した際の緑色（ＧＦＰ）蛍光強度（輝度）を測定した。また、上記（７）において、上記（６）の緑色蛍光染色に加えて赤色蛍光染色及び青色蛍光染色の３色をオーバーレイした際に確認することができる黄色蛍光の面積（Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を示す）、及び細胞膜を示す赤色蛍光の面積を測定した。Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生量に関しては、「緑色蛍光強度（輝度）」と、黄色面積を赤色面積で調整すること（黄色面積／赤色面積）によって算出した「Ｐｉｅｚｏ２陽性面積率（黄色陽性面積率）」とで評価した。評価結果を表２及び３、並びに図２に示す。
(Test method)
In order to confirm and evaluate the amount of Piezo2 receptor protein produced in MCC14/2 cells, a test was performed using a primary antibody against the Piezo2 receptor and a fluorescently labeled secondary antibody according to the procedure (1) to (8) described below.
(1) Using the same growth medium as in Test Example 1, a certain number of MCC14/2 cell preparations suspended in this growth medium were seeded in a two-well chamber slide.
(2) After 24 hours, the medium was replaced with the same basal medium as in Test Example 1.
(3) After another 24 hours, each extract was added to the basal medium to adjust it to a certain concentration, and then added to the MCC14/2 cell preparation.
(4) Thirty hours after the addition of each extract, the culture medium was removed and the cells were fixed with ice-cold absolute methanol.
(5) Thereafter, the cells were blocked with a blocking buffer solution prepared with skim milk for 60 minutes, and then a Piezo2 antibody solution (primary antibody) prepared with the blocking buffer solution was added and the cells were treated (left to stand) overnight at 4°C.
(6) On the following day, the blocking buffer was removed, and the cells were treated (left to stand) with a secondary antibody solution (green fluorescent-labeled antibody) prepared in the same blocking buffer for 2 hours at room temperature to fluorescently stain the cells green. As a result, the Piezo2 receptor protein was fluorescently stained green.
(7) After the reaction was completed, the cell membrane and cell nucleus were further fluorescently stained with Nile Red (red fluorescence) and DAPI (blue fluorescence) solutions (a total of three-color fluorescent staining in combination with (6) above).
(8) Using a fluorescent microscope, the green (GFP) fluorescence intensity (brightness) when fluorescently stained green in (6) above was measured. In addition, in (7) above, the area of yellow fluorescence (indicating the production of Piezo2 receptor protein) that can be confirmed when the green fluorescent staining in (6) above, red fluorescent staining, and blue fluorescent staining are overlaid, and the area of red fluorescence indicating the cell membrane were measured. The amount of Piezo2 receptor protein produced was evaluated by "green fluorescent intensity (brightness)" and "Piezo2 positive area rate (yellow positive area rate)" calculated by adjusting the yellow area with the red area (yellow area/red area). The evaluation results are shown in Tables 2 and 3, and FIG. 2.
ＭＣＣ１４／２細胞におけるＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生について、ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａ、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂは、コントロールと比較して、緑色蛍光強度、及び黄色陽性面積率ともに有意な増加が認められ、その産生量の増加が確認された。このように、ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａ、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂは、Ｐｉｅｚｏ２受容体タンパク質の産生を促進し得ることが示された。 With regard to the production of Piezo2 receptor protein in MCC14/2 cells, extract A containing ginger extract and extract B containing Satsuma mandarin extract showed a significant increase in both green fluorescence intensity and yellow positive area rate compared to the control, confirming an increase in the amount of production. Thus, it was shown that extract A containing ginger extract and extract B containing Satsuma mandarin extract can promote the production of Piezo2 receptor protein.
［試験例３］
試験例１で使用したエキス剤Ａ、Ｂ、及び２～３を用い、表４に示す処方に従って、化粧料として、実施例１～２、比較例１～３の化粧水を調製した。各エキス剤を含有する化粧水を塗布した際にヒトの感情に及ぼす影響を、以下に説明する試験方法によって評価した。
[Test Example 3]
Using the extracts A, B, and 2-3 used in Test Example 1, the lotions of Examples 1-2 and Comparative Examples 1-3 were prepared as cosmetics according to the formulations shown in Table 4. The effects of applying the lotions containing each extract on human emotions were evaluated using the test methods described below.
（試験方法）
実施例１～２、比較例１～３の化粧水を用い、各化粧水を被験者の皮膚に、１日１回、１週間連続して塗布した後、被験者に、化粧水を塗布した際に想起された感情をランダムに列挙した４７個の言葉から、複数回答可能であるとの条件下で選択してもらった。これを、７名（男性：５名、女性：２名）の被験者について評価した。評価結果を表５に示す。
(Test method)
The lotions of Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 3 were applied to the skin of subjects once a day for one week. The subjects were then asked to select from 47 randomly listed words that evoked feelings when applying the lotion, under the condition that multiple answers were allowed. Seven subjects (5 men, 2 women) were evaluated. The evaluation results are shown in Table 5.
（ランダムに列挙した言葉）
楽しい、やる気、安心、豊か、潤った、繊細、喜び、幸せ、悲しい、爽やか、生き生き、輝いている、新しい、落ち着く、陽気、愉快、好き、安らか、気持ち良い、優しい、嬉しい、高級感、鮮やか、怖い、楽しみ、心地良い、嫌い、のどか、気持ち悪い、暖かい、上品、弾んだ、平和、びっくり、面白い、イライラ、調和、上質、穏やか、気楽、くつろいだ、素晴らしい、ぬくもり、なごやか、親しい、新鮮、ニュートラルな感じ
(Random list of words)
Fun, motivation, relief, rich, moist, delicate, joy, happiness, sad, refreshing, lively, shining, new, calm, cheerful, pleasant, like, peaceful, pleasant, gentle, delighted, luxurious, vivid, scary, enjoyment, comfortable, dislike, tranquil, gross, warm, elegant, bouncy, peaceful, surprise, interesting, irritation, harmony, fine, calm, easygoing, relaxed, wonderful, warmth, harmonious, familiar, fresh, neutral feeling
ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａを配合した実施例１の化粧水、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂを配合した実施例２の化粧水は、エキス剤を配合していない（未配合の）比較例１、並びにセージの抽出物を含有するエキス剤２を配合した比較例２の化粧水、及びボタンピの抽出物を含有するエキス剤３を配合した比較例３の化粧水と比較して、「気持ち良い」、「心地良い」の両方が上位に選択されることが示された。このように、ショウガの抽出物を含有するエキス剤Ａを配合した実施例１の化粧水、及びウンシュウミカンの抽出物を含有するエキス剤Ｂを配合した実施例２の化粧水は、気持ち良い、心地良いといった感情価値に優れることが示された。 The lotion of Example 1, which contains extract A containing ginger extract, and the lotion of Example 2, which contains extract B containing Satsuma mandarin extract, were shown to be selected highly for both "pleasant" and "comfortable" compared to Comparative Example 1, which does not contain any extract (unblended), the lotion of Comparative Example 2, which contains extract 2 containing sage extract, and the lotion of Comparative Example 3, which contains extract 3 containing Peony extract. In this way, the lotion of Example 1, which contains extract A containing ginger extract, and the lotion of Example 2, which contains extract B containing Satsuma mandarin extract, were shown to be excellent in emotional values such as "pleasant" and "comfortable".
本発明のＰｉｅｚｏ２受容体遺伝子発現促進剤及びＰｉｅｚｏ２受容体タンパク質産生促進剤は、化粧料に配合して感情価値を高めることができ、また、研究開発の促進に寄与し得る。本発明の化粧料は、感情価値を高めることができ、これにより、化粧料を使用する際の満足感を高めることができるため、種々の用途の化粧料に好適に利用することができる。また、本発明の化粧料の使用感の評価方法は、化粧料の研究開発、製造現場や販売現場等において好適に利用することができる。
The Piezo2 receptor gene expression promoter and the Piezo2 receptor protein production promoter of the present invention can be blended into cosmetics to enhance emotional value and contribute to the promotion of research and development. The cosmetics of the present invention can enhance emotional value, thereby enhancing the sense of satisfaction when using the cosmetics, and can therefore be suitably used in cosmetics for various applications. In addition, the method for evaluating the usability of cosmetics of the present invention can be suitably used in the research and development, manufacturing and sales of cosmetics, etc.
Claims (7)
前記化粧料を手の甲に塗布した後、前記化粧料の使用感を、前記化粧料を塗布した際に想起された感情を示す複数の言葉を選択することによって評価する化粧料の使用感の評価方法。
A method for evaluating the usability of a cosmetic composition according to claim 5 or 6, comprising:
The method for evaluating the feeling of use of a cosmetic is carried out by applying the cosmetic to the back of the hand and then evaluating the feeling of use of the cosmetic by selecting a plurality of words that indicate the feelings evoked when applying the cosmetic.
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