JP2024055621A

JP2024055621A - 皮膚恒常性維持外用剤、これを含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品、並びに、皮膚恒常性維持方法

Info

Publication number: JP2024055621A
Application number: JP2022162702A
Authority: JP
Inventors: さくら岸田; 知也岡田; 加歩鷲頭; 友紀畑
Original assignee: Kose Corp
Current assignee: Kose Corp
Priority date: 2022-10-07
Filing date: 2022-10-07
Publication date: 2024-04-18

Abstract

【課題】新規な皮膚恒常性維持外用剤を提供する。【解決手段】本発明にかかる皮膚恒常性維持外用剤は、ナツシロギク抽出物を有効成分とする皮膚恒常性維持外用剤である。【選択図】図１

Description

本発明は、皮膚恒常性維持外用剤、当該皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品、並びに、皮膚恒常性維持方法に関するものである。

健康な肌では、良質な表皮細胞により外界からの刺激やアレルゲンなどの侵入を防ぐバリア機能の形成や体内の水分喪失を防ぐ保湿機能の保持など皮膚恒常性維持が欠かせない。

フィラグリンはケラチノサイトで産生されるタンパク質であり、プロフィラグリンがケラチノサイトの角化の際に脱リン酸化と加水分解を受けることで産生される。非特許文献１および非特許文献２では、フィラグリンは角層において、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部の構築に関与していることが報告されている。また、非特許文献３では、バリア機能の低下が認められるアトピー性皮膚炎の皮膚では、フィラグリンの発現量が低下していることも報告されている。さらにフィラグリンは角質細胞の辺縁構造でバリア機能に深く関与しているコーニファイドエンベロープを構成する前駆体の一つとしても知られている。このようにフィラグリンは、皮膚のバリア機能や保湿機能に重要な役割を果たしていることは広く知られている。

フィラグリンが表皮の最上層に近づくにつれてアミノ酸レベルにまで分解されると、天然保湿因子（natural moisturizing factor: NMF）が産生される。この分解過程においてカスパーゼ１４が関与していることも知られている。角層の水分保持に重要な役割を担うＮＭＦもバリア機能の維持に関与しており、非特許文献４では、ＮＭＦの産生阻害により、皮膚バリア機能の低下がもたらされることが報告されている。

一方で、１７型コラーゲンはケラチノサイトと基底膜を接着させる分子であり、皮膚の恒常性維持において重要な役割を果たしていることが知られている。非特許文献５では、表皮ではダメージやストレスを受けた幹細胞を選択的に排除しながら、１７型コラーゲンを発現する再生能力の高い表皮幹細胞を増幅することで、表皮角化細胞の品質を保っていると報告されている。さらに、加齢によって１７型コラーゲンの発現が低下すると、表皮の細胞競合が減弱して表皮の老化が顕著となることから、１７型コラーゲンの発現増加は皮膚の恒常性維持に重要であると考えられている。

このような背景から、皮膚恒常性維持に関し有用な外用剤を提供する目的の下、従来からフィラグリン及びＮＭＦの産生促進作用、並びに、１７型コラーゲン産生促進作用を持つ物質の探索が行われてきたが、充分に満足するものは得られていなかった。

そこで、本発明者らは、数多ある候補物質の中でも、キク科ヨモギギク属のナツシロギク（英名：Ｆｅｖｅｒｆｅｗ、学名：Ｔａｎａｃｅｔｕｍｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ、学名シノニム：ＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍＰａｒｔｈｅｎｉｕｍ）の植物又はその抽出物に着目した。ここで、ナツシロギクは、古くから、薬草として知られている。ナツシロギクの薬草としての使用目的としては、例えば、発熱、頭痛、便秘、下痢、分娩困難、及びめまい等が挙げられる。

近年、ナツシロギクの効能に関しいくつかの研究がなされてきた。例えば特許文献１では、ナツシロギク抽出物に関して、抗炎症及び抗酸化活性を有する点が開示されている。また、特許文献２には、皮膚の弾力性、色調、又はきめ等の皮膚の老化因子を整えたり、皮膚のしわを整えたりするためのナツシロギク抽出物を含む組成物が開示されている。ここで、特許文献２にて具体的に検討された作用は、酵素障害及び抗酸化による皮膚老化因子調節作用のみで、詳細な検討はなされていない。

Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（１９９４）１０３（５）：７３１－７４０Ｊ．ＣｅｌｌＳｃｉｅｎｃｅ（２００９）１２２（９）：１２８５－１２９４ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓ．（１９９６）２８８（８）：４４２－６ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ. （２０１１）２８６（１０）：８２０４－８２１２Ｎａｔｕｒｅ（２０１９）５６８（７７５２）：３４４－３５０

特開２０１７－６１４７６号公報特許第５００５６４４号

上記背景に鑑み、本発明は新規な皮膚恒常性維持外用剤を提供することを目的とする。

〔１〕上記目的を達成する本発明に係る皮膚恒常性維持外用剤は、ナツシロギク抽出物を有効成分とする。

〔２〕また、上記〔１〕の皮膚恒常性維持外用剤が、表皮細胞にて天然保湿因子を増加させることが好ましい。

〔３〕また、上記〔１〕又は〔２〕の皮膚恒常性維持外用剤が、前記表皮細胞にてフィラグリンの産生を促進することが好ましい。

〔４〕また、上記〔１〕～〔３〕の何れかの皮膚恒常性維持外用剤が、前記表皮細胞にてカスパーゼ１４の産生を促進することが好ましい。

〔５〕また、上記〔１〕～〔４〕の何れかの皮膚恒常性維持外用剤が、表皮細胞にて１７型コラーゲンの産生を促進することが好ましい。産生された１７型コラーゲンにより、表皮細胞と、基底膜との接着を強化させることで、皮膚恒常性維持機能を高めることができる。

〔６〕また、上記〔１〕～〔５〕の何れかの皮膚恒常性維持外用剤において、前記ナツシロギク抽出物が水抽出物であることが好ましい。

〔７〕ここで、本発明の化粧品、医薬品、又は医薬部外品は、上記〔１〕～〔６〕の何れかの皮膚恒常性維持外用剤を含むことを特徴とする。

〔８〕また、上記〔７〕の化粧品、医薬品、又は医薬部外品において、前記ナツシロギク抽出物の含有量が乾燥固形物換算の質量対容量比濃度で０．０００１w/v％以上であることが好ましい。

〔９〕さらに、本発明の皮膚恒常性維持方法は、上記〔１〕～〔６〕の何れかの皮膚恒常性維持外用剤を用いることを特徴とする。

本発明によれば、新規な皮膚恒常性維持外用剤を提供することが可能となる。

ナツシロギク抽出物（ナツシロギクエキス）による、カスパーゼ14のmRNAの発現促進効果を示すグラフである。ナツシロギク抽出物による、フィラグリンのmRNAの発現促進効果を示すグラフである。ナツシロギク抽出物による、コラーゲン17A1のmRNAの発現促進効果を示すグラフである。ショウブ抽出液が、カスパーゼ14のmRNAの発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。ショウブ抽出液が、フィラグリンのmRNAの発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。ショウブ抽出液が、コラーゲン17A1のmRNAの発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。

以下、本発明の一例にかかる皮膚恒常性維持外用剤について説明する。以下、本明細書において、皮膚恒常性維持外用剤を塗布して皮膚恒常性維持効果をもたらす対象である、皮膚の構造については、下記の通りであるものとして説明する。まず皮膚は、最表層側からこの順に、表皮、真皮、及び皮下組織を有する。さらに、表皮は最表層側からこの順で、角層、顆粒層、有棘層、及び基底層を有する。そして、表皮を構成する細胞は「表皮細胞」と呼ばれるが、表皮細胞には、一般的にケラチノサイトを示すことが多い。また、表皮と真皮との間には、「基底膜」と称される構造部が存在する。この基底膜とケラチノサイトとが良好に接着することで、基底層における正常な細胞分裂が促進され、皮膚恒常性を良好に維持することができる。

本発明の皮膚恒常性維持外用剤は、ナツシロギク抽出物を有効成分とする。ナツシロギク抽出物は、本発明者らによる検討の結果、皮膚恒常性維持に関連して後述する種々の機能を奏しうる物質であることが明らかになった有効成分であり、１種類で多方面からアプローチ可能な有効成分である。なお、上記列挙した特許文献１、２においては、ナツシロギク抽出物に関し種々の機能を奏しうることが示唆されているが、これら列挙された機能は皮膚恒常性維持外用剤としての有用性を何ら示唆するものではなかった。このように、本発明は、技術常識に照らして全く新規な用途をナツシロギク抽出物に見出したものである。

本発明の皮膚恒常性維持外用剤の有効成分であるナツシロギク抽出物は、学名「Ｔａｎａｃｅｔｕｍｐａｒｔｈｅｎｉｕｍ」（学名シノニム：ＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍＰａｒｔｈｅｎｉｕｍ）で表されるナツシロギクの抽出物である。ナツシロギク抽出物の原料としては、ナツシロギクの花、葉、茎、種子、及び根等であり、特にこれらすべてを含む全草が好ましい。なお、原料は、生物自体、凍結物、乾燥物、及び凍結乾燥物などのいずれでもよい。また、ナツシロギク抽出物の製造方法は特に限定されず、常法に従って製造することができる。中でも、抽出溶媒として水などの水性溶媒を用いて製造したナツシロギク抽出物が好ましい。

皮膚恒常性維持外用剤は、本発明の効果を阻害しない限り、水などの溶媒、ナツシロギク抽出物以外に、化粧品、医薬品、及び医薬部外品に汎用される水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、界面活性剤、油剤、アルコール、ＰＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、及び香料等の添加成分を必要に応じて配合して用いることができる。そして、本発明の皮膚恒常性維持外用剤及びこれを用いた化粧品、医薬品、及び医薬部外品の剤形は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤形でありうる。

また、本発明の皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品は、ナツシロギク抽出物の含有量が乾燥固形物換算の質量対容量比濃度で、０．０００１w/v％以上であることが好ましく、０．０００４w/v％以上であることがより好ましく、０．００１w/v％以上であることが更に好ましく、０．００５w/v％以上であることが更に好ましい。皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品におけるナツシロギク抽出物の含有量が上記下限値以上であれば、皮膚恒常性維持効果に優れる。より具体的には、皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品等におけるナツシロギク抽出物の含有量が上記下限値以上である場合には、後述する、表皮細胞におけるカスパーゼ１４の産生促進効果、表皮細胞におけるフィラグリンの産生促進効果、及び表皮細胞におけるコラーゲン１７の産生促進効果のうちの一つ又は複数を効果的に高めることができる。なお、皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品におけるナツシロギク抽出物の含有量の上限は特に限定されないが、例えば、乾燥固形物換算の質量対容量比濃度で、０．０２w/v％以下でありうる。

以下、ナツシロギク抽出物を有効成分とする皮膚恒常性維持外用剤及び当該皮膚恒常性維持外用剤を含む化粧品、医薬品、及び医薬部外品（以下、本発明の皮膚恒常性維持外用剤など、と称することがある）が皮膚に皮膚恒常性維持効果をもたらすメカニズムについて説明する。

本発明の皮膚恒常性維持外用剤などは、表皮細胞にて天然保湿因子（ＮＭＦ）を増加させることができる。産生促進されたＮＭＦによれば、皮膚バリア機能を高めることができ、その結果、皮膚恒常性を良好に維持することができる。

また、本発明の皮膚恒常性維持外用剤などは、表皮細胞におけるカスパーゼ１４の産生を促進することができる。カスパーゼ１４は、フィラグリンを分解して、天然保湿因子（ＮＭＦ）を生成する過程において重要な役割を果たす分解酵素である。よって、本発明の皮膚恒常性維持外用剤により、表皮細胞にてカスパーゼ１４の産生が促進されることで、ＮＭＦの生成が促進され、その結果として、皮膚バリア機能を高めて皮膚恒常性維持に寄与する。

また、本発明の皮膚恒常性維持外用剤などは、表皮細胞におけるフィラグリンの産生を促進することができる。フィラグリンとは、ＮＭＦのもととなるタンパク質である。フィラグリンは、表皮は最表層側から、角層に続き２番目の層である顆粒層に貯蔵されているプロフィラグリンが角化する際に、脱リン酸化されることで生成される。その後、フィラグリンが表皮の最上層に近づくにつれて、アミノ酸レベルにまで分解されて、ＮＭＦとなる。したがって、本発明の皮膚恒常性維持外用剤は、フィラグリンを産生促進することで、ＮＭＦの生成を促進し、その結果として、皮膚バリア機能を高めて皮膚恒常性維持に寄与する。

また、本発明の皮膚恒常性維持外用剤などは、表皮細胞における１７型コラーゲンの産生を促進することができる。１７型コラーゲンは、表皮と真皮との間に介在する基底膜と表皮細胞との間の接着に寄与する分子の一つである。よって、本発明の皮膚恒常性維持外用剤により１７型コラーゲンが産生促進されることで、基底膜と表皮細胞とが良好に接着することができるようになる。その結果、基底層における正常な細胞分裂が促進され、皮膚恒常性を良好に維持することができる。

そして、上記のようなメカニズムにより、本発明の皮膚恒常性維持外用剤等を、対象とする皮膚に対して適用することで皮膚恒常性維持効果をもたらす皮膚恒常性維持方法を実施することができる。なお、本発明の皮膚恒常性維持方法は、ヒトの皮膚の治療目的で実施する方法は含まない。

なお、本発明の皮膚恒常性維持方法は、表皮細胞におけるカスパーゼ１４を促進すること、表皮細胞におけるフィラグリンの産生を促進すること、及び表皮細胞におけるコラーゲン１７の産生を促進すること、のうちの少なくとも一つを含むことを特徴する。本発明の皮膚恒常性維持方法では、これらすべてが実施されることが好ましい。また、これらのうち、表皮細胞におけるカスパーゼ１４を促進すること、及び、表皮細胞におけるフィラグリンの産生を促進することは、共に、表皮細胞におけるＮＭＦの産生を促すことにつながる。

以下、本発明について実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
正常ヒト表皮角化細胞Normal Human Epidermal Keratinocytes（クラボウ社製、ケラチノサイト）をナツシロギク抽出物（ナツシロギク全草を原料とするナツシロギクエキス）存在下で培養し、各遺伝子の発現量を確認した。ナツシロギク抽出物は、25v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用いた。具体的には、ケラチノサイトにナツシロギク抽出物を、乾燥固形物換算の質量対容量比濃度がそれぞれ0.005w/v％、0.01w/v％、0.015w/v％、0.02w/v％となるように添加し、37℃、5体積％ＣＯ_２環境下で培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.25v/v%になるように調製した。培養後の細胞から精製したトータルRNAを用いて、カスパーゼ１４（以下、「CASP14」と略記することがある。）のmRNA発現量を定量的逆転写PCR（バイオラッド社製、Real-time PCR Detection System）で測定した。

図１は、ナツシロギク抽出物によるCASP14のmRNAの発現促進効果を示すグラフである。図１において、縦軸はコントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）のmRNA発現量を1とした時の相対量を示している。横軸は、ナツシロギク抽出物の添加濃度（乾燥固形物換算濃度の質量対容量比濃度）を示している。また、エラーバーはSD値を示す（以下、各グラフにおいても同じ。）。コントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）を基準として、0.005 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例１－１）では2.34倍、0.01 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例１－２）では5.30倍、0.015w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例１－３）では4.53倍、0.02 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例１－４）では2.44倍のmRNA発現量の増加が認められた。

ナツシロギク抽出物を添加した実施例１－１～１－４では、総じて、ナツシロギク抽出物を添加しなかったコントロール（比較例相当）よりもカスパーゼ１４の遺伝子の発現量が増えていたことが分かる。このことから、ナツシロギク抽出物を添加することで、表皮細胞でのカスパーゼ１４産生を促進できたことが分かる。したがって、この結果から、ナツシロギク抽出物を有効成分とする皮膚恒常性維持外用剤を適用した場合に、産生されたカスパーゼ１４がNMFの生成を促進し、その結果として、皮膚バリア機能を高めて皮膚恒常性維持に寄与し得ることが分かる。

（実施例２）
実施例１と同様にして、ナツシロギク抽出物存在下（25v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用い、濃度はそれぞれ、乾燥固形物換算の質量対容量比濃度で0.005w/v％、0.01w/v％、0.015w/v％、0.02w/v％でケラチノサイトを培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.25v/v%になるように調製した。そして、実施例１と同行にして、細胞から精製したトータルRNAにより、フィラグリン（FLG）のmRNA発現量を測定した。

図２は、ナツシロギク抽出物によるFLGのmRNAの発現促進効果を示すグラフである。図２において、縦軸はコントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）のmRNA発現量を1とした時の相対量を示している。横軸は、ナツシロギク抽出物の添加濃度（乾燥固形物換算の質量対容量比濃度）を示している。コントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）を基準として、0.005 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例２－１）では3.58倍、0.01 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例２－２）では6.47倍、0.015 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例２－３）では6.89倍、0.02%のナツシロギク抽出物添加（実施例２－４）では4.21倍のmRNA発現量の増加が認められた。

ナツシロギク抽出物を添加した実施例２－１～２－４では、総じて、ナツシロギク抽出物を添加しなかったコントロール（比較例相当）よりもフィラグリンの遺伝子の発現量が増えていたことが分かる。このことから、ナツシロギク抽出物を添加することで、表皮細胞でのフィラグリン産生を促進できたことが分かる。したがって、この結果から、ナツシロギク抽出物を有効成分とする皮膚恒常性維持外用剤を適用した場合に、産生促進されたフィラグリンがNMFの生成を促進し、その結果として、皮膚バリア機能を高めて皮膚恒常性維持に寄与し得ることが分かる。

（実施例３）
実施例１と同様にして、ナツシロギク抽出物存在下（25v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用い、濃度はそれぞれ、乾燥固形物換算の質量対容量比濃度で0.005w/v％、0.01w/v％、0.015w/v％、0.02w/v％）でケラチノサイトを培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.25v/v%になるように調製した。そして、実施例１と同様にして、細胞から精製したトータルRNAにより、コラーゲン17A1（COL17A1）のmRNA発現量を測定した。

図３は、ナツシロギク抽出物によるCOL17A1のmRNAの発現促進効果を示すグラフである。図３において、縦軸はコントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）のmRNA発現量を1とした時の相対量を示している。横軸は、ナツシロギク抽出物の添加濃度（乾燥固形物換算の質量対容量比濃度）を示している。コントロール（ナツシロギク抽出物無添加；比較例相当）を基準として、0.005 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例３－１）では1.66倍、0.01 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例３－２）では1.97倍、0.015 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例３－３）では1.85倍、0.02 w/v％のナツシロギク抽出物添加（実施例３－４）では1.50倍のmRNA発現量の増加が認められた。

ナツシロギク抽出物を添加した実施例３－１～３－４では、総じて、ナツシロギク抽出物を添加しなかったコントロール（比較例相当）よりもコラーゲン17A1の遺伝子の発現量が増えていたことが分かる。このことから、ナツシロギク抽出物を添加することで、表皮細胞でのコラーゲン17A1産生を促進できたことが分かる。したがって、この結果から、ナツシロギク抽出物を有効成分とする皮膚恒常性維持外用剤を適用した場合に、産生促進されたコラーゲン17A1が基底膜と表皮細胞との間の良好な接着を促進して、基底層における正常な細胞分裂を促し、皮膚恒常性を良好に維持することができることが分かる。

（比較例１）
正常ヒト表皮角化細胞Normal Human Epidermal Keratinocytes（クラボウ社製、以下ケラチノサイト）をショウブ抽出液存在下で培養し、各遺伝子の発現量を確認した。ショウブ抽出物は、50v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用いた。具体的には、ケラチノサイトにショウブ抽出液を、乾燥固形物換算の質量対容量比濃度がそれぞれ0.0004w/v％、0.004w/v％となるように添加し、３７℃、５体積％ＣＯ₂環境下で培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.5v/v%になるように調製した。培養後の細胞から精製したトータルRNAを用いて、カスパーゼ14（CASP14）のmRNA発現量を定量的逆転写PCR（バイオラッド社製、Real-time PCR Detection System）で測定した。

図４は、ショウブ抽出液がCASP14のmRNA発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。図４において、縦軸はコントロールのmRNA発現量を1とした時の相対量を示している。横軸はショウブ抽出液の乾燥固形物換算での添加濃度を示している。0.0004w/v%のショウブ抽出液添加では0.92倍、0.004w/v%のショウブ抽出液添加では1.05倍のmRNA発現量となっていた。高濃度側（0.004w/v％）の添加濃度は、オーダーが実施例１－１の0.005w/v％と同等であり、また、測定値の標準偏差を考慮すると、ショウブ抽出液の添加の有無は、CASP14のmRNA発現量の増減に有意な影響がなかったといえる。よって、ショウブ抽出液によっては、カスパーゼ14の産生促進に基づく皮膚恒常性維持効果を得ることができないことが分かる。

（比較例２）
比較例１と同様にして、ショウブ抽出液存在下（50v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用い、濃度はそれぞれ乾燥固形物換算で0.0004w/v％、0.004w/v％）でケラチノサイトを培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.5v/v%になるように調製した。そして、比較例１と同様にして、細胞から精製したトータルRNAにより、フィラグリン（FLG）のmRNA発現量を測定した。

図５は、ショウブ抽出液がFLGのmRNA発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。図５において、縦軸はコントロールのmRNA発現量を1とした時の相対量を示している。横軸はショウブ抽出液の乾燥固形物換算での添加濃度を示している。0.0004w/v %のショウブ抽出液添加では1.08倍、0.004w/v %のショウブ抽出液添加では1.11倍のmRNA発現量となっていた。誤差を考慮すると、ショウブ抽出液の添加の有無は、FLGのmRNA発現量の増減に有意な影響がなかったといえる。よって、ショウブ抽出液によっては、フィラグリンの産生促進に基づく皮膚恒常性維持効果を得ることができないことが分かる。

（比較例３）
比較例１と同様にして、ショウブ抽出液存在下（50v/v%エタノール水溶液に溶解したものを用い、濃度はそれぞれ、乾燥固形物換算で0.0004w/v％、0.004w/v％）でケラチノサイトを培養した。このとき、培養液中のエタノール濃度は、コントロール含め0.5v/v%になるように調製した。そして、比較例１と同様にして、細胞から精製したトータルRNAにより、コラーゲン17A1（COL17A1）のmRNA発現量を測定した。

図６は、ショウブ抽出液がCOL17A1のmRNA発現に対して及ぼす影響を示すグラフである。0.0004w/v %のショウブ抽出液添加では0.89倍、0.004w/v %のショウブ抽出液添加では0.81倍のmRNA発現量の低下が認められた。この結果から、ショウブ抽出液は、コラーゲン１７Ａ１の産生を促進するどころか、むしろコラーゲン１７Ａ１の産生を抑制しうることが分かる。よって、ショウブ抽出液の添加によっては、コラーゲン１７Ａ１の産生促進に基づく基底膜と表皮細胞との間の接着促進効果を得ることができず、ひいては、皮膚恒常性維持効果を得ることができないことが分かる。

以下、本発明の皮膚恒常性維持剤を用いた処方例を示す。これらの処方例は、本発明の例示にすぎず、本発明はこれらの処方例に限定されるものではない。

［処方例１：化粧水］
（成分）（％）
１．グリセリン５．０
２．１，３－ブチレングリコール５．０
３．乳酸０．０５
４．乳酸ナトリウム０．１
５．モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタン１．２
６．エタノール８．０
７．インドール－２－カルボン酸０．０１
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．香料０．０５
１０．精製水残量
１１．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．１
１２．シラカバ樹液０．１
１３．ケイケットウ抽出液０．１
１４．加水分解コラーゲン０．１
１５．ナイアシンアミド４．０
１６．トラネキサム酸２．０

（製造方法）
Ａ：成分（５）～（９）を混合溶解した。
Ｂ：成分（１）～（４）と（１０）～（１６）を混合溶解した。
Ｃ：ＢにＡを加え混合し、化粧水を得た。

〔処方例２：乳化型化粧水〕
（成分）（％）
１．大豆由来水素添加リン脂質０．５
２．セトステアリルアルコール０．１
３．ポリオキシエチレン（１０モル）コレステロールエーテル０．２
４．酢酸－ｄｌ－α－トコフェロール０．１
５．スクワラン０．１
６．ヒドロキシエチルセルロース０．０３
７．精製水残量
８．グリチルレチン酸ステアリル０．２５
９．リン酸一水素二ナトリウム０．１
１０．リン酸二水素一ナトリウム０．１
１１．グリセリン３．０
１２．ジプロピレングリコール２．０
１３．エタノール７．０
１４．香料０．１
１５．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）２．０
１６．シラカバ樹液０．１
１７．ケイケットウ抽出液０．１
１８．加水分解コラーゲン０．１
１９．ナイアシンアミド０．０５
２０．トラネキサム酸１．５

（製造方法）
Ａ：成分１～５を７５℃に加熱し、均一に混合溶解した。
Ｂ：成分６、７を７５℃に加熱し、均一に混合溶解した。
Ｃ：ＡにＢを添加し、７５℃で乳化した。
Ｄ：Ｃを室温に冷却し、成分８～２０を添加し、乳化型化粧水を得た。

［処方例３：水中油型乳液］
（成分）（％）
１．１，３－ブチレングリコール５．０
２．ジブチレングリコール５．０
３．精製水残量
４．６－フェニル－インドール－２－カルボン酸０．００１
５．水酸化ナトリウム２％溶液０．２
６．Ｎ－ミリストイル－Ｌ－グルタミン酸０．２
７．ポリオキシエチレン（１０モル）硬化ヒマシ油（注１）０．２
８．マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル１．０
９．ジメチルポリシロキサン（注２）３．０
１０．Ｎ－ステアロイルフィトスフィンゴシン０．１
１１．酢酸トコフェロール０．０１
１２．ステアリルアルコール０．５
１３．１，２－ペンタンジオール０．１
１４．カルボキシビニルポリマー（注３）０．１５
１５．（アクリル酸Ｎａ／アクリロイルジメチルタウリンＮａ）コポリマー（注４）０．１
１６．エタノール５．０
１７．香料０．１
１８．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）１．０
１９．エゾウコギ抽出液０．１
２０．ホオノキ抽出液０．１
２１．タベブイアインペチギノサ樹皮エキス０．１
２２．ナイアシンアミド５．０
２３．トラネキサム酸３．０
（注１）ＨＣＯ－１０（日本サーファクタント工業社製）
（注２）シリコンＫＦ－９６Ａ（６ＣＳ）（信越化学工業社製）
（注３）ＣＡＲＢＯＰＯＬ９８０（ＬＵＢＲＩＺＯＬＡＤＶＡＮＮＣＥＤＭＡＴＥＲＩＡＬＳ社製）
（注４）ＳＩＭＵＬＧＥＬＥＧ（ＳＥＰＩＣ社製）

（製造方法）
Ａ：成分１～５を７０℃で均一に溶解混合した。
Ｂ：成分６～１４を８０℃で均一に溶解混合した。
Ｃ：ＡにＢを添加し７０℃で乳化した。
Ｄ：Ｃに成分（１５）～（２３）を添加混合した後、４０℃まで冷却して水中油型乳液を得た。

［処方例４：水中油型乳化クリーム]
（成分）（％）
１．１，３－ブチレングリコール１２．０
２．グリセリン５．０
３．精製水残量
４．クエン酸０．１
５．アスコルビン酸ナトリウム０．５
６．メタケイ酸ナトリウム０．０５
７．水添レシチン０．５
８．水添リゾレシチン（注５）０．５
９．マカデミアンナッツ油脂肪酸フィトステリル１．５
１０．トリ（カプリル・カプリン）酸グリセリル２．０
１１．セラミド２０．１
１２．アスタキサンチン０．１
１３．トコフェロール０．０１
１４．セトステアリルアルコール２．０
１５．ベヘニルアルコール１．０
１６．グリセリンモノステアリン酸エステル１．０
１７．パラオキシ安息香酸メチル０．０５
１８．カルボマー０．１５
１９．キサンタンガム０．１
２０．水酸化ナトリウム０．００４
２１．香料０．０５
２２．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．０１
２３．エゾウコギ抽出液０．１
２４．ホオノキ抽出液０．１
２５．タベブイアインペチギノサ樹皮エキス０．１
２６．ナイアシンアミド１．０
２７．トラネキサム酸２．５
（注５）ＬＰ７０Ｈ（日本精化社製）

（製造方法）
Ａ：成分１～６を７０℃で均一に溶解混合した。
Ｂ：成分７～１６を８０℃で均一に溶解混合した。
Ｃ：ＡにＢを添加し７０℃で乳化した。
Ｄ：Ｃに成分１７～２７を添加混合した後、４０℃まで冷却することで水中油型乳化クリームを得た。

［処方例５：不織布含浸タイプパック料]
（成分）（％）
１．ポリオキシエチレン（１０モル）フィトステロール１．０
２．ステアリルアルコール０．２
３．セタノール０．２
４．水素添加大豆リン脂質（注６）１．０
５．プロピレングリコール１０．０
６．ジグリセリン８．０
７．流動パラフィン１．０
８．メドウフォーム油０．５
９．コエンザイムＱ１０（注７）０．０２
１０．精製水１．０
１１．エタノール３．０
１２．精製水残量
１３．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．５
１４．オウゴンエキス０．１
１５．コンドロイチン硫酸ナトリウム０．０５
１６．パンクラチウムマリチムムエキス０．１
１７．ナイアシンアミド０．５
１８．トラネキサム酸０．１
（注６）ニッコールレシノールＳ－１０（日光ケミカルズ社製）
（注７）カネカコエンザイムQ10（カネカ社製）

（製造方法）
Ａ：成分１～６を８０℃で溶解混合した。
Ｂ：成分７～９を８０℃に加熱し、Ａに添加したのち、７５℃に加熱した成分１０を加えて乳化した。
Ｃ：これを撹拌冷却し、成分１１～１８を加えて混合して水中油型乳液を得た。これを不織布に含浸させ、不織布含浸タイプパック料を得た。

[処方例６：日焼け止め]
１．ステアリン酸１．０
２．モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタン０．５
３．セスキオレイン酸ソルビタン０．５
４．ベヘニルアルコール０．５
５．２－エチルヘキサン酸グリセリル２．０
６．パラメトキシケイ皮酸２－エチルヘキシル１０．０
７．ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル２．０
８．ジメチコジエチルベンザルマロネート１．０
９．２，４－ビス－［｛４－（２－エチルヘキスルオキシ）－２－ヒドロキシ｝－フェニル］－６－（４－メトキシフェニル）－１，３，５－トリアジン（注８）１．０
１０．オクチルトリアゾン０．５
１１．ジプロピレングリコール１０．０
１２．トリエタノールアミン１．０
１３．精製水残量
１４．グリセリン５．０
１５．１，３－ブチレングリコール５．０
１６．メチレンビスベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール（注９）１．０
１７．アクリル酸／メタクリル酸アルキルエステル共重合体（注１０）０．２
１８．精製水５．０
１９．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．５
２０．オウゴンエキス０．１
２１．コンドロイチン硫酸ナトリウム０．０５
２２．パンクラチウムマリチムムエキス０．１
２３．ナイアシンアミド１．５
２４．トラネキサム酸０．５
２５．クエン酸０．１
２６．コハク酸二ナトリウム０．１
２７．エタノール１０．０
２８．フェノキシエタノール０．１
２９．香料０．１
（注８）ＴｉｎｏｓｏｒｂＳ（ＢＡＳＦ社製）
（注９）ＴｉｎｏｓｏｒｂＭ（ＢＡＳＦ社製）
（注１０）ＣＡＲＢＯＰＯＬ１３８２（ＬＵＢＲＩＺＯＬＡＤＶＡＮＣＥＤＭＡＴＥＲＩＡＬＳ社製）

（製造方法）
Ａ：成分１～１０を８０℃にて均一に溶解した。
Ｂ：成分１１～１８を８０℃にて均一に溶解した。
Ｃ：ＢにＡを添加し、乳化した。
Ｄ：Ｃを攪拌冷却し、成分１９～２９を添加し、日焼け止めを得た。

[処方例７：軟膏]
（成分）（％）
１．ステアリルアルコール１８．０
２．モクロウ２０．０
３．ポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸エステル０．２５
４．グリセリンモノステアリン酸エステル０．３
５．ワセリン４０．０
６．精製水残量
７．グリセリン１０．０
８．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．５
９．ニーム葉エキス０．１
１０．ポリグルタミン酸溶液０．１
１１．ブクリョウエキス０．１
１２．ナイアシンアミド２
１３．トラネキサム酸３．５

（製造方法）
Ａ：１～５を７０℃で均一に混合した。
Ｂ：６～８を７０℃に加温した。
Ｃ：ＡにＢを加え、乳化した。
Ｄ：Ｃを冷却し、９～１３を添加し、軟膏を得た。

[処方例８：ファンデーション]
（成分）（％）
１．ポリオキシエチレンメチルシロキサン・ポリオキプロピレンオレイルメチルシロキサン・ジメチルシロキサン共重合体（注１１）２．０
２．ＰＥＧ－９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン（注６）１．０
３．ジメチルポリシロキサン５．０
４．ジメチルポリシロキサン処理赤色酸化鉄１．０
５．ジメチルポリシロキサン処理黄色酸化鉄１．５
６．ジメチルポリシロキサン処理黒色酸化鉄０．５
７．ジメチルポリシロキサン処理二酸化チタン（平均粒子径４００ｎｍ）１０．０
８．ジメチルポリシロキサン処理タルク（板状、平均粒子径１２μｍ）５．０
９．パラメトキシケイ皮酸２－エチルヘキシル５．０
１０．グリチルレチン酸ステアリル０．５
１１．セスキオレイン酸ソルビタン０．５
１２．精製水残量
１３．１，３－ブチレングリコール１５．０
１４．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）０．２
１５．ニーム葉エキス０．１
１６．ポリグルタミン酸溶液０．１
１７．ブクリョウエキス０．１
１８．ナイアシンアミド０．１
１９．トラネキサム酸１．０
２０．クエン酸ナトリウム０．１
２１．リン酸二水素一ナトリウム０．１
２２．フェニルベンズイミダゾールスルホン酸０．３
２３．トリエタノールアミン１．７
２４．カプリリルグリコール０．１
２５．香料０．１
（注１１）ＡＢＩＬＥＭ-９０（ＥＶＯＮＩＫＧＯＬＤＳＣＨＭＩＤＴＧＭＢＨ製）

（製造方法）
Ａ：成分１～３を均一に混合する。
Ｂ：成分４～１１をローラーにて均一に分散する。
Ｃ：ＡにＢを添加し、均一混合する。
Ｄ：成分１２～２５を混合溶解する。
Ｅ：ＣにＤを添加して、乳化し、ファンデーションを得た。

[処方例９：水中油型下地]
（成分）（％）
１．１，３－ブチレングリコール７．０
２．ジプロピレングリコール５．０
３．トリエタノールアミン０．４
４．精製水残量
５．乳酸ソーダ０．０４
６．水添レシチン０．４
７．ステアリン酸１．０
８．ステアリン酸ＰＥＧ－５５０．３
９．セスキイソステアリン酸ソルビタン０．１
１０．２－エチルヘキサン酸セチル２．０
１１．セトステアリルアルコール０．３
１２．ベヘニルアルコール０．５
１３．オレイン酸フィトステリル０．１
１４．タルク０．４
１５．含水シリカ０．１
１６．マイカ１．３
１７．酸化チタン６．０
１８．酸化鉄０．１
１９．アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体０．３
２０．キサンタンガム０．１
２１．水酸化ナトリウム０．００８
２２．グリシン０．０１
２３．アルギニン０．０１
２４．ナイアシンアミド７．０
２５．トラネキサム酸０．１
２６．ナツシロギクエキス（25v/v%エタノールによる1w/v％希釈溶液）１．５
２７．テアニン０．０５
２８．クインスシードエキス０．１
２９．ディオスコレアパンタイカ根エキス０．１
３０．アデノシン三リン酸ナトリウム０．０５

（製造方法）
Ａ：成分１～５を７０℃で均一に溶解混合した。
Ｂ：成分６～１３を８０℃で均一に溶解混合した。
Ｃ：ＡにＢを添加し７０℃で乳化した。
Ｄ：Ｃに成分１４～２５を添加混合した後、４０℃まで冷却し成分２６～３０を添加混合することで水中油型下地を得た。

本発明によれば、新規な皮膚恒常性維持外用剤を提供することができる。

Claims

ナツシロギク抽出物を有効成分とする、皮膚恒常性維持外用剤。
表皮細胞にて天然保湿因子を増加させる、請求項１に記載の皮膚恒常性維持外用剤。
前記表皮細胞にてフィラグリンの産生を促進する、請求項２に記載の皮膚恒常性維持外用剤。
前記表皮細胞にてカスパーゼ１４の産生を促進する、請求項２に記載の皮膚恒常性維持外用剤。
表皮細胞にて１７型コラーゲンの産生を促進する、請求項１に記載の皮膚恒常性維持外用剤。
前記ナツシロギク抽出物が水抽出物である、請求項１～５の何れかに記載の皮膚恒常性維持外用剤。
請求項６に記載の皮膚恒常性維持外用剤を含む、化粧品、医薬品、又は医薬部外品。
前記ナツシロギク抽出物の含有量が乾燥固形物換算量で０．０００１w/v％以上である、請求項７に記載の化粧品、医薬品、又は医薬部外品。
請求項６に記載の皮膚恒常性維持外用剤を用いた皮膚恒常性維持方法。