JP2024055034A

JP2024055034A - 発毛剤

Info

Publication number: JP2024055034A
Application number: JP2022161614A
Authority: JP
Inventors: 博子礒田; ベジャウィ・メリエム; チャン・ゴック・リン; 隆志有村; 健一富永
Original assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 2022-10-06
Filing date: 2022-10-06
Publication date: 2024-04-18

Abstract

【課題】ミノキシジルに代わる新たな作用機序に基づく毒性の低い発毛剤を提供する。【解決手段】下記式（１）で表される化合物を有効成分とする発毛剤。［化１］TIFF2024055034000008.tif60170【選択図】なし

Description

本発明は、発毛剤に関する。

脱毛症は、性別や年齢に関係なく発症し、世界中の多くの人が悩みとしている。自尊心を低下させ、精神的な影響も大きい。
最も一般的な治療剤としてミノキシジルが知られている。しかし、この治療剤はもともと血管拡張剤として開発されたものであり、すべての脱毛症を治癒するわけではない。投与量には限界があり、頭痛や血圧低下などの副作用が知られている。
育毛、発毛を促す代表的な化学薬品として、ミノキシジル、フィナステリド及びデュタステリドが知られている。ミノキシジルは、血管を膨張させる効果があることから、塗布により頭皮下の毛細血管の血行を促進し、毛根細胞により多くの養分を供給するため、発毛・育毛効果が発現する。

しかしながら、血管の膨張は、血圧の低下をもたらし、心臓やその他の臓器に対して悪影響を及ぼすことがあり、場合によっては危篤状態となり致命的な結果を与えることがある。フィナステリド及びデュタステリドは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）による脱毛作用を抑止することによって抜け毛予防・増毛効果が観察されているが、重大な副作用として肝機能障害が報告されている。様々な発毛・育毛剤が存在する中、高い発毛・育毛効果を示すが、毒性や副作用がない又は低い発毛・育毛剤の開発が依然として望まれている。

本発明は、ミノキシジルに代わる新たな作用機序に基づく毒性の低い発毛剤を提供することを目的の一つとする。また、本発明は、ミノキシジルにはない機能を持つ発毛剤を提供することを目的の一つとする。

本発明は以下の態様を含む。
［１］下記式（１）で表される化合物を有効成分とする発毛剤。

式（１）中、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。
［２］下記式（１）で表される化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む、発毛用組成物。

式（１）中、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。

本発明によれば、ミノキシジルに代わる新たな作用機序に基づく毒性の低い発毛剤を提供することができる。また、本発明によれば、ミノキシジルにはない機能を持つ発毛剤を提供することができる。

図１は、実施例１のＭＴＴアッセイの結果を示すグラフである。図２は、実施例２のＡＴＰアッセイの結果を示すグラフである。図３は、実施例３の機能評価試験の結果（ＡＬＰＬ遺伝子発現量）を示すグラフである。図４は、実施例３の機能評価試験の結果（ＣＯＲＩＮ遺伝子発現量）を示すグラフである。図５は、実施例３の機能評価試験の結果（ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現量）を示すグラフである。図６は、実施例３の機能評価試験の結果（ＦＧＦ２遺伝子発現量）を示すグラフである。図７は、実施例３の機能評価試験の結果（ＦＧＦ１遺伝子発現量）を示すグラフである。図８は、実施例３の機能評価試験の結果（ＰＤＧＦＡ遺伝子発現量）を示すグラフである。図９は、実施例４の毛乳頭細胞の３Ｄスフェロイドによる機能評価の結果（ＶＣＡＮ遺伝子発現量）を示すグラフである。図１０は、実施例４の毛乳頭細胞の３Ｄスフェロイドによる機能評価の結果（ＡＬＰＬ遺伝子発現量）を示すグラフである。図１１は、実施例４の毛乳頭細胞の３Ｄスフェロイドによる機能評価の結果（ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現量）を示すグラフである。図１２は、実施例５の動物実験の方法を説明する図である。図１３は、実施例５の動物実験の結果を示す写真である。図１４は、実施例６の毛包に対する抗老化作用の検討結果を示すブロッティング像である。

［発毛剤］
一実施形態において、本発明の発毛剤は、下記式（１）で表されるスクアレン誘導体を含む。

上記式（１）において、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。

実施例において後述するように、発明者らは、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体を有効成分とする発毛剤が塗布において高い発毛・育毛効果を示すことを見出し、人体に対し無毒である発毛・育毛、スキンケア及びヘルスケアに応用することができるという知見を得、本発明を完成するに至った。

したがって、一態様において、本発明は、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体を有効成分とする発毛剤を提供する。

上記式（１）で表されるスクアレン誘導体を、ｎ＝１の場合、Ｍｏｎｏ－ＳＱ、ｎ＝２の場合、Ｄｉ－ＳＱ、ｎ＝３の場合、Ｔｒｉ－ＳＱ、ｎ＝４の場合、Ｔｅｔｒａ－ＳＱ、と略称する場合がある。
上記式（１）で表されるスクアレン誘導体としては、ｎ＝３のＴｒｉ－ＳＱ及びｎ＝４のＴｅｔｒａ－ＳＱからなる群から選択される少なくとも１種が好ましい。
上記式（１）で表されるスクアレン誘導体は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

［発毛用組成物］
本実施形態の発毛剤は、薬学的に許容可能な担体を含む、発毛用組成物として製剤化されていることが好ましい。発毛用組成物は、育毛用組成物と言い換えることができる。一態様において、発毛用組成物は、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体及び薬学的に許容可能な担体を含む。

薬学的に許容される担体としては、特に制限されず、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、乳化剤、増粘剤、湿潤剤、注射剤用溶剤等が挙げられる。また、発毛用組成物は添加剤を更に含んでいてもよい。

添加剤としては、特に制限されず、例えば、防腐剤、ｐＨ調整剤、安定剤紫外線吸収剤、酸化防止剤、着色剤、香料等が挙げられる。

薬学的に許容される担体及び添加剤としては、例えば、第十六改正日本薬局方等に記載されている一般的な原料を使用することができる。

発毛用組成物の剤型としては、例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口的に投与する剤型、あるいは、注射剤、坐剤、皮膚外用剤等の非経口的に投与する剤型等が挙げられる。

皮膚外用剤としては、例えば、クリーム、ローション、化粧水、乳液、ファンデーション、パック剤、フォーム剤、硬膏剤、軟膏剤、パップ剤、エアゾール剤等の剤型が挙げられる。

発毛用組成物は、脱毛症の治療薬であってもよいし、化粧料であってもよいし、サプリメント等の食品であってもよい。

発毛用組成物中の上記式（１）で表されるスクアレン誘導体の含有量は、例えば、０．０１～５０質量％、０．０１～３０質量％、０．０１～１０質量％、０．０１～５質量％、０．０１～１質量％の範囲が挙げられる。

発毛剤又は発毛用組成物の投与方法は特に制限されず、投与対象者の症状、体重、年齢、性別等に応じて適宜決定すればよい。例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等は経口投与される。また、注射剤は、単独で、又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じて、動脈内、筋肉内、皮内、皮下又は腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与される。皮膚外用剤は、患部に塗布、貼付又はスプレーされる。

発毛剤又は発毛用組成物の投与量は、投与対象者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できないが、経口投与の場合には、例えば１日あたり０．０１～５，０００ｍｇ／ｋｇ体重の有効成分（上記式（１）で表されるスクアレン誘導体）を投与すればよい。また、注射剤の場合には、例えば１日あたり０．０１～５００ｍｇの有効成分を投与すればよい。また、坐剤の場合には、例えば１日あたり０．０１～１，０００ｍｇの有効成分を投与すればよい。また、皮膚外用剤の場合には、例えば１日あたり０．０１～５００ｍｇの有効成分を投与すればよい。

［スクアレン誘導体及びその製造方法］
本発明の発毛剤の有効成分は、下記式（１）で表されるスクアレン誘導体である。

上記式（１）中、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。

上記式（１）で表されるスクアレン誘導体は、下記式（２）で示される２，３－エポキシスクアレンから製造することができる。

具体的には、スクアレンの２，３位をモノエポキシ化して、上記式（２）で表される２，３－オキシドスクアレンを合成し〔文献１：van Tamelen，E. E.、Curphey, T. J.、「The selective in vivo oxidation of the terminal double bonds in squalene」、Tetrahedron Letters、１９６２年、第３巻、ｐ．121－124〕、合成した２，３－オキシドスクアレンの２位又は３位をオリゴエチレングリコール基：（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ（nは１～１０の整数）で置換することにより、上記式（１）で表される化合物を合成することができる。

［その他の実施形態］
一実施形態において、本発明は、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、脱毛症の治療方法を提供する。

一実施形態において、本発明は、脱毛症の治療における使用のための、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体を提供する。

一実施形態において、本発明は、発毛剤を製造するための、上記式（１）で表されるスクアレン誘導体の使用を提供する。

以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

［製造例］
Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱを製造した。

＜製造例１＞Ｍｏｎｏ―ＳＱ（式（１）：Ｒ_１＝Ｈ，Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）Ｈ）の合成
２，３－オキシドスクアレン３０ｍｇ（７１μｍｏｌ）を２－プロパノール３ｍＬに溶解し、エチレングリコール２．７ｍｇ（４３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６時間加熱し、放冷した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、無水酢酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ－３００）を用いて、ヘキサン・酢酸エチル混合溶媒で精製し、Ｍｏｎｏ－ＳＱ（式（１）において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）Ｈ）１７ｍｇ（収率４９％）を無色油状物として得た。

＜製造例２＞Ｄｉ―ＳＱ（式（１）：Ｒ_１＝Ｈ，Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２Ｈ）の合成
２，３－オキシドスクアレン３０ｍｇ（７１μｍｏｌ）を２－プロパノール３ｍＬに溶解し、ジエチレングリコール４．６ｍｇ（４３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６時間加熱し、放冷した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、無水酢酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ－３００）を用いて、ヘキサン・酢酸エチル混合溶媒で精製し、Ｄｉ―ＳＱ（式（１）において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２Ｈ）２７ｍｇ（収率８０％）を無色油状物として得た。

＜製造例３＞Ｔｒｉ―ＳＱ（式（１）：Ｒ_１＝Ｈ，Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３Ｈ））の合成
２，３－オキシドスクアレン３０ｍｇ（７１μｍｏｌ）を２－プロパノール３ｍＬに溶解し、トリエチレングリコール６．５ｍｇ（４３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６時間加熱し、放冷した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、無水酢酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ－３００）を用いて、ヘキサン・酢酸エチル混合溶媒で精製し、Ｔｒｉ―ＳＱ（式（１）において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３Ｈ））１１ｍｇ（収率４０％）を無色油状物として得た。

＜製造例４＞Ｔｅｔｒａ―ＳＱ（式（１）：Ｒ_１＝Ｈ，Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_４Ｈ））の合成
２，３－オキシドスクアレン３０ｍｇ（７１μｍｏｌ）を２－プロパノール３ｍＬに溶解し、テトラエチレングリコール８．４ｍｇ（４３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で６時間加熱し、放冷した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、無水酢酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ－３００）を用いて、ヘキサン・酢酸エチル混合溶媒で精製し、Ｔｅｔｒａ―ＳＱ（式（１）において、Ｒ_１＝Ｈ、Ｒ_２＝（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_４Ｈ））１３ｍｇ（収率５１％）を無色油状物として得た。

［実施例１］毒性試験－ＭＴＴアッセイ
正常なヒトの頭皮毛包の乳頭から分離された間葉系細胞である、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：ＨｕｍａｎＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌｓ；ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＩｎｃ．より購入）に対する、Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの細胞毒性を評価した。

＜実験方法＞
９６ウェルプレート（ＢＤＦａｌｃｏｎ）にＨＦＤＰＣを３×１０^５個／ウェルの密度で播種し、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中、３７℃でインキュベートした。培地として、成長因子（ウシ胎児血清、インスリン、トランスフェリン、トリヨードサイロニン、ウシ下垂体抽出物、シプロテロン溶液）を添加した毛乳頭細胞成長培地を使用した。
２４時間後、培地を除去し、細胞を様々な濃度のスクアレン（ＳＱ）又はスクアレン誘導体（Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、若しくはＴｅｔｒａ－ＳＱ）を含有する培地（０、２．５、５、１０、２０、又は４０μＭ）に交換し、４８時間インキュベートした。
続いて、３－（４，５－ジメチル－チアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を使用して、細胞増殖を測定した。具体的には、ＭＴＴ試薬（ＭＴＴ濃度：５ｍｇ／ｍＬ）を細胞に添加し、８時間インキュベートした後、１０％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加し、一晩インキュベートした。その後、マイクロプレートリーダー（ＰｏｗｅｒｓｃａｎＨＴ）を使用して、５７０ｎｍの吸光度を測定し、細胞増殖を、未処理細胞の吸光度に対する吸光度の割合（％）として定量化した。

＜結果＞
いずれの濃度でも細胞毒性は観察されなかった。
Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの場合に細胞の増殖が確認された。
スクアレン又はスクアレン誘導体の濃度が２．５μＭの場合の結果を図１に示す。

［実施例２］毒性試験－ＡＴＰアッセイ
正常なヒトの頭皮毛包の乳頭から分離された間葉系細胞である、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：ＨｕｍａｎＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌｓ；ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＩｎｃ．より購入）に対する、Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの細胞毒性を評価した。

＜実験方法＞
９６ウェルプレート（ＢＤＦａｌｃｏｎ）にＨＦＤＰＣを３×１０^５個／ウェルの密度で播種し、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中、３７℃でインキュベートした。培地として、成長因子（ウシ胎児血清、インスリン、トランスフェリン、トリヨードサイロニン、ウシ下垂体抽出物、シプロテロン溶液）を添加した毛乳頭細胞成長培地を使用した。
２４時間後、培地を除去し、細胞を様々な濃度のスクアレン（ＳＱ）又はスクアレン誘導体（Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、若しくはＴｅｔｒａ－ＳＱ）を含有する培地（０、２．５、５、１０、２０、又は４０μＭ）に交換し、４８時間インキュベートした。
続いて、ルシフェラーゼを使用して、細胞増殖を測定した。具体的には、ルシファラーゼ試薬（東洋ピーテックＣＡ－２）を１００μＬ／ウェルで細胞に添加し、室温（２５℃）でシェーカー中１分間、暗所で１０分間インキュベートした。その後、マイクロプレートリーダー（大日本住友製薬）を使用して発光量を測定し、細胞増殖を、未処理細胞の発光量に対する発光量の割合（％）として定量化した。

＜結果＞
いずれの濃度でも細胞毒性は観察されなかった。
Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの場合に細胞の増殖が確認された。
スクアレン又はスクアレン誘導体の濃度が２．５μＭの結果を図２に示す。

［実施例３］機能評価試験
正常なヒトの頭皮毛包の乳頭から分離された間葉系細胞である、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：ＨｕｍａｎＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌｓ；ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＩｎｃ．より購入）に対する、Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの発毛促進効果を検討した。

＜実験方法＞
６ウェルプレート（ＢＤＦａｌｃｏｎ）にＨＦＤＰＣを５×１０^５個／ウェルの密度で播種し、３７℃で２４時間インキュベートした。続いて、培地を除去して、２．５μＭのスクアレン（ＳＱ）又はスクアレン誘導体（Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、若しくはＴｅｔｒａ－ＳＱ）を含有する培地に交換した。
続いて、４８時間後に、細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、ＩＳＯＧＥＮキット（ニッポンジーン）を使用して全ＲＮＡを抽出した。続いて、ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度計（サーモフィッシャーサイエンティフィック）を使用して全ＲＮＡを定量し、定量的リアルタイムＰＣＲ分析を実施した。
まず、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＶＶＩＬＯＴＭＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、９５℃１０分間、９５℃で１５秒間４０サイクル、６０℃で１分間のサイクリングプロトコールにより、抽出された１μｇの全ＲＮＡから逆転写を行い、ｃＤＮＡを合成した。
続いて、得られたｃＤＮＡ（１００ｎｇ）を，ＴａｑＭａｎＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｓｓａｙにより増幅させ、７５００ＦａｓｔＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲＳｙｓｔｅｍで解析し、毛乳頭細胞関連遺伝子〈ＡＬＰＬ（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）遺伝子、ＣＯＲＩＮ（ｃｏｒｉｎ，ｓｅｒｉｎｅｐｅｐｔｉｄａｓｅ）遺伝子〉、β－カテニン関連遺伝子〈ＣＴＮＮＢ１（ｃａｔｅｎｉｎｂｅｔａ１）遺伝子、ＦＧＦ２（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ２）遺伝子、ＦＧＦ１（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ１）遺伝子＞、及び毛乳頭・真皮関連遺伝子〈ＰＤＧＦＡ（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓｕｂｕｎｉｔＡ）遺伝子〉の発現量を定量した。

＜結果＞
Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの場合に以下の遺伝子発現が増加した。結果を図３～図８に示す。
毛乳頭細胞関連遺伝子：ＡＬＰＬ（図３）、ＣＯＲＩＮ（図４）
β－カテニン関連遺伝子：ＣＴＮＮＢ１（図５）、ＦＧＦ２（図６）、ＦＧＦ１（図７）
毛乳頭・真皮関連遺伝子：ＰＤＧＦＡ（図８）

［実施例４］毛乳頭細胞の３Ｄスフェロイドによる機能評価
正常なヒトの頭皮毛包の乳頭から分離された間葉系細胞である、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：ＨｕｍａｎＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌｓ；ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＩｎｃ．より購入）に対する、Ｍｏｎｏ－ＳＱ、Ｄｉ－ＳＱ、Ｔｒｉ－ＳＱ、及びＴｅｔｒａ－ＳＱの発毛促進効果を検討した。

＜実験方法＞
既報に従い、ハンギングドロップ法によりＨＦＤＰＣの３Ｄスフェロイドを培養した。
未処理のものの他に、０．１μＭのミノキシジル（Ｍｉｎｏｘ）で４８時間処理したもの、０．１μＭのＴｒｉ－ＳＱで４８時間処理したもの、０．１μＭのＴｅｔｒａ－ＳＱで４８時間処理したものを作成した。
実施例４と同様にして、細胞接着関連遺伝子〈ＶＣＡＮ（ｖｅｒｓｉｃａｎ）遺伝子〉、毛乳頭細胞関連遺伝子〈ＡＬＰＬ（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）遺伝子〉、β－カテニン関連遺伝子〈ＣＴＮＮＢ１（ｃａｔｅｎｉｎｂｅｔａ１）遺伝子〉の発現量を定量した。

＜結果＞
ＶＣＡＮ遺伝子発現量を図９に示す。スクアレン誘導体（Ｔｒｉ－ＳＱ、Ｔｅｔｒａ－ＳＱ）は、ミノキシジル（Ｍｉｎｏｘ）と同程度の遺伝子発現量を示した。
ＡＬＰＬ遺伝子発現量を図１０に示す。スクアレン誘導体（Ｔｒｉ－ＳＱ、Ｔｅｔｒａ－ＳＱ）は、ミノキシジル（Ｍｉｎｏｘ）より有意に高い遺伝子発現量を示した。
ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現量を図１１に示す。スクアレン誘導体（Ｔｒｉ－ＳＱ、Ｔｅｔｒａ－ＳＱ）は、ミノキシジル（Ｍｉｎｏｘ）と同程度の遺伝子発現量を示した。

［実施例５］動物実験
正常なヒトの頭皮毛包の乳頭から分離された間葉系細胞である、ヒト毛包真皮乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：ＨｕｍａｎＦｏｌｌｉｃｌｅＤｅｒｍａｌＰａｐｉｌｌａＣｅｌｌｓ；ＣｅｌｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＩｎｃ．より購入）からハンギングドロップ法により作製した３Ｄスフェロイド（３ＤＤＰ、３ＤＤＰ－Ｍｉｎｏｘ、３ＤＤＰ－Ｔｒｉ－ＳＱ、３ＤＤＰ－Ｔｅｔｒａ－ＳＱ）をマウス（Ｃ５７ＢＬ／６，オス，６週齢，ｎ＝５）に移植した場合の発毛促進効果を検討した。

＜実験方法（図１２）＞
マウスを７日間馴化させた。
休止期毛をトリミング、クリームを用いて脱毛した。
各３Ｄスフェロイド細胞（３ＤＤＰ、３ＤＤＰ－Ｍｉｎｏｘ、３ＤＤＰ－Ｔｒｉ－ＳＱ、３ＤＤＰ－Ｔｅｔｒａ－ＳＱ）を脱毛した背部の３箇所（上背、中背、下背）に３×１０^５個／７０μＬを３回注入した。
注入後０日目、１０日目、２０日目にマウスを観察した。

＜結果＞
結果を図１３に示す。
１０日目で比較すると、３ＤＤＰＴｒｉ－ＳＱ群と３ＤＤＰＴｅｔｒａ－ＳＱ群のマウスは、１０日目、２０日目において３ＤＤＰ－Ｍｉｎｏｘと同様に発毛を促進していた。

［実施例６］毛包に対する抗老化作用の検討
＜実験方法＞
実施例５の背部細胞を採取し、ウェスタンブロッティングによりタンパク質を定量した。

＜結果＞
結果を図１４に示す。
ＳＱ誘導体で炎症性サイトカイン（ＮＦ－κＢ）およびそのメディエーター（Ｃｏｘ２）の発現が減少した。
その結果、ＨＦ幹細胞の老化の制御に関与するＮｆａｔｃ１の発現が抑制された。
内在性皮膚老化マーカーであるＭｒｐｓ５もＳＱ誘導体で減少した。
一方、ミノキシジル（Ｍｉｎｏｘ）ではこのような抗炎症・抗老化作用は見られなかった（ミノキシジルでは炎症マーカーが増大している）。

本発明によれば、炎症を抑制しながら発毛を促進する発毛剤を提供することができる。

Claims

下記式（１）で表される化合物を有効成分とする発毛剤。

式（１）中、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。
下記式（１）で表される化合物及び薬学的に許容可能な担体を含む、発毛用組成物。

式（１）中、Ｒ_１及びＲ_２のいずれか一方が水素原子であり、他方が（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨであり、ｎは１～１０の整数である。