JP2023553533A - 癌の処置のための併用療法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、式Ｉの化合物などのＳＨＰ２阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、またはＭＥＴ阻害剤との併用療法による、癌を処置するための方法を提供する。【選択図】図２

Description

相互参照本出願は、２０２０年１２月１１日提出の米国仮特許出願第６３／１２４，６６３号、２０２０年１２月１１日提出の米国仮特許出願第６３／１２４，６６７号、２０２０年１２月１１日に提出の米国仮特許出願第６３／１２４，６７１号、および２０２０年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１２４，６７４号の利益を主張し、各出願はその全体を引用することによって本明細書に組み込まれる。
Ｓｒｃホモロジー－２ホスファターゼ（ＳＨＰ２）は、様々な組織および細胞型において遍在的に発現される非受容体タンパク質ホスファターゼである（ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｔａｊａｎ Ｍ ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ２０１６ ５８（１０）：５０９－２５；ＧｒｏｓｓｍａｎｎＫＳ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１０ １０６：５３－８９を参照されたい）。ＳＨＰ２は、そのＮＨ２末端における２つのＳｒｃ相同性２（Ｎ－ＳＨ２およびＣ－ＳＨ２）ドメイン、触媒ＰＴＰ（タンパク質－チロシンホスファターゼ）ドメイン、および調節特性を有するＣ末端テールから構成される。基底状態では、ＳＨ２ドメインとＰＴＰドメインとの間の分子間相互作用は、触媒ポケットへの基質の接近を妨げ、ＳＨＰ２を閉じた自己阻害立体構造に維持する。刺激に応答して、ホスホチロシンモチーフを有するＳＨＰ２活性化タンパク質は、ＳＨ２ドメインに結合し、活性部位の曝露およびＳＨＰ２の酵素的活性化をもたらす。
本明細書に開示される本実施形態は、概して、ＳＨＰ２阻害剤をＦＧＦＲ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤またはＭＥＴ阻害剤と組み合わせて利用し、予期されなかった相乗作用をもたらすことを含む、癌を治療するための併用療法に関連する組成物および方法に関する。
ＳＨＰ２は、増殖、分化、細胞周期維持および運動性を含む基本的な細胞機能において重要な役割を果たす。その関連シグナル伝達分子を脱リン酸化することによって、ＳＨＰ２は、広範囲の成長因子、サイトカイン、およびホルモンに応答して複数の細胞内シグナル伝達経路を調節する。ＳＨＰ２が関与する細胞シグナル伝達プロセスには、ＲＡＳ－ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ）、ＰＩ３Ｋ（ホスホイノシトール３－キナーゼ）－ＡＫＴ、およびＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路が含まれる。
ＳＨＰ２はまた、この経路においてシグナル増強の役割を果たし、ＲＴＫの下流およびＲＡＳの上流で作用する。抵抗性の一般的なメカニズムの１つは、ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化を促進するＲＴＫの活性化を含む。ＲＴＫ活性化は、直接結合を介して、およびアダプタータンパク質を通してＳＨＰ２を動員する。これらの相互作用は、閉鎖（不活性）立体構造から開放（活性）立体構造へのＳＨＰ２の変換をもたらす。ＳＨＰ２は、ＲＡＳシグナル伝達再活性化の重要な促進因子であり、主抵抗性および二次抵抗性の両方における薬理学的阻害を回避する。ＳＨＰ２の阻害は、しばしば発癌性シグナル伝達および適応腫瘍エスケープを駆動する上流ＲＴＫシグナル伝達を全体的に減弱させる作用を獲得し（Ｐｒａｈａｌｌａｄ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２， １９７８－１９８５（２０１５）；Ｃｈｅｎ ＹＮ， Ｎａｔｕｒｅ ５３５， １４８－１５２（２０１６）を参照）、本明細書の実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、すべての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示のすべてについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）は、タンパク質の線維芽細胞増殖因子ファミリーのメンバーに結合し、ＲＡＳの上流のＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達経路にも影響を及ぼす。複数の方面からのシグナル伝達経路を標的とし、ＳＨＰ２を介してＲａｓの上流のフィードバックループを潜在的に改善する機会は、併用療法を使用する方法を開発するための機会を提供する。本開示は、予期せぬ程の相乗作用を提供しながら、そのような方法を提供する。
ＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達経路は、タンパク質のＲａｆファミリーを含む。このファミリーは、Ｒａｓの下流エフェクターとして作用する３つの関連キナーゼ（Ａ－、Ｂ－およびＣ－Ｒａｆ）から構成される。特にＢ－Ｒａｆは、ＭＡＰキナーゼ／ＥＲＫシグナル伝達経路を活性化するセリン／トレオニンプロテインキナーゼである。恒常的に活性なＢ－Ｒａｆ変異体は、細胞の増殖を過度にシグナル伝達することによって癌を引き起こすことが一般に知られている。例えば、活性化Ｂ－Ｒａｆ Ｖ６００Ｅキナーゼ変異は、ヒト悪性腫瘍の約７％および黒色腫の約５０～６０％で生じる。
ＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達経路はまた、ＭＥＫ１およびＭＥＫ２を含む。ＭＥＫ１およびＭＥＫ２は、ＭＡＰキナーゼキナーゼとしても知られる二重機能セリン／トレオニンおよびチロシンタンパク質キナーゼである。ＭＥＫは、増殖因子受容体から核にシグナルを伝達して、とりわけ、細胞増殖、分化、生存および浸潤を調節する経路であるＲＡＳ調節ＲＡＦ－ＭＥＫ－ＥＲＫシグナル伝達経路において枢軸的役割を果たす。
最後に、枢軸的なタンパク質チロシンキナーゼである細胞外ＭＥＴ（またはｃ－ＭＥＴ）は、ＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達経路の上流で作動する。複数の角度からのシグナル伝達経路を標的とし、ＳＨＰ２を介してＲａｓの上流のフィードバックループを潜在的に改善する機会は、併用療法を使用する方法を開発するための機会を提供する。本明細書で開示される実施態様は、予期せぬ程の相乗作用を提供しながら、そのような方法をする。
第１の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を
ＦＧＦＲ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象におけるＦＧＦＲは恒常的に活性である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は肝細胞癌である。いくつかの実施形態では、癌は胆管癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、およびＦＧＦ４０１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤はエルダフィチニブである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブである。いくつかの実施形態では、方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。
第２の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をエルダフィチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における肝癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、エルダフィチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
第３の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＦＧＦＲ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＦＧＦＲ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の処置のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、ＦＧＦ４０１、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブのうちの１つまたは複数である。
第４の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクラス１変異を有するＢ－Ｒａｆタンパク質の阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、クラス１変異はＶ６００Ｅである。いくつかの実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、阻害剤はエンコラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はダブラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はソラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はレゴラフェニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、１ｍｇから５００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＢ－Ｒａｆ阻害剤エルダフィチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における大腸癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、エルダフィチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をエンコラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をベムラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をダブラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をソラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
レゴラフェニブをエンコラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
本明細書に記載された方法の様々な実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は膵臓の送管の腺癌（ＰＤ ＡＣ）である。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。いくつかの実施形態中では、式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。
別の態様では、本開示は、細胞集団におけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、細胞集団をレゴラフェニブと組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
に接触させる工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の濃度は、１ｎＭから５００ｎＭの範囲にある。いくつかの実施形態では、エンコラフェニブの濃度は、１０ｎＭから２０ｎＭの範囲にある。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩、およびＢ－Ｒａｆ阻害剤を含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＢ－Ｒａｆ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の処置のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブのうちの１つまたは複数である。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ１またはＭＥＫ２を選択的に、もしくはＭＥＫ１およびＭＥＫ２の両方を選択的に阻害する。いくつかの実施形態では、癌は転移性である。いくつかの実施形態では、癌大腸癌。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵癌である。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵臓の送管の腺癌（ＰＤ ＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、ＰＤ－０３２５９０１、セルメチニブ、およびＣＩ－１０４０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はコビメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はビニメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＰＤ－３２５９０１である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＣＩ－１０４０である。いくつかの実施形態では、本方法は、さらなるＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＫ阻害剤ビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、ビニメチニブまたはトラメチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をビニメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をトラメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
本明細書に記載された方法の様々な実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の投与量は、ＭＥＫ阻害剤による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。いくつかの実施形態中では、式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。
別の態様では、本開示は、細胞集団におけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、ビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
に接触させる工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物濃度は、１ｎＭから１，０００ｎＭの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の濃度は、１０ｎＭから５００ｎＭの範囲にある。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＭＥＫ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＭＥＫ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブまたはビニメチニブのうちの１つまたは複数である。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＴ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤はまた、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、またはその両方である。いくつかの実施形態では、癌は非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は胃腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、チバンチニブからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、テポチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はサボリチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はカボザンチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はチバンチニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日１０ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、阻害剤の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクリゾチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における胃癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、クリゾチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
最後の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＭＥＴ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＭＥＴ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、およびチバンチニブのうちの１つまたは複数である。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、医薬組成物として製剤化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、経口組成物として製剤化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日に１回または２回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、連続の２８日サイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、約１０ｍｇから約１４０ｍｇの量で１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の３週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む４週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、６週間にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週に３回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週の１日目、３日目、および５日目に投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週に４回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の３週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む４週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日２回、週に２日に投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、各週の１日目および２日目に投与される。
いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、若年性骨髄単球性白血病、神経芽細胞腫、黒色腫、および急性骨髄性白血病から選択される。
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明および添付の図面を参照することによって得られるであろう。
式Ｉの化合物とＦＧＦＲ阻害剤エルダフィチニブとの組み合わせがインビトロで相乗作用を発揮することを表わすデータを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。 式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせを用いたＨｅｐ３Ｂ癌細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。 肝癌ＣＤＸモデルＫＡＴＯ ＩＩＩにおける、式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＦＧＦＲ２増幅性胃癌ＣＤＸ ＳＮＵ－１６における、式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＦＧＦ１９－ＦＧＦＲ４依存性肝癌ＣＤＸモデルＨｕｈ－７における、式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせが複数のＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異細胞にわたって相乗作用を発揮することを表わすデータを示す。 式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＲＫＯ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。 式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＷｉＤｒ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。 式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＨＴ２９ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。 ＲＫＯ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を表わしているゲルを示す。図９Ａは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせを用いたｐＥＲＫ１／２のロバストな減少を指し示す。 ＷｉＤｒ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の強力な阻害を表わしているゲルを示す。図９Ｂは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせを用いたｐＥＲＫ１／２のロバストな減少を指し示す。 ＲＫＯ大腸癌細胞株における式Ｉの化合物単独またはエンコラフェニブと組み合わせた式Ｉの化合物の抗増殖作用のプロットを示す。図９Ｃは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせが、式Ｉの化合物の阻害活性を増加させたことを示唆する。 ＷｉＤｒ大腸癌細胞株における式Ｉの化合物またはエンコラフェニブと組み合わせた式Ｉの化合物の抗増殖作用のプロットを示す。図９Ｄは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせが式Ｉの化合物の阻害活性を増加させたことを示唆する。 ＲＫＯ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を以下の組み合わせ－式Ｉの化合物＋エンコラフェニブ、ＴＮＯ１５５＋エンコラフェニブ、およびＲＭＣ－４５５０＋エンコラフェニブ、と比較したゲルを示し、ＥＲＫ１／２リン酸化の阻害が、式ＩのＳＨＰ２阻害剤化合物とエンコラフェニブとの組み合わせで最も有効であることを指し示す。 対照のパーセンテージとしてのｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２．（式Ｉの化合物）、３．エンコラフェニブ、および４．（式Ｉの化合物）＋エンコラフェニブであり、ＥＲＫ１／２リン酸化の阻害は、式ＩのＳＨＰ２阻害剤化合物とエンコラフェニブとの組み合わせで最も有効であることを指し示す。 対照のパーセンテージとしてのｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２．ＴＮＯ１５５、３．エンコラフェニブ、および４．ＴＮＯ１５５＋エンコラフェニブであり、ＥＲＫ１／２リン酸化の阻害は、式ＩのＳＨＰ２阻害剤化合物とエンコラフェニブとの組み合わせで最も有効であることを指し示す。 対照のパーセンテージとしてのｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２．ＲＭＣ－４５５０、３．エンコラフェニブ、および４．ＲＭＣ－４５５０＋エンコラフェニブであり、ＥＲＫ１／２リン酸化の阻害は、式ＩのＳＨＰ２阻害剤化合物とエンコラフェニブとの組み合わせで最も有効であることを指し示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸ モデルＣＲ００２９における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００４における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＷｉＤｒにおける、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組合せによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＨＴ－２９における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組合せによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体甲状腺癌ＣＤＸモデルＢＨＴ－１０１における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＲＫＯにおける、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組合せによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１６６６癌細胞株における相乗作用の図表データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１６６６癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＭｅＷｏ癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＭｅＷｏ癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１８３８癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１８３８癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇ Ｍ）のプロットを示す。表は、式Ｉの化合物単独、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞のＩＣ５０データ。 式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＭｅＷｏ細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。表は、式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＭｅＷｏ細胞におけるＩＣ５０データ。 ＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を示すウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）・ゲルを示す。 図２０Ａのウエスタンブロットの定量棒グラフを示す。 ＭｅＷｏ（ＮＦ１ ＬｏＦ）癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を示すウエスタンブロット・ゲルを示す。 図２０Ｃのウエスタンブロットの棒グラフ定量を示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ａ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＡ５４９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｓ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ７２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ａ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＡ５４９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｓ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ７２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。 式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。表は、式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞のデータ。 式Ｉ単独またはトラメチニブ単独が細胞生存率に対して最小の作用を有することを示すＣＴＧ活性パーセントの棒グラフを示す。まとめると、このデータは、式Ｉの化合物とＭＥＫの阻害剤との組み合わせが、ＢＲＡＦクラスＩＩＩ、ＮＦ１ ＬｏＦおよびＫＲＡＳ Ｇ１２Ｘ変異癌における癌細胞生存率の相乗的阻害を提供することを示す。 は、ＮＦ１ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおける、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＮＦ１ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおける、式Ｉの化合物単独、ビニメチニブ単独、および式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせによる処置時間の期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＢＲＡＦクラスＩＩＩ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ５０８における、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ＮＦ１ ＬｏＦ変異体ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１８３８における、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いたＨｓ７４６Ｔ癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いたＭＫＮ－４５癌細胞株における相乗作用データを示す。 式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いたＥＢＣ－１癌細胞株における相乗作用データを示す。 ｃ－ＭＥＴ増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＵ－５における、式Ｉの化合物単独、クリゾチニブ単独、および式Ｉの化合物とクリゾチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。 ｃ－ＭＥＴ増幅ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１９９３における、式Ｉの化合物単独、クリゾチニブ単独、および式Ｉの化合物とクリゾチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。
Ｉ．全般
本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＦＧＦＲ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。以下の実施例は、当該組み合わせについて予期されなかった相乗作用を示す。式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を使用する本明細書に開示される併用療法は、ＦＧＦＲの阻害剤と組み合わせて使用される代替的なＳＨＰ２阻害剤の組み合わせと比較して優れた結果を示し得る。さらに、式ＩのＳＨＰ２阻害剤とＦＧＦＲの阻害剤との組み合わせは、単剤療法において単独で使用されるどちらかの薬剤の投与量よりも低い投与量の使用を可能にする方法を提供し、これにより潜在的な副作用の低減が支援され得る。特に、併用療法は、ＦＧＦＲ４変異ならびにＦＧＦＲの増幅発現を含むがこれらに限定されない変異を発現する癌細胞において有効であり得る。
第１の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
を投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象におけるＦＧＦＲは構成的に活性である。いくつかの実施形態、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は肝細胞癌である。いくつかの実施形態では、癌は胆管癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、およびＦＧＦ４０１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤はエルダフィチニブである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。
第２の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をエルダフィチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における肝癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、エルダフィチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
第３の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＦＧＦＲ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＦＧＦＲ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、ＦＧＦ４０１、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブのうちの１つまたは複数である。
第４の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクラス１変異を有するＢ－Ｒａｆタンパク質の阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、クラス１変異はＶ６００Ｅである。いくつかの実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、阻害剤はエンコラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はダブラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はソラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はレゴラフェニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、１ｍｇから５００ｍｇの範囲にある。
本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクラス１変異体Ｂ－Ｒａの阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。以下の実施例は、当該組合せの予期されなかった有意な相乗作用を示す。式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を使用する本明細書に開示される併用療法は、クラス１変異体Ｂ－Ｒａｆの阻害剤と組み合わせて使用される代替的なＳＨＰ２阻害剤の組み合わせと比較して、優れた結果を示すことができる。さらに、式ＩのＳＨＰ２阻害剤とクラス１変異体Ｂ－Ｒａｆの阻害剤との組み合わせは、単剤療法において単独で使用されるどちらかの薬剤の投与量よりも低い投与量の使用を可能にする方法を提供し、これにより潜在的な副作用の低減が支援され得る。特に、併用療法は、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異を発現する癌細胞に効果的であり得る。
第４の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクラス１変異を有するＢ－Ｒａｆタンパク質の阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、クラス１変異はＶ６００Ｅである。いくつかの実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、阻害剤はエンコラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はダブラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はソラフェニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はレゴラフェニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、１ｍｇから５００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＢ－Ｒａｆ阻害剤エルダフィチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における大腸癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、エルダフィチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をエンコラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をベムラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をダブラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をソラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をレゴラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
本明細書に記載された方法の様々な実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は甲状腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は膵臓の送管の腺癌（ＰＤ ＡＣ）である。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。いくつかの実施形態中では、式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。
別の態様では、本開示は、細胞集団におけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、細胞集団をレゴラフェニブと組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
に接触させる工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の濃度は、１ｎＭから５００ｎＭの範囲にある。いくつかの実施形態では、エンコラフェニブの濃度は、１０ｎＭから２０ｎＭの範囲にある。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩、およびＢ－Ｒａｆ阻害剤を含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＢ－Ｒａｆ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブのうちの１つまたは複数である。
本実施形態は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。以下の例は、予期されなかった組み合わせの相乗作用を示す。式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を使用する本明細書に開示される併用療法は、ＭＥＫの阻害剤と組み合わせて使用される代替的なＳＨＰ２阻害剤の組み合わせと比較して優れた結果を示すことができる。さらに、式ＩのＳＨＰ２阻害剤とＭＥＫの阻害剤との組み合わせは、単剤療法において単独で使用されるどちらかの薬剤の投与量よりも低い投与量の使用を可能にする方法を提供し、これは、潜在的な副作用の低減を支援し得る。特に、当該併用療法は、ＦＧＦＲ４変異およびＫＲＡＳ Ｇ１２Ｘ変異を含むがこれらに限定されない変異を発現する癌細胞において有効であり得る。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ１またはＭＥＫ２を選択的に、もしくはＭＥＫ１およびＭＥＫ２の両方を選択的に阻害する。いくつかの実施形態では、癌は転移性である。いくつかの実施形態では、癌大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵癌である。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵臓の送管の腺癌（ＰＤ ＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、ＰＤ－０３２５９０１、セルメチニブ、およびＣＩ－１０４０からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はコビメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はビニメチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＰＤ－３２５９０１である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＣＩ－１０４０である。いくつかの実施形態では、本方法は、さらなるＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＫ阻害剤ビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、ビニメチニブまたはトラメチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をビニメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をトラメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。
本明細書に記載された方法の様々な実施形態では、癌は大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の投与量は、ＭＥＫ阻害剤による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。いくつかの実施形態中では、式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法のために必要な投与量よりも少ない。
別の態様では、本開示は、細胞集団におけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、ビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
に接触させる工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の濃度は、１ｎＭから１，０００ｎＭの範囲にある。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の濃度は、１０ｎＭから５００ｎＭの範囲にある。
別の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＭＥＫ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＭＥＫ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブまたはビニメチニブのうちの１つまたは複数である。
本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＴ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。以下の実施例は、当該組み合わせについて予期されなかった相乗作用を示す。式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を使用する本明細書に開示される併用療法は、ＭＥＴの阻害剤と組み合わせて使用される代替的なＳＨＰ２阻害剤の組み合わせと比較して優れた結果を示すことができる。さらに、式ＩのＳＨＰ２阻害剤とＭＥＴの阻害剤との組み合わせは、どちらかの薬剤の単剤療法において単独で使用される投与量よりも低い投与量の使用を可能にする方法を提供し、潜在的な副作用の低減を支援し得る。特に、併用療法は、ＭＥＴにおける異常な変異を発現する癌細胞に効果的であり得る。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象を処置する方法であって対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をＭＥＴ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤はまた、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、またはその両方である。いくつかの実施形態では、癌は非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、癌は胃癌である。いくつかの実施形態では、癌は胃腺癌である。いくつかの実施形態では、癌は膵臓の送管の腺癌（ＰＤ ＡＣ）である。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、およびチバンチニブからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤はクリゾチニブである。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、テポチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はサボリチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はカボザンチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤はチバンチニブである。いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、毎日１０ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある。いくつかの実施形態では、阻害剤の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある。
別の態様では、本開示は、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
をクリゾチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における胃癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、クリゾチニブは、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
最後の態様では、本開示は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＭＥＴ阻害剤を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物およびＭＥＴ阻害剤は、別々のパッケージ内にある。いくつかの実施形態では、キットは、癌の治療のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、およびチバンチニブのうちの１つまたは複数である。
したがって、このような処置は、適切な患者集団選択を支援するためのコンパニオン診断の使用に適合する。これらの、および他の利点は、当業者によって認識されるであろう。
ＩＩ．定義
別段の明記がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、実施形態が対象とする当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。さらに、本明細書に記載の方法または材料と類似または同等の任意の方法または材料を、本明細書の実施形態の実施において使用することができる。本明細書に開示される実施形態の目的のために、以下の用語が定義される。
本明細書で使用される「１つの（Ａ）」、「１つの（ａｎ）」または「上記（ｔｈｅ）」は、１つの構成要素を有する態様を含むだけでなく、複数の構成要素を有する態様も含む。例えば、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「上記（ｔｈｅ）」は、文脈上明確に別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞」への言及は、複数のそのような細胞を含み、「薬剤」への言及は、当業者に公知の１つ以上の薬剤への言及を含む、などである。
「薬学的に許容可能な賦形剤」は、対象への活性剤の投与および対象による吸収を助ける物質を指す。本実施形態において有用な医薬賦形剤としては、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、界面活性剤、コーティング、甘味剤、香味剤および着色剤が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、他の医薬賦形剤が本実施形態において有用であることを認識するであろう。
「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、寛解、鎮静、症状の減少、もしくは損傷、病状または状態を患者にとってより耐容可能なものにすること、変性または悪化の速度の減速、変性の最終点の衰弱をより少なくすること、患者の身体的または精神的な健康状態の改善などの、任意の客観的または主観的パラメータを含む、損傷、病状、または状態の処置または改善における成功の任意の徴候を指す。処置または症状の改善は、身体検査、神経精神医学的検査、および／または精神医学的評価の結果を含む、客観的または主観的パラメータに基づいてよい。
「投与」は、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、病巣内、鼻腔内または皮下投与、髄腔内投与、あるいは対象への徐放性デバイス、例えば、ミニ浸透圧ポンプの移植を指す。本明細書に開示される併用療法の文脈において、投与は、別々の時間または同時または実質的に同時であり得る。
「治療有効量」は、それが投与される治療効果をもたらす用量を指す。正確な用量は治療の目的に依存し、当業者は公知の技術（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ． １ ３， １９９２）、Ｌｌｏｙｄ， Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）、 Ｐｉｃｋａｒ， Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ２００３， Ｇｅｎｎａｒｏ， Ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）を用いて確認することができる。感作細胞において、治療有効量は、しばしば、非感作細胞についての従来の治療有効量よりも低くなり得る。
「阻害」、「阻害する」、および「阻害剤」は、特定の作用または機能を部分的もしくは完全に遮断もしくは妨げる化合物、または部分的もしくは完全に遮断もしくは妨げる方法を指す。
「癌」は、白血病、リンパ腫、癌腫および肉腫を含むがこれらに限定されない、哺乳動物（例えば、ヒト）において見出される全ての種類の癌、新生物または悪性腫瘍を指す。本明細書において提供される化合物または方法で処置さ得る例示的な癌として、脳癌、神経膠腫、神経膠芽腫、前立腺癌、大腸癌、膵癌、髄芽腫、黒色腫、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、頭部の癌、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。本明細書において提供される化合物または方法で処置され得る例示的な癌として、甲状腺、内分泌系、脳、乳房、子宮頸部、結腸、頭頸部、肝臓、腎臓、肺、卵巣、膵臓、直腸、胃、および子宮の癌が挙げられる。さらなる例として、甲状腺癌、胆管癌、膵臓腺癌、皮膚皮膚黒色腫、結腸腺癌、直腸腺癌、胃腺癌、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、乳房浸潤性癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、非小細胞肺癌、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、多形性神経膠芽腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、悪性膵臓インスラノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、尿生殖路癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、内分泌または外分泌膵臓の新生物、甲状髄癌、甲状髄癌、黒色腫、大腸癌、甲状腺乳頭癌、肝細胞癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、または前立腺癌が挙げられる。
「ＦＧＦＲ阻害剤」は、野生型ＦＧＦＲまたはＦＧＦＲ変異体の任意の阻害剤を指す。ＦＧＦＲ変異には、単一ヌクレオチド多型、エクソン挿入および欠失、ポリソミーなどが含まれるが、これらに限定されない。変異および阻害剤の具体的な例として、限定されないが、ＦＧＦＲ１遺伝子コピーゲイン、ＦＧＦＲ１遺伝子増幅、ＦＧＦＲ２遺伝子コピーゲイン、ＦＧＦＲ２遺伝子増幅、ＦＧＦＲ３遺伝子コピーゲイン、ＦＧＦＲ３遺伝子増幅、ＦＧＦＲ４遺伝子コピーゲイン、ＦＧＦＲ４遺伝子増幅、ＦＧＦＲ１ Ｔ１４１Ｒ、ＦＧＦＲ１ Ｒ４４５Ｗ、ＦＧＦＲ１ Ｎ５４６Ｋ、ＦＧＦＲ１ Ｋ６５６Ｅ、ＦＧＦＲ１ Ｇ８１８Ｒ、ＦＧＦＲ２ Ｓ２５２Ｗ、ＦＧＦＲ２ Ｐ２５３Ｒ、ＦＧＦＲ２ Ａ３１５Ｔ、ＦＧＦＲ２ Ｄ３３６Ｎ、ＦＧＦＲ２ Ｙ３７５Ｃ、ＦＧＦＲ２ Ｃ３８２Ｒ、ＦＧＦＲ２ Ｖ３９５Ｄ、ＦＧＦＲ２ Ｄ４７１Ｎ、ＦＧＦＲ２ Ｉ５４７Ｖ、ＦＧＦＲ２ Ｎ５４９Ｋ、ＦＧＦＲ２ Ｎ５４９Ｙ、ＦＧＦＲ２ Ｋ６５９Ｅ、ＦＧＦＲ３ ＳＩ ３ ＩＬ、ＦＧＦＲ３ Ｒ２４８Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｓ２４９Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｇ３７０Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｓ３７１Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｙ３７３Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｇ３８０Ｒ、ＦＧＦＲ３ Ｒ３９９Ｃ、ＦＧＦＲ３ Ｅ６２７Ｋ、ＦＧＦＲ３ Ｋ６５０Ｅ、ＦＧＦＲ３ Ｋ６５０Ｍ、ＦＧＦＲ３ Ｖ６７７Ｉ、ＦＧＦＲ３ Ｄ７８５Ｙ、ＦＧＦＲ４ Ｒ１８３ Ｓ、ＦＧＦＲ４ Ｒ３９４Ｑ、ＦＧＦＲ４ Ｄ４２５Ｎ、ＦＧＦＲ４ Ｖ５１０Ｌ、ＦＧＦＲ４ Ｒ６１ ＯＨ、ならびに ＦＧＦＲ融合体（例えば、ＦＧＦＲ３－ＴＡＣＣ３、ＦＧＦＲ２－ＴＡＣＣ３、ＦＧＦＲ２－ＮＰＭ１、ＦＧＦＲ２－ＴＡＣＣ２、ＦＧＦＲ２－ ＢＩＣＣ１、ＦＧＦＲ２－Ｃ１０ｏｒｆ６８，ＦＧＦＲ３－ＪＡＫＭＩＰｌ、ＦＧＦＲ２－ＫＩＡＡ１５９８，ＦＧＦＲ２－ＮＣＡＬＤ、ＦＧＦＲ２－ＮＯＬ４、ＦＧＦＲ１－ＮＴＭ、ＦＧＦＲ２－ＰＰＡＰＤＣ１ Ａ、ＦＧＦＲ３－ＴＮＩＰ２、およびＦＧＦＲ３ －ＷＨＳＣＩ）が挙げられる。いくつかの態様において、限定されないが、上に列挙された変異型のうちの１つまたは複数は、本明細書に記載される任意の方法、キットおよび組成物などを含む実施形態から具体的に除外され得る。阻害剤には、限定されないが、エルダフィチニブ、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブが含まれる。いくつかの態様において、上に列挙された変異型のうちの１つまたは複数は、本明細書に記載される方法、キットおよび組成物などを含むがこれらに限定されない任意の実施形態から具体的に除外され得る。
「クラス１変異体Ｂ－Ｒａｆ」または「クラス１変異を有するＢ－Ｒａｆタンパク質」は、一般に、Ｖ６００（バリン６００）で野生型Ｂ－Ｒａｆタンパク質から逸脱する任意の変異を指す。特に、そのような変異体Ｂ－Ｒａｆタンパク質は、Ｖ６００Ｅ変異を含む変異を含む。他のクラス１のＢＲＡＦ変異には、限定されないが、Ｖ６００Ｋ、Ｖ６００Ｄ、Ｖ６００Ｌ、Ｖ６００Ｍ、およびＶ６００Ｒが含まれる。いくつかの態様において、上に列挙された変異のうちの１つまたは複数は、本明細書に記載される方法、キットおよび組成物などを含むがこれらに限定されない任意の実施形態から具体的に除外され得る。
「ＭＥＫ阻害剤」は、一般に、ＭＥＫ１またはＭＥＫ２を選択的に、またはＭＥＫ１とＭＥＫ２の両方を阻害する任意の阻害剤を指す。阻害剤の例として、限定されないが、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、ＰＤ－０３２５９０１、セルメチニブ、およびＣＩ－１０４０が挙げられる。
「ＭＥＴ阻害剤」は、野生型ＭＥＴまたはＭＥＴ変異体の任意の阻害剤を指す。ＭＥＴ変異には、単一ヌクレオチド多型、エクソン挿入および欠失、ポリソミーなどが含まれるが、これらに限定されない。変異および阻害剤の具体的な例として、ＭＥＴ遺伝子コピーゲイン、ＭＥＴ遺伝子増幅、ＭＥＴ Ｅ３４Ｋ、ＭＥＴ Ｈ１５０Ｙ、ＭＥＴ Ｅ１６８Ｄ、ＭＥＴ Ｌ２６９Ｖ、ＭＥＴ Ｌ２９９Ｆ、ＭＥＴ Ｓ３２３Ｇ、ＭＥＴ Ｍ３６２Ｔ、ＭＥＴ Ｎ３７５Ｓ、ＭＥＴ Ｃ３８５Ｙ、ＭＥＴ Ｒ９７０Ｃ、ＭＥＴ Ｒ９８８Ｃ、ＭＥＴ Ｐ１００９Ｓ、ＭＥＴ Ｔ１０１０Ｉ、ＭＥＴ Ｓ１０５８Ｐ、ＭＥＴエクソン１４スキッピング変異、ＭＥＴエクソン１４スプライスバリアント、ＭＥＴ Ａｌ １０８ Ｓ、ＭＥＴ ＶＩ １１０１、ＭＥＴ Ｈｌ １１２Ｒ、ＭＥＴ Ｈｌ １１２Ｌ、ＭＥＴ Ｈｌ １１２１、ＭＥＴ ＨＪ１１２４Ｄ、ＭＥＴ Ｇ１１３７ Ｖ、ＭＥＴ Ｍｌ １４９Ｔ、ＭＥＴ Ｔ１１９１１、ＭＥＴ Ｖ１２０６Ｌ、ＭＥＴ Ｌ１２１３Ｖ、ＭＥＴ Ｄ１２２８Ｖ、ＭＥＴ Ｙ１２３０Ｃ、ＭＥＴ Ｙ１２３０Ｈ、ＭＥＴ Ｙ１２３０Ｄ、ＭＥＴ Ｙ１２３５Ｄ、ＭＥＴ Ｖ１２３８Ｉ、ＭＥＴ Ｄ１２４６Ｎ、ＭＥＴ Ｙ１２４８Ｃ、ＭＥＴ Ｙ１２４８Ｄ、ＭＥＴ Ｙ１２４８Ｈ、ＭＥＴ Ｋ１２６２Ｒ、ＭＥＴ Ｍ１２６８Ｔ、ＭＥＴ Ｍ１２６８Ｉ、およびＭＥＴ Ｖ１３１２１が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本段落および本明細書の他の場所に列挙される変異型のうちの１つ以上は、本明細書に記載される方法、キット、および組成物等を含むがそれらに限定されない任意の実施形態から具体的に除外され得る。阻害剤の例として、クリゾチニブ、カパチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、チバンチニブ、カボザンチニブ、フォレチニブ、アミバンタマブ、オナルツズマブ、エミベツズマブ、およびフィクラツズマブが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本段落および本明細書の他の場所に列挙される阻害剤のうちの１つ以上は、本明細書に記載される方法、キット、および組成物等を含むがそれらに限定されない任意の実施形態から具体的に除外され得る。
「対象」は、本明細書に提供される医薬組成物の投与によって処置され得る疾患または状態に罹患しているか、またはその傾向がある生物を指す。非限定的な例として、ヒト、他の哺乳動物、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ、シカ、ウマ、および他の非哺乳動物が挙げられる。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。
ＩＩＩ．投与方法
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、医薬組成物として製剤化される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、経口組成物として製剤化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日に１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日に１回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日に２回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、連続２８日のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、約１０ｍｇから約１４０ｍｇの量で１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の３週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む４週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、６週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は、週に３回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週の１日目、３日目、および５日目に投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は、週に４回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩は、化合物の３週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む４週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日２回、週に２日に投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、各週の１日目および２日目に投与される。
いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵癌、若年性骨髄単球性白血病、神経芽細胞腫、黒色腫、および急性骨髄性白血病から選択される。いくつかの実施形態では、癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。
ＩＶ．組合せ方法
いくつかの実施形態では、本方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む。理論に束縛されるものではないが、癌細胞におけるＭＡＰＫシグナル伝達の抑制は、ＰＤ－Ｌ１発現の下方制御をもたらし、癌細胞が免疫系によって検出される可能性を増加させることができる。このような第３のＭＡＰＫ経路阻害剤は、ＭＡＰＫ経路におけるタンパク質の他の変異に基づき得る。いくつかの実施形態では、Ｋ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ、Ｈ－Ｒａｓ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＭＥＴ、ＦＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒ、ＧＲＢ２、ＳＯＳ、ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ、ＲＡＦＩ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ｃ－Ｍｙｃ、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫ２、ＥＲＫ１、およびＥＲＫ２を標的とするものを含む、任意のＭＡＰＫ経路阻害剤を採用することができる。ＭＥＫ阻害剤の非限定的な例として、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、ＰＤ－０３２５９０１、セルメチニブおよびＣＩ－１０４０が挙げられる。例示的なＭＡＰＫ経路阻害剤として、限定されないが、アファチニブ、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、ダコミチニブ、バンデタニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ネシツムマブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、ウリキセルチニブ、ＬＴＴ４６２、およびＬＹ３２１４９９６が挙げられる。いくつかの実施形態では、本段落および本明細書の他の場所に列挙される阻害剤のうち１つまたは複数は、本明細書に記載される方法、キット、および組成物等を含むがそれらに限定されない任意の実施形態から具体的に除外され得る。
本明細書に開示される方法は、他の化学療法剤と組み合わせることができる。このような薬剤の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｖ．Ｔ． Ｄｅｖｉｔａ ａｎｄ Ｓ． Ｈｅｌｌｍａｎ（ｅｄｉｔｏｒｓ）， ６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｆｅｂｒｕａｒｙ １５， ２００１）， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓに見られ、本明細書の実施形態および開示のいずれかとともに使用するために、限定されないが、全ての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示の全てについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。当業者は、薬物および関与する疾患の特定の特徴に基づいて、薬剤のどの組合せが有用であるかを識別することができるであろう。
いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１つの細胞毒性剤の同時投与を含むことができる。用語「細胞傷害剤」は、本明細書で使用される場合、細胞機能を阻害するかまたは妨げ、ならびに／あるいは細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞毒性剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、成長阻害剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、ならびに、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素などの、それらの断片および／またはバリアントを含む、毒素を含むが、これらに限定されない。
細胞毒性剤の例は、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモンアナログ、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、免疫療法剤、アポトーシス促進剤、ＬＤＨ－Ａの阻害剤、脂肪酸生合成の阻害剤、細胞周期シグナル伝達阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ならびに癌代謝の阻害剤から選択され得る。
化学療法剤には、癌の治療に有用な化学化合物が含まれる。化学療法剤の例として、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩＰｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、１７－ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラジシコール、ラクテートデヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ－Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｓｕｇｅｎ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フィナスネート（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５－ＦＵ（５－フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、ロナファミブ（ＳＣＨ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、バイエル Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパおよびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロメラミンを含む、エチレンイミン（ｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）類とメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）類；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）、カンプトテシン（トポテカンおよびイリノテカンを含む）、ブリオスタチン、カルシスタチン、ＣＣ１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）、クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）、副腎皮質ステロイド（プレドニゾンおよびプレドニゾロンを含む）、酢酸シプロテロン、５－α－レダクターゼ（フィナステリドおよびデュタステリドを含む）、ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成アナログ、ｋＷ－２１８９とＣＢ１－ＴＭ１を含む））；エロイテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉ ｓｔａｔｉｎ）；ａサルコジクチイン（ａ ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン；クロラムブチル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１ｌとカリケアマイシンｃｏＩＩ（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． １９９４ ３３：１８３－１８６）などの抗生物質；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連するクロモプロテイン系エンジイン抗生物質）、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸とノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）；フォリン（ｆｒｏｌｉｎｉｃ）酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルホミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシンとアンサマイトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール（ｍｏｐｉｄａｍｎｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫＲ多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｅｕｇｅｎｅ， Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、およびアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシッド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（パクリタキセル；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン（登録商標）（クレモフォールを含まない）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ， Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ， ＩＩＩ．）、およびタキソテール（登録商標）（ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ、ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン、アミノプテリン、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、イバンドロネート、ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸などのレチノイド、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、および誘導体を含む。
化学療法剤は、また、（ｉ）例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、イオドキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフェン）を含む、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ｉｉ） 副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など；（ｉｉｉ） フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤；ブセレリン、トリプテレリン、メドロキシプロゲステロンアセタート、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、全てのトランスレチン酸、フェンレチニド、ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害薬；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ） アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ－α、ＲａｌｆおよびＨ－Ｒａｓ；（ｖｉｉ） ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標） ｒｍＲＨ；および（ｉｘ）上記のもののいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、および誘導体を含む。
化学療法剤は、また、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）などの抗体；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｅ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、および抗体薬物コンジュゲートであるゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）を含む。本発明の化合物と組み合わせた薬剤としての治療可能性を有するさらなるヒト化モノクローナル抗体は、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネツズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォノリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブ・オゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブモトビズマブ（ｍｏｔｏｖｉｚｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ（ｎｏｌｏｖｉｚｕｍａｂ）、ヌマビズマブ（ｎｕｍａｖｉｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ（ｐｅｃｔｕｚｕｍａｂ）、ペクセリズマブ、ラリビズマブ（ｒａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、ラニビズマブ、レスリビズマブ（ｒｅｓｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、レシリズマブ、レシビズマブ（ｒｅｓｙｖｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、アカツズマブテトラキセタン（ａｃａｔｕｚｕｍａｂ ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツクシツズマブ（ｔｕｃｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、および排他的にヒト配列の組み換えであり、ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子改変された完全長ＩｇＧ１抗体であるインターロイキン－１２抗体（ＡＢＴ－８７４／Ｊ６９５， Ｗｙｅｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含む。
化学療法剤はまた、「ＥＧＦＲ阻害剤」を含み、これはＥＧＦＲまたはその変異体形態に結合するかまたはそうでなければそれと直接相互作用し、そのシグナル伝達活性を防止または低減する化合物を指し、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」とも呼ばれる。このような薬剤の例には、ＥＧＦＲに結合する抗体および小分子が含まれる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例として、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬＨＢ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ８５０９）（米国特許４，９４３，５３３、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ｅｌ ａｌを参照）、およびそれらのバリアント（キメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ、ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標）と再成形ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ ９６／４０２１０、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓ ｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．を参照）など）；完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体であるＩＭＣ－１１Ｆ８（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許５，２１２，２９０）；米国特許第５，８９１，９９６号に記載のＥＧＦＲに結合するヒト化およびキメラ抗体；およびＥＧＦＲに結合するヒト抗体（ＡＢＸ－ＥＧＦまたはパニツムマブなど（ＷＯ９８／５０４３３、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照）；ＥＭＤ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ ｅｔａｌ． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ３２Ａ：６３６－６４０（１９９６））；ＥＧＦＲに対して向けられＥＧＦＲ結合についてＥＧＦとＴＧＦ－αの両方に競合するヒト化ＥＧＦＲ抗体であるＥＭＤ７２００（マツズマブ）（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３およびＥ７．６．３として知られ、およびＵＳ６，２３５，８８３に記載された完全ヒト抗体；ＭＤＸ－４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；およびｍＡｂ８０６またはヒト化ｍＡｂ８０６（Ｊｏｈｎｓ ｅｔａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７９（２９）：３０３７５－３０３８４（２００４））が挙げられる。抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害剤とコンジュゲートされ得、したがって、イムノコンジュゲート（例えば、ＥＰ６５９，４３９Ａ２， Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照）を生成する。ＥＧＦＲアンタゴニストには、米国特許番号５，６１６，５８２、５，４５７，１０５、５，４７５，００１、５，６５４，３０７、５，６７９，６８３、６，０８４，０９５、６，２６５，４１０、６，４５５，５３４、６，５２１，６２０、６，５９６，７２６、６，７１３，４８４、５，７７０，５９９、６，１４０，３３２、５，８６６，５７２、６，３９９，６０２、６，３４４，４５９、６，６０２，８６３、６，３９１，８７４、６，３４４，４５５、５，７６０，０４１、６，００２，００８、および ５，７４７，４９８、ならびにＰＣＴ公報ＷＯ９８／１４４５１、Ｗ０９８／５００３８、Ｗ０９９／０９０１６、およびＷＯ９９／２４０３７に記載されている化合物などの小分子が含まれる。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストとして、ＯＳＩ－７７４（ＣＰ－３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ１８３８０５（ＣＩ １０３３、２ －プロペンアミド、Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［３－（４－モルホリニル）プロポキシ］－６－キナゾリニル］－，二塩酸塩、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））４－（３’－クロロ－４’－フルオロアニリノ）－７－メトキシ－６－（３－モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ １０５１８０（（６－アミノ－４－（３－メチルフェニル－アミノ）－キナゾリン，Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ－１３８２（Ｎ８－（３－クロロ－４－フルオロ－フェニル）－Ｎ２－（１－メチル－ピペリジン－４－イル）－ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－２，８－ジアミン， ベーリンガーインゲルハイム）；ＰＫＩ－１６６（（Ｒ）－４－［４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール）；（Ｒ）－６－（４－ヒドロキシフェニル）－４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン）；ＣＬ－３８７７８５（Ｎ－［４－［（３－ブロモフェニル）アミノ］－６－キナゾリニル］－２－ブチンアミド）；ＥＫＢ－５６９（Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－３－シアノ－７－エトキシ－６－キノリニル］－４－（ジメチルアミノ）－２－ブチンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）；ラパチニブなどのデュアルＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤（（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６またはＮ－［３－クロロ－４－［（３ フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］－６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］－２－フラニル］－４－キナゾリンアミン）が挙げられる。上記の参考文献の各々は、本明細書における実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、すべての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示のすべてについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
化学療法剤は、また、先の段落で言及したＥＧＦＲ標的薬物を含む「チロシンキナーゼ阻害剤」；Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５などの小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤；ＣＰ－７２４，７１４、ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択的阻害剤（ＰｆｉｚｅｒおよびＯＳＩ）；ＥＧＦＲに優先的に結合するが、ＨＥＲ２およびＥＧＦＲ過剰発現細胞の両方を阻害するＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）などのデュアルＨＥＲ阻害剤；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６；Ｇｌａｘｏ－ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）、経口ＨＥＲ２およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤；ＰＫＩ－１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；カネルチニブ（ＣＩ－１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などのｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤；ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なＩＳＩＳ－５１３２などの、Ｒａｆ－１シグナル伝達を阻害するアンチセンス剤であるＲａｆ－１阻害剤；メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）などの非ＨＥＲ標的化ＴＫ阻害剤；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）などの多標的化チロシンキナーゼ阻害剤；バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧから入手可能）などのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩ阻害剤ＣＩ－１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；ＰＤ１５３０３５，４－（３－クロロアニリノ） キナゾリンなどのキナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１、およびＣＧＰ６２７０６などのピロロピリミジン；ピラゾロピリミジン類、４－（フェニルアミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン， ４，５－ビス（４－フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチルホスチン；ＰＤ－０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ－Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲをコードする核酸に結合するもの）；キノキサリン（米国特許５，８０４，３９６）；トリホスチン（米国特許５，８０４，３９６）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）などのｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ ３５２１；ＩＳＩＳ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＩＮＣ－１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））、が挙げられ、あるいは以下の特許公報：米国特許５，８０４，３９６；ＷＯ１９９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ１９９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ１９９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；ＷＯ１９９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）；ＷＯ１９９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）およびＷＯ１９９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）のいずれかに記載されている通りである。上記の参考文献の各々は、本明細書における実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、すべての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示のすべてについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
化学療法剤は、また、デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＢＣＧライブ、ベバキュジマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デキサゾキサン、エポエチンアルファ、エロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファレン、シクロスポリン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセドジナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ－２６、６－ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルルビシン、ゾレドロネート、およびゾレドロン酸、ならびにそれらの薬学的に許容可能な塩を含む。
化学療法剤は、また、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンアセタート、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、ベータメタゾンナトリウムホスフェート、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン－１７－ブチレート、ヒドロコルチゾン－１７－バレレート、アクロメタゾンジプロピオネート、ベータメタゾンバレレート、ベータメタゾンジプロピオネート、プレドニカルベート、クロベタゾン－１７－ブチレート、クロベタゾール－１７－プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロンおよび酢酸フルプレドニデン；フェニルアラニン－グルタミン－グリシン（ＦＥＧ）およびそのＤ－異性体型（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）などの免疫選択的抗炎症ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）；アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ－ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノサイクリン、スルファサラジンなどの、抗リウマチ薬、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、セルトリズマブペゴール（Ｃｉｍｚｉａ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）などの、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）遮断薬、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）などのインターロイキン１（ＩＬ－１）遮断薬、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）などのＴ細胞共刺激遮断薬、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））などのインターロイキン６（ＩＬ－６）遮断薬；レブリキズマブなどのインターロイキン１３（ＩＬ－１３）遮断薬；ロンタリズマブなどのインターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断薬；ｒｈｕＭＡｂベータ７などのベータ７インテグリン遮断薬；抗Ｍ１プライムなどのＩｇＥ経路遮断薬；抗リンホトキシンα（ＬＴａ）などの分泌ホモトリマーＬＴａ３および膜結合ヘテロトリマーＬＴａ１／β２遮断薬；放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体）；チオプラチン、ＰＳ－３４１、フェニルブチレート、ＥＴ－１８－ＯＣＨ３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ－７３９７４９、Ｌ－７４４８３２）など、その他の研究薬剤；クエルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸、およびそれらの誘導体などの、ポリフェノール；クロロキンなどのオートファジー阻害剤；δ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９アミノカンプトテシン）；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などの、ビスホスホネート；および上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；ペリフォシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ－７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピキサントロン；ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上記いずれかの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体；シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ；および５－ＦＵとロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））による処置レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸなどの、上記のうちの２つ以上の組合せを含む。
化学療法剤はまた、鎮痛、解熱および抗炎症効果を有する非ステロイド性抗炎症薬を含む。ＮＳＡＩＤは、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤を含む。ＮＳＡＩＤの具体例としては、アスピリン、プロピオン酸誘導体、例えばイブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンおよびナプロキセン、酢酸誘導体、例えばインドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、エノール酸誘導体、例えばピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロモキシカムおよびイソキシカム、フェナム酸誘導体、例えばメフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、ならびにＣＯＸ－２阻害剤、例えばセレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブおよびバルデコキシブが挙げられる。ＮＳＡＩＤは、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性痛風、月経困難症、転移性骨痛、頭痛および片頭痛、術後疼痛、炎症および組織損傷による軽度から中程度の疼痛、発熱、イレウス、ならびに大腸炎などの状態の症状の軽減に適応され得る。
ある実施形態では、化学療法剤は、ドキソルビシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、インターフェロン、白金誘導体、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン）、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド）、シスプラチンとりわけ、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）、メトトレキサート、アクチノマイシンＤ、ドラスタチン１０、コルヒチン、トリメトレキサート、メトプリン、シクロスポリン、ダウノルビシン、テニポシド、アンホテリシン、アルキル化剤（例えば、クロラムブシル）、５－フルオロウラシル、カンプトテシン、シスプラチン、メトロニダゾール、およびメシル酸イマチニブ、が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、ベバシズマブまたはパニツムマブなどの生物学的薬剤と組み合わせて投与される。
特定の実施形態において、本明細書に開示される化合物、またはその薬学的に許容される組成物は、アバレリクス、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ＢＣＧ ｌｉｖｅ、ベバキュジマブ、フルオロウラシル、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カンプトテシン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、クロラムブシル、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダウノルビシン、デニロイキン、デキサゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン（中性）、塩酸ドキソルビシン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピルビシン、エポエチンアルファ、エロチニブ、エストラムスチン、エトポシドホスフェート、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、メシルマブ、酢酸ゲムスチマブ、酢酸ゲムセレリン、フルベスチニルリン、インターフェロンα－２ａ、インターフェロンα－２ｂ、イリノテカン、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、レウプロリドアセタート、レバミゾール、ロムスチン、メゲストロールアセテート、メルファラン、メルカプトプリン、６－ＭＰ、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウムペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、マレイン酸スニチニブ、タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、ＶＭ－２６、テストラクトン、チオグアニン、６－ＴＧ、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ＡＴＲＡ、ウラシルマスタード、バルルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ゾレドロネート、またはゾレドロン酸から選択される任意の１つまたは複数の抗増殖剤または化学療法剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量は、癌を処置するための任意の適切な量であり得る。例えば、投与量は、重量１ｍｇから５００ｍｇまでの間の日用量であり得る。さらなる例として、日用量は、約２０ｍｇから４００ｍｇの範囲（またはその間の任意の下位範囲もしくは下位値、端点を含む）であり得る。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量の範囲は、１０ｍｇから３００ｍｇであり得る。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量の範囲は、１０ｍｇから１００ｍｇであり得る。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の投与量の範囲は、５ｍｇから５０ｍｇであり得る。毎日の投与量は、単回投与された投与量（例えば、ＱＤ）により、または、１日の合計投薬量を提供するための複数回投与を介して１日の間に（例えば、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ、など）達成することができる。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤の投与量は、任意の適切な量である。例えば、毎日１ｍｇから５００ｍｇ（またはその間の任意の下位範囲もしくは下位値（端点を含む））の範囲の量であり得る。ＭＥＫ阻害剤の投与量は、任意の所与のＭＥＫ阻害剤について承認された投与量と同じかまたはそれ未満であり得、および所与の適応症に依存し得る。いくつかの実施形態では、トラメチニブは、毎日１回、約１ｍｇから約１０ｍｇの範囲の用量で投与され得る。例えば、トラメチニブは、毎日１回２ｍｇが承認されている。１．５ｍｇＱＤおよび１ｍｇＱＤなどの用量低減でも承認されている。いくつかの実施形態では、ビニメチニブは、約３０ｍｇから約１００ｍｇの範囲の用量で投与され得る。例えば、ビニメチニブは、毎日２回４５ｍｇ用量で承認されている。ビニメチニブは、約３０ｍｇＢＩＤなどの用量低減でも承認されている。上記の列挙された範囲のそれぞれは、その中の任意の下位範囲または部分点を、端点を含めて、含み得ることが理解されるであろう。上記の列挙された範囲のそれぞれは、端点を含む、その中の任意の下位範囲または部分点を含み得ることが理解されるであろう。成人の一般的な用量範囲は、一般に５ｍｇ～２ｇ／日である。離散的な単位で提供される錠剤または他の提示形態は、そのような投与量で、またはその倍数として有効な量の１つ以上の化合物、例えば、５ｍｇ～５００ｍｇ、通常、約１０ｍｇ～２００ｍｇを含有する単位を好都合に含有し得る。単回投与形態を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存する。いくつかの実施形態では、投与は経口である。
いくつかの実施形態では、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩をトラメチニブまたはビニメチニブと組み合わせて対象に経口投与する工程を含む、対象における大腸癌およびＮＳＣＬＣ癌を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、毎日１回または２回投与される。いくつかの実施形態では、トラメチニブまたはビニメチニブは、毎日１回または２回投与され得る。薬物は、例えば、本明細書に記載されるように同時投与することができる。
いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、または他の小動物などのヒト以外の哺乳動物である。
いくつかの実施形態では、細胞集団をトラメチニブまたはビニメチニブと組み合わされた式Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩と接触させることを含む、ＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法を提供する。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物の濃度は、１ｎｍから１マイクロモル、または１ｎｍから５００ｎＭ、または１ｎＭから２０ｎＭの範囲にある。いくつかの実施形態では、トラメチニブまたはビニメチニブの濃度は、１０ｎＭから１マイクロモル、または１０ｎＭから５００ｎＭの範囲にある。
組成物
本明細書に開示される式Ｉの化合物は、塩として存在し得る。本実施形態は、薬学的に許容可能な塩であり得るそのような塩を含む。適用可能な塩形態の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（例えば、（＋）－酒石酸塩、（－）－酒石酸塩、またはラセミ混合物を含むそれらの混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩、ならびに、グルタミン酸などのアミノ酸との塩が挙げられる。これらの塩は、当業者に公知の方法によって調製することができる。ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウムなどの塩基付加塩、有機アミノもしくはマグネシウム塩、または類似の塩も含まれる。本実施形態の化合物が相対的に塩基性の官能基を含む場合、酸付加塩は、そのような化合物の中性形態を、生で、または好適な不活性溶媒中のいずれかで、充分な量の所望の酸と接触させることによって得ることができる。許容可能な酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、モノ水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、モノ水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸に由来するもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などなどの有機酸に由来する塩が挙げられる。また、アルギン酸塩などのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸、またはガラクツロン酸などの有機酸の塩が含まれる。本実施態様の一定の具体的な化合物は、化合物が塩基または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする、塩基性および酸性両方の官能性を含んでいる。
他の塩は、本実施形態の方法において使用される化合物の酸または塩基の塩を含む。薬学的に許容可能な塩の例示的な例は、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸等）塩、有機酸（酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸、クエン酸等）塩、および第四級アンモニウム（ヨウ化メチル、ヨウ化エチル等）塩である。薬学的に許容可能な塩類が無毒であることは理解されよう。適切な薬学的に許容可能な塩に関する追加情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９８５に見出すことができ、これは、本明細書の実施形態および開示のいずれかとともに使用するための全ての方法、化合物、組成物、データなどを含むがこれらに限定されないその教示の全てについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
薬学的に許容可能な塩には、本明細書に記載される化合物上に見出される特定の置換基に応じて、比較的非毒性の酸または塩基を用いて調製される活性化合物の塩が含まれる。本実施形態の化合物が相対的に酸性の官能基を含む場合、塩基付加塩は、そのような化合物の中性形態を、生で、または好適な不活性溶媒中のいずれかで、充分な量の所望の塩基と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、もしくはマグネシウム塩、または類似の塩が挙げられる。本実施形態の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、酸付加塩は、そのような化合物の中性形態を、生で、または好適な不活性溶媒中のいずれかで、充分な量の所望の酸と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容可能な酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、モノ水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、モノ水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などの無機酸に由来するもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの、比較的非毒性の有機酸に由来する塩が挙げられる。また、アルギネートなどのアミノ酸の塩、およびグルクロン酸またはガラクツロン酸などの有機酸の塩も含まれ（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔａｌ，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９７７， ６６， １－１９を参照）、これらは、本明細書の実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、すべての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示のすべてについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本実施形態のある特定の化合物は、化合物を塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換することを可能にする塩基性官能基および酸性官能基の両方を含有する。
化合物の中性形態は、好ましくは、塩を塩基または酸と接触させ、従来の様式で親化合物を単離することによって再生される。化合物の親形態は、極性溶媒への溶解度などの特定の物理的特性において様々な塩形態とは異なる。
本実施形態の一定の化合物は、非溶媒和形態で、同様に水和形態を含む溶媒和形態で、存在し得る。概して、溶媒和形態は、非溶媒和形態と等価であり、本実施形態の範囲内に包含される。本実施形態の特定の化合物は、複数の結晶形態または非晶質形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態は、本実施形態によって企図される使用に対して等価であり、本実施形態の範囲内であることが意図される。
本実施態様の特定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有し；エナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、立体異性体の形態は、絶対立体化学に関して、アミノ酸について（Ｒ）－または（Ｓ）－、或いは（Ｄ）－または（Ｌ）－として定義され得、個々の異性体は本実施形態の範囲内に包含される。本実施形態の化合物は、当該技術分野においてあまりに不安定なため合成および／分離ができないと知られるものを含まない。本実施形態は、ラセミ形態および光学的に純粋な形態にある化合物を含むことを意図される。光学活性の（Ｒ）－および（Ｓ）－、または（Ｄ）－および（Ｌ）－の異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を使用して調製され、或いは従来の技術を使用して分離され得る。
別段の指示がない限り、本実施態様の化合物は、そのような化合物を構成する原子の１以上において不自然な比率の原子の同位体を含み得る。例えば、本発明の化合物は、例えば、重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）、フッ素－１８（１８Ｆ）、窒素－１５（１５Ｎ）、酸素－１７（１７Ｏ）、酸素－１８（１８Ｏ）、炭素－１３（１３Ｃ）、または炭素－１４（１４Ｃ）などの放射性同位体または安定同位体で標識することができる。本発明の実施態様の化合物の全ての同位体変化は、放射性であるか否かにかかわらず、本発明の実施態様の範囲内に包含される。
塩形態に加えて、本実施形態は、プロドラッグ形態にある化合物を提供する。本明細書に記載される化合物のプロドラッグは、本実施形態の化合物を提供するための生理学条件下で、化学的変化を容易に受けやすい化合物である。さらに、プロドラッグは、エクスビボ環境において化学的または生化学的な方法によって本発明の実施形態の化合物に変換することができる。例えば、プロドラッグは、好適な酵素または化学試薬と共に経皮パッチリザーバに入れると、本発明の実施形態の化合物にゆっくりと変換することができる。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は経口錠剤として構成される。
本発明の実施形態の化合物は、多種多様な経口、非経口、および局所剤形で調製および投与することができる。経口製剤には、患者による摂取に適した錠剤、丸剤、散剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ロゼンジ剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などが含まれる。本実施形態の化合物はまた、注射によって、すなわち、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、硬膜内、または腹腔内に投与することができる。また、本明細書に記載の化合物は、吸入によって、例えば鼻腔内に投与することができる。さらに、本発明の実施形態の化合物は、経皮的に投与することができる。本明細書に開示される式Ｉの化合物はまた、眼内、膣内および直腸内経路で投与される場合もあり、坐剤、吹送剤、散剤、およびエアロゾル製剤を含めて、眼内、膣内、および直腸内経路で投与される場合もあり（ステロイド吸入剤の例についてはＲｏｈａｔａｇｉ， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３５：１１８７－１１９３， １９９５；Ｔｊｗａ， Ａｎｎ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７５：１０７－１１１， １９９５を参照されたい）、本明細書の実施形態および開示のいずれかとともに使用するための全ての方法、化合物、組成物、データなどを含むがこれらに限定されないその教示の全てが、参照により本明細書に組み込まれる。したがって、本実施形態はまた、１つまたは複数の薬学的に許容される担体および／または賦形剤と、式Ｉの化合物か式Ｉの化合物の薬学的に許容可能な塩のいずれかとを含む医薬組成物を提供する。
本発明の実施形態の化合物から医薬組成物を調製するために、薬学的に許容される担体は、固体または液体のいずれかであり得る。固形調製物は、散剤、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ剤、坐剤、および分散可能な顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、香味剤、界面活性剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用し得る１つ以上の物質であり得る。製剤化および投与のための技術に関する詳細は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ， Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ（“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ”）の最新版を参照すると、科学文献および特許文献に詳細に記載されており、本明細書の実施形態および開示のいずれかと共に使用するための全ての方法、化合物、組成物、データなどを含むがこれらに限定されないその教示の全てが参照により本明細書に組み込まれる。
散剤において、担体は、微粉化された活性成分との混合物中にある、微粉化された固体である。錠剤において、活性成分は、必要な結合特性を有する担体、および必要に応じて付加的な賦形剤と適切な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。
散剤、カプセル剤および錠剤は、好ましくは、５％または１０％から７０％の活性化合物を含有する。適切な担体は、マグネシウムカルボネート、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどである。 用語「調製」は、活性成分が他の賦形剤を伴ってまたは伴わずに担体により囲まれ、従って担体と関連付けられる、カプセル剤を提供する担体としての封入材料を備えた、活性化合物の製剤を含むように意図される。同様に、カシェ剤およびトローチ剤が含まれる。錠剤、粉末剤、カプセル、丸剤、カシェ剤、およびトローチ剤は、経口投与に適している固形剤形として使用され得る。
適切な固体賦形剤は、限定されないが、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖、トウモロコシ、小麦、米、ジャガイモ、または他の植物由来のデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース、ならびに、アラビアゴムおよびトラガカントゴムを含むゴム、同様に、ゼラチンおよびコラーゲンなどのタンパク質を含む、炭水化物またはタンパク質充填剤である所望であれば、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはアルギン酸ナトリウム、およびその塩などの、崩壊剤または可溶化剤を添加してもよい。
糖剤コアは、濃縮された砂糖溶液など、適切なコーティングを施され、コーティングはさらにアラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／あるいは二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含む場合がある。染料または顔料は、生成物同定のために、または、活性化合物の量（すなわち、用量）を特徴づけるために、錠剤または糖衣錠のコーティングに添加されてもよい。本明細書に開示される医薬調製物は、例えば、ゼラチン製のプッシュフィットカプセル、同様に、ゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどのコーティングで作られるソフトな密封カプセルを用いて、経口で使用され得る。プッシュフィットカプセルは、ラクトースまたはデンプンなどの充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および任意選択で安定剤と混合された式Ｉの化合物を含有することができる。ソフトカプセルにおいて、式Ｉの化合物は、脂肪油、流動パラフィン、または液体のポリエチレングリコールなどの適切な液体中に、安定化剤を伴って、または伴わずに、溶解または懸濁され得る。
液体調製物として、溶液、懸濁液、およびエマルジョン、例えば、水または水／プロピレングリコール溶液が挙げられる。非経口注射のために、液体調製物は、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液中に製剤化され得る。
経口使用に好適な水溶液は、活性成分を水に溶解し、所望の好適な着色剤、香味剤、安定剤、および増粘剤を添加することによって調製することができる。経口使用に適した水性懸濁液は、微粉化された活性成分を、天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムなどの粘性材料、ならびに天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノ－オレエート）、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノ－オレエート）などの分散剤または湿潤剤とともに、水中に分散させることによって作製することができる。水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤、例えば、エチルまたはｎ－プロピル ｐ－ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤および１つ以上の甘味剤、例えば、スクロース、アスパルテームまたはサッカリンを含有し得る。製剤は、容量オスモル濃度について調整することができる。
使用直前に経口投与用の液体形態調製物に変換されることが意図される固体形態調製物も含まれる。このような液体形態としては、溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。これらの調製物は、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有し得る。
油性懸濁液は、式Ｉの化合物を、落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油などの植物油、または流動パラフィンなどの鉱油、またはこれらの混合物に懸濁することによって製剤化することができる。油性懸濁液は、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含有することができる。グリセロール、ソルビトール、またはスクロースなどの甘味剤を添加して、口当たりの良い経口調製物を提供することができる。これらの製剤は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存することができる。注射用油ビヒクルの例は、Ｍｉｎｔｏ，Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ． ２８１ ：９３－１０２， １９９７で見られ、これは、本明細書における実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、すべての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示のすべてについて、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に開示される医薬製剤はまた、水中油型エマルジョンの形態であり得る。油相は、上記の植物油もしくは鉱油、またはこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤としては、アカシアゴムおよびトラガカントゴムなどの天然に存在するゴム、ダイズレシチンなどの天然に存在するホスファチド、ソルビタンモノ－オレエートなどの脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来するエステルまたは部分エステル、ならびに、ポリオキシエチレンソルビタンモノ－オレエートなどの上記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物が挙げられる。エマルジョンはまた、シロップ剤およびエリキシル剤の製剤の場合のように、甘味剤および香味剤を含有し得る。このような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、または着色剤を含有し得る。
本明細書に開示される式Ｉの化合物の医薬製剤は、塩として提供することができ、および塩基を備えて、すなわちアルカリなどのカチオン性塩、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ度類金属塩、ならびにアンモニウム、トリメチル－アンモニウム、ジエチルアンモニウム、およびトリス－（ヒドロキシメチル）－メチル－アンモニウム塩などのアンモニウム塩を備えて、形成することができる。
医薬製剤は、好ましくは単位剤形にある。このような形態では、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位剤形は、包装された調製物であってもよく、包装は、包装された錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤などの、別個の量の調製物を含有する。また、単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、もしくはロゼンジ剤自体であってもよく、または適切な数の、パッケージされた形態にあるこれらのいずれのであってもよい。
単位用量調製物中の活性成分の量は、特定の用途および活性成分の効力に応じて、０．１ｍｇから１００００ｍｇ、より典型的には１．０ｍｇから１０００ｍｇ、最も典型的には１０ｍｇから５００ｍｇで、変動または調整され得る。組成物は、所望であれば、他の適合性のある治療剤も含有することができる。
投与レジメンはまた、当技術分野で周知の薬物動態パラメータ、すなわち、吸収速度、バイオアベイラビリティ、代謝、クリアランスなども考慮に入れる（例えば、Ｈｉｄａｌｇｏ－Ａｒａｇｏｎｅｓ（１９９６）Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ５８：６１１－６１７を参照されたい；Ｇｒｏｎｉｎｇ（１９９６）Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ５１：３３７－３４１；Ｆｏｔｈｅｒｂｙ（１９９６） Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ ５４：５９－６９；Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９９５） Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ８４：１１４４－１１４６；Ｒｏｈａｔａｇｉ（１９９５）Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ５０：６１０－６１３；Ｂｒｏｐｈｙ（１９８３） Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２４： １０３－１０８；最新の上記Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓは、その各々が、本明細書における実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、全ての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示の全てについて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。最先端技術は、臨床医が、個々の患者、ＧＲおよび／またはＭＲモジュレーター、ならびに処置される疾患または状態それぞれに対する投与レジメンを決定することを可能にする。
式Ｉの化合物製剤の単回または複数回の投与は、患者によって必要とされ、許容される投与量および頻度に応じて投与することができる。製剤は、疾患状態を効果的に処置するのに充分な量の活性薬剤を提供しなければならない。したがって、一実施形態では、式Ｉの化合物の経口投与のための医薬製剤は、約０．５ｍｇ／体重ｋｇ／日から約３０ｍｇ／体重ｋｇ／日の間の日量であり、端点を含むその中のすべての下位範囲および下位値を含む。代替的な実施形態では、投与量は、約１ｍｇ～約２０ｍｇ／体重ｋｇ／患者／日が使用される。特に、経口投与とは対照的に、脳脊髄液（ＣＳＦ）空間などの解剖学的に閉塞した部位に、血流に、体腔に、または器官の管腔に薬物を投与する場合、より低い投与量が使用され得る。実質的により高い投与量を局所投与に使用することができる。非経口投与のための式Ｉの化合物を含む製剤を調製するための実際の方法は、当業者に公知または明らかであり、上記Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓなどの刊行物により詳細に記載されている。また、Ｎｉｅｍａｎ， Ｉｎ “Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｎｔｉｓｔｅｒｏｉｄ Ａｃｔｉｏｎ，” Ａｇａｒｗａｌ， ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）も参照され、本明細書における実施形態および開示のいずれかとともに使用するための、限定されないが、全ての方法、化合物、組成物、データなどを含む、その教示の全てについて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、同時投与は、第２の活性剤の０．５、１、２、４、６、８、１０、１２、１６、２０、または２４時間（あるいは２４時間以内の任意の下位範囲または下位値）以内に１つの活性剤を投与することを含む。同時投与は、２つの活性薬剤を同時に、ほぼ同時に（例えば、互いの約１、５、１０、１５、２０、または３０分以内（または、例えば、時間の任意の下位範囲または０～３０分の時間の下位値））、または任意の順序で連続して投与することを含む。いくつかの実施形態では、同時投与は、同時製剤化、すなわち、両方の活性剤を含む単一の医薬組成物を調製することによって達成され得る。いくつかの実施形態では、活性剤は別々に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、活性剤および／または補助剤は、互いに連結またはコンジュゲートされ得る。薬物の少なくとも１つの投薬量は、例えば、同時に投与され得る。薬物の少なくとも１つの投薬量は、例えば、数分内に、または互いに１時間未満で、投与され得る。薬物の少なくとも１つの投薬量は、例えば、同じ日だが異なる時間に、または異なる日に、投与され得る。
本明細書に開示される式Ｉの化合物を含む医薬組成物は、１つ以上の許容される担体中で製剤化された後、適切な容器に入れられ、必要とする状態の処置のためにラベル付けされる。式Ｉの化合物の投与について、このようなラベルは、例えば、投与の量、頻度、および方法に関する指示を含む。
薬学的投与
本明細書の化合物の投与レジメンは、当然ながら、特定の薬剤の薬力学的特徴ならびにその投与様式および投与経路；レシピエントの種、年齢、性別、健康状態、医学的状態、および体重；症状の性質および程度；同時治療の種類；治療頻度；投与経路、患者の腎機能および肝機能、ならびに所望の効果などの、既知の因子に依存して変動する。臨床医は、疾患または障害の進行を防ぎ、阻止し、または停止させるために、必要な薬物の有効量を決定および処方することができる。
一般的な指針として、各活性成分の毎日の経口投与量は、必要とする効果のために使用される場合、約０．００１から約１０００ｍｇ／体重ｋｇの間、好ましくは約０．０１から約１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の間、最も好ましくは約０．１から約２０ｍｇ／ｋｇ／日の間の範囲である。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、１日約１０ｍｇ／日と約２００ｍｇ／日との間の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、約１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１３０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、１７０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、１９０ｍｇ／日、または２００ｍｇ／日の用量で投与され得る。用量は、列挙された範囲内のどの値または下位範囲でもあり得る。
患者の状態および意図される治療効果に応じて、治療剤の投与頻度は、例えば、１日１回から１日６回まで変動し得る。つまり、投与頻度は、ＱＤ、すなわち１日に１回、ＢＩＤ、すなわち１日に２回、ＴＩＤ、すなわち１日に３回、ＱＩＤ、すなわち１日４回、１日に５回、または１日に６回であり得る。別の実施形態では、投与頻度は、ＢＩＷ、すなわち週２回、ＴＩＷ、すなわち週３回、またはＱＩＷ、すなわち週４回であり得る。
患者の状態および意図される治療効果に応じて、治療サイクルは、治療剤が投与されない期間を有し得る。本明細書で使用されるように、「間隔投与」は、治療剤の投与と、その後の空所の日または空所の週を指す。例えば、処置サイクルは、治療剤の２週間の投与と、それに続く治療剤が投与されない１週間とを含む３週間であり得る。いくつかの実施形態では、処置サイクルは、４週間であり、これは３週間の投与と、それに続く治療剤が投与されない１週間を含む。
本明細書に使用される用語「処置サイクル」は、治療剤の投与のための所定の期間を意味する。典型的には、療法の効果を評価するために、患者は各処置サイクルの終わりに診察される。
一実施形態では、処置サイクルのそれぞれは、約３日またはそれ以上の日数を有する。別の実施形態では、処置サイクルのそれぞれは、約３日から約６０日を有する。別の実施形態では、処置サイクルのそれぞれは、約５日から約５０日を有する。別の実施形態では、処置サイクルのそれぞれは、約７日から約２８日を有する。別の実施形態では、処置サイクルのそれぞれは、２８日を有する。一実施形態では、各処置サイクルは、約２９日を有する。別の実施形態では、各処置サイクルは、約３０日を有する。別の実施形態では、各処置サイクルは、約３１日を有する。別の実施形態では、処置サイクルは約１か月の長さの処理サイクルを有する。別の実施形態では、処置サイクルは３週から８週までの任意の時間である。別の実施形態では、処置サイクルは３週から６週までの任意の時間である。また別の実施形態において、処置は、３週間である。別の実施形態では、処置サイクルは、１カ月である。別の実施形態では、各処置サイクルは、４週間である。別の実施形態では、各処置サイクルは、５週間である。別の実施形態では、各処置サイクルは、６週間である。別の実施形態では、各処置サイクルは、７週間である。別の実施形態では、各処置サイクルは、８週間である。処置サイクルの持続時間は、端点を含め、列挙された範囲内の任意の値または下位範囲を含み得る。
本明細書で使用する場合、「同時投与」または「同時投与」という用語は、（ａ）追加の治療剤と（ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物、エステル、および／あるいはプロドラッグとを、整合された方法で一緒に投与することを指す。例えば、同時投与は、同時投与、逐次投与、重複投与、間隔投与、連続投与、またはそれらの組み合わせであり得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の投与レジメンは、連続２８日サイクルにわたって１日１回である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の１日１回の投与レジメンは、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日であり得るが、これらに限定されない。式（Ｉ）の化合物は、１日１回、２０ｍｇから６０ｍｇまでのある量で投与され得る。用量は、列挙された範囲内の任意の値または下位範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の投与レジメンは、連続２８日サイクルにわたって毎日２回である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の１日２回の投与レジメンは、限定されないが、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日であり得る。式（Ｉ）の化合物は、２０ｍｇから８０ｍｇまでのある量で１日２回投与され得る。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、１０ｍｇ／日から１００ｍｇ／日までのある量で投与され得る。用量は、列挙された範囲内の任意の値または下位範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のための投与レジメンは、２週間毎日１回、２０ｍｇから６０ｍｇまでのある量の投与、その後１週間の休薬（例えば、２週間オン、１週間オフ）で６週間にわたる場合がある。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のための投与レジメンは、２週間毎日２回、１０ｍｇから１００ｍｇまでのある量の投与、その後１週間の休薬（例えば、２週間オン、１週間オフ）で６週間にわたる場合がある。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のための投与レジメンは、３週間毎日１回、２０ｍｇから６０ｍｇまでのある量の投与、その後１週間の休薬（例えば、３週間オン、１週間オフ）で８週間にわたる場合がある。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のための投与レジメンは、３週間毎日２回、１０ｍｇから１００ｍｇまでのある量の投与、その後１週間の休薬（例えば、８週間オン、１週間オフ）で８週間にわたる場合がある。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のための投与レジメンは、８週間にわたり毎週１日目と２日目に１日２回であり得る。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の投与量は、限定されないが、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇであり得る。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、化合物の３週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む４週間のサイクルで、１日１回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩は、６週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週３回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週の１日目、３日目、および５日目に投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週４回投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩は、化合物の２週間の投与とその後の化合物の１週間の非投与を含む３週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態において、前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、前記化合物の３週間の投与とその後の前記化合物の１週間の非投与とを含む４週間のサイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週に２日、１日２回投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、各週の１日目と２日目に投与される。
式Ｉの化合物が週に複数回投与される場合、用量は、週内の任意の日または日の組み合わせに投与され得る。例えば、週に３回の投与は、１日目、３日目、および５日目に投与、１日目、２日目、および３日目に投与、ならびに１日目、３日目、および５日目に投与などを含み得る。週に２日の投与は、１日目と２日目、１日目と３日目、１日目と４日目、１日目と５日目、および１日目と７日目の投与などを含み得る。
キットおよび製品
本開示のいくつかの実施形態は、式Ｉの化合物および／または少なくとも１つのＦＧＦＲ阻害剤を含むキットおよび製品に関する。例えば、キットまたは製品は、式Ｉの化合物を有するパッケージまたは容器を含み得る。そのようなキットおよび産物は、どのように式Ｉの化合物を別途提供されるＦＧＦＲ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載される癌を治療する方法において使用することができる。
いくつかの態様では、キットまたは製品は、式Ｉの化合物および少なくとも１つのＦＧＦＲ阻害剤の両方を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ阻害剤は、例えば、エルダフィチニブである。このようなキットは、１つまたは複数の容器またはパッケージを含むことができ、１つまたは複数の容器またはパッケージは、単一の容器および／もしくはパッケージ中に、または別々のパッケージ／容器中に一緒に１つまたは両方の組合せ薬物を含む。場合によっては、２つの薬物は別々に包装されるが、単一のパッケージ、容器または箱に含まれる。そのようなキットおよび製品は、どのように式Ｉの化合物をＦＧＦＲ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ製品挿入物またはラベルをさらに含むことができる。キットは、本明細書に記載される癌を治療する方法において使用することができる。
本開示のいくつかの実施形態は、式１の化合物および／または少なくとも１つのＢ－Ｒａｆ阻害剤を含むキットおよび製品に関する。例えば、キットまたは産物は、式Ｉの化合物を備えたパッケージまたは容器を含み得る。そのようなキットおよび産物は、どのように式１の化合物を別れて提供されるＢ－Ｒａｆ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
いくつかの態様では、キットまたは産物は、式１の化合物および少なくとも１つのＢ－Ｒａｆ阻害剤の両方を含むことができる。いくつかの実施形態では、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤は、例えば、エンコラフェニブである。そのようなキットは、１つまたは複数容器もしくはパッケージを含むことができ、１つまたは複数の容器もしくはパッケージは、単一の容器および／もしくはパッケージ中に一緒に、あるいは別々のパッケージ／容器中に、１つまたは両方の併用薬物を含む。いくつかの例では、２つの薬物は別々に包装されるが、単一のパッケージ、容器または箱に含まれる。そのようなキットおよび製品は、どのように式１の化合物をＢ－Ｒａｆ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
本開示のいくつかの実施形態は、式Ｉの化合物および／または少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤を含むキットおよび製品に関する。例えば、キットまたは産物は、式Ｉの化合物を備えたパッケージまたは容器を含み得る。そのようなキットおよび製品は、どのように式１の化合物を別れて提供されるＭＥＫ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
いくつかの態様では、キットまたは産物は、式１の化合物および少なくとも１つのＭＥＫ阻害剤の両方を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤は、例えば、トラメチニブ、ビニメチニブである。そのようなキットは、１つまたは複数の容器もしくはパッケージを含むことができ、１つまたは複数の容器もしくはパッケージは、単一の容器および／もしくはパッケージ中に一緒に、または別々のパッケージ／容器中に、１つまたは両方の併用薬物を含む。いくつかの例では、２つの薬物は別々に包装されるが、単一のパッケージ、容器、または箱に含まれる。そのようなキットおよび製品は、どのように式１の化合物をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
本開示のいくつかの実施形態は、式Ｉの化合物および／または少なくとも１つのＭＥＴ阻害剤を含むキットおよび製品に関する。例えば、キットまたは産物は、式Ｉの化合物を備えたパッケージまたは容器を含み得る。そのようなキットおよび製品は、どのように式１の化合物を別れて提供されるＭＥＴ阻害剤と組み合わせて使用するかを含めて、承認された薬物投与と適応症の情報を持つ挿入物またはラベルをさらに含み得る。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
いくつかの態様では、キットまたは産物は、式１の化合物および少なくとも１つのＭＥＴ阻害剤の両方を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＭＥＴ阻害剤は、例えば、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、またはチバンチニブである。そのようなキットは、１つまたは複数の容器もしくはパッケージを含むことができ、１つまたは複数の容器もしくはパッケージは、単一の容器および／もしくはパッケージ中に一緒に、または別々のパッケージ／容器中に、１つまたは両方の併用薬物を含む。いくつかの例では、２つの薬物は別々に包装されるが、単一のパッケージ、容器または箱に含まれる。そのようなキットと結果は、ＭＥＴ阻害剤と組み合わせて式Ｉの化合物を使用する方法を含む承認された薬の投与と適応症情報により結果挿入物またはラベルをさらに含むことができる。キットは、本明細書に記載されるような癌を処置する方法において使用することができる。
実施例１－式Ｉの化合物とＦＧＦＲの阻害剤との相乗的組み合わせ
本実施例は、式Ｉの化合物とＦＧＦＲの阻害剤との相乗的組み合わせを実証する。
組合せ細胞増殖アッセイ
細胞（ウェルあたり２０００細胞）を、９６ウェルプレート上の１００μｌの細胞培養培地中に播種した。Ｔｅｃａｎ Ｄ３００ｅ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒのｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用して、濃度を０から１０μＭまで変化させた式Ｉの化合物とエルダフィチニブで、細胞を処理した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、製造元の説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って発光シグナルを求め、Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェアを使用して標準ＨＳＡモデルによって組み合わせデータを生成した。組み合わせの相乗作用は、結果表において正の数によって表した。負の数は、組み合わせの拮抗作用を表す。
結果
図１Ａ～図１Ｂは、式Ｉの化合物とＦＧＦＲ阻害剤エルダフィチニブとの組み合わせがインビトロで相乗作用を表わすことを示すデータを示す。図１Ａは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせを用いたＨｅｐ３Ｂ癌細胞株における３Ｄグラフィック相乗作用データを示す。図ＩＢは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせを用いたＪＨＨ－７癌細胞株における３Ｄグラフィック相乗作用データを示す。図１Ａと図１Ｂは、式Ｉの化合物とＦＧＦＲ阻害剤エルダフィチニブとの組み合わせがインビトロで相乗作用を表わすことを示すデータを示す。図１Ａは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせを用いたＨｅｐ３Ｂ癌細胞株における相乗作用データを示す。図１Ｂは、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせを用いたＪＨＨ－７癌細胞株における相乗作用データを示す。
実施例２－ＦＧＦＲ２増幅肝癌ＣＤＸモデルＫＡＴＯ ＩＩＩにおける式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。併用剤エルダフィチニブを２０％ＨＰ－Ｐ－ＣＤのビヒクル中に調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植片モデルの調製
ＫＡＴＯ－ＩＩＩ細胞株は、ＦＧＦＲ増幅によるヒト肝癌細胞であった。ＫＡＴＯ－ＩＩＩ 細胞株は、ＡＴＣＣ から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＨＴＢ－１０３（商標））。５０％のマトリゲルと混合された１０×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。皮下移植後、腫瘍体積が平均２２０ｍｍ３に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブ単独を経口投与により投与された。さらにもう１つの群が式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用処置を受けたが、式Ｉの化合物の投与が１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ、およびエルダフィチニブの投与が１０ｍｇ／ｋｇＱＤだった。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エルダフィチニブを、式Ｉの化合物のＢＩＤ投与１回目の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図２は、肝癌ＣＤＸモデルＫＡＴＯ ＩＩＩにおける、式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２に示されるように、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによって、ＦＧＦＲ２増幅肝癌ＣＤＸモデルＫＡＴＯ ＩＩＩにおいて、式Ｉの化合物単独での処置またはエルダフィチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例３－ＦＧＦＲ２増幅胃癌ＣＤＸＳＮＵ－１６における式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エルダフィチニブを２０％ＨＰ－Ｐ－ＣＤのビヒクル中に調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によって承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植片モデルの調製
ＳＮＵ１６細胞株はＦＧＦＲ増幅があるヒト胃癌細胞だった。ＳＮＵ１６細胞株は、ＡＴＣＣから購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－１４２０（商標））。５０％のマトリゲルと混合された１０×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。皮下移植後、腫瘍体積が平均１８０ｍｍ３に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを投与され、他方の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを投与された。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群において、エルダフィチニブは、式１の化合物ＩのＱＤ投与の後、または式Ｉの化合物の１回目のＢＩＤ投与の後に１投与された。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図３は、ＦＧＦＲ２増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＵ－１６における式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる、処置時間の期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図３に示されるように、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによって、ＦＧＦＲ２増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＬＴ－１６において、式Ｉの化合物単独での処置またはエルダフィチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例４－ＦＧＦ１９－ＦＤＦＲ４依存増幅肝癌ＣＤＸモデルＨｕｈ－７における式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用療法
材料
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エルダフィチニブを２０％ＨＰ－Ｐ－ＣＤのビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
異種移植片モデルの調製
Ｈｕｈ－７細胞株はＦＧＦＲ過剰発現があるヒト肝癌細胞だった。Ｈｕｈ－７細胞株は、Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋから購入した（ＪＣＲＢ Ｃｅｌｌ銀行（ＪＣＲＢ０４０３））。Ｈｕｈ－７ 細胞を、ダルベッコ改変培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ））に１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質－抗真菌薬（ＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞をトリプシン－ＥＤＴＡにより８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。Ｈｕｈ－７腫瘍細胞を、マウスに皮下移植した。５０％のマトリゲルと混合された１０×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して右側腹部に皮下移植した。腫瘍体積が５００～１０００ｍｍ３あたりに到達した時、腫瘍断片（１５～３０ｍｍ３）を回収し、次に１８ｇトロカールニードルを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。皮下移植後、腫瘍体積が平均１４６ｍｍ３に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。単剤療法処置群では、マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを投与され、他方の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤでエルダフィチニブを投与された。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群において、エルダフィチニブは、式１の化合物ＩのＱＤ投与の１時間後、または式Ｉの化合物の１回目のＢＩＤ投与の１時間後に投与された。処置２１日目に調査を終了した。
結果
図４は、ＦＧＦ１９－ＦＧＦＲ４依存性肝癌ＣＤＸモデルＨｕｈ－７における、式Ｉの化合物単独、エルダフィチニブ単独、および式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図４に示されるように、式Ｉの化合物とエルダフィチニブとの組み合わせによって、ＦＧＦ１９－ＦＧＦＲ４依存性肝癌ＣＤＸモデルＨｕｈ－７において、式Ｉの化合物単独での処置またはエルダフィチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例５－式Ｉの化合物とクラス１変異体Ｂ－Ｒａｆタンパク質の阻害剤とのインビトロでの相乗的併用
細胞増殖アッセイ
細胞（ウェル当たり２０００細胞）を９６ウェルプレート上の１００μｌ細胞培養培地に播種し、式Ｉの化合物単独で、または式Ｉの化合物と一定濃度のエンコラフェニブとで処置した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、製造元の説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って発光シグナルを求め、ＰｒｉｓｍＧｒａｐｈＰａｄを使用してグラフをプロットした。
組合せ細胞増殖アッセイ
細胞（ウェルあたり２０００細胞）を、９６ウェルプレート上の１００μｌの細胞培養培地中に播種した。Ｔｅｃａｎ Ｄ３００ｅ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒのｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用して、濃度を０から１０μＭまで変化させた式Ｉの化合物とエンコラフェニブで、細胞を処理した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、発光シグナルを製造元の説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って決定し、Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェアを使用して標準ＨＳＡモデルによって組み合わせデータを生成した。組み合わせの相乗作用は、結果表において正の数によって表した。負の数は、組み合わせの拮抗作用を表す。
ｐＥＲＫとＥＲＫについてのウェスタンブロッティング
細胞を化合物と共に４時間インキュベートした。処置後、細胞を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含むＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＲＩＰＡ溶解緩衝液を用いて氷上で１０分間溶解した。微量遠心機を用いて４℃で１０分間、細胞を遠心分離した。上清を予め冷却した微量遠心管に移し、溶解物のタンパク質濃度をＢＣＡ法を使用して測定した。細胞溶解物上清の等量のタンパク質をｐＥＲＫ およびＥＲＫに対する免疫ブロッティングに使用した。
結果
図５は、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせが複数のＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異細胞にわたって相乗作用を発揮することを表わすデータを示す。
図６は、式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＲＫＯ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。
図７は、式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＷｉＤｒ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。
図８は、式Ｉの化合物とＢＲＡＦ阻害剤エンコラフェニブとの組み合わせを用いたＨＴ２９ ＢＲＡＦＶ６００Ｅ ＣＲＣ細胞株における相乗作用データを示す。このデータは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせにおいて有意な程度の相乗作用があることを指し示す。
図９Ａは、ＲＫＯ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化のロバストな阻害を表わしているゲルを示す。図９ＢＡは、ＷｉＤｒ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化のロバストな阻害を表わしているゲルを示す。図９Ｃは、ＲＫＯ大腸癌細胞株における、式Ｉの化合物単独またはエンコラフェニブと組み合わせた式Ｉの化合物の抗増殖作用のプロットを示す。図９Ｄは、ＷｉＤｒ大腸癌細胞株における、式Ｉの化合物またはエンコラフェニブと組み合わせた式Ｉの化合物の抗増殖作用のプロットを示す。図９Ａ～図９Ｂは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせを用いたｐＥＲＫ１／２のロバストな阻害を指し示す。図９Ｃ～図９Ｄは、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせが式Ｉの化合物の阻害活性を増加させたことを示唆する。
図１０Ａ～１０Ｄは、ＲＫＯ大腸癌細胞株におけるＳＨＰ２阻害剤とエンコラフェニブとの組み合わせの有効性の比較研究を示す。図１０Ａは、ＲＫＯ大腸癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の阻害を、式Ｉの化合物＋エンコラフェニブ、ＴＮＯ１５５＋エンコラフェニブ、およびＲＭＣ－４５５０＋エンコラフェニブ組み合わせで比較したゲルを示す。図１０Ｂは、対照のパーセンテージとしてｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２．（式Ｉの化合物）、３．エンコラフェニブ、および４．（式Ｉの化合物）＋エンコラフェニブである。図１０Ｃは、対象のパーセンテージとしてｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２． ＴＮＯ１５５、３． エンコラフェニブ、４．ＴＮＯ１５５＋エンコラフェニブである。図１０Ｄは、対照の割合としてのｐＥＲＫの棒グラフを示し、１．対照、２． ＲＭＣ－４５５０ 、３． エンコラフェニブ、４．ＲＭＣ－４５５０＋エンコラフェニブである。図１０Ａ～図１０Ｄに示すように、ＥＲＫ１／２リン酸化の阻害は、式ＩのＳＨＰ２阻害剤化合物とエンコラフェニブとの組み合わせで最も有効である。
実施例６－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００２９における式Ｉの化合物とエンコラフェニブの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭ酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを、０．５％ＣＭＣと０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、ＳＰＦ（Ｂｅｉｊｉｎｇ） Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ， Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に７～９週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連する全ての手順は、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｔａｉｃａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｔａｉｃａｎｇ， Ｃｈｉｎａ）で実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＣＲ００２９ ＰＤＸモデルを、ＣｒｏｗｎＢｉｏでの前臨床有効性研究のために確立した。このＰＤＸモデルは、中国人女性のＣＲＣ患者に由来した。ＰＤＸモデルＣＲ００２９におけるＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異をＲＮＡシーケンシングとエキソームシーケンシングの両方によって確認した。マウスの皮膚を、右側腹部上で適切な外科用スクラブおよびヨードファアで洗浄した。ＰＤＸモデルから採取した腫瘍断片（直径２～３ｍｍ）を、１８ｇトロカールニードルを使用して、雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下移植した。
動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１４１ｍｍ３（１１０～１７６ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する７つの異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらにもう１つの群が併用処置を受けたが、式Ｉの化合物の投与が１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ、およびエンコラフェニブの投与が９０ｍｇ／ｋｇＱＤだった。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物の投与の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図１１は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００２９における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１１に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００２９において、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例７－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００４における式Ｉの化合物とエンコラフェニブの併用療法材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを０．５％ＣＭＣと０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、ＳＰＦ（Ｂｅｉｊｉｎｇ） Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ， Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に９～１１週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）の動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）で実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
ＰＤＸの調製
ＣＲ０００４ ＰＤＸモデルを、ＣｒｏｗｎＢｉｏでの前臨床有効性研究のために確立した。このＰＤＸモデルは、７３歳の中国人男性のＣＲＣ患者に由来した。ＰＤＸモデルＣＲ０００４におけるＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異をＲＮＡシーケンシングとエキソームシーケンシングの両方によって確認した。マウスの皮膚を、右側腹部上で適切な外科用スクラブおよびヨードファアで洗浄した。ＰＤＸモデルから採取した腫瘍断片（直径２～３ｍｍ）を、１８ｇトロカールニードルを使用して、雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの右側腹部に皮下移植した。平均腫瘍体積が１４１ｍｍ３（１２１～１８０ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、群ごとに８匹のマウスを有する６つの試験群に無作為に分けた。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらにもう１つの群が併用処置を受けたが、式Ｉの化合物の投与が１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ、およびエンコラフェニブの投与が９０ｍｇ／ｋｇＱＤだった。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物の投与の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図１２は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００４における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１２に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＰＤＸモデルＣＲ００４において、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例８－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＷｉＤｒにおける式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを、０．５％ＣＭＣと０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植片モデルの調製
ＷｉＤｒは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒトＣＲＣ腫瘍細胞株であった。ＷｉＤｒ細胞株は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣ ＡＣＣ、８５１１１５０１）から購入した。ＷｉＤｒ細胞を、ＥＭＥＭ（ＥＢＳＳ） ＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭグルタミンを含有し、且つ１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）を補足した培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＷｉＤｒ腫瘍細胞をマウスに皮下移植した。５×１０６個の腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、注射器を用いてマウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１８９ｍｍ３（１３９～２４０ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用処置を受け、その第１の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与され、その第２の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与された。式Ｉの化合物とエンコラフェニブの投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物のＱＤ投与の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図１３は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＷｉＤｒにおける、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１３に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＷｉＤｒにおいて、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例９－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＨＴ－２９における式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを０．５％ＣＭＣおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。マウスは、移植時に６～８週齢であった。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたプロトコルおよびガイドラインに従って実施した。動物施設およびプログラムは、実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＲＣ，２０１１）の標準の下で操作され、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって認定された。具体的には、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎで実行されたこの研究の全ての部分は、ＩＡＣＵＣおよび適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によって検討され承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＨＴ－２９はＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を持つヒトＣＲＣ腫瘍細胞株であった。ＨＴ－２９細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－２５７７（商標））。ＨＴ－２９細胞を、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５ａ培地＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中で３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＨＴ－２９腫瘍細胞を、マウスに皮下移植した。５０％のマトリゲルと混合された２×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均２００ｍｍ３（１４６～２５９ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用処置を受け、その第１の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与され、その第２の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与された。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物の投与の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図１４は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＨＴ－２９における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組合せによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１４に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＨＴ－２９において、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１０－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体甲状腺癌ＣＤＸモデルＢＨＴ－１０１における式Ｉの化合物とエンコラフェニブの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２０日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の試験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを、０．５％ＣＭＣと０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。マウスは、移植時に６～８週齢であった。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたプロトコルおよびガイドラインに従って実施した。動物施設およびプログラムは、実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＲＣ，２０１１）の標準の下で操作され、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって認定された。具体的には、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎで実行されたこの研究の全ての部分は、ＩＡＣＵＣおよび適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によって検討され承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植片モデルの調製
ＢＨＴ－１０１はＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を持つヒト甲状腺癌細胞株であった。ＢＨＴ－１０１細胞株は、Ｃｅｌｌ Ｂａｎｋ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓから（もとはＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ＧｍｂＨから）購入された。ＢＨＴ－１０１細胞を、２０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有し且つ１×Ｇｌｕｔａｍａｘ溶液と１ｍＭピルビン酸ナトリウムを補足したＤＭＥＭ培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
Ｈｕｈ－７１０１腫瘍細胞を、マウスに皮下移植した。５０％のマトリゲルと混合された２×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１９０ｍｍ３（１４６～２５８ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用処置を受け、その第１の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与され、その第２の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与された。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物の投与の１時間後に投与した。研究は処置２０日目に終了し、これは、急速な腫瘍増殖のため、研究プロトコルにおいて定義される元の終了日よりも早かった。ビヒクル対照群における腫瘍の半分は、処置２０日目にＩＡＣＵＣプロトコルによる腫瘍体積閾値（２，０００ｍｍ３）を超えた。
結果
図１５は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体甲状腺癌ＣＤＸモデルＢＨＴ－１０１における、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１５に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体甲状腺癌ＣＤＸモデルＢＨＴ－１０１において、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１１－ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＲＫＯにおける式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調節して調製し、マウスにおける１６日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤エンコラフェニブを０．５％ＣＭＣと０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に新たに調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。マウスは、移植時に６～８週齢であった。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたプロトコルおよびガイドラインに従って実施した。動物施設およびプログラムは、実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＲＣ，２０１１）の標準の下で操作され、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）によって認定された。具体的には、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎで実行されたこの研究の全ての部分は、ＩＡＣＵＣおよび適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によって検討され承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＲＫＯは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を有するヒトＣＲＣ腫瘍細胞株であった。ＲＫＯ細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－２５７７（商標））。ＲＫＯ細胞を、ＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有し非必須アミノ酸を補足された培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＲＫＯ腫瘍細胞をマウスに皮下移植した。５０％のマトリゲルと混合された２×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均２１７ｍｍ３（１６３～２６２ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は無作為化の日にスタートした。処置開始日を処置０日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物との併用処置を受け、その第１の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与され、その第２の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および９０ｍｇ／ｋｇＱＤでエンコラフェニブを投与された。それぞれの化合物の投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、エンコラフェニブを、式Ｉの化合物ＱＤ投与の１時間後に投与した。研究は処置１６日目に終了し、これは、急速な腫瘍増殖のため、研究プロトコルにおいて定義される元の終了日よりも早かった。ビヒクル対照群における腫瘍の大半は、処置１６日目にＩＡＣＵＣプロトコルによる腫瘍体積閾値（２，０００ｍｍ３）を超えた。
結果
図１６は、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＲＫＯにおける、式Ｉの化合物単独、エンコラフェニブ単独、および式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによる、処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図１６に示されるように、式Ｉの化合物とエンコラフェニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＲＫＯにおいて、式Ｉの化合物単独での処置またはエンコラフェニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１２－式Ｉの化合物とＭＥＫの阻害剤との相乗的組み合わせ
本実施例は、式Ｉの化合物とＭＥＫの阻害剤との相乗的組み合わせを実証する。
細胞増殖アッセイ
細胞（ウェル当たり２０００細胞）を９６ウェルプレート上の１００μｌ細胞培養培地に播種し、式Ｉの化合物単独で、または式Ｉの化合物と一定濃度のトラメチニブまたはビニメチニブで処置した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、製造元の説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って発光シグナルを求め、ＰｒｉｓｍＧｒａｐｈＰａｄを使用してグラフをプロットした。
組合せ細胞増殖アッセイ
細胞（ウェルあたり２０００細胞）を、９６ウェルプレート上の１００μｌの細胞培養培地中に播種した。Ｔｅｃａｎ Ｄ３００ｅ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒのｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用することにより、０から１０μＭまで変動する濃度で式Ｉの化合物およびトラメチニブまたはビニメチニブで細胞を処理した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、発光シグナルを製造元の説明書（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って決定し、Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェアを使用して標準ＨＳＡモデルによって組み合わせデータを生成した。組み合わせの相乗作用は、結果表において正の数によって表した。負の数は、組み合わせの拮抗作用を表す。
ｐＥＲＫとＥＲＫについてのウェスタンブロッティング
ＮＣＩ－Ｈ５０８細胞を化合物で４時間処置した。処置後、細胞を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含むＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＲＩＰＡ溶解緩衝液を用いて氷上で１０分間溶解した。微量遠心機を用いて４℃で１０分間、細胞を遠心分離した。上清を予め冷却した微量遠心管に移し、溶解物のタンパク質濃度をＢＣＡ法を使用して測定した。細胞溶解物上清の等量のタンパク質をｐＥＲＫ およびＥＲＫに対する免疫ブロッティングに使用した。
ＭｅＷｏ細胞を化合物で４時間処置した。処置後、細胞を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含むＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＲＩＰＡ溶解緩衝液を用いて氷上で１０分間溶解した。微量遠心機を用いて４℃で１０分間、細胞を遠心分離した。上清を予め冷却した微量遠心管に移し、溶解物のタンパク質濃度をＢＣＡ法を使用して測定した。細胞溶解物上清の等量のタンパク質をｐＥＲＫ およびＥＲＫに対する免疫ブロッティングに使用した。
結果
図１７Ａは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株における相乗作用データを示す。図１７Ｂは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株における相乗作用データを示す。図１７Ｃは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１６６６癌細胞株における相乗作用の図表データを示す。図１７Ｄは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１６６６癌細胞株における相乗作用データを示す。
図１８Ａは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いた ＭｅＷｏ癌細胞株における相乗作用データを示す。図１８Ｂは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＭｅＷｏ癌細胞株における相乗作用データを示す。図１８Ｃは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１８３８癌細胞株における相乗作用データを示す。図１８Ｄは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ１８３８癌細胞株における相乗作用データを示す。
図１９Ａは、式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。表は、式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞のＩＣ５０データ。図１９Ｂは、式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＭｅＷｏ細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。表にしたＩＣ５０データは、式Ｉの化合物単独で、およびビニメチニブと組み合わせて処理したＭｅＷｏ細胞におけるものである。
図２０Ａは、ＮＣＩ－Ｈ５０８癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を示すウエスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）・ゲルを示す。図２０Ｂは、図２０Ａのウエスタンブロットの定量棒グラフを示す。図２０Ｃは、ＭｅＷｏ（ＮＦ１ ＬｏＦ）癌細胞株におけるＥＲＫ１／２リン酸化の相乗的阻害を示すウエスタンブロット・ゲルを示す。図２０Ｄは、図２０Ｃのウエスタンブロットの棒グラフ定量を示す。
図２１Ａは、式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ａ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２ＩＢは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２１Ｃは、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせを用いたＡ５４９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｓ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２１Ｄは、式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ７２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）癌細胞株における相乗作用データを示す。
図２２Ａは、式Ｉの化合物とビニメチニブの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２ＡＡ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２２Ｂは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２２Ｃは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＡ５４９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｓ）癌細胞株における相乗作用データを示す。図２２Ｄは、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせを用いたＮＣＩ－Ｈ７２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）癌細胞株における相乗作用データを示す。
図２３Ａは、式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＬＳ５１３（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。図２３Ｂは、式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ２００９（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）細胞における活性パーセント対阻害剤濃度（ｌｏｇＭ）のプロットを示す。表は、式Ｉの化合物単独で、およびトラメチニブと組み合わせて処理したＮＣＩ－Ｈ５０８細胞のデータ。図２３Ｃは、式Ｉ単独またはトラメチニブ単独が細胞生存率に対して最小の作用を有することを示すＣＴＧ活性パーセントの棒グラフを示す。まとめると、このデータは、式Ｉの化合物とＭＥＫの阻害剤との組み合わせが、ＢＲＡＦクラスＩＩＩ、ＮＦ１ ＬｏＦおよびＫＲＡＳ Ｇ１２Ｘ変異癌における癌細胞生存率の相乗的阻害を提供することを示す。
実施例１３－ＮＦ１ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデル ＭｅＷｏにおける式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤トラメチニブを、０．５％ＨＰＭＣと０．２％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に調製し、周囲条件下で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＭｅＷｏはＮＦｌ Ｑ１３３６＊変異を持つヒト黒色腫細胞株だった。ＭｅＷｏ細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＨＴＢ－６５（商標））。ＭｅＷｏ細胞を、最小必須培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞をトリプシン－ＥＤＴＡにより８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＭｅＷｏ腫瘍細胞をマウスに皮下移植した。５０％のマトリゲルと混合された５×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１９１ｍｍ３（１５０～２４２ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇ／投与ＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを経口投与により投与された。２つの群が、式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１０ｍｇ／ｋｇ／投与ＢＩＤで式Ｉの化合物、およびｍｇ／ｋｇＱＤで投与され、他方の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および１０ｍｇ／ｋｇＱＤで投与された。両方の併用群は０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを投薬された。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、式Ｉの化合物のＢＩＤ投与またはＱＤ投与スケジュールの１時間後にトラメチニブを投与した。
結果
図２４は、ＮＦ１ ＬｏＦ変異黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおける、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２４に示されるように、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによって、ＮＦ１ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおいて、式Ｉの化合物単独での処置またはトラメチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１４－ＮＦ１ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおける式Ｉの化合物とビニメチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
式Ｉの化合物の試験物品を、毎週１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中で新たに調製し、周囲条件下で保存した。組合せ剤ビニメチニブを１．０％ＭＣおよび０．５％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中で毎週新たに調製し、２～８°Ｃで保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．から購入された。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＧｅｎｅｎＤｅｓｉｇｎで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植片モデルの調製
ＭｅＷｏはＮＦｌ Ｑ１３３６＊変異を持つヒト黒色腫細胞株だった。ＭｅＷｏ細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＨＴＢ－６５（商標））。ＭｅＷｏ細胞を、最小必須培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞をトリプシン－ＥＤＴＡにより８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＭｅＷｏ腫瘍細胞をマウスに皮下移植した。簡単には、５０％のマトリゲルと混合された５×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１９５ｍｍ３（１４１～２６７ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１５ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、６ｍｇ／ｋｇＱＤでビニメチニブ単独、および９ｍｇ／ｋｇ／投与ＢＩＤでビニメチニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とビニメチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１５ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および６ｍｇ／ｋｇＢＩＤでビニメチニブを投与され、他方の群は、１５ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および９ｍｇ／ｋｇ／投与ＢＩＤでビニメチニブを投与された。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、ビニメチニブを、式Ｉの化合物ＱＤ投与の１時間後にした。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図２５は、ＮＦ１ ＬｏＦ変異黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおける、式Ｉの化合物単独、ビニメチニブ単独、および式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせによる処置時間の期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２５に示されるように、式Ｉの化合物とビニメチニブとの組み合わせによって、ＮＦ １ ＬｏＦ変異体黒色腫ＣＤＸモデルＭｅＷｏにおいて、式Ｉの化合物単独での処置またはビニメチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１５－ＢＲＡＦＶクラスＩＩＩ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ５０８における式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤トラメチニブを、０．５％ＨＰＭＣと０．２％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に調製し、周囲条件下で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＮＣＬＨ５０８は、ＢＲＡＦクラスＩＩＩ変異（ＢＲＡＦ Ｇ５９６Ｒ）を持つヒトＣＲＣ細胞株だった。ＮＣＩ－Ｈ５０８細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＣＬ－２５３（商標））。ＮＣＩ－Ｈ５０８細胞を、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質－抗真菌薬（ＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＮＣＬＨ５０８腫瘍細胞は、マウスに皮下注射された。簡単には、５０％のマトリゲルと混合された５×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均１８２ｍｍ３（１０８～２８７ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブ単独を経口投与により投与された。２つの群が、式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを投与され、他方の群は、０．４ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および３０ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを投与された。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、式の化合物のＢＩＤ投与またはＱＤ投与スケジュールの１時間後にトラメチニブを投与した。
結果
図２６は、ＢＲＡＦクラスＩＩＩ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ５０８における、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２６に示されるように、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによって、ＢＲＡＦクラスＩＩＩ変異体ＣＲＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ５０８において、式Ｉの化合物単独での処置またはトラメチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１６－ＮＦ１ ＬｏＦ変異体ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１８３８における式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。毎週、併用剤トラメチニブを、０．５％ＨＰＭＣと０．２％Ｔｗｅｅｎ８０のビヒクル中に調製し、周囲条件下で保存した。
雌のＳＣＩＤ Ｂｅｉｇｅマウス（Ｃａｔ＃４０５） は、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によって承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＮＣＬＨ１８３８は、ＮＦ１ ＬＯＦ変異（ＮＦ１ Ｎ１８４ｆｓ）を持つヒト肺腺癌細胞株だった。ＮＣＩ－Ｈ１８３８ 細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－５８９９（商標））。ＮＣＩ－Ｈ１８３８細胞を、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質－抗真菌薬（ＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。
ＮＣＩ－Ｈ１８３８腫瘍細胞を、マウスに皮下移植した。簡単には、５０％のマトリゲルと混合された５×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。腫瘍体積が平均２５４ｍｍ３（１４９～５０３ｍｍ３の範囲）に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブ単独を経口投与により投与された。２つの群が、式Ｉの化合物とトラメチニブとの併用処置を受け、一方の群は、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを投与され、他方の群は、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および０．４ｍｇ／ｋｇＱＤでトラメチニブを投与された。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、式Ｉの化合物の投与またはＱＤ投与スケジュールの１時間後にトラメチニブを投与した。
結果
図２７は、ＮＦ１ ＬｏＦ変異体ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１８３８における、式Ｉの化合物単独、トラメチニブ単独、および式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２７に示されるように、式Ｉの化合物とトラメチニブとの組み合わせによって、ＮＦ１ ＬｏＦ変異体ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１８３８において、式Ｉの化合物単独での処置またはトラメチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１７－式Ｉの化合物とＭＥＴの阻害剤との相乗的組み合わせ
組合せ細胞増殖アッセイ
細胞（ウェルあたり２０００細胞）を、９６ウェルプレート上の１００μｌの細胞培養培地中に播種した。Ｔｅｃａｎ Ｄ３００ｅ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒのｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｘ ｐｒｏｔｏｃｏｌを使用して、濃度を０から１０μＭまで変化させた式Ｉの化合物とクリゾチニブで、細胞を処理した。５日目に、５０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、プレートを穏やかに振盪しながら１０分間インキュベートした。１０分間のインキュベーション後、発光シグナルを提供者の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従って決定し、Ｃｏｍｂｅｎｅｆｉｔソフトウェアを使用して標準ＨＳＡモデルによって組み合わせデータを生成した。組み合わせの相乗作用は、結果表において正の数によって表した。負の数は、組み合わせの拮抗作用を表す。
結果
図２８Ａは、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いた Ｈｓ７４６Ｔ癌細胞株における相乗作用データを示す。図２８Ｂは、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いたＭＫＮ－４５癌細胞株における相乗作用データを示す。図２８Ｃは、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせを用いたＥＢＣ－１癌細胞株における相乗作用データを示す。
実施例１８－ｃＭＥＴ増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＵ－５における式Ｉの化合物とクリゾチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。併用剤クリゾチニブを０．５％メチルセルロースのビヒクル中に調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＳＮＵ－５はｃ－ＭＥＴ増幅された胃癌細胞株だった。ＳＮＵ－５細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－ＳＮＵ－５（商標））。ＳＮＵ－５細胞を、ＩＭＤＭ（ＩｓｃｏｖｅのＤｕｌｂｅｃｃｏ改変培地）＋２０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質－抗真菌薬（ＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。ＳＮＵ－５腫瘍細胞（継代１３）を、マウスに皮下移植した。１０×１０６個の腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、注射器を用いてマウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。皮下移植日３４後、腫瘍体積が平均２２７ｍｍ３に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および５０ｍｇ／ｋｇＢＩＤでクリゾチニブ単独を経口投与により投与された。さらに２つの群が、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの併用処置を受け、一方の群は、５ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物、および５０ｍｇ／ｋｇＢＩＤでクリゾチニブを投与され、他方の群は、１５ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物、および５０ｍｇ／ｋｇＢＩＤでクリゾチニブを投与された。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群において、クリゾチニブは、式Ｉの化合物のＱＤ投与の１時間後、またはＢＩＤ投与スケジュールの１回目の投与の１時間後に投与された。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図２９は、ｃ－ＭＥＴ増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＵ－５における、式Ｉの化合物単独、クリゾチニブ単独、および式Ｉの化合物とクリゾチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図２９に示されるように、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせによって、ｃ－ＭＥＴ増幅胃癌ＣＤＸモデルＳＮＵ－５において、式Ｉの化合物単独での処置またはクリゾチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
実施例１９－ｃ－ＭＥＴ増幅ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１９９３における式Ｉの化合物とクリゾチニブとの併用療法
材料
ビヒクル／対照物、脱イオン水中１００ｍＭの酢酸を、ｐＨを４．８～５．０に調整して調製し、マウスにおける２８日投与の間、周囲条件下で保存した。
毎週、式Ｉの化合物の被験物を１００ｍＭ酢酸緩衝液のビヒクル中に新たに調製し、周囲条件下で保存した。併用剤クリゾチニブを０．５％メチルセルロースのビヒクル中に調製し、２～８℃で保存した。
雌のＢａｌｂ／ｃヌードマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。マウスは、移植時に６～８週齢であった。マウスを、特別な病原体を含まない（ＳＰＦ）環境の飼育器施設に宿し、ＩＡＣＵＣプロトコルに従って、どの実験の開始前にも少なくとも３日間、その新しい環境に順応させた。本研究における動物の取り扱い、ケア、および処置に関連するすべての手順は、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたガイドラインに従って実施した。研究中、動物のケアおよび使用は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規制に従って行った。加えて、ＷｕＸｉＡｐｐＴｅｃで実行されたこの研究の全ての部分は、試験責任者および適用可能な標準操作手順（ＳＯＰ）によってされ承認された研究プロトコルに準拠した。
異種移植モデルの調製
ＮＣＩ－Ｈ１９９３はｃ－Ａｆｆｉ増幅ＮＳＣＬＣ細胞株だった。ＮＣＩ－Ｈ１９９３細胞株は、アメリカ培養細胞系統保存機関から購入した（ＡＴＣＣ（登録商標） ＣＲＬ－５９０９（商標））。ＮＣＩ－Ｈ１９９３細胞を、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質－抗真菌薬（ＡＡ）を含有する培地中で、３７℃、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で培養した。培地を２～３日毎に更新し、腫瘍細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡによって８０～９０％のコンフルエンスでルーチン継代培養した。指数増殖期で増殖する細胞を採収し、接種のためにカウントした。ＮＣＩ－Ｈ１９９３腫瘍細胞（継代１３）をマウスに皮下注射した。５０％のマトリゲルと混合された５×１０６腫瘍細胞を含有する２００μＬの細胞懸濁液を、シリンジを使用して、マウスの右側腹部に皮下移植した。動物の健康および腫瘍増殖を毎日モニタリングした。腫瘍体積は、腫瘍が触診可能かつ測定可能であった場合、カリパスによって週２回測定した。皮下移植日１０後、腫瘍体積が平均２０１ｍｍ３に達したとき、腫瘍を有するマウスを、各群に８匹のマウスを有する異なる群に無作為化した。無作為化日を処置０日目と表記した。
処置
処置は、無作為化の後の日に開始した。処置開始日を処置１日目と表記した。マウスは、ビヒクル対照溶液、１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤで式Ｉの化合物単独、３０ｍｇ／ｋｇＱＤで式Ｉの化合物単独、および５０ｍｇ／ｋｇＢＩＤでクリゾチニブを経口投与により投与された。さらにもう１つの群が併用処置を受けたが、式Ｉの化合物が５ｍｇ／ｋｇＢＩＤ、およびクリゾチニブが５０ｍｇ／ｋｇＢＩＤだった。投与体積は５ｍＬ／ｋｇであり、ＢＩＤレジメンの間隔は８時間であった。併用群では、クリゾチニブを、式Ｉの化合物のＢＩＤ投与の１回目の投与の１時間後に投与した。この研究は、研究プロトコルに定義されるように処置２８日目に終了した。
結果
図３０は、ｃ－ＭＥＴ増幅ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１９９３における、式Ｉの化合物単独、クリゾチニブ単独、および式Ｉの化合物とクリゾチニブの組み合わせによる処置期間にわたる腫瘍体積のグラフを示す。対照群および処置群において有意な体重変化は観察されなかった。
結論
図３０に示されるように、式Ｉの化合物とクリゾチニブとの組み合わせによって、ｃ－ＭＥＴ増幅ＮＳＣＬＣ ＣＤＸモデルＮＣＩ－Ｈ１９９３において、式Ｉの化合物単独での処置またはクリゾチニブ単独での処置と比較して優れた腫瘍増殖阻害が示された。
前述の実施形態は、理解を明瞭にする目的で、例示および実施例によってある程度詳細に説明されているが、当業者であれば、添付の特許請求の範囲の範囲内で特定の変更および改変が実施され得ることを理解するであろう。さらに、本明細書で提供される各参考文献は、各参考文献が個別に参照により組み込まれる場合と同じ程度まで、参照によりその全体が組み込まれる。本出願と本書に規定された参考文献との間に矛盾が存在する場合、本出願が優先されるものとする。

Claims (139)

  1. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をＦＧＦＲ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  2. 前記対象において前記ＦＧＦＲは構成的に活性である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記癌は肺癌である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記癌は肝細胞癌である、請求項１または２に記載の方法。
  5. 前記癌は胆管癌である、請求項１または２に記載の方法。
  6. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項１または２に記載の方法。
  7. 前記阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、およびＦＧＦ４０１からなる群から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記ＦＧＦＲ阻害剤はエルダフィチニブである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記ＦＧＦＲ阻害剤は、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 投与は経口である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. ＦＧＦＲ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある、請求項１から１２のいずれか１項のいずれか一項に記載の方法。
  14. 対象における肝臓癌を処置する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をエルダフィチニブと組み合わせて前記対象に経口投与する工程を含む、方法。
  15. 前記式Ｉの化合物は、毎日、１回または２回投与される、請求項１４に記載の方法。
  16. エルダフィチニブは毎日、１回または２回投与される、請求項１４または１５に記載の方法。
  17. 前記対象はヒトである、請求項１４に記載の方法。
  18. 式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＦＧＦＲ阻害剤を含むキット。
  19. 前記式Ｉの化合物および前記ＦＧＦＲ阻害剤は、別個のパッケージ中にある、請求項１８に記載のキット。
  20. 前記キットは、癌の処置のために前記キットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む、請求項１８または１９に記載のキット。
  21. 前記ＦＧＦＲ阻害剤は、エルダフィチニブ、ＡＺＤ４５４７、Ｌｙ２８７４４５５、ＣＨ５１８３２８４、ＮＶＰ－ＢＧＪ３９８、ＩＮＣＢ０５４８２８、ロガラチニブ、ＰＲＮ１３７１、ＴＡＳ－１２０、ＢＬＵ－５５４、Ｈ３Ｂ－６５２７、ＦＧＦ４０１、ペミガチニブ、インフィグラチニブ、ドビチニブ、ポナチニブ、ニンテダニブ、およびフィソガチニブのうちの１つまたは複数である、請求項１８から２０のいずれか一項に記載のキット。
  22. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をクラス１変異を有するＢ－Ｒａｆタンパク質の阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  23. 前記クラス１変異はＶ６００Ｅである、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記癌は大腸癌である、請求項２２または２３に記載の方法。
  25. 前記癌は黒色腫である、請求項２２または２３に記載の方法。
  26. 前記癌は甲状腺癌である、請求項２２または２３に記載の方法。
  27. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項２２または２３に記載の方法。
  28. 前記阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブからなる群から選択される、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記阻害剤はエンコラフェニブである、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記阻害剤はベムラフェニブである、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記阻害剤はダブラフェニブである、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記阻害剤はソラフェニブである、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記阻害剤はレゴラフェニブである、請求項２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記方法は、第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む、請求項２２から３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 投与は経口である、請求項２２から３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある、請求項２２から３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、１ｍｇから５００ｍｇの範囲にある、請求項２２から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 対象における大腸癌を処置する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をＢ－Ｒａｆ阻害剤エンコラフェニブと組み合わせて前記対象に経口投与する工程を含む、方法。
  39. 前記式Ｉの化合物は、毎日、１回または２回投与される、請求項３８に記載の方法。
  40. エンコラフェニブは、毎日、１回または２回投与される、請求項３８または３９に記載の方法。
  41. 前記対象はヒトである、請求項３８から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をエンコラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  43. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をベムラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  44. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をダブラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  45. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をソラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  46. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をレゴラフェニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  47. 前記癌は大腸癌である、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記癌は甲状腺癌である、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記癌は黒色腫である、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  51. Ｂ－Ｒａｆ阻害剤の投与量は、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤による単剤療法に必要な投与量より少ない、請求項２２から５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法に必要な投与量より少ない、請求項２２から５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 細胞集団におけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、細胞集団をレゴラフェニブと組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    に、接触させる工程を含む、方法。
  54. 前記式Ｉの化合物の濃度は、１ｎＭから５００ｎＭの範囲にある、請求項５３に記載の方法。
  55. エンコラフェニブの濃度は、１０ｎＭから２０ｎＭの範囲にある、請求項５３または５４に記載の方法。
  56. 式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＢ－Ｒａｆ阻害剤を含むキット。
  57. 前記式Ｉの化合物および前記Ｂ－Ｒａｆ阻害剤は、別個のパッケージ中にある、請求項５６に記載のキット。
  58. 前記キットは、癌の処置のために前記キットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む、請求項５６または５７に記載のキット。
  59. 前記Ｂ－Ｒａｆ阻害剤は、エンコラフェニブ、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、およびレゴラフェニブのうちの１つまたは複数である、請求項５６から５８のいずれか一項に記載のキット。
  60. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  61. 前記ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ１を選択的にまたはＭＥＫ２を選択的に、あるいはＭＥＫ１とＭＥＫ２の両方を選択的に阻害する、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記癌は転移性である、請求項６０に記載の方法。
  63. 前記癌は大腸癌である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記癌は黒色腫である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記癌は肺癌である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記癌は膵癌である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記癌は乳癌である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項６０から６２のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、ＰＤ－０３２５９０１、セルメチニブ、およびＣ１－１０４０からなる群から選択される、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブである、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記ＭＥＫ阻害剤はコビメチニブである、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記ＭＥＫ阻害剤はビニメチニブである、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記ＭＥＫ阻害剤はＰＤ－３２５９０１である、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  74. 前記ＭＥＫ阻害剤はＣＩ－１０４０である、請求項６０から６８のいずれか一項に記載の方法。
  75. 前記方法がさらなるＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む、請求項６０から７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 投与は経口である、請求項６０から７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記式Ｉの化合物の投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある、請求項６０から７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記ＭＥＫ阻害剤の投与量は、毎日１ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある、請求項６０から７７に記載の方法。
  79. 対象における癌を処置する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をＭＥＫ阻害剤ビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わせて前記対象に経口投与する工程を含む、方法。
  80. 前記式Ｉの前記化合物は、毎日、１回または２回投与される、請求項７９に記載の方法。
  81. ビニメチニブまたはトラメチニブは、毎日、１回または２回投与される、請求項７９または８０に記載の方法。
  82. 前記対象がヒトである、請求項７９から８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をビニメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  84. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をトラメチニブと組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  85. 前記癌は大腸癌である、請求項８３または８４に記載の方法。
  86. 前記癌は肺癌である、請求項８３または８４に記載の方法。
  87. 前記癌は黒色腫である、請求項８３または８４に記載の方法。
  88. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項８３または８４に記載の方法。
  89. 前記ＭＥＫ阻害剤の投与量は、ＭＥＫ阻害剤による単剤療法に必要な投与量より少ない、請求項６０から８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記式Ｉの化合物の投与量は、式Ｉの化合物による単剤療法に必要な投与量より少ない、請求項６０から８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. ＥＲＫ１／２リン酸化を阻害する方法であって、細胞集団をビニメチニブまたはトラメチニブと組み合わされた式Ｉまたはその薬学的に許容可能な塩
    に接触させる工程を含む、方法。
  92. 前記式Ｉの化合物の濃度は、１ｎＭから１，０００ｎＭの範囲にある、請求項９１に記載の方法。
  93. ＭＥＫ阻害剤の濃度は、１０ｎＭから５００ｎＭの範囲にある、請求項９１または９２に記載の方法。
  94. 式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびＭＥＫ阻害剤を含むキット。
  95. 前記式Ｉの化合物と前記ＭＥＫ阻害剤は、別個のパッケージ中にある、請求項９４に記載のキット。
  96. 前記キットは、癌の処置のために前記キットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む、請求項９４または９５に記載のキット。
  97. 前記ＭＥＫ阻害剤はトラメチニブまたはビニメチニブの１つまたは複数である、請求項９４から９６のいずれか一項に記載のキット。
  98. 癌を有する対象を処置する方法であって、前記対象に治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をＭＥＴ阻害剤と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
  99. 前記ＭＥＴ阻害剤は、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、またはその両方でもある、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記癌は非小細胞肺癌である、請求項９８または９９に記載の方法。
  101. 前記癌は胃癌である、請求項９８または９９に記載の方法。
  102. 前記癌は、胃腺癌である、請求項９８または９９に記載の方法。
  103. 前記癌は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項９８または９９に記載の方法。
  104. 前記ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、およびチバンチニブからなる群から選択される、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記ＭＥＴ阻害剤はクリゾチニブである、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  106. 前記ＭＥＴ阻害剤はテポチニブである、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記ＭＥＴ阻害剤はサボリチニブである、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記ＭＥＴ阻害剤はカボザンチニブである、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  109. 前記ＭＥＴ阻害剤はチバンチニブである、請求項９８から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  110. 第３のＭＡＰＫ経路阻害剤を投与する工程を含む、請求項９８から１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 投与は経口である、請求項９８から１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記式Ｉの化合物の投与量は、毎日１０ｍｇから毎日５００ｍｇの範囲にある、請求項９８から１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記阻害剤の前記投与量は、毎日２０ｍｇから毎日４００ｍｇの範囲にある、請求項９８から１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 対象における胃癌を処置する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩
    をクリゾチニブと組み合わせて前記対象に経口投与する工程を含む、方法。
  115. 前記式Ｉの化合物は、毎日、１回または２回投与される、請求項１１４に記載の方法。
  116. クリゾチニブは、毎日、１回または２回投与される、請求項１１４または１１５に記載の方法。
  117. 前記対象はヒトである、請求項１１４から１１６のいずれか一項に記載の方法。
  118. 式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩、およびＭＥＴ阻害剤を含む、キット。
  119. 前記式Ｉの化合物および前記ＭＥＴ阻害剤は、別個のパッケージ中にある、請求項１１８に記載のキット。
  120. 前記キットは、癌の処置のためにキットの内容物を対象に投与するための説明書をさらに含む、請求項１１８または１１９に記載のキット。
  121. 前記ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、テポチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、およびチバンチニブのうちの１つまたは複数である、請求項１１８から１２０のいずれか一項に記載のキット。
  122. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、医薬組成物として製剤化される、請求項１から１２１にいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、経口組成物として製剤化される、請求項１から１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日１回または２回投与される、請求項１から１２３に記載の方法。
  125. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、連続２８日サイクルにわたって投与される、請求項１から１２４のいずれか一項に記載の方法。
  126. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、約１０ｍｇから約１４０ｍｇの量で１日１回投与される、請求項１から１２５のいずれか一項に記載の方法。
  127. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、前記化合物の２週間の投与とその後の前記化合物の１週間の非投与とを含む３週間のサイクルで１日１回投与される、請求項１から１２６のいずれか一項に記載の方法。
  128. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、前記化合物の３週間の投与とその後の前記化合物の１週間の非投与とを含む４週間のサイクルで１日１回投与される、請求項１から１２６のいずれか一項に記載の方法。
  129. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、６週間にわたって投与される、請求項１から１２８のいずれか一項に記載の方法。
  130. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される、請求項１から１２８のいずれか一項に記載の方法。
  131. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週に３回投与される、請求項１から１３０のいずれか一項に記載の方法。
  132. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週の１日目、３日目、および５日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
  133. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、週に４回投与される、請求項１から１３２のいずれか一項に記載の方法。
  134. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、前記化合物の２週間の投与とその後の前記化合物の１週間の非投与とを含む、３週間のサイクルで投与される、請求項１３３に記載の方法。
  135. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、前記化合物の３週間の投与と、それに続く前記化合物の１週間の非投与とを含む、４週間のサイクルで投与される、請求項１３３に記載の方法。
  136. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、１日に２回、週に２日投与される、請求項１から１２５のいずれか一項に記載の方法。
  137. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、８週間にわたって投与される、請求項１から１２６のいずれか一項に記載の方法。
  138. 前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、各週の１日目および２日目に投与される、請求項１３６または１３７に記載の方法。
  139. 前記癌は、肺癌、胃癌、肝臓癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵癌、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、若年性骨髄単球性白血病、神経芽細胞腫、黒色腫、および急性骨髄性白血病から選択される、請求項１から１３８のいずれか一項に記載の方法。
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