KR20230152652A - 암 치료를 위한 병용 요법 - Google Patents

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KR20230152652A
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cancer
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KR1020237023401A
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리누스 마틴
레슬리 해리스 브레일
로버트 필드 슈메이커
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에라스카, 아이엔씨.
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Abstract

본 개시내용은 SHP2 억제제 예컨대 화학식 I의 화합물과 FGFR 억제제, B-Raf 억제제, MEK 억제제, 또는 MET 억제제의 병용 요법으로 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

암 치료를 위한 병용 요법
상호 참조
본 출원은 2020년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/124,663호; 2020년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/124,667호; 2020년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/124,671호; 및 2020년 12월 11일에 출원된 미국 가출원 제63/124,674호의 이익을 주장하며; 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
Src 상동성-2 포스파타아제(SHP2)는 다양한 조직 및 세포 유형에서 편재적으로 발현되는 비-수용체 단백질 포스파타아제이다(하기 보고서: 문헌[Tajan M et al., Eur J Med Genet 2016 58(10):509-25]; [Grossmann KS et al., Adv Cancer Res 2010 106:53-89] 참조). SHP2는 그것의 NH2-말단에서의 2개의 Src 상동성 2(N-SH2 및 C-SH2) 도메인, 촉매적 PTP(단백질-티로신 포스파타아제) 도메인, 및 조절 특성을 가진 C-말단 테일로 이루어진다. 기저 상태에서, SH2 도메인과 PTP 도메인 간의 분자간 상호작용은 촉매적 포켓에 대한 기질의 접근을 방지하고, SHP2를 닫힌, 자동-억제 구조(auto-inhibited conformation)로 유지시킨다. 자극에 반응하여, SHP2 활성화 단백질 함유 인광체-티로신 모티프는 SH2 도메인에 결합되고, 이는 SHP2의 효소적 활성화 및 활성 부위의 노출을 유발한다.
본원에 개시된 본 실시양태는 일반적으로 예상하지 못한 정도의 상승작용을 제공하는 것을 포함하는, FGFR 억제제, B-Raf 억제제, MEK 억제제, 또는 MET 억제제와 함께 SHP2 억제제를 이용하여 암을 치료하기 위한 병용 요법과 관련된 조성물 및 방법에 관한 것이다.
SHP2는 증식, 분화, 세포 주기 유지 및 운동성을 포함하는 기본적인 세포 기능에 있어서 중요한 역할을 한다. 그의 관련된 신호전달 분자를 탈인산화시킴으로써, SHP2는 광범위한 성장 인자, 사이토카인 및 호르몬에 반응하여 복수의 세포내 신호전달 경로를 조절한다. SHP2가 참여하는 세포 신호전달 과정은 RAS-MAPK(미토겐-활성화된 단백질 키나아제), PI3K(포스포이노시톨 3-키나아제)-AKT, 및 JAK-STAT 경로를 포함한다.
SHP2는 또한 RTK의 하류 및 RAS의 상류에서 작용하는 이 경로에 대해 신호-향상 역할을 한다. 내성의 하나의 일반적인 메커니즘은 MAPK 신호전달의 재활성화를 정기적으로 촉진하는 RTK의 활성화를 수반한다. RTK 활성화는 직접 결함을 통해 그리고 어댑터 단백질을 통해 SHP2를 모집한다. 이 상호작용은 닫힌 (비활성) 구조로부터 개방 (활성) 구조로의 SHP2의 전환을 유발한다. SHP2는 1차 및 2차 저항 둘 모두에서 약리학적 억제를 우회하는 RAS 신호전달의 재활성화의 중요한 촉진자이다. SHP2의 억제는 종종 발암성 신호전달(oncogenic signaling) 및 적응성 종양 도피(adaptive tumor escape)를 유도하는 상류 RTK 신호전달을 전반적으로 약화시키는 효과를 달성하며(문헌[Prahallad, A. et al. Cell Reports 12, 1978-1985(2015)]; 문헌[Chen YN, Nature 535, 148-152(2016)] 참조), 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
섬유아세포 성장 인자 수용체(FGFR)는 단백질의 섬유아세포 성장 인자 패밀리의 구성원에 결합하고, 또한 RAS 상류의 RAS-MAPK 신호 전달 경로에 영향을 미친다. 여러 각도로부터 신호 전달 경로를 표적화하고 SHP2를 통해 Ras 상류의 피드백 루프(feedback loop)를 잠재적으로 개선하는 기회는 병용 요법을 이용하는 방법을 개발하기 위한 기회를 제공한다. 본 개시내용은 예상하지 못한 정도의 상승작용을 제공하는 이러한 방법을 제공한다.
RAS-MAPK 신호 전달 경로는 Raf 패밀리의 단백질을 포함한다. 상기 패밀리는 Ras의 하류 효과기로서 작용하는 3개의 관련 키나아제(A-, B- 및 C-Raf)로 이루어진 것을 포함한다. B-Raf는 특히 MAP 키나아제/ERK-신호전달 경로를 활성화시키는 세린/트레오닌 단백질 키나아제이다. 구성적으로 활성인 B-Raf 돌연변이체는 세포가 성장하도록 과도하게 신호전달함으로써 암을 일으키는 것으로 일반적으로 알려져 있다. 예를 들어, 활성화 B-Raf V600E 키나아제 돌연변이는 인간 악성종양의 약 7% 및 흑색종의 약 50-60%에서 발생된다.
RAS-MAPK 신호 전달 경로는 또한 MEK1 및 MEK2를 포함한다. MEK1 및 MEK2는 이중 기능 세린/트레오닌 및 티로신 단백질 키나아제이고, 이는 또한 MAP 키나아제 키나아제로도 알려져 있다. MEK는 성장 인자 수용체로부터 핵으로 신호를 전달하여 무엇보다도 세포 증식, 분화, 생존 및 침습을 조절하는 경로인 RAS-조절된 RAF-MEK-ERK 신호전달 경로에서 중요한 역할을 한다.
마지막으로, 중추 단백질 티로신 키나아제인 세포외 MET (또는 c-MET)는 RAS-MAPK 신호 전달 경로의 상류에서 작용한다. 여러 각도로부터 신호 전달 경로를 표적화하고 SHP2를 통해 Ras 상류의 피드백 루프를 잠재적으로 개선하는 기회는 병용 요법을 이용하는 방법을 개발하기 위한 기회를 제공한다. 본원에 개시된 본 개시내용은 예상하지 못한 정도의 상승작용을 제공하는 이러한 방법을 제공한다.
제1 양태에서, 본 개시내용은 FGFR 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 대상체에서의 FGFR은 구성적으로 활성이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 간세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 담관암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, 및 FGF401로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 에르다피티닙이다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
제2 양태에서, 본 개시내용은 에르다피티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 간암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 에르다피티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
제3 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 FGFR 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 FGFR 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, FGF401, 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙 중 하나 이상이다.
제4 양태에서, 본 개시내용은 클래스 1 돌연변이를 갖는 B-Raf 단밸질의 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 클래스 1 돌연변이는 V600E이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 엔코라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 베무라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 다브라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 소라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 레고라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제의 투여량은 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 B-Raf 억제제 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 결장직장암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 엔코라페닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 베무라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 다브라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 소라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 레고라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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본원에 기재된 방법의 다양한 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제의 투여량은 B-Raf 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 레고라페닙과 조합한 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는 세포 집단에서 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 500 nM의 범위이다. 일부 실시양태에서, 엔코라페닙의 농도는 10 nM 내지 20 nM의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 B-Raf 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 B-Raf 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙 중 하나 이상이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MEK 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, MEK 억제제는 MEK1을 선택적으로 또는 MEK2를 선택적으로 또는 MEK1과 MEK2 둘 모두를 선택적으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, PD-0325901, 셀루메티닙 및 CI-1040으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 코비메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 비니메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 PD-325901이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 CI-1040이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 추가의 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MEK 억제제 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 비니메티닙 또는 트라메티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 비니메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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본원에 기재된 방법의 다양한 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 투여량은 MEK 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합한 하기 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 세포 집단을 접촉시키는 단계를 포함하는 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 1,000 nM의 범위이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 농도는 10 nM 내지 500 nM의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MEK 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 MEK 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙 또는 비니메티닙 중 하나 이상이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MET 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, MET 억제제는 또한 ALK 억제제, ROS1 억제제, 또는 둘 모두이다. 일부 실시양태에서, 암은 비-소세포 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙(savolitinib), 카보잔티닙, 및 티반티닙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙이다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 테포티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 사보리티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 카보잔티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제는 티반티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 10 mg 내지 500 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, 상기 억제제의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 크리조티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 위암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 크리조티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
마지막 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MET 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 MET 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 및 티반티닙 중 하나 이상이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 경구용 조성물로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 1회 또는 2회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 연속 28일 주기에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약 10 mg 내지 약 140 mg의 양으로 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 6주의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 3회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 주 중 1일차, 3일차, 및 5일차에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 4회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 2회, 주당 2일 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매주 1일차 및 2일차에 투여된다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암, 위암, 간암, 결장암, 신장암, 유방암, 췌장암, 췌관 선암(PDAC), 소아 골수단구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 및 급성 골수성 백혈병으로부터 선택된다.
본 발명의 신규한 특징은 첨부된 청구항에서의 특이성으로 제시된다. 본 발명의 원리가 이용되는 예시적인 실시양태를 제시하는 하기 상세한 설명 및 하기의 도면을 참조함으로써 본 발명의 특징 및 장점의 더 나은 이해가 얻어질 것이다:
도 1a는 화학식 I의 화합물과 FGFR 억제제 에르다피티닙의 조합이 시험관내에서 상승작용을 나타내는 것을 나타내는 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 1b는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합을 사용한 Hep3B 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 2는 간 암종 CDX 모델 KATO III에서의 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 3은 FGFR2 증폭된 위암 CDX SNU-16에서의 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 시간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 4는 FGF19-FGFR4 의존적 간암 CDX 모델 Huh-7에서의 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 시간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 5는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합이 복수의 BRAF V600E 돌연변이된 세포에 대해 상승작용을 나타내는 것을 나타내는 데이터를 보여준다.
도 6은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 RKO BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 7은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 WiDr BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 8은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 HT29 BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 9a는 RKO 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 겔을 보여준다. 도 9a는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합을 사용한 pERK1/2의 강력한 감소를 나타낸다.
도 9b는 WiDr 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 강력한 억제를 나타내는 겔을 보여준다. 도 9b는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합을 사용하는 pERK1/2의 강력한 감소를 나타낸다.
도 9c는 RKO 결장직장암 세포주에서의 화학식 I의 화합물 단독 또는 엔코라페닙과 조합된 화학식 I의 화합물의 증식 방지 효과의 플롯을 보여준다. 도 9c는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합이 화학식 I의 화합물의 억제 활성을 증가시켰음을 시사한다.
도 9d는 WiDr 결장직장암 세포주에서의 화학식 I의 화합물 또는 엔코라페닙과 조합된 화학식 I의 화합물의 증식 방지 효과의 플롯을 보여준다. 도 9d는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합이 화학식 I의 화합물의 억제 활성을 증가시켰음을 시사한다.
도 10a는 다음의 조합: 화학식 I의 화합물 + 엔코라페닙; TNO155 + 엔코라페닙; 및 RMC-4550 + 엔코라페닙으로의 RKO 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 비교하는 겔을 보여주며, 이는 ERK1/2 인산화의 억제가 SHP2 억제제 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로 가장 효과적이었음을 나타낸다.
도 10b는 1. 대조군; 2. (화학식 I의 화합물); 3. 엔코라페닙; 및 4. (화학식 I의 화합물) + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여주며, 이는 ERK1/2 인산화의 억제가 SHP2 억제제 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로 가장 효과적이었음을 나타낸다.
도 10c는 1. 대조군; 2. TNO155; 3. 엔코라페닙; 및 4. TNO155 + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여주며, 이는 ERK1/2 인산화의 억제가 SHP2 억제제 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로 가장 효과적이었음을 나타낸다.
도 10d는 1. 대조군; 2. RMC-4550; 3. 엔코라페닙; 및 4. RMC-4550 + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여주며, 이는 ERK1/2 인산화의 억제가 SHP2 억제제 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로 가장 효과적이었음을 나타낸다.
도 11은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR0029에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 12는 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR004에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 13은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 WiDr에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 14는 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 HT-29에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 15는 BRAFV600E 돌연변이체 갑상선 암종 CDX 모델 BHT-101에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 16은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 RKO에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 17a은 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H508 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 17b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H508 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 17c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1666 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 17d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1666 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 18a은 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 MeWo 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 18b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 MeWo 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 18c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1838 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 18d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1838 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 19a은 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 NCI-H508 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 NCI-H508 세포에서의 IC50 데이터를 표로 만들었다.
도 19b는 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 MeWo 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 MeWo 세포에서의 IC50 데이터를 표로 만들었다.
도 20a는 NCI-H508 암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 웨스턴 블롯 겔을 보여준다.
도 20b는 도 20a의 웨스턴 블롯의 막대 도표 정량화를 보여준다.
도 20c는 MeWo (NF1 LoF) 암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 웨스턴 블롯 겔을 보여준다.
도 20d는 도 20c의 웨스턴 블롯의 막대 도표 정량화를 보여준다.
도 21a는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H2009 (KRAS G12A) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 21b는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 LS513 (KRAS G12D) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 21c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 A549 (KRAS G12S) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 21d는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H727 (KRAS G12V) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 22a는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H2009 (KRAS G12A) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 22b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 LS513 (KRAS G12D) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 22c는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 A549 (KRAS G12S) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 22d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H727 (KRAS G12V) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 23a는 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 LS513 (KRAS G12D) 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다.
도 23b는 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 NCI-H2009 (KRAS G12D) 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 NCI-H508 세포에서의 데이터를 표로 만들었다.
도 23c는 화학식 I의 화합물 또는 트라메티닙 단독이 세포 생존율에 대해 최소 효과를 갖는 것을 나타내는 CTG 활성 백분율의 막대 도표를 보여준다. 총괄적으로, 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 MEK의 억제제의 조합이 BRAF 클래스 III, NF1 LoF 및 KRAS G12X 돌연변이된 암의 암세포 생존율의 상승작용적 억제를 제공하는 것을 나타낸다.
도 24는 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 25는 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물 단독, 비니메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 26은 BRAF 클래스 III 돌연변이체 CRC CDX 모델 NCI-H508에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 27은 NF1 LoF 돌연변이체 NSCLC CDX 모델 NCI-H1838에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 28a는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 Hs746T 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 28b는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 MKN-45 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 28c는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 EBC-1 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 29는 c-MET 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-5에서의 화학식 I의 화합물 단독, 크리조티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
도 30은 c-MET 증폭된 NSCLC CDX 모델 NCI-H1993에서의 화학식 I의 화합물 단독, 크리조티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
I. 개요
본 개시내용은 FGFR 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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하기 실시예는 예상외의 조합에 대한 상승작용을 나타낸다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이용하는 본원에 개시된 병용 요법은 FGFR의 억제제와 조합되어 사용되는 대안적인 SHP2 억제제의 조합과 비교하여 우수한 결과를 나타낼 수 있다. 게다가, 화학식 I의 SHP2 억제제와 FGFR의 억제제의 조합은 단독요법에서 단독으로 사용되는 제제의 더 낮은 투여량의 사용을 가능하게 하는 방법을 제공하며, 이는 잠재적인 부작용을 감소시키는 데 도움이 될 수 있다. 특히, 병용 요법은 비제한적으로 FGFR4 돌연변이뿐만 아니라 FGFR의 증폭된 발현을 포함하는 돌연변이를 발현하는 암세포에 효과적일 수 있다.
제1 양태에서, 본 개시내용은 FGFR 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 대상체에서의 FGFR은 구성적으로 활성이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 간세포 암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 담관암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, 및 FGF401로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 에르다피티닙이다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
제2 양태에서, 본 개시내용은 에르다피티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 간암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 에르다피티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
제3 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 FGFR 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 FGFR 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, FGF401, 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙 중 하나 이상이다.
제4 양태에서, 본 개시내용은 클래스 1 돌연변이를 갖는 B-Raf 단백질의 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 클래스 1 돌연변이는 V600E이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 엔코라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 베무라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 다브라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 소라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 레고라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제의 투여량은 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
본 개시내용은 클래스 1 돌연변이체 B-Raf의 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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하기 실시예는 예상하지 못한 조합에 대한 상당한 상승작용을 나타낸다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이용하는 본원에 개시된 병용 요법은 클래스 1 돌연변이체 B-Raf의 억제제와 조합되어 사용되는 대안적인 SHP2 억제제의 조합과 비교하여 우수한 결과를 나타낼 수 있다. 게다가, 화학식 I의 SHP2 억제제 및 클래스 1 돌연변이체 B-Raf의 억제제의 조합은 단독요법에서 단독으로 사용되는 제제의 더 낮은 투여량의 사용을 가능하게 하는 방법을 제공하며, 이는 잠재적 부작용을 감소시키는 데 도움이 될 수 있다. 특히, 병용 요법은 BRAF V600E 돌연변이를 발현하는 암세포에서 효과적일 수 있다.
제4 양태에서, 본 개시내용은 클래스 1 돌연변이를 가진 B-Raf 단백질의 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 클래스 1 돌연변이는 V600E이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 억제제는 엔코라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 베무라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 다브라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 소라페닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 레고라페닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제의 투여량은 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 B-Raf 억제제 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 결장직장암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 엔코라페닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 베무라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 다브라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 소라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 레고라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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본원에 기재된 방법의 다양한 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제의 투여량은 B-Raf 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 레고라페닙과 조합한 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 세포 집단을 접촉시키는 단계를 포함하는 세포 집단에서 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 500 nM의 범위이다. 일부 실시양태에서, 엔코라페닙의 농도는 10 nM 내지 20 nM의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 B-Raf 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 B-Raf 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙 중 하나 이상이다.
본 실시양태는 MEK 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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하기 실시예는 예상외의 조합에 대한 상승작용을 나타낸다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이용하는 본원에 개시된 병용 요법은 MEK의 억제제와 조합되어 사용되는 대안적인 SHP2 억제제의 조합과 비교하여 우수한 결과를 나타낼 수 있다. 게다가, 화학식 I의 SHP2 억제제 및 MEK의 억제제의 조합은 단독요법에서 단독으로 사용되는 제제의 더 낮은 투여량의 사용을 가능하게 하는 방법을 제공하며, 이는 잠재적 부작용을 감소시키는 데 도움이 될 수 있다. 특히, 병용 요법은 클래스 비제한적으로 III B-raf 돌연변이 및 KRAS G12X 돌연변이를 포함하는 돌연변이를 발현하는 암세포에서 효과적일 수 있다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MEK 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, MEK 억제제는 MEK1을 선택적으로 또는 MEK2를 선택적으로 또는 MEK1과 MEK2 둘 모두를 선택적으로 억제한다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, PD-0325901, 셀루메티닙 및 CI-1040으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 코비메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 비니메티닙이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 PD-325901이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 CI-1040이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 추가의 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MEK 억제제 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 비니메티닙 또는 트라메티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 비니메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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다른 양태에서, 본 개시내용은 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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본원에 기재된 방법의 다양한 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 일부 실시양태에서, 암은 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 흑색종이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 투여량은 MEK 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 더 적다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 더 적다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합한 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 1,000 nM의 범위이다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 농도는 10 nM 내지 500 nM의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MEK 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 MEK 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 트라메티닙 또는 비니메티닙 중 하나 이상이다.
본 개시내용은 MET 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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하기 실시예는 예상외의 조합에 대한 상승작용을 나타낸다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이용하는 본원에 개시된 병용 요법은 MET의 억제제와 조합하여 사용되는 대안적인 SHP2 억제제의 조합과 비교하여 우수한 결과를 나타낼 수 있다. 게다가, 화학식 I의 SHP2 억제제 및 MET의 억제제의 조합은 단독요법에서 단독으로 사용되는 제제의 더 낮은 투여량의 사용을 가능하게 하는 방법을 제공하며, 이는 잠재적 부작용을 감소시키는 데 도움이 될 수 있다. 특히, 병용 요법은 MET에서 일탈적 돌연변이를 발현하는 암세포에서 효과적일 수 있다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 MET 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 암을 가진 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, MET 억제제는 또한 ALK 억제제, ROS1 억제제, 또는 둘 모두이다. 일부 실시양태에서, 암은 비-소세포 폐암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위선암이다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 및 티반티닙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙이다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 테포티닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 사보리티닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 카보잔티닙이다. 일부 실시양태에서, 억제제는 티반티닙이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 10 mg 내지 500 mg의 범위이다. 일부 실시양태에서, 억제제의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 크리조티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 위암을 치료하는 방법을 제공한다:
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일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 크리조티닙은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
마지막 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MET 억제제를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 MET 억제제는 별도의 패키지에 존재한다. 일부 실시양태에서, 키트는 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 및 티반티닙 중 하나 이상이다.
따라서, 이러한 치료는 적절한 환자 집단 선택에 도움이 되는 동반 진단의 사용에도 적합하다. 이러한 그리고 다른 장점은 본 기술분야의 당업자에게 인지될 것이다.
II. 정의
구체적으로 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 실시양태와 관련된 기술분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 또한, 본원에 기재된 방법 또는 물질과 유사하거나 동등한 임의의 방법 또는 물질이 본원의 실시양태의 실시에서 사용될 수 있다. 본원에 개시된 실시양태의 목적을 위해, 하기 용어가 정의된다.
본원에 사용되는 단수 형태("A," "an," 또는 "the")는 하나의 구성원을 사용한 양태를 포함할 뿐만 아니라 하나 초과의 구성원을 사용한 양태도 포함한다. 예로서, 단수 형태("a," "an," 및 "the")는 문맥에서 달리 명시하지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 복수의 이러한 세포를 포함하고, "제제"에 대한 언급은 본 기술분야의 당업자에게 알려진 하나 이상의 제제에 대한 언급을 포함하며, 기타 마찬가지다.
"약학적으로 허용 가능한 부형제"는 대상체에 의해 활성제의 투여 및 대상체에 의한 흡수를 보조하는 물질을 지칭한다. 본 실시양태에서 유용한 약학 부형제는 비제한적으로 결합제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 계면활성제, 코팅, 감미제, 향미제 및 착색제를 포함한다. 본 기술분야의 당업자는 다른 약학 부형제가 본 실시양태에 유용하다는 것을 인지할 것이다.
"치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터 예컨대 완화; 차도; 증상의 감소 또는 손상, 병리 또는 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 하는 것; 악화 또는 저하 속도의 둔화; 악화의 최종 지점을 덜 쇠약하게 하는 것; 환자의 신체적 또는 정신적 삶의 질(well-being)의 개선을 포함하는, 손상, 병리 또는 병태의 치료 또는 개선에 있어서의 성공의 임의의 지표와 관련된다. 증상의 치료 또는 개선은 신체 검사, 신경정신과 검사, 및/또는 정신과 평가의 결과를 포함하는; 객관적 또는 주관적 파라미터에 기초할 수 있다.
"투여하는"은 대상체에 대한 경구 투여, 좌약, 국소 접촉, 비경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 병소내, 비강내 또는 피하 투여와 같은 투여, 척수강내 투여, 또는 저속 방출 디바이스 예를 들어 미니-삼투압 펌프의 이식을 지칭한다. 본원에 개시된 병용 요법의 맥락에서, 투여는 별도의 시간에 또는 동시에 또는 실질적으로 동시에 있을 수 있다.
"치료적 유효량"은 투여되는 대상에 대한 치료 효과를 생성하는 용량을 지칭한다. 정확한 용량은 치료 목적에 좌우될 것이며, 공지된 기술을 사용하여 본 기술분야의 당업자에 의해 확인될 것이다(예를 들어 문헌[Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992)]; 문헌[Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999)]; 문헌[Pickar, Dosage Calculations (1999)]; 및 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins] 참조). 감작된 세포에서, 치료적 유효 용량은 종종 감작되지 않은 세포에 대한 종래의 치료적 유효 용량보다 더 낮을 수 있다.
"억제", "억제하다" 및 "억제제"는 특정 작용 또는 기능을 부분적으로 또는 완전하게 차단하거나 방지하는 화합물 또는 이를 부분적으로 또는 완전하게 차단하거나 방지하는 방법과 관련된다.
"암"은 비제한적으로, 백혈병, 림프종, 암종 및 육종을 포함하는 포유동물(예를 들어 인간)에서 발견되는 모든 유형의 암, 신생물 또는 악성 종양을 지칭한다. 본원에 제공되는 화합물 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적인 암은 뇌암, 신경교종, 교모세포종, 신경모세포종, 전립선암, 결장직장암, 췌장암, 수모세포종, 흑색종, 자궁경부암, 위암, 난소암, 폐암, 두부암, 호지킨병 및 비호지킨 림프종을 포함한다. 본원에 제공되는 화합물 또는 방법으로 치료될 수 있는 예시적인 암은 갑상선, 내분비계, 뇌, 유방, 자궁경부, 대장, 두경부, 간, 신장, 폐, 난소, 췌장, 직장, 위, 및 자궁의 암을 포함한다. 추가의 예는 갑상선 암종, 담관암종, 췌장 선암, 피부 흑색종, 결장 선암, 직장 선암, 위 선암, 식도 암종, 두경부 편평 세포 암종, 유방 침습 암종, 폐 선암, 폐 편평 세포 암종, 비소세포 폐암종, 중피종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 신경교종, 다형 교모세포종, 난소암, 횡문근육종, 원발성 혈소판 증가증, 원발성 마크로글로불린혈증, 원발성 뇌종양, 악성 췌장 섬도종, 악성 유암종, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 갑상선암, 신경모세포종, 식도암, 비뇨생식기암, 악성 고칼슘혈증, 자궁내막암, 부신 피질암, 내분비 또는 외분비 췌장의 신생물, 갑상선 수질암, 갑상선 수질 암종, 흑색종, 결장직장암, 갑상선 유두암, 간세포 암종, 췌관 선암(PDAC), 또는 전립선암을 포함한다.
"FGFR 억제제"는 야생형 FGFR 또는 FGFR 돌연변이체의 임의의 억제제를 지칭한다. FGFR 돌연변이는 비제한적으로 단일 뉴클레오티드 다형성(single nucleotide polymorphism), 엑손 삽입 및 결실, 다염색체성(polysomy) 등을 포함한다. 돌연변이 및 억제제의 특정 예는 비제한적으로 EGFR 유전자 복제 획득(gene copy gain), FGFR1 유전자 증폭, FGFR2 유전자 복제 획득, FGFR2 유전자 증폭, FGFR3 유전자 복제 획득, FGFR3 유전자 증폭, FGFR4 유전자 복제 획득, FGFR4 유전자 증폭, FGFR1 T141R, FGFR1 R445W, FGFR1 N546K, FGFR1 K656E, FGFR1 G818R, FGFR2 S252W, FGFR2 P253R, FGFR2 A315T, FGFR2 D336N, FGFR2 Y375C, FGFR2 C382R, FGFR2 V395D, FGFR2 D471N, FGFR2 I547V, FGFR2 N549K, FGFR2 N549Y, FGFR2 K659E, FGFR3 S131L, FGFR3 R248C, FGFR3 S249C, FGFR3 G370C, FGFR3 S371C, FGFR3 Y373C, FGFR3 G380R, FGFR3 R399C, FGFR3 E627K, FGFR3 K650E, FGFR3 K650M, FGFR3 V677I, FGFR3 D785Y, FGFR4 R183S, FGFR4 R394Q, FGFR4 D425N, FGFR4 V510L, FGFR4 R610H, 및 FGFR 융합(예를 들어, FGFR3-TACC3, FGFR2-TACC3, FGFR2-NPM1, FGFR2-TACC2, FGFR2-BICC1, FGFR2-C10orf68, FGFR3-JAKMIP1, FGFR2-KIAA1598, FGFR2-NCALD, FGFR2-NOL4, FGFR1-NTM, FGFR2-PPAPDC1A, FGFR3-TNIP2, 및 FGFR3-WHSC1)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 열거된 돌연변이된 형태 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다. 억제제는 비제한적으로 에르다피티닙, 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 열거된 돌연변이된 형태 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다.
"클래스 1 돌연변이체 B-Raf" 또는 "클래스 1 돌연변이를 가진 B-Raf 단백질"은 일반적으로 V600(발린 600)에서의 야생형 B-Raf 단백질로부터 유도되는 임의의 돌연변이를 지칭한다. 특히, 이러한 돌연변이체 B-Raf 단백질은 V600E 돌연변이를 포함하는 돌연변이를 포함한다. 다른 클래스 1 BRAF 돌연변이는 비제한적으로 V600K, V600D, V600L, V600M 및 V600R을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 열거된 돌연변이된 형태 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다.
"MEK 억제제"는 일반적으로 MEK1 또는 MEK2를 선택적으로 또는 MEK1과 MEK2 둘 모두를 억제하는 임의의 억제제를 지칭한다. 예시적인 억제제는 비제한적으로 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, PD-0325901, 셀루메티닙 및 CI-1040을 포함한다.
"MET 억제제"는 야생형 MET 또는 MET 돌연변이체의 임의의 억제제를 지칭한다. MET 돌연변이는 비제한적으로 단일 뉴클레오티드 다형성, 엑손 삽입 및 결실, 다염색체성 등을 포함한다. 돌연변이 및 억제제의 특정 예는 비제한적으로 MET 유전자 복제 획득, MET 유전자 증폭, MET E34K, MET H150Y, MET E168D, MET L269V, MET L299F, MET S323G, MET M362T, MET N375S, MET C385Y, MET R970C, MET R988C, MET P1009S, MET T1010I, MET S1058P, MET 엑손 14 스키핑 돌연변이, MET 엑손 14 스플라이스 변이체, MET A1108S, MET V1110I, MET H1112R, MET H1112L, MET H1112I, MET HJ1124D, MET G1137V, MET M1149T, MET T1191I, MET V1206L, MET L1213V, MET D1228V, MET Y1230C, MET Y1230H, MET Y1230D, MET Y1235D, MET V1238I, MET D1246N, MET Y1248C, MET Y1248D, MET Y1248H, MET K1262R, MET M1268T, MET M1268I, 및 MET V1312I를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 단락 및 본원의 임의의 부분에 열거된 돌연변이된 형태 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다. 예시적인 억제제는 비제한적으로 크리조티닙, 카프마티닙(capmatinib), 테포티닙, 사보리티닙, 티반티닙, 카보잔티닙, 포레티닙(foretinib), 아미반타맙, 오나르투주맙(onartuzumab), 에미베투주맙(emibetuzumab), 및 피클라투주맙(ficlatuzumab)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 단락 및 본원의 임의의 부분에 열거된 억제제 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다.
"대상체"는 본원에 제공된 바와 같은 약학 조성물의 투여에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 병태를 앓거나 이에 취약한 살아 있는 유기체를 지칭한다. 비제한적인 예는 인간, 다른 포유동물, 소, 래트, 마우스, 개, 원숭이, 염소, 양, 암소, 사슴, 말 및 기타 비포유동물인 동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
III. 투여 방법
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물로서 제제화된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 경구용 조성물로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 연속 28일 주기에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약 10 mg 내지 약 140 mg의 양으로 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 6주의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 3회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 주 중 1일차, 3일차 및 5일차에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 4회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 2회, 주당 2일 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매주 1일차 및 2일차에 투여된다.
일부 실시양태에서, 암은 폐암, 위암, 간암, 결장암, 신장암, 유방암, 췌장암, 소아 골수단구성 백혈병, 신경세포종, 흑색종 및 급성 골수성 백혈병으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 췌관 선암(PDAC)이다.
IV. 병용 방법
일부 실시양태에서, 상기 방법은 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 이론에 구속되지 않고, 암세포에서의 MAPK 신호전달의 억제는 PD-L1 발현의 하향조절을 야기할 수 있고, 암세포가 면역계에 의해 검출될 가능성을 증가시킬 수 있다. 이러한 제3 MAPK 경로 억제제는 MAPK 경로에서의 단백질의 다른 돌연변이에 기초할 수 있다. 일부 실시양태에서, K-Ras, N-Ras, H-Ras, PDGFRA, PDGFRB, MET, FGFR, ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, EGFR, IGF1R, GRB2, SOS, ARAF, BRAF, RAF1, MEK1, MEK2, c-Myc, CDK4, CDK6, CDK2, ERK1, 및 ERK2를 표적화하는 것을 포함하는 임의의 MAPK 경로 억제제가 이용될 수 있다. MEK 억제제의 비제한적인 예는 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, PD-0325901, 셀루메티닙 및 CI-1040을 포함한다. 예시적인 MAPK 경로 억제제는 비제한적으로 아파티닙, 오시머티닙, 에를로티닙, 제피티닙, 라파티닙, 네라티닙, 다코미티닙, 반데타닙, 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 네시투무맙, 트라메티닙, 비니메티닙, 코비메티닙, 셀루메티닙, 울리제르티닙(ulixertinib), LTT462, 및 LY3214996을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 단락 및 본원의 임의의 부분에 열거된 억제제 중 하나 이상은 구체적으로 임의의 방법, 키트 및 물질의 조성물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원에 제시된 실시양태로부터 제외될 수 있다.
본원에 개시된 방법은 다른 화학요법제와 병용될 수 있다. 이러한 제제의 예는 문헌[Cancer Principles 및 Practice of Oncology by V.T. Devita and S. Hellman(편집자), 6차 편집(2001년 2월 15일), Lippincott Williams & Wilkins 출판사]에서 찾을 수 있고; 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다. 본 기술분야의 당업자는 어느 제제의 조합이 관련된 약물 및 질환의 특정 특성에 기초하여 유용할 것인지를 확인할 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 적어도 하나의 세포독성제의 공동투여를 포함할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제하거나 방지하고 및/또는 세포 사멸 또는 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 세포독성제는 비제한적으로 방사성 동위원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학요법제; 성장 억제제; 핵산 분해 효소(nucleolytic enzyme)와 같은 효소 및 이의 단편; 및 이들의 단편 및/또는 변이체를 포함하는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 유래의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소와 같은 독소를 포함한다.
세포독성제의 예는 항-미세소관제(anti-microtubule agent), 백금 배위 복합체, 알킬화제, 항생제, 토포이소머라제 II 억제제, 항대사제, 토포이소머라제 I 억제제, 호르몬 및 호르몬 유사체, 신호 전달 경로 억제제, 비수용체 티로신 키나아제 혈관신생 억제제, 면역치료제, 세포사멸 촉진제(proapoptotic agent), LDH-A의 억제제; 지방산 생합성 억제제; 세포 주기 신호전달 억제제; HDAC 억제제, 프로테아좀 억제제; 및 암 대사 억제제로부터 선택될 수 있다.
화학요법제는 암 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 에를로티닙(TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), 보르테조밉(VELCADE®, Millennium Pharm.), 디설피람, 에피갈로카테킨 갈레이트, 살리노스포라미드 A, 카르필조밉, 17-AAG(겔다나마이신), 라디시콜, 젖산 탈수소효소 A(LDH-A), 풀베스트란트(FASLODEX®, AstraZeneca), 수니티닙(SUTENT®, Pfizer/Sugen), 레트로졸(FEMARA®, Novartis), 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®., Novartis), 피나수네이트(바탈라닙®, Novartis), 옥살리플라틴(ELOXATIN®, Sanofi), 5-FU(5-플루오로우라실), 류코보린, 라파마이신(Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth) , 라파티닙(TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파르닙(SCH 66336), 소라페닙(NEXAVAR®, Bayer Labs), 제피티닙(IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, 알킬화제 예컨대 티오테파 및 CYTOXAN® 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토제닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(토포테칸 및 이리노테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC 1065(그의 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 부신피질호르몬(프레드니손 및 프레드니솔론 포함); 사이프로테론 아세테이트; 피나스테리드 및 두타스테리드를 포함하는 5-알파-리덕타제); 보리노스타트, 로미뎁신, 파노비노스타트, 발프로산, 모세티노스타트 돌라스타틴; 알데스류킨, 탈크 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰기스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로마파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제 예컨대 에네다인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 γ1I 및 칼리케아미신 ω1I(Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 1994 33:183-186); 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 비스포스포네이트 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신;뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생 발색단(chromoprotein enediyne antibiotic chromophore)), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN®(독소루비신), 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신(quelamycin), 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사제(anti-metabolite) 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체 예컨대 데노프테린(denopterin), 메토트렉세이트, 프테로프테린(pteropterin), 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6 아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항아드레날(anti-adrenal) 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피담놀; 니트라에린(nitraerine); 펜토스타틴; 페나메트(phenamet); 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); 라족산(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조푸란(sizofuran); 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, TAXOL(파클리탁셀; Bristol-Myers Squibb Oncology, 뉴저지 프린스턴 소재), ABRAXANE®(크레모퍼(Cremophor)-무함유), 파클리탁셀의 알부민 조작된 나노입자 제제(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.) 및 TAXOTERE®(도세탁셀(docetaxel), 독세탁셀(doxetaxel); Sanofi-Aventis); 클로람부실(chloranmbucil); GEMZAR®(젬시타빈); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 에토포사이드(VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴; NAVELBINE®(비노렐빈); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(XELODA®); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산(retinoic acid); 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체를 포함한다.
화학요법제는 또한 (i) 종양에 대해 호르몬 작용을 제어하거나 억제하도록 장용하는 항호르몬제 예컨대, 예를 들어 타목시펜(NOLVADEX®; 타목시펜 시트레이트 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 요오독시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FARESTON®(토레미핀 시트레이트)를 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM); (ii) 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제 예컨대, 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE®(메게스트롤 아세테이트), AROMASIN®(엑세메스탄; Pfizer), 포르메스타니(formestanie), 파드로졸, RIVISOR®(보로졸), FEMARA®(레트로졸; Novartis) 및 ARIMIDEX®(아나스트로졸; AstraZeneca); (iii) 항안드로겐제 에컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프로라이드 및 고세렐린; 부세렐린, 트리프테렐린, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 디에틸스틸베스트롤, 프레마린, 플루옥시메스테론, 모든 트랜스레티온산, 펜레티니드뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); (iv) 단백질 키나아제 억제제; (v) 지질 키나아제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상 세포 증식과 관련된 신호전달 경로에서 유전자 발현을 억제하는 것, 예컨대, 예를 들어 PKC-알파, Ralf 및 H-Ras; (vii) 리보자임 예컨대 VEGF 발현 억제제(예를 들어, ANGIOZYME®) 및 HER2 발현 억제제; (viii) 백신 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어 ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® 및 VAXID®; PROLEUKIN®, rIL-2; 토포이소머라제 1 억제제 예컨대 LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; 및 (ix) 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체를 포함한다.
화학요법제는 또한 항체 예컨대 알렘투주맙(Campath), 베바시주맙(AVASTIN®, Genentech); 세툭시맙(ERBITUX®, Imclone); 파니투무맙(VECTIBIX®, Amgen), 리툭시맙(RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), 페르투주맙(OMNITARG®, 2C4, Genentech), 트라스투주맙(HERCEPTIN®, Genentech), 토시투모맙(Bexxar, Corixia) 및 항체 약물 접합체, 젬투주맙 오조가미신(MYLOTARG®, Wyeth)을 포함한다. 본 발명의 화합물과 조합되는 제제로서 치료 가능성을 가진 추가적인 인간화 단클론 항체는 다음을 포함한다: 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피네우주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트라세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 투코투주맙 셀몰류킨, 투쿠시투주맙(tucusituzumab), 우마비주맙(umavizumab), 우르톡사주맙(urtoxazumab), 우스테키누맙, 비실리주맙 및 인터류킨-12 p40 단백질을 인식하도록 유전자 변형된 재조합 유일 인간 서열, 전장 IgG1 λ 항체인 항-인터류킨-12(ABT-874/J695, Wyeth Research and Abbott Laboratories).
화학요법제는 또한, EGFR 또는 이의 돌연변이체 형태에 직접적으로 결합하거나 그렇지 않으면 이와 상호작용하여 이의 신호전달 활성을 방지하거나 감소시키는 화합물을 지칭하며, 대안적으로 "EGFR 길항제"로도 지칭되는 "EGFR 억제제"를 포함한다. 이러한 제제의 예는 EGFR에 결합되는 항체 및 소분자를 포함한다. EGFR에 결합되는 항체의 예는 MAb 579(ATCC CRL HB 8506), MAb 455(ATCC CRL HB8507), MAb 225(ATCC CRL 8508), MAb 528(ATCC CRL 8509)(Mendelsohn 등의 미국특허 제4,943,533호 참조) 및 이의 변이체, 예컨대 키메라화 225(C225 또는 세툭시맙; ERBUTIX®) 및 재구성된 인간 225(reshaped human 225)(H225)(WO 96/40210 참조, Imclone Systems Inc.); 완전 인간 EGFR 표적 항체인 IMC-11F8(Imclone); 유형 II 돌연변이체 EGFR에 결합하는 항체(미국 특허 제5,212,290호); 미국 특허 제5,891,996호에 기재된 바와 같이 EGFR에 결합하는 인간화 및 키메라 항체; 및 EGFR에 결합하는 인간 항체 예컨대 ABX-EGF 또는 파니투무맙(Abgenix/Amgen의 WO98/50433 참조); EMD 55900(Stragliotto 등의 문헌[Eur. J. Cancer 32A:636-640(1996)]); EGFR 결합을 위해 EGF 및 TGF-알파 둘 모두와 경쟁하는 EGFR에 대한 인간화 EGFR 항체인 EMD7200(마투주맙)(EMD/Merck); 인간 EGFR 항체, HuMax-EGFR(GenMab); E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 및 E7.6.3으로 알려지고, US 6,235,883에 기재된 완전 인간 항체; MDX-447(Medarex Inc); 및 mAb 806 또는 인간화 mAb 806(Johns 등의 문헌[J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)])을 포함한다. 항-EGFR 항체는 세포독성제와 접합될 수 있고, 이에 따라 면역접합체를 생성한다(예를 들어 Merck Patent GmbH의 EP659,439A2 참조). EGFR 길항제는 소분자 예컨대 미국특허 번호: 5,616,582, 5,457,105, 5,475,001, 5,654,307, 5,679,683, 6,084,095, 6,265,410, 6,455,534, 6,521,620, 6,596,726, 6,713,484, 5,770,599, 6,140,332, 5,866,572, 6,399,602, 6,344,459, 6,602,863, 6,391,874, 6,344,455, 5,760,041, 6,002,008, 및 5,747,498뿐만 아니라 하기 PCT 공보: WO98/14451, WO98/50038, WO99/09016, 및 WO99/24037에 기재된 화합물을 포함한다. 특정 소분자 EGFR 길항제는 OSI-774(CP-358774, 에를로티닙, TARCEVA® Genentech/OSI Pharmaceuticals); PD 183805(CI 1033, 2-프로펜아미드, N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[3-(4-모르폴리닐)프로폭시]-6-퀴나졸리닐]-, 디하이드로클로라이드, Pfizer Inc.); ZD1839, 제피티닙(IRESSA®) 4-(3'-클로로-4'-플루오로아닐리노)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린, AstraZeneca); ZM 105180((6-아미노-4-(3-메틸페닐-아미노)-퀴나졸린, Zeneca); BIBX-1382(N8-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-N2-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피리미도[5,4-d]피리미딘-2,8-디아민, Boehringer Ingelheim); PKI-166 ((R)-4-[4-[(1-페닐에틸)아미노]-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀); (R)-6-(4-하이드록시페닐)-4-[(1-페닐에틸)아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘); CL-387785(N-[4-[(3-브로모페닐)아미노]-6-퀴나졸리닐]-2-부틴아미드); EKB-569(N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-3-시아노-7-에톡시-6-퀴놀리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드)(Wyeth); AG1478(Pfizer); AG1571(SU 5271; Pfizer); 이중 EGFR/HER2 티로신 키나아제 억제제 예컨대 라파티닙(TYKERB®, GSK572016 또는 N-[3-클로로-4-[(3 플루오로페닐)메톡시]페닐]-6[5[[[2메틸설포닐)에틸]아미노]메틸]]-2-푸라닐]-4-퀴나졸린아민)을 포함한다. 상기 기재된 참조문헌 각각은 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
화학요법제는 또한 선행 단락에 언급된 EGFR-표적화 약물; 소분자 HER2 티로신 키나아제 억제제 예컨대 Takeda로부터 이용 가능한 TAK165; ErbB2 수용체 티로신 키나아제의 경구 선택적 억제제인 CP-724,714(Pfizer 및 OSI); EGFR에 우선적으로 결합하지만 HER2 및 EGFR-과발현 세포 둘 모두를 억제하는 이중-HER 억제제 예컨대 EKB-569(Wyeth로부터 이용 가능함); 경구 HER2 및 EGFR 티로신 키나아제 억제제인 라파티닙(GSK572016; Glaxo-SmithKline으로부터 이용 가능함); PKI-166 (Novartis로부터 이용 가능함); pan-HER 억제제 예컨대 카너티닙(CI-1033; Pharmacia); Raf-1 억제제 예컨대 Raf-1 신호전달을 억제하는 ISIS Pharmaceuticals로부터 이용 가능한 안티센스제 ISIS-5132; 비-HER 표적화 TK 억제제 예컨대 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®, Glaxo SmithKline으로부터 이용 가능함); 다중-표적화 티로신 키나아제 억제제 예컨대 수니티닙(SUTENT®, Pfizer로부터 이용 가능함); VEGF 수용체 티로신 키나아제 억제제 예컨대 바탈라닙(PTK787/ZK222584, Novartis/Schering AG로부터 이용 가능함); MAPK 세포외 조절 키나아제 I 억제제 CI-1040(Pharmacia로부터 이용 가능함); 퀴나졸린, 예컨대 PD 153035,4-(3-클로로아닐리노) 퀴나졸린; 피리도피리미딘; 피리미도피리미딘; 피롤로피리미딘, 예컨대 CGP 59326, CGP 60261 및 CGP 62706; 피라졸로피리미딘, 4-(페닐아미노)-7H-피롤로[2,3-d] 피리미딘; 커큐민(디페룰로일 메탄, 4,5-비스(4-플루오로아닐리노)프탈이미드); 티르포스틴 함유 니트로티오펜 모이어티; PD-0183805(Warner-Lamber); 안티센스 분자(예를 들어 HER-인코딩 핵산에 결합되는 것); 퀴녹살린(미국 특허 제5,804,396호); 트리포스틴(미국 특허 제5,804,396호); ZD6474(Astra Zeneca); PTK-787(Novartis/Schering AG); pan-HER 억제제 예컨대 CI-1033(Pfizer); 아피니탁(Affinitac)(ISIS 3521; Isis/Lilly); 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®); PKI 166(Novartis); GW2016(Glaxo SmithKline); CI-1033(Pfizer); EKB-569(Wyeth); 세막시닙(Semaxinib)(Pfizer); ZD6474(AstraZeneca); PTK-787(Novartis/Schering AG); INC-1C11(Imclone), 라파마이신(sirolimus, RAPAMUNE®); 또는 하기 특허 공보: 미국 특허 제5,804,396호; WO 1999/09016(American Cyanamid); WO 1998/43960(American Cyanamid); WO 1997/38983(Warner Lambert); WO 1999/06378(Warner Lambert); WO 1999/06396(Warner Lambert); WO 1996/30347(Pfizer, Inc); WO 1996/33978(Zeneca); WO 1996/3397(Zeneca) 및 WO 1996/33980(Zeneca) 중 어느 하나에 기재된 것을 포함하는 "티로신 키나아제 억제제"를 포함한다. 상기 기재된 참조문헌 각각은 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
화학요법제는 또한 덱사메타손, 인터페론, 콜히친, 메토프린, 사이클로스포린, 암포테리신, 메트로니다졸, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 아미포스틴, 삼산화비소, 아스파라기나제, BCG 라이브(BCG live), 베바쿠지맙, 벡사로텐, 클라드리빈, 클로파라빈, 다베포에틴 알파, 데닐류킨, 덱스라족산, 에포에틴 알파, 엘로티닙, 필그라스팀, 히스트렐린 아세테이트, 이브리투모맙, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 레날리도마이드, 레바미솔, 메스나, 메톡살렌, 난드롤론, 넬라라빈, 노페투모맙, 오프렐베킨, 팔리페르민, 파미드로네이트, 페가데마제, 페가스파가제, 페그필그라스팀, 페메트렉세드 이나트륨, 플리카마이신, 포르피머 나트륨, 퀴나크린, 라스부리카제, 사르그라모스팀, 테모졸로마이드, VM-26, 6-TG, 토레미펜, 트레티노인, ATRA, 발루비신, 졸레드로네이트 및 졸레드론산 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.
화학요법제는 또한 히드로코르티손, 히드로코르티손 아세테이트, 코르티손 아세테이트, 틱소코르톨 피발레이트, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 알코올, 모메타손, 암시노니드, 부데소니드, 데소니드, 플루오시노니드, 플루오시놀론 아세토니드, 베타메타손, 베타메타손 나트륨 포스페이트, 덱사메타손, 덱사메타손 나트륨 포스페이트, 플루오코르톨론, 히드로코르티손-17-부티레이트, 히드로코르티손-17-발레레이트, 아클로메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발레레이트, 베타메타손 디프로피오네이트, 프레드니카베이트, 클로베타손-17-부티레이트, 클로베타솔-17-프로피오네이트, 플루오코르톨론 카프로에이트, 플루오코르톨론 피발레이트 및 플루프레드니덴 아세테이트; 면역 선택적 항염증 펩티드(ImSAID) 예컨대 페닐알라닌-글루타민-글리신(FEG) 및 이의 D-이성질체 형태(feG)(IMULAN BioTherapeutics, LLC); 항류마티스 약물 예컨대 아자티오프린, 사이클로스포린(사이클로스포린 A), D-페니실라민, 금염, 하이드록시클로로퀸, 레플루노미데미노사이클린, 설파살라진, 종양 괴사 인자 알파(TNFα) 차단제 예컨대 에타너셉트(Enbrel), 인플릭시맙(Remicade), 아달리무맙(Humira), 세르톨리주맙 페골(Cimzia), 골리무맙(Simponi), 인터류킨 1(IL-1) 차단제 예컨대 아나킨라(Kineret), T 세포 공동자극 차단제 예컨대 아바타셉트(Orencia), 인터루킨 6(IL-6) 차단제 예컨대 토실리주맙(ACTEMERA®); 인터류킨 13(IL-13) 차단제 예컨대 레브리키주맙; 인터페론 알파(IFN) 차단제 예컨대 론탈리주맙; 베타 7 인테그린 차단제 예컨대 rhuMAb 베타7; IgE 경로 차단제 예컨대 항-M1 프라임(Anti-M1 prime); 분비된 동종삼량체 LTa3 및 막 결합 이종삼량체 LTa1/β2 차단제 예컨대 항림포톡신 알파(LTa); 방사성 동위원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 기타 연구용 제제 예컨대 티오플라틴, PS-341, 페닐부티레이트, ET-18-OCH3 또는 파르네실 트랜스퍼라제 억제제(L-739749, L-744832); 폴리페놀 예컨대 케르세틴, 레스베라트롤, 피세아타놀(piceatannol), 에피갈로카테킨 갈레이트, 테아플라빈, 플라바놀, 프로시아니딘, 베툴린산 및 이의 유도체; 자가포식 억제제 예컨대 클로로퀸; 델타-9-테트라히드로칸나비놀(드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 아세틸캄토테신, 스코폴렉틴 및 9-아미노캄토테신); 포도필로톡신; 테가푸르(UFTORAL®); 벡사로텐(TARGRETIN®); 비스포스포네이트 예컨대 클로드로네이트(예를 들어 BONEFOS® 또는 OSTAC®), 에티드로네이트(DIDROCAL®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트(ZOMETA®), 알렌드로네이트(FOSAMAX®), 파미드로네이트(AREDIA®), 틸루드로네이트(SKELID®), 또는 리세드로네이트(ACTONEL®); 및 표피 성장 인자 수용체(EGF-R); 백신 예컨대 THERATOPE® 백신; 페리포신, COX-2 억제제(예를 들어, 셀레콕시브 또는 에토리콕시브), 프로테오좀 억제제(예를 들어, PS341); CCI-779; 티피파르닙(R11577); 오라페닙, ABT510; Bcl-2 억제제 예컨대 오블리메르센 나트륨(GENASENSE®); 픽산트론; 파르네실트랜스퍼라제 억제제 예컨대 로나파르닙(SCH 6636, SARASARTM); 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체뿐만 아니라 상기 중 둘 이상의 조합 예컨대 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어인 CHOP; 및 5-FU 및 류코보린과 조합된 옥살리플라틴(ELOXATINTM) 치료 요법에 대한 약어인 FOLFOX를 포함한다.
화학요법제는 또한 진통, 해열 및 소염 효과가 있는 비스테로이드성 항염증 약물을 포함한다. NSAID는 사이클로옥시게나아제 효소의 비선택적 억제제를 포함한다. NSAID의 특정 예는 아스피린, 프로피온산 유도체 예컨대 이부프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜, 플루르비프로펜, 옥사프로진 및 나프록센, 아세트산 유도체 예컨대 인도메타신, 술린닥, 에토돌락, 디클로페낙, 에놀산 유도체 예컨대 피록시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 드록시캄, 로녹시캄 및 이속시캄, 페남산 유도체 예컨대 메페남산, 메클로페남산, 플루페남산, 톨페남산 및 COX-2 억제제 예컨대 셀레콕십, 에토리콕십, 루미라콕십, 파레콕십, 로페콕십 및 발데콕십을 포함한다. NSAID는 병태 예컨대 류마티스성 관절염, 골관절염, 염증성 관절병증, 강직성 척추염, 건선성 관절염, 라이터 증후군, 급성 통풍, 생리통, 전이성 뼈 통증, 두통 및 편두통, 수술 후 통증, 염증 및 조직 손상으로 인한 경증 내지 중등도의 통증, 발열, 장폐색, 및 신산통(renal colic)의 증상 완화를 나타낼 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학요법제는 비제한적으로 그 중에서도 독소루비신, 덱사메타손, 빈크리스틴, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 토포테칸, 인터페론, 백금 유도체, 탁산(예를 들어 파클리탁셀, 도세탁셀), 빈카 알칼로이드(예를 들어 빈블라스틴), 안트라사이클린(예를 들어 독소루비신), 에피포도필로톡신(예를 들어 에토포사이드), 시스플라틴, mTOR 억제제(예를 들어 라파마이신), 메토트렉세이트, 악티노마이신 D, 돌라스타틴 10, 콜히친, 트리메트렉세이트, 메토프린, 사이클로스포린, 다우노루비신, 테니포사이드, 암포테리신, 알킬화제(예를 들어 클로람부실), 5-플루오로우라실, 캄프토테신, 시스플라틴, 메트로니다졸, 및 이마티닙 메실레이트를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 화합물은 생물학적 제제 예컨대 베바시주맙 또는 파니투무맙과 조합하여 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 조성물은 아바렐릭스, 알데스류킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 삼산화비소, 아스파라기나제, 아자시티딘, BCG 라이브, 베바쿠지맙, 플루오로우라실, 벡사로텐, 블레오마이신, 보르테조밉, 부설판, 칼루스테론, 카페시타빈, 캄프토테신, 카보플라틴, 카무스틴(carmustine), 세툭시맙, 클로람부실, 클라드리빈, 클로파라빈, 시클로포스파미드, 시타라빈, 닥티노마이신, 다베포에틴 알파, 다우노루비신, 데닐류킨, 덱스라족산, 도세탁셀, 독소루비신(중성), 독소루비신 하이드로클로라이드, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피루비신, 에포에틴 알파, 엘로티닙, 에스트라무스틴, 에토포사이드 포스페이트, 에토포사이드, 엑세메스탄, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루다라빈, 풀베스트란트, 제피티닙, 젬시타빈, 젬투주맙, 고세렐린 아세테이트, 히스트렐린 아세테이트, 하이드록시우레아, 이브리투모맙, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙 메실레이트, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 이리노테칸, 레날리도마이드, 레트로졸, 류코보린, 류프로라이드 아세테이트(leuprolide acetate), 레바미솔, 로무스틴, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 머캅토퓨린, 6-MP, 메스나, 메토트렉세이트, 메톡살렌, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 난드롤론, 넬라라빈, 노페투모맙, 오펠베킨, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 팔리페민, 파미드로네이트, 페가데마제, 페가스파가제, 페그필그라스팀, 페메트렉세드 이나소듐, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 포르피머 나트륨, 프로카르바진, 퀴나크린, 라스부리카제, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 소라페닙, 스트렙토조신, 수니티닙 말레이트, 탈크, 타목시펜, 테모졸로마이드, 테니포사이드, VM-26, 테스토락톤, 티오구아닌, 6-TG, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레티노인, ATRA, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 졸레드로네이트 또는 졸레드론산 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 항증식제 또는 화학요법제와 조합하여 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 암을 치료하는 데 적합한 임의의 양일 수 있다. 예를 들어, 투여량은 1 mg 중량 내지 최대 500 mg의 1일 투여량일 수 있다. 추가의 예로서, 1일 용량은 약 20 mg 내지 400 mg의 범위(또는 종점을 포함하는 이들 사이의 임의의 하위 범위 또는 하위 값)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량 범위는 10 mg 내지 300 mg일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량 범위는 10 mg 내지 100 mg일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 투여량 범위는 5 mg 내지 50 mg일 수 있다. 1일 투여량은 단일 투여되는 투여량(예를 들어, QD)으로 또는 총 1일 투여량을 제공하도록 하루 동안 복수회 투여(예를 들어, BID, TID, QID 등)로 투여하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제의 투여량은 임의의 적합한 양이다. 예를 들어, 이는 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위(또는 종점을 포함하는 이들 사이의 임의의 하위 범위 또는 하위 값)의 양일 수 있다. MEK 억제제의 투여량은 임의의 소정의 MEK 억제제에 대해 승인된 투여량과 동일하거나 더 낮을 수 있고, 이는 소정의 적응증에 좌우될 수 있다. 일부 실시양태에서, 트라메티닙은 1일 1회 약 1 mg 내지 약 10 mg의 범위의 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 트라메티닙은 1일 1회 2 mg에 대해 승인된다. 이는 또한 용량 감소 예컨대 1.5 mg QD 및 1mg QD에서 승인된다. 일부 실시양태에서, 비니메티닙은 약 30 mg 내지 약 100 mg의 범위의 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 비니메티닙은 1일 2회 45 mg 용량에 대해 승인된다. 비니메티닙은 또한 용량 감소, 예컨대 약 30 mg BID에서 승인된다. 상기 언급된 범위 각각은 종점을 포함하는 이들 내의 임의의 하위 범위 또는 하위 값을 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 상기 언급된 범위 각각은 종점을 포함하는 이들 내의 임의의 하위 범위 또는 하위 값을 포함할 수 있는 것으로 이해될 것이다. 성인 인간에 대한 일반 용량 범위는 일반적으로 5 mg 내지 2 g/일이다. 별개의 단위로 제공되는 표시의 정제 또는 다른 형태는 편의상 예로서 5 mg 내지 500 mg, 일반적으로 대략 10 mg 내지 200 mg을 포함하는 단위와 같은 이러한 투여량에서 또는 이의 배수로서 효과적인 하나 이상의 화합물의 양을 포함할 수 있다. 단일 제형을 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주 및 특히 투여 방식에 따라 변화될 것이다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구식이다.
일부 실시양태에서, 트라메티닙 또는 비니메티닙과 조합하여 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 결장직장암 및 NSCLC 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 일부 실시양태에서, 트라메티닙 또는 비니메티닙은 1일 1회 또는 2회 투여될 수 있다. 약물은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 공동 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간 이외의 포유동물, 예컨대 영장류, 설치류, 개, 고양이, 또는 다른 소형 동물이다.
일부 실시양태에서, 트라메티닙 또는 비니메티닙과 조합한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 1 마이크로몰, 또는 1nm 내지 500 nM, 또는 1 nM 내지 20 nM의 범위이다. 일부 실시양태에서, 트라메티닙 또는 비니메티닙의 농도는 10 nM 내지 1 마이크로몰, 또는 10 nM 내지 500 nM의 범위이다.
조성물
본원에 개시된 화학식 I의 화합물은 염으로 존재할 수 있다. 본 실시양태는 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있는 이러한 염을 포함한다. 적용 가능한 염 형태의 예는 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트, 메탄설포네이트, 니트레이트, 말리에이트, 아세테이트, 시트레이트, 푸마레이트, 타르트레이트(예를 들어, (+)-타르트레이트, (-)-타르트레이트 또는 라세미 혼합물을 포함하는 이들의 혼합물, 석시네이트, 벤조에이트 및 아미노산 예컨대 글루탐산을 갖는 염을 포함한다. 이들 염은 본 기술분야의 당업자에게 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 염기 부가염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노 또는 마그네슘 염 또는 이와 유사한 염을 포함한다. 본 실시양태의 화합물이 상대적으로 염기성인 작용기를 포함하는 경우, 산 부가염은 순수한 또는 적절한 비활성 용매 중의 충분한 양의 요망되는 산과 중성 형태의 이러한 화합물을 접촉시킴으로써 얻을 수 있다. 허용 가능한 산 부가염의 예는 무기산 예컨대 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 일수소탄산, 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소 또는 아인산 등으로부터 유도된 것뿐만 아니라 유기산 예컨대 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 석신산, 수베산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄설폰산 등으로부터 유도된 것을 포함한다. 또한, 아르기네이트 등과 같은 아미노산의 염 및 글루쿠론산 또는 갈락투노르산 등과 같은 유기산의 염을 포함한다. 본 실시양태의 임의의 특정 화합물은, 화합물이 염기 또는 산 부가염으로 전환되는 것을 가능하게 하는 염기성 또는 산성 작용기 둘 모두를 포함한다.
기타 염으로 본 실시양태의 방법에서 사용되는 화합물의 산 또는 염기 염을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 염의 예시적인 예는 무기산(염산, 브롬화수소산, 인산 등) 염, 유기산(아세트산, 프로피온산, 글루탐산, 시트르산 등) 염, 4차 암모늄(요오드화메틸, 요오드화에틸 등) 염이다. 약학적으로 허용 가능한 염은 비독성인 것으로 이해된다. 적합한 약학적으로 허용 가능한 염에 대한 추가 정보는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985]에서 찾을 수 있고, 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
약학적으로 허용 가능한 염은 본원에 기재된 화합물에서 발견되는 특정 치환기에 따라, 상대적으로 비독성인 산 또는 염기와 함께 제조되는 활성 화합물의 염을 포함한다. 본 실시양태의 화합물이 상대적으로 산성인 작용기를 포함하는 경우, 염기 부가염은 순수한 또는 적절한 비활성 용매 중의 충분한 양의 요망되는 염기와 중성 형태의 이러한 화합물을 접촉시킴으로써 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가염의 예는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아미노 또는 마그네슘 염, 또는 이와 유사한 염을 포함한다. 본 실시양태의 화합물이 상대적으로 염기성인 작용기를 포함하는 경우, 산 부가염은 순수한 또는 적절한 비활성 용매 중의 충분한 양의 요망되는 산과 중성 형태의 이러한 화합물을 접촉시킴으로써 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염의 예는 무기산 예컨대 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 일수소탄산, 인산, 일수소인산, 이수소인산, 황산, 일수소황산, 요오드화수소산 또는 아인산 등으로부터 유도된 것뿐만 아니라 상대적으로 비독성인 유기산 예컨대 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 석신산, 수베산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄설폰산 등으로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 아르기네이트 등과 같은 아미노산의 염 및 글루쿠론산 또는 갈락투노르산 등과 같은 유기산의 염을 포함하며(예를 들어 문헌[Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19] 참조), 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다. 본 실시양태의 임의의 특정 화합물은, 화합물이 염기 또는 산 부가염으로 전환되는 것을 가능하게 하는 염기성 또는 산성 작용기 둘 모두를 포함한다.
중성 형태의 화합물은 바람직하게는 염을 염기 또는 산과 접촉시키고 종래의 방식으로 모 화합물(parent compound)을 단리함으로써 재생된다. 모 형태의 화합물은 특정 물리적 특성, 예컨대 극성 용매에서의 용해도에 있어서 다양한 염 형태와 상이하다.
본 실시양태의 특정 화합물은 용매화되지 않은 형태뿐만 아니라 수화된 형태를 포함하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 용매화되지 않은 형태와 동등하며 본 실시양태의 범위 내에 포괄된다. 본 실시양태의 특정 화합물은 다중 결정질 또는 비정질 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 실시양태에 의해 고려되는 용도를 위해 동등하며, 본 실시양태의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
본 실시양태의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합; 절대 입체화학과 관련하여 아미노산에 대해 (R)- 또는 (S)-로서 또는 (D)- 또는 (L)-로서 정의될 수 있는 거울상 이성질체, 라세메이트, 부분입체 이성질체, 호변 이성질체, 기하 이성질체, 입체 이성질체를 가지며, 개개의 이성질체는 본 실시양태의 범위 내에 포괄된다. 본 실시양태의 화합물은 합성 및/또는 단리하기에 매우 불안정한 본 기술분야에 알려진 것은 포함하지 않는다. 본 실시양태는 라세미 및 광학적으로 순수한 형태의 화합물을 포함하는 것을 의미한다. 광학 활성 (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L)-이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나 종래의 기술을 사용하여 분해될 수 있다.
달리 언급하지 않는 한, 본 실시양태의 화합물은 또한 이러한 화합물을 구성하는 원자 중 하나 이상에서 비자연적 비율의 원자 동위원소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 실시양태의 화합물은 예를 들어 중수소(2H), 삼중수소(3H), 요오드-125(125I), 불소-18(18F), 질소-15(15N), 산소-17(17O), 산소-18(18O), 탄소-13(13C), 또는 탄소-14(14C)와 같은 방사성 또는 안정한 동위원소로 표지될 수 있다. 본 실시양태의 화합물의 모든 동위원소 변이체는 방사성이든 아니든 간에 본 실시양태 내에 포괄된다.
염 형태 이외에, 본 실시양태는 프로드러그 형태인 화합물을 제공한다. 본원에 기재된 화합물의 프로드러그는 본 실시양태의 화합물을 제공하기 위해 생리학적 조건하에 화학적 변화가 용이하게 진행되는 화합물의 것이다. 추가적으로, 프로드러그는 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 실시양태의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 프로드러그는 적합한 효소 또는 화학 시약을 가진 경피 패치 저장소에 배치될 때 본 실시양태의 화합물로 서서히 전환될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 경구 정제 제제로서 구성된다.
본 실시양태의 화합물은 매우 다양한 경구, 비경구 및 국소 제형으로 제조되어 투여될 수 있다. 경구 제제는 환자가 섭취하기에 적합한 정제, 알약, 분말, 당의정, 캡슐, 액체, 로젠지, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등을 포함한다. 본 실시양태의 화합물은 또한 주사에 의해, 즉, 정맥내, 근육내, 피내, 피하, 십이지장내, 또는 복강내로 투여될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 화합물은 흡입에 의해 예를 들어 비강내로 투여될 수 있다. 추가적으로, 본 실시양태의 화합물은 경피로 투여될 수 있다. 본원에 개시된 화학식 I의 화합물은 또한 좌약, 흡입제, 분말 및 에어로졸 제제(예를 들어, 스테로이드 흡입제의 것, 문헌[Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 35:1187-1193, 1995; Tjwa, Ann. Allergy Asthma Immunol. 75:107-111, 1995] 참조)를 포함하는 안구내, 질내 및 직장내 경로에 의해 투여될 수 있고, 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다. 따라서, 본 실시양태는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제 및 화학식 I의 화합물, 또는 화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 실시양태의 화합물로부터 약학 조성물을 제조하기 위해, 약학적으로 허용 가능한 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 고체 형태 제제는 분말, 정제, 알약, 캡슐, 카쉐(cachet), 좌약 및 분산 가능한 과립을 포함한다. 고체 담체는 희석제, 향미제, 계면활성제, 결합제, 보존제, 정제 붕해제 또는 캡슐화 물질로도 작용할 수 있는 하나 이상의 물질일 수 있다. 제제화 및 투여를 위한 기술에 대한 상세설명은 과학 및 특허 문헌에 잘 기재되어 있으며, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA ("Remington's")] 최신판을 참조하며, 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
분말에서, 담체는 미분화된 고체이고, 이는 미분화된 활성 성분과의 혼합물로 존재한다. 정제에서, 활성 성분은 필요한 결합 특성을 갖는 담체 및 적합한 비율로 요구되는 추가의 부형제와 혼합되고, 요망되는 형상 및 크기로 압축된다.
분말, 캡슐 및 정제는 바람직하게는 5% 또는 10% 내지 70%의 활성 성분을 포함한다. 적합한 담체는 탄산마그네슘, 스테아르산마그네슘, 탈크, 당, 락토오스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 저융점 왁스, 코코아 버터 등이다. 용어 "제제"는 다른 부형제와 같이 또는 다른 부형제 없이 활성 성분이 담체에 의해 둘러싸이고, 이에 따라 이것과 회합하는 캡슐을 제공하는 담체로서의 캡슐화 물질과 활성 성분의 배합물을 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게는, 카쉐 및 로젠지가 포함된다. 정제, 분말, 캡슐, 알약, 카쉐, 및 로젠지는 경구 투여에 적합한 고체 제형으로서 사용될 수 있다.
적합한 고체 부형제는 비제한적으로 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 옥수수, 밀, 쌀, 감자 또는 기타 식물의 전분; 셀룰로오스 예컨대 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오스, 또는 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스; 및 아라비아 및 트래거캔스를 포함하는 검을 포함하는 탄수화물 또는 단백질 충전제; 뿐만 아니라 단백질 예컨대 젤라틴 및 콜라겐이다. 요망되는 경우, 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 이의 염, 예컨대 알긴산나트륨과 같은 붕해제 또는 가용화제가 첨가될 수 있다.
당의정 코어에는 적합한 코팅 예컨대 농축된 당 용액이 제공되며, 이는 또한 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 이산화티탄, 래커 용액 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함할 수 있다. 제품 식별을 위해 또는 활성 화합물의 양(즉, 투여량)을 특성화하기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 염료 또는 안료가 첨가될 수 있다. 본원에 개시된 약학 제제는 또한 예를 들어, 젤라틴으로 만든 푸쉬-핏 캡슐(push-fit capsule)뿐만 아니라 젤라틴으로 만든 연질 밀봉 캡슐 및 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 코팅을 사용하여 경구로 사용될 수 있다. 푸쉬-핏 캡슐은 충전제 또는 결합제 예컨대 락토오스 또는 전분, 윤활제 예컨대 탈크 또는 스테아르산마그네슘 및 선택적으로 안정화제와 혼합되는 화학식 I의 화합물을 포함할 수 있다. 연질 캡슐에서, 화학식 I의 화합물은 안정화제를 사용하거나 사용하지 않고 적합한 액체, 예컨대 지방 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해되거나 현탁될 수 있다.
액체 형태 제제는 용액, 현탁액, 및 에멀젼, 예를 들어, 물 또는 물/프로필렌 글리콜 용액을 포함한다. 비경구 주사의 경우, 액체 제제는 수성 폴리에틸렌 글리콜 용액 중의 용액으로 제제화될 수 있다.
경구 사용을 위해 적합한 수용액은 수중에 활성 성분을 용해시키고, 요망되는 바에 따라 적합한 착색제, 향미제, 안정화제 및 증점제를 첨가함으로써 제조될 수 있다. 경구 사용을 위해 적합한 수성 현탁액은 점성 물질 예컨대 천연 또는 합성 검, 수지, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트래거캔스 검 및 아카시아 검, 및 분산제 또는 습윤제 예컨대 자연 발생 포스파티드(예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물(예를 들어, 헵타데카에틸렌 옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노-올리에이트), 또는 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올리에이트)을 사용하여 수중에서 미분화된 활성 성분을 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제 예컨대 에틸 또는 n-프프로필 n-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로오스, 아스파탐 또는 사카린을 포함할 수 있다. 제제는 삼투압에 대해 조정될 수 있다.
또한, 고체 형태 제제가 포함되며, 이는 사용 직전에 경구 투여를 위한 액체 형태 제제로 전환되는 것으로 의도된다. 이러한 액체 형태는 용액, 현탁액, 및 에멀젼을 포함한다. 이러한 제제는 활성 성분 이외에 착색제, 향미제, 안정화제, 버퍼, 인공 및 천연 감미제, 분산제, 증점제, 가용화제 등을 포함할 수 있다.
오일 현탁액은 식물성 오일 예컨대 아라키스 오일, 올리브 오일, 참기름 또는 코코넛 오일 중에, 또는 액체 파라핀과 같은 광유; 또는 이들의 혼합물 중에 화학식 I의 화합물을 현탁시킴으로써 제조된다. 오일 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 포함할 수 있다. 글리세롤, 소르비톨 또는 수크로오스와 같은 감미제는 맛이 좋은 경구 제제를 제공하기 위해 첨가될 수 있다. 이러한 제제는 항산화제 예컨대 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다. 주사 가능한 오일 비히클의 예는 문헌[Minto, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281:93-102, 1997]을 참조하며, 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다. 본원에 개시된 약학 제제는 또한 수중유(oil-in-water) 에멀젼의 형태일 수 있다. 유상은 상기 기재된 바와 같이 식물성 오일 또는 광유, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 에멀젼화제는 자연 발생 검, 예컨대 아카시아 검 및 트래거캔스 검, 자연 발생 포스파타이드, 예컨대 대두 레시틴, 에스테르 또는 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대 소르비탄 모노-올리에이트, 및 이러한 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드와의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올리에이트를 포함한다. 에멀젼은 또한 시럽 및 엘릭시르(elixir)의 배합물에서와 같이 감미제 및 향미제를 포함할 수 있다. 이러한 제제는 또한 완화제, 보존제, 또는 착색제를 포함할 수 있다.
본원에 개시된 화학식 I의 화합물의 약학 제제는 염으로서 제공될 수 있고, 염기, 즉, 양이온성 염 예컨대 알칼리 및 알칼리 토금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘뿐만 아니라 암모늄염, 예컨대 암모늄, 트리메틸-암모늄, 디에틸암모늄, 및 트리스-(하이드록시메틸)-메틸-암모늄염과 함께 형성될 수 있다.
약학 제제는 바람직하게는 단위 제형으로 존재한다. 이러한 형태에서 제제는 적절한 양의 활성 성분을 포함하는 단위 용량으로 세분된다. 단위 제형은 패키징된 제제, 별도의 양의 제제를 포함하는 패키지, 예컨대 바이알 또는 앰플 중의 패키징된 정제, 캡슐 및 분말일 수 있다. 또한, 단위 제형은 캡슐, 정제, 카쉐, 또는 로젠지 그 자체일 수 있거나, 또는 이는 패키징된 형태로의 적절한 수의 임의의 이들일 수 있다.
단위 용량 제제에서의 활성 성분의 양은 활성 성분의 특정 응용분야 및 효능에 따라 0.1 mg 내지 10000 mg, 보다 통상적으로 1.0 mg 내지 1000 mg, 가장 통상적으로 10 mg 내지 500 mg으로 변화되거나 조정될 수 있다. 조성물은 또한 요망되는 경우, 다른 혼용 가능한 치료제를 포함할 수 있다.
투여 요법은 또한 본 기술분야에 잘 알려진 약동학적 파라미터, 즉, 흡수율, 생체 이용가능성, 신진대사, 청소율 등을 고려한다(예를 들어 문헌[Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617; Groning (1996) Pharmazie 51:337-341; Fotherby (1996) Contraception 54:59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84:1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50:610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24:103-108]; 상기 Remington의 최신판을 참조하며, 이들 각각은 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다). 최신 기술은 임상의가 각각의 개별 환자, GR 및/또는 MR 조절제 및 치료되는 질환 또는 병태에 대한 투여 요법을 결정할 수 있게 한다.
화학식 I의 화합물 제제의 단일 또는 복수의 투여는 환자에게 요구되고 허용되는 투여량 및 빈도에 따라 투여될 수 있다. 제제는 효과적으로 질환 상태를 치료하는 데 충분한 양의 활성제를 제공하여야 한다. 따라서, 일 실시양태에서, 화학식 I의 화합물의 경구 투여를 위한 약학 제제는 1일당 체중 킬로그램당 약 0.5 내지 약 30 mg의 1일 양으로 존재하며, 이는 종점을 포함하는 이들 내의 임의의 하위 범위 또는 하위 값을 포함한다. 대안적인 실시양태에서, 투여량은 1일당 1킬로그램 환자 체중당 약 1 mg 내지 약 20 mg이 사용된다. 특히, 약물이 경구 투여와 대조적으로 뇌척수액(CSF) 공간과 같은 해부학적으로 고립된 부위에 혈류로, 체강으로 또는 기관의 내강으로 투여될 때, 더 낮은 투여량이 사용될 수 있다. 국소 투여에서 상당하게 더 높은 투여량이 사용될 수 있다. 상당하게 더 높은 투여량이 국소 투여에 사용될 수 있다. 비경구 투여를 위한 화학식 I의 화합물을 포함하는 제제를 제조하기 위한 실제 방법은 본 기술분야의 당업자에게 알려져 있거나 자명하며, 상기 Remington 문헌과 같은 이러한 공개물에 보다 상세하게 기재되어 있다. 또한, 문헌[Nieman, In "Receptor Mediated Antisteroid Action," Agarwal, et al., eds., De Gruyter, New York (1987)]을 참조하며, 이는 비제한적으로 본원의 임의의 실시양태 및 개시내용과 함께 사용하기 위한 모든 방법, 화합물, 조성물, 데이터 등을 포함하는, 이의 교시 모두를 위해 그 전문이 본원에 참조로 편입된다.
일부 실시양태에서, 공동 투여는 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 또는 24 시간(또는 24시간 기간 내의 임의의 하위 범위의 시간 또는 하위 값의 시간) 내에 제2 활성제 중 하나의 활성제를 투여하는 것을 포함한다. 공동 투여는 2개의 활성제를 동시에, 대략적으로 동시에(예를 들어, 서로 약 1, 5, 10, 15, 20, 또는 30분(예를 들어 0-30분으로부터의 하위 범위 시간 또는 하위 값 시간 내에), 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 공동 투여는 공동 제제(co-formulation), 즉, 두 활성제를 포함하는 단일 약학 조성물을 제조하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 활성제는 별도로 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 활성제 및/또는 보조제(adjunctive agent)는 서로 연결되거나 접합될 수 있다. 적어도 하나의 투여 용량의 약물은 예를 들어 동시에 투여될 수 있다. 적어도 하나의 투여 용량의 약물은 예를 들어, 서로 수분 내에 또는 한 시간 미만 내에 투여될 수 있다. 적어도 하나의 투여 용량의 약물은 예를 들어, 상이한 시간에, 그러나 동일한 날에, 또는 상이한 날에 투여될 수 있다.
본원에 개시된 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학 조성물이 하나 이상의 허용 가능한 담체에서 제제화된 후, 이는 적절한 용기에 배치되고 나타낸 조건의 치료를 위해 표지화될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 투여를 위해, 이러한 표지는 예를 들어 투여의 양, 빈도 및 방법과 관련된 지침을 포함할 것이다.
약물 투여
본원의 화합물에 대한 투여 요법은 물론 공지된 요인, 예컨대 특정 제제의 약동학적 특성 및 이의 투여 방식 및 경로; 대상자의 종, 연령, 성별, 건강, 의학적 상태 및 체중; 증상의 특징 및 정도; 동시 치료의 종류; 치료 빈도; 투여 경로, 환자의 신장 및 간 기능, 및 요망되는 효과에 따라 변화될 것이다. 임상 시술자는 질환 또는 장애의 방지, 대응 또는 저지에 필요한 약물의 유효량을 결정하고 처방할 수 있다.
일반 지침에 의해, 나타낸 효과를 위해 사용되는 경우, 각 활성 성분의 1일 경구 투여량은 1일당 약 0.001 내지 약 1000 mg/체중 kg, 바람직하게는 약 0.01 내지 약 100 mg/체중 kg, 가장 바람직하게는 약 0.1 내지 약 20 mg/kg/일의 범위일 것이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 약 10 mg/일 내지 약 200 mg/일의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 약 10 mg/일, 20 mg/일, 30 mg/일, 40 mg/일, 50 mg/일, 60 mg/일, 70 mg/일, 80 mg/일, 90 mg/일, 100 mg/일, 110 mg/일, 120 mg/일, 130 mg/일, 140 mg/일, 150 mg/일, 160 mg/일, 170 mg/일, 180 mg/일, 190 mg/일, 또는 200 mg/일의 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 언급된 범위 내의 임의의 값 또는 하위 범위일 수 있다.
환자의 병태 및 의도되는 치료 효과에 따라, 치료제에 대한 투여 빈도는 예를 들어 1일당 1회부터 1일당 6회로 변화될 수 있다. 즉, 투여 빈도는 QD, 즉, 1일당 1회, BID, 즉, 1일당 2회; TID, 즉, 1일당 3회; QID, 즉, 1일당 4회; 1일당 5회, 또는 1일당 6회일 수 있다. 다른 실시양태에서, 투여 빈도는 BIW, 즉, 1주 2회, TIW, 즉, 1주 3회, 또는 QIW, 즉 1주 4회일 수 있다.
환자의 병태 및 의도되는 치료 효과에 따라, 치료 주기는 치료제가 투여되지 않는 기간을 가질 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이, "간격 투여(interval administration)"는 치료제 투여 다음 수일 공백 또는 수주 공백을 지칭한다. 예를 들어, 치료 주기는 3주 기간일 수 있고, 이는 치료제(들) 투여의 2주 다음 치료제가 투여되지 않는 1주를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 주기는 4주 기간이고, 이는 투여의 3주 다음 치료제가 투여되지 않는 1주를 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "치료 주기"는 치료제를 투여하기 위한 사전 결정된 기간을 의미한다. 통상적으로, 환자는 요법의 효과를 평가하기 위해 각 치료 주기 종결시 검사된다.
일 실시양태에서, 치료 주기 각각은 약 3 이상의 일수를 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기 각각은 약 3일 내지 약 60일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기 각각은 약 5일 내지 약 50일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기 각각은 약 7일 내지 약 28일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기 각각은 28일을 갖는다. 일 실시양태에서, 치료 주기는 약 29일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 약 30일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 약 31일을 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 약 1개월 기간 치료 주기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 3주로부터 8주까지의 임의의 기간이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 3주로부터 6주까지의 임의의 기간이다. 또 다른 실시양태에서, 치료 주기는 3주이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 1개월이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 4주이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 5주이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 6주이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 7주이다. 다른 실시양태에서, 치료 주기는 8주이다. 치료 주기의 기간은 종점을 포함하는 언급된 범위 내의 임의의 값 또는 하위 범위를 포함할 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같은, 용어 "공동 투여(co-administration)" 또는 "공동투여(coadministration)"는 조율된 방식으로 (a) 추가의 치료제 및 (b) 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 염, 용매화물, 에스테르 및/또는 프로드러그와 함께 투여하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 공동 투여는 동시 투여, 순차 투여, 중복 투여, 간격 투여, 연속 투여, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 연속 28일 주기에 걸쳐 1일 1회이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 1일 1회 투여 요법은 비제한적으로 20 mg/일, 30 mg/일, 40 mg/일, 50 mg/일, 60 mg/일일 수 있다. 화학식 (I)의 화합물은 1일 1회 20 mg 내지 60 mg으로 어디에든 투여될 수 있다. 용량은 언급된 범위 내의 임의의 값 또는 하위 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 연속 28일 주기에 걸쳐 1일 2회이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 1일 2회 투여 요법은 비제한적으로 10 mg/일, 20 mg/일, 30 mg/일, 40 mg/일, 50 mg/일, 60 mg/일, 70 mg/일, 80 mg/일, 90 mg/일, 100 mg/일일 수 있다. 화학식 (I)의 화합물은 1일 2회 20 mg 내지 80 mg으로 어디에든 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 10 mg/일 내지 100 mg/일로 어디에든 투여될 수 있다. 용량은 언급된 범위 내의 임의의 값 또는 하위 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 6주의 기간에 걸쳐 어디에든 2주 동안 1일당 20 mg 내지 60 mg으로 매일 1회 다음 1주 중단(예를 들어 2주 시행, 1주 미시행)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 6주의 기간에 걸쳐 어디에든 2주 동안 1일 2회 10 mg 내지 100 mg으로 매일 2회 다음 1주 중단(예를 들어 2주 시행, 1주 미시행)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 8주의 기간에 걸쳐 어디에든 3주 동안 1일당 20 mg 내지 60 mg으로 매일 1회 다음 1주 중단(예를 들어 3주 시행, 1주 미시행)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 8주의 기간에 걸쳐 어디에든 3주 동안 1일 2회 10 mg 내지 100 mg으로 매일 2회 다음 1주 중단(예를 들어 8주 시행, 1주 미시행)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물에 대한 투여 요법은 8주 동안 매주 1일차 및 2일차에 1일 2회일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 투여량은 비제한적으로 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg일 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 1일 1회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 6주 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 3회 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 주 중 1일차, 3일차 및 5일차에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 4회 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 2회, 주당 2일 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매주 1일차 및 2일차에 투여된다.
화학식 I의 화합물이 1주에 복수회로 투여되는 경우, 용량은 1주 내의 어느 하나의 일자 또는 조합된 일자들에 투여될 수 있다. 예를 들어, 주당 3회 투여는 1, 3, 및 5일차; 1, 2, 및 3일차; 1, 3, 및 5일차 등의 투여를 포함할 수 있다. 주당 2일간 투여는 1 및 2일차; 1 및 3일차; 1 및 4일차; 1 및 5일차; 1 및 6일차; 1 및 7일차 등의 투여를 포함할 수 있다.
키트 및 제품
본 개시내용의 일부 실시양태는 화학식 I의 화합물 및/또는 적어도 하나의 FGFR 억제제를 포함하는 키트 및 제품에 관한 것이다. 예를 들어, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물을 갖는 패키지 또는 용기를 포함할 수 있다. 이러한 키트 및 제품은 별도로 제공되는 FGFR 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물 및 적어도 하나의 FGFR 억제제 둘 모두를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, FGFR 억제제는 예를 들어 에르다피티닙이다. 이러한 키트는 하나 이상의 용기 또는 패키지를 포함할 수 있고, 이는 단일 용기 및/또는 패키지에, 또는 별도의 패키지/용기에 함께 1 또는 2개의 병용 약물을 포함한다. 일부 경우에, 2개의 약물은 별로도 포장되지만, 단일 패키지, 용기 또는 박스에 포함된다. 이러한 키트 및 제품은 FGFR 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
본 개시내용의 일부 실시양태는 화학식 I의 화합물 및/또는 적어도 하나의 B-Raf 억제제를 포함하는 키트 및 제품에 관한 것이다. 예를 들어, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물을 가진 패키지 또는 용기를 포함할 수 있다. 이러한 키트 및 제품은 별도로 제공되는 B-Raf 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물 및 적어도 하나의 B-Raf 억제제 둘 모두를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, B-Raf 억제제는 예를 들어 엔코라페닙이다. 이러한 키트는 하나 이상의 용기 또는 패키지를 포함할 수 있고, 이는 단일 용기 및/또는 패키지에, 또는 별도의 패키지/용기에 함께 1 또는 2개의 병용 약물을 포함한다. 일부 경우에, 2개의 약물은 별로도 포장되지만, 단일 패키지, 용기 또는 박스에 포함된다. 이러한 키트 및 제품은 B-Raf 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
본 개시내용의 일부 실시양태는 화학식 I의 화합물 및/또는 적어도 하나의 MEK 억제제를 포함하는 키트 및 제품에 관한 것이다. 예를 들어, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물을 가진 패키지 또는 용기를 포함할 수 있다. 이러한 키트 및 제품은 별도로 제공되는 MEK 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물 및 적어도 하나의 MEK 억제제 둘 모두를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, MEK 억제제는 예를 들어 트라메티닙 또는 비니메티닙이다. 이러한 키트는 하나 이상의 용기 또는 패키지를 포함할 수 있고, 이는 단일 용기 및/또는 패키지에, 또는 별도의 패키지/용기에 함께 1 또는 2개의 병용 약물을 포함한다. 일부 경우에, 2개의 약물은 별로도 포장되지만, 단일 패키지, 용기 또는 박스에 포함된다. 이러한 키트 및 제품은 MEK 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
본 개시내용의 일부 실시양태는 화학식 I의 화합물 및/또는 적어도 하나의 MET 억제제를 포함하는 키트 및 제품에 관한 것이다. 예를 들어, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물을 가진 패키지 또는 용기를 포함할 수 있다. 이러한 키트 및 제품은 별도로 제공되는 MET 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 키트 또는 제품은 화학식 I의 화합물 및 적어도 하나의 MET 억제제 둘 모두를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, MET 억제제는 예를 들어 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 또는 티반티닙이다. 이러한 키트는 하나 이상의 용기 또는 패키지를 포함할 수 있고, 이는 단일 용기 및/또는 패키지에, 또는 별도의 패키지/용기에 함께 1 또는 2개의 병용 약물을 포함한다. 일부 경우에, 2개의 약물은 별도로 포장되지만, 단일 패키지, 용기 또는 박스에 포함된다. 이러한 키트 및 제품은 MET 억제제와 조합하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방식을 포함하는 승인된 약물 투여 및 적응증 정보가 있는 제품 삽입물 또는 표지를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 본원에 기재된 바와 같이 암을 치료하는 방법에 사용될 수 있다.
실시예
실시예 1 - 화학식 I의 화합물 및 FGFR의 억제제의 상승작용적 조합
이 실시예는 화학식 I의 화합물과 FGFR의 억제제의 상승작용적 조합을 입증한다.
조합 세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였다. Tecan D300e 디지털 디스펜서 콤비네이션 매트릭스 프로토콜(Tecan D300e Digital Dispenser combination matrix protocol)을 사용하여 0 내지 10 μM에서 변화되는 농도의 화학식 I의 화합물 및 에르다피티닙으로 세포를 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, 조합 데이터를 Combenefit 소프트웨어를 사용하는 표준 HSA 모델에 의해 생성하였다. 조합 상승작용은 결과 표에서의 양수에 의해 표시되었다. 음수는 조합의 길항 작용을 나타낸다.
도 1a-1b는 화학식 I의 화합물과 FGFR 억제제 에르다피티닙의 조합이 시험관내에서 상승작용을 나타내는 것을 나타내는 데이터를 보여준다. 도 1a는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합을 사용한 Hep3B 암 세포주에서의 3D 그래프의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 1B는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합을 사용한 JHH-7 암 세포주에서의 3D 그래프의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 1a 및 도 1b는 화학식 I의 화합물과 FGFR 억제제 에르다피티닙의 조합이 시험관내에서 상승작용을 나타내는 것을 나타내는 데이터를 보여준다. 도 1a는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합을 사용한 Hep3B 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 1b는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합을 사용한 JHH-7 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
실시예 2 - FGFR2 증폭된 간 암종 CDX 모델 KATO III에서의 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 에르다피티닙을 20% HP-β-CD의 비히클에서 제조하고, 2-8℃하에 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 시행되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
KATO-III 세포주는 FGFR 증폭을 가진 인간 간 암종 세포이었다. KATO-III 세포주를 ATCC(ATCC®　HTB-103TM)로부터 구입하였다. 50% 매트리젤(Matrigel)과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 피하 이식 후 종양 부피가 평균 220 mm3에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 하나의 추가의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물이 투여되고 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙이 투여되는 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 처리를 받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I 화합물의 첫 번째 BID 용량 후 한 시간 시점에 에르다피티닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 2는 간 암종 CDX 모델 KATO III에서 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 2에 보여진 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합은 FGFR2 증폭된 간 암종 CDX 모델 KATO III에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 에르다피티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 3 - FGFR2 증폭된 위암 CDX SNU-16에서의 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 에르다피티닙을 매주 20% HP-β-CD의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 시행되었다. 또한, 이 연구의 모든 부분은 WuXi AppTec에서 수행되었고, 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
SNU16 세포주는 FGFR 증폭을 가진 인간 위암 세포이었다. SNU16 세포주를 ATCC(ATCC®　CRL-1420TM)로부터 구입하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 피하 이식 후 종양 부피가 평균 180 mm3에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일은 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 요법을 받았고, 하나의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙을 투여받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 QD를 투여하고 한 시간 후 또는 화학식 I의 화합물의 첫 번째 BID 용량을 투여하고 한 시간 후 에르다피티닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 3은 FGFR2 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-16에서 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 3에 보여진 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합은 FGFR2 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-16에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 에르다피티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 4 - FGF19-FDFR4 의존적 간암 CDX 모델 Huh-7에서의 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 요법
물질
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 에르다피티닙을 매주 20% HP-β-CD의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이종이식 모델의 준비
Huh-7 세포주는 FGFR 과발현이 있는 인간 간암 세포이었다. Huh-7 세포주를 일본 연구 생물자원 세포 은행 수집소(Japanese Collection of Research Bioresources Cell Bank)(JCRB Cell Bank,　JCRB0403)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM) + 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 Huh-7 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다. Huh-7 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 종양 부피가 대략 500~1000 mm3에 도달될 때, 종양 단편(15-30 mm3)을 수확하고, 이후 18g 트로차 바늘을 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 피하 이식 후 종양 부피가 평균 146 mm3에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 단독 처리 그룹에서 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙 단독을 마우스에 경투 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 병용 요법을 받았고, 하나의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 10 mg/kg QD로의 에르다피티닙을 투여받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 QD를 투여하고 한 시간 후 또는 화학식 I의 화합물의 첫 번째 BID 용량을 투여하고 한 시간 후 에르다피티닙을 투여하였다. 처리 21일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 4는 FGF19-FGFR4 의존적 간암 CDX 모델 Huh-7에서 화학식 I의 화합물 단독, 에르다피티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 4에 보여진 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 에르다피티닙의 조합은 FGF19-FGFR4 의존적 간암 CDX 모델 Huh-7에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 에르다피티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 5 - 시험관내에서의 화학식 I의 화합물과 클래스 1 돌연변이체 B-Raf 단백질의 억제제의 상승작용적 조합
세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였고, 화학식 I의 화합물 단독 또는 고정된 농도의 엔코라페닙와 함께의 화학식 I의 화합물로 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, Prism GraphPad를 사용하여 그래프를 플롯팅하였다.
조합 세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였다. Tecan D300e 디지털 디스펜서 콤비네이션 매트릭스 프로토콜을 사용하여 0 내지 10 μM에서 변화되는 농도의 화학식 I의 화합물 및 엔코라페닙으로 세포를 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, 조합 데이터를 Combenefit 소프트웨어를 사용하는 표준 HSA 모델에 의해 생성하였다. 조합 상승작용은 결과 표에서의 양수에 의해 표시되었다. 음수는 조합의 길항 작용을 나타낸다.
pERK 및 ERK에 대한 웨스턴 블롯팅
세포를 4시간 동안 화합물로 처리하였다. 처리 후, 세포를 프로테아제 및 포스파타아제 억제제와 함께 Thermo Fisher RIPA 용해 버퍼를 사용하여 얼음 상에서 10분 동안 세포를 용해시켰다. 마이크로원심분리기를 사용하여 10분 동안 4°로 세포를 원심분리시켰다. 상청액을 사전 냉각시킨 마이크로원심분리기 튜브로 이송시키고, 용해물의 단백질 농도를 BCA 방법을 사용하여 측정하였다. 동일한 양의 단백질의 세포 용해물 상청액을 pERK 및 총 ERK에 대한 면역블롯팅을 위해 사용하였다.
결과
도 5는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합이 복수의 BRAF V600E 돌연변이된 세포에 대해 상승작용을 나타내는 것을 나타내는 데이터를 보여준다.
도 6은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 RKO BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 7은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 WiDr BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 8은 화학식 I의 화합물과 BRAF 억제제 엔코라페닙의 조합을 사용한 HT29 BRAFV600E CRC 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합에서 상당한 정도의 상승작용이 존재하는 것을 나타낸다.
도 9a는 RKO 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 겔을 보여준다. 도 9b는 WiDr 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 강력한 억제를 나타내는 겔을 보여준다. 도 9c는 RKO 결장직장암 세포주에서의 화학식 I의 화합물 단독 또는 엔코라페닙과 조합된 화학식 I의 화합물의 증식 방지 효과의 플롯을 보여준다. 도 9d는 WiDr 결장직장암 세포주에서의 화학식 I의 화합물 또는 엔코라페닙과 조합된 화학식 I의 화합물의 증식 방지 효과의 플롯을 보여준다. 도 9a-9b는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합을 사용하여 pERK1/2의 강력한 억제를 나타낸다. 도 9c-9d는 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합이 화학식 I의 화합물의 억제 활성을 증가시켰음을 시사한다.
도 10a-10d는 RKO 결장직장암 세포주에서 SHP2 억제제와 엔코라페닙의 조합의 효능의 비교 연구를 보여준다. 도 10a는 다음의 조합: 화학식 I의 화합물 + 엔코라페닙; TNO155 + 엔코라페닙; 및 RMC-4550 + 엔코라페닙으로의 RKO 결장직장암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 억제를 비교하는 겔을 보여준다. 도 10b는 1. 대조군; 2. (화학식 I의 화합물); 3. 엔코라페닙; 및 4. (화학식 I의 화합물) + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여준다. 도 10c는 1. 대조군; 2. TNO155; 3. 엔코라페닙; 및 4. TNO155 + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여준다. 도 10d는 1. 대조군; 2. RMC-4550; 3. 엔코라페닙; 및 4. RMC-4550 + 엔코라페닙에 대한 대조군의 백분율로서의 pERK의 막대 도표를 보여준다. 도 10a-10d에 나타난 바와 같이, ERK1/2 인산화의 억제는 SHP2 억제제 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로 가장 효과적이다.
실시예 6 - BRAF V600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR0029에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 매주 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 SPF (Beijing) Laboratory Animal Technology Co, Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 7-9주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 Crown Bioscience(중국 타이창 소재)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 시행되었다. 또한, Crown Bioscience(중국 타이창 소재)에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
CR0029 PDX 모델을 CrownBio에서 전임상 효능 연구를 위해 확립하였다. 이 PDX 모델을 여성 중국인 CRC 환자로부터 유도하였다. PDX 모델 CR0029에서의 BRAFV600E 돌연변이를 RNA 시퀀싱 및 엑솜 시퀀싱 둘 모두로 확인하였다. 우측 옆구리 상에 적절한 외과용 스크럽과 아이오도포(iodophor)를 사용하여 마우스 피부를 세척하였다. PDX 모델로부터 수확한 종양 단편(2-3 mm 직경)을 18g 트로차 바늘을 사용하여 암컷 Balb/c 누드 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다.
동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 약 141 mm3(110-176 mm3의 범위)에 도달될 때, 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 7개의 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 하나의 추가의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물이 투여되고 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙이 투여되는 병용 처리를 받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I의 화합물을 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 11은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR0029에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 11에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR0029에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 7 - BRAF V600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR004에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 매주 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 SPF (Beijing) Laboratory Animal Technology Co, Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 9-11주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 Crown Bioscience(중국 베이징 소재)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 시행되었다. 또한, Crown Bioscience(중국 베이징 소재)에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
PDX의 준비
CR0004 PDX 모델을 CrownBio에서 전임상 효능 연구를 위해 확립하였다. 이 PDX 모델을 73세 남성 중국인 CRC 환자로부터 유도하였다. PDX 모델 CR0004에서의 BRAFV600E 돌연변이를 RNA 시퀀싱 및 엑솜 시퀀싱 둘 모두로 확인하였다. 우측 옆구리 상에 적절한 외과용 스크럽과 아이오도포를 사용하여 마우스 피부를 세척하였다. PDX 모델로부터 수확한 종양 단편(2-3 mm 직경)을 18g 트로차 바늘을 사용하여 암컷 Balb/c 누드 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 평균 종양 크기가 약 141 mm3(121-180 mm3의 범위)에 도달될 때, 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 6개의 연구 그룹으로 무작위적으로 나누었다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 하나의 추가의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물이 투여되고 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙이 투여되는 병용 처리를 받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I의 화합물을 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 12는 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR004에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 12에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC PDX 모델 CR004에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 8 - BRAF V600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 WiDr에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 매주 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
WiDr는 BRAFV600E 돌연변이를 가진 인간 CRC 종양 세포주이었다. WiDr 세포주를 유럽 인증 세포 배양물 수집소(European Collection of Authenticated Cell Cultures)(ECACC, 85111501)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 1% 비-필수 아미노산(NEAA)이 보충되고, EMEM (EBSS) + 10% 태아 소 혈청(FBS), 2 mM 글루타민을 포함하는 배지에서 WiDr 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
WiDr 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 189 mm3(139-240 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 처리를 받았고, 제1 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았고, 제2 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았다. 화학식 I의 화합물 및 엔코라페닙에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 QD를 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 13은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 WiDr에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 13에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 WiDr에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 9 - BRAF V600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 HT-29에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 매주 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 GenenDesign의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 프로토콜 및 지침에 따라 수행하였다. 동물 시설 및 프로그램을 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 표준 지침(NRC, 2011)하에 작동시켰고, 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 인증을 받았다. 구체적으로, GenenDesign에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 IACUC에 의해 검토되어 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
HT-29는 BRAFV600E 돌연변이를 가진 인간 CRC 종양 세포주이었다. HT-29 세포주를 아메리칸 타입 배양물 수집소(American Type Culture Collection)(ATCC® CRL-2577TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 10% 태아 소 혈청(FBS)이 더해진 McCoy의 5a 배지에서 HT-29 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
HT-29 종양 세포를 피하로 마우스에 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 2 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 약 200 mm3(146-259 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 처리를 받았고, 제1 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았고, 제2 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물을 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 14는 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 HT-29에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다.
결론
도 14에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 HT-29에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 10 - BRAF V600E 돌연변이체 갑상선 암종 CDX 모델 BHT-101에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 20일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 GenenDesign의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 프로토콜 및 지침에 따라 수행하였다. 동물 시설 및 프로그램을 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 표준 지침(NRC, 2011)하에 작동시켰고, 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 인증을 받았다. 구체적으로, GenenDesign에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 IACUC에 의해 검토되어 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
BHT-101은 BRAFV600E 돌연변이를 가진 인간 갑상선 암종 세포주이었다. BHT-101 세포주를 중국 과학 아카데미 세포 은행(Cell Bank of Chinese Academy of Sciences)로부터 (본래, 미생물 및 세포 배양물의 DSMZ-독일 수집소 GmbH(DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH)로부터) 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 1x Glutamax 용액 및 1mM 나트륨 피루베이트가 보충되고, 20% 태아 소 혈청(FBS)을 포함하는 DMEM 배지에서 BHT-101 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
BHT-101 종양 세포를 피하로 마우스에 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 2 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 190 mm3(146-258 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 처리를 받았고, 제1 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았고, 제2 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물을 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 급속한 종양 성장으로 인해 연구 프로토콜에 정의된 본래 종료일보다 이른 처리 20일차에 연구를 종료하였다. 비히클 대조군 그룹에서의 종양 절반이 처리 20일차에 IACUC 프로토콜에 따른 종양 부피 임계값(2,000 mm3)을 초과하였다.
결과
도 15는 BRAFV600E 돌연변이체 갑상선 암종 CDX 모델 BHT-101에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 15에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 갑상선 암종 CDX 모델 BHT-101에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 11 - BRAF V600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 RKO에서의 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 16일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 엔코라페닙을 매주 0.5% CMC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 GenenDesign의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 프로토콜 및 지침에 따라 수행하였다. 동물 시설 및 프로그램을 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 표준 지침(NRC, 2011)하에 작동시켰고, 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 인증을 받았다. 구체적으로, GenenDesign에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 IACUC에 의해 검토되어 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
RKO는 BRAFV600E 돌연변이를 가진 인간 CRC 종양 세포주이었다. RKO 세포주를 아메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® CRL-2577TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 비-필수 아미노산이 보충되고, MEM + 10% 태아 소 혈청(FBS)을 포함하는 배지에서 RKO 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
RKO 종양 세포를 피하로 마우스에 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 2 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 217 mm3(163-262 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화 당일에 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 0일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물의 병용 처리를 받았고, 제1 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았고, 제2 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 90 mg/kg QD로의 엔코라페닙을 투여받았다. 각 화합물에 대한 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 QD 용량을 투여하고 한 시간 후 엔코라페닙을 투여하였다. 급속한 종양 성장으로 인해 연구 프로토콜에 정의된 본래 종료일보다 이른 처리 16일차에 연구를 종료하였다. 비히클 대조군 그룹에서의 종양의 대다수가 처리 16일차에 IACUC 프로토콜에 따른 종양 부피 임계값(2,000 mm3)을 초과하였다.
결과
도 16은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 RKO에서의 화학식 I의 화합물 단독, 엔코라페닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 16에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 엔코라페닙의 조합은 BRAFV600E 돌연변이체 CRC CDX 모델 RKO에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 엔코라페닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 12 - 화학식 I의 화합물과 MEK의 억제제의 상승작용적 조합
이 실시예는 화학식 I의 화합물과 MEK의 억제제의 상승작용적 조합을 입증한다.
세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에서 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였고, 화학식 I의 화합물 단독 또는 고정된 농도의 트라메티닙 또는 비니메티닙과의 화학식 I의 화합물로 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, 그래프를 Prism GraphPad를 사용하여 플롯팅하였다.
조합 세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에서 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였다. Tecan D300e 디지털 디스펜서 콤비네이션 매트릭스 프로토콜을 사용하여 0 내지 10 μM에서 변화되는 농도의 화학식 I의 화합물 및 트라메티닙 또는 비니메티닙으로 세포를 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, 조합 데이터를 Combenefit 소프트웨어를 사용하는 표준 HSA 모델에 의해 생성하였다. 조합 상승작용은 결과 표에서의 양수에 의해 표시되었다. 음수는 조합의 길항 작용을 나타낸다.
pERK 및 ERK에 대한 웨스턴 블롯팅
NCI-H508 세포를 4시간 동안 화합물로 처리하였다. 처리 후, 세포를 프로테아제 및 포스파타아제 억제제와 함께 Thermo Fisher RIPA 용해 버퍼를 사용하여 얼음 상에서 10분 동안 세포를 용해시켰다. 마이크로원심분리기를 사용하여 10분 동안 4°로 세포를 원심분리시켰다. 상청액을 사전 냉각시킨 마이크로원심분리기 튜브로 이송시키고, 용해물의 단백질 농도를 BCA 방법을 사용하여 측정하였다. 동일한 양의 단백질의 세포 용해물 상청액을 pERK 및 총 ERK에 대한 면역블롯팅을 위해 사용하였다.
MeWo 세포를 4시간 동안 화합물로 처리하였다. 처리 후, 세포를 프로테아제 및 포스파타아제 억제제와 함께 Thermo Fisher RIPA 용해 버퍼를 사용하여 얼음 상에서 10분 동안 세포를 용해시켰다. 마이크로원심분리기를 사용하여 10분 동안 4°로 세포를 원심분리시켰다. 상청액을 사전 냉각시킨 마이크로원심분리기 튜브로 이송시키고, 용해물의 단백질 농도를 BCA 방법을 사용하여 측정하였다. 동일한 양의 단백질의 세포 용해물 상청액을 pERK 및 총 ERK에 대한 면역블롯팅을 위해 사용하였다.
결과
도 17a는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H508 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 17b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H508 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 17c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1666 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 17d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1666 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 18a는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 MeWo 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 18b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 MeWo 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 18c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1838 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 18d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H1838 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 19a는 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 NCI-H508 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 NCI-H508 세포에서의 IC50 데이터를 표로 만들었다. 도 19b는 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 MeWo 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독으로 그리고 비니메티닙과 조합되어 처리된 MeWo 세포에서의 IC50 데이터를 표로 만들었다.
도 20a는 NCI-H508 암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 웨스턴 블롯 겔을 보여준다. 도 20b는 도 20a의 웨스턴 블롯의 막대 도표 정량화를 보여준다. 도 20c는 MeWo (NF1 LoF) 암 세포주에서의 ERK1/2 인산화의 상승작용적 억제를 나타내는 웨스턴 블롯 겔을 보여준다. 도 20d는 도 20c의 웨스턴 블롯의 막대 도표 정량화를 보여준다.
도 21a는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H2009 (KRAS G12A) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 21b는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 LS513 (KRAS G12D) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 21c는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 A549 (KRAS G12S) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 21d는 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합을 사용한 NCI-H727 (KRAS G12V) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 22a는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H2009 (KRAS G12A) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 22b는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 LS513 (KRAS G12D) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 22c는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 A549 (KRAS G12S) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 22d는 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합을 사용한 NCI-H727 (KRAS G12V) 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
도 23a는 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 LS513 (KRAS G12D) 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 도 23b는 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 NCI-H2009 (KRAS G12D) 세포에서의 활성 백분율 대 억제제 농도(log M)의 플롯을 보여준다. 화학식 I의 화합물 단독 그리고 트라메티닙과 조합하여 처리된 NCI-H508 세포에서의 데이터를 표로 만들었다. 도 23c는 화학식 I의 화합물 또는 트라메티닙 단독이 세포 생존율에 대해 최소 효과를 갖는 것을 나타내는 CTG 활성 백분율의 막대 도표를 보여준다. 총괄적으로, 이 데이터는 화학식 I의 화합물과 MEK의 억제제의 조합이 BRAF 클래스 III, NF1 LoF 및 KRAS G12X 돌연변이된 암의 암세포 생존율의 상승작용적 억제를 제공하는 것을 나타낸다.
실시예 13 - NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 트라메티닙을 매주 0.5% HPMC 및 0.2% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 주변 조건하에 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
MeWo는 NF1 Q1336* 돌연변이를 가진 인간 흑색종 세포주이었다. MeWo 세포주를 아메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® HTB-65TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 최소 필수 배지(MEM) + 10% 태아 소 혈청(FBS), 1% 비-필수 아미노산(NEAA), 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 MeWo 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
MeWo 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 191 mm3(150-242 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg/용량 BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 처리를 받았고, 하나의 그룹은 10 mg/kg/용량 BID로의 화학식 I의 화합물을 투여받았고, 다른 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물을 투여받았다. 두 병용 그룹은 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙을 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I의 화합물 BID 또는 QD 일정의 첫 번째 용량 후 한 시간 시점에 트라메티닙을 투여하였다.
결과
도 24는 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 24에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합은 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 트라메티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 14 - NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 비니메티닙을 매주 1.0% MC 및 0.5% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 2-8℃에서 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 GenenDesign의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 프로토콜 및 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 시행되었다. 또한, GenenDesign에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
MeWo는 NF1 Q1336* 돌연변이를 가진 인간 흑색종 세포주이었다. MeWo 세포주를 어메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® HTB-65TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 최소 필수 배지(MEM) + 10% 태아 소 혈청(FBS), 1% 비-필수 아미노산(NEAA), 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 MeWo 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
MeWo 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 간략하게는, 50% 메트리젤과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 195 mm3(141-267 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 15 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 6 mg/kg BID로의 비니메티닙 단독 및 9 mg/kg/용량 BID로의 비니메티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 병용 처리를 받았고, 하나의 그룹은 15 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 6 mg/kg BID로의 비니메티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 15 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 9 mg/kg/용량 BID로의 비니메티닙을 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 QD 용량을 투여하고 한 시간 후 비니메티닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 25는 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서의 화학식 I의 화합물 단독, 비니메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 25에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 비니메티닙의 조합은 NF1 LoF 돌연변이체 흑색종 CDX 모델 MeWo에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 비니메티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 15 - BRAF 클래스 III 돌연변이체 CRC CDX 모델 NCI-H508에서의 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 트라메티닙을 매주 0.5% HPMC 및 0.2% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 주변 조건하에 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
NCI-H508은 BRAF 클래스 III 돌연변이(BRAF G596R)를 가진 인간 CRC 세포주이었다. NCI-H508 세포주를 어메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® CCL-253TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 RPMI-1640 + 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 NCI-H508 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
NCI-H508 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 간략하게는, 50% 메트리젤과 혼합된 10 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 182 mm3(108-287 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 처리를 받았고, 하나의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 화학식 I의 화합물 및 30 mg/kg QD로의 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙을 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식의 화합물 BID 또는 QD 용량 중 첫 번째 용량 후 한 시간 시점에 트라메티닙을 투여하였다.
결과
도 26은 BRAF 클래스 III 돌연변이체 CRC CDX 모델 NCI-H508에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 26에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합은 BRAF 클래스 III 돌연변이체 CRC CDX 모델 NCI-H508에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 트라메티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 16 - NF1 LoF 돌연변이체 NSCLC CDX 모델 NCI-H1838에서의 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 트라메티닙을 매주 0.5% HPMC 및 0.2% Tween 80의 비히클에서 새롭게 제조하고, 주변 조건하에 저장하였다.
암컷 SCID Beige 마우스(Cat#405)를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다.
이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, 이 연구의 모든 부분은 WuXi AppTec에서 수행되었고 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
NCI-H1838은 NF1LOF 돌연변이를 가진 인간 폐선암 세포주인 NF1 N184fs이었다. NCI-H1838 세포주를 어메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® CRL-5899TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 RPMI-1640 + 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 NCI-H1838 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다.
NCI-H508 종양 세포를 마우스에 피하 이식하였다. 간략하게는, 50% 메트리젤과 혼합된 10 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 종양 부피가 평균 254 mm3(149-503 mm3의 범위)에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 병용 처리를 받았고, 하나의 그룹은 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 0.4 mg/kg QD로의 트라메티닙을 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 1의 화합물 용량 또는 QD 용량 중 첫 번째 용량을을 투여하고 한 시간 후 트라메티닙을 투여하였다.
결과
도 27은 NF1 LoF 돌연변이체 NSCLC CDX 모델 NCI-H1838에서의 화학식 I의 화합물 단독, 트라메티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 27에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 트라메티닙의 조합은 NF1 LoF 돌연변이체 NSCLC CDX 모델 NCI-H1838에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 트라메티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 17 - 화학식 I의 화합물과 MET의 억제제의 상승작용적 조합
조합 세포 증식 검정
100 μl 세포 배양 배지 중의 96-웰 플레이트 상에서 세포(웰당 2000개 세포)를 플레이팅하였다. Tecan D300e 디지털 디스펜서 콤비네이션 매트릭스 프로토콜을 사용하여 0 내지 10 μM에서 변화되는 농도의 화학식 I의 화합물 및 크리조티닙으로 세포를 처리하였다. 5일차에, 50 μl의 CellTiter-Glo(CTG) 시약(Promega)을 추가하였고, 플레이트를 온건하게 진탕하며 10분 동안 인큐베이션하였다. 10분의 인큐베이션 후, 공급자 지침(Promega)에 따라 발광 신호를 결정하였고, 조합 데이터를 Combenefit 소프트웨어를 사용하는 표준 HSA 모델에 의해 생성하였다. 조합 상승작용은 결과 표에서의 양수에 의해 표시되었다. 음수는 조합의 길항 작용을 나타낸다.
결과
도 28a는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 Hs746T 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 28b는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 MKN-45 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다. 도 28c는 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합을 사용한 EBC-1 암 세포주에서의 상승작용 데이터를 보여준다.
실시예 18 - c-MET 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-5에서의 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 크리조티닙을 0.5% 메틸 셀룰로오스의 비히클에서 제조하고, 2-8℃하에 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다. 이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
SNU-5는 c-MET 증폭된 위암 세포주이었다. SNU-5 세포주를 어메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® CRL-5973TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 IMDM(이스코브 변형된 둘베코 배지(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)) + 20% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 SNU-5 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다. SNU-5 종양 세포(계대 13)를 마우스에 피하 이식하였다. 10 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 피하 이식 후 34일차에 종양 부피가 평균 227 mm3에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 50 mg/kg BID로의 크리조티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 두 그룹은 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 병용 처리를 받았고, 하나의 그룹은 5 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 50 mg/kg BID로의 크리조티닙을 투여받았고, 다른 그룹은 15 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 및 50 mg/kg BID로의 크리조티닙을 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I의 화합물 QD 또는 BID 용량 일정의 첫 번째 용량을 투여하고 한 시간 후 크리조티닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 29는 c-MET 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-5에서의 화학식 I의 화합물 단독, 크리조티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 29에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합은 c-MET 증폭된 위암 CDX 모델 SNU-5에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 크리조티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
실시예 19 - c-MET 증폭된 NSCLC CDX 모델 NCI-H1993에서의 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 병용 요법
물질
pH를 4.8-5.0으로 조정한 탈이온수 중의 100 mM 아세트산인 비히클/대조군 물품을 제조하여 마우스로의 28일 투여 동안 주변 조건하에 저장하였다.
화학식 I의 화합물의 시험 물품을 매주 100 mM 아세트산 버퍼의 비히클에서 새롭게 제조하였고, 주변 조건하에 저장하였다. 병용제 크리조티닙을 0.5% 메틸 셀룰로오스의 비히클에서 제조하고, 2-8℃하에 저장하였다.
암컷 Balb/c 누드 마우스를 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구입하였다. 마우스는 이식 시점에 6-8주령이었다. 마우스를 동물 사육장 시설의 특수 무병균(SPF) 환경에서 관리하였고, IACUC 프로토콜에 따른 임의의 실험의 개시 전 적어도 3일 동안 그의 새로운 환경에서 적응시켰다. 이 연구에서 동물 취급, 관리 및 처리에 관한 모든 절차를 WuXi AppTec의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 승인된 지침에 따라 수행하였다. 연구 동안, 동물의 관리 및 사용은 실험실 동물 관리의 평가 및 인증 협회(AAALAC)의 규제에 따라 실시되었다. 또한, WuXi AppTec에서 수행된 이 연구의 모든 부분은 연구 책임자에 의해 승인된 연구 프로토콜 및 적용 가능한 표준 작업 절차(SOP)를 준수하였다.
이종이식 모델의 준비
NCI-H1993은 c-MET 증폭된 NSCLC 세포주이었다. NCI-H1993 세포주를 어메리칸 타입 배양물 수집소(ATCC® CRL-5909TM)로부터 구입하였다. 공기 중의 5% CO2의 분위기 중 37℃에서 RPMI-1640 + 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 항생제-항진균제(AA)를 포함하는 배지에서 NCI-H1993 세포를 배양하였다. 배지를 매2 내지 3일마다 교체하고, 종양 세포를 정기적으로 트립신-EDTA에 의해 80-90%의 컨플루언스로 계대 배양하였다. 대수 증식기에서 성장된 세포를 수확하고 접종을 위해 계수하였다. NCI-H1993 종양 세포(계대 13)를 마우스에 피하 이식하였다. 50% 매트리젤과 혼합된 5 x 106개의 종양 세포를 포함하는 200 μL 세포 현탁액을 주사기를 사용하여 마우스의 우측 옆구리에 피하 이식하였다. 동물 건강 및 종양 성장을 매일 모니터링하였다. 종양이 감지될 수 있고 측정 가능할 때, 종양 부피를 캘리퍼로 1주 2회 측정하였다. 피하 이식 후 10일차에 종양 부피가 평균 201 mm3에 도달될 때, 종양을 가진 마우스를 각 그룹당 8마리 마우스를 갖는 상이한 그룹으로 무작위화하였다. 무작위화 날짜는 처리 0일차로 표시하였다.
처리
무작위화하고 하루 후 처리를 시작하였다. 처리 시작일을 처리 1일차로 표시하였다. 비히클 대조군 용액, 10 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 단독, 30 mg/kg QD로의 화학식 I의 화합물 단독, 및 50 mg/kg BID로의 크리조티닙 단독을 마우스에 경구 투여로 투여하였다. 추가의 하나의 그룹은 5 mg/kg BID로의 화학식 I의 화합물 및 50 mg/kg BID로의 크리조티닙의 병용 처리를 투여받았다. 투여 부피는 5 mL/kg이었고, BID 요법의 간격은 8시간이었다. 병용 그룹에서 화학식 I의 화합물 BID 용량의 첫 번째 용량 후 한 시간 시점에 크리조티닙을 투여하였다. 연구 프로토콜에 정의된 바와 같이 처리 28일차에 연구를 종료하였다.
결과
도 30은 c-MET 증폭된 NSCLC CDX 모델 NCI-H1993에서의 화학식 I의 화합물 단독, 크리조티닙 단독, 및 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합으로의 처리 기간에 걸친 종양 부피의 그래프를 보여준다. 대조군 및 처리 그룹에서 유의미한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
결론
도 30에서 보여지는 바와 같이, 화학식 I의 화합물과 크리조티닙의 조합은 c-MET 증폭된 NSCLC CDX 모델 NCI-H1993에서 화학식 I의 화합물 단독으로의 처리 또는 크리조티닙 단독으로의 처리에 비해 우수한 종양 성장 억제를 입증하였다.
상술한 실시양태는 명확한 이해를 위해 예시 및 실시예에 의해 다소 상세히 설명되었지만, 본 기술분야의 당업자는 첨부된 청구 범위 내에서 실시될 수 있는 특정 변화 및 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 본원에 제공된 각각의 참조문헌은 각각의 참조문헌이 개별적으로 참조로 편입되는 것과 같은 정도로 그 전문이 참조로 편입된다. 본 출원과 본원에 제공된 참조문헌 간에 상충이 있는 경우, 본 출원이 우선할 것이다.

Claims (139)

  1. FGFR 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  2. 제1항에 있어서, 대상체에서의 FGFR은 구성적으로 활성인 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암은 폐암인 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암은 간세포 암종인 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암은 담관암종인 방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, 및 FGF401로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 억제제는 에르다피티닙인 방법.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 억제제는 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 투여는 경구식인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위인 방법.
  14. 에르다피티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 간암을 치료하는 방법:
    .
  15. 제14항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 에르다피티닙은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  17. 제14항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  18. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 FGFR 억제제를 포함하는 키트.
  19. 제18항에 있어서, 화학식 I의 화합물 및 FGFR 억제제는 별도의 패키지에 존재하는 것인 키트.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함하는 키트.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, FGFR 억제제는 에르다피티닙, AZD4547, Ly2874455, CH5183284, NVP-BGJ398, INCB054828, 로가라티닙, PRN1371, TAS-120, BLU-554, H3B-6527, FGF401, 페미가티닙, 인피그라티닙, 도비티닙, 포나티닙, 닌테다닙, 및 피소가티닙 중 하나 이상인 키트.
  22. 클래스 1 돌연변이를 가진 B-Raf 단백질의 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  23. 제22항에 있어서, 클래스 1 돌연변이는 V600E인 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
  25. 제22항 또는 제23항에 있어서, 암은 흑색종인 방법.
  26. 제22항 또는 제23항에 있어서, 암은 갑상선암인 방법.
  27. 제22항 또는 제23항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  28. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  29. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 엔코라페닙인 방법.
  30. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 베무라페닙인 방법.
  31. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 다브라페닙인 방법.
  32. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 소라페닙인 방법.
  33. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제는 레고라페닙인 방법.
  34. 제22항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  35. 제22항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 투여는 경구식인 방법.
  36. 제22항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위인 방법.
  37. 제22항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, B-Raf 억제제의 투여량은 1 mg 내지 500 mg의 범위인 방법.
  38. B-Raf 억제제 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 결장직장암을 치료하는 방법:
    .
  39. 제38항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, 엔코라페닙은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  41. 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  42. 엔코라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  43. 베무라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  44. 다브라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  45. 소라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  46. 레고라페닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
  48. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 갑상선암인 방법.
  49. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종인 방법.
  50. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  51. 제22항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, B-Raf 억제제의 투여량은 B-Raf 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적은 것인 방법.
  52. 제22항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적은 것인 방법.
  53. 레고라페닙과 조합한 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포 집단에서 ERK1/2 인산화를 억제하는 방법:
    .
  54. 제53항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 500 nM의 범위인 방법.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 엔코라페닙의 농도는 10 nM 내지 20 nM의 범위인 방법.
  56. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 B-Raf 억제제를 포함하는 키트.
  57. 제56항에 있어서, 화학식 I의 화합물 및 B-Raf 억제제는 별도의 패키지에 존재하는 것인 키트.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서, 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함하는 키트.
  59. 제56항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, B-Raf 억제제는 엔코라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 소라페닙, 및 레고라페닙 중 하나 이상인 키트.
  60. MEK 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  61. 제60항에 있어서, MEK 억제제는 MEK1을 선택적으로 억제하거나 MEK2를 선택적으로 억제하거나 MEK1과 MEK2 둘 모두를 선택적으로 억제하는 것인 방법.
  62. 제60항에 있어서, 암은 전이성인 방법.
  63. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
  64. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종인 방법.
  65. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 폐암인 방법.
  66. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 췌장암인 방법.
  67. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 유방암인 방법.
  68. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  69. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 트라메티닙, 코비메티닙, 비니메티닙, PD-0325901, 셀루메티닙 및 CI-1040으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  70. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 트라메티닙인 방법.
  71. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 코비메티닙인 방법.
  72. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 비니메티닙인 방법.
  73. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 PD-325901인 방법.
  74. 제60항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 CI-1040인 방법.
  75. 제60항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  76. 제60항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 투여는 경구식인 방법.
  77. 제60항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위인 방법.
  78. 제60항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제의 투여량은 1일 1 mg 내지 500 mg의 범위인 방법.
  79. MEK 억제제 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법:
    .
  80. 제79항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, 비니메티닙 또는 트라메티닙은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  82. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  83. 비니메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  84. 트라메티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
  86. 제83항 또는 제84항에 있어서, 암은 폐암인 방법.
  87. 제83항 또는 제84항에 있어서, 암은 흑색종인 방법.
  88. 제83항 또는 제84항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  89. 제60항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제의 투여량은 MEK 억제제를 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적은 것인 방법.
  90. 제60항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 화학식 I의 화합물을 사용하는 단독요법에 대해 요구되는 투여량보다 적은 것인 방법.
  91. 비니메티닙 또는 트라메티닙과 조합한 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는, ERK1/2 인산화를 억제하는 방법:
    .
  92. 제91항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 농도는 1 nM 내지 1,000 nM의 범위인 방법.
  93. 제91항 또는 제92항에 있어서, MEK 억제제의 농도는 10 nM 내지 500 nM의 범위인 방법.
  94. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MEK 억제제를 포함하는 키트.
  95. 제94항에 있어서, 화학식 I의 화합물 및 MEK 억제제는 별도의 패키지에 존재하는 것인 키트.
  96. 제94항 또는 제95항에 있어서, 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함하는 키트.
  97. 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, MEK 억제제는 트라메티닙 또는 비니메티닙 중 하나 이상인 키트.
  98. MET 억제제와 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체를 치료하는 방법:
    .
  99. 제98항에 있어서, MET 억제제는 또한 ALK 억제제, ROS1 억제제, 또는 둘 모두인 방법.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 암은 비-소세포 폐암인 방법.
  101. 제98항 또는 제99항에 있어서, 암은 위암인 방법.
  102. 제98항 또는 제99항에 있어서, 암은 위선암인 방법.
  103. 제98항 또는 제99항에 있어서, 암은 췌관 선암(PDAC)인 방법.
  104. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 및 티반티닙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  105. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 크리조티닙인 방법.
  106. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 테포티닙인 방법.
  107. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 사보리티닙인 방법.
  108. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 카보잔티닙인 방법.
  109. 제98항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 티반티닙인 방법.
  110. 제98항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 MAPK 경로 억제제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  111. 제98항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 투여는 경구식인 방법.
  112. 제98항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물의 투여량은 1일 10 mg 내지 500 mg의 범위인 방법.
  113. 제98항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 억제제의 투여량은 1일 20 mg 내지 400 mg의 범위인 방법.
  114. 크리조티닙과 조합하여 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 치료적 유효량을 대상체에 경구 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 위암을 치료하는 방법:
    .
  115. 제114항에 있어서, 화학식 I의 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  116. 제114항 또는 제115항에 있어서, 크리조티닙은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  117. 제114항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  118. 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 MET 억제제를 포함하는 키트.
  119. 제118항에 있어서, 화학식 I의 화합물 및 MET 억제제는 별도의 패키지에 존재하는 것인 키트.
  120. 제118항 또는 제119항에 있어서, 암 치료를 위해 대상체에 키트의 내용물을 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함하는 키트.
  121. 제118항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, MET 억제제는 크리조티닙, 테포티닙, 사보리티닙, 카보잔티닙, 및 티반티닙 중 하나 이상인 키트.
  122. 제1항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물로서 제제화되는 것인 방법.
  123. 제1항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 경구용 조성물로서 제제화되는 것인 방법.
  124. 제1항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 1회 또는 2회 투여되는 것인 방법.
  125. 제1항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 연속 28일 주기에 걸쳐 투여되는 것인 방법.
  126. 제1항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약 10 mg 내지 약 140 mg의 양으로 1일 1회 투여되는 것인 방법.
  127. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 1일 1회 투여되는 것인 방법.
  128. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 1일 1회 투여되는 것인 방법.
  129. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 6주의 기간에 걸쳐 투여되는 것인 방법.
  130. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여되는 것인 방법.
  131. 제1항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 3회 투여되는 것인 방법.
  132. 제131항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 주 중 1일차, 3일차, 및 5일차에 투여되는 것인 방법.
  133. 제1항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1주 4회 투여되는 것인 방법.
  134. 제133항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 2주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 3주 주기 동안 투여되는 것인 방법.
  135. 제133항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3주의 화합물의 투여 다음 1주의 화합물의 비투여를 포함하는 4주 주기 동안 투여되는 것인 방법.
  136. 제1항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1일 2회, 주당 2일 투여되는 것인 방법.
  137. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 8주의 기간에 걸쳐 투여되는 것인 방법.
  138. 제136항 또는 제137항에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매주 1일차 및 2일차에 투여되는 것인 방법.
  139. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 폐암, 위암, 간암, 결장암, 신장암, 유방암, 췌장암, 췌관 선암(PDAC), 소아 골수단구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 및 급성 골수성 백혈병으로부터 선택되는 것인 방법.
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