JP2023553421A - がんの治療において有用な１つ以上の８－ｈｅｔ－２－にコンジュゲーションによって連結された抗ｃｅａ抗体を含む免疫複合体、及びその使用 - Google Patents

がんの治療において有用な１つ以上の８－ｈｅｔ－２－にコンジュゲーションによって連結された抗ｃｅａ抗体を含む免疫複合体、及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン誘導体にコンジュゲーションによって連結された抗ＣＥＡ抗体を含む式Ｉの免疫複合体を提供する。本発明は、反応性官能基を含む８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン誘導体中間組成物も提供する。かかる中間組成物は、リンカーまたは連結部分を介した免疫複合体の形成に好適な基質である。本発明は、免疫複合体を用いてがんを治療する方法を更に提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照により全体が組み込まれる、２０２０年１２月１１日に出願された米国仮出願第６３／１２４，３２８号の優先権の利益を主張する。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、かつ参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２１年１２月３日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、１７０１９＿０１０ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、５５，２４８バイトのサイズである。
本発明は、概して、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン分子にコンジュゲートされた抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体を含む免疫複合体に関する。
アクセス不能な腫瘍に到達するために、及び／またはがん患者及び他の対象の治療選択肢を拡大するために、抗体及び免疫アジュバントの送達のための新たな組成物及び方法が必要とされている。本発明は、かかる組成物及び方法を提供する。
本発明は、概して、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン誘導体にコンジュゲーションによって連結された抗ＣＥＡ抗体を含む免疫複合体に関する。本発明は、反応性官能基を含む８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン誘導体中間組成物を更に対象とする。かかる中間組成物は、免疫複合体の形成に好適な基質であり、抗体は、リンカーＬによって、式：
Figure 2023553421000001
 を有する８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン（ＨｘＢｚ）部分に共有接合され得、式中、Ｈｅｔは、ヘテロシクリルジイル及びヘテロアリールジイルから選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは、Ｌに結合されている。Ｒ１－４及びＸ１－４置換基は、本明細書で定義されている。
本発明は、疾病、特にがんの治療におけるかかる免疫複合体の使用を更に対象とする。
本発明の一態様は、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分に共有結合しているリンカーに共有結合した抗ＣＥＡ抗体を含む免疫複合体である。
本発明の別の態様は、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物である。
本発明の別の態様は、治療有効量の、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分にコンジュゲーションによって連結された抗ＣＥＡ抗体を含む免疫複合体を投与することを含む、がんを治療するための方法である。
本発明の別の態様は、がんを治療するための１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分にコンジュゲーションによって連結された抗ＣＥＡ抗体を含む免疫複合体の使用である。
本発明の別の態様は、抗ＣＥＡ抗体と、１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分とのコンジュゲーションによって免疫複合体を調製する方法である。
マウスにおけるインビボ異種移植腫瘍モデルのグラフを示す。処理後の経時的な腫瘍体積を測定して、ＣＥＡ－高ヒト膵臓ＨＰＡＦ－ＩＩ腫瘍を有するマウスの腫瘍阻害における免疫複合体ＩＣ－２と、アイソタイプ免疫複合体（ＩＳＡＣ）及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２との有効性を比較した。 免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４（表３ａ）、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ヒト従来の樹状細胞（ｃＤＣ）濃縮初代細胞単離物との、ＣＥＡ－高ＭＫＮ－４５細胞の共培養におけるサイトカインＩＬ－１２ｐ７０誘導のグラフを示す。 免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ＣＥＡ－高ＭＫＮ－４５細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養におけるサイトカインＴＮＦα（腫瘍壊死因子アルファ）誘導のグラフを示す。 免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ＣＥＡ－高ＭＫＮ－４５細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養におけるＩＬ－６（インターロイキン－６）誘導のグラフを示す。 免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ＣＥＡ－高ＭＫＮ－４５細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養におけるサイトカインＩＦＮγ（インターフェロンガンマ）誘導のグラフを示す。 免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ＣＥＡ－高ＭＫＮ－４５細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養におけるサイトカインＣＣＬ２誘導のグラフを示す。 ＣＥＡ－高ＨＰＡＦＩＩ細胞における様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２で処理されたＭ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージによる貪食のグラフを示す。ＣＴＧ標識腫瘍－ＩＣ－２免疫複合体を、Ｍ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージと２：１のエフェクター対標的比でインキュベートした。４時間後、ＣＴＧシグナルが陽性のエフェクター細胞上でフローサイトメトリーゲーティングによって貪食を測定した。３人のドナーからの平均＋／－標準偏差がグラフに示されている。 ＣＥＡ－培地ＬｏＶｏ細胞における様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２で処理されたＭ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージによる貪食のグラフを示す。ＣＴＧ標識腫瘍－ＩＣ－２免疫複合体を、Ｍ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージと２：１のエフェクター対標的比でインキュベートした。４時間後、ＣＴＧシグナルが陽性のエフェクター細胞上でフローサイトメトリーゲーティングによって貪食を測定した。３人のドナーからの平均＋／－標準偏差がグラフに示されている。 ＣＥＡ－低ＬＳ－１７４Ｔ細胞における様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２で処理されたＭ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージによる貪食のグラフを示す。ＣＴＧ標識腫瘍－ＩＣ－２免疫複合体を、Ｍ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージと２：１のエフェクター対標的比でインキュベートした。４時間後、ＣＴＧシグナルが陽性のエフェクター細胞上でフローサイトメトリーゲーティングによって貪食を測定した。３人のドナーからの平均＋／－標準偏差がグラフに示されている。 ＣＥＡ－陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２で処理されたＭ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージによる貪食のグラフを示す。ＣＴＧ標識腫瘍－ＩＣ－２免疫複合体を、Ｍ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージと２：１のエフェクター対標的比でインキュベートした。４時間後、ＣＴＧシグナルが陽性のエフェクター細胞上でフローサイトメトリーゲーティングによって貪食を測定した。３人のドナーからの平均＋／－標準偏差がグラフに示されている。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＴＮＦα（腫瘍壊死因子アルファ）サイトカインレベルのグラフを示す。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＩＬ－６（インターロイキン－６）サイトカインレベルのグラフを示す。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＣＸＣＬ１０サイトカインレベルのグラフを示す。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＴＮＦα（腫瘍壊死因子アルファ）サイトカインレベルのグラフを示す。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＣＤ４０表面マーカー誘導レベルのグラフを示す。 様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、分泌ＣＤ８６表面マーカー誘導レベルのグラフを示す。
ここで、本発明のある特定の実施形態を詳細に参照し、それらの例は添付の構造及び式において図示される。本発明は、列挙された実施形態と併せて説明されるが、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定するようには意図されていないことが理解されるであろう。むしろ、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る全ての代替物、修正、及び等価物を包含するよう意図されている。
当業者であれば、本発明の実施において使用され得る、本明細書に記載されるものと類似または同等の多くの方法及び材料を認識するであろう。本発明は、記載された方法及び材料に決して限定されない。
定義
「免疫複合体」または「免疫刺激抗体複合体」という用語は、リンカーを介してアジュバント部分に共有結合する抗体構築物を指す。「アジュバント」という用語は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。
「アジュバント部分」は、例えば、本明細書に記載するように、リンカーを介して抗体構築物に共有結合するアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体構築物に結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体構築物からの切断（例えば、酵素切断）後に免疫応答を誘発することができる。
「アジュバント」は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。
「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」という用語は、病原体関連分子パターンを認識し、先天性免疫における重要なシグナル伝達要素として機能する、高度に保存された哺乳類タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンが豊富な反復を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む特徴的な構造を共有する。
「トール様受容体７」及び「ＴＬＲ７」という用語は、公的に入手可能なＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９９０２６、またはマウスＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７６に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。
「トール様受容体８」及び「ＴＬＲ８」という用語は、公的に入手可能なＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９５４４１、またはマウスＴＬＲ８ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７７に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。
「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８）に直接的または間接的に結合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達における任意の検出可能な差異は、アゴニストがＴＬＲを刺激または活性化することを示すことができる。シグナル伝達の差異は、例えば、標的遺伝子の発現、シグナル伝達成分のリン酸化、核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）などの下流要素の細胞内局在化、ある特定の成分（ＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）など）と他のタンパク質もしくは細胞内構造との関連、またはキナーゼ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）など）などの成分の生化学的活性の変化として現れることができる。
「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子またはその断片からの抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含むポリペプチドを指す。「抗体」という用語は、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性を示す抗体断片を包含する。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、テトラマーを含む。各四量体は、２つの同一の対のポリペプチド鎖から構成されており、各対は、ジスルフィド結合によって接続された１つの「軽い」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重い」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖は、免疫グロブリンドメインと呼ばれる構造ドメインで構成されている。これらのドメインは、サイズ及び機能、例えば、軽鎖及び重鎖上の可変ドメインまたは領域（それぞれ、ＶＬ及びＶＨ）、ならびに軽鎖及び重鎖上の定常ドメインまたは領域（それぞれ、ＣＬ及びＣＨ）によって異なるカテゴリーに分類される。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識、すなわち、抗原結合ドメインを担うパラトープと呼ばれる、約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域を定義する。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、これは、それぞれ、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定義する。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖からなる約１５０ｋＤａの大分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖及び約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖、したがって、四量体四級構造を含有する。２つの重鎖は、ジスルフィド結合によって互いに連結されており、各々軽鎖に連結されている。得られる四量体は、２つの同一の半分を有し、それらは一緒にＹ様形状を形成する。フォークの各末端は、同一の抗原結合ドメインを含有する。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）があり、血清中のそれらの存在量の順に命名される（すなわち、ＩｇＧ１が最も多く存在する）。典型的には、抗体の抗原結合ドメインは、がん細胞への結合の特異性及び親和性において最も重要であろう。
「抗体構築物」は、（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む抗体または融合タンパク質を指す。
いくつかの実施形態では、結合剤は、抗原結合抗体「断片」であり、これは、抗体の少なくとも抗原結合領域を、単独で、または抗原結合構築物を一緒に構成する他の成分とともに含む構築物である。例えば、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片からなる二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）軽度の還元条件を使用してＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を破壊することから生じるＦａｂ’断片、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、及び（ｖｉ）２つのドメインが、単一のポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって結合される、Ｆｖ断片の２つのドメイン（すなわち、ＶＬ及びＶＨ）からなる一価の分子である単一鎖（ｓｃＦｖ）を含む、多くの異なる種類の抗体「断片」は、当該技術分野で既知である。
抗体または抗体断片は、より大きな構築物、例えば、抗体断片の更なる領域への複合体または融合構築物の一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域に融合され得る。他の実施形態では、抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、例えば、膜貫通ドメイン（任意選択的に、介在するリンカーまたは「茎」（例えば、ヒンジ領域）とともに）及び任意の細胞間シグナル伝達ドメインに融合することによって、キメラ抗原受容体またはキメラＴ細胞受容体の一部であり得る。
「エピトープ」とは、抗原結合ドメインが結合する（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープにおける）抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基を意味する。抗原決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グループからなり、通常、特定の三次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体の３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及び（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲが存在する。ＦｃγＲファミリーは、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーを含む。Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に対する異なる親和性も有する。
本明細書で参照される核酸またはアミノ酸配列「同一性」は、目的の核酸またはアミノ酸配列を、参照核酸またはアミノ酸配列と比較することによって判定することができる。パーセント同一性は、最適にアラインメントされた目的の配列と参照配列との間で同じ（すなわち、同一である）ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数を、最長の配列の長さ（すなわち、目的の配列または参照配列のいずれかの長さのいずれか長い方）で割ったものである。配列のアラインメント及びパーセント同一性の計算は、利用可能なソフトウェアプログラムを使用して行うことができる。かかるプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ－Ｗ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅ、ＡＬＩＧＮ（核酸及びアミノ酸配列のアラインメントのための）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴｎなど）、及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ、及びＳＳＥＡＲＣＨ）（配列アラインメント及び配列類似性検索のための）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０（１９９０）、Ｂｅｉｇｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０６（１０）：３７７０－３７７５（２００９）、Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐｒｏｂａｌｉｓｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（２００９），Ｓｏｄｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２１（７）：９５１－９６０（２００５）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５（１７）：３３８９－３４０２（１９９７）、及びＧｕｓｆｉｅｌｄ，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｏｎ Ｓｔｒｉｎｇｓ，Ｔｒｅｅｓ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ（１９９７）を参照されたい。配列のパーセント（％）同一性はまた、例えば、１００ｘ［（同一の位置）／ｍｉｎ（ＴＧＡ、ＴＧＢ）］として計算することができ、ＴＧＡ及びＴＧＢは、ＴＧＡ及びＴＧＢを最小化するアラインメントにおけるペプチド配列Ａ及びＢにおける残基及び内部ギャップ位置の数の合計である。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏｌＢｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４）を参照されたい。
結合剤は、一緒に抗原結合部位を形成するＩｇ重鎖及び軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。重鎖及び軽鎖可変領域の各々は、フレームワーク領域によって連結された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むポリペプチドである。結合剤は、Ｉｇ重鎖及び軽鎖を含む、当該技術分野で既知の様々な種類の結合剤のいずれかであり得る。例えば、結合剤は、抗体、抗原結合抗体「断片」、またはＴ細胞受容体であり得る。
「バイオシミラー」は、例えば、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、ＭＮ－１４、ｈＭＮ１４、免疫医学）ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．２１９６４９－０７－７）などのＣＥＡ標的化抗体と同様の活性特性を有する承認された抗体構築物を指す。
「バイオベター」は、ラベツズマブなどの以前に承認された抗体構築物の改良である承認された抗体構築物を指す。バイオベターは、以前に承認された抗体構築物に対して１つ以上の修飾（例えば、変化したグリカンプロファイル、または独自のエピトープ）を有することができる。バイオベターは、既存のバイオ医薬品と同じクラスの組換えタンパク質薬であるが、同一ではなく、元のものよりも優れている。バイオベターは、新薬だけではなく、薬のジェネリック版でもない。バイオシミラー及びバイオベターは、両方とも、生物学的製剤の変異体であり、前者は原薬に近いコピーであり、後者は有効性、安全性、及び忍容性または投与計画の点で改善されている。
「アミノ酸」は、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に組み込まれ得る任意のモノマー単位を指す。アミノ酸には、天然に存在するα－アミノ酸及びその立体異性体、ならびに非天然（天然に存在しない）アミノ酸及びその立体異性体が含まれる。所与のアミノ酸の「立体異性体」は、同じ分子式及び分子内結合を有するが、結合及び原子の異なる三次元配列（例えば、Ｌ－アミノ酸及び対応するＤ－アミノ酸）を有する異性体を指す。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ結合型グリカン、Ｏ結合型グリカン、ホスホグリカン、Ｃ結合型グリカン、またはグリピケーション）、または脱グリコシル化することができる。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３つの文字記号またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１つの文字記号のいずれかによって参照されてもよい。
天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するαアミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、限定されないが、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－スレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（ＤーＴｙｒ）、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
天然に存在するアミノ酸には、シトルリン（Ｃｉｔ）などの翻訳後修飾によってタンパク質中に形成されるものが含まれる。
非天然（天然に存在しない）アミノ酸としては、限定されないが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するＬまたはＤ構成のいずれかのアミノ酸類似体、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ置換グリシン、及びＮ－メチルアミノ酸が挙げられる。例えば、「アミノ酸類似体」は、天然に存在するアミノ酸（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合した炭素）と同じ基本的な化学構造を有するが、修飾された側鎖基または修飾されたペプチド骨格、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、及びメチオニンメチルスルホニウムを有する非天然アミノ酸であり得る。「アミノ酸模倣物」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化合物を指す。
「リンカー」は、化合物または材料中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、免疫複合体中の抗体構築物にアジュバント部分を共有結合させる役割を果たすことができる。
「連結部分」は、化合物または材料中の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部分は、免疫複合体中の抗体にアジュバント部分を共有結合させる役割を果たすことができる。タンパク質及び他の材料に連結部分を連結するための有用な結合としては、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネート、及びチオ尿素が挙げられるが、これらに限定されない。
「二価」は、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含有する化学部分を指し、多価連結部分は、更なる官能基を連結するための更なる結合点を有することができる。二価のラジカルは、接尾辞「ジイル（ｄｉｙｌ）」で示され得る。例えば、二価連結部分としては、二価ポリ（エチレングリコール）、二価シクロアルキル、二価ヘテロシクロアルキル、二価アリール、及び二価ヘテロアリール基などの二価ポリマー部分が挙げられる。「二価のシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基」は、分子または材料内の２つの部分を共有結合的に連結するための２つの結合点を有するシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、置換されるか、または置換されなくてもよい。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
波線（「
Figure 2023553421000002
 」）は、指定された化学部分の結合点を表す。指定された化学部分に２本の波線が存在する場合、化学部分は、両側、すなわち、左から右または右から左に読まれるように使用され得ることが理解されるであろう。
「アルキル」は、示される炭素原子の数を有する直線状（線状）または分岐状の飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルは、任意の数の炭素、例えば、１～１２個を含むことができる。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ２ＣＨ３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ３）２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ３）３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１－ヘキシル（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２－メチル－２－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３－メチル－３－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２－メチル－３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３－ジメチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３－ジメチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換されるか、または置換されなくてもよい。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
「アルキルジイル」という用語は、二価のアルキルラジカルを指す。アルキルジイル基の例としては、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルジイル基は、「アルキレン」基とも称され得る。
「アルケニル」は、示される炭素原子の数と、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合であるｓｐ２と、を有する、直線状（線状）または分枝状の、不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルケニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含み得る。アルケニル基は、「シス」及び「トランス」配向、または代替的に、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルである。例としては、エチレニルまたはビニル（－ＣＨＣＨ２）、アリル（－ＣＨ２ＣＨＣＨ２）、ブテニル、ペンテニル、及びその異性体が挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、置換されるか、または置換されなくてもよい。「置換アルケニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
「アルケニレン」または「アルケニルジイル」という用語は、直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチレニレンまたはビニレン（－ＣＨＣＨ－）、アリル（－ＣＨ２ＣＨＣＨ－）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキニル」は、示される炭素原子の数と、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合である、ｓｐと、を有する、直線状（線状）または分枝状の不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含み得る。例えば、Ｃ２－Ｃ６アルキニルは、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びその異性体を含むが、これらに限定されない。アルキニル基は、置換されるか、または置換されなくてもよい。「置換アルキニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換され得る。
「アルキニレン」または「アルキニルジイル」という用語は、二価のアルキニルラジカルを指す。
「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環式環」、及び「シクロアルキル」という用語は、３～１２個の環原子、または示される原子の数を含有する飽和または部分的不飽和、単環式、縮合二環式、または架橋多環式環アセンブリを指す。飽和単環式炭素環式環としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが挙げられる。飽和二環式及び多環式炭素環式環は、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン、及びアダマンタンを含む。炭素環式基はまた、環内に１つ以上の二重または三重結合を有する、部分的に不飽和であり得る。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基としては、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３－及び１，４－異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクタジエン（１，３－、１，４－及び１，５－異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが挙げられるが、これらに限定されない。
「シクロアルキルジイル」という用語は、二価のシクロアルキルラジカルを指す。
「アリール」は、親芳香族環系の単一の炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される６～２０個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ２０）の一価芳香族炭化水素ラジカルを指す。アリール基は、単環式であってもよく、二環式もしくは三環式基を形成するために縮合していてもよく、または結合によって連結して、ビアリール基を形成してもよい。代表的なアリール基としては、フェニル、ナフチル、及びビフェニルが挙げられる。他のアリール基としては、メチレン連結基を有するベンジルが挙げられる。いくつかのアリール基は、フェニル、ナフチル、またはビフェニルなどの６～１２個の環メンバーを有する。他のアリール基は、フェニルまたはナフチルなどの６～１０個の環メンバーを有する。
「アリレン」または「アリールジイル」という用語は、親芳香族環系の２つの炭素原子から２つの水素原子を除去することによって誘導される６～２０個の炭素原子（Ｃ６～Ｃ２０）の二価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリールジイル基は、例示的な構造において「Ａｒ」として表される。アリールジイルには、飽和、部分的に不飽和の環、または芳香族炭素環式環に縮合した芳香族環を含む二環式ラジカルが含まれる。典型的なアリールジイル基としては、ベンゼン（フェニルジイル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２－ジヒドロナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなどに由来するラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールジイル基はまた、「アリレン」とも称され、任意選択的に、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換される。
「複素環」、「ヘテロシクリル」、及び「複素環式環」という用語は、本明細書では互換的に使用され、少なくとも１つの環原子が窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣである、３～約２０個の環原子の飽和または部分的不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重及び／または三重結合を有する）炭素環式ラジカルを指し、１つ以上の環原子は、任意選択的に、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。ヘテロ環は、３～７個の環メンバー（２～６個の炭素原子、及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～４個のヘテロ原子）を有する単環、または７～１０個の環メンバー（４～９個の炭素原子、及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～６個のヘテロ原子）を有するビシクロ、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系であってもよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７、及び９章、“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０ ｔｏ ｐｒｅｓｅｎｔ）、特に第１３、１４、１６、１９、及び２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている．「ヘテロシクリル」はまた、複素環ラジカルが飽和、部分的不飽和環、または芳香族炭素環式もしくは複素環式環と縮合されるラジカルを含む。複素環式環の例としては、モルホリン－４－イル、ピペリジン－１－イル、ピペラジニル、ピペラジン－４－イル－２－オン、ピペラジン－４－イル－３－オン、ピロリジン－１－イル、チオモルホリン－４－イル、Ｓ－ジオキソチオモルホリン－４－イル、アゾカン－１－イル、アゼチジン－１－イル、オクタヒドロピリド［１，２－ａ］ピラジン－２－イル、［１，４］ジアゼパン－１－イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３－アザビシコ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ－インドリルキノリジニル、及びＮ－ピリジル尿素が挙げられるが、これらに限定されない。スピロヘテロシクリル部分もまた、この定義の範囲内に含まれる。スピロヘテロシクリル部分の例としては、アザスピロ［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルが挙げられる。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意選択的に、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して置換される。
「ヘテロシクリルジイル」という用語は、少なくとも１つの環原子が窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣである、３～約２０個の環原子の二価、飽和、または部分的不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重及び／または三重結合を有する）炭素環式ラジカルを指し、１つ以上の環原子は、任意選択的に、記載されるように、１つ以上の置換基で独立して置換される。５員及び６員ヘテロシクリルジイルの例としては、モルホリニルジイル、ピペリジニルジイル、ピペラジニルジイル、ピロリジニルジイル、ジオキサニルジイル、チオモルホリルジイル、及びＳ－ジオキソチオモルホリルジイルが挙げられる。
「ヘテロアリール」という用語は、５、６、または７員環の一価芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する、５～２０個の原子の縮合環系（少なくとも１つは芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２－ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば、４－ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意選択的に、本明細書に記載の１つ以上の置換基で独立して置換される。
「ヘテロアリールジイル」という用語は、５、６、または７員環の二価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１つ以上のヘテロ原子を含有する、５～２０個の原子の縮合環系（少なくとも１つは芳香族である）を含む。５員及び６員ヘテロアリールジイルの例としては、ピリジルジイル、イミダゾリルジイル、ピリミジルジイル、ピラゾリルジイル、トリアゾリルジイル、ピラジニルジイル、テトラゾリルジイル、フリルジイル、チエニルジイル、イソオキサゾリルジルジイル、チアゾリルジイル、オキサジアゾリルジイル、オキサゾリルジイル、イソチアゾリルジイル、及びピロリルジイルが挙げられる。
複素環またはヘテロアリール基は、そのようなことが可能な場合、炭素（炭素結合）または窒素（窒素結合）結合であってもよい。限定ではなく例として、炭素結合複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位に結合される。
限定ではなく例として、窒素結合複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾールまたはβ－カルボリンの９位に結合される。
「ハロ」及び「ハロゲン」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を指す。
「カルボニル」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、Ｃ（＝Ｏ）または－Ｃ（＝Ｏ）－、すなわち、酸素に二重結合し、かつカルボニルを有する部分内の他の２つの基に結合した炭素原子を指す。
本明細書で使用される場合、「四級アンモニウム塩」という語句は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはブチルなどのＣ１～Ｃ４アルキル）で四級化された三級アミンを指す。
用語「治療する」、「治療」、及び「治療すること」は、軽減、寛解、症状の緩和、もしくは症状、傷害、病理、もしくは疾患を患者により許容可能にすること、症状の進行の速度の低下、症状もしくは疾患の頻度もしくは持続時間の低下、または状況によっては症状の発症を予防するなどの任意の客観的または主観的パラメータを含む、傷害、病理、疾患（例えば、がん）、または症状（例えば、認知障害）の治療または改善における成功の任意の兆候を指す。症状の治療または改善は、例えば、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づいてもよい。
「がん」、「新生物」、及び「腫瘍」という用語は、細胞が、細胞増殖に対する制御の著しい喪失を特徴とする異常な増殖表現型を示すように、自律的な、無制御な増殖を示す細胞を指すために本明細書で使用される。本発明の文脈における検出、分析、及び／または治療のための目的の細胞としては、がん細胞（例えば、がんを有する個体由来のがん細胞）、悪性がん細胞、転移前がん細胞、転移性がん細胞、及び非転移性がん細胞が挙げられる。ほぼ全ての組織のがんが知られている。「がん負荷」という語句は、対象におけるがん細胞の量またはがん体積を指す。したがって、がん負荷を低減することは、対象におけるがん細胞の数またはがん細胞体積を低減することを指す。本明細書で使用される場合、「がん細胞」という用語は、がん細胞である（例えば、個体が治療され得る、例えば、がんを有する個体から単離され得るがんのいずれかからの）、またはがん細胞、例えば、がん細胞のクローンに由来する任意の細胞を指す。例えば、がん細胞は、確立されたがん細胞株からであってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞であってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞であってもよいなどである。いくつかの実施形態では、用語はまた、がん細胞の一部分、がん細胞のサブ細胞部分、細胞膜部分、または細胞溶解物を指す場合もある。癌腫、肉腫、膠芽腫、黒色腫、リンパ腫、及び骨髄腫などの固形腫瘍、ならびに白血病などの循環癌を含む、多くの種類のがんが当業者に既知である。
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、固形腫瘍癌（例えば、皮膚、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、及び神経内分泌）、及び液体癌（例えば、血液癌）、癌腫、軟部腫瘍、肉腫、変形腫、黒色腫、白血病、リンパ腫、ならびに微小残存病変を含み、かつ原発性及び転移性腫瘍の両方を含む脳癌を含むが、これらに限定されない任意の形態のがんを含む。
がんの「病理学」には、患者の幸福を損なう全ての現象が含まれる。これには、異常なまたは制御不能な細胞増殖、転移、隣接細胞の正常な機能への干渉、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、炎症性または免疫学的応答の抑制または悪化、新生物、前悪性腫瘍、悪性腫瘍、ならびにリンパ節などの周囲または遠隔の組織または器官の浸潤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「がん再発」及び「腫瘍再発」という語句、ならびにその文法的変異形は、がんの診断後の腫瘍性細胞またはがん性細胞の更なる増殖を指す。特に、がん性組織において更なるがん性細胞増殖が生じたときに再発が生じ得る。同様に、「腫瘍拡散」は、腫瘍の細胞が局所的または遠隔の組織及び器官に拡散するときに生じ、したがって、腫瘍拡散は、腫瘍転移を包含する。「腫瘍浸潤」は、腫瘍増殖が局所的に広がり、正常な臓器機能の圧縮、破壊、または予防によって関与する組織の機能を損なうときに発生する。
本明細書で使用される場合、「転移」という用語は、元のがん性腫瘍の臓器に直接接続されていない臓器または身体部分におけるがん性腫瘍の増殖を指す。転移は、元のがん性腫瘍の臓器に直接接続されていない臓器または身体部分において検出することができない量のがん性細胞の存在である微小転移を含むと理解されよう。転移はまた、元の腫瘍部位からのがん細胞の離脱、及び身体の他の部分へのがん細胞の移動及び／または浸潤などのプロセスのいくつかのステップとして定義することができる。
「有効量」及び「治療有効量」という語句は、それが投与される治療効果をもたらす免疫複合体などの物質の用量または量を指す。正確な用量は、治療の目的に依存し、既知の技術を使用して当業者によって確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）、Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）、Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照されたい。）がんの場合、治療有効量の免疫複合体は、がん細胞の数を減少させ、腫瘍サイズを縮小させ、がん細胞の末梢臓器への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅くさせ、好ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅くさせ、好ましくは停止させ）、腫瘍増殖をある程度阻害し、及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和し得る。免疫複合体が、既存のがん細胞の増殖及び／または死滅を防止し得る限り、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん治療の場合、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価すること及び／または奏効率（ＲＲ）を判定することによって測定することができる。
「受容者」、「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、互換的に使用され、診断、治療、または療法が所望される任意の哺乳動物対象（例えば、ヒト）を指す。「哺乳類」とは、ヒト、飼育動物、及び家畜を含む哺乳類に分類される任意の動物、ならびにイヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ラクダなどの動物園の動物、スポーツ動物、またはペット動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。
本発明の文脈における「相乗的アジュバント」または「相乗的組み合わせ」という用語は、組み合わせることで、いずれかの単独投与と比較して免疫に対する相乗的効果を誘発する、受容体アゴニスト、サイトカイン、及びアジュバントポリペプチドなどの２つの免疫調節剤の組み合わせを含む。特に、本明細書に開示される免疫複合体は、特許請求されるアジュバント及び抗体構築物の相乗的組み合わせを含む。投与時のこれらの相乗的組み合わせは、例えば、抗体構築物またはアジュバントが他の部分の非存在下で投与される場合と比較して、免疫に対するより大きな効果を誘発する。更に、抗体構築物またはアジュバントのいずれかが単独で投与される場合と比較して、（抗体構築物の総数、または免疫複合体の一部として投与されるアジュバントの総数によって測定されるように）減少した量の免疫複合体を投与してもよい。
本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病変内、鼻腔内、または皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、髄腔内投与、または対象への徐放デバイス、例えば、ミニ浸透圧ポンプの移植を指す。
本明細書で数値を修正するために使用される場合、「約」及び「おおよそ」という用語は、数値の周囲の近い範囲を示す。したがって、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「おおよそＸ」は、０．９Ｘ～１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ～１．０５Ｘまたは０．９９Ｘ～１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「おおよそＸ」への言及は、少なくともＸ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘの値を具体的に示す。したがって、「約Ｘ」及び「おおよそＸ」は、例えば「０．９８Ｘ」の特許請求の範囲の制限を教示し、書面による記述サポートを提供することが意図される。
ＣＥＡ抗体
本発明の免疫複合体は、癌胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）を標的にする、結合する、または認識する抗体を含む。本発明の実施形態の範囲には、本明細書に記載の抗体構築物または抗原結合ドメインの機能的変異体が含まれる。本明細書で使用される場合、「機能的変異体」という用語は、親抗体構築物または抗原結合ドメインと実質的または有意な配列同一性または類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体構築物を指し、機能的変異体は、それが変異体である抗体構築物または抗原結合ドメインの生物学的活性を保持する。機能的変異体は、例えば、親抗体構築物または抗原結合ドメインと同様の程度に、同じ程度に、またはより高い程度に、ＣＥＡを発現する標的細胞を認識する能力を保持する、本明細書に記載の抗体構築物または抗原結合ドメイン（親抗体構築物または抗原結合ドメイン）の変異体を包含する。
抗体構築物または抗原結合ドメインに関して、機能的変異体は、例えば、アミノ酸配列において、抗体構築物または抗原結合ドメインと少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一であり得る。
機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。代替的または追加的に、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性が、親抗体構築物または抗原結合ドメインと比較して増加するように、機能的変異体の生物学的活性を増強し得る。
本発明の免疫複合体を含む抗体は、Ｆｃ操作変異体を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ受容体に調節された結合をもたらすＦｃ領域の変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）のうちの１つ以上、ならびに／または以下のアミノ酸：Ｅ３４５Ｒ、Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８、及びＡ３３０における１つ以上の変異を含むことができる。Ｆｃ受容体結合を調節するための追加のＦｃ領域修飾は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０及びＵＳ７４１６７２６及びＵＳ５６２４８２１に記載され、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の免疫複合体を含む抗体は、アフコシル化などの糖鎖変異体を含む。いくつかの実施形態では、結合剤のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域の変化したグリコシル化パターンを有するように修飾される。
本発明の抗体構築物または抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野で既知であり、ある特定の物理的及び／または化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負荷電極性アミノ酸に置換された酸性／負荷電極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸に置換された非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）、別の塩基性／正荷電極性アミノ酸に置換された塩基性／正荷電極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する別の非荷電アミノ酸に置換された極性側鎖を有する非荷電アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、ベータ分岐側鎖を有する別のアミノ酸に置換されたベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、及びＶａｌ）、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒ）などであり得る。
抗体構築物または抗原結合ドメインは、本質的に、本明細書に記載の指定されたアミノ酸配列（複数可）の配列からなることができ、その結果、他の成分、例えば、他のアミノ酸は、抗体構築物または抗原結合ドメイン機能的変異体の生物学的活性を実質的に変化させない。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含有し、修飾は、Ｆｃ領域の１つ以上のＦｃ受容体への結合を調節する。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分にコンジュゲートされた抗体）は、Ｆｃ領域内の変異を欠く天然抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及び／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））への調節された結合（例えば、結合の増加または結合の減少）をもたらす、Ｆｃ領域内の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失、及び／または置換）を含有する。いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を減少させる、Ｆｃ領域内の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換）を含有する。いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域内の変異を欠く天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体の結合を低減する一方で、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、及び／またはＦｃＲγＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合を維持するか、または増加した結合を有する、抗体のＦｃ領域内の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換）を含有する。いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を増加させる、Ｆｃ領域内の１つ以上の修飾を含有する。
いくつかの実施形態では、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域と比較して、抗体のＦｃ領域内の変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組み合わせであり得る。「天然Ｆｃ領域」は、「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、自然界に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるか、または天然抗体（例えば、セツキシマブ）に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域としては、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然に存在する変異体が挙げられる。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの種々のアロタイプを含む（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８）。
いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ受容体に、調節された結合をもたらすＦｃ領域の変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）、及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）のうちの１つ以上、ならびに／または以下のアミノ酸：Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８、及びＡ３３０における１つ以上の変異を含むことができる。Ｆｃ受容体結合を調節するための追加のＦｃ領域修飾は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０及びＵＳ７４１６７２６及びＵＳ５６２４８２１に記載され、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域の変化したグリコシル化パターンを有するように修飾される。
ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメイン内のＡｓｎ２９７残基でグリコシル化される。このＮ結合オリゴ糖は、コアヘプタサッカリド、Ｎ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）から構成される。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅ Ｆによるヘプタサッカリドの除去は、抗体Ｆｃ領域の構造変化をもたらすことが知られており、これは、ＦｃγＲの活性化に対する抗体結合親和性を著しく低下させ、エフェクター機能を低下させることができる。コアヘプタサッカリドは、多くの場合、ガラクトース、二分ＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で装飾され、これは、活性化及び阻害性ＦｃγＲへのＦｃ結合に差異的に影響する。更に、α２，６－シアル化がインビボでの抗炎症活性を増強する一方で、脱フコシル化は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の改善、ならびに抗体依存性細胞傷害性及び抗体依存性貪食の１０倍の増加をもたらすことが実証されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。
いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更するための修飾は、変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７は、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異する。ＦｃγＲ制御シグナル伝達を調節する抗体による免疫応答を制御するための方法は、例えば、米国特許第７，４１６，７２６号ならびに米国特許出願公開第２００７／００１４７９５号及び同第２００８／０２８６８１９号に記載されており、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体の抗体は、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含有するように修飾される。例えば、ハイブリドーマは、アフコシル化ｍＡｂ、脱アリル化ｍＡｂ、または脱グリコシル化Ｆｃを、増加したＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能を可能にする特定の変異で分泌するように遺伝子操作され得る。いくつかの実施形態では、本免疫複合体の抗体は、アフコシル化されるように操作される。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体内の抗体のＦｃ領域全体が、異なるＦｃ領域と交換され、その結果、抗体のＦａｂ領域が非天然のＦｃ領域にコンジュゲートされる。例えば、通常、ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含むセツキシマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、もしくはＩｇＡにコンジュゲートされてもよく、または通常、ＩｇＧ４Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＧ２にコンジュゲートされてもよい。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体は、記載のＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異などの１つ以上のアミノ酸修飾も含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書に記載の１つ以上のアミノ酸修飾も含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変更しない。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増加させる。
例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＣＥＡを特異的に認識し、結合する抗原結合ドメインを含む抗体構築物を含む。
癌胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）の発現の上昇は、腫瘍の様々な生物学的側面、特に腫瘍細胞接着、転移、細胞免疫機構の遮断、及び抗アポトーシス機能を有することに関与している。ＣＥＡは、細胞表面抗原であり、また、多くの癌腫の血液マーカーとして使用される。ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．２１９６４９－０７－７）は、ＭＮ－１４及びｈＭＮ１４としても知られており、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、結腸直腸癌の治療のために研究されている（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ５４（４）：３１５－３２７）。カンプトテシンアナログ（ラベツズマブゴビテカン、ＩＭＭＵ－１３０）にコンジュゲートされたラベツズマブは、ＣＥＡを標的とし、再発または難治性転移性結腸直腸癌の患者において研究されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２０１８），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１９６－２０３、Ｄｏｔａｎ，Ｅ．ｅｔ ａｌ（２０１７），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３５（９）：３３３８－３３４６）。また、１３１Ｉにコンジュゲートされたラベツズマブは、結腸癌及び他の固形悪性腫瘍の治療のための臨床試験において評価されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（１９９５），Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｕｐｐｌ．）５５（２３）：５９３５ｓ－５９４５ｓ、Ｌｉｅｒｓｃｈ，Ｔ．ｅｔ ａｌ（２００５），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２３（２７）：６７６３－６７７０、Ｓａｈｌｍａｎｎ，Ｃ．－Ｏ．ｅｔ ａｌ（２０１７），Ｃａｎｃｅｒ １２３（４）：６３８－６４９）。
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ６６７６９２４に開示されている、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号１の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＳＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＳＬＹＲＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号１
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号２－８の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
Figure 2023553421000003
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ６６７６９２４に開示されている、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号９の可変重鎖（ＶＨ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＳＳＧＦＤＦＴＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＨＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＳＬＹＦＧＦＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ 配列番号．９
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号１０～１６の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ６６７６９２４）。
Figure 2023553421000004
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ８６４２７４２に開示されている、ｈＰＲ１Ａ３配列番号１７の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号１７
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＰＲ１Ａ３配列番号１８～２４の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ８６４２７４２）。
Figure 2023553421000005
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＰＲ１Ａ３配列番号２５～３１の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ８６４２７４２）。
Figure 2023553421000006
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ７２３２８８８に開示されている、ｈＭＦＥ－２３配列番号３２の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＶＧＤＲＶＮＩＡＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＭＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号３２
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号３３～４０の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８８）。本実施形態は、ＬＦＲ１の２つの変異体、配列番号３３及び配列番号３４を含む。
Figure 2023553421000007
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号４１の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ７２３２８８８）。
ＱＶＫＬＥＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＳＹＭＨＷＬＲＱＧＰＧＱＲＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＦＴＴＤＴＳＡＮＴＡＹＬＧＬＳＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＥＧＴＰＴＧＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号４１
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号４２～４９の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８８）。本実施形態は、ＨＦＲ１の２つの変異体、配列番号４２及び配列番号４３を含む。
Figure 2023553421000008
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＳＭ３Ｅ配列番号５０の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含む（ＵＳ７２３２８８８）。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＶＳＶＧＤＲＶＴＩＡＣＳＡＳＳＳＶＰＹＭＨＷＬＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５０
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＳＭ３Ｅ配列番号５１～５６及び３８～３９の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７２３２８８８）。本実施形態は、ＬＦＲ１の２つの変異体、配列番号５１及び配列番号５２を含む。
Figure 2023553421000009
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号５７の可変軽鎖を含む。
ＱＴＶＬＳＱＳＰＡＩＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＴＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＳＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＷＳＳＫＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５７
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号５８～６４の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。
Figure 2023553421000010
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号６５の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＧＦＩＧＮＫＡＮＧＹＴＴＥＹＳＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＫＳＱＳＩＬＹＬＱＭＮＴＬＲＡＥＤＳＡＴＹＹＣＴＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ 配列番号６５。
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＮＰ－４配列番号６６～７２の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。
Figure 2023553421000011
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ７７７６３３０に開示されている、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号７３の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＧＥＳＶＤＩＦＧＶＧＦＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＮＥＤＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号７３
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号７４～８０の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ７７７６３３０）。
Figure 2023553421000012
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号８１の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ７７６６３３０）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＧＮＳＫＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＰＦＧＹＹＶＳＤＹＡＭＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号８１
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号８２～８８の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ７７７６３３０）。
Figure 2023553421000013
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ９６１７３４５に開示されている、ｈＡｂ２－３配列番号８９の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＦＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＶＹＮＴＲＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＨＹＧＴＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号８９
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＡｂ２－３配列番号９０～９６の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ９６１７３４５）。
Figure 2023553421000014
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号９７の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９６１７３４５）。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＧＧＳＬＳＬＳＣＡＡＳＧＦＶＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＴＰＥＲＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＩＴＹＡＰＳＴＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＨＹＦＧＳＳＧＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号９７
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ｈＡｂ２－３配列番号９８～１０４の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。
Figure 2023553421000015
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＵＳ９９８２０６３に開示されている、Ａ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１配列番号１０５の可変軽鎖（ＶＬカッパ）を含み、これは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
ＱＡＶＬＴＱＰＡＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＲＧＩＮＶＧＡＹＳＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＲＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＳＳＲＦＳＡＳＫＤＡＳＡＮＡＧＩＬＬＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＧＡＳＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ 配列番号１０５
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ａ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１配列番号１０６～１１２の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
Figure 2023553421000016
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ｂ９ＶＨ配列番号１１３の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１１３
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号１１４～１２１の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。本実施形態は、ＣＤＲ－Ｈ２の２つの変異体、配列番号１１７及び配列番号１１８を含む。
Figure 2023553421000017
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、Ｅ１２ＶＨ配列番号１２２の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＬＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１２２
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、配列番号１２３～１２９の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む（ＵＳ９９８２０６３）。
Figure 2023553421000018
本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体構築物または抗原結合ドメインは、ＰＲ１Ａ３ ＶＨ配列番号１３０の可変重鎖（ＶＨ）を含む（ＵＳ８６４２７４２）。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１３０
いくつかの実施形態では、抗体構築物は、Ｆｃドメインを更に含む。ある特定の実施形態では、抗体構築物は、抗体である。ある特定の実施形態では、抗体構築物は、融合タンパク質である。抗原結合ドメインは、一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）であり得る。合成ペプチドを介して軽抗体鎖のＶドメインに連結された抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む切断されたＦａｂ断片である一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）は、日常的な組換えＤＮＡ技術を使用して生成することができる。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製され得る。抗体構築物または抗原結合ドメインは、抗ＣＥＡ抗体の抗原結合ドメインの１つ以上の可変領域（例えば、２つの可変領域）を含んでもよく、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含有し、修飾は、Ｆｃ領域の１つ以上のＦｃ受容体への結合を調節する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＴＧＦβ１に結合することができる形質転換成長因子ベータ１（ＴＧＦβ１）受容体、またはその断片を含むことによって修飾される。例えば、受容体は、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体は、ヒトＴＧＦβ受容体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、本明細書に組み込まれるＵＳ９６７６８６３に記載されるＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）へのＣ末端融合を有する。「Ｆｃリンカー」を使用して、ＩｇＧをＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメインに結合させてもよい。Ｆｃリンカーは、標的への結合特異性を維持しながら、分子の適切な３次元折り畳みを可能にする短い可撓性ペプチドであってもよい。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体のＮ末端は、抗体構築物のＦｃに融合される（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、抗体構築物重鎖のＣ末端は、（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）ＴＧＦβ受容体に融合される。いくつかの実施形態では、抗体構築物重鎖のＣ末端リジン残基は、アラニンに変異される。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、グリコシル化されている。
いくつかの実施形態では、本免疫複合体中の抗体は、操作されたシステインがコンジュゲーションのために利用可能であるが、免疫グロブリン折り畳み及び組み立て、または抗原結合及びエフェクター機能を攪乱しない部位でのシステイン置換を介した、アジュバント、標識、または薬物部分の部位特異的コンジュゲーションを提供するシステイン操作抗体である（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２、Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ １１４（１３）：２７２１－２７２９、ＵＳ７５２１５４１、ＵＳ７７２３４８５、ＵＳ２０１２／０１２１６１５、ＷＯ２００９／０５２２４９）。「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体変異体」は、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換される抗体である。システイン操作抗体は、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピンアジュバント部分に、均一な化学量論を有する８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物としてコンジュゲートすることができる（例えば、単一の操作システイン部位を有する抗体では、１抗体当たり最大２つの８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分）。
いくつかの実施形態では、表３の免疫複合体を調製するために使用されるシステイン操作抗体は、軽鎖の１４９－リジン部位（ＬＣ Ｋ１４９Ｃ）に導入されたシステイン残基を有する。他の実施形態では、システイン操作抗体は、重鎖の１１８－アラニン部位（ＥＵナンバリング）（ＨＣ Ａ１１８Ｃ）に導入されたシステイン残基を有する。この部位は、代替的に、シーケンシャルナンバリングによって１２１またはＫａｂａｔナンバリングによって１１４の番号が付けられている。他の実施形態では、システイン操作抗体は、ＫａｂａｔナンバリングによるＧ６４ＣもしくはＲ１４２Ｃの軽鎖に、またはＫａｂａｔナンバリングによるＤ１０１Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、もしくはＴ２０５Ｃの重鎖に導入されたシステイン残基を有する。
８－ＨＥＴ－２－アミノベンザゼピンアジュバント化合物
本発明の免疫複合体は、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピンアジュバント部分を含む。本明細書に記載のアジュバント部分は、免疫応答を誘発する化合物（すなわち、免疫刺激剤）である。一般に、本明細書に記載のアジュバント部分は、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲは、脊椎動物における先天性免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス、及び真菌からの様々な病原体関連分子パターンを認識し、侵入病原体に対する第１の防御ラインとして機能する。ＴＬＲは、細胞発現及びそれらが開始するシグナル伝達経路の相違に起因して、重複しているが明確な生物学的応答を誘発する。（例えば、天然刺激または合成ＴＬＲアゴニストによって）係合されると、ＴＬＲは、アダプタータンパク質骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）を介した核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）の活性化及びＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員につながるシグナル伝達カスケードを開始する。次いで、ＩＲＡＫのリン酸化は、ＮＦ－κＢ阻害剤Ｉ－κＢのリン酸化をもたらすＴＮＦ－受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の動員をもたらす。その結果、ＮＦ－κＢは、細胞核に入り、サイトカインなどのＮＦ－κＢ結合部位を含有するプロモーターを持つ遺伝子の転写を開始する。ＴＬＲシグナル伝達のための追加の調節モードには、ＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）のＴＩＲドメイン含有アダプター誘導インターフェロンβ（ＴＲＩＦ）依存性誘導、ならびにＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介したＭｙＤ８８独立経路の活性化が含まれ、インターフェロン応答因子３（ＩＲＦ３）のリン酸化につながる。同様に、ＭｙＤ８８依存性経路は、ＩＲＦ５及びＩＲＦ７を含むいくつかのＩＲＦファミリーメンバーも活性化するが、ＴＲＩＦ依存性経路は、ＮＦ－κＢ経路も活性化する。
典型的には、本明細書に記載のアジュバント部分は、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニストである。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は両方とも、単球及び樹状細胞において発現する。ヒトでは、ＴＬＲ７は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞においても発現される。ＴＬＲ８は、主に、骨髄起源の細胞、すなわち、単球、顆粒球、及び骨髄樹状細胞において発現される。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルス侵入に応答する手段として、細胞内の「外来」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８アゴニストによるＴＬＲ８発現細胞の処置は、高レベルのＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらし得る。同様に、ＴＬＲ７アゴニストによるｐＤＣなどのＴＬＲ７発現細胞の刺激は、高レベルのＩＦＮ－α及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらし得る。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８関与及び結果として生じるサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化し、腫瘍破壊につながる多様な先天的及び獲得された免疫応答メカニズムを駆動することができる。
本発明の例示的な８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン化合物（Ｈｘ）を表１に示す。各化合物を合成し、精製し、質量分析によって特徴付け、示された質量を有することが示された。追加の実験手順は、実施例に見られる。ヒトＴＬＲ７またはヒトＴＬＲ８を発現するヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３ＮＦＫＢレポーター細胞に対する活性を、実施例２０２に従って測定した。表１の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン化合物は、がん及び他の障害を治療するための有用な治療活性を予測し得る、ＴＬＲ８アゴニスト選択性の驚くべき及び予期しない特性を実証する。
Figure 2023553421000019
Figure 2023553421000020
Figure 2023553421000021
Figure 2023553421000022
Figure 2023553421000023
Figure 2023553421000024
Figure 2023553421000025
Figure 2023553421000026
Figure 2023553421000027
Figure 2023553421000028
Figure 2023553421000029
Figure 2023553421000030
８－ＨＥＴ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物
本発明の免疫複合体は、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物、ＨｘＢｚＬとの抗ＣＥＡ抗体のコンジュゲーションによって調製される。８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物は、リンカー単位に共有結合した８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン（ＨｘＢｚ）部分を含む。リンカー単位は、本免疫複合体の安定性、透過性、溶解性、及び他の薬物動態、安全性、及び有効性の特性に影響を与える官能基及びサブユニットを含む。リンカー単位は、抗体の反応性官能基と反応する、すなわちコンジュゲートする反応性官能基を含む。例えば、抗体のリジン側鎖アミノなどの求核基は、ＨｘＢｚＬリンカー化合物の求電子反応性官能基と反応して、本免疫複合体を形成する。また、例えば、抗体のシステインチオールは、Ｈｘ－リンカー化合物のマレイミドまたはブロモアセトアミド基と反応して、本免疫複合体を形成する。
ＨｘＢｚＬリンカー化合物に好適な求電子反応性官能基としては、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ－ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）、カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）、ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）、マレイミド（チオール反応性）、Ｎ－ヨードアセトアミドなどのハロゲン化アセトアミド（チオール反応性）、アリールアジド（一級アミン反応性）、フッ素化アリールアジド（炭素水素（Ｃ－Ｈ）挿入による反応性）、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）、テラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル（アミン反応性）、イミドエステル（アミン反応性）、イソシアネート（ヒドロキシル反応性）、ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒフォロキシル反応性）、ピリジルジスルフィド（チオール反応性）、及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ－Ｈ結合挿入を介する反応性）が挙げられるが、これらに限定されない。更なる試薬としては、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明は、免疫複合体の設計、調製、及び使用に対する限界及び課題に対する解決策を提供する。いくつかのリンカーは、血流中で不安定であり得、それによって、標的細胞内での内在化の前に、許容できない量のアジュバント／薬物を放出する（Ｋｈｏｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ ７（１３）：１６３３－１６４８）。他のリンカーは、血流中の安定性を提供し得るが、細胞内放出有効性は、負の影響を受ける可能性がある。所望の細胞内放出を提供するリンカーは、典型的には、血流中の安定性が低い。別の言い方をすれば、血流安定性及び細胞内放出は、典型的には逆相関する。更に、標準的なコンジュゲーションプロセスでは、抗体に充填されるアジュバント／薬物部分、すなわち、薬物負荷の量、コンジュゲーション反応で形成される凝集体の量、及び得られ得る最終精製複合体の収率は、相互に関連している。例えば、凝集体形成は、概して、抗体にコンジュゲートされたアジュバント／薬物部分及びその誘導体の等価物の数と正に相関している。高い薬物負荷の下では、形成された凝集体は治療用途のために除去されなければならない。結果として、薬物負荷媒介性凝集体の形成は、免疫複合体収率を低下させ、プロセスのスケールアップを困難にする可能性がある。
例示的な実施形態は、式ＩＩ：
Figure 2023553421000031
 の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物を含み、式中、Ｈｅｔが、ヘテロシクリルジイル及びヘテロアリールジイルから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールが、独立して、かつ任意選択的に、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５）ＮＲ５－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリール）、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）、
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）ＮＲ５－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ５（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
－Ｎ（Ｒ５）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、及び
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換されるか、
またはＲ２及びＲ３が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４が、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ５）からなる群から選択され、
Ｒ５が、独立して、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ５基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ５ａが、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、Ｌに結合しており、
Ｌが、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ＋（Ｒ６）２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－、及び
Ｑ－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｒ６が、独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であり、
Ｇｌｕｃが、式：
Figure 2023553421000032
 を有し、
ＰＥＰが、式：
Figure 2023553421000033
 を有し、式中、ＡＡが、独立して、天然もしくは非天然のアミノ酸側鎖から選択されるか、またはＡＡのうちの１つ以上と隣接する窒素原子とが、５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線が、結合点を示し、
Ｃｙｃが、任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び以下の構造：を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換される、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、
Figure 2023553421000034
 Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、式中、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、式中、Ｒ９が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から選択され、式中、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であるか、または２つのＲ９基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
ｙが、２～１２の整数であり、
ｚが、０または１であり、
Ｑは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、及びＳＯ３ －から独立して選択される１つ以上の基で置換される、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、及びフェノキシからなる群から選択され、
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、独立して、かつ任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＣＨ２Ｆ、－ＯＣＨＦ２、－ＯＣＦ３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される。
式ＩＩの８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが：
Figure 2023553421000035
 から選択されることを含む。
式ＩＩの８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが、１つ以上のＦで置換されるフェノキシであることを含む。
式ＩＩの８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが、２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシであることを含む。
８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー（ＨｘＢｚＬ）化合物の例示的な実施形態は、表２ａ及び表２ｂから選択される。各化合物を合成し、精製し、質量分析によって特徴付け、示された質量を有することが示された。追加の実験手順は、実施例に見られる。表２ａ及び表２ｂの８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物は、がん及び他の障害を治療するための有用な治療活性を予測し得る、ＴＬＲ８アゴニスト選択性の驚くべき及び予期しない特性を実証する。表２の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー中間体、式ＩＩ化合物を、実施例２０１の方法によって抗体にコンジュゲートして使用して、表３ａ及び表３ｂの免疫複合体を形成する。
Figure 2023553421000036
Figure 2023553421000037
Figure 2023553421000038
Figure 2023553421000039
Figure 2023553421000040
Figure 2023553421000041
Figure 2023553421000042
Figure 2023553421000043
Figure 2023553421000044
Figure 2023553421000045
Figure 2023553421000046
Figure 2023553421000047
Figure 2023553421000048
Figure 2023553421000049
Figure 2023553421000050
Figure 2023553421000051
Figure 2023553421000052
Figure 2023553421000053
Figure 2023553421000054
Figure 2023553421000055
Figure 2023553421000056
Figure 2023553421000057
Figure 2023553421000058
Figure 2023553421000059
Figure 2023553421000060
Figure 2023553421000061
Figure 2023553421000062
ＣＥＡ免疫複合体
免疫刺激抗体複合体、すなわち、免疫複合体は、ＴＬＲ７／８アゴニストを腫瘍内に向かわせて、腫瘍浸潤性骨髄系細胞を活性化し、広範な先天性及び適応性の抗腫瘍免疫応答を開始する（Ａｃｋｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，（２０２１）Ｎａｔｕｒｅ Ｃａｎｃｅｒ ２：１８－３３）。
ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）は、複数の固形腫瘍で高度に発現する、十分に検証された細胞表面抗原である。堅牢な細胞表面発現、低い内在化率、及び制限された正常な組織発現を含む、ＣＥＡの好ましい特性は、抗原が、ＣＥＡ発現がんを治療するための多機能アプローチにおける免疫複合体の好適な標的であり得ることを示唆する。
免疫複合体の例示的な実施形態は、リンカーによって１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン（Ｈｘ）部分に共有結合した抗ＣＥＡ抗体を含み、かつ式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｈｘ］ｐ Ｉ
を有し、
式中、
Ａｂが、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物であり、
ｐが、１～８の整数であり、
Ｈｘが、式：
Figure 2023553421000063
 を有する８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分であり、Ｈｅｔが、ヘテロシクリルジイル及びヘテロアリールジイルから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールが、独立して、かつ任意選択的に、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５）ＮＲ５－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリール）、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）、
－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）ＮＲ５－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ５（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
－Ｎ（Ｒ５）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、及び
－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換され、
またはＲ２及びＲ３が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４が、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ５）からなる群から選択され、
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ５基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ５ａが、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、Ｌに結合しており、
Ｌが、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ＋（Ｒ６）２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－、及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｒ６が、独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であり、
Ｇｌｕｃが、式：
Figure 2023553421000064
 を有し、
ＰＥＰが、式：
Figure 2023553421000065
 を有し、式中、ＡＡが、独立して、天然もしくは非天然のアミノ酸側鎖から選択されるか、またはＡＡのうちの１つ以上と隣接する窒素原子とが、５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線が、結合点を示し、
Ｃｙｃが、任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び以下の構造：を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換される、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、
Figure 2023553421000066
 Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、式中、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、式中、Ｒ９が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から選択され、式中、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であるか、または２つのＲ９基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
ｙが、２～１２の整数であり、
ｚが、０または１であり、
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、独立して、かつ任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＣＨ２Ｆ、－ＯＣＨＦ２、－ＯＣＦ３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、ラベツズマブ及びアルシツモマブ、またはそれらのバイオシミラーもしくはバイオベターから選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体構築物が、
ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｅ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｇ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
ｈ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１７または１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；または
ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体構築物が、配列番号１、１７、３２、５０、５７、７３、８９、及び１０５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号９、４１、６５、８１、９７、１１３、１２２、及び１３０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含むことを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体構築物が、配列番号１、１７、３２、５０、５７、７３、８９、及び１０５から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号９、４１、６５、８１、９７、１１３、１２２、及び１３０から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含むことを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体構築物が、配列番号１０５からのアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号１１８からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）ＣＤＲ－Ｈ２と、を含むことを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体構築物が、配列番号１０５からのアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号１１３からのアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含むことを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｈｅｔが、ピリジルジイル、ピリミジルジイル、ピラゾリルジイル、ピペラジニルジイル、ピペリジニルジイル、及びピラジニルジイルからなる群から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ１が、結合であり、Ｒ１が、Ｈであることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ２が、結合であり、Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルであることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２，－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルであり、Ｒ３が、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、Ｒ３が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（ｔ－Ｂｕ）、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（シクロブチル）、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（シクロブチル）から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２及びＲ３が、各々独立して、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２及びＲ３が、各々－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、Ｒ３が、－ＯＣＨ２ＣＨ３であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ３－Ｒ３が、
Figure 2023553421000067
 から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ４が、結合であり、Ｒ４が、Ｈであることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ１が、Ｌに結合されていることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ２またはＲ３が、Ｌに結合されていることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ３－Ｒ３－Ｌが、
Figure 2023553421000068
 から成る群から選択され、式中、波線が、Ｎへの結合点を示す。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ４が、Ｃ１－Ｃ１２アルキルであることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ４が、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊であり、式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示すことを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、抗体のシステインチオールに結合されていることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＰＥＧについて、ｍが、１または２であり、ｎが、２～１０の整数であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、ジペプチドであり、かつ式：
Figure 2023553421000069
 から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ１及びＡＡ２が、独立して、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、－ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２から選択されるか、またはＡＡ１及びＡＡ２が、５員環プロリンアミノ酸を形成することを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ１が、－ＣＨ（ＣＨ３）２であり、ＡＡ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ１及びＡＡ２が、独立して、ＧｌｃＮＡｃアスパラギン酸、－ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、及び－ＣＨ２ＯＰＯ３Ｈから選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＰＥＰが、式：
Figure 2023553421000070
 を有し、式中、ＡＡ１及びＡＡ２は、独立して、天然に存在するアミノ酸の側鎖から選択される。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰは、トリペプチドであり、かつ式：
Figure 2023553421000071
 から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、テトラペプチドであり、かつ式：
Figure 2023553421000072
 から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、
ＡＡ１が、Ａｂｕ、Ａｌａ、及びＶａｌからなる群から選択され、
ＡＡ２が、Ｎｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ、及びＰｒｏからなる群から選択され、
ＡＡ３が、Ａｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）２からなる群から選択され、
ＡＡ４が、Ｏｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）からなる群から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ（配列番号１３１）、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（配列番号１３２）、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａ（配列番号１３３）からなる群から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、構造：
Figure 2023553421000073
 から選択されることを含む。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが、構造：
Figure 2023553421000074
 から選択され、式中、波線が、Ｒ５への結合を示すことを含む。
式Ｉａ：
Figure 2023553421000075
 を有する式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態。
式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ４が、結合であり、Ｒ４が、Ｈであることを含む。
式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択されることを含む。
式Ｉｂ～Ｉｉ：
Figure 2023553421000076
Figure 2023553421000077
 から選択される式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態。
式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ２及びＸ３がそれぞれ結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５から選択されることを含む。
式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルであり、Ｒ３が、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５から選択されることを含む。
本発明は、式Ｉの実施形態の全ての合理的な組み合わせ、及び特徴の置換を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の免疫複合体化合物は、免疫刺激活性を有するものを含む。本発明の抗体－薬物複合体は、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン薬物の有効用量を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、非コンジュゲート８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピンと比較して治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性（すなわち、より低い有効用量）を達成し得る。
薬物負荷は、式Ｉの免疫複合体中の抗体当たりのＨｘＢｚ部分の数である、ｐで表される。薬物（ＨｘＢｚ）負荷は、抗体当たり１～約８個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式Ｉの免疫複合体は、１～約８の範囲の薬物部分にコンジュゲートされた抗体の混合物または集合体を含む。いくつかの実施形態では、抗体にコンジュゲートすることができる薬物部分の数は、リジン及びシステインなどの反応性または利用可能なアミノ酸側鎖残基の数によって制限される。いくつかの実施形態では、遊離システイン残基は、本明細書に記載の方法によって抗体アミノ酸配列に導入される。かかる態様では、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、または８であってもよく、１～８または２～５などのその範囲であってもよい。任意のかかる態様では、ｐ及びｎは、等しい（すなわち、ｐ＝ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、またはそれらの間のある範囲）。式Ｉの例示的な免疫複合体としては、１、２、３、または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３－１３８）。いくつかの実施形態では、１つ以上の遊離システイン残基は、操作を使用せずに、鎖内ジスルフィド結合を形成する抗体に既に存在し、この場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートしてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲーションの前に還元条件に曝露される。
いくつかの免疫複合体では、ｐは、抗体上の結合部位の数によって制限されてもよい。例えば、本明細書に記載のある特定の例示的な実施形態のように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１つまたは限定された数のシステインチオール基のみを有してもよく、または薬物が結合してもよい１つまたは限定された数の十分に反応性のあるチオール基のみを有してもよい。他の実施形態では、抗体中の１つ以上のリジンアミノ基は、式ＩＩのＨｘ－リンカー化合物とのコンジュゲーションのために利用可能であり、反応性であり得る。ある特定の実施形態では、より高い薬物負荷、例えば、ｐ＞５は、ある特定の抗体－薬物複合体の凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態では、免疫複合体の平均薬物負荷は、１～約８、約２～約６、または約３～約５の範囲である。ある特定の実施形態では、抗体は、リジンまたはシステインなどの反応性求核基を明らかにするために変性条件に供される。
免疫複合体の負荷（薬物／抗体比）は、異なる方法で、例えば、（ｉ）抗体に対するＨｘ－リンカー中間体化合物のモル過剰を制限することと、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間または温度を制限することと、（ｉｉｉ）最適化された抗体反応性のための部分的または制限的還元変性条件と、によって、制御され得る。
抗体の２つ以上の求核基が薬物と反応する場合、得られる生成物は、抗体に結合された１つ以上の薬物部分の分布を有する免疫複合体化合物の混合物であることを理解されたい。抗体当たりの薬物の平均数は、抗体に特異的であり、薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から計算され得る。個々の免疫複合体分子は、質量分析によって混合物中で同定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離され得る（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９－３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４を参照されたい）。ある特定の実施形態では、単一の負荷値を有する均一な免疫複合体は、電気泳動またはクロマトグラフィーによってコンジュゲーション混合物から単離され得る。
式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、表３ａ及び表３ｂの抗ＣＥＡ、ＨｘＢｚ免疫複合体から選択される。インビトロでの免疫複合体活性の評価は、実施例２０３の方法に従って実施した。
Figure 2023553421000078
Figure 2023553421000079
Figure 2023553421000080
免疫複合体の組成物
本発明は、本明細書に記載の複数の免疫複合体と、任意選択的にその担体、例えば、薬学的または薬理学的に許容される担体とを含む、組成物、例えば、薬学的または薬理学的に許容される組成物または製剤を提供する。本免疫複合体は、組成物中で同じまたは異なる場合があり、すなわち、組成物は、抗体構築物上の同じ位置に連結された同じ数のアジュバントを有する免疫複合体、及び／または抗体構築物上の異なる位置に連結された同じ数のＨｘアジュバントを有する免疫複合体、抗体構築物上の同じ位置に連結された異なる数のアジュバントを有するか、または抗体構築物上の異なる位置に連結された異なる数のアジュバントを有する免疫複合体を含むことができる。
例示的な実施形態では、本免疫複合体化合物を含む組成物は、免疫複合体化合物の混合物を含み、免疫複合体化合物の混合物中の抗体当たりの平均薬物（Ｈｘ）負荷は、約２～約５である。
本発明の免疫複合体の組成物は、約０．４～約１０の抗体構築物比（ＤＡＲ）の平均アジュバントを有することができる。当業者であれば、抗体構築物にコンジュゲートされる８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピンアジュバントの数が、本発明の複数の免疫複合体を含む組成物中で、免疫複合体によって異なり得、それ故に、アジュバント対抗体構築物（例えば、抗体）比が、薬物（アジュバント）対抗体比（ＤＡＲ）と称され得る平均として測定され得ることを認識するであろう。アジュバント対抗体構築物（例えば、抗体）比は、任意の好適な手段によって評価することができ、その多くは、当該技術分野で既知である。
コンジュゲーション反応からの免疫複合体の調製における抗体（ＤＡＲ）当たりのアジュバント部位の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けられ得る。組成物中の免疫複合体のｐに関する定量的分布もまた、判定され得る。いくつかの事例では、ｐが特定の値である均一な免疫複合体の、他の薬物負荷を有する免疫複合体からの分離、精製、及び特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。
いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の薬学的または薬理学的に許容される賦形剤を更に含む。例えば、本発明の免疫複合体は、ＩＶ投与または臓器の体腔もしくは管腔への投与などの非経口投与のために製剤化することができる。あるいは、免疫複合体を腫瘍内に注射することができる。注射用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体に溶解された免疫複合体の溶液を含む。使用され得る許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、ならびに塩化ナトリウムなどの１つ以上の塩の等張溶液、例えば、リンゲル溶液がある。加えて、無菌固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として用いることができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無菌性固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸を同様に注射剤の調製に使用することができる。これらの組成物は、望ましくは無菌であり、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができる。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどなどの生理学的条件を近似するために必要に応じて、薬学的に許容される補助物質を含有することができる。
組成物は、任意の好適な濃度の免疫複合体を含有することができる。組成物中の免疫複合体の濃度は、大きく異なっていてもよく、主に、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに応じて、流体体積、粘度、体重などに基づいて選択される。ある特定の実施形態では、注射用溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の範囲である。
免疫複合体の生物学的活性
免疫複合体ＩＣ－２は、以下の表に示すように、細胞株のパネル上の表面発現ＣＥＡに差異的に結合し、ＣＥＡ転写物レベルと相関する。
Figure 2023553421000081
ヒト結腸直腸癌アレイ（ｎ＝２４７）、非小細胞肺癌アレイ（ｎ＝６９）、及び胃／胃食道癌アレイ（ｎ＝１１４）を、ＣＥＡ３１ ＩＨＣアッセイ（Ｖｅｎｔａｎａ／Ｃｅｌｌ Ｍａｒｑｕｅ）で染色した。Ｈスコアは、（１＋染色強度を有する細胞のパーセント）＋（２＋染色強度を有する細胞のパーセント２Ｘ）＋（３＋染色強度を有する細胞のパーセント３Ｘ）として計算される。細胞当たりのＩＣ－２結合部位は、所与の腫瘍細胞が結合し、細胞の表面上の抗原発現のレベルと相関するＩＣ－２分子の数を表す。生存腫瘍細胞を採取し、１００ｎＭで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ４８８標識ＩＣ－２またはＡｌｅｘａ Ｆｌｏｕｒ４８８標識ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で標識化し、続いてフローサイトメトリー分析した。ＩＣ－２結合部位を、Ｂａｎｇｓ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＱＳＣビーズを使用して判定した。非特異的結合部位は、ＩＣ－２結合部位からｈＩｇＧ１アイソタイプ対照結合部位を差し引くことによって補正した。
図１は、マウスにおけるインビボ異種移植腫瘍モデルのグラフを示す。処理後の経時的な腫瘍体積を測定して、ＣＥＡ－高ヒト膵臓ＨＰＡＦ－ＩＩ腫瘍を有するマウスの腫瘍阻害における免疫複合体ＩＣ－２と、アイソタイプ免疫複合体（ＩＳＡＣ）及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２との有効性を比較した。免疫複合体ＩＣ－２は、０．５ｍｇ／ｋｇと低い用量レベルで、ＣＥＡ－高ヒト膵臓ＨＰＡＦ－ＩＩ腫瘍の用量依存的増殖阻害を示す。アイソタイプＩＳＡＣは、ＩＣ－２と同じアジュバントリンカーであるＨｘＢｚＬ－５にコンジュゲートされた抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）の免疫複合体である。アイソタイプＩＳＡＣは、ＩＣ－２と同じアジュバントリンカー（ＨｘＢｚＬ－５）を有する。アイソタイプＩＳＡＣは、オフターゲット、陰性対照として機能し、腫瘍増殖阻害をほとんど、または全く示さない。裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２もまた、本研究において腫瘍増殖阻害をほとんど、または全く示さない。これらの結果は、先天性エフェクター細胞の用量依存性腫瘍動員及び免疫刺激サイトカインの誘導を実証し、本発明の免疫複合体が、ＣＥＡ発現がんの治療に有効であり得ることを示唆する。
図２ａ～ｅは、免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２による、ＣＥＡ－高胃癌ＭＫＮ－４５細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養における様々なサイトカインの誘導のグラフを示す。サイトカインＩＬ－１２ｐ７０（図２ａ）、ＴＮＦα（腫瘍壊死因子α）（図２ｂ）、ＩＬ－６（インターロイキン－６）（図２ｃ）、ＩＦＮγ（インターフェロンγ）（図２ｄ）、及びＣＣＬ２（図２ｅ）の上清中への細胞による分泌レベルを測定した。これらのサイトカインの誘導は、がんに対する免疫応答をマウントすることに関連している。様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－６、ＩＣ－１４、及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、ＣＥＡ高ＭＫＮ－４５細胞及びｃＤＣ濃縮初代細胞調製物（Ｅ：Ｔ＝１０：１）とともに１８時間インキュベートし、次いで上清を回収した。分泌サイトカインレベルを、ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘｃｙｔｏｋｉｎｅビーズアレイキットを使用して判定した。試験した免疫複合体は、アジュバントの機能として誘導されるサイトカインのレベルの点で異なる。天然のＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２抗体は、サイトカイン分泌をほとんど、または全く誘導せず、ＴＬＲ７／８活性化アジュバントへの依存性を実証する。
図３ａ～ｄは、ＣＥＡ－高ＨＰＡＦＩＩ細胞（図３ａ）、ＣＥＡ－中ＬｏＶｏ細胞（図３ｂ）、ＣＥＡ－低ＬＳ－１７４Ｔ細胞（図３ｃ）、及びＣＥＡ－陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（図３ｄ）において、様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２で処理されたＭ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージによる貪食のグラフを示す。ＣＴＧ標識腫瘍－ＩＣ－２免疫複合体を、Ｍ－ＣＳＦ分化単球由来マクロファージと２：１のエフェクター対標的比でインキュベートした。４時間後、ＣＴＧシグナルが陽性のエフェクター細胞上でフローサイトメトリーゲーティングによって貪食を測定した。３人のドナーからの平均＋／－標準偏差がグラフに示されている。抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）は、抗体－オプソニン化された標的細胞が、マクロファージの表面上のＦｃγＲを活性化して、貪食を誘導し、標的細胞の内在化及び分解をもたらす機構である。免疫複合体ＩＣ－２は、ＣＥＡ－高ＨＰＡＦＩＩ（ＥＣ５０＝９．２±２．３ｎＭ）及びＣＥＡ－中ＬｏＶｏ（ＥＣ５０＝１１．４±３．５ｎＭ）の用量依存性貪食を誘導する。ＣＥＡ－ｌｏｗ ＬＳ－１７４Ｔについては最小限のＡＤＣＰが観察されている。ＩＣ－２は、ＣＥＡ陰性－ＭＤＡ－ＭＢ－２３１のＡＤＣＰを誘導しない。これらの結果は、ＩＣ－２によるＡＤＣＰの誘導が、標的腫瘍細胞による中／高ＣＥＡ発現に依存することを実証する。
図４ａ～ｆは、様々な濃度の免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養とともにインキュベートした後の、上清中の分泌サイトカインレベル及び細胞表面マーカーの誘導のグラフを示す。免疫複合体ＩＣ－２及び裸抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２を、ＣＥＡ陽性腫瘍細胞（ＨＰＡＦ－ＩＩ、ＬｏＶｏ、またはＬＳ１７４－Ｔ）及びｃＤＣ濃縮初代細胞調製物（Ｅ：Ｔ＝１０：１）とともに１８時間インキュベートし、次いで上清及び細胞を回収した。上清中の分泌サイトカインレベル（図４ａ～ｄ）を、ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘサイトカインビーズアレイキットを使用して判定した。細胞表面マーカーの誘導（図４ｅ～ｆ）は、フローサイトメトリーによって判定された。がん細胞とｃＤＣ濃縮初代細胞単離物との共培養において、ＣＥＡ標的免疫複合体ＩＣ－２は、がんに対する免疫応答をマウントすることに関連するサイトカインＴＮＦａｌｐｈａ（図４ａ）、ＩＬ－６（図４ｂ）、ＩＬ－１２ｐ７０（図４ｃ）、及びＣＸＣＬ１０（図４ｄ）の分泌を誘導する。加えて、ＣＤ４０（図４ｅ）及びＣＤ８６（図４ｆ）抗原の表面レベルは、上昇し、先天免疫（骨髄細胞）の活性化と一致している。サイトカイン及び表面マーカー誘導のレベルは、ＣＥＡ－高ＨＰＡＦ－ＩＩ及びＣＥＡ－中ＬｏＶｏ細胞と同様であるが、ＣＥＡ－低ＬＳ－１７４Ｔ細胞では著しく低下する。サイトカイン及び表面マーカー研究は、ＣＥＡ発現腫瘍細胞及び抗ＣＥＡ ＩＳＡＣ ＩＣ－２に曝露したときの骨髄系細胞の活性化を実証する。活性化は、ＣＥＡ－高ＨＰＡＦ－ＩＩ細胞及びＣＥＡ－中ＬｏＶｏ細胞で観察される。活性化は、ＣＥＡ－低ＬＳ－１７４Ｔ細胞及びＣＥＡ－陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞では低いか、または検出できない。天然抗体ＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２は、骨髄活性化を誘導しない。図４ａ～ｆからの結果は、ヒトがんに関連するＣＥＡ発現レベルに対するＩＣ－２活性の依存性を実証する。天然のＣＥＡ．９－Ｇ１ｆｈＬ２抗体は、サイトカイン分泌を、ほとんどまたは全く誘導せず、ＴＬＲ７／８活性化ペイロードへの依存性を実証する。
免疫複合体によるがんを治療する方法
本発明は、がんを治療するための方法を提供する。本方法は、治療有効量の本明細書に記載の免疫複合体（例えば、本明細書に記載の組成物として）を、それを必要とする対象、例えば、がんを有し、がんの治療を必要とする対象に投与することを含む。本方法は、治療有効量の表３ａ及び表３ｂから選択される免疫複合体（ＩＣ）を投与することを含む。
本発明の免疫複合体は、例えば、腫瘍抗原の過剰発現によって特徴付けられる様々な過剰増殖性疾患または障害を治療するために使用され得ることが企図される。例示的な過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに白血病及びリンパ系悪性腫瘍などの血液学的障害が挙げられる。
別の態様では、医薬品として使用するための免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、有効量の免疫複合体を個体に投与することを含む、個体を治療する方法で使用するための免疫複合体を提供する。かかる一実施形態では、本方法は、個体に、有効量の、例えば、本明細書に記載される少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを更に含む。
更なる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における免疫複合体の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、がんの治療のためのものであり、本方法は、がんを有する個体に、有効量の医薬品を投与することを含む。かかる一実施形態では、本方法は、個体に、有効量の、例えば、本明細書に記載される少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを更に含む。
癌腫は、上皮組織に由来する悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外面を覆い、内腔を並べ、腺組織の内層を形成する。癌腫の例としては、腺癌（乳癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌、胃癌、胃食道癌、及び結腸癌などの腺（分泌）細胞に発症するがん）、副腎皮質癌、肝細胞癌、腎細胞癌、卵巣癌、上皮内癌、管癌、乳癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、移行細胞癌、結腸癌、鼻咽頭癌、多発性嚢胞性腎細胞癌、燕麦細胞癌、大細胞肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌などが挙げられるが、これらに限定されない。癌腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常、二次転移として）、肺、乳房、及び皮膚に見られることがある。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌を治療するための方法は、ＣＥＡ（例えば、ラベツズマブ、またはそのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合することができる抗体構築物を含有する免疫複合体を投与することを含む。
軟部組織腫瘍は、結合組織に由来する希少腫瘍の非常に多様な群である。軟部組織腫瘍の例には、肺胞軟部肉腫、血管腫様線維性組織球腫、軟骨筋酸化線維腫、骨格性軟骨肉腫、骨格外粘液状軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、乳児線維肉腫、消化管間質腫瘍、骨巨細胞腫瘍、腱滑膜巨細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、子宮平滑筋腫、平滑筋肉腫、脂肪芽腫、典型的な脂肪腫、紡錘細胞または多形性脂肪腫、非定型脂肪腫、軟骨脂肪腫、高分化型脂肪肉腫、粘液様／円形細胞脂肪肉腫、多形性脂肪肉腫、粘液様悪性線維性組織球腫、高悪性度の悪性線維性組織球腫、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、原始神経外胚葉腫瘍、肺胞横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、良性または悪性の神経鞘腫、滑膜肉腫、Ｅｖａｎ’ｓ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、孤立性線維性腫瘍、隆起皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、腱滑膜巨細胞腫（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性異形成、粘液線維肉腫、線維肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、神経線維腫、軟部組織の多形性腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞、及び神経鞘細胞に由来する新生物が含まれるが、これらに限定されない。
肉腫は、軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、または他の結合組織もしくは支持組織を含む、間葉由来の細胞、例えば、骨または体の軟部組織に生じる稀なタイプのがんである。肉腫の異なるタイプは、がんが形成される場所に基づいている。例えば、骨肉腫は、骨に形成され、脂肪肉腫は、脂肪に形成され、横紋筋肉腫は、筋肉に形成される。肉腫の例としては、アスキン腫瘍、肉腫ボトリオイデス、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、及び軟部肉腫（例えば、歯槽軟部肉腫、血管肉腫、嚢肉腫フィヨルド性線維性肉腫プロトベランス（ＤＦＳＰ）、デスモイド腫瘍、脱形成性小丸細胞腫瘍、上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維性肉腫、消化性胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管癌、血管肉腫（より一般的には「血管肉腫」と称される）、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、滑膜肉腫、及び未分化多形成肉腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
変形腫は、例えば、毛髪、筋肉、及び骨を含む、いくつかの異なるタイプの組織を含有し得る（例えば、内胚葉、中胚葉、及び外胚葉の３つの胚葉層のいずれか及び／または全てに由来する組織を含むことができる）生殖細胞腫瘍のタイプである。変形腫は、女性の卵巣、男性の睾丸、及び小児の尾骨で最も頻繁に発生する。
黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）に発症するがんの一形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）に発症することがあるが、目または腸などの他の色素性組織に発症することもある。
メルケル細胞癌は、通常、顔、頭部、または首に肉色または青みがかった赤色の結節として現れる稀なタイプの皮膚癌である。メルケル細胞癌はまた、皮膚の神経内分泌癌とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌を治療するための方法は、ＣＥＡ（例えば、ラベツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）に結合することができる抗体構築物を含有する免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌は、投与が発生したときに転移している。
白血病は、骨髄などの血液形成組織で発生し、多数の異常な血液細胞が産生され、血流に入るがんである。例えば、白血病は、血流中で通常成熟する骨髄由来細胞に由来し得る。白血病は、疾患の発症及び進行の速さ（例えば、急性対慢性）、及び影響を受ける白血球のタイプ（例えば、骨髄対リンパ）によって名付けられる。骨髄性白血病は、骨髄性または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞は、リンパ節に集まり得、腫れになる可能性がある。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
リンパ腫は、免疫系の細胞に発症するがんである。例えば、リンパ腫は、リンパ系で通常成熟する骨髄由来細胞に由来し得る。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーがある。リンパ腫の１つのカテゴリーは、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、これは、Ｒｅｅｄ－Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ細胞と呼ばれるタイプの細胞の存在によって特徴付けられる。現在、６種類のＨＬが認められている。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化症古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞性ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優性ＨＬが挙げられる。
リンパ腫の他のカテゴリーは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、免疫系細胞のがんの大規模で多様なグループを含む。非ホジキンリンパ腫は、緩慢な（ゆっくり成長する）経過を有するがんと、急速な（急速に成長する）経過を有するがんとに、更に分けられる。現在、６１種類のＮＨＬが認められている。非ホジキンリンパ腫の例としては、エイズ関連リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小非切断細胞リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマデルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞性白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻性Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、中枢神経系原発悪性リンパ腫、形質転換リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症が挙げられるが、これらに限定されない。
脳腫瘍には、脳組織のあらゆるがんが含まれる。脳腫瘍の例としては、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び前庭シュワン腫、原始神経外胚葉腫瘍（髄芽腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の免疫複合体は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて、のいずれかで使用され得る。例えば、免疫複合体は、化学療法剤などの少なくとも１つの追加の治療剤とともに投与されてもよい。かかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤に含まれる）、及び別個の投与を包含し、この場合、免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時に、及び／またはその後に起こり得る。免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用され得る。
本発明の免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、経口、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所治療のために所望される場合、病変内投与を含む任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が短時間であるか慢性であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によって行うことができる。様々な時点にわたる単回または複数回の投与、ボーラス投与、及び脈拍注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
免疫複合体は、ラベツズマブ、そのバイオシミラー、及びそのバイオベターに利用される投薬レジメンなどの任意の適切な投薬レジメンを使用して、それを必要とする対象に任意の治療有効量で投与される。例えば、本方法は、免疫複合体を投与して、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供することを含むことができる。免疫複合体用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体用量はまた、特定の複合体、ならびに治療されるがんの種類及び重症度に応じて、これらの範囲の外にあることができる。投与の頻度は、単回投薬から週当たり複数回投薬まで、またはそれ以上の頻度の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、約１回／月～約５回／週、投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回、投与される。
別の態様では、本発明は、がんを予防するための方法を提供する。本方法は、治療有効量の免疫複合体（例えば、上記の組成物として）を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、対象は、予防されるある特定のがんに感受性である。
本発明のいくつかの実施形態は、上記のようながんを治療するための方法を提供し、がんは、乳癌である。乳癌は、乳房の異なる領域から発生する可能性があり、多数の異なる種類の乳癌が特徴付けられている。例えば、本発明の免疫複合体は、非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌（例えば、管状癌、髄質癌、粘液性癌、乳頭状癌、または篩状癌）、上皮内小葉癌、浸潤性小葉癌、炎症性乳癌、ならびにトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査陰性）乳癌などの他の形態の乳癌の治療に使用され得る。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＣＥＡ（例えば、レベツズマブ、そのバイオシミラー、またはそのバイオベター）、またはＣＥＡを過剰発現する腫瘍に結合することができる抗体構築物を含有する免疫複合体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８によって誘導される炎症誘発性応答に感受性である。
いくつかの実施形態では、治療有効量の免疫複合体を、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、食道癌、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、または乳癌を治療する必要がある患者に投与する。メルケル細胞癌は、転移性メルケル細胞癌であり得る。乳癌は、トリプルネガティブ乳癌であり得る。食道癌は、胃食道接合部腺癌であり得る。
実施例Ｌ－２ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピラゾール－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－２の合成
Figure 2023553421000082
 ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピラゾール－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－２ａの調製
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（１ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＰＰｈ３（１．３５ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、１当量）及びＤＥＡＤ（０．８９ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、０．９４ｍＬ、１当量）を０℃で添加し、２５℃で０．５時間撹拌し、次いで、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノ酸塩（３．０２ｇ、５．１５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を水２０ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ＊３）で抽出した。混合有機層をブライン（２０ｍＬ＊３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エテール／酢酸エチル＝５０／１～酢酸エチル：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－２ａ（３．５ｇ、４．５９ｍｍｏｌ、収率８９．０４％）を黄色油として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピラゾール－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ＨｘＢｚＬ－２ｃの調製
ＨｘＢｚＬ－２ａ（６２５ｍｇ、８１９ｕｍｏｌ、２．５当量）、２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚＬ－２ｂ（１２０ｍｇ、３２８ｕｍｏｌ、１当量）、水（０．３ｍＬ）中のＮａ２ＣＯ３（６９．５ｍｇ、６５５ｕｍｏｌ、２当量）の溶液、及びＤＭＦ（３ｍＬ）中の［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］二塩化パラジウム（ＩＩ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３．９ｍｇ、３２．８ｕｍｏｌ、０．１当量）の混合物を脱気し、次いでＮ２下で５時間１２０℃に加熱した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：３５％～６５％、１０分）により精製して、黄色固体としてＨｘＢｚＬ－２ｃ（３００ｍｇ、２９０ｕｍｏｌ、収率８８．４％、ＴＦＡ）を得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピラゾール－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－２ｄの調製
水（３ｍＬ）及びＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－２ｃ（３００ｍｇ、３２５ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、４０７ｕＬ、１５当量）を添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、化合物３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［４－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピラゾール－１－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（２００ｍｇ、２２２ｕｍｏｌ、収率６８．１％、ＨＣｌ）を無色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－２の調製
ＤＣＭ（１ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－２ｄ（８０．０ｍｇ、８８．７ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１１９ｍｇ、４４３ｕｍｏｌ、５当量）の溶液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＥＤＣＩ（８４．９ｍｇ、４４３ｕｍｏｌ、５当量）を添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５～５０％、８分）により精製して、黄色油としてＨｘＢｚＬ－２（３０ｍｇ、２４．８ｕｍｏｌ、収率２８．０１％、ＴＦＡ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ８．２０（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．６５－７．６１（ｍ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），７．５５－７．５２（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６３－３．５２（ｍ，３６Ｈ），３．４２（ｓ，２Ｈ），２．９５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０９４．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０９４．３（観測値）。
実施例Ｌ－４ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［４－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］ピペラジン－１－イル］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－４の合成
Figure 2023553421000083
 ２－アミノ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－４ｂの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）中の２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－４ａ（０．５ｇ、１．３７ｍｍｏｌ、１当量）、４，４，５，５，５－テトラメチル－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン（５２０ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｐｆ）Ｃｌ２（９９．９ｍｇ、１３７ｕｍｏｌ、０．１当量）、ＫＯＡｃ（３３５ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ、２．５当量）の混合物をＮ２下で１００℃で１時間撹拌した。粗製ＨｘＢｚ－４ｂを精製することなく次の工程に使用し、（５６４ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ、収率９９．９６％）、黒色液体として得た。
Ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－－８－イル］ピリミジン－２－イル］ピペラジン－１－カルボキシレート、ＨｘＢｚ－４の調製
ジオキサン（４ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４ｂ（０．４５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３９．８ｍｇ、５４．４ｕｍｏｌ、０．０５当量）、Ｋ２ＣＯ３（３７６ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ、２．５当量）、ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモピリミジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（３７４ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、Ｎ２下で１００℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、ジオキサンを除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）で希釈した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、次いでＥＡ：ＭｅＯＨ＝１．５：１）により精製し、次いで、分取ＨＰＬＣ、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：３０％～５５％、８分）により更に精製して、褐色油としてＨｘＢｚ－４（０．３５ｇ、６３７ｕｍｏｌ、収率５８．５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．７４（ｓ，２Ｈ），７．７２－７．６３（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），３．９９（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，４Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６０－３．５１（ｍ，４Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．８０－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．５１（ｓ，９Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５０．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５０．２（観測値）。
２－アミノ－Ｎ－エトキシ－８－（２－ピペラジン－１－イルピリミジン－５－イル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－３の調製
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４（２０ｍｇ、３６．４ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、５ｍＬ、５５０当量）を添加し、２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、ＨｘＢｚ－３（１０．５ｍｇ、２１．４ｕｍｏｌ、収率５８．９％、純度９９．２３３％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．７０（ｓ，２Ｈ），７．６５－７．４７（ｍ，３Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），４．１４－３．９６（ｍ，４Ｈ），３．８６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．２５－３．２１（ｍ，４Ｈ），１．７１－１．６２（ｍ，２Ｈ），１．０８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４５０．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４５０．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［１［３－［２－アミノ－４－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロピル－エトキシ－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］フェニル］スルホニルアゼチジン－３－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－４ａの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３（１１０ｍｇ、１７６ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（６３．５ｍｇ、４９１ｕｍｏｌ、２．８当量）、及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（９９．２ｍｇ、１４０ｕｍｏｌ、０．８当量）を添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ ＯＢＤ Ｃ１８ １５０＊４０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％－５５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４ａ（２８ｍｇ、２４ｕｍｏｌ、収率１３．７％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－４の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（０．３ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４ａ（７８ｍｇ、７８．８ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１０６ｍｇ、３９４ｕｍｏｌ、５当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（７５．５ｍｇ、３９４ｕｍｏｌ、５当量）を添加し、次いで、２０℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～４０％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４（３９．８ｍｇ、２６．４ｕｍｏｌ、収率３３．５％、純度９５．９４４％、２ＴＦＡ）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．７５（ｓ，２Ｈ），７．７６－７．５５（ｍ，３Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），４．０２－３．７３（ｍ，１６Ｈ），３．６８－３．５８（ｍ，３６Ｈ），３．３７（ｓ，２Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８５－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．２５－１．２０（ｍ，３Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２１８．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２１８．３（観測値）。
実施例Ｌ－５ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－５の合成
Figure 2023553421000084
 ５－ブロモ－２－（ブロモメチル）ピリミジン、ＨｘＢｚ－５ｂの調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（５－ブロモピリミジン－２－イル）メタノール、ＨｘＢｚ－５ａ（３００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＰＰｈ３（４９９ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＣＢｒ４（６３１ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、１．２当量）を、Ｎ２下で０℃で一度に添加した。混合物を２０℃で１０時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、８／１）により精製して、ＨｘＢｚ－５ｂ（２９０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、収率７２．４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．８１（ｓ，２Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ）．
Ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５－ブロモピリミジン－２－イル）メチル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバメート、ＨｘＢｚ－５ｃの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－５ｂ（２９０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルカルバメート（２５０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、Ｃｓ２ＣＯ３（５６２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．５当量）を、Ｎ２下で２０℃で少量ずつ添加し、混合物を２０℃で２．５時間撹拌した。水（５ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、５／１）により精製して、ＨｘＢｚ－５ｃ（３５０ｍｇ、９０１ｕｍｏｌ、収率７８．３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．７４（ｓ，２Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，１８Ｈ）．
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼ－ピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバメート、ＨｘＢｚ－５ｄの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－５ｃ（１８４ｍｇ、４７３ｕｍｏｌ、１．０当量）及び２－アミノ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド（１９５ｍｇ、４７４ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（１９．３ｍｇ、２３．７ｕｍｏｌ、０．０５当量）及びＫ２ＣＯ３（１６３ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、２．５当量）を、Ｎ２下で一度に添加し、混合物を脱気し、Ｎ２下で２時間９０℃に加熱した。ジオキサン（１０ｍＬ）を真空中で除去し、水（２０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、０／１～酢酸エチル／メタノール＝１０／１）により精製して、ＨｘＢｚ－５ｄ（２８０ｍｇ、４７０．８３ｕｍｏｌ、収率９９．３５％）を灰色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，１８Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－５の調製
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－５ｄ（２０．０ｍｇ、３３．６ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、８．４１ｕＬ、１．０当量）を、Ｎ２下で２０℃で一度に添加し、混合物を２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１％～３０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚ－５（６．２ｍｇ、９．８４ｕｍｏｌ、収率２９．２％、純度９８．８％、２ＴＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．２２（ｓ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９－７．７５（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），１．８５－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９５．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９５．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－５ａの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－５（７０ｍｇ、１４９ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１２７ｍｇ、１７９ｕｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、ＤＩＥＡ（７７．４ｍｇ、５９９ｕｍｏｌ、１０４ｕＬ、４．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．０４％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１２％－３９％、５．５分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－５ａ（５０．０ｍｇ、５３．４ｕｍｏｌ、収率３５．７％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．１４（ｓ，２Ｈ），７．８６－７．８１（ｍ，１Ｈ），７．７８－７．７４（ｍ，２Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５－３．７１（ｍ，８Ｈ），３．６９－３．５８（ｍ，３８Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．８５－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
ＨｘＢｚＬ－５の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－５ａ（６０ｍｇ、６１．７ｕｍｏｌ、１．０当量、ＨＣｌ）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニロキシナトリウム（９９．３ｍｇ、３７０ｕｍｏｌ、６．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（７１．０ｍｇ、３７０ｕｍｏｌ、６．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％－４５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－５（３８．０ｍｇ、３０．５ｕｍｏｌ、収率４９．３％、純度９３．３％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．１１（ｓ，２Ｈ），７．８３－７．７９（ｍ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．７６－７．７１（ｍ，１Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８５－３．７５（ｍ，５Ｈ），３．７０－３．５７（ｍ，３８Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ），１．８５－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６３．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６３．３（観測値）。
実施例Ｌ－７ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［１－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］スルホニル］アゼチジン－３－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－７の合成
Figure 2023553421000085
 Ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（（５－ブロモピリジン－３－イル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－７ｂの調製
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＴｅｒｔ－ブチルＮ－（アゼチジン－３－イルメチル）カルバメート（７６２ｍｇ、４．０９ｍｍｏｌ、１．０５当量）及び５－ブロモピリジン－３－スルホニルクロリド、ＨｘＢｚ－７ａ（１ｇ、３．９０ｍｍｏｌ、２．２６ｍＬ、１当量）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（７８９ｍｇ、７．８０ｍｍｏｌ、１．０９ｍＬ、２当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物に、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加し、次いで、真空中で濃縮して、ＤＣＭを除去した。混合物から沈殿させた所望の固体を濾過して、所望の生成物ＨｘＢｚ－７ｂ（１．１ｇ、２．７１ｍｍｏｌ、収率６９．４５％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）δ９．０９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５６－２．５２（ｍ，１Ｈ），１．３４（ｓ，９Ｈ）．
Ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（（５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－７ｃの調製
ジオキサン（１５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－７ｂ（０．７５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１当量）４，４，５，５－テトラメチル－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン、Ｐｉｎ２Ｂ２、ビス（ピナコラート）ジボロン、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．７８１８３－３４－３（７０３ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ、１．５当量）ＫＯＡｃ（３６２ｍｇ、３．６９ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６７．５ｍｇ、９２．３ｕｍｏｌ、０．０５当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、次いで１００℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、真空中で濃縮した。黄色油としてＨｘＢｚ－７ｃ（０．８５ｇ、粗製物）を得た。
Ｔｅｒｔ－ブチル（（１－（（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリジン－３－イル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－７ｄの調製
ジオキサン（１５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－７ｃ（０．８５ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１当量）及び２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚＬ－２ｂ（７５５ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（５１８ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６８．６ｍｇ、９３．７ｕｍｏｌ、０．０５当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、１００℃で１時間撹拌した。混合物を、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）に注いだ。水相を、酢酸エチル（１５０ｍＬ＊３）で抽出した。混合有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝５／１、０／１～ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製した。オフホワイト固体としてＨｘＢｚ－７ｄ（１ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、収率８７．０５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）δ９．１８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５－７．５１（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４５（ｍ，１Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ ２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｓ，２Ｈ），３．０６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６９－２．５８（ｍ，１Ｈ），１．７７（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［５－［３－（アミノメチル）アゼチジン－１－イル］スルホニル－３－ピリジル］－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－７の調製
ＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－７ｄ（０．８ｇ、１．３１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＴＦＡ（１．４９ｇ、１３．１ｍｍｏｌ、９６７ｕＬ、１０当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮してＣＨ３ＣＮを除去し、水溶液をＭＴＢＥ（２０＊３）で抽出して廃棄し、次いで水相を直接凍結乾燥して、ＨｘＢｚ－７（０．９ｇ、１．２２ｍｍｏｌ、収率９３．０７％、２ＴＦＡ）をオフホワイト固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５０（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８７－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．７７－７．７２（ｍ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），４．０６－３．９４（ｍ，４Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．８３－２．７３（ｍ，１Ｈ），１．７９（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５１３．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５１３．２（観測値）。
１－（１－（（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリジン－３－イル）スルホニル）アゼチジン－３－イル）－３－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２－アザヘキサトリアコンタン－３６－酸、ＨｘＢｚＬ－７ａの調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－７（４５１ｍｇ、６３８ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（１６１ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、２２２ｕＬ、２．５当量）を、Ｎ２下で０℃で添加し、次いで０℃で１時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）に注ぎ、混合物のｐＨを０℃でＴＦＡで約６に調整し、次いでＭＴＢＥ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄し、水相をＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ（２０ｍＬ＊３）で更に抽出した。混合有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－７ａ（０．６ｇ、５６９．６８ｕｍｏｌ、収率８９．２５％）を淡黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－７の調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＤＭＡ（１．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－７ａ（０．６ｇ、５７０ｕｍｏｌ、１当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（６１１ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、４当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（４３７ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ、４当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。残渣を濾過し、分取ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：３０％～５０％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－７（３７０ｍｇ、２８８．７６ｕｍｏｌ、収率５０．６９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９１－７．８４（ｍ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．０３－３．９１（ｍ，４Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．４９（ｍ，４０Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），３．２１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．７９－２．６８（ｍ，１Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．７８（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８１．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８１．６（観測値）。
実施例Ｌ－１２ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（シクロブトキシ－カルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－１２の合成
Figure 2023553421000086
 シクロブチルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－１５ｂの調製
ＤＣＭ（４ｍＬ）及びＤＭＡ（２ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１５ａ（２５０ｍｇ、６１１ｕｍｏｌ、１．０当量）及びシクロブチルＮ－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］カルバメート（２０１ｍｇ、７９４ｕｍｏｌ、１．３当量、ＨＣＬ）の混合物に、ＥＤＣＩ（４６８ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、４．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、２５℃で２時間撹拌した。ＤＣＭ（４ｍＬ）を真空中で除去し、水（１０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（１０ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（５ｍＬ＊２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、０／１～酢酸エチル／メタノール＝１０／１）により精製して、ＨｘＢｚ－１５ｂ（１９０ｍｇ、３１３ｕｍｏｌ、収率５１．２％）を褐色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５８－７．５２（ｍ，２Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），４．７４－４．６７（ｍ，２Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３３（ｓ，２Ｈ），２．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．８，５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９４－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
シクロブチルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－１５の調製
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１５ｂ（１９０ｍｇ、３１３ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＣＦ３ＣＯＯＨ（５３５ｍｇ、４．６９ｍｍｏｌ、３４７ｕＬ、１５当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、次いで、２５℃で１．５時間撹拌した。ＤＣＭ（５ｍＬ）を真空中で除去し、残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＭＴＢＥ（５ｍＬ＊４）で抽出して、余分なＴＦＡを除去し、次いで水相を凍結乾燥して、ＨｘＢｚ－１５（１３０ｍｇ、１６９ｕｍｏｌ、収率５４．１％、純度９５．７％、２ＴＦＡ）を褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ＝９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８５－７．７６（ｍ，３Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），４．６６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），２．２０－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．６０（ｍ，１Ｈ），１．５７－１．４７（ｍ，１Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０８．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０８．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（シクロブトキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１２ａの調製
ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１５（１０５ｍｇ、１８１ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及びＥｔ３Ｎ（７３．２ｍｇ、７２３ｕｍｏｌ、１００ｕＬ、４．０当量）の混合物に、３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，４，５，６－ペンタフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＰＦＰ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２Ｈ（１３１ｍｇ、１８１ｕｍｏｌ、１．０当量）を、Ｎ２下で０℃で添加し、０℃で０．５時間撹拌し、次いで２５℃で更に０．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を水（５ｍＬ）で希釈し、水相を酢酸エチル（３ｍＬ＊２）で抽出して廃棄し、次いで、水相をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ＝３／１（５ｍＬ＊３）で更に抽出し、混合有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－１２ａ（１００ｍｇ、９５．４ｕｍｏｌ、収率５２．７％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－１２の調製
ＤＣＭ（１ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１２ａ（１００ｍｇ、９５．４ｕｍｏｌ、１．０当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（１２８ｍｇ、４７７ｕｍｏｌ、５．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（９１．４ｍｇ、４７７ｕｍｏｌ、５．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１２（３５．１ｍｇ、２５．６ｕｍｏｌ、収率２６．９％、純度９３．３％）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．１２（ｓ，２Ｈ），７．８４－７．７７（ｍ，３Ｈ），７．５２（ｓ，１Ｈ），４．７５－４．６７（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７０－３．５７（ｍ，３８Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．０１－２．９７（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２４－２．１４（ｍ，２Ｈ），１．９６－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．８４－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．７３－１．６１（ｍ，１Ｈ），１．５９－１．４９（ｍ，１Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７６．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７６．６（観測値）。
実施例Ｌ－１３ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（シクロブチルカルバモイルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－１３の合成
Figure 2023553421000087
 Ｔｅｒｔ－ブチル（（５－（２－アミノ－４－（（２－（３－シクロブチルウレイド）エトキシ）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－１６ａの調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（２ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１５ａ（２５０ｍｇ、６１１ｕｍｏｌ、１当量）１－シクロブチル－３－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］尿素（２３１ｍｇ、９１６ｕｍｏｌ、１．５当量、ＨＣｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（３５１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、２５℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＤＣＭを除去した。残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ＊３）で抽出した。混合有機層をブライン（２０ｍＬ＊２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を得た。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エテール／酢酸エチル＝５０／１～酢酸エチル：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、ＨｘＢｚ－１６ａ（２３０ｍｇ、３８０ｕｍｏｌ、収率６２．１％）を褐色固体として得た。
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－［２－（シクロブチルカルバモイルアミノ）エトキシ］－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－１６の調製
水（２ｍＬ）及びＭｅＣＮ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１６ａ（２３０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（４３２ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ、０．２８ｍＬ、１０当量）を添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水（２ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（３ｍＬ＊３）で抽出して廃棄し、水相を減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚ－１６（２３０ｍｇ、３７１ｕｍｏｌ、収率９７．８％、ＴＦＡ）を褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８４－７．７３（ｍ，３Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），４．０１－３．８９（ｍ，３Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，２Ｈ），３．３３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．１９－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．６８（ｍ，４Ｈ），１．６４－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０７．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０７．２（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（シクロブチルカルバモイルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１３ａの調製
ＴＨＦ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１６（１００ｍｇ、１３６ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（９６．２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（４１．３ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、５６．８ｕＬ、３当量）を添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで約６に調整し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ、３回）で抽出して廃棄し、水溶液を、ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ（１０ｍＬ＊３、３／１）で更に抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物ＨｘＢｚＬ－１３ａ（１２０ｍｇ、１１５ｕｍｏｌ、収率８４．２％）を黄色油として得、更に精製することなく次のステップに使用した。
ＨｘＢｚＬ－１３の調製
ＤＭＡ（０．５ｍＬ）及びＤＣＭ（１．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１３ａ（７０ｍｇ、６６．９ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（７１．７ｍｇ、２６７ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（５１．３ｍｇ、２６７ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～３５％、８分）により精製した。次いで、残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１３（２０ｍｇ、１３．３ｕｍｏｌ、収率１９．９％、２ＴＦＡ）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ９．０９（ｓ，２Ｈ），７．８０－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），３．９５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６８－３．５７（ｍ，３８Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．６８（ｍ，４Ｈ），１．６４－１．５２（ｍ，２Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７５．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７５．２（観測値）。
実施例Ｌ－１４ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－１４の合成
Figure 2023553421000088
 シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］、ＨｘＢｚ－１４の調製
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１４ａ（０．２５ｇ、６１１ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（１８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ、２５５ｕＬ、３．０当量）、シクロブチルＮ－［３－（プロピルアミノ）プロピル］カルバメート（１７０ｍｇ、６７８ｕｍｏｌ、１．１１当量、ＨＣｌ）、及びヘキサフルオロリン酸アザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム、ＨＡＴＵ（２３２ｍｇ、６１１ｕｍｏｌ、１．０当量）を、０℃で一度に添加し、０℃で０．５時間撹拌した。次いで、混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、３／１）により精製して、ＨｘＢｚ－１４（０．２８ｇ、４６２ｕｍｏｌ、収率７５．７１％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０４（ｓ，２Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４５－７．４０（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），４．８４－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｓ，４Ｈ），３．５４－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４６－３．３９（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２２－３．０７（ｍ，２Ｈ），２．３２－２．２８（ｍ，２Ｈ），２．１０－２．００（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７９（ｍ，３Ｈ），１．７５－１．６０（ｍ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０６．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０６．２（観測値）。
シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＨｘＢｚ－１３の調製
ＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１４（０．２６ｇ、４２９ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＴＦＡ（４８９ｍｇ、４．２９ｍｍｏｌ、３１８ｕＬ、１０．０当量）を２５℃で一度に添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、混合物をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×２）で抽出して、過剰なＴＦＡを除去した。水層を凍結乾燥させて、黄色固体としてＨｘＢｚ－１３（０．２ｇ、３２３ｕｍｏｌ、収率７５．２０％、ＴＦＡ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８４－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｓ，１Ｈ），４．８５－４．８５（ｍ，１Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．３７（ｓ，２Ｈ），３．１５（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３０－２．２５（ｍ，２Ｈ），２．０８－２．００（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．６６（ｍ，６Ｈ），１．０１－０．８８（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０６．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０６．２（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１４ａの調製
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１３（０．１ｇ、１６１ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（４８．９ｍｇ、４８４ｕｍｏｌ、６７．４ｕＬ、３．０当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＴＦＰ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２Ｈ（１１４ｍｇ、１６１ｕｍｏｌ、１．０当量）を、０℃で一度に添加し、次いで０℃で０．５時間撹拌した。混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで５～６に調整した。次いで、混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３）で洗浄した。次いで、水層を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（２０ｍＬ×３）で更に抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚＬ－１４ａ（０．１５ｇ、１２９ｕｍｏｌ、収率８０．１１％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－１４の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１４ａ（０．１５ｇ、１２９ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）の混合物に、２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１３９ｍｇ、５１７ｕｍｏｌ、４．０当量）及びＥＤＣＩ（１４９ｍｇ、７７６ｕｍｏｌ、６．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで、２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。次いで、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１４（７５．３ｍｇ、５９．１ｕｍｏｌ、収率４５．７１％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０９（ｓ，２Ｈ），７．８２－７．６７（ｍ，３Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），４．８６－４．８２（ｍ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．４８（ｍ，４０Ｈ），３．３８（ｓ，２Ｈ），３．２２－３．０６（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６４－２．５８（ｍ，２Ｈ），２．３２－２．２５（ｍ，２Ｈ），２．０９－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８０（ｍ，３Ｈ），１．７５－１．６１（ｍ，３Ｈ），０．９３（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７４．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７４．３（観測値）。
実施例Ｌ－１５ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－１５の合成
Figure 2023553421000089
 ２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－１１ｂの調製
ＤＭＡ（１５０ｍＬ）及びＤＣＭ（１５０ｍＬ）中のＮ－エトキシプロパン－１－アミン（９．６ｇ、６８．８ｍｍｏｌ、１．３当量、ＨＣｌ）及び２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１１ａ（１４．８ｇ、５２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（４０．６ｇ、２１１ｍｍｏｌ、４．０当量）をＮ２下で２５℃で添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。混合物のｐＨをＮａＨＣＯ３で約９に調整し、減圧下で濃縮して、４５℃でＤＣＭを除去した。水相を酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（１０００ｍＬｘ２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をＭＴＢＥ／ＰＥ＝１／１で２５℃で粉砕して、ＨｘＢｚ－１１ｂ（１２．５ｇ、３４．１ｍｍｏｌ、収率６４．５％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．３１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６－７．２２（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．１７－７．１４（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），１．７９－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．１５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－１１ｃの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１１ｂ（５００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｐｉｎ２Ｂ２（４１６ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＫＯＡｃ（３３５ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ、２．５当量）、及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９９．９ｍｇ、１３６ｕｍｏｌ、０．１当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、次いで、混合物を、Ｎ２雰囲気下で９５℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。残渣を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１０ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌した。水相をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×１）で抽出し、次いで水相をＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（１０ｍＬ×３）で更に抽出した。混合有機層（ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ）を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ＨｘＢｚ－１１ｃ（４９０ｍｇ、粗製物）を得、黒色固体として更に精製することなく次のステップで使用した。
メチル５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚ－１１の調製
ジオキサン（１５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１１ｃ（３９０ｍｇ、９４４ｕｍｏｌ、１．０当量）、メチル５－ブロモピリミジン－２－カルボキシレート（２６６ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、１．３当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６９．０ｍｇ、９４．３ｕｍｏｌ、０．１当量）、Ｋ３ＰＯ４（４０１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ、２．０当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、次いで、Ｎ２雰囲気下で８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚ－１１（１０５ｍｇ、１６１ｕｍｏｌ、収率１７．１％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．３０（ｓ，２Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３－７．７４（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），１．８３－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４２４．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４２４．１（観測値）。
５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－１５ａの調製
ＥｔＯＨ（５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－１１（３３０ｍｇ、７７９ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１３１ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。混合物のｐＨをＨＣｌ（４Ｍ）で約６に調整し、真空中で濃縮して、ＥｔＯＨを除去した。残渣を水（１０ｍＬ）で希釈した。水相を、ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－１５ａ（２００ｍｇ、４８８ｕｍｏｌ、収率６２．７％）を黄色固体として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［１－［［５－［２－アミノ－４－［３－（３，３－ジメチルブタノイルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］スルホニル］アゼチジン－３－イル］メチル－メチル－アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ＨｘＢｚＬ－１５ｂの調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１５ａ（１９５ｍｇ、３３２ｕｍｏｌ、０．８当量）及びｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ｔＢｕＯＯＣ－ＰＥＧ１０－ＮＨ２（３９０ｍｇ、６６６ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（１２６ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ、１７３ｕＬ、３．０当量）及びＨＡＴＵ（１５８ｍｇ、４１５ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で添加した。混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５％～５０％、７分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１５ｂ（８０ｍｇ、６６．４ｕｍｏｌ、収率１６．０％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１５ｃの調製
ＭｅＣＮ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１５ｂ（８０ｍｇ、６６．４ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、８３．０ｕＬ、１５．０当量）を添加し、８０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、残渣を得、残渣を凍結乾燥させて、ＨｘＢｚＬ－１５ｃ（６０ｍｇ、６２．７ｕｍｏｌ、収率９４．４％、ＨＣｌ）を無色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－１５の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１５ｃ（６０ｍｇ、６０．４ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（６４．７ｍｇ、２４１ｕｍｏｌ、４．０当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（４６．３ｍｇ、２４１ｕｍｏｌ、４．０当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１５（３６ｍｇ、３１．３ｕｍｏｌ、収率５１．９％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２７（ｓ，２Ｈ），７．９０－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７８－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７３－３．７２（ｍ，２Ｈ），３．７０－３．５６（ｍ，３６Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８４－１．７１（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１４９．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１４９．５（観測値）。
実施例Ｌ－１６ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－１６の合成
Figure 2023553421000090
 メチル（２Ｓ）－１－（５－ブロモピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシル－ａｔｅ、ＨｘＢｚＬ－１６ｂの調製
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の５－ブロモピリミジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－１６ａ（４００ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（５９８ｍｇ、５．９１ｍｍｏｌ、８２２ｕＬ、３．０当量）、及びメチル（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボキシレート（３４２ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ、１．０５当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＨＡＴＵ（７４９ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、１．０当量）を、Ｎ２下で０℃で一度に添加し、０℃で３０分間撹拌し、次いで２５℃に加熱し、更に０．５時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（２０ｍＬ＊４）で抽出し、混合有機相をブライン（１０ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、４／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１６ｂ（３２０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、収率５１．７％）を黄色油として得た。
（２Ｓ）－１－（５－ブロモピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－１６ｃの調製
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１６ｂ（３２０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１７１ｍｇ、４．０７ｍｍｏｌ、４．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、２５℃で２時間撹拌した。反応混合物をＨＣｌ（４Ｍ）でｐＨ＝７までクエンチし、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を真空中で除去し、所望の固体を水相から沈殿させ、濾過し、乾燥して、ＨｘＢｚＬ－１６ｃ（３００ｍｇ、粗製物）を淡黄色固体として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－（５－ブロモピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－１６ｄの調製
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１６ｃ（２００ｍｇ、６６６ｕｍｏｌ、１．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（１６８ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ、２３２ｕＬ、２．５当量）及びｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート（３９０ｍｇ、６６６ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＨＡＴＵ（２５３ｍｇ、６６６ｕｍｏｌ、１．０当量）を、Ｎ２下で０℃で一度に添加し、０℃で３０分撹拌し、次いで２５℃に加熱し、更に０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～６０％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１６ｄ（３００ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、収率５１．８％）を無色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－（５－ブロモピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１６ｅの調製
ＭｅＣＮ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１６ｄ（３００ｍｇ、３４５ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、８６４ｕＬ、３０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－１６ｅ（２５０ｍｇ、３０７．９９ｕｍｏｌ、収率８９．０９％）を黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－１６ｆの調製
ジオキサン（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（０．３ｍＬ）のＨｘＢｚＬ－１６ｅ（１５０ｍｇ、１８５ｕｍｏｌ、１．０当量）、２－アミノ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド（９１．６ｍｇ、２２２ｕｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１３．５ｍｇ、１８．５ｕｍｏｌ、０．１当量）及びＫ２ＣＯ３（６３．８ｍｇ、４６２ｕｍｏｌ、２．５当量）の溶液を脱気し、次いでＮ２下で２時間９５℃に加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．０４％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～４５％、７分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１６ｆ（１１０ｍｇ、１０８ｕｍｏｌ、収率５８．４％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－１６の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－１６ｆ（１１０ｍｇ、１０８ｕｍｏｌ、１．０当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（１４５ｍｇ、５４０ｕｍｏｌ、５．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（１０３ｍｇ、５４０ｕｍｏｌ、５．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－１６（６６．５ｍｇ、５０．９ｕｍｏｌ、収率４７．１％、純度９５．３％）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．２８－９．２４（ｍ，２Ｈ），７．９１－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．８０－７．７４（ｍ，１Ｈ），７．５０－７．４７（ｍ，１Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｄｔ，Ｊ＝３．２，５．６Ｈｚ，４Ｈ），３．８１－３．７４（ｍ，４Ｈ），３．７０－３．５３（ｍ，３７Ｈ），３．５０－３．３２（ｍ，５Ｈ），３．０２－２．９６（ｍ，２Ｈ），２．１６－１．９７（ｍ，４Ｈ），１．８４－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４６．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４６．７（観測値）。
実施例Ｌ－２１ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（ジメチルカルバモイルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－２１の合成
Figure 2023553421000091
 Ｔｅｒｔ－ブチル（（５－（２－アミノ－４－（（２－（３，３－ジメチルウレイド）エトキシ）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－２０ａの調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１４ａ（２５０ｍｇ、６１１ｕｍｏｌ、１当量）、及び１，１－ジメチル－３－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］尿素（１６５ｍｇ、７３３ｕｍｏｌ、１．２当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＥＤＣＩ（４６８ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、ＤＣＭを除去し、残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、混合物のｐＨをＮａ２ＣＯ３水溶液で約８に調整した。水相を、酢酸エチル（１０ｍＬ＊４）で抽出した。混合有機層をブライン（２０ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、０／１、酢酸エチル／メタノール＝１／０、３／１）により精製して、ＨｘＢｚ－２０ａ（２６０ｍｇ、４４７．７５ｕｍｏｌ、収率７３．３３％）を黄色固体として得た。
ＨｘＢｚ－２０の調製
ＥｔＯＡｃ（３．００ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２０ａ（１３０ｍｇ、２２４ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３．００ｍＬ、５３．６０当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、ＨｘＢｚ－２０（１１５ｍｇ、２０７．７７ｕｍｏｌ、収率９２．８１％、２ＨＣｌ）を淡赤色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２２（ｓ，２Ｈ），７．８６－７．８０（ｍ，２Ｈ），７．８０－７．７４（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．３８－３．３４（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４８１．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４８１．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（ジメチルカルバモイルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－２１ａの調製
ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２０（６５．０ｍｇ、１１７ｕｍｏｌ、１当量、２ＨＣｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（４８．０ｍｇ、４７０ｕｍｏｌ、４当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－２１ａ（８３．０ｍｇ、１１７ｕｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで０℃で１時間撹拌した。混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、混合物のｐＨを、ＴＦＡを漸進的に添加することによって約６に調整し、ＭＴＢＥ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄し、水溶液を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（２０ｍＬ×３）で更に抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚＬ－２１ａ（９５ｍｇ、９３．０３ｕｍｏｌ、収率７９．２２％）を淡黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－２１の調製
ＤＣＭ（２．００ｍＬ）及びＤＭＡ（０．１０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－２１ａ（９０．０ｍｇ、８８．１ｕｍｏｌ、１当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（９５．０ｍｇ、３５３ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（６８．０ｍｇ、３５３ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－２１（５１ｍｇ、３７．４１ｕｍｏｌ、収率４２．４５％、ＴＦＡ）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．１０（ｓ，２Ｈ），７．８３－７．７０（ｍ，３Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７８－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６５－３．５５（ｍ，３６Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．３７－３．３４（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｓ，６Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４９．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４９．６（観測値）。
実施例Ｌ－２３ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－ヒドロキシエトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－２３の合成
Figure 2023553421000092
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［２－ヒドロキシエトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－２２ａの調製
ＤＣＭ（６ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１４ａ（０．３５ｇ、８５５ｕｍｏｌ、１．０当量）及び２－（プロピルアミノオキシ）エタノール（２００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、１．５当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＥＤＣＩ（４９２ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、３．０当量）を２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、ＤＣＭを除去し、残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈した。混合物のｐＨを、ＮａＨＣＯ３水溶液で約８に調整した。次いで、水相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブラインで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１／０、１０／１）により精製して、ＨｘＢｚ－２２ａ（０．３７ｇ、７２５ｕｍｏｌ、収率８４．７７％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０８－９．０１（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４６（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ），４．５６－４．４９（ｍ，２Ｈ），４．０２－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．８１－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．７３－３．６６（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－２２の調製
Ｈ２Ｏ（４ｍＬ）及びＣＨ３ＣＮ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２２ａ（０．３５ｇ、６８５ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＴＦＡ（１．１７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ、７６１ｕＬ、１５．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。混合物をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×２）で抽出して、過剰なＴＦＡを除去した。その後、水層を凍結乾燥させた。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１％～２０％、８分）により更に精製して、ＨｘＢｚ－２２（０．３２ｇ、５０１ｕｍｏｌ、収率７３．１１％、２ＴＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２０（ｓ，２Ｈ），７．８４－７．７２（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），４．０３－３．９６（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７４－３．６６（ｍ，２Ｈ），３．５３－３．３６（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４１１．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４１１．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［５－［２－アミノ－４－［２－ヒドロキシエトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－２３ａの調製
ＴＨＦ（６ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２２（０．２３ｇ、５６０ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＴＦＡ）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（１７０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、２３４ｕＬ、３．０当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（３９６ｍｇ、５６０ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で一度に添加し、次いで０℃で０．５時間撹拌した。混合物を水（５ｍｌ）で希釈し、混合物のｐＨを０℃でＴＦＡで約６に調整した。水相を、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）抽出して廃棄した。水層を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（２０ｍＬ×２）で更に抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚＬ－２３ａ（０．５３ｇ、粗製物、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－ヒドロキシエトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－２３のｐの調製
ＤＣＭ（４ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－２３ａ（０．３５ｇ、３２９ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（３５２ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ、４．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（３７８ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、６．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。次いで、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－２３（８０．４ｍｇ、６８．２ｕｍｏｌ、収率２０．７５％）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．８２－７．７０（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），４．０６－３．９７（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８３－３．７６（ｍ，４Ｈ），３．７４－３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６５－３．５７（ｍ，３６Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），３．０２－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８７－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７９．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７９．３（観測値）。
実施例Ｌ－２７ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（イソプロポキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－２７の合成
Figure 2023553421000093
 イソプロピルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－２７ａの調製
ＤＣＭ（５ｍＬ）及びＤＭＡ（３ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１４ａ（３５０ｍｇ、８５５ｕｍｏｌ、１．０当量）、及びイソプロピルＮ－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］カルバメート（２６８ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１．３当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＥＤＣＩ（６５６ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。混合物を減圧下で３０℃で濃縮した。残渣を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１０ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌した。混合物のｐＨを、ＮａＨＣＯ３水溶液で約８に調整した。水相を、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（１０ｍＬｘ３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、１／１、酢酸エチル／メタノール＝１／０、１０／１）により精製して、ＨｘＢｚ－２７ａ（４６０ｍｇ、７７２ｕｍｏｌ、収率９０．３％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．０４（ｓ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５１－７．４４（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），４．７４－４．６８（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３０－３．２６（ｍ，２Ｈ），１．７６（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．
イソプロピルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－２７の調製
ＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２７ａ（４１０ｍｇ、６８８ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＴＦＡ（１．１８ｇ、１０．３ｍｍｏｌ、７６４ｕＬ、１５．０当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、ＣＨ３ＣＮを除去した。水相をＭＴＢＥ（５ｍＬ×３）で抽出して、過剰なＴＦＡを除去した。水相を凍結乾燥させ、ＨｘＢｚ－２７（４００ｍｇ、５５３ｕｍｏｌ、収率８０．３％、２ＴＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８６－７．７４（ｍ，３Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），４．７６－４．６３（ｍ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．７８（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９６．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９６．１（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（イソプロポキシカーボンイラミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－２７ａの調製
ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－２７（１３０ｍｇ、１８０ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＴＦＡ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（５４．５ｍｇ、５３９ｕｍｏｌ、７５．０ｕＬ、３．０当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１２７ｍｇ、１８０ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で添加し、次いで０．５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、混合物のｐＨをＴＦＡで約６に調整した。水相を、ＭＴＢＥ（５ｍＬ×３）抽出して廃棄した。水相を、ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（１０ｍＬ×３）で更に抽出した。有機相を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－２７ａ（１８０ｍｇ、１７４ｕｍｏｌ、収率９６．７％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－２７の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－２７ａ（１８０ｍｇ、１７４ｕｍｏｌ、１．０当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（１８６ｍｇ、６９５ｕｍｏｌ、４．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（２６６ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、８．０当量）を添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－２７（９１ｍｇ、６６．０ｕｍｏｌ、収率３８．０％、ＴＦＡ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．８２－７．７３（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），４．７５－４．６６（ｍ，３Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５６（ｍ，３６Ｈ），３．４５－３．４２（ｍ，２Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．８４－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２６４．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２６４．７（観測値）。
実施例Ｌ－３２ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル－［２－（ピロリジン－１－カルボニルアミノ）エトキシ］カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－３２の合成
Figure 2023553421000094
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル－［２－（ピロリジン－１－カルボニルアミノ）エトキシ］カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚＬ－３２ａの調製
ＤＣＭ（４ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－１４ａ（０．２５ｇ、６１１ｕｍｏｌ、１．３当量）の混合物に、Ｎ－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］ピロリジン－１－カルボキサミド（１１８ｍｇ、４６９ｕｍｏｌ、１．０当量、ＨＣｌ）及びＥＤＣＩ（２７０．１２ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ、３．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。次いで、混合物を濃縮し、濾過した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊５ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：７％～３８％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－３２ａ（０．１ｇ、１６５ｕｍｏｌ、収率３５．０９％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．８８－７．６８（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），４．０２－３．８９（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，２Ｈ），３．３６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．１９－３．０７（ｍ，４Ｈ），１．８６－１．６８（ｍ，６Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－プロピル－Ｎ－［２－（ピロリジン－１－カルボニルアミノ）エトキシ］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚＬ－３２ｂの調製
Ｈ２Ｏ（４ｍＬ）及びＣＨ３ＣＮ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３２ａ（０．０９ｇ、１４８ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＴＦＡ（２５４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１６５ｕＬ、１５．０当量）を２５℃で一度に添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。次いで、混合物をＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３）で抽出して廃棄した。水層を凍結乾燥させて、ＨｘＢｚＬ－３２ｂ（０．１ｇ、１３６ｕｍｏｌ、収率９１．７６％、２ＴＦＡ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８６－７．７０（ｍ，３Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４８－３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｓ，４Ｈ），１．８１－１．７１（ｍ，６Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（ピロリジン－１－カルボニルアミノ）エトキシ］カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－３２ｃの調製
ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３２ｂ（７０ｍｇ、８２．５ｕｍｏｌ、１．０当量、３ＴＦＡ）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（２５．０ｍｇ、２４７ｕｍｏｌ、３４．４ｕＬ、３．０当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（６９．９ｍｇ、９８．９ｕｍｏｌ、１．２当量）を、０℃で一度に添加し、次いで０℃で０．５時間撹拌した。混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、ｐＨを０℃でＴＦＡで約６に調整した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄した。水層を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（１０ｍＬ×２）で更に抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚＬ－３２ｃ（０．１ｇ、粗製物、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－３２の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３２ｃ（０．１ｇ、８６．１ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）の混合物に、２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１１５ｍｇ、４３１ｕｍｏｌ、５．０当量）及びＥＤＣＩ（１１６ｍｇ、６０３ｕｍｏｌ、７．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮した。次いで、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０＊２５＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－３２（４６．４ｍｇ、３３．４ｕｍｏｌ、収率３８．７８％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０９（ｓ，２Ｈ），７．８５－７．６６（ｍ，３Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９０－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５８（ｍ，３８Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｓ，４Ｈ），３．０１－２．９３（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８６－１．６８（ｍ，６Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７５．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７５．６（観測値）。
実施例Ｌ－３３ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［１－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］スルホニル］アゼチジン－３－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－３３の合成
Figure 2023553421000095
 エチル２－アミノ－８－（５－（（３－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）アゼチジン－１－イル）スルホニル）ピリジン－３－イル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキシレート、ＨｘＢｚ－３２ｂの調製
ジオキサン（５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＴｅｒｔ－ブチルＮ－［［１－［［５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３－ピリジル］スルホニル］アゼチジン－３－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３２ａ（５ｇ、１１．０ｍｍｏｌ、１当量）及びエチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート（３．４１ｇ、１１．０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３．０５ｇ、２２．１ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４０３ｍｇ、５５１ｕｍｏｌ、０．０５当量）を、Ｎ２下で２５℃で添加し、次いで９０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮して、残渣を得た。残渣を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚ－３２ａを得、ＨｘＢｚ－３２ａを、２５℃で１５分間ＣＨ３ＣＮで粉砕し、ＨｘＢｚ－３２ｂ（５．５ｇ、９．９０ｍｍｏｌ、収率８９．７５％）を灰色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）δ９．２９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５０－７．４１（ｍ，２Ｈ），７．０４－６．８５（ｍ，３Ｈ），４．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．５８－３．５２（ｍ，２Ｈ），２．９９－２．８５（ｍ，４Ｈ），２．５６－２．５１（ｍ，１Ｈ），１．３５－１．３０（ｍ，１２Ｈ）．
２－アミノ－８－（５－（（３－（（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）メチル）アゼチジン－１－イル）スルホニル）ピリジン－３－イル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－３２ｃの調製
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３２ｂ（３．２ｇ、５．７６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（７２５ｍｇ、１７．３ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、次いで６０℃で４時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＥｔＯＨを除去した。混合物のｐＨを、０℃でＨＣｌ（１２Ｍ）で約５に調整し、次いで濾過し、濾過ケーキを減圧下で乾燥させて、粗生成物を得た。粗生成物を２５℃で２０分間ＣＨ３ＣＮで粉砕して、ＨｘＢｚ－３２ｃ（２．７ｇ、５．１２ｍｍｏｌ、収率８８．８６％）を灰色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，４００ＭＨｚ）δ９．３４（ｓ，１Ｈ），９．０２（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．９８－７．９２（ｍ，２Ｈ），７．８９－７．８３（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．５９－３．４９（ｍ，４Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５６－２．５４（ｍ，１Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ）．
シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［５－［３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］アゼチジン－１－イル］スルホニル－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３２ｄの調製
ＤＭＦ（１０．０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３２ｃ（４００ｍｇ、７５８ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（３１７ｍｇ、８３４ｕｍｏｌ、１．１当量）、ＤＩＥＡ（４９０ｍｇ、３．７９ｍｍｏｌ、６６０ｕＬ、５当量）、及びシクロブチルＮ－［３－（プロピルアミノ）プロピル］カルバメート（３８０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、２当量、ＨＣｌ）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬｘ３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）、１ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）シリカフラッシュカラム、０～３０％酢酸エチル／ＭｅＯＨ＠３５ｍＬ／分の溶離液）により精製して、ＨｘＢｚ－３２ｄ（３４０ｍｇ、４６９．６９ｕｍｏｌ、収率６１．９５％）を淡黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．１８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５８－７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４３（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），４．８５－４．７６（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６４－３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５４－３．４８（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．２２－３．０２（ｍ，４Ｈ），２．７０－２．５７（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．０１（ｍ，４Ｈ），１．９０－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．７７－１．４７（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），１．０５－０．７６（ｍ，３Ｈ）．
シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［５－［３－（アミノメチル）アゼチジン－１－イル］スルホニル－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３２の調製
ＣＨ３ＣＮ（２．００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１．００ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３２ｄ（３４０ｍｇ、４７０ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（４２８ｍｇ、３．７６ｍｍｏｌ、２７８ｕＬ、８当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊５ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚ－３２（４００ｍｇ、４７０ｕｍｏｌ、収率９９．９８％、２ＴＦＡ）を淡黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），９．０４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），７．８８－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．１３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．８５－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．６，８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．５９－３．４３（ｍ，４Ｈ），３．３８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．１２（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），２．８３－２．７３（ｍ，１Ｈ），２．３７－２．１２（ｍ，２Ｈ），２．００－２．１０（ｍ，４Ｈ），１．７８－１．４３（ｍ，４Ｈ），１．０５－０．８３（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６２４．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６２４．２（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［１－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］スルホニル］アゼチジン－３－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－３３ａの調製
ＴＨＦ（２．００ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３２（２００ｍｇ、２３５ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（７１．０ｍｇ、７０４ｕｍｏｌ、９８．０ｕＬ、３当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１６６ｍｇ、２３５ｕｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、水（１０ｍＬ）で希釈し、混合物のｐＨを、ＴＦＡを漸進的に添加することによって約６に調整し、ＭＴＢＥ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄し、水相を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（２０ｍＬ×３）で更に抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＨｘＢｚＬ－３３ａ（２１０ｍｇ、１８０．３６ｕｍｏｌ、収率７６．８１％）を淡黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－３３の調製
ＤＣＭ（４．００ｍＬ）及びＤＭＡ（０．２０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３３ａ（２１０ｍｇ、１８０ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸（１７８ｍｇ、７２１ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（１３８ｍｇ、７２１ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．２％ＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－３３（９８ｍｇ、６８．１３ｕｍｏｌ、収率３７．７７％、ＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．０２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９１－７．６７（ｍ，３Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），４．８５－４．８０（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５５（ｍ，４０Ｈ），３．５４－３．４８（ｍ，４Ｈ），３．４０（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．２５－３．０８（ｍ，４Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７９－２．６８（ｍ，１Ｈ），２．２９（ｂｒ ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），１．９３－１．８０（ｍ，３Ｈ），１．７７－１．５２（ｍ，４Ｈ），１．０１－０．８８（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９２．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９２．３（観測値）。
実施例Ｌ－３４ シクロブチル（２－（（２－アミノ－８－（２－（３９－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，３７－ジオキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２，３６－ジアザノナトリアコンチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、ＨｘＢｚＬ－３４の合成
Figure 2023553421000096
 ＤＭＦ（１ｍｌ）中のシクロブチル（２－（（２－アミノ－８－（２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、ＨｘＢｚＬ－３４ａ（２３．６ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、１当量）、及び１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３－オキソ－７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４－デカオキサ－４－アザトリアコンタン－３７－酸（３１．７ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（４９μｌ、０．２８ｍｍｏｌ、６当量）、続いて（７－アゼナゾトリアゾトリルオキシ－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰｙＡＯＰ、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．１５６３１１－８３－０（５９ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ、２．４当量）を添加した。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、ＨｘＢｚＬ－３４（４．９ｍｇ、０．００４２ｍｍｏｌ、９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７０．６（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７０．９（観測値）。
実施例Ｌ－３７ シクロブチル（２－（（２－アミノ－８－（２－（３８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，３７－ジオキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２，３６－ジアザオクタトリアコンチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、ＨｘＢｚＬ－３７の合成
Figure 2023553421000097
 ＤＦＭ（０．５ｍｌ）中のシクロブチル（２－（（２－アミノ－８－（２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、ＨｘＢｚＬ－３７ａ（１２．４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）、及び１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザトリヘキサトリアコンタン－３６－酸（１６．３ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２５．５μｌ、０．１５ｍｍｏｌ、６当量）、続いてＰｙＡＯＰＹ（３１．０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ、２．４当量）を添加した。反応物を室温で撹拌し、ＬＣ／ＭＳによってモニタリングし、次いで、濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、ＨｘＢｚＬ－３７（６．７ｍｇ、０．００５８ｍｍｏｌ、２４％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１５６．６（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１５６．９（観測値）。
実施例Ｌ－３８ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－２－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－３８の合成
Figure 2023553421000098
 ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５－ブロモ－２－ピリジル）メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３６ｂの調製
ＣＨ３ＣＮ（２５０ｍＬ）中の５－ブロモピリジン－２－カルバルデヒド、ＨｘＢｚ－３６ａ（５．００ｇ、２６．９ｍｍｏｌ、１当量）及びｔｅｒｔ－ブチルカルバメート（６．３０ｇ、５３．８ｍｍｏｌ、２当量）の溶液に、ＴＦＡ（９．１９ｇ、８０．６ｍｍｏｌ、５．９７ｍＬ、３当量）及びＥｔ３ＳｉＨ（３１．３ｇ、２６８．８ｍｍｏｌ、４２．９ｍＬ、１０当量）を０℃で添加し、２５℃で３時間撹拌した。反応混合物を、０℃でＮａ２ＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）を添加することによってクエンチし、減圧下で濃縮した。残渣を（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層を、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～１：１）により精製した。淡黄色固体としてＨｘＢｚ－３６ｂ（９ｇ、粗製物）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ８．５９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．５８－４．２９（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）
Ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－２－ピリジル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３６ｃの調製
ジオキサン（８０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６ｂ（８．００ｇ、２７．９ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｉｎ２Ｂ２（８．４９ｇ、３３．４ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．０２ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、０．０５当量）及びＫＯＡｃ（５．４７ｇ、５５．７ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージした。混合物を、Ｎ２雰囲気下で９０℃で２時間撹拌し、次いで、ワークアップすることなく、次のステップに直接使用し、ＨｘＢｚ－３６ｃ（９．４ｇ、粗製物）を、黒褐色油として得た。
エチル２－アミノ－８－［６－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート、ＨｘＢｚ－３６ｄの調製
ジオキサン（８０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６ｃ（９．３０ｇ、２７．８２ｍｍｏｌ、２当量）、エチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸（４．３０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５０９ｍｇ、６９５ｕｍｏｌ、０．０５当量）、及びＫ２ＣＯ３（３．８４ｇ、２７．８ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージし、次いで、Ｎ２雰囲気下で９０℃で３時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（３０ｍＬｘ３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）、次いで（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝１：０～５：１）により精製して、ＨｘＢｚ－３６ｄ（２．４０ｇ、５．５０ｍｍｏｌ、収率３９．５％）を淡黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．７６（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．５８－７．３３（ｍ，４Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０５（ｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．３８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［６－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－３６ｅの調製
ＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６ｄ（２．４０ｇ、５．５０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（６ｍＬ）中のＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（９２３ｍｇ、２２．０ｍｍｏｌ、４当量）の溶液を添加し、次いで４０℃で２時間撹拌した。反応混合物のｐＨを、０℃で１ＭのＨＣｌを添加することにより、５～６に調整し、次いで減圧下で濃縮して、ＥｔＯＨを除去した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾過ケーキを減圧下で乾燥させて、ＨｘＢｚ－３６ｅ（１．８８ｇ、４．６０ｍｍｏｌ、収率８３．７％）を灰色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ９．０１（ｓ，１Ｈ），８．５０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，２Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），７．７３－７．６６（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－２－ピリジル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３６ｆの調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６ｅ（０．３５ｇ、８５７ｕｍｏｌ、１当量）及びＮ－エトキシプロパン－１－アミン（１４４ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１．２当量、ＨＣｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（４９３ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、次いで、２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭを除去した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、混合物のｐＨを、０℃でＮａ２ＣＯ３水溶液を添加することによって、約９に調整し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（５ｍＬｘ３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１）、次いで（ＳｉＯ２、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝１：０～３：１）により精製して、ＨｘＢｚ－３６ｆ（０．３３ｇ、６６９ｕｍｏｌ、収率７８．０％）を淡黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．７６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４０－７．３４（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｓ，２Ｈ），３．９５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），１．８２－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
２－アミノ－８－［６－（アミノメチル）－３－ピリジル］－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－３６の調製
ＣＨ３ＣＮ（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６ｆ（０．３３ｇ、６６９ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（６１０ｍｇ、５．３５ｍｍｏｌ、３９６ｕＬ、８当量）を添加し、次いで、８０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、溶媒を除去した。残渣をＨ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈し、ＭＴＢＥ（５ｍＬ×３）で抽出し、廃棄した。水相を減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚ－３６（０．３３ｇ、５３０．９５ｕｍｏｌ、収率７９．４２％、２ＴＦＡ）を淡黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．９９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７９－７．６７（ｍ，３Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），１．８３－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．２６－１．１６（ｍ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９４．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９４．２（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－２－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－３８ａの調製
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３６（０．１５ｇ、２４１ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）の溶液に、ＴＥＡ（７３．３ｍｇ、７２４ｕｍｏｌ、３当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１７１ｍｇ、２４１ｕｍｏｌ、１当量）を０℃で添加し、２０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで５～６に調整し、次いで、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出し、廃棄した。水相を、ＤＣＭ：ｉ－ＰｒＯＨ＝３：１（５ｍＬｘ３）で更に抽出した。混合有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－３８ａ（０．２３ｇ、２１９ｕｍｏｌ、収率９０．９％、ＴＦＡ）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．９１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３－７．７７（ｍ，１Ｈ），７．７５－７．６９（ｍ，３Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８３－３．７４（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５０（ｍ，３６Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），２．５８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
ＨｘＢｚＬ－３８の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（０．３ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３８ａ（０．１８ｇ、１７２ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の溶液に、（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（１８４ｍｇ、６８７ｕｍｏｌ、４当量）及びＥＤＣＩ（１３２ｍｇ、６８７ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、２０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＤＣＭを除去し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－３８（１１６．７ｍｇ、９１．４ｕｍｏｌ、収率５３．２％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．５７（ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８４－７．７９（ｍ，２Ｈ），７．７５－７．６８（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８２－３．７２（ｍ，４Ｈ），３．６７－３．５１（ｍ，３６Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６２．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６２．５（観測値）。
実施例Ｌ－３９ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－２－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－３９の合成
Figure 2023553421000099
 シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［６－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３８ｂの調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２－アミノ－８－［６－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－３８ａ（０．３５ｇ、８５７ｕｍｏｌ、１当量）及びシクロブチルＮ－［３－（プロピルアミノ）プロピル］カルバメート（２５８ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１．２当量、ＨＣｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（３２６ｍｇ、８５７ｕｍｏｌ、１当量）及びＤＩＥＡ（３３２ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ、４４８ｕＬ、３当量）を添加し、次いで２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を０℃で添加Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）によってクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬｘ３）で抽出した。混合有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＭｅＯＨ／酢酸エチル＝１／５）により精製して、ＨｘＢｚ－３８ｂ（０．４５ｇ、７４４．１２ｕｍｏｌ、収率８６．８４％）を黄色固体として得た。
シクロブチルＮ－［３－［［２－アミノ－８－［６－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピル］カルバメート、ＨｘＢｚ－３８の調製
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３８ｂ（０．４５ｇ、７４４ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（６７９ｍｇ、５．９５ｍｍｏｌ、４４１ｕＬ、８当量）を添加し、８０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＣＮを除去し、次いでＭＴＢＥ（５ｍＬ）で抽出して、過剰なＴＦＡを除去した。水層を濃縮して、残渣を得、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚ－３８（０．４ｇ、６４６ｕｍｏｌ、収率８６．８９％、ＴＦＡ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．９９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８０－７．６６（ｍ，３Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），４．８５－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．５４（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．３６（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．１３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．４２－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．７９（ｍ，３Ｈ），１．７７－１．５９（ｍ，３Ｈ），０．９４（ｂｒ ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．３（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブトキシカルボニルアミノ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－２－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－３９ａの調製
ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３９（０．１５ｇ、２０４ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（６２．１ｍｇ、６１４ｕｍｏｌ、８５．４９ｕＬ、３当量）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１４５ｍｇ、２０５ｕｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、添加Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）によってクエンチし、混合物のｐＨを、ＴＦＡで約６に調整し、次いで、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄し、水相を、ＤＣＭ／ＰｒＯＨ＝３／１（２０ｍＬ×３）で更に抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣、ＨｘＢｚＬ－３９ａ（０．２ｇ、１９１ｕｍｏｌ、収率９３．４６％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－３９の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－３９ａ（０．２ｇ、１９１ｕｍｏｌ、１当量）及びナトリウム；２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸塩（１５４ｍｇ、５７４ｕｍｏｌ、３当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（１１０ｍｇ、５７４ｕｍｏｌ、３当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＤＣＭを除去し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－３９（０．０８ｇ、６２．８３ｕｍｏｌ、収率３２．８３％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．０３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８７－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６７－３．５０（ｍ，３８Ｈ），３．６４（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．３８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．１３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．９５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．５９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３５－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．９４－１．８１（ｍ，３Ｈ），１．７７－１．６４（ｍ，４Ｈ），０．９３（ｂｒ ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７３．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７３．７（観測値）。
実施例Ｌ－４０ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－４０の合成
Figure 2023553421000100
 ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－１－（５－ブロモピリジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４０ａの調製
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の５－ブロモピリジン－２－カルボン酸（２．００ｇ、９．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｅｔ３Ｎ（２．５０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ、３．４５ｍＬ、２．５当量）、及びｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボキシレート（２．０６ｇ、９．９０ｍｍｏｌ、１．０当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＨＡＴＵ（３．７６ｇ、９．９０ｍｍｏｌ、１．０当量）をＮ２下で０℃で一度に添加し、混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで２５℃に加熱し、更に０．５時間撹拌した。水（３０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（３０ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝２０／１、２／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４０ａ（３．４０ｇ、９．５７ｍｍｏｌ、収率９６．６％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．６５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９６－７．９２（ｍ，２Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝３．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９１－３．８５（ｍ，２Ｈ），２．３３－２．２８（ｍ，２Ｈ），２．１８－２．１２（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．４８（ｍ，９Ｈ）．
Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－１－［５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４０ｂの調製
ジオキサン（３０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ａ（３．４０ｇ、９．５７ｍｍｏｌ、１．０当量）、４，４，５，５－テトラメチル－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン（２．９２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７００ｍｇ、９５７ｕｍｏｌ、０．１当量）、及びＡｃＯＫ（２．３５ｇ、２３．９ｍｍｏｌ、２．５当量）の溶液を脱気し、次いで、Ｎ２下で３時間１００℃に加熱した。反応混合物を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－４０ｂ（３．６０ｇ、粗製物）を黒色油として得、精製することなく次のステップに直接使用した。
エチル２－アミノ－８－［６－［（２Ｓ）－２－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピロリジン－１－カルボニル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４０ｃの調製
ジオキサン（４５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｂ（３．６０ｇ、８．９５ｍｍｏｌ、１．０当量）、エチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート（２．７７ｇ、８．９５ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６５５ｍｇ、８９５ｕｍｏｌ、０．１当量）及びＫ３ＰＯ４（３．８０ｇ、１７．９ｍｍｏｌ、２．０当量）の溶液を脱気し、次いでＮ２下で２時間９５℃に加熱した。ジオキサン（４５ｍＬ）を除去し、水相を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（３０ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、０／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４０ｃ（１．６０ｇ、３．１７ｍｍｏｌ、収率３５．４％）を淡黄色固体として得た。
２－アミノ－８－［６－［（２Ｓ）－２－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピロリジン－１－カルボニル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４０ｄの調製
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｃ（１．６０ｇ、３．１７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３９９ｍｇ、９．５１ｍｍｏｌ、３．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、２５℃で１０時間撹拌した。反応混合物を、ｐＨ＝７までＨＣｌ（４Ｍ）でクエンチし、次いでＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を除去し、沈殿物を濾過し、乾燥して、ＨｘＢｚＬ－４０ｄ（１．１０ｇ、２．３１ｍｍｏｌ、収率７２．８％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．８６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３２－８．２６（ｍ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９５－７．６５（ｍ，５Ｈ），５．０４－５．０１（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），２．３６－２．２７（ｍ，１Ｈ），２．０３－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８９－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．４５－１．２３（ｍ，９Ｈ）．
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４０ｅの調製
ＤＣＭ（４ｍＬ）及びＤＭＡ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｄ（２００ｍｇ、４２０ｕｍｏｌ、１．０当量）及びＮ－エトキシプロパン－１－アミン（６４．５ｍｇ、４６２ｕｍｏｌ、１．１当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＥＤＣＩ（３２２ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、４．０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。ＤＣＭ（４ｍＬ）を除去し、水（８ｍＬ）を添加し、次いで、水相のｐＨを、飽和ＮａＨＣＯ３で約８に調整し、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）で抽出し、混合有機相をブライン（５ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、０／１～酢酸エチル／メタノール＝１０／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４０ｅ（２００ｍｇ、３５６ｕｍｏｌ、収率８４．８％）を褐色油として得た。
（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４０ｆの調製
ＭｅＣＮ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｅ（２００ｍｇ、３５６ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、８９０ｕＬ、３０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、混合物を８０℃で１時間撹拌し、反応混合物を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－４０ｆ（１７５ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、収率９７．２％）を黄色油として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－４０ｇの調製
ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｆ（１７５ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、１．０当量）、ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート（２０３ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、１．０当量）、及びＥｔ３Ｎ（１０５ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、１４５ｕＬ、３．０当量）の混合物に、ＨＡＴＵ（１３２ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、１．０当量）を、Ｎ２下で０℃で一度に添加し、０℃で３０分間撹拌し、次いで２５℃に加熱し、更に０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～５０％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４０ｇ（１５０ｍｇ、１２６ｕｍｏｌ、収率３６．５％、ＴＦＡ）を淡黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｓ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－４０ｈの調製
ＭｅＣＮ（０．２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｇ（１５０ｍｇ、１４０ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、３４９ｕＬ、３０当量）を、Ｎ２下で２５℃で一度に添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮して、ＣＨ３ＣＮを除去し、水相を凍結乾燥して、ＨｘＢｚＬ－４０ｈ（１４０ｍｇ、１３７．６４ｕｍｏｌ、収率９８．４８％）を褐色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－４０の調製
ＤＣＭ（１．５ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４０ｈ（１４０ｍｇ、１３８ｕｍｏｌ、１．０当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（１８５ｍｇ、６８８ｕｍｏｌ、５．０当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（１３２ｍｇ、６８８ｕｍｏｌ、５．０当量）を、Ｎ２下で２０℃で一度に添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４０（４６．３ｍｇ、３５．５ｕｍｏｌ、収率２５．８％、純度９５．５％）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．９６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝２．４，８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｓ，２Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），５．１６（ｄｄ，Ｊ＝４．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９０－３．８４（ｍ，３Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６８－３．５６（ｍ，３６Ｈ），３．５３－３．４３（ｍ，６Ｈ），３．２２－３．１４（ｍ，２Ｈ），３．０１－２．９６（ｍ，２Ｈ），２．４２－２．３５（ｍ，１Ｈ），２．１３－１．９６（ｍ，３Ｈ），１．８５－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４５．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４５．４（観測値）。
実施例Ｌ－４２ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－４２の合成
Figure 2023553421000101
 （Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル１－（５－ブロモピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４２ｂの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５－ブロモピリミジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４２ａ（２００ｍｇ、９８５ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（５０９ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、６８６ｕＬ、４当量）、及びＨＡＴＵ（４１２ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で添加し、次いで１０分間撹拌し、混合物にｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボキシレート（１８６ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、２５℃で更に３時間撹拌した。反応混合物を水２０ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（２０ｍＬｘ２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１～１／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４２ｂ（２００ｍｇ、５６１ｕｍｏｌ、収率５６．９９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．１８－９．１０（ｍ，２Ｈ），４．７０－４．４１（ｍ，１Ｈ），３．７５－３．４８（ｍ，２Ｈ），２．４２－１．８７（ｍ，４Ｈ），１．５６－１．３０（ｍ，９Ｈ）
（Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル１－（５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４２ｃの調製
ジオキサン（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４２ｂ（２００ｍｇ、５６１ｕｍｏｌ、１当量）及びＰｉｎ２Ｂ２（２１４ｍｇ、８４２ｕｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、ＫＯＡｃ（１１０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４１．１ｍｇ、５６．２ｕｍｏｌ、０．１当量）を、保護されたＮ２下で添加し、次いで９０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。褐色固体として得られた粗生成物ＨｘＢｚＬ－４２ｃ（２３０ｍｇ、粗製物）を更に精製することなく次のステップに使用した。
（Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル１－（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４２ｄの調製
ジオキサン（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４２ｃ（２３０ｍｇ、５７０ｕｍｏｌ、１当量）及び２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド（２０９ｍｇ、５７０ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、水（０．２ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（１５８ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４１．７ｍｇ、５７ｕｍｏｌ、０．１当量）の溶液を、保護されたＮ２下で添加し、次いで９０℃で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エテール／酢酸エチル＝５０／１～酢酸エチル：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４２ｄ（２４０ｍｇ、４２７ｕｍｏｌ、収率７４．８％）を黄色油として得た。
（Ｒ）－１－（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４２ｅの調製
Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）及びＭｅＣＮ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４２ｄ（２４０ｍｇ、４２７ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、３５５ｕＬ、１０当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－４２ｅ（１７０ｍｇ、３３６ｕｍｏｌ、収率７８．７％）を黄色油として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－４２ｆの調製
ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＴｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート（１６７ｍｇ、２８４ｕｍｏｌ、１．２当量）及びＨｘＢｚＬ－４２ｅ（１２０ｍｇ、２３７ｕｍｏｌ、１当量）及びＤＩＥＡ（９１．９ｍｇ、７１１ｕｍｏｌ、１２４ｕＬ、３当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（９０．１ｍｇ、２３７ｕｍｏｌ、１当量）を０℃で添加し、０℃で２時間撹拌し、混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～４５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４２ｆ（１２０ｍｇ、１１２ｕｍｏｌ、収率４７．２％）を淡黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－４２ｇの調製
Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４２ｆ（１１５ｍｇ、１０７ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＣｌ（１２Ｍ、８９．２ｕＬ、１０当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－４２ｇ（１０５ｍｇ、１０３ｕｍｏｌ、収率９６．３％）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．３９－９．０４（ｍ，２Ｈ），７．８８－７．８０（ｍ，２Ｈ），７．７８－７．７４（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０－４．６２（ｍ，１Ｈ），４．０３－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．９２－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７２－３．６７（ｍ，２Ｈ），３．６６－３．５７（ｍ，３８Ｈ），３．４８－３．３８（ｍ，４Ｈ），３．２９－３．１１（ｍ，２Ｈ），２．４７（ｄｔ，Ｊ＝２．８，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１５－１．９８（ｍ，４Ｈ），１．８４－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）
ＨｘＢｚＬ－４２の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４２ｇ（１０５ｍｇ、１０３ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１１１ｍｇ、４１３ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（７９．１ｍｇ、４１３ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、残留圧力下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４２（６０．０ｍｇ、４４．１ｕｍｏｌ、収率４２．８％、ＴＦＡ）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２７－９．２１（ｍ，２Ｈ），７．８９－７．８１（ｍ，２Ｈ），７．７７－７．７２（ｍ，１Ｈ），７．４８－７．４４（ｍ，１Ｈ），５．０５－４．６２（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８９－３．８３（ｍ，４Ｈ），３．７６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５３（ｍ，３６Ｈ），３．５０－３．４２（ｍ，４Ｈ），３．２８－３．２０（ｍ，２Ｈ），３．１６－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．９４（ｍ，２Ｈ），２．４６－２．２６（ｍ，１Ｈ），２．１２－１．９７（ｍ，３Ｈ），１．８２－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｄｔ，Ｊ＝１．８，７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０４－０．９８（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４６．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４６．４（観測値）。
実施例Ｌ－４３ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－４３の合成
Figure 2023553421000102
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－１－（５－ブロモピリジン－２－カルボニル）ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４３ｂの調製
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の５－ブロモピリジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４３ａ（２．１９ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＡＴＵ（４．５３ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、１．１当量）、及びＥｔ３Ｎ（３．２９ｇ、３２．５ｍｍｏｌ、４．５２ｍＬ、３当量）を添加し、次いでｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－ピロリジン－２－カルボン酸塩（２．２５ｇ、１０．８ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）を添加した。混合物を２０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～２／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４３ｂ（３．８ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、収率９８．８％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．７６－８．６１（ｍ，１Ｈ），８．１７－８．１３（ｍ，１Ｈ），７．９１－７．７４（ｍ，１Ｈ），５．０７－４．５１（ｍ，１Ｈ），３．９６－３．６７（ｍ，２Ｈ），２．４３－２．２７（ｍ，１Ｈ），２．１８－１．９０（ｍ，３Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，６Ｈ）．
Ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－１－［５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４３ｃの調製
ジオキサン（８０ｍＬ）中のＴｅｒｔ ＨｘＢｚＬ－４３ｂ（３．５ｇ、９．８５ｍｍｏｌ、１当量）、４，４，５，５－テトラメチル－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１，３，２－ジオキサボロラン、Ｐｉｎ２Ｂ２、ビス（ピナコラート）ジボロン、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．７８１８３－３４－３（３．７５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＫＯＡｃ（２．４２ｇ、２４．６ｍｍｏｌ、２．５当量）の混合物に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７２１ｍｇ、９８５ｕｍｏｌ、０．１当量）を添加し、次いで１００℃で２時間撹拌した。混合物を、ワークアップ及び精製をすることなく次のステップに使用した。ＨｘＢｚＬ－４３ｃ（３．９６ｇ、９．８４ｍｍｏｌ、収率１００．００％）を黒色液体として得た。
エチル２－アミノ－８－［６－［（２Ｒ）－２－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピロリジン－１－カルボニル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４３ｄの調製
ジオキサン（１００ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｃ（３．９６ｇ、９．８４ｍｍｏｌ、１当量）、エチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキシレート（３．０４ｇ、９．８４ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３６０ｍｇ、４９２ｕｍｏｌ、０．０５当量）、及びＫ２ＣＯ３（３．４０ｇ、２４．６ｍｍｏｌ、２．５当量）の混合物を、１００℃で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、残渣を得た。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。粗製物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、ＥＡ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、ＨｘＢｚＬ－４３ｄ（４ｇ、７．９３ｍｍｏｌ、収率８０．５％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．０７－８．７２（ｍ，１Ｈ），８．２９－８．１６（ｍ，１Ｈ），８．１２－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６２－７．４０（ｍ，３Ｈ），５．１７－４．４７（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），４．０４－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．６７－２．９４（ｍ，２Ｈ），２．４９－２．２７（ｍ，１Ｈ），２．２２－１．８８（ｍ，３Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），１．４３－１．３４（ｍ，９Ｈ）．
２－アミノ－８－［６－［（２Ｒ）－２－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピロリジン－１－カルボニル］－３－ピリジル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４３ｅの調製
ＴＨＦ（２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（４０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｄ（３．５ｇ、６．９４ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（５８２ｍｇ、１３．９ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、次いで２０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮して、ＴＨＦを除去し、次いで混合物のｐＨをＨＣｌ（４Ｍ）で約５に調整し、固体を混合物から形成した。混合物を濾過し、濾過したケーキを真空乾燥させ、ＨｘＢｚＬ－４３ｅ（３．３ｇ、６．９３ｍｍｏｌ、収率９９．８％）を白色固体として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボキシレート、ＨｘＢｚＬ－４３ｆの調製
ＤＣＭ（５ｍＬ）及びＤＭＡ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｅ（０．４ｇ、８３９ｕｍｏｌ、１当量）及びＮ－エトキシプロパン－１－アミン（１１７ｍｇ、８３９ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＥＤＣＩ（４８３ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、ＤＣＭを除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１、ＥＡ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４３ｆ（０．３２ｇ、５７０ｕｍｏｌ、収率６７．９％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．０６－８．７７（ｍ，１Ｈ），８．２６－８．１７（ｍ，１Ｈ），８．０７－７．８７（ｍ，１Ｈ），７．５３－７．３６（ｍ，３Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），５．１７－４．５０（ｍ，１Ｈ），４．０１－３．６９（ｍ，６Ｈ），３．０１－２．８８（ｍ，２Ｈ），２．４５－２．３０（ｍ，１Ｈ），２．１８－２．０３（ｍ，２Ｈ），２．０２－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８２－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－４３ｇの調製
Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｆ（２６０ｍｇ、４６３ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＣｌ（１２Ｍ、５７９ｕＬ、１５当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、ＨｘＢｚＬ－４３ｇ（０．２５ｇ、４６１ｕｍｏｌ、収率９９．６％、ＨＣｌ）を黄色油として得た。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－４３ｈの調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｇ（２００ｍｇ、３６９ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート（２１６ｍｇ、３６９ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＡＴＵ（１５４ｍｇ、４０６ｕｍｏｌ、１．１当量）及びＤＩＥＡ（１４３ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１９３ｕＬ、３当量）を０℃で添加し、０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５％～５１％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４３ｈ（３４０ｍｇ、２８６ｕｍｏｌ、収率７７．６％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［（２Ｒ）－１－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリジン－２－カルボニル］ピロリジン－２－カルボニル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－４３ｉの調製
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｈ（３４０ｍｇ、２８６ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の混合物に、ＨＣｌ（１２Ｍ、３５８ｕＬ、１５当量）を添加し、次いで８０℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、残渣を得た。粗製物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４３ｉ（２２０ｍｇ、２０９ｕｍｏｌ、収率７２．９％、ＨＣｌ）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－４３の調製
ＤＭＡ（０．３ｍＬ）及びＤＣＭ（３ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４３ｉ（１８０ｍｇ、１７１ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（１８３ｍｇ、６８３ｕｍｏｌ、４当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（１６４ｍｇ、８５４ｕｍｏｌ、５当量）を添加し、１５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～４５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４３（９４ｍｇ、７２．６ｕｍｏｌ、収率４２．５％、純度９６．２％）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ９．１０－８．８５（ｍ，１Ｈ），８．４３－８．１６（ｍ，１Ｈ），８．１１－７．９４（ｍ，１Ｈ），７．９１－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），５．１８－４．６５（ｍ，１Ｈ），４．０７－３．７２（ｍ，８Ｈ），３．６９－３．３９（ｍ，４０Ｈ），３．３０－３．１３（ｍ，２Ｈ），３．００－２．９７（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．２３（ｍ，１Ｈ），２．１９－１．６６（ｍ，５Ｈ），１．２５－１．２１（ｍ，３Ｈ），１．０５－１．００（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４５．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２４５．４（観測値）。
実施例Ｌ－４４ ２－アミノ－８－（２－（３８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，３７－ジオキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２，３６－ジアザオクタトリアコンチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚＬ－４４の合成
Figure 2023553421000103
 ２－アミノ－８－（２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－５（０．０２８３ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１当量）及び１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザトリアコンタン－３６－酸、ＨｘＢｚＬ－４４ａ（０．０４７８ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１当量）をジメチルホルムアミド、ＤＭＦに溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン、ＤＩＰＥＡ（０．０７５ｍｏｌ、０．４３ｍｍｏｌ、６当量）、続いて（（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰｙＡＯＰ、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．１５６３１１－８３－０（０．０９１ｇ，０．１８ｍｍｏｌ，２．４当量）を添加した。反応物を室温で撹拌し、次いで濃縮し、ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製して、ＨｘＢｚＬ－４４（０．０３４６ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、４６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０４３．５３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０４３．８４（観測値）。
実施例Ｌ－４７ （２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－４７の合成
Figure 2023553421000104
Figure 2023553421000105
 ５－（クロロメチル）－１Ｈ－ピラゾール、ＨｘＢｚ－４１ｂの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１Ｈ－ピラゾール－５－イルメタノール、ＨｘＢｚ－４１ａ（４ｇ、４０．８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化チオニル、ＳＯＣｌ２（９．７０ｇ、８１．５５ｍｍｏｌ、５．９２ｍＬ、２当量）を添加し、次いで０℃～２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚ－４１ｂ（４．５ｇ、３８．６ｍｍｏｌ、収率９４．７０％）を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７．０（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１７．０（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－プロピル－Ｎ－（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）カルバメート、ＨｘＢｚ－４１ｃの調製
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４１ｂ（３．０１ｇ、１７．２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、０℃でＮａＨ（１．０３ｇ、２５．７ｍｍｏｌ、６０％純度、１．５当量）を添加し、混合物をこの温度で０．５時間撹拌し、次いで、ＫＩ（２８５ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ、０．１当量）及び５－（クロロメチル）－１Ｈ－ピラゾール（２ｇ、１７．１６ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。得られた混合物を２０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を、０℃で添加ＮＨ４Ｃｌ２０ｍＬによってクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬｘ３）で抽出した。混合有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８（２５０＊７０ｍｍ、１５ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～４５％、２０分）により精製して、ＨｘＢｚ－４１ｃ（０．６ｇ、２．３５ｍｍｏｌ、収率１３．６９％）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２５６．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２５６．１（観測値）。
Ｎ－（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）プロパン－１－アミン、ＨｘＢｚ－４１ｄの調製
ＭｅＣＮ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４１ｃ（０．５ｇ、１．９６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（２．２３ｇ、１９．５８ｍｍｏｌ、１．４５ｍＬ、１０当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＭｅＣＮを除去した。水層をＭＴＢＥ２０ｍＬで抽出して、過剰なＴＦＡを除去した。水層を凍結乾燥し、ＨｘＢｚ－４１ｄ（０．２５ｇ、粗製物、ＴＦＡ）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ，４００ＭＨｚ）δ ７．１０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．３０－３．２０（ｍ，２Ｈ），１．７８－１．７１（ｍ，２Ｈ），１．０２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５６．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５６．１（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－４１ｆの調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４１ｄ（０．２ｇ、７４３ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ塩）及び２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－４１ｅ（３０４ｍｇ、７４３ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（８５４ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ、６当量）を添加し、次いで２０℃で２時間撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３で調整されたｐＨ＝約８にクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×４）で抽出した。混合有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＭｅＯＨ／酢酸エチル＝１／５）により精製して、ＨｘＢｚ－４１ｆ（０．３５ｇ、６４０．３０ｕｍｏｌ、収率８６．１９％）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５４７．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５４７．３（観測値）。
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－プロピル－Ｎ－（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－４１の調製
ＭｅＣＮ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４１ｆ（０．３５ｇ、６４０ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（５８４ｍｇ、５．１２ｍｍｏｌ、３７９ｕＬ、８当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１％～２５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚ－４１（０．２５ｇ、３７１ｕｍｏｌ、収率５７．８８％、２ＴＦＡ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ，４００ＭＨｚ）δ ９．２０（ｓ，２Ｈ），７．８２－７．７８（ｍ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２６（ｓ，２Ｈ），１．８８－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４７．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４７．２（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－４７ａの調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液ＨｘＢｚ－４１（０．２ｇ、２９６ｕｍｏｌ、１当量、２ＴＦＡ）に、Ｅｔ３Ｎ（９０．０ｍｇ、８８９ｕｍｏｌ、１２４ｕＬ、３当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ｔ－Ｂｕ－ＣＯＯ－ＰＥＧ１０－ＣＯＯＴＦＰ（２２６ｍｇ、２９６ｕｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、添加Ｈ２Ｏ ５ｍＬによってクエンチし、混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで約６に調整し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ＊２）で抽出して、副産物を除去し、水相をＤＣＭ／ＰｒＯＨ＝１０／１（２０ｍＬｘ３）で更に抽出し、混合有機相を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、化合物ＨｘＢｚＬ－４７ａを黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０４３．５６（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０４３．６（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［プロピル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメトキシ）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－４７ｂの調製
ＭｅＣＮ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）の中のＨｘＢｚＬ－４７ａ（０．２ｇ、１９２ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ（１２Ｍ、３２０ｕＬ、２０当量）を添加し、次いで８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４７ｂ（０．１３ｇ、１３２ｕｍｏｌ、収率６８．６９％）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８７．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９８７．６（観測値）。
ＨｘＢｚＬ－４７の調製
ＤＣＭ（１ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－４７ｂ（０．１ｇ、１０１ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（６７．３ｍｇ、４０５ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（７７．７ｍｇ、４０５ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２０％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－４７（０．０２１６ｇ、１９．０ｕｍｏｌ、収率１８．７８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ，４００ＭＨｚ）δ ９．１０（ｓ，２Ｈ），７．７８（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７１－７．６６（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８－７．３７（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．２８－７．２４（ｍ，１Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｓ，２Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８３－３．７６（ｍ，４Ｈ），３．６８－３．５５（ｍ，３６Ｈ），３．２６（ｓ，２Ｈ），３．０２－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１３５．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１３５．６（観測値）。
実施例Ｌ－５２ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブチルカルバモイルオキシ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－５２の合成
Figure 2023553421000106
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブチルカルバモイルオキシ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚ－４５ｂの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚ－４５ａ（１８０ｍｇ、４４０ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（１６７ｍｇ、４４０ｕｍｏｌ、１当量）及びＤＩＰＥＡ（２８４ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ、３８３ｕＬ、５当量）を０℃で添加した。添加後、混合物をこの温度で５分間撹拌し、次いで３－（プロピルアミノ）プロピルＮ－シクロブチルカルバメート（１１０ｍｇ、４４０ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を２０℃で２５分間撹拌した。反応混合物を、０℃でＨ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加することによってクエンチし、次いで、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（５ｍＬｘ３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５％～５５％、１０分）により精製して、ＨｘＢｚ－４５ｂ（０．１５ｇ、２０８ｕｍｏｌ、収率４７．４％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０７（ｓ，２Ｈ），７．８６－７．６５（ｍ，３Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），４．０９－４．０６（ｍ，３Ｈ），３．６３－３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３６（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．２５－２．２１（ｍ，２Ｈ），２．０４－１．８７（ｍ，４Ｈ），１．７８－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），０．９８－０．９４（ｍ，３Ｈ）．
３－［［２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］プロピルＮ－シクロブチルカルバメート、ＨｘＢｚ－４５の調製
ＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４５ｂ（０．１５ｇ、２０８ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１０ｍＬ、１９２当量）を添加し、次いで１５℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚ－４５（１３５ｍｇ、粗製物、２ＨＣｌ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．２１（ｓ，２Ｈ），７．８８－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），４．１６－３．９７（ｍ，３Ｈ），３．６２－３．５８（ｍ，２Ｈ），３．５１－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．２６－２．２０（ｍ，２Ｈ），２．０４－１．８５（ｍ，４Ｈ），１．７５－１．５３（ｍ，４Ｈ），１．０１－０．８９（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０６．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０６．３（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブチルカルバモイルオキシ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－５２ａの調製
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚ－４５（７５ｍｇ、１３０ｕｍｏｌ、１当量、２ＨＣｌ）の溶液に、トリエチルアミン、Ｅｔ３Ｎ、ＴＥＡ（３９．４ｍｇ、３８９ｕｍｏｌ、５４．１ｕＬ、３当量）、及び（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート（９８．９ｍｇ、１３０ｕｍｏｌ、１当量）を０℃で添加した。混合物を１５℃で１時間撹拌した。反応混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで約６に調整し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５％～５５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－５２ａ（０．１３ｇ、１０７ｕｍｏｌ、収率８２．４％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１０２．６（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１０２．６（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［３－（シクロブチルカーブアモイルオキシ）プロピル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－５２ｂの調製
ＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）及びＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－５２ａ（０．１３ｇ、１０７ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の溶液に、ＴＦＡ（９７．５ｍｇ、８５５ｕｍｏｌ、６３．３ｕＬ、８当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＣＨ３ＣＮを除去した。水相をＭＴＢＥ（５ｍＬ×３）で抽出し、廃棄した。水相を減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－５２ｂ（０．１４ｇ、粗製物、ＴＦＡ）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０９（ｓ，２Ｈ），７．８５－７．７８（ｍ，１Ｈ），７．７７－７．６９（ｍ，２Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），４．０９－４．０５（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７６－３．６９（ｍ，３Ｈ），３．６６－３．５８（ｍ，３８Ｈ），３．５０－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５６－２．５１（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．０７（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．８１（ｍ，４Ｈ），１．７５－１．６６（ｍ，４Ｈ），０．９８－０．９１（ｍ，３Ｈ）
ＨｘＢｚＬ－５２の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－５２ｂ（０．１３ｇ、１１２ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の溶液に、（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（９０．１ｍｇ、３３６ｕｍｏｌ、３当量）及びＥＤＣＩ（８５．９ｍｇ、４４８ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、次いで、１５℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＤＣＭを除去し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－５２（３２．３ｍｇ、２５．４ｕｍｏｌ、収率２２．６％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．８３－７．６７（ｍ，３Ｈ），７．１１（ｓ，１Ｈ），４．６９（ｓ，２Ｈ），４．０９－４．０５（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．７０－３．５５（ｍ，３６Ｈ），３．５１－３．４５（ｍ，３Ｈ），３．３８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．３２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．２０（ｍ，２Ｈ），２．０７－１．８４（ｍ，４Ｈ），１．８０－１．５４（ｍ，４Ｈ），１．１０－０．８２（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７４．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２７４．７（観測値）。
実施例Ｌ－５３ （２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－５３の合成
Figure 2023553421000107
 Ｔｅｒｔ－ブチル（（５－ブロモピリジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－３９ｂの調製
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の（５－ブロモ－３－ピリジル）メタンアミン、ＨｘＢｚ－３９ａ（１ｇ、５．３５ｍｍｏｌ、１当量）、及びＴＥＡ（６４９ｍｇ、６．４２ｍｍｏｌ、８９３ｕＬ、１．２当量）の溶液に、０℃でＢｏｃ２Ｏ（１．４０ｇ、６．４２ｍｍｏｌ、１．４７ｍＬ、１．２当量）を添加し、次いで２５℃で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１～１／１）により精製して、ＨｘＢｚ－３９ｂ（１．５ｇ、５．２２ｍｍｏｌ、収率９７．７％）を白色固体として得た。
Ｔｅｒｔ－ブチル（（５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－３９ｃの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３９ｂ（７５０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ、１当量）及びＰｉｎ２Ｂ２（９９５ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、ＫＯＡｃ（５１３ｍｇ、５．２２ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１９１ｍｇ、２６２ｕｍｏｌ、０．１当量）を、Ｎ２下で添加し、次いで９０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚ－３９ｃ（８００ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、収率９１．７％）を褐色油として得、これを更に精製することなく次のステップに使用した。
Ｔｅｒｔ－ブチル（（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリジン－３－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚ－３９ｄの調製
ジオキサン（３ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３９ｃ（８００ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１当量）及び２－アミノ－８－ブロモ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド（８７７ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、水（３ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（９９２ｍｇ、７．１８ｍｍｏｌ、３当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１７５ｍｇ、２３９ｕｍｏｌ、０．１当量）の溶液を、Ｎ２下で添加し、次いで、９０℃で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エテール／酢酸エチル＝５０／１～酢酸エチル：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、ＨｘＢｚ－３９ｄ（９００ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、収率７６．２％）を黄色油として得た。
２－アミノ－８－（５－（アミノメチル）ピリジン－３－イル）－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－３９の調製
ＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚ－３９ｄ（３５０ｍｇ、７０９ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（６４６ｍｇ、５．６７ｍｍｏｌ、４２０ｕＬ、８当量）を添加し、Ｎ２雰囲気下で８０℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）を添加し、水相を、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ×３）で抽出して廃棄し、水相を凍結乾燥させた。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３５％、９分）により精製して、ＨｘＢｚ－３９（２０１ｍｇ、３９６ｕｍｏｌ、収率５５．９％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．９６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．３３－８．２７（ｍ，１Ｈ），７．８０－７．７２（ｍ，３Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），４．３１（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２ｚ，２Ｈ），３．４４（ｓ，２Ｈ），１．８２－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９４．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９４．２（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］－３－ピリジル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－５３ａの調製
ＴＨＦ（５ｍＬ）のＨｘＢｚ－３９（１５０ｍｇ、２９６ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（２０９ｍｇ、２９６ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（８９．７ｍｇ、８８７ｕｍｏｌ、１２３ｕＬ、３当量）を添加し、２５℃で１時間撹拌した。混合物のｐＨを、０℃でＴＦＡで４～５に調整し、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出して廃棄し、水溶液をＤＣＭ／ｉ－ｐｒＯＨ（２０ｍＬ＊３、３／１）で更に抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－５３ａ（２００ｍｇ、２１４ｕｍｏｌ、収率７２．４％）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－５３の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－５３ａ（０．１３ｇ、１３９ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（９２．５ｍｇ、５５７ｕｍｏｌ、４．０当量）及びＥＤＣＩ（１３３ｍｇ、６９６ｕｍｏｌ、５．０当量）を、２５℃で一度に添加し、次いで、２５℃で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：２５％～５５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－５３（７８ｍｇ、６５．２ｕｍｏｌ、収率４６．８５％、ＴＦＡ）を淡黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．９８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．４７（ｓ，１Ｈ），７．８６－７．８１（ｍ，１Ｈ），７．７９－７．７２（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．３７（ｍ，２Ｈ），４．６３（ｓ，２Ｈ），３．９８（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８１－３．７３（ｍ，４Ｈ），３．６４－３．５４（ｍ，３６Ｈ），３．４５（ｓ，２Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５９－２．５０（ｍ，２Ｈ），１．８７－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８２．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８２．６（観測値）。
実施例Ｌ－６１ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－６１の合成
Figure 2023553421000108
Figure 2023553421000109
 Ｎ－ブト－３－エニル－４－ニトロ－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｂの調製
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の４－ニトロ－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ａ（１２ｇ、４９．１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（４０．０ｇ、１２３ｍｍｏｌ、２．５当量）、ＫＩ（８．１６ｇ、４９．１ｍｍｏｌ、１．０当量）、及び４－ブロモブチル－１－エン（１９．９ｇ、１４７ｍｍｏｌ、１５．０ｍＬ、３．０当量）を添加し、次いで、Ｎ２下で４０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１５０ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（１００ｍＬｘ２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、１０／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｂ（１１ｇ、３６．９ｍｍｏｌ、収率７５．１％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．５１－８．３６（ｍ，２Ｈ），８．１４－７．９４（ｍ，２Ｈ），５．７７－５．７０（ｍ，１Ｈ），５．１０－４．９６（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．６７－１．４４（ｍ，２Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２９９．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２９９．０（観測値）。
４－ニトロ－Ｎ－［２－（オキシラン－２－イル）エチル］－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｃの調製
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｂ（１３．５ｇ、４５．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、０℃でメタ－クロロ過安息香酸、ｍ－ＣＰＢＡ（１８．４ｇ、９０．５ｍｍｏｌ、純度８５％、２．０当量）を添加し、次いで２０℃で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＳＯ３（３０ｍＬ×１）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、３／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｃ（１２ｇ、３８．２ｍｍｏｌ、収率８４．４％）を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３１５．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３１５．０（観測値）。
Ｎ－［４－（エチルアミノ）－３－ヒドロキシ－ブチル］－４－ニトロ－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｄの調製
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｃ（７ｇ、２２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、０℃でエタンアミン（３３．５ｇ、４４５ｍｍｏｌ、４８．６ｍＬ、純度６０％、２０当量）を添加し、次いで３０℃で２時間撹拌した。混合物を４５℃で真空中で濃縮した。粗生成物ＨｘＢｚＬ－６１ｄ（８ｇ、２２．３ｍｍｏｌ、収率９９．９５％）を、黄色固体として更に精製することなく次のステップに使用した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３６０．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３６０．２（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－エチル－Ｎ－［２－ヒドロキシ－４－［（４－ニトロフェニル）スルホニル－プロピル－アミノ］ブチル］カルバメート、ＨｘＢｚＬ－６１ｅの調製
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｄ（７．６ｇ、２１．１ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）の溶液に、ＮａＨＣＯ３（３．５５ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、１．６４ｍＬ、２．０当量）及びＢｏｃ２Ｏ（９．２３ｇ、４２．３ｍｍｏｌ、９．７１ｍＬ、２．０当量）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。得られた混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（５０ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（５０ｍＬｘ１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、２／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｅ（８．６ｇ、１８．７ｍｍｏｌ、収率８８．５％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．４６－８．３９（ｍ，２Ｈ），８．１３－８．０４（ｍ，２Ｈ），３．７８－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．３９－３．２（ｍ，３Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．１４（ｍ，２Ｈ），３．１０－３．００（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．５３（ｍ，３Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－（１，３－ジオキソイソインドリン－２－イル）－４－［（４－ニトロフェニル）スルホニル－プロピル－アミノ］ブチル］－Ｎ－エチル－カルバメート、ＨｘＢｚＬ－６１ｆの調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｅ（５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びイソインドリン－１，３－ジオン（１．７６ｇ、１２．０ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、トリフェニルホスフィン、ＰＰｈ３（４．２８ｇ、１６．３ｍｍｏｌ、１．５当量）、及びジエチルアゾジカルボキシレート、ＤＥＡＤ（２．８４ｇ、１６．３ｍｍｏｌ、２．９７ｍＬ、１．５当量）を０℃で添加し、２０℃で１時間撹拌した。混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（５０ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機相をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、１／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｆ（８．８ｇ、粗製物）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５８９．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５８９．２（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－アミノ－４－［（４－ニトロフェニル）スルホニル－プロピル－アミノ］ブチル］－Ｎ－エチル－カルバメート、ＨｘＢｚＬ－６１ｇの調製
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｆ（４．４ｇ、７．４７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、２０℃でＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏ（２．２５ｇ、４４．９ｍｍｏｌ、２．１８ｍＬ、６．０当量）を添加し、次いで、８０℃で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－６１ｇ（３．４ｇ、７．４１ｍｍｏｌ、収率９９．２％）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４５９．２（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４５９．２（観測値）。
Ｎ－［３－アミノ－４－（エチルアミノ）ブチル］－４－ニトロ－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｈの調製
ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｇ（２．９ｇ、６．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、２９．０ｍＬ、１８．３当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－６１ｈ（２．７ｇ、粗製物、２ＨＣｌ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．３５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７８－３．６９（ｍ，１Ｈ），３．４５－３．３１（ｍ，４Ｈ），３．１７－３．０５（ｍ，４Ｈ），２．１２－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５７－１．４３（ｍ，２Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．８０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３５９．１７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３５９．１（観測値）。
Ｎ－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル］－４－ニトロ－Ｎ－プロピル－ベンゼンスルホンアミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｉの調製
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｈ（２．７ｇ、７．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（１．９１ｇ、１８．８ｍｍｏｌ、２．６２ｍＬ、２．５当量）の混合物に、カルボニルジイミダゾール、ＣＤＩ（２．４４ｇ、１５．１ｍｍｏｌ、２．０当量）を０℃で添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。得られた混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（５０ｍＬ）に注ぎ、１０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、０／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｉ（３００ｍｇ、７８０ｕｍｏｌ、収率１０．４％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ８．３９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．９９－３．９５（ｍ，１Ｈ），３．７７－３．６３（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４８－３．３８（ｍ，１Ｈ），３．３５－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．２２－３．０４（ｍ，４Ｈ），１．９８－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６６－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．１５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
１－エチル－４－［２－（プロピルアミノ）エチル］イミダゾリジン－２－オン、ＨｘＢｚＬ－６１ｊの調製
ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｉ（３００ｍｇ、７８０ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１９６ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ、６．０当量）及び２－スルファニルアセタート（０．４５ｇ、４．２４ｍｍｏｌ、３８４ｕＬ、５．４３当量）を添加し、次いで２５℃で２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、次いで、水相のｐＨを、ＨＣｌ（１Ｍ）で３～４に調整し、次いで、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出して、副産物を除去し、次いで、水相を凍結乾燥させて、ＨｘＢｚＬ－６１ｊ（１８０ｍｇ、７６３ｕｍｏｌ、収率９７．８％、ＨＣｌ）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ３．８３－３．７３（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．２８－３．１３（ｍ，３Ｈ），３．１２－３．０３（ｍ，２Ｈ），３．０２－２．９３（ｍ，２Ｈ），２．０１－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．７９－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．１１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］カルバメート、ＨｘＢｚＬ－６１ｌの調製
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）メチル］ピリミジン－５－イル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボン酸、ＨｘＢｚＬ－６１ｋ（２１０ｍｇ、５１３ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（２０５ｍｇ、５３９ｕｍｏｌ、１．０５当量）、ＤＩＥＡ（３３１ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、４４７ｕＬ、５．０当量）、及びＨｘＢｚＬ－６１ｊ（１４５ｍｇ、６１５ｕｍｏｌ、１．２当量、ＨＣｌ）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。得られた混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１０ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌した。水相を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合有機層をブライン（１０ｍＬｘ２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００～２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、１／０、酢酸エチル／メタノール＝１／０、３／１）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｌ（３００ｍｇ、５０８ｕｍｏｌ、収率９９．０％）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５９１．３（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５９１．３（観測値）。
２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル］－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚＬ－６１ｍの調製
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｌ（３００ｍｇ、５０８ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、６．００ｍＬ、４７．３当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１％～３０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１ｍ（１４２ｍｇ、１９８ｕｍｏｌ、収率３８．９１％、２ＴＦＡ）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．２２（ｓ，２Ｈ），７．８８－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），３．７５－３．６０（ｍ，２Ｈ），３．５７－３．５０（ｍ，４Ｈ），３．３９（ｓ，２Ｈ），３．２８－３．１８（ｍ，３Ｈ），２．０２－１．９７（ｓ，１Ｈ），１．８８－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８１－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．１５－１．１０（ｍ，３Ｈ），１．０１－０．９５（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９１．２８（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９１．３（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ＨｘＢｚＬ－６１ｎの調製
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｍ（９０ｍｇ、１２５ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＴＦＡ）及びＥｔ３Ｎ（３８．０２ｍｇ、３７６ｕｍｏｌ、５２．３ｕＬ、３．０当量）の溶液に、（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパネート、ｔ－Ｂｕ－ＣＯＯ－ＰＥＧ１０－ＣＯＯＴＦＰ（９５．５ｍｇ、１２５ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、次いで、混合物のｐＨをＴＦＡで約６に調整した。水層をＭＴＢＥ（５ｍＬ×３）で抽出して、副生成物を除去した。水相を、ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（１０ｍＬ×３）で更に抽出した。有機相（ＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ）を真空中で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－６１ｎ（１３０ｍｇ、１２０ｕｍｏｌ、収率９５．５％）を黄色油として得た。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［２－（１－エチル－２－オキソ－イミダゾリジン－４－イル）エチル－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－６１ｏの調製
ＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｎ（１００ｍｇ、９２．０ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＴＦＡ（８３．９ｍｇ、７３５ｕｍｏｌ、５４．５ｕＬ、８．０当量）を添加し、次いで８０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮して、残渣を得、残渣を水（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＭＴＢＥ（１０ｍＬ）で抽出して、過剰なＴＦＡを除去し、水相を凍結乾燥して、ＨｘＢｚＬ－６１ｏ（１００ｍｇ、８７．３ｕｍｏｌ、収率９４．９％、ＴＦＡ）を黄色油として得た。
ＨｘＢｚＬ－６１の調製
ＤＣＭ（１ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６１ｏ（１００ｍｇ、８７．３ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（７０．２ｍｇ、２６２ｕｍｏｌ、３．０当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（６７．０ｍｇ、３４９ｕｍｏｌ、４．０当量）を添加し、次いで２０℃で１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１０％～３５％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６１（３０ｍｇ、２３．８ｕｍｏｌ、収率２７．３％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ ９．１０（ｓ，２Ｈ），７．８１－７．６８（ｍ，３Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６８－３．５９（ｍ，３７Ｈ），３．５５－３．５０（ｍ，３Ｈ），３．４０（ｓ，２Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，３Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．０６－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．１５－１．１０（ｍ，３Ｈ），１．０１－０．９３（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２５９．５（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２５９．６（観測値）。
実施例Ｌ－６５ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［４－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルカルバモイルオキシメチル］フェニル］カルバモイル］－４－ウレイド－ブチル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］アミノ］－３－オキソ－プロキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロオキシ、２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、ＨｘＢｚＬ－６５の合成
Figure 2023553421000110
 ４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－メチルブタンアミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）メチル）カルバメート、ＨｘＢｚＬ－６５ａの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンザゼピン－４－カルボキサミド、ＨｘＢｚ－５（４１．２ｍｇ、９６ｕｍｏｌ、１ｅｑ、ＨＣｌ）、及びＥｔ３Ｎ（２９．０ｍｇ、２８７ｕｍｏｌ、３９．９ｕＬ、３当量）の溶液に、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－３－メチル－１－（（（Ｓ）－１－（（４－（（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレドペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソブタン－２－イル）カルバメート、Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＮＣ（１１０ｍｇ、１４３ｕｍｏｌ、１．５当量）を０℃で添加し、次いで、２５℃で１時間撹拌した。ピペリジン（２４．４ｍｇ、２８７ｕｍｏｌ、２８．３ｕＬ、３当量）を混合物に添加し、２５℃で更に１時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：５％～３０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６５ａ（６０ｍｇ、７５．０ｕｍｏｌ、収率７８．４％）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８００．４（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］８００．６（観測値）。
ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［４－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルカルバモイルオキシメチル］フェニル］カルバモイル］－４－ウレイド－ブチル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］アミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ＨｘＢｚＬ－６５ｂの調製
ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６５ａ（６０ｍｇ、６５．７ｕｍｏｌ、１当量、ＴＦＡ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１９．９ｍｇ、１９７ｕｍｏｌ、２７．４ｕＬ、３当量）及び（２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（３－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３－オキソ－プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノエート、ｔ－Ｂｕ－ＣＯＯ－ＰＥＧ１０－ＣＯＯＴＦＰ（５０．１ｍｇ、６６ｕｍｏｌ、１当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を水２ｍＬで希釈し、次いで、水相のｐＨを、ＴＦＡで５～６に調整し、ＤＣＭ／ｉ－ｐｒＯＨ（５ｍＬ×３、３／１）で抽出し、混合有機相を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－６５ｂ（９０ｍｇ、６４．４ｕｍｏｌ、収率９８．２％）を黄色油として得、これを更に精製することなく、次のステップに使用した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９６．８（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３９６．７（観測値）。
３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－［［４－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルカルバモイルオキシメチル］フェニル］カルバモイル］－４－ウレイド－ブチル］カルバモイル］－２－メチル－プロピル］アミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－６５ｃの調製
水（３ｍＬ）及びＭｅＣＮ（１ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６５ｂ（９０ｍｇ、６４ｕｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＦＡ（７３．５ｍｇ、６４４ｕｍｏｌ、４７．７ｕＬ、１０当量）を添加し、次いで８０℃で２時間撹拌した。反応混合物を水２ｍＬで希釈し、水相のｐＨをＴＦＡで５～６に調整し、ＤＣＭ／ｉ－ｐｒＯＨ（５ｍＬ×３、３／１）で抽出し、混合有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ＨｘＢｚＬ－６５ｃ（１００ｍｇ、粗製物）を黄色油として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３４０．７（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１３４０．６（観測値）。
ＨｘＢｚＬ－６５の調製
ＤＣＭ（１ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＨｘＢｚＬ－６５ｃ（１００ｍｇ、７４．６ｕｍｏｌ、１当量）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸ナトリウム（８０．０ｍｇ、２９８ｕｍｏｌ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（５７．２ｍｇ、２９８ｕｍｏｌ、４当量）を添加し、次いで２５℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］、Ｂ％：１５％～４０％、８分）により精製して、ＨｘＢｚＬ－６５（２０ｍｇ、１２．７５ｕｍｏｌ、収率１７．０９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ９．０８（ｓ，２Ｈ），７．８３－７．７８（ｍ，１Ｈ），７．７７－７．７１（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４７（ｓ，１Ｈ），７．４２－７．３４（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），４．５４－４．４８（ｍ，１Ｈ），４．２３－４．１８（ｍ，１Ｈ），４．０２－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８０－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．６５－３．６０（ｍ，３６Ｈ），３．５２－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），３．２１－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６１－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．１０（ｍ，１Ｈ），２．０２－１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８５－１．７１（ｍ，３Ｈ），１．７０－１．５２（ｍ，２Ｈ），１．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０５－０．９９（ｍ，９Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５６８．６（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１５６８．６（観測値）。
実施例Ｌ－７０ ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル１－（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）－３－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２－アザヘキサトリアコンタン－３６－オート、ＨｘＢｚＬ－７０
Figure 2023553421000111
 実施例Ｌ－５の手順に従い、５０ｍｌのＤＣＭ中の３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンザゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、ＨｘＢｚＬ－５ａ（５．００ｇ、５．３５ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（１．７７、１０．７ｍｍｏｌ、２．００当量）、プロパネホスホン酸無水物（ＰＰＡＡ、Ｔ３Ｐ）、ＣＡＳ Ｒｅｇ．Ｎｏ．６８９５７－９４－８（ＭｅＣＮ中の５０重量％溶液、１７．０ｇ溶液、２６．８ｍｍｏｌ、５．００当量）、及びＮ－メチルイミダゾール、ＮＭＩ（２．１５ｍＬ、２６．８ｍｍｏｌ、５．００当量）を順次添加した。混合物を２０℃で２時間撹拌し、次いで、２０％のＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で希釈した。水層をＤＣＭ（２５ｍＬ）で抽出し、混合有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空内で濃縮して、粗製ＨｘＢｚＬ－７０を濃褐色油の形態で得た。材料をＢｉｏｔａｇｅカラム（ＭｅＣＮ／水２：８、ｖ／ｖ中の２５０ｍＬの７．５ｍＭ ＨＣｌ）に充填し、勾配ステップ（２０カラム体積のＭｅＣＮ／水２：８、次いで１５カラム体積のＭｅＣＮ／水３：７）を使用して精製した。所望の画分を合わせ、次いで抽出し（２×３００ｍＬのＤＣＭ）、真空内で濃縮して、窒素下で－２０℃で貯蔵した暗黄色油の形態で純粋なＨｘＢｚＬ－７０（５．３４ｇ、ｑＮＭＲによる５５．６重量％の純度、収率５６％）を得た後、ＤＭＡで希釈し、ＨｘＢｚＬ－７０の２０ｍＭ溶液を作製した。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８３．１（計算値）、ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８３．１（観測値）。
実施例２０１ 免疫複合体（ＩＣ）の調製
リジンコンジュゲート免疫複合体を調製するために、抗体を、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、１００ｍＭのホウ酸、５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ８．３の１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸を含有するコンジュゲーション緩衝液に緩衝液交換する。次いで、溶出液を各々、緩衝液を使用して約１～１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整し、次いで滅菌濾過する。抗体を２０～３０℃に予め加温し、５～２０ｍＭの濃度までジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解させた式ＩＩの２～２０（例えば、７～１０）モル当量のテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）またはスルホン酸テトラフルオロフェニル（ｓｕｌｆｏＴＦＰ）エステル、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー（ＨｘＢｚＬ）化合物と急速に混合する。反応物を３０℃で約１６時間進行させ、免疫複合体（ＩＣ）を、２つの連続したＧ－２５脱塩カラムまたはｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で平衡化されたＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを走らせることによって、反応物から分離して、表３ａ及び表３ｂの免疫複合体（ＩＣ）を提供する。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）は、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）上のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって判定される。
システインコンジュゲート免疫複合体を調製するために、抗体を、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、２ｍＭのＥＤＴＡを有するＰＢＳ、ｐＨ７．２を含有するコンジュゲーション緩衝液に緩衝液交換する。２～４モル過剰のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）を３７℃で３０分～２時間使用して、鎖間ジスルフィドを還元する。過剰なＴＣＥＰまたはＤＴＴを、コンジュゲーション緩衝液で予め平衡化されたＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して除去した。緩衝液交換された抗体の濃度を、コンジュゲーション緩衝液を使用して約５～２０ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。マレイミド－ＨｘＢｚＬ化合物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）のいずれかに、５～２０ｍＭの濃度に溶解される。コンジュゲーションのために、抗体を、１０～２０モル当量のマレイミド－ＨｘＢｚＬと混合する。いくつかの事例では、最大２０％（ｖ／ｖ）の追加のＤＭＡまたはＤＭＳＯを添加して、マレイミド－ＨｘＢｚＬのコンジュゲーション緩衝液中の溶解度を改善した。反応物を２０℃で約３０分～４時間進行させる。得られた複合体を、２つの連続したＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して、未反応のマレイミド－ＨｘＢｚＬから精製する。カラムは、ｐＨ７．２のリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で予め平衡化される。アジュバント対抗体比（ＤＡＲ）は、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）上のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって推定される。
コンジュゲーションのために、抗体は、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさない、当該技術分野で既知の水性緩衝系に溶解され得る。リン酸緩衝生理食塩水を使用してもよい。ＨｘＢｚＬ化合物は、本明細書の他の箇所に記載されるように、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解される。いくつかのかかる態様では、ＨｘＢｚＬは、ｐＨ８トリス緩衝液（例えば、５０ｍＭトリス）中に、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及び約５ｍＭ～約５０ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３０ｍＭなどのその範囲の濃度に溶解される。いくつかの態様では、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー中間体は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、アセトニトリル、または別の好適な双極非プロトン性溶媒中に溶解される。
あるいは、コンジュゲーション反応において、等価過剰のＨｘＢｚＬ溶液を希釈し、抗体溶液と組み合わせてもよい。ＨｘＢｚＬ溶液は、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で適切に希釈され得、それらの例として、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、及び酢酸が挙げられる。抗体に対する８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー中間体のモル当量は、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１、または約２０：１、及び、約１．５：１～約２０：１、約１．５：１～約１５：１、約１．５：１～約１０：１、約３：１～約１５：１、約３：１～約１０：１、約５：１～約１５：１、または約５：１～約１０：１の範囲であってもよい。反応は、ＬＣ－ＭＳなどの当該技術分野で既知の方法によって完了するように好適に監視され得る。コンジュゲーション反応は、典型的には、約１時間～約１６時間の範囲で完全である。反応が完了した後、試薬を反応混合物に添加して、反応をクエンチしてもよい。抗体チオール基が、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー中間体のマレイミドなどのチオール反応性基と反応している場合、未反応の抗体チオール基を、キャッピング試薬と反応させてもよい。好適なキャッピング試薬の例は、エチルマレイミドである。
コンジュゲーション後、免疫複合体は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、限外濾過、遠心限外濾過、接線流濾過、及びそれらの組み合わせなどの、当該技術分野において既知の精製方法により精製され、非コンジュゲート反応体及び／またはコンジュゲート凝集体から分離され得る。例えば、精製の前に、免疫複合体を、２０ｍＭのコハク酸ナトリウム、ｐＨ５中などで希釈してもよい。希釈溶液をカチオン交換カラムに塗布し、続いて、例えば、少なくとも１０カラム体積の２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄する。複合体は、ＰＢＳなどの緩衝液で好適に溶出されてもよい。
実施例２０２ ＨＥＫレポーターアッセイ
ヒトＴＬＲ７またはヒトＴＬＲ８（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）を発現するヒト胚性腎臓（ＨＥＫ２９３）レポーター細胞を、細胞増殖及び実験のためのベンダープロトコルとともに使用した。簡潔に述べると、細胞を、１０％ＦＢＳ、ＺＥＯＣＩＮ（商標）、及びＢｌａｓｔｉｃｉｄｉｎを補充したＤＭＥＭ中で、５％ＣＯ２で８０～８５％融合に増殖させた。次いで、ＨＥＫ検出培地及び免疫刺激分子を含有する基質を用いて、４×１０４細胞／ウェルの９６ウェル平板に細胞を播種した。６２０～６５５ｎｍの波長でプレートリーダーを使用して活性を測定した。
実施例２０３ インビボでの免疫複合体活性の評価
本実施例は、本発明の免疫複合体が、免疫活性化を誘発するのに有効であり、したがって、がんの治療に有用であることを示す。
ａ）ヒト抗原提示細胞の単離：ヒト骨髄抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）ヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｃａｎａｄａ）を使用した密度勾配遠心分離により、健康な献血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得られるヒト末梢血から負に選択された。その後、未成熟ＡＰＣを、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含有するＣＤ１６枯渇を伴わないＥＡＳＹＳＥＰ（商標）ヒト単球濃縮キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、負の選択によって９０％超の純度まで精製した。
ｂ）骨髄系ＡＰＣ活性化アッセイ：２ｘ１０５ＡＰＣを、Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬ（マイクログラム／ミリリットル）ストレプトマイシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸を補充したＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ）、及び示される場合、本発明の様々な濃度の非コンジュゲート（裸）抗体及び免疫複合体（上記の実施例に従って調製される）を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）でインキュベートする。無細胞上清を、ＥＬＩＳＡを介して１８時間後に分析して、炎症誘発性応答の読み出しとしてＴＮＦα分泌を測定する。
ｃ）ＰＢＭＣ活性化アッセイ：ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離によって健康な献血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得たヒト末梢血から単離した。ＰＢＭＣを、１０：１のエフェクター対標的細胞比で、ＣＥＡ発現腫瘍細胞（例えば、ＭＫＮ－４５、ＨＰＡＦ－ＩＩ）と共培養した９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）でインキュベートした。細胞を、本発明の様々な濃度の非コンジュゲート（裸）抗体及び免疫複合体（上記の実施例に従って調製される）で刺激した。製造元のガイドライン（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標）、ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）に従って、ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ（商標）キットを使用して、サイトカインビーズアレイによって無細胞上清を分析した。
ｄ）ヒト従来の樹状細胞の単離：ヒト従来の樹状細胞（ｃＤＣ）を、密度勾配遠心分離によって健康な献血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得たヒト末梢血から負に選択した。簡潔に述べると、まず、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（登録商標）ヒトＣＤ３枯渇カクテル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、細胞を濃縮して、細胞調製物からＴ細胞を除去する。次いで、ＥＡＳＹＳＥＰ（登録商標）ヒト骨髄系ＤＣ濃縮キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ｃＤＣを負の選択によって更に濃縮する。
ｅ）ｃＤＣ活性化アッセイ：８×１０４のＡＰＣを、１０：１のエフェクター（ｃＤＣ）対標的（腫瘍細胞）比でＩＳＡＣ標的抗原を発現する腫瘍細胞と共培養した。細胞を、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地、及び示される場合、本発明の様々な濃度の示される免疫複合体（上記の実施例に従って調製される）を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）でインキュベートした。約１８時間の一晩のインキュベーション後、無細胞上清を回収し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＬＥＧＥＮＤＰＬＥＸサイトカインビーズアレイを使用してサイトカイン分泌（ＴＮＦαを含む）について分析した。
骨髄細胞型の活性化は、異なる骨髄集団が利用される記載のアッセイに加えて、様々なスクリーンアッセイを使用して測定することができる。これらは、健康なドナー血から単離された単球、Ｍ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４単球由来樹状細胞、健康なドナー血から単離された従来の樹状細胞（ｃＤＣ）、及び免疫抑制状態に分極された骨髄細胞（骨髄由来抑制細胞またはＭＤＳＣとも称される）を含み得る。ＭＤＳＣ偏光細胞の例としては、Ｍ２ａＭΦ（ＩＬ４／ＩＬ１３）、Ｍ２ｃＭΦ（ＩＬ１０／ＴＧＦｂ）、ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ６ ＭＤＳＣ、及び腫瘍教育単球（ＴＥＭ）などの免疫抑制状態に向かって分化した単球が挙げられる。ＴＥＭ分化は、腫瘍条件培地（例えば、７８６．Ｏ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９５４）を使用して行うことができる。原発性腫瘍関連骨髄細胞はまた、解離した腫瘍細胞懸濁液中に存在する初代細胞を含んでもよい（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
骨髄細胞の記載された集団の活性化の評価は、単一培養として、または免疫複合体が抗体のＣＤＲ領域を介して結合し得る目的の抗原を発現する細胞との共培養として行われ得る。１８～４８時間のインキュベーション後、活性化は、フローサイトメトリーを使用した細胞表面共刺激分子のアップレギュレーションによって、または分泌された炎症誘発性サイトカインの測定によって評価され得る。サイトカイン測定のために、無細胞上清を採取し、フローサイトメトリーを使用してサイトカインビーズアレイ（例えば、ＢｉｏｌｅｇｅｎｄからのＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ）によって分析する。
本明細書で引用される刊行物、特許出願、及び特許を含む全ての参考文献は、各参考文献が個別にかつ具体的に参照により組み込まれることが示され、その全体が本明細書に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (58)

  1. リンカーによって１つ以上の８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分に共有結合した抗体を含み、かつ式Ｉ：
    Ａｂ－［Ｌ－ＨｘＢｚ］ｐ Ｉ
    を有する免疫複合体であって、
    式中、
    Ａｂが、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する抗体構築物であり、
    ｐが、１～８の整数であり、
    ＨｘＢｚが、式：
    Figure 2023553421000112
     を有する前記８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン部分であり、Ｈｅｔが、ヘテロシクリルジイル及びヘテロアリールジイルから選択され、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、Ｃ２－Ｃ６アルケニル、Ｃ２－Ｃ６アルキニル、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル、及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールが、独立して、かつ任意選択的に、
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）、
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－＊、
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －（Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５）ＮＲ５－＊、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリール）、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）、
    －（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリル）－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）ＮＲ５－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－ＮＲ５－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ２－Ｃ９ヘテロシクリル）－（Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル）－＊、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－＊、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－ＮＲ５－Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリール）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－ＮＲ５（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－＊、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ５－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、
    －Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、
    －Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－＊、
    －Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、
    －ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －ＮＲ５Ｃ（＝ＮＲ５ａ）Ｒ５、
    －Ｎ（Ｒ５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｎ（Ｒ５）－（Ｃ２－Ｃ５ヘテロアリール）、
    －Ｎ（Ｒ５）－Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）－＊、
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－＊、
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）２、
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＮＲ５－＊、及び
    －Ｓ（＝Ｏ）２－（Ｃ２－Ｃ２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換されるか、
    またはＲ２及びＲ３が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
    Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４が、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）２、及びＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ５）からなる群から選択され、
    Ｒ５が、独立して、Ｈ、Ｃ６－Ｃ２０アリール、Ｃ３－Ｃ１２カルボシクリル、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及びＣ１－Ｃ１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ５基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
    Ｒ５ａが、Ｃ６－Ｃ２０アリール及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
    式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、Ｌに結合しており、
    Ｌが、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ＋（Ｒ６）２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ５）－Ｃ（＝Ｏ）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－、
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－、及び
    －スクシンイミジル－（ＣＨ２）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ２－Ｃ５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択されるリンカーであり、
    Ｒ６が、独立して、ＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    ＰＥＧが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－を有し、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であり、
    Ｇｌｕｃが、式：
    Figure 2023553421000113
     を有し、
    ＰＥＰが、式：
    Figure 2023553421000114
     を有し、式中、ＡＡが、独立して、天然もしくは非天然のアミノ酸側鎖から選択されるか、またはＡＡのうちの１つ以上と隣接する窒素原子とが、５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線が、結合点を示し、
    Ｃｙｃが、任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ２、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で置換される、Ｃ６－Ｃ２０アリールジイル及びＣ１－Ｃ２０ヘテロアリールジイルから選択され、
    Figure 2023553421000115
     Ｒ７が、－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－、－ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｎ（Ｒ８）－、及び－ＣＨ（Ｒ８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、式中、Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ１－Ｃ６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択され、式中、Ｒ９が、独立して、Ｈ、Ｃ１－Ｃ１２アルキル、及び－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍ－ＯＨからなる群から選択され、式中、ｍが、１～５の整数であり、ｎが、２～５０の整数であるか、または２つのＲ９基が一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し、
    ｙが、２～１２の整数であり、
    ｚが、０または１であり、
    アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールジイルが、独立して、かつ任意選択的に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨＦ２、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、－ＣＨ２ＣＮ、－ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－ＣＨ２ＮＨＣＨ３、－ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯＣＨ３、－ＣＯ２ＣＨ３、－ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＨＣＨ３、－ＣＯＮ（ＣＨ３）２、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）２、－ＮＨＣＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、－ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、－Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２、－ＮＯ２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ、－ＯＣＨ２Ｆ、－ＯＣＨＦ２、－ＯＣＦ３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＣＨ３、－Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、及び－Ｓ（Ｏ）３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される、前記免疫複合体、またはその薬学的に許容される塩。
  2. 前記抗体が、ラベツズマブ及びアルシツモマブ、またはそれらのバイオシミラーもしくはバイオベターから選択される、請求項１に記載の免疫複合体。
  3. 前記抗体構築物が、
    ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｄ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｅ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｆ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｇ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；
    ｈ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１７もしくは１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３；または
    ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、請求項１に記載の免疫複合体。
  4. 前記抗体構築物が、配列番号１、１７、３２、５０、５７、７３、８９、及び１０５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号９、４１、６５、８１、９７、１１３、１２２、及び１３０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含む、請求項１に記載の免疫複合体。
  5. 前記抗体構築物が、配列番号１、１７、３２、５０、５７、７３、８９、及び１０５から選択されるアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号９、４１、６５、８１、９７、１１３、１２２、及び１３０から選択されるアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含む、請求項１に記載の免疫複合体。
  6. 前記抗体構築物が、配列番号１０５からのアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号１１８からのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）ＣＤＲ－Ｈ２と、を含む、請求項５に記載の免疫複合体。
  7. 前記抗体構築物が、配列番号１０５からのアミノ酸配列を含む可変軽鎖と、配列番号１１３からのアミノ酸配列を含む可変重鎖と、を含む、請求項６に記載の免疫複合体。
  8. Ｈｅｔが、ピリジルジイル、ピリミジルジイル、ピラゾリルジイル、ピペラジニルジイル、ピペリジニルジイル、及びピラジニルジイルからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  9. Ｘ１が、結合であり、Ｒ１が、Ｈである、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  10. Ｘ２が、結合であり、Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルである、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  11. Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  12. Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルであり、Ｒ３が、（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５である、請求項１１に記載の免疫複合体。
  13. Ｒ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、Ｒ３が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（ｔ－Ｂｕ）、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（シクロブチル）、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２（シクロブチル）から選択される、請求項１２に記載の免疫複合体。
  14. Ｒ２及びＲ３が、各々独立して、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＦ３、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される、請求項１２に記載の免疫複合体。
  15. Ｒ２及びＲ３が、各々－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１２に記載の免疫複合体。
  16. Ｒ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、Ｒ３が、－ＯＣＨ２ＣＨ３である、請求項１２に記載の免疫複合体。
  17. Ｘ３－Ｒ３が、
    Figure 2023553421000116
     からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  18. Ｘ４が、結合であり、Ｒ４が、Ｈである、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  19. Ｒ１が、Ｌに結合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  20. Ｒ２またはＲ３が、Ｌに結合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  21. Ｘ３－Ｒ３－Ｌが、
    Figure 2023553421000117
     からなる群から選択され、式中、波線が、Ｎへの結合点を示す、請求項２０に記載の免疫複合体。
  22. Ｒ４が、Ｃ１－Ｃ１２アルキルである、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  23. Ｒ４が、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）－＊であり、式中、アスタリスク＊が、Ｌの結合部位を示す、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  24. Ｌが、－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  25. Ｌが、前記抗体のシステインチオールに結合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  26. 前記ＰＥＧについて、ｍが、１または２であり、ｎが、２～１０の整数である、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  27. ｎが、１０である、請求項２６に記載の免疫複合体。
  28. Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、ジペプチドであり、かつ式：
    Figure 2023553421000118
     を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  29. ＡＡ１及びＡＡ２が、独立して、Ｈ、－ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３、－ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、及び－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２から選択されるか、またはＡＡ１及びＡＡ２が、５員環プロリンアミノ酸を形成する、請求項２８に記載の免疫複合体。
  30. ＡＡ１が、－ＣＨ（ＣＨ３）２であり、ＡＡ２が、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２ある、請求項２８に記載の免疫複合体。
  31. ＡＡ１及びＡＡ２が、独立して、ＧｌｃＮＡｃアスパラギン酸、－ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、及び－ＣＨ２ＯＰＯ３Ｈから選択される、請求項２８に記載の免疫複合体。
  32. ＰＥＰが、式：
    Figure 2023553421000119
     を有し、式中、ＡＡ１及びＡＡ２が、独立して、天然に存在するアミノ酸の側鎖から選択される、請求項２８に記載の免疫複合体。
  33. Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、トリペプチドであり、かつ式：
    Figure 2023553421000120
     を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  34. Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、テトラペプチドであり、かつ式：
    Figure 2023553421000121
     を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  35. ＡＡ１が、Ａｂｕ、Ａｌａ、及びＶａｌからなる群から選択され、
    ＡＡ２が、Ｎｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ、及びＰｒｏからなる群から選択され、
    ＡＡ３が、Ａｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）２からなる群から選択され、
    ＡＡ４が、Ｏｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）からなる群から選択される、請求項３４に記載の免疫複合体。
  36. Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ（配列番号１３１）、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ（配列番号１３２）、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａ（配列番号１３３）からなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  37. Ｌが、ＰＥＰを含み、ＰＥＰが、構造：
    Figure 2023553421000122
     から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  38. Ｌが、構造：
    Figure 2023553421000123
     から選択され、式中、波線が、Ｒ５への結合を示す、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  39. 式Ｉａ：
    Figure 2023553421000124
     を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体。
  40. Ｘ４が、結合であり、Ｒ４が、Ｈである、請求項３９に記載の免疫複合体。
  41. Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２から選択される、請求項３９に記載の免疫複合体。
  42. Ｘ２が、Ｏである、請求項３９に記載の免疫複合体。
  43. 式Ｉｂ～Ｉｉ：
    Figure 2023553421000125
    Figure 2023553421000126
     から選択される、請求項３９に記載の免疫複合体。
  44. Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２及びＲ３が、独立して、Ｃ１－Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）、－（Ｃ１－Ｃ１２アルキルジイル）－ＯＲ５、－（Ｃ１－Ｃ８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５、及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５から選択される、請求項４３に記載の免疫複合体。
  45. Ｘ２及びＸ３が、各々結合であり、Ｒ２が、Ｃ１－Ｃ８アルキルであり、Ｒ３が、－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）及び－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ１２アルキル）－Ｎ（Ｒ５）ＣＯ２Ｒ５から選択される、請求項４３に記載の免疫複合体。
  46. 表２ａ及び表２ｂから選択される、８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物。
  47. 抗ＣＥＡ抗体と、表２ａ及び表２ｂから選択される８－Ｈｅｔ－２－アミノベンザゼピン－リンカー化合物とのコンジュゲーションによって調製される、免疫複合体。
  48. 治療有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体と、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
  49. がんを治療するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の免疫複合体を投与することを含み、前記がんが、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、食道癌、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、前記方法。
  50. 前記がんが、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘導される炎症誘発性応答に感受性である、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記がんが、ＣＥＡ発現がんである、請求項４９に記載の方法。
  52. 前記乳癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項４９に記載の方法。
  53. 前記メルケル細胞癌が、転移性メルケル細胞癌である、請求項４９に記載の方法。
  54. 前記がんが、胃食道接合部腺癌である、請求項４９に記載の方法。
  55. 前記免疫複合体が、前記患者に、静脈内、腫瘍内、または皮下投与される、請求項４９に記載の方法。
  56. 前記免疫複合体が、体重１ｋｇ当たり約０．０１～２０ｍｇの用量で前記患者に投与される、請求項４９に記載の方法。
  57. がんを治療するための請求項１～４７のいずれか１項に記載の免疫複合体の使用であって、前記がんが、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、食道癌、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、前記使用。
  58. 請求項４６に記載の８－Ｈｅｔ－２－アミノ－チエノアゼピン－リンカー化合物が、前記抗ＣＥＡ抗体にコンジュゲートされている、請求項１に記載の式Ｉの免疫複合体を調製する方法。
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