JP2023553205A - Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する抗体およびその使用 - Google Patents

Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する抗体が開示され、さらに、本発明の抗体のアミノ酸配列、クローニングまたは発現ベクター、ホスト細胞、および抗体を発現または分離するための方法が開示され、本発明の抗体を含む組成物もまた開示される。本発明の抗体を用いるという手段によって、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを発現する生物サンプルを検出または精製するための方法もまた開示される。【選択図】図１

Description

本発明は、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する抗体に関し、抗体のアミノ酸配列、クローニングまたは発現ベクター、ホスト細胞、抗体を産生するための方法、およびＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを発現する生物サンプルを精製または検出するために抗体を用いる方法を開示する。
腫瘍免疫療法の開発によって、ＣＡＲ－Ｔ（キメラ抗原受容体Ｔ細胞）およびＴＣＲ－Ｔ（Ｔ細胞受容体Ｔ細胞、操作されたＴ細胞受容体Ｔ細胞）ならびに他の免疫細胞療法戦略が多大な注目を受けている。インビボにおけるＣＡＲ－ＴまたはＴＣＲ－Ｔの増殖レベルはその有効性の重要な指標である。よって、細胞の迅速かつ正確な検出のための試薬または方法の開発は、インビトロおよびインビボにおけるその増殖効率を有効にモニタリングすることを助けるであろう。
現行では、ＣＡＲ－ＴまたはＴＣＲ－Ｔ細胞を検出するための２つの方法があり、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を用いて、Ｔ細胞におけるＣＡＲまたはＴＣＲの遺伝子発現を検出すること、およびＴ細胞におけるＣＡＲ蛋白質またはＴＣＲ蛋白質発現を検出すること、である。Ｔ細胞におけるＣＡＲ蛋白質発現の検出のためには、Ｔ細胞が、フローサイトメトリーによって、普通にはＣＡＲ蛋白質上のｓｃＦｖ（一本鎖可変断片）断片に特異的に結合する抗体、またはＦａｂ断片に結合する抗体、またはプロテインＬ、および同様によって検出される。Ｔ細胞におけるＴＣＲ蛋白質発現の検出のためには、特にそのＴＣＲを特異的に標的化するペプチドおよびＨＬＡの複合体がＴ細胞のフローサイトメトリーアッセイのために普通に用いられる。しかしながら、上の検出法は明らかな限定を有する。遺伝子コピー数のｑＰＣＲ検出はＣＡＲ発現Ｔ細胞を正確には反映し得ない。なぜなら、ＣＡＲ遺伝子をインテグレーションする細胞は通常はＣＡＲ蛋白質を発現し得ず、ｑＰＣＲ検出法において偽陽性を引き起こすからである。ＣＡＲ蛋白質陽性のＴ細胞の検出法では、Ｆａｂ抗体の検出バックグラウンド値は高く、容易に偽陽性を引き起こすもので、プロテインＬはｓｃＦｖ上にκ軽鎖を有するＣＡＲの検出にのみ好適である。その上、ＣＡＲ蛋白質上のｓｃＦｖ断片を標的化する抗体では、ならびにＴＣＲを標的化するＨＬＡおよびポリペプチドの複合体では、異なるＣＡＲ蛋白質またはＴＣＲについて、異なる抗体または複合体をスクリーニングし、妥当な検出法を確立することが必要とされる、これらは時間消費的、非効率的、かつコスト高である。ＣＡＲ－Ｔの正確な、高感度の、かつ普遍的な抗体検出が開発され得る場合には、それは遺伝子形質導入細胞療法薬の検出効率を多大に改善し、検出コストを縮減するであろう。
本発明は、重鎖可変領域（以下、ＶＨと略される）と軽鎖可変領域（以下、ＶＬと略される）とを含むＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する単離された抗体を開示し、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７または配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＨは、配列番号１で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号３または配列番号４で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号５または配列番号６で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７または配列番号８で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号９または配列番号１０で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＬは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＬは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態において、抗体はＶＨおよびＶＬを含み、ＶＨは、配列番号１で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号３で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号５で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号９で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含むか、または
ＶＨは、配列番号１で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ２、および配列番号４で提示されるアミノ酸配列からなるＶＨ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号６で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ２、および配列番号１０で提示されるアミノ酸配列からなるＶＬ－ＣＤＲ３を含む。
本発明において、ＶＨおよびＶＬ上の各ＣＤＲはカバット付番システムによって同定される。
いくつかの実施形態において、ＶＨは配列番号２３もしくは２４のアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなるか、またはＶＨは８５％以上の、好ましくは９０％以上の、より好ましくは９５％以上の、もしくはさらに好ましくは９９％以上の同一性を配列番号２３もしくは２４に対して有するアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる。
いくつかの実施形態において、ＶＬは配列番号２５もしくは２６のアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなるか、またはＶＬは８５％以上の、好ましくは９０％以上の、より好ましくは９５％以上の、もしくはさらにはより好ましくは９９％以上の同一性を配列番号２５もしくは２６に対して有するアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体のＶＨまたはＶＬはさらに１つ以上のフレームワーク領域（単数または複数）（以下、ＦＷＲと略される）を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＨは１つ、２つ、３つ、または４つのＦＷＲを含み、各ＦＷＲは、配列番号１１、１２、１３、１４、１５、および１６で提示される配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列（アミノ酸配列は、配列番号１１、１２、１３、１４、１５、および１６のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を有する）を含む。いくつかの具体的な実施形態において、前述のＶＨは４つのＦＷＲを含み、ＦＷＲ１は配列番号１１で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ２は配列番号１２または配列番号１３で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ３は配列番号１４または配列番号１５で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ４は配列番号１６で提示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＬは１つ、２つ、３つ、または４つのＦＷＲを含み、各ＦＷＲは、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、および２２で提示される配列からなる群から選択されるアミノ酸配列、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列（アミノ酸配列は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、および２２のいずれか１つのアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を有する）を含む。いくつかの具体的な実施形態において、前述のＶＬは４つのＦＷＲを含み、ＦＷＲ１は配列番号１７または配列番号１８で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ２は配列番号１９で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ３は配列番号２０または配列番号２１で提示されるアミノ酸配列を含み、ＦＷＲ４は配列番号２２で提示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＶＨは配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなり、ＶＬは配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態において、ＶＨは配列番号２４のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなり、ＶＬは配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体の重鎖は、配列番号２７もしくは２９のアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなるか、または抗体の重鎖は、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、もしくはさらに好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号２７もしくは２９に対して有するアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体の軽鎖は、配列番号２８もしくは３０のアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなるか、または抗体の軽鎖は、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、もしくはさらに好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号２８もしくは３０に対して有するアミノ酸配列を含むか、もしくは本質的にそれからなるか、もしくはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体の重鎖は配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなり、抗体の軽鎖は配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態において、抗体の重鎖は配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなり、抗体の軽鎖は配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、または本質的にそれからなるか、またはそれからなる。
いくつかの実施形態において、前述の抗体は、さらに、重鎖定常領域および軽鎖定常領域の少なくとも１つを含む。重鎖定常領域はマウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、またはマウスＩｇＧ３から選択され、軽鎖定常領域はκ鎖またはλ鎖から選択される。好ましくは、重鎖定常領域はマウスＩｇＧ１であり、軽鎖定常領域はマウス抗体のκ鎖である。
いくつかの実施形態において、前述の抗体は全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。
例示的な抗体の配列は表１および配列表で提示される通りである。
Figure 2023553205000002
Figure 2023553205000003
例示的な抗体のＣＤＲ配列およびＦＷＲ配列は表２および３で提示される通りである。
Figure 2023553205000004
Figure 2023553205000005
本発明は、前述の抗体をコードする単離された核酸分子をもまた開示する。
本発明はクローニングベクターまたは発現ベクターをもまた開示し、発現ベクターは前述の核酸分子を含む。
本発明は、前述のクローニングベクターまたは発現ベクターの１つ以上を含むホスト細胞をもまた開示する。
本発明は、前述の抗体を産生するための方法をもまた開示し、前述のホスト細胞を培養することと抗体を単離することとを含む。
本発明は、前述の抗体と１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体とを含む組成物またはキットをもまた開示する。
本発明は、検出可能な標識に連結された前述の抗体を含むコンジュゲートをもまた開示する。当業者は、いずれかの検出可能な標識が本発明のコンジュゲートを構築するために用いられ得るということを了解するであろう。例示的な検出可能な標識は蛍光標識、酵素基質標識、放射性同位体、ジゴキシゲニン、ビオチン、もしくはアビジン、ＤＮＡ分子、または検出のための金を包含するが、これらに限定されない。ここで、蛍光標識はフルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリスリン、またはテキサスレッドを包含するが、これらに限定されない。酵素基質標識は西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、またはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼを包含するが、これらに限定されない。放射性同位体は１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、他のランタニドを包含するが、これらに限定されない。標識はルミネセンス標識またはクロモフォアでもまたあり得る。
本発明は、前述のコンジュゲートと１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体とを含む組成物またはキットをもまた開示する。
本発明は、サンプル中のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する融合ポリペプチドを検出するための試薬またはキットの調製における前述の抗体の使用をもまた開示する。
本発明は、サンプル中のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する融合ポリペプチドを検出するための方法をもまた開示し、（ｉ）融合ポリペプチドを含有するサンプルを、本発明の単離された抗体とインビトロで、抗体および融合ポリペプチドの間の相互作用を許す条件下において接触させることと、（ｉｉ）抗体および融合ポリペプチドの間の複合体の形成を検出することとを含む。ここで、複合体を検出する方法はフローサイトメトリー、ウエスタンブロット、免疫組織化学、および免疫蛍光の少なくとも１つを包含するが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するサンプルはＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するＣＡＲ－Ｔ細胞である。
本発明は、サンプル中のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する融合ポリペプチドを精製するための方法をもまた開示し、（ｉ）融合ポリペプチドを含有するサンプルを、インビトロで、本発明の単離された抗体と、抗体および融合ポリペプチドの間の相互作用を許す条件下において接触させることと、（ｉｉ）抗体および融合ポリペプチドの間で形成された複合体を精製することとを含む。ここで、精製する方法は、アフィニティークロマトグラフィー、免疫沈降、および同類を包含するが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、サンプルは、血液、尿、唾液、リンパ、脳脊髄液、骨髄、組織および臓器、細胞の少なくとも１つを含む生物サンプルである。
具体的な実施形態において、血液は血清、血漿、および全血の少なくとも１つを含む。
いくつかの実施形態において、サンプルはキメラ抗原受容体細胞または操作された細胞受容体細胞を含む。
いくつかの実施形態において、サンプルはキメラ抗原受容体細胞または操作された細胞受容体細胞である。
本発明の抗体はより強い親和性を有し、これはキメラ抗原受容体細胞または操作された細胞受容体細胞のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグにより特異的に結合し得、キメラ抗原受容体細胞または操作された細胞受容体細胞のインビトロおよびインビボの増幅効率を有効にモニタリングし得る。
図１は４回の免疫化後のマウスからの血清の力価曲線を示す。 図２は抗体８Ｆ８Ｄ１のポリアクリルアミドゲル電気泳動パターンを示す。レーンＭは分子量標準（３００ＫＤ以内）であり、レーン１は抗体８Ｆ８Ｄ１の重鎖（約５５ＫＤ）および軽鎖（約２４ＫＤ）である。 図３は抗体８Ｆ８Ｄ１および８Ａ８８２のフローサイトメトリーグラフを示す。 図４は抗体８Ｆ８Ｄ１および８Ａ８８２の親和性試験グラフを示す。 図５は、抗体８Ｆ８Ｄ１を用いてモニタリングされたマウスにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の代謝グラフを示す。
本発明は具体的な実施形態によって下でさらに記載される。別様に定義されない限り、本明細書において用いられる用語は、当業者に普通に理解される同じ意味を有する。
本明細書において用いられる用語「抗原」は、抗体産生または特異的な免疫担当細胞の活性化が関わり得る免疫応答を誘起する分子を言う。当業者は、全ての蛋白質またはペプチドを包含するいずれかの高分子が抗原として用いられ得るということを理解するであろう。例えば、本発明における免疫化抗原は、ＮＷＳＨＰＱＦＥＫのアミノ酸配列を有するＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩであり得るか、またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲート化されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＫＬＨ）であり得る。抗原は、生成、合成され得るか、または組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、もしくは生体液を包含するがこれらに限定されない生物サンプルに由来し得る。本明細書において用いられる用語「検出抗原」は、抗体力価を決定するために用いられる抗原、例えばオボアルブミン（ＯＶＡ）にコンジュゲート化されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡ）を言うが、当業者は、抗原はＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡには限定されず、ＮＷＳＨＰＱＦＥＫまたはその一部を含有する抗原もまた検出抗原として用いられ得るということを理解し得る。そのため、特定の検出抗原の使用は抗体の調製方法に対する限定として解釈されるべきではない。
本明細書において用いられる用語「ペプチド」および「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸残基からなる化合物を言う。本明細書において用いられる「融合ポリペプチド」は、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグが取り付けられているポリペプチドを言う。例えば、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグはキメラ抗原受容体の細胞外ドメインｓｃＦｖ上の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＮ末端またはＣ末端の端に取り付けられている。ポリペプチドは天然のペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。
本明細書において用いられる用語「抗体」は最も幅広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包摂し、それらが所望の抗原結合活性を見せる限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、全長抗体、および抗体断片（または抗原結合断片、または抗原結合部分）を包含するが、これらに限定されない。抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｔｒｉ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、および抗原結合機能を保持する他の抗体断片を含むが、これらに限定されず、それは二量体構造（ダイアボディ）または三量体構造（トライアボディ）でもまたあり得る。抗原結合断片は典型的には抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、これらは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域と、フレームワーク領域（ＦＷＲ）と呼ばれるより保存された領域とにさらに細分され得る。これは散在している。本発明において開示される抗体および抗原結合断片のＣＤＲはカバット付番によって定義または同定される。
全長抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重鎖および２つの軽鎖を含む蛋白質を言う。各重鎖は重鎖可変領域および重鎖定常領域からなり、各軽鎖は軽鎖可変領域および軽鎖定常領域からなる。本発明の具体的な実施形態において、重鎖定常領域はマウス由来ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、またはＩｇＧ３から選択され得、軽鎖定常領域はκ鎖またはλ鎖から選択される。
本明細書において用いられる用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、免疫エフェクター細胞上に発現されるように操作されたかつ抗原に特異的に結合することができる人工の受容体を言う。「キメラ抗原受容体細胞」は、細胞上の抗原に特異的に結合し得る人工の受容体を発現する免疫細胞を言い、免疫細胞はリンパ球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、単球／マクロファージ、顆粒球、マスト細胞などを含み、養子細胞移入を用いる治療に用いられ得る。操作されたＴ細胞受容体としてもまた公知の本発明において用いられる用語「操作された細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、ＭＨＣによって送達される腫瘍細胞内抗原ペプチドのより有効な認識を可能化し、それによって腫瘍を死滅・処置するようにインビトロで遺伝子操作されたＴＣＲのペプチド鎖から組成されるヘテロ二量体である。本発明における融合ポリペプチドはＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグと融合したＣＡＲまたはＴＣＲを含む。
本明細書において用いられる「単離された」は、天然の状態から変調されたか、または取り出されたことを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは「単離されて」いないが、その天然の状態における共存する材料から部分的にまたは完全に分離されている同じ核酸またはペプチドは「単離されて」いる。単離された核酸または蛋白質は、実質的に精製された形態で存在し得るか、またはホスト細胞などの非天然環境に存在し得る。「単離された」抗体は、その天然の環境の構成成分から同定ならびに分離および／または回収されたものである。いくつかの実施形態において、抗体は、電気泳動（例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動ＩＥＦ、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えばイオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される９５％または９９％よりも多大な純度で精製される。本明細書において用いられるホスト細胞は、クローニングベクターまたは発現ベクターを含有するいずれかの原核または真核細胞であり得、ホスト細胞の染色体またはゲノム上にクローニングされた遺伝子を含有するように遺伝子操作された原核または真核細胞を包含する。改変された免疫系を有する特別なトランスジェニック動物もまた抗体を作るために用いられ得る。
本明細書において申し立てられる数的な限度または範囲は端点を包含し、数的な限度または範囲内の全ての値および部分範囲を具体的に包含する。
別様に規定されない限り、次の例における実験法は従来の方法である。
例１．抗原、マウス免疫化、およびハイブリドーマ調製
１．抗原
免疫化抗原はキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にコンジュゲート化されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＫＬＨ）であり、検出抗原はオボアルブミン（ＯＶＡ）にコンジュゲート化されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡ）である。全てはチャイニーズペプチド（Chinese Peptide）社から購入した。
２．免疫化
免疫化抗原蛋白質（ＫＬＨにコンジュゲート化されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩポリペプチド（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＫＬＨ））を生理食塩水中に０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。１００μＬの上述の抗原蛋白質溶液を等体積の完全フロイントアジュバント（シグマ；Ｃａｔ＃：１００１６４６４４６）と混合し、免疫応答を産生するための皮下腹部多点注射によってＢａｌｂ／ｃマウス（雌、６～８週、北京維通利華実験動物技術有限公司（Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.）から購入）を免疫化した。それから、上の抗原蛋白質溶液を生食によって０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、１００ｕＬの希釈された抗原蛋白質溶液およびフックス不完全アジュバント（シグマ；Ｃａｔ＃：１００２０３６１５２）をそれぞれ第１５、２９、および４３日に体積で１：１混合し、ブースター免疫化のための皮下腹部多点注射によってＢａｌｂ／ｃマウスを免疫化した。合計で４回の抗原免疫化のために、各マウスには注射あたり２００μＬの体積を注射した。血清力価をそれぞれ第２２、３６、および５０日に断尾血液によって決定した。マウス血清力価はＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡポリペプチドを用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって検出し、方法は次の通りであった：１μｇ／ｍＬのＯＶＡコンジュゲート化Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡ）を４℃の９６ウェルプレート（コーニングから購入）に追加し、一晩置き、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄し、それから、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＴ）によって５回洗浄した。プレートを１％ウシ血清アルブミンによって２時間の間室温でブロッキングし、ＰＢＳＴによって５回洗浄した。それから、マウス血清を１：１０００から１：１０２４００まで４回希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに追加し、室温で１時間の間インキュベーションし、ＰＢＳＴによって５回洗浄した。１００μＬ／ウェルのＨＲＰ標識ヤギ抗マウス二次抗体（インビトロジェン、Ｃａｔ＃：３１４３０）を追加し、洗浄後に室温で１時間の間インキュベーションした。それから、５０μＬ／ウェルの３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）をプレートに追加し、室温で１５分間インキュベーションし、それから反応を止め、結果を読み取った。
免疫化されたマウスの血清力価の検出結果に従って、５匹のマウスの力価結果が示され（図１）、Ｎｏ．＃４マウスの力価は他のマウスのものよりも高かった。マウス＃４をハイブリドーマ融合のために選択し、融合の３日前に、マウスにショックのために５０μｇの免疫化抗原を腹腔内注射した。
３．融合
ポリエチレングリコール融合法によって、マウス＃４の脾臓を摘出し、すり潰し、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）に再懸濁してマウス脾臓Ｂ細胞の単細胞を摘出し、５００ｇで５分間遠心し、ペレットをＤＰＢＳに再懸濁し、それから、細胞を５分の５００ｇの遠心によって洗浄し、脾細胞をマウスミエローマ細胞株ｓｐ２／０（ノルディック・バイオサイエンス（北京）社から購入）と３：１の比（細胞数の比）で混合し、１ｍＬポリエチレングリコール（ロシュ；Ｃａｔ＃：１０７８３６４１００１）を追加し、融合した細胞をＨＡＴ培地（ギブコ；Ｃａｔ＃：２１０６０－０１７）に再懸濁し、９６ウェル細胞培養プレートにプレーティングし、二酸化炭素インキュベータにおける３７℃での７日の培養後に、ハイブリドーマの一次スクリーニングをＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーによって行った。選択されたハイブリドーマ細胞を二酸化炭素インキュベータにおいて３７℃で一晩培養し、それから、融合した細胞を限界希釈によって９６ウェルプレートに播種した。
例２．陽性ハイブリドーマ細胞のスクリーニング
ハイブリドーマの培養上清中の抗Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ抗体の存在をＥＬＩＳＡ試験およびフローサイトメトリーによって検出し、無限増殖および抗体を分泌し得るハイブリドーマ細胞を最後にスクリーニングした。詳細は次の通りである。
１．ＥＬＩＳＡスクリーニング
１μｇ／ｍＬのＯＶＡコンジュゲート化Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ－ＯＶＡ）を９６ウェルプレート（コーニングから購入）に４℃で一晩追加し、それから、上清を捨てた後に、プレートをリン酸緩衝液中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳＴ）によって５回洗浄した。プレートを１％ウシ血清アルブミンによって２時間の間室温でブロッキングし、ＰＢＳＴによって５回洗浄した。１００μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清を追加し、１時間の間室温でインキュベーションし、それからＰＢＳＴによって５回洗浄した。洗浄後に、１００μＬ／ウェルのＨＲＰ標識ヤギ抗マウス二次抗体（インビトロジェン、Ｃａｔ＃：３１４３０）を追加し、１時間の間室温でインキュベーションした。それから、５０μＬ／ウェルの３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）をプレートに追加し、室温で１５分間インキュベーションし、それから反応を止め、結果を読み取った。陽性のハイブリドーマをＥＬＩＳＡスクリーニングによって選択し、拡大培養のために９６ウェル培養プレートから２４ウェル培養プレートに移入し、２４ウェル培養プレートの上清を５日後に再スクリーニングし、再スクリーニングをフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によって分析した。
２．フローサイトメトリースクリーニング
ＣＤ１９を標的化するＣＡＲをコードするレンチウイルス移入プラスミドの構築およびレンチウイルスベクターの調製：１）Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩとＣＤ１９を標的化するｓｃＦｖとをコードするキメラ遺伝子を、遺伝子合成法（北京バイオメッド・ジーン・テクノロジー（Beijing Biomed Gene Technology）社）によって合成した。２）ＣＤ１９を標的化するＣＡＲの既存のプラスミドを鋳型として用いて（ＣＤ１９を標的化するＣＡＲのヌクレオチド配列は、特許ＣＮ１０５１７７０３１Ｂの配列番号１３参照）、ＰＣＲを用いて、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通領域、４－１ＢＢの細胞内領域（ＮＰ＿００１５５２．２に対応）、およびＣＤ３ζの細胞内領域（ＮＰ＿０００７２５．１に対応）を含有するＣＡＲ分子の核酸断片をクローニングした。３）ステップ１）で得られたキメラ遺伝子とステップ２）で得られた核酸断片とを鋳型として用いて、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩとＣＤ１９を標的化するＣＡＲとをコードする完全な核酸断片をＰＣＲによってクローニングした。４）ステップ３）で得られた完全な核酸断片をレンチウイルスベクターｐＬｅｎｔｉ６．３／Ｖ５（サーモフィッシャー、ウォルサム、ＭＡ、ＵＳＡ）上に制限酵素消化およびライゲーションの方法によって挿入して、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩとＣＤ１９を標的化するＣＡＲとの遺伝子を持つレンチウイルス移入プラスミドを得た。５）レンチウイルスパッケージングプラスミドｐＬＰ／ＶＳＶＧ、ｐＬＰ１／ＭＤＫ、ｐＬＰ２／ＲＳＫ（サーモフィッシャー、ウォルサム、ＭＡ、ＵＳＡ）、およびステップ４）で得られた移入プラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（サーモフィッシャー、ウォルサム、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いてトランスフェクションし、培養培地を４８時間後に収集し、３００ｇで遠心して細胞デブリを取り除き、２５，０００ｒｐｍで３時間の間超遠心によって遠心した。沈殿を１ｍＬの生理食塩水に溶解して、所望のレンチウイルスベクターを得た。
Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製：Ｔ細胞を健康なボランティアの末梢血単核細胞（妙通（上海）生物科技有限公司（Miao Tong (Shanghai) Biological Science & Technology Co., Ltd.）、中国）からＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズ（サーモフィッシャー）を用いて単離し、単離されたＴ細胞（この時点のＴ細胞はＣＤ３／ＣＤ２８ダイナビーズと連結されている）をＩＬ－２（５００ＩＵ／ｍＬ）を含有する新鮮なＸ－ＶＩＶＯ１５培養系によって４８時間の間培養し、上のレンチウイルスベクターを用いてＴ細胞を感染させた。細胞のウイルス感染の２４時間後に、細胞を遠心して培地を交換し、培養を上述の培養系によって続けた。４日の細胞培養後に、培養系のすべての細胞を収集し、培養系のダイナビーズを磁石スタンドによって取り出し、Ｔ細胞を遠心およびカウントし、ＣＡＲ－Ｔ細胞含量をフローサイトメータ（ＮｏｖｏＣｙｔｅ２０６０Ｒ、ＡＣＥＡバイオサイエンシズ、サンディエゴ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって検出した。
Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する上のＣＡＲ－Ｔ細胞を収集し、ＤＰＢＳによって洗浄し、カウントし、細胞をチューブあたりおよそ３×１０５細胞でＥＰチューブに分注した。上清を遠心によって収集した後に、１００μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清を追加し、室温で１５分間インキュベーションした。２回の洗浄後に、５μＬのＰＥ標識ラット抗マウスＩｇＧ（ＢＤ、Ｃａｔ＃：５５００８３）を各チューブに追加し、１５分間室温でインキュベーションし、それから、細胞をＤＰＢＳによって２回洗浄し、フローサイトメトリーＦＡＣＳ法によって分析した。
３．陽性サブクローン
陽性のハイブリドーマクローンを限界希釈法によって９６ウェルプレートにサブクローニングし、陽性の単クローンをＦＡＣＳスクリーニング法（上と同じ）によって同定および選択した。ＲＮＡを得られたモノクローナル細胞から抽出し、ＤＮＡへの逆転写後に、ＰＣＲを抗体の重鎖および軽鎖遺伝子に特異的に結合するプライマーによって行い、ＰＣＲ産物をシーケンシングした。
例３．シーケンシング
陽性の単クローンを選択し、トータルＲＮＡをＴＲＩＺＯＬ法によって抽出した。ｃＤＮＡをＲＴ－ＰＣＲによって生成し、それから、重および軽鎖をそれぞれＰＣＲによって増幅した（ＲＴ－ＰＣＲキットをＴｒａｎｓＧｅｎから購入、Ｃａｔ＃：ＡＥ３１１－０３。ＧＸＬハイフィデリティＤＮＡポリメラーゼをＰＣＲに用い、タカラから購入、Ｃａｔ＃：Ｒ０５０Ａ。具体的な作業は製品マニュアル参照）。それから、ＰＣＲ産物をクリーニングキット（ＡＸＹＧＥＮ、Ｃａｔ＃：１５５。具体的な作業は製品マニュアル参照）によってクリーニングし、次にシーケンシングをし、シーケンシングは北京睿博興科生物技術有限公司（Beijing Ruibiotech Co., Ltd.）に任せた。軽鎖可変領域および重鎖可変領域のアミノ酸配列は表１および２ならびに配列表で提示される通りである。スクリーニングされた抗体クローン番号はそれぞれ８Ａ８８２および８Ｆ８Ｄ１である。
例４．腹水調製および抗体精製
１．腹水調製
６から８週齢の５匹のＢａｌｂ／ｃマウスを注文し、１週の給餌後に１ｍＬのパラフィンワックス（江西省益普生製薬有限公司（Jiangxi Yipusheng Pharmaceutical Co., Ltd.）から購入）を注射し、次週に、各マウスに１×１０６のモノクローナルハイブリドーマ細胞を注射した。１週後に、マウスは明らかな腹部膨満を有することが観察され、マウスは４８時間毎に穿刺およびアスピレーションされた。３～４ｍＬの腹水を各マウスから収集し、合計で２０ｍＬの腹水を収集した。
２．抗体精製
抗体はアフィニティー精製法によって精製し、自然流下式カラムを結合緩衝液（ｐＨ７．０）によって平衡化し、カラム体積の２～５倍で洗浄した。濾過された腹水をカラム（プロテインＡ／Ｇカラム、サーモフィッシャーに注文、Ｃａｔ＃：８９９３０）に通した；カラムをカラム体積の５～１０倍の結合緩衝液によって洗浄し、標的蛋白質をｐＨ３．５の０．１Ｍグリシンによって溶出し、次に、ｐＨ９．０のＴｒｉｓ－ＨＣｌによる中性への調整をした。最後に、ＢＣＡキット（サーモ；Ｃａｔ＃：２３２２７、具体的な作業は製品マニュアル参照）を用いて抗体濃度を決定した。抗体の純度はＳＤＳ－ＰＡＧＥによって同定され、図２は抗体が高い純度を有するということを示す。
例５．抗体の検証および親和性の検出
１．フローサイトメトリー検証
精製された高純度抗体をＦＡＣＳによって同定した。例２．２で調製されたＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するＣＡＲ－Ｔ細胞（当社製造）を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液によって洗浄し、カウントした。細胞をチューブあたりおよそ３×１０５細胞でＥＰチューブに分注した。上清を取り除くための遠心後に、８Ａ８８２抗体もしくは８Ｆ８Ｄ１抗体または正の対照抗体を１μｇ／ｍＬの終濃度で追加し、チューブを室温で１５分間インキュベーションした。２回の洗浄後に、５μＬのＰＥ標識ラット抗マウスＩｇＧを各チューブに追加し、室温で１５分間インキュベーションした。それから、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ分析を行った。実験結果は、同じ量の検出細胞（ＣＡＲ－Ｔ）の条件下では、本発明の８Ｆ８Ｄ１および８Ａ８８２抗体による処置後に、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するＣＡＲ－Ｔ細胞の発現率はそれぞれ４８．０７％および３６．４１％であるということを示している。これらは正の対照抗体処置の発現率２７．６３％よりもかなり高い。上の結果は、本発明の抗体が短いＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩペプチドを特異的に認識し得、本発明の抗体が短いＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩペプチドに対して市販の正の対照抗体よりも高い親和性を有するということを証明している（図３）。負の対照は追加されないＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグ抗体追加であり、負の対照ＩｇＧのみが追加され、正の対照は市販の抗Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグ抗体（Ａｂｃａｍ；Ｃａｔ＃：ａｂ１８４２２４）であった。
２．抗体の蛍光標識
本発明の抗体は、マルチサイト検出および分析の目的でそれぞれＦＩＴＣおよびＰＥの２つの異なる蛍光によって標識される。抗体蛍光標識は北京４Ａバイオテック社がした。
３．蛍光標識抗体アフィニティー検出
本発明の抗体アフィニティー検出は動的平衡アッセイ法（飽和濃度法）を採用する。少量の抗原の存在下において、抗体を勾配希釈に付して抗原－抗体複合体の濃度を検出する。抗原－抗体複合体の濃度が合計の抗原濃度の半分を占めるときには、抗体の対応する濃度値（ＥＣ５０）は抗原に対する抗体のＫＤ値である。
Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有するＣＡＲ－Ｔ細胞を収集し、ＤＰＢＳによって洗浄し、カウントした。細胞をチューブあたりおよび３×１０５細胞でいくつかのＥＰチューブに分注した。上清を取り除くための遠心後に、１０個の濃度に連続勾配で希釈された８Ａ８８２抗体または８Ｆ８Ｄ１抗体および正の対照抗体（市販のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩ抗体、Ａｂｃａｍ；Ｃａｔ＃：ａｂ１８４２２４）を追加し、室温で１５分間インキュベーションした。細胞をＤＰＢＳによって２回洗浄した後に、ＰＥ標識ラット抗マウスＩｇＧを追加し、室温で１５分間インキュベーションした。細胞を２回洗浄した後に、ＦＡＣＳ分析およびグラフパッドプリズムソフトウェアを用いてＥＣ５０値を計算した。ソフトウェア分析によって得られた８Ａ８８２および８Ｆ８Ｄ１ならびに正の対照抗体のＥＣ５０値は、それぞれ０．４ｎＭ、０．２ｎＭ、および０．５５ｎＭであった（図４）。正の対照抗体と比較して、本発明の２系統の抗体は高い親和性を有する。
例６．抗体を用いる腫瘍を持つマウスの末梢血中のＣＡＲ－Ｔ細胞の検出
合計で６匹の６～８週齢ＮＣＧマウス（江蘇省ＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ社、中国）に１．０×１０６のＮａｌｍ－６－ＬＡＥ細胞（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）を各マウスの尾静脈から注射し、５日後に、マウスをルシフェラーゼインビボイメージング（Ｌｕｍｉｎａ－ＩＩ小動物インビボイメージングシステム、パーキンエルマー、ＵＳＡ）によって分析して、マウス白血病モデルが首尾良く調製されたということを確認し、それから、各マウスにＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞を尾静脈から注射した（例２．２の方法を参照して当社が調製、マウスあたり２×１０６細胞）。１００μＬの末梢血を、ＣＡＲ－Ｔ検出のためにＣＡＲ－Ｔ細胞注射後の第２、４、８、１２、２１、および２８日にマウスの眼窩から収集した。具体的には、末梢血を各５０μＬの２つのアリコートに分け、３μＬのＰＥ標識８Ｆ８Ｄ１抗体を各アリコートに追加し、混合し、室温で２０分間インキュベーションし遮光した。そして、溶血液をサンプルに追加し、室温で１５分間インキュベーションし遮光し、ＤＰＢＳによって２回洗浄し、それからそれぞれ１００μＬのＤＰＢＳに再懸濁し、ＣＡＲ－Ｔ比をＦＡＣＳによって分析し、１００μＬの末梢血あたりのＣＡＲ－Ｔ細胞数を計算し、各マウスにおけるＣＡＲ－Ｔの代謝プロファイルをプロットした（図５）。
データは、マウスにおけるＣＡＲ－Ｔ細胞の分布がＰＥ標識８Ｆ８Ｄ１抗体を用いて
有効に検出され得るということを示している。

Claims (15)

  1. 重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、Ｓｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグに特異的に結合する単離された抗体であって、
    前記ＶＨは、配列番号１を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号３または配列番号４を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号５または配列番号６を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７または配列番号８を含むＶＬ－ＣＤＲ２、配列番号９または配列番号１０を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、抗体。
  2. 前記ＶＨは、配列番号１を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号３を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号５を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号７を含むＶＬ－ＣＤＲ２、配列番号９を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含むか、または
    前記ＶＨは、配列番号１を含むＶＨ－ＣＤＲ１、配列番号２を含むＶＨ－ＣＤＲ２、配列番号４を含むＶＨ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号６を含むＶＬ－ＣＤＲ１、配列番号８を含むＶＬ－ＣＤＲ２、配列番号１０を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、
    請求項１に記載の抗体。
  3. 前記ＶＨは、配列番号２３もしくは２４のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、もしくはさらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号２５もしくは２６のアミノ酸配列を含むか、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、もしくはさらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１に記載の抗体。
  4. 前記ＶＨは、１つ以上のフレームワーク領域（単数または複数）を含み、前記フレームワーク領域のそれぞれがアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１１、１２、１３、１４、１５、および１６で提示される配列、または少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列であり、
    前記ＶＬは、１つ以上のフレームワーク領域（単数または複数）を含み、前記フレームワーク領域のそれぞれがアミノ酸配列を含み、前記アミノ酸配列は、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、および２２で提示される配列、または少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列である、
    請求項１に記載の抗体。
  5. 前記ＶＨは、配列番号２３のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号２５のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含むか、あるいは
    前記ＶＨは、配列番号２４のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、配列番号２６のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１に記載の抗体。
  6. 抗体重鎖が、配列番号２７もしくは２９のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含み、抗体軽鎖が、配列番号２８もしくは３０のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１に記載の抗体。
  7. 抗体重鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸を含み、抗体軽鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含むか、あるいは
    抗体重鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含み、抗体軽鎖が、配列番号３０、または少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の同一性をそれに対して有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１に記載の抗体。
  8. 請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
  9. 請求項８に記載の核酸分子を含むクローニングまたは発現ベクター。
  10. 請求項８に記載の核酸分子を含むホスト細胞。
  11. 標識が蛍光標識、酵素基質標識、放射性同位体、ジゴキシゲニン、ビオチン、もしくはアビジン、ＤＮＡ分子、または検出のための金から選択され、好ましくは、前記蛍光標識は、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリスリン、またはテキサスレッドから選択され、好ましくは、前記酵素基質標識は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、またはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼから選択され、好ましくは、前記放射性同位体は、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、他のランタニドから選択され、好ましくは、前記標識は、ルミネセンス標識またはクロモフォアから選択される、前記標識に連結された請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体を含む抗体コンジュゲート。
  12. 請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体または請求項１１に記載の抗体コンジュゲートと、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体とを含む組成物またはキット。
  13. サンプル中のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する融合ポリペプチドを検出する方法であって、
    （ｉ）前記融合ポリペプチドを含有する前記サンプルを、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離された抗体とインビトロで、前記抗体および前記融合ポリペプチドの間の相互作用を許す条件下において接触させることと、（ｉｉ）前記抗体および前記サンプルの間の複合体の形成を検出することとを含み、
    好ましくは、前記複合体を検出する方法はフローサイトメトリー、ウエスタンブロット、免疫組織化学、および免疫蛍光の少なくとも１つを含む、
    方法。
  14. サンプル中のＳｔｒｅｐ－ＴａｇＩＩタグを含有する融合ポリペプチドを精製する方法であって、
    （ｉ）前記サンプルを、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離された抗体とインビトロで、前記抗体および前記融合ポリペプチドの間の相互作用を許す条件下において接触させることと、（ｉｉ）前記抗体および前記サンプルの間で形成された複合体を精製することとを含み、
    好ましくは、前記精製する方法はアフィニティークロマトグラフィーおよび免疫沈降を含む、
    方法。
  15. 前記サンプルは、血液、尿、唾液、リンパ、脳脊髄液、骨髄、組織および臓器、細胞の少なくとも１つを含む生物サンプルであり、好ましくは、前記血液は、血清、血漿、および全血の少なくとも１つを含み、好ましくは、前記サンプルは、キメラ抗原受容体細胞または操作された細胞受容体細胞を含有する、請求項１３または１４に記載の方法。
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