JP2023547961A - Ｔリンパ球の増殖能を測定するためのマーカーとしてのトルクテノウイルス（ｔｔｖ）の使用 - Google Patents

Abstract

本発明の主題は、対象におけるＴリンパ球の増殖能を決定するための方法であり、前記方法は、以下の工程：ａ）前記対象の生体試料からトルクテノウイルスの量を測定する工程と；ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に基づきＴリンパ球の増殖能を決定する工程と、を含む。

Description

免疫系は、病原性感染、細胞形質転換、物理的又は化学的損傷等の攻撃から体を防御する。このように、免疫能のある個体は、抗原刺激に対する防御免疫応答を引き起こすことができる。

しかしながら、免疫系が弱まったり、完全に欠如したりすると、免疫不全が発現する。これは様々な形態をとり、欠損の原因に応じて、自然免疫系又は適応免疫系又はその両方に影響を及ぼすことがある。多数の症例では、免疫不全は生涯にわたって獲得される。感染性かどうかにかかわらず（ＨＩＶ感染等）、病理に起因することもあれば、放射線療法や化学療法等の治療によって誘発されることもある。患者はその後、細菌、ウイルス、寄生生物、真菌等の病原体による二次感染に対する易罹患性の増加を示すので、免疫不全状態は、特に危険である。例えば、移植片に対する免疫抑制治療、特に造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の使用は、患者において再発性、又は場合によっては致命的な微生物感染を引き起こすことがある。

したがって、対象の免疫系の機能を決定できることが重要である。これは、特に免疫不全が特定されたときに適切な治療反応を適応させることを可能にする。

免疫能の測定には様々な技術が利用できるが、完全に満足できるものはない。これらの技術は、とりわけ細胞仲介に対する免疫応答を測定し、特にリンパ球の集団の分析、特にＣＤ４^＋Ｔ細胞の数又はＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率の測定、リンパ球増殖能の測定、Ｔ細胞の細胞毒性の測定、抗体応答の測定、四量体の標識、産生されたサイトカインの検出、ＥＬＩＳｐｏｔ等を含む。

例えばＴ細胞の計数等、これらの技術の幾つかは、これらの細胞の活性、ひいては免疫系の活性を必ずしも反映しない結果を与える。Ｔ細胞の絶対数は、これらの細胞が増殖する能力について何も示さない。例えば、ＨＳＣＴ後の少数のＴ細胞は、これらのＴ細胞が増殖できず、微生物感染から患者を守ることができないことを示しているとは言うことができない。更に、細胞増殖試験は、日常的に実施することが困難であり、標準化が困難なことがある。そのため、免疫能を決定するのに簡単に使える、簡便な方法が依然として求められている。

トルクテノウイルス（ＴＴＶ）は、輸血後肝炎（１～７）の日本人患者において１９９７年に初めて同定されたＡｎｅｌｌｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスである。ＴＴＶは、小さなサイズ（約３．８ｋｂ）の一本鎖環状ＤＮＡを有するウイルスであり、大きな遺伝的多様性を有するコード領域と、よく保存された非コード領域（ＵＴＲ）を含む。この非コード領域の配列を増幅するためのプライマーの使用は、ＴＴＶの高い世界的蔓延（約９０％）を示してきた。ＴＴＶは、明確に関連する臨床所見を伴わずに慢性感染症を引き起こす。非病原性又はオーファンウイルスと呼ばれる。このように、多くの研究がヒトの病理学、特に特定の肝病理学におけるＴＴＶの関与を扱っているが、このウイルスの明確な役割は特定されていない。

しかしながら、免疫不全の対象ではＴＴＶ量が高いことが観察されている。例えば、臓器移植の文脈（ｃｏｎｔｅｘｔ）で、免疫抑制治療（非特許文献１）又はＨＳＣＴ（非特許文献２）を受けた患者では、高レベルのＴＴＶが認められる。更に、ＴＴＶ量と、慢性感染症や癌に関連する免疫系の欠損との間には関連性があると考えられる（非特許文献３）が、一方でＴＴＶは、ＨＩＶやＨＣＶ感染等の免疫抑制ウイルス感染に関連して見られる。

これらの観察は、ＴＴＶ量が免疫能のマーカーである可能性を示唆した（８～１１）。しかしながら、これらの研究では、免疫能は、免疫細胞の数又は望ましくない臨床イベントの発生からのみ評価された（１１～１４）。現在では、細胞の量は必ずしも細胞の質と関連しない、即ちＴ細胞の活性がその数に反映されないことが既に示唆されている（１２）。

したがって、対象においてＴ細胞が活性化されることができるかどうかを決定することを可能にする、簡単で信頼性の高い方法が依然として必要である。

Ｒｅｚａｈｏｓｓｅｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｒｅｖ（Ｏｒｌａｎｄｏ）． ３３（３）：１３７－１４４，２０１９ Ａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０８（２）：２５３－２５８，２０１９ Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．９４５：８４－９２，２００１；Ｆｏｇｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２：８２９５８４，２０１２；Ｂｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０９（２）：２４７－２５４，２０１４；Ｇｏｒｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．３３（３）：３２０－３２３，２０１４）

本発明は、Ｔ細胞が対象において機能的であるかどうかを決定する方法に関する。より正確には、本発明者らは、特に、移植、より具体的にはＨＳＣＴを受けた患者において、Ｔ細胞の増殖能がトルクテノウイルス（ＴＴＶ）の量と逆相関することを示した。ＴＴＶウイルス量は、Ｔ細胞の増殖と逆相関する：したがって、ＴＴＶ量が高いほど、Ｔ細胞の増殖能は低くなる。ウイルス量は、これがＴ細胞の数であろうと臨床基準であろうと、別のパラメータと特異的に相関しておらず、特定された相関の関連性を強調する。ＴＴＶ量は、特に移植、特にＨＳＣＴを受けた患者において、Ｔ細胞の活性の特定のマーカーである。したがって、免疫系の機能の展開は、対象において、ＴＴＶ量を測定するだけで追跡されることができる。したがって、このパラメータを評価するために通常採用される面倒な技術的工程を実施する必要なく、免疫系の機能状態を迅速に評価することが可能である。

Ｔ細胞の増殖能を決定する方法
本記載は、患者におけるＴＴＶ量の測定を含む、対象におけるＴ細胞の増殖能を決定する方法に関する。

前述のように、Ｔ細胞の増殖能は、必ずしも当該Ｔ細胞の数と相関しない。したがって、Ｔ細胞の数を数える既知の方法は、Ｔ細胞の増殖能、したがって免疫系の機能について何ら情報を提供しない。したがって、発明者らは、Ｔ細胞の増殖能と有利に相関する、日常的に容易に測定可能な新しいパラメータを特定し、それによって免疫系の機能を評価することを可能にしたという利点を有する。

「Ｔ細胞（Ｔ ｃｅｌｌｓ）」又は「Ｔ細胞（Ｔ ｃｅｌｌｓ）」は、免疫応答を増幅又は減少させる役割を担う免疫系の必須細胞である。好ましくは、Ｔ細胞は、ＣＤ３と呼ばれる膜マーカーと、特定の受容体である、抗原認識に直接関与する特異的受容体ＴＣＲ（「Ｔ細胞受容体」の意）の発現によって特徴づけられる。有利には、Ｔ細胞は他の表面マーカー、特にＴ細胞の特定の機能カテゴリーに対応するＣＤ４及びＣＤ８を発現することができる。ＨＳＣＴの文脈では、関与されるＴ細胞は、特にレシピエントの少数の残存Ｔ細胞、又は移植において存在するドナーのＴ細胞であることができる。また、レシピエントの胸腺においてドナーの幹細胞と前駆細胞の分化の結果生じたナイーブＴ細胞であることもできる。

本明細書における「Ｔ細胞の活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ）」又は「Ｔ細胞の活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ）」という表現は、ナイーブＴ細胞が免疫応答に関与できるようになるプロセスを指す。Ｔ細胞の活性化は、特にその増殖につながる。したがって、Ｔ細胞の活性化は、Ｔ細胞の増殖を測定することによって有利に評価される。Ｔ細胞の増殖の測定は、通常、当業者に知られる技術によって行われるが、実施するのは面倒である。特に、Ｔ細胞は、例えばコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ Ａ）、ヨウシュヤマゴボウのマイトジェン（ＰＷＭは“ヨウシュヤマゴボウマイトジェン”の意）、及びフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）のようなマイトジェンの存在下で、そのＴＣＲの特異性とは無関係に、増殖できることがよく知られている。先行技術の方法は、マイトジェンによる刺激後のＴ細胞のＤＮＡの合成を測定することによって、Ｔ細胞の増殖能を評価する。しかしながら、これらの方法は実施するのが面倒であるので、日常的に使用することは困難なことがある。比較すると、本明細書で記載される方法は、特に単純で強力である。

したがって、Ｔ細胞増殖試験は、以下の工程：
－遠心分離によって全血から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離する工程と；
－当該単離されたＰＢＭＣを、任意に、細胞培養プレート等の補足培地でインキュベーションする工程と；
－マイトジェンによる刺激（できれば２倍）工程と；
－インキュベーション工程と；
－Ｔ細胞の増殖を決定するために、例えば培養ペレットからのフローサイトメトリーによる分析工程と、
を含む。

実施形態の例において、特に、詳細なプロトコルが提供される。

第１の態様によれば、対象における、Ｔ細胞の増殖能を決定する方法が本明細書に記載され、前記方法は、
ａ）前記対象の試料からのＴＴＶ量の測定工程と；
ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に応じて対象のＴ細胞の増殖能を決定する工程と、
を含む。

好ましい実施形態によれば、高いＴＴＶ量は、Ｔ細胞の増殖能が低いことを示す。逆に、低いＴＴＶ量は、細胞の増殖能力が高いことを示す。

もちろん、生体試料中のＴＴＶ量が高いか低いかを決定し、Ｔ細胞の増殖能について結論を導くためには、当該ＴＴＶ量を、本記載の後で定義される基準ＴＴＶ量又は対照量と有利に比較されることができる。一例として、基準ＴＴＶ量は、一人の同一個体で測定されたＴＴＶウイルス量であることができる。

本方法は、より具体的には、免疫不全状態を有することがある対象におけるＴ細胞の増殖能力を評価するのにより適している。

本明細書で使用される「免疫不全」（又は「免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）」又は「免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）」）という用語は、免疫系の機能の低下又は抑制を指す。したがって、本明細書における「免疫不全状態」とは、対象の免疫系が低下又は欠如している状態を示す。好ましくは、免疫不全状態の対象では、感染性病原体に対する体液性及び／又は細胞性の免疫応答が欠損している。より好ましくは、免疫不全状態は、少なくとも細胞性応答の低下によって発現される。

免疫不全は、原発性と続発性であることができる。原発性免疫不全症には、感染に対する易罹患性が増加した免疫系の先天性欠損を含む。対照的に、続発性免疫不全（又は後天性免疫不全）は、例えば、病原体への曝露、疾患（例えば、リンパ腫又は白血病）、疾患を治療する療法（例えば、放射線療法又は化学療法）、免疫抑制、又は加齢に伴うが、これらに限定はされない、生活の中で現れる免疫機能の損失に対応するものである。免疫不全を引き起こすことがある病原体は、とりわけ、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）１（ＨＩＶ－１）、ＨＩＶ－２、梅毒トレポネーマ、熱帯熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、二日熱マラリア原虫、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、プリオン、ウエストナイルウイルス、パルボウイルス、クルーズトリパノソーマ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２等のコロナウイルス、及び／又は牛痘ウイルスを含む。また、移植片拒絶反応を防ぐために、例えば臓器移植（例えば腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸等）やＨＳＣＴ等の移植準備において、薬物によって意図的に免疫不全を誘発することもできる。

本記載による免疫不全は、続発性（又は後天性）免疫不全であることが好ましい。したがって、本明細書に記載されている免疫不全は、例えば、免疫抑制治療、薬物治療又は放射線療法を含む療法の免疫抑制副作用、遺伝性免疫抑制遺伝形質又は疾患、後天性免疫抑制疾患（ＡＩＤＳ等）、癌（白血病又はリンパ腫等）等、いかなる起源のものであってもよいが、これらに限定されない。特に、免疫不全は、移植、特にＨＳＣＴと関連している。

特定の実施形態では、免疫不全状態にある可能性が高い対象は、移植を受けた対象である。より特定の実施形態によれば、この移植はＨＳＣＴである。

より具体的には、本記載は、ＨＳＣＴを受けた対象におけるＴ細胞の増殖能を決定するための方法に関するものであり、前記方法は以下の工程：
ａ）対象の試料からのＴＴＶ量を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に応じて対象のＴ細胞の増殖能を決定する工程と、
を含む。

好ましい実施形態によれば、高いＴＴＶ量は、細胞の増殖能が低いことを示す。逆に、低いＴＴＶ量は、細胞の増殖能が高いことを示す。

本明細書では、「幹細胞」は、２つの主要な特性：自己複製能と非常に長い期間その場に留まる能力、及びその多能性を定義する特定の組織の全ての種類の分化した細胞を生成する能力、を有する未分化であるが特殊な細胞を示すことを意図している。本明細書では、「造血幹細胞」又は「ＨＳＣ」は、より具体的には、異なる血液の細胞（特に赤血球、血小板、顆粒球、Ｔ細胞又はＢ細胞、単球）をもたらすことができる幹細胞を示す。ＨＳＣは、臍帯血から有利に得ることができる。或いは、末梢血から得ることもできる。骨髄から得ることも可能である。

本明細書において理解される「造血幹細胞移植」又は「ＨＳＣＴ」とは、一般に骨髄、末梢血、又は臍帯血に由来するＨＳＣをドナーからレシピエントに移植する、血液学分野の治療手技である。

ＨＳＣＴは、様々な疾患に対する潜在的な治療アプローチである。これらは特に血液疾患、特に急性白血病、脊髄形成異常症、及びリンパ腫のような特に悪性の血液疾患、及び体質的延髄形成不全及び異常ヘモグロビン症、固形腫瘍、免疫欠損、及び、例えばゴーシェ病等の造血組織の酵素欠損及び免疫欠損を含む、重度の予後を伴う非悪性の血液疾患である。病理は、血液疾患であることが好ましく、悪性の血液疾患であることがより好ましい。

ＨＳＣＴは、自己由来のもの（患者自身の幹細胞が使用される、即ちドナーとレシピエントは同一人物である）と同種由来のもの（以下「同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ）」という。本幹細胞は、レシピエント以外のドナー由来である）であることができる。本明細書で説明される方法のＨＳＣＴは、同種移植であることが好ましい。

この具体的な実施形態によれば、本記載は、同種造血幹細胞移植を受けた対象におけるＴ細胞の増殖能を決定する方法に関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）対象の試料からのＴＴＶ量を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に応じて対象のＴ細胞の増殖能を決定する工程と、
を含む。

好ましい実施形態によれば、高いＴＴＶ量は、細胞の増殖能が低いことを示す。逆に、低いＴＴＶ量は、細胞の増殖能が高いことを示す。

同種移植の場合、移植手術前に準備のための治療（又は前処置（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）治療）を行い、レシピエントの免疫系の活性を破壊又は低下させる。この前処置は、移植片の拒絶反応を防ぎ、腫瘍の量を軽減することを目的としている。

前処置は、「骨髄破壊的」であることができる。本明細書で理解されている「骨髄破壊的」前処置とは、レシピエントの骨髄の細胞を破壊する前処置である。有利なことに、骨髄破壊的前処置は、レシピエントの免疫系も破壊するため、移植片の受け入れを容易にする。骨髄破壊的前処置は、特に化学療法及び／又は放射線療法の１以上の工程を含むことができる。例えば、一般的に使用される前処置のうち２つは、ブスルファン－シクロホスファミドとシクロホスファミド－全身照射（ＴＢＩ）との組合せである。好ましくは、骨髄破壊的前処置は、５５歳未満、好ましくは５０歳未満の患者に適用される。

或いは、前処置は、非骨髄破壊的前処置であり、これは減弱的であり、「低下された強度」とも呼ばれる。「減弱的前処置」とは、レシピエントの骨髄を完全に破壊するのではなく、レシピエントの免疫系を阻害し、移植片の受け入れを促進する前処置である。この減弱的前処置は、免疫抑制剤の投与を含むことが好ましい。例えば、減弱的前処置のプロトコルは、フルダラビン、シクロホスファミド、又は他のアルキル化剤と、ＴＢＩとの組合せを含むことができる。減弱的前処置のプロトコルの別の例は、フルダラビン、抗リンパ球血清（ＡＬＳ）、及びブスルファンの組合せを含むことができる。減弱的前処置のプロトコルの別の例は、フルダラビン、イダルビシン、及びシタラビンの組合せを含むことができる。最後に、減弱的前処置のプロトコルの別の例は、フルダラビンと完全なミニ照射（ｍｉｎｉ－ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）の組合せを含むことができる。好ましい実施形態では、減弱的前処置は７５歳未満の患者に適用される。

本明細書で使用される「ドナー」という用語は、ＨＳＣをレシピエントに移植する対象を指す。本明細書では、「レシピエント」又は「患者」は、ドナーからＨＳＣを受け取る対象を意味する。特定の実施形態では、レシピエントは、完全であるか部分的であるかにかかわらず、ＨＳＣＴが治療上の利益を提供すべき病理によって影響される。

本明細書で使用されるように、「対象」という用語は、脊椎動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを指す。例えば、ヒトは患者である。

好ましくは、以下に説明する方法では、その全ての実施形態において、対象は患者である。

「患者」という用語は、例えば、医師等の医療専門家、医療組織、病院等の医療施設に接触したヒトを指す。

本明細書では、「生体試料」とは、対象から採取されることができるいずれの試料を意味する。一般に、生体試料は、ＴＴＶ量の決定を可能にしなくてはならない。本明細書で理解されているように、生体試料は、とりわけ、全血、血清、血漿、痰、鼻咽頭の試料、尿、糞便、皮膚、脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）、唾液、胃液分泌物、精液、精漿、涙、脊髄組織又は脊髄液、脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｆｌｕｉｄ）、三叉神経節の試料，仙骨リンパ節の試料、脂肪組織、リンパ組織、胎盤組織、上部生殖器系の組織、胃腸管系の組織、生殖器組織、及び中枢神経系の組織が挙げられるが、これらに限定されない。試験試料は、生体源から直接、又は試料の特性を修正するための前処理後に使用されることができる。例えば、この前処理は、血液からの血漿の調製、粘性流体の希釈等を含む。前処理の方法は、濾過、沈殿、希釈、蒸留、混合、濃縮、阻害成分の不活性化、試薬の添加、溶解等を含むこともできる。更に、固体の試験試料を修正して液体培地を形成したり、分析物（ａｎａｌｙｔｅ）を放出したりすることが有益な場合もある。生体試料は、血液又はその誘導体（血漿や血清等）であることが好ましい。したがって、生体試料は、試験される対象に由来する血液、血漿、又は血清であることが好ましい。

「トルクテノ（Ｔｏｒｑｕｅ Ｔｅｎｏ）ウイルス又はトルクテノ（Ｔｏｒｑｕｅ ｔｅｎｏ）ウイルス又はＴＴＶ」とは、Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスを意味する。本明細書で理解されるように、ＴＴＶは、非エンベロープウイルスであり、負の極性を持つ環状一本鎖ＤＮＡのゲノムを有する。本明細書では、「ＴＴＶゲノム」とは、ａｌｐｈａｔｏｒｑｕｅｖｉｒｕｓ（ＴＴＶ）、ｂｅｔａｔｏｒｑｕｅｖｉｒｕｓ（ＴＴＭＶ）、ｇａｍｍａｔｏｒｑｕｅｖｉｒｕｓ（ＴＴＭＤＶ）を含む全てのＡｎｅｌｌｏｖｉｒｉｄａｅ科のゲノムを指す。例として、本明細書では、トルクテノウイルスのプロトタイプ株であるＴＴＶ－１ａのゲノムを参照する。より具体的には、ＴＴＶゲノムの例は、例えば配列番号１で表され、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号がＡＢ０１７６１０であるような配列である。

ＴＴＶゲノムのサイズは、約３．８ｋｂであることが好ましい。ＴＴＶの構造及びゲノム構成は、よく知られており（例えば、Ｂｉａｇｉｎｉ，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３１：２１－３３，２００９を参照）、図１に例示されている。したがって、ＴＴＶゲノムは、約１～１．２ｋｂの非翻訳領域（ＵＴＲ）及び約２．６～２．８ｋｂの潜在的なコード領域に分割されることができる。コード領域は、特に、ＯＲＦ１及び／又はＯＲＦ２という２つの大きなオープンリーディングフレームを含み、それぞれ７７０残基と２０２残基を有する２つのタンパク質をコードする。配列番号１で表されるＴＴＶゲノムでは、オープンリーディングフレームＯＲＦ１及び／又はＯＲＦ２は、それぞれヌクレオチド５８９～２９０１と１０７～７１５との間にある。ＴＴＶゲノムは、他のオープンリーディングフレームを有することができる。例えば、ＴＴＶゲノムは、ＯＲＦ３及び／又はＯＲＦ４という２つの追加のリーディングフレームを含むことができる（図１）。

対照的に、非翻訳領域ＵＴＲはよく保存されている。これは特に、二次構造を形成することができるＧＣリッチな配列を含む。非翻訳領域ＵＴＲ－５’で選択された配列の増幅は、全世界の人口を通してウイルスの有病率が非常に高いことを実証することを可能にする（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３（８）：３７４７－３７５４，２００５）。この領域は特に、ＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）診断キット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）で増幅可能な１２８ｂｐの配列を含む。

本明細書で理解されるように、「ウイルス量」は、生体試料中に存在するウイルス粒子の数である。ウイルス量は、ウイルス感染の重症度を反映する。ウイルス量は、この生体試料中のウイルスの成分（ゲノムＤＮＡ、ｍＲＮＡ、タンパク質等）の１つの量を測定することによって決定されることができる。したがって、ウイルス量とは、生体試料中の当該ウイルスに属する核酸配列の割合を指すことが好ましい。より好ましくは、ウイルス量は、生体試料中の当該ウイルスのゲノムのコピー数を表す。

この場合、ウイルス量はＴＴＶ量を表す。本明細書での「ＴＴＶ量」は、より具体的にはＴＴＶのウイルス量、即ち生体試料中に存在するＴＴＶのウイルス粒子の数に対応する。対象におけるＴＴＶ量は、当該被験者が有する全てのＴＴＶのウイルス量を意味する。ＴＴＶ量は、この生体試料中の核酸又はタンパク質等のＴＴＶの成分の量を測定することによって決定されることができる。ＴＴＶ量は、生体試料中に存在するＴＴＶの核酸配列の量に対応することが好ましい。したがって、本発明による対象中のＴＴＶ量の決定は、当該対象からの生体試料中の全てのＴＴＶの配列数の推定を含む。特に、本発明によれば、当該生体試料中で測定されるＴＴＶの特定の菌株の選択はない。ＴＴＶ量の決定は、活性及び／又は不活性なウイルスコピーの量の決定を含むことが好ましい。それは、組み込まれた又は潜在的に循環しているウイルスコピーの量を決定することからなる。

ＴＴＶのレベル、つまりＴＴＶ量は、ＴＴＶ ＤＮＡ、ＴＴＶ ＲＮＡ、又はＴＴＶタンパク質のレベルを測定することによって決定されることができる。したがって、本発明に係る方法は、患者から試料を得ることと、上記で定義された工程ａ）との間に、生体試料を二本鎖ＤＮＡの試料、又はｍＲＮＡ（又は対応するｃＤＮＡ）の試料、又はタンパク質の試料への転換に対応する、他の予備工程を含むことができ、その後、工程ａ）でＴＴＶのインビトロ検出に使用する準備が整う。細胞試料から出発される二本鎖ウイルスＤＮＡ、ｍＲＮＡ（及び後者のｃＤＮＡへの逆転写）、又はタンパク質の調製又は抽出は、当業者にはよく知られた日常的な手順にすぎない。二本鎖ＤＮＡはＴＴＶゲノム全体に対応する場合もあれば、その一部にのみ対応する場合もある。二本鎖ＤＮＡ、ｍＲＮＡ（又は対応するｃＤＮＡ）、又はすぐに使用できるタンパク質の試料が利用可能になれば、試料や形質転換の種類に応じて、ゲノムＤＮＡ（即ち、ＴＴＶゲノムの少なくとも一部からなる少なくとも１つの配列の存在に基づく）、ｍＲＮＡ（即ち、試料中のＴＴＶ ｍＲＮＡの含有量に基づいて）、又はタンパク質レベル（即ち、試料中のＴＴＶタンパク質の含有量に基づいて）のいずれかによって、ＴＴＶの検出を行うことができる。

好ましくは、ＴＴＶのレベルは、ＴＴＶ核酸、より好ましくはＴＴＶ ＤＮＡのレベルを測定することによって決定される。

生体試料中の核酸の検出方法は、とりわけ、ＰＣＲ増幅、配列決定、標識プローブとのハイブリダイゼーション、及び当業者に知られている他の全ての方法を含む増幅を含む。

第１の実施形態によれば、ＴＴＶ量は、ＴＴＶ配列の増幅によって決定される。

好ましいアプローチは、ＴＴＶゲノムに特異的であることが知られている配列の増幅からなる。本明細書では、「ＴＴＶゲノムに特異的な配列」とは、既知のＴＴＶの大部分に存在するが、他の大多数のウイルス、特に他の大多数のａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓには存在しない配列を意味する。ＴＴＶに特異的な配列は、既知のＴＴＶのゲノムの少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％に存在することが好ましい。既知のＴＴＶのゲノムの１００％に存在することがより好ましい。或いは、ＴＴＶ以外の既知のａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓのゲノムの１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満に、ＴＴＶに特異的な配列が存在する。ＴＴＶ以外の既知のａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓの全ゲノムに、ＴＴＶに特異的な配列が存在しないことが好ましい。このような配列は、例えば、非翻訳領域ＵＴＲに含まれる配列である。より具体的には、このような配列は、ＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）診断キット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）を使用して増幅される非翻訳領域５’－ＵＴＲの１２８ｂｐの配列に対応する。

したがって、この実施形態によれば、本明細書で記載される方法は、ＴＴＶゲノムに特異的であることが知られている配列の増幅のためのプライマーとプローブの使用を含む。本技術分野では通常、これらのプライマーはオリゴヌクレオチドであることが好ましい。例えば、これらのプライマーは、３０ヌクレオチド未満、２５ヌクレオチド未満、２０ヌクレオチド未満、１５ヌクレオチド未満、又は１２ヌクレオチド未満を含むことができる。或いは、これらのプライマーは、少なくとも１２、１５、２０、２５、又は３０ヌクレオチドを含む。使用されるプライマーは、１２～２０ヌクレオチド、１２～２５ヌクレオチド、１５～２０ヌクレオチド、又は１５～２５ヌクレオチドを含むことが好ましい。当業者であれば、ＴＴＶに特異的な配列が選択された後に使用される増幅プライマーの長さ及び配列を決定する方法を知っているであろう。例えば、ＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）診断キット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）で提供されているものと同じプライマーを使用することが可能であろう。

特に、増幅技術は、等温法と、ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応）に基づく技術とを含む。等温増幅法には多数の方法がある。病原体の検出に最もよく用いられる方法は、ＬＡＭＰ（ループ媒介増幅；Ｌｏｏｐ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）及びＲＰＡ（リコンビナーゼポリメラーゼ増幅；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）である。等温増幅の方法は、例えば、ＮＡＳＢＡ（核酸配列に基づく増幅；ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｂａｓｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、ＨＤＡ（ヘリカーゼ依存性増幅；ｈｅｌｉｃａｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、ＲＣＡ（ローリングサイクル増幅；ｒｏｌｌｉｎｇ ｃｉｒｃｌｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）及びＳＤＡ（鎖置換増幅；ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、ＥＸＰＡＲ（指数的増幅反応；ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＩＣＡＮ（等温の、キメラプライマーによって開始される核酸の増幅；ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｎｄ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｐｒｉｍｅｒ－ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ）、ＳＭＡＲＴ（ＲＮＡのシグナル媒介増幅技術；ｓｉｇｎａｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）等の方法も含む（例えば、Ａｓｉｅｌｌｏ ａｎｄ Ｂａｅｕｍｎｅｒ，Ｌａｂ Ｃｈｉｐ １１（８）：１４２０－１４３０，２０１１参照）。使用されるＰＣＲ技術は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡの初期量を定量的に測定することが好ましい。本明細書で記載される方法で使用できるＰＣＲに基づく技術の例としては、リアルタイムＰＣＲ（Ｑ－ＰＣＲ）、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、多重逆転写ＰＣＲ、リアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＱＲＴ－ＰＣＲ）、及びデジタルＰＣＲ等の技術が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの技術は、当業者にとってよく知られており、容易に入手できる技術であるため、本明細書で詳述する必要はない。

ＴＴＶ量は、リアルタイム定量的ＰＣＲによって決定されることが好ましい。ＴＴＶの検出及び定量のための多数の方法が、先行技術に記載されてきた（例えば、Ｍａｇｇｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７７（４）：２４１８－２４２５，２００３参照）。特に、Ｋｕｌｉｆａｊらによって記載された方法が参照される（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｖｉｒｏｌ．１０５：１１８－１２７，２０１８）。この方法は、その単純さと頑強性（ｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ）のために特に有利である。それは、非コーディング領域ＵＴＲに含まれる配列の増幅に基づいている。この配列は、既知の全てのＴＴＶに存在するため、この方法に非常に大きな特異性を与えている。更に、これは特に汎用性があり、任意のタイプのＰＣＲプラットフォームで実行されることができる。この方法を実行するために、ＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）診断キット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）を使用することは特に有利である。

或いは、ウイルス量の決定は、デジタルＰＣＲによって行われる。デジタルＰＣＲは、極端に希釈された核酸における幾つかのＰＣＲ分析を含み、それによって陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）増幅の殆どが単一のマトリックス分子のシグナルを反映する。したがって、デジタルＰＣＲは、個々のモデル分子を計測することができる。分析されたＰＣＲの総数のうちの陽性増幅の割合によって、元の試料又は希釈されていない試料のマトリックスの濃度を推定することができる。この技術は、様々な遺伝現象の検出を可能にするために提案された（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６：９２３６－９２４，１９９９）。デジタルＰＣＲは、リアルタイムＰＣＲと同様に、試料間の標的配列の細かい定量的な違いを潜在的に識別できる。

別の実施形態によると、ＴＴＶ ＤＮＡのレベルはシークエンシングによって測定される。本明細書で使用されているように、「シークエンシング」という用語は、最も広く受け入れられているものであり、ポリヌクレオチド分子（ＤＮＡ又はＲＮＡ）の配列を決定するため、即ち、この分子を構成するヌクレオチドの連続を決定するために、当業者に知られている技術を指す。

したがって、ＴＴＶ ＤＮＡは、当技術分野で知られる技術によって配列決定されることができる。本明細書で理解されるように、シークエンシングは、とりわけ、サンガー法によるシークエンシング、ゲノム全体のシークエンシング、ハイブリダイゼーションによるシークエンシング、パイロシークエンシング（特に、４５４シークエンシング、Ｓｏｌｅｘａ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｚｅｒシークエンシング）、キャピラリー電気泳動によるシークエンシング、サイクルシークエンシング（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｉｎ ｃｙｃｌｅｓ）、単一塩基伸長シークエンシング、固相シークエンシング、超高速シークエンシング、超並列署名シークエンシング（ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ；ＭＰＳＳ）、可逆的ダイターミネーターシークエンシング（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｄｙｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、対のシークエンシング（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｗｉｔｈ ｐａｉｒｅｄ ｐａｉｒｓ）、短期間シークエンシング（ｓｈｏｒｔ ｔｅｒｍ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、エキソヌクレアーゼによるシークエンシング、ライゲーションによるシークエンシング、単一分子シークエンシング、合成によるシークエンシング、電子顕微鏡によるシークエンシング、リアルタイムシークエンシング、リバースターミネーションシークエンシング（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、ナノポアによるシークエンシング、可逆的ターミネーターシークエンシング（ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）、半導体によるシークエンシング、ＳＯＬｉＤ（Ｒ）シークエンシング、ＳＭＲＴシークエンシング（単一分子リアルタイム分析）、ＭＳ－ＰＥＴシークエンシング、質量分析、及びこれらの組合せを含む。特定の実施形態は、例えば、Ｉｌｌｕｍｉｎａにより開発されたプラットフォームＭｉＳｅｑ、ＮｅｘｔＳｅｑ ５００、及びＨｉＳｅｑシリーズ（Ｒｅｕｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ，５８：５８６－５９７，２０１５；Ｂｅｎｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ；４５６：５３－５９，２００８）、４５４ゲノムシークエンサー及びＲｏｃｈｅプラットフォーム（Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ；４３７：３７６－３８０，２００５）、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＳＯＬｉＤプラットフォーム（ＭｃＫｅｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ；１９：１５２７－１５４１，２００９）、Ｐｏｌａｎａｔｏｒプラットフォーム（Ｓｈｅｎｄｕｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９：１７２８－１７３２）又はＨｅｌｉｃｏｓ単一分子シークエンシングプラットフォーム（Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ；３２０：１０６－１０９，２００８）を用いた、超高速ＤＮＡシークエンシングを使用する。超高速シークエンシングは、ＳＭＲＴリアルタイムシークエンシング（Ｒｏａｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ＆Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１３（５）：２７８－２８９，２０１５）、Ｉｏｎ Ｔｏｒｒｅｎｔシークエンシング（ＷＯ２０１０／００８４８０；Ｒｏｔｈｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４７５：３４８－３５２，２０１１）、及びナノポアを用いたシークエンシング（Ｃｌａｒｋｅ Ｊ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ：４：２６５－２７０，２００９）等の方法も含む。

シークエンシングは、生体試料に含まれるＤＮＡ全体又は生体試料に含まれるＤＮＡの一部に対して行われる。当業者であれば、当該試料が少なくとも宿主対象者のＤＮＡとＴＴＶ ＤＮＡとの混合物を含むことは、すぐに明らかであろう。更に、ＴＴＶ ＤＮＡはおそらく試料中に存在する全ＤＮＡのごく一部を表すであろう。有利なことに、ＤＮＡは配列決定の前に、一般的に、物理的な方法によってランダムに断片化される。

第１のアプローチは、ＴＴＶの種のゲノムの特定の配列の配列決定からなる。他のアプローチは、生体試料から得られた核酸の定量的な遺伝子型決定を非常に正確に行うことができる方法を使用することからなる。特定の実施形態では、標的配列（即ち、この場合、ＴＴＶの配列）の事前知識に基づいたプロトコルを使用して、増幅を行わずに、多数（例えば、数百万又は数十億等）の核酸分子を分析することによって精度が得られる。

好ましい実施形態では、本発明の方法は、リーディングの数を定量化する工程を含む。

特定の実施形態では、生体試料の核酸分子のランダムなサブセットが超高速シークエンシングにかけられる。好ましくは、ＴＴＶ配列は、公開で寄託されるＴＴＶ配列と比較することによって、グローバルシークエンシングで同定される。この比較は、既知のＴＴＶ配列との配列同一性のレベルに有利に基づいており、遠縁の変異体でさえも検出することを可能にする。ＢＬＡＳＴ等の一般的なソフトウェアを使用して、配列間の同一性のレベルを決定することができる。

したがって、既知のＴＴＶ配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有する配列は、ＴＴＶ配列として同定される。したがって、この実施形態によれば、ＴＴＶ量の決定は、対象からの生体試料におけるシークエンシングによって同定されたＴＴＶ配列のナンバリングを含む。

別の実施形態では、ＴＴＶ量は、生体試料におけるウイルスタンパク質の量を測定することによって決定される。したがって、特に免疫沈降法、免疫組織学、ウエスタンブロット、ドットブロット、ＥＬＩＳＡ又はＥＬＩＳＰＯＴ、電気化学ルミネセンス （ＥＣＬＩＡ）、プロテインチップ、抗体チップ、又は免疫組織学に結合した組織チップ等のよく知られた技術で、特定の抗体を使用することが可能である。使用されることができる他の方法は、ＦＲＥＴ又はＢＲＥＴ技術、特に共焦点顕微鏡及び電子顕微鏡の方法を含む顕微鏡又は組織化学の方法、電気化学方法（ボルタンメトリー及びアンペロメトリー技術）等の適応光学方法及び１以上の励起波長の使用に基づく方法、原子間力顕微鏡、及び高周波方法（ｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｍｅｔｈｏｄ）（多極性、共焦点、及び非共焦点共鳴スペクトロスコピー等）、蛍光、発光、化学発光、吸光度、反射率、透過率、及び複屈折率（ｂｉｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｐｏｗｅｒ）又は屈折率（例えば、表面プラズモン共鳴、エリプリメトリー、共鳴ミラー方法等によって）の検出、フローサイトメトリー、放射性同位元素又は磁気共鳴画像法、ポリアクリルアミドゲルにおける電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、質量分析、及び質量分析と連結した液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）による分析を含む。これらの技術は全て当業者にはよく知られており、本明細書で詳述する必要はない。更に、ＴＴＶタンパク質の特異的抗体は既に利用可能である。

好ましい実施形態では、本明細書で説明される方法は、測定された核酸又はウイルスタンパク質の量の標準化の追加工程を含む。

好ましい実施形態によれば、生体試料中に存在するＴＴＶのレベル、即ちＴＴＶ ＤＮＡ、ＴＴＶ ＲＮＡ、又はＴＴＶタンパク質の量を、この試料の特定のパラメータに標準化することは有利なことがある。測定されたＴＴＶ量を特定へのパラメータへ標準化することは、２つの異なる生体試料のウイルス量を比較する際のエラー率を低減することを可能にする。この標準化に有用であることができるパラメータの例としては、例えば後の体積等、試料の含有量に依存しない物理的パラメータであることができる。また、ＴＴＶ ＤＮＡ、ＴＴＶ ＲＮＡ、又はＴＴＶタンパク質の量を、試料中に存在するＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質の総量に標準化することも可能である。或いは、特定のＤＮＡ又はＲＮＡ配列、又は特定のタンパク質を標準化ツールとして使用することも可能である。例えば、この配列又はこのタンパク質は、ヒトの配列又はタンパク質であることができる。

或いは、所定の試料中のＴＴＶ ＤＮＡ又はＲＮＡ、又はＴＴＶタンパク質の量を内部対照と比較する。このため、生体試料で測定されたＴＴＶ核酸又はタンパク質の量は、例えば宿主又は外因性の核酸又はタンパク質等、特定及び定量されることができる核酸又は適切なタンパク質の定義された量に対して、参照されることができる。この同定可能及び定量可能な核酸又はタンパク質を標的核酸又はタンパク質として扱われることが好ましい（例えば、増幅される、配列決定される等）。したがって、この同定可能及び定量可能な核酸又はタンパク質の既知の量を試料に加えることが最初から可能であり、その後、標的核酸又はタンパク質として扱われ、このウイルス核酸又はタンパク質の量の測定の前に試料調製の全ての工程を通る。調製工程は、例えば様々なヌクレアーゼを使用して、ウイルス核酸を保護し、宿主核酸を破壊する手段を含むことができる。或いは、これらの工程は、例えば様々なプロテアーゼを使用して、ウイルスタンパク質を保護し、宿主タンパク質を破壊する手段を含むことができる。内部制御により、試料中の検討中の分子（核酸又はタンパク質）の品質と処理の程度（例えば、増幅又は配列決定）を評価することができる。好ましくは、当該内部制御は既知の配列の核酸分子であり、この核酸分子は既知の濃度で試料中に存在する。この核酸分子は、試料中の既知の配列と濃度のウイルスのゲノム一本鎖環状ＤＮＡの分子であることがより好ましい。この既知のウイルスは、例えば、サーコウイルス科のウイルスであることができる。対照に対する試料の配列数の比によって、既知の配列と濃度のＴＴＶゲノムの絶対数を推定することができる。或いは、この内部制御は既知の配列のタンパク質であり、既知の濃度で試料中に存在する。

決定されたＴＴＶ核酸又はタンパク質の量を測定することによってＴＴＶ量が決定され、後で任意で標準化されると、基準ＴＴＶ量と比較することが有利になる場合がある。

「基準ＴＴＶ量」又は「基準ウイルス量」とは、本出願の意味において、基準として使用されるＴＴＶ量を意味する。これは、基準ＴＴＶ量が「基準レベルのＴＴＶ核酸（又はタンパク質）」又は「基準レベルのＴＴＶ核酸（又はタンパク質）」、即ち基準として使用されるＴＴＶ核酸（又はタンパク質）の濃度に対応することを意味する。本明細書で理解されているように、「基準濃度のＴＴＶ核酸（又はタンパク質）」とは、被験物質と同等の対照試料で測定され、特定の免疫適格性状態を有する対象又は対象群から得られるベースラインレベルである。例えば、健康である、又は免疫抑制につながる疾患を有していない、対象又は対象群であることができる。また、例えば、免疫抑制治療後の、免疫抑制された対象又は対象群であることもできる。最後に、例えば免疫抑制の前又は直後の、移植手術を受けた同じ個体であることができる。

基準レベルは、複数の方法で決定されることができる。例えば、対照は、様々な形式を想定することができる所定の値であってもよい。中央値や平均値等、一意の閾値であることができる。「基準レベル」は、患者ごとに適用可能な一意の値であることができる。或いは、基準レベルは、患者の特定の亜集団の関数として変化することができる。したがって、例えば、高齢の男性は、ＴＴＶ量の基準レベルが若い男性と異なり、女性はこのウイルス量の基準レベルが男性と異なることがある。更に、「基準レベル」は、ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）のレベルが高くない群とＴＴＶ核酸（又はタンパク質）のレベルが高い群等の比較群に基づいて立証されることができる。比較群の別の例は、疾患、状態、又は特定の症状を持つ群と、疾患のない群がある。例えば、試験集団を低リスク群、中リスク群、高リスク群等の群に均等に（又は不均等に）分割する場合に、所定値を定義することができる。

基準レベルは、移植を受けた患者や免疫抑制につながる疾患を有する患者の集団におけるＴＴＶ核酸（又はタンパク質）のレベルを比較することによって決定されることもできる。これは、例えば、ヒストグラム分析によって達成されることができ、対象のコホート全体がグラフで示され、第１の軸は当該ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）のレベルを表し、第２の軸は所定のレベルでＴＴＶ核酸（又はタンパク質）を発現している患者の群における患者数を表す。同一又は類似のレベルのＴＴＶ核酸（又はタンパク質）を有するコホートの亜集団を特定することによって、２以上の別々の対象群を決定することができる。その後、これらの別々の群を最もよく区別するレベルに基づいて、基準レベルを決定することができる。基準レベルは、存在する２つ以上のＴＴＶ核酸（又はタンパク質）のレベルを表すこともできる。２つ以上のマーカーは、例えば、各マーカーのレベルの値の比率によって表されることができる。

更に、明らかに健康な個体群は、高濃度の当該ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）と関連する状態を有することが知られている個体群とは「異なる」正常範囲を有するであろう。したがって、選択される所定値は、個体がどのカテゴリーに分類されるかを考慮することができる。適切な範囲及びカテゴリーは、単に当業者による日常的な実験によって選択されることができる。「高い」又は「上昇した」は、選択された対照に対して高いことを意味する。一般的に、対照は、適切な年齢群において明らかに健康な正常な個体に基づく。

好ましい実施形態では、基準濃度は、一般集団におけるＴＴＶ核酸（又はタンパク質）の濃度又は複数のＴＴＶ核酸（又は複数のＴＴＶタンパク質）の組合せの濃度に相当する。

本明細書で記載されている方法における対照は、所定値の他に、試験試料と並行して測定された生体試料であってもよいことが理解されるであろう。この実施形態によれば、基準レベルは、健康な対象から得られた試料中のＴＴＶ核酸又は複数のＴＴＶ核酸（又はタンパク質又は複数のタンパク質）の基準レベルであろう。

ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）の基準濃度は、健康な対象又は健康な対象の集団におけるこのＴＴＶ核酸（又はこのＴＴＶタンパク質）の濃度であることが好ましい。別の好ましい実施形態によれば、ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）の基準濃度は、免疫抑制された対象又は免疫抑制された対象の集団（例えば、免疫抑制治療後）におけるこのＴＴＶ核酸（又はこのＴＴＶタンパク質）の濃度である。別の好ましい実施形態によれば、ＴＴＶ核酸（又はタンパク質）の基準濃度は、例えば後者の前又は直後の特定の時点で移植を受けた同じ個体におけるこのＴＴＶ核酸（又はこのＴＴＶタンパク質）の濃度である。

好ましくは、上記の方法では、全ての実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＣＤ３＋及び／又はＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の集団、好ましくはＣＤ３＋Ｔ細胞である。

Ｔ細胞の活性を監視する方法
本明細書で記載される方法は、対象におけるＴ細胞の増殖能を迅速かつ容易に評価することを可能にする。

複数の要因が、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植のレシピエントにおける重度の免疫抑制状態に関与する。前処置は、特にレシピエントのリンパ組織を変化させる。ＧｖＨＤの存在及びその治療は、新たな免疫性合併症を引き起こす。最後に、免疫適格者のＴ細胞コンパートメントの大きさと比較して、移植されたＴ細胞が僅かであること、及び移植片に存在するドナーの免疫前駆体の数が極めて限られていることも、レシピエントの免疫回復の遅れに関与する。これら全ての要因により、レシピエントは微生物感染症やＧｖＨＤ等の移植後合併症にかかりやすくなる。

本明細書で記載された方法のおかげで、例えばＨＳＣＴ後、特に同種造血幹細胞移植後等、免疫系が損なわれた状況でＴ細胞の活性を容易に評価することができる。

したがって、本開示の他の態様は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＴ細胞の活性を監視する方法に関する。本方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法で、最初の時点でＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、患者のＴ細胞の活性の変化を決定する工程と、
を含む。

本明細書で理解されるように、「Ｔ細胞の基準増殖能」とは、上述の基準ＴＴＶ量から推定されるＴ細胞の増殖能である。当然、工程ａ）で決定された患者の試料のＴＴＶ量を基準ＴＴＶ量と比較するだけによって、工程ｂ）の比較を行うことができる。

例えば、この最初の時点での患者のＴ細胞の増殖能と、免疫抑制された個体のＴ細胞の基準増殖能を比較することで、この最初の時点で、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植後の患者の免疫能の回復を推定することができる。本明細書で、「免疫能」とは、免疫細胞による機能の獲得を意味する。したがって、免疫抑制された個体の増殖能に対して、患者のＴ細胞の増殖能が増加していることは、患者の免疫能の回復が進行中であることを示す。前述のように、免疫抑制された対象に対して、患者のＴ細胞の増殖能が増加していることは、ＴＴＶ量が低いことに相当する。

或いは、Ｔ細胞の基準増殖能は、健康な個体のものであることができる。この場合、Ｔ細胞の基準増殖能に対する患者のＴ細胞の増殖能の低下は、患者の免疫能が完全には回復していないことを示す。健康な対象に対する患者のＴ細胞の増殖能の低下は、ＴＴＶ量の増加に対応することが直ちに理解されるであろう。

本明細書において特定の実施形態で使用される「増加した」という用語は、より多い量、例えば元の量を僅かに上回る量、又は例えば元の量に対して非常に過剰な量、特に範囲内の全ての量を意味する。変形として、「増加」は、増加した量又は活性が比較される量又は活性よりも、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％多い量又は活性を指すことができる。本明細書では、「強化した」、「～より大きい」、「更に大きい」、及び「増加した」という用語は同じ意味で使用されている。

本明細書において特定の実施形態で使用される「減少した」という用語は、より小さな量、例えば元の量を僅かに少ない量、又は例えば元の量に対して非常に不十分な量、特に範囲内の全ての量を意味する。変形として、「減少」は、減少した量又は活性が比較される量又は活性よりも、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％少ない量又は活性を指すことができる。本明細書では、「減少した」、「～より小さい」、「更に低い」、及び「低下した」という用語は同じ意味で使用されている。

Ｔ細胞の基準増殖能として、２回目の時点での同じ患者のＴ細胞の増殖能を使用することもできる。したがって、高価で複雑な検査機器を使用することなく、第１の時点及び第２の時点での患者のＴＴＶ量を簡単に測定することによって、移植後のこの患者におけるこれらのＴ細胞の活性の変化を容易に監視することができる。

この特定の実施形態によれば、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＴ細胞の活性を監視する本方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法で、最初の時点でＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）上記の方法で、工程ａ）における最初の時点よりも遅い第２の時点で、Ｔ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｃ）ａ）及びｂ）で測定されたＴ細胞の増殖能を比較する工程と；
ｄ）工程ｃ）における比較に応じて、患者のＴ細胞の活性の変化を決定する工程と、
を含む。

他の特定の実施形態によれば、移植、好ましくはＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた対象におけるＴ細胞の活性を監視する本方法は、以下の工程：
ａ）最初の時点で採取された対象の生体試料からのＴＴＶウイルス量を決定する工程と；
ｂ）工程ａ）における最初の時点よりも後である第２の時点で採取された対象の生体試料からのＴＴＶウイルス量を決定する工程と：
ｃ）ａ）及びｂ）で測定されたＴＴＶのウイルス量を比較する工程と；
ｄ）工程ｃ）における比較に応じて、対象のＴＴＶ量における変化を決定する工程と、
を含む。

上記で説明されたように、ＴＴＶウイルス量は、Ｔ細胞の増殖能と逆相関しているため、ＴＴＶ量の変化によってＴ細胞の増殖能が増加しているか減少しているかを判断することができるため、Ｔ細胞の活性、特に対象の免疫能の回復（又はその逆）等の指標を提供する。

したがって、この方法は、患者のＴ細胞の活性を経時的に監視する上で特に有用である。好ましい実施形態では、工程ａ）における最初の時点は移植時に位置する。他の好ましい実施形態では、ＨＳＣＴ後少なくとも３０日後、６０日後、９０日後、１００日後、１２０日後、１５０日後、１８０日後、２１０日後、２４０日後、２７０日後、３００日後、３３０日後、３６０日後、７２０日後、又は１０８０日後に採取した試料を用いて、工程ｂ）でＴ細胞の増殖能を測定する。或いは、試料は、ＨＳＣＴの３０日後、６０日後、９０日後、１００日後、１２０日後、１５０日後、１８０日後、２１０日後、２４０日後、２７０日後、３００日後、３３０日後、３６０日後、７２０日後、又は１０８０日後に採取する。

最初の時点に対して第２の時点で細胞が増加した増殖能を有する場合、その細胞の活性自体がこの時点で増加することは明らかである。例えば、最初の時点が移植の時点である場合、この第２の時点でＴ細胞の増殖能が増加していることは、より多くのＴ細胞が活性化しており、患者が特に脅威に抵抗する能力が高いことを意味する。Ｔ細胞の増殖能におけるこれらの変化は、逆方向のＴＴＶ量の変化に変換される：したがって、時間の経過とともにＴＴＶ量の減少は、Ｔ細胞の増殖能力の増加、即ち患者の免疫能の回復を反映する。したがって、現在の方法は、レシピエントの免疫系の回復を推定することを可能にする。言い換えれば、Ｔ細胞の増殖能の変化は、移植後の患者における免疫能の再出現を評価することを可能にする。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において、採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

微生物感染のリスクを評価する方法
ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植は、患者によってかなり異なる早期又は後期の合併症を引き起こすことがある。

特に、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者は、免疫系が回復するまで、細菌性、ウイルス性、寄生動物性、真菌性を問わず、微生物感染に対して罹りやすいままである。ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植後の所定時のＴ細胞の増殖能を評価することで、移植手術を受けた患者の微生物感染に対する易罹患性を決定することができる。

この特定の態様において、本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者の微生物感染に対する易罹患性を決定する方法に関する。この方法は、以下の工程：
ａ）最初の時点で、上記の方法で患者の試料からＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）Ｔ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較から、患者において微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

本明細書に記載された方法は、例えば、以下で詳細に記載される、１以上の感染性病原体（細菌、ウイルス、寄生生物又は酵母、及び糸状菌等）の存在の特定の診断の１つ以上の工程を更に含むことができる。これらの病原体の検出は、特にＨＳＣＴに関連した日常的な臨床診療であり、当業者であれば、対応する技術はなじみがあるので、本明細書で詳述する必要はない。

これらの微生物感染は、特にウイルス感染、細菌感染、寄生生物感染、真菌感染である。ウイルス感染は、特にウイルスＨＳＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ－６、エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）等のヘルペスウイルス科のウイルスによる感染である。これらのウイルス感染は、アデノウイルス、呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウイルス（ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ又はＭｙｘｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅとも呼ばれる）、又はＢＫウイルスによって引き起こされることもできる。中でも、細菌感染の原因となる細菌は、黄色ブドウ球菌又はコアグラーゼ陰性ブドウ球菌等のブドウ球菌、肺炎連鎖球菌、髄膜炎菌、又はインフルエンザ菌等の莢膜細菌、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｓｐ．）、又はシュードモナス属、アシネトバクター属、ステノトロホモナス属、バークホルデリア属、アルカリゲネス属（Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅｓ）等の絶対好気性非発酵性グラム陰性杆菌等であることができる。非定型抗酸菌による感染も観察されることができる。特にカリニ肺炎菌による、罹患率と死亡率の高い寄生生物感染が発生することがあり、トキソプラズマ症（トキソプラズマ原虫によって引き起こされる）によっても発生することがある。最後に、カンジダやクリプトコッカス等の酵母だけでなく、アスペルギルス等の糸状菌も、ＨＳＣＴ後の感染性死亡率の主要な原因の１つである侵襲性真菌感染症の原因である。

Ｔ細胞の基準増殖能は、上記のように基準ＴＴＶ量から決定されたＴ細胞の増殖能に相当する。工程ｂ）における比較は、単に工程ａ）で決定された患者の試料のＴＴＶ量を基準ＴＴＶ量と比較することによって、行われることができる。

この基準ＴＴＶ量は、例えば、免疫抑制されていない健康な個体のＴＴＶ量であることができる。次に、Ｔ細胞の基準増殖能は、この免疫抑制されていない健康な個体のＴＴＶ量であることができる。

この特定の実施形態では、本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者における微生物感染に対する易罹患性を決定する方法に関する。この方法は、以下の工程：
ａ）最初の時点で、上記の方法で患者の試料からＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）Ｔ細胞の増殖能と健康な対象のものと比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較から、患者において微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

この場合、健康な対象に対して患者における減少したＴ細胞の増殖能は、患者の免疫系が十分に機能していないことを示す。健康な対象のものよりも低い患者のＴ細胞の増殖能は、健康な対象のＴＴＶ量よりも多い患者の試料で測定されたウイルス量に相当する。言い換えれば、対象には免疫系が不足しているため、病原体による攻撃を受ける可能性がある。したがって、患者は微生物に感染されるリスクがある。しかしながら、Ｔ細胞が健康な対象のものと実質的に同じ増殖能を有する場合、患者は微生物に感染しにくい。

第２の時点での同じ患者におけるＴ細胞の増殖能は、Ｔ細胞の基準増殖能としても使用されることができる。したがって、当業者は、移植後の経時の微生物感染のリスクの展開を監視することができる。したがって、抗感染治療は、患者の生活の質を向上させながら、耐性出現のリスクを制限する、患者の微生物感染に対する実際の易罹患性の関数として適応されることができる。

この特定の実施形態では、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者において、微生物感染に対する易罹患を決定する方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法で、最初の時点でＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）上記の方法で、工程ａ）における最初の時点よりも遅い第２の時点で、Ｔ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｃ）ａ）及びｂ）で測定されたＴ細胞の増殖能を比較する工程と；
ｄ）工程ｃ）における比較に応じて、患者における微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

したがって、患者における微生物感染に対する易罹患性の経時的な展開を追跡することが可能である。工程ａ）に対して工程ｂ）における増加したＴ細胞の増殖能は、その活性が増加していることを反映しているので、２つの時点間に微生物感染に対する患者の易罹患性が低下していることを反映する。現在の方法は、特に、移植後の経過時間が長いほど、患者は微生物に感染しにくくなる、即ち、免疫系がますます機能的になることを検証することを可能にする。

したがって、患者の微生物感染に対する易罹患性は、本明細書に記載された方法を使用して決定されることができ、患者のニーズに合わせた治療を適応させることを可能にする。したがって、本発明の方法による患者の免疫抑制された状態の予備的決定は、先行技術の方法に基づいて設計された治療よりも安全な治療につながる。

好ましくは、上記の方法では、全ての実施形態で、Ｔ細胞の増殖能は、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖能又はＣＤ３＋及び／又はＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の増殖能、好ましくはＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能に対応する。

したがって、本発明は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者における微生物感染のための治療を設計する方法にも関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と
ｂ）工程ａ）の結果に従って治療を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

治療は予防的に決定されることができる、即ち、感染の発生を防ぐために、患者の免疫不全状態を考慮して処方されることができる。この文脈では、後述されるＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植後に一般的に使用される治療的又は予防的治療を処方することを決定することができる。本方法は、このような感染のリスクが特定された場合に、ウイルス感染、細菌感染、寄生生物感染、又は真菌感染の予防的又は治療的治療を決定及び実施することを可能にする。

したがって、本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者における感染を治療する方法にも関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程と、
を含む。

したがって、本発明は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた対象における感染の治療に使用されることを意図した治療を提案し、前記使用は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程と、
を含む。

言い換えれば、本発明は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた対象における感染を治療するための医薬製品の調製における治療の使用に関し、前記使用は以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

上記で説明されたように、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植後に遭遇する感染は、ウイルス感染、細菌感染、寄生生物感染、又は真菌感染である。これらの感染の治療は、よく知られ、長年にわたって臨床現場で使用されてきた（例えば、Ｔｏｍｂｌｙｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１５（１０）：１１４３－１２３８，２００９を参照）。したがって、ウイルス感染は、アシクロビル、ガンシクロビル、シドホビル、エンテカビル、フルダラビン、ラミブジン、テノホビル、リバビリン、又はバラシクロビル等の抗ウイルス剤、又はパリビズマブ（ＲＳＶに対して）等の特定のモノクローナル抗体によって予防されることができる。抗生物質は、通常、細菌感染の治療を可能にする。特に、βラクタム系抗生物質、糖ペプチド、ホスホマイシン、マクロライド、テトラサイクリン、アミノグリコシド、クロラムフェニコール、キノロン、リファンピシン、及びスルファミド等の広域抗生物質が用いられる。通常、コトリモキサゾール、ピリメタミン、及びスルファジアジン等の抗寄生生物剤を投与することで、寄生生物感染症を治療する。最後に、投与されることができる抗真菌剤はよく知られており、特にフルコナゾールとエキノキャンディンを含む。

移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスクの評価方法
本明細書に記載された方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＧｖＨＤの発症リスクを推定できるという利点も提供する。

したがって、本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する方法にも関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）前記方法によって、最初の時点で患者の試料からのＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）工程ａ）における測定から患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

本明細書で理解されるように、「移植片対宿主病」又は「ＧｖＨＤ」は、レシピエントに対する炎症性免疫反応であり、移植片に存在する免疫適格性細胞が関与する。通常、移植後約１００日間で発生する急性ＧｖＨＤと、一般的にこの範囲を超えて発生する慢性ＧｖＨＤの２つの臨床型のＧｖＨＤがある。急性ＧｖＨＤは、皮膚、肝臓、消化管の３つの臓器にのみ同種炎症反応が出現することを指す。対照的に、慢性ＧｖＨＤは、皮膚、口、目、消化管、肝臓、肺、筋肉、関節、筋膜、及び生殖器の８つの臓器の少なくとも１つに影響を及ぼすことがある。急性型であれ慢性型であれ、ＧｖＨＤは通常、問題の臓器の生検の組織学的分析を含む臨床検査によって診断される（Ｓｃｈｏｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ５３：１４０１－１４１５，２０１８）。

この点で、例えば、患者の免疫抑制治療を中断する可能性を予測し、それによって患者の生存を保証するため、本方法は、特に有用であることに留意すべきである。本方法は、免疫抑制治療の継続を必要とする活動性（ａｃｔｉｖｅ）ＧｖＨＤと、もはや全く活動性がなく、治療を中止することができるＧｖＨＤとを容易に識別する可能性を提供する（Ｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｌｌ Ｃａｎｃｅｒ．１０４Ｓ：Ｓ１４５－Ｓ１６８，２０１７を参照）。

より具体的には、急性ＧｖＨＤは移植手術後最初の月（３０日）に発生するが、慢性ＧｖＨＤは移植手術後１００日～４００日に発生する。いずれも移植片に存在するドナーのＴ細胞の活性化によって特徴づけられる。宿主の抗原とドナーのＴ細胞の相互作用は、Ｔ細胞の同種活性化、その増殖、そして宿主の上皮細胞を攻撃するエフェクター細胞への分化をもたらす。

ＨＳＣＴのレシピエント、特に同種造血幹細胞移植のレシピエントは、患者の試料中のＴ細胞が増殖できる場合、ＧｖＨＤを発症する可能性がある。特に、免疫系がまだ回復していない時期に患者のＴ細胞が増殖することは、患者がＧｖＨＤの影響を受けやすいことを強く示す。これは、上記の方法を用いてＴＴＶ量を測定することで容易に評価できる。この検査によって示される徴候は、必要に応じて、患者の臨床検査、特に患者の臓器の１以上から採取された１以上の生検の組織学的分析によって補足されることができる。

患者の試料は、移植手術後４００日未満に採取されることが好ましい。試料は、移植手術後１００日未満に採取されることがより好ましい。或いは、試料は、移植手術後１００日～４００日に採取される。特定の実施形態では、ＧｖＨＤは、急性ＧｖＨＤであり；別の特定の実施形態では、ＧｖＨＤは慢性ＧｖＨＤである。

特定の実施形態では、工程ｂ）からの測定値を、既知のＴ細胞の増殖能を有する基準、即ちＴ細胞の基準増殖能と比較することが有用な場合がある。Ｔ細胞の基準増殖能は、上記のように基準ＴＴＶ量から推定されるＴ細胞の増殖能に相当する。工程ｂ）における比較は、単に、工程ａ）で決定された患者の試料のＴＴＶ量を基準ＴＴＶ量と比較することによって行われることができる。

この基準ＴＴＶ量は、例えば、免疫抑制されていない健康な個体のものである。次に、Ｔ細胞の基準増殖能は、この免疫抑制されていない健康な個体のものである。

或いは、基準ＴＴＶ量は、免疫抑制された個体のものであることができる。この特定の実施形態では、本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する方法にも関する。前記方法は、以下の工程：
ａ）最初の時点で、上記の方法で患者の試料からＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）Ｔ細胞の増殖能と免疫抑制された対象のものと比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較から患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

この場合、免疫抑制された対象と比較して患者のＴ細胞の増殖能が増加していることは、患者の免疫系が再び機能していることを示す。患者のＴ細胞の増殖能が免疫抑制された対象の増殖能よりも大きいことは、患者の試料で測定されたウイルス量が免疫抑制された対象のＴＴＶ量よりも低いことに相当する。言い換えれば、対象は活性Ｔ細胞を有し、これが移植片の細胞を攻撃してＧｖＨＤを誘発することがある。しかしながら、患者のＴ細胞が免疫抑制された対象と実質的に同じ増殖能を有する場合、患者はＧｖＨＤを発症する可能性は低い。

また、Ｔ細胞の基準増殖能として、第２の時点での同一患者のＴ細胞の増殖能を用いることも可能である。したがって、当業者であれば、移植手術後の経時的なＧｖＨＤの発生リスクの展開を監視することができる。したがって、抗ＧｖＨＤ治療は、患者の生活の質を向上させながら、抵抗性の出現リスクを制限する、患者のＧｖＨＤに対する実際の易罹患性の機能として適応されることができる。

この特定の実施形態では、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法で、最初の時点でＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）上記の方法で、工程ａ）における最初の時点よりも遅い第２の時点で、Ｔ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｃ）ａ）及びｂ）で測定されたＴ細胞の増殖能を比較する工程と；
ｄ）工程ｃ）における比較に応じて、患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

したがって、患者におけるＧｖＨＤに対する易罹患性の展開を経時的に追跡することが可能である。工程ａ）と比較して、工程ｂ）のＴ細胞の増殖能が増加していることは、その活性の増加を反映しているので、２つの時点間のＧｖＨＤ発症に対する患者の易罹患性が増加していることを反映する。このリスクは、移植手術後すぐに発生する場合、即ち、活性Ｔ細胞がドナーのもののみであり、それらが宿主の臓器を攻撃するリスクがある場合に、より大きくなる。

したがって、患者のＧｖＨＤに対する易罹患性は、本明細書に記載された方法を使用して決定されることができ、これにより、患者のニーズに特化した治療を練ることが可能になる。

したがって、本発明は、ＨＳＣ、特にＨＳＣＴを受けた対象のためのＧｖＨＤの治療を設計する方法にも関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、ＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）工程ａ）の結果に従って治療を決定する工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

本記載は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた患者におけるＧｖＨＤの治療方法にも関し、前記方法は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、ＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程と、
を含む。

したがって、本発明は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた対象におけるＧｖＨＤの治療に使用されるために意図された治療を提案し、前記使用は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、ＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程
を含む。

言い換えれば、本発明は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受けた対象におけるＧｖＨＤを治療するための医薬製品の調製における治療の使用に関し、前記使用は、以下の工程：
ａ）上記の方法によって、患者の、ＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と；
ｂ）前記対象に好適な治療を施す工程と、
を含む。

Ｔ細胞の活性の変化を経時的に監視することで、特に、前処置を受けた患者における移植後の免疫能の回復を監視することが可能である。この特定の実施形態によれば、上記のＴ細胞の活性を監視する方法は、ＨＳＣＴ、特に同種造血幹細胞移植を受ける前の前処置を受けた患者において採用される。好ましい実施形態では、前処置は骨髄破壊的である。他の好ましい実施形態では、前処置は減弱的である。

ＧｖＨＤの治療はよく知られており、臨床医側の推奨事項の対象となっている（例えば、Ｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．，ＢｕｌｌＣａｎｃｅｒ．１０４Ｓ：Ｓ１４５－Ｓ１６８，２０１７；Ｐｅｎａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｈａｅｍａｔｏｌ．７（２）：ｅ１５７－ｅ１６７；２０２０参照）。ＧｖＨＤの治療は予防的に使用されることができ、シクロスポリン又はタクロリムス等の免疫抑制治療による治療から最も多くなる。

ＧｖＨＤの治療が治療的に使用される場合、合併症の重症度によって異なる。しかしながら、これらの治療は、殆ど一般的に、免疫抑制剤、コルチコイド、特にプレドニゾロン及びメチルプレドニゾロンを含む。コルチコイドが無効の場合は、抗リンパ球血清（ＡＬＳ）も使用される。最後に、ミコフェノール酸モフェチル（セルセプト（登録商標））、モノクローナル抗体（抗ＴＮＦα又はＩＬ２抗受容体）等、他の第二選択薬物を使用することができる。

本記載は、対象のＴ細胞の増殖能を決定するために、対象におけるＴＴＶ量の変動の測定の使用にも関する。

量の変動は、最初の時点で採取された試料で測定されたＴＴＶ量と、第１の時点よりも後である第２の時点で採取された試料で測定されたＴＴＶ量とを比較することで、決定されることができる。

前述のように、ＴＴＶ量が経時で増加する場合、これはＴ細胞の増殖能の低下を通じて、当該Ｔ細胞の活性の低下を反映する。逆に、ＴＴＶ量が経時で減少することは、Ｔ細胞の増殖能の増加を通じて、当該Ｔ細胞の活性の上昇を反映する。

本記載はまた、以下の実施形態に関する。

実施形態１：対象における、Ｔ細胞の増殖能を決定する方法であって、前記方法は、以下工程：
ａ）前記対象の生体試料からＴＴＶ量を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に応じてＴ細胞の増殖能を決定する工程と、
を含む。

実施形態２：ＴＴＶ量が、ＴＴＶ配列の増幅、シークエンシング、又はハイブリダイゼーションによって、好ましくは増幅によって、より好ましくはリアルタイムＰＣＲによって、測定される、実施形態１に記載の方法。

実施形態３：生体試料が、全血、血漿、又は血清の試料である、実施形態１から２のいずれかに記載の方法。

実施形態４：工程ｂ）における決定が、ａ）で測定されたＴＴＶ量と基準ＴＴＶ量とを比較することを含む、実施形態１から３のいずれかに記載の方法。

実施形態５：患者が移植を受けた、実施形態１から４のいずれかに記載の方法。

実施形態６：患者が造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、好ましくは同種造血幹細胞移植を受けた、実施形態５に記載の方法。

実施形態７：患者が、移植手術前に、前処置、好ましくは骨髄破壊的又は減弱的前処置を受けた、実施形態５から６のいずれかに記載の方法。

実施形態８：同種造血幹細胞移植を受けた患者において、Ｔ細胞の活性を監視する方法であって、前記方法が、
ａ）実施形態１から６のいずれかにおいて、最初の時点で、前記患者におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、前記患者のＴ細胞の活性における変化を決定する工程と、
を含む。

実施例９：同種造血幹細胞移植を受けた患者において、微生物感染に対する易罹患を決定する方法であって、前記方法が、
ａ）実施形態１から６のいずれかにおいて、最初の時点で、前記患者におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、患者の、微生物感染に対する易罹患性を決定する工程と、
を含むこと。

実施形態１０：前記微生物感染がウイルス、細菌、原虫、又は真菌感染である、実施形態９に記載の方法。

実施形態１１：同種造血幹細胞移植を受けた患者において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対する易罹患性を決定する方法であって、前記方法が、
ａ）実施形態１から６のいずれかにおいて、最初の時点で、前記患者におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、患者の、ＧｖＨＤに対する易罹患性を決定する工程と、
を含む。

実施形態１２：前記Ｔ細胞の基準増殖能が、健康な個体のＴ細胞の増殖能又は免疫抑制された個体のＴ細胞の増殖能である、実施形態８から１１のいずれかに記載の方法。

実施形態１３：前記Ｔ細胞の基準増殖能が、第２の時点で、前記患者で測定されたＴ細胞の増殖能である、実施形態８から１１のいずれかに記載の方法。

本発明は、以下に示す実施例によってより正確に記載される。

ＴＴＶ分離株のゲノムの構造の表現。 プロトタイプＴＴＶ（ＴＴＶ－１ａ分離株）のゲノムの組織体。矢印は主要なＯＲＦ（５０アミノ酸超の長さを有する）を表す。ＧＣリッチ領域と領域Ｎ２２（ＴＴＶが元々単離された）を示す。非翻訳領域ＵＴＲは、ＯＲＦ４の３’末端からＯＲＦ２の５’末端までの領域に相当する。Ｆｒｏｍ Ｂｉａｇｉｎｉ，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３１：２１－３３，２００９より。 同種造血幹細胞移植のレシピエント及び健康な被験者からの血漿試料からのＴＴＶウイルス量。 ４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエント（黒）及び５４人の健康な被験者（白）のＴＴＶウイルス量を定量化した。ＤＮＡ抽出後、ＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）キット（診断のためではなく、調査のためのみに使用可能、Ｒｅｆ＃６９－０３０，ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ．Ｍａｒｃｙ－ｌ’Ｅｔｏｉｌｅ、フランス）を用いて、ＴＴＶウイルス量を定量化した。検出された最小ウイルス量は、０．４６Ｌｏｇコピー／ｍＬ（ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬ）であった。ｌｏｇコピー／ｍＬは、２つの集団間のＴＴＶのウイルス量の発現を記述するために使用される。分散はＦ検定を使用して比較された（＃＃ｐ＜０．０１）。平均ＴＴＶウイルス量（黒い線）は、対応のないｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ ｔ－ｔｅｓｔ）とウェルチ補正を使用して比較された（^＊＊＊ｐ＜０．００１）。 略号：ＤＮＡ デオキシリボ核酸；Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＴＴＶ トルクテノウイルス ４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエント（黒）と２０人の健康な被験者（白）からのＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に定量化し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８キットを用いたフローサイトメトリーで測定した。Ｆ検定を用いて、両集団の分散を比較した（＃＃ｐ＜０．０１）。平均値（黒い線）の比較は、ウェルチ補正を用いた対応のないｔ検定を用いて行った（^＊＊＊ｐ＜０．００１）。略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＰＨＡ フィトヘマグルチニン ＴＴＶウイルス量と、Ｔ細胞数及びＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能との相関関係 幾つかのＴ細胞サブタイプの数に対して、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの、血漿のＴＴＶウイルス量の全体の相関関係（Ａ）。評価された全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、黒い点と黒い線で表される。 （Ｂ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能、（Ｃ）絶対的リンパ球数、及び（Ｄ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数の関数として、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの血漿のＬｏｇコピー／ｍＬで表される、ＴＴＶウイルス量の詳細な相関関係。患者は、ドットで表される。一番極端な（ｅｘｔｒｅｍｅ）患者：「Ａ」（正方形）及び「Ｂ」（三角形）、並びに線形回帰（黒い線）を示す。 Ｔ細胞膜マーカーの広範なパネルを使用して、免疫学研究室でフローサイトメトリーによってリンパ球の数を測定した。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８キットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（ｘ軸）と、リンパ球の数又はＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能（ｙ軸）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＮＫ ナチュラルキラー；ＰＨＡ フィトヘマグルチニン；ＴＴＶ トルクテノウイルス Ｔ細胞の免疫表現型検査及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿から得られた血漿ＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の全体的な相関関係（Ａ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｂ）。絶対的リンパ球数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｃ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｄ）。Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルを用いて、フローサイトメトリーによってサブタイプ及び絶対的リンパ球数を測定した。ＣＤ３^＋の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８フローキットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（横座標）とＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能又は細胞数（縦座標）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。（Ａ）黒の点線で表される－０．５～０．５の値は、相関関係信頼区間の範囲に対応する。全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、点と黒い線で表される（Ｂ、Ｃ、及びＤ）。患者は黒の点、一番極端な患者は、正方形と三角形で表される。線形回帰は黒い線で表される。 ＴＴＶウイルス量と、Ｔ細胞数及びＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能との相関関係 幾つかのＴ細胞サブタイプの数に対して、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの、血漿のＴＴＶウイルス量の全体の相関関係（Ａ）。評価された全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、黒い点と黒い線で表される。 （Ｂ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能、（Ｃ）絶対的リンパ球数、及び（Ｄ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数の関数として、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの血漿のＬｏｇコピー／ｍＬで表される、ＴＴＶウイルス量の詳細な相関関係。患者は、ドットで表される。一番極端な（ｅｘｔｒｅｍｅ）患者：「Ａ」（正方形）及び「Ｂ」（三角形）、並びに線形回帰（黒い線）を示す。 Ｔ細胞膜マーカーの広範なパネルを使用して、免疫学研究室でフローサイトメトリーによってリンパ球の数を測定した。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８キットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（ｘ軸）と、リンパ球の数又はＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能（ｙ軸）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＮＫ ナチュラルキラー；ＰＨＡ フィトヘマグルチニン；ＴＴＶ トルクテノウイルス Ｔ細胞の免疫表現型検査及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿から得られた血漿ＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の全体的な相関関係（Ａ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｂ）。絶対的リンパ球数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｃ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｄ）。Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルを用いて、フローサイトメトリーによってサブタイプ及び絶対的リンパ球数を測定した。ＣＤ３^＋の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８フローキットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（横座標）とＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能又は細胞数（縦座標）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。（Ａ）黒の点線で表される－０．５～０．５の値は、相関関係信頼区間の範囲に対応する。全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、点と黒い線で表される（Ｂ、Ｃ、及びＤ）。患者は黒の点、一番極端な患者は、正方形と三角形で表される。線形回帰は黒い線で表される。 ＴＴＶウイルス量と、Ｔ細胞数及びＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能との相関関係 幾つかのＴ細胞サブタイプの数に対して、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの、血漿のＴＴＶウイルス量の全体の相関関係（Ａ）。評価された全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、黒い点と黒い線で表される。 （Ｂ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能、（Ｃ）絶対的リンパ球数、及び（Ｄ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数の関数として、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの血漿のＬｏｇコピー／ｍＬで表される、ＴＴＶウイルス量の詳細な相関関係。患者は、ドットで表される。一番極端な（ｅｘｔｒｅｍｅ）患者：「Ａ」（正方形）及び「Ｂ」（三角形）、並びに線形回帰（黒い線）を示す。 Ｔ細胞膜マーカーの広範なパネルを使用して、免疫学研究室でフローサイトメトリーによってリンパ球の数を測定した。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８キットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（ｘ軸）と、リンパ球の数又はＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能（ｙ軸）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＮＫ ナチュラルキラー；ＰＨＡ フィトヘマグルチニン；ＴＴＶ トルクテノウイルス Ｔ細胞の免疫表現型検査及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿から得られた血漿ＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の全体的な相関関係（Ａ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｂ）。絶対的リンパ球数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｃ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｄ）。Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルを用いて、フローサイトメトリーによってサブタイプ及び絶対的リンパ球数を測定した。ＣＤ３^＋の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８フローキットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（横座標）とＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能又は細胞数（縦座標）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。（Ａ）黒の点線で表される－０．５～０．５の値は、相関関係信頼区間の範囲に対応する。全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、点と黒い線で表される（Ｂ、Ｃ、及びＤ）。患者は黒の点、一番極端な患者は、正方形と三角形で表される。線形回帰は黒い線で表される。 ＴＴＶウイルス量と、Ｔ細胞数及びＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能との相関関係 幾つかのＴ細胞サブタイプの数に対して、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの、血漿のＴＴＶウイルス量の全体の相関関係（Ａ）。評価された全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、黒い点と黒い線で表される。 （Ｂ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能、（Ｃ）絶対的リンパ球数、及び（Ｄ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数の関数として、４１人の同種造血幹細胞移植のレシピエントからの血漿のＬｏｇコピー／ｍＬで表される、ＴＴＶウイルス量の詳細な相関関係。患者は、ドットで表される。一番極端な（ｅｘｔｒｅｍｅ）患者：「Ａ」（正方形）及び「Ｂ」（三角形）、並びに線形回帰（黒い線）を示す。 Ｔ細胞膜マーカーの広範なパネルを使用して、免疫学研究室でフローサイトメトリーによってリンパ球の数を測定した。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８キットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（ｘ軸）と、リンパ球の数又はＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能（ｙ軸）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＮＫ ナチュラルキラー；ＰＨＡ フィトヘマグルチニン；ＴＴＶ トルクテノウイルス Ｔ細胞の免疫表現型検査及びＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対して、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿から得られた血漿ＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の全体的な相関関係（Ａ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｂ）。絶対的リンパ球数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｃ）。ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数に対する、４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿のＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）の詳細な相関関係（Ｄ）。Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルを用いて、フローサイトメトリーによってサブタイプ及び絶対的リンパ球数を測定した。ＣＤ３^＋の増殖能を、マイトジェン（ＰＨＡ）を用いた３日間の刺激後に決定し、Ｃｌｉｃｋ－Ｉｔ（登録商標）ＥｄＵ ＡＦ４８８フローキットを用いたフローサイトメトリーで測定した。ＴＴＶウイルス量（横座標）とＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能又は細胞数（縦座標）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。（Ａ）黒の点線で表される－０．５～０．５の値は、相関関係信頼区間の範囲に対応する。全てのパラメータにおけるピアソンのロー（ρ）及び９５％信頼区間（ＣＩ９５）は、それぞれ、点と黒い線で表される（Ｂ、Ｃ、及びＤ）。患者は黒の点、一番極端な患者は、正方形と三角形で表される。線形回帰は黒い線で表される。 ＴＴＶウイルス量の一番極端な値を有する患者の経時的な記述的モニタリング 患者「Ａ」及び患者「Ｂ」の、ＨＳＣＴから組み入れ（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）までの間の、主な臨床ステージ（黒）及び感染エピソード（灰色）の経時的な記載。患者「Ａ」は、ＴＴＶウイルス量が最も低く、逆に患者「Ｂ」は、ＴＴＶウイルス量が最も高かった。略語：ＣＭＶ サイトメガロウイルス；ＥＢＶ エプスタイン・バール・ウイルス；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＧｖＨＤ 移植片対宿主病；Ｍ 月 ＴＴＶウイルス量とＨＳＣＴからの時間との相関関係。 詳細の相関関係 ４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントの血漿の血漿ＴＴＶウイルス量（Ｌｏｇ ｃｐ／ｍＬで表される）と、ＨＳＣＴから組み入れまでの間の時間経過（月で表される）との詳細の相関関係。ＴＴＶウイルス量（横座標）と遅延（ｄｅｌａｙ）（縦座標）との相関関係は、ピアソン相関係数（各図に示される）を用いて決定した。患者は黒の点で表され、線形回帰は黒い線で表される。略語：ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＴＴＶ トルクテノウイルス

実施例１
本研究では、同種造血幹細胞移植（ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ）レシピエントの移植手術後の免疫回復期におけるＴＴＶウイルス量と免疫細胞数との相関関係、及び免疫細胞の機能を評価・比較した。

材料及び方法
研究集団
同種造血幹細胞移植を受けた患者から得られた、ヘパリン化された全血の試料及びＥＤＴＡで処理された血漿試料は、前述の前向きコホートＶａｃｃｈｅｍｉｎｆから得られた（１３）。このコホートは地域の審査委員会（Ｃｏｍｉｔｅ ｄｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｄｅｓ ｐｅｒｓｏｎｎｅｓ Ｓｕｄ－Ｅｓｔ Ｖ， Ｇｒｅｎｏｂｌｅ， Ｆｒａｎｃｅ， ｎｕｍｂｅｒ ６９ＨＣＬ１７＿０７６９）によって承認され、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌ．ｇｏｖ（ＮＣＴ０３６５９７７３）に登録される。ＣＨＵ Ｌｙｏｎの血液学科で同種造血幹細胞移植を受けた治療継続成人患者を、患者の書面による同意が得られた時点で将来を見越して組み入れた。

入院時には、電子症例報告書（ｅＣＲＦ）を用いて、人口統計学的特徴（年齢、性別）及び臨床データ（移植の種類、免疫表現型検査、免疫抑制治療、ＧｖＨＤ状態、及びＧｖＨＤ治療）等の収集データを記録した。

並行して、８０人の健康な個体（ＨＶ）は、Ｌｙｏｎ血液バンク（Ｅｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ Ｆｒａｎｃａｉｓ ｄｕ Ｓａｎｇ，ＥＦＳ）のドナーから集められた。献血のためのＥＦＳの標準化された手順及び公衆衛生法（ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｃｏｄｅ）の第Ｒ．１２４３－４９条等により、研究目的での献血血液の使用に反対しない書面が健康な人から得られた。供血者の年齢と性別は匿名で研究室に送られた。これらの試料の取り扱いと保管に関する規制当局の許可は、地域倫理委員会（Ｃｏｍｉｔｅ ｄｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｄｅｓ ｐｅｒｓｏｎｎｅｓ Ｓｕｄ－Ｅｓｔ ＩＩ，Ｂｒｏｎ、フランス）及びフランス研究省（Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｉｇｈｅｒ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ， Ｐａｒｉｓ、フランス）から得られた。

ＴＴＶウイルス量の定量化
製造業者の使用説明書に従って、ｅａｓｙＭａｇ抽出器（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）を用いて、２００μｌの血漿試料から５０μＬのウイルスＤＮＡの溶出体積を抽出した。次にＴＴＶの存在及びＴＴＶ量を、前述のＴＴＶ Ｒ－ＧＥＮＥ（登録商標）キット（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ，Ｍａｒｃｙ－ｌ’Ｅｔｏｉｌｅ、フランス）を用いて決定した（１４、１５）。

Ｔ細胞増殖試験
Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心法（Ｕ－０４； Ｅｕｒｏｂｉｏ，Ｌｅｓ Ｕｌｉｓ、フランス）によりヘパリン化された新鮮血液試料（ヘパリン化された全血）から末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離した。次に、１０^５細胞／ウェルを、３７℃、５％ＣＯ_２の９６ウェル細胞培養プレート（ＲＰＭＩ １６４０；Ｅｕｒｏｂｉｏ）内の補充培養培地で２４時間インキュベートした。次に、ＰＢＭＣをマイトジェン、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）で４μｇ／ｍＬ（Ｒ３０８５２８０１；Ｒｅｍｅｌ，Ｏｘｏｉｄ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）で２回刺激し、７２時間インキュベートした。ＰＢＭＣの培養上清を回収し、製造業者の使用説明書に従ってＥＬＬＡナノ流体システム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， ＣＡ， ＵＳＡ）上でＳｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘカートリッジを使用してＩＦＮγ分泌検査（ＩＧＲＡ、「ＩＦＮγ－遊離検査」）を行った。公表されたプロトコル（１６）に従って、５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ）の組込みを測定する、Ｃｌｉｃｋ－ｉＴ（商標）Ｐｌｕｓ ＥｄＵ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８フローサイトメトリーアッセイキット（Ｃ１０４２０；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて、ペレット内でＴ細胞の増殖を分析した。簡単に言えば、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）で実施されたフローサイトメトリー分析によって、（ＣＤ３^＋細胞の中で）ＥｄＵ＋増殖細胞の割合が判明した（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ）。各実験について、少なくとも２．５×１０^３ＣＤ３^＋細胞を測定した。データは、ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａ（登録商標）ソフトウェア（バージョン８．０．３，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。

移植手術後のＴ細胞の免疫表現型検査
白血球、並びにＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞をＥｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で計数した。更に、全血において、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルをフローサイトメトリーで測定した。前に記載されるように（１４）、この方法で計数されたのは以下である：ナイーブＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ ＣＣＲ７^＋）、セントラルメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ^－ ＣＣＲ７^＋）、エフェクターメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５^－ ＣＣＲ７^＋）、及び分化されたメモリーＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ^＋ ＣＣＲ７^－）。結果は、細胞／μＬで表される。

統計分析
免疫表現型検査データ、ＴＴＶウイルス量、及びＴ細胞の増殖能は、平均値（範囲）で表される。Ｌｏｇ形式に変換したＴＴＶ量を分析に用いた（ｌｏｇコピー／ｍＬ）。健康なレシピエントと同種造血幹細胞移植レシピエントとの差は、ウェルチ補正を用いた対応のないパラメトリックｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｔ ｔｅｓｔ）を用いて計算された。相関関係は、パラメトリックピアソンロー（ρ）相関係数を用いて評価した。回帰分析は、従属変数（ＴＴＶウイルス量）と独立変数（増殖細胞の割合、リンパ球の絶対数、ＣＤ３^＋Ｔ細胞の数）との関連性を評価するために実施された。分散分析は、Ｆ検定を用いて実施された。マン・ホイットニー検定を用いて、様々な臨床的特徴に対する血漿ＴＴＶ量の差を決定した。ｐ＜０．０５の値を有意とみなした。統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェア（バージョン５；ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びＲ（バージョン３．５．１）を用いて行った。

結果
コホートの特徴
２０１８年５月～２０２０年４月に、健康な被験者（ｎ＝８０）と同種造血幹細胞移植レシピエント（ｎ＝４１）を登録した。健康な個体と同種造血幹細胞移植のレシピエントでは、年齢（中央値［ＩＲ］：それぞれ５６［４０～６４］対４６［３１～５３］年）と性別（性比はそれぞれ１．６対１．４）で、有意差はなかった。登録時の移植手術後の中央値期間［ＩＲ］は、同種造血幹細胞移植のレシピエントで６［５～８］か月であった。組入れ時、同種造血幹細胞移植のレシピエントの７８％が免疫抑制剤薬物（コルチコイド、カルシニューリン阻害剤、その他．．．）を受け、１７％が慢性移植片対宿主病を有していた（表１）。

健康な被験者及び同種造血幹細胞移植からの血漿試料におけるＴＴＶウイルス量
８０人の健康なレシピエントと４１人の同種造血幹細胞移植レシピエントから得られた血漿試料中のＴＴＶウイルス量を研究した。ＴＴＶウイルス量は、リアルタイムＰＣＲによって、健康な試料の６８％（５４／８０）において検出された。同種造血幹細胞移植レシピエントに関しては、本研究に含まれる全ての患者は、ＴＴＶウイルス量の検出可能な値を有していた。平均値（範囲）ＴＴＶウイルス量は、健康な対象と比較して、同種造血幹細胞移植レシピエントにおいて、有意に高かった（それぞれ、３．９（０．７～７．７）対２．１（０．５～４．３）ｌｏｇコピー／ｍＬ、ｐ＜０．０００１）［図２］。

ＴＴＶ ウイルス量とＴ細胞の数との相関関係及び後者の増殖能
移植手術後６か月を含めた同種造血幹細胞移植レシピエントを考慮すると、リンパ球サブタイプの集団の殆どは正常値（ＮＶ）の範囲内であった。しかしながら、Ｔ細胞ＣＤ４^＋、ナイーブＣＤ４^＋、セントラルメモリーＣＤ４^＋、最終分化におけるエフェクターメモリーＣＤ４^＋、ナイーブＣＤ８^＋、及びセントラルメモリーＣＤ８^＋の量、並びにＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋比は、正常値以下であった（［表１］参照）。

［表１］ 同種造血幹細胞移植レシピエントのベースライン特徴
全ての研究室データは、レシピエントの登録時に記録された。^＊骨髄系及びリンパ系腫瘍の世界保健機構分類の２０１６年改訂版による。＃免疫抑制治療は、抗胸腺細胞グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、シクロホスファミド、副腎皮質ステロイド≧１ｍｇ／ｋｇ＞２１日間を含んだ。Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の免疫学研究室で、Ｔ細胞の膜マーカーの幅広いパネルを用いて、フローサイトメトリーによってリンパ球の総数及びサブタイプを測定した。示された正常値は、Ｅｄｏｕａｒｄ Ｈｅｒｒｉｏｔ ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｈｏｓｐｉｃｅｓ Ｃｉｖｉｌｓ ｄｅ Ｌｙｏｎ）の研究室から提供される。

略語：Ａｌｌｏ 同種間；ＤＬＩ ドナーリンパ球注入；ＧｖＨＤ 移植片対宿主病；ＨＬＡ ヒト白血球抗原；ＨＳＣＴ 造血幹細胞移植；ＩＲ 四分位範囲；ＴＢＩ 全身照射；ＩＳ 免疫抑制剤；ＩＶＩＧ 静脈内ポリクローナル免疫グロブリン；ＭＡＣ 骨髄破壊的前処置；ＮＫ ナチュラルキラー；ＥＣＰ 体外循環式光化学療法；ＣＲ 完全寛解；ＲＩＣ 強度軽減移植前治療；ＮＶ 正常値

健康な対象と比較して、同種造血幹細胞移植レシピエントにおけるＣＤ３^＋細胞中の有意に低い増殖能を除いては（それぞれ、４０．５％対２１．３％、ｐ＜０．０００１）、より大きくより有意な不均一な分布も認められ（同種造血幹細胞移植及び健康な対象において、それぞれ［２．９％～４２．３％］及び［２９．７％～５５．３％］；Ｆ検定ｐ＝０．００４０）、同種造血幹細胞移植レシピエントの免疫の回復において、個人間の可変性が根底にある（図表では示されない）。

ピアソン相関検定（ロー（ρ）［ＣＩ９５］）を用いて、最も高い相関関係は、ＴＴＶウイルス量とＴ細胞の増殖能との間で観察された（（３Ａ）及び（３Ｂ））。なお、リンパ球の総数又は特定の細胞のサブセット（例えば、ＣＤ３^＋）との間には有意な相関関係は観察されなかったことに注意すべきである（それぞれ、ピアソンのロー（ρ）ρ＝－０．３９［ＣＩ９５％－０．６２～－０．０９］）対（ρ＝０．１３［－０．１９～０．４２］）及び（ρ＝０．０９［－０．２３～０．３８］））（図３Ｃ）及び（図３Ｄ）。

一番極端な値のＴＴＶ量を有する患者の臨床的特徴
ＰＨＡ刺激に応答したＴ細胞の増殖能とＴＴＶ量との相関関係を個人レベルで分析したところ、最も低いウイルス量（０．６５ｌｏｇコピー／ｍＬ）を有する患者（Ａ、正方形で表される）は、増殖細胞の高い割合（４１．６％）を有し、反対に、最も高いウイルス量（７．７２ｌｏｇコピー／ｍＬ）を有する患者（Ｂ、三角形で表される）は、増殖細胞の低い割合（２．９％）を有した（図３Ｂ）。この二人の患者（男性及び女性）は同じ年齢層（５０＜年齢＜６０歳）であり、移植手術前には完全寛解状態にあった。患者（Ａ）は、ゲノ同一性（ｇｅｎｏ－ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）ドナーから幹細胞の移植を受けていたが、患者（Ｂ）は、フェノ同一性（ｐｈｅｎｏ－ｉｄｅｎｔｉｃａｌ）ドナーから末梢血細胞の移植を受けていた。患者（Ａ）は、移植手術から登録までの間に、感染エピソード、ＧｖＨＤ、免疫抑制治療等の特定の臨床イベントがなく、移植後の展開は、単純であった（図４）。逆に、患者（Ｂ）は、面倒な免疫抑制治療を受けており、急性のＧｖＨＤ及び複数の重篤な細菌／ウイルス感染症を患っていた（図４）。

議論
まず、単一中心性前向きコホートＶａｃｃＨｅｍＩｎｆ（１３）の８０人の健康な免疫適格対象及び４１人の免疫抑制された同種造血幹細胞移植移植者の、二つの異なる集団について、ＴＴＶの有病率及び血漿中のウイルス量を比較した。

最近の研究（１８）によると、健康な対象からの試料において、６８％のＴＴＶの有病率が観察された。これに対し、免疫抑制された患者の試料の１００％でＴＴＶが検出された。また、同種造血幹細胞移植のレシピエントでは、ＴＴＶの血漿ウイルス量がＨＶと比較して有意に高いことが確認された（１０、１９）。そのため、同種造血幹細胞移植の６ヶ月後には、十分な数のＴ細胞にもかかわらず、ＴＴＶのウイルス量を調節できない患者もいる。移植後の遅延［５～８ヶ月］と血漿ＴＴＶウイルス量との間に相関関係は認められなかった。本研究の主な結果の一つは、ＴＴＶの血漿ウイルス量が、健康な対象と比較して同種造血幹細胞移植レシピエント（移植手術後６ヶ月）で有意に高かったことであり、Ｔｙａｇｉら（２０１３年）（移植手術後の遅延は記載されず）及びＭａｓｏｕｒｉｄｉら（２０１６年）（移植手術後２～３か月）の観察結果を確認した（１０、１８）。この結果は、ウイルス感染に対する免疫応答の主要な細胞であるＴ細胞（１９、２０）が、ＴＴＶの主要な複製部位（２１、２２）の一つであるという事実によって説明されることができるかもしれない。移植後６ヶ月の同種造血幹細胞移植レシピエントでは、免疫系が回復しつつあるため、Ｔ細胞の増殖が進行中であり、これによってウイルスが複製できる大量の細胞を供給する。また、ＴＴＶ量は移植手術後約３～６ヶ月で最大となり、その後いわゆる正常値（２３、２４年）に戻ると記載される（２３、２４）。したがって、ＴＴＶはまだナイーブで機能していないＴ細胞の増殖を利用して複製を行い、最終的に免疫系と機能細胞によって制御されると仮定されることができ、ＴＴＶウイルス量と免疫機能との間の重要な関連性を示唆する。本研究は、血漿ＴＴＶ量と定量的マーカーである免疫細胞数との相関関係の評価を含み、幾つかの研究で既に評価されているが、矛盾した結果が出ており（１７、２３～２５）、また免疫回復の定性的マーカーである非特異的刺激後のＴ細胞の増殖の測定も含む。同種造血幹細胞移植移植手術から登録までの期間の影響は認められなかった（図５）。免疫抑制された集団の個人間の可変性を強調する、不均一なＴ細胞の増殖値の分布の不均一性にもかかわらず、ＴＴＶウイルス量とＴ細胞の増殖との間には、免疫細胞数よりも、より大きな相関関係が認められた（図３Ａ）。より正確には、興味深いことに逆相関であり、機能的な免疫細胞の数が多いほど、ＴＴＶ量が低いことを示唆する。この結果は、固体臓器の移植手術において、Ｄｅ Ｖｌａｍｉｎｃｋらによって２０１３年に記載されたもの（１１）と一貫し、そこでは免疫抑制のレベルの低下がＴＴＶウイルス量の低下と相関していた。これは、移植手術後のＴＴＶウイルス量の動態に関する多くの記載にも対応し（２３、２６）、そこでは、最初に免疫抑制治療に関連した減少の段階が観察され、その後、ＴＴＶの複製のための免疫細胞能力の拡大に関連した成長段階、その後安定化の段階を経て、最終的にベースラインレベルまでウイルス量が減少し、このことは機能的免疫回復を反映する。同種造血幹細胞移植の６ヶ月後には、ＴＴＶの有意な複製を可能にするのに十分な数の免疫細胞が拡大しているが、それらはＴＴＶウイルス量を調節するのに十分に機能的ではないだろうと考えられる。したがって、免疫抑制された患者は、十分な数のＴ細胞にもかかわらず、ＴＴＶウイルス量を調節することができないであろう。これは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）又はエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）等、同種造血幹細胞移植のレシピエントに古典的に記載されている他のウイルスにも当てはまる（２４、２７、２８）。我々のコホートでは、それぞれ２４％と３７％の患者がこれら２つのウイルスに感染していた。これは、ＴＴＶウイルス量の一番極端な値を有する患者に対して行われた観察とも一致する。

ＴＴＶウイルス量は、免疫老化の潜在的マーカーとして記述されるリンパ球のサブタイプであるＣＤ８^＋／ＣＤ５７^＋Ｔ細胞の数とも関連付けられており、後天性免疫不全状態、移植又は持続的なウイルス感染等の特定の病理の過程で増加する。したがって、これら全ての結果は、ＴＴＶと免疫系の機能との間、特にウイルス量を調整する能力に関して、潜在的に重要な関連性があることを示唆する。

我々の研究では、ＴＴＶ量に対する様々な臨床的特徴（例えば、状態、基礎疾患、免疫抑制治療、又はＧｖＨＤ）の影響は観察されなかった（表２）。

表２ 同種造血幹細胞移植の４１人のレシピエントの血漿ＴＴＶ量と臨床的特徴との比較
全てのデータは、レシピエントの登録時に記録された。^＊骨髄系及びリンパ系腫瘍の世界保健機構分類の２０１６年改訂版による。＃免疫抑制治療は、抗胸腺細胞グロブリン、シクロスポリン、タクロリムス、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、シクロホスファミド、副腎皮質ステロイド≧１ｍｇ／ｋｇ＞２１日間を含んだ。マン・ホイットニー検定（^＊＊＊、ｐ＜０．００１）を用いて、中央値血漿ＴＴＶ量［ＩＲ］を臨床データと比較した。

略語：ＧｖＨＤ 移植片対宿主病；ＩＲ 四分位範囲；ＩＶＩＧ 静脈内ポリクローナル免疫グロブリン；ＭＡＣ 骨髄破壊的前処置；ＲＩＣ 強度軽減移植前治療；ＴＢＩ 全身照射；ＴＴＶ トルクテノウイルス

要約すると、本研究は、ＴＴＶウイルス量とＴ細胞機能との間に相関関係が存在することを立証し、この相関関係が細胞数に依存しないことを示す。

実施例２
実施例１から、同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴとも）を受けた複数の患者間の、Ｔ細胞の数、前記Ｔ細胞の増殖能、及び血漿ＴＴＶウイルス量間の比較

ＴＴＶウイルス量の定量化、増殖試験、及びＣＤ３＋Ｔ細胞の計測を実施例１と同じプロトコルに従って行った。結果を以下表３に示す。
表３ 血漿ＴＴＶウイルス量、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数、及び前記リンパ球の増殖能の比較

ＴＴＶウイルス量とＣＤ３＋Ｔ細胞の数とを比較すると、患者の同程度のウイルス量ではＣＤ３＋Ｔ細胞の数が有意に異なることがあり（患者１対患者２）、逆に有意に異なるウイルス量では（患者３対患者４）、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数が同程度であることができることが分かる。したがって、これは、ＴＴＶウイルス量は、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数と相関しないことを確認する。

しかしながら、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数と増殖能を比較すると、ＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖能が同程度の患者では、当該リンパ球の数が有意に異なることがあることが分かる（患者１対患者２）。逆に、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数が同程度の場合は、増殖能が有意に異なることがある（患者３対患者４）。

結果として、このことは、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数がその増殖能と排他的に相関しているわけではなく、ＴＴＶウイルス量とは対照的に、ＣＤ３＋Ｔ細胞の数が多いことは、当該リンパ球の刺激後の増殖能、ひいては免疫系の機能の示唆ではないことを確認する。

実際、ＴＴＶウイルス量を見ると、ＣＤ３^＋Ｔ細胞の増殖能と逆相関していることが分かる（患者３対患者４）。

参照
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２１． Ｆｏｃｏｓｉ Ｄ， Ｍａｃｅｒａ Ｌ， Ｂｏｇｇｉ Ｕ， Ｎｅｌｌｉ ＬＣ， Ｍａｇｇｉ Ｆ． Ｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｏｒｑｕｅ ｔｅｎｏ ｖｉｒｕｓ ｖｉｒａｅｍｉａ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｏｎｆｉｒｍ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ－ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ． １ ｊａｎｖ ２０１５；９６（Ｐｔ＿１）：１１５－７．
２２． Ｍａｇｇｉ Ｆ， Ｆｏｒｎａｉ Ｃ， Ｚａｃｃａｒｏ Ｌ， Ｍｏｒｒｉｃａ Ａ， Ｖａｔｔｅｒｏｎｉ ＭＬ， Ｉｓｏｌａ Ｐ， ｅｔ ａｌ． ＴＴ ｖｉｒｕｓ （ＴＴＶ） ｌｏａｄｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ＴＴＶ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ． ｊｕｉｎ ２００１；６４（２）：１９０－４．
２３． Ａｌｂｅｒｔ Ｅ， Ｓｏｌａｎｏ Ｃ， Ｇｉｍｅｎｅｚ Ｅ， Ｆｏｃｏｓｉ Ｄ， Ｐｅｒｅｚ Ａ， Ｍａｃｅｒａ Ｌ， ｅｔ ａｌ． Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ａｌｐｈａｔｏｒｑｕｅｖｉｒｕｓ ｐｌａｓｍａ ＤＮＡｅｍｉａ ａｔ ｌａｔｅ ｔｉｍｅｓ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ （Ｂｅｒｌ）． ａｖｒ ２０１９；２０８（２）：２５３－８．
２４． Ｗｏｈｌｆａｒｔｈ Ｐ， Ｌｅｉｎｅｒ Ｍ， Ｓｃｈｏｅｒｇｅｎｈｏｆｅｒ Ｃ， Ｈｏｐｆｉｎｇｅｒ Ｇ， Ｇｏｅｒｚｅｒ Ｉ， Ｐｕｃｈｈａｍｍｅｒ－Ｓｔｏｅｃｋｌ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ｔｏｒｑｕｅｔｅｎｏｖｉｒｕｓ Ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｍａｒｋｅｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ： Ａ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ Ｓｔｕｄｙ． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ｊａｎｖ ２０１８；２４（１）：１９４－９．
２５． Ｓｃｈｍｉｔｚ Ｊ， Ｋｏｂｂｅ Ｇ， Ｋｏｎｄａｋｃｉ Ｍ， Ｓｃｈｕｌｅｒ Ｅ， Ｍａｇｏｒｓｃｈ Ｍ， Ａｄａｍｓ Ｏ． Ｔｈｅ Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｔｏｒｑｕｅ Ｔｅｎｏ Ｖｉｒｕｓ （ＴＴＶ） ａｓ ａ Ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （ＨＳＣＴ）． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ｎｏｖ ２０１９；Ｓ１０８３８７９１１９３０７４２６．
２６． Ｇｉｌｌｅｓ Ｒ， Ｈｅｒｌｉｎｇ Ｍ， Ｈｏｌｔｉｃｋ Ｕ， Ｈｅｇｅｒ Ｅ， Ａｗｅｒｋｉｅｗ Ｓ， Ｆｉｓｈ Ｉ， ｅｔ ａｌ． Ｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ Ｔｏｒｑｕｅ Ｔｅｎｏ ｖｉｒｕｓ ｖｉｒｅｍｉａ ｃｏｕｌｄ ｐｒｅｄｉｃｔ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ （Ｂｅｒｌ）． ｏｃｔ ２０１７；２０６（５）：３５５－６２．
２７． Ｌｊｕｎｇｍａｎ Ｐ， Ｈａｋｋｉ Ｍ， Ｂｏｅｃｋｈ Ｍ． Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ． Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ． ｆｅｖｒ ２０１１；２５（１）：１５１－６９．
２８． Ｌｉｕ Ｌ， Ｚｈａｎｇ Ｘ， Ｆｅｎｇ Ｓ． Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｏｓｔ－Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｆｔｅｒ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｂｉｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ． ｊｕｉｌｌ ２０１８；２４（７）：１３４１－９．
２９． Ｂｏｓｃｈ Ｍ， Ｋｈａｎ ＦＭ， Ｓｔｏｒｅｋ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ： Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ． ｊｕｉｌｌ ２０１２；１９（４）：３２４－３５．

Claims (15)

1. 対象における、Ｔ細胞の増殖能を決定する方法であって、前記方法は、
   ａ）前記対象の生体試料からＴＴＶ量を測定する工程と；
   ｂ）ａ）で測定されたウイルス量に応じてＴ細胞の増殖能を決定する工程と、
   を含むことを特徴とする方法。
2. ＴＴＶ量が、ＴＴＶ配列の増幅、シークエンシング、又はハイブリダイゼーションによって、好ましくは増幅によって、より好ましくはリアルタイムＰＣＲによって、測定される、請求項１に記載の方法。
3. 前記生体試料が、全血、血漿、又は血清の試料である、請求項１から２のいずれかに記載の方法。
4. 工程ｂ）における決定が、ａ）で測定されたＴＴＶ量と基準ＴＴＶ量とを比較する工程を含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
5. 前記対象が移植を受けた、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
6. 対象が造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、好ましくは同種造血幹細胞移植を受けた、請求項５に記載の方法。
7. 前記対象が、移植手術前に、前処置、好ましくは骨髄破壊的又は減弱的前処置を受けた、請求項５から６のいずれかに記載の方法。
8. 同種造血幹細胞移植を受けた対象において、Ｔ細胞の活性を監視する方法であって、前記方法が、
   ａ）請求項１から６のいずれかに特許請求されるように、最初の時点で、前記対象におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
   ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
   ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、前記対象のＴ細胞の活性における変化を決定する工程と、
   を含むことを特徴とする方法。
9. 移植、好ましくはＨＳＣＴ、より好ましくは同種造血幹細胞移植を受けた対象において、Ｔ細胞の活性を監視する方法であって、前記方法が、
   ａ）最初の時点で患者から採取された生体試料からのＴＴＶウイルス量を決定する工程と；
   ｂ）工程ａ）における前記最初の時点よりも後である第２の時点で前記患者から採取された生体試料から、ＴＴＶウイルス量を決定する工程と；
   ｃ）ａ）及びｂ）で測定されたＴＴＶウイルス量を比較する工程と；
   ｂ）工程ｃ）での比較に応じて、患者のＴＴＶ量の変化を決定する工程と、
   を含むことを特徴とする方法。
10. 同種造血幹細胞移植を受けた対象において、微生物感染に対する易罹患を決定する方法であって、前記方法が、
    ａ）請求項１から６のいずれかに特許請求されるように、最初の時点で、前記対象におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
    ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
    ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、前記対象の微生物感染に対する易罹患性を決定する方法と、
    を含むことを特徴とする方法。
11. 前記微生物感染が、ウイルス、細菌、原虫、又は真菌感染である、請求項１０に記載の方法。
12. 同種造血幹細胞移植を受けた対象において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対する易罹患性を決定する方法であって、前記方法が、
    ａ）請求項１から６のいずれかに特許請求されるように、最初の時点で、前記対象におけるＴ細胞の増殖能を測定する工程と；
    ｂ）ａ）で測定されたＴ細胞の増殖能とＴ細胞の基準増殖能とを比較する工程と；
    ｃ）工程ｂ）における比較に応じて、ＧｖＨＤに対する前記対象の易罹患性を決定する工程と、
    を含むことを特徴とする方法。
13. Ｔ細胞の基準増殖能が、健康な個体のＴ細胞の増殖能又は免疫抑制された個体のＴ細胞の増殖能である、請求項８から１２のいずれかに記載の方法。
14. Ｔ細胞の基準増殖能が、第２の時点で、前記対象で測定されたＴ細胞の増殖能である、請求項８から１２のいずれかに記載の方法。
15. 対象のＴ細胞の増殖能を決定するための、前記対象におけるＴＴＶ量の変化の測定の使用。