JP2023547742A - リステリア・モノサイトゲネスを阻害するヤクチ精油の抽出方法及びヤクチ精油 - Google Patents
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Abstract
Description
ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して篩にかけて、粉末を得ることと、粉末と水とを固液質量比1:10~12で混合して2~3h静置して浸漬して、220~300℃で5~7h水蒸気蒸留することとを含む。
ヤクチの乾燥した成熟果実をそれぞれ粉砕して10、20、30、40、50、60メッシュの篩にかけて、粒子サイズの異なる粉末を得て、粒子サイズの異なる粉末をそれぞれ50g秤量し、10倍の質量のpH6.8の蒸留水を添加し、3h浸漬し、220℃で5h水蒸気蒸留し、試験を3回繰り返した。2020年版の《中国薬典》で規定された精油測定法の「方法I」に従って精油抽出率を測定した。精油抽出率(%)=精油体積(mL)/植物粉末質量(g)×100%。
ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、7、8、9、10、11、12倍の質量のpH6.8の蒸留水をそれぞれ添加し、3h浸漬し、220℃で5h水蒸気蒸留し、試験を3回繰り返した。2020年版の《中国薬典》で規定された精油測定法の「方法I」に従って精油抽出率を測定した。精油抽出率(%)=精油体積(mL)/植物粉末質量(g)×100%。
ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、10倍量のpH6.8の蒸留水でそれぞれ0、1、2、3、4、5h浸漬し、220℃で5h水蒸気蒸留し、試験を3回繰り返した。2020年版の《中国薬典》で規定された精油測定法の「方法I」に従って精油抽出率を測定した。精油抽出率(%)=精油体積(mL)/植物粉末質量(g)×100%。
ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、10倍量のpH6.8の蒸留水で2h浸漬し、220℃でそれぞれ2、3、4、5、6、7、8h水蒸気蒸留し、試験を3回繰り返した。2015年版の《中国薬典》で規定された精油測定法の「方法I」に従って精油抽出率を測定した。精油抽出率(%)=精油体積(mL)/植物粉末質量(g)×100%。
ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、10倍量のpH6.8の蒸留水で2h浸漬し、それぞれ100、140、180、220、260、300℃で5h水蒸気蒸留し、試験を3回繰り返した。2015年版の《中国薬典》で規定された精油測定法の「方法I」に従って精油抽出率を測定した。精油抽出率(%)=精油体積(mL)/植物粉末質量(g)×100%。
6.1 材料、菌種、試薬
材料:精油1)~5):ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、それぞれ10倍量のpH7.0、7.5、8.0、8.5、9.0の蒸留水で2.4h浸漬し、230℃で5.5h水蒸気蒸留して得られたものである。精油6):ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を50g秤量し、10倍量のpH7.0の蒸留水で2.4h浸漬し、180℃で5.5h水蒸気蒸留して得られたものである。精油7)~10):ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して40メッシュの篩にかけて、粉末を得て、粉末を35±5℃で相対湿度65±5%で(厚さ2~3cmで)それぞれ3、5、7、9d静置し、粉末を50g秤量し、10倍量のpH8.5の蒸留水で2.4h浸漬し、180℃で5.5h水蒸気蒸留して得られたものである。
6.2.1 阻止円の測定
濾紙寒天ディスク拡散法を使用して、ピペットを用いて20μLの精油又はコントロールを滅菌環境条件下で滅菌濾紙(d=6mm)に滴下し、濾紙が精油又はコントロールを完全に吸収してから、各細菌溶液(細菌溶液の濃度が107cfu/mlで、塗布量が60μLである)を均一に塗布した培地プレート(TSA、d=6cm)に当該濾紙を貼り付け、マークを付け、各細菌に対して3回繰り返し、陰性コントロールが滅菌水であり、陽性コントロールがレボフロキサシン(濃度15μg/ml)であり、培養条件がインキュベータ内で37℃で24h培養することである。培養した後、阻止円の有無及び直径の大きさを感度の判断基準として観察して記録し、クロス法で阻止円の直径を測定し、その平均値を測定結果とした。結果標準は、阻止円の直径が20mmを超えると、感度が非常に高いとし、直径が15~20mmであると、感度が高いとし、直径が10~15mmであると、感度が中程度であるとし、直径が10mmよりも小さいと、感度が低いとする(蘭仕梅ら、2018)ことである。
MIC試験を微量二倍希釈法で96ウェルプレートで実施し、A1を第1のウェルとして使用して、左から右に順に行い、各プレートの1~12個のウェルに薬液を入れ、プレートごとに3つのブランク、陽性コントロール及び陰性コントロールを作成し、陰性コントロールが滅菌水であり、陽性コントロールがレボフロキサシンである。まずピペットを用いて各列の第1のウェルに180μLの各細菌懸濁液(細菌濃度107cfu/m、塗布量60μL)を添加し、第2~12のウェルにそれぞれ100μLの各細菌懸濁液を添加し、次に20μLの精油を第1のウェルにそれぞれ吸引し、精油の濃度をそれぞれ100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0.781、0.391、0.195、0.097μL/mLにするように第1~12のウェルに対して順に段階希釈を行い、十分かつ均一に混合し、3回繰り返し、培養条件がインキュベータ内で37℃で24h培養することであり、その後にマイクロプレートリーダーで真菌の吸光度を測定し、抗菌率が80%であるサンプルの濃度を該細菌に対する該サンプルの最小発育阻止濃度(MIC)とする。
寒天培地プレート法を使用して、「6.2.2」での各サンプルのMIC値に対応する溶液を対応する培地に均一に塗布し、培養条件がインキュベータ内で28℃で培養することであり、その後に培地において菌株が増殖しているか否かを観察し、該薬物のMBCはコロニー数が5個よりも少ないプレートに対応するウェルでの最低濃度である。
結果を表1~2に示す。結果は、得られたヤクチ精油が、リステリア・モノサイトゲネスに対して優れた阻害作用を示し、殺菌活性がないことを示した。そのうち、精油8)と精油9)がより高い阻害活性を示した。
Claims (9)
- ヤクチの乾燥した成熟果実を粉砕して篩にかけて、粉末を得ることと、粉末と水とを固液質量比1:10~12で混合して2~3h静置して浸漬して、220~300℃で5~7h水蒸気蒸留することと、を含むことを特徴とする、リステリア・モノサイトゲネスを阻害するヤクチ精油の抽出方法。
- 粉砕して篩にかけることにより得られた粉末を、まず35±5℃で、相対湿度60~70%の条件下で置き、次に水を加えて浸漬して水蒸気蒸留することを特徴とする、請求項1に記載の抽出方法。
- 前記置きの時間が5~7dであることを特徴とする、請求項2に記載の抽出方法。
- 前記篩が40~60メッシュの篩であることを特徴とする、請求項1に記載の抽出方法。
- 粉末と水とを混合する場合、水のpHが塩基性であることを特徴とする請求項1に記載の抽出方法。
- 粉末と水とを混合する場合、水のpHが7.5~8.5であることを特徴とする請求項1に記載の抽出方法。
- 粉末と水とを混合する場合、水のpHが8.5であることを特徴とする請求項1に記載の抽出方法。
- 水蒸気蒸留の温度が220~230℃であることを特徴とする請求項1に記載の抽出方法。
- 請求項1~8のいずれか一項に記載の抽出方法によって製造されることを特徴とする、リステリア・モノサイトゲネスを阻害するヤクチ精油。
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