JP2023545056A - ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を使用して安全殺傷機構を誘発する方法 - Google Patents

ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を使用して安全殺傷機構を誘発する方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与するための方法及び組成物を提供し、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、２０２０年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６３／０９０，００１号、及び２０２１年１月８日に出願された米国仮特許出願第６３／１３５，５１８号の優先権を主張するものであり、これら両仮特許出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含み、当該配列表は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。２０２１年１０月９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１－１０－０９ Ｓａｎａ ８００７．ＷＯ００ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１２１ＫＢである。
再生医療（細胞療法）は、細胞の調製及び患者への送達を含む。これらの細胞は、任意の細胞型に分化することができる多能性幹細胞（ＰＳＣ）、これらのＰＳＣから分化した細胞、または初代細胞であり得る。これらの細胞は、膜貫通タンパク質であり、生物内の宿主細胞上の「自己」の既知のマーカーであるＣＤ４７をコードする１つ以上の外因性核酸、及び任意に、１つ以上の他のタンパク質を含むように操作され得る。ＣＤ４７が、循環免疫細胞上の膜貫通受容体タンパク質であるシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に結合して、抑制性の「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを送達すると、ＣＤ４７を発現する宿主細胞は、患者の免疫系、例えば、マクロファージ及び／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞介在性の死による拒絶反応を回避する。かかる操作された細胞の免疫抑制特性は、例えば、抑制されない増殖が生じた場合に、該細胞が移植される患者にとって危険なものになる可能性があり、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸または相互作用に作用することによって、該移植された細胞の集団を患者の自然免疫系を介して調節、例えば、排除することができる安全機構の開発の必要性が生じる。
本開示は、以前に対象に投与または移植された細胞の集団を調節するための方法及び組成物を提供し、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を該対象に投与することを含み、ここで、該細胞の集団は、ＣＤ４７をコードする、及び／またはＣＤ４７を発現もしくは過剰発現する１つ以上の外因性核酸を含む。かかるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７またはＳＩＲＰαに結合し、ひいてはＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸または相互作用に作用し、干渉し、遮断し、及び／または阻害する低分子、高分子、ポリペプチド、融合タンパク質、ダイアボディ、抗体、またはそれらの組み合わせを含む。ＣＤ４７を過剰発現するか、または他の場合には外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現する細胞の集団を調節することは、かかる細胞を投与されたことがある対象において自然殺傷機構を誘発することを含む。自然殺傷機構は、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与によって誘発される可能性があり、免疫細胞介在性の細胞の殺傷、例えば、ＮＫ介在性の殺傷、マクロファージ介在性の殺傷、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣを含み得る。
１つの態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチド及び少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ、及び／またはＴＣＲベータの発現が低下している、Ｔ細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、及びＴＣＲアルファの発現が低下しており、外因性のＣＤ４７ポリペプチド及びＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された膵島細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であり、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７、ＣＤ４６、及びＣＤ５９ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている。
別の態様では、本明細書に提供するのは、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。
別の態様では、本明細書に提供するのは、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む方法である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、初代細胞である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、同種異系である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ｉＰＳＣから分化する。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、さらに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタジェンアウトルーセルからなる群から選択されるＣＤ１９ ＣＡＲである。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤ１９ ＣＡＲである。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１６の核酸配列によってコードされる。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該膵島細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。
請求項５、６、または７のいずれかに記載の方法であって、前記膵島細胞が、ＣＤ１４２の発現が低下するように操作される、前記方法。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該膵島細胞は、初代細胞である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該膵島細胞は、ｉＰＳＣから分化する。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、バイシストロン性ベクターにて該Ｔ細胞に導入された。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該バイシストロン性ベクターは、レンチウイルスを介して該Ｔ細胞に導入された。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、単一のプロモーターの制御下にある。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該第１のアウトカム及び第２のアウトカムは、独立して、（ｉ）細胞数の約１０％～１００％の減少、（ｉｉ）有害事象の約１０％～１００％の減少、及び（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組み合わせからなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または該第２の用量は、（ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで、（ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または（ｉｉｉ）１日～３週間投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該第１の用量と該第２の用量は同じである。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞は、初代細胞である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞または膵島細胞である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞は、ｉＰＳＣから分化する。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該分化した細胞は、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、初代細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβの発現が低下するように操作される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）の発現が低下するように操作される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、該細胞のゲノム遺伝子座への相同組み換え修復（ＨＤＲ）介在性の挿入により該細胞に導入された。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、及びセーフ・ハーバー遺伝子座からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＢＣＭＡ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗原に結合する。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該第１のアウトカム及び／または該第２のアウトカムは、有害事象である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１日後に投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１週後に投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１か月後に投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該投与された細胞に関連する有害事象を経験した後に投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該有害事象は、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、炎症、感染、吐き気、嘔吐、出血、間質性肺炎、呼吸器疾患、黄疸、体重減少、下痢、食欲不振、けいれん、腹痛、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）、生着不全、臓器損傷、不妊症、ホルモンの変化、異常な成長形成、白内障、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７結合ドメインを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ドメインは、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）またはその断片を含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃドメインを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＩｇＧのＦｃドメインは、ＩｇＧ１のＦｃドメインを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＩｇＧ１のＦｃドメインは、ヒト抗体の断片を含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、及びＡＬＸ１４８からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＩｇＧのＦｃドメインは、ＩｇＧ４のＦｃドメインを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、抗体である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、ＭＩＡＰ４１０、Ｂ６Ｈ１２、及びＭａｇｒｏｌｉｍａｂからなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該細胞の集団を減少させるのに有効な用量で投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約１０％～１００％減少する。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞の集団は、排除される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞の集団の減少は、免疫応答を介して生じる。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞におけるＮＫ細胞介在性の細胞殺傷、マクロファージ介在性の細胞殺傷、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または頭蓋内投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、（ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で、（ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または（ｉｉｉ）１日～３週間投与される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該方法は、さらに、該対象に対してＩＬ－２を投与することを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。
上記または下記の実施形態の各々またはいずれかのいくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。
Ａ～Ｄは、ヒトＨＩＰ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＣＤ４７＋）細胞（Ａ）、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－）細胞（Ｂ）、抗ＣＤ４７ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で処理したヒトＨＩＰ細胞（Ｃ）、または抗ＣＤ４７抗体ＭＩＰ４１０で処理したヒトＨＩＰ細胞（Ｄ）のＩＬ－２刺激ＮＫ細胞による殺傷を示す。 Ａ～Ｄは、ヒトＨＩＰ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＣＤ４７＋）細胞（Ａ）、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－）細胞（Ｂ）、抗ＣＤ４７ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で処理したヒトＨＩＰ細胞（Ｃ）、または抗ＣＤ４７抗体ＭＩＰ４１０で処理したヒトＨＩＰ細胞（Ｄ）のマクロファージによる殺傷を示す。 Ａ及びＢは、ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（Ａ）または抗ＣＤ４７抗体ＭＩＰ４１０（Ｂ）による処理後に、ヒトＮＫ細胞を養子移入されたＮＳＧマウスに皮下注射されたヒトＨＩＰ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＣＤ４７＋）細胞の生物発光測定を示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 抗ＣＤ４７抗体への曝露時の外因性のＣＤ４７及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ構築物を発現するヒトＨＩＰ（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－）ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ、単一プロモーターＣＤ４７－ＣＡＲ」参照）のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷のリアルタイム細胞分析データを示す（例えば、図４Ａ～４Ｅ参照）。これらのデータはまた、ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、チサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲートと実質的に同様の対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び対照モックＴ細胞のＮＫ細胞及びマクロファージが誘導する殺傷の程度も示す。 ヒトＮＫ細胞及びマクロファージを免疫不全ＮＳＧマウスに、ヒトモックＴ細胞ならびにヒトＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩダブルノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の混合物とともに養子移入した後のインビボでの免疫回避のデータを示す。 ヒトＮＫ細胞及びマクロファージを免疫不全ＮＳＧマウスに、ヒトモックＴ細胞ならびに低免疫原性ヒトＨＬＡ－Ｉ、ＨＬＡ－ＩＩ及びＴＣＲトリプルノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の混合物とともに養子移入した後のインビボでの免疫回避のデータを示す。 同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ－ＥＧＦＲｔ構築物（「Ｃａｒ（ＥＧＦＲｔ）」を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞）及びチサゲンレクルユーセルバイオシミラーもしくはサロゲート（「Ｃａｒ（チサゲンレクルユーセル）」）または低免疫原性ヒトＨＬＡ－Ｉ、ＨＬＡ－ＩＩ及びＴＣＲトリプルノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞（「ＨＩＰ」）のいずれかを注射されたヒト化マウスからのサンプルで検出されたＴ細胞活性化及びドナー特異的抗体結合のレベルを示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植ならびにＮＫ細胞及びマクロファージの養子移入ならびに抗ＣＤ４７ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ抗体の１００μｇ／ｍｌでの０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの細胞の生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及びＩｇＧ４アイソタイプ対照の投与後のＮＳＧマウスにおける奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び抗ＣＤ４７ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ抗体の０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び抗ＣＤ４７ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ抗体の０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植ならびにＮＫ細胞及びマクロファージの養子移入ならびに抗ＣＤ４７ ＭＩＡＰ４１０抗体の１００μｇ／ｍｌでの０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの細胞の生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及びＩｇＧ１アイソタイプ対照の投与後のＮＳＧマウスにおける奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び抗ＣＤ４７ ＭＩＡＰ４１０抗体の０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、１５．５ｘ１０４個のヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびに１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞の養子移入ならびに抗ＣＤ４７ＭＩＡＰ４１０抗体の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、１６．５ｘ１０４個のヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびに１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞の養子移入ならびに抗ＣＤ４７ＭＩＡＰ４１０抗体の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、５ｘ１０４個のヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびに１ｘ１０６個のＮＫ細胞の養子移入ならびにＩｇＧ４アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 Ａ及びＢは、５ｘ１０４個のヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびに１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞の養子移入ならびに抗ＣＤ４７ＭＩＡＰ４１０抗体の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、５ｘ１０４個のヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびに１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞の養子移入ならびに抗ＣＤ４７ＭＩＡＰ４１０抗体の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。血液脳関門は、マンニトール注射によって破壊した。 ＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの投与後のＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの投与後のＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ＡＤＣＣマクロファージ及びマクロファージ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの投与後のＡＤＣＣマクロファージ及びマクロファージ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの投与後のＡＤＣＣマクロファージ及びマクロファージ介在性の殺傷に関するヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビトロでの殺傷データを示す。 ヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびにヒトＮＫ細胞の養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後、２０日目及び４０日目に行ったヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射に続いて、ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ注射を（３日間）行った後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびにヒトＮＫ細胞の養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後、２０日目及び４０日目に行ったヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射に続いて、ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ注射を（３日間）行った後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびにヒトＮＫ細胞の養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後、２０日目及び４０日目に行ったヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射に続いて、ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ注射を（３日間）行った後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの皮下移植ならびにヒトＮＫ細胞の養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後、２０日目及び４０日目に行ったヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射に続いて、ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ注射を（３日間）行った後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ１アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。血液脳関門は、マンニトール注射によって破壊した。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。血液脳関門は、マンニトール注射によって破壊した。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ４アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＩｇＧ４アイソタイプ対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のＮＳＧマウスの脳における奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ヒトｉＰＳＣの頭蓋内移植ならびにヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアの養子移入ならびにＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃの０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後の脳におけるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスへのヒトｉＰＳＣの皮下注射ならびに０日目、１日目、及び３日目のヒトＮＫ細胞及び１ｍｇで混合した抗ＳＩＲＰαの皮下的養子移入後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの細胞生存を示す。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射を２０日目に５０，０００細胞（５０ｋ）で皮下的に（左側に）行い、１ｍｇのＢ６Ｈ１２の注射を２０日目（混合して）、２１日目、及び２３日目に行った。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射を４０日目に５０ｋで皮下的に（上部中央胸部に）行い、１ｍｇのＢ６Ｈ１２の注射を４０日目（混合して）、４１日目、及び４３日目に行った。 インビトロでのＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７遮断データを示す。ＮＫ細胞に対する影響を調べた。 インビトロでのＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７遮断データを示す。マクロファージに対する影響を調べた。 Ａ及びＢは、インビトロでのＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７遮断データを示す。ＣＤ１９ ＨＩＰ ＣＡＲ及びＮＫ細胞（Ａ）ならびにＣＤ１９ ＨＩＰ ＣＡＲ及びマクロファージ（Ｂ）に対する影響を調べた。 Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを用いたＮＳＧマウスの試験を示す。ヒトＮＫ細胞及びヒトＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ細胞の養子移入は、融合タンパク質を静脈内に用いて及び用いずに静脈内に行った。１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した後にソートし、続いてソート後及び注射前に１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した。 Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを用いたＮＳＧマウスの試験を示す。ヒトＮＫ細胞及びヒトＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ細胞の養子移入は、融合タンパク質を静脈内に用いて及び用いずに静脈内に行った。１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した後にソートし、続いてソート後及び注射前に１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した。安全戦略によってＨＩＰ ＣＡＲが排除されると、Ｎａｌｍ－６腫瘍が増殖した。 Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを用いたＮＳＧマウスの試験を示す。 Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを用いたＮＳＧマウスの試験を示し、ＨＩＰ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４抗ＣＤ４７融合タンパク質によって排除され、Ｎａｌｍ－６腫瘍の増殖を示している。 Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを用いたＮＳＧマウスの試験を示し、ＨＩＰ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４抗ＣＤ４７融合タンパク質によって排除され、Ｎａｌｍ－６腫瘍の増殖を示している。 抗ＣＤ４７ ＭＩＡＰ４１０抗体の投与後のマウスＨＩＰ初代膵島のインビトロ細胞生存を、ＮＫ細胞介在性の殺傷の結果として示す。 抗ＣＤ４７ ＭＩＡＰ４１０抗体の投与後のマウスＨＩＰ初代膵島のインビトロ細胞生存を、マクロファージ介在性の殺傷の結果として示す。 膵島マウス試験モデルを示す。 ＩｇＧ１アイソタイプ対照の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける同種異系ＨＩＰ膵島に関する細胞生存データを示す。 ＩｇＧ１アイソタイプ対照の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける同種異系ＨＩＰ膵島に関する細胞生存データを示す。 ＩｇＧ１アイソタイプ対照の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける糖尿病の軽減に関する細胞生存データを示す。 ５ｍｇのＭＩＡＰ４１０の７日目～１８日目の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける同種異系ＨＩＰ膵島に関する細胞生存データを示す。 ５ｍｇのＭＩＡＰ４１０の７日目～１８日目の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける同種異系ＨＩＰ膵島に関する細胞生存データを示す。 ５ｍｇのＭＩＡＰ４１０の７日目～１８日目の筋肉内投与後の同種異系マウスにおける糖尿病の軽減に関する細胞生存データを示す。 Ａ～Ｂは、ヒトＮＫ細胞及びヒトマクロファージを養子移入し、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を投与し、インビボでのＩＬ－２刺激を加えたまたは加えないＮＳＧマウスへのヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの注射後のＨＩＰ ｉＰＳＣの細胞生存を示す。 Ａ～Ｂは、ヒトＮＫ細胞及びヒトマクロファージを養子移入し、高用量のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を３回投与したＮＳＧマウスへのヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの注射後のＨＩＰ ｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＭＩＡＰ４１０による局所皮下処理または腹腔内処理後の脳におけるＨＩＰ ｉＰＳＣの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及びＩｇＧ１アイソタイプ対照の投与後のＮＳＧマウスにおける奇形腫形成（ＨＩＰ ｉＰＳＣ生存）を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与と同時の活性化のためのＮＫ細胞へのＩＬ－２の０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与と同時の活性化のためのＮＫ細胞へのＩＬ－２の３日目～３６日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与と同時の活性化のためのＮＫ細胞へのＩＬ－２の１１日目～３６日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の３日目～３６日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の１１日目～３６日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の１１日目、１２日目、及び１４日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の１１日目、１２日目、及び１４日目の腹腔内投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスにヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を皮下注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した後のヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスにヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を皮下注射し、ヒトＮＫ細胞またはヒトミクログリアを養子移入した後のヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスにヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を皮下注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した後のヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスにヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を皮下注射した後、ヒトＮＫ細胞を養子移入しないヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスの脳にヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した後のヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 ＮＳＧマウスの脳にヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を注射した後、ヒトＮＫ細胞を養子移入しないヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスの脳にヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を注射し、ヒトミクログリアを養子移入した後のヒトｉＰＳＣの細胞生存を示す。 同種異系ヒトマクロファージまたはミクログリアと共培養したヒトｗｔ、ｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）またはＨＩＰ １．０（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－ＣＤ４７ｔｇ）に関する細胞生存データを示す。 同種異系ヒトマクロファージもしくはミクログリアと共培養したヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞、または同種異系マウスマクロファージもしくはミクログリアと共培養したマウスｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞に関する細胞生存データを示す。 異種（異種間）マウスマクロファージもしくはミクログリアと共培養したヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞、または異種ヒトマクロファージもしくはミクログリアと共培養したマウスｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞に関する細胞生存データを示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへのＨＩＰ ｉＰＳＣの頭蓋内移植及びＮＫ細胞の養子移入及び高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＦｃアイソタイプＩｇＧ１対照の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへのＨＩＰ ｉＰＳＣの頭蓋内移植及びＮＫ細胞の養子移入及び高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへのＨＩＰ ｉＰＳＣの頭蓋内移植及びＮＫ細胞の養子移入及び高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。血液脳関門は、マンニトール注射によって破壊した。 Ａ及びＢは、マウスＩｇＧ１のＦｃドメインを有する１００μｇ／ｍｌのＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体をヒトＮＫ細胞（Ａ）またはヒトマクロファージ（Ｂ）の存在下で投与した後のインビトロでのヒトＨＩＰ ｉＰＳＣに関する細胞生存データを示す。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植と、ヒトＮＫ細胞の養子移入及びＢ６Ｈ１２の投与後のインビボでのヒトＨＩＰ ｉＰＳＣに関する細胞生存データを示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＦｃアイソタイプＩｇＧ４対照の０日目～４０日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目～９６日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の３日目～４０日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所低用量（ＬＤ、５００μｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の１１日目～４４日目の期間中の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目、１日目、及び３日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の３日目、４日目、及び６日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の１１日目、１２日目、及び１４日目の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 Ａ及びＢは、ＨＩＰ ｉＰＳＣの皮下移植及びＮＫ細胞の養子移入及び局所高用量（ＨＤ、１ｍｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の０日目、１日目、及び３日目の腹腔内投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣのインビボでの細胞生存を示す。 ＮＫ細胞及びマクロファージを殺傷して十分なＣＤ４７レベルを有する細胞の保護に関して、低分子フルシトシン及びガンシクロビルが、それぞれ、シトシンデアミナーゼ及びＨｓＶｔｋ殺傷スイッチに与える影響の低分子インビトロ試験を示す。 低分子フルシトシン及びガンシクロビルが、それぞれ、シトシンデアミナーゼ及びＨｓＶｔｋ殺傷スイッチに与える影響の低分子インビトロ試験に関するプロドラッグの殺傷データを示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスにおける奇形腫を形成するヒトＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣを示す。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＬＤ（２００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。１６～４４日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。１６～３２日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び１３日目から毎日腹腔内に行ったフルシトシンＬＤ（２００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。投与開始後３～１１日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び１３日目から毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。投与開始後３～１１日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。殺傷スイッチがないにもかかわらず、ＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの生存が損なわれている。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。殺傷スイッチがないにもかかわらず、ＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣの生存が損なわれている。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。結果を確認する試験を拡大している。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。結果を確認する試験を拡大している。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。結果を確認する試験を拡大している。 ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったフルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。結果を確認する試験を拡大している。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへの皮下注射後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ ｌｕｃ＋（シトシンデアミナーゼクローン２－Ｇ１１）の細胞生存データを示す。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへの皮下注射及び生理食塩水の投与後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）の細胞生存データを示す。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったガンシクロビルＬＤ（５０ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。１２～２４日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び毎日腹腔内に行ったガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。１２～１６日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び１３日目から毎日腹腔内に行ったガンシクロビルＬＤ（５０ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。投与開始後７日以内でＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び１３日目から毎日腹腔内に行ったガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。投与開始後７日以内でＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。 Ａ及びＢは、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）のＮＳＧマウスへの皮下注射、及び０日目から毎日腹腔内に行ったガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理後の細胞生存データを示す。ＨＩＰ ｉＰＳＣの殺傷は生じなかった。 Ａ及びＢは、ＮＳＧマウスへの皮下注射後のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ ｌｕｃ＋（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）の細胞生存データを示す。
再生医療（細胞療法）は、細胞の調製及び患者への送達を含む。細胞療法、すなわち、損傷した細胞を置換または修復するための対象への細胞の移植は、細胞、組織、及び／または器官の進行性の劣化または欠如を特徴とする疾患の治療に非常に有益であり得る。いくつかの実施形態では、細胞療法は、さもなければ損傷した、機能不全の、または存在しない細胞を修復、置換、回復、及び／または提供することを目的とする。細胞療法に用いる細胞は、例えば、任意の細胞型に分化することができる多能性幹細胞（ＰＳＣ）、これらのＰＳＣから分化した細胞、または初代細胞であり得る。細胞療法に用いる細胞は、寛容原性の因子、例えば、膜貫通タンパク質であり、生物内の宿主細胞上の「自己」の既知のマーカーであるＣＤ４７をコードする１つ以上の外因性核酸、及び任意に１つ以上の他のタンパク質を含むように操作され得る。ＣＤ４７が、循環免疫細胞上の膜貫通受容体タンパク質であるシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に結合して、抑制性の「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを送達すると、ＣＤ４７を発現する宿主細胞は、患者の免疫系、例えば、マクロファージ及び／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞介在性の死による拒絶反応を回避する。かかる操作された細胞の免疫抑制特性により、例えば、抑制されない増殖が生じた場合に、該細胞が移植される患者にとってそれらの特性が危険なものになる可能性があり、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸または相互作用に作用することによって、該移植された細胞の集団を患者の自然免疫系を介して調節、例えば、排除することができる安全機構の開発の必要性が生じる。本開示は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を対象に投与することにより、以前に該対象に投与または移植された細胞または細胞の集団を調節するための方法及び組成物を提供し、ここで、該細胞または細胞の集団は、ＣＤ４７をコードする１つ以上の外因性核酸を含み、及び／または外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現もしくは過剰発現する。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７またはＳＩＲＰαに結合し、ひいてはＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸または相互作用に作用し、干渉し、これを遮断し、及び／または阻害する低分子、高分子、ポリペプチド、融合タンパク質、ダイアボディ、抗体、またはそれらの組み合わせを含み得る。この相互作用は、免疫細胞介在性の細胞の殺傷、例えば、ＮＫ介在性の殺傷、マクロファージ介在性の殺傷、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣを含めた、該以前に投与された細胞に対する自然殺傷機構を誘発する。このようにして、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与は、該対象に含まれる以前に投与された細胞を減少させ、ある特定の実施形態では、完全に排除する。
Ｉ．定義
「抗体」という用語は、天然の抗体に加えて、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、または合成抗体を含めた免疫グロブリンまたはその一部の遺伝子操作された、または他の方法で改変された形態を示すために使用される。該抗体は、モノクローナル抗体の場合もあれば、ポリクローナル抗体の場合もある。抗体が免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分である実施形態では、該抗体としては、単鎖可変断片抗体（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＨＨ抗体、抗原結合断片（Ｆａｂ）、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２断片、またはダイアボディが挙げられ得るがこれらに限定されない。ｓｃＦｖ抗体は、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域を短いリンカーペプチドで連結することによって抗体から得られる。ｓｃＦｖは、Ｖｈ－ＶｌまたはＶｌ－Ｖｈを含むことができる。同様に、ジスルフィド結合Ｆｖ抗体は、ＶＨ及びＶＬをドメイン間ジスルフィド結合を使用して連結することによって生成され得る。一方、ｓｄＡｂは、重鎖または軽鎖のいずれかの可変領域のみで構成され、通常は、抗体の最小の抗原結合断片である。ＶＨＨ抗体は、重鎖のみの抗原結合断片である。ダイアボディは、ｓｃＦｖ断片の二量体であり、低分子ペプチドリンカーによって非共有的に結合された、または互いに共有結合したＶＨ及びＶＬ領域からなる。免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分を含むものを含めた、本明細書に開示する抗体は、特定の抗原に結合する能力を保持する。
本明細書で使用される、「安全スイッチ」という用語は、下方制御または上方制御された場合、例えば、宿主の免疫系による認識を介して細胞のクリアランスまたは死をもたらす目的の遺伝子またはタンパク質の発現を制御するための系を指す。安全スイッチは、有害臨床事象を予防または軽減するために投与される外因性の分子であるか、またはそれを含むように設計され得る。安全スイッチは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びタンパク質レベルでの発現を調節することによって操作され得る。安全スイッチとしては、有害事象に応答して細胞活性の制御を可能にするタンパク質または分子が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、安全スイッチとは、特定の細胞に結合し、それを細胞死または排除の標的とする作用物質（例えば、タンパク質、分子等）を指す。場合によっては、該安全スイッチは、標的細胞の表面の標的タンパク質に結合する封鎖剤であり、これは次に免疫応答を誘発する。１つの実施形態では、該安全スイッチは、「殺傷スイッチ」であり、これは、不活性状態で発現され、外部から提供される選択的な作用物質によって該安全スイッチが活性化されると該スイッチを発現する細胞にとっては致命的である。１つの実施形態では、該安全スイッチ遺伝子は、構築物に含まれる目的の遺伝子に対してシス作用性である。安全スイッチの活性化により、当該細胞のみ、または当該細胞とそれに隣接する細胞がアポトーシスまたは壊死によって殺傷される。
本明細書で細胞を特性評価するために使用される、「低免疫原性」という用語は、一般に、かかる細胞が生着するまたは移植される対象による免疫拒絶反応をかかる細胞が受けにくいことを意味する。例えば、未変化または未改変の野生型細胞に対して、かかる低免疫原性細胞は、かかる細胞を移植される対象による免疫拒絶反応を約２．５％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７．５％、９９％、またはそれ以上受けにくい可能性がある。いくつかの態様では、ゲノム編集技術を使用して、ＭＨＣ Ｉ及び／またはＭＨＣ ＩＩ遺伝子の発現が調節され、任意に、寛容原性の因子、例えば、限定されないがＣＤ４７が発現され、ひいては低免疫原性細胞が生成される。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントにおいて免疫拒絶反応を回避する。場合によっては、本明細書に概説される低免疫原性幹細胞から産生される分化した細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントに投与された（例えば、移植された（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植された（ｇｒａｆｔｅｄ））場合の免疫拒絶反応を回避する。場合によっては、本明細書に概説される低免疫原性幹細胞から産生される低免疫原性または分化した細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントに投与された（例えば、移植された（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植された（ｇｒａｆｔｅｄ））場合の免疫拒絶反応を、非低免疫原性細胞で必要とされるよりも低いレベルの免疫抑制で回避する。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、適応免疫による拒絶反応及び／または自然免疫細胞による拒絶反応から保護される。
細胞の低免疫原性は、細胞の免疫原性、例えば、細胞が適応免疫応答及び自然免疫応答を誘発する能力を評価することによって測定され得る。かかる免疫応答は、当業者に認識されるアッセイを使用して測定され得る。いくつかの実施形態では、免疫応答アッセイは、低免疫原性細胞がＴ細胞増殖、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞殺傷、ＮＫ細胞増殖、ＮＫ細胞活性化、及びマクロファージ活性に与える影響を測定する。場合によっては、低免疫原性細胞及びその派生物は、対象への投与時にＴ細胞及び／またはＮＫ細胞による殺傷の減少を経る。場合によっては、該細胞及びその派生物は、未改変または野生型の細胞と比較して、マクロファージによる貪食の減少を示す。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、対応する未改変の野生型細胞と比較してレシピエント対象において低減または減弱した免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、低免疫原性細胞は、レシピエント対象において非免疫原性であるか、または免疫応答を誘発しない。
本明細書で使用される、「免疫抑制因子」または「免疫調節因子」としては、低免疫因子及び補体阻害物質が挙げられる。
本明細書で使用される、「免疫シグナル伝達因子」とは、場合によっては、免疫シグナル伝達経路を活性化する分子、タンパク質、ペプチド等を指す。
本明細書で使用される「セーフ・ハーバー遺伝子座」とは、導入遺伝子または外因性遺伝子の安全な発現を可能にする遺伝子座を指す。セーフ・ハーバーまたはゲノムセーフ・ハーバーは、新たに挿入された遺伝要素が、（ｉ）予測どおりに機能し、（ｉｉ）宿主細胞または生物にリスクをもたらす宿主ゲノムの変化を引き起こさない方法で、新たな遺伝物質の組み込みに対応することができるゲノム内の部位である。例示的な「セーフ・ハーバー」遺伝子座としては、ＣＣＲ５遺伝子、ＣＸＣＲ４遺伝子、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ（別名、ＡＡＶＳ１）遺伝子、アルブミン遺伝子、及びＲｏｓａ遺伝子が挙げられる。
外因性分子または構築物は、内在性分子と同じ種類の分子、例えば、外因性タンパク質または核酸であり得る。かかる例では、該外因性分子は、細胞に含まれる内在性分子の濃度よりも高い濃度で細胞に導入される。場合によっては、外因性核酸は、感染ウイルスゲノム、細胞に導入されるプラスミドもしくはエピソーム、または細胞内に通常は存在しない染色体を含み得る。外因性分子を細胞に導入するための方法は、当業者に既知であり、脂質介在性移入（すなわち、中性及びカチオン性脂質を含めたリポソーム）、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、粒子ボンバードメント、リン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン介在性移入、及びウイルスベクター介在性移入を含むがこれらに限定されない。
本開示の目的では、「遺伝子」とは、遺伝子産物をコードするＤＮＡ領域、及び該遺伝子産物の産生を調節する全ＤＮＡ領域を含み、かかる調節配列がコード配列及び／または転写配列に隣接するか否かにかかわらない。したがって、遺伝子には、プロモーター配列、ターミネーター、翻訳調節配列、例えば、リボソーム結合部位及び内部リボソーム進入部位、エンハンサー、サイレンサー、インシュレーター、境界エレメント、複製起点、マトリックス付着部位、ならびに遺伝子座制御領域が含まれるが、必ずしもこれらに限定されるわけではない。
「遺伝子発現」とは、遺伝子に含まれる情報の遺伝子産物への変換を指す。遺伝子産物とは、遺伝子の直接転写産物（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡ、もしくは任意の他の種類のＲＮＡ）、またはｍＲＮＡの翻訳によって産生されるタンパク質であり得る。遺伝子産物は、キャッピング、ポリアデニル化、メチル化、及び編集等のプロセスによって修飾されるＲＮＡ、ならびに例えば、メチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、ＡＤＰリボシル化、ミリスチリル化、及びグリコシル化によって修飾されるタンパク質も含む。
「遺伝子発現の調節」とは、遺伝子の発現レベルの変化を指す。発現の調節としては、遺伝子活性化及び遺伝子抑制が挙げられ得るがこれらに限定されない。調節はまた、完全であり得る、すなわち、遺伝子発現が完全に不活性化されるか、または野生型のレベル以上まで活性化されてもよく、あるいは部分的であり得る、すなわち、遺伝子発現が部分的に低減されるか、または野生型のレベルのある割合まで部分的に活性化されてもよい。
本明細書で使用される、「発現が低下する」または「発現が減少する」という用語は、未改変の対応する細胞または野生型細胞（例えば、正常、健康または親細胞）と比較して、低い遺伝子またはタンパク質の発現レベル（例えば、少なくとも約２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低いレベル）を示す細胞を指す。
本明細書で使用される、「発現が高まる」または「発現が増加する」という用語は、未改変の対応する細胞または野生型細胞（例えば、正常、健康または親細胞）と比較して、高い遺伝子またはタンパク質の発現レベル（例えば、少なくとも約２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％高いレベル）を示す細胞を指す。
「作動可能に（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ）連結される」または「作動可能に（ｏｐｅｒａｂｌｙ）連結される」という用語は、２つ以上の構成要素（配列エレメント等）の並置に関して同義で使用され、該構成要素は、両構成要素が正常に機能し、該構成要素の少なくとも一方が、他の構成要素の少なくとも１つに及ぼす機能を媒介することができる可能性を許容するように配置される。例示として、プロモーター等の転写調節配列は、その転写調節配列が１つ以上の転写調節因子の存否に応答してコード配列の転写レベルを制御する場合、コード配列に作動可能に連結されている。転写調節配列は、概して、コード配列とシスに作動可能に連結されるが、それに直接隣接している必要はない。例えば、エンハンサーは、たとえそれらが隣接していなくても、コード配列に作動可能に連結される転写調節配列である。
「ベクター」または「構築物」は、遺伝子配列を標的細胞に移入することが可能である。通常、「ベクター構築物」、「発現ベクター」、及び「遺伝子移入ベクター」とは、目的の遺伝子の発現を導くことができ、遺伝子配列を標的細胞に移入することができる任意の核酸構築物を意味する。したがって、該用語には、クローニング、及び発現媒体、ならびに組み込みベクターが含まれる。ベクターまたは構築物を細胞に導入するための方法は、当業者に既知であり、脂質介在性移入（すなわち、中性及びカチオン性脂質を含めたリポソーム）、エレクトロポレーション、直接注入、細胞融合、粒子ボンバードメント、リン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ－デキストラン介在性移入、及びウイルスベクター介在性移入を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される、「多能性幹細胞」または「初代細胞」は、内胚葉（例えば、胃壁、消化管、肺等）、中胚葉（例えば、筋肉、骨、血液、泌尿生殖器系組織等）または外胚葉（例えば、上皮組織及び神経系組織）という３種の胚葉のうちのいずれかに分化する可能性を有する。本明細書で使用される、「多能性幹細胞」という用語はまた、非多能性細胞に由来する多能性幹細胞の一種である「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」も包含する。親細胞の例としては、種々の手段によって多能性で未分化の表現型を誘導するように再プログラミングされた体細胞が挙げられる。かかる「ｉＰＳ」または「ｉＰＳＣ」細胞は、ある特定の調節遺伝子の発現を誘導することによって、またはある特定のタンパク質の外因性の適用によって創出することができる。ｉＰＳ細胞の誘導のための方法は、当技術分野で知られており、下記にさらに記載する。（例えば、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ２７（１１）：２６６７－７４（２００９）、Ｈｕａｎｇｆｕ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６（７）：７９５（２００８）、Ｗｏｌｔｊｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５８（７２３９）：７６６－７７０（２００９）、及びＺｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ８：３８１－３８４（２００９）参照。これらの各々は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）。人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）の生成を以下に概説する。本明細書で使用される、「ｈｉＰＳＣ」とは、ヒト人工多能性幹細胞である。
「ＨＬＡ」または「ヒト白血球抗原」複合体とは、ヒトにおいて主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質をコードする遺伝子複合体である。該ＨＬＡ複合体を構成するこれらの細胞表面タンパク質は、抗原に対する免疫応答の制御を担う。ヒトでは、クラスＩ及びクラスＩＩの２種のＭＨＣである、「ＨＬＡ－Ｉ」及び「ＨＬＡ－ＩＩ」が存在する。ＨＬＡ－Ｉには、細胞の内側からペプチドを提示するＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃという３種のタンパク質が含まれ、ＨＬＡ－Ｉ複合体によって提示される抗原が、キラーＴ細胞（別名、ＣＤ８＋Ｔ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）を引き付ける。ＨＬＡ－Ｉタンパク質は、β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）に会合している。ＨＬＡ－ＩＩには、細胞の外側から抗原をＴリンパ球に提示するＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲという５種のタンパク質が含まれる。これは、ＣＤ４＋細胞（別名、ヘルパーＴ細胞）を刺激する。「ＭＨＣ」または「ＨＬＡ」のいずれかの使用は、遺伝子がヒト（ＨＬＡ）またはマウス（ＭＨＣ）のどちらに由来するかに依存するため、限定することは意図されないことを理解されたい。したがって、それが哺乳類細胞に関する場合、これらの用語は、本明細書では同義で使用され得る。
単離された細胞に適用される「処理する」、「処理すること」、「処理」等の用語は、細胞を任意の種類のプロセスもしくは条件に供するか、または細胞に対して任意の種類の操作もしくは手順を実施することを含む。対象に適用されるこれらの用語は、標的ポリヌクレオチド配列（例えば、Ｂ２Ｍ）が本明細書に記載の方法に従ってエキソビボで改変された細胞または細胞の集団を、個体に投与することを指す。該個体は、通常、病気であるか、もしくは損傷しているか、または該集団の平均成員と比べて病気になるリスクが増加しており、かかる手当て、介護、または管理を必要とする。
本明細書で使用される、「治療すること」及び「治療」という用語は、当該対象が疾患の少なくとも１つの症状の低減または疾患の改善、例えば、有益なまたは所望の臨床結果を有するように、標的ポリヌクレオチド配列が本明細書に記載の方法に従ってエキソビボで改変された細胞の有効量を対象に投与することを指す。本技術の目的で、有益なまたは所望の臨床結果としては、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減弱、安定化した（すなわち、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善または一時的緩和、及び寛解（部分的か完全かにかかわらず）が挙げられるがこれらに限定されない。治療することとは、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを指すことができる。したがって、当業者には、治療が病状を改善し得るが、疾患に対する完全な治療ではない場合があることが認識される。本明細書で使用される、「治療」という用語は、予防を含む。代替的に、治療とは、疾患の進行が軽減または停止される場合に「有効」である。「治療」はまた、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とする者には、ポリヌクレオチド配列の発現に関連する障害であると既に診断された者、及び遺伝的感受性または他の因子に起因してかかる障害を発症する可能性がある者が含まれる。
疾患または障害の「治療」または「予防」とは、かかる疾患または障害の発症を遅延または予防すること、かかる疾患または障害に関連する状態の進行、悪化（ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ）または悪化（ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ）、その進行または重症度を逆戻りさせること、緩和すること、改善すること、阻害すること、減速すること、または停止することを意味する。１つの実施形態では、該疾患または障害の症状は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％緩和される。
本明細書で使用される、「投与すること」、「導入すること」、及び「移植すること」という用語は、細胞、例えば、本開示の方法に従って改変された標的ポリヌクレオチド配列を含む本明細書に記載の細胞を、所望の部位において、導入された細胞の少なくとも部分的な局在をもたらす方法または経路によって対象に配置することの文脈において同義で使用される。該細胞は、該所望の部位に直接移植される場合もあれば、別の方法として、当該対象の所望の位置への送達をもたらす任意の適切な経路によって投与される場合もあり、移植された細胞または細胞の成分の少なくとも一部は、依然として生存可能である。対象への投与後の細胞の生存期間は、数時間、例えば、２４時間ほどの短期間から、数日、数年ほどの長期間の場合もある。場合によっては、細胞はまた、所望の部位以外の位置、例えば、肝臓内または皮下に、例えば、カプセルにて投与され、移植された細胞を移植位置に維持するとともに、移植された細胞の移動を回避することもできる。
さらなるまたは代替的な態様では、本技術は、当業者に利用可能な任意の様態で、例えば、ＴＡＬＥＮ系を利用して、標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ（例えば、Ｃａｓ９及びＣｐｆ１）ならびにＴＡＬＥＮを利用した方法の例が本明細書に詳述されているが、本技術は、これらの方法／系の使用に限定されないことを理解されたい。標的細胞における発現を低減または消失させるために、例えばＢ２Ｍを標的化する、当業者に既知の他の方法を本明細書で利用することができる。
本開示の方法を使用して、細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることができる。本開示は、任意の目的で細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変化させることを企図する。いくつかの実施形態では、細胞に含まれる標的ポリヌクレオチド配列は、変異細胞を産生するように変更される。本明細書で使用される、「変異細胞」とは、生じる遺伝型がその元の遺伝型とは異なる細胞を指す。場合によっては、「変異細胞」は、例えば、正常に機能している遺伝子が本開示のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して変更される場合、変異表現型を示す。他の例では、「変異細胞」は、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して変異遺伝型が補正される場合、野生型表現型を示す。いくつかの実施形態では、細胞に含まれる標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を補正または修復するように（例えば、細胞に正常な表現型を回復するように）変更される。いくつかの実施形態では、細胞内に含まれる標的ポリヌクレオチド配列は、遺伝子変異を誘導するように（例えば、遺伝子またはゲノムエレメントの機能を破壊するように）変更される。
いくつかの実施形態では、該変更は、インデルである。本明細書で使用される、「インデル」とは、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせからもたらされる変異を指す。当業者には理解される通り、ゲノム配列のコード領域におけるインデルは、インデルの長さが３の倍数でない限り、フレームシフト変異をもたらすことになる。いくつかの実施形態では、該変更は、点突然変異である。本明細書で使用される、「点突然変異」とは、ヌクレオチドの１つを置き換える置換を指す。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、標的ポリヌクレオチド配列において任意の長さのインデルまたは点突然変異を誘導することができる。
本明細書で使用される、「ノックアウト」とは、標的ポリヌクレオチド配列の機能を干渉するように、標的ポリヌクレオチド配列のすべてまたは一部を削除することを含む。例えば、ノックアウトは、標的ポリヌクレオチド配列の機能的ドメイン（例えば、ＤＮＡ結合ドメイン）において標的ポリヌクレオチド配列におけるインデルを誘導することにより標的ポリヌクレオチド配列を変更することによって達成され得る。当業者には、本明細書に記載の詳細に基づいて、標的ポリヌクレオチド配列またはその一部をノックアウトするためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の使用方法が容易に理解されよう。
いくつかの実施形態では、該変更により、標的ポリヌクレオチド配列またはその一部がノックアウトされる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用した標的ポリヌクレオチド配列またはその一部のノックアウトは、様々な用途に有用であり得る。例えば、細胞に含まれる標的ポリヌクレオチド配列のノックアウトは、研究目的のためにインビトロで行われ得る。エキソビボ目的では、細胞に含まれる標的ポリヌクレオチド配列のノックアウトは、該標的ポリヌクレオチド配列の発現に関連する障害を治療または予防するのに有用であり得る（例えば、細胞に含まれる変異アレルをエキソビボでノックアウトし、ノックアウトされた変異アレルを含む細胞を対象に導入することによって）。
本明細書における「ノックイン」とは、遺伝子機能を宿主細胞に付加するプロセスを意味する。これは、いくつかの実施形態では、ノックインされた遺伝子産物、例えば、ＲＮＡまたはコードされたタンパク質のレベルの増加または減少を引き起こす。当業者には理解される通り、これは、遺伝子の１つ以上の追加のコピーを宿主細胞に付加すること、または内在性遺伝子の調節成分を変更することにより、作製されるタンパク質の発現を増加させることを含めたいくつかの方式で達成され得る。これは、プロモーターを改変すること、異なるプロモーターを付加すること、エンハンサーを付加すること、または他の遺伝子発現配列を改変することによっても達成され得る。
いくつかの実施形態では、該変更により、標的ポリヌクレオチド配列の発現が低下する。「減少する」、「低減される」、「低減」、及び「減少」という用語はすべて、統計学的に有意な量の減少を意味するように本明細書では概して使用される。しかしながら、誤解を避けるために、「減少する」、「低減される」、「低減」、「減少」とは、参照レベルと比較して少なくとも１０％の減少、例えば、参照レベルと比較して少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の減少、または最大１００％かつこれを含む減少（すなわち、参照サンプルと比較して不在のレベル）、または１０～１００％の任意の減少を意味する。
「増加した」、「増加する」、または「高まる」もしくは「活性化する」という用語はすべて、本明細書では概して統計学的に有意な量の増加を意味するように使用される。誤解を避けるために、「増加した」、「増加する」、または「高まる」もしくは「活性化する」という用語は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の増加、例えば、参照レベルと比較して少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％の増加、または最大１００％かつこれを含む増加、または１０～１００％の任意の増加、または参照レベルと比較して少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約１０倍の増加、または２倍～１０倍もしくはそれ以上の任意の増加を意味する。
本明細書で使用される、「外因性」という用語は、指示対象の分子または指示対象のポリペプチドが目的の細胞に導入されることを意味することが意図される。該ポリペプチドは、例えば、コード核酸を、細胞の遺伝物質に、例えば、染色体へ組み込むことによって、または非染色体遺伝物質、例えば、プラスミドまたは発現ベクターとして導入することにより導入され得る。したがって、該用語は、コード核酸の発現に関して使用される場合、発現可能な形態でのコード核酸の細胞への導入を指す。「外因性」分子とは、細胞内に通常は存在しないが、１つ以上の遺伝学的方法、生化学的方法、または他の方法によって細胞に導入され得る分子、構築物、因子等である。「細胞内での通常の存在」とは、細胞の特定の発生段階及び環境条件に関して判断される。したがって、例えば、ニューロンの胚発生中にのみ存在する分子は、成体ニューロン細胞に関しては外因性分子である。外因性分子は、例えば、機能不全の内在性分子の機能型または正常に機能する内在性分子の機能不全型を含み得る。
外因性分子または因子は、とりわけ、例えば、コンビナトリアルケミストリープロセスによって生成される低分子、または高分子、例えば、タンパク質、核酸、炭水化物、脂質、糖タンパク質、リポタンパク質、多糖類、上記の分子の任意の修飾された誘導体、もしくは上記の分子のうちの１つ以上を含む任意の複合体であり得る。核酸には、ＤＮＡ及びＲＮＡが含まれ、一本鎖の場合も二本鎖の場合もあり、直鎖状、分岐状、または環状でもよく、任意の長さであり得る。核酸には、二重鎖を形成することが可能な核酸、及び三重鎖形成核酸が含まれる。例えば、米国特許第５，１７６，９９６号及び同第５，４２２，２５１号を参照されたい。タンパク質としては、ＤＮＡ結合タンパク質、転写因子、クロマチンリモデリング因子、メチル化ＤＮＡ結合タンパク質、ポリメラーゼ、メチラーゼ、デメチラーゼ、アセチラーゼ、デアセチラーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、インテグラーゼ、リコンビナーゼ、リガーゼ、トポイソメラーゼ、ギラーゼ、及びヘリカーゼが挙げられるがこれらに限定されない。
「内在性」という用語は、細胞内に存在する指示対象の分子またはポリペプチドを指す。同様に、コード核酸の発現に関して使用される場合の該用語は、細胞内に含まれる、外因的に導入されたのではないコード核酸の発現を指す。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一性」パーセントという用語は、下記の配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮまたは当業者に利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用してまたは目視検査によって測定して、最大限に対応するように比較及びアラインした場合に同じであるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。用途に応じて、「同一性」パーセントは、比較されている配列のある領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在する場合もあれば、代替的に、比較される２つの配列の全長にわたって存在する場合もある。配列比較のために、通常は、一方の配列が、試験配列の比較対象となる参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要に応じてサブシーケンス座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムが、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列（複数可）の配列同一性パーセントを算出する。
比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装によって（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）、または目視検査によって実施することができる（全般的にはＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ（下記）参照）。
配列同一性及び配列類似性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載される、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して一般公開されている。
「対象」及び「個体」という用語は、本明細書では同義で使用され、細胞を得ることができる及び／または本明細書に記載の細胞による治療（予防的治療を含む）が提供される、動物、例えば、ヒトを指す。ヒト対象等の特定の動物に特有である感染症、状態、または病状の治療の場合、対象という用語は、その特定の動物を指す。本明細書において同義で使用される「非ヒト動物」及び「非ヒト哺乳類」としては、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、及び非ヒト霊長類等の哺乳類が挙げられる。「対象」という用語はまた、哺乳類、爬虫類、両生類、及び魚類を含むがこれらに限定されない任意の脊椎動物も包含する。しかしながら、有利には、該対象は、ヒト等の哺乳類、または、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等の飼育哺乳類、もしくは、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ等の生産哺乳動物等の他の哺乳類である。
特許請求の範囲は、いずれの任意選択的な要素も除外するように起草され得ることに留意されたい。したがって、本明細書の記載は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連した「単に」、「のみ」等のような排他的な専門用語の使用のため、または「否定的な」制限の使用のための先行詞として役立つよう意図される。本開示を読む当業者には明らかになる通り、本明細書に記載及び例示される個々の実施形態の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のうちのいずれかの特徴から容易に切り離されるか、またはそれと組み合わされる別々の構成要素及び特徴を有する。任意の列挙される方法は、列挙される事象の順序で行われる場合もあれば、論理的に可能な任意の他の順序で行われる場合もある。本明細書に記載の方法及び材料と類似または同等の任意の方法及び材料が、本技術の実施または試験においても使用され得るが、代表的な例示的方法及び材料をここに記載する。
本明細書に記載の通り、以下の用語が使用され、これらは下記に示すように定義される。
本技術をさらに説明する前に、本技術が記載される特定の実施形態に限定されず、したがって当然のことながら、様々であり得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、本技術の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定するものとしては意図されないことも理解されたい。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。値の範囲が提供される場合、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値と下限値との間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本技術内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は独立して、より小さい範囲内に含まれてもよく、また、表示範囲内の任意の具体的に除外される限界値を条件として、本技術内に包含される。表示範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の片方または両方を除外する範囲もまた、本技術に含まれる。ある特定の範囲は、本明細書で、数値の前に「約」という用語を付けて提示される。「約」という用語は、それが前に付く数そのもの、ならびにこの用語が前に付く数に近いまたはそれに近似する数に文字通りの支持を提供するように本明細書で使用される。ある数が具体的に列挙される数に近いまたはそれに近似するかどうかを決定する際、その近いまたは近似する列挙されていない数は、提示される文脈において、具体的に列挙される数の実質的な同等値を提供する数であり得る。
本明細書で引用されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが明確かつ個別に示された場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。さらに、引用される各刊行物、特許、または特許出願は、それらの刊行物が関連して引用される内容を開示及び説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。いずれの刊行物の引用も、出願日より前のその開示のためのものであり、本明細書に記載の本技術が、先行開示に基づいてかかる刊行物に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されるべきではない。さらに、提供される刊行物の日付は、実際の刊行物の日付とは異なる場合があり、独立して確認する必要があり得る。
ＩＩ．ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）、及び免疫系
本明細書に提供するのは、以前に対象に投与または移植された、ＣＤ４７を発現する細胞の集団を調節するための方法及び組成物であり、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を該対象に投与することを含む。
Ａ．ＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸／相互作用
表面抗原分類４７（ＣＤ４７）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する高度にグリコシル化され、遍在的に発現する細胞表面タンパク質である。ＣＤ４７は、増殖、接着、移動、アポトーシス及び食作用等の重要な細胞機能において役割を果たす。ＣＤ４７の分子構造は、細胞外免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）様ドメイン、膜貫通ドメイン、及び選択的スプライスによる短い細胞質尾部を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７は、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）とトランスで相互作用し、感染部位への顆粒球及びＴ細胞の動員において役割を果たす。ＳＩＲＰαは、マクロファージ及び樹状細胞の表面で発現するＩｇスーパーファミリー受容体をコードし、その細胞質領域には、食作用を阻害するカスケードを誘発することができる免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）が含まれる。
ＣＤ４７は、生物内の宿主細胞上で「自己」のマーカーとして機能する。いくつかの実施形態では、発現された場合、ＣＤ４７は、循環免疫細胞の表面でＳＩＲＰαに結合し、抑制性の「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを送達する。ＣＤ４７－ＳＩＲＰα結合により、ＳＩＲＰαのＩＴＩＭのリン酸化がもたらされ、これが一連の事象を誘発し、最終的に食作用を防ぎ得る。マクロファージによる標的細胞の食作用は、活性化シグナルと抑制シグナル（ＳＩＲＰα－ＣＤ４７）のバランスによって調節される。このバランスは、がん細胞によって変化し、これは、「自己」シグナルを取り込み、ＣＤ４７発現を上方制御して、免疫監視とその後の破壊を回避する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７結合剤及び／またはＳＩＲＰα結合剤、すなわち、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、抑制性ＳＩＲＰα－ＣＤ４７シグナルを遮断及び／または干渉し、それによって食作用及び／または他の免疫系機構を誘発する。
Ｂ．標的細胞の免疫系介在性の殺傷
本明細書に提供するのは、ある特定の実施形態では、以前に対象に投与されたまたは移植された細胞または細胞の集団に対する自然殺傷機構を誘発する方法であり、該細胞は、ＣＤ４７を発現または過剰発現するものであり、該方法は、該対象に対して１つ以上のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することによるものである。ある特定のこれらの実施形態では、該ＣＤ４７を発現または過剰発現する細胞は、ＣＤ４７をコードする１つ以上の外因性核酸を含む。誘発される自然殺傷機構は、ＮＫ介在性の殺傷、マクロファージ介在性の殺傷、ＡＤＣ及び／またはＣＤＣＣを含めた１つ以上の免疫細胞介在性の殺傷機構であり得る。
本明細書に提供するのは、ある特定の実施形態では、以前に対象に投与されたまたは移植された細胞または細胞の集団のＮＫ細胞介在性の殺傷を誘発する方法であり、該細胞は、ＣＤ４７を発現または過剰発現するように操作された細胞を含め、ＣＤ４７を発現または過剰発現するものである。
本明細書に提供するのは、ある特定の実施形態では、以前に対象に投与されたまたは移植された細胞または細胞の集団のマクロファージ介在性の殺傷を誘発する方法であり、該細胞は、ＣＤ４７を発現または過剰発現するように操作された細胞を含め、ＣＤ４７を発現または過剰発現するものである。マクロファージは、自然免疫の重要な構成要素であり、食作用を通じて腫瘍の成長を阻害することができる。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、顆粒球、単球、及び樹状細胞を含めた骨髄細胞の表面で発現される。マクロファージが、標的細胞、例えば、がん細胞または他の外因性細胞のＣＤ４７にＳＩＲＰαを介して結合すると、マクロファージ介在性の標的細胞の殺傷が阻害される。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰα結合剤及び／またはＣＤ４７結合剤、すなわち、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、マクロファージ介在性の食作用の阻害を遮断及び／または干渉し、ＣＤ４７を発現する標的細胞のマクロファージ介在性の殺傷を誘発する。
本明細書に提供するのは、ある特定の実施形態では、以前に対象に投与されたまたは移植された細胞または細胞の集団の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）介在性の殺傷を誘発する方法であり、該細胞は、ＣＤ４７を発現または過剰発現するように操作された細胞を含め、ＣＤ４７を発現または過剰発現するものである。いくつかの免疫細胞は、ＡＤＣＣとして知られているプロセスである、抗体によってオプソニン化されたがん細胞の腫瘍細胞死の誘導を媒介する。いくつかの免疫細胞は、抑制性受容体、例えば、ＳＩＲＰαを備えており、これは標的細胞、例えば、がん細胞または他の外因性の細胞のＣＤ４７に結合し、免疫細胞介在性のＡＤＣＣを阻害する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰα結合剤及び／またはＣＤ４７結合剤、すなわち、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、免疫細胞介在性のＡＤＣＣの阻害を遮断及び／または干渉し、ＣＤ４７を発現する標的細胞のＡＤＣＣ介在性の殺傷を誘発する。ＡＤＣＣは、様々なＦｃ受容体の活性化を通して、及び様々なＦｃ受容体発現細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、及び好中球によって媒介され得る。いくつかの実施形態では、ＡＤＣＣは、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ４を含むＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤によって効果的に誘発される。
本明細書に提供するのは、ある特定の実施形態では、以前に対象に投与されたまたは移植された細胞または細胞の集団の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）介在性の殺傷を誘発する方法であり、該細胞は、ＣＤ４７を発現または過剰発現するように操作された細胞を含め、ＣＤ４７を発現または過剰発現するものである。いくつかの実施形態では、補体系は、標的細胞上で、ＣＤ４７等の抗原と複合体を形成したＦｃドメイン含有抗体の結合を介して活性化される。Ｃ１ｑは、抗体－抗原複合体に含まれる抗体のＦｃドメインに結合し、他の補体タンパク質の結合を引き起こし、最終的に１つ以上の細胞溶解性膜攻撃複合体（ＭＡＣ）の形成に至り、標的細胞の膜に細孔を形成し、細胞溶解／死をもたらす。いくつかの実施形態では、ＣＤＣは、ＩｇＧ１を含むＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤によって効果的に誘発される。
本明細書に提供する方法のいくつかの実施形態では、ＣＤ４７をコードする１つ以上の核酸を含む及び／またはＣＤ４７を発現または過剰発現する細胞または細胞の集団は、配列番号１（ＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿００１７７７．４に記載のヌクレオチド配列のコード配列（ＣＤＳ）もしくは配列番号３（ＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿１９８７９３．２に記載のヌクレオチド配列のＣＤＳ）に記載のヌクレオチド配列、または配列番号１もしくは配列番号３と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるヌクレオチド配列を含む。ある特定のこれらの実施形態では、該ＣＤ４７をコードする核酸は、外因性である。ある特定の実施形態では、該細胞によって発現または過剰発現されるＣＤ４７は、配列番号２もしくは配列番号４に記載のアミノ酸配列、または配列番号２もしくは配列番号４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７をコードするヌクレオチド配列は、哺乳類細胞、例えば、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７をコードするコドン最適化ヌクレオチド配列は、配列番号５に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一）である。
Figure 2023545056000002
Figure 2023545056000003
Figure 2023545056000004
Ｃ．操作された細胞でのＣＤ４７発現を使用した免疫系の回避
本明細書に提供するのは、外因的にＣＤ４７を発現する操作された細胞及びその使用方法である。いくつかの実施形態では、かかるＣＤ４７発現細胞は、患者に投与され、場合によっては、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与前に投与される。理解されるように、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻害または遮断することができる上記の作用物質のいずれかを、任意の組み合わせで使用し、本明細書に記載の免疫認識を回避する操作された細胞のいずれかに対する安全スイッチとして機能させることができる。
いくつかの実施形態では、免疫認識または応答を回避することができる（例えば、免疫原性の低下を示す、または低免疫原性である）ＣＤ４７を外因的に発現する細胞は、レシピエント対象に導入される。免疫認識の回避は、寛容原性因子及び補体阻害物質を含めた１つ以上の免疫抑制因子または分子の過剰発現によって達成され得る。いくつかの実施形態では、該細胞はまた、ＭＨＣ ＩもしくはＭＨＣ ＩＩ、またはその両方（例えば、ＨＬＡ Ｉ及び／またはＨＬＡ ＩＩ）の発現の低下も示す。多くの実施形態では、該細胞はさらに、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）（例えば、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβ）の発現の低下または発現の欠如を示す。かかる細胞の詳細な説明、及び本明細書に記載されるもの等を生成する方法。
１つの実施形態では、免疫抑制因子の発現は、免疫調節因子であるＣＤ４７の発現の調節に基づく。ＣＤ４７は、いくつかの態様では、マクロファージによる食作用を遮断するための自然免疫系の一部としての「ｄｏ ｎｏｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルとして機能する自然免疫系の構成要素である。目的の細胞によって発現されるように操作され得る有用な免疫抑制因子としては、ＣＤ４７、ＣＤ２７、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４、Ｃ１阻害物質、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、ＴＧＦ－β、Ｃｄ７３、Ｃｄ３９、ＬＡＧ３、ＩＬ１ｒ２、Ａｃｋｒ２、Ｔｎｆｒｓｆ２２、Ｔｎｆｒｓｆ２３、Ｔｎｆｒｓｆ１０、Ｄａｄ１、またはＩＦＮγＲＩ ｄ３９が挙げられるがこれらに限定されず、２０１８年６月１２日に出願されたＷＯ２０１８２２７２８６に記載されているものが含まれ、そこに提供されている配列、表１、及び配列表を含めたその内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７、ならびに、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｇ（Ｈ２－Ｍ３）、ＦＡＳＬ（ＦＡＳＬＧ）、ＣＣＬ２１（Ｃｃｌ２１ ｂ）、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９（Ｓｐｉ６）、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）さらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＤＵＸ４を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＰＤ－Ｌ１を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＤ２４を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＤ４６を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＤ５５を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＤ５９を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＤ２００を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＨＬＡ－Ｇを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＦＡＳＬを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＣＣＬ２１を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＭｆｇｅ８を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９（Ｓｅｒｐｉｎｂ９）を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ １、ＨＬＡＧ、ＣＤ２００、ＦＡＳＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４、Ｃ１阻害物質、ＩＤＯ１、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９を含む群から選択される１つ以上の免疫抑制因子を発現するように改変された細胞またはその集団を産生する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４、Ｃ１阻害物質、ＩＤＯ１、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９を含む群から選択される１つ以上の免疫抑制因子を発現するように改変された細胞またはその集団を提供する。他の実施形態では、該免疫抑制因子は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＮＬＲＣ５、ＴＡＰ１、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＲＦＸ－ＡＮＫ、ＮＦＹ－Ａ、ＲＦＸ５、ＲＦＸ－ＡＰ、ＨＬＡ－Ｇ、ＨＬＡ－Ｅ、ＮＦＹ－Ｂ、ＰＤ－Ｌ１、ＮＦＹ－Ｃ、ＩＲＦ１、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、Ｂ７－１、ＣＤ４７、Ｂ７－２、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＳＬＡＭ、ＣＤ２２６、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＣＤ２４４、ＬＦＡ－１、ＳＴ２、ＨＬＡ－Ｆ、ＣＤ３０、Ｂ７－Ｈ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＬＴ、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ５８、ＣＤ２、及びＨＥＬＩＯＳを含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫抑制因子は、該因子の発現を保護するための内在性の遺伝子座に組み込まれるか、または該因子を有するベクターカセットに組み込まれる。いくつかの実施形態では、免疫抑制因子は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、及びセーフ・ハーバー遺伝子座から選択される部位に挿入される。セーフ・ハーバー遺伝子座の非限定的な例としては、ＡＡＶＳ１（別名、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ）、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３（別名、ＣＤ１４２）、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１（別名、ＣＤ９１）、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座が挙げられるがこれらに限定されない。該免疫抑制因子は、例えば、イントロン、エクソン、及び／または遺伝子コード領域（別名、ＣｏＤｉｎｇ配列、または「ＣＤＳ」）を含めたセーフ・ハーバー遺伝子座の適切な領域に挿入され得る。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１遺伝子座、ＣＣＲ５遺伝子座、及びＣＬＹＢＬ遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該挿入は、該特定のゲノム遺伝子座の１つのアレルで行われる。いくつかの実施形態では、該挿入は、該特定のゲノム遺伝子座の両方のアレルで行われる。これらの実施形態のいずれかでは、該標的ゲノム遺伝子座に挿入される導入遺伝子の方向は、その遺伝子座に含まれる遺伝子の方向と同じでも反対でもよい。
本明細書に提供するのは、生存可能な任意の移植細胞型源を示す操作された細胞である。かかる細胞は、１つ以上の免疫抑制因子の発現を用いて、レシピエント対象への投与に際して適応免疫及び自然免疫による拒絶反応から保護され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に概説される細胞は、自然免疫細胞による拒絶反応を受けない。場合によっては、該細胞は、ＮＫ細胞介在性の溶解の影響を受けにくい。場合によっては、本明細書に記載の細胞は、マクロファージによる貪食の影響を受けにくい。
いくつかの態様では、該操作された細胞は、多能性幹細胞、分化した細胞、または初代Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該分化した細胞は、特定の細胞型に対して選択された分化プロトコルを使用して多能性幹細胞から生成される。いくつかの実施形態では、該初代Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、該初代Ｔ細胞は、レシピエント対象（例えば、細胞を投与される患者）とは異なる１名以上のドナー対象に由来する初代Ｔ細胞のプールに由来する。該初代Ｔ細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、１００名またはそれ以上のドナー対象から得ることができ、任意に、一緒にプールされ得る。いくつかの実施形態では、該初代Ｔ細胞は、１個体または複数の個体から採取され、場合によっては、該初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、インビトロで培養される。いくつかの実施形態では、該初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、外因的にＣＤ４７を発現するように操作され、インビトロで培養される。
ある特定の実施形態では、該初代Ｔ細胞または初代Ｔ細胞のプールは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。ＣＡＲ（別名、キメラ免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、または人工Ｔ細胞受容体）は、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）に特定のタンパク質を標的とする新たな能力を与えるように操作された受容体タンパク質である。該受容体は、抗原結合機能とＴ細胞活性化機能の両方を単一の受容体に組み合わせているためにキメラである。該ＣＡＲは、当業者に知られている任意のものであり得る。有用なＣＡＲとしては、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡを含む群から選択される抗原に結合するものが挙げられる。場合によっては、該ＣＡＲは、チサゲンレクルユーセル及びアキシカブタゲンシロルユーセル、または臨床試験で検査中のもの等であるがこれらに限定されないＦＤＡで承認されているＣＡＲ－Ｔ細胞療法に使用されているものと同じであるか、またはそれに相当する。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲである。
ある特定の実施形態では、該ＣＡＲは、Ｎ末端にシグナルペプチドを含み得る。シグナルペプチドの非限定的な例としては、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＩｇＫシグナルペプチド、及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子受容体サブユニットアルファ（ＧＭＣＳＦＲ－α、別名、コロニー刺激因子２受容体サブユニットアルファ（ＣＳＦ２ＲＡ））シグナルペプチド、ならびにそれらのバリアントが挙げられる。それらのアミノ酸配列を以下の表２に示す。
Figure 2023545056000005
ある特定の実施形態では、該ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つの標的抗原または複数の標的抗原に特異的な１つ以上の抗体を含み得る。該抗体は、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、または単一ドメイン抗体断片、例えば、ＶＨＨでもよい。ある特定の実施形態では、該ｓｃＦｖは、リンカーによって結合された抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。該ＶＨ及び該ＶＬは、いずれの順序、すなわち、ＶＨ－リンカー－ＶＬで結合されても、ＶＬ－リンカー－ＶＨで結合されてもよい。リンカーの非限定的な例としては、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー、（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは、正の整数、例えば、１、２、３、４、５、６等であり得る）リンカー、及びそれらのバリアントが挙げられる。ある特定の実施形態では、該抗原は、腫瘍細胞で排他的にまたは優先的に発現される抗原である場合もあれば、自己免疫疾患または炎症性疾患に特徴的な抗原の場合もある。例示的な標的抗原としては、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ７０、カッパ、ラムダ、及びＢ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）（白血病に関連）、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３８、ＣＤ１３８、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＴＡＣＩ、及びＢＣＭＡ（骨髄腫に関連）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｂ７Ｈ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＰＨＡ２、ＦＡＰ、ＦＲα、ＩＬ－１３Ｒα、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、及びＲＯＲ１（固形腫瘍に関連）が挙げられるがこれらに限定されない。これらの実施形態のいずれにおいても、該ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される場合もあれば、細胞外結合ドメインの機能を増大させるバリアント配列を有する場合もある。
ある特定の実施形態では、該ＣＡＲは、スペーサーとも呼ばれるヒンジドメインを含み得る。「ヒンジ」及び「スペーサ」という用語は、本開示では同義で使用され得る。ヒンジドメインの非限定的な例としては、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及びそれらのバリアントが挙げられる。それらのアミノ酸配列を以下の表３に示す。
Figure 2023545056000006
ある特定の実施形態では、該ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータもしくはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、またはその機能的バリアントの膜貫通領域を、これらの配列の各々のヒト型を含めて含み得る。他の実施形態では、該膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ、及びＦＧＦＲ２Ｂ、またはその機能的バリアントの膜貫通領域を、これらの配列の各々のヒト型を含めて含み得る。表４は、いくつかの例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列を示す。
Figure 2023545056000007
ある特定の実施形態では、該ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、ＰＤＣＤ６、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦβ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦα、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／カイ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡ Ｃｌａｓｓ Ｉ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ３ζ、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びそれらの機能的バリアントから、それらの配列の各々のヒト型を含めて選択される１つ以上のシグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメイン及び／または細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ３ζドメイン、ＩＴＡＭ、ＣＤ２８ドメイン、４－１ＢＢドメイン、またはそれらの機能的バリアントから選択される１つ以上のシグナル伝達ドメインを含む。表５は、いくつかの例示的な細胞内共刺激及び／またはシグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を示す。ある特定の実施形態では、後述のチサゲンレクルユーセルの場合のように、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、アミノ酸位置１４に変異、例えば、グルタミン（Ｑ）からリジン（Ｋ）への変異を有し得る（配列番号１１５参照）。
Figure 2023545056000008
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ベクターを使用してＴ細胞または他の免疫細胞に挿入される。ある特定のこれらの実施形態では、該ベクターは、該ＣＡＲの発現のための単一の発現カセットを含む。他の実施形態では、該ベクターは、２つ以上の発現カセットを含む多シストロン性ベクター、例えば、バイシストロン性ベクター、トリシストロン性ベクター、またはクワッドシストロン性ベクターであり、宿主細胞において１つのｍＲＮＡ転写物から２つ以上の別個のタンパク質を同時に発現させる。これらの実施形態では、１つの発現カセットがＣＡＲを発現し得ると同時に、１つ以上のさらなる発現カセットが、例えば、ＣＤ４７、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８を含めたさらなる因子を発現し得る。ある特定の実施形態では、該２つ以上の発現カセットは、単一のプロモーターの制御下にあり、１つの転写物から目的のタンパク質の同時発現を達成するために、１つ以上の切断部位によって互いに分離される。他の実施形態では、該２つ以上の遺伝子は、別個のプロモーターの制御下にあってもよい。ある特定の実施形態では、該多シストロン性ベクターは、さらに、安全スイッチを含んでもよい。該多シストロン性ベクターは、例えば、プラスミド、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ファージ、及び相同組み換え修復（ＨＤＲ）ベースのドナーベクターを含めた、宿主細胞へのヌクレオチド配列の導入に適した任意のタイプのベクターであり得る。
ある特定の実施形態では、該多シストロン性ベクターの２つ以上の発現カセットは、１つ以上の切断部位によって分離され得る。いくつかの実施形態では、該１つ以上の切断部位は、１つ以上の自己切断部位を含む。いくつかの実施形態では、該自己切断部位は、２Ａ部位を含む。２Ａペプチドは、ピコルナウイルスで最初に発見された１８～２２アミノ酸長のペプチドのクラスであり、タンパク質の翻訳中にリボソームスキッピングを誘導することができるため、同じｍＲＮＡ転写物から等量の複数の遺伝子を産生する。２Ａペプチドは、グリシン（Ｇ）残基とプロリン（Ｐ）残基の間のＣ末端でのペプチド結合の合成をリボソームにスキップさせることにより、ｍＲＮＡ転写物を「切断」するように機能し、２Ａ配列の末端と、次の下流のペプチドの間の分離をもたらす。分子生物学で一般に使用される４つの２Ａペプチド、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａが存在し、その配列を表６にまとめる。グリシン－セリン－グリシン（ＧＳＧ）リンカーは、切断効率を高めるために２ＡペプチドのＮ末端に任意に追加される。本開示における配列の前後の「（）」の使用は、囲まれた配列が任意であることを意味する。
Figure 2023545056000009
いくつかの実施形態では、該１つ以上の切断部位は、さらに、１つ以上のプロテアーゼ部位を含む。該１つ以上のプロテアーゼ部位は、多シストロン性ベクターの５’から３’の方向で、自己切断部位（例えば、２Ａ部位）に先行する場合も後続する場合もある。該プロテアーゼ部位は、最初の発現産物が次の発現カセットの翻訳前に放出されるように、完全転写物の翻訳後または各発現カセットの翻訳後にプロテアーゼによって切断され得る。これらの実施形態では、２Ａ部位に加えて、特に５’から３’の方向で２Ａ部位の前にプロテアーゼ部位を有することにより、目的の発現タンパク質に結合した余分なアミノ酸残基の数が減少し得る。いくつかの実施形態では、該プロテアーゼ部位は、フーリン部位、別名、Ｐａｉｒｅｄ ｂａｓｉｃ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ Ｃｌｅａｖｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ（ＰＡＣＥ）部位を含む。少なくとも３つのフーリン切断配列、ＦＣ１、ＦＣ２、及びＦＣ３が存在し、そのアミノ酸配列を表７にまとめる。２Ａ部位と同様に、切断効率のために１つ以上の任意のグリシン－セリン－グリシン（ＧＳＧ）配列を含むことができる。
Figure 2023545056000010
いくつかの実施形態では、該１つ以上の切断部位は、１つ以上の自己切断部位、１つ以上のプロテアーゼ部位、及び／またはそれらの任意の組み合わせを含む。例えば、該切断部位は、２Ａ部位のみを含むことができる。別の例では、該切断部位は、ＦＣ２またはＦＣ３部位に続いて２Ａ部位を含むことができる。これらの実施形態では、該１つ以上の自己切断部位は、同じであっても異なっていてもよい。同様に、該１つ以上のプロテアーゼ部位は、同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの実施形態では、該多シストロン性ベクターは、哺乳類細胞において構成的遺伝子発現を駆動するプロモーターを含む。頻繁に使用されるものとしては、例えば、伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター（Ｇｒｅｅｎａｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １８：３５５－３６０（１９８２））、サル空胞ウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター（Ｆｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２７３：１１３－１２０（１９７８））、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター（Ａｄｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ６０（１）：６５－７４（１９８７））、ヒトベータアクチンプロモーター、ポリユビキチンＣ遺伝子（ＵＢＣ）プロモーター、及びＣＡＧプロモーター（Ｎｉｔｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９（１９９１））が挙げられる。哺乳類細胞（例えば、Ｔ細胞）においてＣＡＲ導入遺伝子を発現することが可能なプロモーターの例は、ＥＦ１αプロモーターである。天然のＥＦ１αプロモーターは、リボソームへのアミノアシルｔＲＮＡの酵素的送達を担う伸長因子１複合体のアルファサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１αプロモーターは、哺乳類の発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローニングされた導入遺伝子からのＣＡＲ発現の駆動に効果的であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）を参照されたい。
他の実施形態では、該多シストロン性ベクターは、誘導性プロモーターを含む。構成的プロモーターとは異なり、誘導性プロモーターは、ある特定の刺激（例えば、化学物質、温度、光）に応答してオンとオフの状態を切り替えることができ、組織または細胞特異的に調節され得る。頻繁に使用される誘導性プロモーターの非限定的な例としては、テトラサイクリンオン（Ｔｅｔ－Ｏｎ）系及びテトラサイクリンオフ（Ｔｅｔ－Ｏｆｆ）系が挙げられ、これらは、ミニマルプロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）の上流に配置されたテトラサイクリン応答エレメント（ＴＲＥ）を利用する（Ｇｏｓｓｅｎ ＆ Ｂｕｊａｒｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９（１２）：５５４７－５５５１（１９９２））。該ＴＲＥは、１９ヌクレオチドのテトラサイクリンオペレーター（ｔｅｔＯ）配列の７つのリピートで構成され、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）によって認識され得る。Ｔｅｔ－Ｏｆｆ系では、ｔｅｔＲを単純ヘルペスウイルスのビリオンタンパク質１６の活性化ドメインと融合させることにより、テトラサイクリン制御トランス活性化因子（ｔＴＡ）が開発された。テトラサイクリンまたはその類似体（例えば、ドキシサイクリン）が存在しない場合、ｔＴＡは、ＴＲＥのｔｅｔＯ配列に結合して発現を駆動し、テトラサイクリンが存在する場合は、ｒＴＡがＴＲＥではなくテトラサイクリンに結合し、遺伝子発現が低下する。逆に、Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、逆転写活性化因子（ｒｔＴＡ）がテトラサイクリン依存性抑制に重要なアミノ酸残基の突然変異誘発によって生成され、このｒｔＴＡがＴＲＥで結合し、テトラサイクリンまたはドキシサイクリンの存在下で遺伝子発現を駆動する（Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８（５２１８）：１７６６－１７６９（１９９５））。誘導性プロモーターの他の例としては、例えば、ＡｌｃＡ、ＬｅｘＡ、及びＣｒｅが挙げられる。
いくつかの実施形態では、該多シストロン性ベクターは、第１の発現カセットの前にＫｏｚａｋコンセンサス配列を含む。Ｋｏｚａｋコンセンサス配列は、ほとんどの真核生物のｍＲＮＡ転写物でタンパク質翻訳開始部位として機能し、リボソームのアセンブリ及び翻訳開始を媒介する核酸モチーフである。いくつかの実施形態では、該Ｋｏｚａｋコンセンサス配列は、配列番号９２に示す配列を含むかまたはそれからなり、ここで、ｒはプリン（すなわち、ａまたはｇ）である：（ｇｃｃ）ｇｃｃｒｃｃａｔｇｇ（配列番号９２）。
いくつかの実施形態では、該多シストロン性ベクターは、第２の発現カセットの後にウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含む。ＷＰＲＥは、転写されると発現を促進する三次構造を創出するＤＮＡ配列である。該ＷＰＲＥ配列は、一般に、ウイルスベクターによって送達される遺伝子の発現を増加させるために使用される。いくつかの実施形態では、該ＷＰＲＥ配列は、配列番号９３に記載のアミノ酸配列または配列番号９３に記載の配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる：
ａａｔｃａａｃｃｔｃｔｇｇａｔｔａｃａａａａｔｔｔｇｔｇａａａｇａｔｔｇａｃｔｇｇｔａｔｔｃｔｔａａｃｔａｔｇｔｔｇｃｔｃｃｔｔｔｔａｃｇｃｔａｔｇｔｇｇａｔａｃｇｃｔｇｃｔｔｔａａｔｇｃｃｔｔｔｇｔａｔｃａｔｇｃｔａｔｔｇｃｔｔｃｃｃｇｔａｔｇｇｃｔｔｔｃａｔｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃｔｔｇｔａｔａａａｔｃｃｔｇｇｔｔｇｃｔｇｔｃｔｃｔｔｔａｔｇａｇｇａｇｔｔｇｔｇｇｃｃｃｇｔｔｇｔｃａｇｇｃａａｃｇｔｇｇｃｇｔｇｇｔｇｔｇｃａｃｔｇｔｇｔｔｔｇｃｔｇａｃｇｃａａｃｃｃｃｃａｃｔｇｇｔｔｇｇｇｇｃａｔｔｇｃｃａｃｃａｃｃｔｇｔｃａｇｃｔｃｃｔｔｔｃｃｇｇｇａｃｔｔｔｃｇｃｔｔｔｃｃｃｃｃｔｃｃｃｔａｔｔｇｃｃａｃｇｇｃｇｇａａｃｔｃａｔｃｇｃｃｇｃｃｔｇｃｃｔｔｇｃｃｃｇｃｔｇｃｔｇｇａｃａｇｇｇｇｃｔｃｇｇｃｔｇｔｔｇｇｇｃａｃｔｇａｃａａｔｔｃｃｇｔｇｇｔｇｔｔｇｔｃｇｇｇｇａａａｔｃａｔｃｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔｔｇｇｃｔｇｃｔｃｇｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃｃａｃｃｔｇｇａｔｔｃｔｇｃｇｃｇｇｇａｃｇｔｃｃｔｔｃｔｇｃｔａｃｇｔｃｃｃｔｔｃｇｇｃｃｃｔｃａａｔｃｃａｇｃｇｇａｃｃｔｔｃｃｔｔｃｃｃｇｃｇｇｃｃｔｇｃｔｇｃｃｇｇｃｔｃｔｇｃｇｇｃｃｔｃｔｔｃｃｇｃｇｔｃｔｔｃｇｃｃｔｔｃｇｃｃｃｔｃａｇａｃｇａｇｔｃｇｇａｔｃｔｃｃｃｔｔｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｃｃｃｃｇｃ（配列番号９３）。
いくつかの実施形態では、該多シストロン性ベクターは、例えば、記載の相同組み換え修復（ＨＤＲ）ベースのアプローチによる、宿主細胞に含まれる特定の遺伝子座への部位特異的挿入（ノックイン）で用いる発現カセット及び／またはプロモーターを含む断片の両側にホモロジーアームを含む。挿入される多シストロン性ベクターの断片は、通常は少なくとも発現カセットを含み、任意にプロモーターも含み、標的挿入部位の直接上流及び下流に相同配列（すなわち、左ホモロジーアーム（ＬＨＡ）及び右ホモロジーアーム（ＲＨＡ））が配される。該ホモロジーアームは、該断片の標的ゲノム遺伝子座がＨＤＲの鋳型として機能するように特別に設計されている。各ホモロジーアームの長さは一般に、導入される挿入物のサイズに依存し、挿入が大きいほど長いホモロジーアームが必要になる。
ある特定の実施形態では、外因性のＣＡＲ及び外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現する細胞または細胞の集団は、２つの別個のベクターからＣＡＲ及びＣＤ４７を発現する。他の実施形態では、該外因性のＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、多シストロン性ベクター、例えば、該外因性のＣＡＲを発現する第１の発現カセット及び該外因性のＣＤ４７を発現する第２の発現カセットを含むバイシストロン性ベクターを介して細胞または細胞の集団に導入された。ある特定のこれらの実施形態では、該多シストロン性ベクターは、１つ以上のさらなる因子を発現する１つ以上のさらなる発現カセットを含んでもよい。細胞または細胞の集団が外因性のＣＡＲ及び外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードするバイシストロン性ベクターを含むある特定の実施形態では、該バイシストロン性ベクターは、レンチウイルスを介して該細胞（複数可）に導入された。
ＣＤ１９ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを直列に含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列または配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ１９、例えば、ヒトＣＤ１９に特異的である。該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される場合もあれば、細胞外結合ドメインの機能を増大させるバリアント配列を有するようにコドン最適化される場合もある。いくつかの実施形態では、該細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＦＭＣ６３モノクローナル抗体（ＦＭＣ６３）に由来するｓｃＦｖを含み、これは、リンカーによって結合されたＦＭＣ６３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。ＦＭＣ６３及び得られるｓｃＦｖは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／２１３３３７号に記載されており、これらの各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、全ＦＭＣ６３由来ｓｃＦｖ（ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖとも呼ばれる）及びその異なる部分のアミノ酸配列は、以下の表８に示される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号１９、２０、もしくは２５に記載のアミノ酸配列または配列番号１９、２０、もしくは２５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２１～２３及び２６～２８に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２１～２３に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２６～２８に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＶＨ部分とＶＬ部分を連結するリンカーは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、該Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーは、異なるリンカー、例えば、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を有する３ｘＧ４Ｓリンカーによって置換されてもよく、これにより、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を有する異なるＦＭＣ６３由来のｓｃＦｖが生じる。ある特定のこれらの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖは、配列番号２９に記載のアミノ酸配列または配列番号２９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
Figure 2023545056000011
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＪ２５Ｃ１（Ｂｅｊｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：２３４６－２３５１（１９９５））、ＨＤ３７（Ｐｅｚｕｔｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８（９）：２７９３－２７９９（１９８７））、４Ｇ７（Ｍｅｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ３：３０５－３２０（１９８４））、Ｂ４３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５））、ＢＬＹ３（Ｂｅｊｃｅｋ（１９９５））、Ｂ４（Ｆｒｅｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７０：４１８－４２７（１９８７））、Ｂ４ ＨＢ１２ｂ（Ｋａｎｓａｓ ＆ Ｔｅｄｄｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：４０９４－４１０２（１９９１）、Ｙａｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１５１７８－１５１８３（２００５）、Ｈｅｒｂｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３３５：２１３－２２２（２０１０））、ＢＵ１２（Ｃａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４８（１０）：２９８３－２９８７（１９９２））、及びＣＬＢ－ＣＤ１９（Ｄｅ Ｒｉｅ Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１８：３６８－３８１（１９８９））を含めたＣＤ１９に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含むかまたはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に記載のアミノ酸配列または配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列または配列番号１４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列または配列番号１５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。４－１ＢＢ、別名、ＣＤ１３７は、強力な共刺激シグナルをＴ細胞に伝達し、分化を促進し、Ｔリンパ球の長期生存を促進する。いくつかの実施形態では、該４－１ＢＢ共刺激ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、該４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の別の共刺激分子である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８共刺激ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを記載の通り含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメインを含む。ＣＤ３ζは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と会合してシグナルを生成するとともに、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化に必要な最初のシグナルを機能的に伝達するのに十分なゼータ鎖の細胞質ドメインに由来するアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列または配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１９または配列番号２９に示す配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１または配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、さらに、記載の通りシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１９または配列番号２９に示す配列を有するＣＤ１９特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１７のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、さらに、記載の通りシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１６に記載のヌクレオチド配列または配列番号１１６に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）のヌクレオチド配列によってコードされる（表９参照）。コードされるＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１７に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、または配列番号１１７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であり、以下の成分：ＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、市販のＣＤ１９ ＣＡＲの実施形態であり、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタジェンアウトルーセルを含めたＴ細胞によって発現される及び／またはコードされるＣＤ１９ ＣＡＲを含むがこれらに限定されない。チサゲンレクルユーセルは、以下の成分、すなわち、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－３ｘＧ４Ｓリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを備えたＣＤ１９ ＣＡＲを含む。チサゲンレクルユーセルに含まれるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列を表９に示し、配列の注釈を表１０に示す。リソカブタゲンマラルユーセルは、以下の成分、すなわち、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを備えたＣＤ１９ ＣＡＲを含む。リソカブタゲンマラルユーセルに含まれるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列を表９に示し、配列の注釈を表１１に示す。アキシカブタゲンシロルユーセルまたはその一部。アキシカブタゲンシロルユーセルは、以下の成分、すなわち、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを備えたＣＤ１９ ＣＡＲを含む。アキシカブタゲンシロルユーセルに含まれるＣＤ１９ ＣＡＲのヌクレオチド及びアミノ酸配列を表９に示し、配列の注釈を表１２に示す。ブレクスカブタジェンアウトルーセルまたはその一部。ブレクスカブタジェンアウトルーセルは、以下の成分、すなわち、ＧＭＣＳＦＲ－αシグナルペプチド、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを備えたＣＤ１９ ＣＡＲを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号３１、３３、もしくは３５に記載のヌクレオチド配列または配列番号３１、３３、もしくは３５に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）のヌクレオチド配列によってコードされる。コードされるＣＤ１９ ＣＡＲは、それぞれ、配列番号３２、３４、もしくは３６に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、またはそれぞれ、配列番号３２、３４、もしくは３６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である。
Figure 2023545056000012
Figure 2023545056000013
Figure 2023545056000014
Figure 2023545056000015
Figure 2023545056000016
Figure 2023545056000017
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ＣＤ２０ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ２０ ＣＡＲである。ＣＤ２０は、ｐｒｏ－Ｂ相の初期からＢ細胞成熟まで漸増するレベルでＢ細胞の表面に見られる抗原であり、ほとんどのＢ細胞腫瘍の細胞でも見られる抗原である。ＣＤ２０陽性細胞は、ホジキン病、骨髄腫、及び胸腺腫の症例でも見られることがある。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２０に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを直列に含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列または配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２０、例えば、ヒトＣＤ２０に特異的である。該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される場合もあれば、細胞外結合ドメインの機能を増大させるバリアント配列を有するようにコドン最適化される場合もある。いくつかの実施形態では、該細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、Ｌｅｕ１６、ＩＦ５、１．５．３、リツキシマブ、オビヌツズマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツムマブ、オドロネクスタマブ、ベルツズマブ、ウブリツキシマブ、及びオクレリズマブを含めたＣＤ２０に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含むかまたはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｌｅｕ１６モノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖを含み、これは、リンカーによって結合されたＬｅｕ１６の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．１４（１２）：１０２５－１０３３（２００１）を参照されたい。いくつかの実施形態では、該リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、該リンカーは、本明細書に記載のＷｈｉｔｌｏｗリンカーである。いくつかの実施形態では、全Ｌｅｕ１６由来ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ１６ ｓｃＦｖとも呼ばれる）の異なる部分及びその異なる部分のアミノ酸配列は、以下の表１３に示される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３７、３８、もしくは４２に記載のアミノ酸配列または配列番号３７、３８、もしくは４２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３９～４１、４３及び４４に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号３９～４１に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、配列番号４３～４４に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ２０特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
Figure 2023545056000019
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に記載のアミノ酸配列または配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列または配列番号１４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列または配列番号１５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列または配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１もしくは配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２０ ＣＡＲは、配列番号３７に示す配列を有するＣＤ２０特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１もしくは配列番号１のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
ＣＤ２２ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ２２ ＣＡＲである。ＣＤ２２は、主に成熟Ｂ細胞の表面に見られる膜貫通タンパク質であり、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達の抑制性受容体として機能する。ＣＤ２２は、Ｂ細胞リンパ腫及び白血病（例えば、Ｂ慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及びバーキットリンパ腫）の６０～７０％で発現し、Ｂ細胞の発生の初期段階の細胞表面または幹細胞には存在しない。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＣＤ２２に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを直列に含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列または配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＣＤ２２、例えば、ヒトＣＤ２２に特異的である。該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される場合もあれば、細胞外結合ドメインの機能を増大させるバリアント配列を有するようにコドン最適化される場合もある。いくつかの実施形態では、該細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ＳＭ０３、イノツズマブ、エプラツズマブ、モキセツモマブ、及びピナツズマブを含めたＣＤ２２に特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含むかまたはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ｍ９７１モノクローナル抗体（ｍ９７１）に由来するｓｃＦｖを含み、これは、リンカーによって結合されたｍ９７１の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、該リンカーは、３ｘＧ４Ｓリンカーである。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用され得る。いくつかの実施形態では、全ｍ９７１由来ｓｃＦｖ（ｍ９７１ ｓｃＦｖとも呼ばれる）及びその異なる部分のアミノ酸配列は、以下の表１４に示される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４５、４６、もしくは５０に記載のアミノ酸配列または配列番号４５、４６、もしくは５０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４７～４９及び５１～５３に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号４７～４９に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５１～５３に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ｍ９７１－Ｌ７由来のｓｃＦｖを含み、これは、親抗体ｍ９７１と比較して有意に改善（約２ｎＭから５０ｐＭ未満まで改善）されたＣＤ２２結合親和性を有するｍ９７１の親和性成熟バリアントである。いくつかの実施形態では、該ｍ９７１－Ｌ７に由来するｓｃＦｖは、３ｘＧ４Ｓリンカーによって結合されたｍ９７１－Ｌ７のＶＨ及びＶＬを含む。他の実施形態では、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーが代わりに使用され得る。いくつかの実施形態では、全ｍ９７１－Ｌ７由来ｓｃＦｖ（ｍ９７１－Ｌ７ ｓｃＦｖとも呼ばれる）及びその異なる部分のアミノ酸配列は、以下の表１４に示される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５４、５５、もしくは５９に記載のアミノ酸配列または配列番号５４、５５、もしくは５９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５６～５８及び６０～６２に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号５６～５８に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、配列番号６０～６２に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＣＤ２２特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
Figure 2023545056000020
Figure 2023545056000021
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、免疫毒素ＨＡ２２またはＢＬ２２を含む。免疫毒素ＢＬ２２及びＨＡ２２は、細菌毒素に融合したＣＤ２２に特異的なｓｃＦｖを含む治療薬であり、したがってＣＤ２２を発現するがん細胞の表面に結合してがん細胞を殺傷することができる。ＢＬ２２は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａの３８ｋＤａ切断型に融合した抗ＣＤ２２抗体ＲＦＢ４のｄｓＦｖを含む（Ｂａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１：１５４５－５０（２００５））。ＨＡ２２（ＣＡＴ８０１５、モキセツモマブパスドトクス）は、変異した高親和性型のＢＬ２２である（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（１）：６０７－１７（２００５））。ＣＤ２２に特異的なＨＡ２２及びＢＬ２２の抗原結合ドメインの適切な配列は、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第７，５４１，０３４号、第７，３５５，０１２号、及び第７，９８２，０１１号に開示されている。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に記載のアミノ酸配列または配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列または配列番号１４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列または配列番号１５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列または配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１もしくは配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１０のＣＤ２８ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ２２ ＣＡＲは、配列番号４５もしくは配列番号５４に示す配列を有するＣＤ２２特異的ｓｃＦｖ、配列番号１１もしくは配列番号１２のＩｇＧ４ヒンジドメイン、配列番号１５のＣＤ２８膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。
ＢＣＭＡ ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲである。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞系統の細胞に発現する腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）のメンバーであり、最終分化したＢ細胞または成熟Ｂリンパ球で最も高度に発現する。ＢＣＭＡは、長期にわたる液性免疫を維持するための形質細胞の生存の媒介に関与する。ＢＣＭＡの発現は、最近、いくつかのがん、例えば、多発性骨髄腫、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、様々な白血病、ならびに膠芽細胞腫と関連付けられている。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、シグナルペプチド、ＢＣＭＡに特異的に結合する細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン、及び／または細胞内シグナル伝達ドメインを直列に含み得る。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲのシグナルペプチドは、ＣＤ８αシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＩｇＫシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＫシグナルペプチドは、配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該シグナルペプチドは、ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該ＧＭＣＳＦＲ－αまたはＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドは、配列番号８に記載のアミノ酸配列または配列番号８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに特異的である。該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、宿主細胞における発現のためにコドン最適化される場合もあれば、細胞外結合ドメインの機能を増大させるバリアント配列を有するようにコドン最適化される場合もある。
いくつかの実施形態では、該細胞外結合ドメインは、免疫グロブリン分子の免疫原的に活性な部分、例えば、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、例えば、ベランタマブ、エルラナタマブ（ｅｒｌａｎａｔａｍａｂ）、テクリスタマブ、ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ、及びシルタカブタジンを含めたＢＣＭＡに特異的な抗体に由来する。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、該抗体のいずれかのＶＨ、ＶＬ、及び／または１つ以上のＣＤＲを含むかまたはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）に記載のＣＤ１１Ｄ５．３というマウスモノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖを含む。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１０４９４９号も参照されたい。該Ｃ１１Ｄ５．３由来のｓｃＦｖは、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカーによって結合されたＣ１１Ｄ５．３の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。それらのアミノ酸配列を以下の表１５に示す。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６３、６４、もしくは６８に記載のアミノ酸配列または配列番号６３、６４、もしくは６８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６５～６７及び６９～７１に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６５～６７に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号６９～７１に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９（８）：２０４８－２０６０（２０１３）及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／１０４９４９号に記載のＣ１２Ａ３．２という別のマウスモノクローナル抗体に由来するｓｃＦｖを含む。そのアミノ酸配列もまた以下の表１５に示す。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７２、７３、もしくは７７に記載のアミノ酸配列または配列番号７２、７３、もしくは７７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７４～７６及び７８～８０に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７４～７６に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号７８～８０に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２９（５）：５８５－６０１（２０１８）においてＢＢ２１２１と呼ばれるヒトＢＣＭＡに高度に特異的なマウスモノクローナル抗体を含む。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１２１６３８０５号も参照されたい。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．１１（１）：１４１（２０１８）に記載のＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍとも呼ばれるＢＣＭＡの２つのエピトープに結合することができる２つの重鎖（ＶＨＨ）の単一の可変断片を含む。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／０２８６４７号も参照されたい。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、Ｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１１（１）：２８３（２０２０）に記載のＦＨＶＨ３３とも呼ばれる完全ヒト重鎖可変ドメイン（ＦＨＶＨ）を含む。ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１９／００６０７２号も参照されたい。ＦＨＶＨ３３及びそのＣＤＲのアミノ酸配列を以下の表１５に示す。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号８１に記載のアミノ酸配列または配列番号８１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号８２～８４に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、米国特許第１１，０２６，９７５ Ｂ２号に記載のＣＴ１０３Ａ（またはＣＡＲ００８５）に由来するｓｃＦｖを含み、そのアミノ酸配列は以下の表１５に示される。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１１８、１１９、もしくは１２３に記載のアミノ酸配列または配列番号１１８、１１９、もしくは１２３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２０～１２２及び１２４～１２６に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２０～１２２に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインは、配列番号１２４～１２６に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のＣＤＲを備えた重鎖を含み得る。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖは、１つ以上のアミノ酸置換を含むか、または特定される配列のいずれかと少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）である配列を含む１つ以上のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、１つ以上の本明細書に記載のＣＤＲを含むかまたはそれからなる。
さらに、ＢＣＭＡを対象とするＣＡＲ及びバインダーは、米国出願公開第２０２０／０２４６３８１ Ａ１号及び第２０２０／０３３９６９９ Ａ１号に記載されており、その各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
Figure 2023545056000022
Figure 2023545056000023
Figure 2023545056000024
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲのヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ８αヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号９に記載のアミノ酸配列または配列番号９に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８ヒンジドメインは、配列番号１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１０に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジドメインは、配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１１もしくは配列番号１２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメイン、例えば、ヒトＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ４ヒンジ－Ｃｈ２－Ｃｈ３ドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１４に記載のアミノ酸配列または配列番号１４に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列または配列番号１５に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、例えば、ヒト４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態では、該細胞内共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、例えば、ヒトＣＤ２８共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ（ζ）シグナル伝達ドメイン、例えば、ヒトＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列または配列番号１８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載のＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのいずれか、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１６の４－１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、さらに、記載の通りシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を含む。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、記載の通りのＢＣＭＡ特異的細胞外結合ドメインのいずれか、配列番号９のＣＤ８αヒンジドメイン、配列番号１４のＣＤ８α膜貫通ドメイン、配列番号１７のＣＤ２８共刺激ドメイン、配列番号１８のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、及び／またはそれらのバリアント（すなわち、本開示の配列と少なくとも８０％同一、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を有する）を含む。これらの実施形態のいずれかでは、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、さらに、記載の通りのシグナルペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号１２７に記載のヌクレオチド配列または配列番号１２７に記載のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）のヌクレオチド配列によってコードされる（表１６参照）。コードされるＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号１２８に記載の対応するアミノ酸配列を有するか、または配列番号１２８に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一）であり、以下の成分：ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＴ１０３Ａ ｓｃＦｖ（ＶＬ－Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー－ＶＨ）、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ＢＣＭＡ ＣＡＲは、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ、ｂｂ２１２１とも呼ばれる）を含めたＢＣＭＡ ＣＡＲの市販の実施形態である。イデカブタゲンビクルユーセルは、以下の成分、すなわち、ＢＢ２１２１バインダー、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを備えたＢＣＭＡ ＣＡＲを含む。
Figure 2023545056000025
Figure 2023545056000026
いくつかの実施形態では、該初代Ｔ細胞または該初代Ｔ細胞のプールは、未改変の初代Ｔ細胞と比較して内在性Ｔ細胞受容体の発現の低下を示すように操作される。ある特定の実施形態では、該初代Ｔ細胞または該初代Ｔ細胞のプールは、未改変の初代Ｔ細胞と比較して、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、またはＣＴＬＡ４とＰＤ１の両方の発現の低下を示すように操作される。Ｔ細胞を含めた細胞を遺伝子改変する方法は、例えば、ＷＯ２０１６１８３０４１に詳述され、該開示は、表、付録、配列表及び図面を含め、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された細胞がレシピエント対象または患者に投与された後、該細胞はレシピエントにおいて不適切に拡大もしくは増殖するか、レシピエントの体内の不適切な位置で存在するか、または悪性に転換する。ある特定の実施形態では、かかる操作された細胞は、サイトカイン放出症候群を誘発するか、神経毒性を誘発するか、またはレシピエントの正常組織への攻撃（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ ｏｆｆ ｔｕｍｏｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）等の毒性を誘発する。その後、当該レシピエント対象は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの結合、シグナル伝達、活性ならびに機能を遮断、中和、不活性化、干渉する作用物質を投与される。
理論に拘束されることを望むものではないが、該操作された細胞の改変は、感染細胞、悪性細胞または非自己細胞のクリアランスに関与する当該レシピエントの免疫系のエフェクター細胞から、該操作された細胞を「覆い隠す」と考えられる。免疫系から細胞を「覆い隠すこと」により、体内で特定の細胞、例えば、同種異系細胞の存在及び持続が可能になる。場合によっては、本明細書に記載の操作された細胞は、もはや治療効果がない場合もあれば、レシピエントに望ましくない副作用を誘発する場合もある。有害事象の非限定的な例としては、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、ＧＶＨＤ、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、炎症、感染、吐き気、嘔吐、出血、間質性肺炎、呼吸器疾患、黄疸、体重減少、下痢、食欲不振、けいれん、腹痛、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）、生着不全、臓器損傷、不妊症、ホルモンの変化、異常な成長形成、白内障、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）等が挙げられる。したがって、該操作された細胞の存在をレシピエントの体内で制御する能力が安全のために重要である。したがって、該細胞の「覆いを外すこと」が、安全スイッチの役割を果たし、これは、免疫抑制因子、例えば、ＣＤ４７の機能を遮断または中和することによって達成され得る。
いくつかの実施形態では、該細胞をＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤と接触させると、該細胞はレシピエントの免疫系によって認識される。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、免疫抑制因子ＣＤ４７を発現し、その結果、１つ以上のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が当該レシピエントに投与されるまで、該細胞は、低免疫原性であるか、または免疫原性が低下している。ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の存在下では、該細胞は、覆いを外され、免疫細胞によって認識されて、細胞死またはクリアランスの標的となる。
１．ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩ複合体の発現の改変
本明細書に提供するのは、外因性のＣＤ４７タンパク質ならびにＭＨＣ Ｉヒト白血球抗原及び／またはＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列の改変を含む細胞である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ Ｉヒト白血球抗原またはＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原の発現が調節される。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ Ｉヒト白血球抗原及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原の発現が調節される。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ複合体の発現を低減または不活性化するため、ＭＨＣクラスＩＩ複合体の発現を低減または不活性化するため、当該レシピエント対象のＣＤ８ Ｔ細胞による直接の認識を防ぐため、及び／または該レシピエント対象によるＮＫ細胞の認識を回避するために遺伝子組み換えされる。いくつかの実施形態では、該細胞は、免疫原性の低下を示す。細胞の遺伝子組み換えの詳細な説明は、例えば、ＷＯ２０１６１８３０４１に見られ、該開示は、配列表、表、及び図面を含め、全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、ＭＨＣ Ｉタンパク質及びＭＨＣ ＩＩタンパク質の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列のゲノム改変を含む。ある特定の実施形態では、該細胞は、ＭＨＣ Ｉタンパク質またはＭＨＣ ＩＩタンパク質の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列のゲノム改変を含む。いくつかの態様では、１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列を改変するために遺伝子編集系が使用される。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＮＬＲＣ５を含む群から選択される１つ以上である。ある特定の実施形態では、該細胞のゲノムは、ＨＬＡ発現の重要な構成要素を低減または削除するように変更されている。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、不活性化変異（例えば、欠失、付加または置換）を含む。
いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＮＬＲＣ５、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４７、ＧＩＴＲ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＲＦ１、ＮＦＹ－Ａ、ＮＦＹ－Ｂ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＮＦＹ－Ｃ、ＯＸ４０、ＲＦＸ５、ＲＦＸ－ＡＮＫ、ＲＦＸ－ＡＰ、ＴＡＰ１、ＨＶＥＭ、ＳＬＡＭ、ＬＦＡ－１、ＳＴ２、ＣＤ２、ＣＤ３０、ＣＤ５８、ＣＤ７４、ＣＤ１６０、ＣＤ２２６、ＣＤ２４４、４－１ＢＢ、ＢＴＬＡ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＨＥＬＩＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＴＬＴ、ＶＩＳＴＡ、及びＮＫＧ２Ｄのリガンドを含む群からの１つ以上から選択される遺伝子の遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄのリガンドは、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｒａｅｔｌ ｅ、Ｒａｅｔｌ ｇ、Ｒａｅｔｌ Ｉ、Ｕｌｂｐｌ、Ｕｌｂｐ２、及びＵｌｂｐ３を含む群の１つ以上から選択される。
いくつかの態様では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続した連なりを削除するように編集されており、それによって細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ分子の表面発現が低減または排除されるゲノムを含む、細胞またはその集団を提供する。ある特定の態様では、本開示は、遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続した連なりを削除するように編集されており、それによって細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現が低減または排除されるゲノムを含む、細胞またはその集団を提供する。特定の態様では、本開示は、１つ以上の遺伝子が、ゲノムＤＮＡの連続した連なりを削除するように編集されており、それによって細胞またはその集団におけるＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩ分子の表面発現が低減または排除されるゲノムを含む、細胞またはその集団を提供する。
ある特定の実施形態では、ＭＨＣ ＩまたはＭＨＣ ＩＩ分子の発現は、ゲノムＤＮＡの連続した連なりを標的化して欠失させ、それによってＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＮＬＲＣ５を含むがこれらに限定されない群から選択される標的遺伝子の発現が低減または排除されることによって調節される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法は、ＣＩＩＴＡ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム編集すること、ならびにＢ２Ｍ及びＮＬＲＣ５等であるがこれらに限定されない１つ以上のさらなる標的ポリヌクレオチド配列を変更するようにかかる細胞のゲノムを編集することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法は、Ｂ２Ｍ遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム編集すること、ならびにＣＩＩＴＡ及びＮＬＲＣ５等であるがこれらに限定されない１つ以上のさらなる標的ポリヌクレオチド配列を変更するようにかかる細胞のゲノムを編集することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞及び方法は、ＮＬＲＣ５遺伝子配列を切断するようにヒト細胞をゲノム編集すること、ならびにＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ等であるがこれらに限定されない１つ以上のさらなる標的ポリヌクレオチド配列を変更するようにかかる細胞のゲノムを編集することを含む。
ｉ．ＣＩＩＴＡ
いくつかの態様では、本明細書に開示する技術は、クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）の発現を標的化し、調節すること（例えば、低減すること、減少させることまたは排除すること）によって、ＭＨＣ ＩＩ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減する、減少させるまたは排除する）。いくつかの態様では、該調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われる。ＣＩＩＴＡは、ＬＲ、またはヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのタンパク質のメンバーであり、ＭＨＣエンハンセオソームと会合することによってＭＨＣ ＩＩの転写を制御する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡのバリアントである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡのホモログである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＣＩＩＴＡのオルソログである。
いくつかの態様では、ＣＩＩＴＡの発現の低減または排除は、以下のＭＨＣクラスＩＩであるＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＲのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、該ＣＩＩＴＡ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼによるＣＩＩＴＡを標的とする遺伝子組み換えは、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該ＣＩＩＴＡ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該ＣＩＩＴＡ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６／１８３０４１の表１２の配列番号５１８４～３６３５２を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、該細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減している。
該ＣＩＩＴＡ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは知られており、本明細書に記載されている。１つの実施形態では、ＰＣＲによって得られるＣＩＩＴＡ遺伝子の遺伝子組み換え及びＨＬＡ－ＩＩ発現の低下は、ＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。別の実施形態では、ＣＩＩＴＡタンパク質の発現は、該ＣＩＩＴＡタンパク質に対する抗体によりプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子組み換えの存在が確認される。
ｉｉ．Ｂ２Ｍ
ある特定の実施形態では、記載されている本方法は、アクセサリー鎖Ｂ２Ｍの発現を標的化し、調節すること（例えば、低減すること、減少させることまたは排除すること）によって、ＭＨＣ－Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減する、減少させるまたは排除する）。いくつかの態様では、該調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われる。Ｂ２Ｍの発現を調節すること（例えば、低減すること、減少させることまたは削除すること）によって、ＭＨＣ－Ｉ分子の表面輸送が遮断され、該細胞が低免疫原性の状態になる。いくつかの実施形態では、該細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減している。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍのバリアントである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍのホモログである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、Ｂ２Ｍのオルソログである。
いくつかの態様では、Ｂ２Ｍの発現の減少または排除は、以下のＭＨＣ Ｉ分子、すなわち、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、該Ｂ２Ｍ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼによってＢ２Ｍ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えは、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びＢ２Ｍ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該Ｂ２Ｍ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６／１８３０４１の表１５の配列番号８１２４０～８５６４４を含む群から選択される。
Ｂ２Ｍ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは知られており、本明細書に記載されている。１つの実施形態では、ＰＣＲによって得られるＢ２Ｍ遺伝子の遺伝子組み換え及びＨＬＡ－Ｉ発現の低下は、ＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。別の実施形態では、Ｂ２Ｍタンパク質の発現は、該Ｂ２Ｍタンパク質に対する抗体によりプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子組み換えの存在が確認される。
ｉｉｉ．ＮＬＲＣ５
ある特定の態様では、本明細書に開示する方法は、ＮＬＲファミリー、ＣＡＲＤドメイン含有５／ＮＯＤ２７／ＣＬＲ１６．１（ＮＬＲＣ５）の発現を標的化し、調節すること（例えば、低減すること、減少させることまたは排除すること）によって、ＭＨＣ－Ｉ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減する、減少させるまたは排除する）。いくつかの態様では、該調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われる。ＮＬＲＣ５は、ＭＨＣ－Ｉ介在性の免疫応答の重要な調節因子であり、ＣＩＩＴＡと同様に、ＮＬＲＣ５は、ＩＦＮ－γによって高度に誘導性であり、核内に移行することができる。ＮＬＲＣ５は、ＭＨＣ－Ｉ遺伝子のプロモーターを活性化し、ＭＨＣ－Ｉ、及びＭＨＣ－Ｉ抗原提示に関与する関連遺伝子の転写を誘導する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５のバリアントである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５のホモログである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＮＬＲＣ５のオルソログである。
いくつかの態様では、ＮＬＲＣ５の発現の減少または排除は、以下のＭＨＣ Ｉ分子、すなわち、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのうちの１つ以上の発現を低減または排除する。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、該ＮＬＲＣ５遺伝子を標的とする遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼによるＮＬＲＣ５遺伝子を標的とする遺伝子組み換えは、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該ＮＬＲＣ５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該ＮＬＲＣ５遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、ＷＯ２０１６／１８３０４１の表１４の配列番号３６３５３～８１２３９を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、該細胞は、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低減している。
該ＮＬＲＣ５遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは知られており、本明細書に記載されている。１つの実施形態では、ＰＣＲによって得られるＮＬＲＣ５遺伝子の遺伝子組み換え及びＨＬＡ－Ｉ発現の低下は、ＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。別の実施形態では、ＮＬＲＣ５タンパク質の発現は、該ＮＬＲＣ５タンパク質に対する抗体によりプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子組み換えの存在が確認される。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣＬ２１、及びＭｆｇｅ８を含む群から選択される１つの発現を調節する改変を含む。いくつかの場合では、該細胞は、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣＬ２１、及びＭｆｇｅ８を含む群から選択される１つ以上の遺伝子またはタンパク質を過剰発現する。いくつかの場合では、該細胞は、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２００、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅ重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＦＡＳＬ、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣＬ２１、及びＭｆｇｅ８を含む群から選択される１つ以上の遺伝子またはタンパク質の発現の低下を示すように改変される。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド及び発現が低下したＭＨＣクラスＩ分子を含む。ある特定の実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド及び発現が低下したＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。さらに他の実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩ分子を含む。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド及び発現が低下したＢ２Ｍを含む。ある特定の実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド及び発現が低下したＣＩＩＴＡを含む。さらに他の実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ分子を含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＢ２Ｍを含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＣＩＩＴＡを含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下したＮＬＲＣ５を含む。いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチド、ならびに発現が低下した（ａ）Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、（ｂ）Ｂ２Ｍ及びＮＬＲＣ５、（ｃ）ＣＩＩＴＡ及びＮＬＲＣ５、ならびに（ｄ）Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＮＬＲＣ５を含む群のいずれかを含む。
２．ＴＣＲ複合体の発現の改変
本明細書に提供するのは、外因性のＣＤ４７タンパク質及びＴＣＲ複合体の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列の改変を含む細胞である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲαタンパク質またはＴＣＲβタンパク質の発現が調節される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲαタンパク質及びＴＣＲβタンパク質の発現が調節される。いくつかの実施形態では、該細胞は、１つ以上のＴＣＲ複合体の発現を低減または不活性化するため、ＴＣＲαの発現を低減または不活性化するため、ＴＣＲβの発現を低減または不活性化するため、及び／または免疫原性を低減するために遺伝子組み換えされる。細胞の遺伝子組み換えの詳細な説明は、例えば、ＷＯ２０１６１８３０４１に見られ、その開示は、配列表、表、及び図面を含め、全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、ＴＣＲαタンパク質及びＴＣＲβタンパク質の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列のゲノム改変を含む。ある特定の実施形態では、該細胞は、ＴＣＲαタンパク質またはＴＣＲβタンパク質の発現を調節する１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列のゲノム改変を含む。いくつかの態様では、１つ以上の標的ポリヌクレオチド配列を改変するために遺伝子編集系が使用される。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣ及びＴＲＢを含む群から選択される１つ以上である。ある特定の実施形態では、該細胞のゲノムは、１つ以上のＴＣＲ複合体の表面発現が変更されるように、ＴＣＲ発現の重要な構成要素を低減または削除するように変更されている。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、不活性化変異（例えば、欠失、付加または置換）を含む。
ｉ．ＴＲＡＣ
ある特定の実施形態では、本明細書に開示する技術は、Ｔ細胞受容体アルファ鎖の定常領域の発現を標的化し、調節すること（例えば、低減することまたは排除すること）によって、ＴＲＡＣ遺伝子を含めたＴＣＲ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの態様では、該調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われる。ＴＲＡＣの発現を調節すること（例えば、低減することまたは削除すること）により、本明細書に開示する技術に従って調節された細胞において、ＴＣＲ分子の表面輸送が遮断される。いくつかの実施形態では、そのゲノムがＴＲＡＣ遺伝子を含めたＴＣＲ遺伝子の発現を調節するように操作された細胞はまた、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低下している。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＣＲ複合体の発現は、ＴＲＡＣ遺伝子の発現が調節された細胞において変更される。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣのバリアントである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣのホモログである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＡＣのオルソログである。
いくつかの態様では、ＴＲＡＣの発現の減少または排除により、ＴＣＲの表面発現が低減または排除される。したがって、１つ以上のＴＣＲ複合体の発現は、未改変細胞での発現と比較して減少する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、該ＴＲＡＣタンパク質をコードする遺伝子座での遺伝子組み換えを含む。換言すれば、該細胞は、ＴＲＡＣ遺伝子座での遺伝子組み換えを含む。場合によっては、該ＴＲＡＣタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ番号Ｘ０２５９２．１に記載されている。場合によっては、該ＴＲＡＣ遺伝子座は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＧ＿００１３３２．３及びＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号２８７５５に記載されている。ある特定の場合には、ＴＲＡＣのアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８として示される。該ＴＲＡＣタンパク質及び遺伝子座のさらなる説明は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８、ＨＧＮＣ参照番号１２０２９、及びＯＭＩＭ参照番号１８６８８０に見出すことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、該ＴＲＡＣ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼによるＴＲＡＣ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えは、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該ＴＲＡＣ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該ＴＲＡＣ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３４８０７３の配列番号５３２～６０９及び９１０２～９７９７からなる群から選択される。
該ＴＲＡＣ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは知られており、本明細書に記載されている。１つの実施形態では、ＰＣＲによって得られるＴＲＡＣ遺伝子の遺伝子組み換え及びＴＣＲ発現の低下は、ＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。別の実施形態では、ＴＣＲαタンパク質の発現は、該ＴＣＲαタンパク質に対する抗体によりプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子組み換えの存在が確認される。
ｉｉ．ＴＲＢ
ある特定の実施形態では、本明細書に開示する技術は、Ｔ細胞受容体ベータ鎖の定常領域の発現を標的化し、調節すること（例えば、低減することまたは排除すること）によって、Ｔ細胞抗原受容体のベータ鎖（例えば、ＴＲＢまたはＴＣＲＢ遺伝子）をコードする遺伝子を含めたＴＣＲ遺伝子の発現を調節する（例えば、低減するまたは排除する）。いくつかの態様では、該調節は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して行われる。ＴＲＢの発現を調節すること（例えば、低減することまたは削除すること）により、本明細書に開示する技術に従って調節された細胞において、ＴＣＲ分子の表面輸送が遮断される。いくつかの実施形態では、そのゲノムがＴＲＢ遺伝子を含めたＴＣＲ遺伝子の発現を調節するように操作された細胞はまた、レシピエント対象において免疫応答を誘導する能力が低下している。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＣＲ複合体の発現は、ＴＲＢ遺伝子の発現が調節された細胞において変更される。
いくつかの実施形態では、本技術の標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢのバリアントである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢのホモログである。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ＴＲＢのオルソログである。
いくつかの態様では、ＴＲＢの発現の減少または排除により、ＴＣＲの表面発現が低減または排除される。したがって、１つ以上のＴＣＲ複合体の発現は、未改変細胞での発現と比較して減少する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、該ＴＲＢタンパク質をコードする遺伝子座での遺伝子組み換えを含む。換言すれば、該細胞は、ＴＲＢ遺伝子座にて遺伝子修飾を含む。場合によっては、該ＴＲＢタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ０ＤＳＥ２に記載されている。場合によっては、該ＴＲＢ遺伝子座は、ＲｅｆＳｅｑ．番号ＮＧ＿００１３３３．２及びＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ番号６９５７に記載されている。ある特定の場合には、ＴＲＢのアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８４８として示される。該ＴＲＢタンパク質及び遺伝子座のさらなる説明は、ＧｅｎＢａｎｋ番号Ｌ３６０９２．２、Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０ＤＳＥ２、及びＨＧＮＣ参照番号１２１５５に見出すことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される低免疫原性細胞は、該ＴＲＢ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼによるＴＲＢ遺伝子を標的とする遺伝子組み換えは、Ｃａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該ＴＲＢ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該ＴＲＢ遺伝子を特異的に標的とするための少なくとも１つのガイドリボ核酸配列は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３４８０７３の配列番号６１０～７６５及び９７９８～１０５３２からなる群から選択される。
該ＴＲＢ遺伝子が不活性化されているかどうかを試験するためのアッセイは知られており、本明細書に記載されている。１つの実施形態では、ＰＣＲによって得られるＴＲＢ遺伝子の遺伝子組み換え及びＴＣＲ発現の低下は、ＦＡＣＳ分析によってアッセイされ得る。別の実施形態では、ＴＣＲβタンパク質の発現は、該ＴＣＲβタンパク質に対する抗体によりプローブされた細胞溶解物のウェスタンブロットを使用して検出される。別の実施形態では、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を使用して、不活性化遺伝子組み換えの存在が確認される。
本明細書に提供するのは、対応する野生型または未改変の細胞と比較して、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩのヒト白血球抗原の発現の低下または発現の欠如、ＴＣＲ複合体の発現の低下または発現の欠如、及びＣＤ４７の発現の増加のために操作された細胞である。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も発現する。場合によっては、該ＣＡＲは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、チサゲンレクルユーセルまたはそのバイオシミラーもしくはサロゲートの細胞で発現されるＣＡＲと実質的に同様の構造及び／または機能を示す。いくつかの態様では、該細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上の遺伝子への遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、該Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ遺伝子に導入される。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子に導入される。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子に導入される。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子に導入される。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－細胞である。
多くの態様では、該細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上の遺伝子への遺伝子組み換えを含み、かつＣＤ４７を過剰発現する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７を過剰発現し、Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７を過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７を過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７を過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞である。いくつかの実施形態では、該記載の細胞による外因性のＣＤ４７の発現は、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターによって制御される。
多くの態様では、該細胞は、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ及びＴＲＢ遺伝子からなる群から選択される１つ以上の遺伝子への遺伝子組み換えを含み、かつＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＡＣ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、及びＴＲＢ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ４７及びＣＡＲを過剰発現し、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ、ＴＲＡＣ、及びＴＲＢ遺伝子に導入された遺伝子組み換えを有する。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞であり、キメラ抗原受容体も発現する。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞であり、キメラ抗原受容体も発現する。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＴＲＢ－／－、ＣＤ４７ｔｇ細胞であり、キメラ抗原受容体も発現する。
いくつかの実施形態では、該ＣＡＲの発現は、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、該記載の細胞による外因性のＣＤ４７の発現は、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターによって制御される。ある特定の実施形態では、該ＣＡＲ及びＣＤ４７の発現は、単一のプロモーターによって制御される。ある特定の実施形態では、該ＣＡＲ及びＣＤ４７の発現は、２つのプロモーターによって制御される。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲの発現は第１のプロモーターによって制御され、ＣＤ４７は第２のプロモーターによって制御され、したがって、該第１のプロモーター及び該第２のプロモーターは同じタイプのプロモーターである。他の例では、該第１のプロモーター及び該第２のプロモーターは、異なるタイプのプロモーターである。場合によっては、該細胞によるＣＡＲの発現レベルは、ＣＤ４７の発現よりも高い（例えば、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２００％、３００％またはそれ以上高い）。場合によっては、該細胞によるＣＤ４７（例えば、外因性のＣＤ４７）の発現レベルは、該ＣＡＲの発現よりも高い（例えば、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２００％、３００％またはそれ以上高い）。多くの場合、該ＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７の発現レベルは、実質的に同じである。
ＩＩＩ．初代細胞：生成、操作、分化、移植
本明細書に提供するのは、ＣＤ４７をコードする１つ以上の核酸、及び任意に他のタンパク質を含む初代細胞及び非初代細胞を含めた細胞の集団を調節するための方法及び組成物であり、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を対象に投与することを含み、該細胞の集団は、以前に該対象に投与または移植されたものである。いくつかの実施形態では、初代細胞は、他の非初代細胞型に分化することができる細胞を含む。いくつかの実施形態では、初代細胞は、多能性である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、多能性幹細胞を含む。いくつかの実施形態では、初代細胞は、ヒト初代細胞である。いくつかの実施形態では、ヒト初代細胞は、ヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）である。いくつかの実施形態では、非初代細胞は、ヒト非初代細胞である。
多能性幹細胞、分化した細胞、初代細胞、及び初代Ｔ細胞等の治療用細胞は、免疫調節タンパク質を発現してレシピエントの免疫系による拒絶を回避するように操作され得る。したがって、かかる細胞は、同種異系細胞療法にかなり有望である。いくつかの態様では、本技術の細胞は、移植細胞に対するレシピエントの免疫応答を抑制するように機能する免疫抑制（例えば、免疫原性）因子を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の該レシピエントへの投与により、これらの細胞及びその派生物（例えば、子孫細胞）の食作用、細胞クリアランス及び／または細胞死が促進される。いくつかの態様では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、またはその両方の細胞表面発現を中和、遮断、拮抗、または干渉する作用物質である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７、ＳＩＲＰαまたはその両方の相互作用を阻害または遮断する。かかるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、投与または移植された細胞の活性を調節するための安全スイッチとして有用であり、それによってこれらの細胞ベースの治療の安全性が向上する。
本明細書に提供するのは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を使用して、ＣＤ４７を発現する細胞（例えば、患者に投与または導入されたことがあるＣＤ４７発現細胞）の数を低減する方法である。同様に提供するのは、ＣＤ４７を発現する細胞及びその派生物（例えば、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、多能性幹細胞から分化した細胞、初代Ｔ細胞、及びその後代）である。いくつかの実施形態では、該細胞は、外因的に発現されるＣＤ４７を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された細胞は、レシピエント対象に投与され、その後、それらの操作された細胞は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が該対象に投与されると、該レシピエント対象の免疫系による細胞死及び／または細胞クリアランスの標的とされる。
いくつかの実施形態では、本明細書で概説される細胞は、レシピエント対象がＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与された後、自然免疫細胞による拒絶を受ける。場合によっては、該免疫抑制因子（例えば、ＣＤ４７）を発現する細胞は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与前にＮＫ細胞介在性の溶解を受けにくい。場合によっては、細胞は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与前にマクロファージによる貪食を受けにくい。いくつかの実施形態では、該細胞は、免疫抑制剤をほとんどまたは全く必要とせずにレシピエント対象に移植することができる普遍的に適合性の細胞または組織（例えば、万能ドナー細胞または組織）の供給源として有用である。かかる細胞は、移植後に細胞特異的な性質及び特徴を保持する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントにおいて免疫拒絶反応を回避する細胞及び／またはその分化した派生物である。場合によっては、ＣＤ４７を発現する移植細胞及び任意の後代（例えば、該細胞の直接的または間接的な後代）を含めたＣＤ４７を発現する細胞及びその後代は、レシピエント対象による免疫認識を回避することができる。いくつかの実施形態では、該細胞及び／またはかかる細胞由来の分化した細胞は、低免疫原性である。したがって、該細胞及びその後代は、免疫認識を回避することができ、レシピエント対象において免疫応答を誘発しない。いくつかの実施形態では、本明細書に概説される幹細胞から産生される分化した細胞は、ＭＨＣ不適合の同種異系レシピエントに投与された（例えば、移植された（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）または移植された（ｇｒａｆｔｅｄ））場合の免疫拒絶反応を回避する。いくつかの実施形態では、該細胞及び／またはかかる細胞由来の分化した細胞は、低免疫原性である。
Ａ．初代細胞及び／または分化した細胞の生成
本開示は、外因的に発現されるＣＤ４７を含む操作された細胞を産生する方法を提供する。いくつかの実施形態では、該細胞は、多能性幹細胞、人工多能性幹細胞、分化した細胞、及び初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む。いくつかの実施形態では、該分化した細胞は、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞を含む群から選択される細胞型を含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞またはその後代は、心臓、脳、皮膚、眼、膵臓、膀胱、脾臓、肝臓、肺、腎臓、甲状腺、心臓血管系、呼吸器系、神経系、及び免疫系を含むがこれらに限定されない体の任意の臓器または組織の細胞である。いくつかの実施形態では、該多能性幹細胞は、特定の分化条件を使用して体の任意の臓器または組織の細胞に分化する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、当業者に知られている方法を使用して産生される初代細胞を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、当業者に知られている方法を使用して産生される多能性幹細胞を含む。マウス及びヒト人工多能性幹細胞（一般にはｉＰＳＣ、マウス細胞の場合はｍｉＰＳＣ、またはヒト細胞の場合はｈｉＰＳＣと呼ばれる）の生成は、当技術分野で一般に知られている。当業者には理解されるように、ｉＰＳＣの生成には様々な異なる方法がある。元々の誘導は、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、及びＫｌｆ４の４つの転写因子のウイルスによる導入を使用してマウス胚性または成体線維芽細胞から行われた。Ｔａｋａｈａｓｈｉ ａｎｄ Ｙａｍａｎａｋａ Ｃｅｌｌ １２６：６６３－６７６（２００６）を参照されたい（参照によりその全体が、特にその中で概説される技法に関して本明細書に組み込まれる）。それ以来、いくつかの方法が開発されてきた。総説についてはＳｅｋｉ ｅｔ ａｌ，Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ７（１）：１１６－１２５（２０１５）、及びＬａｋｓｈｍｉｐａｔｈｙ ａｎｄ Ｖｅｒｍｕｒｉ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ２０１３を参照されたい。両文献は、参照によりそれらの全体が、特にｈｉＰＳＣを生成するための方法（例えば、後者の参考文献の第３章参照）に関して本明細書に明示的に組み込まれる。
一般に、ｉＰＳＣは、通常はエピソームベクターを使用して導入される、宿主細胞における１つ以上の「再プログラミング因子」の一過性発現によって生成される。これらの条件下では、少量の細胞が誘導されて、ｉＰＳＣとなる（一般に、このステップの効率は低いため、選択マーカーは使用されない）。ひとたび細胞が「再プログラミング」され、多能性となると、それらはエピソームベクター（複数可）を喪失し、内在性遺伝子を使用して当該因子を産生する。
同様に当業者には理解されるように、使用され得るまたは使用される再プログラミング因子の数は、様々であり得る。一般に、より少数の再プログラミング因子が使用される場合、多能性状態への細胞の形質転換の効率、ならびに「多能性」は下がり、例えば、より少数の再プログラミング因子は、完全に多能性でないが、より少数の細胞型に分化することのみ可能であり得る細胞をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、単一の再プログラミング因子、ＯＣＴ４が使用される。他の実施形態では、２つの再プログラミング因子、ＯＣＴ４及びＫＬＦ４が使用される。他の実施形態では、３つの再プログラミング因子、ＯＣＴ４、ＫＬＦ４、及びＳＯＸ２が使用される。他の実施形態では、４つの再プログラミング因子、ＯＣＴ４、ＫＬＦ４、ＳＯＸ２、及びｃ－Ｍｙｃが使用される。他の実施形態では、ＳＯＫＭＮＬＴ、すなわちＳＯＸ２、ＯＣＴ４（ＰＯＵ５Ｆ１）、ＫＬＦ４、ＭＹＣ、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、及びＳＶ４０Ｌ Ｔ抗原から選択される５、６、または７つの再プログラミング因子が使用され得る。一般に、これらの再プログラミング因子の遺伝子は、当技術分野で知られており、市販されているようなエピソームベクターにて提供される。
一般に、当技術分野で知られているように、ｉＰＳＣは、本明細書に記載の再プログラミング因子を一過性に発現させることによって、血液細胞、線維芽細胞等であるがこれらに限定されない非多能性細胞から作製される。
ひとたび低免疫原性多能性幹細胞が生成されると、それらは、ｉＰＳＣの維持に関して知られているように、未分化状態で維持され得る。例えば、該細胞は、分化を防止するとともに多能性を維持する培地を使用してマトリゲル上で培養され得る。加えて、それらは、多能性を維持する条件下で培地に含まれ得る。
Ｂ．初代細胞及び／または分化した細胞の操作
提供する方法は、多能性幹細胞、その分化した細胞、初代Ｔ細胞等であるがこれらに限定されない細胞における１つ以上の遺伝子の不活性化または除去に有用である。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、ＭＨＣクラスＩ複合体の任意の成分及び／またはＭＨＣクラスＩ複合体の任意の成分の表面発現を低減または排除する遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、Ｂ２Ｍをコードする遺伝子の遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、ＣＩＩＴＡをコードする遺伝子の遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、ＮＬＲＣ５をコードする遺伝子の遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）をコードする遺伝子の遺伝子組み換えを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞は、プログラム細胞死１（ＰＤ１）をコードする遺伝子の遺伝子組み換えを含む。Ｔ細胞の遺伝子組み換えの詳細な説明は、例えば、ＷＯ２０１６１６０７２１に見られ、該開示は、配列表、表、及び図面を含め、全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、レアカットエンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、及びホーミングエンドヌクレアーゼ系）を使用したゲノム編集技術もまた、ヒト幹細胞に含まれる重要な免疫遺伝子の発現を低減または排除するために使用される（例えば、重要な免疫遺伝子のゲノムＤＮＡを削除することによって）。ある特定の実施形態では、ゲノム編集技術または他の遺伝子調節技術を使用して、ヒト細胞において耐性誘導因子が挿入されて、それらの細胞及びそれらから調製される分化した細胞が低免疫原性（または免疫原性が低下した）細胞になる。したがって、該低免疫原性細胞は、ＭＨＣ Ｉ及び／またはＭＨＣ ＩＩの発現が低減または排除されている。いくつかの実施形態では、該細胞は、レシピエント対象において非免疫原性である（例えば、免疫応答を誘導しない）。ある特定の実施形態では、該細胞は、レシピエント対象において低下した免疫原性（例えば、免疫応答を誘発する可能性の低下）を有する。
ゲノム編集技術は、所望の遺伝子座部位での二本鎖ＤＮＡ切断を可能にする。これらの制御された二本鎖切断は、特定の遺伝子座部位にて相同組み換えを促進する。このプロセスは、当該配列を認識してそれに結合し、当該核酸分子における二本鎖切断を誘導するエンドヌクレアーゼによる、染色体等の核酸分子の特定の配列の標的化に焦点を当てる。該二本鎖切断は、エラープローン非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同組み換え（ＨＲ）のいずれかによって修復される。
特定の実施形態の実施は、特に反対の指示がない限り、当業者の技能の範囲内である化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ技術、遺伝学、免疫学、及び細胞生物学の従来の方法を用いることになり、これらのうちの多くが例示説明の目的で下記に記載される。かかる技術は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ Ｊｕｌｙ ２００８）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）、Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ならびにＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ等の刊行物における研究論文を参照されたい。
いくつかの実施形態では、該レアカットエンドヌクレアーゼは、レアカットエンドヌクレアーゼをコードする核酸の形態で、標的ポリヌクレオチド配列を含む細胞に導入される。核酸を細胞に導入するプロセスは、任意の適切な技術によって達成され得る。適切な技術としては、リン酸カルシウムまたは脂質介在性のトランスフェクション、エレクトロポレーション、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が挙げられる。いくつかの実施形態では、該核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、本明細書に記載の改変ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、ｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、本明細書に記載の改変ｍＲＮＡ（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）を含む。
本開示は、当業者に利用可能な任意の様態で、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を利用して、標的ポリヌクレオチド配列を変更することを企図する。細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変更することが可能な任意のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系が使用され得る。かかるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系は、様々なＣａｓタンパク質を用いることができる（Ｈａｆｔ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．；２００５；１（６）ｅ６０）。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系が細胞内の標的ポリヌクレオチド配列を変更することを可能にするかかるＣａｓタンパク質の分子機構としては、ＲＮＡ結合タンパク質、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼ、ヘリカーゼ、ならびにポリメラーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、該ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、Ｉ型ＣＲＩＳＰＲ系である。いくつかの実施形態では、該ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系である。いくつかの実施形態では、該ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、Ｖ型ＣＲＩＳＰＲ系である。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は一般に、少なくとも２つの構成要素、すなわち、１つ以上のガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）及びＣａｓタンパク質を含む。該Ｃａｓタンパク質は、ＤＳＢを標的部位に導入するヌクレアーゼである。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系は２つの主要なクラスに分類される。クラス１系は、複数のＣａｓタンパク質の複合体を使用して核酸を分解し、クラス２系は、同じ目的のために単一の大きなＣａｓタンパク質を使用する。クラス１は、Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶ型に分けられ、クラス２は、ＩＩ、Ｖ、及びＶＩ型に分けられる。遺伝子編集用途に適応された様々なＣａｓタンパク質としては、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ８ａ、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１２、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１２ｂ（Ｃ２ｃ１）、Ｃａｓ１２ｃ（Ｃ２ｃ３）、Ｃａｓ１２ｄ（ＣａｓＹ）、Ｃａｓ１２ｅ（ＣａｓＸ）、Ｃａｓ１２ｆ（Ｃ２ｃ１０）、Ｃａｓ１２ｇ、Ｃａｓ１２ｈ、Ｃａｓ１２ｉ、Ｃａｓ１２ｋ（Ｃ２ｃ５）、Ｃａｓ１３、Ｃａｓ１３ａ（Ｃ２ｃ２）、Ｃａｓ１３ｂ、Ｃａｓ１３ｃ、Ｃａｓ１３ｄ、Ｃ２ｃ４、Ｃ２ｃ８、Ｃ２ｃ９、Ｃｍｒ５、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｆ１、Ｃｓｍ２、Ｃｓｎ２、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１１、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、及びＭａｄ７が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１２）３３７（６０９６）：８１６－８２１、Ｄａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）１６：２８０、Ｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２０１５）５２０：１８６－１９１、Ｚｅｔｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１５）１６３：７５９－７７１、Ｓｔｒｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．（２０１９）１０：２１２、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１９）３６３：８８－９１を参照されたい。最も広く使用されているＣａｓ９は、ＩＩ型Ｃａｓタンパク質であり、例示説明として本明細書に記載されている。これらのＣａｓタンパク質は、異なる起源種に由来してもよい。例えば、Ｃａｓ９は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓまたはＳ．ａｕｒｅｕｓに由来する場合がある。
元の微生物ゲノムでは、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系は、宿主ゲノム内のアレイとしてコードされたＣＲＩＳＰＲ反復配列の間に侵入ＤＮＡからの配列を組み込む。該ＣＲＩＳＰＲ反復アレイからの転写物は、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）にプロセッシングされ、各々が「プロトスペーサー」配列として知られる該侵入ＤＮＡから転写された可変配列、及び該ＣＲＩＳＰＲ反復の一部を有する。各ｃｒＲＮＡは、第２のトランス活性化型ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）とハイブリダイズし、これら２つのＲＮＡは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと複合体を形成する。該ｃｒＲＮＡのプロトスペーサーにコードされた部分は、相補的な標的ＤＮＡ配列が「プロトスペーサー隣接モチーフ」（ＰＡＭ）として知られる短い配列に隣接している場合、該Ｃａｓ９複合体に、それを切断するように指示する。
前述の説明はＣａｓ９ヌクレアーゼに焦点を当てているが、これまでに説明したものとはいくつかの点で異なるｇＲＮＡを利用する他のＲＮＡガイドヌクレアーゼが存在することを理解されたい。例えば、Ｃｐｆ１（ＣＲＩＳＰＲ ｆｒｏｍ Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓｃｅｌｌａ １、別名、Ｃａｓ１２ａ）は、機能するためにｃｒＲＮＡのみを必要とし、ｔｒａｃｒＲＮＡを必要としないＲＮＡガイドヌクレアーゼである。
その発見以来、ＣＲＩＳＰＲ系は、細菌からヒト細胞を含めた真核細胞に及ぶ広範な細胞及び生物において、配列特異的ＤＳＢ及び標的ゲノム編集を誘導するために適応されてきた。遺伝子編集用途でのその使用においては、人工的に設計された合成ｇＲＮＡが元のｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体に取って代わり、ある特定の実施形態では、シングルｇＲＮＡの使用を含む。例えば、該ｇＲＮＡは、ｃｒＲＮＡ、テトラループ、及びｔｒａｃｒＲＮＡから構成されるシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）であり得る。通常、該ｃｒＲＮＡは、目的の標的ＤＮＡを認識するようにユーザーが設計した相補領域（スペーサーとも呼ばれ、通常は約２０ヌクレオチド長）を含む。該ｔｒａｃｒＲＮＡ配列は、Ｃａｓヌクレアーゼ結合のための足場領域を含む。該ｃｒＲＮＡ配列と該ｔｒａｃｒＲＮＡ配列はテトラループによって連結され、各々が互いにハイブリダイズするための短い反復配列を有するため、キメラｓｇＲＮＡが生成される。該ｇＲＮＡに存在するスペーサーまたは相補領域配列を変更するだけで、該Ｃａｓヌクレアーゼのゲノム標的を変更することができる。該相補領域は、標準的なＲＮＡ－ＤＮＡ相補的塩基対合則により、該Ｃａｓヌクレアーゼを標的ＤＮＡ部位に誘導する。
該Ｃａｓヌクレアーゼが機能するためには、該ゲノムＤＮＡの標的配列のすぐ下流にＰＡＭが存在する必要がある。該Ｃａｓタンパク質によるＰＡＭの認識は、該隣接するゲノム配列を不安定化し、該ｇＲＮＡによる配列の調査を可能にし、一致する配列が存在する場合にｇＲＮＡ－ＤＮＡ対合をもたらすと考えられている。ＰＡＭの特定の配列は、Ｃａｓ遺伝子の種によって異なる。例えば、最も一般的に使用されているＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のＣａｓ９ヌクレアーゼは、５’－ＮＧＧ－３’のＰＡＭ配列を認識するか、または低効率で５’－ＮＡＧ－３’を認識する。ここで、「Ｎ」は、任意のヌクレオチドでよい。別のＰＡＭを有する他のＣａｓヌクレアーゼバリアントもまた特徴づけられており、ゲノム編集に良好に使用されている。これらを以下の表１７に要約する。
Figure 2023545056000027
いくつかの実施形態では、Ｃａｓヌクレアーゼは、それらの活性、特異性、認識、及び／または他の特性を変更するための１つ以上の突然変異を含み得る。例えば、該Ｃａｓヌクレアーゼは、オフターゲット効果を軽減するためにその忠実度を変更する１つ以上の変異を有し得る（例えば、ｅＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９－ＨＦ１、ＨｙｐａＳｐＣａｓ９、ＨｅＦＳｐＣａｓ９、及びｅｖｏＳｐＣａｓ９は、ＳｐＣａｓ９の高忠実度バリアントである）。別の例として、該Ｃａｓヌクレアーゼは、そのＰＡＭ特異性を変更する１つ以上の変異を有し得る。
いくつかの実施形態では、提供するのは、該記載の遺伝子編集系のいずれかによって改変されたゲノム遺伝子座を有する宿主細胞またはその組成物である。いくつかの実施形態では、該遺伝子組み換えは、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ８ａ、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃａｓ１２、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１２ｂ（Ｃ２ｃ１）、Ｃａｓ１２ｃ（Ｃ２ｃ３）、Ｃａｓ１２ｄ（ＣａｓＹ）、Ｃａｓ１２ｅ（ＣａｓＸ）、Ｃａｓ１２ｆ（Ｃ２ｃ１０）、Ｃａｓ１２ｇ、Ｃａｓ１２ｈ、Ｃａｓ１２ｉ、Ｃａｓ１２ｋ（Ｃ２ｃ５）、Ｃａｓ１３、Ｃａｓ１３ａ（Ｃ２ｃ２）、Ｃａｓ１３ｂ、Ｃａｓ１３ｃ、Ｃａｓ１３ｄ、Ｃ２ｃ４、Ｃ２ｃ８、Ｃ２ｃ９、Ｃｍｒ５、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｆ１、Ｃｓｍ２、Ｃｓｎ２、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１１、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｍａｄ７、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、及びＣＲＩＳＰＲ関連トランスポザーゼからなる群から選択される部位特異的ヌクレアーゼを使用することによる。ある特定のこれらの実施形態では、該改変されたゲノム遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、またはセーフ・ハーバー遺伝子座である。セーフ・ハーバー遺伝子座の非限定的な例としては、ＡＡＶＳ１、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座が挙げられるがこれらに限定されない。
ＣＲＩＳＰＲ編集に使用されるｇＲＮＡは、ｃｒＲＮＡ配列を含み、これが目的の相補的標的ＤＮＡを認識して結合する相補領域（スペーサーとも呼ばれる）を含む。該スペーサーまたは相補領域の長さは、特定のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の要件に基づいて異なるが、一般に１５～３０ヌクレオチド、通常は約２０ヌクレオチド長である。ある特定の実施形態では、該スペーサーまたは相補領域は、標的ＤＮＡ配列に完全に相補的である。他の実施形態では、該スペーサーは、標的ＤＮＡ配列に部分的に相補的であり、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％相補的である。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供するｇＲＮＡは、さらにｔｒａｃｒＲＮＡ配列を含み、これは、ヌクレアーゼに結合するための足場領域を含む。該ｔｒａｃｒＲＮＡの長さ及び／または配列は、編集に使用される特定のヌクレアーゼによって異なり得る。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡによるヌクレアーゼ結合は、ｔｒａｃｒＲＮＡ配列を必要としない。該ｇＲＮＡがｔｒａｃｒＲＮＡを含む実施形態では、該ｃｒＲＮＡ配列は、さらに、該ｔｒａｃｒＲＮＡの相補配列とのハイブリダイゼーションのための反復領域を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するｇＲＮＡは、２つ以上のｇＲＮＡ分子、例えば、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを、２つの別個の分子として含む。他の実施形態では、該ｇＲＮＡは、単一のＲＮＡ分子上にｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを含むｓｇＲＮＡを含むシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である。ある特定のこれらの実施形態では、該ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡは、介在するテトラループによって連結される。
いくつかの実施形態では、目的の遺伝子座の標的編集のために、１つのｇＲＮＡを部位特異的ヌクレアーゼと組み合わせて使用することができる。他の実施形態では、同じ目的の遺伝子座を標的とする２つ以上のｇＲＮＡを部位特異的ヌクレアーゼと組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓ９及びＣａｓ１２ｂ（Ｃ２ｃ１）を含めた、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡの両方を必要とする様々な一般的なＣａｓヌクレアーゼとともに使用するための例示的なｇＲＮＡ（例えば、ｓｇＲＮＡ）を表１８に示す。例えば、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１２）３３７（６０９６）：８１６－８２１、Ｄａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２０１５）１６：２８０、Ｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２０１５）５２０：１８６－１９１、Ｓｔｒｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．（２０１９）１０：２１２を参照されたい。各例示的なｇＲＮＡについて、相補領域またはスペーサー、ｃｒＲＮＡ反復領域、テトラループ、及びｔｒａｃｒＲＮＡを含めたｇＲＮＡの異なる部分の配列が示されている。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号９４～９７に示すヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含む。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号９８～１０１に示すヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含む。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号１０２～１０５に示すヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含む。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号１０６～１０９に示すヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含む。
いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、または配列番号１０８に示すヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれらからなるｃｒＲＮＡ反復領域を含む。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号９６または配列番号１０７に示すヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなるテトラループを含む。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、または配列番号１０６に示すヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなるｔｒａｃｒＲＮＡを含む。
Figure 2023545056000028
いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡは、目的の標的遺伝子座、例えば、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、またはＡＡＶＳ１、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座からなる群から選択されるセーフ・ハーバー遺伝子座に特異的な相補的領域を含む。該相補領域は、例えば、ＣＤＳ、エクソン、イントロン、エクソンの一部及び隣接するイントロンの一部にわたる配列、または調節領域（例えば、プロモーター、エンハンサー）を含めた標的遺伝子座のいずれかの領域に含まれる配列に結合し得る。該標的配列が、ＣＤＳ、エクソン、イントロン、またはエクソンの及びイントロンの一部にわたる配列である場合、該ＣＤＳ、エクソン、イントロン、またはエクソン／イントロンの境界は、標的遺伝子の任意のスプライスバリアントに従って定義され得る。いくつかの実施形態では、該ｇＲＮＡによって標的とされるゲノム遺伝子座は、該記載の遺伝子座またはその領域のいずれかの４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内に位置する。さらに、本明細書に提供するのは、本明細書に提供する１つ以上のｇＲＮＡ及びＣａｓタンパク質またはＣａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む組成物である。ある特定のこれらの実施形態では、該１つ以上のｇＲＮＡ及びＣａｓタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ベクター、例えば、ウイルスベクター内に含まれる。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子の部位特異的挿入のために本明細書で使用されるｇＲＮＡは、ＡＡＶＳ１の標的配列を認識する相補領域を含む。ある特定のこれらの実施形態では、該標的配列は、ＡＡＶＳ１のイントロン１に位置する。ＡＡＶＳ１は、染色体１９：５５，０９０，９１８～５５，１１７，６３７のリバース鎖に位置し、ＡＡＶＳ１イントロン１（転写物ＥＮＳＧ０００００１２５５０３に基づく）は、染色体１９：５５，１１７，２２２～５５，１１２，７９６のリバース鎖に位置する。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１９：５５，１１７，２２２～５５，１１２，７９６のいずれかに位置する部位の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１９：５５，１１５，６７４の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１９：５５，１１５，６７４で、または染色体１９：５５，１１５，６７４の５、１０、１５、２０、３０、４０、もしくは５０ヌクレオチド以内の位置で切断部位を生成するように構成される。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １６：８６６－８６９（２０１９）に記載のＧＥＴ００００４６、別名、「ｓｇＡＡＶＳ１－１」である。このｇＲＮＡは、配列番号１１０に示す核酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる相補領域を含み、ＡＡＶＳ１（別名、ＰＰＰ１Ｒ１２Ｃ）のイントロン１を標的とする。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子の部位特異的挿入のために本明細書で使用されるｇＲＮＡは、ＣＬＹＢＬの標的配列を認識する相補領域を含む。ある特定のこれらの実施形態では、該標的配列は、ＣＬＹＢＬのイントロン２に位置する。ＣＬＹＢＬは、染色体１３：９９，６０６，６６９～９９，８９７，１３４フォワード鎖に位置し、ＣＬＹＢＬイントロン２（転写物ＥＮＳＴ０００００３７６３５５．７に基づく）は、染色体１３：９９，７７３，０１１～９９，８５８，８６０フォワード鎖に位置する。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１３：９９，７７３，０１１～９９，８５８，８６０のいずれかに位置する部位の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１３：９９，８２２，９８０の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体１３：９９，８２２，９８０で、または染色体１３：９９，８２２，９８０の５、１０、１５、２０、３０、４０、もしくは５０ヌクレオチド以内の位置で切断部位を生成するように構成される。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、ＧＥＴ００００４７であり、これは、配列番号１１１に示す核酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる相補領域を含み、ＣＬＹＢＬのイントロン２を標的とする。該標的部位は、Ｃｅｒｂｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，１０（１）：ｅ０１１６０３２（２０１５）に記載されているＴＡＬＥＮの標的部位と類似している。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子の部位特異的挿入のために本明細書で使用されるｇＲＮＡは、ＣＣＲ５の標的配列を認識する相補領域を含む。ある特定のこれらの実施形態では、該標的配列は、ＣＣＲ５のエクソン３に位置する。ＣＣＲ５は、染色体３：４６，３７０，８５４～４６，３７６，２０６フォワード鎖に位置し、ＣＣＲ５エクソン３（転写物ＥＮＳＴ０００００２９２３０３．４に基づく）は、染色体３：４６，３７２，８９２～４６，３７６，２０６フォワード鎖に位置する。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体３：４６，３７２，８９２～４６，３７６，２０６のいずれかに位置する部位の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体３：４６，３７３，１８０の４０００ｂｐ以内、３５００ｂｐ以内、３０００ｂｐ以内、２５００ｂｐ以内、２０００ｂｐ以内、１５００ｂｐ以内、１０００ｂｐ以内、または５００ｂｐ以内のゲノム遺伝子座を標的とする。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、染色体３：４６，３７３，１８０で、または染色体３：４６，３７３，１８０の５、１０、１５、２０、３０、４０、もしくは５０ヌクレオチド以内の位置で切断部位を生成するように構成される。ある特定の実施形態では、該ｇＲＮＡは、Ｍａｎｄａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ １５：６４３－６５２（２０１４）に記載されているＧＥＴ００００４８、別名、「ｃｒＣＣＲ５＿Ｄ」である。このｇＲＮＡは、配列番号１１２に示す核酸配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる相補領域を含み、ＣＣＲ５のエクソン３（Ｅｎｓｅｍｂｌゲノムデータベースでは代替的にエクソン２として注釈される）を標的とする。Ｇｏｍｅｚ－Ｏｓｐｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍ．１０（１）：４０４５（２０１９）を参照されたい。
本明細書で使用されるｇＲＮＡのある特定の実施形態では、表１９に示す相補領域配列中に含まれる１つ以上のチミンがウラシルで置換される。
Figure 2023545056000029
いくつかの実施形態では、提供するのは、該記載の部位特異的遺伝子編集アプローチで使用される新たな遺伝子座及び／またはｇＲＮＡ配列を特定する方法である。例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系の場合、特定の遺伝子座（例えば、セーフ・ハーバー遺伝子座内）の既存のｇＲＮＡが既知の場合、「インチワーム」アプローチを使用して、通常はゲノム全体で約１００塩基対（ｂｐ）ごとに生じるＰＡＭ配列のための該遺伝子座のいずれかの側の隣接領域をスキャンすることにより、導入遺伝子を標的挿入するためのさらなる遺伝子座を特定することができる。異なるヌクレアーゼは通常、対応するＰＡＭ配列が異なるため、ＰＡＭ配列は、使用される特定のＣａｓヌクレアーゼに依存する。該遺伝子座の両側の隣接領域は、約５００～４０００ｂｐ長、例えば、約５００ｂｐ、約１０００ｂｐ、約１５００ｂｐ、約２０００ｂｐ、約２５００ｂｐ、約３０００ｂｐ、約３５００ｂｐ、または約４０００ｂｐ長であり得る。検索範囲内でＰＡＭ配列が特定されると、導入遺伝子の部位特異的挿入に使用するために、その遺伝子座の配列に従って新たなガイドが設計され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系が例示として記載されているが、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、メガヌクレアーゼ、及びトランスポザーゼを使用するものを含めて、任意の記載される遺伝子編集アプローチを新たな遺伝子座を特定する本方法に使用することができる。
いくつかの実施形態では、ｇＲＮＡの活性、安定性、及び／または他の特徴は、化学的及び／または逐次的改変の組み込みによって変更することができる。一例として、一過性に発現または送達された核酸は、例えば、細胞ヌクレアーゼによって分解されやすい可能性がある。したがって、本明細書に記載のｇＲＮＡは、ヌクレアーゼに対する安定性を導入する１つ以上の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドを含むことができる。特定の理論に拘束されるものではないが、本明細書に記載のある特定の改変型ｇＲＮＡは、細胞の集団、特に本技術の細胞に導入されると、自然免疫応答の低下を示すことができると考えられる。本明細書で使用される、「自然免疫応答」という用語は、サイトカイン、特にインターフェロンの発現及び放出、ならびに細胞死の誘導を含む、一般にウイルスまたは細菌起源の一本鎖核酸を含む外因性核酸に対する細胞応答を含む。安定性を改善し、ヌクレアーゼ耐性を高め、及び／または免疫応答を低下させるｇＲＮＡの他の一般的な化学修飾としては、２’－Ｏ－メチル修飾、２’－フルオロ修飾、２’－Ｏ－メチルホスホロチオエート結合修飾、及び２’－Ｏ－メチル３’チオＰＡＣＥ修飾が挙げられる。
１つの一般的な３’末端修飾は、１つ以上（通常は５～２００個）のアデニン（Ａ）残基を含むポリＡトラクトの付加である。ポリＡトラクトは、ｇＲＮＡをコードする核酸配列に含まれる場合もあれば、化学合成の過程で、またはインビトロ転写後にポリアデノシンポリメラーゼ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉポリ（Ａ）ポリメラーゼ）を使用してｇＲＮＡに付加することができる場合もある。インビボでは、ポリＡトラクトは、ポリアデニル化シグナルを使用してＤＮＡベクターから転写された配列に付加され得る。かかるシグナルの例は、Ｍａｅｄｅｒに提供されている。他の適切なｇＲＮＡ修飾としては、米国特許出願第ＵＳ ２０１７／００７３６７４ Ａ１号及び国際公開第ＷＯ２０１７／１６５８６２ Ａ１号に記載されているものが挙げられるがこれらに限定されない。これらの各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、細胞内の任意の標的ポリヌクレオチド配列を変更することができる。当業者には、任意の特定の細胞において変更されるべき望ましい標的ポリヌクレオチド配列が、ゲノム配列の発現が障害に関連するかまたは他の場合には細胞内への病原体の進入を容易にする任意のゲノム配列に相当し得ることが容易に理解されよう。例えば、細胞において変更するのに望ましい標的ポリヌクレオチド配列は、疾患に関連する単一ポリヌクレオチド多型を含むゲノム配列に対応するポリヌクレオチド配列であり得る。かかる例では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、細胞において疾患に関連するＳＮＰを、それを野生型アレルと置き換えることによって補正することができる。別の例では、細胞内への病原体の進入または増殖の原因となる標的遺伝子のポリヌクレオチド配列が、標的遺伝子の機能を破壊して、病原体が該細胞に進入するかまたは該細胞の内部で増殖することを阻止するために適切な欠失または挿入の標的であり得る。
いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ゲノム配列である。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、ヒトゲノム配列である。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、哺乳類のゲノム配列である。いくつかの実施形態では、該標的ポリヌクレオチド配列は、脊椎動物のゲノム配列である。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、Ｃａｓタンパク質、及び該Ｃａｓタンパク質を標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズすることができる少なくとも１～２つのリボ核酸を含む。本明細書で使用される、「タンパク質」及び「ポリペプチド」とは、ペプチド結合によって接合された一続きのアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸のポリマー）を指すために同義で使用され、改変されたアミノ酸（例えば、リン酸化、糖化、グリコシル化等）及びアミノ酸類似体を含む。例となるポリペプチドまたはタンパク質としては、遺伝子産物、天然に存在するタンパク質、ホモログ、パラログ、断片、ならびに上記のものの他の同等物、バリアント、及び類似体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、１つ以上のアミノ酸置換または改変を含む。いくつかの実施形態では、該１つ以上のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換を含む。場合によっては、置換及び／または改変は、タンパク質分解を防止または低減すること、及び／または細胞内のポリペプチドの半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、ペプチド結合の置換（例えば、尿素、チオ尿素、カルバメート、スルホニル尿素等）を含み得る。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、天然に存在するアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、代替のアミノ酸（例えば、Ｄ－アミノ酸、ベータ－アミノ酸、ホモシステイン、ホスホセリン等）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、部分を含むための改変（例えば、ＰＥＧ化、グリコシル化、脂質化、アセチル化、エンドキャッピング等）を含み得る。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、コアＣａｓタンパク質を含む。例示的なＣａｓコアタンパク質としては、Ｃａｓ１、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、及びＣａｓ９が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ２）を含む。該Ｅ．Ｃｏｌｉサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｅ３、Ｃｓｅ４、及びＣａｓ５ｅが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＹｐｅｓｔサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ３）を含む。該Ｙｐｅｓｔサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、及びＣｓｙ４が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＮｍｅｎｉサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ４）を含む。該Ｎｍｅｎｉサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｎ１及びＣｓｎ２が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＤｖｕｌｇサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ１）を含む。該Ｄｖｕｌｇサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｄ１、Ｃｓｄ２、及びＣａｓ５ｄが挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＴｎｅａｐサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ７）を含む。該Ｔｎｅａｐサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｔ１、Ｃｓｔ２、Ｃａｓ５ｔが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＨｍａｒｉサブタイプのＣａｓタンパク質を含む。該Ｈｍａｒｉサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｈ１、Ｃｓｈ２、及びＣａｓ５ｈが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＡｐｅｒｎサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ５）を含む。該Ａｐｅｒｎサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓａ１、Ｃｓａ２、Ｃｓａ３、Ｃｓａ４、Ｃｓａ５、及びＣａｓ５ａが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＭｔｕｂｅサブタイプのＣａｓタンパク質（別名、ＣＡＳＳ６）を含む。該Ｍｔｕｂｅサブタイプの例示的なＣａｓタンパク質としては、Ｃｓｍ１、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、及びＣｓｍ５が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、ＲＡＭＰモジュールＣａｓタンパク質を含む。例示的なＲＡＭＰモジュールＣａｓタンパク質としては、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ２、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、及びＣｍｒ６が挙げられるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載のＣａｓタンパク質のうちのいずれか１つまたはその機能的部分を含む。本明細書で使用される、「機能的部分」または「機能断片」とは、ペプチドまたはタンパク質因子の部分を指し、これは、少なくとも１つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））と複合体を形成し、標的ポリヌクレオチド配列を切断するその能力を保持している。いくつかの実施形態では、該機能的部分は、ＤＮＡ結合ドメイン、少なくとも１つのＲＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、及びエンドヌクレアーゼドメインを含む群から選択される、作動可能に連結されたＣａｓ９タンパク質の機能的ドメインの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、該機能的部分は、ＤＮＡ結合ドメイン、少なくとも１つのＲＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、及びエンドヌクレアーゼドメインを含む群から選択される、作動可能に連結されたＣｐｆ１タンパク質の機能的ドメインの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、該機能的ドメインは、複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９ａタンパク質の機能的部分は、ＲｕｖＣ様ドメインの機能的部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質の機能的部分は、ＨＮＨヌクレアーゼドメインの機能的部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質の機能的部分は、ＲｕｖＣ様ドメインの機能的部分を含む。
いくつかの実施形態では、外因性Ｃａｓタンパク質は、ポリペプチド形態で細胞に導入され得る。ある特定の実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、細胞透過性ポリペプチドまたは細胞透過性ペプチドにコンジュゲートまたは融合され得る。本明細書で使用される、「細胞透過性ポリペプチド」及び「細胞透過性ペプチド」とは、細胞内への分子の取り込みを容易にするポリペプチドまたはペプチドをそれぞれ指す。該細胞透過性ポリペプチドは、検出可能な標識を含み得る。
ある特定の実施形態では、Ｃａｓタンパク質は、荷電タンパク質（例えば、正電荷、負電荷、または全体的に中性の電荷を担持するもの）にコンジュゲートまたは融合され得る。かかる結合は、共有結合性であり得る。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、該Ｃａｓタンパク質の細胞を透過する能力を有意に増加させるために、過剰に正電荷を有するＧＦＰに融合され得る（Ｃｒｏｎｉｃａｎ ｅｔ ａｌ．ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．；２０１０；５（８）：７４７－５２）。ある特定の実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、細胞内へのその進入を容易にするためにタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）に融合され得る。例示的なＰＴＤとしては、Ｔａｔ、オリゴアルギニン、及びペネトラチンが挙げられる。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、細胞透過性ペプチドに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、ＰＴＤに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、ｔａｔドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、オリゴアルギニンドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、ペネトラチンドメインに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓ９タンパク質は、過剰に正電荷を有するＧＦＰに融合されたＣａｓ９ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、該Ｃａｓポリペプチドは、Ｃｐｆ１（Ｃａｓ１２ａ）タンパク質またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１（Ｃａｓ１２ａ）タンパク質は、細胞透過性ペプチドに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質は、ＰＴＤに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質は、ｔａｔドメインに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質は、オリゴアルギニンドメインに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質は、ペネトラチンドメインに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該Ｃｐｆ１タンパク質は、過剰に正電荷を有するＧＦＰに融合されたＣｐｆ１ポリペプチドを含む。Ｃｐｆ１タンパク質の詳細な説明は、例えば、Ｓａｆａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ＆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，２０１９；９，３６；ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１３５７８－０１９－０２９８－７に見出され得る。
いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、該Ｃａｓタンパク質をコードする核酸の形態で、標的ポリヌクレオチド配列を含む細胞に導入され得る。該核酸を細胞に導入するプロセスは、任意の適切な技術によって達成され得る。適切な技術としては、リン酸カルシウムまたは脂質介在性のトランスフェクション、エレクトロポレーション、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が挙げられる。いくつかの実施形態では、該核酸は、ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、本明細書に記載の改変ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、ｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該核酸は、本明細書に記載の改変ｍＲＮＡ（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、１～２つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、２つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、１つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載の改変核酸（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）によってコードされる。
本開示の方法は、Ｃａｓタンパク質を標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズすることができる任意のリボ核酸の使用を企図する。いくつかの実施形態では、該リボ核酸のうちの少なくとも１つは、ｔｒａｃｒＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該リボ核酸のうちの少なくとも１つは、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、単一のリボ核酸が、該Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該リボ核酸のうちの少なくとも１つは、該Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸の両方が、該Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。当業者には理解される通り、本開示のリボ核酸は、使用される特定のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、及び該標的ポリヌクレオチドの配列に応じて、様々な異なる標的モチーフにハイブリダイズするように選択され得る。該１～２つのリボ核酸はまた、該標的ポリヌクレオチド配列以外の核酸配列とのハイブリダイゼーションを最小限に抑えるように選択され得る。いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸は、該細胞におけるすべての他のゲノムヌクレオチド配列と比較して少なくとも２つのミスマッチを含む標的モチーフにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸は、該細胞におけるすべての他のゲノムヌクレオチド配列と比較して少なくとも１つのミスマッチを含む標的モチーフにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸は、該Ｃａｓタンパク質によって認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計される。いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸の各々は、該標的モチーフ間に位置する変異アレルの両側に位置するＣａｓタンパク質によって認識されるデオキシリボ核酸モチーフに直接隣接する標的モチーフにハイブリダイズするように設計される。
いくつかの実施形態では、該１～２つのリボ核酸の各々が、該Ｃａｓタンパク質を細胞内の標的ポリヌクレオチド配列の標的モチーフに導くとともにそれにハイブリダイズするガイドＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の同じ鎖上の配列に相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の反対の鎖上の配列に相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、該１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の反対の鎖上の配列には相補的でなく、及び／またはそれにハイブリダイズしない。いくつかの実施形態では、該１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列の重複する標的モチーフに相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、該１つまたは２つのリボ核酸（例えば、ガイドＲＮＡ）は、標的ポリヌクレオチド配列のオフセット標的モチーフに相補的であり、及び／またはそれにハイブリダイズする。
いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質をコードする核酸及び少なくとも１～２つのリボ核酸をコードする核酸は、ウイルス形質導入（例えば、レンチウイルス形質導入）を介して細胞に導入される。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、１～２つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、２つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、１つのリボ核酸と複合体を形成する。いくつかの実施形態では、該Ｃａｓタンパク質は、本明細書に記載の改変核酸（例えば、合成の改変ｍＲＮＡ）によってコードされる。
本明細書に記載の遺伝子のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの標的化に有用な例示的なｇＲＮＡ配列を以下の表２０に提供する。該配列は、２０１６年５月９日に出願されたＷＯ２０１６／１８３０４１に見出すことができ、該開示は、表、付録、及び配列表を含め、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
Figure 2023545056000030
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）法を使用して作製される。
「ＴＡＬＥ－ヌクレアーゼ」（ＴＡＬＥＮ）とは、通常は転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）に由来する核酸結合ドメイン及び核酸標的配列を切断するための１つのヌクレアーゼ触媒ドメインを含む融合タンパク質を意図する。該触媒ドメインは、好ましくはヌクレアーゼドメイン、及びより好ましくは、例えば、Ｉ－ＴｅｖＩ、ＣｏｌＥ７、ＮｕｃＡ、及びＦｏｋ－Ｉのような、エンドヌクレアーゼ活性を有するドメインである。特定の実施形態では、該ＴＡＬＥドメインは、例えば、Ｉ－ＣｒｅＩ及びＩ－ＯｎｕＩまたはそれらの機能的バリアントのような、メガヌクレアーゼに融合され得る。より好ましい実施形態では、該ヌクレアーゼは、モノマーＴＡＬＥ－ヌクレアーゼである。モノマーＴＡＬＥ－ヌクレアーゼは、ＷＯ２０１２１３８９２７に記載される操作されたＴＡＬリピートとＩ－ＴｅｖＩの触媒ドメインとの融合体等の、特異的認識及び切断のために二量体化を必要としないＴＡＬＥ－ヌクレアーゼである。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、細菌種Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ由来のタンパク質であり、複数の反復配列を含み、各リピートが、１２位及び１３位において核酸標的配列の各ヌクレオチド塩基に特異的である二残基（ＲＶＤ）を含む。同様のモジュール塩基ごとの核酸結合特性を有する結合ドメイン（ＭＢＢＢＤ）は、異なる細菌種で本出願人によって最近発見された新たなモジュールタンパク質からも得ることができる。この新たなモジュールタンパク質は、ＴＡＬリピートよりも大きな配列可変性を示すという利点を有する。好ましくは、異なるヌクレオチドの認識に関連するＲＶＤは、Ｃを認識するためのＨＤ、Ｔを認識するためのＮＧ、Ａを認識するためのＮＩ、ＧまたはＡを認識するためのＮＮ、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＴを認識するためのＮＳ、Ｔを認識するためのＨＧ、Ｔを認識するためのＩＧ、Ｇを認識するためのＮＫ、Ｃを認識するためのＨＡ、Ｃを認識するためのＮＤ、Ｃを認識するためのＨＩ、Ｇを認識するためのＨＮ、Ｇを認識するためのＮＡ、ＧまたはＡを認識するためのＳＮ及びＴを認識するためのＹＧ、Ａを認識するためのＴＬ、ＡまたはＧを認識するためのＶＴ、ならびにＡを認識するためのＳＷである。別の実施形態では、必要不可欠なアミノ酸１２及び１３は、ヌクレオチドＡ、Ｔ、Ｃ、及びＧに対するそれらの特異性を調節するため、ならびに特にこの特異性を強化するために、他のアミノ酸残基に向けて変異させることができる。ＴＡＬＥＮキットは、市販されている。
いくつかの実施形態では、該細胞は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して操作される。「ジンクフィンガー結合タンパク質」とは、亜鉛イオンの配位によるタンパク質構造の安定化の結果として、好ましくは配列特異的様態で、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／またはタンパク質に結合するタンパク質またはポリペプチドである。ジンクフィンガー結合タンパク質という用語は、ジンクフィンガータンパク質またはＺＦＰと略称される場合が多い。個々のＤＮＡ結合ドメインは、通常は、「フィンガー」と称される。ＺＦＰは、少なくとも１つのフィンガー、通常は２つのフィンガー、３つのフィンガー、または６つのフィンガーを有する。各フィンガーは、ＤＮＡの２～４塩基対、通常はＤＮＡの３もしくは４塩基対に結合する。ＺＦＰは、標的部位または標的セグメントと呼ばれる核酸配列に結合する。各フィンガーは、通常、約３０アミノ酸の亜鉛キレート化ＤＮＡ結合サブドメインを含む。このクラスの単一のジンクフィンガーは、単一のベータターンの２つのシステイン残基とともに亜鉛と配位結合した２つの不変のヒスチジン残基を含むアルファヘリックスからなることが、研究により実証されている（例えば、Ｂｅｒｇ ＆ Ｓｈｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７１：１０８１－１０８５（１９９６）参照）。
いくつかの実施形態では、本開示の細胞は、ホーミングエンドヌクレアーゼを使用して作製される。かかるホーミングエンドヌクレアーゼは、当技術分野で周知である（Ｂ．Ｌ．Ｓｔｏｄｄａｒｄ，Ｑ Ｒｅｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ，２００５；３８（１）：４９－９５ ２００５）。ホーミングエンドヌクレアーゼは、ＤＮＡ標的配列を認識し、一本鎖または二本鎖切断を生じる。ホーミングエンドヌクレアーゼは、長さ１２～４５塩基対（ｂｐ）に及び、通常は、長さ１４～４０ｂｐに及ぶ高度に特異的な認識ＤＮＡ標的部位を含む。該ホーミングエンドヌクレアーゼは、例えば、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧエンドヌクレアーゼ、ＨＮＨエンドヌクレアーゼ、またはＧＩＹ－ＹＩＧエンドヌクレアーゼに対応し得る。本開示による好ましいホーミングエンドヌクレアーゼは、Ｉ－ＣｒｅＩバリアントであり得る。
いくつかの実施形態では、該記載の細胞は、メガヌクレアーゼを使用して作製される。メガヌクレアーゼは、定義上、大きな配列を認識する配列特異的エンドヌクレアーゼである（Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｂ．Ｓ．ａｎｄ Ｂ．Ｌ．Ｓｔｏｄｄａｒｄ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００１，２９，３７５７－３７７４）。それらは、生細胞において固有の部位を切断し、それによって切断部位の近傍で遺伝子の標的化を１０００倍以上強化することができる（Ｐｕｃｈｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９３，２１，５０３４－５０４０、Ｒｏｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．，１９９４，１４，８０９６－８１０６、Ｃｈｏｕｌｉｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５，１９６８－１９７３、Ｐｕｃｈｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３，５０５５－５０６０、Ｓａｒｇｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９７，１７，２６７－７７、Ｄｏｎｏｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ，１９９８，１８，４０７０－４０７８、Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，９３－１０１、Ｃｏｈｅｎ－Ｔａｎｎｏｕｄｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，１４４４－１４４８）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞は、免疫抑制因子、寛容原性因子等のポリペプチドの発現をノックダウンする（例えば、減少させる、排除する、または阻害する）ためのＲＮＡサイレンシングまたはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を使用して作製される。有用なＲＮＡｉ法としては、合成ＲＮＡｉ分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＰＩＷＩ相互作用ＮＲＡ（ｐｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及び当業者に認識される他の一過性ノックダウン法を利用するものが挙げられる。配列特異的ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等を含めたＲＮＡｉのための試薬は、市販されている。例えば、多能性幹細胞において、細胞にＣＩＩＴＡ ｓｉＲＮＡを導入するかまたはＣＩＩＴＡ ｓｈＲＮＡ発現ウイルスを形質導入することによって、ＣＩＩＴＡをノックダウンすることができる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ干渉を用いて、ＣＩＩＴＡ、Ｂ２Ｍ、及びＮＬＲＣ５を含む群から選択される少なくとも１つの発現が低減または阻害される。
１．例示的な発現構築物
目的の細胞に外因性の遺伝子を導入するために、周知の組み換え技術が使用され、本明細書で概説される組み換え核酸が生成される。標的細胞においてポリペプチドを外因的に発現させるのに有用な多くのベクターが利用可能である。該ベクターは、エピソーム、例えば、プラスミド、サイトメガロウイルス、アデノウイルス等のウイルス由来ベクターであってもよく、または相同組み換えまたはランダムインテグレーション、例えば、ＭＭＬＶ、ＨＩＶ－１、ＡＬＶ等のレトロウイルス由来のベクターによって標的細胞ゲノムに組み込まれてもよい。幹細胞のいくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが好ましい。
ある特定の実施形態では、免疫抑制因子をコードする組み換え核酸は、発現構築物において１つ以上の制御ヌクレオチド配列に作動可能に連結されてもよい。制御ヌクレオチド配列は、一般に、処理される宿主細胞及び対象に適切である。様々な宿主細胞に対して、数多くの種類の適切な発現ベクター及び適切な制御配列が当技術分野で知られている。典型的には、該１つ以上の制御ヌクレオチド配列としては、プロモーター配列、リーダーまたはシグナル配列、リボソーム結合部位、転写開始及び終結配列、翻訳開始及び終結配列、ならびにエンハンサーまたは活性化因子配列が挙げられ得るがこれらに限定されない。当技術分野で知られている構成的または誘導性プロモーターもまた企図される。該プロモーターは、天然に存在するプロモーター、または複数のプロモーターのエレメントを組み合わせたハイブリッドプロモーターのいずれであってもよい。発現構築物は、細胞においてプラスミド等のエピソーム上に存在してもよく、または該発現構築物は、染色体に挿入されてもよい。具体的な実施形態では、該発現ベクターは、形質転換された宿主細胞の選択を可能にするための選択可能マーカー遺伝子を含む。ある特定の実施形態は、少なくとも１つの制御配列に作動可能に連結されたバリアントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む。本明細書で使用するための制御配列としては、プロモーター、エンハンサー、及び他の発現制御エレメントが挙げられる。ある特定の実施形態では、発現ベクターは、形質転換される宿主細胞、発現させることが望まれる特定のバリアントポリペプチド、ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、またはベクターによってコードされる任意の他のタンパク質、例えば、抗生物質マーカーの発現の選定に対して設計される。
適切な哺乳類プロモーターの例としては、例えば、以下の遺伝子からのプロモーター、すなわち、ハムスターのユビキチン／Ｓ２７ａプロモーター（ＷＯ９７／１５６６４）、サル空胞ウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、マウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の長鎖末端反復配列領域、マウス乳癌ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス長鎖末端反復配列領域、及びヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターが挙げられる。他の異種哺乳類プロモーターの例は、アクチン、免疫グロブリン、または熱ショックプロモーター（複数可）である。さらなる実施形態では、哺乳類宿主細胞において使用するためのプロモーターは、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（１９８９年７月５日に公開されたＵＫ２，２１１，５０４）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから得ることができる。さらなる実施形態では、異種哺乳類プロモーターが使用される。例としては、アクチンプロモーター、免疫グロブリンプロモーター、及び熱ショックプロモーターが挙げられる。ＳＶ４０の初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含むＳＶ４０制限断片として便宜的に得られる（Ｆｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ２７３：１１３－１２０（１９７８））。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素断片として便宜的に得られる（Ｇｒｅｅｎａｗａｙ ｅｔ ａｌ，Ｇｅｎｅ １８：３５５－３６０（１９８２））。前述の参考文献は、参照により全体として組み込まれる。
本明細書に記載のポリヌクレオチドを細胞に導入するプロセスは、任意の適切な技術によって達成することができる。適切な技術としては、リン酸カルシウムまたは脂質介在性のトランスフェクション、エレクトロポレーション、及びウイルスベクターを使用した形質導入または感染が挙げられる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウイルス形質導入（例えば、レンチウイルス形質導入）を介して細胞に導入される。
変更後、本明細書に記載の分子のうちのいずれかの発現の存在について、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＦＡＣＳアッセイ等の既知の技術を使用してアッセイすることができる。
２．低免疫細胞
本明細書に提供するのは、低免疫細胞であり、これは、低免疫幹細胞、それらの幹細胞から分化した細胞、または免疫調節タンパク質を発現するようにかつ同種異系細胞療法の一部としてレシピエント対象に投与された際にレシピエント宿主の免疫系による拒絶を回避するように操作された初代細胞（本明細書では集合的に「ＨＩＰ細胞」と呼ばれる）を含む。レシピエント対象への投与に際してかかる細胞の活性を調節するための安全スイッチの導入は、これらの細胞療法の安全性を改善するための重要な技術である。
ＨＩＰ細胞の主要な特徴は、移植された細胞の集団に対する宿主細胞の免疫応答を抑制するように機能する、それらの免疫抑制因子の発現である。いくつかの実施形態では、レシピエント対象に導入される細胞の低免疫は、低免疫因子、例えば、ＣＤ４７、及び補体阻害物質を含めた免疫抑制分子の過剰発現と、それに伴うＨＬＡ－Ｉ及びＨＬＡ－ＩＩ遺伝子座の抑制または遺伝子破壊を介して達成される。これらの修飾は、該細胞を、感染細胞、悪性細胞、または非自己細胞のクリアランスに関与する当該レシピエントの免疫系のエフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びマクロファージから覆い隠す。免疫系から細胞を覆い隠すことにより、体内で同種異系細胞の存在及び持続が可能になる。体からの該操作された細胞の除去の制御は、患者の安全にとって重要であり、免疫系から該細胞の覆いを外すことによって達成され得る。覆いを外すことは、安全スイッチの役割を果たし、これは、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα軸または相互作用を遮断及び／または干渉することによって達成され得る。
Ｃ．低免疫原性表現型及び多能性の保持に関するアッセイ
免疫認識を回避する低免疫原性細胞（複数可）が生成されると、それらは、ＷＯ２０１６１８３０４１、及びＷＯ２０１８１３２７８３、及びＷＯ２０１８１７５３９０に記載されるように、それらの免疫原性及び／または多能性の保持に関してアッセイすることができる。
いくつかの実施形態では、低免疫原性は、ＷＯ２０１８１３２７８３の図１３及び図１５に例示されるいくつかの技術を使用してアッセイされる。これらの技術は、同種異系または異種宿主への移植、及び宿主免疫系を回避する低免疫原性多能性細胞の増殖（例えば、奇形腫）に対する監視を含む。場合によっては、低免疫原性細胞の派生物が、ルシフェラーゼを発現するように形質導入され、次いで生物発光画像法を使用して追跡され得る。同様に、かかる細胞に対する宿主動物のＴ細胞及び／またはＢ細胞応答が、該細胞が宿主動物において免疫反応を引き起こさないことを確認するために試験される。Ｔ細胞機能は、Ｅｌｉｓｐｏｔ、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、ＰＣＲ、またはマスサイトメトリー（ＣＹＴＯＦ）によって評価される。Ｂ細胞応答または抗体応答は、ＦＡＣＳまたはルミネックスを使用して評価される。さらにまたは代替的に、該細胞は、ＷＯ２０１８１３２７８３の図１４及び１５に一般に示されるように、それらが自然免疫応答、例えば、ＮＫ細胞による殺傷を回避する能力に関してアッセイされてもよい。
いくつかの実施形態では、該細胞の免疫原性は、当業者に認識されるＴ細胞増殖アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、及びＴ細胞殺傷アッセイ等のＴ細胞イムノアッセイを使用して評価される。場合によっては、該Ｔ細胞増殖アッセイは、該細胞をインターフェロン－ガンマで前処理することと、該細胞を標識したＴ細胞と共培養し、あらかじめ選択された一定時間後に該Ｔ細胞の集団（または増殖しているＴ細胞の集団）の存在をアッセイすることとを含む。場合によっては、該Ｔ細胞活性化アッセイは、Ｔ細胞を本明細書に概説される細胞と共培養することと、該Ｔ細胞におけるＴ細胞活性化マーカーの発現レベルを決定することとを含む。
本明細書に概説される細胞の免疫原性を評価するために、インビボアッセイを実施することができる。いくつかの実施形態では、細胞の生存及び免疫原性は、同種異系ヒト化免疫不全マウスモデルを使用して決定される。場合によっては、該低免疫原性多能性幹細胞は、同種異系ヒト化ＮＳＧ－ＳＧＭ３マウスに移植され、細胞拒絶反応、細胞生存、及び奇形腫形成に関してアッセイされる。場合によっては、移植された低免疫原性多能性幹細胞またはその分化した細胞は、該マウスモデルにおいて長期生存を示す。
該細胞の低免疫原性を含めた免疫原性を決定するためのさらなる技術は、例えば、Ｄｅｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１９，３７，２５２－２５８及びＨａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１９，１１６（２１），１０４４１－１０４４６に記載され、図、図の凡例、及び方法の説明を含めたこれらの開示は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
同様に、多能性の保持は、いくつかの方式で試験される。１つの実施形態では、多能性は、本明細書に概して記載されるとともに、ＷＯ２０１８１３２７８３の図２９に示されるように、ある特定の多能性特異的因子の発現によってアッセイされる。さらにまたは代替的に、該多能性細胞を、多能性の指標として１つ以上の細胞型に分化させる。
当業者には理解される通り、該多能性細胞におけるＭＨＣ Ｉ機能（細胞がヒト細胞に由来する場合はＨＬＡ Ｉ）の低減の成功は、当技術分野で知られる下記に記載される技術、例えば、ＨＬＡ複合体に結合する標識抗体を使用した、例えば、ヒト主要組織適合性ＨＬＡクラスＩ抗原のアルファ鎖に結合する市販のＨＬＡ－Ａ、Ｂ、Ｃ抗体を使用したＦＡＣＳ技術を使用して測定することができる。
さらに、ＨＬＡ Ｉ複合体が細胞表面で発現しないことを確認するために、細胞を試験することができる。これは、上記で考察したようなＨＬＡ細胞表面の１つ以上の構成要素に対する抗体を使用してＦＡＣＳ解析によってアッセイされ得る。
該多能性細胞またはそれらの派生物におけるＭＨＣ ＩＩ機能（細胞がヒト細胞に由来する場合はＨＬＡ ＩＩ）の低減の成功は、当該タンパク質に対する抗体を使用したウェスタンブロッティング、ＦＡＣＳ技術、ＲＴ－ＰＣＲ技術等の当技術分野で知られる技術を使用して測定することができる。
さらに、ＨＬＡ ＩＩ複合体が細胞表面で発現しないことを確認するために、細胞を試験することができる。この場合もやはり、このアッセイは、当技術分野で知られるように行われ（例えば、ＷＯ２０１８１３２７８３の図２１参照）、一般には、ヒトＨＬＡクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＰ、及びほとんどのＤＱ抗原に結合する市販の抗体に基づくウェスタンブロットまたはＦＡＣＳ解析のいずれかを使用して行われる。
ＨＬＡ Ｉ及びＩＩ（またはＭＨＣ Ｉ及びＩＩ）の低減に加えて、本開示の細胞は、マクロファージの食作用及びＮＫ細胞による殺傷に対して低減された感受性を有し得る。得られる細胞は、１つ以上のＣＤ４７導入遺伝子の発現に起因して免疫マクロファージ及び自然経路を回避すると考えられる（理論に拘束されることを望むものではない）。
Ｄ．幹細胞の分化
本開示は、対象へのその後の移植用に様々な細胞型に分化させることができる多能性細胞を提供する。当業者には理解される通り、分化のための方法は、既知の技術を使用する所望の細胞型に依存する。該細胞を浮遊状態で分化させ、その後、ゲルマトリックス形態、例えば、マトリゲル、ゼラチン、またはフィブリン／トロンビン形態に配し、細胞生存を促進することができる。場合によっては、分化は、当技術分野で知られる通りに、一般には、細胞特異的マーカーの存在を評価することによってアッセイされる。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、肝細胞の機能の喪失または肝硬変に対処するために肝細胞に分化させる。低免疫原性多能性細胞を肝細胞に分化させるために使用され得るいくつかの技術が存在する。例えば、Ｐｅｔｔｉｎａｔｏ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｐｒｅ３２８８８、Ｓｎｙｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ６９８：３０５－３１４（２０１１）、Ｓｉ－Ｔａｙｅｂ ｅｔ ａｌ，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ５１：２９７－３０５（２０１０）、及びＡｓｇａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｖ（：４９３－５０４（２０１３）を参照されたい。これらのすべては参照により全体として、特に分化のための方法及び試薬に関して本明細書に明示的に組み込まれる。分化は、一般に、アルブミン、アルファフェトプロテイン、及びフィブリノゲンが挙げられるがこれらに限定されない肝細胞関連及び／または特異的マーカーの存在を評価することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイされる。分化はまた、アンモニアの代謝、ＬＤＬ貯蔵及び取り込み、ＩＣＧ取り込み及び放出、ならびにグリコーゲン貯蔵等、機能的に測定することもできる。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、Ｉ型真性糖尿病（Ｔ１ＤＭ）に対処するための移植用にベータ様細胞または島オルガノイドに分化させる。細胞系は、Ｔ１ＤＭに対処するための有望な方法である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＥｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ／１０．１０３８／ｎｒｇａｓｔｒｏ．２０１７．９３を参照されたい。さらに、Ｐａｇｌｉｕｃａ ｅｔ ａｌ．は、ヒトｉＰＳＣからのβ細胞の分化の成功に関して報告している（ｄｏｉ／１０．１０６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１４．０９．０４０参照、参照により全体として、特にヒト多能性幹細胞からの機能的ヒトβ細胞の大規模生産について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる）。さらに、Ｖｅｇａｓ ｅｔ ａｌ．は、ヒト多能性幹細胞からのヒトβ細胞の生産、続いて宿主による免疫拒絶反応を回避するための封入について示している（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４０３０、参照により全体として、特にヒト多能性幹細胞からの機能的ヒトβ細胞の大規模生産について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれる）。
分化は、一般にインスリンが挙げられるがこれに限定されないβ細胞関連または特異的マーカーの存在を評価することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイされる。分化はまた、グルコース代謝の測定等、機能的に測定することもできる。一般には、参照により全体として、特に同文献で概説されるバイオマーカーに関して本明細書に組み込まれるＭｕｒａｒｏ ｅｔ ａｌ，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｓ．２０１６．０９．００２を参照されたい。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、視力を脅かす眼疾患に対処するために網膜色素上皮（ＲＰＥ）に分化させる。ヒト多能性幹細胞を、参照により全体として、特に分化技術及び試薬について同文献で概説される方法及び試薬に関して本明細書に組み込まれるＫａｍａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１４：２：２０５－１８に概説される技術を使用して、ＲＰＥ細胞に分化させた。同様に、全体として、ＲＰＥ細胞のシートの生成及び患者への移植のための技術に関して組み込まれるＭａｎｄａｉ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１６０８３６８も参照されたい。
分化は、一般にＲＰＥ関連及び／または特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイすることができる。例えば、参照により全体として、特に結果の節の第１段落に概説されるマーカーに関して本明細書に組み込まれるＫａｍａｏ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍｃｒ．２０１３．１２．００７を参照されたい。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、心血管疾患に対処するために心筋細胞に分化させる。ｈｉＰＳＣの心筋細胞への分化のための技術は、当技術分野で知られており、実施例で考察される。分化は、一般に心筋細胞関連もしくは特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイされ得る。例えば、参照により全体として、特に心筋細胞を含む幹細胞を分化させる方法に関して本明細書に組み込まれるＬｏｈ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１６．０６．００１を参照されたい。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、末梢動脈疾患に対処するために新たな血管を形成させるための内皮コロニー形成細胞（ＥＣＦＣ）に分化させる。内皮細胞への分化のための技術は、既知である。例えば、参照により全体として、特にヒト多能性幹細胞からの内皮細胞の生成のための方法及び試薬に関して、また移植技法に関して組み込まれるＰｒａｓａｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．３０４８を参照されたい。分化は、一般に内皮細胞関連もしくは特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイすることができる。
いくつかの実施形態では、該多能性細胞を、自己免疫性甲状腺炎に対処するために甲状腺ホルモンを分泌することができる甲状腺前駆細胞及び甲状腺濾胞オルガノイドに分化させる。甲状腺細胞への分化のための技術は、当技術分野で知られている。例えば、参照により全体として、特にヒト多能性幹細胞からの甲状腺細胞の生成のための方法及び試薬に関して、また移植技術に関して本明細書に明示的に組み込まれるＫｕｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，ｄｏｉ：１０．１０６／ｊ．ｓｔｅｍ．２０１５．０９．００４を参照されたい。分化は、一般に甲状腺細胞関連もしくは特異的マーカーの存在を評価することによって、または機能的に測定することによって、当技術分野で知られる通りにアッセイすることができる。
多能性細胞を分化させるための方法のさらなる説明は、例えば、Ｄｅｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１９，３７，２５２－２５８及びＨａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２０１９，１１６（２１），１０４４１－１０４４６に見出すことができる。
Ｅ．初代細胞及び／または初代細胞由来細胞の投与／移植
いくつかの実施形態では、初代細胞または非初代細胞であるその派生物は、細胞型及びこれらの細胞の最終的な用途の両方に依存する当技術分野で知られる技術を使用して移植または生着される。一般に、本開示の細胞は、患者の静脈内に投与される場合もあれば、注射によって特定の場所に投与される場合もある。特定の場所に移植される場合、該細胞は、分散を防止するためにゲルマトリックスに懸濁され得る。いくつかの実施形態では、該細胞を投与される患者は、免疫抑制剤を投与される。他の実施形態では、該細胞を投与される患者は、免疫抑制剤を投与されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、細胞療法を必要とする患者の治療方法であり、外因性の免疫抑制因子を含む操作された幹細胞から生成された分化した細胞を含む細胞の集団を投与することを含む。有用な実施形態では、本明細書に提供するのは、細胞療法を必要とする患者の治療方法であり、外因性のヒトＣＤ４７を含む幹細胞から生成された分化した細胞を含む細胞の集団を投与することを含む。一般に、操作された細胞の安全かつ有効な量は、例えば、望ましくない副作用を最小限に抑えながら、患者において望ましい治療効果を引き出す量である。さらなる実施形態では、該患者は、本明細書に記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤のいずれかを投与され、ひいては、投与された操作された細胞からの望ましくない副作用が最小限に抑えられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、細胞療法を必要とする患者の治療方法であり、外因性の免疫シグナル伝達因子を発現する初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞の集団を投与することを含む。有用な実施形態では、本明細書に提供するのは、細胞療法を必要とする患者の治療方法であり、外因性のヒトＣＤ４７を含む初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞の集団を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該患者は、本明細書に記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤のいずれかを投与される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞がレシピエントにおいて不適切な拡大または増殖を起こした場合に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞がレシピエントの体内で不適切な位置に存在する場合に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞が悪性転換した場合に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞がサイトカイン放出症候群を誘発した場合に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞が神経毒性を誘発した場合に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、患者に投与された細胞が毒性、例えば、正常組織への攻撃（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ ｏｆｆ ｔｕｍｏｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）を誘発した場合に投与される。
１つの態様では、本記載の方法は、ＣＤ４７操作細胞の集団（例えば、ＣＤ４７を外因的に発現する細胞の集団）の１回以上の投与を、それを必要とするレシピエント対象に施すこと、及びその後、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該レシピエント対象は、該細胞の集団の１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上の投与を受ける。いくつかの実施形態では、該患者は、ＣＤ４７操作細胞の集団の初回投与を受け、その後、該患者は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与される。特定の実施形態では、該患者は、ＣＤ４７操作細胞の集団の初回投与の後、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤、及びその後次のＣＤ４７操作細胞の集団を投与される。ある特定の実施形態では、該患者は、ＣＤ４７操作細胞の集団の初回投与の後、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の投与、その後次のＣＤ４７操作細胞の集団、及びその後ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の投与を施される。該ＣＤ４７操作細胞の集団の初回投与は、１回以上（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上）の該細胞の注入または注射を含む。該ＣＤ４７操作細胞の集団の次の投与は、１回以上（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上）の該細胞の注入または注射を含む。
別の態様では、該方法は、操作された細胞の集団を投与すること及びその後ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む治療周期を含む治療法を行うことを含む。いくつかの実施形態では、該治療法は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、またはそれ以上）の治療周期を含み、各治療サイクルは、操作された細胞の集団を投与すること及びその後ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該操作された細胞の集団をレシピエント対象に投与するステップは、該細胞の集団の１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回またはそれ以上の投与を施すことを含む。いくつかの実施形態では、該レシピエント対象は、該細胞の集団の１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、またはそれ以上の投与を施された後、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＣＤ４７操作細胞の集団を投与すること、及びその後、ある時間間隔の後にＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む。場合によっては、該時間間隔は、少なくとも１週以上である。場合によっては、該時間間隔は、少なくとも１か月以上である。場合によっては、該時間間隔は、該レシピエント対象が投与された細胞によって誘発された副作用を示す場合に終わる。いくつかの実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞が該レシピエントにおいて不適切な拡大または増殖を起こした場合に終わる。ある特定の実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞が該レシピエントの体内で不適切な位置に存在する場合に終わる。特定の実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞が悪性転換した場合に終わる。いくつかの実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞がサイトカイン放出症候群を誘発する場合に終わる。いくつかの実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞が神経毒性を誘発する場合に終わる。特定の実施形態では、該時間間隔は、該投与された細胞が毒性、例えば、正常組織への攻撃（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔ ｏｆｆ ｔｕｍｏｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）を誘発した場合に。
いくつかの実施形態では、該方法は、複数サイクルのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤療法を含む。場合によっては、該治療法は、投与される細胞及びその派生物（例えば、投与される細胞及びレシピエント対象においてかかる細胞から生成される任意の細胞）の量が、少なくとも１０％（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上）低下するように、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の１回または複数回投与を施すことを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα遮断剤は、該投与された細胞の実質的にすべてが細胞死及び／または細胞クリアランス（例えば、食作用）を受けるように投与される。
ＩＶ．ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤
安全スイッチの導入は、ＣＤ４７を含む操作された細胞を含むもの等の細胞療法の安全性を向上させる。本明細書に記載するのは、レシピエント対象に移植されたかかる細胞におけるＣＤ４７の免疫回避効果を低下させる方法である。いくつかの実施形態では、レシピエント対象は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻害または遮断する治療薬で治療される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤（例えば、ＣＤ４７－ＳＩＲＰαの遮断、阻害、低減、拮抗、中和、または干渉剤）は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される作用物質を含む。本開示の１つの態様では、本明細書に提供するのは、外因的に発現するＣＤ４７タンパク質を含む細胞を以前に投与された患者に、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む方法である。したがって、理論に拘束されることを望むものではないが、該細胞はもはや免疫認識を回避することができず、ひいては患者の免疫細胞によって認識され、細胞死及び／または細胞クリアランスの標的にされると考えられる。場合によっては、該患者の自然免疫細胞が活性化または動員されて、該以前に投与された細胞及びそれらの派生物（例えば、後代）の数が減少する。
本明細書に記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤のいずれも、細胞療法に反応する状態または疾患を有する患者を治療するのに有用である。例えば、かかる状態または疾患は、病的状態にない細胞を含めた健康な細胞を含む治療的介入によって置き換えることができる不健康な細胞または組織（例えば、病気の細胞または組織）の存在によって特徴付けることができる。いくつかの実施形態では、該状態または疾患を有する患者は、該状態または疾患の１つ以上の症状を改善することが予想される細胞療法を施される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤のいずれも、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の集団の投与後の副作用の治療、低減または改善に使用することができる。いくつかの実施形態では、該封鎖剤は、患者における細胞療法の効果を制御するため、患者における細胞療法の活性を調節するため、または該患者において外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の数を減少させるために使用される。
いくつかの態様では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該レシピエント患者において、１つ以上のキメラ抗原受容体も外因的に発現する細胞が挙げられるがこれらに限定されない、ＣＤ４７ポリペプチドを外因的に発現する細胞の数を減少させる。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、かかる細胞によるＣＡＲ発現のレベルとは無関係に、該患者におけるＣＤ４７発現細胞の数を減少させる。場合によっては、該細胞によるＣＡＲ発現のレベルは、対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、例えば、限定されないが、チサゲンレクルユーセルのバイオシミラー、チサゲンレクルユーセルのサロゲート等によるレベルより低い（例えば、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％低い）。ある特定の例では、該細胞によるＣＡＲ発現のレベルは、対照ＣＡＲ－Ｔ細胞、例えば、限定されないが、チサゲンレクルユーセルのバイオシミラー、チサゲンレクルユーセルのサロゲート等によるレベルより高い（例えば、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２００％、３００％、またはそれ以上のパーセンテージ高い）。
Ａ．ＣＤ４７結合封鎖剤
本明細書に提供する方法のいくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する作用物質である。該作用物質は、ＣＤ４７遮断剤、中和剤、拮抗剤または干渉剤であり得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、及びＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質を含む群から選択される。
ＣＤ４７に結合する有用な抗体またはその断片は、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４））（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）、ｕｒａｂｒｅｌｉｍａｂ、ＣＣ－９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＩＢＩ－１８８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＩＢＩ－３２２（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＴＧ－１８０１（（ＴＧ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、別名、ＮＩ－１７０１，Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ ＳＡ）、ＡＬＸ１４８（ＡＬＸ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＴＪ０１１１３３（別名、ＴＪＣ４，Ｉ－Ｍａｂ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ－１２０１（Ｚａｉ Ｌａｂ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）、ＡＫ１１７（Ａｋｅｓｂｉｏ Ａｕｓｔｒａｌｉａ Ｐｔｙ，Ｌｔｄ．）、ＡＯ－１７６（Ａｒｃｈ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＳＲＦ２３１（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＧｅｎＳｃｉ－０５９（ＧｅｎｅＳｃｉｅｎｃｅ）、Ｃ４７Ｂ１５７（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｃ４７Ｂ１６１（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｃ４７Ｂ１６７（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｃ４７Ｂ２２２（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｃ４７Ｂ２２７（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、Ｖｘ－１００４（Ｃｏｒｖｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＨＭＢＤ００４（Ｈｕｍｍｉｎｇｂｉｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｔｅ Ｌｔｄ）、ＳＨＲ－１６０３（Ｈｅｎｇｒｕｉ）、ＡＭＭＳ４－Ｇ４（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＲＴＸ－ＣＤ４７（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ）、及びＩＭＣ－００２（Ｓａｍｓｕｎｇ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｉａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含む群から選択され得る。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、ＣＤ４７結合をめぐって、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ、ｕｒａｂｒｅｌｉｍａｂ、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２を含む群から選択される抗体と競合しない。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、ＣＤ４７結合をめぐって、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ、ｕｒａｂｒｅｌｉｍａｂ、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２から選択される抗体と競合する。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントを含む群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に対するｓｃＦｖ、ＣＤ４７に対するＦａｂ、及びそれらのバリアントは、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ、ｕｒａｂｒｅｌｉｍａｂ、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２を含む群から選択される抗体のいずれかの抗原結合ドメインに基づく。
ＣＤ４７に結合する有用な二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１の抗原結合ドメイン、ならびにＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、及びがん細胞で発現する抗原を含む群から選択される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、サイトカインと、ＣＤ４７に結合する抗原結合ドメイン、抗体、またはその断片のいずれかと、を含む免疫サイトカイン融合タンパク質である。
重鎖、軽鎖、ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＣＤＲ、及びフレームワーク領域の配列を含めた例示的なＣＤ４７結合分子（例えば、ＣＤ４７を認識または結合する抗原結合ドメイン、抗体、ナノボディ、ダイアボディ、抗体模倣タンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ）、及びそれらの断片）の詳細な説明は、例えば、ＷＯ２００９０９１６０１、ＷＯ２０１１１４３６２４、ＷＯ２０１３１１９７１４、ＷＯ２０１４１４９４７、ＷＯ２０１４１４９４７７、ＷＯ２０１５１３８６００、ＷＯ２０１６０３３２０１、ＷＯ２０１７０４９２５１、Ｐｉｅｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ，２０１７，７（２），ｅ５３６、ｖａｎ Ｂｒｏｍｍｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１８，７（２），ｅ１３８６３６１、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２０１８，１５１，５４－６６、及びＡｎｄｒｅｃｈａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ，２０１９，３７４，２０１８０２１７に見出すことができる。それらの開示、例えば、配列表、明細書、及び図は、全体として本明細書に組み込まれる。
Ｂ．ＳＩＲＰα結合封鎖剤
いくつかの実施形態では、該レシピエント対象に投与されるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合する作用物質である。該作用物質は、ＳＩＲＰα遮断剤、中和剤、拮抗剤または不活性化剤であり得る。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、及びＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質を含むがこれらに限定されない群から選択される。
ＳＩＲＰαに結合する有用な抗体またはその断片は、ＡＤＵ－１８０５（Ａｄｕｒｏ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ）、ＯＳＥ－１７２（ＯＳＥ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、別名、ＢＩ ７６５０６３、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＣＣ－９５２５１（Ｃｅｌｇｅｎｅ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＫＷＡＲ２３（Ｌｅｌａｎｄ Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｊｕｎｉｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、及びＰ３６２（Ｌｅｌａｎｄ Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｊｕｎｉｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を含むがこれらに限定されない群から選択され得る。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、ＳＩＲＰα結合をめぐって、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２を含む群から選択される抗体と競合しない。いくつかの実施形態では、該抗体またはその断片は、ＳＩＲＰα結合をめぐって、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２を含む群から選択される抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントを含む群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに対するｓｃＦｖ、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、及びそのバリアントは、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２を含む群から選択される抗体のいずれかの抗原結合ドメインに基づく。
いくつかの実施形態では、該二重特異性抗体は、ＳＩＲＰα及び抗原結合ドメインに結合し、該抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、及びがん細胞で発現する抗原を含む群から選択される抗原に結合する。場合によっては、該二重特異性抗体は、ＳＩＲＰα及び腫瘍関連抗原に結合する。場合によっては、該二重特異性抗体は、ＳＩＲＰα及び免疫細胞の表面で発現する抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、サイトカインと、ＳＩＲＰαに結合する抗原結合ドメイン、抗体、またはその断片のいずれかと、を含む免疫サイトカイン融合タンパク質である。
重鎖、軽鎖、ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＣＤＲ、及びフレームワーク領域の配列を含めた例示的なＳＩＲＰα結合分子（例えば、ＳＩＲＰαを認識または結合する抗原結合ドメイン、抗体、ナノボディ、ダイアボディ、抗体模倣タンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ）、及びそれらの断片）の詳細な説明は、例えば、ＷＯ２０１９２２６９７３、ＷＯ２０１８１９０７１９、ＷＯ２０１８０５７６６９、ＷＯ２０１７１７８６５３、ＷＯ２０１６２０５０４２、ＷＯ２０１６０３３２０１、ＷＯ２０１６０２２９７１、ＷＯ２０１５１３８６００、及びＷＯ２０１３１０９７５２に見出すことができる。配列表、明細書、及び図を含めたそれらの開示は、全体として本明細書に組み込まれる。
Ｃ．ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰα含有融合タンパク質
本明細書に記載の通り、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合するＣＤ４７含有融合タンパク質を含み得る。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαに結合するかかるＣＤ４７含有融合タンパク質は、レシピエント対象に投与される作用物質である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７含有融合タンパク質は、ＳＩＲＰαに結合するＣＤ４７細胞外ドメインまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。配列を含めた例示的なＣＤ４７融合タンパク質の詳細な説明は、例えば、ＵＳ２０１００２３９５７９に見ることができ、その開示は、配列表、明細書、及び図面を含めて全体として本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰα含有融合タンパク質を含み得る。ＳＩＲＰαの配列は、配列番号１２９（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ７８３２４）に記載されている。一般に、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、（ａ）ヒトＳＩＲＰαの免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＳＩＲＰのＩｇＶドメインを含む膜遠位（Ｄ１）ループ、（ｂ）ＩｇＣドメインを含む第１の膜近位ループ、及び（ｃ）ＩｇＣドメインを含む第２の膜近位ループ）のうちのいずれか１つを含むＳＩＲＰαのドメインを含む。場合によっては、該ＳＩＲＰαドメインがＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰα細胞外ドメインまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｐ０１８５７、配列番号１３０）またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０１８６１、配列番号１３１、ＧｅｎＢａｎｋ ＣＡＣ２０４５７．１、配列番号１３２）が挙げられるがこれに限定されないＦｃ領域を含む。任意に、該Ｆｃ領域は、１つ以上の置換を含み得る。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、ＴＴＩ－６２１（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＴＴＩ－６２２（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、及びＡＬＸ１４８（ＡＬＸ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）を含む群から選択される。ＴＴＩ－６２１（配列番号１３３）は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に融合されたヒトＳＩＲＰαのＮ末端Ｖドメインから構成される融合タンパク質である（Ｐｅｔｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２３（４）：１０６８－１０７９（２０１７））一方、ＴＴＩ－６２２（配列番号１３４）は、単一の置換を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域に融合したヒトＳＩＲＰαのＮ末端Ｖドメインから構成される融合タンパク質である。
Figure 2023545056000031
Figure 2023545056000032
ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、及び他の関連する融合タンパク質は、ＰＣＴ公開第ＷＯ１４／９４１２２号に開示されており、その内容は、該タンパク質に関して参照により本明細書に組み込まれる。ＡＬ１４８は、改変されたヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに融合されたＳＩＲＰαのＮ末端Ｄ１ドメインから構成される融合タンパク質である（Ｋａｕｄｅｒ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ（１３（８）：ｅ０２０１８３２（２０１８））。配列を含めた例示的なＳＩＲＰα融合タンパク質の詳細な説明は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ１４／９４１２２号、第ＷＯ１６／２３０４０号、第ＷＯ１７／２７４２２号、第ＷＯ１７／１７７３３３号、及び第ＷＯ１８／１７６１３２号に見ることができる。これらの開示は、配列表、明細書、及び図面を含め、全体として本明細書に組み込まれる。
ＴＴＩ－６２１を含めたＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、単独で、または他のがん治療薬と組み合わせて、血液悪性腫瘍等のがんを治療するために開発されている。再発／難治性血液悪性腫瘍及び選択された固形腫瘍を有する患者における静脈内ＴＴＩ－６２１投与の用量及び安全性を評価する第１相試験（ＮＣＴ０２６６３５１８）では、ＴＴＩ－６２１が忍容性が高く、単剤療法及び他のがん治療薬との併用の両方で活性を示すことが分かった（Ａｎｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２７（８）：２１９０－２１９９（２０２１））。最初の漸増段階では、安全性と最大耐量（ＭＴＤ）を評価するために、被験者にＴＴＩ－６２１を０．０５、０．１、０．３、１、３、及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。拡大段階では、被験者に、単剤療法として０．２ｍｇ／ｋｇのＭＴＤ、またはリツキシマブもしくはニボルマブとの併用で０．１ｍｇ／ｋｇのＭＴＤを投与した。
Ｖ．ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用及び関連する方法
本明細書に開示するのは、ＣＤ４７等の寛容原性因子を発現するように操作された細胞の集団を低減または排除する際にＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を使用するための方法及び組成物であり、該細胞の集団は、以前に対象に投与されたものである。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、さらに、少なくとも１つのＣＡＲを発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、さらに、さらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、さらに、少なくとも１つのＣＡＲ及びさらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、多能性細胞、例えば、人工多能性細胞（ｉＰＳＣ）から分化する。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、多能性細胞、例えば、ｉＰＳＣから分化する。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、初代膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、同種異系膵島細胞である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該細胞は、ｉＰＳＣから分化する。いくつかの実施形態では、該細胞は、分化した細胞である。いくつかの実施形態では、分化した細胞は、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、初代細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞または膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。
いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ１６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２４である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ４６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２００である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣＬ２２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｃ１阻害物質である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＦＡＳＬである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＤＯ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｓｅｒｐｉｎｂ９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣｌ２１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｍｆｇｅ８である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチド及び少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ、及び／またはＴＣＲベータの発現が低下している、Ｔ細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、及びＴＣＲアルファの発現が低下しており、外因性のＣＤ４７ポリペプチド及びＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、及びＴＣＲベータの発現が低下しており、外因性のＣＤ４７ポリペプチド及びＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＢＣＭＡ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１９抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ１９ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ２０抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ２０ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ２２抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ２２ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ３８抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ３８ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１２３抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ１２３ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＣＤ１３８抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＣＤ１３８ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、ＢＣＭＡ抗原に結合し、該ＣＡＲは、ＢＣＭＡ ＣＡＲである。
いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、同種異系である。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ｉＰＳＣから分化する。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβの発現が低下するように操作される。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）の発現が低下するように操作される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、さらに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタジェンアウトルーセルからなる群から選択されるＣＤ１９ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、チサゲンレクルユーセルである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、リソカプタゲンである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、マラルユーセルである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、アキシカプタゲンである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、シロルユーセルである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、ブレクスカブタジェンアウトルーセルである。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤ１９ ＣＡＲである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１１６の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、該Ｔ細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ１６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２４である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ４６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２００である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣＬ２２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｃ１阻害物質である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＦＡＳＬである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＤＯ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｓｅｒｐｉｎｂ９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣｌ２１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｍｆｇｅ８である。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、バイシストロン性ベクターにて該Ｔ細胞に導入された。いくつかの実施形態では、該バイシストロン性ベクターは、レンチウイルスを介して該Ｔ細胞に導入された。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲ及び該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、単一のプロモーターの制御下にある。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該細胞は、ｉＰＳＣから分化する。いくつかの実施形態では、該細胞は、分化した細胞である。いくつかの実施形態では、分化した細胞は、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、初代細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞または膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ１６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２４である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ４６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２００である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣＬ２２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｃ１阻害物質である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＦＡＳＬである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＤＯ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｓｅｒｐｉｎｂ９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣｌ２１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｍｆｇｅ８である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカム及び第２のアウトカムは、独立して、（ｉ）細胞数の約１０％～１００％の減少、（ｉｉ）有害事象の約１０％～１００％の減少、及び（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカム及び／または該第２のアウトカムは、有害事象である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、炎症、感染、吐き気、嘔吐、出血、間質性肺炎、呼吸器疾患、黄疸、体重減少、下痢、食欲不振、けいれん、腹痛、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）、生着不全、臓器損傷、不妊症、ホルモンの変化、異常な成長形成、白内障、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該有害事象は、過剰増殖である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、形質転換である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、腫瘍形成である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、サイトカイン放出症候群である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、炎症である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、感染である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、吐き気である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、嘔吐である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、出血である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、間質性肺炎である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、呼吸器疾患である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、黄疸である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、体重減少である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、下痢である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、食欲不振である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、けいれんである。いくつかの実施形態では、該有害事象は、腹痛である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、生着不全である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、臓器損傷である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、不妊症である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、ホルモンの変化である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、異常な成長形成である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、白内障である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約１０％～約１５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約１５％～約２０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約２０％～約２５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約２５％～約３０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約３０％～約３５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約３５％～約４０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約４０％～約４５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約４５％～約５０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約５０％～約５５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約５５％～約６０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約６０％～約６５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約６５％～約７０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約７０％～約７５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約７５％～約８０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約８０％～約８５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約８５％～約９０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約９０％～約９５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、該細胞数の約９５％～約１００％の減少を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約１０％～約１５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約１５％～約２０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約２０％～約２５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約２５％～約３０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約３０％～約３５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約３５％～約４０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約４０％～約４５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約４５％～約５０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約５０％～約５５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約５５％～約６０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約６０％～約６５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約６５％～約７０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約７０％～約７５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約７５％～約８０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約８０％～約８５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約８５％～約９０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約９０％～約９５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第１のアウトカムは、有害事象の約９５％～約１００％の減少を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約１０％～約１５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約１５％～約２０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約２０％～約２５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約２５％～約３０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約３０％～約３５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約３５％～約４０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約４０％～約４５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約４５％～約５０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約５０％～約５５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約５５％～約６０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約６０％～約６５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約６５％～約７０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約７０％～約７５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約７５％～約８０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約８０％～約８５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約８５％～約９０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約９０％～約９５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、該細胞数の約９５％～約１００％の減少を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であり、（ａ）該対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、（ｂ）（ａ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、（ｃ）任意に、（ｂ）における第１のアウトカムに基づいて、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び（ｄ）任意に、（ｃ）で投与されたＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約１０％～約１５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約１５％～約２０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約２０％～約２５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約２５％～約３０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約３０％～約３５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約３５％～約４０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約４０％～約４５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約４５％～約５０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約５０％～約５５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約５５％～約６０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約６０％～約６５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約６５％～約７０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約７０％～約７５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約７５％～約８０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約８０％～約８５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約８５％～約９０％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約９０％～約９５％の減少を含む。いくつかの実施形態では、該第２のアウトカムは、有害事象の約９５％～約１００％の減少を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該細胞は、ｉＰＳＣから分化する。いくつかの実施形態では、該細胞は、分化した細胞である。いくつかの実施形態では、分化した細胞は、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、初代細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞または膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、該初代細胞は、膵島細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ１６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２４である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ４６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２００である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣＬ２２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｃ１阻害物質である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＦＡＳＬである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＤＯ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｓｅｒｐｉｎｂ９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣｌ２１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｍｆｇｅ８である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約２０％～約３０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約３０％～約４０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約４０％～約５０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約５０％～約６０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約６０％～約７０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約７０％～約８０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約８０％～約９０％減少させるのに有効である。いくつかの実施形態では、該第１の用量は、該細胞の集団を約９０％～約１００％減少させるのに有効である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または該第２の用量は、（ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで、（ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または（ｉｉｉ）１日～３週間投与される。いくつかの実施形態では、該第１及び該第２の用量は同じである。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、０．０５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、０．１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、０．３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、１０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．０５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、６時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、１２時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、１８時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、２４時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、３６時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、４８時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、３日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、４日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、５日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、６日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、７日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、２週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、４週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、６週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、８週間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、３か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、４か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、５か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、６か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約６か月～約１２か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、１８か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、２４か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、３年に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、４年に１回投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、５年に１回投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、（ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、（ｂ）該細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び（ｃ）該対象に対して、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１日～約５０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１日～約１週間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１週～約２週間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約２週～約３週間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約３週～約１か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１か月～約２か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約２か月～約３か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約３か月～約４か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約４か月～約５か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約５か月～約６か月間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約６か月～約１年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１年～約２年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約２年～約３年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約３年～約４年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約４年～約５年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約５年～約１０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１０年～約１５年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約１５年～約２０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約２０年～約３０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約３０年～約４０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、約４０年～約５０年間投与される。いくつかの実施形態では、該第１の用量及び／または第２の用量は、当該対象の生涯にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された膵島細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、（ｉ）外因性のＣＤ４７、ＣＤ４６、及びＣＤ５９ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、ＣＤ１４２の発現が低下するように操作される。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、ｉＰＳＣから分化する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された膵島細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該膵島細胞は、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ１６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２４である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ３９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ４６である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ５９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＤ２００である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣＬ２２である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｃ１阻害物質である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＦＡＳＬである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＤＯ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｃである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｅ重鎖である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＨＬＡ－Ｇである。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＩＬ－３５である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｓｅｒｐｉｎｂ９である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、ＣＣｌ２１である。いくつかの実施形態では、該さらなる因子は、Ｍｆｇｅ８である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子は、該細胞のゲノム遺伝子座への相同組み換え修復（ＨＤＲ）介在性の挿入により該細胞に導入された。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、及びセーフ・ハーバー遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、Ｂ２Ｍ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、ＣＩＩＴＡ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、ＴＲＡＣ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、ＴＲＢＣ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該ゲノム遺伝子座は、セーフ・ハーバー遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＡＡＶＳ１遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＡＢＯ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＣＣＲ５遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＣＬＹＢＬ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＣＸＣＲ４遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、Ｆ３遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＦＵＴ１遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＨＭＧＢ１遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＫＤＭ５Ｄ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＬＲＰ１遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＭＩＣＡ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＭＩＣＢ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＲＨＤ遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＲＯＳＡ２６遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該セーフ・ハーバー遺伝子座は、ＳＨＳ２３１遺伝子座である。いくつかの実施形態では、該細胞は、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している。いくつかの実施形態では、ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、ノックアウトされる。いくつかの実施形態では、該ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下は、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下は、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される。いくつかの実施形態では、Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現は、ノックアウトされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも２日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも３日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも４日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも５日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも６日後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１週後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも２週後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも３週後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも２か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも３か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも４か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも５か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも６か月後に投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該細胞を投与されてから少なくとも１年後に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象が該投与された細胞に関連する有害事象を経験した後に投与される。いくつかの実施形態では、該有害事象は、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、炎症、感染、吐き気、嘔吐、出血、間質性肺炎、呼吸器疾患、黄疸、体重減少、下痢、食欲不振、けいれん、腹痛、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）、生着不全、臓器損傷、不妊症、ホルモンの変化、異常な成長形成、白内障、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該有害事象は、過剰増殖である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、形質転換である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、腫瘍形成である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、サイトカイン放出症候群である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、炎症である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、感染である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、吐き気である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、嘔吐である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、出血である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、間質性肺炎である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、呼吸器疾患である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、黄疸である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、体重減少である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、下痢である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、食欲不振である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、けいれんである。いくつかの実施形態では、該有害事象は、腹痛である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、生着不全である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、臓器損傷である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、不妊症である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、ホルモンの変化である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、異常な成長形成である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、白内障である。いくつかの実施形態では、該有害事象は、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ドメインは、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧのＦｃドメインは、ＩｇＧ１のＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧ１のＦｃドメインは、ヒト抗体の断片を含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、及びＡＬＸ１４８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、及びＡＬＸ１４８である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＴＴＩ－６２２である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＡＬＸ１４８である。いくつかの実施形態では、該ＩｇＧのＦｃドメインは、ＩｇＧ４のＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、抗体である。いくつかの実施形態では、該抗体は、ＭＩＡＰ４１０、Ｂ６Ｈ１２、及びＭａｇｒｏｌｉｍａｂからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該抗体は、ＭＩＡＰ４１０である。いくつかの実施形態では、該抗体は、Ｂ６Ｈ１２である。いくつかの実施形態では、該抗体は、Ｍａｇｒｏｌｉｍａｂである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該細胞の集団を減少させるのに有効な用量で投与される。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約１０％～１００％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約１０％～約２０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約２０％～約３０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約３０％～約４０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約４０％～約５０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約５０％～約６０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約６０％～約７０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約７０％～約８０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約８０％～約９０％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、約９０％～約１００％減少する。いくつかの実施形態では、該細胞の集団は、排除される。いくつかの実施形態では、該細胞の集団の減少は、免疫応答を介して生じる。いくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞におけるＮＫ細胞介在性の細胞殺傷、マクロファージ介在性の細胞殺傷、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。いくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞におけるＮＫ細胞介在性の細胞殺傷である。いくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞におけるマクロファージ介在性の細胞殺傷である。いくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞における補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である。いくつかの実施形態では、該免疫応答は、該細胞における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または頭蓋内投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に静脈内投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に皮下投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に頭蓋内投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、２～３日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３～４日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４～５日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、５～６日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、６～７日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、７～１０日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１０～１５日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１５～２０日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～１０日の間隔で、１０日～１５日の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～１５日の間隔で、１５日～２０日の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、２０日～２５日の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、２５日～３０日の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、１～２か月の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、２～３か月の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、３～４か月の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、４～５か月の期間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１～２０日の間隔で、５～６か月の期間投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、（ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで、（ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または（ｉｉｉ）１日～３週間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、０．０５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、０．１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、０．３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．０５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇで投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、６時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１２時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１８時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、２４時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３６時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４８時間に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、５日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、６日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、７日に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、２週に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４週に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、６週に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、８週に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、５か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、６か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約６か月～約１２か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、１８か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、２４か月に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、３年に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、４年に１回投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、５年に１回投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１日～約５０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１日～約１週間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１週～約２週間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約２週～約３週間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約３週～約１か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１か月～約２か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約２か月～約３か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約３か月～約４か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約４か月～約５か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約５か月～約６か月間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約６か月～約１年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１年～約２年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約２年～約３年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約３年～約４年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約４年～約５年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約５年～約１０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１０年～約１５年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約１５年～約２０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約２０年～約３０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約３０年～約４０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、約４０年～約５０年間投与される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、該対象に対して、該対象の生涯にわたって投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、さらに、該対象に対してＩＬ－２を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７含有融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＣ－９０００２である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＩＢＩ－１８８である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＩＢＩ－３２２である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＡＬＸ１４８である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＴＪ０１１１３３である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＦＡ３Ｍ３である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＺＬ１２０１である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＡＫ１１７である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＡＯ－１７６である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＳＲＦ２３１である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＧｅｎＳｃｉ－０５９である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｃ４７Ｂ１５７である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｃ４７Ｂ１６１である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｃ４７Ｂ１６７である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｃ４７Ｂ２２２である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｃ４７Ｂ２２７である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、Ｖｘ－１００４である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＨＭＢＤ００４である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＳＨＲ－１６０３である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＡＭＭＳ４－Ｇ４である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＲＴＸ－ＣＤ４７である。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＩＭＣ－００２である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対するＦａｂ、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片は、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそのバリアントである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＡＤＵ－１８０５である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＣＣ－９５２５１である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＫＷＡＲ２３である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、Ｐ３６２である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、及びそのバリアントである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片は、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそのバリアントである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤は、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰα含有融合タンパク質は、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１であるＦｃドメインまたはその部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ２であるＦｃドメインまたはその部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ３であるＦｃドメインまたはその部分を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４であるＦｃドメインまたはその部分を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含み、該対象は、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、内在性のＣＤ４７ポリペプチドのアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、内在性のＣＤ４７ポリペプチドのアミノ酸配列と同様のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該外因性のＣＤ４７ポリペプチドは、内在性のＣＤ４７ポリペプチドのアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む。
実施形態
実施形態１．ＣＤ４７－シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）封鎖剤を、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の集団を以前に投与された患者に投与することを含む方法。
実施形態２．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与により、前記患者に含まれる前記生存可能な細胞の集団の量が減少する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与により、前記患者に含まれるＣＤ４７ペプチドを外因的に発現する細胞の数が減少する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記患者が前記細胞の集団の投与後に有害事象を経験した後に行われる、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２．前記有害事象が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記細胞の集団の投与から少なくとも１週間以上後である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記細胞の集団の投与から少なくとも１か月以上後である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５．前記細胞が、さらに、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＤ２００、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１９．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２０．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含み、さらに、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２１．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＤＯ１、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２２．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＤＯ１、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２３．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２４．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２５．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２６．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２７．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２８．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態２９．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３０．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３１．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３２．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３３．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３４．（ａ）患者に対して、ある量の外因的に発現されるＣＤ４７を含む細胞の集団を投与すること、ならびに（ｂ）前記患者に対して、前記患者に含まれる前記細胞及びその派生物の数を低減するのに有効な量のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む方法。
実施形態３５．前記細胞が、さらに、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３６．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３７．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３８．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態３９．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４０．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４１．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４２．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４３．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４４．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４５．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４６．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４７．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４８．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態４９．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５０．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５１．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５２．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５３．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５４．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５５．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５６．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５７．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５８．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態５９．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６０．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６１．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６２．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記患者が前記細胞の集団の投与後に有害事象を経験した場合に行われる、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６３．前記有害事象が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６４．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記細胞の集団の投与から少なくとも１週間以上後である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６５．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与が、前記細胞の集団の投与から少なくとも１か月以上後である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６６．（ａ）患者に対して、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の集団を投与すること、ならびに（ｂ）ステップ（ａ）の後、ある時間間隔の後に、前記患者に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を投与することを含む方法であって、前記時間間隔が、少なくとも１週間以上を含む、前記方法。
実施形態６７．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６８．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態６９．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７０．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７１．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７２．前記細胞が、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現し、さらに、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７３．前記細胞が、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現し、さらに、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７４．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７５．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７６．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７７．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７８．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態７９．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８０．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８１．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８２．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８３．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８４．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８５．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８６．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８７．前記時間間隔が、少なくとも１か月以上を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８８．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態８９．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９０．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９１．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９２．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９３．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９４．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９５．前記ステップ（ｂ）により、前記患者に含まれる生存可能な前記細胞の集団の量が減少する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９６．前記ステップ（ｂ）により、前記患者に含まれるＣＤ４７ペプチドを外因的に発現する細胞の数が減少する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９７．さらに、前記ステップ（ｂ）の後に第２の前記細胞の集団を投与することを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態９８．患者における細胞療法の活性を調節する方法であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがあり、前記患者に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、前記細胞の集団の活性を調節するのに有効な量投与することを含む、前記方法。
実施形態９９．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１００．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０１．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０２．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０３．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０４．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０５．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０６．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０７．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０８．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１０９．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１０．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１１．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１２．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１３．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１４．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１５．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１６．前記治療上有効な細胞の集団の前記少なくとも１回の投与が、前記集団の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の投与を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１７．前記調節が、前記患者に含まれる前記治療上有効な細胞の集団の数を減少させることを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１８．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１１９．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２０．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２１．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２２．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２３．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２４．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２５．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２６．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２７．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２８．前記患者に含まれる前記細胞の集団の活性が、前記細胞の望ましくない活性を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１２９．前記望ましくない活性が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３０．患者における細胞療法の効果を制御する方法であって、（ａ）前記患者に対して、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の集団を含む組成物を投与すること、（ｂ）ステップ（ａ）の後、ある時間間隔の後に、前記患者に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、ステップ（ａ）で投与された前記細胞の集団に対して免疫応答を誘発するのに有効な量でさらに投与し、それにより、前記患者における前記細胞の集団の効果を制御することを含む、前記方法。
実施形態１３１．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３２．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３３．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３４．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３５．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３６．前記細胞が、前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３７．前記細胞が、前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３８．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１３９．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４０．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４１．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４２．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４３．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４４．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４５．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４６．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４７．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４８．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１４９．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５０．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５１．前記時間間隔が、少なくとも１週以上を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５２．前記時間間隔が、少なくとも１か月以上を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５３．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５４．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５５．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５６．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５７．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５８．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１５９．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６０．ステップ（ｂ）を施す前に、ステップ（ａ）が少なくとも１～１０回繰り返される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６１．前記患者に含まれる前記細胞の集団の効果が、前記細胞の副作用または望ましくない効果を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６２．前記副作用が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６３．患者における細胞療法の効果を制御する方法であって、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞を以前に投与された前記患者に投与することを含む、前記方法。
実施形態１６４．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６５．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６６．前記細胞が、さらに、発現が低下した１つ以上のＴＣＲ複合体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６７．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６８．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１６９．前記細胞が、前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７０．前記細胞が、前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７１．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７２．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７３．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７４．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７５．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７６．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７７．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７８．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１７９．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８０．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８１．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８２．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８３．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８４．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８５．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８６．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８７．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８８．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１８９．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１９０．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１９１．前記以前に投与された細胞の効果が、前記患者における副作用または望ましくない効果を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１９２．前記副作用が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載の方法。
実施形態１９３．外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞の集団の投与後の副作用の治療のためのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤。
実施形態１９４．外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原を含む細胞の集団の投与後の副作用の治療のためのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤。
実施形態１９５．外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原及び１つ以上のＴＣＲ複合体を含む細胞の集団の投与後の副作用の治療のためのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤。
実施形態１９６．細胞療法を必要とする患者における、細胞療法のための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態１９７．細胞療法を必要とする患者における、細胞療法のための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原を含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態１９８．細胞療法を必要とする患者における、細胞療法のための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原及び１つ以上のＴＣＲ複合体を含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態１９９．患者における細胞療法の活性を調節するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがある、前記使用。
実施形態２００．患者における細胞療法の活性を調節するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原を含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがある、前記使用。
実施形態２０１．患者における細胞療法の活性を調節するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびに発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣ ＩＩヒト白血球抗原及び１つ以上のＴＣＲ複合体を含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがある、前記使用。
実施形態２０２．患者における、細胞療法の効果を制御するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドを含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態２０３．前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０４．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０５．前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０６．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０７．前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０８．前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２０９．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１０．前記細胞が、さらに、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１１．前記細胞が、発現が低下したＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩヒト白血球抗原を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１２．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１３．前記細胞が、さらに、１つ以上の導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子が、ＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、及びＳｅｒｐｉｎ Ｂ９からなる群から選択される外因的に発現されるポリペプチドをコードする、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１４．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１５．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１６．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１７．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１８．前記細胞が、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチド、発現レベルが低下したＢ２Ｍ及びＣＩＩＴＡ、ならびにＣＤ２４、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＤＵＸ４、ＰＤ－Ｌ１、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｇ、ＦａｓＬ、ＣＣＬ２１、Ｍｆｇｅ８、Ｓｅｒｐｉｎ Ｂ９、及びそれらの任意の組み合わせから選択される群から選択される１つ以上のさらなる外因的に発現されるポリペプチドを含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２１９．前記細胞が、さらに、発現レベルが低下したＴＣＲα、ＴＣＲβ、またはその両方を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２０．前記細胞が、多能性幹細胞に由来する分化した細胞である、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２１．前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２２．前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２３．前記細胞が、初代Ｔ細胞に由来する細胞を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２４．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、前記患者とは異なる１名以上（例えば、２名以上、３名以上、４名以上、５名以上、１０名以上、２０名以上、５０名以上、または１００名以上）の対象からの初代Ｔ細胞を含む初代Ｔ細胞のプールに由来する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２５．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２６．前記ＣＡＲ及び前記外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドが、単一のプロモーターの制御下で発現される、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２７．前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、及びＢＣＭＡからなる群から選択される抗原に結合する、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２８．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した内在性のＴ細胞受容体を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２２９．前記初代Ｔ細胞に由来する細胞が、発現が低下した細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）を含む、上記または下記の実施形態のいずれかに記載のＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤または使用。
実施形態２３０．外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲαを含む細胞の集団の投与後の副作用の治療のためのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤。
実施形態２３１．外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲβを含む細胞の集団の投与後の副作用の治療のためのＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤。
実施形態２３２．細胞療法を必要とする患者における、細胞療法のための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲαを含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態２３３．細胞療法を必要とする患者における、細胞療法のための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲβを含む細胞を投与されたことがある、前記使用。
実施形態２３４．患者における細胞療法の活性を調節するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲαを含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがある、前記使用。
実施形態２３５．患者における細胞療法の活性を調節するための薬剤の製造におけるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の使用であって、前記患者は、外因的に発現されるＣＤ４７ポリペプチドならびに発現が低下したＢ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＣＲβを含む治療上有効な細胞の集団の投与を少なくとも１回受けたことがある、前記使用。
実施例１．インビトロでのＣＤ４７封鎖
ＮＫ細胞及びマクロファージによる殺傷に対するＣＤ４７の阻害効果を排除するＣＤ４７封鎖剤（本明細書ではＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤とも呼ばれる）の能力を、ＸＣＥＬＬＩＧＥＮＣＥ ＭＰプラットフォーム（ＡＣＥＡ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）でアッセイした。９６ウェルのＥプレート（ＡＣＥＡ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）を、コラーゲン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でコートし、４×１０５個のヒトＨＩＰ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＣＤ４７＋）またはダブルノックアウト（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、１００μＬの細胞特異的培地にプレーティングした。このヒト細胞をプレーティングし、１日後に１００ｕｇ／ｍｌの抗ＣＤ４７抗体ＭＩＰ４１０（ＢｉｏＸＣｅｌｌ，Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）またはＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）で処理した。セルインデックス値が０．７に達した後、ヒトＮＫ細胞またはヒトマクロファージ（Ｌｏｎｚａ）をＥ：Ｔ比１：１で、１ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）とともに、またはなしで添加した。殺傷対照として、細胞を２％ＴＲＩＴＯＮ Ｘ１００で処理した。ＣＤ４７を発現するＨＩＰ細胞では、刺激されたもしくは刺激されていないＮＫ細胞（図１Ａ）またはマクロファージ（図２Ａ）による殺傷は観察されなかったが、ダブルノックアウト細胞は、ＮＫ細胞（図１Ｂ）及びマクロファージ（図２Ｂ）の両方によって急速に殺傷された。対照的に、抗ＣＤ４７抗体で処理したＨＩＰ細胞は、ＮＫ細胞（図１Ｄ）及びマクロファージ（図２Ｄ）によって急速に殺傷されたが、ＩｇＧ１アイソタイプ対照処理後には殺傷は見られなかった（図１Ｃ及び２Ｃ）。本実施例は、ＣＤ４７の封鎖が、ＮＫ細胞及びマクロファージによる殺傷に対するＣＤ４７の保護効果を除去したことを示している。
実施例２．インビボでのＣＤ４７封鎖
ＮＳＧマウスは、機能的なマクロファージを有するが、他の免疫細胞を欠いている。したがって、１００万個のヒトＮＫ細胞をＮＳＧマウスに静脈内移植し、同時に５万個のヒトＨＩＰ（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＣＤ４７＋）ｉＰＳＣを同じマウスに皮下注射した。５００ｕｇ／ｋｇの抗ＣＤ４７抗体（ＭＩＰ４１０、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を毎日皮下注射した（ｎ＝５）。対照マウスには、ＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を投与した（ｎ＝３）。生物発光画像法（ＢＬＩ）のために、ホタルＤ－ルシフェリンカリウム塩（３７５ｍｇ／ｋｇ、Ｂｉｏｓｙｎｔｈ）をＰＢＳ（ｐＨ７．４）（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に溶解し、麻酔したマウスに腹腔内注射した（１匹当たり２５０μＬ）。動物をＡＭＩイメージャー（Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して撮像した。対象領域（ＲＯＩ）の生物発光を、最大光子毎秒毎平方センチメートル毎ステラジアンの単位（ｐｓ－１ｃｍ－２ｓｒ－１）で定量化した。ＲＯＩからの最大シグナルは、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を使用して測定した。マウスを、０日目、２日目、及びシグナルがバックグラウンドに達するまで、または奇形腫が２０００ｍｍ３の体積を超えるまで、４日ごとに観察した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を投与したマウスにおけるＨＩＰ ｉＰＳＣからの生物発光は、２５日間にわたって増加し、ｉＰＳＣの生存を示した（図３Ａ）。それに対して、ＨＩＰ ｉＰＳＣの生物発光は、抗ＣＤ４７抗体の投与後に急速に減少し、４日目までにバックグラウンドを下回った（図３Ｂ）。本実施例は、ＣＤ４７の封鎖が、ＣＤ４７を発現する低免疫細胞の殺傷を誘導することができることを示している。
実施例３．同種異系療法の免疫認識を回避するための低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞の創出
Ａ．要約
既製のＣＡＲ－Ｔ細胞は、製造の容易さ、品質管理、ならびに悪性の汚染及びＴ細胞機能不全の回避を含め、自己移植法よりも優れた利点を提供することができる。しかしながら、組織不適合Ｔ細胞に対する活発な宿主対移植片免疫応答は、同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞の拡大及び持続を抑え、このアプローチの有効性を軽減する。本明細書に記載するのは、新規な低免疫編集プラットフォームを使用して、ヒト免疫を回避するＣＡＲ－Ｔ細胞を操作及び生成する方法である。この系は、一部には、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ及びＩＩ遺伝子が不活性化され、ＣＤ４７が過剰発現されると、Ｔ細胞が免疫原性を失うという発見に基づいている。さらに、ＴＣＲのノックアウトは、移植片対宿主病のリスクを制御するのに有用であることが分かっている。
本実施例は、低免疫原性ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞（本明細書ではＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞とも呼ばれる）、及び外因性のＣＤ４７発現がかかる細胞の活性に与える影響を、対照ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、インビトロ腫瘍効力実験で説明する。この実験では、ＣＤ１９＋腫瘍細胞を標的細胞として使用し、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（試験及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞等）をエフェクター細胞として使用した。記載の実験では、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（「ＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ細胞」とも呼ばれる）は、（ａ）Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＡＣ遺伝子のゲノム編集ならびに（ｂ）ＣＤ１９特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド及びＣＤ４７をコードするポリヌクレオチドを担持する導入遺伝子を含むＴ細胞であった。かかるＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－ＣＤ４７ Ｔ細胞とも呼ばれる。また、この実験では、対照ＣＡＲ－Ｔ細胞には、（ａ）チサゲンレクルユーセルまたはそのバイオシミラー／サロゲートと同じＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞を含め、ＣＤ１９特異的ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを発現する免疫原性Ｔ細胞、（ｂ）ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔをコードするポリヌクレオチドを発現する免疫原性Ｔ細胞、ならびに（ｃ）モックトランスフェクトＴ細胞、すなわち、モックトランスフェクトされたＴ細胞を含めた。
同種異系のヒト化マウスに移植すると、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－ＣＤ４７ Ｔ細胞）は、同じヒトドナーから生成された免疫原性ＣＤ１９陽性ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、Ｔ細胞及びＢ細胞による免疫認識を回避した。自然免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞またはマクロファージ）アッセイにより、ＣＤ４７の過剰発現がインビトロ及びインビボでの自然免疫細胞による殺傷からＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞を保護することが示された。ＣＤ４７の発現レベルを分析して、細胞ごとに結合した抗体のフローサイトメトリー推定法を使用して、保護の閾値レベルを評価した。ＣＤ４７に対する遮断抗体は、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞をマクロファージ及びＮＫ細胞による殺傷に対して感受性にし、自然免疫クリアランスを回避するためのＣＤ４７の過剰発現の重要性が確認された。したがって、ＣＤ４７に対する遮断抗体の使用は、本明細書に記載のＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞に安全スイッチを提供するための戦略として想定される。
単離されたＣＤ４７の過剰発現も、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＡＣ遺伝子を不活性化する遺伝子組み換えも、ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害能に影響を与えなかった。ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－ＣＤ４７ Ｔ細胞）は、ＣＤ１９＋腫瘍モデルにおいてインビトロで、及び免疫不全ＮＳＧマウスにおいて、広範な腫瘍細胞：ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞比にわたって抗腫瘍活性を保持した。低免疫遺伝子編集（例えば、Ｂ２Ｍ／ＣＩＩＴＡ／ＴＲＡＣ遺伝子不活性化）の導入は、それらのサイトカイン非依存性増殖を免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して変化させたようには見えなかった。これらの知見は、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞が、同種異系レシピエントにおいて、機能的に免疫を回避し、長期にわたる細胞傷害性抗腫瘍能力を有することを示している。したがって、これらの結果により、ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞が、がん患者に普遍的な免疫療法の選択肢を提供することができることが示唆される。
Ｂ．方法
ＣＡＲ－ＣＤ４７操作汎Ｔ細胞の産生：汎Ｔ細胞を解凍し、ＩＬ－２を添加した標準的なＴ細胞培地で終夜培養した。生存Ｔ細胞を計数し、ビーズ：細胞比１：１にてＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで活性化した。Ｔ細胞の形質導入は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ４７発現レンチウイルス（例えば、単一のプロモーターの制御下でＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ４７導入遺伝子を発現するレンチウイルス）を、硫酸プロタミンの存在下ＭＯＩ１００で用いて行い、ＣＤ４７操作汎Ｔ細胞を生成した。また、モックトランスフェクト汎Ｔ細胞を生成し、Ｔ細胞をモックトランスフェクトした。細胞を、ＩＬ－２を添加した標準Ｔ細胞培地で増殖させ、後で使用するために標準凍結培地中で凍結させた。
Ｂ２Ｍ／ＣＩＩＴＡダブルノックアウト汎Ｔ細胞及びＢ２Ｍ／ＣＩＩＴＡダブルノックアウト／ＣＡＲ－ＣＤ４７操作汎Ｔ細胞の生成：凍結したモックトランスフェクトＴ細胞、すなわち、モックトランスフェクトしたＴ細胞及びＣＤ４７操作Ｔ細胞を解凍し、終夜培養した後、その細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで再活性化した。約４日目の後にビーズを細胞から除去した。Ｃａｓ９と、Ｂ２Ｍ及びＣＩＩＴＡを標的とするガイドＲＮＡとを含むリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を標準プロトコルに従って形成した。Ｔ細胞を、ヌクレオフェクション（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ）用の緩衝液に再懸濁し、ＲＮＰ複合体に添加した後、標準的な細胞エレクトロポレーション装置を使用してエレクトロポレーションを行った。エレクトロポレーション後、ＩＬ－２を添加した標準Ｔ細胞培地に細胞を回収した。編集効率は、ＣＤ４７、ＨＬＡ－ＡＢＣ、及びＨＬＡ－ＤＲのＦＡＣＳ分析によって評価した。
サイトカイン非依存性増殖アッセイ：改変Ｔ細胞を、１ｘＰＢＳで２回洗浄した後に使用し、標準Ｔ細胞培地に終夜再懸濁した後、アッセイに使用した。１日目に、細胞を、ＩＬ－２を添加したまたは添加しない標準培地に再懸濁した。その後、生存細胞をトリパンブルー色素排除法により週２回計数した。アッセイ全体を通して、ＩＬ－２添加培地を使用して細胞濃度を調整した。
ＮＫ細胞の培養：ヒト初代ＮＫ細胞を、標準ＮＫ細胞培地（例えば、ＲＰＭＩ １６４０に１０％熱不活性化ＦＣＳ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを加えたもの）中、ヒトＩＬ－２で刺激した後、その細胞をアッセイに使用した。
マクロファージの培養：ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ分離によって新鮮な血液から単離し、標準的マクロファージ培地（例えば、１０％熱不活化ＦＣＳ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ １６４０）に再懸濁した。細胞をヒトＭ－ＣＳＦにプレーティングし、培養した。培地を１日おきに交換した。６日目以降、細胞を実験のアッセイに使用する約２４時間前に、ヒトＩＬ－２を培地に添加した。
ＣＤ１９＋腫瘍の培養：ＣＤ１９＋腫瘍細胞を、標準細胞培地（例えば、１０％熱不活性化ＦＣＳ及び１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含むＲＰＭＩ １６４０）で培養した後、実験のアッセイに使用した。
リアルタイム細胞分析システムを使用した自然殺傷：ＮＫ細胞殺傷アッセイ及びマクロファージ食作用アッセイを、リアルタイム細胞分析機器（例えば、ＸＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅ（登録商標）ＭＰプラットフォーム、Ａｇｉｌｅｎｔ）で実施した。簡潔には、Ｔ細胞をＣＤ１９＋腫瘍細胞特異的培地にプレーティングした。セルインデックス値が０．７に達した後、ヒトＮＫ細胞またはヒトマクロファージをＥ：Ｔ比１：１で、ＮＫ細胞の場合はヒトＩＬ－２とともに、マクロファージの場合はＩＬ－２なしで添加した。いくつかのウェルは、ヒトＣＤ４７遮断抗体またはヒトＥＧＦＲ抗体（例えば、セツキシマブ）で前処理し、リアルタイム分析アッセイの過程で再度処理した。データを標準化し、リアルタイム細胞分析機器ソフトウェアで分析した。
約４８時間後、Ｔ細胞を収集し、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ細胞生存染色アッセイの成分で染色した。簡潔には、細胞を、製造業者のプロトコルに従ってカルセインＡＭ及びエチジウムホモダイマー－１で染色した。分析をフローサイトメトリーによって行い、結果を死細胞のパーセンテージとして表した。
リアルタイム細胞分析システムを使用したインビトロＣＤ１９＋腫瘍細胞の殺傷：インビトロＣＤ１９＋腫瘍細胞殺傷アッセイを、リアルタイム細胞分析機器（例えば、ＸＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅ（登録商標）ＭＰプラットフォーム、Ａｇｉｌｅｎｔ）で実施した。簡潔には、Ｔ細胞をＣＤ１９＋腫瘍細胞特異的培地にプレーティングした。セルインデックス値が０．７に達した後、ヒトＮＫ細胞またはヒトマクロファージをＥ：Ｔ比０．１２５：１、０．２５：１、０．５：１、１：１、３：１または７：１で、標準Ｔ細胞培地にて添加した。データを標準化し、リアルタイム細胞分析機器ソフトウェアで分析した。
養子移入によるインビボ細胞毒性アッセイ：（１）未改変Ｔ細胞及び改変Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－Ｔ細胞、または（２）未改変Ｔ細胞及び改変Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－ＣＤ４７ｔｇ Ｔ細胞を混合し、多色細胞標識キットを使用して、様々なフルオロフォア色素で染色した。その細胞を生理食塩水及びヒトＩＬ－２で希釈した。次に、その細胞をヒト初代ＮＫ細胞またはヒトマクロファージのいずれかと混合し、免疫不全ＮＳＧマウスに腹腔内注射した。このヒト初代ＮＫ細胞は、注射前にインビトロにてヒトＩＬ－２で前処理した。注射から約４８時間後、腹膜細胞を実験用マウスから採取し、フローサイトメトリーで分析した。未改変Ｔ細胞と改変Ｔ細胞との間で比を比較した。結果を図５Ａ～５Ｂに示す。この養子移入のデータにより、不活性化されたＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ遺伝子を担持するＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＮＫ細胞及びマクロファージによってインビボで殺傷されることが示された。さらに、不活性化されたＨＬＡ－Ｉ／ＩＩ及びＴＣＲ遺伝子を担持し、ＣＤ４７を過剰発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、自然免疫細胞によって殺傷されなかった。
酵素結合免疫吸着スポットＥＬＩＳｐｏｔアッセイ：低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞または同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞のＴ細胞をＮＳＧ－ＳＧＭ３ヒト化マウスに１群あたりｎ＝３で注射した。レシピエントの脾細胞を、細胞注射から約６日後に脾臓から単離し、キラー細胞として使用した。ドナーのＴ細胞をマイトマイシン処理し、刺激細胞として使用した。刺激細胞を、レシピエントのキラーＴ細胞とともに４８時間インキュベートし、ＥＬＩＳｐｏｔプレートリーダーを使用してＩＦＮ－γスポット頻度を計数した。結果を図６に示す。この低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｔ細胞の活性化を誘導しなかったが、活性化Ｔ細胞の同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞がヒト化マウスで検出された。
ドナー特異的抗体アッセイ：レシピエントマウス（例えば、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞または同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞を注射したＮＳＧ－ＳＧＭ３ヒト化マウス）からの血清を、５６℃まで約３０分間加熱することにより脱補体化した。等量の血清と細胞懸濁液を４℃で約４５分間インキュベートした。細胞をＦＩＴＣコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＭで標識し、フローサイトメトリーによって分析した。結果を図６に示す。低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ドナー特異的抗体結合を誘導しなかったが、同種異系ＣＡＲ－Ｔ細胞に対するＩｇＭ結合が検出された。
Ｃ．結果
本明細書に記載の低免疫原性Ｔ細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ及びＩＩならびにＴＣＲ遺伝子の不活性化（例えば、Ｂ２Ｍ、ＣＩＩＴＡ及びＴＲＡＣ遺伝子のノックアウト）及びＣＤ４７の過剰発現の結果として免疫原性を欠いていると思われた。かかる低免疫Ｔ細胞は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ分子を発現するように操作された。この低免疫遺伝子編集の導入は、対応する免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、細胞のサイトカイン非依存性増殖を変化させなかった。
さらに、ＣＤ４７に対する遮断抗体（例えば、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ）への暴露は、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、ＴＲＡＣ－／－、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－ＣＤ４７ Ｔ細胞）をマクロファージ及びＮＫ細胞による殺傷に対して感受性にし、自然免疫クリアランスを回避するためのＣＤ４７の過剰発現の重要性が確認された。例えば、図４Ａ～４Ｊ及び５Ａ～５Ｂを参照されたい。これらのデータは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ４７構築物が、実験の細胞で低レベルまたは高レベルで発現したことを示した。また、かかる構築物は、単一のプロモーター（例えば、単一の構成的活性プロモーター）の制御下で発現した。これらの結果は、低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞が、インビトロアッセイにおいて自然免疫細胞によって殺傷されなかったことを示した。対照的に、ｍａｃｒｏｌｉｍａｂによるＣＤ４７の遮断は、インビトロで自然免疫細胞による低免疫原性ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷を誘導した。予想通り、自然免疫細胞による対照ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ－ＥＧＦＲｔ構築物を発現するＴ細胞またはチサゲンレクルユーセルバイオシミラーまたはサロゲート等）の殺傷は検出されなかった。ＣＡＲ－ＥＧＦＲｔ構築物を発現する対照ＣＡＲ－Ｔ細胞の自然細胞殺傷は、ＥＧＦＲに対する遮断抗体（例えば、セツキシマブ）を使用して誘導された。これらのデータはまた、モックトランスフェクトＴ細胞、すなわち、モックトランスフェクトされたＴ細胞が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂまたはセツキシマブの非存在下または存在下でＮＫ細胞及びマクロファージによって殺傷されなかったことも示した。
要約すると、ＣＤ４７抗体による処理は、本明細書に記載の低免疫原性ＣＡＲ－Ｔ細胞の低免疫原性を排除するための安全戦略として使用することができ、ひいては、レシピエント対象の体がそれらを除去できるようにする。
実施例４．ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の投与により、低免疫細胞がインビトロ及びインビボで殺傷される
インビトロ及びインビボでの低免疫（Ｂ２Ｍ－／－、ＣＩＩＴＡ－／－、及びＣＤ４７ｔｇ＋）細胞を使用した安全機構試験を、本明細書に記載のプロトコルを使用して行った。
Ａ．安全機構試験プロトコル
１．細胞移植
皮下．健康なオスのＮＳＧマウスを、ノックダウンチャンバー内でイソフルラン吸入麻酔で麻酔した。麻酔したマウスをチャンバーから取り出し、仰臥位に置いた。注射部位（右鼠径部）に７０％ＥｔＯＨを噴霧した。細胞を鼠径部近位に皮下注射した。
脳．予定された手術の２４～４８時間前に、カルプロフェン（５ｍｇ／Ｋｇ／日）を含むＭｅｄｉＧｅｌ（Ｃｌｅａｒ Ｈ２Ｏ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＭＥ）を動物に与えた。算出された量は、標準摂取量に基づいている。ＭｅｄｉＧｅｌ（スクラロース）の各カップに、１．５ｍｇのカルプロフェンを加えた。別の方法として、ブプレノルフィン（０．０５～０．１ｍｇ／ＫｇのＩＭまたはＩＰ）ＢＩＤを１２時間ごとに３日間、またはブプレノルフィンＳＲ（０．５～１．０ｍｇ／ＫｇのＳＣ）を手術開始前に１回投与した。ブプレノルフィンＳＲまたはブプレノルフィンは、術後にＭｅｄｉＧｅｌと組み合わせては使用しなかった。
手術日に、動物を麻酔し、イソフルラン吸入によって維持した（それぞれ、３％及び１．５％）。頭頂部を剃毛し、クロルヘキシジンで洗浄し、７０％ＥｔＯＨで拭いた。動物を脳定位固定装置に載せた。ブレグマからラムダへの正中線縫合を容易に露出させるのに十分な長さで、頭皮の正中線に沿って切開した。
所定の座標（Ａｌｌｅｎ Ｂｒａｉｎ ＡｔｌａｓまたはＧｅｏｒｇｅ Ｐａｘｉｎｏｓ’ Ｍｏｕｓｅ Ｂｒａｉｎ Ａｔｌａｓによって特定される）で、硬膜を貫通することなく頭蓋にドリルで穴をあけた。マイクロドリルを、ハミルトンシリンジ及びニードルを備えたマイクロインフュージョンポンプと交換した。このニードルを、脳の標的領域に達するのに必要な深さまで「落とし」、注入液（分化させた幹細胞を含む１μｌ～５μｌの生理食塩水）を注入した。切開部を吸収性縫合糸で閉じ、マウスを加温パッド上で回復させた。動物をＭｅｄｉＧｅｌ（カルプロフェンを含むスクラロースゲル）上で３日間維持した。
２．生物発光画像法（ＢＬＩ）
マウスをイソフルラン吸入麻酔により麻酔し、２５０μｌのルシフェリン（４５．４５ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内（ＩＰ）注射した。次に、これらのマウスを生物発光チャンバーのノーズコーンに配した（麻酔は、５００ｍｌの酸素／分とともに１．５％に維持した）。マウスを１８０秒間撮像した。対象領域（ＲＯＩ）の周りに円が描かれ、放出光の光子／秒の読み取り値が得られた。
３．抗体（Ａｂ）投与
ＩＰ投与。抗体（１００ｕｌ）を、皮膚及び筋層を貫通することによって、腹側表面から腹腔内に注入した。
ＳＣ投与。マウスをイソフルラン吸入麻酔により麻酔し、仰臥位に置いた。注射部位（右鼠径部）に７０％ＥｔＯＨを噴霧し、抗体（１００ｕｌ）を移植細胞の領域に注射した。
ＩＶ投与。マウスを加熱ランプの下で暖め、拡張した側静脈に抗体を注射した。
Ｂ．ヒトｉＰＳＣ：Ｍａｇｒｏｌｉｍａｂインビトロ及びインビボ
図７Ａ～７Ｂに示す通り、抗ＣＤ４７ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ抗体を添加すると、ＮＫ細胞及びマクロファージによるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの殺傷が生じた。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ４）を使用し、０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間に処理を行った。図８Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞を養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ４アイソタイプ対照による処理は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ４）を使用し、０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間に処理を行った。図９Ａ～Ｂに示す通り、インビボでＣＤ４７を遮断すると、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。Ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ処理を１０日目後に中止した。６か月の経過観察中に確認した際には、ｉＰＳＣは再出現しなかった。
Ｃ．ヒトｉＰＳＣ：ＭＩＡＰ４１０インビトロ及びインビボ
抗ＣＤ４７抗体ＭＩＡＰ４１０によるＣＤ４７の遮断を、インビトロでヒト免疫細胞において観察した。図１０Ａ～Ｂに示す通り、抗ＣＤ４７ＭＩＡＰ４１０抗体を添加すると、ヒトＮＫ細胞及びヒトマクロファージによるヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの殺傷が観察された。
抗ＣＤ４７抗体ＭＩＡＰ４１０によるＣＤ４７の遮断をインビボで観察した。２．５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ１）を使用し、０日目～１０日目（Ｄ０～Ｄ１０）の期間に処理を行った。図１１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトｉＰＳＣは、ＮＫ細胞を養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照による処理は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
１．５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。ＩＬ－２を、活性化のためにＮＫ細胞に対して腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。局所的抗ＣＤ４７低用量（ＬＤ）（５００ｕｇ）処理を、Ｄ０～Ｄ１０の期間中に行った。図１２Ａ～Ｂに示す通り、インビボでＣＤ４７を遮断すると、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。抗ＣＤ４７処理を１０日目後に中止した。６か月の追跡調査中に確認した際には、ｉＰＳＣは再出現しなかった。
１５．５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した（ＩＬ－２による活性化なし）。高用量（ＨＤ、１ｍｇ）での局所的抗ＣＤ４７ ＭＩＡＰ４１０処理を、０日目、１日目、及び３日目で行った。図１３Ａ～Ｂに示す通り、インビボでＣＤ４７を遮断すると、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。抗ＣＤ４７処理を３回（０日目、１日目、３日目）行った。６か月の追跡調査中に確認した際には、いずれのマウスにおいてもｉＰＳＣは再出現しなかった。
１６．５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した（ＩＬ－２による活性化なし）。抗ＣＤ４７ ＨＤ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に腹腔内で行った。図１４Ａ～Ｂに示す通り、インビボでＣＤ４７を遮断すると、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。抗ＣＤ４７処理を３回（０日目、１日目、３日目）腹腔内に行った。６か月の追跡調査中に確認した際には、いずれのマウスにおいてもｉＰＳＣは再出現しなかった。
抗ＣＤ４７抗体ＭＩＡＰ４１０によるＣＤ４７の遮断を脳においてインビボで観察した。５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。図１５Ａ～Ｂに示す通り、ヒトｉＰＳＣは、ＮＫ細胞を養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ４アイソタイプ対照による頭蓋内処理は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。局所的ＩｇＧ４アイソタイプ対照ＨＤ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、及び３日目に行った。
５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的抗ＣＤ４７ ＨＤ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。図１６Ａ～Ｂに示す通り、ＣＤ４７の頭蓋内遮断により、脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。抗ＣＤ４７処理を３回後に中止した。マウスを４０日の追跡調査中に確認した際には、ｉＰＳＣは再出現しなかった。
５ｘ１０４個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、１ｘ１０６個のヒトＮＫ細胞を養子移入した。抗ＣＤ４７ ＨＤ（１ｍｇ）処理を０日目、１日目、及び３日目に腹腔内に行い、血液脳関門はマンニトール注射によって破壊した。図１７Ａ～Ｂに示す通り、ＣＤ４７の頭蓋内遮断により、脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。抗ＣＤ４７処理（ｉ．ｐ．）を３回後に中止した。５匹のうち４匹のマウスにおいて４０日の追跡調査中に確認した際には、ｉＰＳＣは再出現しなかった。
Ｄ．ヒトｉＰＳＣ：ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＩｇＧ４Ｆｃ（融合タンパク質）インビトロ及びインビボ
ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質を、それらがヒトｉＰＳＣに与える影響についてインビトロで試験した。ＨＩＰ ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞に対する影響を、ＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ａ）。ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＨＩＰ細胞に対する影響を、ＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ｂ）。ＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＨＩＰ細胞に対する影響（ｄＫＯ殺傷対照を含む）を、ＮＫ細胞、ＡＤＣＣ ＮＫ細胞、及びＣＤＣによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ｃ）。ＨＩＰ細胞に対する影響を、マクロファージ及びＡＤＣＣマクロファージによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ｄ）。ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＨＩＰ細胞に対する影響を、マクロファージ及びＡＤＣＣマクロファージによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ｅ）。ＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＨＩＰ細胞に対する影響（ｄＫＯ殺傷対照を含む）を、マクロファージ及びＡＤＣＣマクロファージによって媒介される殺傷に関して試験した（図１８Ｆ）。予想通り、ＩｇＧ４は、ＣＤ４７を遮断することによって殺傷を媒介することが観察された。その上、ＩｇＧ１は、さらにＣＤＣ及びＡＤＣＣを誘導することが観察された。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＣＤ４７の遮断及びＡＤＣＣをインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣによる再注入を２０日目及び４０日目に行い、続いてＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ注入を行った（３日間）。図１９Ａ～Ｂに示す通り、ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃによる処理は、すべてのマウスにおいて繰り返しＨＩＰ ｉＰＳＣの殺傷をもたらした。追跡調査を６か月間行った。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７の遮断をインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞を養子移入した。局所的ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣによる再注入を２０日目及び４０日目に行い、続いてＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ注入を行った（３日間）（図２０Ａ～Ｂ）。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＣＤ４７の遮断及びＡＤＣＣをインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアを養子移入した。局所的ＩｇＧ１アイソタイプ対照（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。図２１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照による処理は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＣＤ４７の遮断及びＡＤＣＣをインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入した。局所的ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。図２２Ａ～Ｂに示す通り、頭蓋内ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃにより、脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＣＤ４７の遮断及びＡＤＣＣをインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアを養子移入した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に腹腔内で行った。図２３Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照による腹腔内処理は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃによるＣＤ４７の遮断及びＡＤＣＣをインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入した。ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃ（１ｍｇ）処理を０日目、１日目、及び３日目に行い、腹腔内投与し、血液脳関門はマンニトールによって破壊した。図２４Ａ～Ｂに示す通り、全身性ＳＩＲＰα ＩｇＧ１Ｆｃは、５匹中１匹のマウスにおいて脳内のＨＩＰ ｉＰＳＣの殺傷を誘導した。腹腔内投与は、局所投与と比較して効率が悪いと思われた。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７の遮断をインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びヒトミクログリアを養子移入した。局所的ＩｇＧ４アイソタイプ対照（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。図２５Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ＩｇＧ４アイソタイプ対照による処理は、ＨＩＰ生存率に影響を与えなかった。１６日目及び２０日目での奇形腫のサイズ／症状により、マウスを安楽死させた。
ＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７の遮断をインビボで観察した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞及びミクログリアを養子移入した。局所的ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ（１ｍｇ）処理を、０日目、１日目、３日目に行った。図２６Ａ～Ｂに示す通り、頭蓋内ＳＩＲＰα ＩｇＧ４Ｆｃ処理により、５匹のうち１匹のマウスにおいて脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＩｇＧ１Ｆｃはより強力であると思われた。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射したと同時に、０日目、１日目、及び３日目に、ヒトＮＫ細胞及び１ｍｇで混合した抗ＳＩＲＰαを皮下的に養子移入した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射を２０日目に５０，０００細胞（５０ｋ）で皮下的に（左側に）行い、１ｍｇのＢ６Ｈ１２を２０日目（混合して）、２１日目、及び２３日目に行った。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの再注射を４０日目に５０ｋで皮下的に（上部中央胸部に）行い、１ｍｇのＢ６Ｈ１２を４０日目（混合して）、４１日目、及び４３日目に行った（図２７）。
Ｅ．ヒトＣＤ１９ Ｃａｒ Ｔ：ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＩｇＧ４Ｆｃ（融合タンパク質）インビトロ及びインビボ
機能的エンドポイントは次の通りであった：（ａ）ＮＫ細胞またはマクロファージによるＴ細胞の殺傷、及び（ｂ）抗ＣＤ４７抗体（ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ／ＩｇＧ１融合タンパク質／ＩｇＧ４融合タンパク質）によるＨＩＰ Ｔ細胞殺傷の誘導。これにより、ＮＫ細胞／マクロファージによる殺傷から保護するためのＣＤ４７の関連性が確認された。Ｘｃｅｌｌｉｇｅｎｃｅを使用してインビトロ読み出しを行った。

Figure 2023545056000033
ＳＩＲＰα ＩｇＧ１ＦｃまたはＳＩＲＰα ＩｇＧ４ＦｃによるＣＤ４７の遮断をインビトロで観察した。ＮＫ細胞（図２８Ａ）、マクロファージ（図２８Ｂ）、ＣＤ１９ ＨＩＰ ＣＡＲ及びＮＫ細胞（図２９Ａ）、ならびにＣＤ１９ ＨＩＰ ＣＡＲ及びマクロファージ（図２９Ｂ）に対する効果を調べた。
ＮＳＧマウスは、Ｎａｌｍ６腫瘍モデルを使用して試験した。ヒトＮＫ細胞及びヒトＨＩＰ ＣＡＲ－Ｔ細胞の養子移入は、融合タンパク質を静脈内に用いて及び用いずに静脈内に行った。１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した後にソートし、続いてソート後及び注射前に１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２を終夜解凍した（図３０）。安全戦略によってＨＩＰ ＣＡＲが排除されると、Ｎａｌｍ－６腫瘍が増殖した（図３１）。
図３２に示す通り、（ａ）モックトランスフェクトＴ細胞、すなわ、モックトランスフェクトされたＴ細胞で処理したマウスでは、腫瘍が増殖し、（ｂ）ＨＩＰ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理したマウスは、腫瘍のクリアランスを示し、（ｃ）ＩｇＧ１及び ＩｇＧ４融合タンパク質処理は、ＣＤ４７の遮断によるＨＩＰ ＣＡＲ Ｔ細胞の殺傷をもたらしたため、腫瘍増殖は、モックトランスフェクトＴ細胞群に匹敵すると思われた。ＨＩＰ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４抗ＣＤ４７融合タンパク質によって排除され、Ｎａｌｍ－６腫瘍が増殖していたことを示した（図３３及び３４）。
Ｆ．マウス初代ＨＩＰ膵島：ＭＩＡＰ４１０インビトロ及びインビボ
抗ＣＤ４７抗体ＭＩＡＰ４１０による遮断を、マウスＨＩＰ初代膵島においてインビトロで観察した。図３５Ａに示す通り、ＮＫ細胞による殺傷がＭＩＡＰ４１０から生じた。図３５Ｂに示す通り、マクロファージによる殺傷が観察された。
ＭＩＡＰ４１０による遮断を、マウスＨＩＰ初代膵島においてインビボで観察した。マウス１匹は約１５０個の膵島クラスターに相当した。膵島１個は、約１５００細胞に相当した。移植中、マウス１匹（１８ｇ～２０ｇ）あたり３００個のクラスター、すなわち、約４５０，０００個の細胞（４５０ｋ）を筋肉内（ｉ．ｍ．）に使用した。
Figure 2023545056000034
糖尿病を、ＳＴＺを使用してマウス細胞に誘導した。６日後、同種異系ＨＩＰ膵島細胞（ＭＨＣハプロタイプ：Ｈ２ｂ、ｌｕｃ及びＣＤ４７（ＣＡＧプロモーター）についてＭＯＩ２０）をマウスに注射／移植した（図３６）。同種異系Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける初代膵島移植を用いて安全戦略試験を実施した。図３７Ａ～Ｃに示す通り、同種異系ＨＩＰ膵島は、同種異系マウスにおいて生存し、糖尿病が治癒した。５ｍｇの筋肉内ＩｇＧ１アイソタイプ対照を使用した場合、ＨＩＰ膵島の殺傷は観察されなかった。図３８Ａ～Ｃに示す通り、７日目～１８日目に５ｍｇのＭＩＡＰ４１０を筋肉内注射した場合、ＨＩＰ膵島は、同種異系マウスで生存し、糖尿病が治癒した。抗ＣＤ４７を使用すると（「安全戦略」）、ＨＩＰ膵島が殺傷され、マウスは再び糖尿病になった。
実施例５．ＭＩＡＰ４１０抗ＣＤ４７抗体とマウスＩｇＧ１のＦｃドメインの投与により、ヒトＮＫ細胞を養子移入したヒト細胞においてインビボでＣＤ４７が遮断される
プロトコルは実施例４に従った。
Ａ．ＩＬ－２依存なし
図３９Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに注射し、ヒトＮＫ細胞及びヒトマクロファージの養子移入を行った場合、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、インビボでのＩＬ－２刺激の有無にかかわらず、自然細胞による時間依存的な殺傷が、おそらくはＮＳＧマクロファージの活性化によって生じた。
Ｂ．処理開始時期による結果の変動
図４０Ａ～Ｂに示す通り、０日目（Ｄ０）に開始したＭＩＡＰ４１０の局所皮下高用量（ＨＤ、３回）は、１１日目に開始した処理よりも効果的であると思われた。腹腔内投与は、０日目では局所投与と同じ効果があったが、１１日目では効果がなかった。
Ｃ．脳内局所処理
図４１に示す通り、脳内での局所処理は、局所皮下処理と同じ効果があった。腹腔内処理は、血液脳関門が破壊され、ＭＩＡＰ４１０へのアクセスが容易になった場合に効果的であると思われた。
Ｄ．インビボでのＣＤ４７の遮断と同時のＩＬ－２の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷される
図４２Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞を養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、ＦｃアイソタイプＩｇＧ１対照の投与は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
図４３Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＬＤ５００μｇのＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与と同時の活性化のためのＮＫ細胞へのＩＬ－２の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を、０日目～１０日目の期間に行い、１０日目（Ｄ１０）後に中止した。処理後６か月の追跡調査を行った際には、ｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図４４Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与し（ＬＤ５００μｇ）、同時に、活性化のためにＮＫ細胞へのＩＬ－２の投与を行った。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を３日目（Ｄ３）に開始し、３日目～３６日目の期間中に行った。あるサブセットのマウスについては、８０日目に再処理を開始した。処理の開始から６か月後の追跡調査を行った際に、１匹のマウスでｉＰＳＣが排除された一方、４匹のマウスで奇形腫が発生し、再処理により１匹のマウスでｉＰＳＣが排除されたことが観察された。
図４５Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＬＤ５００μｇ）と同時に、活性化のためにＮＫ細胞へのＩＬ－２の投与を行った。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を１１日目（Ｄ１１）に開始し、１１日目～３６日目の期間中に行った。処理の開始から６か月後の追跡調査を行った際に、１匹のマウスでｉＰＳＣが排除された一方、４匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
Ｅ．インビボでのＣＤ４７の遮断と同時のＩＬ－２の投与なしで、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷される
図４６Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＬＤ５００μｇのＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を０日目（Ｄ０）に開始し、０日目～１０日目の期間中に行い、１６日目後に処理を中止した。処理の開始から６か月後の追跡調査を行った際に、４匹のマウスでｉＰＳＣが再出現しなかった一方、ルシフェラーゼ－の１匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
図４７Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＬＤ５００μｇのＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を３日目（Ｄ３）に開始し、３日目～１１日目の期間中に行い、１１日目後に処理を中止した。処理の開始から６か月後の追跡調査を行った際に、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図４８Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＬＤ５００μｇ）。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を１１日目（Ｄ１１）に開始し、１１日目～３６日目の期間中に行い、３６日目後に処理を中止した。処理の開始から６か月後の追跡調査を行った際に、１匹のマウスでｉＰＳＣが排除された一方、３匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
図４９Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＨＤ１ｍｇのＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を、０日目、１日目、及び３日目に行った。処理の開始から１２０日後の追跡調査を行った際に、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図５０Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＨＤ１ｍｇ）。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を、１１日目、１２日目、及び１４日目に行った。処理の開始から４４日後の追跡調査を行った際に、３匹のマウスでｉＰＳＣが再出現しなかったこと及び２匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
図５１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、腹腔内ＨＤ１ｍｇのＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を、０日目、１日目、及び３日目に行った。処理の開始から１００日後の追跡調査を行った際に、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図５２Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、ＭＩＡＰ４１０とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を腹腔内投与した（ＨＤ１ｍｇ）。ＭＩＡＰ４１０抗体処理を、１１日目、１２日目、及び１４日目に行った。処理の開始から４４日後の追跡調査を行った際に、１匹のマウスでｉＰＳＣが再出現しなかったこと及び６匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
実施例６．ＭＩＡＰ４１０抗ＣＤ４７抗体とＩｇＧ１のＦｃドメインでの処理後、マウスにおいてインビボでのヒト低免疫細胞のヒトＮＫ細胞／ミクログリアの養子移入を行ったまたは行わない殺傷は、マウスの体及び脳で異なる
プロトコルは実施例４に記載のものに従った。
図５３に示す通り、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞をＮＳＧマウスに皮下注射した場合、ヒトｉＰＳＣは、ヒトＮＫ細胞が養子移入された場合、ヒトＮＫ細胞によって殺傷された一方、ＮＫ細胞が養子移入されなかった場合、ヒトｉＰＳＣは、ＮＳＧマクロファージによって殺傷された。後者はおそらく、マクロファージによる「自己喪失の異種感知（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｓｅｎｓｉｎｇ ｏｆ ｍｉｓｓｉｎｇ－ｓｅｌｆ）」に起因する。
図５４に示す通り、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／ＣＩＩＴＡ－／－）細胞をＮＳＧマウスの脳に注入した場合、ヒトｉＰＳＣは、ヒトＮＫ細胞またはヒトミクログリアが養子移入された場合に殺傷された。しかしながら、ヒトｉＰＳＣは、ヒトＮＫ細胞またはヒトミクログリアの養子移入を行わなかった場合、ＮＳＧミクログリア単独では殺傷されなかった。後者はおそらく、ミクログリアによる「自己喪失の異種感知」の欠如に起因する。
Ａ．脳内の自己喪失の感知は、同種異系ミクログリアに依存する
図５５Ａ～Ｂに示す通り、５ｘ１０４個のヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行って、または行わずに、ＮＳＧマウスに皮下注射した。ヒトＮＫ細胞が養子移入された場合、ヒトｄＫＯ ｉＰＳＣは皮下的に殺傷された。ヒトＮＫ細胞が移入されなかった場合、ヒトｄＫＯ ｉＰＳＣは、おそらく「自己喪失の異種感知」によって、ＮＳＧマクロファージによって殺傷された。
図５６Ａ～Ｂに示す通り、５ｘ１０４個のヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行って、または行わずに、ＮＳＧマウスの脳に注射した。ヒトｄＫＯ ｉＰＳＣは、ヒトＮＫ細胞が養子移入された場合、脳内で殺傷されたが、ヒトＮＫ細胞が移入されなかった場合、ＮＳＧミクログリアによって殺傷されなかった。
図５７Ａ～Ｂに示す通り、５ｘ１０４個のヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞をＮＳＧ マウスの脳に注射し、ヒトミクログリアの養子移入を行ったところ、おそらくは「自己喪失」の同種異系感知によって、ヒトｄＫＯ ｉＰＳＣが脳内で殺傷された。
実施例７．ＣＤ４７は、マウス脳内のヒト低免疫細胞をミクログリア介在性の殺傷から保護する
プロトコルは実施例４に記載のものに従った。
図５８に示す通り、ヒトｗｔ、ｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）またはＨＩＰ１．０（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－ＣＤ４７ｔｇ）を同種異系ヒトマクロファージまたはミクログリアと共培養した場合、ＣＤ４７は、ｄＫＯ細胞を、マクロファージによる殺傷及びミクログリアによる殺傷の両方から保護した。
Ａ．ミクログリア及びマクロファージによるｄＫＯ細胞の殺傷における差異
図５９に示す通り、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、同種異系ヒトマクロファージもしくはミクログリアと共培養した場合、またはマウスｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、同種異系マウスマクロファージもしくはミクログリアと共培養した場合、同種異系マクロファージ及びミクログリアは、自己喪失を感知し、ｄＫＯ細胞を殺傷した。
図６０に示す通り、ヒトｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、異種（種間）マウスマクロファージもしくはミクログリアと共培養した場合、またはマウスｄＫＯ（Ｂ２Ｍ－／－ＣＩＩＴＡ－／－）細胞を、異種ヒトマクロファージもしくはミクログリアと共培養した場合、異種マクロファージ及びミクログリアは、自己喪失を感知せず、したがってｄＫＯ細胞を殺傷しなかった。
Ｂ．投与試験
図６１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、０日目、１日目、及び３日目の局所ＨＤ（マウスＩｇＧ１、１ｍｇ）の局所的ＩｇＧ１アイソタイプ対照の投与は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
図６２Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、０日目、１日目、及び３日目の局所ＨＤ（１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０の投与により、脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。４０日の追跡調査で、ｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図６３Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに頭蓋内注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、０日目、１日目、及び３日目の腹腔内ＨＤ（１ｍｇ）のＭＩＡＰ４１０の投与とマンニトール注射による血液脳関門の破壊により、脳内でＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。４０日の追跡調査で、５匹のうち４匹のマウスでｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
実施例８．Ｂ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とマウスＩｇＧ１のＦｃドメインの投与により、ＣＤ４７がヒト低免疫細胞においてインビトロ及び／またはインビボで遮断される
プロトコルは実施例４に従った。
Ｂ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とマウスＩｇＧ１のＦｃドメインの投与により、ＣＤ４７がヒト低免疫細胞において、ヒトＮＫ細胞及び／またはマクロファージの存在下、インビトロで遮断される。図６４Ａ（ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ及びヒトＮＫ細胞）ならびに図６４Ｂ（ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ及びヒトマクロファージ）は、１００μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２をインビトロで投与してヒトＨＩＰ ｉＰＳＣを標的とすることにより、ヒトＮＫ細胞及びヒトマクロファージによって殺傷されることを示している。
Ｂ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とマウスＩｇＧ１のＦｃドメインの投与により、ヒトＮＫ細胞を養子移入したヒト低免疫細胞においてインビボでＣＤ４７が遮断される。図６５に示す通り、３回の皮下高用量（ＨＤ）１ｍｇは、ＬＤ（５００μｇ）のＢ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体を継続的に投与するよりも効果的であると思われた。腹腔内投与は効果がないと思われた。
Ａ．処理開始時期による結果の変動
図６６Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣは、ＮＫ細胞を養子移入したＮＳＧマウスにおいて奇形腫を形成した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、０日目～４０日目の期間中のＦｃアイソタイプＩｇＧ４対照の局所ＬＤ（５００μｇ）投与は、ＨＩＰ生存に影響を与えなかった。
図６７Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、Ｂ６Ｈ１２抗ＣＤ４７抗体とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＬＤ５００μｇ）。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、０日目～９６日目の期間中に行った。処理から６か月後に追跡調査を行った際に、２匹のマウスでｉＰＳＣが排除され、３匹のマウスで奇形腫が発生したことが観察された。
図６８Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、Ｂ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＬＤ５００μｇ）。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、３日目～４０日目の期間中に行った。処理の開始から４０日後の追跡調査では、４匹のマウスすべてに奇形腫の発生が観察された。
図６９Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、Ｂ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１を局所的に投与した（ＬＤ５００μｇ）。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、１１日目～４４日目の期間中に行った。処理の開始から１６０日後の追跡調査では、５匹のうち４匹のマウスに奇形腫の発生が観察された。
図７０Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＨＤ１ｍｇのＢ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、３回、０日目、１日目、及び３日目に行った。処理の開始から１２０日後の追跡調査では、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図７１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＨＤ１ｍｇのＢ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、３回、３日目、４日目、及び６日目に行った。処理の開始から１００日後の追跡調査では、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図７２Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行った場合、局所ＨＤ１ｍｇのＢ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の投与により、ＨＩＰ ｉＰＳＣが殺傷された。Ｂ６Ｈ１２抗体処理を、３回、１１日目、１２日目、及び１４日目に行った。処理の開始から４０日後の追跡調査では、いずれのマウスでもｉＰＳＣが再出現しなかったことが観察された。
図７３Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣをＮＳＧマウスに皮下注射し、ヒトＮＫ細胞の養子移入を行い、Ｂ６Ｈ１２とＦｃアイソタイプＩｇＧ１の腹腔内（ＨＤ１ｍｇ）投与を３回、０日目、１日目、及び３日目に行った。処理の開始から１２０日後の追跡調査では、４匹のマウスすべてに奇形腫の発生が観察された。
実施例９．フルシトシン及び／またはガンシクロビルの投与により、低免疫細胞がインビトロ及び／またはインビボで殺傷される
プロトコルは実施例４に従った。
Ａ．インビトロでの低分子フルシトシン及びガンシクロビル
低分子フルシトシン及びガンシクロビルを、それらがそれぞれ、シトシンデアミナーゼ及びＨｓＶｔｋ殺傷スイッチに与える影響について、インビトロで試験した。試験したすべてのクローンは、ＮＫ細胞及びマクロファージによる殺傷から保護するのに十分なＣＤ４７レベルを有することが観察された（図７４）。プロドラッグの殺傷データも得た（図７５）。
Ｂ．インビボでの低分子フルシトシン
低分子フルシトシンを、それがシトシンデアミナーゼ殺傷スイッチに与える影響についてインビボで試験した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）を第５群のＮＳＧマウスに皮下注射した。生理食塩水を対照として使用した。図７６Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣは、ＮＳＧマウス（生理食塩水対照）において奇形腫を形成した。第５群のマウスの処理は以下の通りであった：ｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＣｙＤクローン２Ｇ１１を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理なし（生理食塩水、ＩＰ、０日目）。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）を第１群のＮＳＧマウスに皮下注射した。フルシトシンＬＤ（２００ｍｇ／ｋｇ）処理は、毎日腹腔内に行った。図７７Ａ～Ｂに示す通り、フルシトシンＬＤの投与により、１６～４４日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣが殺傷された。第１群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＣｙＤクローン２Ｇ１１を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理＝２００ｍｇ／ｋｇ／日のフルシトシン、ＩＰ（０日目）。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）を第２群のＮＳＧマウスに皮下注射した。フルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理は、毎日腹腔内に行った。図７８Ａ～Ｂに示す通り、フルシトシンＨＤの投与により、４４日の追跡調査で、１６～３２日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣが殺傷された。ＬＤと比較して、ＨＤの主な利点は観察されなかった。第２群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＣｙＤクローン２Ｇ１１を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、５００ｍｇ／ｋｇ／日のフルシトシン、ＩＰ（０日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）を第３群のＮＳＧマウスに皮下注射した。フルシトシンＬＤ（２００ｍｇ／ｋｇ）処理は、１３日目に開始し、その後毎日腹腔内に行った。図７９Ａ～Ｂに示す通り、フルシトシンＬＤの投与により、処理の開始後３～１１日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４０日の追跡調査中に検査した。第３群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＣｙＤクローン２Ｇ１１を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、２００ｍｇ／ｋｇ／日のフルシトシン、ＩＰ（１３日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＣｙＤクローン２Ｇ１１）を第４群のＮＳＧマウスに皮下注射した。フルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理は、１３日目に開始し、毎日腹腔内に行った。図８０Ａ～Ｂに示す通り、フルシトシンＨＤの投与により、処理の開始後３～１１日以内にＨＩＰ－ＣｙＤ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４０日の追跡調査中に検査した。ＬＤと比較して、ＨＤの利点は観察されなかった。第４群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＣｙＤクローン２Ｇ１１を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、５００ｍｇ／ｋｇ／日のフルシトシン、ＩＰ（１３日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）を第６群のＮＳＧマウスに皮下注射した。フルシトシンＨＤ（５００ｍｇ／ｋｇ）処理は、毎日腹腔内に行った。図８１Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣの生存は、細胞が殺傷スイッチを有さないにもかかわらず、フルシトシンＨＤによって損なわれると思われた。この群を、データ検証のために拡大した（図８１Ｃ～Ｄ及び図８１Ｅ～Ｆ）。第６群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰクローン１５を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、５００ｍｇ／ｋｇ／日のフルシトシン、ＩＰ（０日目）であった。
１ｘ１０６個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ ｌｕｃ＋（シトシンデアミナーゼクローン２－Ｇ１１）をＮＳＧマウスに皮下注射した。この対照群には処理を行わなかった。図８２Ａ～Ｂに示す通り、シトシンデアミナーゼ遺伝子編集は、ｉＰＳＣに影響を与えず、ｉＰＳＣはＮＳＧマウスで生存したことが観察された。
Ｃ．インビボでの低分子ガンシクロビル
低分子ガンシクロビルを、それがＨｓＶｔｋ殺傷スイッチに与える影響についてインビボで試験した。ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）を第５群のＮＳＧマウスに皮下注射した。対照群は生理食塩水処理を受けた。図８３Ａ～Ｂに示す通り、ヒトＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣの生存は、おそらくは殺傷スイッチ編集に起因して、ＮＳＧマウスで損なわれていると思われた。第５群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理なし（生理食塩水、ＩＰ、０日目）。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）を第１群のＮＳＧマウスに皮下注射した。ガンシクロビルＬＤ（５０ｍｇ／ｋｇ）処理は、毎日腹腔内に行った。図８４Ａ～Ｂに示す通り、ガンシクロビルＬＤの投与により、１２～２４日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４４日の追跡調査中に検査した。第１群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、５０ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビル、ＩＰ（０日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）を第２群のＮＳＧマウスに皮下注射した。ガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理は、毎日腹腔内に行った。図８５Ａ～Ｂに示す通り、ガンシクロビルＨＤの投与により、１２～１６日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４０日の追跡調査中に検査した。ＨＤはわずかに有利であると思われた。第２群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、７５ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビル、ＩＰ（０日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）を第３群のＮＳＧマウスに皮下注射した。ガンシクロビルＬＤ（５０ｍｇ／ｋｇ）処理は、１３日目に開始し、毎日腹腔内に行った。図８６Ａ～Ｂに示す通り、ガンシクロビルＬＤの投与により、処理の開始後７日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４０日の追跡調査中に検査した。第３群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、５０ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビル、ＩＰ（１３日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（ＨＳＶＴｋクローン１－Ｂ１０）を第４群のＮＳＧマウスに皮下注射した。ガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理は、１３日目に開始し、毎日腹腔内に行った。図８７Ａ～Ｂに示す通り、ガンシクロビルＨＤの投与により、処理の開始後７日以内にＨＩＰ－ＨｓＶｔｋ ｉＰＳＣが殺傷された。マウスを、４０日の追跡調査中に検査した。ＬＤと比較して、ＨＤの明らかな利点は観察されなかった。第４群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰ ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、７５ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビル、ＩＰ（１３日目）であった。
ヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ（クローン１５、殺傷スイッチなし）を第６群のＮＳＧマウスに皮下注射した。ガンシクロビルＨＤ（７５ｍｇ／ｋｇ）処理は、０日目から毎日腹腔内に行った。図８８Ａ～Ｂに示す通り、ガンシクロビルＨＤ処理は、殺傷スイッチのないＨＩＰ ｉＰＳＣに影響を与えないと思われた。第６群のマウスの処理は以下の通りであった：１ｘ１０６個のｈｉＰＳＣ ＨＩＰクローン１５ ｌｕｃ＋を含む希釈ＭＧ、Ｓ．Ｃ．、処理は、７５ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビル、ＩＰ（０日目）であった。
１ｘ１０６個のヒトＨＩＰ ｉＰＳＣ ｌｕｃ＋（ＨＳＶｔｋクローン１－Ｂ１０）をＮＳＧマウスに皮下注射した。処理は行わなかった（パイロット試験）。図８９Ａ～Ｂに示す通り、対照群では、ＨＳＶｔｋ編集は、ＮＳＧマウスにおけるｉＰＳＣ生存に影響を与えるとは思われなかった。
結論
本技術の実施形態の上記の詳細な説明は、網羅的であること、または該技術を上記で開示された正確な形態に限定することを意図していない。本技術の特定の実施形態、及びそれに対する実施例が、例示目的で上記に説明されるが、関連分野の当業者が認識するように、種々の均等の修正が、本技術の範囲内において可能である。例えば、ステップは所与の順序で提示されているが、代替的な実施形態は、異なる順序でステップを行い得る。本明細書に記載の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供してもよい。
以上から、本技術の特定の実施形態が例示の目的で本明細書に記載されているが、本技術の実施形態の説明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、周知の構成要素及び機能は詳細に示されていないまたは説明されていないことを理解されたい。文脈が許す場合、単数または複数の用語は、それぞれ、複数または単数の用語を含み得る。さらに、本技術のいくつかの実施形態と関連付けられた利点は、それらの実施形態に照らして記載されているが、他の実施形態もまた、かかる利点を示す可能性があり、すべての実施形態が、本技術の範囲内に入るように必ずしもかかる利点を示すことを要するとは限らない。したがって、本開示及び関連付けられた技術は、本明細書に明示的に示されないまたは記載されない他の実施形態を包含することができる。

Claims (74)

  1. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  2. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  3. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチド及び少なくとも１つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ、及び／またはＴＣＲベータの発現が低下している、Ｔ細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  4. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子、及びＴＣＲアルファの発現が低下しており、外因性のＣＤ４７ポリペプチド及びＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されたＴ細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  5. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された膵島細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  6. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、（ｉ）外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  7. ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤を、それを必要とする対象に投与することを含む方法であって、前記対象が、（ｉ）外因性のＣＤ４７、ＣＤ４６、及びＣＤ５９ポリペプチドを発現するように操作された、ならびに（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している膵島細胞の集団を以前に投与されている、前記方法。
  8. 対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を減少させる方法であって、
    （ａ）前記対象に対して、ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を投与すること、
    （ｂ）（ａ）で投与された前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の前記第１の用量の第１のアウトカムを判断すること、
    （ｃ）任意に、（ｂ）における前記第１のアウトカムに基づいて、前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第２の用量を投与すること、及び
    （ｄ）任意に、（ｃ）で投与された前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の前記第２の用量の第２のアウトカムを判断することを含む、前記方法。
  9. （ａ）対象に含まれる外因性のＣＤ４７ポリペプチドを発現するように操作された細胞の集団を定量化すること、
    （ｂ）前記細胞の集団を少なくとも２０％減少させるのに有効であるＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の第１の用量を判断すること、及び
    （ｃ）前記対象に対して、前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤の前記第１の用量を投与することを含む方法。
  10. 前記Ｔ細胞が、初代細胞である、請求項２、３、または４のいずれかに記載の方法。
  11. 前記Ｔ細胞が、同種異系である、請求項２、３、または４のいずれかに記載の方法。
  12. 前記Ｔ細胞が、ｉＰＳＣから分化する、請求項２、３、または４のいずれかに記載の方法。
  13. 前記Ｔ細胞が、さらに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される、請求項２に記載の方法。
  14. 前記ＣＡＲが、チサゲンレクルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、及びブレクスカブタジェンアウトルーセルからなる群から選択されるＣＤ１９ ＣＡＲである、請求項３、４、または１３のいずれかに記載の方法。
  15. 前記ＣＡＲが、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤ１９ ＣＡＲである、請求項３、４、または１３のいずれかに記載の方法。
  16. 前記ＣＤ１９ ＣＡＲが、配列番号１１６の核酸配列によってコードされる、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される、請求項２、３、または４のいずれかに記載の方法。
  18. 前記膵島細胞が、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される、請求項５、６、または７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記膵島細胞が、ＣＤ１４２の発現が低下するように操作される、請求項５、６、または７のいずれかに記載の方法。
  20. 前記膵島細胞が、初代細胞である、請求項５、６、または７のいずれかに記載の方法。
  21. 前記膵島細胞が、ｉＰＳＣから分化する、請求項５、６、または７のいずれかに記載の方法。
  22. 前記ＣＡＲ及び前記外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子が、バイシストロン性ベクターにて前記Ｔ細胞に導入されたものである、請求項３、４、または１３のいずれかに記載の方法。
  23. 前記バイシストロン性ベクターが、レンチウイルスを介して前記Ｔ細胞に導入されたものである、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記ＣＡＲ及び前記外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子が、単一のプロモーターの制御下にある、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記第１のアウトカム及び第２のアウトカムが、独立して、（ｉ）細胞数の約１０％～１００％の減少、（ｉｉ）有害事象の約１０％～１００％の減少、及び（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組み合わせからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
  26. 前記第１の用量及び／または前記第２の用量が、
    （ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇで、
    （ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または
    （ｉｉｉ）１日～３週間
    投与される、請求項８または９に記載の方法。
  27. 前記第１の用量及び前記第２の用量が同じである、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記細胞が、初代細胞である、請求項１、８、または９のいずれかに記載の方法。
  29. 前記初代細胞が、Ｔ細胞または膵島細胞である、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記細胞が、ｉＰＳＣから分化する、請求項１、８、または９のいずれかに記載の方法。
  31. 前記分化した細胞が、心細胞、神経細胞、内皮細胞、Ｔ細胞、膵島細胞、網膜色素上皮細胞、肝細胞、甲状腺細胞、皮膚細胞、血液細胞、初代細胞、及び上皮細胞からなる群から選択される、請求項１２、２１、または３０のいずれかに記載の方法。
  32. 前記細胞が、ＣＤ１６、ＣＤ２４、ＣＤ３５、ＣＤ３９、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ２００、ＣＣＬ２２、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、Ｃ１阻害物質、ＦＡＳＬ、ＩＤＯ１、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｅの重鎖、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ｓｅｒｐｉｎｂ９、ＣＣｌ２１、Ｍｆｇｅ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つのさらなる因子を発現するように操作される、請求項１、８、または９のいずれかに記載の方法。
  33. 前記Ｔ細胞が、ＴＣＲα及び／またはＴＣＲβの発現が低下するように操作される、請求項２、３、４、または２９のいずれかに記載の方法。
  34. 前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）及び／またはプログラム細胞死（ＰＤ１）の発現が低下するように操作される、請求項２、３、４、または２９のいずれかに記載の方法。
  35. 前記外因性のＣＤ４７ポリペプチドをコードする遺伝子が、前記細胞のゲノム遺伝子座への相同組み換え修復（ＨＤＲ）介在性の挿入により前記細胞に導入されたものである、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  36. 前記ゲノム遺伝子座が、Ｂ２Ｍ遺伝子座、ＣＩＩＴＡ遺伝子座、ＴＲＡＣ遺伝子座、ＴＲＢＣ遺伝子座、及びセーフ・ハーバー遺伝子座からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記セーフ・ハーバー遺伝子座が、ＡＡＶＳ１、ＡＢＯ、ＣＣＲ５、ＣＬＹＢＬ、ＣＸＣＲ４、Ｆ３、ＦＵＴ１、ＨＭＧＢ１、ＫＤＭ５Ｄ、ＬＲＰ１、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＲＨＤ、ＲＯＳＡ２６、及びＳＨＳ２３１遺伝子座からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記ＣＡＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＢＣＭＡ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗原に結合する、請求項３、４、または１３のいずれかに記載の方法。
  39. 前記第１のアウトカム及び／または第２のアウトカムが、有害事象である、請求項８に記載の方法。
  40. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象が前記細胞を投与されてから少なくとも１日後に投与される、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  41. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象が前記細胞を投与されてから少なくとも１週後に投与される、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  42. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象が前記細胞を投与されてから少なくとも１か月後に投与される、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  43. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象が前記投与された細胞に関連する有害事象を経験した後に投与される、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  44. 前記有害事象が、過剰増殖、形質転換、腫瘍形成、サイトカイン放出症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、炎症、感染、吐き気、嘔吐、出血、間質性肺炎、呼吸器疾患、黄疸、体重減少、下痢、食欲不振、けいれん、腹痛、肝静脈閉塞症（ＶＯＤ）、生着不全、臓器損傷、不妊症、ホルモンの変化、異常な成長形成、白内障、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）からなる群から選択される、請求項３９または４３のいずれかに記載の方法。
  45. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７結合ドメインを含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  46. 前記ＣＤ４７結合ドメインが、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）またはその断片を含む、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃドメインを含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  48. 前記ＩｇＧのＦｃドメインが、ＩｇＧ１のＦｃドメインを含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記ＩｇＧ１のＦｃドメインが、ヒト抗体の断片を含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２、及びＡＬＸ１４８からなる群から選択される、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  51. 前記ＩｇＧのＦｃドメインが、ＩｇＧ４のＦｃドメインを含む、請求項４７に記載の方法。
  52. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、抗体である、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記抗体が、ＭＩＡＰ４１０、Ｂ６Ｈ１２、及びＭａｇｒｏｌｉｍａｂからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記細胞の集団を減少させるのに有効な用量で投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記細胞の集団が、約１０％～１００％減少する、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記細胞の集団が排除される、請求項５４に記載の方法。
  57. 前記細胞の集団の減少が、免疫応答を介して生じる、請求項５４に記載の方法。
  58. 前記免疫応答が、前記細胞におけるＮＫ細胞介在性の細胞殺傷、マクロファージ介在性の細胞殺傷、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象に対して、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または頭蓋内投与される、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  60. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象に対して、１～２０日の間隔で、１０日～６か月の期間投与される、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、前記対象に対して、
    （ｉ）０．０５、０．１、０．３、１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で、
    （ｉｉ）１２時間に１回、２４時間に１回、３６時間に１回、もしくは４８時間に１回、及び／または
    （ｉｉｉ）１日～３週間
    投与される、請求項６０に記載の方法。
  62. さらに、前記対象に対してＩＬ－２を投与することを含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  63. 前記ＣＤ４７－ＳＩＲＰα封鎖剤が、ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片、ＣＤ４７に結合する二重特異性抗体、ＣＤ４７に結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＣＤ４７含有融合タンパク質、ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片、ＳＩＲＰαに結合する二重特異性抗体、ＳＩＲＰαに結合する免疫サイトカイン融合タンパク質、ＳＩＲＰα含有融合タンパク質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  64. 前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ｍａｇｒｏｌｉｍａｂ（Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４）、ＣＣ－９０００２、ＩＢＩ－１８８、ＩＢＩ－３２２、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１）、ＡＬＸ１４８、ＴＪ０１１１３３、ＦＡ３Ｍ３、ＺＬ１２０１、ＡＫ１１７、ＡＯ－１７６、ＳＲＦ２３１、ＧｅｎＳｃｉ－０５９、Ｃ４７Ｂ１５７、Ｃ４７Ｂ１６１、Ｃ４７Ｂ１６７、Ｃ４７Ｂ２２２、Ｃ４７Ｂ２２７、Ｖｘ－１００４、ＨＭＢＤ００４、ＳＨＲ－１６０３、ＡＭＭＳ４－Ｇ４、ＲＴＸ－ＣＤ４７、及びＩＭＣ－００２からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記ＣＤ４７に結合する抗体またはその断片が、ＣＤ４７に対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＣＤ４７に対するＦａｂ、ＣＤ４７に対するＶＨＨナノボディ、ＣＤ４７に対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
  66. 前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＡＤＵ－１８０５、ＣＣ－９５２５１、ＯＳＥ－１７２（ＢＩ ７６５０６３）、ＫＷＡＲ２３、及びＰ３６２からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
  67. 前記ＳＩＲＰαに結合する抗体またはその断片が、ＳＩＲＰαに対する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ＳＩＲＰαに対するＦａｂ、ＳＩＲＰαに対するＶＨＨナノボディ、ＳＩＲＰαに対するＤＡＲＰｉｎ、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
  68. 前記ＳＩＲＰα含有融合タンパク質が、Ｆｃドメインに結合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含む、請求項６３に記載の方法。
  69. 前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるＦｃドメインまたはその部分を含む、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記細胞が、ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子及び／またはＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子の発現が低下している、請求項１、２、５、８、または９のいずれかに記載の方法。
  71. ＭＨＣクラスＩ及び／またはＭＨＣクラスＩＩの発現がノックアウトされる、請求項３、４、６、７、または７０のいずれかに記載の方法。
  72. 前記ＭＨＣクラスＩ ＨＬＡの発現の低下が、Ｂ２Ｍの発現の低下によって媒介され、ＭＨＣクラスＩＩの発現の低下が、ＣＩＩＴＡの発現の低下によって媒介される、請求項３、４、６、７、または７０のいずれかに記載の方法。
  73. Ｂ２Ｍ及び／またはＣＩＩＴＡの発現がノックアウトされる、請求項７１に記載の方法。
  74. 前記外因性のＣＤ４７ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
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