JP2023538283A - 代謝症候群の治療のための組成物及び方法 - Google Patents

代謝症候群の治療のための組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

肥満、脂肪肝症候群、糖尿病、肝線維症、ＮＡＳＨ、又は他の更なる代謝症候群の状態若しくは合併症を治療、予防、及び緩和するための方法が開示されており、方法は、ｍＲＮＡ分子、好ましくは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２の発現を予防、制限、又は調節するよう設計された有効量のオリゴヌクレオチドを投与することを含む。

Description

関連用途への相互参照
本出願は、２０２０年８月４日に出願された米国仮出願第６３／０６１，０４５号、及び２０２０年９月２４日に出願された米国仮出願第６３／０８２，７６２号に対する優先権及び利益を主張するものである。前述の特許出願の各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
本開示は、代謝症候群を阻害及び制御するためのオリゴヌクレオチドの使用に関する。ある特定の実施形態では、方法は、対象におけるアセチル－ｃｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）発現を阻害する、かつ／又は対象におけるジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）発現を阻害する、治療有効量の１つ以上のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを対象に投与することを含む。
代謝症候群、又は代謝性疾患は、関連する医学的状態及び関連する病態のクラスタである。典型的には、症候群は、以下の医学的状態：腹部肥満、血圧上昇、空腹時血漿グルコース上昇、高血清トリグリセリド、及び低レベルの高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルの５つのうち少なくとも３つに関連する。代謝症候群を有する個体は、心血管疾患及び糖尿病を発症するリスクがより高い。現在、米国人口の３分の１は、代謝症候群及び列挙された病態のうちの１つ以上を有すると考えられる。治療の進歩にもかかわらず、心血管疾患及び代謝性疾患を治療するための療法に対するアンメットメディカルニーズは依然として高い。
本開示は、代謝症候群を治療、復帰、及び／又は予防することを必要とする対象においてそれを治療、復帰、及び／又は予防する方法を提供する。本開示は、代謝症候群に関連する重要な遺伝子の発現を制限、制御、又は排除することができるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド分子を更に提供する。かかるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド分子は、一方がアセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ又はＡＣＡＣ）単独を標的とすることができ、別のものがジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）単独を標的とすることができるか、又はかかる分子の組み合わせが、ＡＣＣ及びＤＧＡＴ２を同時若しくは順に標的化するために使用され得る、様々な二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
本開示は、オリゴヌクレオチド（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド、例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現を低減するという発見に、少なくとも部分的に基づいている。したがって、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ内の標的配列は特定され、これらの標的配列に結合し、かつＡＣＣ又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ発現を阻害するオリゴヌクレオチドが生成された。本明細書で示されるように、オリゴヌクレオチドは、マウス、サル、及び／又はヒトＡＣＣ若しくはＤＧＡＴ２発現をインビボで阻害した。理論によって拘束されるものではないが、本明細書に記載されるＡＣＣを標的とするオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療に有用であり、本明細書に記載されるＤＧＡＴ２を標的とするオリゴヌクレオチドは、ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療に有用である。更に、本明細書で示されるように、ＡＣＣ及びＤＧＡＴ２の阻害剤（例えば、オリゴヌクレオチド）の組み合わせは、ＡＣＣの発現を低減するために相乗的に作用する。ＮＡＳＨのマウスモデルで評価した場合、ＡＣＣ及びＤＧＡＴ２阻害剤の組み合わせは、血清コレステロール、ＡＬＴレベル、肝臓脂肪症、トリグリセリドレベル、及び肝臓炎症の他のマーカー（例えば、ＩＬ－６及びＩＬ－１２ｂ）を著しく低減した。理論によって拘束されるものではないが、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドなどのＡＣＣ及びＤＧＡＴ２を標的とする阻害剤の組み合わせは、肝線維症などの病態及び／又は代謝症候群に関連する病態を有する疾患、障害、又は状態の治療に有用である。
ある特定の実施形態では、方法は、対象において、ＡＣＣ発現若しくは活性を阻害する治療有効量の組成物、及び／又はＤＧＡＴ２発現若しくは活性を阻害する治療有効量の組成物を対象に投与することを含む。かかるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド分子は、代謝症候群及び関連する病態を有する対象を治療するために使用することができ、それによって、肝臓疾患（例えば、脂肪肝、脂肪性肝炎）、脂質異常症（例えば、高脂血症、高ＬＤＬコレステロール、低ＨＤＬコレステロール、高トリグリセリド血症、食後高トリグリセリド血症）、血糖コントロール障害（例えば、インスリン抵抗性、糖尿病）、心臓血管疾患（例えば、高血圧、内皮細胞機能不全）、腎臓疾患（例えば、急性腎臓障害、尿細管機能障害、近位尿細管への炎症誘発性変化）、代謝症候群、脂肪細胞機能不全、内臓脂肪蓄積、肥満、高尿酸血症、痛風、摂食障害、及び過剰な糖分への渇望を患っている対象に治療的に利益をもたらし得る。
したがって、一態様では、本開示は、本開示の２つのオリゴヌクレオチドが順に又は同時にのいずれかで一緒に使用される場合、各々がＡＣＣ又はＤＧＡＴ２のいずれか、又は両方の発現を阻害することができるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド分子を提供する。かかる分子は、単独で又は組み合わせて使用することができ、各々が投与量を変化させることができる。いくつかの態様では、かかるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド分子の各々は、二本鎖領域を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖からなる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２に対する相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号１、２９、３１、４３、及び５５のヌクレオチド配列のうちのいずれかと３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含むセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６のヌクレオチド配列と３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号１０５、１０７、１１１、１２６、１２９、及び１３７のヌクレオチド配列のうちのいずれかと３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含むセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１０６、１０８、１１２、１２５、１３０、及び１３８のヌクレオチド配列と３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号１０５、１０７、１１１、１１７、１１９、１２５、１２９、及び１３７のヌクレオチド配列のうちのいずれかと３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含むセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１０６、１０８、１１２、１１８、１２０、１２６、１３０、及び１３８のヌクレオチド配列と３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号１２６、１２９、及び１３７のヌクレオチド配列のうちのいずれかと３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含むセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１２５、１３０、及び１３８のヌクレオチド配列と３以下のヌクレオチドだけ異なる少なくとも連続する１５ヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１９～２７ヌクレオチド長、又は２１～２７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、１９～４０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、３６ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１９ヌクレオチド長又は少なくとも２１ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する。いくつかの実施形態では、二重鎖領域は、２０ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２のいずれかに対する相補性領域は、少なくとも連続する１９ヌクレオチド長又は少なくとも連続する２１ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖上のその３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する。
いくつかの実施形態では、代謝症候群を治療、復帰、及び／又は予防するためにＡＣＣ又はＤＧＡＴ２のいずれかを低減するためのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、２１～２７ヌクレオチド長であり、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２に対する相補性領域を有し、センス鎖は、その３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成し、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチド長の二重鎖構造を形成するが、共有結合ではない。
いくつかの実施形態では、ループＬは、テトラループである。いくつかの実施形態では、Ｌは、４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、Ｌは、配列ＧＡＡＡを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２７ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、及び２５ヌクレオチド長のセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、及び３６ヌクレオチド長のセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の二重鎖領域オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖上に３’オーバーハング配列を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’オーバーハング配列は、２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、３’オーバーハング配列は、プリンヌクレオチドのみを含む。いくつかの実施形態では、３’オーバーハング配列は、ＡＡ、ＧＧ、ＡＧ、及びＧＡから選択される。いくつかの実施形態では、３’オーバーハング配列は、ＧＧである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、各々が２１～２３ヌクレオチド長の範囲のアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１９～２１ヌクレオチド長の範囲の二重鎖構造を含む。いくつかのかかる実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１以上のヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、３’オーバーハング配列は、アンチセンス鎖、センス鎖、又はアンチセンス鎖及びセンス鎖上に存在する。いくつかの実施形態では、２ヌクレオチド長の３’オーバーハング配列であり、３’オーバーハング配列は、アンチセンス鎖上にあり、センス鎖は、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、それによりセンス鎖及びアンチセンス鎖は、２１ヌクレオチド長の二重鎖を形成する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全ては、例えば、２’－修飾で修飾されている。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合、好ましくは、ホスホロチオエート結合を含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、ホスフェート類似体、例えば、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートを含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、４’－オキシメチルホスホネートである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質などの１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。いくつかの実施形態では、（ＧａｌＮＡｃ）部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ステムループのＬの１つ以上のヌクレオチドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ステムループのＬの最大４つのヌクレオチドは、それぞれ、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ステムループのＬの３つのヌクレオチドは、それぞれ、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本開示の開示は、１つ以上のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象にオリゴヌクレオチドを送達する方法を提供し、方法は、対象に医薬組成物を投与することを含む。
別の態様では、本開示は、本開示のオリゴヌクレオチドを投与することによって、細胞、細胞集団、又は対象におけるＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現を低減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞、細胞集団、又は対象におけるＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現を低減する方法は、細胞若しくは細胞集団を接触させるステップ、又は有効量の本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド、若しくはその医薬組成物を対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現を低減する方法は、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２タンパク質の量若しくはレベル、又はその両方を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、治療薬として使用するための医薬品を提供する。いくつかの実施形態では、治療薬は、単剤療法として投与され、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現の阻害剤である。いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも第１及び第２の治療薬を含む医薬品を提供し、第１の治療薬は、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２の阻害剤である。いくつかの実施形態では、治療薬は、第２の治療薬の投与の前に、又はそれと断続的に投与される。いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、第２の治療薬と同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）又は同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）投与され、第１の治療薬は、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である。いくつかの実施形態では、第１の治療薬及び第２の治療薬は、いずれかの順序で逐次的に投与され、第１の治療薬は、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である。
いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である。いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である。いくつかの実施形態では、両方の治療薬は、オリゴヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤であり、両方の治療薬は、肝臓に優先的に送達される。いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬は、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤であり、両方の治療薬は、脂肪組織に優先的に送達される。いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、肝臓に優先的に送達され、第２の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤であり、脂肪組織に優先的に送達される。いくつかの実施形態では、第１の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、脂肪組織に優先的に送達され、第２の治療薬は、オリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤であり、肝臓に優先的に送達される。
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）ＡＣＣ阻害オリゴヌクレオチド、及び（ｉｉ）ＤＧＡＴ阻害オリゴヌクレオチドを含む、組み合わせ生成物を提供する。いくつかの実施形態では、組み合わせ生成物は、構成成分（ｉ）が、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、構成成分（ｉｉ）が、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である、生成物である。いくつかの実施形態では、組み合わせ生成物は、構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）、並びにその薬学的に許容される塩を含む組成物である。
いくつかの実施形態では、組み合わせ生成物の構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）は、持続放出及び／又は遅延放出のための、注射可能な懸濁液、ゲル、油、ピル、錠剤、座薬、粉末、カプセル、エアロゾル、軟膏、クリーム、パッチ、又はガレノス形態（ｇａｌｅｎｉｃ ｆｏｒｍｓ）の手段で製剤化される。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドによる治療のための対象は、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうちの１つ以上、又はその医薬組成物を投与し、それによって対象を治療することを含む。いくつかの実施形態では、治療のための対象は、ＡＣＣの阻害剤を投与されたか、又は投与されており、本開示は、ＤＧＡＴ２の阻害剤を投与する方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療のための対象は、ＤＧＡＴ２の阻害剤を投与されたか、又は投与されており、本開示は、ＡＣＣの阻害剤を投与する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＡＣＡＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態は、代謝性肝疾患、
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、
薬剤性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、
炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、
脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、
糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）などの慢性胆管障害、
原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、
炎症性腸疾患、クローン病、
潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、
胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、
ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される。
更なる態様では、本開示は、ＡＣＡＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療のための医薬品の製造における、本開示のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか、又はその医薬組成物の使用を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチド、又は本開示の医薬組成物は、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療において、使用のためのもの、又は使用に順応するものである。
更なる態様では、本開示のオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療するためのキットの形態で提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態では、キットは、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象へのオリゴヌクレオチドの投与のための説明書を含む添付文書を更に含む。
いくつかの態様では、本開示は、肝線維症を低減するための方法を提供し、方法は、ａ）ＡＣＣに特異的なｓｉＲＮＡ、及びｂ）ＤＧＡＴ２に特異的なｓｉＲＮＡを患者に提供することを含む。
使用又はキットのいくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態は、肝臓疾患（例えば、脂肪肝、脂肪性肝炎）、脂質異常症（例えば、高脂血症、高ＬＤＬコレステロール、低ＨＤＬコレステロール、高トリグリセリド血症、食後高トリグリセリド血症）、血糖コントロール障害（例えば、インスリン抵抗性、糖尿病）、心臓血管疾患（例えば、高血圧、内皮細胞機能不全）、腎臓疾患（例えば、急性腎臓障害、尿細管機能障害、近位尿細管への炎症誘発性変化）、代謝症候群、脂肪細胞機能不全、内臓脂肪蓄積、肥満、高尿酸血症、痛風、摂食障害、及び過剰な糖分からなる群から選択される。
ジェネリックＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）コンジュゲート化オリゴヌクレオチドの構造及び化学修飾パターンを示す概略図を提供する。ヌクレオチド２７～３０位（番号なし）は、テトラループ構造を示す。２’－ＯＭｅ＝２’－Ｏ－メチル、２’－Ｆ＝２’－フルオロ。 リン酸緩衝生理食塩水で処置されたマウスに対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料に残っている内因性マウスＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 未処置のマウス又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３）で処置されたマウスからの肝臓試料に残っている内因性マウスＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのパーセント（％）（図３Ａ）又は対数発現％（図３Ｂ）を示すグラフを提供する。 同上。 未処置のマウス又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ウェスタンブロットによって測定された場合の、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３）で処置されたマウスからの肝臓試料に残っている内因性マウスＡＣＣ１／２（総ＡＣＣ）タンパク質のパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対して、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３）で処置されたマウスからの肝臓試料における、シリウスレッド染色によって測定された場合の、肝臓脂肪症のレベルを示す画像を提供する。 未処置のマウス又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対して、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３）で処置されたマウスからの肝臓試料における肝線維症スコアを示すグラフを提供する。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１ 未処置のマウス又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料に残っているＣｏｌ１ａ１ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。＊＝ｐ＜０．０５ 未処置のマウス又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３）で処置されたマウスからの肝臓試料に残っているＶｉｍ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。＊＊＝ｐ＜０．０１ ＣＤ－１マウスにおける流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルからの肝臓試料に残っているＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされ、かつリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で製剤化された３ｍｇ／ｋｇのＡＣＡＣオリゴヌクレオチドの皮下投与の３日後、ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡをコードするプラスミドを、ＨＤＩを介してマウスに注射し、ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのパーセント（％）を、ＰＢＳで処置されたマウスに対するマウスからの肝臓試料で１日後に測定した。 ＣＤ－１マウスにおける流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルからの肝臓試料に残っているＡＣＡＣＡ（図７Ａ）及びＡＣＡＣＢ（図７Ｂ）ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされ、かつリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で製剤化された０．３、１、又は３ｍｇ／ｋｇのＡＣＡＣオリゴヌクレオチドの皮下投与の３日後、ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡをコードするプラスミドを、ＨＤＩを介してマウスに注射し、ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのパーセント（％）を、ＰＢＳで処置されたマウスに対するマウスからの肝臓試料で１日後に測定した。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）に対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドで処置されたＮＨＰからの肝臓試料に残っているサルＡＣＡＣＡ（図８Ａ及び８Ｃ）及びＡＣＡＣＢ（図８Ｂ及び８Ｄ）ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 同上。 同上。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたＮＨＰに対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドで処置されたＮＨＰからの肝臓試料における、ウェスタンブロットによって測定された場合の、ＡＣＣ１／２（総ＡＣＣ）のパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における内因性マウスＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、異なる用量（０．３、１、及び３ｍｇ／ｋｇ）での示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における内因性マウスＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 ＣＤ－１マウスにおける流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルからの肝臓試料におけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされ、かつリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で製剤化された３ｍｇ／ｋｇのＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの皮下投与の３日後、ヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡをコードするプラスミドを、ＨＤＩを介してマウスに注射し、ヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡのパーセント（％）を、ＰＢＳで処置されたマウスに対するマウスからの肝臓試料で１日後に測定した。 ＣＤ－１マウスにおける流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルからの肝臓試料におけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。ＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされ、かつリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で製剤化された０．３、１、又は３ｍｇ／ｋｇのＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの皮下投与の３日後、ヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡをコードするプラスミドを、ＨＤＩを介してマウスに注射し、ヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡのパーセント（％）を、ＰＢＳで処置されたマウスに対するマウスからの肝臓試料で１日後に測定した。 リン酸緩衝生理食塩水で処置された非ヒト霊長類（ＮＨＰ）に対する、示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドで処置されたＮＨＰからの肝臓試料におけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における内因性マウスＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつ示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ及び／又はＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における内因性マウスＤＧＡＴ１ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における内因性マウスＡＣＡＣＡ（図１６Ａ）及びＡＣＡＣＢ（図１６Ｂ）ｍＲＮＡノックダウンのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの試料における血清コレステロールのレベルを示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの試料における血清ＡＬＴのレベルを示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における、脂質面積％によって測定された場合の、肝臓脂肪症のレベルを示すグラフ（図１９Ａ）及び画像（図１９Ｂ）を提供する。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料におけるＳｒｅｂｐ１ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつ示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における、Ｆ４／８０染色によって測定された場合の、マクロファージ浸潤のレベルを示すグラフ（図２１Ａ）及び画像（図２１Ｂ）を提供する。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料における、王冠様構造（ＣＬＳ）を特定するアッセイによって測定された場合の、マクロファージ病態のレベルを示すグラフ（図２２Ａ）及び画像（図２２Ｂ）を提供する。 同上。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料におけるＩＬ６ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料におけるＩＬ１２ｂ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料におけるＣｏｌ１ａ１ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で処置されたマウスに対する、ＧＡＮ－ＮＡＳＨの食事を与えられ、かつＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣ（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８）及び／又はＤＧＡＴ２（ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－１４６３）オリゴヌクレオチドで処置されたマウスからの肝臓試料におけるＴｉｍｐ１ ｍＲＮＡのパーセント（％）を示すグラフを提供する。
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される場合、「およそ」又は「約」は、記載された基準値に類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「約」は、別段の記載がない限り、又は文脈から別途明らかでない限り、記載される基準値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はいずれかの方向でそれ以下（より大きい又はより少ない）に含まれる値の範囲を指す（かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、対象に、薬理学的に有用な様式（例えば、対象の状態を治療するために）で物質（例えば、オリゴヌクレオチド）を提供することを指す。
本明細書で使用される場合、「ＡＣＣ」又は「ＡＣＡＣ」という用語は、アセチル－コエンザイムＡカルボキシラーゼ（アセチル－ＣｏＡ）、アセチル－ＣｏＡの不可逆的カルボキシル化を触媒し、その２つの触媒活性であるビオチンカルボキシラーゼ及びカルボキシルトランスフェラーゼを介してマロニルＣｏＡを生成するビオチン依存性酵素を指す。本出願で使用される場合、ＡＣＣという用語は、ＡＣＣタンパク質の両方のアイソフォーム、ＡＣＣ１及びＡＣＣ２を一緒に指す。「ＡＣＣ」はまた、タンパク質であるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢをそれぞれコードする両方の遺伝子とも称され得る。ＡＣＣの阻害は、両方のＡＣＣタンパク質アイソフォームの阻害、両方のＡＣＣ遺伝子の転写レベルでの阻害、ＡＣＣ酵素活性の阻害、又はこれらの全てを指し得る。
本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２）の全て又は一部に対して相補的である配列を有する核酸系分子、特にシード配列を包含し、それによってｍＲＮＡとの二重鎖を形成することができる。したがって、本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、「相補的核酸系阻害剤」と称され得る。
本明細書で使用される場合、「減弱する」、「減弱すること」、「減弱」などは、低減又は効果的に停止することを指す。非限定的な例として、本明細書の治療うちの１つ以上は、対象における脂質異常症／高トリグリセリド血症／高脂血症の発症又は進行を低減するか、又は効果的に停止させ得る。この減弱は、例えば、脂質異常症／高トリグリセリド血症／高脂血症のうちの１つ以上の側面（例えば、症状、組織特徴、及び細胞、炎症、又は免疫活性など）の減少、脂質異常症／高トリグリセリド血症／高脂血症のうちの１つ以上の側面の検出可能な進行（悪化）がないこと、又は、対象においてそれらが別の方法で予期され得る場合に、脂質異常症／高トリグリセリド血症／高脂血症の検出可能な側面がないことによって例示され得る。
本明細書で使用される場合、「組み合わせ生成物」、「併用療法」、「多剤療法」などは、１つを超える治療薬又は１つを超える薬剤若しくはモダリティを使用して、疾患又は障害の治療に使用される療法を指す。組み合わせ生成物を含む治療薬は、同時に、断続的に、又は任意の順序で投与され得る。組み合わせ生成物は、例えば、２つのオリゴヌクレオチド、又は抗体若しくは小分子薬剤と組み合わせたオリゴヌクレオチドを含み得る。かかる療法については、使用される各薬剤の投与量は、患者の転帰を最適化及び／又は強化するために変化し得る。
本明細書で使用される場合、「相補的」とは、２つのヌクレオチドが互いに塩基対を形成することを可能にする２つのヌクレオチド間の構造関係（例えば、２つの対向する核酸上又は単一の核酸鎖の対向領域上）を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに対して相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することによって、一緒に塩基対を形成し得る。いくつかの実施形態では、相補的なヌクレオチドは、ワトソン・クリック様式で、又は安定した二重鎖の形成を可能にする任意の他の様式で、塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、２つの核酸は、本明細書に記載されるように、互いに相補的である複数のヌクレオチドの領域を有して、相補性領域を形成し得る。
本明細書で使用される場合、「ＤＧＡＴ２」は、ジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２を指すために使用される。ＤＧＡＴ２は、トリグリセリドの合成における最終反応を触媒する２つの酵素のうちの１つであり、この場合においてジアシルグリセロールは、長鎖脂肪アシル－ＣｏＡ分子に共有結合されている。本出願で使用される場合、ＤＧＡＴ２は、ＤＧＡＴ２タンパク質又はＤＧＡＴ２遺伝子のいずれかを指し得る。ＤＧＡＴ２の阻害は、ＤＧＡＴ２タンパク質の阻害、ＤＧＡＴ２遺伝子の転写レベルでの阻害、ＤＧＡＴ２活性の阻害、又はこれらの全てを指し得る。
本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較した場合、そのペントース糖の２’位にヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するデオキシリボヌクレオチドであり、糖、リン酸基、又は塩基における、又はそれらの修飾又は置換を含む。
本明細書で使用される場合、「二本鎖ＲＮＡ」又は「ｄｓＲＮＡ」は、実質的に二重鎖形態であるＲＮＡオリゴヌクレオチドを指す。いくつか実施形態では、ｄｓＲＮＡオリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的塩基対形成は、共有結合的に別個の核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列の間に形成される。いくつか実施形態では、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域の相補的塩基対形成は、共有結合されている核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列の間に形成した。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域の相補的塩基対形成は、折り畳まれている単一核酸鎖（例えば、ヘアピンを介して）から形成され、一緒に塩基対形成するヌクレオチドの相補的逆平行配列を提供する。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、互いに完全に二重鎖化された２つの共有結合的に別個の核酸鎖を含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、部分的に二重鎖化された２つの共有結合的に別個の核酸鎖（例えば、一方又は両端にオーバーハングを有する）を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、したがって、１つ以上のミスマッチを有してもよく、これは内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含んでもよい。
本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関する「二重鎖」は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対形成を介して形成される構造を指す。
本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、例えば、所望の一貫性又は安定化効果を提供するか、又は寄与するために、組成物に含まれ得る非治療薬を指す。
本明細書で使用される場合、「肝細胞」は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は、肝臓の質量の約７０％～８５％を占め、血清アルブミン、ＦＢＮ、及び凝固因子のプロトロンビン群（因子３及び４を除く）を製造する。肝細胞系統細胞のマーカーには、これらに限定されないが、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が含まれる。成熟肝細胞のマーカーには、これらに限定されないが、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリアセトアセテートヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－ホスフェート（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）、及びＯＣ２－２Ｆ８が含まれる。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＮＡＴＵＲＥ ４９４：２４７－５０を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「肝毒性薬剤」は、それ自体が肝臓に毒性であるか、又は肝臓に毒性である代謝物を形成するように処理され得る、化合物、ウイルス、又は他の物質を指す。肝毒性薬剤には、これらに限定されないが、四塩化炭素（ＣＣｌ４）、アセトアミノフェン（パラセタモール）、塩化ビニル、ヒ素、クロロホルム、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリン及びフェニルブタゾンなど）が含まれる。
本明細書で使用される場合、「不安定リンカー」は、切断され得る（例えば、酸性ｐＨによって）リンカーを指す。「かなり安定なリンカー」とは、切断できないリンカーを指す。
本明細書で使用される場合、「肝臓炎症」又は「肝炎」は、肝毒性薬剤への曝露によって引き起こされ得る、特に損傷又は感染の結果として、肝臓が腫脹、機能不全、及び／又は疼痛する身体状態を指す。症状には、黄ばみ（皮膚又は眼の黄ばみ）、疲労、衰弱、悪心、嘔吐、食欲減退、及び体重減少が含まれ得る。肝臓炎症は、未治療のまま放置すると、線維症、肝硬変、肝不全、又は肝臓がんに進行し得る。
本明細書で使用される場合、「肝線維症（ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、「肝線維症（Ｌｉｖｅｒ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、又は「肝臓の線維症」は、炎症及び肝細胞死から生じるコラーゲン（Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶ）、ＦＢＮ、アンデュリン、エラスチン、ラミニン、ヒアルロン酸、及びプロテオグリカンを含み得る細胞外マトリックスタンパク質の肝臓における過剰な蓄積を指す。肝線維症は、未治療のまま放置すると、肝硬変、肝不全、又は肝臓がんに進行し得る。
本明細書で使用される場合、「ループ」は、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝剤中、細胞中）で、対形成していない領域に隣接する２つの逆平行領域がハイブリダイズして二重鎖を形成するように（「ステム」と称される）、互いに十分に相補的である核酸の２つの逆平行領域に隣接する核酸を（例えば、オリゴヌクレオチド）の対形成していない領域を指す。
本明細書で使用される場合、「代謝症候群」又は「代謝性肝疾患」は、これらに限定されないが、腹部肥満、血圧上昇、空腹時血漿グルコース上昇、高血清トリグリセリド、肝線維症、及び低レベルの高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）レベルを含む、関連する医学的状態及び関連する病態のクラスタによって特徴付けられる障害を指す。本明細書で使用される場合、代謝症候群又は代謝性肝疾患という用語は、代謝症候群及び代謝性肝疾患に関連する、幅広い直接的及び間接的な症状、疾患、並びに病態を包含してもよく、文書全体を通して使用される状態の拡大されたリストを伴う。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド間結合」は、ホスホジエステル結合を含む参照ヌクレオチド間結合と比較した場合、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然発生型結合である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、１つ以上の望ましい特性を、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する抵抗性、ヌクレアーゼ抵抗性、溶解性、生物学的利用能、生物学的活性、免疫原性の低下などを改善し得る。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド、及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然発生型ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基、及び／又はリン酸基に１つ以上の化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドにコンジュゲートされた１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、１つ以上の望ましい特性を、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する抵抗性、ヌクレアーゼ抵抗性、溶解性、生物学的利用能、生物学的活性、免疫原性の低下などを改善し得る。
本明細書で使用される場合、「ニックテトラループ構造」は、分離センス（パッセンジャー）鎖及びアンチセンス（ガイド）鎖によって特徴付けられるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造を指し、その場合、センス鎖は、アンチセンス鎖との相補性領域を有し、鎖のうちの少なくとも１つ、概してセンス鎖は、少なくとも１つの鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するよう構成されたテトラループを有する。
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、短い核酸（例えば、約１００ヌクレオチド長未満）を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）又はｄｓであってもよい。オリゴヌクレオチドは、二重鎖領域を有しても、有さなくてもよい。非限定的な例のセットとして、オリゴヌクレオチドは、これらに限定されないが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短ｓｉＲＮＡ、又はｓｓ ｓｉＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、二本鎖（ｄｓＲＮＡ）は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「オーバーハング」は、１つの鎖又は領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を越えて延在する１つの鎖又は領域から生じる末端非塩基対形成ヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、ｄｓＲＮＡの５’末端又は３’末端で二重鎖領域から延在する、１つ以上の対形成していないヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オーバーハングは、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’又は５’オーバーハングである。
本明細書で使用される場合、「ホスフェート類似体」は、ホスフェート基の静電特性及び／又は立体特性を模倣する化学的部分を指す。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、５’－ホスフェートの代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに位置付けられ、これはしばしば酵素除去の影響を受けやすい。いくつかの実施形態では、５’ホスフェート類似体は、ホスファターゼ抵抗性結合を含む。ホスフェート類似体の例としては、これらに限定されないが、５’ホスホネート、例えば、５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドの糖の４’－炭素位置にホスフェート類似体（４’－ホスフェート類似体と称される）を有する。４’－ホスフェート類似体の例は、オキシメチルホスホネートであり、オキシメチル基の酸素原子は、糖部分（例えば、その４’－炭素）又はその類似体に結合される。例えば、米国仮特許出願第６２／３８３，２０７号（２０１６年９月２日出願）及び第６２／３９３，４０１号（２０１６年９月１２日出願）を参照されたい。他の修飾は、オリゴヌクレオチドの５’末端に対して開発されている（例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１１／１３３８７１号、米国特許第８，９２７，５１３号、及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４３：２９９３－３０１１を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、遺伝子（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２）の「低減された発現」は、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、試料、又は対象）と比較して、遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ）又はタンパク質の量若しくはレベルの減少、及び／又は細胞、細胞集団、試料、若しくは対象の遺伝子の量又は活性レベルの減少を指す。例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列に対して相補的であるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド）と細胞を接触させる行為は、ｄｓＲＮＡにより処理されていない細胞と比較した場合に、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ、タンパク質、並びに／又は活性の量若しくはレベルの減少をもたらす（例えば、ＲＮＡｉ経路によるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの分解を介して）。同様に、かつ本明細書で使用される場合、「発現を低減すること」は、遺伝子（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２）の低減された発現をもたらす作用を指す。本明細書で使用される場合、「ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の低減」は、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、試料、又は対象）と比較した場合の、細胞、細胞集団、試料、又は対象におけるＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質、並びに／又はＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベルの減少を指す。
本明細書で使用される場合、「相補性領域」は、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝液中、細胞中など）で、ヌクレオチドの２つの配列間のハイブリダイゼーションを可能にするために、ヌクレオチドの逆平行配列に対して十分に相補的である核酸のヌクレオチドの配列（例えば、ｄｓＲＮＡ）を指す。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ標的配列（例えば、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２）に対して相補的領域を有する標的化配列を含む。
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」は、その２’位にヒドロキシル基を含む、そのペントース糖としてリボースを有するヌクレオチドを指す。修飾リボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドであり、リボース、リン酸基、又は塩基における、又はそれらの修飾又は置換を含む。
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」は、（ａ）アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部が、標的ｍＲＮＡの切断においてアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用される、センス鎖（パッセンジャー）及びアンチセンス鎖（ガイド）を有するｄｓＲＮＡ、又は（ｂ）アンチセンス鎖（又はアンチセンス鎖の一部）が、標的ｍＲＮＡの切断においてＡｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用される、単一のアンチセンス鎖を有するｓｓオリゴヌクレオチドのいずれかを指す。
本明細書で使用される場合、「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合）により一緒に結合されたヌクレオチドの単一の連続する配列を指す。いくつかの実施形態では、鎖は、２つの遊離末端（例えば、５’末端及び３’末端）を有する。
本明細書で使用される場合、「対象」は、マウス、ウサギ、及びヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象は、ヒト又はＮＨＰである。更に、「固体」又は「患者」は、「対象」と互換的に使用され得る。
本明細書で使用される場合、「合成」は、人工的に合成される（例えば、機械（例えば、固体核酸合成器）を使用して）か、又はそうでなければ通常分子を産生する天然源（例えば、細胞若しくは生物）から誘導されない核酸又は他の分子を指す。
本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」は、目的の組織又は細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、かつ目的の組織又は細胞に他の物質を標的化する目的で別の物質にコンジュゲート化可能である分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドを特定の組織又は目的の細胞に標的化する目的で、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされてもよい。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、細胞表面受容体に選択的に結合する。したがって、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされた場合の標的化リガンドは、細胞表面上に発現される受容体への選択的結合、並びにオリゴヌクレオチド、標的化リガンド、及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化を介して、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内の標的化リガンドから放出されるように、細胞内在化後に又は細胞内在化中に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされている。
本明細書で使用される場合、「テトラループ」は、ヌクレオチドの隣接配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接する二重鎖の安定性を増加させるループを指す。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチド配列からなる同等の長さのループのセットから、予期される隣接するステム二重鎖のＴｍよりも高い、隣接するステム二重鎖の融解温度（Ｔｍ）の増加として、平均して検出可能である。例えば、テトラループは、１０ｍＭのＮａＨＰＯ４において、少なくとも約５０℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約５６℃、少なくとも約５８℃、少なくとも約６０℃、少なくとも約６５℃、又は少なくとも約７５℃のＴｍを、少なくとも２個の塩基対（ｂｐ）の長さの二重鎖を含むヘアピンに付与することができる。いくつかの実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって、隣接するステム二重鎖においてｂｐを安定化し得る。更に、テトラループ中のヌクレオチド間の相互作用には、これらに限定されないが、非ワトソン・クリック塩基対形成、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が含まれる（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６８０－８２、Ｈｅｕｓ＆Ｐａｒｄｉ（１９９１）ＳＣＩＥＮＣＥ ２５３：１９１－９４）。いくつかの実施形態では、テトラループは、３～６個のヌクレオチドを含むか、又はそれらから成り、典型的には、４～５個のヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、テトラループは、３、４、５、又は６個のヌクレオチドを含むか、又はそれらからなり、それらは修飾されて、又は修飾されなくてもよい（例えば、標的化部分にコンジュゲートされても、されなくてもよい）。一実施形態では、テトラループは、４つのヌクレオチドからなる。任意のヌクレオチドをテトラループに使用してもよく、かかるヌクレオチドに対する標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号を、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１３：３０２１－３０に記載されるように使用してもよい。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあってもよく、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）又はＧ（グアニン）がその位置にあってもよいことを意味するために使用され得、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、又はＴ（チミン）がその位置にあってもよいことを示すために使用され得る。テトラループの例としては、テトラループのＵＮＣＧファミリー（例えば、ＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループが挙げられる（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ ８７：８４６７－８４７１、Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１９：５９０１－５９０５）。ＤＮＡテトラループの例には、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ）、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ））ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、及びテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が挙げられる。例えば、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＢＩＯＣＨＥＭ． ４１：４２８１－１４２９２、Ｓｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．（２０００）ＮＩＰＰＯＮ ＫＡＧＡＫＫＡＩ ＫＯＥＮ ＹＯＫＯＳＨＵ ７８：７３１を参照されたい。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニックテトラループ構造内に含まれる。
本明細書で使用される場合、「治療する」又は「治療すること」は、例えば、治療薬（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド）を対象に投与することによって、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して対象の健康及び／又は幸福を改善する、又は状態の発生の可能性を予防する若しくは減少させる目的ための、それを必要とする対象にケアを提供する行為を指す。いくつかの実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの兆候、症状、又は寄与因子の頻度又は重症度を低減することを含む。
ＩＩ． ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現のオリゴヌクレオチド阻害剤
本開示は、特に、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害するオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡに標的化される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減する。
アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は、アセチル－ＣｏＡの不可逆的カルボキシル化を触媒し、その触媒活性であるビオチンカルボキシラーゼ（ＢＣ）及びカルボキシルトランスフェラーゼ（ＣＴ）の２つを介してマロニル－ＣｏＡを生成するビオチン依存性酵素である。ＡＣＣは、ビオチンカルボキシル担体タンパク質として第３の機能を果たす。ＡＣＣの触媒活性を介して生成されるマロニル－ＣｏＡは、脂肪酸の生合成の基質としての役割を果たす。ＡＣＣは、脂肪酸合成から脂肪酸酸化への移行において重要なスイッチ調節因子として作用する。（Ｅｓｌｅｒ＆Ｂｅｎｓｅ，ＣＥＬＬ ＭＯＬ ＧＡＳＴＲＯＥＮＴＥＲＯＬ ＨＥＰＡＴＯＬ．（２０１９） ８（２）：２４７－６７）。脂肪酸合成の制御は、脂肪酸ヒトのエネルギー代謝において重要な役割を果たす。この理由のため、ＡＣＣなどの脂肪酸合成の調節因子は、肥満、糖尿病、及び心血管合併症を含む代謝症候群に関連するヒト疾患を調節するための魅力的な標的と考えられている（Ｗａｋｉｌ＆Ａｂｕ－Ｅｌｈｅｉｇａ，（２００９）Ｊ ＬＩＰＩＤ ＲＥＳ．５０：Ｓ１３８－Ｓ１４３）。がんから糖尿病まで、及び農業用除草剤としてさえも、幅広い様々な適応症で使用するための転写レベルで、又は低分子調節因子によって、ＡＣＣの活性を調節するいくつかの試みがなされている（Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＲＥＣＥＮＴ ＰＡＴ ＡＮＴＩＣＡＮＣＥＲ ＤＲＵＧ ＤＩＳＣＯＶ．７（２）：１６８－８４）。これまでに、この取り組みは、患者にとって長期的な改善が可能な実行可能な治療薬を生産していない。本開示に従うＲＮＡｉの使用は、この試みを支援するために、異なるアプローチの様式及びオリゴヌクレオチド構成を提供する。
ゲノムの観点からは、ヒトゲノムは、それぞれ２つの主要なタンパク質アイソフォームであるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢと関連する２つの異なるＡＣＣタンパク質であるＡＣＣ１及びＡＣＣ２の遺伝子を含む。この標的と遺伝子及びタンパク質命名法の不一致により、先行技術において一貫性のない使用及び標識がもたらされるため、本出願は、概して、標的をＡＣＣと称する。ＡＣＣという用語は、遺伝子及びそのｍＲＮＡ産物（ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ）、並びにそれらのそれぞれのタンパク質産物（ＡＣＣ１及びＡＣＣ２）の両方を含む。時々、ｍＲＮＡ又はタンパク質アイソフォーム間の差異が強調される場合、本出願は、各アイソフォームを具体的に指す。
脂質代謝経路の調節因子としてのその役割に起因して、ＡＣＣの阻害は、代謝症候群及び関連障害を治療する治療薬として有望である。特定される標的として数十年にわたり、広範囲の適応症にわたる治療開発にとって魅力的であったにもかかわらず、ＡＣＣは、意義のある調節を行うことが依然として困難である。ＡＣＣ（ＡＣＣ１／ＡＣＣ２）の低分子阻害剤を使用したヒトで実施された研究は、ＮＡＦＬＤを有する対象に１ヶ月間投与後の脂質生合成の減少、ケトンの増加、及び肝トリグリセリドの低減を明らかにした（Ｈｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＣＥＬＬ ＭＥＴＡＢ．，２６（２）：３９４－４０６）。しかしながら、これらの同じ患者もまた、血清トリグリセリドレベルの２００％の増加を経験した。
ジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２、（ＤＧＡＴ２）は、トリグリセリドの合成における最終反応を触媒する２つの酵素のうちの１つであり、この場合においてジアシルグリセロールは、長鎖脂肪アシル－ＣｏＡ分子に共有結合されている。血清トリグリセリドの増加は、代謝症候群の顕著な特徴であり、転写レベルで又は他の手段による血清トリグリセリドレベルの調節は、障害の関連する症状の制御の鍵となる。更に、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を模倣する表現型をもたらす食事を与えられたマウスを使用した研究は、肝臓組織におけるＤＧＡＴ２の特異的ノックダウンが、炎症又は線維症を増加させることなく、これらの動物における肝臓脂肪症のより低いレベルの減少につながり得ることを示す（Ｗａｌｔｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ（２０１９）７０（６）：１９７２－８５）。しかしながら、ＤＧＡＴ２は、脂肪酸代謝に関与するいくつかの他の遺伝子標的よりも狭い範囲の機能、及びおそらくは活性と関連している。また、冗長及び重複機能をＤＧＡＴ２と共有する別の酵素ＤＧＡＴ１もある（Ｃｈｉｔｒａｊｕ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｊ ＬＩＰＩＤ ＲＥＳ．６０（６）：１１１２－２０）。しかしながら、前分野のものは、脂肪酸代謝に関与する他の関連遺伝子に広範な影響を与えることなく、この合成を確実に低下させることができる低分子化合物を見出すことに、限られた成功しかなかった。
したがって、本開示は、単独で又は組み合わせて、ＡＣＣ及びＤＧＡＴを標的とするＲＮＡｉ治療薬を提供する。
ｉ． ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含む標的配列に標的化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ配列内の標的配列に相当する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド、又はその一部、断片、若しくは鎖（例えば、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖又はガイド鎖）は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含む標的配列に結合又はアニーリングし、それによってＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、インビボでＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する目的で、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に標的化される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に標的化されたオリゴヌクレオチドによるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の阻害の量又は程度は、オリゴヌクレオチドの効力と相関する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に標的化されたオリゴヌクレオチドによるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の阻害の量又は程度は、オリゴヌクレオチドにより治療されたＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象又は患者における治療的利益の量又は程度と相関する。
複数の異なる種のｍＲＮＡ（例えば、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラット；例えば、実施例１を参照されたい）を含むＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２をコードするｍＲＮＡのヌクレオチド配列の試験を通して、かつインビトロ及びインビボ試験の結果として（例えば、実施例２、実施例３、及び実施例４～１０を参照されたい）、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡのある特定のヌクレオチド配列は、他のものよりもオリゴヌクレオチドベースの阻害を施すことができるため、本明細書のオリゴヌクレオチドの標的配列として有用であることが発見された。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓＲＮＡ）のセンス鎖は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡのセンス鎖の部分又は領域は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列は、配列番号１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、及び１５８のうちのいずれか１つの配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ標的配列は、配列番号１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、及び１５５のうちのいずれか１つの配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ標的配列は、配列番号１５０及び１５１のうちのいずれか１つの配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２標的配列は、配列番号１４９、１５６、１５７、及び１５８のうちのいずれか１つの配列を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２標的配列は、配列番号１５６及び１５７のうちのいずれか１つの配列を含むか、又はそれからなる。
ｉｉ． ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的化配列
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、細胞内のｍＲＮＡを標的化し、かつその発現を阻害する目的で、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡに対する相補性領域（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの標的配列内）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、相補的（ワトソン・クリック）塩基対形成によって、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に結合するか、又はそれにアニーリングする相補性領域を有する、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列（例えば、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖又はガイド鎖）を含む。標的化配列又は相補性領域は、概して、その発現を阻害する目的で、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡへのオリゴヌクレオチド（又はその鎖）の結合又はアニーリングを可能にする好適な長さ及び塩基含量である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、少なくとも約２１、少なくとも約２２、少なくとも約２３、少なくとも約２４、少なくとも約２５、少なくとも約２６、少なくとも約２７、少なくとも約２８、少なくとも約２９、又は少なくとも約３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、約１２～約３０（例えば、１２～３０、１２～２２、１５～２５、１７～２１、１８～２７、１９～２７、又は１５～３０）ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、約１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、２４ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に対して完全に相補的である標的化配列又は相補性領域（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はガイド鎖）を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列に対して部分的に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２の配列に対して完全に相補的である標的化配列又は相補性領域を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５０及び１５１のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５０及び１５１のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５０及び１５１のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５０及び１５１のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２４ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択される配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５６及び１５７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５６及び１５７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５６及び１５７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５６及び１５７のうちのいずれか１つの配列に対して相補的である標的配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域は、２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２の配列に対して部分的に相補的である標的化配列又は相補性領域を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つの配列に対して完全に相補的である標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３に示される配列に対して完全に相補的である標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つの配列に対して部分的に相補性である標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３に示される配列に対して部分的に相補的である標的化配列又は相補性領域を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列の連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、約１２～約３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２８、１２～２６、１２～２４、１２～２０、１２～１８、１２～１６、１４～２２、１６～２０、１８～２０、又は１８～１９）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを含むヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、ヌクレオチドの連続配列は、２０ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２標的配列の連続するヌクレオチドに対して相補的であるオリゴヌクレオチドの標的化配列又は相補性領域は、アンチセンス鎖の全長にわたる。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２標的配列の連続するヌクレオチドに対して相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性領域は、アンチセンス鎖の全長の一部にわたる。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２の標的配列のヌクレオチド１～２０にわたるヌクレオチドの連続的な広がりに対して少なくとも部分的に（例えば、完全に）相補的である相補性領域を含む（例えば、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖上に）。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、対応するＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列との１つ以上の塩基対（ｂｐ）ミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列又は相補性領域は、対応するＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列との、最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有してもよいが、但し、標的化配列又は相補性領域が適切なハイブリダイゼーション条件下でＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡに結合若しくはアニーリングする能力、並びに／又はオリゴヌクレオチドがＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する能力が、維持されるということを条件とする。あるいは、標的化配列又は相補性領域は、対応するＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的配列との１個以下、約２個以下、３個以下、４個以下、又は５個以下のミスマッチを有してもよいが、但し、標的化配列又は相補性領域が適切なハイブリダイゼーション条件下でＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡに結合若しくはアニーリングする能力、並びに／又はオリゴヌクレオチドがＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する能力が、維持されるということを条件とする。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１個のミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と２個のミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と３個のミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と４個のミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と５個のミスマッチを有する標的化配列又は相補性領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列との１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５個、又はそれ以上のミスマッチ）の標的化配列又は相補性領域を含み、ミスマッチのうちの少なくとも２つ（例えば、全て）は、連続して位置する（例えば、連続して２、３、４、５個、又はそれ以上のミスマッチ）か、又はミスマッチは、標的化配列若しくは相補性領域全体に散在する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列とともに、１つを超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５つ、又はそれ以上のミスマッチ）を有する標的化配列又は相補性領域を含み、ミスマッチのうちの少なくとも２つ（例えば、全て）は、連続して位置する（例えば、連続して２、３、４、５つ、又はそれ以上のミスマッチ）か、又は少なくとも１つ以上のミスマッチのない塩基対は、ミスマッチの間に位置するか、若しくはその組み合わせである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＡＣＣ標的配列との、最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＡＣＣ標的配列との、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、又は５個以下のミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、４３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＡＣＣ標的配列との、最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、４３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＡＣＣ標的配列との、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、又は５個以下のミスマッチを有してもよい。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＤＧＡＴ２標的配列との、最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号 １１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＤＧＡＴ２標的配列との、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、又は５個以下のミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＤＧＡＴ２標的配列との、最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、標的化配列又は相補性領域が、対応するＤＧＡＴ２標的配列との、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、又は５個以下のミスマッチを有してもよい。
ｉｉｉ． オリゴヌクレオチドの種類
様々なオリゴヌクレオチドの種類及び／又は構造は、これらに限定されないが、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡなどを含む、本明細書の方法におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２を標的化するのに有用である。本明細書又は他の箇所に記載されるオリゴヌクレオチドの種類のうちのいずれかは、本明細書のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２標的化配列を組み込むためのフレームワークとしての使用のために企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の上流又は下流のＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路と係合することによって、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する。例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１～５個のヌクレオチドの少なくとも１つの３’オーバーハングを有する約１９～２５ヌクレオチドのサイズを有する各鎖で開発されている（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。活性ＲＮＡｉ産物を生成するためにダイサーによって処理されるより長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、米国特許第８，８８３，９９６号を参照されたい）。更なる研究は、少なくとも１つの鎖の少なくとも１つの末端が、二重鎖標的化領域を超えて延長される延長ｄｓＲＮＡを生成し、これには、鎖のうちの１つが熱力学的安定化テトラループ構造を含む構造を含む構造が含まれる（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号及び第８，９２７，７０５号、並びに国際特許出願公開第２０１０／０３３２２５号を参照されたい）。かかる構造は、ｓｓ伸長（分子の一方又は両側に）並びにｄｓ伸長を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサーの関与（例えば、ダイサーの切断）の下流のＲＮＡｉ経路と係合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、ダイサー基質である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端にオーバーハング（例えば、１、２、又は３ヌクレオチド長）を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、標的ＲＮＡに対するアンチセンスである２１－ヌクレオチドガイド鎖と、相補的パッセンジャー鎖とを含み、この場合、両方の鎖はアニーリングし、１９－ｂｐ二重鎖及び２ヌクレオチドオーバーハングを、いずれか又は両方３’末端で形成する。２３個のヌクレオチドのガイド鎖と２１個のヌクレオチドのパッセンジャー鎖とを有するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチド設計も利用可能であり、ここで分子の右側には平滑末端があり（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５′末端）、分子の左側には２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハング（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３′末端）がある。かかる分子には、２１ｂｐ二重鎖領域がある。例えば、米国特許第９，０１２，１３８号、第９，０１２，６２１号、及び第９，１９３，７５３号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方が約１７～２６（例えば、１７～２６、２０～２５、又は２１～２３）ヌクレオチド長の範囲のセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、１９～３０のヌクレオチド長のアンチセンス鎖、及び１９～５０ヌクレオチド長のセンス鎖を含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端で１～４ヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二重鎖領域を形成する別個の鎖である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方が約１９～２２ヌクレオチド長の範囲のセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、等しい長さのものである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖若しくはアンチセンス鎖、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方のいずれかに３’オーバーハングがあるように、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、両方が約２１～２３ヌクレオチド長の範囲のセンス鎖及びアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドについては、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方の３’オーバーハングは、１又は２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチドのガイド鎖、及び２０ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有し、ここで分子の右側には平滑末端があり（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５′末端）、分子の左側には２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハング（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３′末端）がある。かかる分子には、２０ｂｐ二重鎖領域がある。
本明細書の組成物及び方法とともに使用するための他のオリゴヌクレオチド設計には、１６ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ（例えば、ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＩＮ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＡＮＤ ＢＩＯＬＯＧＹ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ又はより短いステムを有する；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＭＥＴＨＯＤＳ ＭＯＬ． ＢＩＯＬ．６２９：１４１－１５８を参照されたい）、平滑ｓｉＲＮＡ（例えば、長さが１９ｂｐｓのもの；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ＆Ｂａｋｅｒ（２００６）ＲＮＡ １２：１６３－１７６を参照されたい）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）ＮＡＴ．ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ．２６：１３７９－１３８２を参照されたい）、非対称のより短い二重鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）ＭＯＬ．ＴＨＥＲ．１７：７２５－３２を参照されたい）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ（２００４）ＦＥＢＳ ＬＥＴＴ．５５７：１９３－１９８を参照されたい）、ｓｓ ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ（２０１２）ＮＡＴ．ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ．３０：１０６３）、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．１２９：１５１０８－０９を参照されたい）、及び低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；，例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．３５：５８８６－９７を参照されたい）が含まれる。いくつかの実施形態で、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２の発現を低減又は阻害するために使用され得るオリゴヌクレオチド構造の更なる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びショートｓｉＲＮＡである（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＥＭＢＯ Ｊ．２１：４６７１－７９を参照されたい；また、米国特許出願公開第２００９／００９９１１５号を参照されたい）。
それでもなお、いくつかの実施形態では、本明細書のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減又は阻害するためのオリゴヌクレオチドは、ｓｓである。かかる構造には、これに限定されないが、ｓｓ ＲＮＡｉ分子が含まれ得る。最近の取り組みは、ｓｓ ＲＮＡｉ分子の活性を例示している（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）ＭＯＬ．ＴＨＥＲ．２４：９４６－５５を参照されたい）。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、核酸塩基配列を有するｓｓオリゴヌクレオチドであり、それは、５’から３’方向に記述された場合、特定の核酸の標的化セグメントの逆相補体を含み、細胞内のその標的ＲＮＡのＲＮａｓｅＨ介在性切断を誘導するように、又は（例えば、ミクスマー（ｍｉｘｍｅｒ）として）細胞内の標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように、（例えば、ギャップマーとして）好適に修飾される。本明細書で使用するためのＡＳＯは、例えば、米国特許第９，５６７，５８７号に示されるようなものを含む、当該技術分野で既知の任意の好適な様式で修飾され得る（例えば、長さ、核酸塩基の糖部分（ピリミジン、プリン）、及び核酸塩基の複素環部分の変化を含む）。更に、ＡＳＯは、特異的標的遺伝子の発現を低減するために数十年間使用されている（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＡＮＮＵ．ＲＥＶ．ＰＨＡＲＭＡＣＯＬ．５７：８１－１０５を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡと相補性領域を共有する。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＭ＿００１０９３として識別されるヒトＡＣＡＣＢ遺伝子の様々な領域を標的とする。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＭ＿１９８８３４として識別されるヒトＡＣＡＣＢ遺伝子の様々な領域を標的とする。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＭ＿００１２５３８９１．１として識別されるヒトＤＧＡＴ２遺伝子の様々な領域を標的とする。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＭ＿０３２５６４．５として識別されるヒトＤＧＡＴ２遺伝子の様々な領域を標的とする。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～５０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～２５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、及び８３のうちのいずれか１つに対して相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３のうちのいずれか１つに対して相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つに対して相補性である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３のうちのいずれか１つに対して相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、連続１５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、連続１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、連続２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的配列と１、２、又は３ヌクレオチドだけ異なる。
ｉｖ． 二重鎖オリゴヌクレオチド
本開示は、センス鎖（本明細書ではパッセンジャー鎖とも称される）及びアンチセンス鎖（本明細書ではガイド鎖とも称される）を含む、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２を標的化し、かつＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を阻害する（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ためのｄｓＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、別個の鎖であり、共有結合されていない。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、共有結合されている。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、二重鎖領域を形成し、センス鎖及びアンチセンス鎖、又はその部分は、相補的な様式で（例えば、ワトソン・クリック塩基対形成によって）互いに結合する。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、第１の領域（Ｒ１）及び第２の領域（Ｒ２）を有し、Ｒ２は、第１のサブ領域（Ｓ１）、テトラループ又はトリループ（Ｌ）、及び第２のサブ領域（Ｓ２）を含み、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に位置し、Ｓ１及びＳ２は、第２の二重鎖（Ｄ２）を形成する。Ｄ２は、様々な長さを有してもよい。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、約１～６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、２～６、３～６、４～６、５～６、１～５、２～５、３～５、又は４～５ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、１、２、３、４、５、又は６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、６ｂｐの長さである。
いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖のＲ１は、第１の二重鎖（Ｄ１）を形成する。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも約１５（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、又は少なくとも２１）ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、約１２～３０ヌクレオチド長の範囲である（例えば、１２～３０、１２～２７、１５～２２、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも１２ヌクレオチド長（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、又は少なくとも３０ヌクレオチド長）である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長にわたらない。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖若しくはアンチセンス鎖又はその両方のいずれかの全長にわたる。ある特定の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。
いくつかの実施形態では、本明細書のｄｓＲＮＡは、表１、３、４、６、８、及び９に配置されるように、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つの配列を有するセンス鎖と、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１、１２６、１３０、及び１３８から選択される相補的配列を含むアンチセンス鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
（ａ）それぞれ、配列番号２５及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号２７及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号２９及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号３１及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号３３及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号３５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号３７及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号３９及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号４１及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号４３及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号４５及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号４７及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号４９及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号５１及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号５３及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号５５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号５７及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号５９及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号６１及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号６３及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号６５及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号６７及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号６９及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号７１及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号７３及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号７５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号７７及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号７９及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号８１及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号８３及び８４から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号４３の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
（ａ）それぞれ、配列番号１１７及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１１９及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１２１及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１２３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１２５及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１２７及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１２９及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１３１及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１３３及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１３５及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号１３７及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号１３９及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号１４１及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号１４３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号１４５及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号１４７及び１４８から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号１１９の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１２０の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号１２９の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１３０の配列を含む。
いくつかの実施形態では、配列表に提示される配列は、オリゴヌクレオチド又は他の核酸の構造を記述する際に言及され得ることが理解されるべきである。かかる実施形態では、実際のオリゴヌクレオチド又は他の核酸は、指定の配列と比較して、指定の配列と本質的に同じ又は類似の相補的特性を保持しながら、１つ以上の代替ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物、又はＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）、及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド、及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合、及び／又は１つ以上の他の修飾を有してもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、ダイサー酵素によって作用された場合、成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖をもたらす、２５－ヌクレオチドセンス鎖及び２７－ヌクレオチドアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、２７ヌクレオチド（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ヌクレオチド）よりも長い。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、２５ヌクレオチド（例えば、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド）よりも長い。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号１６０～１８９から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２７ヌクレオチド（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ヌクレオチド）よりも長い。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号１６０～１８９から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２５ヌクレオチド（例えば、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド）よりも長い。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号１９０～２０５から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２７ヌクレオチド（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ヌクレオチド）よりも長い。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号１９０～２０５から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２５ヌクレオチド（例えば、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド）よりも長い。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、他の５’末端と比較して、熱力学的に安定性がより低い１つの５’末端を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端に平滑末端、及びアンチセンス鎖の３’末端に３’オーバーハングを含む非対称オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、約１～８ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８ヌクレオチド長）である。典型的には、ＲＮＡｉのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２ヌクレオチドオーバーハングを有する。しかしながら、他のオーバーハングも可能である。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５、若しくは６ヌクレオチドの長さを含む３’オーバーハングである。しかしながら、いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５、若しくは６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域、及び１～６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６０～１８９、及び１９０～２０５から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、１～６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８，４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、及び１４８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、１～６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６０～１８９、及び配列番号１９０～２０５から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８，４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、及び１４８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含み、オリゴヌクレオチドは、１～６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ）と相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、標的と相補的ではない。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、対形成していない。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、対形成していないＧＧを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡに対して相補的ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、ＧＧである。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドの各３’末端上の２つの末端ＧＧヌクレオチドのうちの一方又は両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、ニックテトラループ構造内のオリゴヌクレオチドの各３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、ＧＧである。典型的には、オリゴヌクレオチドの各３’末端上の２つの末端ＧＧヌクレオチドのうちの一方又は両方は、標的と相補的ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補性領域を含み、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、対形成していないＧＧを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８，４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、及び１４８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、対形成していないＧＧを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６０～１８９及び１９０～２０５から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８，４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、及び１４８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含み、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２つの末端ヌクレオチドは、対形成していないＧＧを含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）のミスマッチがある。センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つを超えるミスマッチがある場合、それらは、連続して位置する（例えば、連続して２つ、３つ、又はそれ以上）か、又は相補性領域全体に散在してもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端は、１つ以上のミスマッチを含む。一実施形態では、２つのミスマッチは、センス鎖の３’末端に組み込まれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端でのセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、ＲＮＡｉにおける合成二重鎖の効力を改善し、おそらくはダイサーによる処理を容易にすることを通してであった。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）のミスマッチがある。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）のミスマッチがある。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）のミスマッチがある。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ以上（例えば、１、２、３、４、又は５個）のミスマッチがある。
ａ． アンチセンス鎖
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２を標的化するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８のうちのいずれか１つに示される配列を含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１３８、１１２、１２６、１３０、及び１３８のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６から選択される配列を含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３０、３２、及び４４から選択される配列を含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１０６、１０８、１１２、１１８、１２０、１２６、１３０、及び１２８から選択される配列を含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１８、１２０、１２６、１３０、及び１２８から選択される配列を含むか、又はそれからなるアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、最大約５０ヌクレオチド長（例えば、最大５０、最大４０、最大３５、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、又は最大１２ヌクレオチド長）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、最大約４０ヌクレオチド長（例えば、最大４０、最大３５、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、又は最大１２ヌクレオチド長）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２ヌクレオチド長（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３５、又は少なくとも３８ヌクレオチド長）のアンチセンス鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２２、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０、又は３２～４０）ヌクレオチド長の範囲のアンチセンス鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのアンチセンス鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、「ガイド鎖」と称され得る。例えば、アンチセンス鎖が、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と係合し、Ａｇｏ２などのアルゴノートタンパク質に結合することができるか、又は１つ以上の類似の因子と係合若しくは結合することができ、標的遺伝子のサイレンシングを指示することができる場合、それはガイド鎖と称され得る。いくつかの実施形態では、ガイド鎖に対して相補的であるセンス鎖は、「パッセンジャー鎖」と称され得る。
ｂ． センス鎖
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２を標的化するための本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むか、又はそれからなるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、及び１４７のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むか、又はそれからなるセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、４３、及び５５から選択される配列を含むか、又はそれからなるセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６２、１６３、１６９、及び１７５から選択される配列を含むか、又はそれからなるセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択される配列を含むか、又はそれからなるセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９０、１９１、１９４、１９６、２００、及び２０３から選択される配列を含むか、又はそれからなるセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、最大約４０ヌクレオチド長（例えば、最大４０、最大３６、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、又は最大１２ヌクレオチド長）のセンス鎖（又はパッセンジャー鎖）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２ヌクレオチド長（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３６、又は少なくとも３８ヌクレオチド長）のセンス鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２１、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０、又は３２～４０）ヌクレオチド長の範囲のセンス鎖を有してもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ヌクレオチド長のセンス鎖を有してもよい。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ ｍＲＮＡを標的化し、ＡＣＣ発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１６０～１８９のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６０～１８９のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３個）の 配列番号１６０～１８９のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ ｍＲＮＡを標的化し、ＡＣＣ発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１６２、１６３、及び１６９のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６２、１６３、及び１６９のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ ｍＲＮＡを標的化し、ＡＣＣ発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、４３のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２９、３１、及び４３のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的化し、ＤＧＡＴ２発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１９０～２０５のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９０～２０５のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３） ヌクレオチドからなるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的化し、ＤＧＡＴ２発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号２００、２０３、１９４、１９１、１９６、及び１９０のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２００、２０３、１９４、１９１、１９６、及び１９０のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的化し、ＤＧＡＴ２発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１３７、１４３、１１９、１２５、１２９、及び１１７のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１３７、１４３、１１９、１２５、１２９、及び１１７のうちのいずれか１つに示される配列の、少なくとも連続する約１２（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３）ヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の３’末端にステムループ構造を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループは、鎖内塩基対形成によって形成される。いくつかの実施形態では、センス鎖は、その５’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、２ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、３ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、４ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、５ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、６ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、７ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、８ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、９ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、１０ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、１１ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、１２ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、１３ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステムループのステムは、１４ヌクレオチド長の二重鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ステムループは、分解（例えば、酵素分解）に対するオリゴヌクレオチド保護を提供し、標的細胞、組織、又は器官（例えば、肝臓）への標的化及び／又は送達を促進若しくは改善するか、又はその両方である。例えば、いくつかの実施形態では、ステムループのループは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ）への標的化、標的遺伝子発現（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現）の阻害、並びに／又は標的細胞、組織、若しくは器官（例えば、肝臓）への送達、取り込み、及び／若しくは浸透、又はそれらの組み合わせを促進、改善、又は増加させる１つ以上の修飾を含むヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態では、ステムループ自体又はステムループへの修飾は、オリゴヌクレオチドの固有の遺伝子発現阻害活性に影響を与えないか、又は実質的に影響を与えないが、安定性（例えば、分解に対する保護を提供する）並びに／又は標的細胞、組織、若しくは器官（例えば、肝臓）へのオリゴヌクレオチドの送達、取り込み、及び／又は浸透を促進、改善、又は増加させる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含む（例えば、その３’末端に）センス鎖を含み、Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、最大約１０ヌクレオチド長（例えば、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ヌクレオチド長）のＳ１とＳ２との間の結合したヌクレオチドの一本鎖ループを形成する。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌ）は、１０ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、テトラループは、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。いくつかの実施形態では、ステムループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号１５９）を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、その３’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、その５’末端にステムループ構造を含む。いくつかの実施形態では、ステムは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４ｂｐの長さの二重鎖である。いくつかの実施形態では、ステムループは、分解（例えば、酵素分解）に対する分子保護を提供し、標的細胞への送達のための標的化特性を促進する。例えば、いくつかの実施形態では、ループは、オリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を与えることなく、修飾を行うことができる付加ヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、本明細書において、センス鎖がＳ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み（例えば、その３’末端に）、Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２の間に最大約１０ヌクレオチド長（例えば、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ヌクレオチド長）のループを形成する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、及び１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列又は相補的領域を含み、オリゴヌクレオチドは、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含む（例えば、その３’末端に）センス鎖を含む。Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、４ヌクレオチド長のＳ１とＳ２との間の一本鎖ループを形成する。図１Ａ～１Ｃは、かかるオリゴヌクレオチドの非限定的な例を示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される構造Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を有するステムループのループ（Ｌ）は、トリループである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、及び１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列及び相補性領域、並びにトリループを含む。いくつかの実施形態では、トリループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、リガンド（例えば、送達リガンド）、及びそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、記載される構造Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を有するステムループのループ（Ｌ）は、テトラループである。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、及び１４７のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続配列に対して相補的である標的化配列及び相補性領域、並びにテトラループを含む。いくつかの実施形態では、テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、リガンド（例えば、送達リガンド）、及びそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、ループ（Ｆ）は、テトラループ（例えば、ニックテトラループ構造内）に含まれる。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びそれらの組み合わせを含み得る。典型的には、テトラループは、４～５個のヌクレオチドを有する。
ｃ． 二重鎖の長さ
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、少なくとも１２（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、又は少なくとも２１）ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２８ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、２９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長にわたらない。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの全長にわたる。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの全長にわたる。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの全長にわたる。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの全長にわたる。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方の全長にわたる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。
ｖ． オリゴヌクレオチド修飾
ａ． 糖修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、修飾糖を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖類似体とも称される）は、修飾デオキシリボース部分又はリボース部分を含み、この部分では、例えば、１つ以上の修飾は、糖の２’、３’、４’、及び／又は５’炭素位置で生じる。いくつかの実施形態では、修飾糖はまた、ロック核酸（「ＬＮＡ」；例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）ＴＥＴＲＡＨＥＤＯＮ ５４：３６０７－３６３０を参照されたい）、非ロック核酸（「ＵＮＡ」；例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＭＯＬ．ＴＨＥＲ－ＮＵＣＬ．ＡＣＩＤＳ ２：ｅ１０３）２１：１６５３－１６５９を参照されたい）、及び架橋核酸（「ＢＮＡ」；例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ＆Ｏｂｉｋａ（２００２）ＣＨＥＭ ＣＯＭＭＵＮ．（ＣＡＭＢ）２１：１６５３－１６５９を参照されたい）中に存在するものなどの非天然の代替的炭素構造を含み得る。
いくつかの実施形態では、糖中のヌクレオチド修飾は、２’－修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’－修飾は、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、又は２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）であってもよい。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、又は２’－ＭＯＥである。いくつかの実施形態では、糖中の修飾は、糖環の修飾を含み、それは、糖環の１つ以上の炭素の修飾を含み得る。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の２’－酸素が、糖の１’－炭素若しくは４’－炭素に結合されているか、又は２’－酸素が、エチレン若しくはメチレン架橋を介して１’－炭素若しくは４’－炭素に結合されているか、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－炭素から３’－炭素への結合を欠く非環式糖を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、例えば、糖の４’位にチオール基を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０個、又はそれ以上）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５個、又はそれ以上）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０個、又はそれ以上）を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖のヌクレオチドの全ては、修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖のヌクレオチドの全ては、修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全て（すなわち、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方）は、修飾されている。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－Ｆ又は２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥ、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－Ｆ又は２’－ＯＭｅ）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、実施例及び配列表に示される修飾パターンを有するセンス鎖と、実施例及び配列表に示される修飾パターンを有するアンチセンス鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２’－Ｆで修飾されているヌクレオチドを有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆ及び２’－ＯＭｅで修飾されているヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されているヌクレオチドを有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆ及び２’－ＯＭｅで修飾されているヌクレオチドを含むセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾を含むセンス鎖のヌクレオチドの約１０～１５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、又は１５％を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖のヌクレオチドの約１１％は、２－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾を含むアンチセンス鎖のヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、又は３５％を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖のヌクレオチドの約３２％は、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾を含むヌクレオチドの約１５～２５％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、又は２５％を有する。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの約１９％は、２’－フルオロ修飾を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖の８、９、１０、又は１１位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、センス鎖の３、８、９、１０、１２、１３、及び１７位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、及び１４位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２、３、５、７、１０、及び１４位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１４、１６、及び１９位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。いくつかの実施形態では、センス鎖中の１～７及び１２～２０位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、センス鎖中の１～７、１２～２７、及び３１～３６位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、センス鎖中の１～２、４～７、１１、１４～１６、及び１８～２０位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、センス鎖中の１～２、４～７、１１、１４～１６、及び１８～２７及び３１～３６位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中の３、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、及び２０～２２位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中の４、６、８、９、１１、１２、１３、及び１５～２２位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖中の６、８、９、１１～１３、及び１５～２２位のヌクレオチドの各々における糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。
本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、図１Ａ～１Ｃに示される修飾パターンを有するセンス鎖配列と、図１Ａ～１Ｃに示される修飾パターンを有するアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドについて、センス鎖の８、９、１０、又は１１位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。他の実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドについて、センス鎖中の１～７位及び１２～２０位のヌクレオチドの各々の糖部分は、２’－ＯＭｅで修飾されている。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖の８、９、１０、又は１１位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖の８、９、１０、又は１１位のうちの１つ以上は、２’－Ｆ基で修飾されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）からなる群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２、３、５、７、１０、及び１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）からなる群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２～５、７、１０、及び１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）からなる群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、又は２２位に糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－ＯＭｅで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、又は２２位に糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）からなる群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、又は２２位に糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、又は３６位に糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－ＯＭｅで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、又は３６位に糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）からなる群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、又は３６位に糖部分を有するセンス鎖を含む。
ｂ． ５’末端ホスフェート
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’末端ホスフェートを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端ホスフェート基は、Ａｇｏ２との相互作用を強化する。しかしながら、５’－リン酸基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼ又は他の酵素を介した分解の影響を受けやすく、これはインビボでそれらの生物学的利用能を制限し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、かかる分解に抵抗性である５’ホスフェートの類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートであってもよい。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の１’末端は、天然の５’－リン酸基の静電特性及び立体特性を模倣する化学的部分（「リン酸模倣体」）に結合される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端ホスフェート、任意選択で、５’末端ホスフェート類似体を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端ホスフェート、任意選択で、５’末端ホスフェート類似体を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端ホスフェート、任意選択で、５’末端ホスフェート類似体を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端ホスフェート、任意選択で、５’末端ホスフェート類似体を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、糖の４’－炭素位置にホスフェート類似体（「４’－ホスフェート類似体」と称される）を有する。例えば、国際特許出願公開第２０１８／０４５３１７号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドで４’－ホスフェート類似体を含む。いくつかの実施形態では、ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネートであり、オキシメチル基の酸素原子は、糖部分（例えば、その４’－炭素）又はその類似体に結合される。他の実施形態では、４’－ホスフェート類似体は、チオメチルホスホネート又はアミノメチルホスホネートであり、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子は、糖部分の４’－炭素又はその類似体に結合される。いくつかの実施形態では、４’－ホスフェート類似体は、オキシメチルホスホネートである。いくつかの実施形態では、オキシメチルホスホネートは、式－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＨ）２又は－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＲ）２によって表され、式中、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ３、アルキル基、ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＣＯＣ（ＣＨ３）３、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３、又は保護基から選択される。ある特定の実施形態では、アルキル基は、ＣＨ２ＣＨ３である。より典型的には、Ｒは独立して、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＨ２ＣＨ３から選択される。いくつかの実施形態では、４’－ホスフェート類似体は、４’－オキシメチルホスホネートである。いくつかの実施形態では、４’－ホスホネート類似体を有する修飾ヌクレオチドは、ウリジンである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－ホスフェート類似体を含むアンチセンス鎖を含み、５’末端ヌクレオチドは、以下の構造を含む：
４’－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンホスホロチオエート［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］。
ｃ． 修飾ヌクレオシド間結合
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を含み得る。いくつかの実施形態では、ホスフェート修飾又は置換は、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、又は少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドをもたらし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つは、約１～約１０個（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３、又は１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。
修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオンアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホネート結合、又はボラノホスフェート結合であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つの少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、及びアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
ｄ． 塩基修飾
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１つ以上の修飾核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書で塩基類似体とも称される）は、ヌクレオチド糖部分の１’位で結合される。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素塩基である。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含まない。例えば、国際特許出願公開第２００８／０２７４４６２号を参照されたい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。しかしながら、ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基（脱塩基）を含まない。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基は、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位、又は二重鎖に存在するとき、二重鎖の構造を実質的に変化させることなく、１つを超える種類の塩基の反対側に配置され得る、ヌクレオチド糖部分の置換における等価位置に位置する複素環式部分である。いくつかの実施形態では、標的核酸に対して完全に相補的である参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補性核酸とともに形成される二重鎖よりも低いＴｍを有する標的核酸とともに二重鎖を形成する。しかしながら、いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基が塩基と置き換えられて、単一のミスマッチを生成する参照一本鎖核酸と比較すると、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸とともに形成された二重鎖よりも高いＴｍを有する標的核酸とともに二重鎖を形成する。
ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、これらに限定されないが、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる（米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号、Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．２３：４３６３－４３７０、Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．２３：２３６１－２３６６、及びＬｏａｋｅｓ＆Ｂｒｏｗｎ（１９９４）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．２２：４０３９－４０４３を参照されたい）。
ｅ． 可逆的修飾
標的細胞に到達する前にインビボ環境からオリゴヌクレオチドを保護するためのある特定の修飾がなされ得るが、それらは、標的細胞のサイトゾルに到達すると、オリゴヌクレオチドの効力又は活性を低減することができる。可逆的修飾は、分子が細胞の外部で望ましい特性を保持し、その後、細胞の細胞質環境に入ると除去されるようにすることができる。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用によって、又は細胞の内側の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元を介して）除去することができる。
いくつかの実施形態では、可逆的修飾ヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含む。典型的には、核酸分子は、環状ジスルフィド部分で化学的に修飾され、ヌクレオチド間ジホスフェート結合によって作成される負電荷をマスクし、細胞取り込み及びヌクレアーゼ抵抗性を改善する。米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号、国際特許出願公開第２０１４／０８８９２０号及び第２０１５／１８８１９７号、並びにＭｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＮＡＴ． ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬ．３２：１２５６－１２６３を参照されたい。ヌクレオチド間ジホスフェート結合のこの可逆的修飾は、サイトゾル（例えば、グルタチオン）の還元環境によって細胞内に切断されるように設計される。前述の例には、細胞内で切断可能であると報告された中和ホスホトリエステル修飾が含まれる（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．１２５：９４０－５０を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、かかる可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の厳しい環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／又は細胞のリソソーム／エンドソームのコンパートメントにより輸送）中に保護を可能にする。細胞外空間と比較してグルタチオンのレベルがより高い細胞のサイトゾル中に放出されると、修飾が逆転し、結果として切断されたオリゴヌクレオチドとなる。可逆的グルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的化学修飾を用いて利用可能な選択肢と比較して、立体的により大きな化学基を目的のオリゴヌクレオチドに導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基がサイトゾル内で除去されるため、細胞のサイトゾル内部のオリゴヌクレオチドの生物学的活性に干渉してはならないからである。結果として、これらのより大きな化学基を操作して、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに、ヌクレアーゼ抵抗性、親油性、荷電、熱安定性、特異性、及び低減された免疫原性などの様々な利点を付与することができる。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分の構造を操作して、その放出の動態を修飾することができる。
いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合される。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’－炭素に結合される。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’－炭素に位置する。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’－炭素に位置する。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、スルホニル基を含む。例えば、２０１６年８月２３日に出願された、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆと題する、米国仮特許出願第６２／３７８，６３５号を参照されたい。
ｖｉ． 標的化リガンド
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドを、１つ以上の細胞又は１つ以上の器官を標的とすることが望ましい。かかる戦略は、他の器官における望ましくない効果を回避するか、又はオリゴヌクレオチドから利益を得ないであろう細胞、組織、若しくは器官へのオリゴヌクレオチドの過度の損失を回避するのに役立ち得る。１つ以上の細胞又は１つ以上の器官へのオリゴヌクレオチドの標的化は、様々なアプローチを介して達成され得る。組織若しくは細胞特異的抗体、小分子、又は標的化リガンドへのオリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、１つ以上の標的細胞又は組織へのオリゴヌクレオチドの送達を促進し、それらにおけるオリゴヌクレオチドの蓄積を修飾することができる（Ｃｈｅｒｎｏｌｏｖｓｋａｙａ ｅｔ ａｌ．（２０１９）ＦＲＯＮＴ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬ．１０：４４４）。例えば、飽和脂肪酸（例えば、Ｃ２２）へのオリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、従来のオリゴヌクレオチドリガンドよりも容易にかかるリガンドを取り込む脂肪組織のような細胞又は組織への送達を促進し得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、組織、細胞、又は器官の標的化及び／又は送達を促進するために（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するために）修飾される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するために修飾される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、脂肪組織の脂肪細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するために修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされた少なくとも１つのヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、５、６個、又はそれ以上のヌクレオチド）を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチドにコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチドにコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチドにコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチドにコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又はタンパク質の一部（例えば、抗体又は抗体断片）、又は脂質を含む。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、アプタマーである。例えば、標的化リガンドは、腫瘍血管系又は神経膠腫細胞を標的とするために使用されるＲＧＤペプチド、腫瘍血管系又は瘻孔を標的とするためのＣＲＥＫＡペプチド、ＣＮＳ血管系で発現されるトランスフェリン受容体を標的とするための輸送ラクトフェリン、若しくはアプタマー、又は神経膠腫細胞上のＥＧＦＲを標的とする抗ＥＧＦＲ抗体であってもよい。ある特定の実施形態では、標的化リガンドは、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６）ヌクレオチドはそれぞれ、別個の標的化リガンドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの２～４ヌクレオチドはそれぞれ、別個の標的化リガンドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、標的化リガンドが歯ブラシの毛に類似し、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端で２～４ヌクレオチドにコンジュゲートされている（例えば、標的化リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端の２～４ヌクレオチドオーバーハング又は伸長にコンジュゲートされている）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端又は３’末端のいずれかにステムループを含んでもよく、ステムのループの１、２、３、又は４ヌクレオチドは、個別に、標的化リガンドにコンジュゲートされてもよい。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓＲＮＡ）は、センス鎖の３’末端にステムループを含み、ステムループのループは、トリループ又はテトラループを含み、トリループ又はテトラループを含む３又は４ヌクレオチドは、それぞれ、標的化リガンドに個別にコンジュゲートされている。
ＧａｌＮＡｃは、ＡＳＧＰＲに対する高親和性リガンドであり、主に肝細胞細胞の類洞側表面上に発現され、末端ガラクトース又はＧａｌＮＡｃ残基（アシアロ糖タンパク質）を含む循環糖タンパク質を結合、内在化、及びその後クリアリングするのに主要な役割を果たす。本開示のオリゴヌクレオチドへのＧａｌＮＡｃ部分のコンジュゲーション（間接的又は直接的のいずれか）を使用して、これらのオリゴヌクレオチドを細胞上に発現されたＡＳＧＰＲに標的化することができる。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドを、ヒト肝臓細胞（例えば、ヒト肝細胞）上に発現されたＡＳＧＰＲに標的化する。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドを肝臓に標的化する。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つを超える一価ＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされている（すなわち、２、３、又は４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、典型的には、３又は４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１個以上の二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、二価、三価、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分は、分岐リンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、一価ＧａｌＮＡｃ部分は、第１のヌクレオチドにコンジュゲートされており、二価、三価、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分は、分岐リンカーを介して第２のヌクレオチドにコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの１以上（例えば、１、２、３、４、５、又は６）のヌクレオチドはそれぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、テトラループの２～４ヌクレオチドはそれぞれ、別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、トリループの１～３ヌクレオチドはそれぞれ、別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ＧａｌＮＡｃ部分が歯ブラシの毛に類似し、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端で２～４ヌクレオチドにコンジュゲートされている（例えば、リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端の２～４ヌクレオチドオーバーハング又は伸長にコンジュゲートされている）。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のヌクレオチドにコンジュゲートされている。例えば、４個のＧａｌＮＡｃ部分は、各ＧａｌＮＡｃ部分が１ヌクレオチドにコンジュゲートされているセンス鎖のテトラループ中のヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。
いくつかの実施形態では、テトラループは、アデニン及びグアニンヌクレオチドの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、テトラループ（Ｌ）は、以下に示されるように、本明細書に記載される任意のリンカーを介して、テトラループの任意の１つ以上のグアニンヌクレオチドに結合された一価ＧａｌＮＡｃ部分を有する（Ｘ＝ヘテロ原子）：
いくつかの実施形態では、テトラループ（Ｌ）は、以下に示されるように、本明細書に記載される任意のリンカーを介して、テトラループの任意の１つ以上のアデニンヌクレオチドに結合された一価ＧａｌＮＡｃを有する（Ｘ＝ヘテロ原子）：
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－グアニン－ＧａｌＮＡｃと称されるグアニンヌクレオチドに結合された一価ＧａｌＮＡｃを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと称されるアデニンヌクレオチドに結合された一価ＧａｌＮＡｃを含む。
かかるコンジュゲーションの例は、示される５’から３’のヌクレオチド配列ＧＡＡＡ（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）ステム結合点を含むループについて以下に示される。かかるループは、例えば、図１Ａ～１Ｃに示されるセンス鎖の２７～３０位に存在し得る。化学式において、
は、オリゴヌクレオチド鎖への結合点を記述するために使用される。
適切な方法又は化学（例えば、クリックケミストリー）を使用して、標的化リガンドをヌクレオチドに結合することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、アセタール系リンカーを使用して、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのヌクレオチドに標的化リガンドをコンジュゲートする。アセタール系リンカーは、例えば、国際特許出願公開第２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定リンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは、安定である。ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに結合される、５’から３’のヌクレオチドＧＡＡＡを含むループの例を以下に示す。かかるループは、例えば、図１Ａ～１Ｃに示されるセンス鎖のうちのいずれか１つの２７～３０位に存在し得る。化学式において、
は、オリゴヌクレオチド鎖への結合点である。
述べられるように、様々な適切な方法又は化学合成技術（例えば、クリックケミストリー）を使用して、標的化リガンドをヌクレオチドに結合することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドにコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、アセタール系リンカーを使用して、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのヌクレオチドに標的化リガンドをコンジュゲートする。アセタール系リンカーは、例えば、国際特許出願公開第２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定リンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは、安定なリンカーである。
いくつかの実施形態では、二重鎖伸長（例えば、最大３、４、５、又は６ｂｐの長さ）は、標的化リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とｄｓＲＮＡとの間に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、それにコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃを有さない。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドにコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドにコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドにコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
（ｆ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドにコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
ｖｉｉ． 例示的な修飾オリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、ＡＣＣを標的とするオリゴヌクレオチドは、表３に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、約２～６塩基対の二本鎖ステム及び３～４ヌクレオチドのループを有するステムループ構造を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｂに示される修飾パターンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣを標的とするオリゴヌクレオチドは、表３に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、約２～６塩基対の二本鎖ステム及び３～４ヌクレオチドのループを有するステムループ構造を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｂに示される修飾パターンを含み、アンチセンス鎖は、５’末端ヌクレオチドの４’炭素で、オキシメチルホスホネートで修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５９のヌクレオチド配列を含むステムループを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、６塩基対の二重鎖ステムと、１、２、３、又は４個のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドを含む４個のヌクレオチドのステムループとを含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと称されるアデニンヌクレオチドにコンジュゲートされた一価ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ステムループは、６塩基対の二本鎖ステムと、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループとを含み、各アデニンヌクレオチドは、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣを標的とするオリゴヌクレオチドは、表４に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｂに示される修飾パターンを含む。いくつかの実施形態では、ＡＣＣを標的とするオリゴヌクレオチドは、表４に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｂに示される修飾パターンを含み、アンチセンス鎖は、５’末端ヌクレオチドの４’炭素で、オキシメチルホスホン酸塩で修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５９のヌクレオチド配列を含むステムループを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、６塩基対の二重鎖ステムと、１、２、３、又は４個のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドを含む４個のヌクレオチドのステムループとを含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと称されるアデニンヌクレオチドにコンジュゲートされた一価ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ステムループは、６塩基対の二本鎖ステムと、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループとを含み、各アデニンヌクレオチドは、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドは、表８に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、約２～６塩基対の二本鎖ステム及び３～４ヌクレオチドのループを有するステムループ構造を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｃに示される修飾パターンを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドは、表８に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、約２～６塩基対の二本鎖ステム及び３～４ヌクレオチドのループを有するステムループ構造を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｃに示される修飾パターンを含み、アンチセンス鎖は、５’末端ヌクレオチドの４’炭素で、オキシメチルホスホネートで修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５９のヌクレオチド配列を含むステムループを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、６塩基対の二重鎖ステムと、１、２、３、又は４個のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドを含む４個のヌクレオチドのステムループとを含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと称されるアデニンヌクレオチドにコンジュゲートされた一価ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ステムループは、６塩基対の二本鎖ステムと、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループとを含み、各アデニンヌクレオチドは、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドは、表９に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｃに示される修飾パターンを含む。いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドは、表９に示されるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、図１Ｃに示される修飾パターンを含み、アンチセンス鎖は、５’末端ヌクレオチドの４’炭素で、オキシメチルホスホン酸塩で修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１５９のヌクレオチド配列を含むステムループを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、６塩基対の二重鎖ステムと、１、２、３、又は４個のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドを含む４個のヌクレオチドのステムループとを含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチドは、以下に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと称されるアデニンヌクレオチドにコンジュゲートされた一価ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ステムループは、６塩基対の二本鎖ステムと、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループとを含み、各アデニンヌクレオチドは、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
３、８～１０、１２、１３、及び１７位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～２、４～７、１１、１４～１６、１８～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２、５、７～８、１０、１２、１４、１６、及び１９位に２’－Ｆ修飾、１、３～４、６、９、１１、１３、１５、１７～１８、及び２０～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、３位と４位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
３、８～１０、１２、１３、及び１７位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～２、４～７、１１、１４～１６、１８～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２、５、７～８、１０、１２、１４、１６、及び１９位に２’－Ｆ修飾、１、３～４、６、９、１１、１３、１５、１７～１８、及び２０～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、３位と４位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８～１１位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～７、１２～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２～３、５、７、１０、及び１４位に２’－Ｆ修飾、１、４、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８～１１位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～７、１２～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２～３、５、７、１０、及び１４位に２’－Ｆ修飾、１、４、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８～１１位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～７、１２～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２～５、７、１０、及び１４位に２’－Ｆ修飾、１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１６０及び２６、
（ｂ）それぞれ、配列番号１６１及び２８、
（ｃ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
（ｄ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
（ｅ）それぞれ、配列番号１６４及び３４、
（ｆ）それぞれ、配列番号１６５及び３６、
（ｇ）それぞれ、配列番号１６６及び３８、
（ｈ）それぞれ、配列番号１６７及び４０、
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８及び４２、
（ｊ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
（ｋ）それぞれ、配列番号１７０及び４６、
（ｌ）それぞれ、配列番号１７１及び４８、
（ｍ）それぞれ、配列番号１７２及び５０、
（ｎ）それぞれ、配列番号１７３及び５２、
（ｏ）それぞれ、配列番号１７４及び５４、
（ｐ）それぞれ、配列番号１７５及び５６、
（ｑ）それぞれ、配列番号１７６及び５８、
（ｒ）それぞれ、配列番号１７７及び６０、
（ｓ）それぞれ、配列番号１７８及び６２、
（ｔ）それぞれ、配列番号１７９及び６４、
（ｕ）それぞれ、配列番号１８０及び６６、
（ｖ）それぞれ、配列番号１８１及び６８、
（ｗ）それぞれ、配列番号１８２及び７０、
（ｘ）それぞれ、配列番号１８３及び７２、
（ｙ）それぞれ、配列番号１８４及び７４、
（ｚ）それぞれ、配列番号１８５及び７６、
（ａａ）それぞれ、配列番号１８６及び７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号１８７及び８０、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号１８８及び８２、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号１８９及び８４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＤＧＡＴ２発現を低減するための本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、及びＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８～１１位に２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１～７、１２～２７、及び３１～３６位に２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８、２９、及び３０位にＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ヌクレオチド、並びに１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含むセンス鎖と、
２～５、７、１０、及び１４位に２’－Ｆ修飾、１、６、８～９、１１～１３、及び１５～２２位に２′－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、２０位と２１位、及び２１位と２２位との間にホスホロチオエート結合、並びに４’－ホスフェート類似体を含む１位の５’末端ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖とを含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、５’－メトキシホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１～２０位は、センス鎖の１～２０位を有する二重鎖領域を形成し、センス鎖の２１～３６位は、ステムループを形成し、２７～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位及び２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖及びアンチセンス鎖は、
（ａ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
（ｂ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
（ｃ）それぞれ、配列番号１９２及び１２２、
（ｄ）それぞれ、配列番号１９３及び１２４、
（ｅ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
（ｆ）それぞれ、配列番号１９５及び１２８、
（ｇ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
（ｈ）それぞれ、配列番号１９７及び１３２、
（ｉ）それぞれ、配列番号１９８及び１３４、
（ｊ）それぞれ、配列番号１９９及び１３６、
（ｋ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
（ｌ）それぞれ、配列番号２０１及び１４０、
（ｍ）それぞれ、配列番号２０２及び１４２、
（ｎ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
（ｏ）それぞれ、配列番号２０４及び１４６、並びに
（ｐ）それぞれ、配列番号２０５及び１４８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、以下に従うセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
センスストランド：５’－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－３’；
以下にハイブリダイズされる：
アンチセンス鎖：５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－３’；
式中、ｍＸ＝２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、ｆＸ＝２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、－Ｓ－＝ホスホロチオエート結合、－＝ホスホジエステル結合、［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］＝５’－メトキシホスホネート－４－オキシ修飾ヌクレオチド、及びａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝アデニンヌクレオチドに結合したＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、以下に従うセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
センス鎖：５’－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－３’；
以下にハイブリダイズされる：
アンチセンス鎖：５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－３’；
式中、ｍＸ＝２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、ｆＸ＝２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、－Ｓ－＝ホスホロチオエート結合、－＝ホスホジエステル結合、［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］＝５’－メトキシホスホネート－４－オキシ修飾ヌクレオチド、及びａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝アデニンヌクレオチドに結合したＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、以下に従うセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み、
センス鎖：５’－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－３’；
以下にハイブリダイズされる：
アンチセンス鎖：５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－３’；
式中、ｍＸ＝２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、ｆＸ＝２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、－Ｓ－＝ホスホロチオエート結合、－＝ホスホジエステル結合、［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］＝５’－メトキシホスホネート－４－オキシ修飾ヌクレオチド、及びａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝アデニンヌクレオチドに結合したＧａｌＮＡｃである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣ発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ａ）それぞれ、配列番号２０６及び２５２、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０７及び２５３、
（ｃ）それぞれ、配列番号２０８及び２５４、
（ｄ）それぞれ、配列番号２０９及び２５５、
（ｅ）それぞれ、配列番号２１０及び２５６、
（ｆ）それぞれ、配列番号２１１及び２５７、
（ｇ）それぞれ、配列番号２１２及び２５８、
（ｈ）それぞれ、配列番号２１３及び２５９、
（ｉ）それぞれ、配列番号２１４及び２６０、
（ｊ）それぞれ、配列番号２１５及び２６１、
（ｋ）それぞれ、配列番号２１６及び２６２、
（ｌ）それぞれ、配列番号２１７及び２６３、
（ｍ）それぞれ、配列番号２１８及び２６４、
（ｎ）それぞれ、配列番号２１９及び２６５、
（ｏ）それぞれ、配列番号２２０及び２６６、
（ｐ）それぞれ、配列番号２２１及び２６７、
（ｑ）それぞれ、配列番号２２２及び２６８、
（ｒ）それぞれ、配列番号２２３及び２６９、
（ｓ）それぞれ、配列番号２２４及び２７０、
（ｔ）それぞれ、配列番号２２５及び２７１、
（ｕ）それぞれ、配列番号２２６及び２７２、
（ｖ）それぞれ、配列番号２２７及び２７３、
（ｗ）それぞれ、配列番号２２８及び２７４、
（ｘ）それぞれ、配列番号２２９及び２７５、
（ｙ）それぞれ、配列番号２３０及び２７６、
（ｚ）それぞれ、配列番号２３１及び２７７、
（ａａ）それぞれ、配列番号２３２及び配列番号２７８、
（ｂｂ）それぞれ、配列番号２３３及び２７９、
（ｃｃ）それぞれ、配列番号２３４及び２８０、並びに
（ｄｄ）それぞれ、配列番号２３５及び２８１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＡＣＣ発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ａ）それぞれ、配列番号２０８及び２５４、
（ｂ）それぞれ、配列番号２０９及び２５５、並びに
（ｃ）それぞれ、配列番号２１５及び２６１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ａ）それぞれ、配列番号２３６及び２８２、
（ｂ）それぞれ、配列番号２３７及び２８３、
（ｃ）それぞれ、配列番号２３８及び２８４、
（ｄ）それぞれ、配列番号２３９及び２８５、
（ｅ）それぞれ、配列番号２４０及び２８６、
（ｆ）それぞれ、配列番号２４１及び２８７、
（ｇ）それぞれ、配列番号２４２及び２８８、
（ｈ）それぞれ、配列番号２４３及び２８９、
（ｉ）それぞれ、配列番号２４４及び２９０、
（ｊ）それぞれ、配列番号２４５及び２９１、
（ｋ）それぞれ、配列番号２４６及び２９２、
（ｌ）それぞれ、配列番号２４７及び２９３、
（ｍ）それぞれ、配列番号２４８及び２９４、
（ｎ）それぞれ、配列番号２４９及び２９５、
（ｏ）それぞれ、配列番号２５０及び２９６、並びに
（ｐ）配列番号２５１及び２９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ａ）それぞれ、配列番号２４６及び２９２、
（ｂ）それぞれ、配列番号２４９及び２９５、
（ｃ）それぞれ、配列番号２４０及び２８６、
（ｄ）それぞれ、配列番号２３７及び２８３、
（ｅ）それぞれ、配列番号２４２及び２８８、及び
（ｆ）それぞれ、配列番号２３６及び２８２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＡＣＣ発現を低減するためのＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２０８に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２５４に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＡＣＣ発現を低減するためのＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２０９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２５５に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＡＣＣ発現を低減するためのＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２１５に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２６１に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２４６に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２９２に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２４９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２９５に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２４０に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２８６に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２３７に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２８３に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２４２に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２８８に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＤＧＡＴ２発現を低減するためのＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号２３６に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２８２に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含む。
ＩＩＩ． 製剤
オリゴヌクレオチドの使用を促進するために、様々な製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小化するか、送達及び／若しくは取り込みを促進するか、又は製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を提供する製剤を使用して、対象又は細胞環境に送達され得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水溶液、リポソーム、ミセル構造、及びキャプシドなどの緩衝溶液中で製剤化される。
カチオン性脂質を有するオリゴヌクレオチドの製剤を使用して、細胞内へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを促進することができる。例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体、及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリシン）などのカチオン性脂質が使用され得る。好適な脂質には、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、又はＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ）が含まれ、これらの全ては製造業者の指示に従って使用され得る。
したがって、いくつかの実施形態では、製剤は、脂質ナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、脂質複合体、ミクロスフェア、マイクロ粒子、ナノスフェア、若しくはナノ粒子を含むか、又はそれを必要とする対象の細胞、組織、器官、若しくは体への投与のために、他の方法で製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、活性成分の安定性、吸光性、溶解性、及び／又は治療的強化の改善を組成物に付与する。いくつかの実施形態では、賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、又は水酸化ナトリウム）又はビヒクル（例えば、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド、又は鉱油）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、その有効期間を延長するために凍結乾燥され、その後、使用（例えば、対象への投与）前に溶液に作製される。したがって、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、又はポリビニルピロリドン）、又は崩壊温度調節剤（例えば、デキストラン、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、又はゼラチン）であってもよい。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、及び直腸投与が挙げられる。
注射可能な用途に好適な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性である場合）、又は注射可能な滅菌溶液若しくは分散液の即時調製のための分散液及び滅菌粉末が含まれる。静脈内投与について、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。多くの場合、等張剤、例えば、組成物中に、糖、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムなどのポリアルコールを含むことが好ましい。注射可能な滅菌溶液は、必要な場合、上に列挙された成分の１つ又は組み合わせを用いて、選択された溶媒中に必要な量のオリゴヌクレオチドを組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。
いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％の治療剤又はそれ以上を含み得るが、活性成分の割合は、総組成物の重量又は体積の約１％～約８０％以上であり得る。可溶性、生物学的利用能、生物学的半減期、投与経路、製品の有効期間、並びに他の薬理学的考慮事項などの要因は、かかる医薬品製剤を調製する当業者によって企図され、そのため、様々な投与量及び治療レジメンが望ましい場合がある。
いくつかの実施形態は、本明細書のオリゴヌクレオチドのうちのいずれかの肝臓標的化送達を対象とするが、他の組織の標的化も企図される。
ＩＶ． 使用方法
ｉ． 細胞内のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の低減
本開示は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減する目的で、有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つを細胞又は細胞集団に接触させるか、又は送達する方法を提供する。方法は、本明細書に記載されるステップを含んでもよく、これらは、記載されるように順に実施されるが、必ずしもそうではない。しかしながら、他の順も考えられる。更に、個別又は複数のステップは、時間内で並行及び／若しくは重複して並びに／又は個別に、あるいは複数回の繰り返しステップで実施され得る。更に、方法は、追加の不特定のステップを含んでもよい。
本明細書の方法は、任意の適切な細胞型に有用である。いくつかの実施形態では、細胞は、ｍＲＮＡを発現する任意の細胞（例えば、肝細胞、マクロファージ、単球由来細胞、前立腺がん細胞、脳の細胞、内分泌組織、骨髄、リンパ節、肺、胆嚢、肝臓、十二指腸、小腸、膵臓、腎臓、消化管、膀胱、脂肪及び軟部組織、並びに皮膚）である。いくつかの実施形態では、細胞は、対象から得られた初代細胞である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、細胞が実質的に維持するように、限定された数の継代を経たが、これは自然な表現型特性である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボ又はインビトロである（すなわち、培養中の細胞又は細胞が常在する生物に送達され得る）。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、これらに限定されないが、オリゴヌクレオチドを含む溶液の注射、オリゴヌクレオチドにより覆われた粒子による衝撃、細胞若しくは細胞集団をオリゴヌクレオチドを含む溶液に曝露すること、又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜の電気穿孔を含む、適切な核酸送達方法を使用して送達される。脂質媒介担体輸送、化学媒介輸送、及びリン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション、並びにその他などの、細胞にオリゴヌクレオチドを送達するための他の適切な方法を使用してもよい。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の低減は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する細胞又は細胞集団の１つ以上の特性又は特徴を評価する適切なアッセイ若しくは技術によって（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現バイオマーカーを使用する）、又はＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２発現を直接示す分子（例えば、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ又はＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質）を評価するアッセイ又は技術によって決定され得る。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドが、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減する程度は、オリゴヌクレオチドと接触した細胞又は細胞集団におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を、適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドと接触していない又は対照オリゴヌクレオチドと接触した、適切な細胞又は細胞集団）と比較することによって評価される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ分子の送達後のタンパク質へのｍＲＮＡ発現の適切な対照のレベルは、所定のレベル又は値であってもよく、そのため、対照のレベルは毎回測定される必要はない。所定のレベル又は値は、様々な形態を取ることができる。いくつかの実施形態では、所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドの投与は、細胞又は細胞集団におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の低減をもたらす。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２若しくはＤＧＡＴ発現の低減は、適切な対照のレベルのｍＲＮＡと比較した場合、約１％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、又は約９０％以下である。適切な対照のレベルは、本明細書のオリゴヌクレオチドと接触していない細胞又は細胞集団におけるｍＲＮＡ発現及び／又はタンパク質翻訳のレベルであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書の方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限期間の後に評価される。例えば、ｍＲＮＡのレベルは、細胞内へのオリゴヌクレオチドの導入後、細胞内で、少なくとも約８時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、又は少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、若しくは更には最大１４日間、分析され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現は、細胞又は細胞集団へのオリゴヌクレオチドの接触又は送達後、少なくとも約４時間、約８時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、又は少なくとも約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約２１日、約２８日、約３５日、約４２日、約４９日、約５６日、約６３日、約７０日、約７７日、若しくは約８４日以上、細胞又は細胞集団において決定される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現は、細胞又は細胞集団へのオリゴヌクレオチドの接触又は送達後、少なくとも約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、又は約６ヶ月以上、細胞又は細胞集団において決定される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作されている導入遺伝子、又はオリゴヌクレオチドを含む鎖（例えば、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖）の形態で送達される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、本明細書に開示される任意のオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子を使用して送達される。導入遺伝子は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、又は単純ヘルペスウイルス）又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミド又は合成ｍＲＮＡ）を使用して送達されてもよい。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、対象に直接注射され得る。
ｉｉ． 医療用途
本開示はまた、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現の低減から利益を得るであろう対象（例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有するヒト）を治療するための、使用のための、又は使用に順応するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの点で、本開示は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２の発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための、使用のための、又は使用に順応したオリゴヌクレオチドを提供する。本開示はまた、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療するための、薬剤又は医薬組成物の製造における、使用のための、又は使用に順応するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、使用のための、又は使用に順応するオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的とし、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減する（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）。いくつかの実施形態では、使用のための、又は使用に順応するオリゴヌクレオチドは、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的とし、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質、並びに／又はＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２活性の量又はレベルを低減する。
更に、以下の方法は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２の発現に関連する、又はそれらに素因を有する疾患、障害、又は状態を有する対象を選択することを含み得る。いくつかの例では、方法は、血圧上昇、インスリン抵抗性、腹部脂肪の増加、又はＴＧ若しくはコレステロールの上昇など、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する、又はそれらに素因を有する疾患のマーカーを有する個体を選択することを含み得る。
同様に、また以下に詳述されるように、方法はまた、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現のマーカーのベースライン値を測定又は取得すること、及びその後、そのようにして取得された値を、オリゴヌクレオチドを投与された後に得られた１つ以上の他のベースライン値又は値と比較して、治療の有効性を評価することなどのステップを含み得る。
ｉｉｉ． 治療方法
本開示はまた、本明細書のオリゴヌクレオチドを用いて、疾患、障害、又は状態を有するか、それを有する疑いがあるか、又はそれを発症するリスクがある対象を治療する方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の発症又は進行を治療又は減弱する方法を提供する。他の態様では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象において、１つ以上の治療上の利益を達成するための方法を提供する。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、対象は、治療有効量の本明細書のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つ以上を投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、治療は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を低減することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、治療的に処置される。いくつかの実施形態では、対象は、予防的に処置される。いくつかの実施形態では、対象は、ＡＣＣを低減するための治療（例えば、ＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチド）を受けたか、又は受けており、ＤＧＡＴ２発現を低減するための治療（例えば、ＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチド）を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ＤＧＡＴ２を低減するための治療（例えば、ＤＧＡＴ２標的化オリゴヌクレオチド）を受けたか、又は受けており、ＡＣＣ発現を低減するための治療（例えば、ＡＣＣ標的化オリゴヌクレオチド）を投与される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書の１つ以上のオリゴヌクレオチド、又は１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現が対象において低減され、それによって対象を治療するように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２並びに／又はタンパク質の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、トリグリセリド（ＴＧ）（例えば、１つ以上のＴＧ又は総ＴＧ）の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、血漿グルコースの量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、血圧（例えば、収縮期血圧、拡張期血圧、又はその両方）の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、腹部脂肪の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、コレステロール（例えば、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及び／又はＨＤＬコレステロール）の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、肝臓脂肪症の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、肝線維症の量又はレベルは、対象において低減される。いくつかの実施形態では、総コレステロール対ＨＤＬコレステロールとの比率は、対象において変化する。いくつかの実施形態では、以下のうちの任意の組み合わせは、対象において低減されるか、又は変化する：ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベル、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２タンパク質の量又はレベル、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベル、血中グルコースの量又はレベル、腹部脂肪の量又はレベル、血圧の量又はレベル、ＴＧの量又はレベル、コレステロールの量若しくはレベル及び／又は総コレステロール対ＨＤＬコレステロールの比率、肝臓脂肪症の量又は／レベル、並びに肝線維症の量又はレベル。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、１つ以上のオリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現と比較した場合、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現が、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現は、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現と比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベルと比較した場合、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２タンパク質の量又はレベルと比較した場合、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２タンパク質の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２タンパク質の量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２タンパク質の量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベルと比較した場合、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性／発現の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２活性の量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のＴＧの量又はレベルと比較した場合、ＴＧ（例えば、１つ以上のＴＧ又は総ＴＧ）の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＧの量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるＴＧの量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
概して、ヒト患者の正常又は望ましいＴＧ範囲は、＜１５０ｍｇ／ｄＬ血液であり、＜１００は理想的であるとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧１５０ｍｇ／ｄＬのＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、１５０～１９９ｍｇ／ｄＬの範囲のＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定され、これは境界の高いＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、２００～４９９ｍｇ／ｄＬの範囲のＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定され、これは高いＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、５００ｍｇ／ｄＬ以上（すなわち、≧５００ｍｇ／ｄＬ）の範囲のＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定され、これは非常に高いＴＧレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧１５０ｍｇ／ｄＬ、≧２００ｍｇ／ｄＬ、又は≧５００ｍｇ／ｄＬのＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧２００～４９９ｍｇ／ｄＬ、又は５００ｍｇ／ｄＬ以上のＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧２００ｍｇ／ｄＬのＴＧの量又はレベルを有すると特定又は決定される。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前のコレステロールの量又はレベルと比較した場合、コレステロール（例えば、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及び／又はＨＤＬコレステロール）の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、コレステロールの量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）におけるコレステロールの量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
概して、成人のヒト患者の正常又は望ましいコレステロール範囲（総コレステロール）は、＜２００ｍｇ／ｄＬ血液である。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧２００ｍｇ／ｄＬのコレステロールの量又はレベルを有すると特定又は決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、２００～２３９ｍｇ／ｄＬの範囲のコレステロールの量又はレベルを有すると特定又は決定され、これは境界の高いコレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、２４０ｍｇ／ｄＬ以上（すなわち、≧２４０ｍｇ／ｄＬ）の範囲のコレステロールの量又はレベルを有すると特定又は決定され、これは高いコレステロールレベルとみなされる。いくつかの実施形態では、治療から選択されるか、又は治療される患者は、２００～２３９ｍｇ／ｄＬ、又は２４０ｍｇ／ｄＬ以上のコレステロールの量又はレベルを有すると特定又は決定される。いくつかの実施形態では、治療のために選択されるか、又は治療される患者は、≧２００ｍｇ／ｄＬ又は≧２４０ｍｇ／ｄＬ以上のコレステロールの量又はレベルを有すると特定又は決定される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前の肝線維症の量又はレベルと比較した場合、肝線維症の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、肝線維症の量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）における肝線維症の量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチド又は医薬組成物の投与前の肝臓脂肪症の量又はレベルと比較した場合、肝臓脂肪症の量又はレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減されるように、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、肝臓脂肪症の量又はレベルは、オリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物を投与されていないか、又は対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物、若しくは治療を投与されている対象（例えば、参照又は対照対象）における肝臓脂肪症の量又はレベルと比較した場合、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は９９％を超えて低減される。
対象、又は対象由来の試料におけるＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２発現、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量又はレベル、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２活性、ＴＧ、血漿グルコース、又はコレステロールの量若しくは活性を決定するための好適な方法は、当該技術分野で既知である。更に、本明細書に示される実施例は、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現を決定するための方法を示す。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２発現、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２活性、ＴＧ、血漿グルコース、又はコレステロールは、細胞（例えば、肝細胞）、細胞集団若しくは細胞群（例えば、オルガノイド）、器官（例えば、肝臓）、血液若しくはその画分（例えば、血漿）、組織（例えば、肝臓組織）、試料（例えば、肝生検試料）、又は対象から取得若しくは単離された任意の他の適切な生物学的物質において低減される。いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２発現、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２タンパク質、ＡＣＣ及び／若しくはＤＧＡＴ２活性、ＴＧ、血漿グルコース、又はコレステロール、又はそれらの任意の組み合わせは、１つを超える種類の細胞（例えば、肝細胞及び１つ以上の他の種類の細胞）、１つを超える細胞群、１つを超える器官（例えば、肝臓及び１つ以上の他の器官）、１つを超える血液の画分（例えば、血漿及び１つ以上の他の血液画分）、１つを超える種類の組織（例えば、肝臓組織及び１つ以上の他の種類の組織）、又は１つを超える種類の試料（例えば、肝生検試料及び１つ以上の他の種類の生検試料）において低減される。
ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の例としては、これらに限定されないが、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、並びに他のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２関連代謝関連障害及び疾患が挙げられる。本明細書において特に興味深いのは、代謝症候群、高トリグリセリド血症、ＮＡＳＨ、肥満、又はそれらの組み合わせである。
その高い特異性のために、本明細書のオリゴヌクレオチドは、疾患細胞及び組織の標的遺伝子のｍＲＮＡを特異的に標的とする。疾患の予防において、標的遺伝子は、疾患の開始又は維持に必要とされる遺伝子であってもよく、又は疾患に罹患する高いリスクと関連していると特定された遺伝子であってもよい。疾患を治療する際に、オリゴヌクレオチドは、疾患を呈する細胞又は組織と接触させることができる。例えば、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する障害又は状態に関連する野生型（すなわち、天然型）又は変異遺伝子の全て又は一部と実質的に同一であるオリゴヌクレオチドは、肝細胞又は他の肝臓細胞などの目的の細胞又は組織型と接触するか、又はそれらに導入され得る。
いくつかの実施形態では、ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ遺伝子は、ヒト標的などの任意の哺乳動物由来のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ遺伝子であってもよい。本明細書に記載される方法に従って、任意のＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ遺伝子をサイレンシングしてもよい。
本明細書に記載される方法は、典型的には、有効量のオリゴヌクレオチド、すなわち、望ましい治療結果をもたらすことができる量で、対象に投与することを含む。治療的に許容される量は、疾患又は障害を治療的に処置することができる量であってもよい。任意の１人の対象に対する適切な投与量は、対象のサイズ、体の表面積、年齢、投与される特定の組成物、組成物中の活性成分、投与の時間及び経路、一般健康、並びに同時に投与されている他の薬物を含む、ある特定の要因に依存する。
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書の組成物のうちのいずれか１つを、経腸的に（例えば、経口的に、胃栄養チューブによって、十二指腸栄養チューブによって、胃瘻造設術を介して、又は直腸に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射又は注入、動脈内注射又は注入、骨内注入、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内）、局所的に（例えば、経皮、吸入、点眼薬を介して、又は粘膜を通して）、又は標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射のいずれかによって投与される。典型的には、本明細書のオリゴヌクレオチドは、静脈内又は皮下投与される。
非限定的な一組の例として、本明細書のオリゴヌクレオチドは、典型的には、四半期ごとに（３ヶ月毎に１回）、隔月（２ヶ月毎に１回）、毎月、又は毎週投与される。例えば、オリゴヌクレオチドは、毎週、又は２週間若しくは３週間間隔で投与されてもよい。あるいは、オリゴヌクレオチドは、毎日投与されてもよい。いくつかの実施形態では、対象は、１つ以上の負荷用量のオリゴヌクレオチドを投与され、続いて、１つ以上の維持用量のオリゴヌクレオチドを投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、単独で、又は組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、同時、逐次的（任意の順序で）、又は断続的に組み合わせて投与される。例えば、２つのオリゴヌクレオチドは、同時に同時投与されてもよい。あるいは、１つのオリゴヌクレオチドを投与し、続いて、任意の時間（例えば、１時間、１日、１週間、又は１ヵ月）の後に、第２のオリゴヌクレオチドを投与してもよい。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ヒト若しくは非ヒト霊長類又は他の哺乳動物対象である。他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの家畜化された動物、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びニワトリなどの家畜、並びにマウス、ラット、モルモット、及びハムスターなどの動物が挙げられる。
Ｖ． キット
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチド、及び使用のための説明書を含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書のオリゴヌクレオチド、並びにキット及び／又はその任意の構成要素の使用のための説明書を含む添付文書を含む。いくつかの実施形態では、キットは、好適な容器に、本明細書のオリゴヌクレオチド、１つ以上の対照、並びに当該技術分野で周知の様々な緩衝剤、試薬、酵素、及び他の標準的な成分を含む。いくつかの実施形態では、容器は、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、又は他の容器の手段を含み、それらにオリゴヌクレオチドは配置され、いくつかの例では、好適にアリコートされる。追加の構成要素が提供されるいくつかの実施形態では、キットは、この構成要素が配置される追加の容器を含む。キットはまた、市販用の厳重な監禁下でオリゴヌクレオチド及び任意の他の試薬を含むための手段を含み得る。かかる容器は、所望のバイアルが保持される、注射又はブロー成形プラスチック容器を含み得る。容器及び／又はキットは、使用のための説明書及び／又は警告を含むラベルを含み得る。
いくつかの実施形態では、キットは、それを必要とする対象におけるＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、若しくは状態の進行を治療又は遅延させるための、本明細書のオリゴヌクレオチド、及び薬学的に許容される担体、又はオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物、並びに説明書を含む。
ＶＩ． 他の実施形態
本開示は、以下の実施形態に関する。このセクション全体を通して、実施形態という用語は、Ｅに続いて序数と省略される。例えば、Ｅ１は実施形態１にあたる。
Ｅ１． ＡＣＣ発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６のうちのいずれか１つに示される配列を含むアンチセンス鎖を含む、オリゴヌクレオチド。
Ｅ２．配列番号１、２９、３１、４３、及び５５のうちのいずれか１つに示される配列を含むセンス鎖を含む、実施形態１に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３． ＡＣＣ発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が、ＡＣＣの標的配列に対する相補性領域を有し、相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、オリゴヌクレオチド。
Ｅ４． 相補性領域が、ＡＣＣの標的配列に対して完全に相補的である、実施形態３に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５． アンチセンス鎖が、１９～２７ヌクレオチド長である、実施形態１～４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６． アンチセンス鎖が、２１～２７ヌクレオチド長であり、任意選択で、アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長である、実施形態１～５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７． センス鎖が、アンチセンス鎖と二重鎖を形成する、実施形態２～６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８． センス鎖が、１９～４０ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖が、３６ヌクレオチド長である、実施形態７に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ９． 二重鎖領域が、少なくとも１９ヌクレオチド長である、実施形態７又は８に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１０． 二重鎖領域が、２１ヌクレオチド長であり、任意選択で、二重鎖領域が、２０ヌクレオチド長である、実施形態７～９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１１． ＡＣＣに対する相補性領域が、少なくとも連続する１９ヌクレオチド長である、実施形態３～１０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１２． ＡＣＣに対する相補性領域が、少なくとも連続する２１ヌクレオチド長である、実施形態３～１１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１３． アンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６のうちのいずれか１つに示される配列を含む、実施形態３～１２のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１４． センス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、及び５５のいずれか１つに示される配列を含む、実施形態３～１３のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１５． センス鎖が、その３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する、実施形態３～１４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１６． ＡＣＣ発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が、２１～２７ヌクレオチド長であり、ＡＣＣに対する相補性領域を有し、センス鎖が、その３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成し、アンチセンス鎖及びセンス鎖が、少なくとも１９ヌクレオチド長の二重鎖構造を形成するが、共有結合ではない、オリゴヌクレオチド。
Ｅ１７． 相補性領域が、ＡＣＣ ｍＲＮＡの少なくとも連続する１９個のヌクレオチドに対して完全に相補的である、実施形態１６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１８． Ｌが、テトラループである、実施形態１５～１７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ１９． Ｌが、４ヌクレオチド長である、実施形態１５～１８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２０． Ｌが、ＧＡＡＡとして示される配列を含む、実施形態１５～１９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２１． アンチセンス鎖が、２７ヌクレオチド長であり、センス鎖が、２５ヌクレオチド長であり、任意選択で、アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長であり、センス鎖が、３６ヌクレオチド長である、実施形態３～２０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２２． アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２５ヌクレオチド長の二重鎖領域を形成し、任意選択で、二重鎖が、２０ヌクレオチド長である、実施形態２１に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２３． ２ヌクレオチド長のアンチセンス鎖上の３’オーバーハング配列を含む、実施形態１６～２０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２４． オリゴヌクレオチドが、各々が２１～２３ヌクレオチド長の範囲のアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む、実施形態７～１６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２５． オリゴヌクレオチドが、１９～２１ヌクレオチド長の範囲の二重鎖構造を含む、実施形態２４に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２６． オリゴヌクレオチドが、１以上のヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、３’オーバーハング配列が、アンチセンス鎖、センス鎖、又はアンチセンス鎖及びセンス鎖上に存在する、実施形態２４又は２５に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２７． オリゴヌクレオチドが、２ヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、３’オーバーハング配列が、アンチセンス鎖上にあり、センス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、それによりセンス鎖及びアンチセンス鎖が、２１ヌクレオチド長の二重鎖を形成する、実施形態２４又は２５に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２８． オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ２９． 修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含む、実施形態２８に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３０． ２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、実施形態２９に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３１． オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが、修飾されている、実施形態２８～３０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３２． オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３３． 少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、実施形態３２に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３４． アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、ホスフェート類似体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３５． ホスフェート類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートである、実施形態３４に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３６． オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされている、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３７． 各標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質を含む、実施形態３６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３８． 各標的化リガンドが、Ｃ１０～Ｃ２４の長さのサイズの範囲の飽和脂肪酸部分を含む、実施形態３６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ３９． 各標的化リガンドが、Ｃ１６の長さのサイズの範囲の飽和脂肪酸部分を含む、実施形態３８に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４０． 各標的化リガンドが、Ｃ２４の長さのサイズの範囲の飽和脂肪酸部分を含む、実施形態３８に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４１． 各標的化リガンドが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、実施形態３６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４２． ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、実施形態４１に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４３． ステムループのＬの最大４つのヌクレオチドが、それぞれ、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、実施形態１５～２０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４４． オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡｉヌクレオチドである、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４５． 先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
Ｅ４６． ＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、配列番号１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８のうちのいずれか１つに示される配列を含むアンチセンス鎖を含む、オリゴヌクレオチド。
Ｅ４７． 配列番号１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のいずれか１つに示される配列を含むセンス鎖を含む、実施形態４６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ４８． ＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が、ＤＧＡＴ２の標的配列に対する相補性領域を有し、相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、オリゴヌクレオチド。
Ｅ４９． 相補性領域が、ＤＧＡＴ２の標的配列に対して完全に相補的である、実施形態４８に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５０． アンチセンス鎖が、１９～２７ヌクレオチド長である、実施形態４６～４９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５１． アンチセンス鎖が、２１～２７ヌクレオチド長であり、任意選択で、アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長である、実施形態４６～５０のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５２． センス鎖が、アンチセンス鎖と二重鎖を形成する、実施形態４７～５１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５３． センス鎖が、１９～４０ヌクレオチド長であり、任意選択で、センス鎖が、３６ヌクレオチド長である、実施形態５２に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５４． 二重鎖領域が、少なくとも１９ヌクレオチド長である、実施形態５２又は５３に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５５． 二重鎖領域が、２１ヌクレオチド長であり、任意選択で、二重鎖領域が、２０ヌクレオチド長である、実施形態５２～５４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５６． ＡＣＣに対する相補性領域が、少なくとも連続する１９ヌクレオチド長である、実施形態４８～５５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５７． ＤＧＡＴ２に対する相補性領域が、少なくとも連続する２１ヌクレオチド長である、実施形態４８～５６のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５８． アンチセンス鎖が、配列番号１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８のうちのいずれか１つに示される配列を含む、実施形態４８～５７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ５９． センス鎖が、配列番号１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のいずれか１つに示される配列を含む、実施形態４８～５８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６０． センス鎖が、その３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する、実施形態４８～５９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６１． ＤＧＡＴ２発現を低減するためのオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が、２１～２７ヌクレオチド長であり、ＤＧＡＴ２に対する相補性領域を有し、センス鎖が、その３’末端に、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成し、アンチセンス鎖及びセンス鎖が、少なくとも１９ヌクレオチド長の二重鎖構造を形成するが、共有結合ではない、オリゴヌクレオチド。
Ｅ６２． 相補性領域が、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの少なくとも連続する１９個のヌクレオチドに対して完全に相補的である、実施形態６１に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６３． Ｌが、テトラループである、実施形態６０～６２のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６４． Ｌが、４ヌクレオチド長である、実施形態６０～６３のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６５． Ｌが、ＧＡＡＡとして示される配列を含む、実施形態６０～６４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６６． アンチセンス鎖が、２７ヌクレオチド長であり、センス鎖が、２５ヌクレオチド長であり、任意選択で、アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長であり、センス鎖が、３６ヌクレオチド長である、実施形態４６～６５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６７． アンチセンス鎖及びセンス鎖が、２５ヌクレオチド長の二重鎖領域を形成し、任意選択で、二重鎖が、２０ヌクレオチド長である、実施形態６６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６８． ２ヌクレオチド長のアンチセンス鎖上の３’オーバーハング配列を含む、実施形態４８～６５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ６９． オリゴヌクレオチドが、各々が２１～２３ヌクレオチド長の範囲のアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む、実施形態５２～６１のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７０． オリゴヌクレオチドが、１９～２１ヌクレオチド長の範囲の二重鎖構造を含む、実施形態６９に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７１． オリゴヌクレオチドが、１以上のヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、３’オーバーハング配列が、アンチセンス鎖、センス鎖、又はアンチセンス鎖及びセンス鎖上に存在する、実施形態６９又は７０に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７２． オリゴヌクレオチドが、２ヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、３’オーバーハング配列が、アンチセンス鎖上にあり、センス鎖が、２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖が、２３ヌクレオチド長であり、それによりセンス鎖及びアンチセンス鎖が、２１ヌクレオチド長の二重鎖を形成する、実施形態６９又は７０に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７３． オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７４． 修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含む、実施形態７３に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７５． ２’－修飾が、２’アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、実施形態７４に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７６． オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが、修飾されている、実施形態７３～７５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７７． オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７８． 少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、実施形態７７に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ７９． アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、ホスフェート類似体を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８０． ホスフェート類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートである、実施形態７９に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８１． オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされている、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８２． 各標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質を含む、実施形態８１に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８３． 各標的化リガンドが、Ｃ１０～Ｃ２４の長さのサイズの範囲の飽和脂肪酸部分を含む、実施形態８２に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８４． 各標的化リガンドが、Ｃ１６飽和脂肪酸部分を含む、実施形態８３に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８５． 各標的化リガンドが、Ｃ２２飽和脂肪酸部分を含む、実施形態８３に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８６． 各標的化リガンドが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、実施形態８２に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８７． ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、実施形態８６に記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８８． ステムループのＬの最大４つのヌクレオチドが、それぞれ、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、実施形態６０～６５のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ８９． オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡｉヌクレオチドである、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド。
Ｅ９０． 先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
Ｅ９１． 少なくとも第１及び第２の治療薬を含む医薬組成物であって、第１の治療薬が、ＡＣＣの阻害剤であり、第２の治療薬が、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である、医薬組成物。
Ｅ９２． 少なくとも第１及び第２の治療薬を含む医薬組成物であって、第１の治療薬が、オリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬が、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である、医薬組成物。
Ｅ９３． 少なくとも第１及び第２の治療薬を含む医薬組成物であって、第１の治療薬が、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬が、オリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である、医薬組成物。
Ｅ９４． 少なくとも第１及び第２の治療薬を含む医薬組成物であって、第１の治療薬が、実施形態１～４５のいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドであり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、第２の治療薬が、実施形態４６～８９のいずれか１つから選択されるオリゴヌクレオチドであり、ＤＧＡＴ発現の阻害剤である、医薬組成物。
Ｅ９５． （ｉ）配列番号２、３０、３２、４４、及び５６のうちのいずれか１つに示されるアンチセンス鎖を有するＡＣＣ阻害オリゴヌクレオチドと、（ｉｉ）配列番号１、２９、３１、４３、及び５５のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖と、（ｉｉｉ）配列番号１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、１３８のうちのいずれか１つに示されるアンチセンス鎖を有するＤＧＡＴ阻害と、（ｉｖ）配列番号１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖と、を含む、組み合わせ生成物。
Ｅ９６． 構成成分（ｉ）が、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、構成成分（ｉｉ）が、１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であり、ＡＣＣ発現の阻害剤であり、構成成分（ｉｉｉ）が、１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、構成成分（ｉｖ）が、１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であり、ＤＧＡＴ２発現の阻害剤である、実施形態９５に記載の組み合わせ生成物。組み合わせ生成物が、構成成分（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、及び（ｉｖ）並びにその薬学的に許容される塩を含む組成物である、実施形態９７に記載の組み合わせ生成物。
Ｅ９７． 構成成分（ｉ）及び（ｉｉ）が、持続放出及び／又は遅延放出のための、注射可能な懸濁液、ゲル、油、ピル、錠剤、座薬、粉末、カプセル、エアロゾル、軟膏、クリーム、パッチ、又はガレノス形態（ｇａｌｅｎｉｃ ｆｏｒｍｓ）の手段で製剤化される、実施形態９５又は９６に記載の組み合わせ生成物。
Ｅ９８． 炎症性、代謝性、線維性、又は胆汁うっ滞性疾患の治療のための、実施形態９４～９６のいずれか１つに記載の組み合わせ生成物。
Ｅ９９． 疾患が、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は
肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、実施形態９８に記載の使用のための組み合わせ生成物。
Ｅ１００． 対象にオリゴヌクレオチドを送達する方法であって、対象に、実施形態９５～９９のいずれか１つから選択される医薬組成物を投与することを含む、方法。
Ｅ１０１． 細胞、細胞集団、又は対象におけるＡＣＣ発現を低減するための方法であって、細胞若しくは細胞集団を、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、若しくは実施形態４５の医薬組成物と接触させるステップ、又は実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、若しくは実施形態４５に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、方法。
Ｅ１０２． ＡＣＣ発現の低減は、ＡＣＣ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＡＣＣタンパク質の量若しくはレベル、又はその両方を低減することを含む、実施形態１０１に記載の方法。
Ｅ１０３． 対象が、ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する、実施形態１０１又は１０２に記載の方法。
Ｅ１０４． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物を対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法。
Ｅ１０５． 対象における肝線維症の量又はレベルを低減する方法であって、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
Ｅ１０６． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物を投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、０．０３、０．０７５、０．１５、０．３、０．７５、１．５、３、６、１２、２４、６０、１２０、又は６００ｍｇ／ｋｇである、方法。
Ｅ１０７． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物を投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、１．５、３、６、又は１２ｍｇ／ｋｇである、方法。
Ｅ１０８． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、（ｉ）配列番号１、２９、３１、４３、及び５５から選択されるセンス鎖、並びに（ｉｉ）配列番号２、３０、３２、４４、及び５６から選択されるアンチセンス鎖、又はそれらの医薬組成物を含む治療有効量のオリゴヌクレオチドを対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法。
Ｅ１０９． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、
炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、実施形態１０３～１０８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１０． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、実施形態１０９に記載の方法。
Ｅ１１１． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態が、又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、実施形態１０３～１１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１２． オリゴヌクレオチド又は医薬組成物が、第２の組成物又は治療薬と組み合わせて投与される、実施形態１０３～１１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１３． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療のための医薬品の製造における、実施形態１～４４に記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物の使用。
Ｅ１１４． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療における、使用のための、又は使用に順応する、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態４５に記載の医薬組成物。
Ｅ１１５． 実施形態１～４４のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、任意の薬学的に許容される担体、及びＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象への投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
Ｅ１１６． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、実施形態１１４に記載のオリゴヌクレオチドの使用、又は実施形態１１５に記載のキットの使用。
Ｅ１１７． ＡＣＣ発現に関連する疾患、障害、又は状態が、心血管疾患、ＩＩ型糖尿病、高トリグリセリド血症、ＮＡＳＨ、肥満、又はそれらの組み合わせである、実施形態１１４に記載のオリゴヌクレオチドの使用、又は実施形態１１５に記載のキットの使用。
Ｅ１１８． 細胞、細胞集団、又は対象におけるＤＧＡＴ２発現を低減するための方法であって、細胞若しくは細胞集団を、実施形態４６～８８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、若しくは実施形態８９の医薬組成物と接触させるステップ、又は実施形態４６～８８のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、若しくは実施形態８９に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、方法。
Ｅ１１９． ＤＧＡＴ２発現の低減は、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＤＧＡＴ２タンパク質の量若しくはレベル、又はその両方を低減することを含む、実施形態１１８に記載の方法。
Ｅ１２０． 対象が、ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する、実施形態１１８又は１１９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２１． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物を対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法。
Ｅ１２２． 対象における肝線維症の量又はレベルを低減する方法であって、実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
Ｅ１２３． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物を投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、０．０３、０．０７５、０．１５、０．３、０．７５、１．５、３、６、１２、２４、６０、１２０、又は６００ｍｇ／ｋｇである、方法。
Ｅ１２４． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物を投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、１．５、３、６、又は１２ｍｇ／ｋｇである、方法。
Ｅ１２５． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、（ｉ）配列番号１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７から選択されるセンス鎖、並びに（ｉｉ）配列番号１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８から選択されるアンチセンス鎖、又はそれらの医薬組成物を含む治療有効量のオリゴヌクレオチドを対象に投与し、それによって対象を治療することを含む、方法。
Ｅ１２６． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、実施形態実施形態１１８～１２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２７． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、実施形態１２６に記載の方法。
Ｅ１２８． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、実施形態１２０～１２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２９． オリゴヌクレオチド又は医薬組成物が、第２の組成物又は治療薬と組み合わせて投与される、実施形態１２０～１２８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３０． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療のための医薬品の製造における、実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物の使用。
Ｅ１３１． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療における、使用のための、又は使用に順応する、実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態９０に記載の医薬組成物。
Ｅ１３２． 実施形態４６～８９のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチド、任意の薬学的に許容される担体、及びＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象への投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
Ｅ１３３． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質及び／又はコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患、ホモ接合性及びヘテロ接合性の家族性高コレステロール血症、並びにスタチン耐性高コレステロール血症からなる群から選択される、実施形態１３１に記載のオリゴヌクレオチド、又は実施形態１３２に記載のキットの使用。
Ｅ１３４． ＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、心血管疾患、ＩＩ型糖尿病、高トリグリセリド血症、ＮＡＳＨ、肥満、又はそれらの組み合わせである、実施形態１３１に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド若しくは医薬組成物、又は実施形態１３２に記載のキットの使用。
Ｅ１３５． 細胞、細胞集団、又は対象においてＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現を低減するための方法であって、方法が、当該対象に第１及び第２のオリゴヌクレオチドを同時投与することからなり、各オリゴヌクレオチドが、１５～３０ヌクレオチド長のセンス配列、及び１５～３０ヌクレオチド長の相補的アンチセンス配列を含み、第１のオリゴヌクレオチドが、ＡＣＣの阻害剤であり、第２のオリゴヌクレオチドが、阻害剤ＤＧＡＴ２である、方法。
Ｅ１３６． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療する方法であって、方法が、各々が１５～５０ヌクレオチド長のセンス鎖及び１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含む治療有効量の２つのオリゴヌクレオチドを、任意の順序で、対象に同時投与し、それによって対象を治療することを含み、第１のセンス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示される配列を含み、第１のアンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８から選択される相補的配列を含み、第２のセンス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示される配列を含み、第２のアンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８から選択される相補的配列を含むが、但し、第１のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及び第２のオリゴヌクレオチドのセンス鎖が同一でないことを条件とする、方法。
Ｅ１３７． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療する方法であって、方法が、各々が１５～５０ヌクレオチド長のセンス鎖及び１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含む治療有効量の２つのオリゴヌクレオチドを、任意の順序で、同時に、断続的に、又は逐次的に、対象に投与し、それによって対象を治療することを含み、第１のセンス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示される配列を含み、第１のアンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８から選択される相補的配列を含み、第２のセンス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、５５、１０５、１０７、１１１、１２５、１２９、及び１３７のうちのいずれか１つに示される配列を含み、第２のアンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、５６、１０６、１０８、１１２、１２６、１３０、及び１３８から選択される相補的配列を含むが、但し、第１のオリゴヌクレオチドのセンス鎖及び第２のオリゴヌクレオチドのセンス鎖が同一でないことを条件とする、方法。
Ｅ１３８． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現の低減は、ＡＣＣ若しくはＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、ＡＣＣ若しくはＤＧＡＴ２タンパク質の量若しくはレベル、又はそれらの任意の組み合わせを低減することを含む、実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３９． 対象における肝線維症の量又はレベルを低減する方法であって、実施形態１３５～１３７のいずれかに記載のオリゴヌクレオチドを対象に投与することを含む、方法。
Ｅ１４０． 対象が、ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する、実施形態１３５に記載の方法。
Ｅ１４１． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の実施形態１３５～１３７のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドを対象に投与することを含む、方法。
Ｅ１４２． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドを投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、０．０３、０．０７５、０．１５、０．３、０．７５、１．５、３、６、１２、２４、６０、１２０、又は６００ｍｇ／ｋｇの各オリゴヌクレオチドである、方法。
Ｅ１４３． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象を治療するための方法であって、方法が、対象に、治療有効量の、先行実施形態のいずれか１つに記載のオリゴヌクレオチドを投与し、それによって対象を治療することを含み、治療有効量が、１．５、３、６、又は１２ｍｇ／ｋｇの各オリゴヌクレオチドである、方法。
Ｅ１４４． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、例えば、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、実施形態１４０～１４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４５． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態が、心血管疾患、ＩＩ型糖尿病、高トリグリセリド血症、ＮＡＳＨ、肥満、又はそれらの組み合わせである、実施形態１４４に記載の方法。
Ｅ１４６． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療のための医薬品の製造における、実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の組み合わせ生成物の使用。
Ｅ１４７． ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態の治療における、使用のための、又は使用に順応する、実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の組み合わせ生成物。
Ｅ１４８． 実施形態９５～９９のいずれか１つに記載の組み合わせ生成物、任意の薬学的に許容される担体、及びＡＣＣ又はＤＧＡＴ２発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象への投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
Ｅ１４９． 代謝症候群を治療する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量のＡＣＣ遺伝子の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）阻害剤、及びＤＧＡＴ２遺伝子のｄｓＲＮＡ阻害剤を投与することを含み、かかるｄｓＲＮＡ分子が、ＡＣＣ及びＤＧＡＴ２遺伝子の発現及び／又は機能を抑制又は阻害する、方法。
Ｅ１５０． ＡＣＣ遺伝子のｄｓＲＮＡ阻害剤及びＤＧＡＴ２遺伝子のｄｓＲＮＡ阻害剤の同時投与を含む、実施形態１４９に記載の方法。
本開示は、以下の実施例に示される特定の実施形態を参照して記載されてきたが、様々な変更がなされてもよく、均等物は、本開示の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく置換されてもよいことが当業者によって理解されるべきである。更に、以下の実施例は、例示として提供され、本開示の範囲をいかなる方法でも制限することを意図するものではない。加えて、本開示の目的、趣旨、及び範囲に、状況、材料、物質組成、プロセス、プロセスステップ、又はステップに適応させるために、修飾がなされてもよい。かかる全ての修飾は、本開示の範囲内であることが意図される。当該技術分野で周知の標準的な技術、又は以下に具体的に記載される技術を利用した。
実施例１： 二重鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチド合成及び精製 前述の実施例に記載される二本鎖ＲＮＡｉ（ｄｓＲＮＡ）オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される方法を使用して化学的に合成される。一般に、ｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１９～２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡについて記載される固相オリゴヌクレオチド合成方法を使用して合成される（例えば、Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．１８：５４３３－４１及びＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．１０９：７８４５－４６を参照されたく、米国特許第５，８０４，６８３号、第５，８３１，０７１号、第５，９９８，２０３号、第６，００８，４００号、第６，１１１，０８６号、第６，１１７，６５７号、第６，３５３，０９８号、第６，３６２，３２３号、第６，４３７，１１７号、及び第６，４６９，１５８号もまた参照されたい）。
個々のＲＮＡ鎖を合成し、ＨＰＬＣを標準的な方法に従って精製した（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドを、固相ホスホラミダイト化学を使用して合成し、脱保護し、ＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上で標準的な技術を使用して脱塩した（Ｄａｍｈａ＆Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）ＭＥＴＨＯＤＳ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２０：８１－１１４、Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．２３：２６７７－８４）。オリゴマーを、１５分間のステップ直線勾配を使用して、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）上のイオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＩＥ－ＨＰＬＣ）を使用して精製した。勾配は、９０：１０の緩衝液Ａ：Ｂから５２：４８の緩衝液Ａ：Ｂまで変化し、緩衝液Ａは、１００ｍＭのトリスｐＨ８．５であり、緩衝液Ｂは、１００ｍＭのトリスｐＨ８．５、１ＭのＮａＣｌである。試料を２６０ｎｍでモニタリングし、完全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを収集し、プールし、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩し、凍結乾燥した。
各オリゴマーの純度を、Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）上でキャピラリー電気泳動（ＣＥ）によって決定した。ＣＥキャピラリーは、１００μｍの内径を有し、ｓｓＤＮＡ １００Ｒ Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含む。典型的には、約０．６ｎｍｏｌｅのオリゴヌクレオチドを、キャピラリーに注射し、４４４Ｖ／ｃｍの電界で実行し、２６０ｎｍのＵＶ吸光度によって検出した。変性トリス－ホウ酸－７Ｍ－尿素ランニング緩衝液を、Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下に記載される実験で使用するためにＣＥによって評価された場合、少なくとも９０％純粋であったオリゴリボヌクレオチドが得られた。製造業者の推奨プロトコルに従って、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ（商標）バイオスペクトロメーターワークステーション（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）上のマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析によって化合物の同一性を検証した。全てのオリゴマーの相対分子質量は、多くの場合、予期される分子質量の０．２％以内で得られた。
二重鎖の調製
一本鎖ＲＮＡオリゴマーを、１００ｍＭの酢酸カリウム、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５からなる二重鎖緩衝液中に再懸濁した（例えば、１００μＭ濃度で）。相補性センス鎖及びアンチセンス鎖を等モル量で混合し、例えば、５０μＭの二重鎖の最終溶液を得た。試料をＲＮＡ緩衝液（ＩＤＴ）中で５’の間、１００℃に加熱し、使用前に室温まで冷却させた。ｄｓＲＮＡオリゴヌクレオチドを、－２０℃で保存した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーを、凍結乾燥で、又は－８０℃のヌクレアーゼを含まない水中で保存した。
実施例２： インビボでのＡＣＡＣ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ二重標的化ツール化合物配列の特定
配列スクリーニングを、マウスにおいてインビボで実施し、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢの両方に対して活性なツール化合物を特定した。効力のある配列を特定するために、コンピューターベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路による全ＡＣＡＣ発現の阻害をアッセイするのに好適なＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ標的配列を、コンピューター的に生成した。アルゴリズムは、マウス、又は３つの種全て（マウス、カニクイザル、ヒト；表２）に対して相補的であるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド鎖配列を提供する。１２個の選択されたｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列（表１）を使用して、３６ｍｅｒパッセンジャー鎖及び２２ｍｅｒガイド鎖（アンチセンス鎖）を有するニックテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート化構造を含む対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（本明細書では、「ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド」と称される）を生成した。３６ｍｅｒ鎖は、ステムループを形成する配列（配列番号１５９）を含む。更に、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の別個のパターンを有する（このスクリーニングに使用されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドの構造及び化学修飾パターンの概略図については、図１Ａを参照されたい）。テトラループを含む３つのアデノシンヌクレオチドはそれぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）にコンジュゲートされた。スクリーニングは、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡに対する３つの活性ヒットをもたらした（図２）。ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３（マウス配列に基づいてＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８とも呼称される）は、６つの転写物全てに対して１００％の同一性を有する３つの種全てにおいて、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢを標的とする唯一の配列である。
実施例３： ＡＣＡＣ発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害及びインビボ研究
マウス研究：ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３（図１Ａの修飾パターンを有する配列番号１７５及び５６）を、ＣＤＡＨＦＤマウスモデル（コリン欠乏、Ｌ－アミノ酸定義の、６０ｋｃａｌ重量％の脂肪及び０．１重量％のメチオニンからなる高脂肪食）におけるＮＡＳＨ表現型の評価のためのツール化合物として使用した。簡潔には、８週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、１２週間ＣＤＡＨＦＤ上に置き、５ｍｇ／ｋｇのＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３の毎週用量を６週目から開始して皮下投与した。１２週間の終了時に、分子及び組織病理学的評価項目分析のために肝臓試料を収集した。マウスの肝臓から単離された総ＲＮＡを使用して、ｑＲＴ－ＰＣＲによる相対的ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡ発現を評価した。Ｌｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのＴａｑＭａｎ ＲＴ－ｑＰＣＲプローブを使用して、ＡＣＡＣＡ（Ｍｍ０１３０４２７５＿ｇ１）及びＡＣＡＣＢ（Ｍｍ０１２０４６８８＿ｍ１）を評価した。ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３による処置は、標的遺伝子のＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡを７５％効果的に低減した（図３Ａ～３Ｂ）。タンパク質発現は、ＡＣＣ１／２認識抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ３６６２Ｓ）を使用したウェスタンブロット分析によってマウス肝臓において決定した。相対タンパク質存在量を、ウェスタンブロット上で密度測定を走査することによって定量化し、図４に示す。免疫組織化学を実施して、ＡＣＣ抗体で免疫染色された肝臓組織学的切片におけるタンパク質発現パターンを可視化した（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、３６６２Ｓ）。肝細胞におけるＡＣＣ１／２発現は、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣによって著しく減少した。
最後に、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣにより処置された肝臓織学的切片又は対照肝臓織学的切片を、ピクロシリウスレッドにより染色し、肝臓コラーゲン含有量を可視化した。図５Ａに示されるように、コラーゲン発現は低減され、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣによる処置の結果として低減された肝線維を示した。更に、図５Ｂに示されるように、組織病理学スコアは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３処置群において肝線維症の顕著な低減を確認した。更に、ＡＣＡＣ阻害は、ＰＢＳによる処置された動物と比較した場合、肝線維症 マーカー遺伝子、Ｃｏｌ１ａ１及びＶｉｍの低減された発現をもたらした（図５Ｃ～５Ｄ）。
ヒト／カニクイザルＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ標的化候補配列の特定
ヒト及びカニクイザルＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢを標的とする追加のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を特定するために、相補性基準：ヒト及びサルＡＣＡＣＡに対する１００％の相補性、並びにヒトＡＣＡＣＢに対して許容される配列における最大１個のミスマッチに基づいて３０個の配列を特定した。（表２、配列番号１５０ヒトＡＣＡＣＡ ＮＭ＿１９８８３４、配列番号１５１ヒトＡＣＡＣＢ ＮＭ＿００１０９３、配列番号１５２カニクイザルＡＣＡＣＡ ＸＭ＿０１５４３８４０８、配列番号１５３カニクイザルＡＣＡＣＢ ＸＭ＿０１５４３０７８５）。配列分析は、ガイド鎖配列の一部が、マウスにおける対応する標的配列に対しても相補的であったことを示す（配列番号１５４マウスＡＣＡＣＡ ＮＭ＿１３３３６０、及び配列番号１５５マウスＡＣＡＣＢ ＮＭ＿１３３９０４；表２）。本明細書に記載されるスクリーニングで特定されたベンチマーク対照、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３は、３つの種全てにおいてＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢを標的とする唯一の配列である。
３０個のｄｓｉＲＮＡヒットのヌクレオチド配列（表３）を、インビボで評価するために選択した。簡潔には、ヌクレオチド配列を使用して、３６ｍｅｒパッセンジャー鎖及び２２ｍｅｒガイド鎖を有するニックテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート化構造を含む３０個の対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（本明細書では、「ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド」と称される）を生成した。表３は、ニックテトラループ配列を欠く２０ｍｅｒパッセンジャー鎖を示し、一方で、表４は、ニックテトラループ配列を含む３６ｍｅｒパッセンジャー鎖を示す。更に、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の別個のパターンを有する（ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドの構造及び化学修飾パターンの概略図については、図１Ｂを参照されたい）。テトラループを含む３つのアデノシンヌクレオチドはそれぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）にコンジュゲートされた。
表４に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを、インビボマウス肝細胞においてヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡを一過性に発現するように操作されたマウスにおいて評価した。簡潔には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウスに、３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを皮下で処置した。３日後（７２時間）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で、完全ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ遺伝子アイソフォームをコードする等量のＤＮＡプラスミドを、マウスに流体力学的注射した。プラスミドの導入から２０時間後、肝臓試料を収集した。これらのマウスに由来する総ＲＮＡを、同一体積のＰＢＳのみで処置したマウスに対して、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの両方についてｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。ＡＣＡＣＡ（Ｈｓ０１０４６０４８＿ｍ１）及びＡＣＡＣＢ（Ｈｓ０１５６５９１４＿ｍ１）を評価するためにＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入したＴａｑＭａｎ ＲＴ－ｑＰＣＲプローブ。プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について値を正規化した。
図６に示されるように、試験されたベンチマークオリゴヌクレオチドＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－５０８３を含むＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドのうちの１２個は、ＰＢＳにより処置されたマウスに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたマウス由来の肝臓試料中のＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの低減された量によって決定された場合、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ発現を阻害する。図６は、試験された３０個のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドのうち１１個が、ベンチマークＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドＡＣＡＣ－５０８３よりも大きな程度にＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡ発現を阻害することを示す。
ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢの発現を３ｍｇ／ｋｇで阻害することが示されたベンチマークを含む６つの化合物を、用量反応試験で試験した。簡潔には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウスに、０．３、１、及び３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを皮下で処置した。４日後（９６時間）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で、完全ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ遺伝子アイソフォームをコードする等量のＤＮＡプラスミドを、マウスに流体力学的注射した。プラスミドの導入から２０時間後、肝臓試料を収集した。これらのマウスに由来する総ＲＮＡを、同一体積のＰＢＳのみで処置したマウスに対して、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの両方についてｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について値を正規化した。図７Ａ～７Ｂに示されるように、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－２３８９、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－２３９２、及びＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４２０４は、ヒトＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢに対して０．３～１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を示す。
これら３つの化合物を、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるＡＣＡＣＡ／Ｂ発現を阻害するそれらの能力を評価するために選択した。表５に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドは、２’フルオロに変化したガイド鎖４位上の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドを有する図１Ｃに記載されるパターンを有する化学修飾ヌクレオチドを含む。
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）研究
表５に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）において評価した。この研究では、サルの平均体重（約５．４ｋｇ）が対照群と実験群との間で同等になるように、サルをグループ化した。各コホートは、２雄対象及び３雌対象を含んでいた。ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを、研究０日目に６ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与した。血液試料を、投与の１週間前（－７日目）、投与日（０日目）、並びに投与後２８、５４、及び８６に収集した。超音波ガイドコアニードル肝生検を、研究－７、２８、５６、及び８４日目に収集した。各時点で、肝生検試料に由来する総ＲＮＡを、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供して、同等の体積のＰＢＳにより処置されたものに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたサルにおけるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡを測定した。データを正規化するために、２つの参照遺伝子、ＰＰＩＢ及び１８Ｓ ｒＲＮＡの幾何平均に対して測定を行った。Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．から購入した以下のＴａｑＭａｎ ｑＰＣＲプローブを使用して、遺伝子発現：サルＡＣＡＣＡ Ｍｆ０１０５１５８３＿ｍ１、サルＡＣＡＣＢ Ｍｆ０１５６５９２３＿ｍ１、ＰＰＩＢ Ｍｆ０２８０２９８５＿ｍ１、及びｒ１８Ｓ Ｈｓ９９９９９９０１＿ｓ１を評価した。図８Ａ及び図８Ｂ（２８日目）に示されるように、表５に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドを用いてＮＨＰを処置することにより、ＰＢＳにより処置されたＮＨＰに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたＮＨＰからの肝臓試料中のＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの低減された量によって決定された場合、肝臓におけるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢの発現が阻害された。処置されたＮＨＰの肝臓試料におけるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの平均低減パーセントを、各処置群のデータ点のセットの上に示し、経時的な平均値のプロットを図８Ｃ及び図８Ｄに示す。評価した全ての時点について、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣは、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡ発現を著しく阻害する。同じ試料において、ＡＣＣモノクローナル抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃３６７６Ｓ）を使用して、ウェスタンブロットによりＡＣＣ１／２タンパク質レベルを検出した。図９に示されるように、５６日の時点で、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドは、ビンクリン対照に正規化された場合、ＡＣＣ１／２タンパク質発現を阻害する。これらの結果は、ＮＨＰをＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドにより処理すると、肝臓におけるＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの量が低減され、同時に肝臓におけるＡＣＣ１／２タンパク質の量を低減することを示す。
まとめると、これらの結果は、ヒト総ＡＣＡＣ ｍＲＮＡを標的とするよう設計されたＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドが、インビボで総ＡＣＡＣ発現を阻害する（ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡ並びにＡＣＣ１／２タンパク質の量の低減によって決定された場合）ことを示す。
実施例４： インビボでのＤＧＡＴ２発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
ＤＧＡＴ２標的化ツール化合物配列の特定
配列スクリーニングを、マウスにおいてインビボで実施し、ＤＧＡＴ２に対して活性なツール化合物を特定した。効力のある配列を特定するために、コンピューターベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＤＧＡＴ２発現の阻害をアッセイするのに好適なＤＧＡＴ２標的配列を、コンピューター的に生成した。アルゴリズムは、マウス、又は３つの種全て（マウス、サル、ヒト）に対して相補的であるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド鎖配列を提供する。１６個の選択されたｄｓｉＲＮＡのヌクレオチド配列を使用して、３６ｍｅｒパッセンジャー鎖及び２２ｍｅｒガイド鎖を有するニックテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート化構造を含む対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（本明細書では、「ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチド」と称される）を生成した（表６）。更に、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＣＡＣオリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の別個のパターンを有する（例えば、このスクリーニングに使用されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの一般構造及び化学修飾パターンの概略図については、図１Ｃを参照されたい）。テトラループを含む３つのアデノシンヌクレオチドはそれぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）にコンジュゲートされた。スクリーニングは、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡに対する５つの活性ヒットを提供した（図１０）。
３ｍｇ／ｋｇでＤＧＡＴ２発現を阻害することが示された３つの化合物を、用量反応試験で試験した。簡潔には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウスに、０．３、１、及び３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを皮下で処置した。マウスを投与の４日後に安楽死させた。これらのマウスに由来する総ＲＮＡを、同一体積のＰＢＳのみで処置したマウスに対して、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡ（Ｔａｑｍａｎプローブ：Ｍｍ００４９９５３６＿ｍ１、カタログ番号４３３１１８２）についてｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。値は、Ｐｐｉｂ内部対照（Ｔａｑｍａｎプローブ：Ｍｍ００４７８２９５＿ｍ１、カタログ番号４３３１１８２）で正規化した。図１１に示されるように、ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－１４５２及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－１５３３は、マウスＤＧＡＴ２に対して＜１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を示す。
実施例５：インビボでのＤＧＡＴ２発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
ヒト／カニクイザルＤＧＡＴ２標的化候補配列の特定
ヒト及びカニクイザルＤＧＡＴ２を標的とする追加のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を特定するために、１６個の配列を、相補性基準：ヒト及びサルＤＧＡＴ２に対する１００％の相補性に基づいて特定した。（表７、ヒトＤＧＡＴ２ ＮＭ＿０３２５６４．５及びＮＭ＿００１２５３８９１．１、カニクイザルＤＧＡＴ２ ＸＭ＿００５５７９１１８．２）。配列分析は、ガイド鎖配列の一部が、マウスにおける対応する標的配列に対しても相補的であったことを示す（マウスＤＧＡＴ２ ＮＭ＿０２６３８４．３；表７）。
１６個のＤｓｉＲＮＡヒットのヌクレオチド配列（表８）を、インビボで評価するために選択した。簡潔には、ヌクレオチド配列を使用して、３６ｍｅｒパッセンジャー鎖及び２２ｍｅｒガイド鎖を有するニックテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート化構造を含む１６個の対応する二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（本明細書では、「ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチド」と称される）を生成した。表８は、ニックテトラループ配列を欠く２０ｍｅｒパッセンジャー鎖を示し、一方で、表９は、ニックテトラループ配列を含む３６ｍｅｒパッセンジャー鎖を示す。更に、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドのパッセンジャー鎖及びガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチド及びホスホロチオエート結合の別個のパターンを有する（例えば、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの一般構造及び化学修飾パターンの概略図については、図１Ｃを参照されたい）。テトラループを含む３つのアデノシンヌクレオチドはそれぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ番号：１４１３１－６０－３）にコンジュゲートされた。
表９に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを、インビボマウス肝細胞においてヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを一過性に発現するように操作されたマウスにおいて評価した。簡潔には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウスに、３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを皮下で処置した。４日後（９６時間）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で、完全ヒトＤＧＡＴ２遺伝子をコードする等量のＤＮＡプラスミドを、マウスに流体力学的注射した。プラスミドの導入から２０時間後、肝臓試料を収集した。これらのマウスに由来する総ＲＮＡを、同一体積のＰＢＳのみで処置したマウスに対して、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡについてｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。ＤＧＡＴ２を評価するためにＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入したＴａｑＭａｎ ＲＴ－ｑＰＣＲプローブＨｓ０１０４５９１３（カタログ番号４３３１１８２）。プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について値を正規化した。
図１２に示されるように、試験されたＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドのうちの１２個は、ＰＢＳにより処置されたマウスに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたマウス由来の肝臓試料中のＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの低減された量によって決定された場合、ＤＧＡＴ２発現を阻害する。
３ｍｇ／ｋｇでＤＧＡＴ２発現を阻害することが示された３つの化合物を、用量反応試験で試験した。簡潔には、６～８週齢の雌ＣＤ－１マウスに、０．３、１、及び３ｍｇ／ｋｇの用量レベルでのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを皮下で処置した。４日後（９６時間）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で、完全ヒトＤＧＡＴ２遺伝子アイソフォームをコードする等量のＤＮＡプラスミドを、マウスに流体力学的注射した。プラスミドの導入から２０時間後、肝臓試料を収集した。これらのマウスに由来する総ＲＮＡを、同一体積のＰＢＳのみで処置したマウスに対して、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡについてｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供した。プラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、トランスフェクション効率について値を正規化した。図１３に示されるように、ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－０５０９，ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－０８９８、及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－１０７４は、ヒトＤＧＡＴ２に対して＜１ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０を示す。
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）研究
図１２で試験された化合物のうち、６つを、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるＤＧＡＴ２発現を阻害するそれらの能力を評価するために選択した。表１０に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドは、２’フルオロに変化したガイド鎖４位上の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドを有する図１Ｃに記載されるパターンを有する化学修飾ヌクレオチドを含む。
表１０に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）において評価した。この研究では、サルの平均体重（約６ｋｇ）が対照群と実験群との間で同等になるように、サルをグループ化した。各コホートは、雄対象及び雌対象を含んでいた。ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを、研究０日目に６ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与した。血液試料を、投与の１週間前（－７日目）、投与日（０日目）、並びに投与後２８、５４、及び８６に収集した。超音波ガイドコアニードル肝生検を、研究－７、２８、５６、及び８４日目に収集した。各時点で、肝生検試料に由来する総ＲＮＡを、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析に供して、同等の体積のＰＢＳにより処置されたものに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたサルにおけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを測定した。データを正規化するために、２つの参照遺伝子、ＰＰＩＢ及び１８Ｓ ｒＲＮＡの幾何平均に対して測定を行った。Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．から購入した以下のＴａｑＭａｎ ｑＰＣＲプローブを使用して、実施例３に記載される遺伝子発現を評価した。図１４Ａ～１４Ｇに示されるように、表１０に列挙されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドを用いてＮＨＰを処置することにより、ＰＢＳにより処置されたＮＨＰに対して、オリゴヌクレオチドにより処置されたＮＨＰからの肝臓試料中のＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの低減された量によって決定された場合、肝臓におけるＤＧＡＴ２発現が阻害された。処置されたＮＨＰの肝臓試料におけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの平均低減パーセントは、図１４Ｂ～１４Ｇに、経時的な平均値のプロットとともに４週目（２８日目）及び１２週目（８４日目）について示される。評価された全てのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化オリゴヌクレオチドは、４週目で少なくとも７５パーセント（％）だけＤＧＡＴ２発現を低減した。これらの結果は、ＮＨＰをＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドにより処置すると、肝臓におけるＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡの量が低減されることを示す。
まとめると、これらの結果は、ヒトＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡを標的とするように設計されたＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドが、インビボでの発現を阻害することを示す。
実施例６： インビボでのＡＣＡＣ及びＤＧＡＴ２発現の組み合わせＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害
マウス研究：
ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ－４４５８（図１Ａに示される化学修飾パターン）及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２－１４６３（図１Ｃに示される化学修飾パターン）オリゴヌクレオチドを、ＧＡＮ－ＮＡＳＨ供給マウスにおいて組み合わせて評価した。簡潔には、脂肪から４０ｋｃａｌ％、フルクトースから２０ｋｃａｌ％、及び２％コレステロールからなる食事を与えられたＧＡＮ－ＮＡＳＨ供給マウスを、２０週間の食事後にＴａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．から取得した。毎週の同時皮下投与は、表１１に示される研究設計に従って２７週目に開始した。
６回目の毎週の用量後、マウスは、最後の用量から１週間後、３３週目に研究のために採取及び準備し、完全な解剖を行った。標的ｍＲＮＡレベルに加えて、以下のカテゴリーの評価項目を調査した：全身的（例えば、コレステロール）、肝臓脂肪症、肝臓炎症、及び肝線維症。結果の詳細な要約が表１２に見出され、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ処置単独に対して、ｐ値＞０．０５の場合に組み合わせデータが強調されている。
ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせに応答した標的ｍＲＮＡレベルの測定を肝臓で測定した。＞９５％のＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡノックダウンは、ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２処置単独及び組み合わせ処置の両方に示されるが（図１５Ａ）、ＤＧＡＴ１ ｍＲＮＡのノックダウンは観察されていない（図１５Ｂ）。ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのそれぞれ７５％及び５２％のノックダウンが、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ単独処置群で観察された（図１６Ａ及び１６Ｂ）。注目すべきは、ＤＧＡＴ２ ｍＲＮＡレベルに組み合わせ効果は観察されなかったが、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣとＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２の組み合わせは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ単独処置群よりも、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡのより大きなノックダウンをもたらした。ＡＣＡＣＡの阻害は、組み合わせに応答して７５％から９０％に増加したが、一方で、ＡＣＡＣＢ ｍＲＮＡの阻害は、組み合わせに応じて５２％から９７％に増加した。このデータは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２の組み合わせ処置の、ＡＣＡＣＡ及びＡＣＡＣＢ標的ｍＲＮＡレベルに対する予想外の相乗効果を表す。
インビボでのＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせに対する全身的応答を評価するために、総血清コレステロール、並びに肝臓酵素アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）を、研究の終了時に測定した。血清コレステロール（図１７）及びＡＬＴレベル（図１８）は、ＰＢＳ又はいずれかの単一処置群のみと比較した場合、組み合わせ処置群において減少した。これらのデータは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ／ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２の組み合わせ処置が、単一療法のみのいずれかと比較して、肝臓疾患の全身的効果の治療において相加的又は相乗的効果を付与し得ることを示す。
ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせの肝臓脂肪症に対する効果を調査するために、肝臓脂質の面積％によって評価された脂肪症を定量化した（図１９Ａ及び１９Ｂ）。更に、肝臓ＴＧ（表１２）並びに肝臓脂肪症のｍＲＮＡマーカーであるＳｒｅｂｐ１を、図２０に示されるように測定した。肝臓脂質の面積％によって評価した肝脂肪症は、単独処置群のみのいずれかと比較し場合に、組み合わせ処置群において減少することが示され、一方で、肝臓ＴＧ及びＳｒｅｂｐ１ ｍＲＮＡレベルは、組み合わせ処置のベースラインレベル又はそれ以下のベースラインレベルに戻る。
ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせの肝臓炎症への効果を調査するために、マクロファージ浸潤及び病態を、Ｆ４／８０マクロファージマーカーの可視化することによって（図２１Ａ及び２１Ｂ）、並びに王冠様構造（ＣＬＳ）（図２２Ａ及び２２Ｂ）評価した。ＰＢＳ又はＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ若しくはＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２単一処置群又は組み合わせ処置群のいずれかと比較して、Ｆ４／８０染色又はＣＬＳアッセイで優位な変化は観察されなかった。肝臓炎症のサイトカインマーカーであるＩＬ６及びＩＬ１２ｂの肝臓レベルも測定した。ＩＬ６（図２３）及びＩＬ１２ｂ（図２４）の肝臓レベルは、ＰＢＳ又はいずれかの単一処置群のみと比較した場合、組み合わせ処置群において減少した。これらのデータをまとめると、組み合わせ療法は肝臓炎症を付与しないことが示唆される。最後に、肝線維症マーカー遺伝子Ｃｏｌ１ａ１及びＴｉｍｐ１の発現の測定を通して、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ及びＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせの肝臓炎症に対する効果を調査した。Ｃｏｌ１ａ１（図２５）及びＴｉｍｐ１（図２６）のｍＲＮＡレベルの両方は、ＰＢＳ又はＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ若しくはＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２の単一処置群のいずれかと比較して、組み合わせ処置群において減少した。これらのデータは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ／ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２の組み合わせ処置が、単一療法のみ又は個々の処置のみの合計のいずれかと比較して、肝線維症の治療において相加的又は相乗的効果をもたらし得ることを示す。同時に投与される分子の各々に対して５ｍｇ／ｋｇの投与量で、肝臓データは、いずれのｓｉＲＮＡのみの使用でも見られない標的遺伝子の増強された抑制を示す。これらのデータは、タンパク質ノックダウンにおける本開示のＡＣＣ ｓｉＲＮＡ及びＤＧＡＴ２ ｓｉＲＮＡの組み合わせ阻害剤の相乗効果を示す。次いで、これらの効果は、本明細書に提供される代謝症候群に関連する病態からの緩和の増加をもたらし得る。結論として、全体として考慮すると、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ／ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせに関するこの調査からのデータは、組み合わせ処置が、単剤処置と比較して、全身的肝臓疾患、肝臓脂肪症、及び肝線維症の測定可能な評価項目に対して改善された効果を有し得るという仮説を支持する。更に、組み合わせ処置は、マクロファージ浸潤及び病原性アッセイによって、又は肝臓サイトカインレベルによって測定される肝臓炎症のいかなる増加ももたらさなかった。また注目すべきは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ／ＧａｌＸＣ－ＤＧＡＴ２オリゴヌクレオチドの組み合わせは、ＧａｌＸＣ－ＡＣＡＣ処置単独と比較して、ＡＣＡＣ ｍＲＮＡノックダウンの程度において相乗的活性を示しており、まだ説明されていない組み合わせの作用機序を示唆している。

Claims (35)

  1. オリゴヌクレオチドであって、
    （ｉ）ＡＣＣの標的配列に対する相補性領域を含むアンチセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６から選択されるヌクレオチド配列を含む、アンチセンス鎖、又は
    （ｉｉ）ＤＧＡＴ２の標的配列に対する相補性領域を含むアンチセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１１８、１２０、１２６、１３０、１３８、及び１４４から選択されるヌクレオチド配列を含む、アンチセンス鎖を含む、オリゴヌクレオチド。
  2. 前記オリゴヌクレオチドが、前記（ｉ）のアンチセンス鎖と、配列番号１、２９、３１、４３、及び５５から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、を含むか、又は前記（ｉｉ）のアンチセンス鎖と、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、を含む、請求項１に記載のオリゴヌクレオチド。
  3. オリゴヌクレオチドであって、
    （ｉ）１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１５０又は１５１に示されるＡＣＣの標的配列に対する相補性領域を有し、前記相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、アンチセンス鎖及びセンス鎖、又は
    （ｉｉ）１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１５６又は１５７に示されるＤＧＡＴ２の標的配列に対する相補性領域を有し、前記相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む、オリゴヌクレオチド。
  4. 前記センス鎖が、３６ヌクレオチド長であり、かつ／又は前記アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長ある、請求項３に記載のオリゴヌクレオチド。
  5. 前記オリゴヌクレオチドが、前記（ｉ）のアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６から選択されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、前記センス鎖が、配列番号１、２９、３１、４３、及び５５から選択されるヌクレオチド配列を含むか、又は前記（ｉｉ）のアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号１１８、１２０、１２６、１３０、１３８、及び１４４から選択されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、前記センス鎖が、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項３又は４に記載のオリゴヌクレオチド。
  6. 前記ＡＣＣ又はＤＧＡＴ２の標的配列に対する前記相補性領域が、少なくとも連続する１９ヌクレオチド長である、請求項１～５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  7. 前記アンチセンス鎖及び前記センス鎖が、二重鎖領域を形成し、任意選択で、前記二重鎖領域が、少なくとも１９ヌクレオチド長である、請求項２～６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  8. 前記相補性領域が、（ｉ）前記ＡＣＣ若しくはＤＧＡＴ２標的配列に対して３以下のヌクレオチド長だけ異なっているか、又は（ｉｉ）前記ＡＣＣ若しくはＤＧＡＴ２標的配列に対して完全に相補的である、請求項１～７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  9. 前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として示されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成し、任意選択で、Ｌが、テトラループである、請求項２～８のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  10. 前記テトラループが、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む、請求項９に記載のオリゴヌクレオチド。
  11. 前記アンチセンス鎖が、１以上のヌクレオチド長の３’オーバーハング配列を含み、任意選択で、前記３’オーバーハング配列が、２ヌクレオチド長であり、更に任意選択で、前記３’オーバーハング配列が、ＧＧである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  12. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  13. 前記修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含み、任意選択で、前記２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、請求項１２に記載のオリゴヌクレオチド。
  14. （ｉ）前記センス鎖の約１０～１５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、若しくは１５％の前記ヌクレオチドが、２’－フルオロ修飾を含み、（ｉｉ）前記アンチセンス鎖の約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、若しくは３５％の前記ヌクレオチドが、２’－フルオロ修飾を含み、かつ／又は前記オリゴヌクレオチドの約１５～２５％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、若しくは２５％の前記ヌクレオチドが、２’－フルオロ修飾を含む、請求項１３に記載のオリゴヌクレオチド。
  15. （ｉ）前記センス鎖が、５’から３’に１～３６の番号が付いた位置を有する３６個のヌクレオチドを含み、８～１１位が、２’－フルオロ修飾を含み、かつ／又は（ｉｉ）前記アンチセンス鎖が、５’から３’に１～２２の番号が付いた位置を有する２２個のヌクレオチドを含み、２、３、５、７、１０、及び１４位、並びに任意選択で、４位が、２’－フルオロ修飾を含む、請求項１３又は１４に記載のオリゴヌクレオチド。
  16. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含み、任意選択で、前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１～１５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  17. 前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、ホスフェート類似体を含み、任意選択で、前記ホスフェート類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートであり、更に任意選択で、前記ホスフェート類似体が、４’－オキシメチルホスホネートを含む４’－ホスフェート類似体である、請求項１～１６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  18. 前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上の標的化リガンドにコンジュゲートされており、前記１つ以上の標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、脂質、及びＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  19. 前記ＧａｌＮａｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、請求項１８に記載のオリゴヌクレオチド。
  20. 前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
    （ａ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
    （ｂ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
    （ｃ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
    （ｄ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
    （ｅ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
    （ｆ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
    （ｇ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
    （ｈ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、並びに
    （ｉ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項２～１９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  21. 前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖が、
    （ａ）それぞれ、配列番号２０８及び２５４、
    （ｂ）それぞれ、配列番号２０９及び２５５、
    （ｃ）それぞれ、配列番号２１５及び２６１、
    （ｄ）それぞれ、配列番号２４６及び２９２、
    （ｅ）それぞれ、配列番号２４９及び２９５、
    （ｆ）それぞれ、配列番号２４０及び２８６、
    （ｇ）それぞれ、配列番号２３７及び２８３、
    （ｈ）それぞれ、配列番号２４２及び２８８、並びに
    （ｉ）それぞれ、配列番号２３６及び２８２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項２～１９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
  22. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体、送達剤、又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
  23. ＡＣＣ発現の阻害剤及びＤＧＡＴ２発現の阻害剤を含む、組成物。
  24. 前記ＡＣＣ発現の阻害剤及び前記ＤＧＡＴ２発現の阻害剤が、それぞれ、オリゴヌクレオチドである、請求項２３に記載の組成物。
  25. 前記ＡＣＣ発現の阻害剤が、
    （ａ）１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１５０若しくは１５１に示されるＡＣＣの標的配列に対する相補性領域を有し、前記相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、アンチセンス鎖及びセンス鎖、
    （ｂ）ＡＣＣの標的配列に対する相補性領域を含むアンチセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号２、３０、３２、４４、及び５６から選択されるヌクレオチド配列を含む、アンチセンス鎖、並びに任意選択で、配列番号１、２９、３１、４３、及び５５から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖、又は
    （ｃ）
    （ｉ）それぞれ、配列番号１６２及び３０、
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号１６３及び３２、
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１６９及び４４、
    （ｉｖ）それぞれ、配列番号２０８及び２５４、
    （ｖ）それぞれ、配列番号２０９及び２５５、並びに
    （ｖｉ）それぞれ、配列番号２１５及び２６１から選択されるヌクレオチド配列を含む、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含む、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記ＤＧＡＴ２発現の阻害剤が、
    （ａ）１５～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖及び１５～４０ヌクレオチド長のセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１５６又は１５７に示されるＤＧＡＴ２の標的配列に対する相補性領域を有し、前記相補性領域が、少なくとも連続する１５ヌクレオチド長である、アンチセンス鎖及びセンス鎖、
    （ｂ）ＤＧＡＴ２の標的配列に対する相補性領域を含むアンチセンス鎖であって、前記アンチセンス鎖が、配列番号１１８、１２０、１２６、１３０、１３８、及び１４４から選択されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、センス鎖が、配列番号１１７、１１９、１２５、１２９、１３７、及び１４３から選択されるヌクレオチド配列を含む、アンチセンス鎖、又は
    （ｃ）
    （ｉ）それぞれ、配列番号２００及び１３８、
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号２０３及び１４４、
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号１９４及び１２６、
    （ｉｖ）それぞれ、配列番号１９１及び１２０、
    （ｖ）それぞれ、配列番号１９６及び１３０、
    （ｖｉ）それぞれ、配列番号１９０及び１１８、
    （ｖｉｉ）それぞれ、配列番号２４６及び２９２、
    （ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号２４９及び２９５、
    （ｉｘ）それぞれ、配列番号２４０及び２８６、
    （ｘ）それぞれ、配列番号２３７及び２８３、
    （ｘｉ）それぞれ、配列番号２４２及び２８８、並びに
    （ｘｉｉ）それぞれ、配列番号２３６及び２８２から選択される前記ヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む、請求項２４又は２５に記載の組成物。
  27. 炎症性、代謝性、線維性、又は胆汁うっ滞性疾患を治療することを必要とする対象においてそれを治療する方法であって、請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  28. ＡＣＣ阻害剤を投与された、又は投与されている、炎症性、代謝性、線維性、又は胆汁うっ滞性疾患を治療することを必要とする対象においてそれを治療する方法であって、ＤＧＡＴ２阻害剤を投与することを含む、方法。
  29. ＤＧＡＴ２阻害剤を投与された、又は投与されている、炎症性、代謝性、線維性、又は胆汁うっ滞性疾患を治療することを必要とする対象においてそれを治療する方法であって、ＡＣＣ阻害剤を投与することを含む、方法。
  30. 前記疾患が、代謝性肝疾患からなる群において選択される疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝疾患、アルコール性肝疾患、感染因子性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能不全介在性肝疾患、脂質異常症、心臓血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、代謝症候群、糖尿病、肥満、高血圧、慢性胆管障害、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞がん、消化管がん、胃がん、大腸がん、代謝性疾患により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＮＡＦＬＤにより誘発された線維症又は肝硬変、ＮＡＳＨにより誘発された線維症又は肝硬変、アルコール性肝線維症又は肝硬変、薬物性肝線維症又は肝硬変、感染因子性肝線維症又は肝硬変、寄生虫感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、細菌感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ウイルス感染症により誘発された線維症又は肝硬変、ＨＢＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＣＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、ＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、デュアルＨＣＶ及びＨＩＶ感染症により誘発された肝線維症又は肝硬変、放射線又は化学療法により誘発された線維症又は肝硬変、胆管線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は肝硬変、任意の病因の消化管線維症、クローン病により誘発された線維症、潰瘍性大腸炎により誘発された線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺（ｌｕｎｇ）線維症、慢性炎症性気道疾患に連続する肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、並びに特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記疾患が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、又は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項３０に記載の方法。
  32. 肝線維症の量を低減することを必要とする対象においてそれを低減する方法であって、請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  33. ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  34. ＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ発現に関連する疾患、障害、又は状態を治療するための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  35. 請求項１～２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、請求項２２に記載の医薬組成物、又は請求項２３～２６のいずれか一項に記載の組成物、並びにＡＣＣ及び／又はＤＧＡＴ発現に関連する疾患、障害、又は状態を有する対象への投与のための説明書を含む添付文書を含む、キット。
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