JP2023535840A - 抗原結合タンパク質 - Google Patents

Abstract

本発明では、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に特異的に結合する抗原結合タンパク質が提供される。さらに、その抗原結合タンパク質を含む医薬組成物も提供される。本明細書に記載の抗原結合タンパク質および医薬組成物は、線維化病態または障害に関連する疾患の治療のため、ならびに筋肉成長の促進および筋肉機能の改善のために使用することができる。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０２０年７月３１日に出願された米国仮出願第６３／０５９，３８７号の優先権を主張するものであり、これは参照によりその全体が本明細書の一部とされる。

配列表
本願には、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表が含まれ、これも参照によりその全体が本明細書の一部とされる。２０２１年７月６日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーはＰＵ６６９６０＿ＳＬ．ｔｘｔの名称であり、大きさは２６５，３３５バイトである。

発明の分野
本発明は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２と特異的に結合する抗原結合タンパク質、ならびにその医薬組成物および使用に関する。本発明はまた、上記抗原結合タンパク質を含有する医薬組成物およびその使用に関する。

線維性コラーゲンは、組織の完全性を助け正常な生理機能のために細胞の微小環境を維持する細胞外マトリックスの重要な部分である。線維性コラーゲンタンパク質ファミリーの主要なアイソフォームであるコラーゲンＩ～ＩＩＩは、Ｎ末端およびＣ末端のプロペプチドを含むプロコラーゲン前駆体として合成される。プロコラーゲンは、プロリンの水酸化によって翻訳後修飾を受け、さらなるプロセシングのために血管周囲に分泌される。その後、コラーゲンのＮ末端プロペプチドは、ＡＤＡＭＴＳ（A Distintegrin And Metalloproteinase with ThromboSpondin repeats）ファミリーのプロテイナーゼによって切断され、Ｃ末端プロペプチドは、ＢＭＰ１（骨形成タンパク質１(bone morphogenetic protein 1)）、ＴＬＬ１（トロイド様１(tolloid-like 1)）およびＴＬＬ２（トロイド様２）を含むトロイドファミリーのメタロプロテアーゼによってプロセシングを受ける(Hopkins, D.R. et al., Matrix Biology, 2007, 26, 508-523)。Ｎ末端とＣ末端の両プロペプチドが切断されることによりコラーゲンがさらに成熟し、リジン残基での架橋と不溶性の線維構造の形成に至る(Shoulders, M.D. et al., Annual Review of Biochemistry, 2009, 78, 929-958)。

ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２タンパク質が別々の遺伝子によってコードされるのに対し、このファミリーには、同じ遺伝子産物の選択的スプライシングから得られる複数のＢＭＰ１アイソフォームを含むＢＭＰ１のアイソフォームも含まれる（例えば、Takahara, K., et al., The Journal of Biological Chemistry, 1994, 269. 32572-32578;およびCvetjeticanin, B. et al., Medical Hypotheses, 2014, 83, 656-658参照）。ＢＭＰ１の最初に発見された形態は、ＢＭＰ－１－１またはＢＭＰ１－１と呼ばれる。スプライスバリアントＲＮＡ転写物によってコードされる他のＢＭＰ１アイソフォームは転写レベルで記載されており、例えば、ＢＭＰ－１－２、ＢＭＰ－１－３、ＢＭＰ－１－４、ＢＭＰ－１－５、ＢＭＰ－１－６、およびＢＭＰ－１－７として一連の接尾辞で表示される（例えば、Wozney et al., Science (1988), 242: 1528-1534; Kessler et al., Science, (1996) 271 : 360-362; Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996), 93: 5127-5130; Janitz et al., J. Mol. Med. (1998), 76: 141-146; Takahara et al., J. Biol. Chem. (1994), 269: 32572-32578;およびGe and Greenspan, Birth Defect Res. (2006), 78: 47-68参照）。

また、いくつかのＢＭＰ１アイソフォームが、様々な疾患を有する患者および健常者の血中に循環していることがタンパク質レベルで確認されている（例えば、国際特許公開番号ＷＯ２００８／０１１１９３およびＷＯ２０１３／１６３４７９、ならびにGrgurevic et al., J. Am. Soc. Nephrol. (2011), 21 :681-692参照）。さらに、様々な疾患における線維症および瘢痕組織につながるプロコラーゲンのプロセシングにおけるＢＭＰ１の役割、ならびに様々な疾患を有する患者における個々のＢＭＰ１アイソフォームを含んでなる血液プロファイルの発見は、ＢＭＰ１を、新規療法を開発するための魅力的な標的とした（例えば、ＷＯ２００８／０１１１９３；ＷＯ２０１３／１６３４７９；Grgurevic et al., J. Am. Soc. Nephrol. (2011), 21 :681-692, Cvetjeticanin, B. et al., Medical Hypotheses, 2014, 83, 656-658;およびTurtle et al., Expert Opin. Ther. Patents (2004), 14(8): 1185-1197参照）。

コラーゲンを含む細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質の過剰な産生は、組織の剛性の増加、実質組織の置換、異常な電気伝導、硬化性創傷治癒（例えば、梗塞および火傷）、および／または異常な細胞間相互作用に関連し得る種々の器官または組織における線維化病態につながり得る。例えば、急性および慢性心疾患（例えば、心不全、不整脈、肥大型心筋症）および心筋梗塞 (Lopez, B. et al., Circulation, 2010, 121, 1645-1654; Ho, C.Y., et al., New England Journal of Medicine, 2010, 363, 552-563; Kostin, S. et al., Cardiovascular Research, 2002, 54, 361-379; See, F. et al., Current Pharmaceutical Design, 2005, 11, 477-487; Cvetjeticanin, B. et al. Medical Hypotheses, 2014, 83, 656-658)、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）(Salazar, L.M., et al., Lung, 2011, 189, 101-109)、肝硬変および非アルコール性脂肪性肝炎（「ＮＡＳＨ」）(Bataller, R., et al., Journal of Clinical Investigation, 2005, 115, 209-218)、特発性肺線維症(Chakraborty, S, et al., Expert Opin Investig Drugs, 2014, 23, 893-910)、膠原線維疾患、例えば、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチおよび強皮症(Eckes, B., et al., J Mol Med, 2014, 92, 913-924)、筋ジストロフィー（例えば、Serrano, A.C., et al., Experimental Cell Research, 2010, 316, 3050-3058; Klingler, W., et al., Acta Myoligica, XXXI, 2012, 184-195)、慢性腎疾患(Liu, Y., Nature Reviews Nephrology, 2011, 7, 684-696)、急性腎損傷(Molitoris, B., The Journal of clinical Investigation, 2014, 124, 2355-2363; Venkatachalam, M.A. et al., Am J Physiol Renal Physiol 298: F1078-F1094, 2010)、糖尿病性腎症(Sun, Y.M., et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 2013, 433, 359-361)、ケロイド、創傷治癒、癒着、肥大およびその他の瘢痕化（例えば、火傷、手術およびその他の外傷に関連する瘢痕化）(Meier K., et al., Expert Opinion on Emerging Drugs, 2006, 11, 39-47; Malecaze, F., et al., Investigative Opthalmology and Visual Science, 2014, 55, 6712-6721; van der Weer, W. et al., Burns, 2009, 35, 15-29)ならびに脳卒中、多発性硬化症および脊髄損傷（(Fernandez-Klett, F. and Piller, J. Brain Pathology, 2014, 24, 404-13; Rimar, D. et al., Arthritis & Rheumatology, Vol. 66, No. 3, March 2014, 726-730)を有する患者において、線維化およびコラーゲン産生の増加が一貫して見られる。従って、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２経路を標的とすることにより、過剰なコラーゲン産生および成熟を低減することは、これらの疾患などの線維化病態を治療するための有効な治療戦略となり得る。このことは、小動物の心疾患および腎疾患モデルにおいてＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性を阻害する薬理学的薬剤を用いた最近の発表研究によって裏付けられる(Grgurevic, L, et al., Journal of the American Society of Nephrology, 2011, 21, 681-692; He, W., et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107, 21110-21115; Cvetjeticanin, B. et al., Medical Hypotheses, 2014, 83, 656-658;国際特許公開ＷＯ２００８／０１１１９３およびＷＯ２０１３／１６３４７９)。

メタロプロテアーゼのトロイドファミリー（ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２）は、コラーゲン以外にも基質を持ち、ＥＣＭタンパク質の産生を促進する役割にも寄与している可能性がある。例えば、リシルオキシダーゼ１（ＬＯＸ１）のプロフォームはＢＭＰ１の基質であることが示されており、ＢＭＰ１による切断はＬＯＸ酵素活性を促進し、それによりコラーゲンの架橋を誘導する(Uzel, M.I., et al., Journal of Biological Chemistry, 2001, 276, 22537-22543)。従って、ＢＭＰ１はまた、例えば緑内障(Tovar-Vidales, T., et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2013, 54, 4741-4748)および心臓の拡張不全(Lopez, B., et al., American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology, 2010, 299, H1-H9)においてこの機構を介して病的な組織の硬さの発生にも役割を有する。また、ＴＧＦ－β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）はＢＭＰ１によって切断され、ＴＧＦ－βの作用を増強してコラーゲン産生をさらに誘導し得ることが示されている(Ge, G., et al., Journal of Cell Biology, 2006, 175, 1 11-120)。ＢＭＰ１によるＴＧＦ－βの調節は、癌細胞の転移および浸潤の制御など、他の病理においても役割を果たす可能性がある(Wu, X., et al. Oncogene, 2014, 33, 1506- 1514)。同様に、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２は、相互作用するタンパク質をタンパク質分解的にプロセシングすることによって、ＢＭＰ２および４などのより広範な他のＴＧＦ－β様分子も活性化する(Hopkins, D.R. et al., Matrix Biology, 2007, 26, 508-523)。ＢＭＰ１とその様々な基質の複合作用から、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２が組織のＥＣＭ産生／成熟の重要な調節因子であり、メタロプロテアーゼのトロイドファミリーのメンバーが抗線維症の治療介入に特に有効な標的であることが示唆される。

ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２はまた、さらなる基質のプロセシングを介して他の生物学的経路に影響を与える可能性がある。特に、ミオスタチンの活性化を促進することにより、筋肉の生物学に影響を与え得る。ミオスタチンは、筋肉成長を負の調節するホルモンである(Lee, S. J., 2004, Annual Review of Cell & Developmental Biology, 20, 61-86)。ＢＭＰ１は、ミオスタチンの阻害性プロペプチドを切断し、これにより、ミオスタチン活性を高めることが実証されている(Wolfman N.M., et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 2003, 100, 15842-15846)。マウスにおけるＴＬＬ２のノックアウトは筋肉量の増加を示し、それによりトロイドメタロプロテアーゼとミオスタチンの関連の裏付けを提供する(Lee, S.J., PLoS one, 2008, 3, e1628)。従って、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の阻害剤は、筋ジストロフィー、サルコペニアおよび悪液質（例えば、心不全、ＣＫＤ、ＣＯＰＤ、癌または老齢に伴う悪液質）を含む筋肉機能または筋肉量が低下する疾患において有益であり得る。

ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２の生物学を考え合わせると、コラーゲンのプロセシング、集合および架橋における重要な役割を補助し、組織の完全性および適切な細胞微小環境を維持する線維性コラーゲンネットワークの形成をもたらす。このタンパク質ファミリーはまた、線維化状態、例えば、心臓、肺、骨格筋、腎臓、肝臓、皮膚、血管系、神経系および眼における線維化状態の病因においても重要な役割を果たす可能性があり、これらのメタロプロテアーゼの阻害剤は、線維化に関連する疾患、例えば、心筋梗塞、心不全、心不整脈、肥大型心筋症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、急性腎損傷後、糖尿病性腎症、移植後の移植片機能遅延、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型、ベッカー型、肢帯型、先天型、顔面肩甲上腕型、筋強直型、眼球咽頭型、遠位型、およびエメリー・ドレイフス型）、緑内障、角膜瘢痕、ケロイド、創傷治癒、癒着、肥厚性瘢痕、その他の瘢痕化（例えば、火傷、手術またはその他の外傷に伴う瘢痕化）、脳卒中、膠原血管病（例えば、全身性狼瘡性紅斑、関節リウマチおよび強皮症）、脊髄損傷および多発性硬化症の治療のための抗線維化剤としての幅広い利益をもたらし得る。さらに、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１およびＴＬＬ２阻害剤は、ミオスタチン生物学への影響に基づき、筋疾患、特に筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型、ベッカー型、肢帯型、先天型、顔面肩甲上腕型、筋強直型、眼球咽頭型、遠位型、およびエメリー・ドレイフス型）、サルコペニアおよび悪液質（例えば心不全、ＣＫＤ、ＣＯＰＤ、癌または老齢に関連する悪液質）におけるさらなる治療用途を有する可能性がある。

発明の概要
本発明の第１の態様によれば、
（ａ）（ｉ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７および２２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８および２２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７または２２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８または２２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質が提供される。

一実施形態において、以下の６つのＣＤＲ：
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）のＬＣＤＲ１；
ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）のＬＣＤＲ２；
ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）のＬＣＤＲ３；
ＧＹＹＭＳ（配列番号４）のＨＣＤＲ１；
ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２；および
ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）のＨＣＤＲ３
を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質が提供される。

一実施形態において、配列番号７と１００％同一であるＶＨ領域および配列番号８と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質が提供される。

一実施形態において、配列番号９と１００％同一である軽鎖および配列番号１０と１００％同一である重鎖を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターが提供される。

本発明のさらなる態様によれば、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列または本明細書に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質と、薬学上許容可能な希釈剤または担体とを含んでなる医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、それを必要とする対象における線維化関連の疾患または障害の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、療法において使用するための、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための医薬の製造における、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、それを必要とする対象における、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる方法が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善に使用するための、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善に使用するための医薬の製造における、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。

図１は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による６２．５ｐＭ ヒトＢＭＰ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。抗体は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図２は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による５０ｐＭ マウスＢＭＰ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図３は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による２５０ｐＭ ビオチン化ヒトＴＬＬ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図４は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による５００ｐＭ ヒトＴＬＬ－２活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図５は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による８００ｐＭ ビオチン化マウスＴＬＬ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均とエラーバーとしての標準偏差を示す。 図６は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による２．５ｎＭ ラットＴＬＬ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図７は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による２．５ｎＭ ラットＴＬＬ－２活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図８は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による７５０ｐＭ ビオチン化カニクイザル（cyno）ＴＬＬ－１活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４および１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９に関して用量反応曲線をプロットした。分子は、最高濃度７５ｎＭから１１点の３倍希釈系で試験した。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図９は、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体分子による８ｎＭ ビオチン化カニクイザルＴＬＬ－２活性の阻害を測定するＦＲＥＴアッセイを示す図である。最高濃度６００ｎＭから２２点の３倍希釈系で試験した１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４に関する用量反応曲線をプロットした。図は、二反復のデータ点の平均を示し、標準偏差をエラーバーとして示す。 図１０は、ＥＬＩＳＡにより測定したヒトＣ１ｑへの１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４（ＨＥＫにより発現された抗体およびＣＨＯにより発現された抗体）の結合を示す図である。 図１１は、潜在型複合体切断の抗ＢＭＰ－１／ＴＬＬ抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４による阻害－放出されたミオスタチンを測定するためのＭＳＤアッセイを示す図である。 図１２は、マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルで検討した動物からの血漿ＢＭＰ１活性を示す図である。参照として、浸透圧ポンプまたはｉ．ｐ．注射を施していないナイーブマウスで血漿ＢＭＰ１レベルを決定した（右端の白いバー）。化合物Ａ～Ｄは、マウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ Ｆｃ上のヒト可変領域およびマウスκ（本明細書では４Ｂ０６－の場合を化合物Ａおよび３Ｅ０７－２９４４の場合を化合物Ｂと呼称）ならびにラットＩｇＧ２ｂ ＬＡＧＡ Ｆｃ上のヒト可変領域およびラットκ（本明細書では４Ｂ０６－４３３４の場合を化合物Ｃおよび３Ｅ０７－２９４４の場合を化合物Ｄと呼称）を有するリバースキメラｍＡｂとしてクローニングされた抗体である（対応のないｔ検定により比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥと生理食塩水、^＊ｐ＜０．０５；一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥとｍＡｂ群、^＃ｐ＜０．０５、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１；ＲＳＶ対照と用量が対応する化合物ＡまたはＥ０７、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１）。 図１３は、マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルの選択された群からの血漿ＰＩＣＰ測定値を示す図である。複数のイムノブロットでＰＩＣＰレベルを測定した。各ゲルは、総てのＡｎｇＩＩ／ＰＥ＋生理食塩水サンプル、および他の試験群の１つを含んでいた。各ゲルでは、総てのバンド強度をそれぞれのＡｎｇＩＩ／ＰＥ＋生理食塩水群の平均に対して正規化した。その後、可視化のためにデータを１つのグラフにまとめた。（対応のないｔ検定により比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥ＋生理食塩水と他の群、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。 図１４は、ＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルにおける骨格筋量に対する化合物Ａの効果を示す図である。処置群の上の黒字のパーセンテージはＡｎｇＩＩ／ＰＥ群を超える正規化腓腹筋重の増加を示し、赤字のパーセンテージはモデルウインドウ（生理食塩水－生理食塩水群とＡｎｇＩＩ／ＰＥ－生理食塩水群の差）を超える増加を示す（対応のないｔ検定により比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥと生理食塩水、^＊＊ｐ＜０．０１；一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥとｍＡｂ群、^＃ｐ＜０．０５、^＃＃＃ｐ＜０．００１、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１）。 図１５は、ＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルにおける総血漿ミオスタチン（ＭＳＴＮ）レベルに対する化合物Ａの効果を示す図である。総血漿ミオスタチンをＥＬＩＳＡにより測定した。倍率変化はＡｎｇＩＩ／ＰＥ対照に対して表す（対応のないｔ検定により比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥと生理食塩水、^＊＊ｐ＜０．０１；一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥとｍＡｂ群、^＃＃ｐ＜０．０１、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１；ＲＳＶ対照と用量が対応する化合物Ａまたは化合物Ｂ、^＃＃ｐ＜０．０１、^＃＃＃ｐ＜０．００１、^＃＃＃＃ｐ＜０．０００１）。 図１６は、マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥ試験における左心室ヒドロキシプロリン（ＨＤＸＰ）含量を示す図である。ＡｎｇＩＩ／ＰＥ群に対するパーセント変化を算出する（対応のないｔ検定により比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥと生理食塩水、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＡｎｇＩＩ／ＰＥとｍＡｂ群（片側）、^＃ｐ＜０．０５、^＃＃ｐ＜０．０１、^＃＃＃ｐ＜０．００１；一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＲＳＶ対照と用量が対応する化合物Ａ（片側）、^＃ｐ＜０．０５）。 図１７は、ラットＤａｈｌ Ｓモデルにおける線維症（図１７Ａ）および骨格筋量（図１７Ｂ）に対する化合物Ｃの効果を示す図である。図１７Ａ：ラットＤａｈｌ Ｓ試験におけるマッソントリクローム組織病理学的染色の定量評価により測定した左心室線維症。（対応のないｔ検定により比較したＰＢＳ＋０．３％ＮａＣｌとＰＢＳ＋８％ＮａＣｌ、^＊＊ｐ＜０．０１；により比較した一元配置ＡＮＯＶＡＰＢＳ＋８％ＮａＣｌと化合物Ｃ＋８％ＮａＣｌ、^＃ｐ＜０．０５）。図１７Ｂ：化合物Ｃ処置群は、ＰＢＳ＋８％ＮａＣｌと比較して骨格筋量に９％の増加および抗ＲＳＶ処置群と比較して１０％の増加を示す（一元配置ＡＮＯＶＡにより比較したＰＢＳ＋８％ＮａＣｌとｍＡｂ群、^＊＊ｐ＜０．０１）。 図１８は、老化マウスの後肢固定後２週間の回復期における除脂肪量測定値を示す図である。データは絶対除脂肪量の経時的推移（左）および副木装着後の測定値に対するパーセント変化（右）として示す（一元配置ＡＮＯＶＡにより比較した除脂肪量パーセント変化、化合物Ａと抗ＲＳＶ ｍＡｂ：^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１；抗ミオスタチンｍＡｂと抗ＲＳＶ ｍＡｂ：^＃ｐ＜０．０５）。 図１９は、老化マウスにおける後肢固定試験の終了時に測定した腓腹筋（左）およびヒラメ筋（右）湿重を示す図である。空白の四角は副木を装着していない左後肢の重量であり、塗りつぶした四角は副木を装着した右後肢の重量である（二元配置ＡＮＯＶＡにより比較した筋肉重。副木を装着していない肢の化合物Ａまたは抗ミオスタチンｍＡｂと抗ＲＳＶ ｍＡｂ^＊ｐ＜０．０５、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；副木を装着した肢の化合物Ａまたは抗ミオスタチンｍＡｂと抗ＲＳＶ ｍＡｂ^＊ｐ＜０．０５、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；副木を装着した肢としていない肢、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、^＊＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。 図２０は、老化マウスにおける後肢固定試験により縦断的に測定したｉｎ ｖｉｖｏ筋肉収縮力測定値を示す図である。筋肉収縮力値は絶対強縮収縮力測定値（左のパネル）、副木装着後の値に対する相対強縮収縮力（中央のパネル）および腓腹筋湿重に対する正規化（右のパネル）として示す（一元配置ＡＮＯＶＡにより比較した相対強縮収縮力：化合物Ａと抗ＲＳＶ ｍＡｂ、^＊ｐ＜０．０５、抗ミオスタチンｍＡｂと抗ＲＳＶ ｍＡｂ、^＃ｐ＜０．０５。一元配置ＡＮＯＶＡにより比較した正規化力、^＊＊ｐ＜０．０１）。

定義
別途定義されない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書で使用する場合、以下の用語は次のような意味を有する。

「ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質」という用語は、本明細書で使用する場合、ＢＭＰ１（骨形成因子１）、ＴＬＬ１（トロイド様１）および／またはＴＬＬ２（トロイド様２）に結合し得る抗体およびその他のタンパク質構築物、例えばドメインを指す。「ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質」および「抗原結合タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用される。これには天然の同族リガンドまたは受容体を含まない。

「抗体」という用語は、本明細書において、免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を有する分子を指して最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、抗原結合抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ＴＡＮＤＡＢなど、および以上のいずれかの改変型（別の「抗体」形式の概要については、Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136を参照）が含まれる。

抗体に関して本明細書で使用する場合、「完全（full）」、「全（whole）」または「インタクトな（intact）」という用語は、本明細書では互換的に使用され、約１５０，０００ダルトンの分子量を有するヘテロ四量体糖タンパク質を指す。インタクトな抗体は、共有結合性のジスルフィド結合により連結された２本の同一の重鎖（ＨＣ）と２本の同一の軽鎖（ＬＣ）で構成されている。このＨ２Ｌ２構造は折り畳まれて、「Ｆａｂ」フラグメントとして知られる２つの抗原結合フラグメントと「Ｆｃ」結晶性フラグメントを含んでなる３つの機能ドメインを形成する。Ｆａｂフラグメントは、アミノ末端の可変ドメインとしての可変重鎖（ＶＨ）または可変軽鎖（ＶＬ）、およびカルボキシル末端の定常ドメインとしてのＣＨ１（重鎖）およびＣＬ（軽鎖）から構成される。Ｆｃフラグメントは、対になるＣＨ２領域とＣＨ３領域の二量体化によって形成される２つのドメインから構成される。Ｆｃは、免疫細胞上の受容体に結合するか、または古典的補体経路の第一成分であるＣ１ｑに結合することにより、エフェクター機能を惹起し得る。抗体の５つのクラスＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＤは、それぞれμ、α、γ、εおよびδと呼ばれる異なる重鎖アミノ酸配列によって定義され、各重鎖はκまたはλ軽鎖と対になることができる。血清中の抗体の大部分はＩｇＧクラスに属し、ヒトＩｇＧには４つのアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）があり、その配列は主にヒンジ領域で異なっている。

完全ヒト抗体は、例えば酵母に基づくライブラリーまたはヒト抗体のレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用するなど、様々な方法を用いて得ることができる。目的の抗原に結合するヒト抗体を表面に提示する酵母は、ＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞選別）に基づく方法または標識抗原を用いたビーズへの捕捉によって選択することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するように改変されたトランスジェニック動物は、目的の抗原で免疫し、Ｂ細胞選別技術を用いて抗原特異的ヒト抗体を単離することができる。このような技術を用いて生産されたヒト抗体は、その後、親和性、開発性および選択性などの望ましい特性について特性評価を行うことができる。

別の抗体形式には、抗原結合タンパク質の１以上のＣＤＲが、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／０１６４３０１号参照）またはＥＧＦドメインなどの好適な非免疫グロブリンタンパクの足場または骨格上に配置することができる代替足場が含まれる。

「中和する」という用語は、本明細書において使用する場合、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の生物活性が、抗原結合タンパク質の不在下でのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の活性と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで、本明細書に記載されるような抗原結合タンパク質の存在下では低下することを意味する。中和は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２がその標的基質に結合することを阻害すること、ならびにＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２がその標的基質を切断することを防ぐことの１つまたは複数に起因し得る。例えば、実施例に記載の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイは、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質の中和能を評価するために使用され得る。

「ＣＤＲ」とは、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖と軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部には、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。従って、本明細書で使用する場合「ＣＤＲ」は、３つの重鎖ＣＤＲの総て、３つの軽鎖ＣＤＲの総て、重鎖および軽鎖ＣＤＲの総て、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。

本明細書を通じて、全長抗原結合配列内、例えば抗体重鎖配列または抗体軽鎖配列内の可変ドメイン配列および可変ドメイン領域のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従って符番される。同様に、実施例で使用され、配列表に示される「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、「ＬＣＤＲ３」、「ＨＣＤＲ１、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」という用語は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。詳細については、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照のこと。

可変ドメイン配列および全長抗体配列のアミノ酸残基には、別のナンバリング規則もあることは当業者には明らかである。また、ＣＤＲ配列についても、例えばChothia et al. (1989) Nature 342: 877-883に示されているものなど、別のナンバリング規則も存在する。抗原結合タンパク質の構造およびタンパク質の折り畳みは、他の残基がＣＤＲ配列の一部とみなされることを意味する場合があり、当業者にはそのように理解されるであろう。

当業者が利用できるＣＤＲ配列の他のナンバリング規則には、「ＡｂＭ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）法および「ｃｏｎｔａｃｔ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）法がある。

以下の表１－１は、各ＣＤＲまたは結合単位に対してナンバリング規則を用いた１つの定義を表している。表１では、可変ドメインアミノ酸配列の符番にＫａｂａｔナンバリング方式を使用している。ＣＤＲ定義の一部は、使用する個々の公開物によって異なる可能性があることに留意されたい。

ＣＤＲは、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失または付加によって改変することができ、バリアント抗原結合タンパク質は、非改変タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。

ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、ＣＤＲ Ｈ３、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３のそれぞれは、単独で、または任意の順列もしくは組合せで任意の他のＣＤＲと組み合わせて改変され得ることが理解される。一実施形態において、ＣＤＲは、最大３アミノ酸、例えば１または２アミノ酸、例えば１アミノ酸の置換、欠失または付加によって改変される。一般には、改変は置換、特に保存的置換であり、例えば以下の表１－２に示すような置換である。

例えば、バリアントＣＤＲでは、例えばＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａなどの別の定義の一部としてＣＤＲを含んでなるフランキング残基は、保存的アミノ酸残基で置換される場合がある。

上記のようなバリアントＣＤＲを含んでなるこのような抗原結合タンパク質は、本明細書では「機能的ＣＤＲバリアント」と呼ぶことができる。

「抗原結合部位」は、抗原結合タンパク質上の抗原に特異的に結合し得る部位を指し、これは単一可変ドメインであってもよいし、または標準的な抗体に見ることができるように対をなしたＶＨ／ＶＬドメインであってもよい。単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインもまた抗原結合部位を提供することができる。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントであり得る。

抗体のフラグメント（「抗体フラグメント」、「免疫グロブリンフラグメント」、「抗原結合フラグメント」または「抗原結合ポリペプチド」とも呼ばれ得る）は、本明細書で使用する場合、標的、すなわち、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２と特異的に結合する抗体の部分（または前記部分を含む構築物）を指す。抗体フラグメントという用語に包含される結合フラグメントの例としては、
（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント）；
（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントからなる二価フラグメント）；
（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）；
（ｉｖ）Ｆｖフラグメント（抗体の単腕のＶＬおよびＶＨドメインからなる）；
（ｖ）一本鎖可変フラグメント、ｓｃＦｖ（ＶＬ領域とＶＨ領域が対をなして一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能とする合成リンカーによって組換え法を用いて連結されたＶＬドメインおよびＶＨドメインからなる）；
（ｖｉ）ＶＨ（ＶＨドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）；
（ｖｉｉ）ＶＬ（ＶＬドメインからなる免疫グロブリン鎖可変ドメイン）；
（ｖｉｉｉ）ドメイン抗体（ｄＡｂ、ＶＨドメインまたはＶＬドメインのいずれかからなる）；
（ｉｘ）ミニボディ（ＣＨ３ドメインを介して連結されたｓｃＦｖフラグメント対からなる）；および
（ｘ）ダイアボディ（ある抗体に由来するＶＨドメインが小ペプチドリンカーにより別の抗体に由来するＶＬドメインに連結されたものからなるｓｃＦｖフラグメントの非共有結合二量体からなる）
が挙げられる。

「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を指す。ヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３においてヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によりコードされていないアミノ酸残基（例えば、ランダムもしくは部位特異的変異誘発により導入される変異または体細胞変異）を含み得る。しかしながら、この用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことを意図しない。宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体などの組換え手段によって調製、発現、作出もしくは単離されたヒト抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作出もしくは単離された抗体もまた「組換えヒト抗体」と呼ぶことができる。

非ヒト免疫グロブリン可変ドメインのフレームワーク領域の少なくとも１つのアミノ酸残基をヒト可変ドメインの対応する残基で置換することは、「ヒト化」と呼ばれる。可変ドメインのヒト化は、ヒトにおける免疫原性を低下させる可能性がある。

一実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、ヒトのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２と、別の種のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２、例えば、マウス、ラットおよび／またはカニクイザルのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬとの間に交差反応性を示す。ある実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、ヒトおよびマウスのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２と特異的に結合する。医薬品開発では、一般的にその薬物をヒトで試験する前に、マウス系でリード薬候補を試験する必要があるため、これは特に有用である。ヒトおよびマウス種に結合できる薬物を提供することで、これらの系で結果を判定し、同じ薬物を使用したデータを並べて比較することができる。これにより、マウスのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に対して働く薬物と、ヒトのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に対して働く別の薬物とを探すことを必要とする煩雑を避け、また、同一ではない薬物を用いてヒトとマウスで結果を比較する必要を避けられる。イヌまたはサル、例えばカニクイザルの疾患モデルで使用される他の種間の交差反応性も想定される。

「特異性」とは、特定の抗体またはそのフラグメントが結合できる異なるタイプの抗原または抗原決定基の数を指す。抗体の特異性とは、抗体が特定の抗原を固有の分子実体として認識し、別の抗原と区別する能力である。抗原またはエピトープに「特異的に結合」する抗体は、当技術分野でよく理解されている用語である。分子は、特定の標的抗原またはエピトープと、他の標的と比較して、より高頻度に、より迅速に、より持続的におよび／またはより高い親和性で反応する場合に「特異的結合」を示すと言われる。抗体が標的抗原またはエピトープに「特異的に結合」するのは、他の物質に結合するよりも高い親和性、アビディティ、容易さおよび／または持続性で結合する場合である。

抗原と抗原結合ポリペプチドの解離に関する平衡定数（ＫＤ）で表される「親和性（affinity）」は、抗原決定基と抗体（またはそのフラグメント）の抗原結合部位との結合強度の指標であり、ＫＤの値が小さいほど抗原決定基と抗原結合ポリペプチドとの結合力は強い。あるいは、親和性は、１／ＫＤである親和性定数（ＫＡ）として表すこともできる。親和性は、対象となる特定の抗原に応じて、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）などの公知の方法によって決定することができる。例えば、実施例に記載されたＢＩＡＣＯＲＥ法は、結合親和性を測定するために使用され得る。

アビディティ（avidity）は、機能的親和性とも呼ばれ、複数の相互作用部位における結合の強さの累積であり、例えば、２分子（または例えば二重特異性分子もしくは多重特異性分子の場合にはそれを超える分子）が複数の部位で互いに結合する強さの合計であり、例えば相互作用の価数を考慮したものである。

「エピトープ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質の特定の結合ドメインと接触する抗原の部分を指し、パラトープとも呼ばれる。エピトープは、直鎖状であっても、立体配座型／不連続であってもよい。立体配座型または不連続エピトープは、他の配列によって分離されているアミノ酸残基、すなわち、ポリペプチド鎖の三次元折り畳みによって組み立てられた抗原の一次配列において連続した配列にないアミノ酸残基を含んでなる。残基はポリペプチド鎖の異なる領域からのものであってもよいが、抗原の三次元構造では近接している。多量体抗原の場合、立体配座型または不連続エピトープは、異なるペプチド鎖の残基を含み得る。エピトープに含まれる特定の残基は、コンピュータモデリングプログラム、またはＸ線結晶学などの当技術分野で公知の方法によって得られる三次元構造によって決定することができる。エピトープマッピングは、Methods in Molecular Biology ‘Epitope Mapping Protocols’, Mike Schutkowski and Ulrich Reineke (volume 524, 2009) and Johan Rockberg and Johan Nilvebrant (volume 1785, 2018)などの刊行物に記載されているような当業者に公知の様々な技術を用いて実施することができる。例示的な方法としては、ｐｅｐｓｃａｎなどのペプチドに基づくアプローチが挙げられ、この方法では、ＥＬＩＳＡなどの技術を使用して、あるいは、例えばファージによる、ペプチドまたはタンパク質変異体の大規模なライブラリーのｉｎ ｖｉｔｒｏディスプレーを用いて一連の重複するペプチドが結合についてスクリーニングされる。エピトープの詳細な情報は、Ｘ線結晶構造解析、溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法および低温電子顕微鏡（ｃｒｙｏ－ＥＭ）を含む構造的技術によって決定することができる。アラニンスキャニングなどの変異誘発は、エピトープマッピングのために結合の損失分析が使用される効果的なアプローチである。別法として、水素／重水素交換（ＨＤＸ）とタンパク質分解および液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）の組合せによる、不連続または立体配座エピトープの特性決定を行う方法もある。

本発明のＢＭＰ１／ＴＬＬ１／ＴＬＬ２に結合するタンパク質と参照ＢＭＰ１／ＴＬＬ１／ＴＬＬ２に結合するタンパク質、例えば、参照抗体との競合は、ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）またはＦＯＲＴＥＢＩＯ ＯＣＴＥＴバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）などの当業者に公知の１以上の技術により決定することができる。このような技術は、エピトープビニングと呼ばれることもある。この競合には、２つのタンパク質が同じまたは重複するエピトープに結合することがある、結合の立体的な阻害がある、または第１のタンパク質の結合が、第２のタンパク質の結合を阻止または減少させる抗原のコンフォメーション変化を誘発し得る、などいくつかの可能性のある理由がある。

生物活性の低下または阻害は、部分的であっても全面的であってもよい。中和抗原結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の活性を、抗原結合タンパク質が存在しない場合のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の活性に対して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％中和し得る。

いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質（すなわち、ポリペプチド）は単離される。「単離された」抗原結合タンパク質は、その元の環境から取り出されたものである。「単離された」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗原結合タンパク質を実質的に含まない抗原結合タンパク質（例えば、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２、またはそれらのフラグメントと特異的に結合する単離された抗原結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２以外の抗原と特異的に結合する抗原結合タンパク質を実質的に含まない）を指して使用することがある。「単離された」という用語はまた、単離された抗原結合タンパク質が、医薬組成物の有効成分として調合された際に治療的に投与されるのに十分な純度、または少なくとも７０～８０％（ｗ／ｗ）の純度、より好ましくは少なくとも８０～９０％（ｗ／ｗ）の純度、さらにより好ましくは９０～９５％（ｗ／ｗ）の純度、最も好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（ｗ／ｗ）の純度である調製物を指して使用することもある。

いくつかの実施形態において、本発明で使用されるポリヌクレオチドは単離されている。「単離された」ポリヌクレオチドとは、その元の環境から取り出されたものである。例えば、天然に存在するポリヌクレオチドは、天然系に共存する物質の一部または総てから分離されている場合に、単離されている。例えば、ポリヌクレオチドが、その自然環境の一部ではないベクターにクローン化されている場合またはｃＤＮＡ内に構成されている場合は、単離されていると見なされる。

２つの密接に関連するポリペプチド配列を比較する目的で、第１のポリペプチド配列と第２のポリペプチド配列との「配列同一性％」は、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０により、ポリペプチド配列の標準設定を使用して（ＢＬＡＳＴＰ）、算出することができる。密接に関連する２つのポリヌクレオチド配列を比較する目的で、第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との「配列同一性％」は、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ ｖ２．０により、ヌクレオチド配列の標準設定を使用して（ＢＬＡＳＴＮ）、算出することができる。

ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、他のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列と、その全長にわたって１００％の配列同一性を有する場合、同じまたは「同一」であると言われる。配列中の残基は、左から右へ、すなわち、ポリペプチドの場合はＮ末端からＣ末端へ、ポリヌクレオチドの場合は５’末端から３’末端へと符番される。

配列間の「差」は、第１の配列と比較して、第２の配列の位置における単一のアミノ酸残基の挿入、欠失または置換を意味する。２つのポリペプチド配列は、１つ、２つまたはそれを超えるそのようなアミノ酸の相違を含むことができる。第一の配列とそれ以外の点では同一（１００％の配列同一性）である第２の配列における挿入、欠失または置換は、配列同一性％の低下をもたらす。例えば、同一の配列が９アミノ酸残基の長さである場合、第２の配列における１つの置換は、８８．９％の配列同一性となる。第１および第２のポリペプチド配列が９アミノ酸残基の長さで、６つの同一残基を共有する場合、第１および第２のポリペプチド配列は６６％以上の同一性を有する（第１および第２のポリペプチド配列は６６．７％の同一性を有する）。

あるいは、第１の参照用ポリペプチド配列と第２の比較ポリペプチド配列とを比較する目的で、第２の配列を生成するために第１の配列になされた付加、置換および／または欠失の数を確認することができる。「付加」とは、第１のポリペプチドの配列への１アミノ酸残基の付加である（第１のポリペプチドのいずれかの末端での付加も含む）。「置換」とは、第１のポリペプチドの配列中の１アミノ酸残基を１つの異なるアミノ酸残基による置換である。前記置換は、保存的であっても非保存的であってもよい。「欠失」とは、第１のポリペプチドの配列からの１アミノ酸残基の欠失である（第１のポリペプチドのいずれの末端での欠失も含む）。

「ベクター」という用語は、本明細書で使用する場合、連結された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは付加的なＤＮＡセグメントが連結され得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、付加的ＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。ある種のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自律的な複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター、ならびにエピソーム哺乳動物および酵母ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、それによって宿主ゲノムとともに複製され得る。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドがベクターの最も一般的な形態であるため、「プラスミド」と「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）、ならびにバクテリオファージおよびファージミド系などの他の形態の発現ベクターを含むことを意図する。「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、本明細書で使用する場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図される。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫を指すことが意図される。

「対照」、「患者」または「個体」という場合には、治療される対象、特に哺乳動物の対象を指す。哺乳動物対象には、ヒト、非ヒト霊長動物、農用動物（例えば、ウシ）、スポーツ動物、またはペット動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラットもしくはマウスが挙げられる。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。別の実施形態において、対象はマウスなどの非ヒト哺乳動物である。

「十分な量」という用語は、所望の効果をもたらすのに十分な量を意味する。治療上有効な量」という用語は、疾患または障害の症状を改善するのに有効な量である。治療上有効な量は、予防が治療と見なされることがあるため、「予防上有効な量」であり得る。

本明細書で使用する場合、「約」という用語は、指定された値より１０％大きい値から１０％小さい値まで、特に５％大きい値から５％小さい値までを含む。「間」という用語は、指定された境界の値を含む。

当業者は、宿主細胞における抗体などの抗原結合タンパク質の生産に際して、翻訳後修飾が起こり得ることを理解するであろう。例えば、これは、特定のリーダー配列の切断、様々なグリコシル化パターンにおける様々な糖部分の付加、非酵素的糖化、脱アミド化、酸化、ジスルフィド結合スクランブルおよび他のシステインバリアント（例えば、遊離スルフヒドリル、ラセミ化ジスルフィド、チオエーテルおよびトリスルフィド結合）、異性化、Ｃ末端のリジンクリッピングならびにＮ末端のグルタミン環化が含まれる。本発明は、１以上の翻訳後修飾に付された、または受けた抗原結合タンパク質の使用を包含する。従って、本発明の「抗原結合タンパク質」または「抗体」は、本明細書に記載されるような翻訳後修飾を受けた、先に記載の、それぞれ「抗原結合タンパク質」または「抗体」を含む。

糖化は、グルコースなどの還元糖とタンパク質中の遊離アミン基との間の翻訳後非酵素的化学反応であり、一般にリジン側鎖のε－アミンまたはタンパク質のＮ末端に見られる。糖化は、生産中および保存中に還元糖の存在下でのみ起こり得る。

生産中および保存中に起こり得る脱アミド反応は、主にアスパラギン（Ｎ）をイソアスパラギン酸とアスパラギン酸（Ｄ）に約３：１の割合で変換する酵素反応である。従って、この脱アミド化反応は、アスパラギン酸（Ｄ）のイソアスパラギン酸への異性化反応と関連している。アスパラギンの脱アミド化とアスパラギン酸の異性化はどちらも中間体のスクシンイミドが関与している。より程度は低いが、脱アミド化はグルタミン残基でも同様に起こり得る。脱アミド化はＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ領域）またはＦｃ領域で起こり得る。

酸化は、生産中および保存中（すなわち、酸化的条件の存在下）に起こり、活性酸素種によって直接的に、または酸化ストレスの二次副産物との反応によって間接的に誘導されるタンパク質の共有結合的修飾をもたらす。酸化は主にメチオニン残基で起こるが、トリプトファン残基および遊離システイン残基でも起こり得る。酸化はＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ）領域またはＦｃ領域で起こり得る。

ジスルフィド結合のスクランブルは、生産中および基本的保存条件において起こり得る。特定の状況下では、ジスルフィド結合が切断されるか、または不正に形成されて、不対になったシステイン残基（－ＳＨ）が生じ得る。これらの遊離（不対）スルフヒドリル（－ＳＨ）はシャッフリングを促進し得る。

チオエーテルの形成とジスルフィド結合のラセミ化は、生産中または保存中の基本的な条件下で、デヒドロアラニンと過硫酸塩中間体を介してシステイン残基に戻るジスルフィド橋のベータ消去により起こり得る。その後、デヒドロアラニンとシステインが架橋することでチオエーテル結合が形成されるか、遊離システイン残基がＤ－システインとＬ－システインの混合物とジスルフィド結合を形成することがある。

トリスルフィドは、ジスルフィド結合（Ｃｙｓ－Ｓ－Ｓ－Ｃｙｓ）に硫黄原子が挿入されて生じ、生産細胞培養中の硫化水素の存在のために形成される。

重鎖および／または軽鎖のＮ末端グルタミン（Ｑ）およびグルタミン酸（Ｅ）は、環化によりピログルタミン酸（ｐＧｌｕ）を形成すると考えられる。ｐＧｌｕの形成の多くは生産バイオリアクター内で起こるが、処理および保存条件のｐＨおよび温度によって非酵素的に形成されることもある。Ｎ末端のＱまたはＥの環化は、天然のヒト抗体に一般に見られる。

Ｃ末端リジンクリッピングは、カルボキシペプチダーゼによって触媒される酵素反応であり、組換え抗体および天然のヒト抗体に一般に見られる。このプロセスのバリアントには、組換え宿主細胞からの細胞酵素による一方または両方の重鎖からのリジンの除去が含まれる。ヒト対象／患者に投与すると、残存するＣ末端リジンが除去される可能性がある。

Ｆｃエンジニアリング法は、抗体の機能的または薬物動態的特性を変調するために適用することができる。エフェクター機能は、Ｆｃ領域に、Ｃ１ｑまたはＦｃγ受容体への結合を増加または減少させ、ＣＤＣまたはＡＤＣＣ活性をそれぞれ変化させる変異を作出することによって変更することができる。抗体のグリコシル化パターンを変更することでも、エフェクター機能を変更することができる。抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、ＦｃＲｎ（（新生児型Ｆｃ受容体(Neonatal Fc Receptor)）へのＦｃの結合に影響を与える変異を作出することで変更することができる。

「エフェクター機能」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む抗体媒介作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む抗体媒介補体活性化、補体依存性細胞媒介性貪食作用（ＣＤＣＰ）、抗体依存性補体媒介性細胞溶解（ＡＤＣＭＬ）、およびＦｃ媒介性貪食作用または抗体依存性細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）のうちの１以上を指す。

抗原結合タンパク質または抗体のＦｃ領域と、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑおよびＩＩ型Ｆｃ受容体を含む様々なＦｃ受容体（ＦｃＲ）との間の相互作用は、抗原結合タンパク質または抗体のエフェクター機能を媒介すると考えられている。重要な生物学的効果は、エフェクター機能の結果であり得る。通常、エフェクター機能を媒介する能力は、抗原結合タンパク質または抗体の抗原への結合を必要とし、総ての抗原結合タンパク質または抗体があらゆるエフェクター機能を媒介するわけではない。

エフェクター機能は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩを介してナチュラルキラー（ＮＫ）細胞により、またはＦｃγＲＩを介して単球／マクロファージにより媒介される、標的細胞を覆った抗体のＡＤＣＣエフェクター機能を評価すること、またはＣ１ｑを介した補体カスケードにより媒介される、標的細胞を覆った抗体のＣＤＣエフェクター機能を評価することを含む多くの方法で評価することができる。例えば、本発明の抗原結合タンパク質は、ナチュラルキラー細胞アッセイでＡＤＣＣエフェクター機能を評価することができる。このようなアッセイの例は、Shields et al, 2001, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, p. 6591-6604; Chappel et al, 1993, The Journal of Biological Chemistry, Vol 268, p. 25124-25131; Lazar et al, 2006, PNAS, 103; 4005-4010に見出すことができる。ＣＤＣ機能を決定するためのアッセイの例としては、J Imm Meth, 1995, 184: 29-38に記載されているものが挙げられる。

エフェクター機能（例えば、ＦｃＲｎ結合、ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合、ＣＤＣ、ＡＤＣＭＬ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ）に対する変異の効果は、例えば、Grevys et al., J Immunol. 2015 Jun 1; 194(11): 5497-5508に記載されているように評価することができる。

本明細書において、抗体配列または全長抗原結合タンパク質配列中のＦｃ領域のアミノ酸残基は、ＥＵインデックスナンバリング規則に従って符番される。

ヒト定常領域のいくつかのアイソタイプ、特にＩｇＧ４およびＩｇＧ２アイソタイプは、ａ）古典的経路による補体の活性化、およびｂ）ＡＤＣＣの機能を本質的に欠いている。抗原結合タンパク質の重鎖定常領域には、所望のエフェクター特性に応じて、エフェクター機能を変化させるための様々な改変が行われることがある。Ｆｃ受容体への結合を減少させ、ＡＤＣＣおよびＣＤＣなどのエフェクター機能を減少させる特定の変異を含むＩｇＧ１定常領域が記載されている(Duncan et al. Nature 1988, 332; 563-564; Lund et al. J. Immunol. 1991, 147; 2657-2662; Chappel et al. PNAS 1991, 88; 9036-9040; Burton and Woof, Adv. Immunol. 1992, 51;1-84; Morgan et al., Immunology 1995, 86; 319-324; Hezareh et al., J. Virol. 2001, 75 (24); 12161-12168)。

一実施形態において、抗原結合タンパク質が、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの低下などのエフェクター機能が低下するような定常領域を含んでなるＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２結合タンパク質が提供される。そのような一実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプの天然障害定常領域、または変異型ＩｇＧ１定常領域を含んでなり得る。好適な改変の例は、ＥＰ０３０７４３４に記載されている。一例は、２３５番および２３７番（ＥＵインデックスナンバリング）におけるアラニンとの置換、すなわちＬ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ（一般に「ＬＡＧＡ」変異と呼ばれる）を含んでなる。別の例は、２３４番および２３５番（ＥＵインデックスナンバリング）におけるアラニンとの置換、すなわちＬ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（一般に「ＬＡＬＡ」変異と呼ばれる）を含んでなる。ＥＰ２６９１４１７およびＵＳ８９６９５２６に記載されているさらなる例は、ＩｇＧ１ ＦｃｓについてはＬＡＬＡ変異と組み合わせたＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒ（ＥＵインデックスナンバリング）、ＩｇＧ４ ＦｃｓについてはＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅと組み合わせたＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒ（ＥＵインデックスナンバリング）を含んでなる。

エフェクター機能を低下させるためのさらなる改変および変異としては以下のものが含まれる（別段の記載がない限りＩｇＧ１を参照）：アグリコシル化Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ；Ｌ２３５Ｅ；ＩｇＧ４：Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；およびキメラＩｇＧ２／ＩｇＧ４。ＩｇＧ２：Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、およびＩｇＧ２：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓは、ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合を減少させることができる（Wang et al. 2018およびＵＳ８９６１９６７）。

エフェクター機能を低下させる他の変異としては、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ；ヒトＩｇＧ２由来のＣＨ１およびヒンジ領域とヒトＩｇＧ４由来のＣＨ２およびＣＨ３領域を用いて作製したキメラ抗体；ＩｇＧ４由来の４つの重要なアミノ酸残基の変化（Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ）を有するＩｇＧ２アイソタイプに基づくＩｇＧ２ｍ４；Ｆｃγ受容体とＣ１ｑ補体タンパク質への親和性を除去するためにＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を含むＩｇＧ２σ；ＩｇＧ２ｍ４（Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４への変更）；ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）；ｈｕＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＡＡ）；ｈｕＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１σ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）；ＩｇＧ４σ１（Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ）；ならびにＩｇＧ４σ２（Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／ΔＧ２３６／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、ここでΔは欠失を表す）が挙げられる(Tam et al., Antibodies 2017, 6(3))。

抗原結合タンパク質
本発明では、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に特異的に結合し得る抗原結合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、このような抗原結合タンパク質は、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントである。

本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の触媒ドメインへの結合を介してＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の活性を中和する。いかなる理論にも縛られるものではないが、本発明の抗原結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の中和を介して線維化を制限し、器官の機能不全を遅らせると考えられている。例えば、ＢＭＰ１／ＴＬＬは可溶性プロコラーゲンＩを不溶性コラーゲン線維に変換して線維化をもたらし、本明細書に記載の抗原結合タンパク質はプロコラーゲンＩの切断を中和することができる。線維化は、総てではないが多くの器官系の組織損傷に応答して起こると考えられている。初期の線維化は組織の完全性の維持に有益であるが、過剰な線維化は瘢痕化し、正常な器官機能の阻害につながる。従って、この病的な線維化を軽減することで、疾患の進行を遅らせる可能性がある。さらに、ＢＭＰ１の阻害はまた、筋肉の成長を促進することができ、筋肉機能を高めることが示されており、その結果、虚弱体質も軽減し得る。

一実施形態において、抗原結合タンパク質は抗体またはそのフラグメントであり、この抗体またはそのフラグメントはｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、可変ドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、ダイアボディ、ミニボディまたはモノクローナル抗体である。さらなる実施形態において、抗体またはそのフラグメントはモノクローナル抗体である。

本発明の抗体は、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどいずれのクラスのものであっても、またはそのアイソタイプであってもよく、κまたはλ軽鎖を含んでなり得る。一実施形態において、抗体は、ＩｇＧ抗体、例えば、アイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のうち少なくとも１である。さらなる実施形態において、抗体は、エフェクター機能の低下、半減期の延長、ＡＤＣＣの変更、またはヒンジ安定性の向上のために変異させたＦｃを有するなど、所望の特性を付与するように改変されたＩｇＧ形式などの形式である。このような改変は上記されている。

一実施形態において、抗体またはそのフラグメントはヒトである。従って、抗体またはそのフラグメントは、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）配列に由来し得る。抗体（またはそのフラグメント）のＣＤＲ、フレームワークおよび／または定常領域は、ヒトＩｇ配列、特に、ヒトＩｇＧ配列に由来し得る。ＣＤＲ、フレームワークおよび／または定常領域は、ヒトＩｇ配列、特に、ヒトＩｇＧ配列と実質的に同一であり得る。ヒト抗体を使用する利点は、それらはヒトにおいて免疫原性が低いか、または無いということである。

抗体またはそのフラグメントはまた、キメラ、例えば、マウス－ヒト抗体キメラであってもよい。

あるいは、抗体またはそのフラグメントは、マウスなどの非ヒト種に由来する。このような非ヒト抗体は、ヒトにおいて天然に生成された抗体バリアントとの類似性を高めるように改変することができ、よって、抗体またはそのフラグメントは部分的にまたは完全にヒト化することができる。従って、一実施形態において、抗体またはそのフラグメントはヒト化される。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質はＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、ＡＤＣＣの低減などのＦｃにより媒介されるエフェクター機能を低減するための少なくとも１つの変異を含んでなるＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、ＡＤＣＣの低減などのＦｃにより媒介されるエフェクター機能を低減するための変異Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ（「ＬＡＧＡ」変異とも呼ばれる）を含んでなるＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、完全ヒトモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、ＡＤＣＣの低減などのＦｃにより媒介されるエフェクター機能を低減するための変異Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａを含んでなる完全ヒトモノクローナルＩｇＧ１抗体である。

抗原結合タンパク質の配列
本発明のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはフラグメントは、それらのＣＤＲ配列を参照して記載することができる。

本発明の第１の態様によれば、
（ａ）（ｉ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７および２２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８および２２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７または２２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８または２２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントが提供される。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号７中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号７の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号８の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号４０中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号３９中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号４０の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号３９の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号５４中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号５３中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号５４の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号５３の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号６７中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号６８中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号６７の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号６８の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号８２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号８２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号８１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号９６中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号９５中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号９６の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号９５の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１１０中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１０９中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１１０の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１０９の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１２４中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１２３中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１２４の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１２３の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１３８中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１３７中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１３８の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１３７の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１５２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１５１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１５２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１５１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１６６中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１６５中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１６６の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１６５の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１８０中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号１７９中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；あるいは（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１８０の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１７９の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号１９４中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または配列番号１９３中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号１９４の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号１９３の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号２０７中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号２０８中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；あるいは（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号２０７の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号２０８の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
（ａ）（ｉ）配列番号２２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号２２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのうちいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号２２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域および／または配列番号２２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ１；および／または
ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ２；および／または
ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ３；および／または
ＧＹＹＭＳ（配列番号４）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ１；および／または
ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ２；および／または
ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ３
のうち１以上を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＧＹＹＭＳ（配列番号４）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ１を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ２を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＧＹＹＭＳ（配列番号４）の配列を含んでなるＣＤＲ１、ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）の配列を含んでなるＣＤＲ２およびＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ１を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ２を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）の配列を含んでなるＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）の配列を含んでなるＣＤＲ２およびＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、次の６つのＣＤＲ：ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）のＬＣＤＲ１；ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）のＬＣＤＲ２；ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）のＬＣＤＲ３；ＧＹＹＭＳ（配列番号４）のＨＣＤＲ１；ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２；およびＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）のＨＣＤＲ３を含んでなる。

本発明のさらなる態様によれば、本明細書に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含んでなるＶＨ領域と、本明細書に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含んでなるＶＬ領域とを含んでなるＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントが提供される。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）のＬＣＤＲ１；ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）のＬＣＤＲ２；およびＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）のＬＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域と、ＧＹＹＭＳ（配列番号４）のＨＣＤＲ１；ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２；およびＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）ＨＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域とを含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号７と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号７と１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＨ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号８と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を含んでなるＶＨ領域および配列番号８のアミノ酸配列を含んでなるＶＬ領域を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号９と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号９と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０と１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質、例えば、抗ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体またはそのフラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を含んでなる軽鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含んでなる重鎖を含んでなる。

本発明の１つの態様において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質は、以下から選択され、ＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬおよび／またはＨＣ／ＬＣ配列に従って定義されるＢＭＰ－１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２と結合する完全ヒトＦｃ障害モノクローナル抗体である：
配列番号１～１０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４；
配列番号１５～２４に示されるような１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４；
配列番号３３～４２に示されるような１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９；
配列番号４７～５６に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３７６；
配列番号６１～７０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３７３；
配列番号７５～８４に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３６４；
配列番号８９～９８に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３５１；
配列番号１０３～１１２に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３４８；
配列番号１１７～１２６に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３２８；
配列番号１３１～１４０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３２７；
配列番号１４５～１５４に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３２５；
配列番号１５９～１６８に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３２４；
配列番号１７３～１８２に示されるような１３Ｙ０３９－１２７Ｇ０３－２８９０；
配列番号１８７～１９６に示されるような１３Ｙ０３９－１５２Ｂ０２－２９４８；
配列番号２０１～２１０に示されるような１３Ｙ０３９－１５２Ｂ０２－２９４０；および
配列番号２１５～２２４に示されるような１３Ｙ０３９－１５２Ｂ０２－２９３５。

さらなる実施形態において、抗ＢＭＰ－１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体は、以下から選択され、ＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬおよび／またはＨＣ／ＬＣ配列に従って定義される：
配列番号１～１０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４；
配列番号１５～２４に示されるような１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４；および
配列番号３３～４２に示されるような１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９。

さらなる実施形態において、抗ＢＭＰ－１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体は、以下から選択され、ＣＤＲ、ＶＨ／ＶＬおよび／またはＨＣ／ＬＣ配列に従って定義される：
配列番号１～１０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４；および
配列番号１５～２４に示されるような１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４。

なおさらなる実施形態において、抗ＢＭＰ－１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗体：
配列番号１～１０に示されるような１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４。

本明細書において「少なくとも８０％」または「８０％以上」と示される実施形態は、８０％に等しいかまたはそれを超える総ての値、例えば、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を含むと理解される。一実施形態において、本発明の抗体またはフラグメントなどの抗原結合タンパク質は、特定の配列と少なくとも８５％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を含んでなる。

標的抗原との結合
本発明の抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ未満のＳＰＲによって測定される結合親和性（ＫＤ）でヒトＢＭＰ１の触媒ドメインに結合し得る。さらなる実施形態において、ＫＤは５０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下である。なおさらなる実施形態において、ＫＤは５ｎＭ以下、例えば２ｎＭ以下である。例えば、１つの態様によれば、ＳＰＲにより測定した結合親和性（ＫＤ）が２ｎＭ未満でＢＭＰ１の触媒ドメインに結合するヒト抗ＢＭＰ１抗体が提供される。

本発明の抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ未満のＳＰＲによって測定される結合親和性（ＫＤ）でヒトＴＬＬ１の触媒ドメインに結合し得る。さらなる実施形態において、ＫＤは５０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下である。なおさらなる実施形態において、ＫＤは５ｎＭ以下、例えば２ｎＭ以下である。例えば、１つの態様によれば、ＳＰＲにより測定した結合親和性（ＫＤ）が２ｎＭ未満でＴＬＬ１の触媒ドメインに結合するヒト抗ＴＬＬ１抗体が提供される。

本発明の抗原結合タンパク質は、１００ｎＭ未満のＳＰＲによって測定される結合親和性（ＫＤ）で、ヒトＴＬＬ２の触媒ドメインに結合し得る。さらなる実施形態において、ＫＤは５０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下である。なおさらなる実施形態において、ＫＤは５ｎＭ以下、例えば４ｎＭ以下である。例えば、１つの態様によれば、ＳＰＲにより測定した結合親和性（ＫＤ）が４ｎＭ未満でＴＬＬ２の触媒ドメインに結合するヒト抗ＴＬＬ２抗体が提供される。

例えば、１つの態様によれば、ＳＰＲで測定した結合親和性（ＫＤ）が２ｎＭ未満でＢＭＰ１の触媒ドメインに結合する、ＳＰＲで測定した結合親和性（ＫＤ）が２ｎＭ未満でＴＬＬ２の触媒ドメインに結合する、あるいは、ＳＰＲで測定した結合親和性（ＫＤ）が４ｎＭ未満でＴＬＬ２の触媒ドメインに結合する、ヒト抗ＢＭＰ１抗体、ヒト抗ＴＬＬ１抗体およびヒト抗ＴＬＬ２抗体が提供される。

本明細書では、抗原結合タンパク質の機能を定義するために使用され得る他のアッセイも記載する。

ポリヌクレオチドおよび発現ベクター
本発明の１つの態様では、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチドが提供される。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１１と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含んでなるＶＬを含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１２と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含んでなるＶＨ鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含んでなる重鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４と少なくとも７０％の配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を含んでなる軽鎖を含んでなる。

一実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３および／または１４の配列からなる。

抗体などの抗原結合タンパク質またはそのフラグメントを発現させるために、本明細書に記載されるような部分的なまたは全長の軽鎖および重鎖をコードするポリヌクレオチドを、それらの遺伝子が転写および翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入する。従って、本発明の１つの態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターが提供される。

一実施形態において、発現ベクターは、配列番号１３の重鎖を含んでなる。

一実施形態において、発現ベクターは、配列番号１４の軽鎖を含んでなる。

一実施形態において、発現ベクターは、配列番号１３の重鎖および配列番号１４の軽鎖を含んでなる。

本明細書に記載のヌクレオチド配列は、翻訳、精製および検出を助けるためにアミノ酸残基をコードする付加的配列を含んでなるが、使用する発現系に応じて別の配列を使用してもよいことが理解されるであろう。これらの任意選択の配列は、別の設計、翻訳、精製または検出戦略が採用される場合、削除、改変または置換することができる。

ポリペプチドのアミノ酸配列に関してはサイレントであるが、特定の宿主における翻訳のための好ましいコドンを提供するポリペプチドをコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡを変異により作出することができる。核酸の翻訳に好ましいコドンは、例えば、大腸菌(E. coli)、Ｓ．セレビシエ(S. cerevisiae)および哺乳動物、特にヒトで知られている。

ポリペプチドの変異は、例えば、ポリペプチドをコードする核酸の置換、付加または欠失によって達成することができる。ポリペプチドをコードする核酸への置換、付加または欠失は、例えばエラープローンＰＣＲ、シャフリング、オリゴヌクレオチド指向性変異誘発、アセンブリＰＣＲ、ＰＣＲ変異誘発、ｉｎ ｖｉｖｏ変異誘発、カセット変異誘発、再帰的アンサンブル変異誘発、指数関数的アンサンブル変異誘発、部位特異的変異誘発、遺伝子リアセンブリ、人工遺伝子合成、遺伝子部位飽和変異誘発（ＧＳＳＭ：Gene Site Saturation Mutagenesis）、合成ライゲーションリアセンブリ（ＳＬＲ）またはこれらの方法の組合せを含む多くの方法によって導入することができる。また、核酸への改変、付加または欠失は、組換え、再帰的配列組換え、ホスホチオエート修飾ＤＮＡ変異誘発、ウラシル含有鋳型変異誘発、ギャップ付き二重鎖変異誘発、点ミスマッチ修復変異誘発、修復不全宿主株変異誘発、化学的変異誘発、放射線変異誘発、欠失変異誘発、制限選択変異誘発、制限精製変異誘発、アンサンブル変異誘発、キメラ核酸多量体作製またはこれらの組合せを含んでなる方法によっても導入することができる。

特に、人工的な遺伝子合成を使用することができる。本発明のポリペプチドをコードする遺伝子は、例えば、固相ＤＮＡ合成により合成的に生産することができる。前駆体鋳型ＤＮＡを必要とせず、遺伝子全体がｄｅ ｎｏｖｏ合成され得る。所望のオリゴヌクレオチドを得るために、構成ブロックは、成長中のオリゴヌクレオチド鎖に、生成物の配列が必要とする順序で順次結合される。鎖の組み立てが完了すると、生成物は固相から溶液に放出され、脱保護され、回収される。生成物は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分離し、高純度で所望のオリゴヌクレオチドを得ることができる。

発現ベクターには、例えば、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）およびエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）由来エピソームが含まれる。ポリヌクレオチドは、ベクター内の転写および翻訳制御配列が、ポリヌクレオチドの転写および翻訳を制御するという意図した機能を果たすように、ベクターに連結される。発現および／または制御配列としては、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、コード配列の５’側の開始コドン（すなわちＡＴＧ）、イントロンのスプライシングシグナルおよび終止コドンを含み得る。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。配列番号１１～１２は、ＶＨ領域とＶＬ領域を含んでなる本発明の一本鎖可変フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含んでなる。本発明のポリヌクレオチドまたは発現ベクターは、ＶＨ領域、ＶＬ領域もしくはその両方をコードすることができ；または重鎖、軽鎖もしくはその両方をコードすることもできることが理解されるであろう。従って、ＶＨ領域およびＶＬ領域（または重鎖および軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを別々のベクターに挿入することができるし、あるいは両方の領域または鎖をコードする配列を同じ発現ベクターに挿入することもできる。ポリヌクレオチドは、標準的な方法（例えば、ポリヌクレオチドとベクター上の相補的制限部位の連結、または制限部位が存在しない場合は平滑末端連結）により発現ベクターに挿入される。

便利なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨまたはＣＬ免疫グロブリン配列をコードするものであり、本明細書に記載するように、任意のＶＨまたはＶＬ配列が容易に挿入され発現され得るように適切な制限部位が操作されている。発現ベクターは、宿主細胞からの抗体（またはそのフラグメント）などの抗原結合タンパク質の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることもできる。ポリヌクレオチドは、シグナルペプチドが抗原結合タンパク質のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターにクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種のシグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。

本発明の１つの態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含んでなる細胞（例えば、宿主細胞または組換え宿主細胞）が提供される。細胞は、抗体またはそのフラグメントの軽鎖をコードする第１のベクターと、抗体またはそのフラグメントの重鎖をコードする第２のベクターとを含んでなり得ることが理解されるであろう。あるいは、同じ発現ベクターにコードされた重鎖と軽鎖の両方が細胞に導入されてもよい。

一実施形態において、ポリヌクレオチドまたは発現ベクターは、抗体またはそのフラグメントに融合された膜アンカーまたは膜貫通ドメインをコードし、その抗体またはそのフラグメントは、細胞の細胞外表面に提示される。

形質転換は、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための任意の既知の方法によって行うことができる。哺乳動物細胞に異種ポリヌクレオチドを導入するための方法は当技術分野で周知であり、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リポソームへのポリヌクレオチドの封入、微粒子銃注入およびＤＮＡの核への直接マイクロインジェクションが含まれる。さらに、核酸分子は、ウイルスベクターによって哺乳動物細胞に導入することもできる。

発現のための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は当技術分野で周知あり、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株が含まれる。これらには、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞および多数の他の細胞株が含まれる。哺乳動物宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞が含まれる。特に有利な細胞株は、どの細胞株が高い発現レベルを有するか決定することにより選択される。使用可能な他の細胞株としては、昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９細胞）、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞がある。抗体の抗原結合フラグメント、例えば、ｓｃＦｖおよびＦｖフラグメントは、当技術分野で公知の方法を用いて単離し、大腸菌で発現させることができる。

抗原結合タンパク質は、宿主細胞における抗原結合タンパク質の発現、またはより好ましくは宿主細胞が増殖している培養培地への抗原結合タンパク質の分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより生産される。抗原結合タンパク質は、標準的なタンパク質精製法を用いて培養培地から回収することができる。

本発明の抗体（またはフラグメント）は、例えば、Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2012) 4th Edition Cold Spring Harbour Laboratory Pressに開示されている技術を用いて入手し、操作することができる

特にモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術により、特定の抗体産生Ｂ細胞と、組織培養で増殖する能力と抗体鎖合成を行わないことで選択した骨髄腫（Ｂ細胞癌）細胞とを融合させることにより作出することができる。

決定された抗原に対するモノクローナル抗体は、例えば、
ａ）ハイブリドーマを形成するために、決定された抗原で予め免疫した動物の末梢血から得たリンパ球を、不死細胞、好ましくは骨髄腫細胞で不死化させること、
ｂ）形成した不死化細胞（ハイブリドーマ）を培養し、所望の特異性を有する抗体を産生する細胞を回収すること
により得ることができる。

あるいは、ハイブリドーマ細胞の使用は必要でない。本明細書に記載されるような標的抗原に結合し得る抗原結合タンパク質は、好適な抗体ライブラリーから、例えば、当技術分野で公知のファージディスプレー、酵母ディスプレー、リボゾームディスプレーまたは哺乳動物ディスプレー技術を用いるなどの慣例の実践により単離することができる。よって、モノクローナル抗体は特に、例えば、
ａ）ベクター、特に、ファージ、より詳しくは、線維状バクテリオファージに、動物（好適には、決定された抗原で予め免疫された）のリンパ球、特に末梢血リンパ球から得られたＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列をクローニングする工程、
ｂ）抗体の生産を可能とする条件で原核細胞を上記のベクターで形質転換する工程、
ｃ）抗原親和性選択を行うことにより抗体を選択する工程、および
ｄ）所望の特異性を有する抗体を回収する工程
を含んでなる方法により得ることができる。

医薬組成物
さらなる態様によれば、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を含んでなる組成物が提供される。このような実施形態において、組成物は、抗原結合タンパク質を、場合により他の賦形剤と組み合わせて含んでなり得る。また、１以上の付加的有効成分（例えば、本明細書に述べられている疾患を治療するのに好適な有効成分）を含んでなる組成物が提供される。

さらなる態様によれば、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を、薬学上許容可能な希釈剤または担体とともに含んでなる医薬組成物が提供される。本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、対象への投与に好適な医薬組成物に配合することができる。一般に、医薬組成物は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質および薬学上許容可能な担体を含んでなる。本明細書で使用する場合、「薬学上許容可能な担体」には、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学上許容可能な担体の例としては、水、生理食塩水、塩、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうち１以上、ならびにそれらの組合せが含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。また、湿潤剤、または乳化剤、保存剤もしくはバッファーなどの、抗体またはそのフラグメントの保存寿命または有効性を高める微量の補助物質といった薬学上許容可能な物質を医薬組成物に含めてもよい。

本明細書に記載の組成物は、様々な形態であってよい。これらには、例えば、液体、半固体および固体の剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸薬、散剤、リポソームおよび坐剤などが含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療用途によって異なる。典型的な好ましい組成物は、注射または連続注入（例えば、限定するものではないが、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、眼内および門脈内が挙げられる）により投与される注射可能または注入可能溶液の形態である。

好ましい投与様式は、非経口的（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態において、抗原結合タンパク質は、静脈内注入または注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗原結合タンパク質は、筋肉内または皮下注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗原結合タンパク質は、皮下注射によって、一般に１か月に１回投与される。

治療用組成物は、一般に、無菌であり、製造および保存の条件下で安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高薬物濃度に適した他の秩序構造として調合することができる。

本発明の医薬組成物を、本明細書に記載されるような疾患のための治療法において、そのような疾患の治療に通常用いられる他の確立された療法の補助として、またはそれと併用して使用することは、本発明の範囲内にある。

本発明のさらなる態様において、抗原結合タンパク質、組成物または医薬組成物は、少なくとも１つの有効成分と逐次に、同時にまたは別個に投与される。

医薬組成物は、抗原結合タンパク質を他の医薬とともに含むキットに、および／または使用説明書とともに含めることができる。便宜上、キットは、所定量の試薬と使用説明書を含んでなってもよい。キットはまた、医薬組成物の投与に使用されるデバイスも含み得る。

本明細書に記載の抗原結合タンパク質はまた、治療の方法において使用され得る。本明細書において治療という場合には確立された状態の治療を指すことが、当業者には理解されるであろう。しかしながら、本発明の化合物は、条件によっては、特定の疾患の予防にも有用であり得る。本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、治療的、予防的または回避的処置のために有効量で使用される。本明細書に記載の抗原結合タンパク質の治療的有効量は、疾患の１以上の症状を改善もしくは軽減するために、または疾患を予防もしくは治癒するために有効な量である。

治療方法
本発明のさらなる態様によれば、医薬として使用するための、または療法において使用するための本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

本発明の抗原結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の活性を中和し、例えば、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２の阻害が治療利益となる疾患の治療を含む、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患の治療に特に有用であり得る。例えば、本発明の抗原結合タンパク質は、組織ＥＣＭ（細胞外マトリックス）の産生および／または成熟の阻害が有益となる、またはミオスタチン活性の阻害が有益となる、または線維化の阻害が有益となる疾患の治療に特に有用であり得る。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患は、身体の器官または組織における線維化関連の疾患または障害、例えば、病的な線維化状態または疾患に関連する疾患から選択され（例えば、線維化の予防および退縮）、例えば下記の病態がある：
心臓（例えば、心筋梗塞（「ＭＩ」）、ＭＩ後心不全の予防、心不全（例えば、駆出率低下型心不全（ＨＦｒＥＦ）、駆出率維持型心不全）、心不整脈（例えば、心房細動）、心臓線維症（例えば、肥大型心筋症）、急性減圧心不全、心房細動）；
肺（例えば、慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）、肺／肺線維症（例えば、特発性肺線維症（「ＩＰＦ」）、肺動脈性高血圧症（ＰＡＨ））；
腎臓（例えば、糖尿病性腎症、急性腎臓障害後、慢性腎疾患（「ＣＫＤ」）、移植後腎機能発現遅延、腎線維症、腹膜線維症および腹膜透析患者の腹膜線維症予防（例えば、末期腎臓患者の血液透析への移行時期遅延）、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ））；
肝臓（例えば、肝硬変、非アルコール性脂肪性肝炎（「ＮＡＳＨ」）、肝線維症（例えば、ＨＣＶ後肝線維症））；
眼（例えば、緑内障、角膜瘢痕化）；
骨格筋（例えば、筋ジストロフィー（デュシェンヌ型、ベッカー型肢、肢帯型、先天型、顔面肩甲上腕型、筋強直型、眼球咽頭型、遠位型およびエメリー・ドレイフス型を含む）、反復性筋損傷）；
皮膚（例えば、ケロイド、創傷治癒、癒着、肥厚性瘢痕およびその他の瘢痕（例えば、火傷、手術またはその他の外傷に関連する瘢痕）、デュプイトレン拘縮、リンパ浮腫、強皮症）；
血管系（例えば、脳卒中および膠原病血管系疾患（例えば、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチおよび強皮症））；ならびに
神経系（例えば、脊髄損傷、多発性硬化症）。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患は、癌および癌細胞転移から選択される。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患は、
特発性肺線維症；
肥大型心筋症；および
腹膜透析患者の腹膜線維症予防
から選択される。

ある特定の実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患は、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）である。ＮＡＳＨは、肝臓炎症および肝硬変への進行の実質的なリスクを特徴とする非アルコール性脂肪性肝疾患の亜種であり、これらの疾患のより進行した段階は炎症を特徴とする。

いくつかの実施形態において、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２活性に関連する疾患は、筋機能および／または筋量の低下を特徴とする筋疾患、例えば、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型、ベッカー型肢、肢帯型、先天型、顔面肩甲上腕型、筋強直型、眼球咽頭型、遠位型およびエメリー・ドレイフス型）、サルコペニアおよび悪液質（例えば、心不全、ＣＫＤ、ＣＯＰＤ、癌または老化に関連する悪液質）から選択される。

従って、本明細書に記載の線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

さらなる態様によれば、それを必要とする対象における、本明細書に記載の線維化関連の疾患または障害の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２抗原に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法が提供される。

さらなる態様によれば、本明細書に記載の線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための医薬の製造における本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。

本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質はまた、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のために、例えば、悪液質患者集団において虚弱体質（例えば、筋肉消耗）を軽減するために使用することもできる。

よって、さらなる態様によれば、それを必要とする対象における、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる方法が提供される。

さらなる態様によれば、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善に使用するための、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物が提供される。

本発明のさらなる態様によれば、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための医薬の製造における、本明細書に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質または本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。

本発明の他の特徴および利点は、本明細書に提供される説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の好ましい実施形態を示しながらの説明および具体例は、当業者には様々な変更および修正が明らかになるため、単に例示のために示されていると理解されるべきである。以下、本発明を、下記の非限定的な例を用いて説明する。

抗体の生成および特性決定
ｉｎ ｖｉｔｒｏの抗体探索プラットフォームを用いて、ヒトＢＭＰ１／ＴＬＬに特異的な完全ヒト抗体の同定と親和性成熟を行った。

選択結果から得られたクローンを一連の実験でスクリーニングし、結合速度、効力および生物物理学的特性を理解した後、望ましい機能特性を有する１６のモノクローナル抗体のリードパネルを選択した。１６の抗体のリードパネルは、さらなる機能化と特性決定研究のためにＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞から発現させ、精製した。機能的特性決定は、組換えヒトおよび相同分子種、ならびにヒト血清およびラット血漿（内因性発現）に対して行った。

望ましい作用機序にはエフェクター機能は必要ないため、重鎖定常領域のＣＨ２ドメイン内の残基Ｌ２３５およびＧ２３７をアラニン残基に変異させた（ＬＡＧＡ変異）。これらの変異は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを介して標的細胞を溶解するＩｇＧ１抗体の能力を除去することがこれまでに示されている[Bartholomew et al. (1995). Immunology 85, 41-48; Bret et al. (1997) Immunology 91, 346-353]。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４をｉｎ ｖｉｖｏでの特性決定のために選択した。これらの抗体は、マウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ Ｆｃおよびマウスκにヒト可変領域（本明細書では、４Ｂ０６－４３３４については化合物Ａおよび３Ｅ０７－２９４４については化合物Ｂと呼ぶ）およびラットＩｇＧ２ｂ ＬＡＧＡ Ｆｃおよびラットκにヒト可変領域（本明細書では、４Ｂ０６－４３３４については化合物Ｃおよび３Ｅ０７－２９４４については化合物Ｄと呼ぶ）を有するリバースキメラｍＡｂとしてクローニングされた。これらのリバースキメラは、以下に記載するＡｎｇＩＩ／ＰＥ効力試験で試験した。

哺乳動物で発現させた抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体の結合の特性決定
哺乳動物で発現させた抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体の結合の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による特性決定

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による、ＨＥＫで発現させた全リードパネルのヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１への結合
ＨＥＫ細胞で発現させた１６種類のリードパネル抗体と、触媒ドメインおよび末端切断ドメインを含むヒトＢＭＰの末端切断型（ヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１末端切断型抗原）との結合を、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００を用いたＳＰＲにより評価した。ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファーを使用し、実験は２５℃で行った。プロテインＡはアミンカップリングによりＣＭ５センサーチップに固定化した。リードパネル抗体は、プロテインＡ表面に捕捉させた。次に、ヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１を、捕捉された抗体上に様々な濃度で通過させた。結果を以下の表１に示す。

表１の結果は、１６種類の抗体総てがヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に結合することが示され、０．３～４．３ｎＭの範囲の１桁のｎＭの親和性を示したことを示す。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４をさらに評価した。

ＳＰＲによる、ＨＥＫにより発現させた抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４およびリバースキメラのヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１およびマウスＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１への結合
両抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４とリバースキメラ抗体を、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００でのＳＰＲにより、ヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１およびマウスＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１末端切断型抗原への結合に関して評価した。プロテインＡ／Ｇを、アミンカップリングを介してＣＭ５センサーチップに固定化し、抗体をプロテインＡ／Ｇ表面に捕捉させた。捕捉された抗体上に様々な濃度で抗原を通過させた。測定されたヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対する親和性を表２に示し、測定されたマウスＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対する親和性を表３に示す。

表２の結果は、ＨＢＳ－ＥＰ＋バッファー中の１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４はヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対して３．０８ｎＭの親和性を有し、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４はヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１の結合剤ではないことを示す。

表３の結果は、マウスＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対する両抗体の親和性が１桁のｎＭ範囲（１．７～６．１ｎＭ）内であることを示す。

マウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ Ｆｃ上のヒト可変領域とマウス定常κ領域を有するリバースキメラ抗体もまた、総てのＣＤ＋ＣＵＢ１末端切断への結合に関して評価した。これらの実験は、ヒト可変領域とマウス定常κ領域を有する抗ＲＳＶマウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ Ｆｃおよび抗ＭＯＰＣ２１マウスＩｇＧ２ａの陰性抗体対照を含んだ。両陰性対照ともどの抗原に対しても結合剤でなかった（表４、５および６参照）。

リバースキメラのヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対する親和性を表４に示す。ＨＢＳ－ＥＰ＋中で実施した場合、両抗体に対する親和性は１桁のｎＭ（２．３３～５．３１ｎＭ）であった。酵素希釈バッファー中で実施した場合、親和性はより強く、２桁のｐＭ（４０～７０ｐＭ）であった。これらの結果は、表１に報告したヒト抗体の親和性と同等である。

ヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対するリバースキメラの親和性を表５に示す。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４に関して測定された親和性は３．５４ｎＭであった。１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４は、ヒトＴＬＬ２ ＣＤ＋ＣＵＢ１に結合しなかった。これらの結果は、表２に報告したヒト抗体の親和性と同等である。

マウスＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対するリバースキメラに対する親和性を表６に示す。親和性は１桁のｎＭの範囲（０．８２～６．２ｎＭ）である。これらの結果は、表３に報告したヒト抗体の親和性と同等である。

抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４とそのリバースキメラの両方は、ヒトＢＭＰ１ ＣＤ－ＣＵＢ１、マウスＢＭＰ１ ＣＤ－ＣＵＢ１およびヒトＴＬＬ２ ＣＤ－ＣＵＢ１に対して類似の親和性を有し、マウス前臨床有効性試験における１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の代替としてのリバースキメラ使用をさらに裏付けた。

表７は、総てのＣＤ＋ＣＵＢ１抗原に結合する、ＨＥＫ細胞で発現させた抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の総ての速度論および親和性データをまとめたものである。これはこの抗体がＨＢＳ－ＥＰ＋で実施した場合に総ての末端切断型ＣＤ＋ＣＵＢ１標的に対して１桁のｎＭの親和性を有し、酵素希釈バッファー中ではヒトＢＭＰ１ ＣＤ＋ＣＵＢ１に対するその親和性はより強い（４０ｐＭ）ことを示す。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による、ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗原の全長ヒトおよび相同分子種への抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の結合
１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４をＣＨＯ細胞で発現させ、総ての全長ＢＭＰ１抗原およびＴＬＬ抗原に対する結合に関してヒトおよび総ての相同分子種（カニクイザル、ラットおよびマウス）で試験した。このアッセイで使用したタンパク質は、上記の選択アッセイで使用した末端切断型抗原との比較として天然に存在するタンパク質の組換え型であった。結果は２つのバッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋およびＨＢＳ－Ｎ＋５ｍＭ ＣａＣｌ_２および１μＭ ＺｎＣｌ_２で得た。プロテインＡをアミンカップリングによりＣＭ５センサーチップに固定化し、プロテインＡ表面に抗体を捕捉させた。抗原を両バッファーで希釈し、捕捉された抗体上に様々な濃度で通過させた。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、組換えヒトＢＭＰ１と２３．６ｐＭの親和性で、ＴＬＬ１と８８０ｐＭの親和性で、ＴＬＬ２と４２７０ｐＭの親和性で結合した。高親和性結合は、酵素構造および機能におけるこれらの陽イオンの重要性と一致して、Ｚｎ^２＋およびＣａ^２＋の添加に依存する。

結果を表８に示す。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ標的会合効力
ＦＲＥＴに基づくアッセイを用いた、組換えヒトＢＭＰ－１－１、ヒトＴＬＬ－１、マウスＢＭＰ－１－３（７０７末端切断型）、マウスＴＬＬ－１、ラットＴＬＬ－１、ラットＴＬＬ－２およびカニクイザルＴＬＬ－１酵素に対する活性に関する１６の抗ＢＭＰ－１／ＴＬＬモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の哺乳動物発現リードパネルのスクリーニング
ＢＭＰ－１／ＴＬＬ酵素の活性は、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイを用いて検出した。生理学的タンパク質基質プロリシルオキシダーゼのＢＭＰ１／ＴＬＬ切断部位にわたるペプチド基質を２つの蛍光団、具体的にはドナーとクエンチャー（アクセプター）分子（以下、「プロリシルオキシダーゼＦＲＥＴペプチド」と呼ぶ）で標識した。ドナー蛍光団がその励起波長の光で励起されると、通常、分子がその基底状態に戻る際に一過性のより高波長の発光を生じる。しかし、ＦＲＥＴペプチドでは、アクセプター蛍光団が近接しているため、このエネルギーが蛍光シグナルの放出に対して移動し、蛍光が効果的に消光される。酵素（この場合、関連種のＢＭＰ－１、ＴＬＬ－１またはＴＬＬ－２）によってペプチド基質が切断されると、蛍光団が分離され、ドナー蛍光団からの蛍光の放出が可能になる。ＢＭＰ１／ＴＬＬ酵素を介したペプチドの分解の抗体の阻害を、ドナーの発光を測定することにより決定した。

抗体サンプルの連続希釈液を酵素希釈バッファーで調製した。抗体サンプルを酵素（酵素希釈バッファー）とともに穏やかに振盪しながらプレインキュベートした。このプレインキュベーションの後、プロリシルオキシダーゼＦＲＥＴペプチドを添加し、インキュベートした。インキュベーション後、ＥＤＴＡで酵素反応を停止させた。蛍光は、励起波長４８５ｎｍ、発光波長５３５ｎｍで測定した。

スクリーニングは、ＨＥＫ細胞で生産された１６の抗体のリードパネルで行った。ＩＣ_５０値を算出し、比較した（表９）。この初期スクリーニングにおいて、４Ｂ０６ファミリーは、０．０１ｎＭ～０．０９ｎＭのＩＣ_５０値でヒトＢＭＰ－１の効果的阻害を示し、これは試験した他のファミリーよりも一般的に低かった。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の初期のＩＣ_５０値は、総ての酵素で有効な阻害作用を示した：ｈｕＢＭＰ－１（ＩＣ_５０）、０．０３ｎＭ；ｈｕＴＬＬ－１、０．０２ｎＭ；ｈｕＴＬＬ－２、０．０３ｎＭ；ｍＴＬＬ－１、０．０６ｎＭ；ｃｙｎｏＴＬＬ１、０．０５ｎＭ。

３つの抗体：１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４、１３Ｙ０３９－８Ｆ０２－２９４９、および１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の特徴をさらに決定した。ｈｕＢＭＰ－１、ｍＢＭＰ－１、ｈｕＴＬＬ－１、ｈｕＴＬＬ－２、ｍＴＬＬ－１、ｒａｔＴＬＬ－１、ｒａｔＴＬＬ－２、ｃｙｎｏＴＬＬ－１およびｃｙｎｏＴＬＬ－２活性の阻害を調べるためにそれらを試験した。各酵素について全用量反応曲線をプロットし、各酵素の代表的なグラフを図１～９に示す（図１、ｈｕＢＭＰ－１；図２、ｍＢＭＰ－１；図３、ｈｕＴＬＬ－１；図４、ｈｕＴＬＬ－２；図５、ｍＴＬＬ－１；図６、ｒａｔＴＬＬ－１；図７、ｒａｔＴＬＬ－２；図８、ｃｙｎｏＴＬＬ－１；図９、ｃｙｎｏＴＬＬ－２）。

抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、試験した総ての酵素を阻害した。全試験のＩＣ_５０値を算出された平均および標準偏差とともに表１０に示す。各酵素の平均ＩＣ_５０値は、ｈｕＢＭＰ－１、０．０４ｎＭ；ｈｕＴＬＬ－１、０．０５ｎＭ；ｈｕＴＬＬ－２、０．０５ｎＭ；ｍＢＭＰ－１、０．０２ｎＭ；ｍＴＬＬ－１、０．２３ｎＭ；ｒａｔＴＬＬ－１、０．５０ｎＭ；ｒａｔＴＬＬ－２、０．６７ｎＭ；ｃｙｎｏＴＬＬ－１、０．１０ｎＭ；ｃｙｎｏＴＬＬ－２、０．３１ｎＭであった。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４をＨＥＫ細胞およびＣＨＯ細胞で発現させ、ＨＥＫおよびＣＨＯで発現させたタンパク質バッチによる組換えヒトＢＭＰ１、ヒトＴＬＬ１およびヒトＴＬＬ２活性の阻害を、一般に上記されるようにＦＲＥＴにより測定した。組換えヒトＢＭＰ１、ヒトＴＬＬ１、ヒトＴＬＬ２およびヒト血清に対してプロファイリングしたところ、ＨＥＫ２９３により発現させたタンパク質バッチとポリクローナルＣＨＯにより発現させたタンパク質バッチとで効力は同等であった（表１１）。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の生物学的有効性を前臨床齧歯類で試験するために、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の可変ドメインをマウスまたはラットＩｇＧ２ａ Ｆｃ障害型に融合させたリバースキメラを作製した。これらの構築物は、上記のようにプロリシルオキシダーゼＦＲＥＴペプチドを用いて、組換えヒトＢＭＰ１およびマウスＢＭＰ１、ならびにヒト血清、マウス血漿およびラット血漿に対する活性をプロファイリングした。

リバースキメラ抗体と抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、組換えヒトＢＭＰ１アッセイおよびマウスＢＭＰ１アッセイの両方で同様のｐＫｉ，ａｐｐ値を示し、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の代替としての前臨床効力試験での使用を裏付けた。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４およびリバースキメラ抗体について、ヒト血清およびマウスまたはラット血漿における活性が確認された（表１２）。

Ｆｃγ受容体、ＦｃＲＮおよびＣ１ｑへの結合
ｈＩｇＧ１ ＬＡＧＡ骨格上に１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４を含む抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体の、可溶性組換えＦｃγ受容体、ＦｃＲｎおよびＣ１ｑへの結合を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定した。

ＨＥＫにより発現させた抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４、ならびにＣＨＯにより発現させた抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４を、組換え可溶性ヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合に関して評価した。抗体を、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む陽性対照抗体（Ｆｉｘ Ｆｃ＋）およびＦｃ領域にＦｃγ受容体との相互作用を低減する２つの点変異（Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）を含む陰性対照抗体（Ｆｉｘ Ｆｃ－）に対して分析した。ＨＥＫにより発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、ＣＨＯにより発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４およびＨＥＫにより発現させた１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４の、ヒトＦｃγ受容体、マウスＦｃｙ受容体およびカニクイザルＦｃγ受容体への結合を、表面に捕捉されたＦｃγ受容体を用いるＳＰＲにより評価し、その受容体上に供試抗体を所望の濃度で流した。

Ｆｃ障害変異を有する場合に予想されるように、ｈＩｇＧ１ ＬＡＧＡ骨格を有する総ての抗体はヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａＨ、ＦｃγＲＩＩａＲ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａＶおよびＦｃγＲＩＩＩａＦ）、マウスＦｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ／ｂおよびＦｃγＲＩＶ）、またはカニクイザルＦｃγ受容体（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂおよびＦｃγＲＩＩＩ）と結合せず、従って、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発する可能性を小さくした。

ヒト、カニクイザルおよびマウス新生児型Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体の結合をＳＰＲにより評価した。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４およびヒトＩｇＧ１ ＷＴ対照Ｆｉｘ Ｆｃ＋を、組換え可溶性ヒトおよびカニクイザルＦｃＲｎへの結合に関して評価した。化合物Ａ（１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４、ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ）、化合物Ｂ（１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４、ｍＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ）、抗ＲＳＶマウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ、抗ＲＳＶラットＩｇＧ２ｂ ＬＡＧＡ、化合物Ｃ（１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４ラットＩｇＧ２ｂ ＬＡＧＡ）および化合物Ｄ（１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４ラットＩｇＧ２ｂ）を、組換え可溶性マウスＦｃＲｎへの結合に関して評価した。Ｆｉｘ Ｆｃ＋、ラットＩｇＧ２ｂ野生型対照およびマウスＩｇＧ２ａ対照（抗ＭＯＰＣ）を含めた。ヒトおよびカニクイザルＦｃＲｎをｈＩｇＧ１とともに試験し、マウスＦｃＲｎをラットＩｇＧ２ｂおよびｍＩｇＧ２ａとともに試験した。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４および１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４は、ｐＨ６ではヒトおよびカニクイザルＦｃＲｎとの結合を示したがｐＨ７．４では結合せず、このことはＬＡＧＡ変異がヒトまたはカニクイザルＦｃＲｎへの結合に影響を及ぼさないことを示す。ＣＨＯで発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４のヒトＦｃＲｎに対する相対的結合親和性は、ＩｇＧ１（Ｆｉｘ Ｆｃ＋）対照抗体のカニクイザルと同等であった。化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｄは、ｐＨ６ではマウスＦｃＲｎとの結合を示したが、ｐＨ７．４では結合しなかった。プロテインＡ表面への化合物Ｃの捕捉は極めて不安定であったので、表面上にはマウスＦｃＲｎとの結合を評価するには不十分な抗体があった。

ヒトＣ１ｑへの１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の結合は、対照として使用したＦｉｘ Ｆｃ＋およびＦｉｘ Ｆｃ－でＳＰＲにより評価した。抗体を希釈し、アミンカップリングによりセンサーチップに固定化した。ヒトＣ１ｑをＨＢＳ－Ｎ＋１０ｍＭ ＣａＣｌ_２で希釈し、固定化した構築物上に注入した。Ｆｉｘ Ｆｃ＋は、予想通りにＣ１ｑに結合し（ＫＤ＝３６．３ｎＭ）、Ｆｉｘ Ｆｃ－は、Ｆｃ障害抗体に関して予想されたようにＣ１ｑへの結合は示さなかった。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、Ｆｉｘ Ｆｃ＋対照抗体と同等の結合を示した（ＫＤ＝３６．３ｎＭ）。

ヒトＣ１ｑへの１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の結合は、ＥＬＩＳＡでも評価した。ヒトＣ１ｑタンパク質を抗体に添加し、抗Ｃ１ｑビオチン検出試薬およびストレプトアビジン－ＨＲＰを用いて結合を検出した。ＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢを用いて比色定量シグナルを検出し、比色定量反応を現像した後に４５０ｎｍで測定した。陽性対照試験ｍＡｂ（抗ＲＳＶ ＩｇＧ１）を予想通りに用量応答効果を示したが、陰性対照試験ｍＡｂ（抗ＲＳＶ ＬＡＧＡ）がＣ１ｑに対して示した結合は最小であり、これも予想通りであった。ＥＬＩＳＡにより、ＣＨＯにより発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４はｈＩｇＧ１ ＷＴ対照と同等の親和性でＣ１ｑに結合することが確認された。

ＨＥＫ細胞およびＣＨＯ細胞で発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、陽性結合対照抗体である、野生型Ｆｃを有する抗ＲＳＶ ＩｇＧ１よりも高いレベルでヒトＣ１ｑと結合する。図１０の各データ点は、反復１回のみのＣＨＯ細胞で発現させた１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４以外はｎ＝３の実験の代表的なものであるが、データは、この分子が他のＣＨＯ材料、およびその既知の結合活性のためにｎ＝２を代表する抗ＲＳＶ ＷＴと同等に挙動したことを示した。

これらの結果を合わせると、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の、ヒトＣ１ｑへの結合はなお見られるが、ヒトおよびカニクイザルＦｃγ受容体への結合に関して障害されたＦｃであることが実証される。Ｆｃ障害変異は、ヒトＦｃＲｎへの結合には影響を及ぼしていなかった。

ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞活性
１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４はまた、線維芽細胞に基づくコラーゲン形成アッセイ（「ｓｃａｒ－ｉｎ－ａ－ｊａｒ」、ＳＩＪ）において、ＢＭＰ１により触媒されるその天然基質プロコラーゲンＩの切断も阻害する。このアッセイでは、ヒト初代心臓線維芽細胞をフィコールで刺激すると、Ｉ型プロコラーゲンＣ末端ペプチド（ＰＩＣＰ）の放出により測定されるように、内因性ＢＭＰ１によるプロコラーゲンの形成および切断が誘導される。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、ＰＩＣＰ形成を用量依存的に阻害し、このことは、この抗体がこの内因性タンパク質基質の切断を遮断し、疾患関連細胞種における線維化機構の重要な要素を減弱することを示す。複数の試験にわたる、正常ヒト心臓線維芽細胞（ＮＨＣＦ）における１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の平均ｐＩＣ５０値は９．６（±０．２、ｎ＝３）であった。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４（化合物Ａ）のマウスリバースキメラは、ＳＩＪアッセイにおいて、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４で見られたものと同等の９．８（±０．６、ｎ＝２）のｐＩＣ５０で活性を示した。

ミオスタチン潜在型複合体切断アッセイ
抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体は、ミオスタチン潜在型複合体の切断におけるヒトＢＭＰ－１の阻害に関してプロファイリングした。組換えヒトＢＭＰ－１をある濃度範囲の抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体で前処理した後に、組換えヒトミオスタチン潜在型複合体に加えた。ＢＭＰ－１は単独でミオスタチン潜在型複合体を切断して活性ミオスタチンを放出し、これをＢＭＰ－１の活性を示すために測定した。ＢＭＰ－１を抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体とともにプレインキュベートすると、抗体濃度の増加とともにその総酵素活性が低下した。複合体から放出されたミオスタチンのレベルは、ミオスタチンホモ二量体の捕捉および検出のために抗ミオスタチン抗体を用い、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）アッセイで測定した。ミオスタチンレベルのＭＳＤ測定値を用いて抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体の阻害率％を算出した。

図１１のデータは、抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ抗体１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は用量応答様式でミオスタチン潜在型複合体のＢＭＰ１切断を阻害したことを示す。これらの結果から、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、ＢＭＰ－１がミオスタチン潜在型複合体を切断してミオスタチンを放出することを妨げるため、ＢＭＰ１の酵素活性を阻害することが確認される。

ｉｎ ｖｉｖｏ標的会合、薬力学的マーカー、抗線維化および同化活性
マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルにおける薬力学的マーカー
皮下浸透圧ポンプによりアンギオテンシン－ＩＩ（ＡｎｇＩＩ）およびフェニレフリン（ＰＥ）を投与されたマウスは、２週間の処置期間に心臓線維症を発症する（以下、ＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルと呼ぶ）。このＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルを用いて、ＢＭＰ１阻害および心臓線維症の薬力学的マーカーに対する、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の可変領域とマウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ Ｆｃドメインを組み合わせたリバースキメラ構築物である化合物Ａの効果を評価した。浸透圧ポンプ移植時に開始し、マウスに２週間週に１回投与を行った。抗ＲＳＶ（マウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ／マウスｃＫ）抗体およびＭＯＰＣ－２１（マウス可変領域および定常領域マウスＩｇＧ２ａ／マウスｃＫ）抗体を対照として用いた。１３Ｙ０３９－１５２Ｂ０２－１（「Ｂ０２」）は、マウスリバースキメラ（マウスＩｇＧ２ａ上のヒト可変領域／マウスｃＫ）ツール抗ＢＭＰ１／ＴＬＬ ｍＡｂであり、化合物Ｂは、別の抗体１３Ｙ０３９－３Ｅ０７－２９４４のマウスリバースキメラ（マウスＩｇＧ２ａ ＬＡＧＡ／マウスｃＫ）である。この試験で、化合物Ａ／Ｂ０２と化合物Ｂは両方とも、採取された血漿由来のｅｘ ｖｉｖｏ ＢＭＰ１活性を用量依存的に阻害した（図１２）。

ウエスタンブロットアッセイを用い、５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで処置したＡｎｇＩＩ／ＰＥマウスにおける循環Ｉ型プロコラーゲンＣ末端ペプチド（ＰＩＣＰ）レベルに有意な低下も検出された（図１３）。

マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルにおける化合物Ａのさらなる効果は、高レベルのＢＭＰ１阻害における骨格筋量の有意な増加である。ＡｎｇＩＩ／ＰＥ注入により、総体重に対して正規化した左腓腹筋重量が有意に減少した（６．２４±０．１０ｍｇ／ｇ対５．８９±０．０８ｍｇ／ｇ、ｐ＜０．０１、対応のないｔ検定）。０．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの両方の化合物Ａで処置すると、生理食塩水の浸透圧ポンプコントロールよりも大きいレベルまで筋肉量が回復した（図１４）。この所見に付随して、総（すなわち、遊離および結合）ミオスタチン種を検出する市販のＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定されるように、これらの動物の血漿中の総ミオスタチンの蓄積が見られた（図１５）。

循環ミオスタチンは、大部分が抑制性プロドメインフラグメントによって潜在型複合体ＭＳＴＮ－ＬＣに結合していることが示されている（マウスでは７０％超、残りは他の抑制性複合体；Ｈｉｌｌ，２００２）。ＢＭＰ１／ＴＬＬによってプロドメインが切断されると、活性型ミオスタチンが遊離し、負の成長因子としてシグナルを伝達する。従って、化合物Ａの投与による筋肉量と総血漿ミオスタチンレベルの増加は、ＢＭＰ１／ＴＬＬによるプロドメインの分解の低下と、その後の、そうでなければ骨格筋の局所組織部位における成熟ミオスタチンの放出に伴うであろう負の成長調節の緩和されることに起因する可能性がある。

マウスＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルにおけるマウスリバースキメラ（化合物Ａ）の抗線維化効果
マウスにＡｎｇＩＩ／ＰＥを２週間注入すると、液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）により測定されるような左心室ヒドロキシプロリン（ＨＤＸＰ）含量（図１６の最初の２本のバーを比較）により測定されるように、心臓組織におけるコラーゲン産生の著しい増加がもたらされる。

このモデルにおいて、化合物Ａで処置すると、ＡｎｇＩＩ／ＰＥ対照または用量が対応する抗ＲＳＶ ｍＡｂ対照のいずれかと比較して、統計的に有意なＨＤＸＰ量の減少（０．５ｍｇ／ｋｇで４７％、５ｍｇ／ｋｇで５８％）が認められた。しかし、この線維化バイオマーカーの減少にもかかわらず、組織病理学的分析による線維化の有意な変化は見られなかった。

Ｄａｈｌ塩感受性ラットモデルにおけるラットリバースキメラ（化合物Ｃ）の効果
Ｄａｈｌ塩感受性（Ｄａｈｌ Ｓ）ラット系統は、高塩分飼料（８％ ＮａＣｌ）を与えると、急速に高血圧を発症し、腎機能不全、高脂血症およびインスリン抵抗性などの合併症を伴う。これまでの研究で、この系統は心臓および腎臓の線維化も起こすことが示されている。

このモデルにおけるＢＭＰ１阻害の心臓抗線維化効果を評価するために、Ｄａｈｌ Ｓラットに４～５週齢まで０．３％ ＮａＣｌ餌（通常の塩分濃度）を与え、０日目に１％ ＮａＣｌ餌に、その後、７日目に８％ ＮａＣｌ餌に増やした。５ｍｇ／ｋｇの抗ＲＳＶ ｍＡｂ対照または５ｍｇ／ｋｇの化合物Ｃ（１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４のラットリバースキメラ、各群ｎ＝１２）を０日目から２８日目まで毎週皮下に投与し、ラットは３５日目に犠死させた。本試験では、終始０．３％飼料とビヒクルの注射を受けた対照群（ｎ＝１２）も含んだ。化合物Ｃと抗ＲＳＶ対照の両方について、ピーク時とトラフ時両方の曝露量は、ラット血漿アッセイ（表１２）のＩＣ９０値とＩＣ９５値、すなわち１，１８０と１１，８００ｎｇ／ｍＬの間で予想される目標範囲内であった。

試験終了時に、左心室の切片をマッソントリクロームで染色し、線維化領域を特定し、画像解析により定量した。８％ＮａＣｌ餌を与えたビヒクル注射ラットは、正常食塩対照と比較してＬＶ線維化の有意な増加（～２４％）を示し、モデル効果が示された。化合物Ｃで処置すると、ビヒクル処置対照と比較して、ＬＶ線維化の有意な減少（～８８％）がもたらされたが抗ＲＳＶ対照ｍＡｂではそうではなかった（図１７Ａ）。

このモデルにおけるＢＭＰ１阻害の筋効果を評価するため、試験の終了時に腓腹筋を単離し、秤量した。ＡｎｇＩＩ／ＰＥモデル（図１４）で観察されたように、抗ＢＭＰ１抗体による処置は、ビヒクルまたは対照動物と比較して、骨格筋量の有意な増加（例えば、ＰＢＳ＋８％ ＮａＣｌに対して９％）をもたらした（図１７Ｂ）。

マウス後肢固定モデルにおけるマウスリバースキメラ（化合物Ａ）の同化効果
骨格筋の成長と機能に対するＢＭＰ１阻害の効果を評価するために、リバースキメラ化合物Ａをマウス後肢固定モデルで試験した。固定後の筋肉の回復を調べる最初の試験では、老化マウス（雄、２２か月齢）に副木を装着して右後肢を２週間固定した。副木を外した後、マウスを３つの処置群のいずれかに入れ、（ｉ）抗ＲＳＶ対照ｍＡｂ、５ｍｇ／ｋｇ／週、ｓ．ｃ．；（ｉｉ））化合物Ａ、５ｍｇ／ｋｇ／週、ｓ．ｃ．；または（ｉｉｉ）抗ミオスタチンｍＡｂ（陽性対照）、３０ｍｇ／ｋｇ、２週間にわたって３回投与、ｓ．ｃ．（各群ｎ－１０）のいずれかを２週間投与した。定量的ＮＭＲ（ｑＮＭＲ）により測定される体組成、骨格筋機能および筋湿重を、この２週間の回復期間後に測定した。ＢＭＰ１阻害に関連する薬力学的マーカーは、血漿ＢＭＰ１活性の９２％の低下、血漿ＰＩＣＰの７７％の低下および総ミオスタチンレベルの７．９倍の増加を含む化合物Ａ処置群で総て有意な影響を示した。化合物Ａでの２週間の処置は、除脂肪量に５％程度の増加をもたらし、対照の抗ＲＳＶ ｍＡｂで見られたものよりも有意に大きかった（図１８）。

さらに、化合物Ａによる処置は、２週間の回復期間の終了時に測定したところ、対照肢と副木を装着した肢の両方で腓腹筋とヒラメ筋の湿重が増加していた。この増加は、対照処置マウスで見られたものよりも有意に大きかった（図１９）。

また、ＡｎｇＩＩ／ＰＥモデルでこれまでに示されていた筋肉量の増加の所見とともに、化合物Ａによる処置は、筋肉機能に有意な改善をもたらした。筋肉量の増加は力の増加に比例せず、力：筋肉重の比が低下し（図２０の右のパネル）、この現象は、以前に作出したミオスタチンノックアウトマウス系統で見られたものである（Ａｍｔｈｏｒ，２００７）。

本研究の結果は、化合物ＡによるＢＭＰ１／ＴＬＬの阻害は、老化マウスの廃用性萎縮からの回復において骨格筋の成長を促進するだけでなく、筋機能の改善ももたらすことが示される。これらの結果は、臨床状況における１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４によるＢＭＰ１／ＴＬＬの阻害が、線維化の進行に虚弱および骨格筋の喪失が伴う患者集団において有益であることを示唆している。

１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の薬物動態
Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎラットに単回投与および反復投与の両方を行った後に１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の薬物動態を決定した。

ラットにおける単回投与の薬物動態
Ｗｉｓｔａｒ Ｈａｎラット（ｎ＝３）において、公称用量１ｍｇ／ｋｇで単回静脈内（ボーラス）投与または単回皮下投与を行った後に、１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４の薬物動態を決定した。

１ｍｇ／ｋｇを単回静脈内または皮下投与した後の個々のおよび平均の薬物動態パラメーターを表１３に示す。１３Ｙ０３９－４Ｂ０６－４３３４は、顕著に速いクリアランスを示した動物１を除いて、約５日の平均終末半減期でゆっくりとクリアランスされる。平均分配体積は９４ｍＬ／ｋｇで血液量に近く、この抗体が主に全身循環に留まることが示唆された。

ラットにおける反復投与の薬物動態
１ｍｇ／ｋｇを毎週４週間皮下投与した後、３匹中２匹が予想曝露量（ＣｍａｘおよびＡＵＣ６－１６８）を維持した。蓄積のレベル（ＡＵＣ６－１６８で２．９倍の増加）は、半減期が５日のモノクローナル抗体としては予想通りであった（表１４）。３匹目に見られた曝露量の減少は、ＡＤＡ応答によるものである可能性があるが、これは確認できなかった。

実施形態
実施形態１は、
（ａ）（ｉ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７および２２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８および２２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
（ｂ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７または２２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８または２２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態２は、（ａ）（ｉ）のＣＤＲが、配列番号１のＣＤＲＬ１；配列番号２のＣＤＲＬ２；配列番号３のＣＤＲＬ３；配列番号４のＣＤＲＨ１；配列番号５のＣＤＲＨ２；および／または配列番号６のＣＤＲＨ３である、実施形態１のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態３は、
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ１；および／または
ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ２；および／または
ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＬＣＤＲ３；および／または
ＧＹＹＭＳ（配列番号４）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ１；および／または
ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ２；および／または
ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＨＣＤＲ３
のうち１以上を含んでなる実施形態１または２のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態４は、ＧＹＹＭＳ（配列番号４）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ１；ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ２；および／またはＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域を含んでなる、実施形態１～３のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態５は、ＧＹＹＭＳ（配列番号４）の配列を含んでなるＣＤＲ１、ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）の配列を含んでなるＣＤＲ２および／またはＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域を含んでなる、実施形態１～４のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態６は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ１；ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ２；および／またはＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域を含んでなる、実施形態１～５のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態７は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）の配列を含んでなるＣＤＲ１；ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）の配列を含んでなるＣＤＲ２；および／またはＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域を含んでなる、実施形態１～６のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態８は、ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）の配列を含んでなるＬＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）の配列を含んでなるＬＣＤＲ２；ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）の配列を含んでなるＬＣＤＲ３；ＧＹＹＭＳ（配列番号４）の配列を含んでなるＨＣＤＲ１；ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）の配列を含んでなるＨＣＤＲ２；および／またはＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）の配列を含んでなるＨＣＤＲ３を含んでなる、実施形態１～７のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態９は、６つのＣＤＲの総てがＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質中に存在する、実施形態１～８のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１０は、以下の６つのＣＤＲ：
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）のＬＣＤＲ１；
ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）のＬＣＤＲ２；
ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）のＬＣＤＲ３；
ＧＹＹＭＳ（配列番号４）のＨＣＤＲ１；
ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２；および
ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）のＨＣＤＲ３
を含んでなるＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１１は、配列番号７と８０％同一であるＶＨ領域および／または配列番号８と８０％同一であるＶＬ領域を含んでなる、実施形態１０のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１２は、配列番号７と１００％同一であるＶＨ領域および／または配列番号８と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなる、実施形態１０または１１のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１３は、配列番号１０と８０％同一である重鎖（ＨＣ）配列；および／または配列番号９と８０％同一である軽鎖（ＬＣ）配列を含んでなる、実施形態１０～１２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１４は、配列番号１０と１００％同一である重鎖（ＨＣ）配列；および／または配列番号９と１００％同一である軽鎖（ＬＣ）配列を含んでなる、実施形態１０～１３のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１５は、配列番号７と１００％同一であるＶＨ領域および配列番号８と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなるＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１６は、配列番号９と１００％同一である軽鎖および配列番号１０と１００％同一である重鎖を含んでなる、実施形態１５のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態１７は、実施形態１～１６のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列である。

実施形態１８は、重鎖をコードする配列番号１３および／または軽鎖をコードする配列番号１４を含んでなる、実施形態１７のポリヌクレオチド配列である。

実施形態１９は、実施形態１７または１８に定義されるポリヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクターである。

実施形態２０は、実施形態１７もしくは１８に定義されるポリヌクレオチド配列、または実施形態１９に定義される発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞である。

実施形態２１は、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を生産する方法であって、実施形態２０の組換え宿主細胞を前記ポリヌクレオチド配列または発現ベクターの発現に好適な条件下で培養し、それによりＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を含んでなるポリペプチドを生産することを含んでなる、方法である。

実施形態２２は、実施形態２１の方法によって生産されるＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質である。

実施形態２３は、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質と、薬学上許容可能な希釈剤または担体とを含んでなる医薬組成物である。

実施形態２４は、実施形態１５または１６のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を含んでなる、実施形態２３の医薬組成物である。

実施形態２５は、それを必要とする対象における線維化関連の疾患または障害の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法である。

実施形態２６は、前記対象がヒトである、実施形態２５の方法である。

実施形態２７は、療法において使用するための、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物である。

実施形態２８は、線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物である。

実施形態２９は、線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための医薬の製造における、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物の使用である。

実施形態３０は、線維化関連の疾患または障害が心臓線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、腹膜線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、実施形態２５、２６および２９のいずれかの方法または使用である。

実施形態３１は、心臓線維症が肥大型心筋症であり、肺線維症が特発性肺線維症である、実施形態３０の方法または使用である。

実施形態３２は、それを必要とする対象における、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法である。

実施形態３３は、前記対象がヒトである、実施形態３２の方法である。

実施形態３４は、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善に使用するための、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物である。

実施形態３５は、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための医薬の製造における、実施形態１～１６または２２のいずれかのＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは実施形態２３または２４の医薬組成物の使用である。

配列表

Claims (29)

1. （ａ）（ｉ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７および２２２中のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８および２２１中のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３から選択されるＣＤＲのいずれか１つまたは組合せ；または（ｉｉ）１、２または３つのアミノ酸改変を有する（ｉ）のＣＤＲバリアント；あるいは
   （ｂ）配列番号７、２２、４０、５４、６７、８２、９６、１１０、１２４、１３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０７または２２２の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＨ領域、および／または、配列番号８、２１、３９、５３、６８、８１、９５、１０９、１２３、１３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０８または２２１の配列と少なくとも８０％同一である配列を含んでなるＶＬ領域
   を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
2. （ａ）（ｉ）のＣＤＲが、配列番号１のＣＤＲＬ１；配列番号２のＣＤＲＬ２；配列番号３のＣＤＲＬ３；配列番号４のＣＤＲＨ１；配列番号５のＣＤＲＨ２；および／または配列番号６のＣＤＲＨ３である、請求項１に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
3. ＧＹＹＭＳ（配列番号４）の配列を含んでなるＣＤＲ１、ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）の配列を含んでなるＣＤＲ２および／またはＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＨ領域を含んでなる、請求項１または２に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
4. ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）の配列を含んでなるＣＤＲ１；ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）の配列を含んでなるＣＤＲ２；および／またはＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）の配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなるＶＬ領域を含んでなる、請求項１～３のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
5. ６つのＣＤＲの総てが、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質中に存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
6. 以下の６つのＣＤＲ：
   ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１）のＬＣＤＲ１；
   ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２）のＬＣＤＲ２；
   ＱＱＳＤＳＷＰＰＴ（配列番号３）のＬＣＤＲ３；
   ＧＹＹＭＳ（配列番号４）のＨＣＤＲ１；
   ＷＩＮＰＬＳＧＥＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５）のＨＣＤＲ２；および
   ＤＴＧＥＬＤＧＭＮＷＹＦＤＬ（配列番号６）のＨＣＤＲ３
   を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
7. 配列番号７と８０％同一であるＶＨ領域および／または配列番号８と８０％同一であるＶＬ領域を含んでなる、請求項６に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
8. 配列番号７と１００％同一であるＶＨ領域および／または配列番号８と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなる、請求項６または７に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
9. 配列番号１０と少なくとも８０％同一である重鎖（ＨＣ）配列；および／または配列番号９と少なくとも８０％同一である軽鎖（ＬＣ）配列を含んでなる、請求項６～８のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
10. 配列番号１０と１００％同一である重鎖（ＨＣ）配列；および／または配列番号９と１００％同一である軽鎖（ＬＣ）配列を含んでなる、請求項６～９のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
11. 配列番号７と１００％同一であるＶＨ領域および配列番号８と１００％同一であるＶＬ領域を含んでなる、ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
12. 配列番号９と１００％同一である軽鎖および配列番号１０と１００％同一である重鎖を含んでなる、請求項１１に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質。
13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列。
14. 重鎖をコードする配列番号１３および／または軽鎖をコードする配列番号１４を含んでなる、請求項１３に記載のポリヌクレオチド配列。
15. 請求項１３または１４に記載のポリヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクター。
16. 請求項１３もしくは１４に記載のポリヌクレオチド配列、または請求項１５に記載の発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
17. ＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を生産する方法であって、請求項１６に記載の組換え宿主細胞を前記ポリヌクレオチド配列または発現ベクターの発現に好適な条件下で培養し、それによりＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質を含んでなるポリペプチドを生産することを含んでなる、方法。
18. 請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質と、薬学上許容可能な希釈剤または担体とを含んでなる、医薬組成物。
19. それを必要とする対象における線維化関連の疾患または障害の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
20. 前記対象がヒトである、請求項１９に記載の方法。
21. 療法において使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物。
22. 線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物。
23. 線維化関連の疾患または障害の治療において使用するための医薬の製造における、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物の使用。
24. 前記線維化関連の疾患または障害が、心臓線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、腹膜線維症または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１９、２０および２３のいずれか一項に記載の方法または使用。
25. 前記心臓線維症が肥大型心筋症であり、前記肺線維症が特発性肺線維症である、請求項２４に記載の方法または使用。
26. それを必要とする対象における、筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、方法。
27. 前記対象がヒトである、請求項２６に記載の方法。
28. 筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物。
29. 筋肉成長の促進および／または筋肉機能の改善のための医薬の製造における、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＢＭＰ１、ＴＬＬ１および／またはＴＬＬ２に結合するタンパク質あるいは請求項１８に記載の医薬組成物の使用。