JP2023532681A - 改善された治療濃度域を有するサポニン誘導体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、トリテルペンアグリコンと第１の糖鎖及び／又は第２の糖鎖とを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造と；及び／又は第１の糖鎖であって、誘導体化されているカルボキシル基を含む第１の糖鎖と；及び／又は第２の糖鎖であって、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ基を含む第２の糖鎖とを含むサポニン誘導体に関する。本発明はまた、本発明のサポニン誘導体を含む第１の医薬組成物に関する。加えて、本発明は、本発明の第１の医薬組成物と、抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含む第２の医薬組成物とを含む医薬組み合わせ剤に関する。本発明はまた、医薬としての使用のため、又は癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、本発明の第１の医薬組成物又は医薬組み合わせ剤にも関する。更に、本発明は、分子を細胞の外側から上記細胞内へ移行させるための、インビトロ又はエクスビボの方法であって、上記細胞を分子及び本発明のサポニン誘導体と接触させることを含む、方法に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、トリテルペンアグリコンと第１の糖鎖及び／又は第２の糖鎖とを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造と；及び／又は第１の糖鎖であって、誘導体化されているカルボキシル基を含む第１の糖鎖と；及び／又は第２の糖鎖であって、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ基を含む第２の糖鎖とを含むサポニン誘導体に関する。本発明はまた、本発明のサポニン誘導体を含む第１の医薬組成物に関する。加えて、本発明は、本発明の第１の医薬組成物と、抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含む第２の医薬組成物とを含む医薬組み合わせ剤に関する。本発明はまた、医薬としての使用のため、又は癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、本発明の第１の医薬組成物又は医薬組み合わせ剤にも関する。更に、本発明は、分子を細胞の外側から上記細胞内へ移行させるための、インビトロ又はエクスビボの方法であって、上記細胞を分子及び本発明のサポニン誘導体と接触させることを含む、方法に関する。
標的化腫瘍療法は、癌細胞の増殖及び生存に関与する特定の遺伝子及びタンパク質を標的とするための薬物を使用する、癌療法である。免疫毒素は、標的化部分として抗体を含有する標的化された毒素であって、腫瘍特異抗原に対する抗体の特異性を併せもち、それにより目的とする作用点に毒素を向かわせることを可能にし、抗体依存性細胞介在性の細胞毒性及び補体依存性の細胞毒性などの細胞殺傷機構を付加的に導入し得ることから、非常に有望である。この効果を示すためには、毒素が、インターナリゼーション後にサイトゾル中へ放出される必要がある。主な欠点は、ペイロードを担持する標的部分が充分にインターナライズされないことが多く、インターナリゼーション後に表面へ直接リサイクルされるか、又はリソソーム内で分解され、それにより細胞サイトゾル内へのペイロードの充分な送達が妨げられることである。腫瘍細胞のための毒性ペイロード濃度を確保するため、及び不充分なサイトゾル進入を克服するためには、高い血清レベルの標的化毒素が必要であり、特に免疫原性及び血管漏出症候群を含む重い副作用を引き起こすことがよくある。したがって、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を用いて癌患者を治療する場合、充分に広い治療濃度域がなお重要である。
不充分なサイトゾル進入という欠点に対処するため、例えば、生合成経路の内在性細胞膜輸送複合体への毒素の方向転換、エンドソームの崩壊、エンドソーム膜の膜統合性の減衰、又は細胞透過性ペプチドの使用に関連して、いくつかの戦略が開発された。
例えば、サポニンなどのグリコシル化されたトリテルペンは、腫瘍療法において、標的化された毒素のためのエンドソーム脱出促進剤、例えばリボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）として作用することが見出された。サポニンの構造－活性関係の分析により、以下のコア構造要素の存在が、ＲＩＰの細胞毒性を強化するサポニンの能力にとり有益であるように見えることが明らかとなった（式（Ｉ）参照、Ｘ１＝Ｈ又はＯＨ、及びＸ２＝多糖部分）：
－ グルクロン酸を含有する、Ｃ－３における分枝型三糖
－ Ｃ－４におけるアルデヒド
－ Ｃ－２８におけるカルボキシ基
－ アセチル基を含有する少なくとも４つの糖部分のＣ－２８位に連結した多糖部分（Ｒ２）。
Figure 2023532681000002
特に、トリテルペノイドサポニンである、ＳＯ１８６１（式ＩＩ、ＳＰＴ００１とも称されることもある）は、腫瘍細胞標的化毒素のエンドソーム脱出を促進するための強力な分子として同定された。促進剤の機構については、二重効果が仮定され：第１に、エンドソーム脱出の直接的な増加が、結果としてカスパーゼ依存的なアポトーシスを生じ、それが、第２に、リソソーム媒介性の細胞死経路と組み合わされ、これらは、リソソーム膜の破壊に続くカテプシン及び他の加水分解酵素の放出の後にトリガーされる。
Figure 2023532681000003
エンドソーム脱出促進剤としてのサポニンの適用は、これらのサポニンが赤血球膜を破裂する能力を有するという認識に基づく。しかしながら、まさに同時に、サポニンの細胞破裂活性は、このようなサポニンを用いて患者が治療される場合、副作用（のリスク）に寄与し、それにより治療指数の制限の観点からの最適治療濃度域に影響を及ぼす。実際、このようなサポニンの毒性は、細胞外的及び／又は細胞内的に、抗腫瘍療法を必要とする患者に投与される際の、例えば最適の投与レジメン並びに投与の経路及び頻度が考慮される場合の関心ごとである。
トリテルペン主鎖、五環性Ｃ３０テルペン骨格（サポゲニン又はアグリコンとしても知られる）の構造、糖側鎖の数及び長さ、並びに主鎖に連結された糖残基のタイプ及び結合バリアントを含めて、サポニン自体の化学的組成の全ての特徴が、このようなサポニンの溶血指数及び／又は細胞毒性に寄与する。
サポニンは、細胞のエンドソーム及びサイトゾルが考慮される場合に、それ自体に標的特異性はなく、またサポニンは、同じ投与経路が考えられる場合であっても、予想通りに及びほとんどの場合、標的化毒素以外のカイネティクスで（ヒト）患者内に分布する。したがって、その必要がある患者に、例えばＡＤＣとサポニンとを含む治療的組み合わせ剤を適用した後、サポニン分子は任意の臓器中に見られ、特異性は標的化毒素によってのみ媒介されることが暗示される。サポニンの全身的分布には、標的細胞における特異的な蓄積と比較した場合、より高い濃度が好首尾の治療に必要である。したがって、好適な治療濃度域を達成するためには、修飾されたサポニンの毒性を、身体におけるサポニンの全身的適用の観点から、好首尾の適用のために充分に低くする必要がある。
キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニンは、更に、国際公開第２００４／０９２３２９号パンフレット及び同第９３／０５７８９号パンフレットから公知である。サポニンの合成類似体は、とりわけ、国際公開第２０１５／１８４４５１号パンフレットから公知である。
したがって、例えばＡＤＣと一緒の、サポニンの同時投与が考慮される場合、治療指数を改善することがなお必要であり：ＡＤＣの細胞毒性効果の増強が考慮される場合、サポニンの細胞毒性をより良く制御（又はより良く：より低く）することと共に、同時に充分な効能を維持するために必要である。
驚くべきことに、本発明者らは、修飾サポニン、すなわち、
－ サポニンのアグリコンのＣ－３において結合され、修飾グルクロン酸を含有する、分枝型三糖部分；及び／又は
－ サポニンのアグリコンのＣ－４における修飾されたアルデヒド；及び／又は
－ サポニンのアグリコンのＣ－２８位において結合された多糖部分であり、上記多糖部分中に修飾されたアセトキシ基を含有する、多糖部分；
を有するサポニン誘導体が、サポニン誘導体と接触された細胞の細胞生存率が考慮される場合に低減された毒性を有し、例えば毒素の細胞毒性又はＢＮＡ介在性遺伝子サイレンシングの増強が考慮される場合に（いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが、修飾サポニンの同様の又は改善されたエンドソーム脱出促進活性に関連して）活性を有し、及び／又は非修飾サポニンの毒性、活性、及び溶血活性と比較した場合に低減された溶血活性を有することを見出した。それにより本発明者らは、細胞毒性と例えば毒素増強若しくは遺伝子サイレンシングとのＩＣ５０値間の比率が増加することから、及び／又はサポニン溶血活性と例えば毒素増強若しくは遺伝子サイレンシングとのＩＣ５０値間の比率が増加することから、改善された治療濃度域を有するサポニン誘導体を提供する。
本発明の第１の態様は、トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、好ましくは誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択される、サポニン誘導体に関する。
一実施形態は、サポニン誘導体のベースとなる上記サポニンが
－ Ｃ－４にアルデヒド基を含む上記アグリコンコア構造；
－ カルボキシル基、好ましくは、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む第１の糖鎖；及び
－ 少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む第２の糖鎖
のうちの少なくとも１つを更に含む、本発明によるサポニン誘導体である。
特定の実施形態では、サポニン誘導体のベースとなるサポニンは、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）（ＱＳ）サポニンではなく、及び／又はＱｕｉｌ－Ａのサポニンではない。より特定の実施形態では、サポニン誘導体は、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏ、及びＱｕｉｌ－Ａのいずれもベースとしない。
一実施形態は、サポニンが天然サポニンである、本発明によるサポニン誘導体である。
本発明の一態様は、トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、上記サポニンが、
Ｃ－４にアルデヒド基を含む上記アグリコンコア構造；カルボキシル基、好ましくは、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む第１の糖鎖；及び少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む第２の糖鎖
のうちの少なくとも１つを更に含み、
サポニンが、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）（ＱＳ）サポニンではなく、及び／又はＱｕｉｌ－Ａのサポニンではなく；
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、好ましくは誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせ、より好ましくは１つの誘導体化ｉ．ｉｉ．若しくはｉｉｉを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択される、サポニン誘導体に関する。
一実施形態は、サポニンが天然サポニンである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（Ｉ）～（Ｖ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000004
Figure 2023532681000005
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＶＩ）～（ＸＸＸＩＶ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000006
Figure 2023532681000007
Figure 2023532681000008
Figure 2023532681000009
Figure 2023532681000010
Figure 2023532681000011
Figure 2023532681000012
Figure 2023532681000013
Figure 2023532681000014
Figure 2023532681000015
Figure 2023532681000016
Figure 2023532681000017
Figure 2023532681000018
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＸＸＸＶ）～（ＸＸＸＩＸ）を有する合成サポニン：
Figure 2023532681000019
Figure 2023532681000020
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＸＬ）～（ＸＬＶ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000021
Figure 2023532681000022
Figure 2023532681000023
Figure 2023532681000024
Figure 2023532681000025
Figure 2023532681000026
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、モノデスモサイドトリテルペングリコシド又はビデスモサイド（ｂｉｄｅｓｍｏｓｉｄｉｃ）トリテルペングリコシド、より好ましくはビデスモサイドトリテルペングリコシドである、本発明によるサポニン誘導体である。
本発明の第２の態様は、本発明によるサポニン誘導体と、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤とを含む、第１の医薬組成物に関する。
本発明の第３の態様は、医薬組み合わせ剤であって、
・本発明の第１の医薬組成物と、
・抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第２の医薬組成物と
を含む医薬組み合わせ剤に関する。
本発明の第４の態様は、第３の医薬組成物であって、本発明のサポニン誘導体を含み、抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－核酸コンジュゲート、又は受容体－リガンド－核酸コンジュゲートのうちの任意の１つ以上を更に含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第３の医薬組成物に関する。
本発明の第５の態様は、医薬としての使用のための、本発明の第１の医薬組成物、本発明の医薬組み合わせ剤、又は本発明の第３の医薬組成物に関する。
本発明の第６の態様は、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、本発明の第１の医薬組成物、本発明の医薬組み合わせ剤、又は本発明の第３の医薬組成物に関する。
本発明の第７の態様は、分子を細胞の外側から上記細胞の内側へ、好ましくは上記細胞のサイトゾル中へ移行させるための、インビトロ又はエクスビボの方法であって：
ａ）細胞を提供する工程と；
ｂ）工程ａ）において提供された細胞内へ、細胞の外側から移行させるための分子を提供する工程と；
ｃ）本発明によるサポニン誘導体を提供する工程と；
ｄ）工程ａ）の細胞を、インビトロ又はエクスビボにおいて、工程ｂ）の分子及び工程ｃ）のサポニン誘導体と接触させ、それにより分子の細胞の外側から上記細胞内への移行を確立させる工程と
を含む、方法に関する。
定義
用語「サポニン」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、サポゲニンである親油性のアグリコンコアと結合した、１つ以上の親水性グリコン部分を含む、一群の両親媒性グリコシドを指す。サポニンは、天然でもよく、又は合成（すなわち、非天然）であってもよい。用語「サポニン」は、天然サポニン、天然サポニンの誘導体、並びに化学的及び／又はバイオテクノロジー的な合成経路を介しデノボで合成されたサポニンを包含する。
用語「修飾サポニン」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、修飾サポニンの提供のための化学修飾に供される前の非誘導体化サポニンにおいて、アルデヒド基、カルボキシル基、アセテート基、及び／又はアセチル基のいずれかが既に存在した位置において、１つ以上の化学修飾を有するサポニン、すなわちサポニン誘導体を指す。例えば、修飾サポニンは、修飾サポニンがベースとするサポニンにおける、アルデヒド基、カルボキシル基、アセテート基、及び／又はアセチル基のうちの任意の１つ以上の化学修飾により提供され、すなわち、サポニンが提供され、そしてアルデヒド基、カルボキシル基、アセテート基、及び／又はアセチル基のいずれかが化学修飾され、それにより修飾サポニンが提供される。例えば、修飾サポニンの提供のために修飾されるサポニンは、天然サポニンである。典型的には、修飾サポニンは合成サポニンであり、典型的には修飾サポニンは天然サポニンの修飾物であり、したがって天然サポニンに由来するが、しかし修飾サポニンが天然の対応物を有し得るか又は有し得ない合成サポニンに由来することも可能ではある。典型的には、修飾サポニンは、天然の対応物を有さない、すなわち修飾サポニンは、例えば草又は樹木によって自然に生成されることはない。
用語「半合成サポニン誘導体」は、通常の科学的意味を有し、本明細書では、自然界に見られるサポニンの合成修飾を指す。したがって、ＱＳ－７、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、及びＱＳ－２１などの天然サポニン自体、又はキラヤ・サポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎ）の木の樹皮から単離されるはＱｕｉｌ－Ａは、用語「半合成サポニン誘導体」には包含されない。半合成サポニン誘導体は、単離され、化学変換を受けた、単離された天然サポニンとして解釈されるべきである。結果として、実験室規模又は工業規模で行われる生体内変換又は酵素的変換を受ける天然サポニンも、「半合成サポニン誘導体」という用語に含まれる。このような半合成サポニン誘導体の例は、脱アシル化サポニン（脱アシルサポニン又は脱アシル化サポニンとしても知られる）であり、アルカリ加水分解により、それ自体がトリテルペンの２８位に結合しているオリゴ糖残基からアシル基又はアシルオイル基を除去するように修飾されている。
用語「合成サポニン誘導体」は、通常の科学的意味を有し、本明細書では、化学的及び／又は生物工学的合成経路を介して、例えば、合成アグリコンコア構造中間体を炭水化物置換基又は糖部分若しくは糖鎖などの置換基に結合することにより、サポニンをデノボで合成することを指す。
用語「アグリコンコア構造」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、それに結合された１つ若しくは２つの炭水化物アンテナ又は糖鎖（グリカン）を有さない、サポニンのアグリコンコアを指す。例えば、キラ酸は、ＳＯ１８６１、ＱＳ－７、及びＱＳ２１のアグリコンコア構造である。典型的には、サポニンのグリカンは、単糖又はオリゴ糖、例えば直鎖又は分枝グリカンである。
用語「ＱＳ２１」又は「ＱＳ－２１」は、更に特定しない限り、図４１に示された構造式を有する、ＱＳ２１の異性体のうちの任意の１つ、並びに図４１に示された全ての異性体などの、２つ以上の混合物を指す。当業者には理解されるように、ＱＳ２１を含む典型的な天然の抽出物は、ＱＳ２１の様々な異性体の混合物を含むであろう。
用語「糖鎖」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、グリカン、炭水化物アンテナ、単一の糖部分（単糖）、又は複数の糖部分を含む鎖（オリゴ糖、多糖）のいずれかを指す。糖鎖は、糖部分のみで構成されてもよく、又はまた４Ｅ－メトキシケイ皮酸、４Ｚ－メトキシケイ皮酸、及び、例えばＱＳ－２１中に存在するような、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸のうちの任意の１つなどの、更なる部分を含んでもよい。
用語「化学的に修飾された」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、第２の化学基又は第２の化学的部分を提供するようにする、第１の化学基又は第１の化学的部分の化学修飾を指す。例は、カルボニル基の－（Ｈ）Ｃ－ＯＨ基への化学修飾、アセテート基のヒドロキシル基への化学修飾、そのアルデヒド基において化学反応によってＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）部分とコンジュゲートされたサポニンの提供などである。
用語「化学修飾されたアルデヒド基」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、サポニンのアルデヒド基が関与する、結果として新たな化学基による最初のアルデヒド基の置換を生じる化学反応によって得られた、化学反応生成物を指す。例えば、サポニンの最初のアルデヒド基からの、－（Ｈ）Ｃ－ＯＨ基の形成がある。
用語「化学修飾されたカルボキシル基」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、サポニンのカルボキシル基、例えばグルクロン酸部分のカルボキシル基と、更なる分子とが関与する、結果として新たな化学基による最初のカルボキシル基の置換を生じる化学反応によって得られた化学反応生成物を指す。例えば、サポニンのグルクロン酸のカルボキシル基が関与する、サポニンと、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）、Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）、又は１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）のうちの任意の１つとの間のコンジュゲートの形成がある。
糖鎖の名称という文脈における用語「Ａｐｉ／Ｘｙｌ－」又は「Ａｐｉ－又はＸｙｌ－」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、アピオース（Ａｐｉ）部分を含むか、又はキシロース（Ｘｙｌ）部分を含む、いずれかの糖鎖を指す。
用語「修飾サポニンがベースとするサポニン」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、修飾サポニンを提供する目的で修飾されているサポニンを指す。典型的には、修飾サポニンがベースとするサポニンは、天然サポニンであり、これが修飾サポニンの提供のための化学修飾に供される。
用語「サポニンをベースとする修飾サポニン」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、修飾サポニンが提供されるようにする化学修飾工程に供されているサポニンを指し、これにおいて、修飾サポニンがそれから調製されたサポニンは、典型的には天然サポニンである。
用語「オリゴヌクレオチド」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、中でも、ＤＮＡ、修飾ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、修飾ＲＮＡ、単鎖分子又は二本鎖分子として提供された、ＢＮＡなどの合成核酸、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ、ＡＯＮ）、短又は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；サイレンシングＲＮＡ）、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどを含む、任意の天然又は合成された一連の核酸を指す。
用語「抗体－薬物コンジュゲート」又は「ＡＤＣ」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、抗体、例えばＩｇＧ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、１つ又は複数のＶＨドメイン、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、ラクダ類のＶＨなどと、ヒト患者などの患者の細胞と接触された場合に治療効果を及ぼし得る任意の分子、例えば、医薬品有効成分、毒素、オリゴヌクレオチド、酵素、低分子薬剤化合物などとの、任意のコンジュゲートを指す。
用語「抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート」又は「ＡＯＣ」は、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、抗体、例えばＩｇＧ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、免疫グロブリン、免疫グロブリンフラグメント、１つ又は複数のＶＨドメイン、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、ラクダ類のＶＨなどと、ヒト患者などの患者の細胞と接触された場合に治療効果を及ぼし得る任意のオリゴヌクレオチド分子、例えば、ＤＮＡ、修飾ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、修飾ＲＮＡ、単鎖分子又は二本鎖分子として提供された、ＢＮＡなどの合成核酸、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、短又は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；サイレンシングＲＮＡ）、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡなどを包含する、核酸の天然又は合成された一連の核酸から選択されるオリゴヌクレオチドとの、任意のコンジュゲートを指す。
用語「エフェクター分子」又は「エフェクター部分」は、例えば、共有コンジュゲートの部分としてのエフェクター分子について言及する場合、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、標的分子：タンパク質、ペプチド、炭水化物、グリカンなどの糖、（リン）脂質、核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、酵素、の任意の１つ以上に選択的に結合することができ、このような１つ以上の標的分子の生物活性を調節する分子を指す。エフェクター分子は、例えば、薬物分子などの低分子、タンパク質毒素などの毒素、ＢＮＡなどのオリゴヌクレオチド、ゼノ核酸若しくはｓｉＲＮＡ、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせのうちの任意の１つ以上から選択される分子である。したがって、例えば、エフェクター分子又はエフェクター部分は、標的分子：タンパク質、ペプチド、炭水化物、グリカンなどの糖、（リン）脂質、核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、酵素のうちの任意の１つ以上に選択的に結合することができ、及び標的分子への結合に際し、このような１つ以上の標的分子の生物活性を調節する、薬物分子などの低分子、タンパク質毒素などの毒素、ＢＮＡなどのオリゴヌクレオチド、ゼノ核酸若しくはｓｉＲＮＡ、酵素、ペプチド、タンパク質、又はそれらの任意の組み合わせのうちの任意の１つ以上から選択される分子又は部分である。典型的には、エフェクター分子は、細胞、例えば哺乳類細胞、例えばヒト細胞の内側において、例えば上記細胞のサイトゾル中で、生物学的効果を及ぼすことができる。したがって、典型的なエフェクター分子は、薬物分子、プラスミドＤＮＡ、毒素、例えば抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）によって含まれる毒素、オリゴヌクレオチド、例えばｓｉＲＮＡ、ＢＮＡ、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート（ＡＯＣ）によって含まれる核酸である。例えば、エフェクター分子は、（細胞内）酵素活性、遺伝子発現、若しくは細胞シグナリングを増加又は減少させ得るリガンドとして、作用し得る分子である。
用語「ＨＳＰ２７」は、細胞におけるＨＳＰ２７の発現をサイレンシングするＢＮＡ分子に関する。
用語「架橋型核酸」又は手短に言えば「ＢＮＡ」は、「ロック核酸」若しくは手短に言えば「ＬＮＡ」又は２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノエチレン若しくは２’－Ｏ，４’－Ｃ－アミノメチレン架橋型核酸（ＢＮＡＮＣ）を指し、その通常の科学的意味を有し、本明細書では、修飾されたＲＮＡヌクレオチドを指す。ＢＮＡは、また、「束縛されたＲＮＡ分子」又は「アクセス不能ＲＮＡ分子」とも称される。ＢＮＡモノマーは、「固定された」Ｃ３’－ｅｎｄｏ糖パッカリングを有する、五員、六員、又は更には七員の架橋構造を含有し得る。架橋は、リボースの２’，４’－位置において合成的に取込まれ、２’，４’－ＢＮＡモノマーを生じる。ＢＮＡモノマーは、当該技術分野において公知の標準的なホスホロアミダイト化学を用いて、オリゴヌクレオチドポリマー構造内に取込まれ得る。ＢＮＡは、結合親和性及び安定性が増加した、構造的に堅いオリゴヌクレオチドである。
用語「Ｃ－４におけるアルデヒド」又は「サポニンのアグリコンのＣ－４における修飾されたアルデヒド」は、サポニンのアグリコンに対するアルデヒド基又はアルデヒド基に由来する修飾基の位置を特定するために使用され、分子１から見ることができる。典型的には、キラ酸アグリコンコア及びギプソゲニンアグリコンコアは、Ｃ－４に結合したアルデヒド基を有する。同時に、上記アルデヒド基の同じ位置は、分子１からも分かるように、キラ酸又はジプソゲニンのＣ２３位にあると定義することもできる。したがって、アルデヒド基の位置の２つの定義は両方とも使用することができる。
本明細書及び特許請求の範囲における用語、第１、第２、第３などは、例えば、類似した要素、組成、組成物中の構成要素、又は個別の方法工程の間を区別するために使用され、必ずしも順番又は時系列順を記載するために使用されるものではない。用語は、適当な状況下では交換可能であり、本発明の実施形態は、他に特に指定しない限り、本明細書に記載又は例示されたもの以外の順序で操作し得る。
本明細書に記載された本発明の実施形態は、他に特に指定しない限り、組み合わせて及び共同して操作し得る。
更に、種々の実施形態は、「好ましい」又は「例えば（ｅ．ｇ．）」又は「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」又は「特に」などと呼ばれていても、本発明の範囲を限定するものとしてよりもむしろ、本発明が実行され得る例示的な方法として解釈されるべきである。
特許請求の範囲において使用される用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、例えば、後段に列記された、要素又は方法工程又は組成物中の構成要素に限定されるものとして解釈されるべきではない；それは、他の要素又は方法工程又は特定の組成物中の構成要素を除外しない。それは、述べられた特徴、整数、（方法）工程、又は成分の存在を、表記された通りに特定するものとして解釈される必要はあるが、しかし１つ以上の他の特徴、整数、工程、若しくは成分、若しくはそれらの群の存在又は付加を排除するものではない。したがって、「工程Ａ及びＢを含む方法」という表現の範囲は、工程Ａ及びＢのみからなる方法に限定されるべきではなく、本発明に関してはむしろ、方法の工程の中でＡ及びＢが列挙されたに過ぎず、更に特許請求の範囲は、これらの方法工程の同等物を含むものと解釈されるべきである。したがって、「成分Ａ及びＢを含む組成物」という表現の範囲は、成分Ａ及びＢのみからなる組成物に限定されるべきではなく、本発明に関してはむしろ、組成物の成分の中でＡ及びＢが列挙されたに過ぎず、更に特許請求の範囲は、これらの成分の同等物を含むものと解釈されるべきである。
加えて、不定冠詞「１つ（ａ）」又は「１つ（ａｎ）」による要素又は成分への言及は、文脈が明らかに１つの、及び唯一の要素又は成分があることを要求しない限り、２つ以上の要素又は成分が存在する可能性を排除しない。したがって、不定冠詞「１つ（ａ）」又は「１つ（ａｎ）」は、通常「少なくとも１つ」を意味する。
分子３Ａの合成。 分子６の合成。 分子８の合成。 分子９の合成。 分子１０の合成。 分子１１の合成。 分子１２の合成。 分子１４の合成。 分子１５の合成。 分子１６の合成。 分子１８の合成。 分子１９の合成。 分子２０の合成。 分子２１の合成。 分子６の質量クロマトグラム。 ＳＯ１８６１から出発する分子６の合成の質量クロマトグラムの詳細。 分子６から出発する分子９の質量クロマトグラムの詳細。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。図１８Ｂのｙ軸は、図１８Ａと同じｙ軸である。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。図１９Ｂのｙ軸は、図１９Ａと同じｙ軸である。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。図２０Ｂのｙ軸は、図２０Ａと同じｙ軸である。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。図２１Ｂのｙ軸は、図２１Ａと同じｙ軸である。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体の活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、非有効定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下での、サポニン誘導体の活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０曲線。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）における、濃度５ｐＭのセツキシマブ－サポリン（Ｓａｐｏｒｉｎ）の存在下での、種々のＱＳサポニン分画のエンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）における、濃度５ｐＭのセツキシマブ－サポリンの存在下での、種々のＱＳサポニン分画の脱出促進活性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）におけるＱＳサポニン分画の毒性のＩＣ５０曲線。 ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるＱＳサポニン分画の毒性のＩＣ５０曲線。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、ＱＳサポニン分画の溶血活性 分子２３の合成。 分子２５の合成。 分子２７の合成。 分子２８の合成。 分子２９の合成 ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（分子３０）。 ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（分子３１）。 ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子３２）。 ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子３３）。 ４つのＱＳ－２１異性体の構造。 臨界ミセル濃度の測定：１修飾ＳＯ１８６１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：２修飾ＳＯ１８６１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：３修飾ＳＯ１８６１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：ＱＳサポニンのＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：ＱＳ２１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：修飾ＱＳ２１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：１修飾ＱＳ２１のＡＮＳ蛍光収率。 臨界ミセル濃度の測定：２修飾ＱＳ２１のＡＮＳ蛍光収率。 Ａ４３１細胞における、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ＋１０ｐＭ セツキシマブ－サポリンの細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、セツキシマブ－ジアンチン＋３００ｎＭ及び４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、セツキシマブ－サポリン＋３００ｎＭ及び１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ＋１０ｐＭ ＥＧＦジアンチンの細胞生存率アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、ＥＧＦジアンチン＋１０ｎＭ、３００ｎＭ及び１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４８２９ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、ＥＧＦジアンチン＋１０ｎＭ、３００ｎＭ及び１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４８２９ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、トラスツズマブ－ジアンチン又はトラスツズマブ－サポリン＋１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、トラスツズマブ－ジアンチン又はトラスツズマブ－サポリン＋１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの細胞生存アッセイ（ＭＴＳ）。 Ａ４３１細胞における、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ＋１００ｎＭ ＨＳＰ２７ＢＮＡ、１００ｎＭ セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡの、ＨＳＰ２７ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 Ａ４３１細胞における、セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡコンジュゲート（ＤＡＲ１．５又はＤＡＲ４）＋１００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの、ＨＳＰ２７ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 ＳＫ－ＢＲ－３細胞における、トラスツズマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡコンジュゲート（ＤＡＲ４．４）＋１００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの、ＨＳＰ２７ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 Ａ４３１細胞及びＡ２０５８細胞における、ＨＳＰ２７ＢＮＡ＋４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨのＨＳＰ２７ ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 Ａ４３１細胞及びＡ２０５８細胞における、ＨＳＰ２７ＢＮＡ＋４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨのＨＳＰ２７ ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 ＳＫ－ＢＲ－３細胞における、ＨＳＰ２７ＢＮＡ又はＨＳＰ２７ＬＮＡ＋４８２９ｎＭ ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの、ＨＳＰ２７ｍＲＮＡ遺伝子サイレンシング分析。 分子２６の合成。 ＥＭＣＨマレイミド基の、チオールとのマイケル付加反応の一般的な反応スキーム（Ｒ＝ＣＨ２－ＣＨ２－ＯＨである場合、図６０はブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）の合成を記載する）。 （Ａ）ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの、及び（Ｂ）ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノールの、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳスペクトル。（Ａ）ＲＰモード：ｍ／ｚ ２１２４Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，サポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）、ｍ／ｚ ２１０９Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）、ｍ／ｚ ２０９４Ｄａ（［Ｍ＋Ｎａ］＋，ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨ）。（Ｂ）ＲＰモード：ｍ／ｚ ２１９３Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，サポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）、ｍ／ｚ ２１８５Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）、ｍ／ｚ ２１７０Ｄａ（［Ｍ＋Ｎａ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）。 ｐＨ３のＨＣｌ溶液中での加水分解の前（Ａ）及び後（Ｂ）の、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳスペクトル。 ｐＨ３のＨＣｌ溶液中での加水分解の前（Ａ）及び後（Ｂ）の、ＳＯ１８６１－ＥＭＣＨのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳスペクトル。 非コンジュゲートサポニン媒介性のエンドソーム脱出及び標的細胞殺傷増強。Ａ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析 Ｂ）ＥＧＦジアンチン及び定濃度のＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＧＥ１７４１で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｄ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、種々のＱＳｍｉｘ（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）由来のサポニン混合物）で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。図６３Ｂのｙ軸は、図６３Ａと同じｙ軸である。図６３Ｃのｙ軸は、図６３Ｄと同じｙ軸である。 非コンジュゲートサポニン媒介性のエンドソーム脱出及び標的細胞殺傷増強。Ａ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析 Ｂ）ＥＧＦジアンチン及び定濃度のＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＧＥ１７４１で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｄ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、種々のＱＳｍｉｘ（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）由来のサポニン混合物）で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。図６３Ｂのｙ軸は、図６３Ａと同じｙ軸である。図６３Ｃのｙ軸は、図６３Ｄと同じｙ軸である。 非コンジュゲートサポニン媒介性のエンドソーム脱出及び標的細胞殺傷増強。Ａ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析 Ｂ）ＥＧＦジアンチン及び定濃度のＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＧＥ１７４１で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｄ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、種々のＱＳｍｉｘ（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）由来のサポニン混合物）で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。図６３Ｂのｙ軸は、図６３Ａと同じｙ軸である。図６３Ｃのｙ軸は、図６３Ｄと同じｙ軸である。 非コンジュゲートサポニン媒介性のエンドソーム脱出及び標的細胞殺傷増強。Ａ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析 Ｂ）ＥＧＦジアンチン及び定濃度のＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）又はＳＯ１９０４で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＧＥ１７４１で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。Ｄ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、種々のＱＳｍｉｘ（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）由来のサポニン混合物）で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。図６３Ｂのｙ軸は、図６３Ａと同じｙ軸である。図６３Ｃのｙ軸は、図６３Ｄと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ活性。本発明による、癌細胞におけるＥＧＦＲ標的化アンチセンスＢＮＡオリゴ送達及び遺伝子サイレンシング。Ａ、Ｂ、Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨで処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）、又はＡ２０５８（ＥＧＦＲ－）細胞の細胞生存率分析。Ｄ、Ｅ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）で処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）又はＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞の細胞生存率分析。図６４Ｂのｙ軸は、図６４Ａと同じｙ軸である。図６４Ｄのｙ軸は、図６４Ｃ及び６４Ｅと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ活性。本発明による、癌細胞におけるＥＧＦＲ標的化アンチセンスＢＮＡオリゴ送達及び遺伝子サイレンシング。Ａ、Ｂ、Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨで処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）、又はＡ２０５８（ＥＧＦＲ－）細胞の細胞生存率分析。Ｄ、Ｅ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）で処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）又はＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞の細胞生存率分析。図６４Ｂのｙ軸は、図６４Ａと同じｙ軸である。図６４Ｄのｙ軸は、図６４Ｃ及び６４Ｅと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ活性。本発明による、癌細胞におけるＥＧＦＲ標的化アンチセンスＢＮＡオリゴ送達及び遺伝子サイレンシング。Ａ、Ｂ、Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨで処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）、又はＡ２０５８（ＥＧＦＲ－）細胞の細胞生存率分析。Ｄ、Ｅ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）で処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）又はＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞の細胞生存率分析。図６４Ｂのｙ軸は、図６４Ａと同じｙ軸である。図６４Ｄのｙ軸は、図６４Ｃ及び６４Ｅと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ活性。本発明による、癌細胞におけるＥＧＦＲ標的化アンチセンスＢＮＡオリゴ送達及び遺伝子サイレンシング。Ａ、Ｂ、Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨで処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）、又はＡ２０５８（ＥＧＦＲ－）細胞の細胞生存率分析。Ｄ、Ｅ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）で処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）又はＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞の細胞生存率分析。図６４Ｂのｙ軸は、図６４Ａと同じｙ軸である。図６４Ｄのｙ軸は、図６４Ｃ及び６４Ｅと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ活性。本発明による、癌細胞におけるＥＧＦＲ標的化アンチセンスＢＮＡオリゴ送達及び遺伝子サイレンシング。Ａ、Ｂ、Ｃ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨで処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）、又はＡ２０５８（ＥＧＦＲ－）細胞の細胞生存率分析。Ｄ、Ｅ）１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）で処理された、Ａ４３１（ＥＧＦＲ＋＋）又はＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞の細胞生存率分析。図６４Ｂのｙ軸は、図６４Ａと同じｙ軸である。図６４Ｄのｙ軸は、図６４Ｃ及び６４Ｅと同じｙ軸である。 非コンジュゲートＳＯ１８６１対ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（不安定なヒドラゾン結合）対ＳＯ１８６１－ＨＡＴＵ（またＳＯ１８６１－（Ｓ）（安定）及びＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵとも称される）。ＥＧＦジアンチンの有り無しで、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵ（またＳＯ１８６１－（Ｓ）（Ｓ＝ＨＡＴＵ）とも称される）、及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＳＯ１８６１アグリコンコアとＥＭＣＨリンカーとの間のヒドラゾン結合はまた「不安定なリンカー」とも称される）で処理されたＨｅＬａ細胞（ＥＧＦＲ＋）の細胞生存率分析。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０グラフ。図６６Ｂのｙ軸は、図６６Ａと同じｙ軸である。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０グラフ。図６６Ｂのｙ軸は、図６６Ａと同じｙ軸である。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン誘導体の溶血活性。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０グラフ。図６８Ｂのｙ軸は、図６８Ａと同じｙ軸である。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニン誘導体の毒性のＩＣ５０グラフ。図６８Ｂのｙ軸は、図６８Ａと同じｙ軸である。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニンの毒性のＩＣ５０グラフ。図６９Ｂのｙ軸は、図６９Ａと同じｙ軸である。 Ａ）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ）及びＢ）ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）におけるサポニンの毒性のＩＣ５０グラフ。図６９Ｂのｙ軸は、図６９Ａと同じｙ軸である。 ヒト赤血球溶血アッセイにより測定された、サポニン及びサポニン誘導体の溶血活性。 ＳＯ１８６１及びＳＯ１８６１－ＥＭＣＨの影響下での赤血球溶解。 ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの分子構造。 Ａ）エスシン（９５％、９８％）及びＢ）ＳＯ１８３１、ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（「ＳＯ１８３１－ＥＭＣＨ」）のミセル形成。
本発明は、特定の実施形態について記載されるが、本発明はそれに制限されず、特許請求の範囲によってのみ制限される。
驚くべきことに、本発明者らは、修飾サポニン、すなわち、：
－ サポニンのアグリコンのＣ－３において結合され、修飾グルクロン酸を含有する、分枝型三糖部分；及び／又は
－ サポニンのアグリコンのＣ－４における修飾されたアルデヒド；及び／又は
－ サポニンのアグリコンのＣ－２８位において結合された多糖部分であり、上記多糖部分中に修飾アセアセチル基を含有する、多糖部分；
を有するサポニン誘導体が、サポニン誘導体と接触された細胞の細胞生存率が考慮される場合に低減された毒性を有し；修飾サポニンにおける上記の上述した基の１つ又は２つ（すなわち、アグリコンのアルデヒド基、アグリコンのＣ－３に結合された多糖鎖におけるグルクロン酸のカルボキシル基、及びアグリコンのＣ－２８において結合された多糖鎖におけるアセチル基：の１つ又は２つ）が誘導体化される場合、例えば毒素の細胞毒性又はＢＮＡ介在性遺伝子サイレンシングの増強が考慮される場合に（いかなる特定の理論にも縛られることを望むものではないが：修飾サポニンの類似の又は改善されたエンドソーム脱出促進活性に関連して）活性を有し；並びに／又は非修飾のサポニンの毒性、活性、及び溶血活性と比較した場合、低減された溶血活性を有することを見出した。それにより本発明者らは改善された治療濃度域を有するサポニン誘導体を提供するが、その理由は、サポニン誘導体について、細胞毒性が天然の対応物について測定された細胞毒性よりも低いこと、溶血活性がサポニン誘導体の天然の対応物について測定された溶血活性よりも低いこと、また単一誘導体化サポニンについて、及び二重誘導体化サポニンについて、細胞毒性と例えば毒素増強又は遺伝子サイレンシングとの、ＩＣ５０値間の比率が同様か若しくは増加することから、並びに／又はサポニン溶血活性と例えば毒素増強若しくは遺伝子サイレンシングとの、ＩＣ５０値間の比率が同様か若しくは増加することからである。例示的なサポニン誘導体の概要については、図１～１４、及び３６～４０と組み合わせて、表Ａ２が参照され、また種々の細胞において測定された、細胞毒性、溶血活性、及びエンドソーム脱出促進活性（「活性」）の概要、並びに細胞毒性のＩＣ５０と活性のＩＣ５０との間の比率、及び溶血活性のＩＣ５０と活性のＩＣ５０との間の比率の概要については、表Ａ５及び表Ａ６が参照される。
本発明の第１の態様は、トリテルペンアグリコンコア構造（「アグリコン」とも称される）と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、好ましくは誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択される、サポニン誘導体に関する。
一実施形態は、サポニン誘導体のベースとなる上記サポニンが
－ Ｃ－４にアルデヒド基を含む上記アグリコンコア構造；
－ カルボキシル基、好ましくは、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む第１の糖鎖；及び
－ 少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む第２の糖鎖
のうちの少なくとも１つを更に含む、本発明によるサポニン誘導体である。
特定の実施形態では、サポニン誘導体のベースとなるサポニンは、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）（ＱＳ）サポニンではなく、及び／又はＱｕｉｌ－Ａのサポニンではない。より特定の実施形態では、サポニン誘導体は、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏ、及びＱｕｉｌ－Ａのいずれもベースとしない。
一実施形態は、サポニンが天然サポニンである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含む、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、半合成サポニン誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、５０００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは４０００ｇ／ｍｏｌ、より好ましくは３０００ｇ／ｍｏｌ未満、最も好ましくは２５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量、及び／又は１０００ｇ／ｍｏｌ超、好ましくは１５００ｇ／ｍｏｌ超、より好ましくは１８００ｇ／ｍｏｌ超の分子量を有する、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（Ｉ）～（Ｖ）を有するサポニン：
Figure 2023532681000027
Figure 2023532681000028
Figure 2023532681000029
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＶＩ）～（ＸＩＩ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000030
Figure 2023532681000031
Figure 2023532681000032
Figure 2023532681000033
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニン由来で、以下の式（ＸＩＩＩ）～（ＸＸＩ）を有するサポニン：
Figure 2023532681000034
Figure 2023532681000035
Figure 2023532681000036
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＸＸＩＩ）～（ＸＸＸＩＶ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000037
Figure 2023532681000038
Figure 2023532681000039
Figure 2023532681000040
Figure 2023532681000041
Figure 2023532681000042
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＸＸＸＶ）～（ＸＸＸＩＸ）を有する合成サポニン：
Figure 2023532681000043
Figure 2023532681000044
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、以下の式（ＸＬ）～（ＸＬＶ）を有するサポニン誘導体：
Figure 2023532681000045
Figure 2023532681000046
Figure 2023532681000047
Figure 2023532681000048
Figure 2023532681000049
Figure 2023532681000050
Figure 2023532681000051
のうちのいずれでもないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
好ましい実施形態は、サポニン誘導体が、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニンの誘導体ではないという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、モノデスモサイドトリテルペングリコシド又はビデスモサイドトリテルペングリコシド、より好ましくはビデスモサイドトリテルペングリコシドである、本発明によるサポニン誘導体である。
好ましい実施形態は、サポニン誘導体が、Ｃ－２３位にアルデヒド官能基を有する１２，１３－デヒドロオレアナン型に属し、サポニンのＣ－３ベータ－ＯＨ基の炭水化物置換基にグルクロン酸官能基を任意選択的に含むトリテルペノイドサポニン及び／若しくはビスデスモサイドトリテルペンサポニンの誘導体、並びに／又はジプソフィラ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ）種及び／若しくはサポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）などのサポナリア（Ｓａｐｏｎａｒｉａ）種及び／若しくはアグロステンマ（Ａｇｒｏｓｔｅｍｍａ）種から単離されたサポニンの誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
好ましい実施形態は、サポニンが１２，１３－デヒドロオレアナン型に属する、本発明によるサポニン誘導体である。
驚くべきことに、サポニンのアグリコンのＣ－２３位置におけるアルデヒド基、アグリコンのＣ－３における糖部分、すなわちグルクロン酸部分におけるカルボキシル基、及びサポニンのアグリコンコアのＣ－２８において結合された（オリゴ－）糖部分の糖単位におけるアセチル基の、任意の１つ、２つ、又は３つの修飾（誘導体化）は、結果として、このようなサポニン誘導体が細胞、すなわち種々のタイプの細胞と接触された場合に細胞毒性を低減する。細胞毒性の低減は、本発明者らにより、表Ａ２、表Ａ３、並びに図１～１４、及び３６～４０に列記された一連の種々のサポニン誘導体について確証された。したがって、低減された細胞毒性を有するこれらの一連のサポニン誘導体が提供されることは、本発明の一部であって、ここで細胞毒性の低減とは、非修飾の天然サポニンの対応物について測定した場合の細胞毒性と比較したものである。サポニン誘導体は、このような天然サポニンから形成され得る。典型的には、本発明のサポニン誘導体は、自然界に存在するＳＯ１８６１及びＱＳ－２１（異性体）などの、天然の対応物と比較した場合、１つ、２つ、又は３つの誘導体化を含む。細胞毒性の低減が考慮される場合、本明細書で上記に概説されたサポニン分子中の位置において１つ、２つ、又は３つの修飾（誘導体化）を含むサポニン誘導体は、細胞毒性の低減されたサポニンが提供されるべき場合に、等しく好適である。更に、本発明者らは、驚くべきことに、多種多様な異なる修飾が、細胞毒性を低減すること、溶血活性を低減すること、及び充分な程度のエンドソーム脱出促進活性を保持し且つ残すことに好適であることを確証した。溶血活性が考慮される場合、細胞毒性の低下と同様に、サポニンの示された化学基の１つ、２つ、又は３つが誘導体化される場合に、溶血活性は低減される。これらの誘導体化は、様々な性質のもの、例えば表Ａ２、表Ａ３、並びに図１～１４、及び３６～４０に概説された誘導体化のものであり得る。還元によるアルデヒド基のヒドロキシル基への誘導体化のように小さい誘導体化、及びＡＥＭによるグルクロン酸のカルボキシル基の誘導体化と組み合わされた、ＥＭＣＨによるアルデヒド基の誘導体化のように大きい誘導体化の両方の誘導体化が、細胞毒性及び溶血活性を低減する。いずれも天然のサポニン対応物と比較した場合に、低減された細胞毒性という点で改善された細胞毒性を有し、低減された溶血活性という点で改善された溶血活性を有するサポニン誘導体を提供するために、サポニンの３つの化学基のうちの任意の１つ以上、例えば１つ、２つ、若しくは３つが、異なるサイズ及び／又は異なる化学的性質を有する幅広く様々な化学基によって誘導体化され得ることは明らかである。
理論に束縛されることを望むものではないが、サポニンのアグリコンのＣ－２３原子におけるアルデヒド基が、ビデスモサイドトリテルペングリコシド型のサポニンのエンドソーム脱出促進活性、すなわち、例えば、インビトロ及びインビボの双方において、このようなサポニンの存在下に細胞と接触された場合のほうが、このようなサポニンの不在下に同じ用量が同じ細胞と接触された場合のこのような毒素の毒性と比較して増大された（タンパク質）毒素の毒性、に関係及び／又は寄与することが推定される。実際、本発明者らは、グルクロン酸単位中に誘導体化されたカルボキシル基、及び／又は多糖鎖中に誘導体化されたアセチル基を有し、アグリコン中に遊離のアルデヒド基を含むサポニン誘導体が、エンドソーム脱出促進活性を有することを確証した。これらの誘導体は、低減された溶血活性及び低減された細胞毒性を有する。例えば、分子３Ａ、８、１１、１８、１９、及び２８（表Ａ２、表Ａ３、表Ａ５、表Ａ６、図１、３、６、１１、１２、３９）のようなサポニン誘導体は、アグリコンコア中に遊離の非修飾アルデヒド基を有しており、実際、抗体がそれに結合する受容体を発現している種々の（腫瘍）細胞と接触される、抗体－薬物コンジュゲートの細胞毒性の増強が考慮される場合に活性を示す。したがって、これらのサポニン誘導体は、本発明の明らかに想定される実施形態である。
驚くべきことに、アグリコン中に誘導体化されたアルデヒド基を有し、サポニン誘導体が遊離のアルデヒド基を含まないようにしたサポニン誘導体でも、リガンド－毒素コンジュゲート、例えばＡＤＣの形態で（腫瘍）細胞へ提供されたエフェクター分子の細胞毒性、並びに前提条件として、Ｃ－２８における多糖鎖中のアセチル基及びＣ－２３における多糖鎖中のカルボキシル基のうちのゼロ個又は１個だけが誘導体化される場合、なお特徴的なエンドソーム脱出促進活性を示す。例えば、表Ａ２、表Ａ３、並びに図２、４、５、８、９、１３、３８、及び４０において分子６、９、１０、１４、１５、２０、２７、及び２９として示された、修飾されたアルデヒド基を有し、ゼロ個又は単一の更なる誘導体化を有するサポニン誘導体は、アグリコン中に誘導体化されたアルデヒド基を有するこのようなサポニン誘導体の存在下に腫瘍細胞と接触される、エフェクター分子の細胞毒性効果を増強する能力を有する。これらのサポニン誘導体は全て、低減された細胞毒性を示し、及び低減された溶血活性を示し、それ故に本発明の明らかに想定される実施形態である。
本発明者らはまた、特定の修飾が、対応する非修飾のサポニンと比較した場合、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）の増大をもたらすことも見出した。例えば、分子２、６、８、１０、１５、２７、及び２８として示されたサポニン誘導体、好ましくは分子２、６、８、１０、及び１５として示されたサポニン誘導体は、それらの対応する非誘導体化サポニンと比較した場合、ＣＭＣが増大し、したがって本発明の明らかに想定される実施形態である。何ら理論に束縛されることを望むものではないが、ＣＭＣの増大は、いくつかの理由で有利であると考えられる。例えば、自由分子は一般に、ミセル構造中に正しく並べられた分子よりもコンジュゲーション反応の影響を受けやすいことから、増大されたＣＭＣはその後のコンジュゲーション反応における修飾サポニンの使用を促進し得る。更に、サポニン誘導体が生物学的機能（例えば、インビボ治療、又はエクスビボ法、又はインビトロ法において）を及ぼす必要がある場合、例えば、サポニン誘導体がそのまま使用される場合、又は更にはそれらが担体若しくは別の実体から切断された後にインサイチュで放出される場合でも、非修飾のサポニンに比較して増大されたＣＭＣは有利であり、その理由は、自由サポニン分子が、これらのサポニン誘導体がミセル構造中に正しく並べられている場合よりも、その生物学的標的と相互作用するためにより容易に利用されやすいことからである。臨界ミセル濃度を超える（上回る）濃度においては、サポニンは単離（例えば、分取ＨＰＬＣを用いた）を邪魔するミセルを形成することから、増大されたＣＭＣはまた、サポニン誘導体の大量の生産及び濃縮を促進するためにも有用であり得る。驚くべきことに、本発明によるサポニン誘導体については、観察された増大されたＣＭＣは、増大された細胞毒性又は溶血活性とは関係しない。ＣＭＣと細胞毒性との間の相互関係は、例えば、α－ヘデリン（Ｈｅｄｅｒｉｎ）を基準点として、ＣＭＣは一般的な細胞毒性の増大と関係づけられ得る（ジギトニン（Ｄｉｇｉｔｏｎｉｎ）の場合と同様に）が、細胞毒性の低減にも全く同様に関係づけられること（グリチルリチン（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ）及びヘデラコシド（Ｈｅｄｅｒａｃｏｓｉｄｅ）Ｃの場合と同様に）を示す、Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．（“Ｓａｐｏｎｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｍｏｄｅｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｙｓｔｅｍｓ－Ｌａｎｇｍｕｉｒ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ，ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＳＣＯＭｓ”，Ｐｌａｎｔａ ｍｅｄｉｃａ ８２．１８（２０１６）：１４９６－１５１２．）の表２のデータから分かるように、予測可能ではなく複雑である。更に、分子２、６、１０、及び１５として示されたサポニン誘導体については、増大されたＣＭＣはまた、対応する遊離のサポニンに比較して増大された比率：ＩＣ５０溶血／ＩＣ５０活性と関係づけられるため、これらのサポニン誘導体は本発明の特に好ましい実施形態である。
したがって、本発明者らは、細胞毒性が考慮される場合、及び／又は溶血活性が考慮される場合、並びに例えば毒素の増強、及び／又は対応する非誘導体化サポニンと比較して増大されたＣＭＣが考慮される場合に、改善された治療濃度域を有するサポニン誘導体を提供する。本発明のこのようなサポニン誘導体は、特に、例えば癌の予防又は治療のための、例えばＡＤＣ又はＡＯＣを含む治療レジメンにおける適用に好適である。このようなサポニン誘導体の安全性は、細胞毒性及び／又は溶血活性が考慮される場合、とりわけ、このようなサポニン誘導体が、例えば、ＡＤＣを用いるか又はＡＯＣを用いる治療を要する患者に投与される場合に改善される。
一実施形態は、サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、ここで第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、及び／又はサポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、ここで第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基（本明細書ではまた誘導体化されたアセテート基とも称される）を含み、好ましくは、サポニン誘導体が、誘導体化されている上記第１の糖鎖と、誘導体化されている上記第２の糖鎖との両方を含み、より好ましくは、サポニン誘導体が、誘導体化されている上記第１の糖鎖と、誘導体化されている上記第２の糖鎖との両方を含み、サポニン誘導体が、アルデヒド基又は誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含み、最も好ましくは、サポニン誘導体が、誘導体化されている上記第１の糖鎖と、誘導体化されている上記第２の糖鎖との両方を含み、サポニン誘導体が、アルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含む、本発明によるサポニン誘導体である。同様に好ましいのは、天然サポニンが考慮される場合、サポニン中のこれら３つの化学基の１つを未変更のまま残している、このような誘導体化の２つの全ての他の可能な組み合わせである。更に、サポニン中の化学基の１つ、２つ、又は３つ、好ましくは１つ又は２つは、表Ａ２及び表Ａ３に列記された誘導体化の任意の１つ以上によって誘導体化される。
一実施形態は、サポニン誘導体が：
２α－ヒドロキシオレアノール酸；
１６α－ヒドロキシオレアノール酸；
ヘデラゲニン（２３－ヒドロキシオレアノール酸）；
１６α，２３－ジヒドロキシオレアノール酸；
ギプソゲニン；
キラ酸；
プロトアエスシゲニン－２１（２－メチルブタ－２－エノエート）－２２－アセテート；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１，２２－ビス（２－メチルブタ－２－エノエート）；
２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１（２－メチルブタ－２－エノエート）－１６，２２－ジアセテート；
ジギトゲニン；
３，１６，２８－トリヒドロキシオレアナン－１２－エン；
ギプソゲン酸、
及び
それらの誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、
好ましくはサポニン誘導体が、キラ酸及びギプソゲニン又はそれらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造を含み、より好ましくはサポニン誘導体アグリコンコア構造が、キラ酸又はその誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。本発明者らは今、改善されたサポニン誘導体が、トリテルペングリコシド型のサポニンをベースとして、このような誘導体と接触された細胞の、細胞毒性の低減及び溶血の低減に関して提供され得ることを見出したことから、本発明者らによって試験されたようなエンドソーム脱出促進活性を有する任意のサポニン、例えば前述の実施形態のアグリコンを有し表Ａ１に列記されたサポニンは、したがって基本的に改善可能である。毒素及び例えばＢＮＡの増強が考慮される場合、活性を充分に高い程度に保持しながら、毒性を低減させること及び溶血活性を低減させることは、単独又は例えばＡＤＣ若しくはＡＯＣと組み合わせたサポニン誘導体の治療濃度域の拡大が考慮される場合に、本発明者らによる重要な業績である。充分に高い用量の誘導体化されたサポニンが、例えば、それを必要とする癌患者のための腫瘍療法において適用可能である一方、サポニン誘導体によって及ぼされるか又は誘導される、細胞毒性の副作用（のリスク）及び望ましくない溶血活性（のリスク）は、天然のサポニンの対応物の適用と比較して低減される。本発明のサポニン誘導体の治療濃度域の改善は、例えば、細胞毒性又は溶血活性のいずれかのＩＣ５０と、エンドソーム脱出促進活性のＩＣ５０との間の比率、並びに溶血活性、細胞毒性、及び活性が列記されている表Ａ５及び表Ａ６における例示的なサポニン誘導体について明らかである。
一実施形態は、サポニン誘導体が、キラ酸、ギプソゲニン、及びそれらの誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、好ましくは、サポニン誘導体が、キラ酸、及びそれらの誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、ここで第１の糖鎖が、存在する場合、アグリコンコア構造のＣ３原子（「Ｃ－３原子」とも称される）若しくはＣ２８原子（「Ｃ－２８原子」とも称される）、好ましくはＣ３原子に連結され、及び／又はここで第２の糖鎖が、存在する場合、アグリコンコア構造のＣ２８原子に連結される、本発明によるサポニン誘導体である。好ましいのは、アグリコンに結合された双方の糖鎖を有するサポニンをベースとするサポニン誘導体であるが、一般に、エンドソーム脱出促進活性を示す任意のサポニンも、より低い細胞毒性、より低い溶血活性、及び充分に高いエンドソーム脱出促進活性を有する、単一、二重、又は三重、好ましくは一重又は二重誘導体化されたサポニンを提供するための、本発明による誘導体化に好適である。
一実施形態は、第１の糖鎖が、存在する場合、以下（リストＳ１）の：
ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ－、
Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－［Ｇｌｃ－（１→４）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－Ｇｌｃ－（１→４）－Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、及び
それらの誘導体から選択され、
並びに／又は第２の糖鎖が、存在する場合、以下（リストＳ２）の：：
Ｇｌｃ－、
Ｇａｌ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ｒｈａ－（１→２）－［Ａｒａ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
Ａｒａ－、
Ｘｙｌ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１は、４Ｅ－メトキシけい皮酸である］、
Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ２－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ２は、４Ｚ－メトキシけい皮酸である］、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－３，４－ジ－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ３－（→４）］－３－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ３は、４Ｅ－メトキシけい皮酸である］、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
（Ａｒａ－又はＸｙｌ－）（１→３）－（Ａｒａ－又はＸｙｌ－）（１→４）－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）（１→２）－［４－ＯＡｃ－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）（１→４）］－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ａｒａ／Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ／Ｆｕｃ－（１→４）－［Ｇｌｃ／Ｇａｌ－（１→２）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ４－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ４は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ５－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ５は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３，４－ｄｉ－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ６－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ６は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ７－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ７は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ８－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ８は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ９－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ９は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１０－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１０は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１１－（→３）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１１は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１２－（→３）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１２は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→６）］－Ｇａｌ－、及び
それらの誘導体から選択される、本発明によるサポニン誘導体である。
典型的には、細胞がサポニン及び毒素と接触される場合、毒素の細胞毒性を増強するサポニンは、アグリコンに結合されたこのような単糖又は多糖鎖の１つ又は２つを有する。２つの糖鎖を含む誘導体化のために選択されたサポニンが好ましい。エンドソーム脱出促進活性が充分に高い程度に保持されるべき場合に、このようなサポニンを、単一、二重、又は三重誘導体化、好ましくは一重又は二重誘導体化に供するために特に好ましいサポニンの概要は、表Ａ１に提供される。当然ながら、このようなサポニンの構造バリアントは、このようなサポニンが例えば毒素、ＢＮＡなどに対してエンドソーム脱出促進活性を示す場合には、本発明による誘導体化に等しく好適である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、及び第２の糖鎖を含み、第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、アグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
ｉ．アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されている、
ｉｉ．第１の糖鎖が、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、並びに
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、
のうちの１つ、２つ、又は３つ、好ましくは１つ又は２つ、より好ましくは１つである、本発明によるサポニン誘導体である。
好ましい実施形態では、サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、及び第２の糖鎖を含み、ここで第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、及びアグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
ｉ．アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されている、
ｉｉ．第１の糖鎖が、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、並びに
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、
のうちの１つである、本発明によるサポニン誘導体である。
特定の実施形態では、サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、及び第２の糖鎖を含み、ここで第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、及びアグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
ｉ．アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されている、
ｉｉ．第１の糖鎖が、誘導体化されていないグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、並びに
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、誘導体化されていない少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、本発明によるサポニン誘導体である。
より特定の実施形態では、サポニン誘導体は、以下のいずれでもない：
Figure 2023532681000052
Figure 2023532681000053
特定の実施形態では、サポニン誘導体は、第１の糖鎖を含み、及び第２の糖鎖を含み、第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、及びアグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
ｉ．アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されていない、
ｉｉ．第１の糖鎖が、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、並びに
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、誘導体化されていない少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、本発明によるサポニン誘導体である。
より特定の実施形態では、サポニン誘導体は、以下のいずれでもない：
Figure 2023532681000054
特定の実施形態では、サポニン誘導体は第１の糖鎖を含み、及び第２の糖鎖を含み、第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、アグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
ｉ．アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されていない、
ｉｉ．第１の糖鎖が、誘導体化されていないグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、及び
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、本発明によるサポニン誘導体である。
以下の要約は、好適な誘導体化を例示する：
Figure 2023532681000055
本発明によれば、サポニンは３つの誘導体化を含んでなお充分に高いエンドソーム脱出促進活性を示し得る。特に、細胞毒性及び／又は溶血活性の低減が、細胞内でのエフェクター分子、例えば毒素又はＢＮＡの効果及び活性をエフェクター分子及び誘導体化されたサポニンと接触された腫瘍細胞において強化する能力の（潜在的な又は見かけ上の）低減よりも大きい場合である。したがって、本発明は、アグリコンのアルデヒド基が考慮される場合、存在する場合にはＣ－３における多糖中のグルクロン酸単位におけるカルボキシル基が考慮される場合、及び存在する場合にはＣ－２８における多糖鎖中のアセチル基が考慮される場合に、１つ、２つ、又は３つの誘導体化を含む、誘導体化されたサポニンを提供する。好ましいのは、１つ又は２つの修飾を有するサポニン誘導体である。例えば遊離アルデヒド基を有し、糖鎖中に１つ又は２つの誘導体化を有するサポニン誘導体が、毒素及びＢＮＡなどのエフェクター分子の、エンドソーム脱出を改善するために好適である。先に述べた通り、誘導体化されたアルデヒド基を有するサポニン誘導体もまた、等しく好適である。誘導体化の際に、アグリコン中に遊離アルデヒド基を有さないこのようなサポニン誘導体は、なお充分且つ効率的なエンドソーム脱出促進活性を示す。何ら理論に束縛されることを望むものではないが、ヒト細胞などの（哺乳類）細胞のエンドソーム内及びリソソーム内の酸性条件の結果として、アルデヒド基は、位置Ｃ－２３において誘導体化されたアグリコンを有するサポニン誘導体を提供するためのサポニンのアルデヒド基に最初に結合した部分のｐＨ駆動型の切断に際し、細胞の内側で再び形成され得る。エンドソーム又はリソソーム内で再度形成され得る修飾アルデヒド基を有するサポニン誘導体の例は、ヒドラゾン結合を含むサポニン誘導体であり、結合は、アルデヒドのカルボニル基と、例えば、アグリコンに結合された化学基中のヒドラジド部分、例えばＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）、又はマレイミド基に結合されてチオエーテル結合を形成するメルカプトエタノールを有するＥＭＣＨとの間に形成される。このようなサポニン誘導体の例は、図８及び図９に提示され、並びに分子２及び分子３として以下に表示される。
一実施形態は、サポニン誘導体が、ディプサコシドＢ、サイコサポニンＡ、サイコサポニンＤ、マクラントイジンＡ、エスクレントシドＡ、フィトラッカゲニン、エシネート、ＡＳ６．２、ＮＰ－００５２３６、ＡＭＡ－１、ＡＭＲ、α－ヘデリン、ＮＰ－０１２６７２、ＮＰ－０１７７７７、ＮＰ－０１７７７８、ＮＰ－０１７７７４、ＮＰ－０１８１１０、ＮＰ－０１７７７２、ＮＰ－０１８１０９、ＮＰ－０１７８８８、ＮＰ－０１７８８９、ＮＰ－０１８１０８、ＳＡ１６４１、ＡＥ Ｘ５５、ＮＰ－０１７６７４、ＮＰ－０１７８１０、ＡＧ１、ＮＰ－００３８８１、ＮＰ－０１７６７６、ＮＰ－０１７６７７、ＮＰ－０１７７０６、ＮＰ－０１７７０５、ＮＰ－０１７７７３、ＮＰ－０１７７７５、ＳＡ１６５７、ＡＧ２、ＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１９０４、ＳＯ１８６２、β－エスシン（Ａｅｓｃｉｎ）、エスシンＩａ、茶種子（Ｔｅａｓｅｅｄ）サポニンＩ、茶種子サポニンＪ、アッサムサポニン（Ａｓｓａｍｓａｐｏｎｉｎ）Ｆ、ジギトニン、プリムラ酸（Ｐｒｉｍｕｌａ ａｃｉｄ）１、及びＡＳ６４Ｒ、それらの立体異性体、並びにそれらの組み合わせからなるサポニンの群から選択されるサポニンの誘導体であり、好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びＧＥ１７４１誘導体からなる群から選択され、より好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体からなる群から選択される、本発明によるサポニン誘導体である。これらのサポニンは、基本的に、本発明者らにより実証されたようなエンドソーム脱出促進活性を示すか、又は、それらについてエンドソーム脱出促進活性が確立されているサポニンに構造的に非常に類似しているものである。これらのサポニンの構造の概要は、表Ａ１に要約されている。
他の実施形態は、サポニン誘導体が：キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）樹皮サポニン、ＱＳ－７、ＱＳ１８６１、ＱＳ－７ａｐｉ、ＱＳ１８６２、ＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１ Ａ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ａ－ｘｙｌｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ａｐｉｏ、ＱＳ－２１ Ｂ－ｘｙｌｏからなるサポニンの群から選択されるサポニンの誘導体であり、好ましくは、サポニン誘導体が、ＱＳ－２１誘導体からなる群から選択される、本発明によるサポニン誘導体である。これらのサポニンは、基本的に、本発明者らにより実証されたようなエンドソーム脱出促進活性を示すか、又は、それらについてエンドソーム脱出促進活性が確立されているサポニンに構造的に非常に類似しているものである。これらのサポニンの構造の概要は、表Ａ１に要約されている。
一実施形態は、サポニン誘導体が、分子１：
Figure 2023532681000056
［式中、
第１の糖鎖Ａ１は、水素、単糖、又は直鎖若しくは分枝オリゴ糖を表し、好ましくは、Ａ１は、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、より好ましくは、Ａ１は、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、Ａ１は、グルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなり；
第２の糖鎖Ａ２は、水素、単糖、又は直鎖若しくは分枝オリゴ糖を表し、好ましくは、Ａ２は、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、より好ましくは、Ａ２は、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、Ａ２は、少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基、例えば１つ、２つ、３つ、又は４つの、好ましくは１つのアセトキシ基を含み、Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つは水素ではなく、好ましくは、Ａ１及びＡ２の両方がオリゴ糖鎖であり；
Ｒは、ギプソゲニン中の水素又はキラ酸中のヒドロキシルである］
によって表される、キラ酸サポニン又はギプソゲニンサポニンのサポニン誘導体であり、
サポニン誘導体が、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンの位置Ｃ２３におけるアルデヒド基が誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ１が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、及びＡ１がグルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなる場合、Ａ１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されている；並びに
ｉｉｉ．Ａ２が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、及びＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ２のうちの１つの糖部分又は２つ以上の糖部分の、１つ以上の、好ましくは全てのアセトキシ基が誘導体化されている
のうちの少なくとも１つが存在する分子１によって表されるサポニンに対応する、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、Ａ１が、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、グルクロン酸部分を含むか若しくはグルクロン酸部分からなり、及びＡ１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が誘導体化されており、並びに／又はＡ２が、本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、サポニンのＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含み、及び上記Ａ２の少なくとも１つのアセトキシ基がサポニン誘導体で誘導体化されている、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、分子１によって表されるサポニンが、ビデスモサイドトリテルペンサポニンである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、分子１によって表されるサポニンに対応し、ここで、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンの位置Ｃ２３におけるアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ 好ましくはヒドラジドとの反応を介した、ヒドラゾン結合への変換
によって誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ１が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、及びＡ１がグルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなる場合、Ａ１のグルクロン酸部分のカルボキシル基がアミド結合への変換により、好ましくはアミンとの反応を介して誘導体化されている；及び
ｉｉｉ．Ａ２が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、及びＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ２のうちの１つの糖部分又は２つ以上の糖部分の、１つ以上の、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されている
のうちの少なくとも１つが存在し、好ましくは１つ又は２つが存在し、より好ましくは１つが存在する、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、分子１によって表されるサポニンに対応し、ここで、以下の誘導体化：
ｉ．キラ酸又はギプソゲニンの位置Ｃ２３におけるアルデヒド基が、
－ アルコールへの還元；又は
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、それにより、サポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、例えばＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを提供し、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；又は
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＢＭＰＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；又は
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＫＭＵＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；
によって誘導体化されている；
ｉｉ．Ａ１が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ１）を表し、及びＡ１がグルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなる場合、Ａ１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換により誘導体化され、それにより、サポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、例えばＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、例えばＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭを提供する；並びに
ｉｉｉ．Ａ２が本発明の特定の実施形態について本明細書の上記に定義されたような糖鎖（リストＳ２）を表し、及びＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ２のうちの１つの糖部分又は２つ以上の糖部分の、１つ以上の、好ましくは全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されている
のうちの少なくとも１つが存在し、好ましくは１つ又は２つが存在し、より好ましくは１つが存在する、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又はＡ２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは分子１によって表されるサポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、及び／又はＳＡ１６４１、最も好ましくはＳＯ１８６１である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が：ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、Ｇｙｐ１、ギプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、それらの立体異性体、及びそれらの組み合わせの誘導体からなる群から選択され、好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＧＥ１７４１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくは、サポニン誘導体がＳＯ１８６１誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、Ａ１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又はＡ２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは分子１によって表されるサポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、最も好ましくはＳＯ１８６１である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、Ｇｙｐ１、ギプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４の誘導体からなる群から選択され、好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＧＥ１７４１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくは、サポニン誘導体がＳＯ１８６１誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、単一誘導体化が、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基への結合によるか（図５９参照）、若しくは（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基への結合などによる、ＳＯ１８６１のグルクロン酸のカルボキシル基の変換であり、又はサポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２：
Figure 2023532681000057
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体であって、ここでＥＭＣＨのマレイミド基がメルカプトエタノールによって誘導体化され、それによりチオエーテル結合を形成する誘導体を表す、分子３：
Figure 2023532681000058
によって表されるＳＯ１８６１誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、単一誘導体化が、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基への結合によるか、若しくは（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基への結合による、ＳＯ１８６１のグルクロン酸のカルボキシル基の変換であり、又はサポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２：
Figure 2023532681000059
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体であって、ここでＥＭＣＨのマレイミド基がメルカプトエタノールによって誘導体化され、それによりチオエーテル結合を形成する誘導体を表す、分子３：
Figure 2023532681000060
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここでアグリコンコアのアルデヒド基がアルコールへ還元されているＳＯ１８６１誘導体であるか、又はサポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここでサポニンのアグリコンコア構造のＣ２８に結合された第２の糖鎖におけるアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であるか、又はサポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここでサポニンのアグリコンコア構造のＣ３に結合された第１の糖鎖におけるグルクロン酸単位のカルボキシル基が、式（３）：
Figure 2023532681000061
で示されるような２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）との反応を介したアミド結合へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここでサポニンのアグリコンコア構造のＣ３に結合された第１の糖鎖におけるグルクロン酸単位のカルボキシル基が、式（１８）：
Figure 2023532681000062
で示されるようなＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここでサポニン誘導体が、以下のもの：
Figure 2023532681000063
Figure 2023532681000064
Figure 2023532681000065
Figure 2023532681000066
のうちの１つに従う式を有するＳＯ１８６１誘導体である、
本発明のサポニン誘導体である。
分子２によって表されるサポニンは、遊離スルフヒドリル基を含む更なる分子との結合反応のための前駆体として適用するのに好適である。分子２として表示されるサポニン誘導体のマレイミド基は、このような遊離スルフヒドリル基とチオエーテル結合を形成することができる。例えば、分子２のサポニン誘導体は、遊離スルフヒドリル基を有するシステインなどの遊離スルフヒドリル基を含むペプチド又はタンパク質に共有結合することができる。そのようなタンパク質は、例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖなどの抗体又はその結合フラグメント若しくは結合ドメイン、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体、例えばラクダＶＨである。例えば、遊離スルフヒドリル基を含む抗体とのカップリング反応における、分子２のサポニン誘導体の適用は、抗体（又はその結合ドメイン若しくはそのフラグメント）が、例えば腫瘍細胞上に存在する受容体などの、標的細胞表面分子への特異的結合のための抗体である場合、細胞及び細胞内部へのサポニンの標的化送達のためのコンジュゲートを提供する。好ましくは、サポニン誘導体は、例えばＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ７１といった受容体などの腫瘍細胞特異表面分子への結合が可能な、抗体又はＶＨＨへ結合される。
一実施形態は、サポニン誘導体が、単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体ではないという前提条件つきであり、ここで単一誘導体化とは、１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応による、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基の変換であり、又はサポニン誘導体が；Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３においてアルデヒド基を含む、分子２：
Figure 2023532681000067
によって表されるＳＯ１８６１誘導体である、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は：
ｉ．サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、ここでアグリコンコア構造が、
－ アルコールへの還元；若しくは
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＢＭＰＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＫＭＵＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；
のいずれかによって誘導体化されているアルデヒド基を含み；又は
ｉｉ．第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）若しくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換により誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含み；又は
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含み；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つ又は３つの任意の組み合わせ、任意選択的には、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
好ましくは、サポニン誘導体がアグリコン構造を含み、アグリコンコア構造が、ＥＭＣＨとの反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基が、任意選択的に、メルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、アグリコンコア構造が、アルデヒド基を含み、及び第１の糖鎖がカルボキシル基、好ましくは、Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換によって誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、アグリコンコア構造中のアルデヒド基がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化され、サポニンがＳＯ１８６１である場合には、グルクロン酸及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きであり、サポニンがＳＯ１８６１であり及びＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）とＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応によって誘導体化される場合には、アルデヒド基及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた修飾されるという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体のアグリコンコア構造中のアルデヒド基がＥＭＣＨとの反応を介して誘導体化され及びサポニンがＳＯ１８６１である場合には、グルクロン酸及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きであり、サポニンがＳＯ１８６１であり、及びＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、結合したＨＡＴＵにより誘導体化される場合には、アルデヒド基及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きである、本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ａ）：
Figure 2023532681000068
［式中、Ｒ１及びＲ２は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、Ｒ２は本発明で定義されるとおりの第２の糖鎖であり、
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000069
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000070
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｅ）：
Figure 2023532681000071
［式中、Ｒ１及びＲ２は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、Ｒ２は本発明で定義されるとおりの第２の糖鎖であり、式中、Ｒ１は、式（ｆ）に従う官能化グルコン酸部分を含む：
Figure 2023532681000072
（式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000073
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000074
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000075
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000076
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））である］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｇ）：
Figure 2023532681000077
［式中、Ｒ２は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ２は、本発明で定義されるとおりの第２の糖鎖であり、
式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000078
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000079
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000080
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000081
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））である］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニンが、第１の第２の糖鎖及び第２の糖鎖を含み、ここで第２の糖鎖が、少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含み、サポニン誘導体が、式（ｈ）：
Figure 2023532681000082
に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ａ）：
Figure 2023532681000083
［式中、Ｒ１及びＲ２は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、Ｒ２は本発明で定義されるとおりの第２の糖鎖であり、式中、Ｒ１は、式（ｆ）に従う官能化グルコン酸部分を含み：
Figure 2023532681000084
（式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000085
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000086
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000087
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000088
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨである）に従うチオール官能基である））である）
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000089
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000090
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｇ）：
Figure 2023532681000091
［式中、Ｒ２は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ２は、本発明で定義されるとおりの第２の糖鎖であり、
式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000092
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000093
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は分枝状アルキニル若しくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000094
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000095
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であり、
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくはＨ又は分枝状アルキニル又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000096
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000097
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｊ）：
Figure 2023532681000098
［式中、Ｒ１は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、式中、Ｒ１は、式（ｆ）に従う官能化グルコン酸部分を含む：
Figure 2023532681000099
（式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000100
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000101
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は分枝状アルキニル若しくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000102
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000103
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｋ）：
Figure 2023532681000104
［式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000105
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000106
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000107
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000108
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））である］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｌ）：
Figure 2023532681000109
［式中、Ｒ１は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は、本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000110
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000111
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｍ）：
Figure 2023532681000112
［式中、Ｒ１は、水素、単糖、直鎖オリゴ糖及び分枝鎖オリゴ糖から独立して選択され、好ましくはＲ１は本発明で定義されるとおりの第１の糖鎖であり、式中、Ｒ１は、式（ｆ）に従う官能化グルコン酸部分を含み：
Figure 2023532681000113
（式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000114
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000115
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は分枝状アルキニル若しくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000116
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000117
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））である）
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000118
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000119
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
一実施形態は、サポニン誘導体が、式（ｎ）：
Figure 2023532681000120
［式中、Ｔ＝ＮＲ３Ｒ４（式中、Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は分枝状アルキニル若しくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000121
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000122
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である））であるか；又は
式中、Ｔ＝ＯＲ５（式中、Ｒ５は、独立して、Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000123
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000124
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）である））であり、
式中、Ｘ＝Ｏ、Ｐ、又はＳ、好ましくはＯであり；
式中、Ｙ＝Ｈ、非置換のＣ１～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルキル、非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖、分枝状、若しくは環状アルケニル、若しくは非置換のＣ２～Ｃ１０直鎖若しくは分枝状アルキニル、又は式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位、好ましくは式（ｂ）若しくは式（ｃ）に従うマレイミド部位を表す
Figure 2023532681000125
（式中、ｏは、０～１０、好ましくは２～７、より好ましくは４～６から選択される整数であり、
Ｗは、式（ｄ）
Figure 2023532681000126
（式中、Ｕ＝ＳＨ、ＮＨ２、又はＯＨ、好ましくはＯＨであり、
ｐは、０～４、好ましくは１～３、より好ましくは１又は２から選択される整数である）に従うチオール官能基である）］に従う本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ１と称された一実施形態は、サポニン誘導体がＳＡ１６４１ではないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体であり、アグリコンコア構造が変換によって、例えば式（Ａ１）：
Figure 2023532681000127
の化合物との反応によるアミンへの還元的アミノ化によって、誘導体化されているアルデヒド基を含む。
すなわち、本明細書において実施形態Ｄ１と称された一実施形態は、それが、ＳＡ１６４１と式（Ａ１）の化合物との間の反応の結果ではないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。したがって、実施形態Ｄ１は、それが、少なくとも１つのＳＡ１６４１分子の、式（Ａ１）の化合物に対する還元的アミノ化によるカップリングの結果ではないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ２と称された一実施形態は、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的に、チオ－ルとのチオエーテル結合の形成により誘導体化され、ここでサポニンには他の誘導体化が存在しないことを特徴とし、好ましくは、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的に、チオ－ルとのチオエーテル結合の形成により誘導体化されることを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ３と称された一実施形態は、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここでＥＭＣＨのマレイミド基が：
・メルカプトエタノール、
・少なくとも２－イミノチオランによって誘導体化されているエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマー、
・シアニン－３と、少なくとも２－イミノチオランによって更に誘導体化されているエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマーとのコンジュゲート、
・少なくとも２－イミノチオランによって誘導体化されているＧ４デンドロン、
・シアニン－５と、少なくとも２－イミノチオランによって更に誘導体化されているＧ４デンドロンとのコンジュゲート、
・ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び
・配列ＳＥＳＤＤＡＭＦＣＤＡＭＤＥＳＤＳＫ［配列番号：１］をもつペプチド、

のうちの１つ、好ましくは全てから選択されるチオールとの、チオエーテル結合の形成により誘導体化され、
他の誘導体化がサポニンに存在しないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。当業者には理解されるように、「Ｇ４デンドロン」という表現は、式（Ａ２）：
Figure 2023532681000128
の化合物を意味するものと解釈されるべきである。
本明細書において実施形態Ｄ４と称された一実施形態は、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、カルボキシル基が、シアニン－３及びエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマーの任意選択的に更に誘導体化されたコンジュゲートとの反応による、アミドへの変換によって誘導体化されており、他の誘導体化がサポニンに存在しないことを特徴とし、好ましくは、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、カルボキシル基が、シアニン－３及びエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマーの任意選択的に更に誘導体化されたコンジュゲートとの反応による、アミドへの変換によって誘導体化されていることを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ５と称された一実施形態は、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造が、シアニン－３及びエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマーのコンジュゲートとの反応による、アミンへの還元的アミノ化などの変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、他の誘導体化がサポニンに存在しないことを特徴とし、好ましくは、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造が、シアニン－３及びエチレンジアミンコアを有するポリ（アミドアミン）デンドリマーのコンジュゲートとの反応による、アミンへの還元的アミノ化などの変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含むことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ６と称された一実施形態は、サポニン誘導体が毒素、マイクロＲＮＡ、又はタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含まないこと、好ましくは、サポニン誘導体が薬学的に活性のある物質、例えば毒素、薬物、ポリペプチド及び／又はポリヌクレオチドを含まないことを特徴とし、より好ましくは、サポニン誘導体がエフェクター分子を含まないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ７と称された一実施形態は、サポニン誘導体が：
・ポリ－又はオリゴ（アミン）、例えばポリエチレンイミン及びポリ（アミドアミン）、
・ポリエチレングリコール、
・ポリ－又はオリゴ（エステル）、例えばポリ（ラクチド）、
・ポリ（ラクタム）、
・ポリラクチド－ｃｏ－グリコリドコポリマー、
・ポリ－又はオリゴ糖、例えばシクロデキストリン及びポリデキストロース、
・ポリ－又はオリゴ（アミノ酸）、例えばタンパク質及びペプチド、並びに
・核酸及びその類似体、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ（ロック核酸）、及びＰＮＡ（ペプチド核酸）；
からなる群から選択されるポリマー又はオリゴマー構造を含まないことを特徴とし、
好ましくは、サポニン誘導体が、ポリマー、オリゴマー、デンドリマー、デンドロナイズドポリマー、若しくはデンドロナイズドオリゴマーなどの構造的に規則正しい形態であるポリマー若しくはオリゴマー構造を含まないか、又はそれが、ヒドロゲル、ミクロゲル、ナノゲル、安定化された重合体ミセル、若しくはリポソームなどの集合したポリマー構造であることを特徴とし、より好ましくは、サポニン誘導体がポリマー又はオリゴマー構造を含まないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ８と称された一実施形態は、サポニン誘導体が、一緒に結合された少なくとも２つの等しいか又は同様の単位から、主として又は完全に構築された分子構造を含まないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ９と称された一実施形態は、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１とＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イルメチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）との反応生成物である、式（Ａ３）：
Figure 2023532681000129
の化合物ではないことを特徴とし、
好ましくは、サポニン誘導体が活性化されたエステルではないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。図５９参照。
本明細書において実施形態Ｄ１０と称された一実施形態は、サポニン誘導体がサポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、ここでカルボキシル基がアミド結合又はエステル結合への変換により誘導体化されており、サポニンには他の誘導体化が存在しないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ１１と称された一実施形態は、サポニン誘導体がジアンチン部分を含まないことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ１２と称された好ましい一実施形態は、サポニン誘導体が単一のサポニン部分を含むことを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ１３と称された好ましい一実施形態は、サポニン誘導体が２５００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは２３００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは２１５０ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有することを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。
本明細書において実施形態Ｄ１４と称された好ましい一実施形態は、サポニン誘導体化が４００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは３００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは２７０ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有することを特徴とする、本発明によるサポニン誘導体である。サポニン誘導体化の分子量は、アグリコンコアと１つ（モノデスモサイドサポニンについて）又は２つ（ビデスモサイドサポニンについて）のグリコン（糖）鎖を除いたサポニン誘導体の分子量に相当する。当業者は、サポニン誘導体がその対応する非誘導体化サポニン（例えば、脱アセチル化により誘導体化されたＳＯ１８６１に相当する、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨの場合のように）よりも低い分子量を有する場合、サポニン誘導体化は分子量に何ら増加をもたらすことはなく、それ故、サポニン誘導体化が実施形態Ｄ１４の、４００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは３００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは２７０ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有することという要求に適合することを理解するであろう。
当業者には理解されるように、実施形態Ｄ１～Ｄ１４は、互いの中で、並びに本出願において記載された別の実施形態と組み合わせてよい。例えば、本発明の実施形態では、実施形態Ｄ１～Ｄ１４の以下の組み合わせが提供される：
・Ｄ１２、及びＤ１～Ｄ１１、Ｄ１３の１つ以上；
・Ｄ１３、及びＤ１～Ｄ１２の１つ以上；
・Ｄ１２、Ｄ１３、及びＤ１～Ｄ１１の１つ以上；
・Ｄ１、Ｄ２、Ｄ１０、及びＤ１２；
・Ｄ１、Ｄ３、Ｄ７、Ｄ９、及び好ましくはＤ１３；又は
・Ｄ３、Ｄ９、Ｄ１２、及びＤ１３。
当業者には、実施形態Ｄ１～Ｄ１４のこれらの組み合わせが、再度本発明の別の実施形態、例えば、及び好ましくは、実施形態Ｄ１４と組み合わせてもよいことが理解されよう。
特に好ましい実施形態は、実施形態Ｄ３、Ｄ９、Ｄ１２、及びＤ１３とＤ１４の一方又は両方の組み合わせに対応する。換言すれば、特に好ましい実施形態は、サポニン誘導体が単一のサポニン部分を含み、サポニン誘導体が２５００ｇ／ｍｏｌ未満、好ましくは２３００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは２１５０ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有し、サポニン誘導体が、
・サポニン、特にＳＯ１８６１ではなく、アグリコンコア構造がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されたアルデヒド基を含み、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的に、メルカプトエタノ－ルとのチオエーテル結合の形成により誘導体化され、及び好ましくはサポニンには他の誘導体化が存在せず；並びに
・ＳＯ１８６１とＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イルメチレン］Ｎ－メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ－オキシド（ＨＡＴＵ）との反応生成物である活性化されたエステルではない、
本発明によるサポニン誘導体である。
本発明の第２の態様は、本発明によるサポニン誘導体と、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤とを含む、第１の医薬組成物に関する。
一実施形態は、本発明のサポニン誘導体と、好ましくは薬学的に許容される希釈剤とを含む本発明による第１の医薬組成物であって、更に：
・薬学的に許容される塩、好ましくは薬学的に許容される無機塩、例えばアンモニウム、カルシウム、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、カリウム、ナトリウム、ストロンチウム、若しくは亜鉛塩、好ましくはＮａＣｌ；並びに／又は
・薬学的に許容される緩衝系、例えばリン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、ヒスチジン、乳酸塩、トロメタミン、グルコン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、及び／若しくはケトグルタール酸塩含有緩衝系、
を含む、第１の医薬組成物である。
一実施形態は、本発明によるサポニン誘導体と、薬学的に許容される希釈剤、好ましくは水とを含む本発明による第１の医薬組成物であって、組成物が２５℃の温度において液体であり、２～１１の範囲内、好ましくは４～９の範囲内、より好ましくは６～８の範囲内のｐＨを有する、第１の医薬組成物である。
一実施形態は、本発明によるサポニン誘導体と、薬学的に許容される希釈剤、好ましくは水とを含む本発明の第１の医薬組成物であって、組成物が２５℃の温度において液体であり、サポニン誘導体の濃度が１０－１２～１ｍｏｌ／ｌの範囲内、好ましくは１０－９～０．１ｍｏｌ／ｌの範囲内、より好ましくは１０－６～０．１ｍｏｌ／ｌの範囲内である、第１の医薬組成物である。
典型的には、このような第１の医薬組成物は、例えばＡＤＣ又はＡＯＣと組み合わせた使用に好適である。例えば、第１の医薬組成物は、ＡＤＣ又はＡＯＣの投与を必要とする患者に対し、ＡＤＣ若しくはＡＯＣが投与される前に、ＡＤＣ若しくはＡＯＣと一緒に、又はＡＤＣ若しくはＡＯＣの投与の（直）後に、このようなＡＤＣ又はＡＯＣ療法を必要とする患者に投与される。例えば、第１の医薬組成物はＡＤＣ又はＡＯＣを含む医薬組成物と混合され、得られた混合物の好適な用量が、ＡＤＣ又はＡＯＣ療法を必要とする患者に投与される。本発明によれば、第１の医薬組成物によって含まれたサポニン誘導体は、サポニン誘導体とＡＤＣ又はＡＯＣとが腫瘍細胞などの標的細胞の内側に共存する場合、このようなＡＤＣ又はＡＯＣによって含まれるエフェクター分子の効能及び効力を増強する。サポニン誘導体の影響下では、サポニン誘導体の不在下で同じ細胞が同じ用量のＡＤＣ又はＡＯＣと接触された場合に比較して、より高い程度までエフェクター分子が標的細胞のサイトゾル中に放出される。したがって、エフェクター分子が第１の医薬組成物のサポニン誘導体と一緒に標的細胞の内側に共存する場合、エフェクター分子を含むＡＤＣ又はＡＯＣが送達される細胞の内側においてサポニン誘導体の不在下で同じ効能を達成するのに必要な用量に比較して、より低いＡＤＣ又はＡＯＣ用量において同様の効能が得られる。
一実施形態は、サポニン誘導体が、分子２：
Figure 2023532681000130
によって表されるサポニン誘導体であり、若しくは単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、単一誘導体化は、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基の、１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）と、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応による変換であり、又はサポニン誘導体が分子３：
Figure 2023532681000131
によって表されるサポニン誘導体である、本発明の第１の医薬組成物である。
本発明の第３の態様は、医薬組み合わせ剤であって、
・本発明の第１の医薬組成物と；
・抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第２の医薬組成物と
を含む医薬組み合わせ剤に関する。
本発明の第４の態様は、第３の医薬組成物であって、本発明のサポニン誘導体を含み、抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－核酸コンジュゲート、又は受容体－リガンド－核酸コンジュゲートのうちの任意の１つ以上を更に含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第３の医薬組成物に関する。
一実施形態は、第２の医薬組成物又は第３の医薬組成物が、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、薬物が、例えばサポリン及びジアンチンなどの毒素であり、オリゴヌクレオチドが、例えばアポリポタンパク質Ｂ又はＨＳＰ２７の遺伝子サイレンシングのための例えばｓｉＲＮＡ又はＢＮＡである、本発明の医薬組み合わせ剤又は本発明の第３の医薬組成物である。
一実施形態は、サポニン誘導体が：ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、Ｇｙｐ１、ギプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、それらの立体異性体、及びそれらの組み合わせの誘導体からなる群から選択されるサポニン誘導体であり、好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＧＥ１７４１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくは、サポニン誘導体がＳＯ１８６１誘導体であり、更により好ましくは、分子２又は分子３によって表される、本発明の医薬組み合わせ剤又は第３の医薬組成物である。
一実施形態は、エンドソーム脱出促進剤として、及び抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートと組み合わせて使用するための、本発明の第１の医薬組成物、本発明の医薬組み合わせ剤、又は本発明の第３の医薬組成物である。
一実施形態は、本発明によるサポニン誘導体と、好ましくは薬学的に許容される希釈剤とを含む本発明による第３の医薬組成物であって、更に、
・薬学的に許容される塩、好ましくは薬学的に許容される無機塩、例えばアンモニウム、カルシウム、銅、鉄、マグネシウム、マンガン、カリウム、ナトリウム、ストロンチウム、若しくは亜鉛塩、好ましくはＮａＣｌ；並びに／又は
・薬学的に許容される緩衝系、例えばリン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、炭酸塩、ヒスチジン、乳酸塩、トロメタミン、グルコン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、及び／若しくはケトグルタール酸塩含有緩衝系、
を含む、第３の医薬組成物である。
一実施形態は、本発明によるサポニン誘導体と、薬学的に許容される希釈剤、好ましくは水とを含む本発明による第３の医薬組成物であって、組成物が２５℃の温度で液体であり、２～１１の範囲内、好ましくは４～９の範囲内、より好ましくは６～８の範囲内のｐＨを有する第３の医薬組成物である。
一実施形態は、本発明によるサポニン誘導体と、薬学的に許容される希釈剤、好ましくは水とを含む本発明による第３の医薬組成物であって、組成物が２５℃の温度で液体であり、サポニン誘導体の濃度が、１０－１２～１モル／Ｌの範囲内であり、好ましくは１０－９～０．１モル／Ｌの範囲内であり、より好ましくは１０－６～０．１モル／Ｌの範囲内である第３の医薬組成物である。
本発明の第５の態様は、医薬としての使用のための、本発明の第１の医薬組成物、本発明の医薬組み合わせ剤、又は本発明の第３の医薬組成物に関する。好ましい実施形態では、医薬としての使用のための、サポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の第１の医薬組成物；サポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の医薬組み合わせ剤；又はサポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の第３の医薬組成物が提供される。
本発明の別の態様では、医薬としての使用のための、本明細書に記載されるサポニン誘導体、好ましくはＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、又はＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵが提供される。
本発明の第６の態様は、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、本発明の第１の医薬組成物、本発明の医薬組み合わせ剤、又は本発明の第３の医薬組成物に関する。
好ましい実施形態では、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、サポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の第１の医薬組成物；サポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の医薬組み合わせ剤；又はサポニン誘導体がＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、若しくはＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる、本発明の第３の医薬組成物が提供される。
好ましい実施形態では、第４の医薬組成物は、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択的には誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択され、
サポニン誘導体が、２５００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有するサポニン誘導体と
任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤と
を含む。
好ましい実施形態では、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫の治療又は予防における使用のための、第２の医薬組み合わせ剤は：
・トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択的には誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択されるサポニン誘導体と
任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤と、
・抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第５の医薬組成物と
を含む。
好ましい実施形態では、第６の医薬組成物は、癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、任意選択的には誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択されるサポニン誘導体と、
任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤と、を含み、
抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－核酸コンジュゲート、又は受容体－リガンド－核酸コンジュゲートのうちの任意の１つ以上を更に含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む。
好ましい実施形態では、第２の医薬組成物又は第３の医薬組成物が、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートの任意の１つ以上を含み、薬物は、例えばサポリン及びジアンチンなどの毒素であり、オリゴヌクレオチドは、例えばｓｉＲＮＡ、ＢＮＡ，例えばアポリポタンパク質Ｂ又はＨＳＰ２７の遺伝子サイレンシングである、本発明による使用のための第２の医薬組み合わせ剤又は本発明による使用のための第６の医薬組成物である。
本発明の第７の態様は、分子を細胞の外側から上記細胞の内側へ、好ましくは上記細胞のサイトゾル中へ移行させるための、インビトロ又はエクスビボの方法であって、
ａ）細胞を提供する工程と；
ｂ）工程ａ）において提供された細胞内へ、細胞の外側から移行させるための分子を提供する工程と；
ｃ）本発明によるサポニン誘導体を提供する工程と；
ｄ）工程ａ）の細胞を、インビトロ又はエクスビボにおいて、工程ｂ）の分子及び工程ｃ）のサポニン誘導体と接触させ、それにより分子の細胞の外側から上記細胞内への移行を確立させる工程とを含む、方法に関する。
好ましい実施形態は、
ａ）細胞を提供する工程と；
ｂ）工程ａ）において提供された細胞内へ、細胞の外側から移行させるための分子を提供する工程と；
ｃ）トリテルペンアグリコンコア構造と、アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、好ましくは天然サポニンをベースとするサポニン誘導体であって：
ｉ．サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
ｉｉ．サポニン誘導体が、第１の糖鎖を含み、第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
ｉｉｉ．サポニン誘導体が、第２の糖鎖を含み、第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、好ましくは誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
ここで、第１の糖鎖及び第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択されるサポニン誘導体を提供する工程と、
ｄ）工程ａ）の細胞を、インビトロ又はエクスビボにおいて、工程ｂ）の分子及び工程ｃ）のサポニン誘導体と接触させ、それにより分子の細胞の外側から上記細胞内への移行を確立させる工程とを含む、本発明の方法である。
一実施形態は、細胞が、ヒト細胞、例えばＴ－細胞、ＮＫ－細胞、腫瘍細胞であり、及び／又は工程ｂ）の分子が：抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つであり、ここで薬物が、例えば毒素であり、オリゴヌクレオチドが、例えばｓｉＲＮＡ、ＢＮＡであり、並びに／又はサポニン誘導体が：ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、Ｇｙｐ１、ギプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４の誘導体、それらの立体異性体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＧＥ１７４１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、より好ましくは、サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であり；又はサポニン誘導体が単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、ここで単一誘導体化は、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基の、アミンとの反応を介したアミドへの変換であり、例えば、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）を、ＳＯ１８６１のグルクロン酸のカルボキシル基へ結合することによるか、若しくは（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）を、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基へ結合することによるものであり、又はここでサポニン誘導体が；Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３においてアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２：
Figure 2023532681000132
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり、
又はサポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体であって、ここでＥＭＣＨのマレイミド基がメルカプトエタノールによって誘導体化され、それによりチオエーテル結合を形成するＳＯ１８６１誘導体を表す、分子３：
Figure 2023532681000133
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり；又はサポニン誘導体が、単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体ではないという前提条件つきであり、ここで単一誘導体化とは、１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応による、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基の変換であり、又はサポニン誘導体が；Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３においてアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２：
Figure 2023532681000134
によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり；又はサポニン誘導体が：
ｉ．サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、ここでアグリコンコア構造が、
－ アルコールへの還元；若しくは
－ Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
－ Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＢＭＰＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
－ Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、ＫＭＵＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；
のいずれかによって誘導体化されているアルデヒド基を含み；若しくは
ｉｉ．第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）若しくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換により誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含み；若しくは
ｉｉｉ．第２の糖鎖が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含み；若しくは
ｉｖ．サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つ又は３つの任意の組み合わせ、任意選択的には、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含む；いずれかである誘導体であり、
好ましくは、サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、ここでアグリコンコア構造は、ＥＭＣＨとの反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここでＥＭＣＨのマレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化され；又はサポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、ここでアグリコンコア構造が、アルデヒド基を含み、ここで、第１の糖鎖がカルボキシル基、好ましくは、Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換によって誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含み；又はサポニン誘導体が、アグリコンコア構造中のアルデヒド基がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化され、サポニンがＳＯ１８６１である場合には、グルクロン酸及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きの、並びにサポニンがＳＯ１８６１であり及びＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）とＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応によって誘導体化される場合には、アルデヒド基及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きの、誘導体であり；又はサポニンが、サポニン誘導体のアグリコンコア構造中のアルデヒド基がＥＭＣＨとの反応を介して誘導体化され及びサポニンがＳＯ１８６１である場合には、グルクロン酸及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きであり、並びにサポニンがＳＯ１８６１であり及びＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基が、結合したＨＡＴＵにより誘導体化される場合には、アルデヒド基及びアセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きの誘導体である、本発明の方法である。
特定の実施形態では、分子を細胞の外側から上記細胞の内側へ、好ましくは、本明細書に記載の上記細胞のサイトゾル中へ、移行させるためのインビトロ又はエクスビボの方法が提供され、ここでサポニン誘導体は、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３、又はＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを含み、好ましくはそれらからなる。
本発明は、いくつかの実施形態に関して記載されてきたが、当業者には、明細書を読むにあたり、及び図面を調べるにあたり、それらの代替物、変更形態、置換物、及び等価物が明らかとなることが意図される。本発明は例示される実施形態にいかなる方法においても制限されない。変更は、添付の特許請求の範囲によって定義される範囲から離れることなく行われ得る。
本発明は、いくつかの例示的な実施形態を参照して記載されてきた。変更は可能であり、且つ添付の特許請求の範囲において定義された保護の範囲内に含まれる。本発明は、以下の実施例によって更に例示されるが、それらはいかなる方法においても本発明を制限するものとして解釈されるべきではない。
Figure 2023532681000135
Figure 2023532681000136
Figure 2023532681000137
Figure 2023532681000138
実施例及び例示的実施形態
材料：
ＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２（異性体）、及びＳＯ１９０４は、サポナリア・オフィキナリスＬ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ）から得られた未加工の植物抽出物から、Ａｎａｌｙｔｉｃｏｎ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＧｍｂＨにより単離及び精製された。ＱＳ２１（純粋）、ＱＳ１８（分画）、ＱＳ１７（分画）、ＱＳ７（分画）、ＱＳ２１（分画）は、Ｄｅｓｅｒｔ Ｋｉｎｇ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏから購入し、トラスツズマブ（Ｔｒａｓ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）、セツキシマブ（Ｃｅｔ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）は、薬局から購入した。ＥＧＦジアンチンは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）より、標準的な手法によって製造された。セツキシマブ－サポニンコンジュゲートは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）より製造及び購入された。トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ、９８％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、５，５－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ、エルマン試薬、９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（２ｍＬ、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、ＮｕＰＡＧＥ（商標）４－１２％ビス－トリスプロテインゲル（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇｅｌｓ）（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、ＮｕＰＡＧＥ（商標）ＭＥＳ ＳＤＳ ランニングバッファー（Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ）（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｎｏｖｅｘ（商標）シャーププレステインドプロテインスタンダード（Ｓｈａｒｐ Ｐｒｅ－ｓｔａｉｎｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ）（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、ＰａｇｅＢｌｕｅ（商標）タンパク質染色液（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡ タンパク質アッセイキット（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ）（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｎ－エチルマレイミド（ＮＥＭ、９８％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、１，４－ジチオスレイトール（ＤＴＴ、９８％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、セファデックスＧ５０Ｍ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、スーパーデックス（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ）２００Ｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ、９９．６％、ＶＷＲ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ、９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｌ－ヒスチジン（９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｄ－（＋）－トレハロース二水和物（９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ２０、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、グアニジン塩酸塩（９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩二水和物（ＥＤＴＡ－Ｎａ２、９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、濾過滅菌フィルター０．２μｍ及び０．４５μｍ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、ビバスピン（Ｖｉｖａｓｐｉｎ）Ｔ４及びＴ１５濃縮器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）、スーパーデックス（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ）２００ＰＧ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、テトラ（エチレングリコール）スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＰＥＧ４－ＳＰＤＰ、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、［Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトラメチルウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート］（ＨＡＴＵ、９７％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ、９９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミドトリフルオロ酢酸塩（ＡＥＭ、９８％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｌ－システイン（９８．５％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、脱イオン水（ＤＩ）はＵｌｔｒａｐｕｒｅ Ｌａｂ Ｗａｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＭｉｌｌｉＱ、Ｍｅｒｃｋ）から新たに採取した、ニッケル－ニトリロ三酢酸アガロース（Ｎｉ－ＮＴＡアガロース、Ｐｒｏｔｉｎｏ）、グリシン（９９．５％、ＶＷＲ）、５，５－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸（エルマン試薬、ＤＴＮＢ、９８％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｓ－アセチルメルカプトコハク酸無水物フルオレセイン（ＳＡＭＳＡ試薬、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）重炭酸ナトリウム（９９．７％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、炭酸ナトリウム（９９．９％、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、セファデックスＧ－２５樹脂を用いたＰＤ ＭｉｎｉＴｒａｐ脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ＰＤ１０ Ｇ２５脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、０．５、２、５、及び１０ｍＬのＺｅｂａ Ｓｐｉｎ脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｖｉｖａｓｐｉｎ遠心式フィルターＴ４ １０ｋＤａ ＭＷＣＯ、Ｔ４ １００ｋＤａ ＭＷＣＯ、及びＴ１５（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）、Ｂｉｏｓｅｐ ｓ３０００ ａＳＥＣカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）、Ｖｉｖａｃｅｌｌ限外濾過ユニット１０及び３０ｋＤａ ＭＷＣＯ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）、Ｎａｌｇｅｎｅ Ｒａｐｉｄ－Ｆｌｏｗフィルター（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）。
略語
ＡＥＭ：Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミドトリフルオロアセテート塩
ＡＭＰＤ：２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール
ＢＯＰ：（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ））ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＥＭＣＨ．ＴＦＡ：Ｎ－（ε－マレイミドカプロン酸）ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩
ＨＡＴＵ：１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート
Ｍｉｎ：分
ＮＭＭ：４－メチルモルホリン
ｒ．ｔ．：保持時間
ＴＣＥＰ：トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩
Ｔｅｍｐ：温度
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
分析方法
ＬＣ－ＭＳ法１
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．Ｐｕｍｐ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを備えたＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎＭ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲 ｎｅｇ又はｎｅｇ／ｐｏｓ １５００～２４００又は２０００～３０００の範囲内；ＥＬＳＤ：ガス圧４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ 温度：６０℃、流量：０．６ｍＬ／分、
生成物の極性に応じた勾配：
Ａｔ０＝２％Ａ、ｔ５．０分＝５０％Ａ、ｔ６．０分＝９８％Ａ
Ｂｔ０＝２％Ａ、ｔ５．０分＝９８％Ａ、ｔ６．０分＝９８％Ａ
ポストタイム：１．０分、溶離液Ａ：アセトニトリル、溶離液Ｂ：水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。
ＬＣ－ＭＳ法２，２
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．Ｐｕｍｐ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを備えたＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ，ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎＭ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲：ｐｏｓ／ｎｅｇ１００～８００又はｎｅｇ２０００～３０００；ＥＬＳＤ：ガス圧４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：２５℃、流量：０．５ｍＬ／分、勾配：ｔ０分＝５％Ａ、ｔ２．０分＝９８％Ａ、ｔ２．７分＝９８％Ａ、ポストタイム：０．３分、溶離液Ａ：アセトニトリル、溶離液Ｂ：水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。
ＬＣ－ＭＳ法３
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．Ｐｕｍｐ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを備えたＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎＭ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲 ｐｏｓ／ｎｅｇ１０５～８００、５００～１２００又は１５００～２５００；ＥＬＳＤ：ガス圧４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ、２．５μｍ、温度：４０℃、流量：０．５ｍＬ／分、勾配：ｔ０分＝５％Ａ、ｔ２．０分＝９８％Ａ、ｔ２．７分＝９８％Ａ、ポストタイム：０．３分、溶離液Ａ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸、溶離液Ｂ：水中の０．１％ギ酸。
ＬＣ－ＭＳ法４
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＩＣｌａｓｓ；Ｂｉｎ．Ｐｕｍｐ：ＵＰＩＢＳＭ、ＳＭ：ＳＯを備えたＵＰＩＳＭＦＴＮ；ＵＰＣＭＡ、ＰＤＡ：ＵＰＰＤＡＴＣ、２１０～３２０ｎＭ、ＳＱＤ：ＡＣＱ－ＳＱＤ２ ＥＳＩ、生成物の分子量に応じた質量範囲：ｐｏｓ／ｎｅｇ１００～８００又はｎｅｇ２０００～０００；ＥＬＳＤ：ガス圧４０ｐｓｉ、ドリフトチューブ温度：５０℃カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８、５０×２．１ｍｍ、１．７μｍ、温度：２５℃、流量：０．５ｍＬ／分、勾配：ｔ０分＝５％Ａ、ｔ２．０分＝９８％Ａ、ｔ２．７分＝９８％Ａ、ポストタイム：０．３分、溶離液Ａ：アセトニトリル、溶離液Ｂ：水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム（ｐＨ＝９．５）。
分取法
分取ＭＰ－ＬＣ法１、
装置型：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）ｐｒｅｐ ＭＰＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ Ｃ１８（１４５×２５ｍｍ、１０μｍ）；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶離液Ａ：水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム（ｐＨ＝９．０）；溶離液Ｂ：９９％アセトニトリル＋水中の１％の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム；勾配：
Ａｔ０分＝５％Ｂ、ｔ１分＝５％Ｂ、ｔ２分＝１０％Ｂ、ｔ１７分＝５０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
Ｂｔ０分＝５％Ｂ、ｔ１分＝５％Ｂ、ｔ２分＝２０％Ｂ、ｔ１７分＝６０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
；検出ＵＶ：２１０、２３５、２５４ｎＭ、及びＥＬＳＤ。
分取ＭＰ－ＬＣ法２
装置型：Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（商標）ｐｒｅｐ ＭＰＬＣ；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＬＵＮＡ Ｃ１８（３）（１５０×２５ｍｍ、１０μｍ）；流量：４０ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶離液Ａ：水中の０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル中の０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸；勾配：
Ａｔ０分＝５％Ｂ、ｔ１分＝５％Ｂ、ｔ２分＝２０％Ｂ、ｔ１７分＝６０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
Ｂｔ０分＝２％Ｂ、ｔ１分＝２％Ｂ、ｔ２分＝２％Ｂ、ｔ１７分＝３０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
ｃｔ０分＝５％Ｂ、ｔ１分＝５％Ｂ、ｔ２分＝１０％Ｂ、ｔ１７分＝５０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
Ｄｔ０分＝５％Ｂ、ｔ１分＝５％Ｂ、ｔ２分＝５％Ｂ、ｔ１７分＝４０％Ｂ、ｔ１８分＝１００％Ｂ、ｔ２３分＝１００％Ｂ
；検出ＵＶ：２１０、２３５、２５４ｎＭ、及びＥＬＳＤ。
分取ＬＣ－ＭＳ法３
ＭＳ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｇ６１３０Ｂ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ；ＨＰＬＣ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２９０分取ＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ（商標）ＣＳＨ（Ｃ１８、１５０×１９ｍｍ、１０μｍ）；流量：２５ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶離液Ａ：１００％アセトニトリル；溶離液Ｂ；水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム ｐＨ＝９．０；勾配：
Ａｔ０＝２０％Ａ、ｔ２．５分＝２０％Ａ、ｔ１１分＝６０％Ａ、ｔ１３分＝１００％Ａ、ｔ１７分１００％Ａ
Ｂｔ０＝５％Ａ、ｔ２．５分＝５％Ａ、ｔ１１分＝４０％Ａ、ｔ１３分＝１００％Ａ、ｔ１７分＝１００％Ａ
；検出：ＤＡＤ（２１０ｎＭ）；検出：ＭＳＤ（ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇ）質量範囲：１００～８００；ＤＡＤに基づく分画収集。
分取ＬＣ－ＭＳ法４
ＭＳ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｇ６１３０Ｂ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ；ＨＰＬＣ装置型：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １２９０分取ＬＣ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｃ４、１５０×１９ｍｍ、１０μｍ）；流量：２５ｍＬ／分；カラム温度：室温；溶離液Ａ：１００％アセトニトリル；溶離液Ｂ；水中の１０ｍＭ 炭酸水素アンモニウム ｐＨ＝９．０；勾配：
Ａｔ０＝２％Ａ、ｔ２．５分＝２％Ａ、ｔ１１分＝３０％Ａ、ｔ１３分＝１００％Ａ、ｔ１７分１００％Ａ
Ｂｔ０＝１０％Ａ、ｔ２．５分＝１０％Ａ、ｔ１１分＝５０％Ａ、ｔ１３分＝１００％Ａ、ｔ１７分＝１００％Ａ
Ｃｔ０＝５％Ａ、ｔ２．５分＝５％Ａ、ｔ１１分＝４０％Ａ、ｔ１３分＝１００％Ａ、ｔ１７分＝１００％Ａ
；検出：ＤＡＤ（２１０ｎＭ）；検出：ＭＳＤ（ＥＳＩ ｐｏｓ／ｎｅｇ）質量範囲：１００～８００；ＤＡＤに基づく分画収集
フラッシュクロマトグラフィー
Ｇｒａｃｅ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｘ２（登録商標）Ｃ－８１５Ｆｌａｓｈ；溶媒送達システム：オートプライミングを備えた３－ピストンポンプ、単回のランで４つまでの溶媒を用いた４つの独立したチャンネル、溶媒枯渇時のオートスイッチライン；最大ポンプ流量率２５０ｍＬ／分；最大圧５０ｂａｒ（７２５ｐｓｉ）；検出：ＵＶ２００～４００ｎｍ、４つまでのＵＶシグナルと全ＵＶ範囲のスキャンの組み合わせ、ＥＬＳＤ；カラムサイズ：装置上で４～３３０ｇ、ルアー型、７５０ｇから３０００ｇまで、オプションのホルダー付き。
実施例１：サポニン誘導体の合成
以下の修飾されたＳＯ１８６１サポニン、すなわちサポニン誘導体は、表Ａ２に要約されるように、天然ＳＯ１８６１をベースとして合成された：
Figure 2023532681000139
Figure 2023532681000140
Figure 2023532681000141
Figure 2023532681000142
以下のＳＯ１８６１誘導体の合成の記載については、表Ａ２及び図面が参照される。
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（分子２）の合成；図６０、図６１Ａ参照
サポナリア・オフィキナリスＬ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ）由来のＳＯ１８６１（５９ｍｇ、３１．７μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ（３０１ｍｇ、８８８μｍｏｌ）を、スターラーを備えた丸型フラスコに入れ、１３ｍＬのメタノール中に溶解した。ＴＦＡ（４００μＬ、ｃａｔ．）を溶液に添加し、反応混合物をＲＣＴ Ｂマグネチックスタラー（ＩＫＡ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ）上で、室温にて８００ｒｐｍで３時間撹拌した。３時間の撹拌後、混合物をＭｉｌｌｉＱ水又はＰＢＳのいずれかで希釈し、ＭＷＣＯ １ｋＤａの再生セルロース膜チューブ（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ７）を用いて、ＭｉｌｌｉＱ水又はＰＢＳのいずれかに対し、２４時間にわたり充分に透析した。透析後、溶液を凍結乾燥して白色粉末を得た。収率６２．４ｍｇ（９５％）。乾燥したアリコートを、１Ｈ ＮＭＲ及びＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳによる特性評価に更に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－Ｄ４）（ＳＯ１８６１）：δ＝０．５０－５．５０（ｍ，サポニントリテルペノイド及び糖骨格プロトン），９．４３（１Ｈ，ｓ，サポニンのアルデヒドプロトン，Ｈａ）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－Ｄ４）（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ，ＰＢＳワークアップ）：δ＝０．５０－５．５０（ｍ，サポニントリテルペノイド及び糖骨格プロトン），６．７９（２Ｈ，ｓ，マレイミドプロトン，Ｈｃ），７．６２－７．６８（１Ｈ，ｍ，ヒドラゾンプロトン，Ｈｂ）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ（ＲＰモード）：ｍ／ｚ２１２４Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，サポニン－ＥＭＣＨ），ｍ／ｚ２１０９Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，ＳＯ１８６１－ＡＬＤ－ＥＭＣＨ），ｍ／ｚ２０９４Ｄａ（［Ｍ＋Ｎａ］＋，ＳＯ１８６１－ＡＬＤ－ＥＭＣＨ）。図６１Ａ参照。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ（ＲＮモード）：ｍ／ｚ２２７５Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２２４４Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２２２２Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２１７８Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２１４４Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２１２２Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２０９２Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，サポニン－ＥＭＣＨコンジュゲート），２０７０Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，ＳＯ１８６１－ＡＬＤ－ＥＭＣＨ），２０３８Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，ＳＯ１８３２－ＥＭＣＨ），１９３６Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，ＳＯ１７３０－ＥＭＣＨ），１８６１Ｄａ（［Ｍ－Ｈ］－，ＳＯ１８６１）。ＳＯ１８６１－ＡＬＤ－ＥＭＣＨは分子２（化学式：Ｃ９３Ｈ１４３Ｎ３Ｏ４８、精密質量：２０６９．８８）によって表される：
Figure 2023532681000143
ヒドラゾン結合のｐＨ依存性加水分解を検査するため、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨをＨＣｌ溶液中にｐＨ３において溶解し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳスペクトルを２つの異なる時点において記録した（図６２）。図６２Ａ及び６２Ｂに示したように、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの相当するｍ／ｚ２０７０Ｄａのピークの明らかな減少傾向が、図６１Ｂにおいて見られる。ＳＯ１８６１は加水分解中に生成されることから、ｍ／ｚ２０７０Ｄａの減少傾向を伴ったｍ／ｚ１８６１Ｄａにおけるピークの上昇が記録された。これらの結果は、ヒドラゾン結合が加水分解に対し感受性であり、それがＳＯ１８６１に結合されている場合でも切断されることを示している。
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール（分子３；ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）の合成；図６０及び図６１Ｂ参照
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨのマレイミド基は、６．５～７．５のｐＨ範囲において実施された場合、チオールと、迅速且つ特異的なマイケル付加を行う。
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（０．１ｍｇ、４８ｎｍｏｌ）に対し、２００μＬのメルカプトエタノール（１８ｍｇ、２３０μｍｏｌ）を添加し、溶液をＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒ Ｃ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）上で、室温にて８００ｒｐｍで１時間振盪した。１時間の振盪後、溶液をメタノールで希釈し、ＭＷＣＯ １ｋＤａの再生セルロース膜チューブ（Ｓｐａｃｔｒａ／Ｐｏｒ７）を用いて、メタノールに対し、４時間にわたり充分に透析した。透析後、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノールが与えられ（分子３）、アリコートを採取して、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳによって分析した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ（ＲＰモード）：ｍ／ｚ２１９３Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール），ｍ／ｚ２１８５Ｄａ（［Ｍ＋Ｋ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール），ｍ／ｚ２１７０Ｄａ（［Ｍ＋Ｎａ］＋，ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール）。図６１Ｂ参照。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノールは分子３（化学式：Ｃ９５Ｈ１４９Ｎ３Ｏ４９Ｓ、精密質量：２１４７．９０）によって表される：
Figure 2023532681000144
ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（分子３Ａ）の合成；図１参照
ＳＯ１８６１（２８．８ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（８．１１ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（１７．６ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．００ｍＬ）及びＮＭＭ（８．４８μＬ、０．０７７ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に、生成物を分取ＬＣ－ＭＳ３を用いることにより再精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２０．２ｍｇ、６７％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９３％（化学式：Ｃ８７Ｈ１３９ＮＯ４７、精密質量：１９４９，８５）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９４９［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．４５１Ｂ
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ（分子６）の合成；図２参照
ＳＯ１８６１（２０．０ｍｇ、１０．７μｍｏｌ）を、メタノール（１．００ｍＬ）中に溶解した。次に、水素化ホウ素ナトリウム（４．０６ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ；ＮａＢＨ４）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。３０分後、反応混合物を水（０．５０ｍＬ）で希釈し、分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（１５．９ｍｇ、７９％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９７％（化学式：Ｃ８３Ｈ１３２Ｏ４６、精密質量：１８６４，８０）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１８６５［Ｍ－１］１－（図１５及び１６参照）
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：１．９５１Ｂ
ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（分子８）の合成；図３参照
ＳＯ１８６１（９．３０ｍｇ、４．９９μｍｏｌ）に対し、水（０．２５ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（２．００ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液及びメタノール（０．２５ｍＬ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（８．８６ｍｇ、９７％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９７％（化学式：Ｃ８１Ｈ１２８Ｏ４５、精密質量：１８２０，７７）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１８２０［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：１．８３１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子９）の合成；図４参照
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ（９．３７ｍｇ、５．０２μｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（２．６４ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、及びＢＯＰ（６．６６ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（５．５２μＬ、０．０５０ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（６．３２ｍｇ、６４％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９５％（化学式：Ｃ８７Ｈ１４１ＮＯ４７、精密質量：１９５１，８７）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９５２［Ｍ－１］１－（図１７参照）
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．４５１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（分子１０）の合成；図５参照
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ（２６．８ｍｇ、０．０１４ｍｍ）に対し、水（０．５０ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（５．７４ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）の溶液及びメタノール（０．５０ｍＬ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２４．２ｍｇ、９２％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９８％。（化学式：Ｃ８１Ｈ１３０Ｏ４５、精密質量：１８２２，７９）
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１８２２［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：１．８１１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子１１）の合成；図６参照
ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（１４．３ｍｇ、７．８４μｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（４．１２ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）、及びＢＯＰ（１０．４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（８．６２μＬ、０．０７８ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に生成物を、最初の分取ＭＰ－ＬＣ２を、次いで分取ＬＣ－ＭＳ３を用いて再精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（９．４７ｍｇ、６３％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９８％（化学式：Ｃ８５Ｈ１３７ＮＯ４６、精密質量：１９０７，８４）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９０８［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．３１１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子１２）の合成；図７参照
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（８．５７ｍｇ、４．７０μｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（４２．５８ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、及びＢＯＰ（６．５７ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（５．１７μＬ、０．０４７ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に生成物を、再び分取ＭＰ－ＬＣ２を用いて精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（７．２１ｍｇ、８０％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９７．８％ 化学式：Ｃ８５Ｈ１３９ＮＯ４６、精密質量：１９０９，８６）
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９１０［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．２１１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子１４）の合成；図８参照
ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（１０．６ｍｇ、５．４３μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（９．２２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を、メタノール（超乾燥、０．５０ｍＬ）中に溶解した。次に、ＴＦＡ（１．６６μＬ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ１に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に生成物を、分取ＬＣ－ＭＳ３を用いて再精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールした。得られた溶液を、ギ酸を用いて中和し、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２．６１ｍｇ、２２％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９５％（化学式：Ｃ９７Ｈ１５２Ｎ４Ｏ４９、精密質量：２１５６，９５）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１５６［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．６４１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（分子１５）の合成；図９参照
ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（９．０５ｍｇ、４．９７μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（８．４３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を、メタノール（超乾燥、０．５０ｍＬ）中に溶解した。次に、ＴＦＡ（１．５２μＬ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ１に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（６．５８ｍｇ、６５％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９７％（化学式：Ｃ９１Ｈ１４１Ｎ３Ｏ４７、精密質量：２０２７，８７）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０２８［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：１．９６１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（分子１６）の合成；図１０参照
ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（６．００ｍｇ、３．１４μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（５．３３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を、メタノール（超乾燥、０．５０ｍＬ）中に溶解した。次に、ＴＦＡ（０．９６μＬ、０．０１３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ１に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に生成物を、分取ＬＣ－ＭＳ３を用いて再精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールした。得られた溶液を、ギ酸を用いて中和し、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（１．０４ｍｇ、１６％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９４％（化学式：Ｃ９５Ｈ１５０Ｎ４Ｏ４８、精密質量：２１１４，９４）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１１５［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．５５１Ｂ
ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（分子１８）の合成；図１１参照
ＳＯ１８６１（１０．４ｍｇ、５．５８μｍｏｌ）、ＡＥＭ（７．１０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（６．３６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．００ｍＬ）及びＮＭＭ（６．１３μＬ、０．０５６ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（７．８２ｍｇ、７１％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９５％（化学式：Ｃ８９Ｈ１３６Ｎ２Ｏ４７、精密質量：１９８４，８３）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９８５［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．６２１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｃ－ＯＨ）（分子１９）の合成；図１２参照
ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（９．０２ｍｇ、４．９５μｍｏｌ）、ＡＥＭ（７．１０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（５．６５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（５．４４μＬ、０．０５０ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（７．１６ｍｇ、７４％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９６％（化学式：Ｃ８７Ｈ１３４Ｎ２Ｏ４６、精密質量：１９４２，８２）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９４４［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．４７１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）（分子２０）の合成；図１３参照
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ（９．３８ｍｇ、５．０３μｍｏｌ）、ＡＥＭ（６．３９ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（５．７３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（５．５３μＬ、０．０５０ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（８．６３ｍｇ、８６％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９５％（化学式：Ｃ８９Ｈ１３８Ｎ２Ｏ４７、精密質量：１９８６，８５）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９８７［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．６２１Ｂ
ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（分子２１）の合成；図１４参照
ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（８．９２ｍｇ、４．８９μｍｏｌ）、ＡＥＭ（６．５４ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（５．６５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（５．３８μＬ、０．０４９ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２に供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（８．９２ｍｇ、９４％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度＝９７％（化学式：Ｃ８７Ｈ１３６Ｎ２Ｏ４６、精密質量：１９４４，８４）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９４４［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．４６１Ｂ
ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（分子２３）の合成；図３６参照
化学式：Ｃ９４Ｈ１５１Ｎ５Ｏ５０、精密質量：２１４９，９４
ＳＯ１８６１－Ｌ－ＮＨＳ（分子２５）の合成；図３７参照
ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（７．７１ｍｇ、３．５８μｍｏｌ）及びＤＢＣＯ－ＮＨＳ（２．８８ｍｇ、７．１７μｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。３０分後、反応混合物をジエチルエーテル（４０ｍＬ）に対し滴加した。遠心分離（７８００ＲＰＭ、５分）の後、上清をデカントし、ペレットをジエチルエーテル（２０ｍＬ）中に再懸濁して、再度遠心分離した。上清をデカントした後、残渣を水／アセトニトリル（３：１、ｖ／ｖ、３ｍＬ）中に溶解し、得られた溶液を直ちに凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（８．８１ｍｇ、９６％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度 ８４％。１４％の加水分解されたＮＨＳエステルを含有（化学式：Ｃ１１７Ｈ１６９Ｎ７Ｏ５５、精密質量：２５５２，０６）。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２５５１［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳｒ．ｔ．（分）：２．７６／２．７８２（異性体による二重ピーク）
ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵ（分子２６）の合成；図５９参照
ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵを生成するためには、ＳＯ１８６１のカルボキシル基が、ペプチドカップリング化学において活性エステルを生じるべく使用される試薬、すなわち、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、によって活性化される。得られたＳＯ１８６１の活性エステルは、図５９に示される。
以下の修飾されたＱＳ－２１サポニン、すなわちサポニン誘導体は、天然ＱＳ－２１をベースとして合成された：
Figure 2023532681000145
Figure 2023532681000146
ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＯＨ（分子２７）の合成；図３８参照
ＱＳ２１（９．４１ｍｇ、４．７３μｍｏｌ）を、メタノール（０．５０ｍＬ）中に溶解した。次に、水素化ホウ素ナトリウム（１．７９ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。３０分後、反応混合物を水（０．５０ｍＬ）で希釈し、分取ＭＰ－ＬＣ．２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（４．６８ｍｇ、５０％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９９％（精密質量：１９９０，４異性体：Ａｐｉ／Ｘｙｌ（２：１））。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：１９９０［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳｒ．ｔ．（分）：１．２５／２．３１１Ｂ（二重ピーク，１７／８３ ＵＶ－面積％，混合物であるＱＳ２１に起因）
ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（分子２８）の合成；図３９参照
ＱＳ－２１（２．４２ｍｇ、１．２２μｍｏｌ；図４１）、ＡＥＭ（１．６８ｍｇ、６．６１μｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（１．４８ｍｇ、３．８９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（１．３４μＬ、０．０１２ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ．２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（１．８０ｍｇ、７０％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９２％（精密質量：２１１０，４異性体：Ａｐｉ／Ｘｙｌ（２：１））。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１１０［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳｒ．ｔ．（分）：２．８４／２．９３１Ｂ（二重ピーク，１０／９０ ＵＶ－面積％，混合物であるＱＳ２１に起因）
ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）（分子２９）の合成；図４０Ａ参照
ＱＳ－２１－Ａｌｄ－ＯＨ（１．９２ｍｇ、０．９６４μｍｏｌ）、ＡＥＭ（１．２９ｍｇ、５．０８μｍｏｌ）、及びＨＡＴＵ（１．１０ｍｇ、２．８９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（１．０６μＬ、９．６４μｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ．２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（１．４６ｍｇ、７２％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９２％（精密質量：２１１２，４異性体：Ａｐｉ／Ｘｙｌ（２：１））。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１１２［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳｒ．ｔ．（分）：２．８３／２．９２１Ｂ（二重ピーク，７／９３ ＵＶ－面積％，混合物であるＱＳ２１に起因）
ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの合成（図４０Ｂ；分子３０）
ＱＳ２１（４．８２ｍｇ、２．４２μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（４．１１ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を、メタノール（超乾燥、０．２５ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥した。次に生成物を、分取ＭＰ－ＬＣ２Ａを用いて再精製した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２．７８ｍｇ、５２％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９６％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２１９６［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．４４１Ｂ（混合物であるＱＳ２１に起因する多重ピーク）
ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤの合成（図４０Ｃ；分子３１）
ＱＳ２１（４．８９ｍｇ、２．４６μｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（１．２９ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）、及びＢＯＰ（３．２６ｍｇ、７．３７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（２．７０μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（３．７６ｍｇ、７４％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９４％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０７６［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．７８１Ｂ（混合物であるＱＳ２１に起因する多重ピーク）
ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）の合成（図４０Ｄ；分子３２）
ＱＳ２１－Ｇｌｕ（２．４７ｍｇ、１．１９μｍｏｌ）及びＥＭＣＨ．ＴＦＡ（２．０２ｍｇ、５．９５μｍｏｌ）を、メタノール（超乾燥、１００μＬ）中に溶解した。次に、ＴＦＡ（０．３６μＬ、４．７６μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。２時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２．２５ｍｇ、８３％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９５％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２２８３［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．８８１Ｂ（混合物であるＱＳ２１に起因する多重ピーク）
ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）の合成（図４０Ｅ；分子３３）
ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）（４．９０ｍｇ、２．４６μｍｏｌ）、ＡＭＰＤ（１．２９ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）、及びＢＯＰ（３．２６ｍｇ、７．３７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）及びＮＭＭ（２．７０μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。反応混合物を１分間振盪し、室温で静置した。１時間後、反応混合物を分取ＭＰ－ＬＣ２Ａに供した。生成物に対応する分画を直ちに一緒にプールし、凍結し、一晩凍結乾燥して、標題化合物（２．１６ｍｇ、４２％）を白色のふわふわした固体として得た。ＬＣ－ＭＳに基づく純度９６％。
ＬＲＭＳ（ｍ／ｚ）：２０７７［Ｍ－１］１－
ＬＣ－ＭＳ ｒ．ｔ．（分）：２．７７１Ｂ（混合物であるＱＳ２１に起因する多重ピーク）
実施例２：サポニン誘導体の活性－予備実験
本明細書に記載されたサポニン修飾は、エンドソーム脱出を促進するサポニンの能力を実質的に妨害しないことが判明した（エンドソームの内側でコンジュゲートから解放された修飾サポニン又はサポニン）。実験の結果は、以下の表Ｅｘ２に要約される。
化学修飾されたサポニンＳＯ１８６１は、細胞系バイオアッセイにおいて、読取り値としての相対的細胞生存率によって反応性を示した。ＨｅＬａ細胞を、以下の構成で７２時間インキュベートし、７２時間のインキュベーションの前後における細胞生存率を評価した。実験では、細胞を１．５ｐＭのジアンチン－ＥＧＦコンジュゲートに暴露した。ネガティブコントロールは、ジアンチン－ＥＧＦ無しで、バッファビヒクル及び１０マイクログラム／ｍＬサポニンとインキュベートした細胞であった。細胞生存率は、サポニン及びＥＧＦ－ジアンチンの双方が除外されたコントロールについて１００％に設定した。ポジティブコントロールは、１０マイクログラム／ｍＬの非修飾サポニンＳＯ１８６１＋ジアンチン－ＥＧＦであった。７２時間後の細胞生存率は、本質的に０％であった。化学修飾されたサポニンバリアントについては、１０マイクログラム／ｍＬサポニンを１．５ｐＭのジアンチン－ＥＧＦと組み合わせて検査した。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、１０マイクログラム／ｍＬにおいて細胞生存率を低減した。
これらのデータは、サポニンが、遊離のアルデヒド基において、又は遊離のカルボニル基において、エンドソーム脱出促進活性を失うことなく修飾され得ることを実証する。
Figure 2023532681000147
実施例３：サポニン誘導体の活性－詳細な研究
種々のサポニン（例えば、ＳＯ１８６１、ＱＳ－２１）を、細胞に対し、「遊離の」非コンジュゲート分子として、標的発現細胞の増強された細胞殺傷活性を生じる結果となる、リガンド毒物融合物（例えば、ＥＧＦ－ジアンチン）又は抗体－タンパク質毒素コンジュゲートと組み合わせて同時投与した。
本発明者らは、ＳＯ１８６１（サポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の根の抽出物から単離及び精製された）及びＱＳ２１（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）から単離及び精製された；Ｄｅｓｅｒｔ Ｋｉｎｇ）を、分子内の種々の位置において化学修飾し（単一、二重、又は三重修飾）、それにより表Ａ２及びＡ３に概説したような一連のサポニン誘導体を提供した。サポニン誘導体を、１）ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ及びＡ４３１）でのリガンド毒素（修飾ＳＯ１８６１／ＱＳ２１滴定＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチン）のエンドソーム脱出促進活性について；２）ＨｅＬａ及びＡ４３１に対する内在的細胞毒性（修飾ＳＯ１８６１／ＱＳ２１滴定）について；及び３）ヒト赤血球溶血活性（ヒト赤血球に対する修飾ＳＯ１８６１／ＱＳ２１滴定）について検査した。
エンドソーム脱出促進活性を測定するため、修飾ＳＯ１８６１を、ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ及びＡ４３１）において、非有効的な定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定した（図１８Ａ－Ｂ、及び１９Ａ－Ｂ参照）。更に、エンドソーム脱出促進活性はまた、非有効的な定濃度の５ｐｍ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定されたサポニン誘導体についても測定された（ＳＯ１８６１とＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ及びブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨとの比較には、図２３Ａ－Ｂを、ＳＯ１８６１とＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、及びＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）との比較には、図２４Ａ－Ｂを参照）。これにより、単一修飾を有する修飾サポニンが、ＳＯ１８６１に比較して、以下の濃度：ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝６００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝６００ｎＭ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝６００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝６００ｎＭ、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝１０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝８００ｎＭ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝１５００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝２０００ｎＭ、及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝２０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝２０００ｎＭ、で活性を示したこと、並びに二重修飾体が、以下のＩＣ５０値：ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝３０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝３０００ｎＭ、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝４０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝４０００ｎＭ、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）（Ａｃ－ＯＨ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝４０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝５０００ｎＭ、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｃ－ＯＨ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝８０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝４０００ｎＭ、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝８０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭ、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝４０，０００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ、で活性を示すことが明らかとなった。検査した三重修飾体は、この濃度では何ら活性を示さなかった。非修飾ＳＯ１８６１コントロールでは、以下のＩＣ５０値：ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝１００ｎＭ、及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝２００ｎＭ、が観察された。修飾ＱＳ２１のエンドソーム脱出促進は、サポニン誘導体を、ＥＧＦＲ発現細胞において、非有効的な定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定することにより測定した（図３０Ａ、及び３０Ｂ）。これにより、以下の修飾ＱＳ２１が、非修飾ＱＳ２１に比較して、以下の濃度：ＱＳ２１では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝２００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝２００ｎＭ、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＯＨでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝６００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝６００ｎＭ、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝６００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝７００ｎＭ、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）では、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝１５００ｎＭ及びＡ４３１で：ＩＣ５０＝３０００ｎＭ、において活性を示すことが明らかとなった。結論として、修飾されていない、ＳＯ１８６１及びＱＳ２１の双方は、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞において、ＩＣ５０＝２００ｎＭで有効であった。単一ＳＯ１８６１／ＱＳ２１修飾体（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＯＨ、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ）は、ＨｅＬａ又はＡ４３１において、ＩＣ５０＝６００ｎＭ－２０００ｎＭで活性を示した（表Ａ５及びＡ６）のに対し、二重ＳＯ１８６１／ＱＳ２１修飾体は、ＨｅＬａ又はＡ４３１細胞において、ＩＣ５０＝１５００ｎＭ－４０，００ｎＭで活性を示した（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１の三重修飾体については、２０，０００ｎＭまで何ら活性は観察できなかった。
上述のとおり、エンドソーム脱出促進活性を測定するために、ＳＯ１８６１誘導体、ＱＳ２１誘導体、及びそれらの非誘導体化対応物を、ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ及びＡ４３１）において、非有効的な定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定した。これにより、非誘導体化ＳＯ１８６１及び非誘導体化ＱＳ２１、並びにＱＳ２１誘導体であるＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤが、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞において、ＩＣ５０＝２００ｎＭで有効であることが明らかとなった。単一ＳＯ１８６１／ＱＳ２１修飾体（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ブロック）（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（メルカプトエタノール）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ）は、ＨｅＬａ又はＡ４３１において、ＩＣ５０＝６００ｎＭ－２０００ｎＭで活性を示した（表Ａ５及びＡ６）のに対し、二重ＳＯ１８６１修飾体及び二重ＱＳ２１修飾体は、ＨｅＬａ又はＡ４３１において、ＩＣ５０＝１５００ｎＭ－４０，０００ｎＭで活性を示した（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１の三重修飾体については、２０，０００ｎＭまで何ら活性は観察できなかった。
毒性測定には、修飾ＳＯ１８６１を、ＨｅＬａ細胞（図２０Ａ及び２１Ａ参照）及びＡ４３１細胞（図２０Ｂ及び２１Ｂ参照）において滴定した。図２５Ａ及び２５Ｂは、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨについての毒性試験の詳細を示し、図２６Ａ及び２６Ｂは、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、及びＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）についての詳細を示す。これにより、非修飾ＳＯ１８６１が、ＨｅＬａ細胞に対し、最も強い内在的毒性：ＩＣ５０＝２０００ｎＭを示すのに対し、単一修飾体ＳＯ１８６１－Ａｃが、ＨｅＬａ細胞に対し、ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭで毒性を示すことが明らかとなった。他の全てのＳＯ１８６１誘導体では、ＨｅＬａ細胞に対する内在的毒性（ＩＣ５０）は、２０，０００ｎＭより高かった。Ａ４３１細胞では、非修飾ＳＯ１８６１の毒性は、ＩＣ５０：１０００ｎＭで観察されるのに対し、単一修飾体ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、受容可能なＩＣ５０＝２０００ｎＭ、ＩＣ５０＝７０００ｎＭ、ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ、及びＩＣ５０＝３０，０００ｎＭで毒性を示す。修飾ＱＳ２１の毒性測定には、サポニン誘導体を、ＨｅＬａ細胞（図３１Ａ）及びＡ４３１細胞（図３１Ｂ参照）で滴定した。これにより、ＱＳ２１では、ＨｅＬａ細胞で：ＩＣ５０＝６０００ｎＭ及びＡ４３１細胞で：ＩＣ５０＝３０００ｎＭ、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＯＨでは、ＨｅＬａ細胞で：ＩＣ５０＝２０．０００ｎＭ及びＡ４３１細胞で：ＩＣ５０＝２０．０００ｎＭ、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭでは、ＨｅＬａで：ＩＣ５０＝＞１００．０００ｎＭ及びＡ４３１細胞で：ＩＣ５０＝＞１００．０００ｎＭ、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）では、ＨｅＬａ細胞で：ＩＣ５０＝＞１００．０００ｎＭ及びＡ４３１細胞で：ＩＣ５０＝＞１００，０００ｎＭ、の毒性を示すことが明らかとなった。ＳＯ１８６１又はＱＳ２１の二重修飾体、及びＳＯ１８６１三重修飾体では、１００，０００ｎＭまで何ら毒性は観察できなかった。上述のとおり、非修飾又は修飾ＳＯ１８６１又はＱＳ２１を、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞に対し滴定した。これにより、非修飾ＳＯ１８６１がＩＣ５０＝１０００ｎＭ（ＨｅＬａ）及びＩＣ５０＝２０００ｎＭ（Ａ４３１）で毒性を示したのに対し、ＱＳ２１がＩＣ５０＝６０００ｎＭ（ＨｅＬａ）（ＩＣ５０＝３０００ｎＭ（Ａ４３１）で毒性を示し、並びにＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤが、ＩＣ５０＝９０００ｎＭ（ＨｅＬａ）及びＩＣ５０＝５０００ｎＭ（Ａ４３１）で毒性を示すことが明らかとなった（表Ａ５及びＡ６）。ＨｅＬａ細胞での単一ＳＯ１８６１修飾体及び単一ＱＳ２１修飾体については、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ブロック）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭは、１００，０００ｎＭまで何ら毒性を示さなかったのに対し、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）は、それぞれＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ、ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭ、ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭで毒性を示した（表Ａ５及びＡ６）。Ａ４３１細胞においては、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ及びＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭは、１００，０００ｎＭまで何ら毒性を示さなかったのに対し、毒性は、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ブロック）（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝７０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（ＩＣ５０＝２０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）について観察できた（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１二重修飾体又はＱＳ２１二重修飾体、及びＳＯ１８６１三重修飾体については、１００，０００ｎＭまで何ら毒性は観察できなかった（表Ａ５及びＡ６）。
加えて、非修飾及び修飾ＳＯ１８６１の溶血活性を、ヒト赤血球溶血アッセイによって測定した（図２２、図２７、図２８、及び図３２参照）。これにより、非修飾ＳＯ１８６１がＩＣ５０＝８０００ｎＭで、及び非修飾ＱＳ２１がＩＣ５０＝３０００ｎＭで、活性を示すことが明らかとなった。単一修飾体ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、１，０００，０００ｎＭまで何ら溶血活性を示さなかったのに対し、ヒト赤血球の溶血活性は、ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝３００，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＯＨ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、及びＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭ）について観察できた（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１又はＱＳ２１二重修飾体については、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）、及びＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）では何ら溶血活性が（１，０００，０００ｎＭまで）観察されなかったのに対し、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（ＩＣ５０＝１００，０００）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝２００，０００）、ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（ＩＣ５０＝１４０，０００）、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｃ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝１００，０００）では溶血活性が観察された。ＳＯ１８６１三重修飾体のいずれについても、１００，０００ｎＭまで溶血は観察できなかった。溶血アッセイにより、非修飾ＳＯ１８６１についてはＩＣ５０＝８０００ｎＭで、及び非修飾ＱＳ２１についてはＩＣ５０＝３０００ｎＭで、また修飾ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤについてはＩＣ５０＝３０００ｎＭで、溶血活性が明らかとなった。単一修飾体ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、１，０００，０００ｎＭまで何ら溶血活性を示さなかったのに対し、ヒト赤血球の溶血活性は、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ブロック）（ＩＣ５０＝３００，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝３０，０００ｎＭ）、ＱＳ２１（Ａｌｄ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭ）、及びＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ（ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭ）で観察できた（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１二重修飾体又はＱＳ２１二重修飾体の場合、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、及びＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）については何らの溶血活性も（１，０００，０００ｎＭまで）観察されなかったのに対し、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（ＩＣ５０＝１００，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）（ＩＣ５０＝２００，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（ＩＣ５０＝１４０，０００ｎＭ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）（ＩＣ５０＝１００，０００ｎＭ）、及びＱＳ２１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）（ＩＣ５０＝４０，０００ｎＭ）について溶血活性が観察された（表Ａ５及びＡ６）。ＳＯ１８６１三重修飾体のいずれについても、１００，０００ｎＭまで溶血は観察できなかった（表Ａ５及びＡ６）。
様々なＱＳサポニン分画の、エンドソーム脱出促進活性（ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞でのサポニン＋５ｐＭ セツキシマブ－サポリンの滴定、図３３Ａ～Ｂ参照）、毒性（ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞でのサポニンの滴定、図３４Ａ～Ｂ参照）、及び溶血活性（ヒト赤血球でのサポニンの滴定、図３２及び３５参照）を検査した。これにより、ＱＳ２１（分画）、ＱＳ１７（分画）、ＱＳ１８（分画）が、ＨｅＬａ細胞及びＡ４３１細胞において、２００ｎＭで活性を示したのに対し、ＱＳ７（分画）は、ＩＣ５０＝６０００ｎＭ（ＨｅＬａ）及び１０，０００ｎＭ（Ａ４３１）で活性を示すことが明らかとなった。毒性測定中、ＱＳ２１（分画）、ＱＳ１７（分画）、ＱＳ１８（分画）が、ＨｅＬａ細胞及びＡ４３１細胞において、ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭで毒性を示したことが観察された場合、一方でＱＳ７（分画）は、ＩＣ５０＝２０，０００ｎＭで毒性を示した（図３４）。次に、溶血アッセイを行い、これにより、ＩＣ５０＝３０００ｎＭでのＱＳ２１（分画）、ＩＣ５０＝５０００ｎＭでのＱＳ１７（分画）、ＱＳ１８（分画）の溶血活性が明らかとなったのに対し、ＱＳ７（分画）では、２０，０００ｎＭまで何ら溶血活性は検出できなかった（図３５）。
種々のＳＯサポニン（ＳＯ１８６２（異性体）、ＳＯ１８３２，ＳＯ１９０４）、並びに抗体－ＳＯ１８６１コンジュゲート（セツキシマブ－ＳＯ１８６１（ＤＡＲ４）、トラスツズマブ－ＳＯ１８６１（ＤＡＲ４））の溶血活性を検査した。これにより、ＳＯ１８６２（異性体、ＳＯ１８３２，ＳＯ１９０４）の溶血活性が、ＳＯ１８６１（ＩＣ５０＝１０，０００ｎＭ）に匹敵していることが明らかとなった（図２９）。セツキシマブ－ＳＯ１８６１（ＤＡＲ４）は、６０，０００ｎＭまで何ら溶血活性を示さなかったのに対し、トラスツズマブ－ＳＯ１８６１（ＤＡＲ４）は、最初の溶血活性を６０，０００ｎＭ以降から示した（ＩＣ５０＝２００，０００ｎＭ）（図２９）。
ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－メルカプトエタノール（ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）の、細胞毒性、溶血活性、及びエンドソーム脱出促進活性を比較した場合、後者２つは同様に又は基本的に等しく細胞毒性であり、溶血活性があり、及びエンドソーム脱出促進活性バイオアッセイにおいて活性があり、並びに後者２つはＳＯ１８６１よりも細胞毒性が低く、溶血活性が低かった。また表Ａ５及びＡ６も参照。
細胞生存率アッセイ
細胞生存率は、ＭＴＳアッセイにより測定され、製造業者の指示に従って実施した（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ）。ＭＴＳ溶液を、１０％ＦＢＳ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を補足した、フェノールレッド無しのＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で２０ｘに希釈した。細胞を、１ウェル当たり２００μＬのＰＢＳで１回洗浄し、その後、１ウェル当たり１００μＬの希釈ＭＴＳ溶液を添加した。プレートを、３７℃で約２０－３０分間インキュベートした。続いて、４９２ｎｍにおける光学密度を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。定量化には、「培地のみ」のウェルのバックグラウンドシグナルを、他の全てのウェルから引き算し、その後に、無処理ウェルのバックグラウンド補正シグナルを、処理ウェルの補正されたバックグラウンドシグナルで割ることにより、無処理／処理細胞の比率を算出した。
ＦＡＣＳ分析
細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を補足したＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で、１０ｃｍディッシュにおいて５００，０００ｃ／プレートで播種し、集密度９０％が達成されるまで４８時間インキュベートした（５％ＣＯ２、３７℃）。次に、細胞をトリプシン処理（ＴｒｙｐＩＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｇｉｂｃｏ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）して単一細胞とした。０．７５ｘ１０６細胞を１５ｍＬのファルコンチューブに移して遠心分離した（１，４００ｒｐｍ、３分）。上清を捨てる一方、細胞ペレットは水中に沈んだままにした。ペレットをボルテックスシェイカー上でファルコンチューブを穏やかにタップすることにより溶解し、細胞を４ｍＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）で洗浄した。洗浄後、細胞を３ｍＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）中に再懸濁し、３つの丸底ＦＡＣＳチューブに等しく分割した（１ｍＬ／チューブ）。細胞を再度遠心分離し、２００μＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）又は２００μＬの抗体溶液；１９５μＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）中に５μＬの抗体を含有する、の中に再度懸濁した。ＡＰＣマウスＩｇＧ１、κアイソタイプＣｔｒｌ ＦＣ（＃４００１２２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、アイソタイプコントロールとして使用し、ＡＰＣ抗ヒトＥＧＦＲ（＃３５２９０６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用した。試料を、チューブローラーミキサー上で、４℃で３０分間インキュベートした。その後、細胞を冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の２％ＰＦＡ溶液を用いて、室温で２０分間固定した。細胞を、冷ＰＢＳで２回洗浄し、ＦＡＣＳ分析用には２５０～３５０μＬの冷ＰＢＳ中に再懸濁した。試料をＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメトリーシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。ＦＡＣＳ分析の結果は、表Ａ４に要約される。
Figure 2023532681000148
溶血アッセイ
赤血球（ＲＢＣ）を、フィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）勾配を用いて軟膜から分離した。得られたＲＢＣペレット（約４～５ｍＬ）を、５０ｍＬのＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋無し、ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）で２回洗浄した。細胞を、室温で８００ｘｇ、１０分間の遠心分離によりペレット化した。ＲＢＣをカウントし、全細胞カウントに基づき、ＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋無し）中に５００，０００，０００ｃ／ｍＬで再懸濁した。
サポニン希釈物を、ＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋あり、ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で、１．１１ｘ最終強度において調製した。ポジティブ溶血コントロールには、０．０２％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）－Ｘ１００溶液を、ＤＰＢＳ＋／＋中に調製した。９６ウェルＶ底プレート１ウェル当たり、全ての化合物溶液の１３５μＬを分注した。これに、１５μＬのＲＢＣ懸濁液を添加し、短時間混合した（１０秒－６００ｒｐｍ）。プレートを、穏やかに撹拌しながら室温で３０分間インキュベートした。その後、プレートを８００ｘｇで１０分間回転してＲＢＣをペレット化し、１００－１２０μＬの上清を、標準的な９６ｗｐ（９６ウェルプレート）に移した。続いて、４０５ｎｍにおけるＯＤを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。定量化には、「ＤＰＢＳ＋／＋のみ」のウェルのバックグラウンドシグナルを、他の全てのウェルから引き算し、その後に、処理ウェルのバックグラウンド補正シグナルを、０．０２％トリトン－Ｘ１００（ｘ１００）ウェルの補正されたバックグラウンドシグナルで割ることにより、０．０２％トリトン－Ｘ１００と比較する溶血のパーセントを算出した。
Figure 2023532681000149
Figure 2023532681000150
Figure 2023532681000151
Figure 2023532681000152
実施例４：サポニン誘導体の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）
材料及び方法
サポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）（ＳＯ）由来（表Ａ７）及びキラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）（ＱＳ）由来（表Ａ８及び表Ａ９）のサポニンの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を、ＤｅＶｅｎｄｉｔｔｉｓらの方法（Ａ ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｉｃｅｌｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １１５，Ｉｓｓｕｅ ２，Ａｕｇｕｓｔ １９８１，Ｐａｇｅｓ ２７８－２８６）により、以下のように測定した：
精製水（ＭＱ）又はＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ＋／＋）のいずれかにおける８－アニリノナフタレン－１－スルホン酸（ＡＮＳ）の発光スペクトルを、ＣＭＣの下及び上の範囲をカバーするための１～１４００μＭの範囲のサポニンの乾燥重量濃度において測定した。ＣＭＣより上では、ミセル内への蛍光色素のポジショニングに起因して、ＡＮＳの蛍光収率は増加し、極大発光の波長は減少する。蛍光収率は、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、３５５ｎｍの励起波長、及び４６０ｎｍの発光波長において記録した。試料及び測定当たり、６μｇ、濃度７５．８６μＭのＡＮＳを用いた。
結果
ＳＯ１８６１サポニン
官能基アルデヒド（Ａｌｄ）、グルクロン酸（Ｇｌｕ）における化学修飾、及びアセチル基（Ａｃ）の除去は、それぞれのサポニンのミセル特性に対し、強い影響を示した。図４２に示したように、ＳＯ１８６１サポニン上のそれぞれの官能基の単一修飾は、得られたＡＮＳの相対蛍光値の傾きにおいて表されるミセル形成能に有意に影響を及ぼした。グルクロン酸に対する修飾（ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、ＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ）は明らかに、より急勾配の傾きを生じる結果となり（図４２）、ネイティブＳＯ１８６１について得られた１８５μＭのようにより低いＣＭＣが得られた。同様の観察が、ブロックＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ試料について得られている。しかしながらアルデヒド及びアセチル基の修飾（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＯＨ、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、ＳＯ１８６１－Ａｃ－ＯＨ）は、有意により平坦な傾きを生じる結果となり（図４２）、ネイティブＳＯ１８６１についてよりも高いＣＭＣ値をもたらした。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ試料は、得られた傾きがほぼ平坦であり、８００μＭまでの濃度でもＣＭＣが測定できなかったことから、特に興味深かった。
修飾の部位に関する同様の観察が、ＳＯ１８６１サポニンの二重修飾（図４３）及び三重修飾（図４４）について得られている。グルクロン酸に対する修飾（ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、ＳＯ１８６１－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｃ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ））は、結果としてより急勾配のＡＮＳ蛍光収率の傾きを、及びそれ故により低いＣＭＣ値を生じる一方、アルデヒド及びアセチル位置に対する修飾（ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ａｃ－ＯＨ））は、平坦なＡＮＳ蛍光収率の傾きを、及びそれ故ネイティブＳＯ１８６１に対して増大されたＣＭＣ値をもたらした（表Ａ７）。
三重修飾サポニンＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）及びＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）を比較した場合、ＳＯ１８６１－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）におけるグルクロン酸に対する修飾は、結果としてそれぞれのＡＮＳ蛍光収率のより平坦な傾きを生じたのに対し、ＳＯ１８６１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ａｃ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）におけるグルクロン酸に対する修飾は、ネイティブＳＯ１８６１よりも、結果としてそれぞれのＡＮＳ蛍光収率の急勾配な傾きを生じた（図４４）。これらの結果は、ＣＭＣが考慮される場合に、Ｇｌｕ－修飾誘導体（遊離のサポニンよりも低いＣＭＣを有する）であっても、上記アルデヒド及び／又はアセトキシ修飾が、Ｇｌｕ－修飾のネガティブな効果を少なくとも部分的に軽減して、ＣＭＣを増大し得ることから、ＣＭＣが考慮される場合のアルデヒド及び／又はアセトキシ位置における修飾の重要性を示している。
Figure 2023532681000153
ＱＳサポニン
キラヤ・サポナリア由来のサポニン（ＱＳ）、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１ Ｆｒａｃ、及びＱＳ２１ ＳＰについて、ＣＭＣ値が測定されており、それらは表Ａ８に示されている。図４５に示されるとおり、関連のＱＳサポニンのＡＮＳ蛍光収率の傾きは、導き出されたＣＭＣ値と一致する。得られたＣＭＣ値は、４９μＭという最も高いＣＭＣ値のＱＳ２１ ＳＰからはじまって、全て７０μＭ周辺の類似したＣＭＣ値を示すＱＳ－１７、ＱＳ－１８、ＱＳ－２１ Ｆｒａｃに向かって減少する傾向を示す。最終的には、ＱＳ－７について、ＣＭＣ値２３０μＭが得られた。
精製水（ＭＱ）及びＰＢＳ中で測定されたＱＳ２１ ＳＰのＡＮＳ蛍光収率を比較した場合、精製水（ＭＱ）中の傾きは、わずかにより急勾配であり、精製水中ではわずかに高い予想ＣＭＣ値をもたらす（図４６、表Ａ９）。
単一修飾ＱＳ２１サポニンＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（分子３０；図４０Ｂ）、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）、及びＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ（図４７Ａ、図４７Ｂ）では、グルクロン酸に対するＡＭＰＤ修飾（ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、図４７Ｂ）のみが、結果として４０μＭというより低いＣＭＣ値を生じるネイティブＱＳ２１について、より急勾配のＡＮＳ蛍光収率の傾きをもたらした（表Ａ９）。グルクロン酸（ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＥＭ）及びアルデヒド位置（ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）の双方における、他の全てのＱＳ２１単一修飾は、結果としてネイティブＱＳ２１よりも平坦なＡＮＳ蛍光収率の傾きを生じた（図４７Ｂ）。
サポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）サポニンＳＯ１８６１に対する二重修飾についての知見と同様に、ＱＳ２１サポニンのＡｌｄＧｌｕ修飾（ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）、図４０Ｅ、分子３３，図４７Ｃ）もまた、結果として３９μＭというより低いＣＭＣ値を生じるネイティブＱＳ２１について、より急勾配のＡＮＳ蛍光収率の傾きをもたらした（表Ａ９）。グルクロン酸及びアルデヒド位置の双方における、他の全てのＱＳ２１二重修飾体（ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ－（Ｇｌｕ－ＡＥＭ）、図４７Ｃ）は、結果としてネイティブＱＳ２１よりも平坦なＡＮＳ蛍光収率の傾きを生じた。
Figure 2023532681000154
Figure 2023532681000155
実施例５：ＳＯ１８６１及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨのエンドソーム脱出促進活性
ＳＯ１８６１及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（またＳＯ１８６１－ＥＭＣＨとも称される、例えば図４８－５８）を、標的化されたタンパク質毒素のエンドソーム脱出を促進するそれらの能力について検査した。このため、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを、ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）について、定濃度の１０ｐＭ セツキシマブ－サポリン（ＤＡＲ４で、タンパク質毒素、サポリンにコンジュゲートされたセツキシマブ）に対し滴定した。これにより、ＳＯ１８６１（ＩＣ５０＝８００ｎＭ）及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝２０００ｎＭ）が、１０ｐＭ セツキシマブ－サポリンとの組み合わせにおいて、Ａ４３１細胞の有効な細胞殺傷を誘発したのに対し、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ単独では、何ら細胞殺傷活性を示さないことが明らかとなった（図４８）。
次に、セツキシマブ－ジアンチン又はセツキシマブ－サポリンを、種々の定濃度のＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨに対し滴定した。これにより、４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、４８２９ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、又は１５００ｎＭ ＳＯ１８６１の存在下での、低いｐＭ濃度のセツキシマブ－ジアンチン（ＩＣ５０＝１ｐＭ、図４９）又はセツキシマブ－サポリン（ＩＣ５０＝０，５ｐＭ、図５０）による効率的な細胞殺傷が明らかとなった。この細胞殺傷効果は、３００ｎＭ ＳＯ１８６１又は３００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨでは観察されなかった（図４９及び５０）。
次に、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを、ＥＧＦＲ発現細胞（Ａ４３１）で、定濃度の１０ｐＭ ＥＧＦジアンチン（ＥＧＦＲ標的化融合タンパク質毒素）に対して滴定した。これにより、ＳＯ１８６１（ＩＣ５０＝８００ｎＭ）及びＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝２０００ｎＭ）が、１０ｐＭのＥＧＦジアンチンとの組み合わせにおいて、Ａ４３１細胞の効率的な細胞殺傷を誘発するのに対し、ＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ単独では、何ら細胞殺傷活性を示さないことが明らかとなった（図５１）。
次に、ＥＧＦジアンチンを、種々の定濃度のＳＯ１８６１又はＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨに対して滴定した。これにより、４８２９ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、又は１５００ｎＭ ＳＯ１８６１の存在下での、低いｐＭ濃度のＥＧＦジアンチン（ＩＣ５０＝０，１ｐＭ、図５２）による効率的な細胞殺傷が明らかとなった。この細胞殺傷効果は、１０ｎＭ ＳＯ１８６１又は３００ｎＭ ＳＯ１８６１では観察されなかった（図５２）。
次に、トラスツズマブ－ジアンチン又はトラスツズマブ－サポリン（ＤＡＲ４で、タンパク質毒素、サポリンにコンジュゲートされたトラスツズマブ）を、ＨＥＲ２発現細胞（ＳＫ－ＢＲ－３）で、定濃度の１５００ｎＭ ＳＯ１８６１又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨに対して滴定した。これにより、１５００ｎＭ ＳＯ１８６１、又は４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの存在下での、低いｐＭ濃度のトラスツズマブ－ジアンチン（ＩＣ５０＝０，１ｐＭ）又はトラスツズマブ－サポリン（ＩＣ５０＝０，１ｐＭ）による、効率的な細胞殺傷が明らかとなった（図５３）。
図４８～５３に概説されたこれら全ての結果は、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨが、標的化タンパク質毒のエンドソーム脱出及び細胞質送達を効率的に促進し、それにより標的化タンパク質毒素の有効濃度を、ｎＭレンジからｐＭレンジへ有意に低減することを示している。
ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを、ＨＳＰ２７ｍＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＢＮＡ、架橋型核酸）の、エンドソーム脱出を促進する能力について検査した。このため、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２発現細胞（Ａ４３１）で、定濃度の１００ｎＭ ＨＳＰ２７ＢＮＡ、１００ｎＭ セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＤＡＲ４で、ＨＳＰ２７ＢＮＡにコンジュゲートされたセツキシマブ）、又は１００ｎＭ トラスツズマブＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＤＡＲ４で、ＨＳＰ２７ＢＮＡにコンジュゲートされたトラスツズマブ）に対して滴定した。これにより、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（ＩＣ５０＝７００ｎＭ）が、Ａ４３１細胞において、１００ｎＭ ＨＳＰ２７ＢＮＡ、１００ｎＭ セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（図５４）、又は１００ｎＭ トラスツズマブＨＳＰ２７ＢＮＡとの組み合わせにおいて、効率的なＨＳＰ２７遺伝子サイレンシング細胞を誘発することが明らかとなった（図示せず）。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ単独では、何らＨＳＰ２７遺伝子サイレンシング活性は示されなかった（図５４）。
次に、セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＤＡＲ１．５又はＤＡＲ４）、トラスツズマブＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＤＡＲ４．４）を、ＥＧＦＲ（Ａ４３１）又はＨＥＲ２（ＳＫ－ＢＲ－３）発現細胞において、種々の定濃度のＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨに対して滴定した。これは、Ａ４３１細胞における、低いｎＭ濃度のセツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＩＣ５０＝０，５ｎＭ、図５５）の、４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの存在下での効率的なＨＳＰ２７遺伝子サイレンシングを示したのに対し、セツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ単独、又はセツキシマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ＋１００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨでは、何ら遺伝子サイレンシング活性を示さないか、又は非常に高い濃度においてわずかな活性を示すに過ぎなかった（ＩＣ５０＞１００ｎＭ；図５５０）。ＳＫＢＲ－３細胞では、トラスツズマブＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＩＣ５０＝０，５ｎＭ、図５６）が、４０００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの存在下で効率的なＨＳＰ２７遺伝子サイレンシング活性を示したのに対し、トラスツズマブ－ＨＳＰ２７ＢＮＡ単独、又はトラスツズマブＨＳＰ２７ＢＮＡ＋１００ｎＭ ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、わずかな遺伝子サイレンシング活性を示すに過ぎなかった（ＩＣ５０＞１００ｎＭ；図５６）。
次に、非標的化ＨＳＰ２７ＢＮＡを、種々の細胞系において、定濃度のＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨに対し滴定した。これは、Ａ４３１、Ａ２０５８、及びＳＫ－ＢＲ－３細胞における、４０００ｎＭ又は４８２９ｎＭのＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの存在下での、低いｎＭ濃度のＨＳＰ２７ＢＮＡ（ＩＣ５０（ＳＫ－ＢＲ３）＝２ｎＭ；ＩＣ５０（Ａ４３１）＝１０ｎＭ；ＩＣ５０（Ａ２０５８）＝１０ｎＭ）による効率的なＨＳＰ２７遺伝子サイレンシングを示したのに対し（図５７及び５８）、ＨＳＰ２７ＢＮＡ単独は、はるかに高い濃度において遺伝子サイレンシングを誘発した（ＩＣ５０（ＳＫ－ＢＲ３）＝３００ｎＭ；ＩＣ５０（Ａ４３１）＝１０００ｎＭ；ＩＣ５０（Ａ２０５８）＞１０００ｎＭ）（図５７及び５８）。ＨＳＰ２７ＢＮＡのその活性（ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨのあり無しで）を、ＨＳＰ２７ＬＮＡ（ＬＮＡ、ロック核酸）活性と比較した場合、本発明者らは、エンドソーム脱出／遺伝子サイレンシング促進係数は同程度であるが、ＨＳＰ２７ＢＮＡと比較してより高いＨＳＰ２７ＬＮＡ濃度においてあることを観察した（図５８）。
このことは全て、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨが、標的化されたアンチセンスＢＮＡオリゴ並びに非標的化ＢＮＡ／ＬＮＡオリゴの、エンドソーム脱出及び細胞質送達を効率的に促進すること、それにより、標的化及び非標的化アンチセンスオリゴの有効濃度を、μＭレンジから低いｎＭレンジへ有意に低減することを示している。
材料
トラスツズマブ（Ｔｒａｓ、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）、セツキシマブ（Ｃｅｔ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）。ジアンチン－ｃｙｓは、Ｐｒｏｔｅｏｇｅｎｉｘ、Ｆｒａｎｃｅから製造及び購入し、ＥＧＦジアンチンは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から、標準的な手順により調製した。セツキシマブ－サポリン及びトラスツズマブ－サポリンコンジュゲートは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から製造及び購入した。
方法
フラッシュクロマトグラフィー
Ｇｒａｃｅ Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ Ｘ２（登録商標）Ｃ－８１５ Ｆｌａｓｈ；溶媒送達システム：オートプライミングを備えた３－ピストンポンプ、単回のランで４つまでの溶媒を用いた４つの独立したチャンネル、溶媒枯渇時のオートスイッチライン；最大ポンプ流量率２５０ｍＬ／分；最大圧５０ｂａｒ（７２５ｐｓｉ）；検出：ＵＶ２００～４００ｎｍ、４つまでのＵＶシグナルと全ＵＶ範囲のスキャンの組み合わせ、ＥＬＳＤ；カラムサイズ：装置上で４～３３０ｇ、ルアー型、７５０ｇから３０００ｇまで、オプションのホルダー付き。
ＨＳＰ２７ＢＮＡオリゴ配列
Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１１）［Ｙ Ｚｈａｎｇ，Ｚ Ｑｕ，Ｓ Ｋｉｍ，Ｖ Ｓｈｉ，Ｂ Ｌｉａｏ１，Ｐ Ｋｒａｆｔ，Ｒ Ｂａｎｄａｒｕ，Ｙ Ｗｕ，ＬＭ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ ＩＤ Ｈｏｒａｋ，Ｄｏｗｎ－ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｔａｒｇｅｔｓ ｕｓｉｎｇ ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ（ＬＮＡ）－ｂａｓｅｄ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１１）１８，３２６－３３３］）によるＨＳＰ２７ ＢＮＡオリゴ（５’－ＧＧＣａｃａｇｃｃａｇｔｇＧＣＧ－３’）（［配列番号：２］）は、Ｂｉｏ－Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｉｎｃ．（Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，Ｔｅｘａｓ）において、５’－チオールＣ６リンカーのあり無しでオーダーした。ＨＳＰ２７ ＬＮＡオリゴ（５’－ｇｇｃａｃａｇｃｃａｇｔｇｇｃｇ－３’）（［配列番号：３］）は、Ｂｉｏ－Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｉｎｃ．（Ｌｅｗｉｓｖｉｌｌｅ，Ｔｅｘａｓ）においてオーダーした。
ＲＮＡ単離及び遺伝子発現分析
細胞由来のＲＮＡは、標準的なプロトコール（Ｂｉｏｒａｄ）に従って単離及び分析した。使用されたｑＰＣＲプライマーを、表Ａ１０に示す。
Figure 2023532681000156
トラスツズマブ－サポリン及びセツキシマブ－サポリンの合成
カスタムｍＡＢ－サポリンコンジュゲートは、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）より製造及び購入した。
トラスツズマブ－ジアンチン及びセツキシマブ－ジアンチンの合成
ジアンチン－Ｃｙｓ（１７．０ｍＬ、約９．６ｍｇ）は、限外濾過により、Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔ１５フィルターチューブ（３，０００ｇ、２０℃、１０分間）を用いて濃縮した。得られた３．２５ｍＬのアリコートを、ＴＢＳ ｐＨ７．５で溶出するｚｅｂａ １０ｍＬスピンカラムを用いてゲル濾過した。
トラスツズマブ（ｍＡＢ）又はセツキシマブ（ｍＡＢ）（０．３０ｍＬ、約１０ｍｇ）を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．５で１０ｍｇ／ｍＬに希釈し、ＤＰＢＳ ｐＨ７．５で溶出するｚｅｂａ ５ｍＬスピンカラムを通して脱塩し、２．５０ｍｇ／ｍＬにノーマライズした。ｍＡｂのアリコートに対し、ＤＭＳＯ中に新たに調製されたＳＭＣＣ溶液のアリコート（１．００ｍｇ／ｍＬ、４．２０モル当量、１３．９ｘ１０－５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を短時間ボルテックスし、次いでローラーミキシングを用いて２０℃で６０分間インキュベートした。その後、反応を、ＤＰＢＳ ｐＨ７．５中に新たに調製されたグリシン溶液のアリコート（２．０ｍｇ／ｍＬ、５．０モル当量、６９．５ｘ１０－５ｍｍｏｌ）の添加によりクエンチした。ＴＢＳ ｐＨ７．５で溶出するｚｅｂａ １０ｍＬスピンカラムを用いたゲル濾過の後、ｍＡｂ－ＳＭＣＣ（４．２７ｍｇ、２．８０ｘ１０－５ｍｍｏｌ、１．５１４ｍｇ／ｍＬ）が得られた。
ジアンチン－Ｃｙｓ（７．５４ｍｇ、２５．３ｘ１０－５ｍｍｏｌ、２．２５８ｍｇ／ｍＬ）に対し、ＴＢＳ ｐＨ７．５中に新たに調製されたＴＣＥＰ溶液のアリコート（１．００ｍｇ／ｍＬ、０．５モル当量、１２．６ｘ１０－５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を短時間ボルテックスし、次いでローラーミキシングを用いて２０℃で６０分間インキュベートした。その後、ＴＢＳ ｐＨ７．５で溶出するｚｅｂａ １０ｍＬスピンカラムを用いたゲル濾過により、ジアンチン－ＳＨ（６．０ｍｇ、２０．２ｘ１０－５ｍｍｏｌ、１．７２２ｍｇ／ｍＬ、ジアンチン：ＳＨ＝１：１）が得られた。
バルクｍＡｂ－ＳＭＣＣに対し、ジアンチン－ＳＨのアリコート（７．２０モル当量）を添加し、混合物を短時間ボルテックスし、次いで２０℃で一晩インキュベートした。約１６時間後、ＴＢＳ ｐＨ７．５中に新たに調製されたＮＥＭ溶液のアリコート（２．５０ｍｇ／ｍＬ、５．０モル当量、１０１ｘ１０－５ｍｍｏｌ）の添加により、反応をクエンチした。反応混合物を、０．４５μｍに対して濾過し、次いで限外濾過により、Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔ１５フィルターチューブ（３，０００ｇ、２０℃、１５分間）を用いて、＜２ｍＬに濃縮した。コンジュゲートを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．５で溶出する１．６ｘ３５ｃｍのＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ＰＧカラムを用いたゲル濾過により精製した。
抗体－（Ｌ－ＨＳＰ２７ ＢＮＡ）ｎ［ＨＳＰ２７ ＢＮＡジスルフィド上で］
ＤＡＲ４でのＰＥＧ４－ＳＰＤＰを介した、トラスツズマブ－（Ｌ－ＨＳＰ２７）４、セツキシマブ－（Ｌ－ＨＳＰ２７）４の合成、及びＤＡＲ２でのＰＥＧ４－ＳＰＤＰを介した、セツキシマブ－（Ｌ－ＨＳＰ２７）２の合成
トラスツズマブ及びセツキシマブは、以降「Ａｂ」と称される。Ａｂは、ＡｂとＨＳＰ２７ ＢＮＡとの間に不安定な（Ｌ）ジスルフィド結合を形成するテトラ（エチレングリコール）スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＰＥＧ４－ＳＰＤＰ）リンカーを介して、ＨＳＰ２７ ＢＮＡジスルフィドにコンジュゲートされた。手順を、例示的にトラスツズマブ－（Ｌ－ＨＳＰ２７ ＢＮＡ）４について記載する：
ＨＳＰ２７ ＢＮＡジスルフィドオリゴ（２．７ｍｇ、４７０ｎｍｏｌ、６．１０ｍｇ／ｍＬ）を、ＴＣＥＰ（１０モル当量、４．７μｍｏｌ、１．３４ｍｇ、５０ｍｇ／ｍＬ）と、ローラーミキシングを用いて２０℃で３０分間反応させた。その後、オリゴ－ＳＨを、ＴＢＳ ｐＨ７．５中に溶出するＰＤ１０ Ｇ２５脱塩カラムによって精製して、速やかに使用した。オリゴ－ＳＨが得られた（２．４８ｍｇ、９０％、１．２４ｍｇ／ｍＬ、ＳＨ対オリゴ比＝０．８）。
トラスツズマブ（１．５ｍｇ、１０．３ｎｍｏｌ、２．５０ｍｇ／ｍＬ）を、ＤＭＳＯ（１ｍｇ／ｍＬ）中に新たに調製されたＰＥＧ４－ＳＰＤＰ溶液のアリコート（６．８１モル当量、７０．１ｎｍｏｌ、３９μｇ）と、ローラーミキシングを用いて２０℃で６０分間反応させた。その後、反応をグリシン（ＴＢＳ ｐＨ７．５中に新たに調製された２ｍｇ／ｍＬの溶液の１５．１μＬ）でクエンチし、次いでｚｅｂａ脱塩カラムにより、ＴＢＳ ｐＨ７．５で溶出して脱塩した。得られたＴｒａｓ－Ｓ－ＰＥＧ４－ＳＰＤＰのアリコートを採取して、ＵＶ－Ｖｉｓ分析により検査した。ＳＰＤＰの取込みは、ＴＣＥＰを用いてピリジル－２－チオン（ＰＤＴ）を遊離させ、そして３４３ｎｍにおけるＵＶ－Ｖｉｓ分析によって測定した（ＳＰＤＰ対Ａｂ比：４）。残りのＴｒａｓ－（Ｓ－ＰＥＧ４－ＳＰＤＰ）４を、新たに調製されたＨＳＰ２７オリゴヌクレオチド（オリゴ－ＳＨ）のアリコート（８モル当量、８２．４ｎｍｏｌ、１．２４ｍｇ／ｍＬ）と反応させ、ローラーミキシングを用いて２０℃で一晩インキュベートした。１７時間後、コンジュゲートをＵＶ－Ｖｉｓ分析によって分析し、ピリジル－２－チオン（ＰＤＴ）の置換によるＨＳＰ２７の取込みを、３４３ｎｍにおいて確認した。粗コンジュゲートを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．５で溶出する１．６ｘ３３ｃｍのＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０カラムを用いて精製した。得られたトラスツズマブ－（Ｌ－ＨＳＰ２７）４を、単一の分画として得た。収率：ｎ．ｄ．純度：９６％、ＨＳＰ２７ ＢＮＡ対Ａｂ比＝４．４
実施例６－サポニンのエンドソーム脱出促進活性
先には、種々のサポニン（ＳＯ１８６１、ＳＡ１６４２）の効能が、「遊離の」非コンジュゲート分子として、リガンド毒素融合物（例えば、ＥＧＦジアンチン）又は抗体－タンパク質毒素コンジュゲートと組み合わせて細胞に同時投与され、標的発現細胞の細胞殺傷活性を促進する結果を生じている。本明細書では、サポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の根の抽出物から単離された３つの異なるサポニン分子（ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）、ＳＯ１８３２、及びＳＯ１９０４）を、ＨｅＬａ（ＥＧＦＲ＋）細胞について、非有効定濃度の１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンのあり無しで滴定した。これは、全ての検査されたサポニンバリアントについて、ＥＧＦジアンチン無しの処理と比較して、強い細胞殺傷活性の促進を示した（ＩＣ５０＝３００ｎＭ；図６３Ａ）。次に、ＥＧＦジアンチンを、定濃度のサポニン（約１０００ｎＭ）を用いて滴定し、これは、全ての使用したサポニンＳＯ１８６１、ＳＯ１８６２（ＳＯ１８６１の異性体）、ＳＯ１８３２、及びＳＯ１９０４について観察された、ＥＧＦジアンチンの低いｐＭ濃度における強い標的化細胞殺傷促進を示した（ＩＣ５０＝０．４ｐＭ；図６３Ｂ）。ＥＧＦ－ジアンチン単独では、非常に高い濃度において細胞殺傷を誘発し得たに過ぎない（ＩＣ５０＝１０．０００ｐＭ）。これは、これらの特定のタイプのサポニンが全て、非常に少量の利用可能な標的化毒素を用いるだけで、効率的にエンドソーム脱出を誘発する内在的な能力を持つことを示している。
この検査を拡張するため、他の供給源に由来するサポニンを分析した。カスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ ｅｌｅｇａｎｓ Ｍ．Ｂｉｅｂ）の根の抽出物から精製されたサポニン（ＧＥ１７４１）を、ＨｅＬａ細胞で、１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンのあり無しで滴定し、精製されたＳＯ１８６１と比較した。ＧＥ１７４１もまた、ＥＧＦジアンチン誘発性のＨｅＬａ細胞殺傷を促進するが、ＳＯ１８６１と比較してやや低い効率を示し（ＧＥ１７４１ ＩＣ５０＝８００ｎＭ、図６３Ｃ）、またより高い一般毒性を示した（ＥＧＦジアンチン無しでＩＣ５０＝５，０００ｎＭ、図６３Ｃ）。同様の検査においては、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニンの異なる部分精製された混合物（ＱＳｍｉｘ１～３）が、ＨｅＬａ細胞で、１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンと同時投与され、３つのうち２つ（ＱＳｍｉｘ１及びＱＳｍｉｘ３）について、ＳＯ１８６１と同様の活性が示された（ＩＣ５０ ＱＳｍｉｘ／ＱＳｍｉｘ３＝３００ｎＭ；図６３Ｄ）。ＱＳｍｉｘ（２）は、１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチン誘発性の細胞殺傷の促進においては効率がより低いが（ＩＣ５０＝２０００ｎＭ；図６３Ｄ）、しかしながら、何ら一般毒性は観察されない。これは、ＱＳ抽出物においても、特定のタイプのサポニンが利用可能であって、標的化リガンド毒素ＥＧＦジアンチンのエンドソーム脱出を効率的に誘発することを示す。したがって、本実施例において記載されたサポニン、例えばキラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）サポニン、ＧＥ１７４１、ＳＯ１８６１、ＳＯ１８６２、ＳＯ１８３２、及びＳＯ１９０４は、本発明によって誘導体化するために特に魅力的なサポ二ンである。
実施例７：サポニン及びサポニン誘導体のエンドソーム脱出促進活性
不安定／酸感受性誘導体（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３（またＳＯ１８６１－Ｎ３及びＳＯ１８６１－アジド又はＳＯ１８６１－Ｎ３／アジドとも称される）を、アルデヒド基を介してＳＯ１８６１に適用して、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ又はＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３を生成した。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨの活性を確認するため、ＥＧＦＲ発現（Ａ４３１，ＨｅＬａ）及び非発現細胞（Ａ２０５８）で、固定非有効濃度（１．５ｐＭ）のＥＧＦジアンチンのあり無しで、この分子を滴定した。３つの全ての細胞系において、ＳＯ１８６１単独では強い細胞生存率減少が示されたのに対し、単一化合物としてのＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、２５，０００ｎＭまで何ら毒性を示さなかった（図６４Ａ～Ｃ）。ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンと組み合わせた場合、ＥＧＦＲ＋ Ａ４３１及びＨｅＬａ細胞において、強い標的特異な細胞生存率減少が観察される（ＩＣ５０＝３，０００ｎＭ、図６４Ａ、Ｂ）のに対し、ＥＧＦＲ－Ａ２０５８細胞は、全く影響を受けない（図６４Ｃ）。同様の結果が、ＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３について得られた。１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンと同時投与されたＳＯ１８６１－Ｌ－Ｎ３もまた、Ａ４３１及びＨｅＬａ細胞で、効率的な細胞殺傷を示す（ＩＣ５０＝３，０００ｎＭ）が、ＥＧＦジアンチン無しでは、一般毒性は１０，０００ｎＭより上において観察される（図６４Ｄ、６４Ｅ）。
ＨＡＴＵを、ＳＯ１８６１のカルボン酸基を介してＳＯ１８６１にコンジュゲートし、ＳＯ１８６１－ＨＡＴＵ又はＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＨＡＴＵとも称される、ＳＯ１８６１－（Ｓ）を生成した。活性を測定するため、ＥＧＦＲ発現ＨｅＬａ細胞において、様々な濃度のＳＯ１８６１－（Ｓ）を１．５ｐＭ ＥＧＦジアンチンと同時投与し、細胞殺傷活性について検査した。ＳＯ１８６１－（Ｓ）は、ＳＯ１８６１と同様の活性を示し、ＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨについて観察されたものと同様に、カルボン酸基へのコンジュゲーションがこの分子のエンドソーム脱出促進活性に影響を及ぼさないことを示している（図６５）。
実施例８
ＱＳ２１（キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）から単離及び精製された）を、分子内のアルデヒド基及びグルクロン酸基で化学修飾した（一重又は二重修飾；図４０）。修飾ＱＳ２１を、１）ＥＧＦＲ発現細胞（表Ａ４）でのリガンド毒素（修飾ＱＳ２１＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチン）のエンドソーム脱出促進活性について；２）ＨｅＬａ及びＡ４３１に対する内在的細胞毒性（ＱＳ２１滴定）について；及び３）ヒト赤血球溶血活性（ヒト赤血球に対する修飾ＱＳ２１滴定）について検査した。エンドソーム脱出促進活性を測定するため、修飾ＱＳ２１を、ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ及びＡ４３１）で、非有効的な定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定した。これにより、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンが、ＨｅＬａ細胞においては、ＱＳ２１＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチン（ＩＣ５０＝２００ｎＭ）と同じくらい効果的であるが、Ａ４３１では、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチン（ＩＣ５０＝１５０ｎＭ）が、ＱＳ２１＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチン（ＩＣ５０＝９０ｎＭ）と比較してわずかに活性が低いことが明らかとなった（図６６Ａ及び６６Ｂ）。ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンは、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞において、ＩＣ５０＝９００ｎＭで効果的であったが、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンは、ＨｅＬａにおいては、ＩＣ５０＝２０００ｎＭで、及びＡ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝１５００ｎＭで効果的であり、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンは、ＨｅＬａにおいて、ＩＣ５０＝４０００ｎＭで効果的であり、Ａ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝２０００ｎＭで効果的であった（図６６ａ及び６６Ｂ）。次に、毒性が測定されたが、このために、修飾サポニンは、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞で滴定された。これにより、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨが、ＨｅＬａ細胞においては、ＱＳ２１（ＩＣ５０＝１０．０００ｎＭ）と同じ毒性を示すが、Ａ４３１では、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）が、ＱＳ２１（ＩＣ５０＝２０００ｎＭ）と比較して毒性が低い（ＩＣ５０＝５０００ｎＭ）ことが明らかとなった（図６６Ａ及び６６Ｂ）。ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、ＨｅＬａにおいては、ＩＣ５０＞３０．０００ｎＭ、Ａ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝３０．０００ｎＭを示したが、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）及びＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）のどちらの毒性についても、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞において、３０．０００ｎＭまで観察できなかった（図６６Ａ及び６６Ｂ）。
次に、赤血球溶血アッセイを実施し、これにより、ＱＳ２１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤが、非修飾ＱＳ２１（ＩＣ５０＝３０００ｎＭ）と同様の溶血活性を示すが、ＱＳ２１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨがＩＣ５０＝４０．０００ｎＭで、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＯＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）がＩＣ５０＝５０．０００ｎＭで溶血活性を示し、ＱＳ２１－（Ａｌｄ－ＥＭＣＨ）－（Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ）が、これらの濃度で最小の溶血活性を示すことが明らかとなった（ＩＣ５０＞３００．０００ｎＭ）（図６７）。
次に、ＳＯ１８３１（サポナリア・オフィキナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）から単離及び精製された）を、アルデヒド基で化学修飾した、ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ（図７２）。修飾及び非修飾ＳＯ１８３１並びに１つの他のサポニン：エスシン（９５％及び９８％）を、１）ＥＧＦＲ発現細胞でのリガンド毒素（５ｐＭ ＥＧＦジアンチン）のエンドソーム脱出促進活性について、２）ＨｅＬａ及びＡ４３１に対する内在的細胞毒性、３）ヒト赤血球溶血活性、及び４）臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）について試験した。表Ａ１２を参照。エンドソーム脱出促進活性を測定するため、修飾ＳＯ１８３１、非修飾ＳＯ１８３１、及びエスシン（９５％及び９８％）を、ＥＧＦＲ発現細胞（ＨｅＬａ及びＡ４３１）にで、非有効的な定濃度の５ｐＭ ＥＧＦ－ジアンチンの存在下で滴定した。これにより、ＳＯ１８３１＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンが、ＨｅＬａ細胞及びＡ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝３００ｎＭで効果的であったが、ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンが、ＨｅＬａ細胞及びＡ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝５０００ｎＭで活性を示すことが明らかとなった（図６８Ａ及び６８Ｂ）。エスシン（９５％又は９８％）＋５ｐＭ ＥＧＦジアンチンは、ＨｅＬａ細胞及びＡ４３１細胞において、４０００ｎＭで活性を示した（図６９Ａ及び６９Ｂ）。次に、毒性が測定されたが、このために、修飾サポニンは、ＨｅＬａ及びＡ４３１細胞で滴定された。これにより、ＳＯ１８３１が、ＨｅＬａ細胞においてはＩＣ５０＝４０００ｎＭで、及びＡ４３１細胞においてはＩＣ５０＝２０００ｎＭで毒性を示すが、ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨが、ＨｅＬａ細胞においては、３０．０００ｎＭまで毒性を示さず、Ａ４３１細胞においては、ＩＣ５０＝３０．０００ｎＭで毒性を示すことが明らかとなった（図６８Ａ及び６８Ｂ）。エスシン（９５％又は９８％）は、ＨｅＬａ細胞又はＡ４３１細胞において、３０．０００ｎＭまで毒性を示さなかった（図６９Ａ及び６９Ｂ）。
次に、赤血球溶血アッセイを実施し、これにより、エスシン（９５％又は９８％）が、ＩＣ５０＝１０．０００ｎＭで溶血を示すことが明らかとなった（図７０）。ＳＯ１８３１は、１５．０００ｎＭで溶血活性を示すが、ＳＯ１８３１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨは、ＩＣ５０＝１００．０００ｎＭで溶血活性が低かった（図７１）。
官能基アルデヒド（Ａｌｄ）でのＳＯ１８３１の化学修飾は、それぞれのサポニンのミセル特性への影響を示した（表Ａ１１参照）。図７３Ｂに示したように、ＳＯ１８３１サポニン上のそれぞれの官能基の単一修飾は、得られたＡＮＳの相対蛍光値の傾きにおいて表されるミセル形成能に有意に影響を及ぼした。
Figure 2023532681000157
材料及び方法
細胞生存率アッセイ
細胞生存率は、ＭＴＳアッセイにより測定され、製造業者の指示に従って実施した（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ）。ＭＴＳ溶液を、１０％ＦＢＳ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を補足した、フェノールレッド無しのＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で２０ｘに希釈した。細胞を、１ウェル当たり２００μＬのＰＢＳで１回洗浄し、その後、１ウェル当たり１００μＬの希釈ＭＴＳ溶液を添加した。プレートを、３７℃で約２０～３０分間インキュベートした。続いて、４９２ｎｍにおける光学密度を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。定量化には、「培地のみ」のウェルのバックグラウンドシグナルを、他の全てのウェルから引き算し、その後に、無処理ウェルのバックグラウンド補正シグナルを、処理ウェルの補正されたバックグラウンドシグナルで割ることにより、無処理／処理細胞の比率を算出した。
溶血アッセイ
赤血球（ＲＢＣ）を、フィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）勾配を用いて軟膜から分離した。得られたＲＢＣペレット（約４～５ｍＬ）を、５０ｍＬのＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋無し、ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）で２回洗浄した。細胞を、室温で８００ｘｇ、１０分間の遠心分離によりペレット化した。ＲＢＣをカウントし、全細胞カウントに基づき、ＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋無し）中に５００，０００，０００ｃ／ｍＬで再懸濁した。
サポニン希釈物を、ＤＰＢＳ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋あり、ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で、１．１１ｘ最終強度において調製した。ポジティブ溶血コントロールには、０．０２％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）－Ｘ１００溶液を、ＤＰＢＳ＋／＋中に調製した。９６ウェルＶ底プレート１ウェル当たり、全ての化合物溶液の１３５μＬを分注した。これに、１５μＬのＲＢＣ懸濁液を添加し、短時間混合した（１０秒－６００ｒｐｍ）。プレートを、穏やかに撹拌しながら室温で３０分間インキュベートした。その後、プレートを８００ｘｇで１０分間回転してＲＢＣをペレット化し、１００－１２０μＬの上清を、標準的な９６ｗｐ（９６ウェルプレート）に移した。続いて、４０５ｎｍにおけるＯＤを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｉｓｋａｎ ＦＣプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した。定量化には、「ＤＰＢＳ＋／＋のみ」のウェルのバックグラウンドシグナルを、他の全てのウェルから引き算し、その後に、処理ウェルのバックグラウンド補正シグナルを、０．０２％トリトン－Ｘ１００（ｘ１００）ウェルの補正されたバックグラウンドシグナルで割ることにより、０．０２％トリトン－Ｘ１００と比較する溶血のパーセントを算出した。
ＣＭＣ測定
サポニンの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を、ＤｅＶｅｎｄｉｔｔｉｓらの方法 （Ａ ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｍｉｃｅｌｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １１５，Ｉｓｓｕｅ ２，Ａｕｇｕｓｔ １９８１，Ｐａｇｅｓ ２７８－２８６）により、以下のように測定した。
精製水（ＭＱ）又はＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ＋／＋）のいずれかにおける８－アニリノナフタレン－１－スルホン酸（ＡＮＳ）の発光スペクトルを、ＣＭＣの下及び上の範囲をカバーするための１から１４００μＭの範囲のサポニンの乾燥重量濃度において測定した。ＣＭＣより上では、ミセル内への蛍光色素のポジショニングに起因して、ＡＮＳの蛍光収率は増加し、極大発光の波長は減少する。蛍光収率は、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ ＦＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、３５５ｎｍの励起波長、及び４６０ｎｍの発光波長において記録した。試料及び測定当たり、６μｇ、濃度７５．８６μＭのＡＮＳを用いた。
ＦＡＣＳ分析
細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）を補足したＤＭＥＭ（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で、１０ｃｍディッシュにおいて５００，０００ｃ／プレートで播種し、集密度９０％が達成されるまで４８時間インキュベートした（５％ＣＯ２、３７℃）。次に、細胞をトリプシン処理（ＴｒｙｐＩＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｇｉｂｃｏ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）して単一細胞とした。０．７５ｘ１０６細胞を１５ｍＬのファルコンチューブに移して遠心分離した（１，４００ｒｐｍ、３分）。上清を捨てる一方、細胞ペレットは水中に沈んだままにした。ペレットをボルテックスシェイカー上でファルコンチューブを穏やかにタップすることにより溶解し、細胞を４ｍＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）で洗浄した。洗浄後、細胞を３ｍＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）中に再懸濁し、３つの丸底ＦＡＣＳチューブに等しく分割した（１ｍＬ／チューブ）。細胞を再度遠心分離し、２００μＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）又は１９５μＬの冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）中に５μＬの抗体を含有する、２００μＬの抗体溶液の中に再懸濁した。ＡＰＣマウスＩｇＧ１、κアイソタイプＣｔｒｌ ＦＣ（＃４００１２２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、アイソタイプコントロールとして使用し、ＡＰＣ抗ヒトＥＧＦＲ（＃３５２９０６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用した。試料を、チューブローラーミキサー上で、４℃で３０分間インキュベートした。その後、細胞を冷ＰＢＳ（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋フリー、２％ＦＢＳ）で３回洗浄し、ＰＢＳ中の２％ＰＦＡ溶液を用いて、室温で２０分間固定した。細胞を、冷ＰＢＳで２回洗浄し、ＦＡＣＳ分析用には２５０～３５０μＬの冷ＰＢＳ中に再懸濁した。試料をＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメトリーシステム（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。ＦＡＣＳ分析の結果は、表Ａ４に要約される。
Figure 2023532681000158

Claims (34)

  1. トリテルペンアグリコンコア構造と、前記アグリコンコア構造に連結された、第１の糖鎖及び第２の糖鎖のうちの少なくとも１つとを含む、サポニンをベースとするサポニン誘導体であって、前記サポニンが、
    Ｃ－４にアルデヒド基を含む前記アグリコンコア構造；カルボキシル基、好ましくは、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む前記第１の糖鎖；及び少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む前記第２の糖鎖
    のうちの少なくとも１つを更に含み、
    前記サポニンが、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ）（ＱＳ）サポニンではなく、及び／又はＱｕｉｌ－Ａのサポニンではなく；
    ｉ．前記サポニン誘導体が、誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含むか；又は
    ｉｉ．前記サポニン誘導体が、前記第１の糖鎖を含み、前記第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含むか；又は
    ｉｉｉ．前記サポニン誘導体が、前記第２の糖鎖を含み、前記第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含むか；又は
    ｉｖ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の任意の組み合わせ、好ましくは誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせ、より好ましくは１つの誘導体化ｉ．ｉｉ．若しくはｉｉｉを含み；
    ここで、前記第１の糖鎖及び前記第２の糖鎖が、単糖、直鎖オリゴ糖、及び分枝オリゴ糖から独立して選択される、
    サポニン誘導体。
  2. 前記サポニンが天然サポニンである、請求項１に記載のサポニン誘導体。
  3. 前記サポニン誘導体が、以下の式（Ｉ）～（Ｖ）を有するサポニン誘導体：
    Figure 2023532681000159
    Figure 2023532681000160
    Figure 2023532681000161
    のうちのいずれでもないという条件付きである、請求項１又は２に記載のサポニン誘導体。
  4. 前記サポニン誘導体が、以下の式（ＶＩ）～（ＸＬＶ）を有するサポニン誘導体：
    Figure 2023532681000162
    Figure 2023532681000163
    Figure 2023532681000164
    Figure 2023532681000165
    Figure 2023532681000166
    Figure 2023532681000167
    Figure 2023532681000168
    Figure 2023532681000169
    Figure 2023532681000170
    Figure 2023532681000171
    Figure 2023532681000172
    Figure 2023532681000173
    Figure 2023532681000174
    Figure 2023532681000175
    Figure 2023532681000176
    Figure 2023532681000177
    Figure 2023532681000178
    Figure 2023532681000179
    Figure 2023532681000180
    Figure 2023532681000181
    Figure 2023532681000182
    のうちのいずれでもないという条件付きである、請求項１～３のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  5. 前記サポニン誘導体が、モノデスモサイドトリテルペングリコシド又はビデスモサイドトリテルペングリコシド、より好ましくはビデスモサイドトリテルペングリコシドである、請求項１～４のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  6. 前記サポニン誘導体が、前記第１の糖鎖を含み、前記第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含み、及び／又は前記サポニン誘導体が、前記第２の糖鎖を含み、前記第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含み、
    好ましくは、前記サポニン誘導体が、誘導体化されている前記第１の糖鎖と、誘導体化されている前記第２の糖鎖との両方を含み、
    より好ましくは、前記サポニン誘導体が、誘導体化されている前記第１の糖鎖と、誘導体化されている前記第２の糖鎖との両方を含み、前記サポニン誘導体が、アルデヒド基又は誘導体化されているアルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含み、
    最も好ましくは、前記サポニン誘導体が、誘導体化されている前記第１の糖鎖と、誘導体化されている前記第２の糖鎖との両方を含み、前記サポニン誘導体が、アルデヒド基を含むアグリコンコア構造を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  7. 前記サポニン誘導体が：
    ２α－ヒドロキシオレアノール酸；
    １６α－ヒドロキシオレアノール酸；
    ヘデラゲニン（２３－ヒドロキシオレアノール酸）；
    １６α，２３－ジヒドロキシオレアノール酸；
    ギプソゲニン；
    キラ酸；
    プロトアエスシゲニン－２１（２－メチルブタ－２－エノエート）－２２－アセテート；
    ２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１，２２－ビス（２－メチルブタ－２－エノエート）；
    ２３－オキソ－バリングトゲノールＣ－２１（２－メチルブタ－２－エノエート）－１６，２２－ジアセテート；
    ジギトゲニン；
    ３，１６，２８－トリヒドロキシオレアナン－１２－エン；
    ギプソゲン酸、
    及び
    それらの誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、
    好ましくは前記サポニン誘導体が、キラ酸及びギプソゲニン又はそれらの誘導体から選択されるアグリコンコア構造を含み、より好ましくは前記サポニン誘導体アグリコンコア構造が、キラ酸又はその誘導体である、請求項１～６のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  8. 前記サポニン誘導体が、キラ酸、ギプソゲニン、及びそれらの誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、好ましくは、前記サポニン誘導体が、キラ酸及びその誘導体からなる群から選択されるアグリコンコア構造を含み、前記第１の糖鎖が、存在する場合、前記アグリコンコア構造のＣ３原子若しくはＣ２８原子に連結され、好ましくは前記Ｃ３原子に連結され、及び／又は前記第２の糖鎖が、存在する場合、前記アグリコンコア構造の前記Ｃ２８原子に連結される、請求項１～７のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  9. 前記第１の糖鎖が、存在する場合：
    ＧｌｃＡ－、
    Ｇｌｃ－、
    Ｇａｌ－、
    Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ－、
    Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡ－、
    Ｇｌｃ－（１→２）－［Ｇｌｃ－（１→４）］－ＧｌｃＡ－、
    Ｇｌｃ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→２）－Ａｒａ－（１→３）－［Ｇａｌ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－Ｇｌｃ－（１→４）－Ｇａｌ－、
    Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→２）］－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ａｒａ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｒｈａ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇｌｃ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｆｕｃ－（１→２）－Ｇａｌ－（１→２）－Ｆｕｃ－（１→２）－ＧｌｃＡ－、及び
    それらの誘導体から選択され、
    並びに／又は前記第２の糖鎖が、存在する場合：
    Ｇｌｃ－、
    Ｇａｌ－、
    Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
    Ｒｈａ－（１→２）－［Ａｒａ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－、
    Ａｒａ－、
    Ｘｙｌ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１は、４Ｅ－メトキシけい皮酸である］、
    Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ２－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ２は、４Ｚ－メトキシけい皮酸である］、
    Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－３，４－ジ－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ３－（→４）］－３－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ３は、４Ｅ－メトキシけい皮酸である］、
    Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    （Ａｒａ－又はＸｙｌ－）（１→３）－（Ａｒａ－又はＸｙｌ－）（１→４）－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）（１→２）－［４－ＯＡｃ－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）（１→４）］－（Ｒｈａ－又はＦｕｃ－）、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇａｌ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    Ａｒａ／Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ／Ｆｕｃ－（１→４）－［Ｇｌｃ／Ｇａｌ－（１→２）］－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ４－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ４は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ５－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ５は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４－ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    ６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３－ＯＡｃ－－Ｒｈａ－（１→３）］－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－，
    Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［３，４－ｄｉ－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    ６－ＯＡｃ－Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）］－Ｒｈａ－（１→２）－Ｆｕｃ－、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒｈａ－（１→３）］－４ＯＡｃ－Ｆｕｃ－、
    Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ６－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ６は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ｒｈａ－（１→２）－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ７－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ７は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ／Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－［Ｇｌｃ－（１→３）］－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ８－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ８は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ９－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ９は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１０－（→４）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１０は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ａｐｉ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１１－（→３）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１１は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ｘｙｌ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｒ１２－（→３）］－Ｆｕｃ－［式中、Ｒ１２は、５－Ｏ－［５－Ｏ－Ａｒａ／Ａｐｉ－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタノイル］－３，５－ジヒドロキシ－６－メチル－オクタン酸）である］、
    Ｇｌｃ－（１→３）－［Ｇｌｃ－（１→６）］－Ｇａｌ－、及び
    それらの誘導体から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  10. 前記サポニン誘導体が前記第１の糖鎖を含み、及び前記第２の糖鎖を含み、前記第１の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、前記第２の糖鎖が２つ以上の糖部分を含み、前記アグリコンコア構造がキラ酸又はギプソゲニンであり、
    ｉ．前記アグリコンコア構造中のアルデヒド基が誘導体化されている、
    ｉｉ．前記第１の糖鎖が、誘導体化されているグルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、及び
    ｉｉｉ．前記第２の糖鎖が、誘導体化されている少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含む、
    のうちの１つ、２つ、又は３つ、好ましくは１つ又は２つ、より好ましくは１つである、請求項１～９のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  11. 前記サポニン誘導体が、ディプサコシドＢ、サイコサポニンＡ、サイコサポニンＤ、マクラントイジンＡ、エスクレントシドＡ、フィトラッカゲニン、エシネート、ＡＳ６．２、ＮＰ－００５２３６、ＡＭＡ－１、ＡＭＲ、α－Ｈｅｄｅｒｉｎ、ＮＰ－０１２６７２、ＮＰ－０１７７７７、ＮＰ－０１７７７８、ＮＰ－０１７７７４、ＮＰ－０１８１１０、ＮＰ－０１７７７２、ＮＰ－０１８１０９、ＮＰ－０１７８８８、ＮＰ－０１７８８９、ＮＰ－０１８１０８、ＳＡ１６４１、ＡＥ Ｘ５５、ＮＰ－０１７６７４、ＮＰ－０１７８１０、ＡＧ１、ＮＰ－００３８８１、ＮＰ－０１７６７６、ＮＰ－０１７６７７、ＮＰ－０１７７０６、ＮＰ－０１７７０５、ＮＰ－０１７７７３、ＮＰ－０１７７７５、ＳＡ１６５７、ＡＧ２、ＳＯ１８６１、ＧＥ１７４１、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１９０４、ＳＯ１８６２、β－エスシン（Ａｅｓｃｉｎ）、エスシンＩａ、茶種子（Ｔｅａｓｅｅｄ）サポニンＩ、茶種子サポニンＪ、アッサムサポニン（Ａｓｓａｍｓａｐｏｎｉｎ）Ｆ、ジギトニン、プリムラ酸（Ｐｒｉｍｕｌａ ａｃｉｄ）１、及びＡＳ６４Ｒ、それらの立体異性体、並びにそれらの組み合わせからなるサポニンの群から選択されるサポニンの誘導体であり、好ましくは前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＳＯ１８３２誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びＧＥ１７４１誘導体からなる群から選択され、最も好ましくは前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  12. 前記サポニン誘導体が、分子１：
    Figure 2023532681000183
    ［式中、
    前記第１の糖鎖Ａ１は、水素、単糖、又は直鎖若しくは分枝オリゴ糖を表し、好ましくは、Ａ１は、請求項９に定義されたような糖鎖を表し、より好ましくは、Ａ１は、請求項９に定義されたような糖鎖を表し、Ａ１は、グルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなり；
    前記第２の糖鎖Ａ２は、水素、単糖、又は直鎖若しくは分枝オリゴ糖を表し、好ましくは、Ａ２は、請求項９に定義されたような糖鎖を表し、より好ましくは、Ａ２は、請求項９に定義されたような糖鎖を表し、Ａ２は、少なくとも１つのアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基、例えば１つ、２つ、３つ、又は４つのアセトキシ基を含み、Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つは水素ではなく、好ましくは、Ａ１及びＡ２の両方がオリゴ糖鎖であり；
    Ｒは、ギプソゲニン中の水素又はキラ酸中のヒドロキシルである］
    によって表される、請求項７に記載のキラ酸サポニン又はギプソゲニンサポニンのサポニン誘導体であり、
    前記サポニン誘導体が、以下の誘導体化：
    ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンの位置Ｃ２３における前記アルデヒド基が誘導体化されている；
    ｉｉ．Ａ１が請求項９に定義されたような糖鎖を表し、及びＡ１がグルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなる場合、Ａ１のグルクロン酸部分の前記カルボキシル基が誘導体化されている；並びに
    ｉｉｉ．Ａ２が請求項９に定義されたような糖鎖を表し、及びＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ２のうちの１つの糖部分又は２つ以上の糖部分の、１つ以上の、好ましくは全てのアセトキシ基が誘導体化されている
    のうちの少なくとも１つが存在する分子１によって表される前記サポニンに対応する、請求項１～１１のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  13. Ａ１が請求項９に定義されたような糖鎖を表し、グルクロン酸部分を含むか若しくはグルクロン酸部分からなり、及びＡ１のグルクロン酸部分の前記カルボキシル基が誘導体化されており、並びに／又はＡ２が、請求項９に定義されたような糖鎖を表し、前記サポニンのＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含み、及び前記Ａ２の少なくとも１つのアセトキシ基が前記サポニン誘導体で誘導体化されている、請求項１２に記載のサポニン誘導体。
  14. 分子１によって表される前記サポニンが、ビデスモサイドトリテルペンサポニンである、請求項１２又は１３に記載のサポニン誘導体。
  15. 前記サポニン誘導体が、分子１によって表される前記サポニンに対応し、ここで、以下の誘導体化：
    ｉ．前記キラ酸又はギプソゲニンの位置Ｃ２３における前記アルデヒド基が、
    アルコールへの還元；又は
    Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、それにより、サポニン－Ａｌｄ－ＥＭＣＨ、例えばＳＯ１８６１－Ａｌｄ－ＥＭＣＨを提供し、ここで、前記ＥＭＣＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；又は
    Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、前記ＢＭＰＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；又は
    Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、前記ＫＭＵＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；
    のいずれかによって誘導体化されている；
    ｉｉ．Ａ１が請求項９に定義されたような糖鎖を表し、及びＡ１がグルクロン酸部分を含むか又はグルクロン酸部分からなる場合、Ａ１のグルクロン酸部分の前記カルボキシル基が、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）又はＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換により誘導体化され、それにより、サポニン－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、例えばＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＭＰＤ、又はサポニン－Ｇｌｕ－ＡＥＭ、例えばＳＯ１８６１－Ｇｌｕ－ＡＥＭを提供する；並びに
    ｉｉｉ．Ａ２が請求項９に定義されたような糖鎖を表し、及びＡ２が少なくとも１つのアセトキシ基を含む場合、Ａ２のうちの１つの糖部分又は２つ以上の糖部分の、１つ以上の、任意選択的には全てのアセトキシ基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されている
    のうちの少なくとも１つが存在し、好ましくは１つ又は２つが存在する、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  16. Ａ１が、Ｇａｌ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）］－ＧｌｃＡであり、及び／又はＡ２が、Ｇｌｃ－（１→３）－Ｘｙｌ－（１→４）－Ｒｈａ－（１→２）－［Ｘｙｌ－（１→３）－４－ＯＡｃ－Ｑｕｉ－（１→４）］－Ｆｕｃであり、好ましくは分子１によって表される前記サポニンが、３－Ｏ－β－Ｄ－ガラクトピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）］－β－Ｄ－グルクロノピラノシルキラ酸２８－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－（１→３）－β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→４）－α－Ｌ－ラムノピラノシル－（１→２）－［β－Ｄ－キシロピラノシル－（１→３）－４ＯＡｃ－β－Ｄ－キノボピラノシル－（１→４）］－β－Ｄ－フコピラノシドであり、より好ましくはＳＯ１８６１、ＳＯ１８３２、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、最も好ましくはＳＯ１８６１である、請求項１２～１５のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  17. 前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１、ＳＡ１６５７、ＧＥ１７４１、ＳＡ１６４１、サポニナム・アルブム（Ｓａｐｏｎｉｎｕｍ ａｌｂｕｍ）、Ｇｙｐ１、ギプソシドＡ、ＡＧ１、ＡＧ２、ＳＯ１５４２、ＳＯ１５８４、ＳＯ１６５８、ＳＯ１６７４、ＳＯ１８３２、ＳＯ１８６２、ＳＯ１９０４、それらの立体異性体、及びそれらの組み合わせの誘導体からなる群から選択され、好ましくは、前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体、ＧＥ１７４１誘導体、ＳＡ１６４１誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、最も好ましくは、前記サポニン誘導体がＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１６のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  18. 前記サポニン誘導体が、単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、前記単一誘導体化が、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基への結合によるか、若しくは（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）の、ＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基への結合による、ＳＯ１８６１の前記グルクロン酸の前記カルボキシル基の変換であり、又は前記サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、前記キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり：
    Figure 2023532681000184
    又は前記サポニン誘導体が、Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、前記キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３にアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記ＥＭＣＨの前記マレイミド基がメルカプトエタノールによって誘導体化され、それによりチオエーテル結合を形成する誘導体を表す、分子３によって表されるＳＯ１８６１誘導体であり：
    Figure 2023532681000185
    又は前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記アグリコンコアの前記アルデヒド基がアルコールへ還元されているＳＯ１８６１誘導体であるか、又は前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記サポニンの前記アグリコンコア構造のＣ２８に結合された前記第２の糖鎖における前記アセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であるか、又は前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記サポニンの前記アグリコンコア構造のＣ３に結合された前記第１の糖鎖における前記グルクロン酸単位の前記カルボキシル基が、式（３）で示されるような２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）との反応を介したアミド結合へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であり：
    Figure 2023532681000186
    又は前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記サポニンの前記アグリコンコア構造のＣ３に結合された前記第１の糖鎖における前記グルクロン酸単位の前記カルボキシル基が、式（１８）で示されるようなＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合へ変換されているＳＯ１８６１誘導体であり：
    Figure 2023532681000187
    又は前記サポニン誘導体が、ＳＯ１８６１誘導体であって、ここで前記サポニン誘導体が、以下：
    Figure 2023532681000188
    Figure 2023532681000189
    Figure 2023532681000190
    Figure 2023532681000191
    のうちの１つに従う式を有するＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  19. 前記サポニン誘導体が単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体ではないという前提条件つきであり、ここで前記単一誘導体化とは、１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）の、ＳＯ１８６１のグルクロン酸部分のカルボキシル基との反応による、ＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基の変換であり、又はサポニン誘導体が；Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されている、前記キラ酸アグリコンコア構造の示した位置Ｃ２３においてアルデヒド基を含むＳＯ１８６１誘導体を表す、分子２によって表されるＳＯ１８６１誘導体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載のサポニン誘導体：
    Figure 2023532681000192
  20. ｉ．前記サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、前記アグリコンコア構造が、
    アルコールへの還元；若しくは
    Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、前記ＥＭＣＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
    Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド（ＢＭＰＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、前記ＢＭＰＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；若しくは
    Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド（ＫＭＵＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換であり、ここで、前記ＫＭＵＨの前記マレイミド基は、任意選択的にメルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される；
    のいずれかによって誘導体化されているアルデヒド基を含み；又は
    ｉｉ．前記第１の糖鎖が、カルボキシル基、好ましくは、２－アミノ－２－メチル－１，３－プロパンジオール（ＡＭＰＤ）若しくはＮ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換により誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含み；又は
    ｉｉｉ．前記第２の糖鎖が、脱アセチル化によるヒドロキシル基（ＨＯ－）への変換によって誘導体化されているアセトキシ（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）基を含み；又は
    ｉｖ．前記サポニン誘導体が、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つ又は３つの任意の組み合わせ、任意選択的には、誘導体化ｉ．ｉｉ．及びｉｉｉ．の２つの任意の組み合わせを含み；
    好ましくは、前記サポニン誘導体がアグリコン構造を含み、前記アグリコンコア構造が、ＥＭＣＨとの反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化されているアルデヒド基を含み、ここで、前記ＥＭＣＨの前記マレイミド基が、任意選択的に、メルカプトエタノールとのチオエーテル結合の形成により誘導体化される、請求項１～１９のいずれか一項に記載のサポニン誘導体。
  21. 前記サポニン誘導体がアグリコンコア構造を含み、前記アグリコンコア構造が、アルデヒド基を含み、及び前記第１の糖鎖がカルボキシル基、好ましくは、Ｎ－（２－アミノエチル）マレイミド（ＡＥＭ）との反応を介したアミド結合への変換によって誘導体化されている、グルクロン酸部分のカルボキシル基を含む、請求項２０に記載のサポニン誘導体。
  22. 前記アグリコンコア構造中の前記アルデヒド基がＮ－ε－マレイミドカプロン酸ヒドラジド（ＥＭＣＨ）との反応を介したヒドラゾン結合への変換によって誘導体化され、前記サポニンがＳＯ１８６１である場合には、前記グルクロン酸及び前記アセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きであり、前記サポニンがＳＯ１８６１であり及びＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基が１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）とＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基との反応によって誘導体化される場合には、前記アルデヒド基及び前記アセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた修飾されるという条件付きである、請求項２０に記載のサポニン誘導体。
  23. 前記サポニン誘導体の前記アグリコンコア構造中の前記アルデヒド基がＥＭＣＨとの反応を介して誘導体化され及び前記サポニンがＳＯ１８６１である場合には、前記グルクロン酸及び前記アセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きであり、前記サポニンがＳＯ１８６１であり、及びＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基が、結合したＨＡＴＵにより誘導体化される場合には、前記アルデヒド基及び前記アセトキシ基（Ｍｅ（ＣＯ）Ｏ－）のうちの少なくとも１つもまた誘導体化されるという条件付きである、請求項２２に記載のサポニン誘導体。
  24. 請求項１～２３のいずれか一項に記載のサポニン誘導体と、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤とを含む、第１の医薬組成物。
  25. 前記サポニン誘導体が、分子２によって表される前記サポニン誘導体であり：
    Figure 2023532681000193
    又は単一誘導体化を含むＳＯ１８６１誘導体であり、前記単一誘導体化は、ＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基の、１－［ビス－（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）と、ＳＯ１８６１の前記グルクロン酸部分の前記カルボキシル基との反応による変換であり、又は前記サポニン誘導体が分子３によって表されるサポニン誘導体である、請求項２４に記載の第１の医薬組成物：
    Figure 2023532681000194
  26. 請求項２４又は２５に記載の第１の医薬組成物と、
    抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第２の医薬組成物と
    を含む医薬組み合わせ剤。
  27. 請求項１～２３のいずれか一項に記載のサポニン誘導体を含み、抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－核酸コンジュゲート、又は受容体－リガンド－核酸コンジュゲートのうちの任意の１つ以上を更に含み、任意選択的に、薬学的に許容される賦形剤及び／又は希釈剤を含む、第３の医薬組成物。
  28. 前記第２の医薬組成物又は前記第３の医薬組成物が、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートのうちの任意の１つ以上を含み、前記薬物が、例えばサポリン及びジアンチンなどの毒素であり、前記オリゴヌクレオチドが、例えばアポリポタンパク質Ｂ又はＨＳＰ２７の遺伝子サイレンシングのための例えばｓｉＲＮＡ又はＢＮＡである、請求項２６に記載の医薬組み合わせ剤又は請求項２７に記載の第３の医薬組成物。
  29. 前記サポニン誘導体が、請求項１７に記載のサポニン誘導体、好ましくは分子２又は分子３によって表される前記サポニン誘導体である、請求項２６若しくは請求項２８に記載の医薬組み合わせ剤、又は請求項２７若しくは２８に記載の第３の医薬組成物。
  30. エンドソーム脱出促進剤として、及び抗体－毒素コンジュゲート、受容体－リガンド－毒素コンジュゲート、抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、又は受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートと組み合わせて使用するための、請求項２４若しくは２５に記載の第１の医薬組成物、請求項２６若しくは２８～２９のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ剤、又は請求項２７～２９のいずれか一項に記載の第３の医薬組成物。
  31. 医薬としての使用のための、請求項２４、２５、２９若しくは３０に記載の第１の医薬組成物、請求項２６若しくは２８～３０のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ剤、又は請求項２７～３０のいずれか一項に記載の第３の医薬組成物。
  32. 癌、感染症、ウイルス感染、高コレステロール血症、原発性高シュウ酸尿症、血友病Ａ、血友病Ｂ、アルファ－１アンチトリプシン関連肝疾患、急性肝性ポルフィリン症、トランスサイレチン媒介アミロイドーシス、若しくは自己免疫疾患の治療又は予防における使用のための、請求項２４若しくは２５に記載の第１の医薬組成物、請求項２６若しくは２８～３０のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ剤、又は請求項２７～３０のいずれか一項に記載の第３の医薬組成物。
  33. 分子を細胞の外側から前記細胞の内側へ、好ましくは前記細胞のサイトゾル中へ移行させるための、インビトロ又はエクスビボの方法であって：
    ａ）細胞を提供する工程と；
    ｂ）工程ａ）において提供された前記細胞内へ、前記細胞の外側から移行させるための前記分子を提供する工程と；
    ｃ）請求項１～２３のいずれか一項に記載のサポニン誘導体を提供する工程と；
    ｄ）工程ａ）の前記細胞を、インビトロ又はエクスビボにおいて、工程ｂ）の前記分子及び工程ｃ）の前記サポニン誘導体と接触させ、それにより前記分子の前記細胞の外側から前記細胞内への前記移行を確立させる工程と
    を含む、方法。
  34. 前記細胞が、ヒト細胞、例えばＴ－細胞、ＮＫ－細胞、腫瘍細胞であり、及び／又は前記サポニン誘導体が、請求項１６～２３のいずれか一項に記載のサポニン誘導体であり、及び／又は工程ｂ）の前記分子が：抗体－薬物コンジュゲート、受容体－リガンド－薬物コンジュゲート、抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲート、若しくは受容体－リガンド－オリゴヌクレオチドコンジュゲートの任意の１つであり、ここで前記薬物が、例えば毒素であり、ここで前記オリゴヌクレオチドが、例えばｓｉＲＮＡ若しくはＢＮＡである、請求項３３に記載の方法。
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